MXPA05001708A

MXPA05001708A - Forma solida cristalina del acido (2s, 5z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico.

Info

Publication number: MXPA05001708A
Application number: MXPA05001708A
Authority: MX
Inventors: Ann E Hallinan
Original assignee: Pharmacia Corp
Priority date: 2002-08-23
Filing date: 2003-08-22
Publication date: 2005-04-19
Also published as: AU2003258327B2; US20040132822A1; PL375557A1; TWI340133B; IL166599A0; ATE556047T1; AR041038A1; JP4708024B2; WO2004018412A1; BR0313752A; EP1534668B1; CA2494583C; NZ538184A; KR20050058443A; KR100893647B1; JP2005536541A; RU2314290C2; TW200413291A; ZA200501134B; AU2003258327A1

Abstract

El acido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico es cristalizado como una sal anhidra HCL 1.5 estequiometrica y se describe un metodo de cristalizacion cuantificable. La forma salina fue caracterizada y la configuracion absoluta del centro quiral fue confirmada como "S". El acido (2S,5Z)-2-amino-7- (etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico se fundio significativamente y aparentemente era aceptablemente no-higroscopico para utilizarse en una composicion farmaceutica.

Description

FORMA SÓLIDA CRISTALINA DEL ÁCIDO (2S,5Z)-2-AMlNO-7- (ETANIMIDOILAMINO)-2-METILHEPT-5-ENOICO. CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención comprende un nuevo compuesto útil en el tratamiento de enfermedades, y más particularmente una sal nueva del hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico, y sus composiciones farmacéuticas, para el tratamiento de condiciones que implican una expresión inadecuada de óxido nítrico de la isoforma ¡nducible de la óxido nítrico sintasa. El ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico se describe y se reivindica en el documento de EE.UU. número de serie 09/953.049 transferido legalmente, presentado el 15 de septiembre del 2001 , que reivindica la prioridad al documento de EE.UU. número de serie provisional 60/232.683, presentado el 15 de septiembre del 2000, ambos incorporados en este documento como referencia. También se describe el ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico en el documento de la publicación internacional número WO 02/22562, publicado el 21 de marzo del 2002, que es una publicación de solicitud de patente internacional PCT/US0 28673 transferida legalmente, presentada el 15 de septiembre del 2001 y que se incorpora en este documento como referencia. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El óxido nítrico (NO) es un gas radical libre bioactivo producido por cualquiera de las diversas isoformas de la enzima óxido nítrico sintasa (NOS). La actividad fisiológica por la que más tarde fue identificada con el NO fue descubierta inicialmente a principios de los años 80 cuando fue encontrada que la relajación vascular causada por la acetilcolina es dependiente de la presencia del endotelio vascular. Actualmente se sabe que el factor derivado del endotelio, llamado después factor de relajación derivado del endotelio (EDRF), que media tal relajación vascular es el NO que se genera en el endotelio vascular por una isoforma de NOS. Se sabe de la actividad del NO como vasodilatador desde hace más de 100 años. Además, el NO es la especie activa derivada de conocidos nitrovasodilatadores incluyendo amilnitrato y trinitrato de glicerilp. El óxido nítrico es también un estimulador endógeno de la guanilato ciclasa soluble (cGMP), y por lo tanto estimula la producción de cGMP. Cuando la NOS se inhibe por la N-monometilarginina (L-NMMA), se previene completamente la formación de cGMP. Además de la relajación dependiente del endotelio, el NO se sabe que está implicado en un número de acciones biológicas incluyendo la citotoxicidad de células fagocitarias y la comunicación célula-a-célula en el sistema nervioso central. La identificación de EDRF como NO coincidió con el descubrimiento de la ruta bioquímica por la que el NO se sintetiza a partir del aminoácido L-arginina por la enzima NO sintasa. Hay al menos tres tipos de NO sintasa que son: (i) un constitutivo, la enzima dependiente de Ca /calmodulina, localizada en el cerebro, que libera NO en respuesta al receptor o a un estímulo físico; (ii) una enzima independiente de Ca++, una proteína de 130 kD, que se induce después de la activación del músculo vascular liso, macrófagos, células del endotelio, y un número de otras células por endotoxina y citoquinas; y (iii) un constitutivo, la enzima dependiente de Ca++/calmodulina, localizada en el endotelio, que no se libera en respuesta al receptor o a un estímulo físico. Una vez expresada, la óxido nítrico sintasa inducible (en lo sucesivo en este documento "¡NOS") genera NO continuamente durante largos períodos. Estudios clínicos han mostrado que la producción de NO y la expresión de ¡NOS aumentan en una variedad de enfermedades inflamatorias crónicas, tales como artritis reumatoides y osteoartritis (véase, por ejemplo, Mclnnes I. B. et al., J. Exp. Med. 184: 1519 (1996)),' enfermedad inflamatoria del intestino (véase, por ejemplo, Lundberg J. O. N. et al., Lancet 344: 1673, (1994)), y asma (véase, por ejemplo., Hamid, Q. et al., Lancet 342: 1510 (1993)), y la ¡NOS está implicada como un factor patológico principal en estas enfermedades inflamatorias crónicas. Así, la inhibición de la producción de NO en exceso mediante ¡NOS probablemente es anti-inflamatoria. Sin embargo, ya que la producción de NO a partir de eNOS y nNOS está implicada en la fisiología normal, sería deseable, para cualquier inhibidor de NOS que fuera usado para tratar la inflamación, que sea selectivo para ¡NOS, de tal modo que la modulación fisiológica normal de la tensión arterial consecuencia del NO generado por eNOS y la transmisión neuronal no adrenérgica y no colinérgica consecuencia del NO generado por nNOS permanezcan inafectadas. Con todos los compuestos farmacéuticos y las composiciones, la estabilidad química y física de un compuesto farmacéutico es importante en el desarrollo comercial de la sustancia farmacéutica. Tal estabilidad incluye la estabilidad en condiciones ambientales, especialmente frente a la humedad y en condiciones de almacenamiento. La estabilidad elevada en diferentes condiciones de almacenaje es necesaria para predecir las posibles condiciones de almacenaje diferentes durante la vida del producto comercial. Un fármaco estable evita el uso de condiciones de almacenaje especiales así como la frecuencia del reemplazo de inventario, Un compuesto farmacéutico también debe ser estable durante el procedimiento de fabricación que a menudo requiere moler el fármaco para alcanzar un material farmacéutico con un tamaño de partículas uniforme y una superficie específica. Los materiales inestables a menudo sufren cambios polimórficos. Por lo tanto, cualquier modificación de una sustancia farmacéutica que realce su perfil de estabilidad proporciona una ventaja significativa respecto a sustancias menos estables. Han sido descritos varios inhibidores de ¡NOS, tales como, por ejemplo, el ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico, que se describe en el documento de la publicación internacional número WO 02/22562 transferida legalmente, publicada el 21 de marzo de 2002, que es una publicación de solicitud de patente internacional PCT/US0128673, presentada el 15 de septiembre del 2001. Tal compuesto, sin embargo, es un sólido amorfo. Sería deseable, por lo tanto, proporcionar una forma sólida cristalina de un inhibidor de ¡NOS tal como el ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanim¡doilamino)-2-metilhept-5-enoico. SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una nueva sal cristalina de hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico, composiciones farmacéuticas, un procedimiento para preparar los nuevos compuestos de sal, un procedimiento para preparar composiciones farmacéuticas, y métodos de utilización del compuesto y composiciones de dicha nueva sal para inhibir o modular la síntesis del óxido nítrico en un sujeto en necesidad de tal inhibición o modulación administrando una sal de un compuesto que preferencialmente inhibe o modula la ¡soforma inducible de la óxido nítrico sintasa sobre las isoformas constitutivas de la óxido nítrico sintasa. El compuesto de sal presente posee actividad en la inhibición útil de la óxido nítrico sintasa, y se espera que sea útil en el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad o condición en la que la síntesis o la sobresíntesis del óxido nítrico formen una parte contribuyente. Estequiometricamente, una celdilla unidad de la sal nueva es dos moléculas del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-met¡lhept-5-enoico y tres moléculas de ácido clorhídrico.

