MXPA00009178A - Agentes compatibles con sangre reactivos latentes - Google Patents

Abstract

Un reactivo y método relacionado para utilizar en pasivar una superficie de biomaterial, el reactivo incluye un grupo reactivo latente y unácido alifático bifuncional (por ejemplo unácido graso) en combinación con un grupo espaciador que enlaza el grupo reactivo latente con elácido alifático en una forma que conserva la función deseada de cada grupo. Una vez ligado la superficie, mediante el grupo reactivo latente, elácido alifático al ambiente fisiológico, in vivo, en una forma (por ejemplo concentración y orientación) suficientes para mantener y orientar la albúmina.

Description

AGENTES COMPATIBLES CON SANGRE REACTIVOS LATENTES REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud corresponde a una continuación de la Solicitud de Patente de los E.U.A. presentada en octubre 22, 1998 y que se le otorgara el No. de Serie 09/177,318, 'la cual es una continuación de la solicitud de Patente de los E.U.A. provisional presentada en marzo 18, 1998 y que se le otorgara el No. de Serie 60/078,383, toda la descripción de la cual aquí se incorpora por referencia. CAMPO TÉCNICO La presente invención se refiere a reactivos y métodos para hacer a una superficie compatible y en particular reactivos y métodos para "pasivar" la superficie de un dispositivo médico implantable a fin de hacerlo hemo-compatible. En otro aspecto, la invención se refiere a dispositivos biomédicos, per se, y en particular a aquellos que tienen superficies de contacto de tejido bio-compatibles, incluyendo hemo-compatibles . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los fabricantes de dispositivos médicos implantables, por mucho tiempo han intentado comprender y a su vez mejorar el desempeño de materiales empleados en aplicaciones de contacto con la sangre (Leonard, E.F., y colaboradores, Arm. N.Y. Acad. Sci, 516 , New York, Acad.

Sci., New York, 1987) . La respuesta biológica del cuerpo, así como problemas con infección, han impedido la aplicación de dispositivos implantables, desechables y extra corpóreo. Drogas anticoagulantes tales como heparina y coumadin pueden mejorar el uso de estos dispositivos, aunque los anticoagulantes tienen sus propios correspondientes riesgos y desventajas. Por estas razones, el desarrollo de materiales que tienen mayor compatibilidad con la sangre se ha seguido agresivamente (Sevastianov, V.I., CRC Crit. Rev. Biocomp . 4:109, 1988). Dos estrategias generales que se han empleado para desarrollar materiales de contacto con la sangre mejorados, incluyen el modificar la química del propio material a granel y/o modificar las propiedades interfaciales del material. Con respecto al último enfoque, varias clases de materiales se han ligado covalentemente en superficies de contacto con la sangre, con la meta de mejorar la compatibilidad de la sangre. Estos incluyen anticoagulantes tales como heparina e hirudina; hidrogeles; polietileno óxido (PEO); agentes de enlace con albúmina; componentes de membrana celular; prostaglandinas; y polímeros sulfonados. Estos enfoques han cumplido con variantes grados de éxito en términos de reducir la adsorción de proteína, adhesión y aplicación de plaquetas y formación de trombos. Desgraciadamente, ningún enfoque aún ha mostrado que es universalmente aplicable para mejorar las interacciones de bio-materiales-sangre . Como se mencionó anteriormente, agentes que ligan albúmina se han considerado para uso en bio-materiales . Bio-materiales que tienen una alta concentración superficial de albúmina, se han mostrado menos probables para iniciar la cascada de fibrina y conexión de plaquetas que aquellos que tienen una alta concentración de otras proteínas de suero, tales como fibrinogeno, fibronectina o inmunoglobulina. En muchos materiales poliméricos, sin embargo, el fibrinógeno es a menudo la proteína predominante que se absorbe de mezclas de proteínas o plasma. Por estas razones, los investigadores han intentado inmovilizar albúmina sobre materiales o diseñar superficies de biomateriales que mejoren la unión de albúmina endógena de la sangre, de esta manera mitigando la absorción de fibrinógeno y consecuentes fenómenos trombogénicos . En este aspecto, una cantidad de diferentes enfoques se han empleado a la fecha. Estos enfoques incluyen la adsorción pasiva o inmovilización covalente de albúmina en la superficie, y el desarrollo de superficies diseñadas para ligar selectivamente albúmina endógena de la sangre circulante, esto última utilizando materiales modificadores de cadena alquilo y otros medios. hidrofóbicMunro y colaboradores, la Patente de los E.U.A. No. 4,530,974, describe un método para absorber albúmina en un polímero insoluble en agua, tal como poliuretano, al ligar covalentemente a la superficie una cadena alifática hidrofóbica no iónica a la cual se ligará o enlazará selectivamente la albúmina del suero. Frautschi y colaboradores, la patente de los E.U.A. No 5,017,670 y la patente de los E.U.A. No. 5,098,977, ilustran métodos para conexión covalente de extensiones alifáticas de 12 a 22 átomos de carbono con polímeros insolubles en agua que contienen anillos aromáticos y estructuras de anillo con hidroxilos secundarios adyacentes para unión de albúmina incrementada . Eaton en la patente de los E.U.A. No 5,073,171 describe un dispositivo protésico biocompatible que incorpora una cantidad de colorante de unión de albúmina efectiva para formar un revestimiento de albúmina endógena en el dispositivo, cuando el dispositivo está en contacto con un fluido fisiológico que contiene albúmina. Mientras que algunas o todas de estas estrategias diversas pueden emplearse para mejorar la unión de albúmina endógena a superficies de material que contacta la sangre, y a su vez para reducir unión de fibrinógeno, cada uno de estos enfoques se limita en uno o más aspectos. Superficies modificadas con cadena alquilo se ha mostrado que incrementan unión de albúmina y disminuyen la unión de fibrinógeno, pero estos efectos fueron substancialmente limitados, por ejemplo a un marco de tiempo corto (generalmente menos de una hora) . Además, diversos otros métodos de modificación superficial discutidos anteriormente son útiles para solo un rango estrecho de material de substrato. En otro asunto, la cesionaria de esta solicitud ha desarrollado la capacidad por agregar grupos bioactivos a una superficie, al unir covalentemente sus grupos, directa o indirectamente a la superficie. Por ejemplo, las patentes de los E.U.A. Nos. 4,722,906,4,979,959,4,973,493 y 5,263,992 se relacionan a dispositivos que tienen agentes biocompatibles ligados covalentemente por grupos fotoreactivos y una porción de enlace químico con la superficie del biomaterial. Las patentes de los E.U.A. Nos. 5,258,041 y 5,217,492 se relacionan a la conexión de bio moléculas con una superficie a través del uso de espaciadores químicos de cadena larga. Las patentes de los E.U.A. Nos. 5,002,582 y 5,512,329 se relacionan a la preparación y uso de superficies poliméricas, en donde los agentes poliméricos que proporcionan las propiedades deseadas, se ligan covalentemente mediante una porción foto-reactiva a la superficie. En particular, los propios polímeros exhiben las características deseadas y en la modalidad preferida, están substancialmente libres de otros grupos (por ejemplo bioactivos) . Sería altamente conveniente el poder conectar albúmina a una superficie de biomaterial en una forma que sea convenientemente estable para uso prolongado, particularmente en una forma que permita que la albúmina se reabastezca con el tiempo y en el curso de uso . COMPENDIO DE LA INVENCIÓN En la presente invención proporciona un reactivo novedoso para utilizar en pasivar una superficie de biomaterial, el reactivo comprende un grupo reactivo latente y un ácido alifático bifuncional en combinación con un grupo espaciador que enlaza el grupo reactivo latente con el ácido alifático en una forma que conserva la función deseada de cada grupo. El reactivo puede emplearse para pasivar una superficie al activar un grupo reactivo latente en la presencia de la superficie a fin de ligar covalentemente el reactivo a la superficie. Una vez que se liga a la superficie, el reactivo presenta el ácido alifático al ambiente fisiológico, in vivo, en una forma (por ejemplo concentración y orientación) suficiente para sostener y orientar la albúmina. De preferencia, con el tiempo, la superficie de reactivo es capaz de reabastecerse al reemplazar moléculas de albúmina que se han deteriorado, con nuevas moléculas de albúmina. La albúmina (por ejemplo albúmina de suero humano (HSA = Human Serum Albumin) se define como cualquier porción proteinácea de origen natural que contiene un sitio de unión de ácido graso. En una modalidad preferida, el reactivo es de la formula general (X)m-Y-(Z)n, en donde X es un grupo reactivo latente (por ejemplo fotorreactivo) , Y es un radical espaciador y Z es un ácido alifático bifuncional como cada uno se describen aquí. Los valores de m y n son menores o iguales a 1 y mientras que m puede ser igual a n no es necesario. El ácido alifático es "bifuncional" ya que proporciona tanto una región alifática como una región aniónica (por ejemplo ácido carboxílico) . Una vez conectado a una superficie, estas porciones cooperan en el proceso de atraer y ligar albúmina a fin de pasivar la superficie. En la modalidad preferida, en donde ambos m y n = 1, el reactivo se denomina un reactivo heterobifuncional. El ácido alifático de preferencia se conecta al grupo reactivo latente mediante un grupo espaciador divalente en una forma que no afecta nocivamente la función de cualquiera de las porciones alifática o aniónica. Grupos espaciadores de valencia superior también pueden seleccionarse que permita la conexión de múltiples grupos reactivos latentes y de ácido alifático, de nuevo en una forma que no afecta de manera nociva las funciones de los grupos respectivos. En este caso m no necesariamente es igual n y ambas son mayores o iguales a 1. En una modalidad adicional, el grupo espaciador puede ser un polímero multivalente que tiene múltiples sitios sobre la estructura principal que permiten la conexión covalente del ácido alifático y los grupos reactivos latentes. Estos grupos pueden conectarse a un polímero reactivo preformado utilizando técnicas de acoplamiento químicas convencionales o pueden incorporarse durante el proceso de polimerización por uso de monómeros substituidos apropiadamente. En esta modalidad, m no necesariamente es igual any típicamente ambas son mayores a 1. La invención además proporciona un método para preparar un reactivo pasivante, así como un método para utilizar el reactivo para pasivar la superficie de un biomaterial sintético o natural. En una modalidad aún adicional, la invención proporciona una superficie revestida con un reactivo pasivante de esta invención, y a su vez un artículo fabricado a partir de un material que proporciona una superficie revestida o para revestir con este reactivo. Todavía en una modalidad adicional, la invención proporciona una superficie de biomaterial pasivado que tiene reactivo conectado y albúmina atraída y conectada al reactivo ligado.

