MXPA01013238A - Uso de la proteina uk 114 para inhibir el rechazo de trasplante de organos. - Google Patents

Abstract

El uso de la proteina UK 114 para reducir o prevenir el rechazo de trasplante de organos asi como para mantener la aceptacion del transplante.

Description

USO DE LA PROTEINA UK 114 PARA INHIBIR EL RECHAZO DE TRASPLANTE DE ÓRGANOS DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al uso de la proteína UK 114 para reducir o inhibir el rechazo de trasplante de órganos, así como para mantener la ace tación del trasplante. En la actualidad la evolución continua de las técnicas de cirugía, junto con el desarrollo de fármacos inmunosupresores más efectivos y bastante selectivof, han mejorado en forma progresiva el resultado del trasplante de órganos . Sin embargo, el trasplante de órganos co o una solución permanente en los casos de insuficiencia de órganos en etapa final aún presenta en la práctica el grave problema de reacción de rechazo. El tratamiento con fármacos inmunosupresores se utiliza para controlar tal problema, con la consecuencia de que las complicaciones infecciosa.s aún siguen siendo la causa principal de muerte en los receptores del trasplante. Además, la terapia con inmunosupresores nunca se puede detener completamente, incluso después de REF: 134814 resolver cualquier rechazo agudo, sino que se tiene que continuar como un tratamiento de mantenimiento en forma indefinida, aunque con dosis relativamente pequeñas. El rechazo de aloinjertos (entre elementos genéticamente diferentes de la misma especie) se puede presentar ya sea debido a una reacción inmune mediada por células o por una reacción humoral contra los antígenos de histocompatibilidad (HLA) presentes en las membranas de las células del donador. La reacción inmune mediada por células ocasiona la destrucción del injerto en un periodo que va de unos días hasta meses después del trasplante (rechazo agudo) y está caracterizada por la infiltración progresiva de células mononucleares (macrófagos, linfocitos y monocitos) en el tejido transplantado; si estas células perciben diferencias de antígeno, éstas activarán los linfocitos T, los cuales estimulan una respuesta inmune, de tipo tanto celular (células T) como humoral (células B) , ocasionando la destrucción del trasplante. Este tipo de rechazo mediado por células con frecuencia se puede tratar con una terapia inmunosupresora fuerte. En el caso de resolución, es poco probable que se presente un rechazo agudo nuevo, y el aloinjerto por lo general sobrevivirá durante periodos prolongados . La participación de los anticuerpos humorales en el rechazo es claro cuando el receptor ha sido sensibilizado previamente a los antígenos de HLA presentes en el injerto; en estos casos la destrucción del órgano transplantado se presenta dentro de unas cuantas horas o incluso minutos después de la revascularización (rechazo hiperagudo) . El rechazo crónico es un proceso gradual de deterioro y falla que se presenta posteriormente en la vida del trasplante, desde varios meses hasta muchos años. Los mecanismos inmunológicos de rechazo crónico son menos claros. La imagen histológica es diferente a la del rechazo agudo, y está caracterizada por lesiones principalmente en el endotelio de la arteria, en el cual la proliferación extensiva gradualmente ocasiona la oclusión del lumen del vaso sanguíneo, isquemia y fibrosis del injerto. El tratamiento con fármacos inmunosupresores para controlar el rechazo de órganos en la actualidad se basa en el uso de corticosteroides, azatioprina (o ciclofosfamida en el caso de pacientes que no toleran la azatioprina) y ciclosporina, frecuentemente en una combinación de los mismos , Sin embargo, cada uno de estos medicamentos implica un número de efectos secundarios no deseados, los cuales se pueden resumir como sigue: - corticosteroides: capacidad de generar diabetes, incremento en el catabolismo de proteínas, atrofia de la corteza adrenal, reducción de la respuesta del tejido conectivo a las lesiones, miopatía, osteoporosis, efectos sobre el sistema hematopoyético y sobre el sistema nervioso; azatioprina: depresión de la médula ósea, hepatitis; - ciclofosfamida: nefrotoxicidad; ciclosporina: nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, hipertensión refractaria e incremento de neoplasias. Por lo tanto es evidente la necesidad de una terapia alternativa que evite o reduzca el rechazo de un órgano o tejido transplantado, o que de alguna manera incremente la aceptación por parte del receptor sin implicar los efectos secundarios antes mencionados. En la actualidad se ha descubierto, y éste es el objetivo de la invención, que la proteína que tiene peso molecular de aproximadamente 14 kDa en SDS-PAGE y que se puede obtener mediante extracción a partir del hígado de mamífero con ácido perclórico, descrita en los documentos WO 97/30154 y WO 96/02567 y que se conoce con el nombre de UK 114, puede reducir o prevenir el rechazo de los aloinjertos así como mantener la aceptación del injerto mismo, sin inducir los efectos secundarios típicos de los fármacos inmunosupresores conocidos. La proteína UK 114 actúa sobre el sistema inmune, ejerciendo efectos pleyotrópicos posiblemente debido a una modulación de la producción de citocina por las células T y los macrófagos . De conformidad con la invención, la proteína UK 114 obtenida ya sea por extracción o en forma recombinante será administrada por vía parenteral, por ejemplo a través de las vías intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea o sublingual. Las formas de formulación preferidas serán formas inyectables, tales como soluciones o suspensiones, polvos estériles para preparar soluciones o suspensiones inyectables; o formas sólidas tales como tabletas para la administración sublingual. La proteína de la invención se puede administrar en forma opcional en combinación con otros inmunosupresores convencionales, tales como corticosteroides, azatioprina, ciclofosfamida, ciclosporina, también en combinaciones de los mismos.

