MXPA02009948A - Metodo para la inhibicion de la agregacion de la proteina amiloide y la formacion de imagenes de los depositos amiloides usando derivados aminoindanos. - Google Patents

Metodo para la inhibicion de la agregacion de la proteina amiloide y la formacion de imagenes de los depositos amiloides usando derivados aminoindanos.

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Abstract

La presente invencion proporciona compuestos de la Formula I y un metodo para tratar la enfermedad de Alzheimer usando un compuesto de la Formula I, en donde: R1 y R2 incluyen alquilo y fenilalquilo; R3 es hidrogeno o alquilo y R4 y R5 incluyen alquilo, alcoxi, carboxilo, alquilcarbonilo y nitro. Tambien se proporciona un metodo para la inhibicion de la agregacion de las proteinas amiloides usando un compuesto de la Formula I y un metodo para la formacion de imagenes de los depositos amiloides usando los compuestos de la Formula I.

Description

MÉTODO PARA LA INHIBICIÓN DE LA AGREGACIÓN DE LA PROTEÍNA AMILOIDE Y LA FORMACIÓN DE IMÁGENES DE LOS DEPÓSITOS AMILOIDES USANDO DERIVADOS AMINOINDANOS CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a un método para inhibir la agregación de la proteína amiloide y la formación de imágenes de los depósitos amiloides. Más particularmente, esta invención se refiere a un método para la inhibición de la agregación de la proteína amiloide para tratar la enfermedad de Alzheimer usando derivados aminoindano.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La amiloidosis es una condición caracterizada por la acumulación de varias proteínas fibrilares insolubles en los tejidos de un paciente. Las proteínas fibrilares que comprenden las acumulaciones o depósitos se llaman proteínas amiloides. Mientras que las proteínas particulares o péptidos encontrados en los depósitos varía, la presencia de la morfología fibrilar y una gran cantidad e estructura secundaria ß-hoja es común para muchos tipos de amiloides. Un depósito amiloide se forma mediante la agregación de las proteínas amiloides seguido por la combinación adicional de los agregados y/o las proteínas amiloides.
La presencia de depósitos amiloides se ha mostrado en varias enfermedades, cada uno con su proteína asociada particular, tal como la fiebre Mediterránea, el Síndrome de Muckle-Wells, el mieloma idiopático, polineuropatía amiloide, cardiomiopatía amiloide, amiloidosis senil sistémica, polineuropatía amiloide, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis, enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down, escrapia, enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, kuru, síndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, carcinoma medular de la tiroides, amiloide atrial aislado, amiloide ß2-microglobulina en pacientes con diálisis, miositis corporal por inclusión, depósitos amiloides ß2 en la enfermedad de deterioro muscular, anemia celular de glóbulos rojos anormales, enfermedad de Parkinson e Isletas de insulinoma tipo 2 de la diabetes Langerhans.
Un método simple, no invasor para detectar y cuantificar los depósitos amiloides en un paciente ha sido ansiosamente solicitado. Actualmente, la detección de los depósitos amiloides involucra el análisis histológico de materiales de biopsia o autopsia. Ambos métodos tienen desventajas principales. Por ejemplo, una autopsia solo puede usarse para un diagnóstico post-mortem.
La formación de imágenes directa de los depósitos amiloides in vivo es difícil, porque los depósitos tienen muchas de las mismas propiedades físicas (es decir, contenido de agua y densidad) como los tejidos normales. Los intentos para la formación de imágenes de los depósitos amiloides usando directamente formación de imágenes por resonancia magnética (MRI) y tomografía asistida por computadora (CAT) han sido decepcionante y han detectado los depósitos amiloides solamente bajo ciertas condiciones favorables. Además, los esfuerzos para marcar los depósitos amiloides con anticuerpos, proteína P amiloide en suero u otras moléculas de sonda han proporcionado alguna selectividad en la periferia de los tejidos, pero se ha proporcionado para la pobre formación de imágenes de tejidos Interiores.
Además, sería útil tener una técnica no invasora para la formación de imágenes y la cuantificación de los depósitos amiloídes en un paciente. Además, sería útil tener compuestos que inhiban la agregación de las proteínas amiloides para formar los depósitos amiloides.
Una de la mayoría de enfermedades devastadoras asociada con los depósitos amiloides es la enfermedad de Alzheimer. La enfermedad de Alzheimer es una enfermedad cerebral degenerativa caracterizada clínicamente por la pérdida progresiva de la memoria, cognición, razonamiento, juicio y estabilidad emocional que gradualmente conduce al deterioro mental y finalmente la muerte. Porque la enfermedad de Alzheimer y las enfermedades cerebrales degenerativas relacionadas son un problema médico principal para una población cada vez más envejecida, existe una necesidad de nuevos tratamientos y métodos para diagnosticar las enfermedades.
Varias clases de compuestos se han mostrado para tener actividad en contra del Alzheimer. Los únicos dos agentes actualmente aprobados para el tratamiento clínico de la enfermedad de Alzheimer son la tacrina de los inhibidores acetilcolinaesterasa y donepezil (ver la Patente Norteamericana No. 4,816,456). Las Patentes Nos. 5,716,975 y 5,523,314 se refieren a derivados rodanina útiles como agentes hipoglicémicos y para tratar la enfermedad de Alzheimer.
La presente invención proporciona un grupo de análogos aminoindanil que son inhibidores de la agregación amiloide y además son útiles para tratar la enfermedad de Alzheimer. Los compuestos también son agentes de formación de imágenes debido a su habilidad para enlazar selectivamente a las proteínas amiloide.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona compuestos de la Fórmula en donde: R y R independientemente son hidrógeno, alquilo C C8, alqueniio C2-C8, alquinilo C2-C8, fenil (CH2)n o fenil sustituido (CH2)n, proporcionan que uno de R y R2 es diferente a hidrógeno; R4 y R5 independientemente son hidrógeno, halo, alquilo C Cs, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, fenilo (CH2)n, fenil sustituido (CH2)n, N02, CN, CF3, alcoxi CrC8, C02Rß, tetrazolil, NH(alquilo C?-C8), H(alquilo C C8)2 o S02R8; R3 es hidrógeno o alquilo C Cß; Rd es hidrógeno, alquilo CrC8 o fenilo (CH2)n o fenilo sustituido (CH2)n; n es un número entero de 0 a 4 inclusive; o una sal farmacéuticamente aceptable, éster, amida o prodroga del mismo.
Los compuestos preferidos tienen la Fórmula I en donde uno de R1 y R2 es fenil(CH2)n o fenil sustituido (CH2)n y R5 es C02R6, tetrazolil o S02R6 y Rß es hidrógeno.
Un grupo preferido de compuestos tienen la Fórmula II en donde R1, R2, R4 y Rß son como se definió anteriormente.
Otro grupo preferido de compuestos tienen la Fórmula lll en donde R4, R5 y R6 son como se definió anteriormente y R7 es hidrógeno, halo, N02, CN, alquilo CrC8, alcoxi CrC8, CF3, NH2, NH(alquilo CrC8) o N(alquilo CrC8)2.
Una modalidad de esta invención es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la Fórmula I junto con un portador, excipiente o diluyente de los mismos.
Otra modalidad de esta invención es un método para inhibir la agregación de proteínas amiloides en un mamífero que comprende la administración de una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I. Se proporciona un método adicional para tratar la enfermedad de Alzheimer y los síndromes de amiloidosis periférica y/o central en mamíferos que comprenden la administración de una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I.
También se proporciona un método para la formación de imágenes de los depósitos amiloides, el método comprende las etapas de: a. introducir dentro de un paciente una cantidad detectable de un compuesto marcado de la Fórmula I; b. permitir un tiempo suficiente para que el compuesto marcado llegue a asociarse con los depósitos amiloides y c. detectar el compuesto marcado asociado con los depósitos amiloides.
En una modalidad preferida del método, el paciente tiene o se sospecha que tiene la enfermedad de Alzheimer.
En otra modalidad preferida, el compuesto marcado es un compuesto radio-marcado.
En otra modalidad preferida, el compuesto marcado se detecta usando MRI.
También se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la Fórmula I.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El término "alquilo" significa una cadena de hidrocarburo lineal o ramificada. Los ejemplos representativos de los grupos alquilo son metilo, etilo, propilo, isopropilo, isobutilo, butilo, tert-butilo, sec-butilo, pentilo y hexilo.
Los grupos alquilo preferidos son alquilo C C8.
"Alquenilo" significa una cadena de carbono que tiene uno o dos puntos de instauración en la forma de enlaces dobles. Los ejemplos incluyen etenil, proa-2-enil y hex-2,4-dienil.
"Alquinilo" significa una cadena de carbono que tiene uno o dos enlaces triples, por ejemplo 2-butinil, octa-3,5-dünil y los similares.
El término "alcoxi" significa un grupo alquilo tal como alquilo CrC8 unido a un átomo de oxígeno. Los ejemplos representativos de los grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi, ter-butoxi, propoxi e isobutoxi.
El término "halógeno" incluye cloro, flúor, bromo e yodo.
Los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo y alcoxi precedentes pueden sustituirse.