DESCRIPCIÓN DETALLADA La presente invención permite la unión de albúmina a una superficie a mejorarse por el uso de un reactivo de modificación de superficie. El reactivo incluye un ácido alifático bifuncional capaz de conectarse a una superficie en una cantidad y orientación que mejora la capacidad de la superficie para atraer y ligar albúmina. Mientras que no pretende estar ligado por teoría alguna, parece ser que una superficie que contiene un reactivo de esta invención exhibe mejorada unión de albúmina en virtud tanto de interacciones hidrofóbicas (de la cadena alquilo) como interacciones iónicas (de la porción aniónica) con albúmina. Se espera que las interacciones hidrofóbicas sirvan para sostener y orientar las moléculas de albúmina libre, mientras que las interacciones iónicas sirven para mantener la molécula de albúmina en posición por la adición de fuerzas iónicas atractivas. De una modalidad particularmente preferida, el ácido alifático y similar se conecta ya a estructuras principales de alcano, oxialcano o polimericas hidrofóbicas, para permitir que tanto regiones alifáticas como iónicas del ácido bifuncional análogo, se orienten espacialmente lejos de la superficie del biomaterial para inducir mejor unión con albúmina nativa. El reactivo a su vez permite superficies de unión de albúmina sean creadas utilizando una variedad de materiales de dispositivos médico, y en particular para utilizar en dispositivos médicos que contactan la sangre. Ácido Alifático Bifuncional El ácido alifático bifuncional de la presente invención (grupo "Z") incluye tanto una porción alifática como una porción aniónica. La palabra "alifática" como se emplea aquí, se refiere a una porción substancialmente lineal, por ejemplo una estructura principal hidrocarburo, capaz de formar interacciones hidrofóbicas con albúmina. La palabra "aniónica" a su vez se refiere a una porción cargada capaz de formar adicionales interacciones iónicas con la molécula de albúmina. Por el uso de un reactivo de esta invención, estas porciones pueden ligarse covalentemente a una superficie en una forma que retiene su función deseada, a fin de atraer y ligar albúmina nativa de la sangre y otros fluidos corporales . En una modalidad preferida, la invención incluye moléculas fotoactivables que tienen grupos funcionales de ácido graso, incluyendo polímeros que tienen múltiples grupos funcionales de ácido graso y fotoactivables, así como moléculas heterobifuncionales . Copolímeros de poliacrilamida fotoactivables que contienen múltiples análogos de ácidos grasos secundarios y múltiples fotogrupos secundarios, se han sintetizado a partir de acrilamida, una acrilamida substituida con benzofenona, y monómeros de acrilamida N-substituidos, que contiene el análogo de ácido graso. Polivinilpirrolidonas fotoactivables también se han preparado en una forma similar. Copolímeros de poliacrilamida y polivinilpirrolidona con un fotogrupo de un solo punto extremo y múltiples análogos de ácido graso secundarios también se han sintetizado. Finalmente, moléculas hetereobifuncionales fotoactivables que tienen una benzofenona en un extremo y un grupo de ácido graso en el otro, opcionalmente separadas por un espaciador se han elaborado, en donde el espaciador puede ser una cadena alquilo hidrofóbica o una cadena de polietilen glicol (PEG) más hidrofílica. Grupo Espaciador Espaciadores convenientes (grupos "Y") para utilizar en preparar reactivos heterobifuncionales de la presente invención, incluyen cualesquiera espaciadores difuncionales o funcionales superiores capaces de conectar covalentemente un grupo reactivo latente con un ácido alifático en una forma que les permite a ambos ser utilizados para su propósito pretendido. Aunque el espaciador en sí puede proporcionar una función química y/o física deseada, de preferencia el espaciador no hace interferencia ya que no afecta de manera nociva el uso de porciones alifáticas e iónicas para sus propósitos pretendidos. En el caso de los reactivos poliméricos de la invención, el grupo espaciador sirve para conectar el ácido alifático con la estructura principal del polímero. El espaciador puede ser ya alifático o polimérico y contiene diversos heteroátomos tales como O, N y S en lugar de carbonos. Átomos constituyentes de los espaciadores no requieren estar alineados linealmente. Por ejemplo, anillos aromáticos que carecen de átomos de hidrógeno extraíbles, como se define a continuación (pueden incluirse como parte del diseño espaciador en aquellos reactivos en donde el grupo reactivo latente funciona al iniciar la formación de enlace covalente mediante extracción de átomo de hidrógeno. En su forma precursora (es decir antes de conexión de un grupo fotorreactivo y ácido alifático) puede terminarse un espaciador con cualesquiera funcionalidades convenientes, tales como grupos hidroxilo, amino, carboxilo y sulfhidrilo, que son adecuados para uso en conectar un grupo fotorreactivo y el ácido alifático por una reacción química conveniente, por ejemplo química de acoplamiento convencional. En forma alterna, el espaciador puede formarse en el curso de combinar un precursor que contiene (o capaz de conectar) el grupo fotorreactivo con otro que contiene (o capaz de conectar) el ácido alifático. Por ejemplo, el ácido alifático puede reaccionarse con una diamina alifática para dar un derivado de amina alifática del ácido alifático bifuncional y que puede acoplarse con un ácido carboxílico que contiene el fotogrupo. Para aquellos con destreza en la especialidad, será evidente que el foto grupo puede conectarse a cualquier grupo termoquímico apropiado que reaccionará con cualquier nucleófilo apropiado que contiene 0, N o S. Ejemplos de grupos espaciadores convenientes incluyen, pero no están limitados a, los grupos que consisten de grupos alquileno, oxialquileno, cicloalquileno, arileno, oxiarileno o aralquileno substituidos o sin substituir y que tiene amidas, éteres y carbonatos como grupos funcionales de enlace con el grupo fotoactivable y el ácido graso alifático bifuncional. El espaciador de la invención también puede comprender un polímero que sirve como una estructura principal. La estructura principal del polímero ya puede ser de origen sintético o natural y de preferencia es un polímero sintético seleccionado del grupo que consiste de oligómeros, homopolímeros, y copolímeros que resultan de polimerización de condensación o adición. Polímeros de origen natural tales como polisacáridos, pueden emplearse por igual. Estructuras principales preferidas son biológicamente inertes, ya que no proporcionan una función biológica que es inconsistente con o nociva a, su uso en la forma descrita. Estas estructuras principales poliméricas pueden incluir acrílicos, tales como aquellos polimerizados a partir de hidroxietil acrilato, hidroetil metacrilato, gliceril acrilato, gliceril metacrilato, ácido acrílico, ácido metacrílico, acrilamida y me acrilamina; vinilos tales como polilauirilpirrolidona y alcohol polilvinilico; nylons tales como policaprolactoma; derivados de po 1 i 1 aui 1 ac ama , pol ihexami e 1 ena 1 domida y polihexametilendodecandiamida y poliuretanos; poliéteres tales como polietilenóxido, polipropilenóxido y polibutilenóxido; y polímeros biodegradables tales como ácido polilactico, ácido poliglicolico, polidioxanona, polianhidridos y poliortoéteres . La estructura principal polimérica se elige para proporcionar una estructura principal capaz de contener uno o más grupos fotorreactivos y uno o más grupos funcionales de ácido graso. La estructura principal polimérica también se selecciona para proporcionar un espaciador entre la superficie y los diversos grupos fotorreactivos y grupos funcionales de ácido graso. De esta manera, el reactivo puede ligarse a una superficie o a una molécula reactiva adyacente, para proporcionar los grupos funcionales de ácido graso con suficiente libertad de movimiento para demostrar actividad óptima. Las estructuras principales poliméricas de preferencia son solubles en agua, con poliacrilamida y polivinilpirrolidona que son polímeros particularmente preferidos. Grupo Fotorreactivo En una modalidad preferida, uno o más grupos fotorreactivos se proporcionan por los grupos X conectados al radical espaciador Y central . Al exponer a una fuente de luz conveniente, cada uno de los grupos fotorreactivos se somete a activación. El término "grupo fotorreactivo" como aquí se emplea, se refiere a un grupo químico que responde a una fuente de energía externa aplicada a fin de someterse a una generación de especie activa, resultando en unión covalente con una estructura química adyacente (por ejemplo un enlace carbono-hidrógeno alifático) . Grupos X preferidos son suficientemente estables para almacenarse bajo condiciones en las que retienen estas propiedades. Ver por ejemplo la Patente de los E.U.A. No. 5,002,582, la descripción de la cual aquí se incorpora por referencia. Grupos reactivos latentes pueden seleccionarse que sean responsivos a diversas porciones del espectro electromagnético, con aquellos que responden a porciones ultravioleta y visible del espectro (aquí referidos como "fotorreactivos") que se prefieren particularmente. Se prefieren arilcetonas fotorreactivas tales como acetofenona, benzofenona, antraquinona, antrona y heterociclos tipo antrona (es decir análogos heterocíclicos de antrona tales como aquellos que tienen N, O o S en la posición 10) o sus derivados substituidos (por ejemplo substituidos de anillo) . Los grupos funcionales de estas cetonas se prefieren ya que son fácilmente capaces de someterse al ciclo de activación/inactivación/reactivación aquí descrito. La benzofenona es un grupo fotorreactivo particularmente preferido, ya que es capaz de filtración fotoquímica con la formación inicial de un estado de singluete excitado que se somete a cruce intersistema al estado de triplete. El estado triplete excitado puede insertarse en los enlaces carbono - hidrógeno por extracción del átomo de hidrógeno (por ejemplo de una superficie de soporte o molécula objetivo en la solución y en proximidad de unión con el agente) , de esta manera creando un par de radicales. Subsecuente colapso del par de radicales conduce a formación de un nuevo enlace de carbono-carbono . Si un enlace reactivo (por ejemplo carbonos - hidrógeno) no está disponible para unir, la excitación inducida por luz ultravioleta del grupo de acetofenonas es reversible y la molécula regresa a el nivel de energía de estado basal, al retirar la fuente de energía. Por lo tanto, arilcetonas fotorreactivas se prefieren particularmente. Las azidas constituyen una clase preferida de grupos reactivos latentes e incluyen aril azidas (C6R5N3) tales como fenil azida y particularmente 4-fluor-3-nitrogenilazida, azil azidas (CON3) tal como etil ácido formiato, fenil ácido formiato, sulfonil azidas (S02N3) tales como bencen sulfonil azida, y fosforil azidas (R0)_ PON3 tales como difenil fosforil azida y dietil fosforil azida. Compuestos diazo constituyen otra clase de grupos fotorreactivos e incluyen diazoalcanos (-CHN2) tal como diazo metano y difenil dizo metano, diazo cetonas (-CO-CHN2), tales como diazo acetofenona y 1-trifluorometil-l-diazopentanona, diazoacetatos (-CO-CN2-CO-0-) tales como t-butil-alfa-diazoaceto acetato.

Otros grupos fotorreactivos incluyen compuestos azo alifáticos tales como azo-bisisobutironitrilo, diazirinas (-CHN2) tal como 3-trifluorometil-3-fenildiazilina y cetenos (-CH=C=0) tal como ceteno y difenilceteno. Al activar los grupos fotorreactivos, las moléculas de adhesión de revestimiento, se ligan covalentemente entre sí y/o a la superficie de material por enlaces covalentes a través de residuos de los grupos fotorreactivos. Grupos fotorreactivos ejemplares y sus residuos ante activación, se ilustran como sigue. Grupo Fotorreactivo Funcionalidad Residual Arilazidas Amina R-N-H-R' Azilazidas Amida R-CO-NH-R' Grupo Fotorreactivo Funcionalidad Residual Azidoformeatos Carbamato R-0-CO-NH-R' Sulfonilazidas Sulfonamida R-S02-NH-R' Fosforil azidas Fosforamida (RO)2PO-NH-R' Diazoalcanos Nuevo enlace C-C Diazoce onas Nuevo enlace C-C y cetona Dizoacetatos Nuevo enlace C-C y éster Betacetoalfadizoacetatos Nuevo enlace C-C y beta acetoéster Azo alifático Nuevo enlace C-C Diazirinas Nuevo enlace C-C Diazilinas Nuevo enlace C-C Ceteños Nuevo enlace C-C Cetonas fotoactivadas Nuevo enlace C-C y alcohol Preparación de reactivos Reactivos de la presente invención pueden prepararse por cualquier medio conveniente, dependiendo de la selección ya sea de un reactivo de heterobifuncional o un reactivo polimérico. En el caso de reactivos heterobifuncionales, el residuo de ácido graso se proporciona por un ácido graso que tiene un grupo químicamente reactivo en la cadena alquilo lo que permite acoplamiento covalente del resto de la molécula heterobifuncional al ácido graso con preservación de la funcionalidad de ácido carboxílico. De preferencia, el sitio del grupo reactivo está en proximidad inmediata con el grupo de ácido carboxílico para minimizar efectos en la actividad de unión de la cadena alquilo hidrofóbica. Más preferiblemente, el residuo de ácido graso puede proporcionarse por un compuesto tal como anhídrido N-tetradecilsuccínico (TDSA) . Reacción de esta molécula con una segunda molécula que posee una especie nucleofílíca, tal como una amina primaria, resulta en abertura del anillo anhídrido para dar un ácido graso con un enlace amida al resto de la molécula. Esta reacción genera un par de regioisómeros dependiendo de la dirección de la abertura de anillo anhídrido. La segunda molécula en esta reacción puede proporcionarse por un grupo espaciador, con o si un grupo fotoactivable, que posee un grupo capaz de reacción con el compuesto de ácido graso. Más preferiblemente, este grupo espaciador posee una amina que es altamente reactiva con una especie anhídrido. El grupo espaciador típicamente es una molécula bifuncional que puede tener el grupo fotoactivable conectado antes de reacción con el derivado de ácido graso o en el roden inverso de reacción puede emplearse. El espaciador bifuncional puede ya ser heterobifuncional u homobinfuncional , con el primero que requiere una reactividad diferencial en la primera y segunda etapas de reacción, y el último que requiere un método deficiente para separar el espaciador monofuncionalizado siguiendo la primer reacción. Opcionalmente, no se requiere espaciador y un grupo fotoactivable que posee funcionalidad capaz de reacción con el derivado de ácido graso, puede ser empleado. Los ejemplos anteriores no son limitantes y los métodos para lograr esta reacción de acoplamiento son aparentes para aquellos con destreza en la especialidad. Reactivos poliméricos de la invención pueden prepararse al derivatizar polímeros preformados que poseen grupos reactivos sobre la estructura principal del polímero capaz de reacción con los grupos fotoactivables y los derivados de ácido graso. Por ejemplo, poliacrilamida, polivinilpirrolidona o siloxanos funcionalizados con grupos amina sobre la estructura principal, con o sin un grupo espaciador, pueden reaccionarse con cloruro de 4-benzoilbenzoilo (BBA-C1) y TDSA para proporcionar los ligandos de ácido graso y fotoactivables, respectivamente. En forma alterna, uno de estos grupos de ácido graso y fotoactivables pueden prepararse en la forma de monómeros polimerizables que pueden luego copolimerizarse por si mismos y otros monómeros para proporcionar polímeros de la invención. En una modalidad adicional de la invención, los grupos fotoactivables puede introducirse en la forma de un agente de transferencia de cadena junto con el monómero de ácido graso y otros comonómeros a fin de proporcionar un polímero que tiene el grupo fotoactivable en el extremo de la cadena de polímeros. Por ejemplo, un agente de transferencia de cadena que posee dos benzofenonas derivatizadas como los grupos fotoactivables y un mercaptano como el agente de transferencia de cadena, puede crearse para coopolimerizar su monómero de ácido graso y acrilamida o monómeros de N-vinilpirrolidona, para proporcionar los polímeros de la invención. En forma alterna, ese polímero puede prepararse con grupos reactivos sobre la estructura principal, seguido por reacción con un derivado de ácido graso. Superficies y métodos de conexión El reactivo de la presente invención puede utilizarse para modificar cualquier superficie conveniente. Cuando el grupo reactivo latente es un grupo fotorreactivo del tipo preferido, se prefiere particularmente que la superficie proporcione átomos de hidrógeno extraibles adecuados para unión covalente con el grupo activado. Plásticos tales como poliolefinas, poliestirenos, pol i (me t i 1 ) me t acr i lat os , pol i acr i 1 oni t r i 1 os , poli (vinilacetatos) , poli (vinilalcoholes) , polímeros que contienen cloro tales como cloruro de poli (vinilo) , polioximetilenos, policarbonatos, poliamidas, poliimidas, poliuretanos, fenólicos, resinas amino epoxi, poliésteres siliconas, plásticos basados en celulosa y plásticos tipo hule, todos pueden emplearse con soportes, proporcionando superficies que pueden ser modificadas como aquí se describe. Ver en general "Plastics" (Plásticos) , páginas 462-464, en Concise Encyclopedia of Polymer Science and Enaineering , (Enciclopedia Concisa de Ciencia e Ingeniería) Kroschwitz, ed. , John Wiley and Sons, 1990, la descripción de la cual aquí se incorpora por referencia. Además, soportes tales como aquellos formados de carbón pirolítico y superficies sililadas de vidrio, cerámica o metal, son adecuados para modificación de superficie. Cualquier técnica conveniente puede emplearse para unión de reactivo a una superficie, y estas técnicas pueden seleccionarse y optimizarse por cada material, proceso o dispositivo. El reactivo puede aplicarse exitosamente para limpiar superficies de material como se enlistó anteriormente por rocío, inmersión o rendimiento con cepillo de una solución del reactivo de unión de ácido graso. La superficie puede secarse al aire antes de iluminación o la superficie puede iluminarse mientras que se sumerge en la solución de revestimiento. El grupo fotorreactivo se energiza mediante un estímulo estero (por ejemplo exposición a una fuente de luz conveniente) para formar, por generación de espacio activo libre, un enlace covalente entre el reactivo y ya sea otra molécula de reactivo polibifuncional o la superficie de biomaterial.

