MXPA02007018A - Composicion alimenticia para mascotas para tratamiento de la especie helicobacter en mascotas. - Google Patents

Abstract

Se describe el uso de al menos una cepa de bacteria lactica y/o sus metabolitos o un medio fermentado por al menos una bacteria lactica que ha sido aislada y seleccionada por su habilidad para mostrar una actividad bactericida anti-Helicobacter in vitro fuerte, para la preparacion de una composicion disenada para la profilaxis o el tratamiento de trastornos relacionados a infeccion por GHLOs en mascotas y composiciones alimenticias para mascotas que contienen los mismos.

Description

COMPOSICIÓN ALIMENTICIA PARA MASCOTAS PARA TRATAMIENTO DE LA ESPECIE HELICOBACTER EN MASCOTAS La presente invención se refiere al uso de una cepa aislada de bacteria láctica para la preparación de una composición alimenticia diseñada para la profilaxis o tratamiento de trastornos relacionados a la infección por organismos similares a Heli coba cter en mascotas. La invención se refiere también a la composición alimenticia para mascotas, preparada a partir de la misma .

Antecedentes de la invención Es conocido que en humanos, la infección con el patógeno Heli coba cter pyl ori puede provocar gastritis, y conducir a enfermedad ulcerativa y tumores gástricos. Los métodos de tratamiento son numerosos. Se ha mostrado previamente en la Patente Europea EP 577903 (Nestlé) que las bacterias de ácido láctico son capaces de inhibir Heli coba c ter pyl ori tanto in vitro como in vivo. Los carnívoros domésticos tales como perros y gatos son virtualmente todos infectados con otras especies de Helicobacters gástricas. La mayoría de ellas no pueden ser cultivadas in vitro, pero morfológicamente se parecen a H. heilmanni i . H. fel i s fue también aislada a partir de mucosa gástrica de gato y, recientemente, dos nuevas especies de Heli coba cter , denominadas H. bi zzozeroni i y H. sal omoni s , fueron aisladas a partir de perros. Sin embargo, los únicos análisis morfológicos no permiten discriminar entre estas especies de Heli coba cter y son agrupadas bajo la denominación de "organismos similares a Helicobacter Gástrico" (GHLOs) . GHLOs colonizan las cavidades y/o el cuerpo de mascotas, mientras que la colonización de H. pyl ori principalmente tiene lugar en el cuerpo. Los organismos GHLOs colonizadores están localizados profundamente en las glándulas fúndicas gástricas y algunas veces se encuentran realmente dentro de los canalículos celulares apriétales gástricos así como en la boca del estómago y la mucosa gástrica, en comparación a H. pyl ori que es conocida como una bacteria no invasora. (Dunn y colaboradores, 1997: "Hp están localizadas en la mucosa adherente al epitelio superficial y son frecuentemente encontradas profundamente dentro de las criptas"...) La contaminación del estómago de perros y gatos por la especie Heli coba cter es considerada como un importante factor de riesgo para desarrollar gastritis leve a moderada. La inflamación es usualmente menos severa que la que ocurre en los humanos infectados con H. pyl ori . Lesiones más severas tales como úlceras estomacales, linfomas y cánceres pueden ser observadas, pero la patogenicidad de GHLOs está lejos de ser clarificada. No obstante, el control de la infección por hs en gatos y perros a un bajo nivel es reconocido por la mayoría de los veterinarios como un beneficio. Ya que no" es una enfermedad totalmente reconocida que requiera terapia de fármacos, un producto alimenticio que contenga un ingrediente activo capaz de minimizar la infección por GHLO es gatos y perros, es ampliamente requerido.

Breve descripción de la invención De este modo, la presente invención se refiere al uso de al menos una cepa de bacteria de ácido láctico y/o a sus metabolitos o a un medio fermentado por al menos una bacteria de ácido láctico que ha sido aislada y seleccionada por su habilidad para mostrar una actividad bactericida anti-Helicobacter in vitro fuerte, para la preparación de una composición diseñada para la profilaxis o el tratamiento de desórdenes relacionados a la infección por GHLOs en mascotas. En una modalidad preferida, son utilizados los metabolitos producidos por la cepa aislada o un medio fermentado por bacteria de ácido láctico, o subfracciones del medio cultivado, fermentado por la cepa aislada de bacteria de ácido láctico. La cepa de bacteria de ácido láctico puede ser seleccionada del grupo que consiste de Lactobacillus johnsonii , Lactobacillus reuterii , Lactobacillus paracasei , Lactobacillus animalis , Lactobacillus ruminis , Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rahmnosus , Lactobacillus fermßntzum, Bifidobacterium sp. r Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animalis . En una modalidad preferida, la cepa de bacteria de ácido láctico se selecciona del grupo que consiste de Lactobacillus johnsonii NCC 533 (CNCM-I 1225), Lactobacillus fermentum NCC 2581 (CNCM 1-2448), Lactobacillus fermentum NCC 2592 (CNCM 1-2450), Lactobacillus fermentum NCC 2613 (CNCM 1-2452), Lactobacillus paracasei NCC 2461 (CNCM-I 2116), Lactobacillus animalis NCC 2603 (CNCM 1-2451), Lactobacillus rahmnosus NCC 2583 (CNCM 1-2449), Lactobacillus acidophilus NCC 2628 (CNCM 1-2453), Bifidobacterium sp . NCC 2627, Bifidobacterium sp . NCC 2657, Bifidoba cteri um la cti s (ATCC 27536) . Otro objetivo se refiere a un método para el tratamiento o para la profilaxis de trastornos relacionados a infección por GHLOs en mascotas, que comprende la administración a una mascota una composición que contiene al menos una cepa de bacteria de ácido láctico y/o sus metabolitos o un medio fermentado por al menos una bacteria de ácido láctico que ha sido aislada y seleccionada por su habilidad para mostrar una actividad in vitro bactericida anti-Helicobacter, fuerte. Un objetivo adicional es proporcionar una composición alimenticia para mascotas, que contiene al menos una cepa aislada de bacteria de ácido láctico y/o sus metabolitos o un medio fermentado por al menos una bacteria láctica que tiene los rasgos anteriores, asociada con un soporte ingerible o una matriz farmacéutica. Esta composición alimenticia para mascotas es capaz de disminuir la infección por GHLO en gatos y perros, de modo que la carga de GHLOs y la actividad de ureasa son reducidas por al menos 0.5 grados en el fundus y de al menos 0.5 grados en la cavidad. El efecto de la composición sobre la gastritis crónica fue también evaluado mediante examen citológico de biopsia de secciones delgadas. Esto puede inducir una regresión de la gastritis fúndica crónica, con una regresión promedio del grado de inflamación gástrica (graduada de 0 a 3 ) de al menos 0.5. En otra modalidad, esta composición alimenticia para mascotas puede inducir a una reducción significativa de olores del aliento los cuales están correlacionados con el nivel de infección por GHLOs.

