MXPA05005329A - Construcciones y composiciones geneticas las cuales comprenden rre y cte y usos de las mismas. - Google Patents

Construcciones y composiciones geneticas las cuales comprenden rre y cte y usos de las mismas.

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Abstract

Se describen construcciones geneticas que comprenden una secuencia de codificacion para Rev de VIH-1, y una secuencia de codificacion para una proteina deseada. Se describen composiciones que comprenden por lo menos dos moleculas de acido nucleico en las cuales por lo menos una molecula de acido nucleico comprende una secuencia de codificacion para Rev de VIH-1, y por lo menos una molecula de acido nucleico comprende una secuencia de codificacion para una proteina deseada. En tales construcciones y composiciones geneticas que comprenden moleculas de acido nucleico, la secuencia de codificacion para la proteina deseada comprende por lo menos una porcion de secuencia de codificacion para una proteina estructural de VIH que incluye un RRE y por lo menos un CTE. Se describen tambien metodos para inducir una respuesta inmune contra un inmunogen en un individuo, metodos para suministro de proteinas a un individuo y metodos para producir proteinas.

Description

CONSTRUCCIONES Y COMPOSICIONES GENETICAS LAS CUALES COMPRENDEN RUE Y CTE Y USOS DE LAS MISMAS Campo de la Invención La presente invención se relaciona a construcciones genéticas mejoradas. En particular, la presente invención se relaciona a moléculas de ácidos nucleicos que pueden ser usadas para generar altos niveles de expresión de proteínas codificadas por secuencias nucleicas de la molécula de ácido nucleico. La presente invención también se relaciona a vacunas de ADN mejoradas y terapéuticos de genes. Antecedentes de la Invención El Rev- RE de VIH-1 es bien conocido pero no entendido completamente. Es conocido que los genes que codifican proteínas estructurales del VIH, es decir genes gag, pol y env de VIH cada uno contienen un RRE el cual es reconocido por la proteína Rev de VIH. Se sabe que estas secuencias interactuan con la proteína Rev de VIH. Las moléculas de ácidos nucleicos en células que contienen el RRE enlazan a Rev que está presente en la célula y son transportados al citoplasma. Este transporte resulta en un nivel superior de expresión de genes con relación a aquel observado en la ausencia del RRE o Rev en construcciones similares . Las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica No. 5,554,528 y 5,604,114, las ' cuales son incorporadas en la KEP 164131 presente para referencia, describen las secuencias RRE de VIH. Las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica No. 5,650,309 y 5,665,577, las cuales se incorporan en la presente para referencia, describen vectores que comprenden secuencias RRE de VIH. El sistema CTE es bien conocido y descrito en, inter alia, las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica No. 5,585,263 y 5,880,276, las cuales son incorporadas en la presente para referencia. De acuerdo a este sistema, las proteínas huésped reconocen la secuencia CTE en el ARNm y la transportan a partir del núcleo al citoplasma . Este transporte resulta en un nivel superior de expresión de gen con relación a aquel observado en la ausencia del RRE o Rev en construcciones similares. Los sistemas CTE son también descritos en Bray, M. , S. Prasad, J. W. Dubay, E. Hunter, K. -T. Jeang, D. Rekosh, y M.-L. Hammarskj oíd (1994). Un elemento pequeño a partir del genoma del virus de chango Mason-Pfizer hace a la expresión y replicación del virus de inmunodeficiencia humano tipo 1 independiente a Rev. Proc . Nati. Acad. Sci . USA 91:1256-1260; Saavedra, C, B. Felber, y E. Izaurralde. 1997. El elemento de transporte constitutivo del retrovirus-1 de simio, a diferencia del RRE de VIH-1, utiliza factores requeridos para la exportación de ARNm celulares. Curr. Biol . 