Este método de revestimiento aquí se denomina el "método de revestimiento de una etapa", ya que la química de acoplamiento fotorreactivo conecta un polímero de la invención a una superficie de biomaterial y no se requieren etapas subsecuentes para agregar el grupo bioactivo. El estímulo externo que se emplea convenientemente es radiación electromagnética, y de preferencia es radiación en las regiones ultravioleta visible o infrarroja del espectro electromagnético. El método de "dos etapas" involucrará una primer etapa de fotoacoplamiento de una estructura principal de hidrocarburo a la superficie, seguido por una segunda etapa de conexión (por ejemplo termoquímicamente) de uno o más derivados de ácido graso a la estructura principal inmovilizada. Por ejemplo, este enfoque de dos etapas puede involucrar el conectar de manera covalente una estructura principal de hidrocarburo fotorreactiva que contiene nucleófilos que pueden emplearse para acoplar en forma termoquímica, derivados de ácido graso a la superficie, o conectar directamente grupos termoquímicos (por ejemplo aminas) a la superficie, seguido por conexión termoquímica de uno o más derivados de ácido graso. En forma alterna, grupos químicamente reactivos pueden introducirse en la superficie por una variedad de métodos no fotoquímicos, seguido por acoplamiento químico del grupo de ácido graso a la superficie modificada. Por ejemplo, grupos de amina pueden introducir en una superficie por tratamiento con plasma con una mezcla de metano y amoníaco y las aminas resultantes luego pueden alcanzarse con TDSA, para acoplar químicamente el derivado de ácido graso con la superficie a través de un enlace amida. Cuando se desea, pueden emplearse otros enfoques para modificación de superficie utilizando el reactivo de la presente invención. Este enfoque es particularmente útil en aquellas situaciones en donde un soporte es difícil de modificar utilizando química convencional, o para situaciones que requieren durabilidad y estabilidad excepcionales de la molécula objetivo en la superficie. Ejemplos La invención se describirá adicionalmente con referencia a los siguientes ejemplos no limitantes que incorporan^ la siguiente tabla de fórmulas. Será aparente para aquellos con destreza en la especialidad que muchos cambios pueden realizarse en las modalidades descritas sin apartarse del alcance de la presente invención. De esta manera, el alcance de la presente invención no habrá de limitarse a las modalidades descritas en esta solicitud, sino solo por modalidades descritas por el lenguaje de las reivindicaciones y los equivalentes de aquellas modalidades. A menos que de otra forma se indique, todos los porcentajes se dan en peso.

Fórmula Comp . Notación /Ej . 1/1 Cloruro de 4 -benzoil benzoilo 2/2 4-bromo metil benzo fenona 3/3 Poli (etilen glicol) 200 mono-4- benzoil benciléter 4/4 Poli (etilen glicol) 200 mono-4- benzoil benciléter- monometan sulfonato Fórmula Comp. Notación /Ej. 5/5 Monoamino poli (etilen glicol) 200 mono-4-benzoil benciléter 6/6 Mono -2- (carboxi metil) hexadecan amido-poli (etilen glicol) 200 mono-4-benzoil benciléter 7/6 Mono-3- carboxi hepta cadecan amidopoli (etilen glicol) 200 mono-4- benzoil benciléter Fórmula Comp . Notación /Ej. 8/7 Mono-2 (carboxi metil) hexadecan amido- tetra (etilen glicol) mono-4-benzoilbe nciléter 9/7 Mono-3 (carboxi heptadecan amidotetra) (etilen glicol) mono-4- benzoil benciléter hexadecanamida 11/8 N[2 (4-benzoil ) (carboxi) hexadecan amida Fórmula Comp . Notación /Ej. 12/9 N[12 (benzoil benciloxi) dodecil] -2- (carboximetil) hexadecanamida 13/9 N[12 (benzoil benciloxi) dodecil] -3- (carboximetil) hexadecanamida 14/10 N[3 (4-benzoil benzamido) propil] -2- (carboxi metil) hexadecan amida 15/10 N[3 (4-benzoil benzamido) propil] -3- (carboxi) hexadecanamida Fórmula Comp . Notación /Ej . 16/11 N- (3 -benzoil fenil) -2- (carboximetil ) hexadecanamida 17/11 N- (3 -benzoil fenil) -3- (carboxi) hexadecanamida 18/12 N- (4-benzoil fenil) -2- (carboxifenil ) hexadecanamida 19/12 N- (4-benzoil fenil) -3- (carboxi) hexadecanamida 20/13 Monohexadecan amido-poli- (etilenglicol) 200 - mono-4-benzoil benciléster Fórmula Comp . Notación /Ej . 21/14 Mono- 3 -carboxi propan amido-poli- (etilenglicol) 200 - mono-4-benzoil benciléster 22/15 Hexadecil 4 - bencil éter 23/16 Poli (etilen glicol) 200 Monohexa- decil Mono-4- benzoil- bencil éter Fórmula Comp . Notación /Ei . 24/17 Poli (etilen o pentadecil Mono-4 - benzoil- bencil éter amido poli (etilen glicol) 200 Mono-4- benzoil- bencil éter decil Mono-4- benzoil- bencil éter Fórmula Comp. Notación /Ei . 26/19 N- [3-Meta- pro hexadecan amida heptadecan amida a Fórmula Comp . Notación /EJ. 29/21 N- (2- Fórmula 9e ¿e P o tp Formula Notación Compuesto/Ei emplo Copolímero fotorreactivo 34/26 de siloxano que contiene ligandos de ácido graso .

Ejemplo 1 Preparación de cloruro de 4-benzoilbenzoilo (BBA-Cl) (compuesto I) Ácido 4-Benzoilbenzoico (BBA) , 1.0 kg (4.42 moles) , se agrega a un matraz Morton de 5 litros de capacidad, seco equipado con condensador de reflujo y agitador superior, seguido por la adición de 645 ml (8.84 moles) de cloruro de tionilo y 725 ml de tolueno. Dimetil formamida, 3.5 ml (DMF) , luego se agrega y la mezcla se calienta a reflujo por 4 horas. Después de enfriar, los solventes se retiran bajo presión reducida y el cloruro de tionilo residual se retira por tres evaporación utilizando 3 x 500 ml de tolueno. El producto se repite lista a partir de tolueno/hexano (1/4) para dar 988 g (91% rendimiento) (después de secado en un horno al vacío) .