La nueva sal se caracteriza por algunas o todas las siguientes mediciones físicas: análisis elemental (tal como por análisis por combustión), punto de fusión y calor de fusión (calorimetría diferencial de barrido y análisis termogravimétricos), índices de refracción (microscopía de luz polarizada), caracterización estructural por el modelo de difracción de rayos X en polvo, adsorción de la humedad (por ejemplo, con el índice de humedad DVS) y espectro vibracional (espectro Raman). La presente nueva sal puede usarse para tratar enfermedades que implican la degeneración del cartílago, que ocurre en ciertas condiciones tales como la artritis. En consecuencia, las condiciones en las que hay una ventaja en la inhibición de la producción de NO de L-arginina incluyen condiciones de artríticas tales como artritis reumatoide, osteoartritis, artritis gotosa, artritis juvenil, artritis séptica, espondiloartritis, artritis reumática aguda, artritis enteropática, artritis neuropática y artritis piogena. Además, la depresión inducida por NO de la respiración de condrocitos podría modular la pérdida de la matriz y la mineralización del cartílago secundaria en la artritis, en particular en la osteoartritis. Otras condiciones para las que la presente sal puede ser útil incluyen enfermedad crónica o inflamatoria del intestino, isquemia cardiovascular, diabetes, paro cardíaco congestivo, miocarditis, aterosclerosis, migraña, glaucoma, aneurisma aórtico, esofagitis péptica, diarrea, síndrome del intestino irritable, fibrosis cística, enfisema, asma, bronquiectasias, hiperalgesia, isquemia cerebral, trombosis, isquemia global (secundaria al paro cardiaco), esclerosis múltiple y otros trastornos del sistema nervioso central mediados por NO, por ejemplo la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Alzheimer. Otros trastornos neurodegenerativos en los que la inhibición de NO puede ser útil incluyen la degeneración neuronal y/o la necrosis de nervios en trastornos tales como hipoxia, hipoglucemia, epilepsia, y en heridas externas (tales como de la médula espinal y el traumatismo craneal), convulsiones y toxicidad de oxígeno hiperbárico, demencia, por ejemplo demencia presenil y demencia relacionado con el SIDA, Corea de Sydenham, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotróphica, enfermedad de Korsakoffs, imbecilidad que se refiere a un trastorno los vasos cerebrales, trastornos del sueño, esquizofrenia, depresión, depresión u otros síntomas asociados con el síndrome premenstrual (PMS), ansiedad y choque séptico. La presente sal puede usarse además cuando la inhibición del óxido nítrico también pueda desempeñar un papel en el tratamiento, tal como en el dolor incluyendo dolor somatogénico (nociceptivo o neuropático), tanto agudo como crónico. Los presentes compuestos podrían ser usados en cualquier situación del SIDA común o ser administrados tradicionalmente como analgésico opioide. De todos modos, otros trastornos que pueden ser tratados inhibiendo la producción de NO con la presente sal incluyen la tolerancia opiácea en pacientes que necesitan analgésicos opiáceos prolongados, y tolerancia a la benzodiazepina en pacientes que toman benzodiazepinas, y otros comportamientos adictivos, por ejemplo, con la nicotina y trastornos en la alimentación. Los presentes compuestos también pueden ser útiles como agentes antibacterianos. Además las condiciones en las que la presente sal puede usarse para inhibir la producción de NO de L-arginina incluyen hipotensión sistémica asociada con choque séptico y/o tóxico inducido por una amplia variedad de agentes; terapia con citoquinas tales como TNF, IL-1 e IL-2; y como un adyuvante de inmunosupresión a corto plazo en la terapia de trasplantes. La presente sal también puede ser útil en el tratamiento de una condición ocular (tal como la hipertensión ocular, retinitis, uveítis), lupus eritematoso sistémico (LES), glomerulonefritis, reestenosis, secuelas inflamatorias de infecciones virales, síndrome de dificultad respiratoria del adulto (SDRA), daño pulmonar inducido por oxidante, terapia con IL2 (interleuquina 2) tal como en un paciente con cáncer, caquexia, inmunosupresión tal como en la terapia de trasplantes, trastornos de mobilidad gastrointestinal, quemaduras, eczemas, psoriasis, gingivitis, pancreatitis, daño a la extensión gastrointestinal que es el resultado de infecciones, fibrosis cística, tratamiento a un sistema inmunológico disfuncional tal como un adyuvante de inmunosupresión a corto plazo en la terapia de transplantes, inducción al parto, poliposis adenomatosa, control del crecimiento de tumores, quimioterapia, quimioprevención y bronquitis. La presente invención también se refiere a composiciones farmacéuticas para el tratamiento del dolor, asma y otros trastornos de las vías respiratorias, cáncer, artritis, trastornos oculares incluyendo retinopatías y glaucoma, trastornos relacionados con la inflamación incluyendo el síndrome del intestino irritable, y otros trastornos en los que una producción excesiva de óxido nítrico desempeña un papel, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un cristal del hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimido¡lamino)-2-metil ept-5-eno¡co junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable, diluyente o vehículo. Además de ser útil para el tratamiento en humanos, esta forma es también útil para tratamiento veterinario de animales de compañía, animales exóticos y animales de granja, incluyendo mamíferos, pájaros y similares. Los animales más preferidos incluyen caballos, perros y gatos. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 es un diagrama de una celdilla unidad de la sal cristalina 1 ,5 HCI del ácido 2-amino-7-(etan¡midoilamino)-2-metiIhept-5-enoico de la presente invención; La figura 2 es un gráfico del estudio de calorimetría diferencial de barrido del ácido 1 ,5 HCI 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico de la presente invención; La figura 3 es un modelo de rayos X en polvo del ácido 1 ,5 HCI 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico; La figura 4 es un modelo de rayos X en polvo calculado de la estructura de crista! singular superpuesta con un modelo de rayos X en polvo del ácido 1 ,5 HCI 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2- metilhept-5-enoico; La figura 5 es un gráfico termogravimétrico del ácido 1 ,5 HCl 2-amino-7-(etanimidoilam¡no)-2- metilhept-5-enoico de la presente invención; La figura 6 es el espectro Raman de la sal del ácido 1 ,5 HCl (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico de la presente invención. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN 1. Definiciones Los términos "trato", "tratar" y "tratamiento", como se usan en este documento incluyen el tratamiento profiláctico, paliativo, o el tratamiento reconstituyente. La expresión "cantidad eficaz" significa una dosis conducente al tratamiento. Una cantidad eficaz puede ser administrada en una dosis única, o en dosis divididas por un período de tiempo. El término "esferulítica" significa que toma la forma aproximada de una esferulita. El término "esferulita" significa una forma ubicua de un agregado de cristal, que se da en un amplio intervalo de materiales diferentes, caracterizada por el crecimiento radial que conduce a la simetría esférica. ABREVIATURAS ACN o de forma alternativa CH3CN es acetonitrilo AcOH es ácido acético CH2CI es cloruro de metilo DIBAL es hidruro de diisobutilaluminio DMF es dimetilformamida EÍ3 es trietilamina EtOAc es acetato de etilo KH DS es hexametildisilazida de potasio OH es hidróxido de potasio Mel es yoduro de metilo MS es espectro de masas MsCI es cloruro de mesilo NaHCC>3 es hidrógeno-carbonato de sodio (bicarbonato de sodio) a2S04 es sulfato de sodio THF es tetrahidrofurano También comprendida dentro de esta invención hay una clase de composiciones farmacéuticas que comprenden el hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-met¡lhept-5-enoico cristalino en asociación con uno o varios vehículos no tóxicos, farmacéuticamente aceptables y/o diluyentes y/o adyuvantes (en conjunto referidos en este documento como materiales "de vehículo") y, de ser deseado, otros ingredientes activos. La forma cristalina del hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico de la presente invención puede administrarse por cualquier ruta adecuada, preferiblemente en forma de una composición farmacéutica adaptada a tal ruta, y en una dosis eficaz para el tratamiento pretendido. El hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7- (etanimido¡lamino)-2-metilhept-5-eno¡co activo y las composiciones, por ejemplo, pueden administrarse oralmente, intravascularmente, intraperitonealmente, subcutáneamente, intramuscularmente o tópicamente. Para la administración oral, la composición farmacéutica puede estar en la forma de, por ejemplo, un comprimido, una cápsula, una suspensión o un líquido. La composición farmacéutica preferiblemente se prepara en forma de una unidad de dosificación que contiene una cantidad particular del ingrediente activo. Los ejemplos de tales unidades de dosificación son comprimidos o cápsulas. El ingrediente activo también puede administrarse por inyección tal como una composición en la que, por ejemplo, puede usarse solución salina, dextrosa o agua como vehículo adecuado. La cantidad de compuesto terapéuticamente activo que se administra y el régimen de dosificación para tratar una condición de enfermedad con las composiciones y/o el compuesto de esta invención depende de una variedad de factores, incluyendo la edad, el peso, el sexo y la condición médica del sujeto, la severidad de la enfermedad, la ruta y la frecuencia de administración, y el compuesto particular empleado, y así puede variar extensamente. Las composiciones farmacéuticas pueden contener ingredientes activos en un intervalo de aproximadamente 0,1 a 2000 mg, preferiblemente en el intervalo de aproximadamente 0,5 a 500 mg y más preferiblemente entre aproximadamente 1 y 100 mg. Una dosis diaria de aproximadamente 0,01 a 100 mg/kg peso corporal, preferiblemente entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal y más preferiblemente entre aproximadamente 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal, puede ser apropiada. La dosis diaria puede administrarse entre una a cuatro dosis por día. El hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico cristalino también puede administrarse por un dispositivo transdermal. La administración tópica preferiblemente será lograda usando un parche tanto del tipo depósito como de membrana porosa o de una variedad de matriz sólida. En tal caso, el agente activo se suministra continuamente desde el depósito o desde las microcápsulas a través de una membrana en el adhesivo permeable del agente activo, que está en contacto con la piel o la mucosa del receptor. Si el agente activo es absorbido por la piel, se administra al receptor un flujo controlado y predeterminado del agente activo. En el caso de microcápsulas, el agente de encapsulación también puede funcionar como la membrana. La fase aceitosa de las emulsiones de esta invención puede estar constituida de ingredientes conocidos en una manera conocida. Mientras la fase puede comprender simplemente un emulsionante, esto puede comprender una mezcla de al menos una emulsionante con una grasa o un aceite o tanto con una grasa como con un aceite. Preferiblemente, se incluye un emulsionante hidrófilo junto con un emulsionante lipófilo que actúa como estabilizador. También se prefiere que se incluya tanto un aceite como una grasa.