El término "sustituido" significa que uno o más átomos de carbono en una molécula se ha reemplazado con otro átomo o grupo de átomos. Por ejemplo, los sustituyentes incluyen halógeno, -OH, -CF3, -N02, -NH2, -NH(alquilo CrC8), -N(alquilo CrC8)2, alquilo CrC8, alquilo -OCrC8, -CN, -CF3, -C02H, alquilo -C02CrC8, S02H y alquilo S02CrC8. El término "fenilo sustituido" significa un anillo fenilo en el cual de 1 a 4 átomos de hidrógeno se han reemplazado independientemente con un sustituyente, de preferencia uno seleccionado de la lista anterior. Los ejemplos del fenil sustituido incluye 2,6-diclorofenil, 2-metoxicarbonilfenilo, 3-cianofenil, 2,3,4,5-tetrafluorofenil, 3-aminofenil, 2-hidroxifenil y los similares.
El símbolo "-" significa un enlace covalente.
El término "sal, éster, amida y prodroga farmacéuticamente aceptable" como se usa en este documento se refiere a aquellas sales carboxilato, sales de adición de aminoácidos, esteres, amidas y prodrogas de los compuestos de la presente invención que están, dentro del alcance del buen juicio médico, apropiados para usarse en contacto con los tejidos de pacientes sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica y los similares, conmensurables con una proporción riesgo/beneficio razonable y efectivo para su uso intentado, así como las formas anfotéricas, en donde sea posible, de los compuestos de la invención. El término "sales" se refiere a las sales acidas de adición, orgánicas e inorgánicas de los compuestos de la presente invención. Estas sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento final y purificación de los compuestos o mediante reaccionar por separado el compuesto purificado en su forma de base libre con un ácido inorgánico u orgánico apropiado y el aislamiento de la sal además formada. Las sales representativas incluyen las sales de hidrobromuro, de clorhidrato, sulfato, bisulfato, nitrato, acetato, oxalato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactiobionato y laurilsulfonato y las similares. Estas pueden incluir cationes basados en los metales álcali y alcalino térreos, tales como sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y los similares, así como, amonio no tóxico, amonio cuaternario y los cationes amina que incluyen pero no se limitan a amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina y los similares. (Ver por ejemplo, Berge S.M. et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sci., 66:1-19 (1977) que se incorpora en este documento como referencia).
Los ejemplos de esteres no tóxicos farmacéuticamente aceptables de I compuesto de esta invención incluyen esteres alquilo CrC8 en donde el grupo alquilo es una cadena lineal o ramificada. Los esteres aceptables también incluyen esteres cicloalquilo C5-C7 así como esteres arilalquilo tal como, pero no limitados a bencilo. Se prefieren los esteres alquilo C?-C4. Los esteres de los compuestos de la presente invención pueden prepararse de conformidad con los métodos convencionales.
Los ejemplos de las amidas no tóxicas farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen amidas derivadas de amoniaco, alquiJ aminas CrC8 primarias y dialquil aminas C C8 secundarias en donde los grupos alquilo son cadenas lineales o ramificadas. En el caso de aminas secundarias, la amina también puede estar en la forma de un heterociclo de 5 o 6 miembros que contienen un átomo de nitrógeno. Se prefieren las amidas derivadas de amoniaco, alquil amidas primarias CrC3 y las dialquil amidas secundarias CrC2. Las amidas de los compuestos de la invención pueden prepararse de conformidad con los métodos convencionales.
El término "prodroga" se refiere a compuestos que se transforman rápidamente in vivo para producir el compuesto madre de las fórmulas anteriores, por ejemplo, mediante hidrólisis en la sangre. Una descripción completa se proporciona en T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Deliverv Systems. Vol. 14 de la Serie de Simposio A.C.S. y en Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association y Pergamon Press., 1987, ambas de las cuales se incorporan en este documento como referencia.
Además, los compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como formas solvatadas con solventes farmacéuticamente aceptable tales como agua, etanol y los similares. En general, las formas solvatadas se consideran equivalente a las formas no solvatadas para los propósitos de la presente invención.
Los compuestos de la presente invención pueden existir en diferentes formas estereoisómeras por la virtud de la presencia de centros asimétricos en los compuestos. Se contempla que todas las formas estereoisómeras de los compuestos, así como la mezcla de los mismos, incluyendo las mezclas racémicas forman parte de esta invención.
En la primera etapa del presente método para la formación de imágenes, un compuesto marcado de la Fórmula I se introduce dentro de un tejido o un paciente en una cantidad detectable.
El compuesto es típicamente parte de una composición farmacéutica y se administra al tejido o el paciente mediante los métodos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica.
En los métodos de la presente invención, un compuesto pude administrarse ya sea oral, rectal, parenteral (intravenosa, por intramuscular o subcutáneamente), intracistemalmente, intravaginal, intraperitoneal, intravesical, localmente (polvos, ungüentos o gotas) o como un spray nasal o bucal.
Las composiciones apropiadas para la inyección parenteral pueden comprender soluciones no acuosa o acuosas fisiológicamente estériles aceptables, dispersiones, suspensiones o emulsiones y polvos estériles para la reconstitución dentro de las soluciones inyectables estériles o dispersiones. Los ejemplos de portadores, diluyentes, solventes o vehículos no acuosos o acuosos apropiados incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol y los similares), mezclas apropiadas de los mismos, aceites vegetales (tales como aceite de oliva) y esteres orgánicos inyectables tales como oleato etílico. Puede mantenerse la fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como la lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerida en el caso de dispersiones y mediante el uso de surfactantes.
Estas composiciones también pueden contener adyuvantes tales como agentes preservadores, de humectación, emulsificadores y dispersantes. La prevención de la acción de los microorganismos puede asegurarse mediante varios agentes anti-fúngicos y antibacteriales, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y los similares. También puede desearse incluir agentes isotónicos, por ejemplo azúcares, cloruro de sodio y los similares. La absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable pueden producirse aproximadamente por el uso de agentes retardantes de la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.
Las formas de dosis sólidas para la administración oral incluyen cápsulas, tabletas, pildoras, polvos y granulos. En tales formas de dosis sólidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un excipiente usual inerte (o portador) tal como citrato de sodio o fosfato de dicalcio o (a) agentes de relleno o extendedores, tal como por ejemplo, almidones, lactosa, sucrosa, glucosa, manitol y ácido de silícico; (b) aglomerantes, como por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sucrosa y acacia; (c) humectantes, como por ejemplo, glicerol; (d) agentes desintegrantes, como por ejemplo, goma agar-agar, carbonato de calcio, almidón de papa o tapioca, ácido algínico, ciertos compuestos de silicatos y carbonato de sodio; (e) retardantes de la solución, como por ejemplo parafina; (f) aceleradores de la absorción, como por ejemplo compuestos de amonio cuaternario; (g) agentes humectantes, como por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol; (h) absorbentes, como por ejemplo, caolín y bentonita e (i) lubricantes, como por ejemplo, talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles, sulfato laurel de sodio o mezclas de los mimos. En el caso de cápsulas, tabletas y pildoras, las formas de dosis también pueden comprender agentes de estabilización.
Las composiciones sólidas de un tipo similar también pueden emplearse como agentes de relleno en cápsulas de gelatina llenas duras y suaves usando dichos excipientes como lactosa o azúcar de leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y los similares.
Las formas de dosis sólidas tales como tabletas, grageas, cápsulas, pildoras y granulos pueden prepararse con recubrimientos o capas, tales como las capas entéricas y otros bien conocidos en la técnica. Ellos pueden contener agentes de opacidad y también pueden ser de tal composición que liberan el compuesto activo o compuestos en cierta parte del tracto intestinal en una manera retardada. Los ejemplos de las composiciones Incrustadas que pueden usarse son sustancias poliméricas y ceras. Los compuestos activos también pueden estar en forma micro-encapsulada, si es apropiado con uno o más de los excipientes anteriormente mencionados.
Las formas de dosis líquidas para la administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones jarabes y elíxires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, las formas de dosis sólidas pueden contener diluyentes inertes comúnmente usados en la técnica, tal como agua y otros solventes, agentes solubilizantes y emulsificadores, como por ejemplo, alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato etílico, etil acetato, alcohol bencílico, benzoato bencílico, propilenglicol, 1 ,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites, en particular aceite de cártamo, aceite de cacahuate, aceite de germen de maíz, aceite de oliva, aceite de ricino, aceite de ajonjolí, glicerol, alcohol tetrahidrofurfuril, polietilenglicoles y esteres del ácido graso de sorbitan y mezclas de estas sustancias y los similares.
Además de estos diluyentes inertes, la composición también puede incluir adyuvantes, tales como agentes de humectación, agentes de suspensión y emulsificantes, edulcorantes, saborizantes y agentes perfumantes.
Las suspensiones, además de los compuestos activos pueden contener agentes de suspensión, como por ejemplo, alcoholes isoestearil etoxilados, polietileno sorbitol y esteres de sorbitan, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, goma agar-agar y tragacanto o mezclas de estas sustancias y los similares.
Las composiciones de las administraciones rectales de preferencia son supositorios que pueden prepararse mediante el mezclado de los compuestos de la presente invención con excipientes no irritantes apropiados o portadores tales como mantequilla de cocoa, polietilenglicol o una cera para supositorios, que son sólidos a temperaturas ordinarias pero líquidos en la temperatura corporal y por lo tanto, fusionados en el recto o la cavidad vaginal liberan el componente activo.