Punto de fusión de producto fue 92-94°C. . Análisis de resonancia magnética nuclear (RMN) a 80 Mhz fue consistente con el producto deseado. El compuesto final se almacena para utilizar en la preparación de compuestos fotoactivables como se describe por ejemplo en los Ejemplos y 20. Ejemplo 2 Preparación de 4-Bromometilbenzofenona (BMBP) (compuesto 4-Metilbenzofenona, 750 g (3.82 moles), se agrega a un matraz Morton de 5 litros equipado con un agitador superior y disueltos en 2850 ml de benceno. La solución luego se calienta a reflujo, seguido por adición por gotas de 610 g (3.82 moles) de bromo en benceno, 330 ml . La velocidad de adición fue de aproximadamente 1.5 ml/min y el matraz se iluminó con una lámpara de halógeno de 90 watts (90 joules/segundo para iniciar la reacción. Un cronómetro se empleó con la lámpara para proporcionar un ciclo de servicio de 10% (5 segundos encendido, 40 segundos apagado) seguido en una hora por un ciclo de servicio al 20% (10 segundos encendido, 40 segundos apagado) . Al final de la adición, el producto se analiza por cromatografía de gas y se encuentra que contiene 71% de la 4-bromometil benzofenona deseada, 8% de producto dibromo, y 20% de la 4-bromometil benzofenona sin reaccionar. Después de enfriar, la mezcla de reacción se lava con 10 g de bisulfito de sodio en 100 ml de agua, seguido por lavado con 3 x 200 ml de agua. El productos se seca sobre sulfato de sodio y recristaliza dos veces a partir de tolueno/hexano (1/3 en volumen (v/v)) dos veces. Después de secar al vacío, 635 g de BMBP se aislan, proporcionando un rendimiento de 60% y que tiene un punto de fusión de 112 -114 °C. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. El producto final se almacena para uso en la preparación de compuestos fotoactivables, como se describe por ejemplo en los Ejemplos 3, 7, 8, 9, 15 y 16. Ejemplo 3 Preparación de Poli (etilen glicoI?nn Mono-4-benzoilbencil éter (compuesto 3) . El poli (etilen glicol) 200 (PEG), 72.72 g (0.363 mol) se azeotropó con 200 ml de tolueno por dos horas para retirar humedad, seguido por remoción de tolueno en exceso al vacío. El residuo PEG luego se disuelve en 400 ml de tetrahidrofurano anhidro (mientras que se agita bajo argón a 4°C) . Hidruro de sodio, 2.90 g de una mezcla al 60% en aceite mineral (72.5 mmoles) se agrega en porciones y la mezcla se agita a una hora a temperatura ambiente. BMBP, 20.0 g (72.7 mmoles), preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 2, se agrega como una solución en 100 ml de THF durante un periodo de dos horas y la mezcla se agita 16 horas a temperatura ambiente bajo argón. La reacción se neutraliza con cloruro de amonio acuoso (36 g en 200 ml de agua) y el solvente orgánico se retira al vacío. El residuo se disuelve en salmuera, extrae con cloroformo y los extractos orgánicos resultantes se secan sobre el sulfato de sodio. El producto se aisla como un aceite viscoso al agregar la solución de cloroformo a dietiléter, resultando en precipitación del producto deseado. El producto se emplea sin purificación adicional. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. Ejemplo 4 Preparación de Poli (etilen glicol) 200 Mono-4-benzoilbenzil éter monometansulfonato (compuesto 4) El compuesto 3,3.0 g (7.61 mmoles), preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 3, se disuelve en 3 , se disuelve en 25 ml de cloruro de metileno, seguido por la adición de 1.5 g (14.8 mmoles) de trietilamina (TEA) . La mezcla se enfría en un baño de hielo bajo argón y 1.3 g (11.3 mmoles) de cloruro de metansulfonilo (MsCl) se agregan lentamente durante un periodo de 10 minutos. La temperatura de reacción se dejó que elevara a la temperatura ambiente durante la noche. Las sales precipitadas se retiraron por filtración y el solvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en tolueno y filtró para retirar los residuos sólidos, seguido por evaporación al vacío para dar 3.01 g de producto. No se realizó mayor purificación al producto en este punto. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. Ej emplo 5 Preparación de Monoaminopoli (etilen qlicol) - nn mono-4- benzoil bencil éter (Compuesto 5) El compuesto 4, 17.97 g (38.07 mmoles), preparado de acuerdo con el método general descrito en el ejemplo 4, se disuelve en 100 ml de THF anhidro en un tubo de pared gruesa, seguido por adición de 100 ml de hidróxido de amonio concentrado. El tubo se selló y la mezcla de dos fases se agitó vigorosamente a 65 °C por 16 horas. El solvente se retiró al vacío y el residuo resultante se disolvió en cloroformo. El producto se cargó en una columna de cromatografía instantánea de gel de sílice y eluyó con cloroformo/acetona/ácido acético (60/40/1 v/v) hasta que todas las impurezas menos polares se retiraron. El producto luego se diluyó con cloroformo/metanol/ácido acético/agua (85/15/1/1 v/v) . Las fracciones que fueron positivas a UV, ninhidrina y Dragendorff se reunieron y el solvente se retiró al vacío para dar 8.63 g de producto. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. Ejemplo 6 Preparación de Mono-2- (carboximetil) hexadecanamidopoli (etilen crlicol) ,nf, benzoilbenzil éter (Compuesto 6) v Mono-3- carboxiheptadecanamidopoli (etilen crlicol) ,,- Mono-4- benzoilbenzil éter (compuesto 7) El compuesto 5, 3.03 g (7.71 mmoles), preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 5 y TEA, 2.24 g (22.1 mmoles), se disolvieron en 30 ml cloruro de metileno, seguido por adición de 2.40 g (8.10 mmol) de TDSA como el sólido. La mezcla de reacción se agitó a 18 horas a temperatura ambiente bajo argón. Los solventes se retiraron al vacío y el aceite resultante se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando un gradiente de solvente: 500 ml de eter/hexano (75/25/v/v) ; 500 ml de éter/hexano/ácido acético (75/25/1 v/v) ; cloroformo/acetona/ácido acético (60/40/1 v/v) ; y cloroformo/metanol/ácido acético/agua (85/15/1/1 v/v) . Las fracciones se recolectaron para dar dos materiales positivos separados a UV y Dragendorff , que representan los regioisómeros que resultan de abertura de anillo del anillo anhídrido. Evaporación de solvente dio 1.35 g de producto en una fracción y 0.893 g en la segunda. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con los productos deseados. Ejemplo 7 Preparación de Mono-2- (carboximetil) exadecanamidotetra (etilen glicol) mono-4- benzoilbenzil éter (Compuesto 8) y mono-3- carboxihentadecanamidotetra (etilen glicol) Mono-6- benzoilbenzil éter (Compuesto 9) El tetraetilen glicol (TEG), 7.063 g (36.4 mmoles) , se azeotropó con 200 ml de tolueno por dos horas para retirar humedad, seguido por remoción del tolueno en exceso al vacío. El residuo TEG luego se disolvió en 70 ml de THF anhidro, mientras que se agita bajo argón en un baño de hielo. Hidruro de sodio 1.45 g de una mezcla al 60% en aceite mineral 1(36.3 mmoles), se agrega y la mezcla se agita por una hora a temperatura ambiente, BMBP, 5.0 g (18.2 mmoles), preparados de acuerdo con el método general descrito en el ejemplo 2, se agregan y la mezcla se agita a 16 horas a temperatura ambiente bajo argón. La reacción se neutraliza con cloruro de amonio acuoso (9 g en 40 ml de agua) y el solvente orgánico se retira al vacío. El residuo se disuelve en salmuera saturada, extrae con cloroformo y los extractos orgánicos resultantes se aplicaron sobre sulfato de sodio. El producto se aisla como un aceite viscoso al agregar la solución de cloroformo a dietiléter. El producto crudo 7.6 g, se utiliza sin adicional purificación. Todo el producto anterior se disolvió en 200 ml de cloruro de métileno, seguido por la adición de 3.96 g (39.1 mmoles) de TEA. La mezcla se enfrió a 4°C bajo argón y 3.35 g (29.2 mmoles) de MsCl se agregan. Después de 6 horas, 1 ml adicional, de cada uno de TEA y MsCl se agregó y la mezcla se dejó que agitara por 16 horas asegurar reacción completa. Las sales precipitadas se retiraron por filtración y el solvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en tolueno y filtró para retirar sólidos, seguido por evaporación al vacío. No se efectuó en este punto mayor purificación del producto. Todo el producto mesilato anterior se disolvió en 50 ml de THF en un tubo de vidrio de pared gruesa, seguido por la adición de 50 ml de hidróxido de amonio concentrado. El tubo se selló y la mezcla de dos fases se agitó vigorosamente a 65 °C por 16 horas. El solvente se retiró al vacío y el residuo resultante se disolvió en 20 ml de cloroformo. Después de secar sobre sulfato de sodio, el producto se precipitó por adición de la solución de cloroformo en dietil éter resultando en aproximadamente 4.5 g de un aceite viscoso café. Una porción del producto, aproximadamente 1 g, se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice, utilizando un gradiente de solvente de éter/hexano/ácido acético (75/25/1 v/v) , seguido por cloroformo/acetona/ácido acético (60/40/1 v/v) , y cloroformo/etanol/agua/ácido acético (85/15/1/1 v/v) . Un total de 220 mg de producto purificado se aisló. Análisis en un espectrómetro de RMN fué consistente con el producto deseado. El producto amina anterior, 0.220 g (0.568 mmoles) y TEA 63 mg (0.623 mmoles), se disolvieron en 20 ml de cloruro de metileno seguido por adición de 0.185 g (0.625 mmoles) de TDSA. La mezcla de reacción se agitó por 48 horas a temperatura ambiente bajo argón. Los solvente se retiraron al vacío y el aceite resultante se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando cloroformo/metanol/agua/ácido acético (85/15/1/1 v/v) . Las fracciones apropiadas se reunieron, evaporaron, redisolvieron en . cloroformo y secaron sobre el sulfato de sodio. Evaporación de solvente dio 234 mg de un sólido ceroso con una mezcla de regioisómeros resultando de abertura del anillo anhídrido. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con los productos deseados. Ejemplo 8 Preparación de N- \2 - (4-Benzoilbenziloxi) etill -2-carboxi- etil) hexadecanamida (Compuesto 10) y N-F2-(4- Benzoilbenzoiloxi) etill -3 -carboxi -heptadecanamida (Compuesto 11) Etanolamina anhídrida, 1.00 g (16.4 mmoles), se disuelve en 5 ml de THF anhidro con agitación bajo argón. Hidruro de sodio 0.655 g (16.4 mmoles) de una dispersión en el aceite mineral al 60%, se agrega como un sólido seguido por 5 ml adicionales de THF anhidro. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente por 45 minutos, en cuyo tiempo no se observó más desprendimiento de hidrógeno . El BMBP, 4.50 g (16.4 mmoles), preparado de acuerdo con el método general descrito en ejemplo 2, se agrega como una solución en 25 ml de THF durante un periodo de 30 minutos.

La reacción se • dejó que agitara durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se neutralizó con agua y el producto se extrajo con cloroformo. El extracto orgánico se lavó con HCl 0.1 N y la solución acuosa se lavó una vez con cloroformo. La fase acuosa luego se evaporó al vacío, disolvió en 10% de metanol en cloroformo (v/v) y secó sobre el sulfato de sodio. Evaporación de solvente dio 2.62 g de un sólido amarillo pálido que se empleó sin adicional purificación. La anterior amina, 0.625 g (2.14 mmoles), y TDSA, 0.467 g (1.57 mmoles), se disolvieron en 10 ml de cloruro de metileno, seguido por adición de 660 pl (4.74 mmoles) de TEA. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente por 16 horas para completar la reacción. El producto se diluyó con agua y trató con HCl, al 5% seguido por separación de la capa orgánica y secado sobre sulfato de sodio. El solvente se retiró al vacío y el producto se purificó utilizando cromatografía instantánea en gel de sílice con un gradiente de solvente a cloroformo seguido por 2.5% y 5 % (v/v) de metanol en cloroformo. Las fracciones apropiadas se reunieron para dar 357 mg del producto con un par de regioisómeros que resultan de la abertura del anillo anhídrido. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con los productos deseados.

. • Ejemplo 9 Preparación de N- T12- (Benzoilbenziloxi) dodecill -2- fcarboximetil) hexadecanamida (Compuesto 12) y N-T12- Benzoilbenziloxi) dodecill -3-carboxiheptadecanamida (Compuesto 13) 1, 12-Dodecandíol, 5.0 g (24.7 mmoles), se disuelve en 50 ml de THF anhidro en un matraz seco bajo nitrógeno. El hidruro de sodio, 0.494 g de una dispersión al 60% en aceite mineral (12.4 mmoles), se agrega en porciones durante un periodo de cinco minutos. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente por una hora.

BMBP, 3.40 g (12.4 mmoles), preparado de acuerdo con el método general descrito en el ejemplo 2, se agrega como un sólido junto con yoduro de sodio (0.185 g, 1.23 mmoles) y bromuro de tetra-n-butilamonio (0.398 g, 1.23 mmoles) . La mezcla se agitó a un reflujo suave por 24 horas. La reacción luego se enfrió, neutralizó con agua, acidificó con HCl al 5% y extrajo con cloroformo. Los extractos orgánicos se secaron sobre el sulfato de sodio y el solvente residual vacío. El producto se purificó en una columna de cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando cloroformo para eluir impurezas no polares, seguido por elución del producto con cloroformo/acetato de etilo (80/20 v/v) . La reunión de las fracciones apropiadas y evaporación de solvente dio 3.42 g de producto, un rendimiento de 70%. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. El alcohol anterior, 1.30 g (3.28 mmoles), se disuelve en 13 ml de cloruro de metileno anhidro, seguido por 0.829 g (8.19 mmoles) de TEA y enfriamiento en un baño de hielo bajo argón. MsCl, 0.563 g (4.91 mmoles), se agrega por gotas durante un periodo de 5 minutos, seguido por agitación a temperatura ambiente por 16 horas. La reacción se diluyó con agua, acidificó con HCl al 5% y extrajo con cloroformo. Los extractos orgánicos se secaron sobre el sulfato de sodio y evaporaron para dar 1.56 g de un aceite amarillo. Este producto se empleó sin mayor purificación. Análisis en un espectrómetro de RMN fue consistente con el producto deseado. El mesilato anterior, 1.56 g (3.28 mmoles), se disuelve en 25 ml de THF en un tubo de pared gruesa seguido por la adición de 25 ml de hidróxido de amonio. El tubo se selló y la mezcla se agitó vigorosamente por 72 horas a 80 °C. La mezcla se trató con 200 ml de agua y el producto se extrajo con cloroformo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio y el producto se purificó en una columna de cromatografía instantánea en gel de sílice.