Descripción detallada de la invención Dentro de la siguiente descripción, el término "GHLOs" define los "organismos similares a Helicobacter Gástrico". Las especies de Heli cobacter tales como Heli coba cter felis, H. heilmanii , H. bi zzozeroni y H. sal omoni s, por ejemplo, las cuales han sido mostradas para colonizar la mucosa gástrica en mascotas, son agrupadas bajo esta denominación. Además, se incluye dentro de los términos "trastornos por GHLOs", todos los trastornos que pueden afectar directamente el tracto gastrointestinal de mascotas, pero también trastornos secundarios tales como síntomas de mal aliento, por ejemplo. Finalmente, "NCC" designa Nestlé Culture Collection (Nestlé Research Center, Ver-chez-les-Blanc, Lausana, Suiza) . Con respecto al primer objetivo de la presente invención, está relacionado el uso de al menos una cepa de bacteria de ácido láctico y/o sus metabolitos o un medio fermentado por al menos una cepa de bacteria de ácido láctico que es capaz de mostrar una actividad in vitro bactericida anti-Helicobacter fuerte, para la preparación de una composición ~ diseñada para la profilaxis o el tratamiento de trastornos relacionados a infección por GHLOs en mascotas. Estas cepas han sido seleccionadas entre cepas de bacterias lácticas con respecto a sus parámetros tecnológicos y fisiológicos y en particular por sus características de buen desarrollo, al menos 5xl08 bacterias/ml, preferentemente 106-1010 bacterias/ml, más preferentemente 109-1010 bacterias/ml y su habilidad para mostrar una actividad in vitro bactericida anti-Helicobacter fuerte. En una modalidad preferida, la cepa de bacteria de ácido láctico puede ser seleccionada del grupo que consiste de Lactoba cill us j ohnsonii , Lactobacill us reu terii , La ctoba cill us paracasei , Lactobacill us animali s , Lactobacill us ruminis , Lactoba cill us a cidophil us , Lactoba cill us rahmnosus, Lactobacillus fermen tum, Bifidoba cteri um sp . , Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animalis . La cepa de bacteria de ácido láctico es preferentemente seleccionada del grupo que consiste de Lactobacillus johnsonii NCC 533 (CNCM-I 1225), Lactobacillus fermentum NCC 2581 (CNCM 1-2448), Lactobacillus fermentum NCC 2592 (CNCM 1-2450), Lactobacillus fermentum NCC 2613 (CNCM 1-2452), Lactobacillus paracasei NCC 2461 (CNCM-I 2116), Lactobacillus animalis NCC 2603 (CNCM 1-2451), Lactobacillus rahmnosus NCC 2583 (CNCM 1-2449), Lactobacillus acidophilus NCC 2628 (CNCM 1-2453), Bifidobacterium sp. NCC 2627, Bifidobacterium sp. NCC 2657, Bifidobacterium lactis (ATCC 27536) . Entre las diversas cepas seleccionadas de acuerdo con la presente invención, las siguientes cepas fueron depositadas a manera de ejemplo bajo el Tratado de Budapest en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos (CNCM) , Instituto Pasteur, 28 rué du Docteur Roux, 75724 París Cedex 15, Francia, Lactobacillus johnsonii (NCC 533) el 30.06.92 bajo la referencia CNCM 1-1225, Lactobacillus paracasei (NCC 2461) el 12.01.99 bajo la referencia CNCM 1-2116 y Lactobacillus fermentum NCC 2581, NCC 2592, NCC 2613, Lactobacillus animalis NCC 2603, Lactobacillus rahmnosus NCC 2583, Lactobacillus acidophilus NCC 2628 el 19.04.00 bajo las referencias (CNCM 1-2448), (CNCM 1-2450), (CNCM 1-2452) (CNCM 1-2451), (CNCM 1-2449), (CNCM 1-2453), respectivamente. La cepa de Bifidoba cteri um l a c ti s (ATCC27536) se proporciona por Hansen (Chr. Hansen A/S, 10-12 Boege Alie, P.O. Box 407, DK-2970 Hoersholm, Dinamarca).

CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE LAS CEPAS SELECCIONADAS Lactobac±llus johnson±± CNCM 1-1225 microorganismo Gram positivo, sin movilidad, sin esporas bastoncillos claramente cortos y gruesos - microorganismo microaerófilo con metabolismo homofermentativo, producción de ácido láctico L(+) y D(-) . catalasa (-), producción de C0 (-), hidrólisis de arginina (-) - fermentación de azúcares: a igdalina (+), arabinosa (-), celobiosa (+), esculina (+), fructosa ( + ) , galactosa (-) , glucosa ( + ), lactosa ( + ), maltosa ( +/-), manitol (-), mañosa (+-), melibiosa (-), rafinosa (+), ribosa (-), salicina (+), sucrosa (+), trehalosa ( + ) • 1 o Lactobac±llus paracase± CNCM 1-2116 Gram positivo negativo a catalasa, forma NH3, negativo a arginina producción negativa de C02 producción de ácido láctico L(-t-) - desarrollo en presencia de sales biliares en una concentración de hasta aproximadamente 0.4%.

La cepa aislada de bacteria láctica y/o su medio fermentado de cultivo pueden ser utilizados para la preparación de composiciones diseñadas para mejorar la salud de mascotas, particularmente para la prevención o tratamiento de trastornos relacionados a y infecciones por GHLOs en mascotas. Éstos pueden ser utilizados en otros trastornos relacionados a infecciones por GHLOs tales como olores de mal aliento. De hecho, la presencia de GHLOs en el estómago de perros y gatos puede tener una clara; influencia en los olores del aliento al producir gran cantidad de amoniaco proveniente de la urea. Este amoniaco puede aparecer en el aliento después del eructo. El mal aliento podría estar también relacionado a la presencia de GHLOs en el estómago por la producción de compuestos volátiles de sulfuro.

