MXPA03000359A - Lipidos de la dieta para mejorar la piel y el pelaje de mascotas. - Google Patents

Abstract

Uso de una fuente de lipidos de la dieta que contiene acidos grasos antimicrobianos para la preparacion de una composicion de alimento diseñada para mejorar o mantener la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota al evitar o regular el crecimiento de patogenos cutaneos y de microflora responsable de la generacion de olores de la superficie corporal y del pelaje.

Description

LIPIDOS DE LA DIETA PARA MEJORAR LA PIEL Y EL PELAJE DE MASCOTAS DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona con el uso de una fuente de lípidos de la dieta para la preparación de una composición de alimento diseñada para mejorar o mantener la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota al regular el nivel de ácidos grasos ant imi crobi anos en la epidermis del animal. La invención también se relaciona con un método para mejorar la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota, y la formulación de alimento para mascota sobre la misma.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La piel es el límite exterior del cuerpo, y juega un papel clave como una barrera entre el organismo vivo y el ambiente. Una de las funciones más importantes de la piel es retener el agua y compuestos hidrosolubles que abandonan o que entran al cuerpo. Una función dañada de barrera de la piel puede llevar, por ejemplo, a susceptibilidad aumentada a infecciones cutáneas, inflamación, prur i to .

La mayor parte de la función de la barrera de la piel se proporciona por la capa exterior de la epidermis, el estrato córneo. Consiste principalmente de capas de querat inoci tos que mueren conforme avanzan hacia la superficie y son esparcidas. El estrato córneo contiene lípidos los cuales ayudan a mantener la cohesión entre los queratinocitos por lo que aseguran la condición impermeable de la epidermis. Existen varios casos en los que la función de barrera de la piel es adecuada bajo condiciones normales, pero se vuelve insuficiente debido a los cambios en las condiciones fisiológicas, ambientales o patológicas. La piel generalmente se adapta a estas condiciones al incrementar la síntesis de lípidos cutáneos; tr igl icé idos , colesterol y esteres de colesterol, ceramidas (Grubauer et al., 1987, Journal of Lipid Research 1987; 28 (6) : 746-752) . Este proceso permite que la piel alcance un nivel adecuado de protección después de aproximadamente 48 horas. La nutrición puede incidir en la función de barrera de la piel. La solicitud de patente internacional WO 9856263 describe la combinación de ácido linoléico y zinc, por ejemplo para el mejoramiento de la calidad de la piel y la condición del pelaje en mascotas. Otro aspecto por el cual la nutrición puede incidir en la piel es a través de los ácidos grasos que pueden inhibir el desarrollo de reacciones inflamatorias en la piel, por ejemplo el ácido graso a-linolénico (Vaug n DM et al., 1994, Vet. Dermatol . 5 : 163-173) . Se sabe que los lípidos de la piel, y de manera más específica los ácidos grasos libres pueden ser antimicrobianos para bacterias patógenas grampositivas (Bibel D.J. et al., 1989, J. invest. Dermatol., 92, 632-638). En particular, los ácidos palmitoléico y láuricos se sabe que tienen actividad antimicrobiana contra patógenos cutáneos comunes a partir de estudios in vitro. En realidad, el ácido láurico, el ácido palmitoléico o el ácido linoléico se ha demostrado que son inhibidores in vitro contra varios patógenos cutáneos tales como Pneumococci , Streptococcus f Coryneba cteri a , Mi crococci f Candida y Staphylococcus aureus (Kabara et al., 1972, Antimicro Agents and Chemo . , 2, 23-28 y, 1978, J. Soc. Cosmet. Chem. , 29, 733-741) . Sin embargo, no hay datos respecto al efecto del nivel aumentado, inducido nutricionalmente de tales ácidos grasos para una protección aumentada contra el crecimiento de patógenos, es decir, al incrementar el nivel de ácidos grasos antimicrobianos en la epidermis o en la piel por medio de nutrición.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En consecuencia, en un aspecto, esta invención se relaciona con el uso de una fuente de lípidos de la dieta para la preparación de una composición de alimento diseñada para mejorar o mantener la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota al evitar o regular el crecimiento de patógenos cutáneos y de olores generados por mi crof lora . Se ha encontrado sorprendentemente que algunos lípidos de la dieta tienen la capacidad de regular la composición de lipidos cutáneos y el contenido de ácidos grasos epidérmicos, particularmente al inducir un incremento de ácidos grasos ant imicrobianos biodisponibles en la epidermis de animales, por ejemplo, y por lo tanto mejorar la salud de la piel o la calidad del pelaje de 1 a mas co t a . Preferiblemente, la fuente de lípidos de la dieta de acuerdo con la presente invención pueden mejorar el nivel de los ácidos grasos antimicrobianos, ácido láurico y ácido palmitoléico en la epidermis de animales. Estos ácidos grasos son activos, por ejemplo contra patógenos cutáneos tales como Staphylococcus a?reus, Staphylococcus intermedius o Malassezia pachydermati s . Los ácidos grasos de la dieta pueden ser de origen vegetal. Preferibl mente están en forma de una mezcla de aceites comestibles y grasas o alimentos que contienen estos, que comprenden por lo menos ácido palmitoléico de la dieta, y de manera más preferible en combinación con otros ácidos grasos de la dieta tales como ácido láurico, ácido linoléico y ácido linolénico alfa-o gama-. En una modalidad preferida, los ácidos grasos de la dieta se utilizan en una cantidad suficiente para obtener un nivel de por lo menos 5% de ácidos grasos ant imi crobianos en la epidermis de animales, y de manera más preferible de por lo menos 5% de ácido palmitoléico epidérmico. En consecuencia, la fuente de grasa de los ácidos grasos de la dieta pueden contener ácido palmitoléico de la dieta en una cantidad de por lo menos 2.5% en peso, en una base de peso seco de los ácidos grasos totales, y de manera preferible desde aproximadamente 3 hasta 10% de los ácidos grasos totales de la dieta. La fuente de ácidos grasos de la dieta también puede consistir de una mezcla de por lo menos ácidos palmitoléico y láurico de la dieta. El ácido palmitoléico de la dieta por lo tanto se puede utilizar en una cantidad de por lo menos 0.2% en combinación con por lo menos aproximadamente 10% de ácido láurico de la dieta, en peso, en una base en peso seco de los ácidos grasos totales. En el ejemplo 2 se muestra un efecto cinergístico de esta mezcla sobre el ácido palmitoléico epidérmico. Esta mezcla también puede incrementar el ácido láurico epidérmico hasta aproximadamente 3.0% de los ácidos grasos epidérmicos. En un aspecto adicional, esta invención proporciona un método para mejorar la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota, que incluye las etapas de suministrar como alimento la formulación de alimento para mascota que comprende por lo menos una fuente de lípidos de la dieta que tienen la capacidad de regular la composición de lípidos cutáneos y el contenido de ácido graso antimic obiano epidérmico.