La columna se diluyó con cloroformo y cloroformo/metanol (95/5 v/v) hasta que las impurezas menos polares se retiraron, seguidos por elución del producto deseado utilizando cloroformo/metanol/hidróxido de amonio (70/25/5 v/v) . La reunión de las fracciones de ninhidrina y activa de UV y la evaporación del solvente dio 0.526 g de producto, un rendimiento de 40%. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. La amina anterior 0.440 g (1.11 mmoles), se disolvió en 7 ml de cloruro de metileno seguido por 0.329 g (1.11 mmoles) de TDSA y 0.337 g (3.33 mmoles) de TEA. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por 36 horas. La reacción luego se diluyó con agua, se acidificó con HCl al 5% y, extrajo con cloroformo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio y el residuo después de evaporación se purificó en cromatografía instantánea en gel de sílice. Un gradiente de solvente de cloroformo, 2.5% de metanol en cloroformo (v/v), y 5% de metanol en cloroformo (v/v) se utiliza para eluir el producto. Un total de 378 mg de producto se aislaron como un par de regioisómeros parcialmente resuelto que resulta de abertura del anillo anhídrido. Análisis en un espectrómetro de, RMN fue consistente con los productos deseados . Ejemplo 10 Preparación de N- f3- (4-Benzoilbenzamido) propill -2- (carboximetil) hexadecanamida (Compuesto 14) y N-F3-(4- Benzoilbenzamido) propill -3 -carboxiheptadecanamida (Compuesto 15) 1, 3-Diaminopropano, 1.910 kg (25.77 moles), se coloca en un matraz Morton de 12 litros de capacidad y diluyen con 1000 ml de cloruro de metileno. Después de enfriar por debajo de 10°C en un baño de hielo, una solución de 1.005 kg (5.175 moles) de t-butil fenil carbonato en 250 ml cloruro de metileno se agrega lentamente a la diamina mientras que mantiene la temperatura por debajo de 15°C en todo tiempo. Una vez que se completa la adición, la mezcla se calienta a temperatura ambiente por 2 horas para completar la reacción. La reacción se diluye adicionalmente con 900 ml de cloruro de metileno, seguido por adición de 500 g de hielo y lenta adición de 2500 ml de 2.2 N NaOH. La capa orgánica se separa y la solución acuosa básica se extrae con 3 x 1250 ml de cloruro de metileno, manteniendo cada extracto separado. Cada uno de estos extractos separados se lavó sucesivamente con 1250 ml de 0.6 N NaOH, empezando con el primer extracto y procediendo al último. Este procedimiento de lavado se repite y los extractos orgánicos se combinan y secan sobre sulfato de sodio. Evaporación de solvente generó 825 g de producto con un rendimiento de 92%. Este producto se empleó sin mayor purificación adicional. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado.

La amina anterior, 0.774 g (4.44 mmoles), se diluye con 20 ml de cloruro de metileno anhidro, seguido por adición de l'.24 g (12.3 mmoles) de TEA y una adición por gotas de 10 ml de cloruro de metileno anhidro que contiene 1.0 g (4.09 n-mmoles) de BBA-C1, preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 1. Después de agitación por 1.5 horas a la temperatura ambiente, la reacción se diluye con agua y acidifica con HCl. 1 N. El producto se extrae con cloroformo y los extractos orgánicos se secan sobre sulfato de sodio. Cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando cloroformo/metan?l (90/10 v/v) dio 1.68 g de producto, ligeramente mayor que el teórico debido a residuos de solvente. Análisis espectral de masa confirmó el producto deseado. El producto anterior, 1.5 g (3.95 mmoles), se disuelve en 10 ml de ácido trifluoroacético bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitar 3 horas a temperatura ambiente para retirar el grupo protector t-butiloxicarbonilo (t-BOC) , el solvente se retiró bajo presión reducida y el producto se purificó utilizando cromatografía instantánea de gel de sílice. Después de retirar las impurezas menos polares con cloroformo/metanol (90/10 v/v) , el solvente de elusión se conmuta a cloroformo/metanol/hidróxido de amonio (70/25/5 v/v) para aislamiento del producto deseado. La recolección de las fracciones apropiadas y evaporación de solvente dio 1.77 g de producto. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. Una porción del producto de amina anterior, 0.500 g (1.77 mmoles), se disuelve en 10 ml de cloruro de metileno anhidro bajo una atmósfera de argón. TEA, 0.197 g (1.95 mmoles), se agrega seguido por 0.577 g (1,95 mmoles) de TDSA. La reacción se agita por 4 horas a temperatura ambiente. La mezcla se diluye con agua, extrae con cloruro de metileno y los extractos orgánicos se secan sobre sulfato de. sodio. Después de remoción al vacío de solventes, el producto se purifica por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando un sistema de cloroformo/metanol/ácido acético/agua (85/15/1/1 v/v) . Una cromatografía repetida utilizando un sistema 0?5% de metanol en cloroformo (v/v) , El sistema dio un producto más puro. Un total de 0.259 g de producto (25% rendimiento) se aisla como un par de regioisómeros que resultan de abertura del anillo anhídrido. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con los productos deseados . Ejemplo 11 Preparación de N- (3-Benzoilfenil) -2- (carboximetil ¡hexadecanamida (Compuesto 16) y N-(3- Benzoilfenil) -3 -carboxiheptadecanamida (Compuesto 17) La 3-aminobenzofenona, 0.500 g (2.53 mmoles), se disuelve en 5.0 • ml de DMF seco junto con 0.512 g (5.06 mmoles) de TEA y 0.030 g (0.25 mmol) de 4-dimetilaminopiridina. Mientras que se agita bajo argón 0.826 g (2.79 mmoles) de TDSA agrega y la solución resultante se agita a 45°C durante la noche. La reacción se diluye con agua y el producto deseado se extrae con cloroformo. Después de secar sobre sulfato de sodio, el solvente se retira y el producto se purifica en cromatografía instantánea en gel de sílice. Las impurezas menos polares se - eluyeron con un gradiente de 2.5?5.0. de metanol en cloroformo (v/v) . Un total de 1.048 g de producto se aislaron con resolución parcial de los dos regioisómeros resultando de la abertura de del sistema de anillo anhídrido. Análisis en un espectrómetro de MNR fue consistente con los productos deseados. Ejemplo 12 Preparación de N- (4-Benzoilfenil) 2- (carboximetil) hexadecanamida compuesto 18) y N- (4- Benzoilfenil) -3 -carboxiheptadecanamida (Compuesto 19) La 4-aminobenzofenona, 0.500 g (2.53 mmoles), se disuelve en 7.0 ml de DMF seco junto con 0.512 g (5.06 mmoles) de TEA y 0.030 g (0.25 mmol) de 4-dimetilaminopiridina. Mientras que se agita bajo argón, 0.826 g (2.79 mmoles) de TDSA se agregan y la solución resultante se agita a 55°C por 80 horas. En este punto, la cromatografía de capa delgada (TLC = Thin Layer Chromatography) , reveló conversión parcial a un producto activo de V menos polar. La reacción se diluyó con agua y el producto deseado se extrajo con cloroformo. Después de secar sobre sulfato de sodio, el solvente retira y el producto se purifica en cromatografía instantánea del gel de sílice. Las impurezas menos polares se eluyeron con cloroformo y el producto se eluye con un gradiente 2.5?5.0% de metanol en cloroformo (v/v) . Un total de 0.753 g de producto se aislaron con una resolución parcial de los dos regioisómeros resultantes de la abertura del sistema de anillo anhídrido. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con los productos deseados. Ejemplo 13 Preparación de Monohexadecanamidopoli (etilen crlicol),nn Mono-4-benzoilbencil éter (Compuesto 20) El compuesto 5,0.914 g (2.32 mmoles), preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 5, se disuelve en 10 ml de cloroformo anhidro con agitación bajo argón. TEA, 0.516 g (5.10 mmoles), se agrega seguido por la lenta adición por gotas de 0.701 g (2.55 mmoles) de cloruro de palmitoilo. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se diluye con agua y el producto se extrae con cloroformo. Después de secar sobre sulfato de sodio, el solvente se retira al vacío y el producto se purifica por cromatografía de gel de sílice'. Un solvente de cloroformo/metanol/ (95/5) se utiliza para eluir el producto, dando 382 mg de un aceite viscoso. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. Ejemplo 14 Preparación de Mono-3-Carboxipropanamidopoli (etilen glicol) Mono-4-benzoilbenzil Éter (Compuesto 21) Compuesto 5,0.500 g (1.27 mmoles) preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 5 se disuelve en 5 ml de cloroformo anhidro junto con 0.14 g (1.40 mmoles) de anhídrido succínico. Después de completar la solución, 0.141 g (1.39 y 20 mmoles) de TEA se agregan con agitación bajo argón. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente por 24 horas. El solvente luego se retira al vacío y el producto se purifica en una columna de cromatografía instantánea en gel de sílice, utilizando un solvente de cloroformo seguido por un gradiente de solvente de cloroformo/metanol (95/5 a 90/10 v/v) . La recolección de fracciones apropiadas y evaporación de solvente dio 447 mg de un aceite viscoso. El análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. Ejemplo 15 Preparación de Hexadecil 4-Benzoilbencil éter (Compuesto 22) 1-Hexadecanol, 5.0 g (20.6 mmoles), se disuelve en 10 ml de THF anhidro con calentamiento, seguido por lenta adición 0.840 g (21 .0 mmoles) de una dispersión al 60% de NaH en aceite mineral. Una vez que se completó el desprendimiento de hidrógeno, se agregaron 6.35 g (23.1 mmoles) de BMBP preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 2. La mezcla de reacción se agitó a 50 °C bajo argón por una hora y luego a temperatura ambiente por 16 horas. Después de este tiempo, la reacción se neutralizó con agua y el producto se extrajo con cloroformo. Después de secar sobre el sulfato de sodio, el solvente retiró al vacío y el residuo se purificó por cromatografía instantánea de gel de sílice utilizando un solvente hexano/éter (90/10) . Fracciones apropiadas se recolectaron y evaporaron para dar 8.01 g de un sólido ceroso, un rendimiento de 88.9%. Análisis en un espectrómetro de RMN fue consistente con el producto deseado. Ejemplo 16 Preparación de Poli (etilen crlicol) onn Monohexadecil Mono- 4-benzoilbenzil éter (Compuesto 23) El compuesto 3, 1.00 g (2.54 mmoles), preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 3 se disuelve en 10 ml de THF anhidro bajo atmósfera de argón. Hidruro de sodio, 0.112 g (2.80 mmoles) de una dispersión al 60% en aceite mineral se agrega en porciones mientras que se agita en un baño de hielo. La mezcla se deja que agite a 20 minutos a temperatura ambiente, seguido por la adición de 0.776 g (2.54 mmoles) de 1-bromohexadecano . La mezcla se agita durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se neutraliza con agua y el producto se extrae con cloroformo. Después de secar sobre sulfato de sodio y retirar el solvente, el producto se purifica por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando un solvente de cloroformo/metanol/ácido acético/agua (1850 5/1/1 v/v) como eluyente. Las fracciones apropiadas se recolectaron para dar 1.357 g del producto, un rendimiento de 86%. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. Ejemplo 17 carboxioentadecil Mono-4-benzoilbenzil éter (Compuesto 24) Ácido O-Hidroxihexadecanoico 0.785 g (2.88 mmoles) , se disuelve en 20 ml de DMF anhidro en un matraz seco bajo argón. Hidruro de sodio, 0.260 g (6.5 mmoles) de una dispersión al 60% en aceite mineral luego se agrega y el fango resultante se agita a 60 °C por cuatro horas. Después de este tiempo, el compuesto 4, 1.24 g (2.62 mmoles) preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 4, se agrega como una solución en 7 ml de DMF. El fango resultante se agita a temperatura ambiente por 72 horas. Después de este tiempo, la reacción se neutraliza con agua y el producto se extrae con cloroformo. Después de secar sobre sulfato de sodio, el producto se purifica en una columna de cromatografía instantánea en gel de sílice. La columna se eluye con cloroformo/metanol (95/5 v/v) hasta que las impurezas menos polares se retiraron, seguidos por elusión del producto con cloroformo/metanol/ácido acético/agua (90/10/1/1 v/v) . Las fracciones apropiadas se recolectaron y evaporaron para dar 1.24 g de producto, un rendimiento de 74%. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. Ejemplo 18 Preparación de Mono-15-carboxipentadecan amidonoli (etilen glicol) ?nn Mono-4-benzoilbenzil Éter (Compuesto 25) Ácido hexadecanedioico 0.500 g (1.75 mmoles), se disuelve en 5 ml de DMF anhidro con agitación bajo atmósfera de argón. N-Hidroxisuccinimida, 0.442 g (3.84 mmoles) y diciciohexilcarbodiimida, 1.44 g (6.98 mmoles), se agregaron y la mezcla se agitó por seis horas a temperatura ambiente. El sólido resultante se retira por filtración y la torta filtro se lava con 1 ml de DMF. La solución luego se reacciona con 0.747 g (1.90 mmoles) del compuesto 5, preparada de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 5, disuelto en 5 ml de DMF y 0.389 g (3.84 mmoles) de TEA. Después de agitar dos horas a temperatura ambiente, TLC mostró consumo completo de la amina de partida. El producto se purificó en una columna de cromatografía instantánea en gel de sílice al eluir impurezas menos polares utilizando cloroformo y elusión del producto deseado utilizando un solvente de cloroformo/metanol/ácido acético/agua (85/15/1/1 v/v) . Las fracciones apropiadas se recolectaron y evaporaron para dar 1.356 g de producto. Análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado. • ' Ejemplo 19 Preparación de N-3 -Metacrilamida) ropil -2 - (carboximetil) hexadecanamida (Compuesto 26) y N-Í3- Methacrilamida) ropill -3 -carboxiheptadecanamida (Compuesto 27) Hidrocloruro de N- (3 -Aminopropil) metacrilamida (APMA-HC1) , 6.064 (33.9 mmoles), se disuelve en cloruro de metileno anhidro junto con 10.24 g (101 mmoles) de TEA.