Preferentemente, los metabolitos producidos por las cepas aisladas están diseñados para reducir los olores del mal aliento y refrescar el aliento de las mascotas. Una subfracción del medio de cultivo fermentado por la cepa aislada de bacteria de ácido láctico, puede también ser utilizada. La cepa de bacteria de ácido láctico de acuerdo con la invención puede ser utilizada en su forma viable o inactivada. En una modalidad preferida, la cepa de bacteria láctica es utilizada en presencia de su medio de desarrollo fermentado. El medio puede ser esterilizado solo o bien con un alimento, extruido o secado por rocío, enfriado o estable en anaquel, por ejemplo. La bacteria de ácido láctico _o el medio de fermentación equivalente pueden ser utilizados de modo que la cantidad disponible para la mascota puede corresponder a aproximadamente 103-1014 ufe por día. Esta" cantidad depende del peso del animal, y es preferentemente de aproximadamente 109-1012 ufe/día para perros y 107-1011 ufe/día para gatos. En otra modalidad, la invención se refiere a un método para el tratamiento o para la profilaxis de trastornos relacionados a infección por GHLOs en mascotas, el cual comprende la administración a una mascota de una composición que contiene al menos una cepa de bacteria de ácido láctico y/o un medio fermentado por al menos una bacteria de ácido láctico que tiene los rasgos anteriores. La cantidad disponible para la mascota puede corresponder a aproximadamente 103-1014 ufe por día, y es preferentemente de aproximadamente 109-1012 ufe/día para perros y 107-101:L ufe/día para gatos. El segundo objetivo principal de la presente invención se refiere a una composición alimenticia para mascotas, que contiene al menos una cepa aislada de bacteria de ácido láctico y/o sus metabolitos o medio de desarrollo fermentado, la bacteria láctica tiene los rasgos anteriores, asociada con un soporte ingerible o una matriz farmacéutica. La cepa y/o su medio fermentado pueden ser seleccionados de una o más bacterias lácticas adecuadas para el consumo animal, por su habilidad para mostrar una actividad bactericida anti-Helicobacter in vitro fuerte. Al menos una cepa bacteriana que tiene los rasgos anteriores y/o su medio fermentado puede ser administrada a la mascota como un suplemento a su dieta normal o como un componente de un alimento para mascotas, nutricionalmente completo. La composición alimenticia para mascotas, nutricionalmente completa, de acuerdo con la invención puede estar en producto alimenticio para mascotas enfriado o estable en anaquel, en forma seca o húmeda, o en polvo. Éste puede también ser suplementos dietéticos para mascotas o composiciones farmacéuticas. El alimento para mascotas, nutricionalmente completo puede estar en cualquier forma adecuada; por ejemplo en forma seca, forma semihúmeda y forma húmeda. Estos alimentos para mascotas pueden ser producidos como es convencional . Aparte de las cepas bacterianas y/o su medio fermentado, estos alimentos para mascotas pueden incluir una o más de una fuente de almidón, una fuente de proteína y fuente de lípidos. Las fuentes de almidón, adecuadas son, por ejemplo, granos y leguminosas tales como maíz, arroz, trigo, cebada, avena, soya, y mezclas de éstos. Las fuentes de proteínas, adecuadas pueden ser seleccionadas de cualquier fuente de proteínas vegetales o animales, adecuadas; por ejemplo carne y harina, harina de aves de corral, harina de pescado, concentrados de proteína de soya, proteínas de leche, gluten, y similares. Para animales mayores, se prefiere que la fuente de proteínas contenga una proteína de alta calidad. Las fuentes de lípidos, adecuadas incluyen carnes, grasas animales y grasas vegetales. La elección de las fuentes de almidón, proteínas y lípidos será ampliamente determinada por las necesidades nutricionales del animal, las consideraciones de sabor agradable, y el tipo de producto producido. Para mascotas mayores, el alimento para mascotas preferentemente contiene proporcionalmente menos grasa que los alimentos para mascotas para mascotas más jóvenes. Además, las fuentes de almidón pueden incluir uno o más de arroz, cebada, trigo y maíz. Además, pueden también ser incorporados otros diversos ingredientes, por ejemplo, azúcar, sal, especias, sazonadores, vitaminas, minerales, agentes saborizantes, grasas y similares, en el alimento para mascotas, como se desee. Para alimentos secos para mascotas, un proceso adecuado es el cocinado por extrusión, aunque puede ser utilizado el horneado y otros procesos adecuados. Cuando se cocina por extrusión, el alimento seco para mascotas es usualmente proporcionado en la forma de una galleta desmenuzada. Si se utiliza un prebiótico, el prebiótico puede ser mezclado con los otros ingredientes del alimento seco para mascotas antes del procesamiento. Un proceso adecuado se describe en la solicitud de patente Europea No. 0850569, la descripción de la cual se incorpora por referencia. Si se utiliza un microorganismo probiótico, el organismo está mejor recubierto o llenado en el alimento seco para mascotas. Un proceso adecuado se describe en la solicitud de patente Europea No. 0862863, la descripción de la cual se incorpora por referencia. Para alimentos húmedos, pueden ser utilizados los procesos descritos en las patentes norteamericanas Nos. 4,781,939 y 5,132,137, para producir productos que simulan carne. Las descripciones de estas patentes son incorporadas por referencia. Pueden también ser utilizados otros procedimientos para producir productos tipo trozo; por ejemplo cocinado en un horno de vapor. Alternativamente, los productos tipo hogaza pueden ser producidos mediante la emulsificación de un material de carne adecuada, para producir una emulsión de carne, agregando un agente de gelificación adecuado, y calentando la emulsión de carne antes de llenar latas u otros recipientes. La cantidad de prebiótico en el alimento para mascotas es preferentemente de aproximadamente 20% en peso; especialmente aproximadamente 10% en peso. Por ejemplo, el prebiótico puede comprender aproximadamente 0.1% hasta aproximadamente 5% en peso del alimento para mascotas. Para alimentos para mascotas que usen achicoria como el prebiótico, la achicoria puede ser incluida para comprender de aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 10% en peso de la mezcla alimenticia; más preferentemente de aproximadamente 1% hasta aproximadamente 5% en peso. Si se utiliza un microorganismo probiótico, el alimento para mascotas preferentemente contiene aproximadamente de 104 hasta aproximadamente 1010 células del microorganismo probiótico por gramo del alimento para mascotas; más alimento para mascotas de aproximadamente 106 hasta aproximadamente 108 células del microorganismo probiótico por gramo. El alimento para mascotas puede contener de aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 20% en peso de la mezcla del microorganismo probiótico; alimento para mascotas de aproximadamente 1% hasta 6% en peso; por ejemplo de aproximadamente 3% hasta aproximadamente 6% en peso. Los alimentos par mascotas pueden contener otros ingredientes activos tales como ácidos grasos de cadena larga. Los ácidos grasos de cadena larga, adecuados, incluyen ácido alfa-linoleico, ácido gamma- linoleico, ácido linoleico, ácido eicosapentanoico, y ácido docosahexanoico. Los aceites de pescado son una fuente adecuada de ácidos eicosapentanoicos y ácido docosahexanoico. El aceite de borraja, el aceite de semilla de casis y aceite de hierba del asno, son fuentes adecuadas de ácido gamma-linoleico . Los aceites de cártamo, aceites de girasol, aceites de maíz y aceites de fríjol de soya son fuentes adecuadas de ácido linoleico. Si es necesario, los alimentos para mascotas son suplementados con minerales y vitaminas, de modo que éstos sean nutricionalmente completos. Además, si se desea, la cepa bacteriana puede ser encapsulada; por ejemplo en una matriz de azúcar, matriz de grasa o matriz de polisacárido. La cantidad del alimento para mascotas, a ser consumida por la mascota para obtener un efecto benéfico dependerá del tamaño de la mascota, del tipo de mascota, y de la edad de la mascota. Sin embargo, podría usualmente ser adecuada una cantidad del alimento para mascotas, para proporcionar una cantidad diaria de aproximadamente 103-1014 ufe de al menos una cepa de bacteria de ácido láctico y/o el medio de fermentación equivalente. Preferentemente, son administrados aproximadamente 109-1012 ufe/día para perros ó 107-101:L ufe/día para gatos. La composición de acuerdo con la invención está particularmente diseñada para la profilaxis o el tratamiento de infecciones relacionadas a GHLOs en mascotas, y en particular en los tractos gastrointestinales o en el intestino delgado de mascotas, por ejemplo. Ésta también está diseñada para mantener saludable la función digestiva en mascotas y para prevenir reinfección por cepas patógenas tales como GHLOs, por ejemplo. De este modo, esta composición puede también ser utilizada como adyuvante de una antibioterapia contra infestación de GHLOs. El efecto de la composición de acuerdo con la invención sobre GHLOs fue evaluado mediante un examen histológico de secciones de biopsia (ver ejemplo 2). Si el número de GHLOs por sección es sin bacterias (grado "0"); menos de 5 bacterias (grado "1"); entre 5 y 20 bacterias (grado "2") y más de 20 bacterias (grado "3"). Esta composición de alimento para mascotas es capaz de disminuir la infección por GHLO en gatos y perros, de modo que la carga de GHLOs y la actividad de ureasa en el fundus, son reducidas de al menos 0.5 grados y de al menos 0.5 en la cavidad. El efecto de la composición sobre gastritis crónica, fue también evaluado mediante examen citológico de secciones delgadas de biopsia. La clasificación histológica de la gastritis crónica es: - grado 0: fibrosis superficial, 0 neutrófilos, 0-10 linfocitos y células plasmáticas, sin agregados, epitelio normal; gastritis crónica leve - grado 1: gastritis superficial crónica, 10-15 linfocitos o células plasmáticas que envuelven el tejido intersticial superficial, agregados <2, epitelio normal, - gastritis crónica moderada - grado 2: gastritis intersticial crónica, 10-50 o más linfocitos o células plasmáticas que envuelven el espesor completo de la mucosa, agregados >3, epitelio normal, gastritis crónica severa - grado 3: gastritis atrófica, 10-50 o más linfocitos o células plasmáticas, agregados >3, cambios en el epitelio glandular. Esta composición puede inducir una regresión de la gastritis fúndica crónica, con una regresión media del grado de inflamación gástrica de al menos aproximadamente 0.5. Esta composición también ha mostrado que induce una reducción significativa de los olores del aliento. De este modo, ésta está diseñada para el tratamiento o prevención de trastornos secundarios relacionados a infección por GHLOs tales como olores por 2 O mal aliento de mascotas. Además, las composiciones de acuerdo con la presente invención pueden también estar encaminadas para el aumento de la longevidad de los perros. Los siguientes ejemplos se dan a manera de ilustración únicamente y de ninguna manera deben construirse como limitantes de la materia de interés de la presente solicitud. Todos los porcentajes se dan en peso, a no ser que se indique de otro modo.