La invención proporciona además un método para reducir el olor de la superficie corporal o los olores del pelaje de una mascota, que incluye la etapa de suministrar como alimento una formulación de alimento para mascota que comprende por lo menos una fuente de lípidos de la dieta que tiene la capacidad de regular el contenido de ácidos grasos antimicrobianos en la epidermis. La fuente de lípidos de la dieta preferiblemente es como se describe en lo anterior. Este método puede mejorar o mantener la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota al evitar el crecimiento de patógenos cutáneos y de microflora responsable de la generación de los olores en la superficie corporal y el pelaje. En otro aspecto, la invención proporciona una formulación de alimento para mascotas que comprende una fuente de lípidos de la dieta que se seleccionan por su capacidad para regular la composición de lípidos cutáneos y el contenido de ácidos grasos ant imi crobi nos epidérmicos. La formulación de alimento para mascota preferiblemente es un alimento para mascota completo y nutricionalmente equilibrado. De manera alternativa, puede ser un suplemento de la dieta o un adyuvante para la adición en un alimento principal o algún refrigerio. La formulación de alimento para mascotas por lo tanto comprende un agente lípido capaz de inhibir el crecimiento de patógenos cutáneos y de la microflora responsable de la generación de los olores de la superficie corporal y el pelaje. En una modalidad, la formulación de alimento para mascotas también puede contener ácidos -linolénico y ?- 1 ino 1 éni co , en cantidad suficiente para mejorar o mantener la salud de la piel.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona el uso de una fuente de lípidos de la dieta para la preparación de una composición de alimento diseñada para mejorar o mantener la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota al evitar o regular el crecimiento de patógenos cutáneos y de olores generados por microflora. Se ha encontrado so prendent me te que ciertos lípidos de la dieta tienen la capacidad de inducir e incrementar los ácidos grasos antimicrobianos biodisponibles en la epidermis de animales, y al mismo tiempo mantienen una función de barrera adecuada de la piel. En general, estos son ácidos grasos activos que tienen de C:10 a C:18. Estos ácidos grasos antimicrobianos en la epidermis preferiblemente son ácidos palmitoléico y láurico. Al mismo tiempo, también se puede incrementar el nivel en la epidermis de los ácidos grasos con un papel de la función de barrera cutánea y permeabilidad (ácido linoléico) así como aquellos con actividades ant i in fl am tori as (ácido a-linolénico y ?- 1 ino 1 éni co ) . La fuente de lípidos de la dieta de acuerdo con la presente invención puede mejorar o modular particularmente el nivel de ácidos grasos an imicrobianos, ácido láurico y ácido palmitoléico, en la epidermis y en las secreciones epidérmicas de los anima les. Estos ácidos grasos son activos contra los patógenos cutáneos tales como, por ejemplo Staphyl ococcus aureusr Staphylococ us intermedius o Malas sezia pachydermati s . Los lípidos de la dieta provienen de cualquier fuente adecuada y prefe iblemente son de origen vegetal. La fuente de lípidos de la dieta puede ser una mezcla de aceites comestibles y grasas o alimento que contenga estas, que comprende por lo menos ácidos grasos de la dieta tales como ácido palmitoléico, y de manera más preferible en combinación con otros ácidos grasos de la dieta tales co o ácido láurico, ácido linolénico alfa-o gama- . En una modalidad preferida, los ácidos grasos de la dieta se utilizan en una cantidad suficiente para obtener un nivel de por lo menos 5% de ácidos grasos antimicrobianos en la epidermis de animales, y de manera más preferible de por lo menos aproximadamente 5% de ácido palmitoléico epidérmico. En consecuencia, la fuente de ácidos grasos de la dieta puede contener por lo menos ácido palmítoléico de la dieta en una cantidad de por lo menos 2.5% en peso en una base en peso seco de los ácidos grasos totales de la dieta, y de manera preferible desde aproximadamente 3% hasta 10% de los ácidos grasos totales de la dieta. La fuente de ácidos grasos de la dieta también puede consistir de una mezcla de por lo menos ácidos palmitoléico y láurico de la dieta. Cuando se expresan como un porcentaje del producto final, el ácido palmitoléico de la dieta por lo tanto se puede utilizar en una cantidad de por lo menos 0.02% en combinación con por lo menos aproximadamente 1.0% de ácido láurico de la dieta, la mezcla también puede contener por lo menos 1.0% de ácido linoléico. En el ejemplo 2 se muestra un efecto cinergístico de esta mezcla sobre el ácido palmitoléico epidérmico. Esta mezcla también puede incrementar el ácido láurico epidérmico hasta aproximadamente 3.0% de los ácidos grasos epidérmi eos . La composición de ácido graso también puede ajustarse adicionalmente de manera que proporcione una relación óptima (n-6)/(n-3), de aproximadamente 7 a 15. El ácido palmitoléico de la dieta puede provenir de sebo (carnero, res) aves (por ejemplo pollo, pato), pero también de una fuente vegetal adecuada. También puede provenir de cultivos microbianos, por ejemplo levaduras o lípidos de levadura . El ácido láurico de la dieta se puede adquirir por ejemplo, aceite de coco, aceite de babasu, aceite de corojo, sebo de murumuru, aceite de semilla de palma o aceite de tucum. La administración oral de los lípidos de la dieta de acuerdo con la invención o de un alimento que contiene estos resultará en un nivel aumentado de ácidos grasos ant imicrobi anos , ácido láurico y ácido palmitoléico, en la epidermis. Esto incrementará la capacidad de la piel a resistir a la infestación por patógenos cutáneos, por ejemplo Staphylococcus aure?s, Staphyl ococcus intermedius , Malassezia pachydermati s . En un aspecto adicional, esta invención proporciona un método para mantener o mejorar la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota, que incluye las etapas de suministrar como alimento una formulación de alimento para mascotas que comprende por lo menos una fuente de lípidos de la dieta que tiene la capacidad de regular la composición de lípidos cutáneos y el contenido de ácido graso epidérmicos. El método puede incluir por ejemplo, inhibir o evitar el crecimiento de patógenos cutáneos y de microflora responsable por la generación olores en la superficie corporal y del pelaje. La fuente de lípidos de la dieta se selecciona para proporcionar los beneficios descritos antes. La cantidad de la formulación de alimento para mascotas que se va a consumir por la mascota para obtener un efecto benéfico dependerá del tamaño o la mascota, el tipo de mascota y la edad de la mascota. Sin embargo, se puede utilizar de manera más preferible una concentración en el alimento para mascotas de aproximadamente 0.4% de ácido palmitoléico en peso, en una base de peso seco, o de aproximadamente 0.10g/100 kcal. Además, se puede utilizar de manera más preferible una concentración en el alimento para mascotas de aproximadamente 0.05% de ácido palmitoléico por peso, en una base en peso seco, en combinación con 1.0% de ácido láurico en la dieta. Además, la invención proporciona una formulación de alimento para mascotas que comprende una fuente de lípidos de la dieta que se selecciona por su capacidad de regular la composición de lipidos cutáneos y el contenido de