TDSA, 10.0 g (33.7 mmoles), se agregó inmediatamente y la mezcla se agitó '48 horas a temperatura ambiente con protección de humedad de un tubo de secado . Después de este tiempo, la reacción se acidificó con HCl 1 N, y extrajo con cloroformo y secó sobre el sulfato de sodio. El producto se purificó en una columna de cromatografía de gel de sílice utilizando un solvente cloroformo/metanol/ácido acético/agua (85/15/1/1 v/v) . Las fracciones apropiadas se recolectaron, 100 ppm de fenotiazina se agregaron y el solvente se retiró bajo presión reducida para dar 16.0 g de producto como un par de regioisómeros resultantes de la abertura del anillo anhídrido. El análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con los productos deseados. Ejemplo 20 Preparación de N- ¡3 - (4-Benzoilbenzamido) propill metacrilamida (BBA-APMA) (Compuesto 28) APMA-HC1, 120.0 g (0.672 mol), se suspende en 800 ml de cloroformo junto con 25 mg de fenotiazina. La solución se enfrió por debajo de 10 °C, seguido por la adición de 172.5 g (0.705 mmol) de BBA-C1, preparada de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 1. Una solución de 150.3 g (1.49 moles) de TEA en 50 ml de cloroformo se prepara y la solución se agrega por gotas en la suspensión anterior durante un periodo de tiempo de 1-1.5 hrs, mientras que se agita en un baño de hielo. Después de terminar la adición, el baño de hielo se retira y la solución se agita por 2.5 horas para completar la V reacción. La mezcla luego se lava con 600 ml de HCl 0.3 N seguido por 2 x 300 ml de HCl 0.07 N. La solución de cloroformo luego se secó sobre sulfato de sodio y el producto se recristalizó dos veces utilizando una mezcla de tolueno/cloroformo (40 v/v) . Fenotiazina, 25 mg, se agrega antes de la segunda recristalización para evitar polimerización prematura. El rendimiento fue 212 g (90% de rendimiento) con un punto de fusión de 147-151°C. El análisis en un espectrómetro de RMN fue consistente con el producto deseado . Ejemplo 21 Preparación de N- (2-Mercaptoetil) -3.5-bis (4- benzoilbenziloxi) benzamida (Compuesto 29) Un reactivo de transferencia de cadena fotoactivable, se prepara en la siguiente forma y dirige en la forma descrita en los Ejemplos 22 y 24. Ácido 3,5-dihidroxibenzoico 46.2 g (0.30 moles) , se pesó en un matraz de 250 ml equipado con un extractor Soxhiet y condensador. Metanol, 48.6 ml , y ácido sulfúrico concentrado, 0.8 ml, se agregan al matraz y 48 g de tamices moleculares 3A se colocaron en el extractor Soxhiet . El extractor se diluyó con metanol y la mezcla se calienta al reflujo durante la noche. Análisis cromatográfico de gases en el producto resultante mostró una conversión de 98% al metil éster deseado. El solvente se retiró bajo presión reducida para dar aproximadamente 59 g de producto crudo. Este producto se utilizó en la siguiente etapa sin mayor purificación. Una pequeña muestra se purificó para análisis RMN, resultando en un espectro consistente con el producto deseado. Todo el producto metil éster anterior se coloca en un matraz de' dos litros con agitador superior y condensador seguido por adición de 173.25 g (0.63 mol) de BMBP, preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 2, 207 g (1.50 mol) de carbonato de potasio y 1200 ml de acetona. La mezcla resultante luego se refluja durante la noche para dar reacción completa como se indica por TLC. Los sólidos se retiraron por filtración y la acetona se evapora bajo presión reducida para dar 49 g de producto crudo. Los sólidos se diluyeron con un litro de agua y extrajeron con 25, 3 x 1 litro de cloroformo. Los extractos se combinaron con la fracción soluble en acetona y secaron sobre sulfato de sodio, dando 177 g de producto crudo. El producto se recristalizó de acetonitrilo para dar 150.2 g de un sólido blanco, un rendimiento de 90% para las primeras dos etapas. El punto de fusión del producto fue 13 1.5"C @SC) y el análisis en un espectrómetro de RMN fue consistente con el producto deseado. El metil 3 , 5-bis (4-benzoilbenziloxi) benzoato, 60.05 g (0.108 mol), se coloca en un matraz de dos litros seguido por la adición de 120 ml de agua, 480 ml de metanol, y 6.48 g (0.162 mol) de hidróxido de sodio. La mezcla se calienta al reflujo por tres horas para completar la hidrólisis del éster. Después de enfriar, el metanol se retira bajo presión reducida y la sal de sodio del ácido se disuelve en 2400 ml de agua caliente. El ácido se precipitó utilizando ácido clorhídrico concentrado, filtra, lava con agua y seca en un horno al vacío para dar 58.2 g de un sólido blanco (99% rendimiento) . El punto de fusión del producto fue 188.3 °C (DSC) y el análisis en une espectrómetro de RMN fue consistente con el producto deseado . El ácido 3 , 5-bis (4-benzoilbenziloxi) benzoico 20.0 g (36.86 mmoles) , se agregó a un matraz de 250 ml , seguido por 36 ml de tolueno, 5.4 ml (74.0 mmoles) de cloruro de tionilo y 28 µl de DMF. La mezcla se refluja por cuatro horas para formar el cloruro de ácido. Después de enfriar, el solvente y cloruro de tionilo en exceso se retira a una presión reducida. Cloruro de tionilo residual se retira por cuatro evaporaciones adicionales utilizando 20 ml de cloroformo por cada una. El material crudo se recristaliza de tolueno para dar 18.45 g de producto, con un rendimiento de 89%. El punto de fusión de producto fue de 126.9 °C (DSC) y análisis em un espectrómetro de RNM fue consistente con el producto deseado.