Las formas de dosis para la administración tópica de un compuesto de esta invención incluyen ungüentos, polvos, sprays e inhaladores. El compuesto activo se mezcla bajo condiciones estériles con un portador farmacéuticamente aceptable y cualquier preservativo, aglomerante o propelente como se requiera. Las formulaciones oftálmicas, los ungüentos oculares y las soluciones también se contemplan para estar dentro del alcance de esta invención.
En una modalidad preferida de la invención, el compuesto marcado se introduce dentro de un paciente en una cantidad detectable y después de tiempo suficiente ha pasado para que el compuesto llegue a asociarse con los depósitos amiloides, el compuesto marcado se detecta no invasoramente dentro del paciente. En otra modalidad de la invención, un compuesto marcado de la Fórmula I se introduce dentro de un paciente, se permite tiempo suficiente para que el compuesto llegue a asociarse con los depósitos amiloides y posteriormente una muestra de tejido del paciente se remueve y el compuesto marcado en el tejido se detecta aparte del paciente. En una tercera modalidad de la invención, una muestra de tejido se remueve de un paciente y un compuesto marcado de la Fórmula I se introduce dentro de la muestra del tejido. Después de una cantidad de tiempo para que el compuesto llegue a unirse a los depósitos amiloides, se detecta el compuesto.
La administración del compuesto marcado a un paciente puede ser mediante una ruta de administración local o general. Por ejemplo, el compuesto marcado puede ser administrado a un paciente de tal manera que se suministra a través de todo el cuerpo. Alternativamente, el compuesto marcado puede administrarse a un órgano específico o tejido de interés. Por ejemplo, es deseable ubicar y cuantificar los depósitos amiloides en el cerebro para diagnosticar o rastrear el progreso de la enfermedad de Alzheimer en un paciente. El término "tejido" significa una parte de un cuerpo del paciente. Los ejemplos de los tejidos incluyen el cerebro, corazón, hígado, vasos sanguíneos y arterias. Una cantidad detectable es una cantidad de compuesto marcado necesario para detectarse mediante el método de detección seleccionado. La cantidad de un compuesto marcado para introducirse dentro de un paciente para proporcionar para la detección puede determinarse rápidamente por aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, las cantidades de incremento del compuesto marcado pueden darse a un paciente hasta que el compuesto se detecta por el método de detección de selección. Una marca se introduce dentro de los compuestos para proporcionar la detección de los compuestos.
El término "paciente" significa humanos y otros animales. Aquellos expertos en la técnica son también familiares con la determinación de la cantidad de tiempo suficiente para que un compuesto llegue a asociarse con los depósitos amiloides. La cantidad de tiempo necesario puede determinarse fácilmente mediante la introducción de una cantidad detectable de un compuesto marcado de la Fórmula I dentro de un paciente y posteriormente la detección del compuesto marcado en varios momentos después de la administración.
El término "asociado" significa una interacción química entre el compuesto marcado y el depósito amiloide. Los ejemplos de asociaciones incluyen enlaces covalentes, enlaces iónicos, interacciones hidrofílicos-hidrofílicos, interacciones hidrofóbicos-hidrofóbicos y complejos.
Aquellos expertos en la técnica son familiares con las varias formas para detectar los compuestos marcados. Por ejemplo, pueden usarse MRI, tomografía de emisión de positrones (PET) o tomografía computarizada de emisión de fotones simples (SPECT) para detectar los compuestos radio marcados. La marca que se introduce dentro del compuesto dependerá del método de detección deseado. Por ejemplo, si PET se selecciona como un método de detección, el compuesto deberá poseer un átomo de emisión de positrones, tal como 11C ó 18F.
Otro ejemplo de una marca apropiada en un compuesto de la Fórmula I es un átomo tal como 13C, 15N o 19F que pueden detectarse usando MRI que también algunas veces se llama resonancia magnética nuclear (NMR). Además, los compuestos marcados de la Fórmula I también pueden detectarse mediante MRI usando agentes de contraste paramagnético.
Otro ejemplo de detección es la resonancia paramagnética de electrones (EPR). En este caso, las sondas EPR que son bien conocidas en la técnica, pueden usarse tales como nitróxidos.
La formación de imágenes de los depósitos amiloides también puede llevarse a cabo cuantitativamente de manera que la cantidad de depósitos amiloides puede determinarse.
La presente invención también proporciona un método para la inhibición de la agregación de las proteínas amiloides para formar los depósitos amiloides, mediante la administración a un paciente en necesidad de la inhibición de la agregación de proteína amiloide en una proteína amiloide inhibiendo la cantidad de un compuesto de la Fórmula I. Aquellos expertos en la técnica son hábiles para determinar rápidamente una cantidad de inhibición amiloide mediante simplemente administrar un compuesto de la Fórmula I a un paciente en cantidades de incremento hasta que el crecimiento de los depósitos amiloides se disminuye o detiene. La proporción de crecimiento puede examinarse usando la formación de imágenes o mediante tomar una muestra de tejido de un paciente y se observan los depósitos de amiloide en el mismo.
Un paciente en necesidad de la inhibición de la agregación de las proteínas amiloides es un paciente que tiene una enfermedad periférica o central o condición en la cual las proteínas amiloides se agregan. Los ejemplos de dichas enfermedades y condiciones incluyen la fiebre del Mediterráneo, síndrome de Muckle-Wells, mieloma idiopático, polineuropatía amiloide, cardiomiopatía amiloide, amiloidosis senil sistémica, polineuropatía amiloide, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis, enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down, escrapia, enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, kuru, síndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, carcinoma medular de la tiroides, amiloide atrial aislado, amiloide ß2-microgIobulina en pacientes con diálisis, miositis coforal por inclusión, depósitos amiloldes ß2 en la enfermedad de deterioro muscular, anemia celular de glóbulos rojos anormales, enfermedad de Parkinson e Isletas de insulinoma tipo 2 de la diabetes Langerhans.
También se proporcionan por la presente invención los compuestos de la Fórmula I, en donde uno o más átomos en el compuesto se han reemplazado con un radioisótopo. El radioisótopo puede ser cualquier radioisótopo. Sin embargo, se prefieren 3H, 123l, 1l, 131l, 11C y 18F.
Aquellos expertos en la técnica están familiarizados con el procedimiento usado para introducir un radioisótopo dentro de un compuesto. Por ejemplo, los compuestos de la Fórmula I se hacen en donde un átomo 12C se reemplaza por un átomo 13C.
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse a un paciente en niveles de dosis en el rango de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1 ,000 mg por día, que son "cantidades efectivas" para la inhibición de la formación amiloide y el tratamiento de las enfermedades mencionadas anteriormente, especialmente la enfermedad de Alzheimer. Para un adulto humano normal que tiene un peso corporal de aproximadamente 70 kg, una dosis en el rango de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal por día es suficiente. La dosis específica usada, sin embargo puede variar. Por ejemplo, la dosis puede depender en un número de factores incluyendo los requerimientos del paciente, la severidad de la condición que está siendo tratada y la actividad farmacológica del compuesto que esta siendo tratado. La determinación de las dosis óptimas para un paciente particular es bien conocida por aquellos expertos en la técnica.
Los compuestos de la Fórmula I pueden prepararse mediante cualquiera de los varios procesos usando los materiales iniciales rápidamente disponibles y los métodos bien conocidos en la química orgánica. El esquema I posterior ilustra un método típico para hacer los materiales iniciales y los productos finales de ia Fórmula I. Los compuestos de la invención se preparan generalmente mediante reaccionar un amino indano con un haluro fenilo tal como un yoduro de fenilo o bromuro de fenilo.
El esquema 1 inicia con un 2-amino-5-nitro-indano, que se prepara mediante reaccionar 2-amino-indano con ácido nítrico y ácido sulfúrico, generalmente en un solvente tal como ácido trifluoroacético.
El 2-amino-5-nitro-indano se reduce rápidamente al 2,5-diaminoindano correspondiente, por ejemplo mediante la hidrogenación en la presencia de un catalizador tal como el níquel Raney. El grupo 5-amino posteriormente se fenilatado mediante la reacción con un compuesto fenilo soportando un buen grupo de retiro L, por ejemplo en donde L es halo tal como yodo. La reacción se lleva bajo condiciones de acoplamiento mediadas con paladio estándar, tales como en un solvente orgánico (es decir, tolueno) y en la presencia de una base templada (es decir, carbonato de cesio). El producto, un 2-amino-5-fenilaminoindano, además se alquila o fenilata en la posición 2-amino, de nuevo usando los métodos de alquilación estándar.
Los esquemas 2,3 y 4 ilustran la alquilación inicial o fenilación del grupo 2-amino de un 2-amino-5-nitro-indano, seguido por la reducción de un grupo nitro y la fenilación del grupo 5-amino. Todas estas reacciones se llevaron a cabo bajo condiciones estándares, por ejemplo en un solvente orgánico no reactivo, en la presencia de una base templada y generalmente en una temperatura elevada de aproximadamente 60° C a aproximadamente 150° C. Los productos se aislan rápidamente mediante simplemente la remoción del solvente de reacción, por ejemplo mediante la evaporación bajo presión reducida y ellos pueden purificarse si se desea, mediante los métodos estándares tales como cromatografía, cristalización, destilación y los similares.
Esquema 1 Esquema 2 Esquema 3 o LiOH LiOH THF/MeOH THF/MeOH Esquema 4 Los siguientes ejemplos detallados además ilustran la síntesis de compuestos típicos que tienen la Fórmula l. Estos ejemplos son solo representativos y no se intentan que limiten la invención en ningún aspecto. Todas la referencias que incluyen patentes citadas en este documento se incorporan como referencia.