619-628, Ernst R , Bray M, Rekosh D, Hammarsk oíd ML (1997) . La estructura secundaria y análisis mutacional del elemento de transporte constitutivo del ARN del virus de chango Mason-Pfizer. RNA. 3 (2) : 210-22 ; y Kang Y, Bogerd HP, Cullen BR. (2000) . Análisis de factores celulares que median la exportación nuclear de ARN que portan el elemento de transporte constitutivo del virus de chango Mason-Pfizer. J Virol 74 (13 ): 5863-71 , los cuales se incorporan en la presente para referencia . Hay una necesidad para proporcionar sistemas mejorados para incrementar la expresión de secuencias de codificación en moléculas de ácidos nucleicos . Hay una necesidad para proporcionar vacunas mejoradas, métodos de inmunización, y métodos y composiciones de terapia de genes que exhiben altos niveles de expresión de secuencias de codificación en moléculas de ácidos nucleicos . Sumario de la Invención / La presente invención se relaciona a construcciones genéticas que comprenden una secuencia dé codificación para una Rev de VIH-1, y una secuencia de codificación para una proteína deseada. En tales construcciones genéticas, la secuencia de codificación para la proteína deseada comprende por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y por lo menos un CTE. La presente invención también se relaciona a composiciones que comprenden por lo menos dos moléculas de ácido nucleico en las cuales por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para una Rev de VIH-1, y por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para una proteína deseada. La secuencia de codificación para la proteína deseada comprende por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un KRE y por lo menos un CTE. La~ proteína deseada es generalmente una proteína diferente de Rev de VIH-1. La presente invención además se relaciona a métodos para inducir una respuesta inmune contra un inmunogen en un individuo. Algunos de los métodos de la invención comprenden la etapa de administrar al individuo una construcción genética la cual comprende una secuencia de codificación para una Rev de VIH-1, y secuencia de codificación para un inmunogen. La secuencia de codificación para el inmunogen comprende por lo menos una porción de la secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y por lo menos un CTE. Algunos de los métodos de la invención comprenden la etapa de administrar al individuo una composición la cual comprende por lo menos dos moléculas de ácidos nucleicos. Por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para una Rev de VIH-1, y por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para un inmunogen. La secuencia de codificación para el inmunogen comprende por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y por lo menos un CTE. La presente invención además se relaciona a métodos para suministrar una proteína a un individuo . "Algunos de los métodos de la invención comprenden la etapa de administrar al individuo una construcción genética la cual comprende la secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y la secuencia de codificaicón para una proteína. La secuencia de codificación para la proteína comprende por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y por lo menos un CTE. Algunos de los métodos de la invención comprenden la etapa de administrar al individuo una composición la cual comprende por lo menos dos moléculas de ácido nucleico . Por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para una proteína deseada. La secuencia de codificación para la proteína comprende por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y por lo menos un CTE. La presente invención además se relaciona a métodos para producir una proteína en una célula. Algunos de los métodos de la invención comprenden la etapa de cultivar una célula que comprende una construcción genética que comprende una secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y secuencia de codificación para una proteína. La secuencia de codificación para la proteína comprende por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH-1 que incluye un RRE y por lo menos un CTE. Algunos de los métodos de la invención comprenden la etapa de cultivar una célula que comprende por lo menos dos moléculas de ácido nucleico . Por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para una Rev de VIH-1, y por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para una proteína deseada. La secuencia de codificación para la proteína comprende por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y por lo menos una CTE. Breve Descripción de las Figuras Las Figuras 1A-5 muestran datos a partir de comparaciones hechas entre las respuestas inmunes contra Env de VIH-1 después de la administración de uno de tres plásmidos, cada uno de los cuales codifica Env en la cual la secuencia de codificación de Env contiene El RRE. Estos datos son descritos en el ejemplo posterior. Las Figuras 1A-1B representan construcciones de ADN de cubierta de VIH.