Ejemplos Ejemplo 1: Selección de cepa bacteriana Con el fin de seleccionar la cepa bacteriana de acuerdo con la presente invención, GHLOs cultivables (107 bacterias) pueden ser incubados a 37°C bajo atmósfera de C02 al 5% por 1-2 horas en presencia de diluciones en serie del sobrenadante de desarrollo de la cepa bacteriana (BS) en DMEM. Después de la incubación, la mezcla de GHLOs-BS se centrifuga a 12,000 g por 3 minutos, el botón se lava luego con 1 ml de NaCl al 0.9%, y se resuspende en 500 µl de prueba rápida de ureasa ( Jatrox®-H .p . -test , Procter&Gamble Pharmaceuticals GMBH, Weiterstadt, Alemania) . Los cambios colorimétricos, proporcionales a la actividad de ureasa, son determinados mediante análisis fotométrico en una densidad óptica de 550 nm. La viabilidad bacteriana es estimada antes y después de la incubación con LS mediante diluciones en serie en placas de GHLOs sobre placas de suero (agar GC, Gibco BRL, Paisley, Escocia) suplementadas con suero de caballo al 10%, Inotec, y con Isovitale X al 1% (Baltiraore Biological Laboratories, Baltimore, MD), y contando las unidades formadoras de colonias (UFC) .

Ejemplo 2 Se estudiaron los efectos de un suplemento con medio de fermentación de Lactobacillus sobre infección por Heli coba cter spp . en perros.