PREPARACIÓN 1 2-Amino-5-nitro-indano sulfato ' Ácido trifluoroacético (60 ml) se cargó dentro de un matraz, se enfrió en un baño agua/hielo y se agregó cuidadosamente 2-aminoindano clorhidrato (10.08 g), seguido por H2S04 (6.0 ml) y HN03 (3.0 ml). El baño de hielo se removió y la mezcla se permitió que se calentara a temperatura ambiente y se agitó por 2 horas. La mezcla posteriormente se colocó en un baño de agua helada para la adición lenta de éter dietílico (300 ml) durante 35 minutos. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche, posteriormente los sólidos se filtraron y se secaron al vacío para dar 15.43 g de 2-amino-5-nitro-indano sulfato.
PREPARACIÓN 2 2-(4-Fluorobencil)amino-5-nitro-indano y 2-[bis-(4-Fluorobencil)amino]-5-nitro-indano El 2-Amino-5-nitro-indano sulfato (3 g) de la Preparación 1 se disolvió en 10 mi de agua y 20 ml 2 M de NaOH. La mezcla se extrajo tres veces con 40 ml de éter t-butil metílico y las capas orgánicas se combinaron y se secaron sobre MgS04/Na2S04, se filtraron y se concentraron mediante evaporación giratoria. El aceite residual se absorbió en 30 ml de CH3CN a los cuales se agregó 4-fluorobenciI bromuro (2.26 g), seguido por K2C03. La mezcla se calentó a reflujo por 18 horas, se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y se concentró. El aceite residual se purificó mediante cromatografía de columna líquida de presión media en sílica gel (MPLC, columna biotage, solvente de gradiente 99:1 a 85:15 (CH2CI2/% de NH4OH en MeOH). El aminoindano mono-alquilado deseado se obtuvo en una producción del 35% (1.10 g) y el aminoindano bis- dialquilado también se aisló (1.38 g, 32% producido). MS (APCl) m/z 287 (M++1) monoalquilado, MS (APCl) m/z (M++1) dialquilado.
PREPARACIÓN 3 Condiciones generales para la reducción del grupo nitro Los indanos nitro sustituidos de la Preparación 2 se reactivaron con hidrógeno en la presencia de níquel Raney para producir el alquilo 2 correspondiente y 2-dialquilamino-5-aminoindanos. El sulfato 2-amino-5-nitro-indano de la Preparación 1 puede hidrogenarse similarmente para proporcionar 2, 5-diamino-indano.
PREPARACIÓN 4 2-n-Pentilamino-5-nitro-indano y 2-N,N-di-n-Pentilamino-5-nitro-indano El 2-Amino-5-nitro-indano sulfato de la Preparación 1n (2g) se disolvió en 20 ml de agua y se produjo a un pH = 11 con 2N de NaOH. La solución acuosa se extrajo con 3 x 30 ml de éter n-butil metílico, los orgánicos se combinaron, se secaron sobre MgS04/Na2S04, se filtraron y se concentraron. El aceite residual se disolvió en 30 ml de acetonitrilo, se agregaron carbonato de potasio (1 g) y 1-nromopentano (1.79 ml). La mezcla se agitó a reflujo por 18 horas, posteriormente se filtró, se concentró y se purificó por cromatografía de columna (MPLC, sílica, gradiente 1 :1 a 3:1 acetato etílico en hexanos) para dar la amina mono-alquilada (0.26 g, 14% de producción) y la amina dialquilada (0.99 g, 43% de producción);MS mono-alquilada (APCl) m/z 249.1 (M++1 ). MS dialquilada (APCl) m/z 319.2 (M++1).
PREPARACIÓN 5 2-(3,4-Diclorobencil)amino-5-nitro-indano El ácido sulfúrico se cargó dentro de un matraz y se enfrió en un baño agua/hielo conteniendo 2-amino-nitro-indano clorhidrato (1.68 g), seguido por HN03 (0.39 ml). El baño frío se removió y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos y posteriormente se enfrió de nuevo en un baño de agua/hielo. Se agregó hidróxido de sodio (25% soln) cuidadosamente a un pH = 11. La solución posteriormente se extrajo con 4 x 60 ml de éter dietílico. Las capas orgánicas se filtraron a través de celita, se secaron sobre MgS04/Na2S04, se filtraron y se concentraron. El aceite negro residual se disolvió en THF (25 ml), se enfrió a 0o C para ia adición de NaH (0.4 g, 60% de la dispersión en aceite mineral). Después de 5 minutos, se agregó dicloro bencil bromuro (3.0 g) y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con 20 ml de agua y 40 ml de Et20, las capas se separaron y los orgánicos se lavaron con 20 ml de agua. Las capas acuosas se combinaron y se lavaron con 30 ml con 30 ml de Et20 y las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre celita y se concentraron. El aceite negro se purificó mediante cromatografía de columna (MPLC, columna de sílica Isco ReadiSep, gradiente del solvente 80:20 para 50:50 Hexano/EtOAc) para dar 2-(3,4-diclorobencil)amino-5-nitro-indano (1.05 g, 32% de producción). MS (APCl) m/z 336.1 (M+-1). El nitro indano se redujo mediante la reacción con hidrógeno y níquel Raney para dar 2-(3,4-diclorobencil)amino-5-amino-indano.
PREPARACIÓN 6 2-Amino-5-(3,4-diclorofenilamino)-indano El 2,5-diamino-indano (0.77 g) (de la Preparación 3) se absorbió en tolueno (0.25 M) y el nitrógeno se burbujea a través de la solución por 5 minutos. (s)-(-)-2,2'-bis(di-p-tolil-fosfino)-1 ,1 '-binaftil [(S)-tol-BINAP] (0.176 g) y acetona dibencilideno de paladio (Pd2(dba)3) (0.123 g), CS2C03 (2.37 g) y se agregó 3,4-dicloro-1-yodo benceno (1.42 g) y la mezcla se calentó a reflujo por 36 horas. La mezcla posteriormente se enfrió, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de un tapón de celita, se concentró y se purificó mediante cromatografía líquida de presión media (columna de sílica gel, eluída con gradiente CH2CI2/MeOH 1% de MeOH para 20% de MeOH). Las fracciones que contienen cualquier rastro del compuesto deseado (espectro de masa) se combinaron y se concentraron para dar 2-amino-5-(3,4-diclorofenilamino)-indano (0.54 g, 35% de producción). MS (APCl) m/z 293.1 (M++1). EJEMPLO 1 Ácido 2-[(2-N,N-d¡-n-pentilamino)-indan-5-il]am¡no-5-nitro-benzoico El 2-N,N-di-n-PentiIamino-5-amino-indano (preparado como se describe en la Preparación 3) (0.88 g) se disolvió en tolueno (0.25 M) y el nitrógeno se burbujeo a través de la solución por 5 minutos. (S)-tol-BINAP (0.16 g) y se agregó metil l-bromo-4-nitro benzoato (0.66 g) y la mezcla se calentó a reflujo por 18 horas. La mezcla posteriormente se enfrió, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de un tapón de celita, se concentró y se purificó mediante cromatografía líquida de presión media (columna de sílica gel, eluída con gradiente CH2CI2/MeOH para 10% de MeOH). Las fracciones que contienen cualquier rastro del producto deseado (esp. de masa) se combinaron y se concentraron para dar metil-2-[(2-N,N-di-n-pentilamino)-indano-5-il]amino-5-nitro-benzoato (1.28 g, 90% de producción). MS (APCl) m/z 468.1 (M++1 ). El metil benzoato (0.5 g) se disolvió en 20 ml de 1:1 THF/MeOH; esta solución se trató con 4 ml de 1 M de LiOH y se agitó a temperatura ambiente por 24 horas. Cuando el material inicial no se observó más mediante espec. de masa, la mezcla se concentró y el aceite residual se purificó mediante cromatografía de columna (MPLC, sílica, gradiente 98:2 para 80:20) (CH2CI2/MeOH + 1% de NH40H). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se concentraron y se secaron al vacío durante toda la noche para dar el ácido 2-[2-N,N-di-n-pentilamino)-indan-5-¡l]amino-nitro-benzoico (0.240 g, 49% de producción). MS (APCl) m/z 454.2 (M*+1). CHN para (C26H35N304) cale: C68.85, H 7.78, N 9.26; encontrado C 69.37, H 7.49, N 8.91.
EJEMPLO 2 Metil 2-[2-(3,4-Dicloro-bencilamino)-indan-5-ilamino]-benzoato El 2-(3,4-Dicloro-bencilamino)-5-amino-indano (1.08 g) se disolvió en tolueno (0.25 M) y el nitrógeno se burbujeo a través de la solución por 5 minutos. (S)-tol-BINAP (0.12 g) y Pd2(dba)2 (0.08 g), CS2CO3 (1.6 g) y se agregó metil 1 -bromo benzoato (0.76 g) y la mezcla se calentó a reflujo por 24 horas. La mezcla posteriormente se enfrió, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de un tapón de celita, se concentró y se purificó mediante cromatografía líquida de presión media (columna de sílica gel, eluída con gradiente CH2CI2/MeOH 1 % de MeOH para 10% de MeOH). Las fracciones que contienen cualquier rastro del producto deseado (esp. de masa) se combinaron y se concentraron para dar metil-2-[2-(3,4-dicloro-bencilamino)-indan-5-ilaminoj-benzoato (0.98 g, 63% de producción). MS (APCl) m/z 441.2 (M++1). CHN para (C24H22Cl2 2?2*0.13CH3OH) cale. C 65.05, H 5.09, N 6.29; encontrado: C 64.72, H 4.96, N 6.35.