La Figura 2 ilustra los títulos de anticuerpo de IgG total en 'los ratones inmunizados con suero . La Figura 3 representa gráficamente la respuesta proliferativa de células T a Env. La Figura 4 representa gráficamente la inducción de IFKf-? intracelular en esplenocitos vacunados, específicamente la comparacón de EAC-1 y EAC-II. La Figura 5 representa gráficamente la inducción de IF -? intracelular en esplenocitos vacunados, específicamente la comparacón de EAC-1 y Calde B Env optimizado en codón. Descripción Detallada de la Invención De acuerdo a la invención, las moléculas de ácido nucleico son suministradas con dos elementos de transporte diferentes los cuales cuando se presentan en el AKNm resultan en el transporte del AKNm a partir del núcleo al citoplasma y la producción de proteínas en las células se incrementa. Los dos elementos de transporte operan independientes uno del otro y cuando se usan juntos resultan en un incremento superior de producción de proteína que simplemente un efecto aditivo. Cada uno de los sistemas de transporte empleados es conocido. Uno es el sistema de elemento de respuesta (RRE) Rev-Rev de VIH-1. El otro es el sistema CTE aislado del virus de chango Mason-Efizer . De acuerdo a la invención, las construcciones genéticas contienen tanto un REE y por lo menos un CTE. Adicionalmente, las construcciones se proporcionan con secuencias de codificación Rev de VIH-1 para proporcionar a la célula con la proteína Rev necesaria para acoplar el RRE y el efecto de transporte. Como se usa en la presente, el término "construcción genética" se entiende para referirse a una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica para una proteína (secuencia de codificación) enlazada operablemente a elementos necesarios para expresión de la secuencia de codificación. En algunas modalidades, la construcción genética es ADN, preferentemente un plásmido o genoma de un vector viral. En algunas modalidades, la construcción genética es AR , preferentemente un genoma de un vector retroviral . De acuerdo a la presente invención, son proporcionadas construcciones genéticas las cuales comprenden la secuencia de codificación para Rev, y una secuencia de codificación para una proteína deseada. Como se usa en la presente, el término "proteína deseada: se entiende para referirse a cualquier proteína, la cual incluye las proteínas con secuencias activas fisiológica o inmunológicamente, con la condición de que tal proteína comprenda por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluya un RRE y el ARNm que incluye una secuencia de codificación para la proteína comprende por lo menos un CTE. En algunas modalidades, la proteína deseada es una proteína estructural de VIH y el ANm que incluye una secuencia de codificación para la proteína estructural de VIH comprende por lo menos un CTE. En algunas modalidades, la proteína deseada es una proteína de fusión la cual comprende por lo menos una porción de una proteína estructural de VIH y una porción no VIH. En algunas modalidades, la porción que no es VIH puede ser una proteína activa inmunológica o fisiológicamente activa o fragmento inmunogénico o fisiológicamente activo de la misma que además comprende una proteína estructural de VIH o fragmento de la misma que comprende un KRE . Si la proteína deseada no es una proteína estructural, de VIH, es decir, es una proteína de fusión, la naturaleza de las secuencias que no son VIH determinará si la construcción genética es una vacuna o un terapéutico de gen. Es decir, si la proteína de fusión que es la pro eína deseada es un inmunogen, la construcción puede ser usada para inducir respuestas inmunes tales como un uso como una vacuna, ¦ o un material de partida para la producción de proteína. Si la proteína de fusión es activa biológicamente y no inmunogénica, la construcción puede ser usada como terapéutico de gen o un material de partida para producción de proteína. La invención también proporciona una composición con por lo menos dos moléculas de ácido nucleico, por lo menos una de las cuales comprende una secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y por lo menos una de las cuales comprende una secuencia de codificación para una proteína deseada. En algunas modalidades, las moléculas de ácido nucleico son moléculas de ADN, preferentemente plásmidos . Las construcciones genéticas de la invención y moléculas de ácidos nucleicos de composiciones de la invención incluyen una secuencia de codificación seleccionada del grupo que consiste de gag, pol, env, y un fragmento de los mismos el cual incluye un RRE. Es decir, la invención puede ser usada para alto nivel de expresión de las proteínas VIH codificadas por gag, pol o env o alternativamente, pueden ser usadas para expresión de alto nivel de proteínas de fusión que incluyen porciones de productos de gen gag, pol, o env que incluyen el KRE. La construcción genética