ácidos grasos ant imicrobianos epidérmicos. Preferiblemente, la fuente de lípidos de la dieta es capaz de evitar o por lo menos inhibir el crecimiento de patógenos cutáneos y de microflora responsable por la generación de olores en la superficie corporal y pelaje. La formulación de alimento para mascota preferiblemente es un alimento para mascotas completo y nutricion lmente equilibrado. También puede ser un suplemento de la dieta para mascotas o bien en forma de una composición farmacéutica. La formulación de alimento para mascotas nutricionalmente completa, de acuerdo con la invención, puede estar en cualquier forma adecuada, por ejemplo un polvo, un molido seco o granulos u otra forma seca, en forma extruida, en forma semihumedecida o húmeda, por ejemplo como un trozo u hogaza o budín. Se puede enfriar o se puede proporcionar como un producto estable en anaquel. Este producto alimenticio se puede producir por métodos convencionales. Puede incluir cualquiera de uno o más de una fuente de almidón, una fuente de proteína, una fuente de lípidos y por lo menos uno que está constituido parcial o totalmente de la mezcla de grasa que se describe antes. Las fuentes de almidón adecuadas son, por ejemplo, granos y legumbres tales como maíz, arroz, trigo, cebada, avena, soya y mezclas de los mismos. Las fuentes de proteína adecuadas se pueden seleccionar de cualquier fuente de proteína adecuada animal o vegetal; por ejemplo alimento y carne de ganado, carne de aves, carne de peces, concentrado de proteína de soya, proteínas de leche, gluten y similares. Para animales viejos, se prefiere que la fuente de proteína contenga una proteína de alta cal idad . Las fuentes de lípidos adecuados incluyen carnes, grasas animales y grasas vegetales, así como granos oleaginosos y semillas. La elección de las fuentes de proteína y lípido de almidón se determinarán en gran medida por las necesidades nutricionales del animal, consideraciones agradable al paladar y el tipo de producto que se produzca. Para mascotas viejas, el alimento para mascotas preferiblemente contiene proporcionalmente menos grasa que los alimentos para mascotas para las mascotas más jóvenes. Además, las fuentes de almidón pueden incluir uno o más de arroz, cebada, trigo y maíz. El alimento para mascotas opcionalmente también puede contener material prebiótico, un microorganismo probiótico u otro agente activo, por ejemplo un ácido graso de cadena larga. La cantidad de material prebiótico en el alimento para mascotas preferiblemente es menor de 10% en peso. Por ejemplo, el material prebiótico puede comprender aproximadamente 0.1% a aproximadamente 5% en peso del alimento para mascotas. Para alimentos para mascotas el cual utiliza achicoria como la fuente del material prebiótico, la achicoria se puede incluir para que comprenda desde aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 10% en peso de la mezcla de alimento; de manera más preferible desde aproximadamente 1% hasta aproximadamente 5% en peso. Si se utiliza un microorganismo probiótico, el alimento para mascotas preferiblemente contiene desde aproximadamente 10^ hasta aproximadament 10 -1- ° células del microorganismo probiótico por gramo del alimento para mascotas; de manera más preferible desde aproximadamente 106 hasta aproximadamente 108 células del microorganismo probiótico por gramo. El alimento para mascotas puede contener desde aproximadamente 0.5% hasta ap oximadamente 20% en peso de la mezcla del microorganismo probiótico; de manera preferible desde aproximadamente 1% hasta aproximadamente 6% en peso; por ejemplo desde aproximadamente 3% hasta aproximadamente 6% en peso. Los ácidos grasos de cadena larga adecuados incluyen ácido linoléico, ácido linolénico alfa-o gama-, ácido eicosapentanoico y ácido docosahexanoico . Los aceites de pescado son una fuente adecuada de ácidos eicosapentanoico y de ácido docosahexanoico. El aceite de borraja, el aceite de semilla de casis y el aceite de hierba del asno son fuentes adecuadas de ácido gama linoléico. Los aceites de cártamo, aceites de girasol y aceites de maíz así como los aceites de frijol de soya son fuentes adecuadas de ácido linoléico. Si es necesario, el alimento para mascotas se suplementa con minerales y vitaminas de manera que sean nutricionalmente completos. Además, se pueden incorporar en el alimento para mascotas según se desee otros ingredientes diversos, por ejemplo azúcar, sal, especias, condimentos, agentes saborizantes y similares. Para alimento para mascotas seco, un proceso adecuado es cocinado por extrusión, aunque también se pueden utilizar horneado u otros procesos adecuados. Cuando se cocina por extrusión, el alimento para mascotas seco habitualmente se proporciona en forma de un molido. Si se utiliza un material prebiótico, material prebiótico se puede mezclar con uno de los ingredientes adicionales del producto para mascotas seco antes del procesamiento. Un proceso adecuado se describe en la solicitud de patente Europea No. 0850569; cuya descripción se incorpora como referencia. Si se utiliza un microorganismo probiótico, el organismo prefe iblemente se recubre sobre o se llena dentro del producto para mascotas seco. Un proceso adecuado se describe en la solicitud para patente Europea No. 0862863; cuya descripción se incorpora como referencia. Para alimentos húmedos, se puede utilizar el proceso descrito en las patentes de los Estados Unidos Nos. 4,781,939 y 5,132,137 para producir productos de carne simulada. Las descripciones de estas patentes se incorporan como referencia. Otros procedimientos para elaborar productos de tipo en trozos también se pueden utilizar; por ejemplo cocinado en un horno de vapor. Al ernativamente, se pueden elaborar productos del tipo de hogaza mediante emulsificación de material de carne adecuado para producir una emulsión de carne, agregar un agente gelificante adecuado y calentar la emulsión de carne antes de rellenarse en latas u otros envases . La cantidad del alimento para mascotas que se va a consumir por la mascota para obtener un efecto benéfico dependerá del tamaño de la mascota, el tipo de mascota y la edad de la mascota. Sin embargo, se prefiere de manera adicional utilizar una concentración en el alimento para mascota 0.4% de ácido palmitoléico en peso en una base en peso seco, o de 0.1g/100 kcal. Además, se prefiere utilizar de manera adicional una concentración en el alimento para mascotas de aproximadamente 0.05% de ácido palmitoléico en peso, en una base en peso seco, en combinación con 1.0% de ácido láurico en la dieta . El efecto de los ácidos grasos en la dieta se evalúa sobre los ácidos grasos epidérmicos y la función de barrera cutánea en ensayos in vi vo . Se puede manipular por la dieta el nivel de ácidos grasos antimicrobianos en la epidermis. En un último aspecto, la formulación de alimento para mascotas de acuerdo con la invención puede contener también ácidos linoléico, - y ?-linolénico en una cantidad suficiente para mejorar o mantener la salud de la piel. Una fuente adecuada de ácido linoléico en la dieta puede ser aceite de girasol o de frijol de soya. Se proporcionan los siguientes ejemplos a modo de ilustración únicamente y de ninguna manera se deben considerar como limitantes de la materia objeto de la presente solicitud. Todos los porcentajes se proporcionan en peso a menos que se indique de otra manera. Los ejemplos están precedidos por una descripción breve de las figuras.