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Las dosis que se administrará dependerá de un número de factores, tales como las características individuales del paciente (peso, etc.) así como del tipo de órgano o tejido transplantado o que se pretende trasplantar. Sin embargo, en general, la cantidad de UK 114 que se administre varía de 0.1 hasta 30 mg/kg/día durante un tiempo de 1 a 6 meses después del trasplante. Después de esto, se seguirá un tratamiento de mantenimiento. Los procedimientos de administración, tales como dosificación, vía de administración, duración de los tratamientos de ataque y de mantenimiento, la posible administración de agentes inmunosupresores o quimioterapéuticos conocidos, ya sea en forma concomitante o por separado, serán definidos por el experto en la técnica. El siguiente ejemplo ilustra también la invención.

EJEMPLO Trasplante de islotes pancreáticos en ratón Se prepararon 400 a 500 islotes pancreáticos provenientes de ratones NOD euglucémicos de 5-6 semanas de edad, disponibles de Charles River (Calco, Italia) , y se implantaron bajo la cápsula renal de ratones NOD hembra que padecen de diabetes espontánea de inicio reciente (7-4 días) de conformidad con el procedimiento descrito por Mellgren A. et al., en Diabetología, 1986, 29:670. Este procedimiento permite restablecer la normoglucemia en ratones NOD, seguido por reaparición de hiperglucemia dentro de 6-8 días, debido a la destrucción de los islotes transplantados (véase Sandberg J.O. et al., Clin. Exp. Immunol . , 1997, 108:314).

Tratamiento con UK 114 Empezando dos días antes del trasplante, y posteriormente cada día durante la duración del experimento, se trataron tres grupos de ratones NOD diabéticos de 2-25 semanas de edad (15 animales/grupo) por vía intraperitoneal con UK 114 a una dosis de 30 o 60 µg/ratón (en 0.1 o 0.2 ml) o con 0.2 ml de PBS. Se midió la glucemia en los animales en los días 3, 6, 9, 12 y 14 después del trasplante a partir de muestras de sangre de la cola (ExacTech, Baxter Travenol, Deerfield, IL) . Los animales se consideraron diabéticos cuando la glucemia fue mayor de 11.8 mmoles/1 después de 6 horas de ayuno. Durante el experimento murieron un animal del grupo de control y otro del grupo tratado con UK 114 a dosis bajas en los días 2 y 3 después del trasplante y estos no se consideraron para calcular los datos. En el día 3 del experimento, 5/14 ratones del grupo de control tratado con PBS seguían siendo normoglucémicos, en el día 6 solamente un ratón de este grupo fue normoglucémico, y en el día 9 todos los animales habían desarrollado notoriamente hiperglucemia • con valores de glucemia promedio (SD) de 16.2 ± 3.2 mmoles/1, los cuales se incrementaron después hasta 18.9 ± 4.5 en el día 14 (véase el cuadro) . Por el contrario, el tratamiento con UK 114 en forma dependiente de la dosis evitó la reaparición de hiperglucemia en los ratones NOD transplantados. De los animales tratados con 30 µg de UK 114, 12/14 animales fueron normoglucémicos en el día 6 y 11 de 14 en los días 9 y 14 (véase el cuadro) . Ninguno los 15 animales tratados con la dosis más alta de UK 114 se tornó diabético durante los 14 días posteriores al trasplante (véase cuadro) . Estos datos demuestran que la administración de UK 114 puede prevenir, o de algún modo retrasar, el rechazo de islotes pancreáticos en un modelo animal bien conocido y sugiere el uso potencial del tratamiento con UK 114 para prevenir el rechazo de islotes pancreáticos transplantados en pacientes IDDM.

CUADRO Días 6 9 14 PBS 9/14 diabéticos9 13/14 diabéticos"1 14/14 diabéticosd 14/14 diabéticos11 UK 114 30 µg 2/14 diabéticos0 3/14 diabéticos0 3/14 diabéticos6 3/14 diabéticos6 UK 114 60 µg 0/15 diabéticos0 0/15 diabéticos1 0/15 diabéticosf 0/15 diabéticos1 b contra a, p = 0.02 con Xi2 c contra a, p < 0.0001 con Xi2 e, f contra d, p < 0.0001 con Xi2 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el convencional para la manufactura de los objetos o productos a que la misma se refiere.

Claims (3)

1. REIVINDICACIONES
2. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1.- El uso de la proteína UK 114 para preparar medicamentos que reduzcan o que inhiban el rechazo de trasplante de órganos y que mantengan la aceptación del trasplante mismo. 2. - El uso de la reivindicación 1, para reducir o evitar el rechazo el trasplante de los islotes de Langerhans.
3. 3.- La proteína UK 114 como un agente contra el rechazo.