también contiene secuencias de codificación que codifican la proteína Rev de VIH-1 enlazada operablemente a elementos regulatorios de tal forma que se produce la proteína Rev. Las composiciones contienen una molécula de ácido nucleico que comprende las secuencias de codificación que codifican la proteína Rev de VIH-1 enlazada operablemente a elementos regulatorios de tal forma que se produce la proteína Rev. De acuerdo a la invención, la secuencia o secuencias CTE son incluidas en la construcción de genes o molécula nucleica' de una composición en la secuencia de la proteína a ser producida . En modalidades preferidas , la secuencia de CTE es incluida en el sitio 3' de la cola de poliadenilación. En algunas modalidades, la construcción de genes puede contener más de una secuencia de CTE. En algunas modalidades, puede contener 2, 3, 4 ó 5 secuencias CTE. La presente invención además proporciona métodos para inducir una respuesta inmune contra un inmunogen en un individuo, métodos para suministrar una proteína a un individuo y métodos para producir una proteina. Los métodos para inducir una respuesta inmune contra un inmunogen en un individuo y los métodos para suministrar una proteína a un individuo comprenden la etapa de administrar al individuo una construcción o composición genética como se describe anteriormente. En los métodos para inducir respuestas inmunes , la proteína deseada es inmunogénic . Si la proteína deseada es una proteína estructural de VIH, la construcción genética es una vacuna y la proteína deseada es expresada para el propósito de ser un inmunogen. Similarmente, si la proteína deseada es una proteína inmunogénica, la construcción o composición genética puede ser usada como una vacuna y la proteína deseada es expresada para el propósito de ser un inmunogen. Las respuestas inmunes pueden ser inducidas para proporcionar efectos protectores o terapéuticos o para producir anticuerpos y células del sistema inmune específico a antigeno específicas para el inmunogen. Tales anticuerpos y células pueden ser recolectados y usados . Ejemplos de inmunogenes que pueden ser codificados por la presente invención incluyen las proteínas estructurales de VIH Gag, Pol, Env y fragmentos de las mismas. Además, pueden ser preparadas vacunas en las cuales el inmunogen es una proteína objetivo como se describe en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica No. 5,593,972 concedida el 14 de Enero de 1997 que se incorpora en la presente para referencia. Tales inmunogenes pueden ser proteínas patógenas, proteínas asociadas con enfermedades hiperproliferativas o proteínas asociadas con enfermedades autoinmunes así como también alérgenos . Para todos los inmunogenes de proteínas estructurales no VIH, la proteína inmunogénica debe ser presentada como una proteína de fusión codificada por un gen quimérico el cual incluye la secuencia de codificación que incluye por lo menos una porción de la secuencia de codificación de proteína estructural de VIH la cual es el REE. En modalidades de la invención en la cual se suministra una respuesta inmune, la presente invención puede ser usada en combinación con adyuvantes, proteínas inmunomoduladoras y secuencias genéticas que codifican proteínas inmunomoduladoras tales como citosinas, quimiosinas, y factores de crecimiento. Los métodos para suministrar una proteína a un individuo comprenden la etapa de administrar al individuo una construcción o composición genética como se describe anteriormente. En algunas modalidades, la proteína deseada es una citosina, un factor de crecimiento, una quimiosina, una molécula coestimulatoria, un anticuerpo, un receptor soluble, una enzima, un factor de coagulación, o fragmentos de los mismos. En algunas modalidades, la proteina deseada es un antígeno de patógeno, un producto de traducción de oncogen u otro antígeno asociado con el cáncer, una proteína' asociada con enfermedad autoinmune, un alérgeno o fragmentos de los mismos. En algunas modalidades, la proteína deseada es insulina, IL-1, IL-2, IL-5, IL-12, IL-15, VEGF, EGF, EPO, GMCSF, GCSF, receptores de los mismos, CD28, CD80, CD86, CD40, CD40L, mAbs, Fabs, F(ab)2s, mAbs quimérico, humanizado, de primate, humano, Fabs, F(ab)2S, DNAsa, tPa, Factores I-XII o fragmentos activos de los mismos. En algunas modalidades, la proteína deseada es un antígeno como se indica en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica No. 5,593,972, la cual se incorpora en la presente para referencia. Los métodos para producir una proteína en una célula comprenden la etapa de cultivar una célula que comprende una construcción genética o por lo menos dos moléculas de ácido nucleico de la composición como se describe anteriormente. En tales métodos, la célula puede ser cualquier célula en la cual tanto el sistema RRE y el sistema CTE son activos. En algunas modalidades, la célula es una célula mamífera. En