MATERIALES Y MÉTODOS Animales El comité ético en la Escuela Veterinaria de Lyon, Francia, aprobó el estudio. Nueve perros pachones macho, los cuales habían contraído naturalmente una infección gástrica con GHLOs, fueron incluidos en el estudio. Los perros estuvieron en un intervalo de peso de 10 a 14 kg y edad de 3 a 4 años. Los perros fueron alojados en perreras con condiciones idénticas de higiene y alimentación (Escuela Veterinaria de Lyon, Francia) . Las perreras fueron limpiadas y desinfectadas diariamente. Los perros fueron regularmente alimentados a las 8 a.m. y tuvieron acceso constantemente a agua a todo lo largo del estudio. Durante el estudio completo, éstos fueron alimentados con una dieta específica; VITALITY® - Friskies, Francia (anexo A) .

Diseño experimental Antes del tratamiento, la infección gástrica con GHLOs se confirmó en los 9 perros pachones mediante la evaluación de la identificación de GHLOs (histobacteriología) , la actividad de ureasa gástrica (prueba de Jatrox®) y la presencia de gastritis crónica (histopatología) en biopsias fúndicas y/o de la cavidad del estómago. Todos los perros con infección por GHLOs fueron sujetos de un tratamiento por 13 días continuos. La detección de infección gástrica con GHLOs por estas pruebas más la prueba del aliento de 13C-urea se repitió tres veces: antes del tratamiento [Do], al final del tratamiento [Di3] y 30 días después del final del tratamiento [D43] .

Tratamiento El tratamiento estuvo compuesto por un consumo diario de una preparación fermentada de leche acidificada por L . Johnsoni i NCC 533 por 13 días continuos. La preparación de leche acidificada tuvo que ser completamente ingerida antes de la dieta específica (240 g "VITALITY®"/perro) .

Pruebas de evaluación • Examen clí ni co : durante el estudio completo, los perros fueron observados por dos cirujanos veterinarios de la Escuela Veterinaria de Lyon, Francia. Las observaciones clínicas tuvieron que ser registradas en la forma de reporte por caso.

• Bi opsia gás tri ca : la endoscopia gástrica fue realizada bajo anestesia (cetamina, IMALGENE®, 5 mg/kg - IM) . Los perros fueron sometidos a ayuno por 24 horas. La endoscopia fue llevada a cabo con un videogastroscopio Olympus® GIFX/XV10. En cada día de evaluación, se tomaron 12 biopsias del fundus y de la cavidad. Dos biopsias fúndicas y de la cavidad tuvieron que ser inmediatamente utilizadas para medir la actividad de ureasa de GHLOs. Cuatro biopsias fúndicas y de la cavidad fueron realizadas para mantenerse en una solución de "Bouin" antes de ser utilizadas para histobacteriología e histopatología .

• Identifi cación de GHLOs (hi stoba cteriol ogía ) : la identificación de GHLOs fue realizada mediante un examen histológico de secciones de biopsia. Las secciones tisulares fueron teñidas con una tintura tipo Gie sa y evaluadas mediante microscopía de luz (x 1000). Una evaluación semicuantitativa de GHLOs se efectuó tomando en cuenta la localización en el estómago y "deapness" de la contaminación extracelular. Si el número de GHLOs por sección no tiene bacterias (grado "0"); menos de 5 bacterias (grado "1"); entre 5 y 20 bacterias (grado "2) y más de 20 bacterias (grado "3") . Para cada biopsia fúndica y de la cavidad, se realizaron dos secciones, luego se evaluaron, y el resultado fue la media de dos evaluaciones (Ref. Willard M.D. Characterization of naturally developing small intestinal bacterial overgrowth in 16 Germán Sheperd Dogs . J Am Ve t Med Assoc, 1994, 204, 1201- 1206) • Acti vidad de ureasa gás tri ca (Ja trox® - H. P. tes t , Procter & Gamble , Al emania) : el principio de la prueba es que la urea en el medio de prueba es dividido por la ureasa presente en los GHLOs. La elevación en el valor del pH, asociada con la división de la urea provoca un cambio de color en el medio indicador (rojo de fenol) del amarillo al rosa/rojo. Las biopsias fueron probadas inmediatamente después de su espécimen. Después de la introducción de la biopsia en el medio indicador, la prueba de Jatrox® fue leída en 180 minutos por un fotómetro con un detector ultravioleta, el cual fue ajustado a 550 nm para la lectura con una referencia a 650 nm. La actividad de ureasa en biopsias fúndicas y de la cavidad fue la medía de dos mediciones ópticas.

• Prueba del ali en to con 13C-urea : la prueba de UBT se realizó dos horas después de la anestesia para la endoscopia, de modo que ésta última no tuvo influencia en los resultados de la UBT. La UBT se realizó en perros en ayuno, sin anestesia. En un primer tiempo, los perros comieron una carne de prueba, la cual fue la mitad de su ingestión diaria; a saber 120 g de VITALITY®/perro . En un segundo tiempo, a los perros se les administró oralmente de 7.5 mg de 13C-urea/perro (MASS TRACE, Woburn - EUA) . Las muestras exhaladas de 13C02 fueron obtenidas antes del alimento de prueba [TB] , 40 minutos después, la administración de 13C-urea [T40]. Posteriormente, los perros tuvieron la segunda mitad de su consumo alimenticio diario. Las muestras exhaladas de 13C02-urea fueron analizadas con un espectrómetro de masa de proporción de isótopo de gas (FINNIGAN MAT, Bremen, Alemania) . Para estandarizar los resultados entre laboratorios, se utilizó un análogo del estándar internacional para la referencia de 13C (Viena Pee Dee Belemnite o VPDB) . El exceso porcentual atómico para 13C02 fue definido como la diferencia (valor delta, d) en el 13C02 porcentual atómico entre la muestra de línea base (muestra antes del alimento de prueba y administración de 13C [TB] y las muestras obtenidas después a los 40 minutos [T40] x 1000 (44,45). Los resultados son expresados como un 13 C02 d en exceso (d %) • Histopa tol ogí a (ci tología) : la histopatología se realizó mediante prueba de cytoloBT que se efectuó por examen citológico de secciones delgadas de biopsia. Las secciones de impresión fueron teñidas con He atoxylin-Pholoxin-Saffron (HPS) y se observaron por microscopio. Los criterios para diagnósticos histológicos de biopsias gástricas confían en el número de cada tipo celular que es la media de tres campos observados a una amplificación x400 y la cantidad de agregados de linfocitos es el número en una muestra a una amplificación x200. La clasificación histológica de gastritis crónica es: grado 0: fibrosis superficial, 0 neutrófilos, 0-10 linfocitos y células plasmáticas, sin agregados, epitelio normal; - gastritis crónica leve - grado 1: gastritis superficial crónica, 10-15 linfocitos o células plasmáticas que envuelven el tejido intersticial superficial, agregados <2, epitelio normal; - gastritis crónica moderada - grado 2: gastritis intersticial crónica, 10-50 o más linfocitos o células plasmáticas que envuelven el espesor completo de la mucosa, agregados <3, epitelio normal; - gastritis crónica severa - grado 3: gastritis atrófica, 10-50 o más linfocitos o células plasmáticas, agregados >3, cambios en el epitelio glandular (atrofia) . (Ref.: P. Lecoindre, M. Chevallier, R. Gillard y F. Daurin.- Small intestinal bacterial overgro th and inflammatory bowel diseases in dogs. Evaluation of the therapeutic efficacy of Spiramycine-Metronidazole association. Revue MéD. Vét, 1998; 149: 843-852) .