EJEMPLO 3 Ácido 2-[2-(3,4-Diclorobencilamino)-indano-5-¡lamino]-benzoico El metil-2-[2-(3,4-dicloro-bencilamino)-indan-5-ilamino]-benzoato (0.98 g) se disolvió en 20 mi 1 :1 THF/MeOH y esta solución se trató con 9 ml 50% de NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 24 horas. Cuando el material inicial no se observó más mediante espectrometría de masa, la mezcla se concentró para remover el MeOH, se extrajo con éter dietílico y el precipitado se colectó mediante filtración y se secó al vacío durante toda la noche para dar ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indano-5-ilamino]-benzoico (0.09 g, 10% de producción). MS (APCl) m/z 427.1 (M++1). CHN para .ßd HCl) cale: 55.83, H 4.45, N 5.66; encontrado: C 55.45, H 4.22, N 5.50.
EJEMPLO 4 Ácido 2-[2-(3,4-Diclorobencilamino)-indan-5-ilamina]-5-n¡tro-benzoico Mediante seguir el procedimiento del Ejemplo 2, el 2-(3,4-diclorobencilamino)-5-amino-indano se reaccionó con metil 2-bromo-5-nit.ro benzoato para dar el metil 2-[2-(3,4-diclorobencil-amino)-indan-5-il-amino]-5-nitro-benzoato (0.65 g, 69% de producción). MS (APCl) m/z 486.0 (M*+1).
El benzoato metílico (0.65 g) se disolvió en 10 ml 1 :1 THF/MeOH y esta solución se trató con 2 mi 50% de NaOH y 1 ml de agua y se agitó a temperatura ambiente por 18 horas. Cuando el material inicial no fue más observado por espectrometría de masa, la mezcla se concentró, los sólidos se disolvieron en agua/acetato etílico 1 :1. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con 2 x 20 ml de acetato etílico. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con 10 ml 50% de NaCI saturado, se secaron sobre MgS04/Na2S04, se filtraron y se concentraron. El aceite residual se purificó mediante cromatografía de columna (MPLC, sílica, gradiente 98:2 a 80:20) (CH2CI2/MeOH + 1% NH4OH). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se concentraron y se secaron al vacío durante toda la noche para dar ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indan-5-ilamino]-5-nitro-benzoico (0.38 g, 60% de producción). MS (APCl) m/z 470.0 (M*-1 ). CHN para (C23H19CI2N304«CH2CI2) cale: C 55.58, H 3.94, N 8.31 ; encontrado: C55.25, H 3.88, N 8.32.
EJEMPLO 5 Ácido 2-[2-(3,4-Diclorobencilamino)-¡ndan-5-ilamino]-5-metoxi-benzoico Mediante seguir el procedimiento del Ejemplo 2, el 2-(3,4-diclorobencilamino)-5-amino-indano se reaccionó con metil 2-bromo-5-metoxi benzoato para dar el metil 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indan-5-il-amino]-5-metoxi-benzoato (0.130 g, 11% de producción). MS (APCl) m/z 471.0 (M++1).
El benzoato metílico (0.130 g) se absorbió en 20 mí 1 :1 THF/MeOH y se trató con 1 M de LiOH (3 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 48 horas. La mezcla posteriormente se concentró y el aceite residual se purificó mediante cromatografía (MPLC, sílica, gradiente 95:5 a 75:25) (CH2CI2/MeOH). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se concentraron y se secaron al vacío durante toda la noche para dar ácido 2-[2-(3,4-dicIorobencilamino)-indan-5-ilamino]-5-metoxi-benzoico (0.03 g, 24% de producción). MS (APCl) m/z 457.0 (M*-1). CHN para C24 22C\2 2O3»0.6 20) cale: C 61.57, H 4.98, N 5.98; encontrado: C61.23, H 4.88, N 5.69.
EJEMPLO 6 Ácido 2-(2-Dipentilamino-indan-5-il-amino)-5-metil-benzoico El 2-(2-Dipentilamíno)-5-iamino-indano (0.5 g) se disolvió en THF (8.7 ml) y se enfrió a -78° C por la adición de LiHMDS (4.0 ml, 1 M en THF). Se agregó ácido 2-Flúor-5-metil benzoico (0.27 g) después de 5 minutos y el baño frío se removió. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó por 16 horas. La mezcla se diluyó con éter dietílico y agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con 2 x 20 ml de éter dietílico. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04/Na2S04, se filtraron y se concentraron. El aceite residual se purificó mediante cromatografía de columna (MPLC, sílica, gradiente 95:5 a 75:25)(CH2CI2/MeOH). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se concentraron y se secaron al vacío durante toda la noche para dar el ácido 2-(2-dipentilamino-indan-5-il-amino)-5-metil-benzoico (0.029 g, 4% de producción). MS (APCl) m/z 421.2 (M++1). EJEMPLO 7 Ácido 4-(2-Dipentilamino-indan-5-il-amino)-3-nitro-benzoico El 2-(2-Dipentilamino)-5-iamino-indano (0.5 g) se disolvió en THF (8.7 ml) y se enfrió a -78° C por la adición de LiHMDS (4.0 ml, 1 M en THF). Se agregó ácido 4-Flúor-3-nitro benzoico (0.32 g) después de 5 minutos y el baño frío se removió. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó por 16 horas. La mezcla se diluyó con éter dietílico y agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con 2 x 20 ml de éter dietílico. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04/Na2S04, se filtraron y se concentraron. El aceite residual se purificó mediante cromatografía de columna (MPLC, sílica, gradiente 95:5 a 75:25)(CH2CI2/MeOH). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se concentraron y se secaron al vacío durante toda la noche para dar el ácido 4-(2-dipentilamino-indan-5-il-amino)-3-nitro-benzoico (0.300 g, 38% de producción). MS (APCl) m/z 454.1 (M++1).
EJEMPLO 8 Metil-2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indan-2-ilamino]-5-nitro benzoato El 2-Amino-5-(3,4-diclorofenilamino)-indano (0.20 g) se disolvió en tolueno (0.25 M) y el nitrógeno se burbujeo a través de la solución por 5 minutos. (S)-tol-BINAP (0.023 g) y Pd2(dba)2 (0.05 g), CS2C03 (0.31 g) y se agregó metil 2-bromo-4-nitro benzoato (0.18 g) y la mezcla se calentó a reflujo por 18 horas. La mezcla posteriormente se enfrió, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de un tapón de celita, se concentró y se purificó mediante cromatografía líquida de presión media (colma de sílica ge, se eluyó con gradiente CH2CI2/MeOH 1% de MeOH a 20% de MeOH). Las fracciones que contenían cualquier rastro del producto deseado (espectrometría de masa) se combinaron y se concentraron para dar metil 2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indan-2-iIamino]-5-nitro-benzoato (0.10 g, 26% de producción). MS (APCl) m/z 472.0 (M++1).
EJEMPLO 9 Ácido 2-[5-(3,4-Diclorofenilamino)-indan-2-ilamino]-5-nitro-benzoico Mediante seguir el procedimiento del Ejemplo 4, el metil 2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indan- 2-iIamino]-5-nitro-benzoato se reaccionó con hidróxido de sodio en THF/MeOH para dar ácido 2-[5- (3,4-diclorofenilamino)-indan-2-iIamino]-5-nitro-benzoico (0.017 g, 18% de producción). MS (APCl) m/z 457.9 (M++1).
EJEMPLO 10 Ácido 2-[2-(4-Fluorobencilamino)-indan-5-ilamino]-nitro-benzoico El 2-(4-Fluorobenc¡Iamino)-5-amino-indano (0.90 g) se disolvió en tolueno (0.25 M) y el nitrógeno se burbujeo a través de la solución por 5 minutos. (S)-tol-BINAP (0.18 g) y Pd2(dba)2 (0.08 g), CS2C03 (1.59 g) y se agregó metil 1-bromo-4-nitro benzoato (0.75 g) y la mezcla se calentó a reflujo por 48 horas. La mezcla posteriormente se enfrió, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de un tapón de celita, se concentró y se purificó mediante cromatografía líquida de presión media (columna de sílica gel, se eluyó con gradiente CH2CI2/MeOH 1 % de MeOH a 10% de MeOH). Las fracciones que contenían cualquier rastro del producto deseado (espectrometría de masa) se combinaron y se concentraron. El aceite crudo residual se disolvió en 10 ml 1 :1 THF: MeOH con 1 ml de NaOH y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. Cuando el material inicial no fue más observado por espectrometría de masa, la mezcla se concentró y el aceite residual se purificó mediante cromatografía de columna (MPLC, sílica, gradiente 95:5 a 75:25 (CH2CI2/1 % de NH4OH en MeOH). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se concentraron y se secaron al vacío para dar 0.83 g del ácido 2-[2-(4-fluorobencilamino)-indan-5-ilamino]-5-nitro-benzoico. MS (APCl) m/z 422.0 (M++1). CHN para [H2OJ) cale: C 63.70, H 4.96, N 9.69; Encotrado: C 63.32, H 4.69, N 9.65.