algunos modalidades, la célula es una célula humana. En modalidades preferidas, las construcciones genéticas son plásmidos que pueden ser suministrados al paciente por administración directa. Hay un gran número de métodos que pueden ser usados para suministrar ADN directamente a un paciente. Además de aquellos descritos en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica No. 5,593,972, la cual se incorpora en la presente para referencia, otros métodos incluyen aquellos descritos en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica No. 5,739,118 la cual se incorpora en la presente para referencia, y la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica No. 5,981,505 la cual se incorpora en la presente para referencia. Además, los métodos descritos en las patentes y publicaciones descritas en ww . dnavaccine . com, las cuales se incorporan en la presente para referencia, pueden ser empleados usando las mejoras descritas en la presente. Por ejemplo, la invención es compatible con cualquier sistema de suministro de plásmido tal como lipofectinas , lípidos catiónicos, lípidos aniónicos, liposomas, agentes de transfección, y agentes de objetivo de célula . En una modalidad preferida, el ADN de plásmido es administrado a un individuo por inyección intramuscular. Además al ADN de plásmido, la composición inyectable puede opcionalmente comprender un facilitador tal como bupivacaina o una composición relacionada la cual incluye aquellas descritas en la Solicitud de PCT No. de serie PCT/US94/00899 , la cual se incorpora en la presente para referenciar Además de uso en plásmidos, las construcciones de la presente invención pueden ser útiles en otros sistemas de suministro genético en los cuales el ADN que codifica las proteínas cuya expresión es deseada es transcrito en los núcleos, tales como retrivuros u otros vectores virales o no virales . EJEMPLOS Los datos anexos en la presente en las Figuras 1-5 reportan una comparación de las respuesta inmunes contra Env de VIH-1 después de la administración de uno de los tres plásmidos, cada uno los cuales codifican Env. La secuencia de codificación Env contiene el RRE. Los datos muestran claramente que la combinación de secuencia de codificación para Env y Rev que incluyen un CTE produce una respuesta inmune incrementada con relación a aquella observada después de la admin stración de una construcción que contiene solamente secuencia de codificación para Env y Rev o secuencia de codificación para Env con un CTE. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a ,1a práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (23)

  1. REIVINDICACIONES
  2. Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Una construcción genética caracterizada porque comprende : a) una secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y b) una secuencia de codificación para una proteína deseada, en donde la secuencia de codificación para la proteína deseada comprende i ) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y ii) por lo menos un CTE. 2. La construcción genética de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la construcción genética es una molécula de ADN.
  3. 3. La construcción genética de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque la construcción genética es un plásmido.
  4. 4. La construcción genética de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la proteína deseada es una proteína estructural de VIH que comprende por lo menos un CTE.
  5. 5. La construcción genética de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la proteína deseada es una proteína de fusión la cual comprende por lo menos una porción de una proteína estructural de VIH y una porción que no es VIH.
  6. 6. La construcción genética de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la proteína deseada es una proteína de fusión la cual comprende por lo menos una porción de una proteína estructural de VIH y una porción no VIH inmunogénica .
  7. 7. La construcción genética de conformidad con la reivindicación 1, caracteizada porque la construcción genética comprende 1-5 CTE.
  8. 8. Una composición caracterizada porque comprende por lo menos dos molécula de ácido nucleico: a) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y t>) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para una proteína deseada, en donde la secuencia de codificación para la proteína deseada comprende i) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un KRE y ii) por lo menos un CTE.
  9. 9. La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque las moléculas de ácido nucleico son moléculas de ADN.
  10. 10. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque las moléculas de ADN son plásmidos .
  11. 11. La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque la proteína deseada es una proteína estructural de VIH que comprende por lo menos un CTE.