Análisis estadístico Cada resultado de las pruebas de diagnóstico fue la media de dos mediciones de las distintas biopsias. La normalidad o anormalidad de la distribución de resultados se examinó mediante el procedimiento de Wilk-Shapiro . Los efectos del tratamiento y post-tratamiento se evaluaron por el uso de una prueba de Clasi icación de signos de Wilcoxon (WSRT) y/o prueba t apareada. Todos los cálculos estadísticos fueron realizados con un programa de software (Statistix®, Excel Microsoft®). Un valor P < 0.05 fue considerado como significativo.

RESULTADOS Cinética de carga de GHLOs gástricos: los resultados se presentan en las Tablas 1 y 2.

Tabla 1: Histobacteriología en fundus D.4 vs Do D43 vs D14 D43 vs Do WSRT 0.0143 0.3270 0.0360 3 O Tabla 2: Histobacteriología en Cavidad Al final del tiempo de tratamiento [D0] a [D14], la carga bacteriana media con- GHLOs fue significativamente disminuida en grado del "3" al "1" en el fundus (P = 0.0143) y de "2" a "1" en la cavidad (P = 0.0360) . Entre el inicio del tratamiento y el final del estudio [Do] a [D43] , la carga bacteriana media con GHLOs fue significativamente disminuida en grado del "3" al "2" en biopsias fúndicas (P < 0.0360). En biopsias de la cavidad, no existió diferencia significativa .

Actividad de ureasa gástrica (prueba de Jatrox®) en fundus DM vs D0 D43 vs D ? D3 vs D0 Prueba t apareada 0.0155 0.0381 0.0921 Tabla 4: actividad de ureasa gástrica (prueba de Jatrox®) en la cavidad Al final del tiempo de tratamiento ( [D0] a [Di ] ) , la actividad media de ureasa disminuyó significativamente de 35% en el fundus (P = 0.0155) y 93% en la cavidad (P = 0.0197). Veintinueve días después del final del tratamiento ( [Di ] s [D43] ) , la actividad media de ureasa se incrementó significativamente de 35% en biopsias fúndicas (P = 0.0381) pero permaneció aún inferior que en el comienzo del tratamiento. La actividad de ureasa en cavidad no se modificó y permaneció nula.

Actividad de ureasa global (prueba del aliento de 13C- urea) : Los resultados se dan en la Tabla 5.

Tabla 5: actividad de ureasa global (prueba del aliento de 13C-urea) D?4 vs D0 D43 vs D 14 D43 vs Do WSRT 0 . 0494 0 . 4772 0 . 3433 Entre el inicio y el final del tratamiento ( [D0] a [D?4] ) , el enriquecimiento mediano con 13C de 35% de 13C02 exhalado disminuyó significativamente (P = 0.049) . ' Al final de 29 días después del final del tratamiento ( [Di4] a [D43] ) , el enriquecimiento de 13C de 13 C02 exhalado no fue significativamente modificado Gastritis crónica (prueba del aliento de 13,C-urea Los resultados se dan en las Tablas 6 y 7.

Tabla 6: histopatología en fundus Tabla 7: Histopatología en cavidad Al final del tiempo de tratamiento ([Incl.] a [D14], la gastritis crónica media fue significativamente disminuida de grado del "1" al "0" en el fundus (P = 0.0143). Esta disminución se mantuvo hasta el final del estudio. Cualquier modificación significativa de grado medio no se mostró en biopsias de la cavidad.

CONCLUSIÓN (1) Prueba t apareada; (2) prueba de Clasificación de Signos de Wilcoxon - (-) (+) variación negativa o positiva - P < 0.05 - a Histobacteriología - b prueba de Jatrox® - c prueba del aliento de 13C-urea - d histopatología - En perros que tienen una infección gástrica por GHLOs con una gastritis crónica, el consumo de una preparación de leche acidificada, fermentada por L . johnsoni i NCC 533 fue capaz de obtener: en el fundus y en la cavidad, una disminución significativa de la carga de GHLOs y la actividad de ureasa y la regresión de gastritis crónica durante el tratamiento, en el fundus, una regresión significativa de la gastritis crónica que fue^ mantenida después del final del tratamiento, sin efectos colaterales.

Ejemplo 3: propiedades Anti-Helicobacter presentes en los sobrenadantes de cultivo de diferentes cepas de Lactobacilos .

Las propiedades in vitro anti-GHLO de los sobrenadantes de cultivo de desarrollo de Lactobacilos de las cepas aisladas: NCC 533, NCC 2583 y NCC 2628 fueron evaluadas mediante la inhibición de la actividad de ureasa. H. bi zzozzeronii y H. sal omoni s se desarrollaron en agar Columbia - sangre de oveja al 5%. H. felis se desarrolló en agar de infusión de corazón y cerebro (BHI) que contenía 3 g/L de extracto de levadura y sangre de oveja al 10%. Todas las especies de Helicobacter se mantuvieron en una atmósfera 4 O microaerofílica (85% N2/10% C02/5% 02) a 37°C por 48 horas. Las bacterias fueron cosechadas en caldo BHI suplementado con 2.5 g/L de extracto de levadura. El número de bacterias se estimó mediante la medición de la densidad óptica a 600 nm (1 DO 600 = 108 bacterias/ml ) . Los sobrenadantes de cultivo, puros o pre-diluidos en el medio apropiado, fueron finalmente diluidos 1:2 en medio DMEM. Después de ajustar el pH a 4.2, las muestras fueron esterilizadas mediante filtración a través de 0.2 µM. El equivalente de lxlO7 H. pyl ori se agregó a tubos que contenían 500 µl de muestras diferentes y los tubos fueron además mantenidos por 1 hora a 37 °C en un incubador celular (5% de C02 ) . Las bacterias fueron cosechadas mediante centrifugación. Los botones bacterianos fueron lavados una vez en NaCl al 0.9% y resuspendidos en 250 µl de reactivo de prueba de ureasa ( Jatrox®-prueba H.p.; Procter & Gamble Pharmaceutical). Después de una incubación adicional de 1 hora a 37°C, los cambios colorimétricos, proporcionales a la actividad de ureasa, fueron determinados mediante espectrofotometría a una densidad óptica (DO) de 550 nm.