EJEMPLO 11 Ácido 2-{2-[bis-(4-Fluorobencil)amino]indan-5-ilamino}-5-nitro-benzoico El 2[bis-(4-Fluorobencil)amino]-5-amino-indano (1.28 g) se disolvió en tolueno (0.25 M) y el nitrógeno se burbujeo a través de la solución por 5 minutos. (S)-tol-BINAP (0.18 g) y Pd2(dba)2 (0.12 g), CS2C03 (1.6 g) y se agregó metil l-bromo-4-nitro benzoato (0.76 g) y la mezcla se calentó a reflujo por 48 horas. La mezcla posteriormente se enfrió, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de un tapón de celita, se concentró y se purificó mediante cromatografía líquida de presión media (columna de sílica gel, se eluyó con gradiente CH2CI2/MeOH gradiente 1 % de MeOH a 10% de MeOH). Las fracciones que contenían cualquier rastro del producto deseado (espectrometría de masa) se combinaron y se concentraron para dar 1.89 g del éster acoplado. El aceite crudo residual se disolvió en 30 ml en THF y 20 ml de esta solución se trató con 5m ml 2N de NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 45 horas. Cuando el material inicial no fue más observado por espectrometría de masa, la mezcla se concentró y el aceite residual se purificó mediante cromatografía de columna (MPLC, sílica, gradiente 95:5 a 75:25 (CH2CI2/1 % de NH4OH en MeOH). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se concentraron y se secaron al vacío durante toda la noche para dar 0.063 g del ácido 2-{2-[bis-(4-fluorobencil)amino]indan-5-ilamino}-5-nítro-benzoico puro. MS (APCl) m/z 530.0 (M++1). CHN para (C30H25F2N3O4«CH3OH) cale: C 66.22, H 5.23, N 7.46; Encotrado: C 66.56, H 5.26, N 6.97.
EJEMPLO 12 Ácido 2-[2-n-Pentilamino)-indan-5-ilamino]-5-nitro-benzoico El 2-n-Pentilamino-5-amino-indano (0.32 g) se disolvió en tolueno (0.2 M) y el nitrógeno se burbujeo a través de la solución por 5 minutos. (S)-tol-BINAP (0.076 g) y Pd2(dba)2 (0.04 g), CS2C03 (0.68 g) y se agregó metil 1 -bromo-4-nitro benzoato (0.32 g) y la mezcla se calentó a reflujo por 48 horas. La mezcla posteriormente se enfrió, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de un tapón de celita, se concentró y se purificó mediante cromatografía líquida de presión media (columna de sílica gel, se eluyó con gradiente CH2CI2/Me0H gradiente 1 % de MeOH a 10% de MeOH). Las fracciones que contenían cualquier rastro del producto deseado (espectrometría de masa) se combinaron y se concentraron para dar 0.42 g del éster acoplado. El aceite crudo residual se disolvió en 16 ml en 1 :1 THF/MeOH, esta solución se trató con 1 ml 2N de NaOH y se agitó a temperatura ambiente por 12 horas. Cuando el material inicial no fue más observado por espectrometría de masa, la mezcla se concentró y el aceite residual se purificó mediante cromatografía de columna (MPLC, sílica, gradiente 98:2 a 80:20 (CH2CI2/MeOH). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se concentraron y se secaron al vacío durante toda la noche para dar el ácido 2-[2-(n-pentilamino)-indan-5-ilamino]-5-nitro-benzoico (0.170 g, 30% de producción). MS (APCl) m/z 382.0 (M++1 ). CHN para (C2iH25N3O4*0.35CH2CI2) cale: C 62.06, H 6.27, N 10.17; Encotrado: C 61.67, H 6.34, N 10.15.
EJEMPLOS BIOLÓGICOS Los compuestos de la invención de la Fórmula I pueden evaluarse en varias pruebas estándares in vitro e in vivo que son bien establecidas como indicadoras de la utilidad clínica en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y otras condiciones asociadas con la formación amiloide.
PRUEBAS AMILOIDES BASSR (Radio-prueba de Auto-Selección Beta-Amiloide) Una prueba para los inhibidores del crecimiento fibrilar amíloide auto seleccionados.
Materiales: Soluciones Madre: Estabilizador de la Prueba - 50 mM de fosfato de sodio, pH 7.5, 100 mM de NaCI, 0.02% de NaN3, 1M de urea (filtrar y almacenar a 4o C) Péptido Soluble Aß(1-40) (Bachem, Torrance, California) - 2.2 mg/ml en H20 ionizada (almacenado en alícuotas a -20° C, mantenidas en hielo cuando se descongelaron) se auto seleccionó después de 1 semana de almacenaje. Típicamente, la solución deberá almacenarse hasta que no se observe la fase de retraso en la prueba. , 125l-marcado Aß (1-40) - 150 a 350K cpm/µl en 100% de acetonitrilo - 0.1% de ácido trifluoroacético (TFA) - 1 % de ß-mercaptoetanol (las alícuotas se almacenaron a -20° C). 125l-marcado Aß (1-40) puede hacerse de conformidad con el procedimiento establecido en H. Levine, lll en Neurobiol. Aging, 16:755 (1995), que se incorpora en este documento como referencia o este reactivo puede comprarse en Amersham, Ariington Heights, Illinois.
Condiciones de prueba final: 30 µM de Aß (1-40) soluble en agua ionizada en estabilizador de prueba + 20 a 50K cpm 125l-marcado Aß (1-40) por prueba. El compuesto a probarse se disolvió en dimetiisulfóxido (DMSO), típicamente 5 a 50 mM de solución madre, tal como la concentración final de DMSO es < 1% de vol/vol en la prueba.
Prueba: La mezcla de reacción para 50 pruebas (en hielo) comprende de 0.1 a 0.2 µl de 125l-marcado A i25l-marcado Aß (1-40) + 1 µl del /4ßf1-40) soluble + 13.5 µl del estabilizador de prueba por prueba. Lo siguiente son las cantidades de los compuestos de la mezcla de reacción suficiente para los pozos de 50 pruebas. 5 a 50 µl 125l-marcado Aß (1-40) seco abajo 675 µl de estabilizador de prueba 50 µl de >Aß (1-40) soluble Método de Prueba 1 ) Preparar la mezcla de reacción anterior mediante mezclar los componentes y almacenarla en hielo. 2) Colocar en pipetas los 14.5 µl de la mezcla de reacción dentro de cada uno de los 50 pozos en una placa de polipropileno de micro-concentración de 96 pozos en forma de U inferior en hielo (Costar 3794). 3) Agregar 1.7 µl del compuesto diluido para probarse a cada pozo en una columna de ocho, incluyendo el solvente de control. Las series de diluciones de 3 veces de 1 mM (100 µM final) en el estabilizador de prueba-urea = 7 diluciones + cero. Cada placa de 96 pozos por lo tanto puede acomodar 11 muestras + 1 control Rojo Congo (0.039-5 µM finales en etapas de 2 veces). 4) Sellar la placa con la película de aluminio (Beckman 538619) e incubar por 10 minutos en hielo. 5) Elevar la temperatura a 37° C e incubar por 3 a 5 horas (dependiendo del lote del péptido). 6) Remover la película de aluminio y agregar 200 µl/pozo del estabilizador de prueba frío con urea, colectando fibrillas radio-marcadas por la filtración al vacío a través de filtros GVWP de tamaño de poro de 0.2 µm en placas de 96 pozos (Millipore MAGV N22, Bedford, Massachussets). Determinar la radioactividad de los filtros usando los métodos estándares bien conocidos por aquellos expertos en la técnica.
BASST (Auto-Selección Beta-Amiloide, Tioflavina T) Una prueba para los inhibidores del crecimiento febril amiloide auto-seleccionado.
MÉTODOS Materiales: Soluciones Madre: Estabilizador de la Prueba - 50 mM de fosfato de sodio, pH 7.5, 100 mM de NaCI, 0.02% de NaN3, 1 M de urea (filtrar y almacenar a 4° C) Péptido Soluble Aß(1-40) - 2.2 mg/ml en H20 ionizada (almacenado en alícuotas a -20° C, mantenidas en hielo cuando se descongelaron) se auto seleccionó después de 1 semana de almacenaje. Típicamente, la solución deberá almacenarse hasta que no se observe la fase de retraso en la prueba.
Condiciones de prueba final: 30 µM de Aß (1-40) soluble en agua ionizada en estabilizador de prueba. El compuesto a probarse se disolvió en DMSO, típicamente 5 a 50 mM de solución madre, tal como la concentración final de DMSO es < 1% de vol/vol en la prueba.