Juntos, el(los) emulsionante(s) con o sin el(los) estabilizador(es) constituyen lo que se denomina cera emulsionante, y la cera junto con el aceite y la grasa constituyen lo que se denomina la base de un ungüento emulsionante que forma la fase aceitosa dispersada de las formulaciones cremosas. Emulsionantes y estabilizadores de emulsión adecuados para uso en la formulación de la presente invención incluyen Tween 60, Span 80, alcohol cetoestearílico, alcohol miristílico, monoestearato glicerílico, y lauril-sulfato de sodio, entre otros. La opción de aceites adecuados o grasas para la formulación se basa en alcanzar las propiedades cosméticas deseadas, porque la solubilidad del compuesto activo en la mayor parte de los aceites posibles que se usan en las formulaciones de emulsión farmacéuticas es muy baja. Así, la crema preferiblemente debe ser un producto no grasiento, que no manche y que sea fácilmente lavable con la consistencia adecuada para evitar su pérdida en tubos u otros recipientes. Los ésteres de alquilo mono- o di-básicos de cadena lineal o ramificada tales como di-isoadipato, estearato de isocetilo, diester de propilenglicol de ácidos grasos de coco, miristato isopropílico, oleato de decilo, palmitato isopropílico, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo pueden usarse o una mezcla de ésteres de cadena ramificada. Estos pueden usarse solos o en combinación dependiendo de las propiedades requeridas. De forma alternativa, se usan lípidos de alto punto de fusión tales como parafina blanca blanda y/o parafina líquida u otras aceites minerales.