Preparación de sobrenadante fermentado Los Lactobacilos provenientes de la colección de cultivos de Nestle, denominados NCC 2583 y NCC 2628 fueron desarrollados en medio MRS-Pasteur. E . Faeci um SF68 y S . Boulardii SB20 se desarrollaron en medio de HJL e YPF, respectivamente. Después de 48 horas a 37°C, las bacterias fueron formadas en botones y los sobrenadantes fermentados fueron recuperados y mantenidos congelados a -2°C hasta su uso posterior.

Resultados Reservas de cepas de Lactobacillus, NCC 2583 y NCC 2628, de E . Faeci um SF68 (Bioferment) y de S . boulardii SB20 (Levucell) se desarrollaron en paralelo en sus medios apropiados. Los sobrenadantes fermentados diferentes ' fueron probados para su capacidad inhibitoria contra H. bi zzozzeronii , H. sal omoni s y H. feli s utilizando la prueba de ureasa.

Un sobrenadante de cultivo en desarrollo NCC 533 fue utilizado como un control positivo, y los medios de cultivo solos se utilizaron como controles negativos en los ensayos. La Tabla 8 muestra los resultados de dos experimentos separados. El sobrenadante fermentado de L. acidophilus NCC 2628 inhibió totalmente la actividad de ureasa de H. bizzozzeronii , H. salomonis y H. felis. El sobrenadante fermentado de L. rhamnosus NCC 2583 inhibió parcialmente la actividad de ureasa de H. bizzozzeronii y H. salomonis pero no aquella de H. felis . La incubación de cualquier especie de Helicobacter con el sobrenadante de cultivo de L. johnsonii NCC 533 condujo a una inhibición completa de su actividad de ureasa. No se observó inhibición de la actividad de ureasa cuando se incubaron las tres especies de Helicobacter con los sobrenadantes de cultivo en desarrollo de E. faecium SF68, de S. boulardii SB20.

Tabla 8: Efecto de sobrenadantes fermentados diferentes sobre la actividad de ureasa por GHLO 3 Lactobacilos, E. faecium, S. boulardii fueron cultivados por 48 horas en sus medios apropiados. Dilución i* de los sobrenadantes de cultivo fermentados fueron incubados con 2x107 bacterias/ml. Después de incubación de 1 hora, las actividades de ureasa de H. bizzozzeronii , H. felis y H. salomonis fueron evaluadas mediante espectrofotometría. Inhibición total D?550nm=0; sin inhibición DOssonm=O .5.

Ejemplo 4: alimento seco para perros Una mezcla alimenticia se elabora con aproximadamente 58% en peso de maíz, aproximadamente 5.5% en peso de gluten de maíz, aproximadamente 22% en peso de harina de pollo, 2.5% de achicoria deshidratada, leche fermentada por cepas de Lactobacillus johnsonii NCC 533 (CNCM-I 1225) y Lactobacillus paracasei (CNCM-I 2116) de modo que la cantidad correspondiente para el perro es aproximadamente 109-1012 ufc/dí , y sales, vitaminas y minerales constituyen el resto. La mezcla alimenticia es introducida en un preacondicionador y humedecida. El alimento humedecido es luego introducido en un extrusor-hornilla y gelatinizado. La matriz gelatinizada que sale del extrusor es forzada a través de un troquel y extruida. El extruido es cortado en piezas adecuadas para alimentar a perros, secado a aproximadamente 110°C por aproximadamente 20 minutos, y enfriado para formar pellas . Este alimento seco para perros es capaz de mejorar la salud de las mascotas, y particularmente previene trastornos relacionados a infección por GHLOs en mascotas.

Ejemplo 5 Se condujo una prueba en un panel de 20 perros pachones machos, los cuales habían contraído naturalmente una infección gástrica con GHLOs. A todos los perros se les dio primeramente un antibiótico, un tratamiento clásico para la erradicación de GHLOs, que comprende la administración de dos diferentes antibióticos (Espiramicina y Metronidazol) y un antisecretor similar al Omeprazol durante 1 semana. Después de 7 días de tratamiento, la mitad de los perros fueron negativos a GHLOs, por ejemplo no se detectaron organismos Helicobacter mediante histobacteriología, no hubo actividad de ureasa gástrica y un valor de prueba del aliento de 13C-urea Inferior a 5% de incremento sobre la línea base a 40 minutos . Después del tratamiento, la mitad de los perros fueron alimentados con producto Friskies Menú Energy, el cual es alimento seco para perros, disponible en el mercado, como un alimento control. Los 10 perros restantes fueron alimentados con un alimento de prueba correspondiente al producto Friskies Menú Energy excepto que éste contenía pellas de leche en polvo fermentada por cepas de La ctoba cill us j ohnsonii NCC 533 (CNCM-I 1225) y La ctoba cil l us para casei (CNCM-I 2116) , de modo que la cantidad para un perro es de aproximadamente 109-1012 ufe/día. La prueba del aliento de 13C-urea y detección de Helicobacter mediante histobacteriología fueron medidas nuevamente 6 semanas después de la alimentación con estas dos dietas diferentes. El resultado muestra que 20% de los perros alimentados con el producto Friskies Menú Energy, se volvieron positivos en 6 semanas. Todos los perros alimentados con el alimento de prueba fueron negativos después de 6 semanas. Esta composición es eficiente como un adyuvante en antibioterapias para prevención de reinfestación por GHLOs .