Figura Figura 1: Relación entre el ácido palmitoléico de la dieta y epidérmico en dietas suministradas a ratones desnudos con varias combinaciones de aceites (ambas expresadas como % de ácidos grasos) . Cada punto es un valor promedio (en donde n= 10) . Media + SD, (desviación estándar), en donde n= 10.

EJEMPLOS Ejemplo 1: actividad antimicrobiana in vitro d? ácidos grasos, determinación de la concentración inhibidora mínima (MIC) Se desarrolló un método colorimétrico para medición cuantitativa de las susceptibilidad de las cepas de Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius y Malassezia pachydermati s a los ácidos grasos. Este método se basa en los ensayos descritos por Hogan, J.S., et al., 1987, J. Dairy, Sci. , 70, 927-934 y Tiballi, R.N., et al., 1995, J. Clin. Microbiol . , 33 (4), 915-917. Los microorganismos utilizados en este estudio fueron Staphylococcus aureus F?M 51, 52, 84 (aislados de alimentos), ATCC 6538, S taphyl ococcus intermedius BCCM™/LMG 9079, 13351 y Malassezia pachidermatis ATCC 14522. Las cepas de Staphylococcus se hacen crecer en caldo Lab-Lemco broth (LL btoth, Oxoid CM15) durante 18-20h a 30°C y se cultiva Malassezia durante 5 días a 30°C en medio de Dixon líquido (30g de extracto de malta, 20g de Oxbile, 15g de Agar, 5g de pep t ona i co 1 ó gi ca , 2.5 g de monooleato de glicerol, 10 ml de Tween™ 40, pH = 5.4 +_ 0.2) . Después de lavar en solución salina (Oxoid, BR53), los granulos celulares se resuspenden en caldo LL suplementado con agar 0.15% (p/v) . Las concentraciones inhibidoras mínimas (las MIC) de los ácidos palmitoléico, láurico y oleico (NU-CHECK-PREP, Inc. DK, U-40-A, N-12-A, U-46-A respectivamente) se investigan en un ensayo de placa de microtitulación utilizando un colorante de oxidación-reducción AlamarBlue™ (Interchim, Francia), como un indicador de crecimiento. Cada placa se ajusta con cada uno de los microorganismos de prueba, como siguen: una columna, 110 µl de caldo LL estéril suplementado con 0.15% de agar (control negativo), una columna, 100 µl de caldo LL estéril suplementado con agar 0.15% más 10 µl del microorganismo de prueba (control positivo) , otras columnas, 100 µl de diluciones dobles seriadas de los ácidos grasos de prueba (diluidos en caldo LL suplementado con agar 0.15%) más 10 µl de microorganismos (concentración final de 10°-10 células/ml). Las placas se incuban a 30°C en aire ambiente y se examinan a 24h y 4-5 días a partir de cepas de Staphylococcus y de Malassezia , respectivamente. Después del período de incubación, TM se agrega a cada pozo 25 µl de solución Ala arBlue (diluido 1/4 con solución salina amortiguada con fosfato lO M, Tween 20 0.05%, Sigma P3563), a cada pozo. Después de una segunda incubación durante 2h { Staph ylococcus) y 1 día (Malassezia) a 30 °C, se determinan los puntos finales visualmente al observar un cambio de color de azul (sin crecimiento) a rosa (crecimiento) . Se define la MIC como la concentración más baja de ácido graso que no muestra crecimiento (ningún cambio de color) . Tabla 1: Intervalo de MIC para cuatro cepas de S. rango MIC (mg l) ácido graso Stphylococcus Staphylococcus Mtúassezia aureus mtermedius paehydermatis Oléico >25 >25 >25 Pal itolcico 0.02 0.02-0.1 0.25 ->1 Laúrico <0.2-0.4 <0.2-0.8 <0.2 aureus, dos cepas de S. intermedius y una cepa de M. pachydermatís determinada por un método colorimétrico utilizando AlamarBlue™.