Prueba: La mezcla de reacción para 50 pruebas (en hielo) comprende de 1 µl de 4ß (1-40) + 13.5 µl del estabilizador de prueba por prueba. Lo siguiente son las cantidades de los compuestos de la mezcla de reacción que resulta en cada uno de los 50 pozos de prueba. 50 µI Aß (1-40) 675 µl de estabilizador de prueba Método de Prueba 1) Preparar la mezcla de reacción anterior mediante mezclar los componentes y almacenarla en hielo. 2) Colocar en pipetas los 14.5 µl de la mezcla de reacción dentro de cada uno de los 50 pozos en una placa de polipropileno de micro-concentración de 96 pozos en forma de U ¡nferior en hielo (Corning 25881-96). 3) Agregar 1.7 µl del compuesto diluido para probarse a cada pozo en una columna de ocho, incluyendo el solvente de control. Las series de diluciones de 3 veces de 1 mM (100 µM final) en el estabilizador de prueba-urea = 7 diluciones + cero. Cada placa de 96 pozos por lo tanto puede acomodar 11 muestras + 1 control Rojo Congo (0.039-5 µM finales en etapas de 2 veces). 4) Sellar la placa con la película de aluminio e incubar por 10 minutos en hielo. 5) Elevar la temperatura a 37° C e incubar por 3 a 5 horas (dependiendo del lote del péptido). 6) Remover la película de aluminio y agregar 250 µl/pozo del estabilizador de 5 µM de tioflavina T (ThT) |T-3516, Sigma-Aldrich] en 50 mM de flicina-NaOH, pH 8.5. Fluorescencia leída en un lector de placas (ex = 440 nm/20nm, em = 485 nm/20 nm) dentro de 5 minutos.
BAPA (Agregación del Péptido Beta-Amilode) Esta prueba se usa para proporcionar una medición de la inhibición mediante un compuesto en contra del comportamiento de la agregación del péptido ß-amiloide.
El propósito de esta prueba es proporcionar un método de mayor volumen para probar la cantidad de la agregación ß-amiloide usando una prueba de punto final basada en la filtración. En esta prueba, se usó el hexafluoroisopropanol (HFIP) para romper el péptido amiloide inicial a un estado monómero y usar una concentración de 33 µM que es suficientemente alto de manera que la agregación ocurrirá en un pH de 6.0 en varias horas.
MÉTODOS: Agregación del Péptido Beta-Amiloide, pH 6.0 (BAPA) En una placa de 96 pozos (Costar 3794), se agregaron 25 µl 50 mM de estabilizador de fosfato, pH 6.0, 10 µl 0.5 mg/ml péptido Aß (1-40) en 20% de HFIP + 0.1 µl/prueba radio-ionizada 125l Aß (1-40) [125l Aß(1-40)j y 1 µl del compuesto para ser probado en 50 mM con una concentración de DMSO < 1%. Posteriormente, se incubará por 2 a 4 horas a temperatura ambiente y se filtrará a través de una placa filtradora de 96 pozos 0.2 µm (Millipore MAGU N22). SE lava la placa filtradora con 100 µl del mismo estabilizador de fosfato. La agregación se detectó en un contador Microbeta después de impregnar los filtros con Meltilex (1450-441) y se corrige para el fondo.
PRUEBA BATYM MÉTODOS: El Aß (1-42) requerido (Péptido California) se secó de su solución madre HFIP. El Aß (1-42) se disolvió en DMSO y posteriormente se mezcló con solución salina de fosfato (PBS) (pH 7.4). La solución Aß (1-42) se filtró con un filtro de jeringa de membrana Omnipore de 0.2-µm (Millipore, Bedford, Massachussets). El compuesto a probarse en DMSO (50 x concentrado) se colocó en cada pozo (0.5 µl/pozo) de una placa de 96 pozos. La solución Aß (1-42) se agregó dentro de cada pozo (24.5 µl/pozo). La placa se centrifugó a 1 ,000 g por 5 minutos y se incubó a 37° c POR 1 DÍA (Aß1-42; concentración final 100 µM).
Después de la incubación, se agregó una solución de tioflavina T (ThT) (30 µM) en estabilizador de glicina-NaOH (pH 8.5, 50 mM) en cada pozo (250 µl/pozo), la fluorescencia fue medida (ex = 440/20 nm; em = 485/20 nm) usando un lector de placas de fluorescencia. La actividad inhibidora se calculó como la reducción de la fluorescencia con la siguiente fórmula: Inhibición (%) = {(F(Aß)-F(Aß+ compuesto)}/{F(Aß)-F(solvente + compuesto )}x100.
Los IC50s se calcularon por un programa de empalme de curva usando la siguiente ecuación. Los datos se obtuvieron de dos diferentes experimentos en triplicado. Inhibición (x) = 100-100/{1+(x/IC50)p} x = concentración del compuesto probado (M). IC50 = (M). n = coeficiente Hill.
Los compuestos representativos de la Fórmula I tienen actividades inhibidoras exhibidas (IC50) oscilando de desde 0.1 a >100 µM en las pruebas precedentes. Los resultados de estas pruebas para los compuestos representativos específicos de la presente invención se muestran en la tabla siguiente.
Inhibición Amiloide Los compuestos de la presente invención también pueden evaluarse en pruebas in vivo estándares comúnmente usadas para evaluar los agentes para tratar las condiciones asociadas con la agregación amiloide tal como la enfermedad de Alzheimer. En una prueba, la proteína amiloide se induce en el bazo de ratones mediante las inyecciones subcutáneas de nitrato de plata, el adyuvante completo de Freíd y una inyección intravenosa del factor de mejoramiento amiloide. El nitrato de plata se administra cada día hasta el Día 11. Los compuestos de prueba se administran a ratones diariamente iniciando en el Día 1 hasta el Día 11. En el día 12, los animales se sacrifican y los bazos se remueven, histológicamente preparados, marcados con rojo Congo y el área de porcentaje del bazo ocupado por el bi-refrigerante, el amiloide marcado con rojo Congo se cuantifica microscópicamente. Los compuestos de la invención inhibirán la deposición amiloidea del bazo.
Otra prueba in vivo en la cual los compuestos de la invención pueden evaluarse usa ratones transgénicos. El ratón soporta un transgen de la proteína del precursor ß-amiloide humano con un promotor prión, como se describe en Hsiao et al., "Correlative memoery déficits, Aß elevation and amylold plaques in transgenic mice" Science 1996; 274:99-102. Estos ratones transgénicos desarrollaron depósitos ß-amiloides en aproximadamente 9 meses de edad. Por 15 meses, las placas seniles compactas y difusas son abundantes, primeramente en la neocorteza, el bulbo olfativo y el hipocampo. Los compuestos de la invención se administran oralmente al ratón iniciando en la edad de 8 meses Gusto antes del inicio de los depósitos amiloides) y continuando por varios meses (más de aproximadamente 14-18 meses de edad). Los animales también se sacrifican y los cerebros se remueven. La cantidad de amiloides en el cerebro se cuantifíca tanto histológica y bioquímicamente. Los compuestos de la ¡nvención inhiben la acumulación amiloide en la corteza y el hipocampo de los animales de prueba.
Los datos anteriores establecen que los compuestos de la invención de la Fórmula I son inhibidores potentes de la agregación de proteínas y además son útiles en el tratamiento de enfermedades asociadas con los depósitos amiloides y para la formación de imágenes de los depósitos para usarse en diagnósticos. Los compuestos típicamente se usarán en la forma de formulaciones farmacéuticas para el uso terapéutico y los siguientes ejemplos además ilustran las composiciones típicas.
EJEMPLO 13 Formulación de la Tableta Ingrediente Cantidad Compuesto del Ejemplo 1 50 mg Lactosa 80 mg Almidón de maíz (para mezcla) 10 mg Almidón de maíz (para pasta) 8 mg Estearato de magnesio (1 %) 2 mg 150 mg El ejemplo del compuesto 1 se mezcla con la lactosa y el almidón de maíz (para mezcla) y se mezclan a uniformidad en un polvo. El almidón de maíz (para pasta) se suspende en 6 ml de agua y se calienta con agitación para formar una pasta. La pasta se agrega a un polvo mezclado y la mezcla se granula. Los granulos húmedos se pasan a través de un tamiz duro No. 8 y se secan a 50° C. La mezcla se lubrica con estearato de magnesio al 1 % y se comprimen en una tableta.
Las tabletas se administran a un paciente en la proporción de 1 a 4 cada día para la prevención y tratamiento amiloide de la enfermedad de Alzheimer.
EJEMPLO 14 Solución Parenteral En una solución de 700 ml de propilenglicol y 200 ml de agua para inyección se agrega a 20.0 g del compuesto del Ejemplo 9. La mezcla se agita y el pH se ajusta a 5.5 con ácido clorhídrico. El volumen se ajusta a 1000 ml con agua para inyección. La solución se esteriliza, se llena dentro de ampolletas de 5.0 ml, cada una conteniendo 2.0 ml (40 mg del compuesto del Ejemplo 9) y se sellan bajo nitrógeno. La solución 10 se administra mediante inyección a un paciente que sufre de carcinoma medular de la tiroides y en necesidad de dicho tratamiento.
EJEMPLO 15 Formulación del Parche Diez miligramos de ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indan-5-il-amino]-benzoico se mezclan con 1 ml de propilenglicol y 2 mg de adhesivo de polímero basado en acrílico conteniendo un agente de reticulación resinoso. La mezcla se aplicó a un respaldo impermeable (30 cm2) y se aplicó en la espalda superior de un paciente para el tratamiento de liberación sostenida de polineuropatía amiloide.
La invención y la manera y proceso de hacer y usarla ahora se describirían en forma clara, completa y concisa y términos exactos para permitir a cualquier persona experta en la técnica a la cual pertenece hacer y usar la misma. Se entiende que lo anterior describe las modalidades preferidas de la presente invención y que pueden hacerse modificaciones en la misma sin apartarse del espíritu o alcance de la presente invención como se establece en las reivindicaciones. Para señalar particularmente y distinguir el objeto con respecto a la invención, las siguientes reivindicaciones concluyen esta especificación.