Ejemplo 6: alimento en lata para mascotas Se prepara una mezcla a partir de 73% de carne de aves de corral, pulmones y bistec de hígado de cerdo (molidos), 16% de harina de trigo, 2% de colorantes y 9% de leche fermentada por cepas de La ctoba cill us j ohnsonii NCC 533 (CNCM-I 1225) y Bifidoba cteri um la cti s (ATCC 27536), vitaminas, y sales inorgánicas. Esta mezcla es emulsificada a 12°C y extruida en la forma de un puré que es luego cocinado a una temperatura de 90°C. Éste es enfriado a 30°C y cortado en trozos. 45% de estos trozos son mezclados con 55% de una salsa preparada a partir de 98% de agua, 1% de colorante y 1% de goma guar. Las latas de lámina estañada son llenadas a 125°C por 40 minutos. Esta composición húmeda está diseñada para prevenir o tratar trastornos relacionados a infección por GHLOs en mascotas.

Ejemplo 7: efecto sobre olores por mal aliento 10 perros con GHLOs en estómago fueron alimentados con la misma dieta que en el ejemplo 2 por 2 semanas. El olor del aliento fue medido en cada perro al comienzo y al final del tratamiento mediante la ayuda de un halitómetro. Este experimento mostró que la alimentación de los perros con una composición que contiene una preparación de leche acidificada, fermentada por L . johnsonii NCC 533 induce una reducción significativa de los olores del aliento. Además, existió correlación clara entre el nivel de infección por Helicobacter y los olores del aliento.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. El uso de al menos una cepa de bacteria láctica y/o sus metabolitos o un medio fermentado por al menos una bacteria láctica gue ha sido aislada y seleccionada por su habilidad para mostrar una actividad bactericida in vitro anti-Helicobacter, fuerte, para la preparación de una composición diseñada para la profilaxis o el tratamiento de trastornos relacionados a infección por GHLOs en mascotas.

2. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la bacteria de ácido láctico es utilizada en la forma de un medio fermentado por la bacteria de ácido láctico, o una subfracción de medio cultivado fermentado por la bacteria de ácido láctico.

3. El uso de conformidad con cualquiera de -las reivindicaciones precedentes, en donde la cepa de bacteria de ácido láctico se selecciona del grupo que consiste de La ctoba cillus j ohnsonii , Lactoba cill us reuterii , La ctobacill us paracasei , Lactoba cillus animalis , La ctobacillus ruminis , Lactoba cill us acidophil us , La ctobacillus rahmnosus , La ctobacillus fermen tum, Bifidoba cterium sp . , Bifidoba cterium la ctis , Bifidobacterium animalis .

4. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la cepa de bacteria de ácido láctico se selecciona del grupo que consiste de Lactobacillus johnsonii NCC 533 (CNCM-I 1225), Lactobacillus fermentum NCC 2581 (CNCM 1-2448), Lactobacillus fermentum NCC 2592 (CNCM 1-2450), Lactobacillus fermentum NCC 2613 (CNCM 1-2452), Lactobacillus paracaseí NCC 2461 (CNCM-I 2116), Lactobacillus animalis NCC 2603 (CNCM 1-2451), Lactobacillus rahmnosus NCC 2583 (CNCM 1-2449), Lactobacillus acidophilus NCC 2628 (CNCM 1-2453), Bifidobacterium lactis (ATCC 27536) .

5. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la bacteria de ácido láctico o el medio de fermentación equivalente es utilizado de modo que la cantidad disponible para la mascota es de aproximadamente 103-1014 ufe por día.

6. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la bacteria de ácido láctico o el medio de fermentación equivalente es utilizado en una cantidad de aproximadamente 109-1012 5 O ufe/día para perros y 107-101:L ufe/día para gatos.

7. Una composición alimenticia para mascotas que contiene una cantidad efectiva _de cuando menos una cepa aislada de bacteria láctica y/o sus metabolitos o su medio de crecimiento fermentado, la bacteria láctica siendo aislada y seleccionada por su habilidad para desarrollar una fuerte actividad bactericida anti-helicobacter in vitro, asociada con un soporte ingerible o una matriz farmacéutica.

8. Una composición de conformidad con la reivindicación 7, en donde la bacteria de ácido láctico es utilizada en la forma de un medio fermentado por una bacteria de ácido láctico viable o inactivada, o una subfracción de medio de cultivo fermentado por la bacteria de ácido láctico.

9. Una composición de conformidad con las reivindicaciones 7 ú 8, en donde la cepa de bacteria de ácido láctico se selecciona del grupo que consiste de Lactobacill us johnsonii , Lactobacillus reuterii , Lactobacillus paracasei , Lactobacillus animalis , Lactobacillus ruminis , Lactobacillus acidophilus , Lactoba cillus rahmnosus , Lactobacillus fermen tum, Bifidobacterium sp . , Bifídobacterium lactis , Bifidobacterium animalis .

10. Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en donde la cepa de bacteria de ácido láctico se selecciona del grupo que consiste de Lactobacillus j ohnsonii NCC 533 (CNCM-I 1225) , Lactobacillus fermentum NCC 2581 (CNCM 1-2448), Lactobacillus fermentum NCC 2592 (CNCM I-2450), Lactobacillus fermentum NCC 2613 (CNCM 1-2452), Lactobacillus ' paracasei NCC 2461 (CNCM-I 2116), Lactobacillus animalis NCC 2603 (CNCM 1-2451) , Lactobacillus rahmnosus NCC 2583 (CNCM 1-2449), Lactobacillus acidophilus NCC 2626 (CNCM 1-2453), Bifídobacterium lactis (ATCC 27536) .

11. Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, en donde la cantidad de cepa de bacteria de ácido láctico o el medio de fermentación equivalente disponible para la mascota es correspondiente a aproximadamente 103-1014 ufe por día.

12. Una composición de conformidad con cualquiera _de las reivindicaciones 7 a 11, la cual reduce la infección por GHLO en gatos y perros de manera que la carga de los GHLOs y la actividad de la ureasa son disminuidas en al menos 0.5 del grado en el fundus y en al menos 0.5 del grado en la cavidad.

13. Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, la cual induce una regresión de la gastritis fúndica crónica, con una regresión promedio del grado de inflamación gástrica de al menos aproximadamente 0.5.

14. Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11, en donde los metabolitos reducen los malos olores del aliento de las mascotas .

15. Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11, la cual previene o reduce los trastornos relacionados con la infección por GHLOs en el tracto gastrointestinal de las mascotas, particularmente en el estómago y en el intestino bajo.