Ejemplo 2: ensayos in vivo del efecto de los ácidos grasos en la dieta sobre los ácidos grasos epidérmicos y la función de barrera de la piel .

MATERIALES Y MÉTODOS Modelo animal El modelo animal in vivo son ratones desnudos alimentados con dietas enriquecidas con diversas mezclas de aceite a un nivel constante de lípidos totales. Se seleccionan ratones desnudos debido a su carencia de pelo lo que permite acceso fácil a la piel para medición de parámetros biofísicos. Además, la composición de los lípidos cutáneos principales es similar a la de los humanos, aunque existen ciertas diferencias en la composición de ceramida (Vicanova et al., Arch. Dermatol. Res. , 1999, 291 : 405-412 ) .

Protocolo y dietas Se alimenta a ratones desnudos destetados (Iffa-Credo, L'Arbresle, Francia) con una dieta irradiada estándar para ratones inmunodef icient s (UAR, R03, UAR, Vi 11 e o i s son , Francia) durante cuatro días consecutivos. Se albergan en un área especial de la instalación para animales de manera que se mantiene una exposición mínima a patógenos potenciales. El cuarto se mantiene a una temperatura de 26 + - 1°C y una humedad relativa de 45 +- 5%. Los ratones después se asignan de acuerdo al peso corporal en seis grupos experimentales de once ratones cada uno. Después se les proporciona acceso ad libitum a dietas experimentales y a agua corriente durante 35 días. Estas dietas se basan en una dieta comercial para roedores desnudos (Kliba 2049, Kliba, Kaiseraugst, Suiza) la cual se modifica de manera que proporciona 11% en peso de grasa. Todo el contenido de grasa de estas dietas se proporciona bajo la forma de mezclas de grasas proporcionadas por Nestlé, las cuales se agregan a la dieta basal. La fuente de la dieta control es sebo. Las otras fuentes se formulan de manera que contienen cantidades variables de ácido linoléico así como otros ácidos grasos de interés potencial: ácido linolénico-a, ácido linolénico-? y ácidos grasos con actividad antimicrobiana conocida in vitro (ácido láurico y palmitoléico) . Estas dietas primero se irradian. Las fuentes y el perfil de ácido graso de la dieta, determinado analíticamente después de irradiación, se muestran en la tabla 2.

Oléico 33 32 46 27 19 22 Linoléico 5.4 38 16 23 16 37 ?-lino_énico 7.0 a-Unoléiiico 0.5 0.5 0.5 23.6 0.8 5.8 saturado 51 24 22 22 61 22 Total n-6 5.4 38.1 15.9 22.9 15.5 43.6 Total n-3 0.5 0.5 0.5 23.6 0.8 5.8 ín-6V(n-3) 10.8 82.8 30.5 1.0 19.4 7.6 Tabla 2: Composición de la dieta (g/100 g, excepto para ácidos grasos individuales: g/100 g de ácidos grasos) . Los valores son los que se proporcionan por el fabricante excepto (a) : analizado en NRC/Q? y (b) : analizado en NRC/N. Ta: sebo, Su: girasol, Ma : macadamia, Co : coco. Estas dietas se proporcionan como alimento durante cuatro semanas al final de lo cual se miden los parámetros biofisicos de la piel: pH, hidratación, pérdida de agua transepidérmica (TEWL) . También se realiza una prueba dinámica de la regeneración de la función de barrera de la piel después de la exposición. Al final del período de estudio de 5 semanas, se sacrifica a los ratones y se miden los ácidos grasos epidérmicos por cromatografía de gases.