Las formulaciones adecuadas para la administración tópica al ojo también incluyen colirios en los que los ingredientes activos son disueltos o suspendidos en un vehículo adecuado, especialmente un disolvente acuoso para los ingredientes activos. Los ingredientes activos antinflamatorios están preferiblemente presentes en tales formulaciones en una concentración de 0-5 a 20%, ventajosamente de 0,5 a 10% y particularmente aproximadamente de 1 ,5% peso/peso. Con objetivos terapéuticos, el hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico cristalino generalmente se combina con uno o varios adyuvantes apropiados a la ruta indicada de administración. De ser administrado oralmente, el compuesto puede mezclarse con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, esteres de celulosa de ácidos alcanóicos, ésteres de alquilo de celulosa, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de calcio y sodio de ácidos fosfóricos y sulfúricos, gelatina, goma de acacia, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, y/o poli(alcohol de vinilo), y luego prensarse o encapsularse para la administración conveniente. Tales cápsulas o comprimidos pueden contener una formulación de liberación controlada como puede proporcionarse en una dispersión de compuesto activo en hidroxipropilmetil-celulosa. Las formulaciones para la administración parenteral pueden ser soluciones de inyección en forma de soluciones acuosas o no acuosas isotónicas estériles o suspensiones. Estas soluciones y suspensiones pueden prepararse a partir de polvos estériles o gránulos que tienen uno o varios vehículos o diluyentes mencionados para uso en las formulaciones para la administración oral. La forma cristalina B puede ser disuelta en agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de algodón, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, alcohol bencílico, cloruro de sodio y/o varios tampones. Se conocen bien y extensamente otros adyuvantes y modos de administración en la técnica farmacéutica. La forma amorfa del hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7- (etanimidoilamino)-2-metilhept-5-eno¡co puede prepararse conforme al esquema general mostrado debajo; ESQUEMA DE SÍNTESIS GENÉRICO a) KOH b) Mel c) TBSCI d) DIBAL e) MsCI f) sal de potasio de 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona g) AcOH h) Tuf20 i) KH DS/(2S,4S)-3-benzoil-2-t-butil-4-metil- ,3-oxazolidin-5-ona j) catalizador de Lindlar k) HCI 6 N Ejemplo de 1. Preparación del dihidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1 -iminoetil)amino]-5- heptenoico: dihidrocloruro del ácido (2S, 5Z)-2-amino-2-metil-7-[amino (1 iminoetil)]- 5-heptenoico EX-1A) (Z)-5-t-butildimetiisililoxi-2-penten-1-ol (EX-1A) se preparó a partir de 5,5-dihidro-2-pirona (Aldrich) por el método de Harold, Mohr y Tamm, Helvética Chimica Acta 66, 2, 1983, 744-754.