El hidrocloruro de 2-aminoetantiol, 4.19 g (36.7 mmoles) , se agrega a un matraz de 250 ml equipado con un agitador superior, seguido por 15 ml de cloroformo y 10.64 ml (76.5 mmoles) de TEA. Después de enfriar la solución de amina en un baño de hielo, una solución de cloruro 3, 5-bis (4-benzoilbenziloxi) benzoilo, 18.4 g (32.8 mmoles), en 50 ml de cloroformo se agrega por gotas durante un periodo de 50 minutos. El enfriamiento en hielo se continua a 30 minutos, seguido por calentamiento a temperatura ambiente por dos horas. El producto se diluye con 150 ml de cloroformo y lava con 5 x 250 ml de ácido clorhídrico 0.1 N. El producto se seca sobre el sulfato de sodio y recristaliza dos veces de tolueno/hexano (15/1 v/v) para dar 13.3 g de producto, con un rendimiento de 67%. El punto de fusión en el producto fue 115.9"C (DSC) y el análisis en un espectrómetro RMN fue consistente con el producto deseado . Ejemplo 22 Preparación de un copolimero de punta de extremo fotoreactivo de acrilamida v monomeros de ácido graso (compuesto (30) . Acrilamida 0.640 g (9.00 mmoles), se disuelve en 9 ml de THF, seguido por la adición de 0.299 g (0.68 mmoles) de los Compuestos 26 y 27, preparados de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 12, 0.060 g (0.10 mmoles) del Compuesto 29, preparados de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 21, 9 pl (0.060 mmoles) de N,N,N' ,N' -tetrametiletilendiamina (TEMED), y 0.049 g (0.30 mmoles) de 2 , 2 ' -azobisisobutironitrilo @IBN) . La solución se burbujea dos minutos con helio, dos minutos con argón y luego se sella y calienta durante la noche a 55 °C. La suspensión resultante se diluye con 5 ml de THF adicional y agrega a dietil éter, seguido por filtración para aislar el sólido. Después de secar en un horno al vacío, 0.966 g de un sólido blanco se aislaron. Análisis de polimero reveló 0.073 mmol de BBA por gramo de polimero. Ejemplo 23 Preparación de un copolimero aleatorio fotorreactivo de monómeros de ácido graso y acrilamida (compuesto 31) Acrilamida , 0.657 g (9.24 mmoles), se disuelve en 9 ml de THF, seguido por la adición de 0.307 g (0.70 mmoles) de los Compuestos 26 y 27, preparados de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 19, 0.036 g (0.10 mmol) del Compuesto 28, preparados de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 20, 9 pl (0.060 mmol) de TEMED, y 0.026 g (0.16 mmol) de AIBN. La solución se burbujea dos minutos con helio, dos minutos con argón y luego se sella y calienta durante la noche a 55 °C. La suspensión resultante se diluye con 5 ml de THF adicional y agrega a dietil éter, seguido por filtración para aislar el sólido. Después de secar en un horno al vacío, 0.997 g de un sólido blanco se aisla. El análisis del polimero reveló 0.086 nmlOl BBA por gramo de polimero. Ejemplo 24 Preparación de un copolimero de punta de extremo fotorreactivo de monómeros de ácido graso y N-Vinilpirrolidona (Compuestos 32A-C) N-Viniípirrolidona, 0.915 g (8.23 mmoles), se disuelven en 3 ml de THF, seguido por la adición de 0.271 g (0.618 mmoles) de los compuestos 26 y 27, preparados de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 19, 0.070 g (0.116 mmol) del compuesto 29, preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 21, 1 µl (0.01 mmol) de TEMED, y 0.057 g (0.347 mmol) de AIBN. Esta composición se diseña para producir TDSA al 7% en mol de los monómeros en la mezcla de reacción. La solución se burbujea dos minutos con helio, dos minutos con argón, y luego se sella y calienta durante la noche a 55 °C. El polímero se precipita por la adición de dietil éter, seguido por aislamiento con filtración. Después de secar en un horno al vacío, 10 g de un sólido blanco se aislaron. Análisis del compuesto 32A reveló 0.109 mmol de BBA por gramo de polimero. El procedimiento anterior fue seguido utilizando las siguientes cantidades de reactivos en 4 ml de THF: N-vinilpirrolidona, 0.433 g (3.90 mmoles); Compuestos 26 y 27, 0.507 g (1.16 mmoles) Compuesto 29, 0.060 g (0.10 mmol); TEMED, 3 pl (0.02 mmol); y AIBN, 0.049 g (0.298 mmol) . Esta composición se diseñó para producir TDSA 23 % en mol de los monómeros en una mezcla de reacción. Después de aislamiento siguiendo el procedimiento anterior, 0.808 g de un sólido blanco se aislaron. Análisis del compuesto 32B reveló 0.083, mmol de BBA por gramo de polimero •El procedimiento anterior fue seguido utilizando las siguientes cantidades de reactivos en 3 ml de THF: N-vinilpirrolidona, 0.181 g (1.63 mmoles); Compuestos 26 y 27, 0.759 g (1.73 mmoles); Compuesto 29, 0.060 g (0.10 mmol); TEMED, 1 µl (0.0125 mmol); y AIBN, 0.049 g (0.298 mmol) . Esta composición se diseñó para hacer TDSA 50 % en mol de los monómeros en la mezcla de reacción. Después de aislar siguiendo al procedimiento anterior 0.705 g de un solido blanco se, obtuvo. El análisis del compuesto 32C reveló 0.102 mmol de BBA por gramo de polímero. Ejemplo 25 Preparación de un copolímero aleatorio fotoreactivo de monómeros de ácido graso y N-Vinilpirrolidona (Compuestos 33A-D) N-Vinylpirrolidona, 0.749 g (6.74 mmoles), se disuelve en 8.8 ml de THF, seguido por adición de 0.224 g (0.511 mmol) de los Compuestos 26 y 27, preparados de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 19, 0..027 g (0.077 mmol) del Compuesto 28, preparados de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 20, 1 µKO.Ol mmol) de TEMED, y 0.019 g (0.116 mmol) de AIBN. Esta composición se diseña para producir TDSA a 7% en mol de los monómeros en la mezcla de reacción. La solución se burbujea dos minutos con helio, dos minutos con argón, y luego se selló y calentó durante la noche a 55 °C. El polímero se precipitó por adición del dietil éter, seguido por aislamiento con agitación. Después de secar en un horno al vacío, 0.353 g de un sólido blanco se aislaron. Análisis del compuesto A reveló 0.112 mmol de BBA por gramo de polímero. El procedimiento anterior se siguió utilizando las siguientes cantidades de reactivos en 3 ml de THF: N-vinilpirrolidona, 0.362 g (3.26 mmoles); Compuestos 26 y 27, 0.621 g (1.42 mmoles); Compuesto 28, 0.017 g (0.049 mmol); TEMED, l 'pl (0.01 mmol); y AIBN, 0.012 g (0.073 mmol) . Esta composición se diseña para producir TDSA 30 % en mol de los monómeros en la mezcla de reacción. Después de aislamiento siguiendo el procedimiento anterior, 0.770 g de un sólido blanco se aislaron. Análisis del compuesto 33B reveló 0.052 mmol de BBA por gramo de polímero. El procedimiento anterior se siguió utilizando las siguientes cantidades de reactivos en 3 ml THF: N-vinilpirrolidona, 0.196 g (1.76 mmoles); Compuestos 26 y 27, 0.791 g (1.80 mmoles); Compuesto 28, 0.013 g (0.037 mmol); TEMED, 1 pl(O.01 25 mmoles); y AIBN, 0.009 g (0.055 mmol) . Esta composición se diseña para producir TDSA al 50 % en mol de los monómeros en la mezcla de reacción. Después de aislamiento siguiendo el procedimiento anterior, 0.770 g de un sólido blanco se separaron. Análisis del compuesto 33C reveló 0.048 mmol de BBA por gramo de polímero. _ . Se siguió el procedimiento anterior utilizando las siguientes cantidades de reactivos en 7 ml de THF: N-vinilpirrolidona, 0.188 g (1.69 n-mol); Compuestos 26 y 27, 1.792 g (4.09 mmol); Compuesto 28, 0.020 g (0.057 mmol); TEMED, 1 µl (0.01 mmol); y AIBN, 0.014 g (0.085 mmol) . Esta composición se diseña para producir TDSA a 70 % en mol de los monómeros en la mezcla de reacción. Después de aislamiento siguiendo al procedimiento anterior, 0.879 g de un sólido blanco se separó. Análisis del compuesto 33D reveló 0.058 mmol de BBA por gramo de polímero Ejemplo 26 Preparación de un copolimero siloxano fotorreactivo que contiene ligandos de ácido graso (Compuesto 34 ) Un c op o l í me r o d e am i no p r o p i l metilsiloxano-dimetilsiloxano , 5 . 00 g de un contenido de monómero amina 6 a 7% en mol, se disuelve en 50 ml de cloruro de metileno seco seguido por la adición de 0.79 g (7.81 mmol) de TEA. BBA-C1, 0.19 g (0.78 mmol), preparado de acuerdo con el método general descrito en el Ejemplo 1, luego se agrega y la mezcla se agita por tres horas a temperatura ambiente. TDSA, 0.924 g (3.12 mmoles), luego se agrega en la solución y se agita a 24 horas a temperatura ambiente. La reacción luego se diluye con agua y el pH se ajusta a aproximadamente 6 utilizando HCl. 0.1 N. La capa orgánica se retira y seca con el sulfato de sodio. El solvente se retira bajo presión reducida y el aceite resultante se diluye con hexano. El precipitado se retira por filtración y evaporación del solvente dio 4.75 g de un aceite viscoso. Análisis del polímero revela 0.013 mmol de BBA por gramo del polímero. Ejemplo 27 Inmovilización de ácido graso en una superficie derivatizada de amina. Una superficie de polímero se derivatiza por tratamiento con plasma utilizando una mezcla 3/1 de gases metano y amoniaco (v/v) . (Ver., por ejemplo el método general descrito en la Patente de los E.U.A. 5,643,580). Una mezcla de metano (490 SCCM) y amoniaco (161 SCCM) se introduce en la cámara de plasma junto con la parte del polímero a revestir. Los gases se mantienen a una presión de 0.2-0.3 torr ' y una descarga luminiscente de 300-500 Watts se establece dentro de la cámara. La muestra se trata por un total de 3 a 5 minutos bajo estas condiciones. La formación de una superficie derivatizada de amina se verifica por análisis de superficie utilizando espectroscopia de electrones para, análisis químico (ESCA = Electron Spectroscopy for Chemical Analysis) y espectometría de masas de iones secundarios de tiempo de recorrido (TOF-SIMS = Time of Flight Secondary Ion Mass Spectrometry) . TDSA se disuelve a una concentración de 30 mg/ml en un solvente compatible tanto con el substrato de polímero como el anhídrido. TEA, 1.5 equivalentes respecto al anhídrido se agregan a la solución y la mezcla final se deja que incube con la superficie derivatizada de amina por 24 horas a temperatura ambiente para permitir acoplamiento máximo del ácido graso a la superficie. La superficie final luego se lava con un solvente fresco para retirar todos los materiales sin reaccionar y el lavado final es un lavado de ácido diluido para retirar cualquier TEA restante. Ejemplo 28 Modificación de superficie de substrato selecto con reactivos . Tres polímeros comúnmente empleados como biomateriales se modificaron en superficie con compuestos novedosos descritos anteriormente. Los substratos de polímero incluyen polietileno (PE) , cloruro de polivinilo (PVC) , y poliuretano (PU) . Estos polímeros se obtuvieron como hojas planas y emplearon como cuadrados de 1 x 1 cm, discos circulares de 1 cm o se obtienen en forma cilindricas (tubos o varillas) y utilizan como segmentos cortos. La forma y tamaño de la parte se elige con base en el ensayo particular a conducirse con el procesado revestidos. Soluciones de revestimiento se prepararon al disolver los reactivos a concentraciones en el rango de 1-1 5 mg/ml en isopropanol neto) o soluciones de agua desionizada/IPA. Los reactivos se aplicaron a los substratos de polímero utilizando métodos de revestimiento por inmersión. Se suspendieron partes verticalmente, sumergieron en la solución a 2 cm/seg, se dejó que residieran por 5 segundos y luego retiraron a una velocidad de 0.1 cm/seg. Después de retirar el substrato de la solución de revestimiento, se secó al aire hasta que el solvente no fue más sensible, a menudo en aproximadamente 1 minuto. El substrato con el revestimiento luego se suspende a la mitad entre dos lámparas de curado de UV Dymax opuestas, cada una adaptada con un bulbo Heraeus Q402Z4. A la distancia de colocación de las lámparas, las partes recibieron aproximadamente 1.5 mW/cm2 en el rango de longitud de onda' 330-340 nm. El subtrato se giró a 3 rpm durante los dos minutos de iluminación para asegurar que la superficie se bañó uniformemente en luz. Después de iluminación, las partes se retiraron de la cámara de lámpara y lavaron en IPA, utilizando dos lavados secuenciales de 30 -minutos en solvente fresco. Las muestras revestidas luego se almacenaron en la obscuridad a temperatura ambiente, hasta que se utilizaron. Ejemplo 29 Análisis de superficies de substratos de polímero modificados con compuestos 8. 9. 18. 19.32 y 33. Tres técnicas diferentes (manchado, ESCA, y TOF-SIMS) se emplearon para evaluar la superficie de substratos modificados para confirmar la presencia y uniformidad de los compuestos . Materiales planos de PE y PVC se modificaron con reactivos heterobifuncionales (Compuestos 8, 9, 18, 19) y reactivos polímericos (Compuestos 32 y 33, que tienen composiciones variantes de monómeros) . Se prepararon reactivos en IPA a 1.0 mg/ml y aplicaron utilizando los métodos descritos en el Ejemplo 28. Primero, los materiales revestidos se mancharon con azul = toluidina en un colorante de longitud de onda visible cargado positivamente. Se sumergieron muestras en una solución del colorante (0.02% p/v en agua) por 30 segundos, retiraron de la solución, y enjuagaron con agua DI. Este protocolo de manchado fue útil para identificar cualitativamente la presencia de cada uno de los reactivos en la superficie de material. Los resultados de unión de colorante sugirieron que los procedimientos de modificación de superficie fueron exitosos para inmovilizar los reactivos en las superficies del substrato. Hubo algo de variabilidad en la obscuridad de la mancha, tanto de diferentes reactivos en el mismo material como para los mismos reactivos en diferentes materiales. El manchado fue toscamente uniforme a simple vista sobre la superficies del material, sugiriendo que el reactivo no se estaba recolectando o segregando cuando se aplica a la superficie y que la cobertura de la superficie fue relativamente uniforme. Se empleó ESCA para analizar cualitativamente la composición química superficial de los substratos modificados. PE y PVC modificados con reactivos heterobifuncionales (Compuestos 8,9,18,19) y reactivos políméricos (Compuestos 32 y 33, que tienen composiciones molares variantes) se analizaron con un sistema Perkin Elmer Modelo 5400 ESCA utilizando rayos X Al monocromáticos con análisis a un ángulo de despegue de 65 grados. Los espectros de exploración se recolectaron para calcular las concentraciones atómicas en la superficie. Los resultados en las mediciones ESCA (Tablas 1 y 2) en los materiales modificados de superficie fueron útiles para indicar la presencia y composición química del revestimiento. Para el subtrato de PVC la concentración atómica del átomo de cloro (Cl) se utiliza para determinar si el revestimiento enmascaró el material de substrato. Al comparar las cantidades de Cl detectado en la superficie de PCV después de modificación, fue claro que el Cl se redujo enormemente en los substratos modificados de superficie. Junto con los resultados de la unión de colorante anteriormente descrita, esto sugiere que los reactivos cubren la superficie completamente, pero fueron suficientemente delgados para detectar el substrato subyacente. Para el substrato PE, que en el estado no revestido deberá tener una concentración atómica de 100 % de carbono (ya que ESCA no puede detectar átomos H) , las muestras modificada y no modificada simplemente pueden compararse utilizando la concentración de carbono. En todas las muestras modificadas, ia concentración de carbono se reduce en aproximadamente 20%. También fue evidente que estuvo presente nitrógeno en las superficies del PE y PVC modificado pero no en las superficies no revestidas. Esto fue indicativo de nitrógeno y cada uno de los reactivos. Finalmente, la similaridad de las concentraciones atómicas C, 0, y N en las superficies de las muestras PE y PVC modificadas con cada compuesto, soportan la presencia y lo completo del revestimiento. Tabla 1. Resumen de concentración atómica para muestras PE (% atómico) Tabla 2. Resumen de concentración atómica para muestras PVC (% atómico) TOF-SIMS se conduce para asegurar que los revestimientos se localizaron en la superficie más externa de los substratos. TOF-SIMS es sensible a la estructura química dentro de los 10Á exteriores de una superficie. TOF-SIMS se realiza por Physical Electronics (Edén Prairie, MN) utilizando un instrumento Physical Electronics número de modelo number 7200. Espectros de iones positivos y negativos se registraron para cada una de las superficies. Además, exploraciones de las superficies se emplearon para determinar la uniformidad de fragmentos químicos que fueron indicativos de los revestimientos (independientes de la química de substrato) . Las superficies (substratos y revestimientos) analizados por TOF-SIMS fueron las mismas que aquellas analizadas por ESCA descrito anteriormente. Para los substratos revestidos, los espectros TOF-SIMS fueron substancialmente diferentes de los espectros para el material PE o PVC sin revestir. Por ejemplo, hubo muchos fragmentos químicos que contienen nitrógeno que no están presentes en ninguno de los materiales base. Hubo muchos fragmentos de alto peso molecular en los espectros de iones positivos (entre 200 y 600 masa/unidades de carga) asociados con los reactivos heterobifuncionales (compuestos 8, 9 y 18, 19) . Los reactivos basados en polímero (compuestos 32, 33) tuvieron huellas de fragmentos repetidos regulares indicativas de la estructura principal del polímero. También confirmando que los reactivos estuvieron presentes en la superficies de los materiales, es el hecho que • los patrones de fragmentos para cada compuerta fueron similares en los dos diferentes substratos. Además, las exploraciones de la superficie para detectar la presencia de picos asociados en forma única con los reactivos de revestimiento indica que los reactivos fueron distribuidos en forma relativamente uniforme sobre de la superficie de substrato, confirmando adicionalmente los resultados de las pruebas de manchado azul O toluidina descritas previamente. Ejemplo 30 Adsorción de albúmina de suero humano (HSA) de - amortiguador y plasma. La adsorción de albúmina de suero humano (HSA) de solución de amortiguador de proteína simple, y de plasma pobre en plaquetas humano diluidos (PPP) sobre los materiales de polímero se cuantificó utilizando proteína radioetiquetada. HSA libre de ácido graso (Sigma Chemical, St. Louis MO) se radioetiquetó con 3H utilizando técnicas de borohidruro de sodio (Means and Feeney, Biochemistry 2,2 192 (1968)). Soluciones de amortiguadores de HSA se prepararon al disolver HSA sin etiquetar a una concentración de 0.1 mg/ml en Tris-Salino (TN) solución amortiguadora (50 mM Tris, 150 mM NaCl , pH 7.5). La solución resultante luego se intensificó con una alícuota de 3H-HSA, de manera tal que la actividad específica fue aproximadamente 1000 dpm/µg de HSA para la solución total.