Pérdi da de a gua transepi dérmi ca La pérdida de agua transepidérmica basal se mide después de 30 días utilizando el equipo TEW Ameter TM 210 (de Courage & Khazaka) utilizando una sonda regular de 6 mm .

Recolección de muestra Se sacrifican 35 ratones y 36 días después del inicio del ensayo. La piel se muestrea en su totalidad, excepto para las extremidades y la cabeza. A la piel se aplica con el lado de la dermis hacia abajo en una caja de Petri de vidrio que contiene aproximadamente 3 ml de solución de tripsina-EDTA (tripsina EDTA, tripsina 0.05%, EDTA 0.53 M, 4 Na en HB?S, cat. 25300-054, GIBCO BRL Grand Island NY) . Las muestras de piel se mantienen durante la noche a 4°C y la dermis se raspa manualmente. La epidermis se congela a -40°C, se liofiniliza y almacena a -20°C hasta análisis.

Mé todos ana lí ti cos Se extraen lípidos epidérmicos de aproximadamente de 100 mg de muestras liofilizadas por un solvente de 2:1 de cloroformo/metanol, enjuagado con una solución de KCl 0.9% y se determinan los ácidos grasos después de transes ter i f icación directa por HCl/metanol utilizando C23:0 como un estándar interno.

Es tadís tica Excepto cuando se especifique, la detección de diferencias en el grupo se lleva a cabo por ANOVA, y las diferencias entre grupos se prueban utilizando la prueba de Tukey. Cuando solo se comparan únicamente dos grupos, se utiliza la prueba t clásica. El nivel de significancia es de 0.05.

RESUL TADOS Se encuentran efectos importantes del tratamiento en ácidos grasos epidérmicos, junto con diferencias importantes entre grupos (Tabla 3) .

Tabla 3: ácidos grasos epidérmicos en ratones desnudos alimentados con dietas enriquecidas con diversas combinaciones de aceite (% de ácidos grasos, media +- SD, n=10) . Los valores que comparten diferentes subíndices de letra son estadísticamente diferentes de manera significativa a p= 0.05. <LD: inferior al límite de detección (corresponde a <0.1% y promedio <0.5%) . Ta: sebo, Su: girasol, Ma: macadamia, Flax: semilla de lino, Co: coco.

Composici ón d? ácido graso an timicroblano epidérmico Se ha encontrado sorprendentemente que la concentr ción de ácido palmitoléico en la epidermis depende del nivel en la dieta y se puede incrementar hasta 6% de ácidos grasos (Tabla 3) . Los grupos de ratones alimentados con sebo, coco y aceite de macadamia (grupos de Sebo, ?ebo/Gi rasol /Aceit e de coco y S bo /Gi r asol /Macadami a ) tienen las concentraciones más altas de ácido palmitoléico. La relación entre el ácido palmitoléico de la dieta y epidérmico se ilustra en la Figura 1. Se muestra que en ausencia de ácido láurico, el ácido palmitoléico epidérmico se incrementan como una función del contenido de la dieta y se parece alcanzar una meseta en aproximadamente 4% de los ácidos grasos de la dieta, lo que corresponde a 0.45% de la dieta en ese caso. Una interacción con el ácido láurico de la dieta es evidente, sin embargo, puesto que la dieta de Sebo/Girasol/Coco resulta en una concentración de ácido palmitoléico de 5.5%, muy superior de la que se esperaría a partir únicamente de su contenido de ácido palmitoléico (punto exterior en la figura) . Esto revela que el ácido láurico puede tener un efecto sinergístico con el ácido palmitoléico, reforzando su concentración en la epidermis. Este efecto aparentemente sinerqistico del ácido láurico sobre el ácido palmitoléico puede deberse ya sea al hecho de que el ácido láurico es un precursor de ácido palmitoléico o que inhibe su degradación puesto que es un producto de degradación de ácido palmitoléico por la vía de la oxidación ß. También se observan cambios significativos para el ácido láurico epidérmico, como se suministra por la mezcla de sebo (20%), aceite de coco (60%) y aceite de girasol (20%), la cual se implementa desde aproximadamente el nivel de detección hasta 3.2% de los ácidos grasos epidérmicos. Por lo tanto, se puede incrementar el nivel de ácidos palmitoléico y láurico en la epidermis por medio de la dieta. Ambos ácidos grasos se muestra que son bactericidas potentes a partir de los experimentos in vitro, por ejemplo contra Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius y Malassezia pachydermati s . Por lo tanto, existe un potencial para una protección aumentada contra el crecimiento de patógenos oportunistas por la modulación de la composición de ácidos grasos bacterianos de la epidermis o del sebo. Existe un amplio consenso de que los ácidos grasos más activos son C10.-0 (cáprico), C12:0 (láurico), C14:0 (mirístico), C16:l (palmitoléico), C18:2 n-6 (linoléico) y C18:3n-3 (a- 1 inolénico ) (Puhvel et al, 1970; Kabara et al. 1972; Ko et al, 1978; Galbraith et al, 1971) . Algunos ácidos grasos generalmente no presentan actividad bactericida significati a e incluso pueden favorecer el crecimiento bacteriano. Este es el caso del ácido oleico.

Efecto de los á ci dos grasos de la die ta en el á ci do linoléico epidérmico Se ha encontrado que el nivel de ácido linoléico en la dieta determina su nivel en la epidermis (Tabla 3), con una diferencia de casi 3 veces entre los dos grupos de extremo. Esto se observa sobre un intervalo de ingestión que se inicia desde requerimientos de ratón hasta 6 veces los mismos. Los requerimientos reconocidos internacionalmente para ácido linoléico son 1-2% de las calorías totales de la dieta en humanos, y 0.68% en una base peso/peso en ratas y ratones (National Academy of Sciences. Recommended Dietary Allowances, lO^ edition. National Academy of Sciences, Washington, 1989; National Research Council. Nutrient requirements of laboratory animáis, 4^n revised edición, Academy Press, Washington, 1995) .