EX-1 B) A una solución de EX-1A (720 mg, 3,3 mmol) en CH2CI2 (25 ml_) fueron añadidos Et3N (525 mg, 5,3 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (561 mg, 4,90 mmol). La mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a 0°C y después a temperatura ambiente durante 16 h. Se añadió CH2CI2 adicional, la solución fue extraída con NaHC03, salmuera y fue secada para proporcionar 790 mg de un aceite amarillo. El aceite fue disuelto en DMF (20 mL), y (513 mg, 3,7 mmol) fueron añadidos. La solución resultante fue agitada a 50°C durante 16 h. El disolvente fue eliminado in vacuo y el residuo se dividió entre EtOAc y salmuera. La capa orgánica fue secada (Na2S04) y concentrada para proporcionar un aceite que fue purificado por cromatografía por desorción súbita en columna en gel de sílice eluyendo con étenhexano (1 :1) para dar 780 mg (79%) del producto deseado de amidina ciclica Z-alílica protegida como un aceite claro, que contenía sólo el isómero z deseado por 1HRMN.

EX-1C) Una solución de EX-1 B (100 mg, 0,34 mmol) en una mezcla de ácido acético (1 ml_), THF (3 mL) y agua (1 mL) fue agitada a temperatura ambiente durante 16 horas. La solución resultante fue concentrada in vacuo a un aceite que fue disuelto en EtOAc. La capa orgánica fue lavada con NaHC03 saturado, fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada para dar 80 mg (cuant.) del producto de alcohol deseado como un aceite claro incoloro.

EX-1D) A una solución de CH2CI2 (3 mL) de EX-1C (80 mg, 0,43 mmol) fue añadida Et3N (44 mg) y anhídrido triflico (146 mg, 0,52 mmol) a 0°C, la mezcla fue agitada durante 1 ,5 h. La solución fue concentrada in vacuo y a la mezcla amarilla resultante se añadió una solución de CH2CI2 (1 ,5 mL) de EX-2D (0,15 g, 0,74 mmol). El material ordinario fue purificado por cromatografía por desorción súbita en columna en gel de sílice eluyendo con EtOAc:hexano (1 :1) para dar 62 mg (44%) del producto deseado de triflato como un aceite claro.

EX-1E) A una solución de THF (10 mL) de (2S,4S)-3-benzo¡I-2-t-butil-4-metil-1 ,3-oxazolidin-5-ona (Ref.) (532 mg, 2,04 mmol) a - 78°C se añadió KH DS (4,48 mL, 2,2 mmol, 0,5 en THF). La solución resultante coloreada de naranja fue agitada durante 15 minutos seguido de la adición de EX-1 D (580 mg, 1 ,8 mmol). Se permitió a la solución resultante calentarse a temperatura ambiente seguido de la adición de KHS04 (10%, 1 ,5 mL), salmuera y EtOAc. La capa orgánica fue separada, secada y concentrada ¡n vacuo para proporcionar 960 mg de un aceite amarillo. El material en bruto fue purificado por cromatografía por desorción súbita en columna en gel de sílice eluyendo con EtOAc.hexano (1 :1) para dar 138 mg (18%) del producto alquilado deseado como un aceite claro.

EX-1F) A una solución de metanol (10 mL) de EX-1 E ( 38 mg, 0,32 mmol) fue añadido catalizador Lindiar (260 mg). La mezcla agitada se sometió a reflujo durante 2 horas, luego se enfrió a temperatura ambiente. El catalizador fue eliminado por filtración mediante celite, y el filtrado fue destilado para dar el producto de amidina desprotegido deseado como un aceite amarillo palo. Una solución del aceite amarillo en HCI (6 N, 10 mL) se sometió a reflujo durante ,75 horas. El disolvente se eliminó in vacuo, y la espuma resultante fue purificada por HPLC de fase inversa eluyendo con un gradiente de 30 minutos de 0-40% de CH3CN/H20 (0,25% de ácido acético). Las fracciones que contenían el producto fueron combinadas y fueron concentradas en una espuma. El producto fue disuelto en HCI 1 N y el disolvente fue eliminado in vacuo (2x) para dar 34 mg (20%) del producto de dihidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metiI-7-[(1-iminoetil) amino]-5-heptenoico deseado, MS cale, para C10H19N3O2: m/z = 214 [M+H]+, encontrado: 214. (100%) 1H RMN (D20) d 1 ,40 (s, 3H), 1 ,5-2,0 (m, 4H) 1 ,90 (s, 3H), 3,55 (m, 2H) 5,15-5,25 (m, vinilo, 1H), 5,30-5,45 (m, vinilo, 1 H).