  12. 12. La composición de conformidad con la reivindicación 9 , caracterizada porque la proteína deseada es una proteína de fusión la cual comprende por lo menos una porción de una proteína estructural de VIH y una porción que no es VIH.
  13. 13. La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque la proteína deseada es una proteína de fusión la cual comprende por lo menos una porción de una proteína estructural de VIH y una porción que no es VIH inmunogénica .
  14. 14. La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para una proteína deseada, en donde la secuencia de codificació para la proteína deseada comprende: i) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y ii) 1-5 CTE.
  15. 15. Un método para inducir una respuesta inmune contra un inmunogen en un individuo caracterizado porque comprende la etapa de administrar al individuo ya sea: a) una composición la cual comprende una construcción genética que comprende i) una secuencia de codificación para Rev de VIH- i, y ii) una secuencia de codificación para el inmunogen, en donde la secuencia de codificación para el inmunogen comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y 2) por lo menos un CTE; o b) una composición la cual comprende por lo menos dos moléculas de ácido nucleico : i) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para Rev de VIH-1 y ii) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para un inmunogen, en donde la secuencia de codificación para el inmunogen comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH ue incluye un RRE y 2) por lo menos un CTE.
  16. 16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la etapa de administración al individuo de una composición la cual comprende una construcción genética que comprende i) secuencia de codificación para Rev de VIH-1, 7 ii) secuencia de codificación para el inmunogen, en donde la secuencia de codificación para el inmunogen comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificicón para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y 2) por lo menos un CTE; o
  17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la etapa de administrar al individuo una composición que comprende por lo menos dos moléculas de ácido nucleico: i) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y ii) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para un inmunogen, en donde la secuencia de codificación para el inmunogen comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y 2) por lo menos un CTE.
  18. 18. Un método para suministrar una proteína a un individuo caracterizado porque comprende la etapa de administrar al individuo ya sea: a) una composición la cual comprende una construcción genética que comprende i) una secuencia de codificación para el Rev de VIH-1, y ii) una secuencia de codificación para la proteína, en donde la secuencia de codificación para la proteína comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y 2) por lo menos un CTE; o ) una composición la cual comprende por lo menos dos moléculas de ácido nucleico : i) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y ii) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para la proteina, en donde la secuencia de codificación para la proteína comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y 2) por lo menos un CTE.
  19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque comprende la etapa de administrar al individuo una composición que comprende una construcción genética que comprende i) una secuencia de codificación para Rev de VH-1, y ii) una secuencia de codificación para la proteína, en donde la secuencia de codificación para la proteína comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteina estructural de VIH que incluye un RRE Y 2) por lo menos un CTE.
  20. 20. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque comprende la etapa de administrar al individuo una composición que comprende por lo menos dos moléculas de ácido nucleico: i) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para Rev de VIH-1 y ii) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para la proteína, en donde la secuencia de codificación para la proteína comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH-1 que incluye un KRE y 2) por lo menos un CTE.
  21. 21. Un método para producir una proteína en una célula caracterizado porque comprende la etapa de cultivar una célula que comprende ya sea: a) una construcción genética que comprende i) una secuencia de codificación para Rev de VIH- 1, Y ii) una secuencia de codificación para la proteína, en donde la secuencia de codificación para la proteína comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y 2) por lo menos un CTE; o b) por lo menos dos moléculas de ácido nucleico en donde : i) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y ii) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para la proteína, en donde la secuencia de codificación para la proteína comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y 2) por lo menos un CTE.
  22. 22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque comprende la etapa de cultivar una célula que comprende una construcción genética que comprende i) una secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y ii) una secuencia de codificación para la proteína, en donde la secuencia de codificación para la proteína comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y 2) por lo menos un CTE.
  23. 23. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque comprende la etapa de cultivar una célula que comprnde una construcción genética que comprende or lo menos dos moléculas de ácido nucleico: i) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para Rev de VIH-1, y ii) por lo menos una molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de codificación para la proteína, en donde la secuencia de codificación para la proteína comprende 1) por lo menos una porción de secuencia de codificación para una proteína estructural de VIH que incluye un RRE y 2 ) por lo menos un CTE .
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