Los niveles AAFCO mínimas de ácido linoléico en alimentos para mascotas son de 0.5% para gatos y 1.0% para perros, en una base peso por peso.

Efecto de la dieta sobre otros ácidos grasos . Las concentraciones de los ácidos linolénicos a- y ?- también se pueden incrementar por medio de la dieta, en este caso por un factor de por lo menos 10 (Tabla 3) . Aunque no se incluye exposición proinf1 ama tor i a en este estudio, al incrementar el nivel de ácido linolénico ?- puede ayudar a reducir las manifestaciones de eczema atópico (Horrobin, DF., Am . J. Clin. Nutr. 2000; 71 ( 1 suppl .) : 367?-372?), producción de prostaglandina E2 después de exposición de hipersensibilidad de tipo retardado (Wu. D, et al., Am . J. Clin. Nutr. 1999; 70 (4) : 536-543), e inflamación inducida por radiación (Hopewell JW . et al, Br, J. Cáncer 1993; 68 (1) : 1-7) , aunque un suplemento de ácido linolénico ?- a 600mg/día durante 24 semanas no mejora si nificati amente la dermatitis en la mano, en un ensayo en humanos (Whitaker DK . et al, Dermatology 1996; 193 (2) : 115-120) . Otra aplicación potencial para incrementar el ácido linolénico ?-epidérmico puede ser inhibir la 5 a-reductasa como se muestra para aplicación tópica (Liang T. et al, J. In ve s t . Derm a t ol . 1997; 109 (2) : 152-157) , y por lo tanto se permite reducir algunas manifest ciones de desórdenes cutáneos dependientes de andrógenos. Sin embargo, necesita confirmarse la eficacia en la administración oral.

Parámetros bio físicos Tampoco se encuentran diferencias estadísticamente significativas entre tratamientos para TEWL basal. Esto significa que se mantiene la función de barrera cutánea en un nivel adecuado para la totalidad de las nuestras mezclas de grasa. Esto confirma que las mezclas de grasa que contienen concentraciones apropiadas de ácidos palmitoléico y láurico, así como otros ácidos grasos tales como los ácidos linoléico, -linolénico y ?-linolénico se pueden formular para adición en alimentos, especialmente alimentos para mascotas.

Fuente de la grasa Ta Ta./Su. Ta./Su./Ma. Ta./Su./Fl Ta./?u./ Ta./Su. CO. BCSO Pr poircLcn 100 20/80 20/20/60 20/20/60 20/20/60 20/20/60 TEWL 13.0+5.1 12.8+3.0 11.4+3.6 11.9+3.6 11.1+3.6 13.3+4.8 (basal) g lrp? Tabla 4: valores de línea de base de los parámetros biof ísicos en ratones desnudos alimentados con dietas con diversas combinaciones de aceite. Media +_ SD, con n=ll. Ta : sebo, Su: girasol, Ma : macadamia, Co: coco, Fl: lino Ejemplo 3: alimento seco para perro Una mezcla de alimento está constituida de aproximadamente 58% en peso de maíz, aproximadamente 5.5% en peso de gluten de maíz, aproximadamente 22% en peso de carne de pollo, 10% de una mezcla de ácidos grasos de la dieta que consisten de 60% de sebo, 25% de aceite de girasol, 15% de aceite de coco y sales, vitaminas y minerales constituyendo el resto. La mezcla de alimentación se proporciona como alimento en un pr eacondi cionador y humidificador. El alimento humidificado después se alimenta dentro de un asador extrusor y se gelatiniza. La matriz gelatinizada que abandona el extrusor es impulsada a través de un troquel y se extruye. El extruído se corta en piezas adecuadas para alimentar a perros, y se seca a aproximadamente 110°C durante aproximadamente 20 minutos, y se enfría para formar granulos.

Será evidente para aquellos expertos en la técnica que parte o la totalidad de la mezcla de grasa o de las grasas y aceites utilizados, se pueden agregar en una etapa posterior, por ejemplo como un recubrimiento. Este alimento para mascotas por lo tanto proporciona a una mascota con una cantidad de aproximadamente 0.5% de ácido palmitoléico y aproximadamente 0.01% de ácido láurico de la dieta, así como aproximadamente 0.8% de ácido linoléico en peso del producto final. Este alimento seco para perros se encuentra que ayuda a mantener la salud de la piel y la calidad del pelaje en perros alimentados, en una base en ensayo.

Ejemplo 4 Se prepara un alimento para mascotas como en el ejemplo 3, excepto que la mezcla de ácidos grasos de la dieta consiste de 40% de sebo de res, 20% de aceite de girasol, 30% de aceite de coco y 10% de lino. Este alimento para mascotas por lo tanto proporciona a una mascota una cantidad de aproximadamente 1.3% de ácido láurico en la dieta y aproximadamente 0.33% de ácido palmitoléico. La cantidad de ácido linoléico es de aproximadamente 1.5%. Comprende además un mejorador de palatabilidad adecuado para gatos. Los gatos que recibieron esta formulación en un ensayo de alimentación de 12 semanas mostraron una piel notablemente más brillante y mejorada en general así como una mejor condición del pelaje, cuando se compara con un grupo control que recibe una dieta sin la mezcla de ácidos grasos de la dieta .