Tabla I: Análisis Nombre del Material: ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2- metilhept-5-enoico (HCI sal. hidrato) Aspecto cristal/goma de incoloro a no incoloro Identificación por LC-MS se conforma en el ácido (2S,5Z)-2-amino-7- (etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico por masas 214 (electropulverización+) Ensayo por LC-MS (por UV) > 99% - contiene co-eluyendo hidrocloruro del ácido (2S)-2-amino-7-(etanimidoiIamino)-2- metilheptanoico sobre-reducido Impurezas por LC-MS 2,5% de hidrocloruro del ácido (2S)-2-amino-7-(por UV) (etanimidoilamino)-2-metilheptanoico sobre- reducido Otra impureza singular +2HC-L (por la relación de integrales de canal de MS) ninguno detectable conforma al estándar Identificación por LC quiral Pureza quiral del > 99,9% (Isómero S) (por UV) Pureza química del 94,62% del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-Ensayo por LC quiral (etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico (por UV) 1 ,73% de hidrocloruro del ácido (2S)-2-amino-7- (etanimido¡Iamino)-2-rnetilheptanoico sobre- reducido Otras impurezas singu lares por LC quiral ninguna detectada conforma a la estructura del ácido (2S,5Z)-2- amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico Identificación por H-RMN (D20) Pureza química del 98% del ácido (2S,5Z)-2- amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico Pureza por 1H-RMN 1% de especie sobre-reducida del hidrocloruro del ácido mino-7-(etanimidoilamino)-2-etilheptanoico specie emigrada por enlace . ctado (el límite de cuantificación es de 50 TFA Residual (% en p/p) Pb < 1 mg/kg Pd < 2 mg/kg Análisis de metales Ni 1 ,8 mg/kg Fe 18,7 mg/kg cale. C: 35,28 H: 7,55 N: 12,34 Cl: 26,03 encontrado C: 34,97 H: 7,41 N: 12,33 Cl: 24,07 -> 2,5 Análisis Elemental HCI 2H20 (Nota: El material parece ser higroscópico - el análisis elemental refleja el contenido de agua en el tiempo del análisis.) Ejemplo 2. Preparación de la forma cristalina del ácido (2S.5Z)- 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico Cristalización El ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico amorfo, con hidrocloruro en exceso, es libremente soluble en agua, metanol y etanol, y soluble en isopropanol y varios disolventes que contienen agua tales como 10% de agua en THF, acetato de etilo saturado en agua, 0% de agua en acetonitrilo y alcoholes superiores con agua. La molécula amorfa es insoluble en considerablemente menos que un mg/mL en los disolventes no acuosos probados: acetona, EK, metil-isobutil-cetona, THF, acetato de etilo, cloroformo, cloruro de metileno, hexanos, ciclohexano, di-isopropiléter, acetonitrilo y tolueno. Aproximadamente 460 mg del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metiIhept-5-enoico fueron disueltos en 0 mL de agua de calidad HPLC. La resina de intercambio iónico Amberlite 1RA400 que había sido convertida de la forma cloruro a la forma hidróxido fue usada para titular la solución del ácido (2S,5Z)-2-am¡no-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico a pH 10,7. Un electrodo selectivo a cloruro indicó que el cloruro se reducía a 200 ppm. Esta solución fue filtrada por una membrana LS de Millipore de 5 µ?? y la solución fue liofilizada. El análisis elemental del sólido liofilizado, Tabla II, indicó que el cloruro se redujo a 0,25 equivalentes, que era compatible con la lectura del electrodo selectiva del ión de 200 ppm. Tabla II Resultados del análisis elemental: medido por análisis por combustión vs. teoría; por ciento en peso.

La sal de hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico fue disuelta en agua, varios alcoholes inferiores, THF-agua, agua en acetonitrilo y acetato de etilo saturado en agua para obtener soluciones concentradas. Los antidisolventes enumerados anteriormente se usaron para forzar la sal de la solución. Se obtuvieron en todos los casos las salidas de fase líquido-líquido, emulsiones y precipitados vitreos. También se dispusieron también células de difusión de vapor con unos pocos sistemas, produciendo exclusivamente la salida de la fase de emulsión. Una muestra de sal de hidrocloruro fue sometida a evaporación rotatoria, fue disuelta, liofilizada y se dejó reposando de cuatro a seis semanas en una campana de humos. Esta muestra comenzó a cambiar espontáneamente. La microscopía de luz polarizada fue usada para mostrar que ocurría la cristalización. Casi la mitad del volumen de muestra se hizo incolora y nunca cristalizó, pero casi la mitad cristalizó realmente. Un poco del material fue usado como semillas en un número de experimentos de cristalización, con varios disolventes, para obtener el material más cristalino del hidrocloruro del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metiIhept-5-enoico. Ocurrió muy poca cristalización, si acaso un poco, y luego sólo muy despacio. Los cristales de cada lote fueron examinados por microscopía de luz polarizada para probar el polimorfismo. El hábito del cristal y las propiedades ópticas permanecieron constantes en una forma. Los cristales de cada lote eran biaxiales, exhibieron una cara de alta birrefringencia y una cara de baja birrefringencia ?-|-?2 < 0,006, con ejes ópticos que surgen de la cara de baja birrefringencia. Ningunas pruebas de solvatación fueron notadas por microscopía electrónica de exploración con espectroscopia de energía dispersiva SEM/EDS o microscopía de calefacción óptica de luz polarizada. El fundido eutéctico de los cristales; con la fase aceitosa incolora que no podía ser completamente eliminada sin disolver también los cristales; era de aproximadamente 210°C. Varios cristales grandes fueron aislados a partir de una primera muestra para su determinación estructural. La estequiometría de la celdilla unidad fue determinada y era: dos moléculas independientes del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico y tres de HCI.