Claims (26)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de la Fórmula I en donde: R1 y R2 independientemente son hidrógeno, alquilo CrCß, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, fenil (CH2)p o fenil sustituido (CH2)n, proporcionan que uno de R1 y R2 es diferente a hidrógeno; R4 y R5 independientemente son hidrógeno, halo, alquilo C C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, fenilo (CH2)n, fenil sustituido (CH2)n, N02, CN, CF3, alcoxi CrC8, C02R6, tetrazoiil, NH(alquilo C C8), H(alquiIo C?-C8)2 o S02R6; R3 es hidrógeno o alquilo C^Ca; Rß es hidrógeno, alquilo C C? O fenilo (CH2)n o fenilo sustituido (CH2)n; n es un número entero de 0 a 4 inclusive; o una sal farmacéuticamente aceptable, éster, amida o prodroga del mismo.
2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , que tiene la Fórmula II
3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 2, en donde Rß es hidrógeno.
4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , que tiene la Fórmula lll en donde R7 es hidrógeno, halo, N02, CN, alquilo CrC8, alcoxi CrC8, CF3, NH2, NH(alquilo C Cs) o N(alquilo CrC8)2.
5. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste de ácido 2-[(2-N,N-di-n-pentilamino)-indan-5-iI]amino-5-nitro-benzoico; Metil 2-[2-(3,4-Dicloro-bencilamino)-indan-5-ilamino]-benzoato; ácido 2-[2-(3,4-Diclorobencilamino)-indano-5-ilamino]-benzoico; ácido 2-[2-(3,4-Diclotobencilamino)-indan-5-ilamina]-5-nitro-benzoico; ácido 2-[2-(3,4-Diclorobencilamino)-indan-5-iIamino]-5-metoxi-benzoico; ácido 2-(2-Dipentilamino-indan-5-il-amino)-5-metil-benzoico; ácido 4-(2-Dipentilamino-indan-5-il-amino)-3-nitro-benzoico; Metil 2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indan-2-iIamino]-5-nitro-benzoato; ácido 2-[5-(3,4-Diclorofenilamino)-indan-2-ilamino]-5-nitro-benzoico; ácido 2-[2-(4-Fluorobencilamino)-indan-5-ilamino]-5-nitro-benzoico; ácido 2-{2-[bis-(4-Fluorobencil)amino]indan-5-ilamino}-nitro-benzoico y ácido 2-[2-(n-Pentilamino)-indan-5-ilamino]-5-nitro-benzoico.
6. El uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , para tratar la enfermedad de Alzheimer en un paciente que tiene la enfermedad.
7. El uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 2, para tratar la enfermedad de Alzheimer en un paciente que tiene la enfermedad.
8. El uso de una cantidad inhibidora de la agregación de la proteína amiloide de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , para inhibir la agregación de las proteínas amiloides para formar depósitos amiloides en un paciente que necesita de dicha inhibición.
9. El uso de una cantidad inhibidora de la agregación de la proteína amiloide de un compuesto de conformidad con la reivindicación 2, para inhibir la agregación de las proteínas amiloides para formar depósitos amiloides en un paciente que necesita de dicha inhibición.
10. El uso de una cantidad inhibidora de la agregación de la proteína amiloide de un compuesto de conformidad con la reivindicación 3, para inhibir la agregación de las proteínas amiloides para formar depósitos amiloides en un paciente que necesita de dicha inhibición.
11. Un método para la formación de imágenes de los depósitos amiloides, el método comprende las etapas de: a) introducir dentro de un paciente una cantidad detectable de un compuesto marcado de conformidad con la reivindicación 1 ; b) permitir tiempo suficiente para que el compuesto marcado llegue a asociarse con los depósitos amiloides y c) detectar el compuesto marcado asociado con los depósitos amiloides.
12. Un método para la formación de imágenes amiloides, el método que comprende las etapas de: a) introducir dentro de un paciente una cantidad detectable de un compuesto marcado de conformidad con la reivindicación 2; b) permitir tiempo suficiente para que el compuesto marcado llegue a asociarse con los depósitos amiloides y c) detectar compuesto marcado asociado con los depósitos amiloides.
13. Un método de formación de imágenes de depósitos amiloides, el método comprende las etapas de: a) introducir dentro de un paciente una cantidad detectable de un compuesto marcado de conformidad con la reivindicación 3; b) permitir suficiente tiempo para que el compuesto marcado llegue a asociarse con los depósitos amiloides y c) detectar el compuesto marcado asociado con los depósitos amiloides.
14. El método de conformidad con la reivindicación 11 , en donde el paciente tiene o se sospecha que tiene la enfermedad de Alzheimer.
15. El método de conformidad con la reivindicación 12 en donde el paciente tiene o se sospecha que tiene la enfermedad de Alzheimer.
16. El método de conformidad con la reivindicación 13 en donde el paciente tiene o se sospecha que tiene la enfermedad de Alzheimer.
17. El método de conformidad con la reivindicación 11 , en donde el compuesto marcado es un compuesto radio-marcado.
18. El método de conformidad con la reivindicación 12, en donde el compuesto marcado es un compuesto radio-marcado.
19. El método de conformidad con la reivindicación 13, en donde el compuesto marcado es un compuesto radio-marcado.
20. El método de conformidad con la reivindicación 11 , en donde el compuesto marcado se detecta usando MRI.
21. El método de conformidad con la reivindicación 12, en donde el compuesto marcado se detecta usando MRI.
22. B método de conformidad con la reivindicación 13, en donde el compuesto marcado se detecta usando MRI.
23. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 junto con un excipiente, diluyente o portador del mismo.
24. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 2 junto con un excipiente, diluyente o portador del mismo.
25. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 3 junto con un excipiente, diluyente o portador del mismo.
26. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 4 junto con un excipiente, diluyente o portador del mismo.
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Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1660101A4 (en) * 2003-08-21 2010-02-24 Access Pharma Inc LIQUID FORMULATIONS FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF SLAUGHTER DISEASES AND DISORDERS
WO2008099210A2 (en) 2007-02-12 2008-08-21 Merck & Co., Inc. Piperazine derivatives for treatment of ad and related conditions
JP2009084254A (ja) * 2007-10-03 2009-04-23 Sumitomo Chemical Co Ltd アミロイドβタンパク質の蓄積を抑制するための医薬組成物
WO2009079566A2 (en) 2007-12-18 2009-06-25 Acumen Pharmaceuticals, Inc. Novel addl receptor polypeptides, polynucleotides and host cells for recombinant production
US9464319B2 (en) 2009-03-24 2016-10-11 California Institute Of Technology Multivolume devices, kits and related methods for quantification of nucleic acids and other analytes
US10196700B2 (en) 2009-03-24 2019-02-05 University Of Chicago Multivolume devices, kits and related methods for quantification and detection of nucleic acids and other analytes
EP2412020B1 (en) 2009-03-24 2020-09-30 University Of Chicago Slip chip device and methods
US9447461B2 (en) 2009-03-24 2016-09-20 California Institute Of Technology Analysis devices, kits, and related methods for digital quantification of nucleic acids and other analytes
WO2013159116A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 University Of Chicago Fluidic devices for biospecimen preservation
JP6196661B2 (ja) 2012-04-20 2017-09-13 スリップチップ， エルエルシー サンプル調製または自律分析のための流体デバイスおよびシステム
US9803237B2 (en) 2012-04-24 2017-10-31 California Institute Of Technology Slip-induced compartmentalization
AU2013339167B2 (en) 2012-10-31 2018-03-15 Fujifilm Corporation Novel amine derivative or salt thereof
US10478513B2 (en) * 2015-08-18 2019-11-19 The Regents Of The University Of Califonia Nitroxide containing amyloid binding agents for imaging and therapeutic uses
US11028051B2 (en) * 2016-12-13 2021-06-08 St. Jude Children's Research Hospital Tetrahydroquinoline-based bromodomain inhibitors

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816456A (en) * 1986-10-01 1989-03-28 Summers William K Administration of monoamine acridines in cholinergic neuronal deficit states
GB8707123D0 (en) * 1987-03-25 1987-04-29 Pfizer Ltd Antiarrhythmic agents
US5280032A (en) * 1989-02-14 1994-01-18 Toyama Chemical Co., Ltd. 1,2-ethanediol derivative and salt thereof, process for producing the same, and cerebral function-improving agent comprising the same
EP0535496A1 (en) * 1991-09-25 1993-04-07 Hoechst-Roussel Pharmaceuticals Incorporated (1-Indanon-2yl)methylpiperidines, intermediates and a process for their preparation and their use as medicaments
IL99759A (en) * 1991-10-16 1997-06-10 Teva Pharma Mono-fluorinated derivatives of n-propargyl-1-aminoindan, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
EP0587377A3 (en) * 1992-09-10 1994-09-21 Lilly Co Eli Thiazolidinone derivatives as hypoglycemic agents and for treating alzheimer's disease
WO1997026919A2 (en) * 1996-01-24 1997-07-31 Warner-Lambert Company Method of imaging amyloid deposits
SE9802360D0 (sv) * 1998-07-01 1998-07-01 Wikstroem Hakan Vilhelm New 2-aminothiazol-fused 2-aminoindans and 2-aminotetralins ((basic)-N-substituted and (basic)-N,N-disubstituted derivatives of 2,6-diamino-thiazolo(4,5-f)indan and 2,7-di-amino-thiazolo(4,5-g)tetralin

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