Claims (23)

1. REIVINDICACIONES 1. Uso de una fuente de lípidos de la dieta para la preparación de una composición de alimento diseñada para mejorar o mantener la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota al evitar o regular el crecimiento de patógenos cutáneos y de microflora responsable de la generación de los olores de la superficie corporal y pelaje.
2. 2. Uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la fuente se selecciona por su capacidad para modular la composición de lípidos cutáneos del contenido de ácidos grasos epidérmicos ant imi crobi anos .
3. 3. Uso de conformidad con una de las rei indicaciones 1 a 2, en el cual la fuente es una mezcla de aceites y grasas comestibles o alimentos que contienen estas, que comprende por lo menos ácidos palmitoléico de la dieta, sólo o en combinación con ácido láurico, ácido linoléico, y ácido linolénico alfa- o gamma-.
4. 4. Uso de conformidad con una de las r ivindicaciones 1 a 3, en el cual los lípidos de la dieta son de origen vegetal.
5. 5. Uso como se describe en las rei indicaciones 1 a 4, en el cual los lípidos en la dieta se utilizan en una cantidad suficiente para obtener un nivel de por lo menos 5% de ácidos grasos ant imi crob i ano s en la epidermis.
6. 6. Uso de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 5, en el cual el contenido de ácido palmitoléico en la epidermis de los animales se incrementa hasta por lo menos aproximadamente 5%.
7. 7. Uso de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 6, en el cual la fuente de lípidos de la dieta contiene por lo menos 2.5% en peso, en una base en peso seco de ácidos grasos totales de ácido palmitoléico.
8. 8. Uso de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 7, en el cual la fuente de ácidos grasos de la dieta contiene con un porcentaje del producto final, por lo menos 0.02% de ácido palmitoléico de la dieta en combinación con por lo menos 1.0% de ácido láurico de la dieta.
9. 9. Método para mejorar la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota, que incluye la etapa de suministrar como alimento una formulación de alimento para mascota que comprende por lo menos una fuente de lípidos de la dieta que tienen la capacidad de regular el contenido de ácidos grasos antimicrobi nos en la epidermis.
10. 10. Método para reducir el olor de la superficie corporal o los olores del pelaje de una mascota, que incluye la etapa de suministrar como alimento una formulación de alimento para mascotas que comprende por lo menos una fuente de lípidos de la dieta que tienen la capacidad de modular el contenido de ácidos grasos ant imicrobi anos en la ep idermi s .
11. 11. Método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el cual mejora la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota al evitar el crecimiento de patógenos de la piel y de microflora responsable para la generación de olores de la superficie corporal y del pel e.
12. 12. Método de conformidad con una de las reivindicaciones 9 a 10, caracterizado porque en el cual la fuente es una mezcla de aceites y grasas comestibles o alimento que contiene estos, que comprende por lo menos ácido palmitoléico de la dieta, sólo o en combinación con ácido láurico, ácido linoléico, ácido linolénico alfa- o gamma-.
13. 13. Método de conformidad con una de las reivindicaciones 9 a 11, caracterizado porque en el cual los lípidos de la dieta se utilizan en una cantidad suficiente para obtener un nivel de por lo menos 5% de ácidos grasos ant imicrobianos en la epidermis, y particularmente ácido palmitoléico epidérmico .
14. 14. Método de conformidad con una de las reivindicaciones 9 a 12, caracterizado porque en el cual los lípidos de la dieta son de origen vegetal.
15. 15. Composición de alimento para mascotas, que comprende por lo menos una fuente de lípidos de la dieta que se selecciona por su capacidad para regular el contenido de ácidos grasos antimicrobianos en la epidermis de mamíferos.
16. 16. Composición de alimento para mascotas, diseñada para mejorar o mantener la salud de la piel o la calidad del pelaje en una mascota al evitar o regular el crecimiento de patógenos cutáneos y de microflora responsable para la generación de olores de la superficie corporal o del pelaje, la cual comprende por lo menos una fuente de lípidos de la dieta.
17. 17. Composición de alimento para mascotas diseñada para reducir el olor de la superficie corporal y/o el olor del pelaje de una mascota, la cual comprende por lo menos una fuente de lípidos de la dieta, de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 8.
18. 18. Composición de alimento para mascotas, de conformidad con una de las reivindicaciones 15 a 17, caracterizada porque en la cual la fuente es una mezcla de aceites y grasas comestibles o alimento que contiene estos, que comprende por lo menos ácido palmitoléico, sólo o en combinación con ácido láurico, ácido linoléico, ácido linolénico alfa- o gamma- .
19. 19. Composición de alimento para mascotas, de conformidad con una de las reivindicaciones 15 a 18, caracterizada porque la cual contiene lípidos de la dieta en una cantidad suficiente para obtener un nivel de por lo menos 5% de ácidos grasos antimicrobianos en la epidermis, y particul rmente ácido palmitoléico.
20. 20. Composición de alimento para mascotas, de conformidad con una de las r ivindicaciones 15 a 19, caracterizada porque la cual contiene por lo menos 0.25% en peso en una base en peso seco, o por lo menos 0.07g/100 kcal de ácido palmitoléico.
21. 21. Composición de alimento para mascotas, de conformidad con una de las reivindicaciones 15 a 20, caracterizada porque la cual contiene como un porcentaje del producto final, por lo menos 0.02% de ácido palmitoléico de la dieta en combinación con por lo menos 1.0% de ácido láurico de la dieta.
22. 22. Método para incrementar o mantener los niveles sanos de ácidos grasos antimicrobianos en la piel de una mascota animal que comprende alimentar a la mascota con una composición de alimento para mascota que comprende una fuente de lípidos de la dieta.
23. 23. Método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada porque los lípidos de la dieta se seleccionan para incrementar los niveles de ácidos grasos C:10 a C:18 en la epidermi s .