Ninguna solvatación fue observada. El grupo espacial era P1 (triclínico) y la celdilla unidad a = 8,1623, b = 9,0524, c = 10,5937, alfa = 71 ,522, beta = 73,472, gamma = 86,086. Se confirmó que la configuración absoluta del ácido 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico era "S". Aproximadamente 1 ,5 g del ácido (2S,5Z)-2-amino-7- (etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico, (2,5 HCI x 2,0 H20) fueron disueltos en 5,0 mi de H2O y fue añadida la resina OH de amberlite para titular a pH 7, según se midió con un electrodo y medidor del pH. La solución fue filtrada mediante un filtro de 5 µ?? LS de Millipore y fue liofilizada para proporcionar 903 mg de la sal de monohidrocloruro. El material liofilizado fue disuelto prácticamente en 6,0 mL de isopropanol que contenía 0,38% de H2O seguido de la adición de HCI (150 µ?, 12 M) para formar el sesquihidrocloruro. Esta mezcla se agitó y se sónico después y se dejó agitar de la noche a la mañana a temperatura ambiente para asegurar la saturación y el equilibrio. Los cristales semilla fueron añadidos después (aproximadamente 0,1 mg) y la agitación se continuó. Se notaba que la cristalización comenzaba al cabo de unos minutos y pareció ser sustancial al cabo de 3 horas. La solución fue agitada a temperatura ambiente durante 48 horas. Los cristales fueron recogidos por filtración, lavados con un pequeño volumen de isopropanol y fueron sometidos a secado al vacío a 40°C de la noche a la mañana para proporcionar 860 mg, 89% en teoría, de un sólido blanco. Será apreciado que al "sembrar" una solución del ácido (2S.5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico se puede iniciar o aumentar la nucleación en las condiciones descritas. Los cristales están disponibles de Pharmacia Corporation, 4901 Avenida Searle, Skokie, Illinois, EE.UU. 60077. Dos experimentos similares fueron llevados a cabo. Unos cientos de miligramos del ácido (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico fueron disueltos en aproximadamente la misma concentración en isopropanol que el material liofilizado en el experimento anterior. La concentración de hidrocloruro no fue ajustada. Este sistema fue sembrado y agitado a temperatura ambiente. Ninguna cristalización fue observada. En el siguiente experimento el pH de la solución fue ajustado con hidróxido de sodio concentrado a aproximadamente pH 3 y fue sembrada. Algún producto cristalino fue obtenido, pero el rendimiento fue sólo de aproximadamente 30 a 40%. La adición de éter aumentó el rendimiento a cerca del 90%. Ejemplo 3. Caracterización de la sal cristalina del ácido (2S.5Z)- 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico El ácido 1 ,5HCI 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico sólido era cristalino por microscopía de luz polarizada y el tamaño de los cristales estaba sobre el orden de un micrometro. Las partículas aglomeradas eran esferulíticas. El análisis elemental del ácido 1 ,5HCI 2-amino-7-(etan¡midoilamino)-2-metilhept-5-enoico según la metodología física proveyó una correspondencia muy estrecha con la teoría para una sal 1,5HCI sin solvatación, véase la Tabla III. El análisis de agua con culometria KarI Fischer encontró 0,6% de agua, 0,09 equivalentes, de un promedio de dos medidas. Tabla III Resultados del análisis elemental del ácido 1.5HC1 2-amino-7-(etanimido¡lamino)-2-metilhept-5-eno¡co Medido por análisis por combustión vs. teoría; tanto por ciento en peso.

Con la microscopía de luz polarizada del ácido 1 ,5HCI (2S,5Z)-2-amino-7-(etanimidoilamino)-2- metilhept-5-enoico se encontraron unos índices de refracción nd a 1 ,508, p de aproximadamente 1 ,59 y ? 1 ,608, un signo óptico negativo y 2V cerca de 37 grados. La fuerte dispersión de los ejes ópticos fue evidente en las figuras de interferencia. Con la calorimetría diferencial de barrido (DSC) se encontró una sola fusión a 224°C y un calor de fusión de 1 7 julios gram"1. (Véase la figura 2). La figura 3 muestra el modelo de rayos X en polvo del ácido 1 ,5HCI 2-am¡no-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico.

En referencia a la figura 4, el modelo de rayos X en polvo calculado a partir de la estructura individual del cristal superpuesto con el modelo de rayos X en polvo del ácido 1 ,5HCI 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico está muy de acuerdo con la concesión para la diferencia de temperaturas. Los datos del cristal individual fueron recogidos a 120° K y los datos de rayos X en polvo a temperatura ambiente. Ninguna pérdida de masas fue observada por el análisis termogravimétrico (TGA) a la iniciación del fundido (véase la figura 5). Una pérdida del 0,47% fue notada durante la fusión por TGA. El ácido 1 ,5HCI 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico cristalino no es higroscópico a y por debajo de una humedad relativa del 70%. La adsorción de humedad del ácido 1 ,5HCI 2-amino-7-(etanim¡doilamino)-2-metilhept-5-enoico a 25°C, por el balance de humedad DVS, mostró un aumento de la humedad del 0,91% en una humedad relativa del 70% (H.R.). A 80% de H.R. el aumento era de 18,5% y a una H.R. del 90% el aumento fue del 76,8%. El instrumento se puso en ciclo para reducir la humedad relativa y la muestra fue retirada después examinándola por microscopía de luz polarizada. La muestra fue totalmente cristalina después de la eliminación del balance de humedad, pero el tamaño del cristal había aumentado. Las propiedades ópticas fácilmente observadas por PLM sugirieron que no ocurría ningún cambio de la forma cristal, pero al menos un poco de la muestra se había licuado y se cristalizó de nuevo al secarla. La tabla IV muestra los datos detallados del balance de humedad DVS. Esta forma de sal, 1 ,5 HCl no tienen ninguna solvatacion. Tabla IV HR Obietivo (%) Sorción Desorción Hvsteresis 0,0 0,00 13,02 10,0 0,10 20,0 0,16 18,93 18,77 30,0 0,21 40,0 0,26 22,72 22,46 50,0 0,28 60,0 0,27 33,44 33,16 70,0 0,91 80,0 18,48 67,59 49,10 85,0 46,91 90,0 76,82 76,82 Sólido cristalino blanco MP 253 1H-RMN, HR-MS, CHN > 99,0 Sólido cristalino blanco MP 229,33 1H-RMN, HR-MS, CHN > 99,0

Claims

REIVINDICACIONES

1. - Una forma cristalina del ácido 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico.

2. - Una forma cristalina del ácido 2-amino-7-(etanimidoilamino)-2-metilhept-5-enoico caracterizado por al menos una medida física seleccionada del grupo que consiste en: caracterización estructural por difracción de rayos X en polvo como se muestra en la figura 3, espectro Raman como se muestra en la figura 6, punto de fusión de 224°C y un calor de fusión de 147 julios gramo"1. 3.- Un compuesto de fórmula (1) siendo el ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1-iminoetil)am¡no]-5-heptenoico, el hidrocloruro 1 ,5 o uno de sus derivados fisiológicamente funcionales. 4. - Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del hidrocloruro 1 ,5 del ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[amino(1-iminoetil)]-5-heptenoico junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable. 5. - Un método para la profilaxis o el tratamiento de una condición clínica en un mamífero, tal como un ser humano, para el que es indicado un inhibidor de la óxido nítrico sintasa, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto como se reivindica en la reivindicación 1. 6. - El método de la reivindicación 5 en el que dicha condición clínica es seleccionada del grupo que consiste en: dolor, incluyendo dolor somatogénico (nociceptivo o neuropático), tanto dolor agudo como crónico; tolerancia opiácea en pacientes que necesitan analgésicos opiáceos prolongados; tolerancia a la benzodiazepina en pacientes que toman benzodiazepinas; comportamientos adictivos, incluyendo a la nicotina y trastornos de la alimentación; hipotensión sistémica asociada con choque séptico o tóxico; una condición ocular; lupus eritematoso sistémico (LES); glomerulonefritis; reestenosis; secuelas inflamatoria de infecciones virales; síndrome de dificultad respiratoria del adulto (SDRA); daño pulmonar inducido por oxidante; complicaciones asociadas a la terapia con IL2 (interleuquina 2); caquexia; inmunosupresión; trastornos de mobilidad gastrointestinales; quemaduras; eczemas; psoriasis; gingivitis; pancreatitis; daño al tracto gastrointestinal que es el resultado de infecciones; fibrosis cística; tratamiento a un sistema inmunológico disfuncional; poliposis adenomatosa; crecimiento de tumores y bronquitis. 7. - El uso de un compuesto como se reivindica en la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento de una condición clínica para la que es indicado un inhibidor de la óxido nítrico sintasa. 8.- Un método para preparar el hidrocloruro 1 ,5 del ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico cristalino, que comprende las etapas de: (a) obtener una forma no cristalina del ácido (2S,5Z)-2-amino-2-met¡l-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico; (b) opcionalmente añadir ácido clorhídrico hasta que el ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico incorpore ,5 equivalentes de HCI; u (c) opcionalmente ajustar la concentración del ácido clorhídrico con una base apropiada hasta que el ácido (2S,5Z)-2-am¡no-2-metil-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico incorpore 1 ,5 equivalentes de HCI; u (d) opcionalmente eliminar cualquier otro contraión de la sal del ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[amino(1-iminoetil)]-5-hepteno¡co y añadir ácido clorhídrico hasta que el ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1-iminoetil) amino]-5-heptenoico incorpore ,5 equivalentes de hidrocloruro; (e) opcionalmente sembrar el hidrocloruro 1 ,5 del ácido (2S.5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico obtenido con el hidrocloruro 1 ,5 del ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1-iminoetil)amino]-ácido 5-heptenoico cristalino; y (f) opcionalmente añadir un disolvente.