Soluciones de plasma se prepararon utilizando PPP comercialmente disponible (George King Biomedical; Overland Park, KS) preparado a partir de sangre anticoagulada con citrato de sodio (3.8%) . Justo antes de un experimento de adsorción, el PPP se diluye 4:1 con salina amortiguado con fosfato (10 mM Fosfato, 150 mM NaCl, pH 7.4; PBS) y luego resaltó con el HSA radioetiquetado de manera tal que la actividad específica fue de aproximadamente de HSA en el plasma diluido. Experimentos de adsorción se realizaron en forma idéntica tanto para las soluciones de amortiguador como PPP que contienen 3H-HSA. Discos circulares (1 cm) PE y PVC modificados en superficie se colocaron en ampolletas de destelleo de 20 ml; discos sin revestir de los mismos materiales se utilizaron como controles. Las piezas se hidrataron en 2 ml de TN durante la noche a temperatura ambiente. El .día del experimento soluciones 3H-HSA (Amortiguador o PPP) se prepararon como se describió anteriormente. El amortiguador de hidratación se aspira de las muestras de polímero y 1.0 ml de solución HSA radioetiquetada, se agrega a la ampolleta. Las ampolletas se agitaron ligeramente en un agitador orbital por dos horas a temperatura ambiente. La solución de HSA se aspiró y 4 ml de solución TNT (50 mM Tris, 150 M NaCl , 0.05% 30 Tween20, pH 7.5) se agregó a cada ampolleta; las ampolletas se agitaron por , 15 minutos a temperatura ambiente. La etapa de lavado TNT se repite dos veces y los discos se transfirieron a ampolletas de destello en seco y limpia. 2 ml de pH se agregaron a cada ampolleta y las muestras se agitaron fuertemente en un agitador orbital durante la noche. A cada ampolleta, 10 ml de Hionic Fluor se agregaron y mezclaron completamente por torbellino. Las ampolletas se contaron utilizando un contador de destelleo líquido (Packard 1900 CA) . La concentración de superficie de HSA se calculó a partir de estos datos utilizando la actividad específica de la solución de adsorción HSA y el área superficial de los discos. PE y PVC se modificaron con compuestos heterobifuncionales y polímericos utilizando los mismos procedimientos que se describió en el Ejemplo 28. Los resultados de la unión de 3H-HSA de la solución de amortiguador TN sobre los materiales PE y PVC modificados y no revestidos, se ilustran en la Tabla 3. Tabla 3 : adsorción de HSA de amortiguador TN sobre superficies de PE y PVC modificadas.

Los resultados de la unión HSA de la solución amortiguadora indicaron que muchos de los reactivos políméricos ligaron HSA a niveles similares con superficies sin revestir, mientras que los compuestos heterobifuncionales mejoraron la unión en 2- a 3- veces frente a no revestidos. Ejemplo 31 Unión de HSA de plasma a PE modificado con los Compuestos 8, 9, 18, 19, 30, 32 y 33 Substratos planos de PE se modificaron con los compuestos 8, 9, 18, 19, 30, 31 y 33. Los compuestos 8, 9, 18, 19, 32, y 33 se preparan en IPA a una concentración de 1 mg/ml y el Compuesto 30 se preparó en IPA/agua (80/20 v/v) y los substratos se revistieron siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 28. La unión HSA de PPP se midió como se describe en el Ejemplo 30; la actividad específica fue 2,003 dpm/µg Tabla 4. Unión de HSA de PPP sobre PE Ejemplo 32 Unión HSA de plasma PVC modificado con los- compuestos 8, 9, 32 y 33 Substratos planos de PVC se modificaron con los compuestos 8, 9, 32, y 33. Los compuestos se prepararon en IPA a concentración de 1 mg/ml, y se aplicaron a los substratos siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 28. La unión HSA de PPP se mide como se describe en el Ejemplo 30; en este experimento la actividad específica fue 3,150 dpm/ug de HSA. Tabla 5 Unión HSA de PPP , sobre PVC Ejemplo 33 Unión de HSA de plasma a PE modificado con los Compuestos 14 , 15 Substratos planos de PE se modificaron con los Compuestos 14, 15. Los compuestos se prepararon en IPA a concentraciones en el rango de 1-10 mg/ml y aplicaron como un revestimiento o tres revestimientos, de otra forma siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 28. La unión de HSA de PPP se mide como se describe en el Ejemplo 30; actividad específica de HSA fue 5,636 dpm/µg en el experimento #1 y #2. Los resultados se ilustran en la Tabla 6. Tabla 6. Unión de HSA de PPP sobre PE modificado con los Compuestos 14, 15 *n.d. es no determinado Los resultados de este experimento indican que incrementar la concentración del reactivo aplicado produce superficies que deberán incrementar la unión de HSA de PPP. Además, incrementar el número de revestimientos de reactivo aplicado a la superficie produce incrementada unión de HSA de PPP. Ejemplo 34 Unión de HSA de plasma a PE modificado con Compuestos 10, 11 Substratos planos PE se modificaron con los Compuestos 10, 11. Los compuestos se prepararon en IPA a concentraciones en el rango de 1-15 mg/ml y aplicaron en tres revestimientos, de otra forma siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 28. Unión HSA de PPP se mide como se describe en el ejemplo 30; actividad específica de HSA en plasma fue 5,977 dpm/µg en el experimento #1 y 6,636 dpm/µg en el Experimento #2. Tabla 7. Unión HSA de PPP sobre PE modificado con los Compuestos 10, Los resultados de este experimento indican que incrementar la concentración del reactivo aplicado produce unión de HSA incrementada, aunque parece que como si la unión de HSA alcanza una meseta en donde a mayores incrementos en el reactivo aplicado de la superficie no proporcionan beneficio adicional . Esto puede indicar que la superficie se ha saturado con reactivo.

Ejemplo 35 Unión de HSA a PE modificado con los Compuestos 8 , 9 Substratos planos de PE se modificaron con los Compeustos 8, 9. Los compuestos se prepararon en IPA a concentraciones en el rango de 1-10 mg/ml y aplican como un revestimiento o tres revestimientos (capas) , de otra forma siguiendo ,el procedimiento que se describe en el Ejemplo 28. Unión de HSA de PPP se mide como se describe en el ejemplo 30; actividad específica en plasma fue 6,045 dpm/µg de HSA. Tabla 8. Unión de HSA de PPP sobre PE modificado con los Compuestos 8, 9.

Estos revestimientos .en PE y PVC mejoraron la unión de HSA del amortiguador y plasma tanto como 10 veces. Con algunos reactivos (10, 11, 14, 15 y 8, 9), el incrementar la concentración de la solución de revestimiento produce superficies con incrementada capacidad para ligar o unir HSA. Esta meseta ocurre cerca de 7.5 mg/ml para los reactivos 14, 15. Para los Compuestos 8, 9, 10, 11, esta meseta ocurrió cerca de 10 mg/ml . Ejemplo 36 Adsorción de Fibrinógeno (Fgn) de PPP sobre los Substratos Modificados Substratos de PE y PVC se modificaron con los Compuestos 8, 9, 18, 19, 32, y 33. Los compuestos se prepararon en IPA a una concentración de 1.0 mg/ml y aplicaron como un solo revestimiento, de otra forma siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 28. Adsorción de Fgn de plasma humano (PPP) sobre los materiales modificados en superficie y de control, se cuantifico al utilizar 3H-Fgn. Fgn fue radio-etiquetado con 3H utilizando técnicas de borohidruro de sodio (Means and Feeney, Biochemistry (Bioquímica) , 7, 2192 (1968) ) y almacenado congelado a -80 °C, hasta utilizarse. Soluciones de plasma de Fgn para experimentos de adsorción se prepararon utilizando PPP (George King Biomedical; Overland Park, KS) . El día del experimento de adsorción, PPP se diluye 4:1 con amortiguador TN. El PPP diluido luego se reforzado con una alícuota de la solución de material 3H-Fgn para dar una solución de trabajo con actividad específica de 1,816 dpm/µg de Fgn. Muestras de polímero (discos circulares de 1 cm) se colocaron en ampolletas de destelleo de 20 ml e hidrataron durante la noche en 2.0 ml de TN a temperatura ambiente antes de adsorción de proteína. El día del experimento, la solución amortiguadora se aspira y 1.0 ml de PPP diluido que contiene el 3H-Fgn se agrega para cubrir completamente la muestra de polímero. Los substratos se incubaron en la solución 3H-Fgn por 2 horas a 23 °C. La solución PPP se aspira y los substratos se lavan 3 veces con TNT (15 minutos cada vez) . Se colocaron discos en ampolletas de destelleo limpias, disolvieron con THF y contaron por radioactividad como se describe en el Ejemplo 30 para los , experimentos de adsorción de HSA. Concentraciones superficiales de Fgn se calcularon utilizando la actividad específica del Fgn en la solución y el área superficial de las masas de polímero. Los resultados experimentales de los experimentos de adsorción de fibrinógeno se ilustran en la Tabla 10. Tabla 10. Adsorción de Fgn en PE y PVC modificado con los compuestos 8, 9, 18, 19, 32 y 33 Con estos reactivos, la unión de Fgn a superficies modificadas fue igual a o menor que la adsorción a superficies no revestidas. Es posible que la unión mejorada de HSA fue responsable por unión reducida de Fgn. Superficies que reducen la unión de Fgn generalmente es menos probable que induzcan respuestas desfavorables subsecuentes de la sangre, tales como formación de fibrina y adhesión de plaquetas. Ejemplo 37 Unión de Anticuerpos Anti -HSA a PE Modificado Expuesto a HSA Se modificaron substratos PE con los Compuestos 8, 9, 18, 19, '30, 31, 32 y 33. Los compuestos se prepararon en IPA a una concentración de 1.0 mg/ml y aplicaron como un solo revestimiento, de otra forma siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 28. La unión de anticuerpos anti-HSA policlonales se realizó utilizando una técnica ELISA para determinar si albúmina ligada mantiene la estructura nativa en el estado absorbido. Anticuerpos anti- (HSA) de oveja conjugados con peroxidasa de rábano (HRP) se obtienen de Biodesign (Kennebunk, ME) . Muestras de polímero se hidrataron con TN por 2 horas, y la solución de proteína se prepara con una concentración de HSA de 1.0 mg/ml en TN. 1 ml de la solución de proteína se agrega a la muestra e incuba por 2 horas a temperatura ambiente. Después de la adsorción, la solución se aspira y las muestras se enjuagan con amortiguador TNT. 1 ml de BSA 1% se agrega como una etapa de bloqueo e incuba por 1 hora. Las muestras se lavaron dos veces con TNT por 30 minutos cada una. Después del lavado, las muestras se enjuagaron brevemente con TN e incubaron con oveja-Ab-HRP en TN (Diluido 1:2000), a temperatura ambiente por 1 hora con ligera agitación. Las muestras se lavaron 4 veces con 3 mis de TNT por ampolleta mediante torbellino. Los trozos se transfirieron a tubos de ensayo y 1 ml de TMB/solución de peróxido se agregaron.

El color se dejó que revelara por 15 minutos. La absorbancia de las soluciones se leyó a 655 nm utilizando un espectrofotómetro. La absorbancia es directamente proporcional a la concentración superficial de HRP y por lo tanto también proporcional a la concentración superficial de anticuerpo anti-HSA ligado a la superficie de substrato. Tabla 11. Resultados de unión de anticuerpo anti -albúmina a superficie expuesta de HSA Los resultados de la unión de anticuerpo anti-HSA a HSA previamente absorbido de amortiguador en los materiales sin revestir y modificado en superficie, indica que hubo poca diferencia entre los reactivos probados.

Todas las superficies ligan altas concentraciones de anticuerpo, aproximadamente 3 a 4 veces superior que las superficies no revestidas. Ejemplo 38 Conexión de Plaquetas y Activación de Plasma Rico en Plaquetas (PRP) en PE v PVC Modificados Los materiales modificados en superficies se incubaron con plasma rico en plaquetas (PRP) y luego examinaron con un microscopio electrónico de exploración (SEM= Scanning Electron Microscope) para determinar la influencia de la química superficial en conexión y activación de plaquetas. Se recolectó sangre fresca de voluntarios humanos, en citrato de sodio a 3.8% utilizando una proporción de 9:1 de sangre a anticoagulante. La sangre se centrifugó a 1200 rpm por 15 min. para separar PRP de la sangre. El PRP se recolecta y se mantiene a temperatura ambiente hasta que se utiliza (menos de 1 hora). Las muestras de prueba (6.45 cm2 (1 pulgada cuadrada)) se colocaron en una placa a 6 pozos, una muestra por pozo. Para cuántificar las plaquetas en el plasma, una muestra del PRP se toma y diluye 1:100 con oxalato de amonio al 1%. Un tubo capilar se emplea para transferir una pequeña cantidad de solución a un hemacitómetro y la mezcla se incuba en un plato petri cubierto por 30 minutos para que las plaquetas se sedimenten. Se contaron las plaquetas bajo un microscopio de contraste de fase y determinaron entre 1.4 - 4.4 x 1014 plaquetas/ml . La solución PRP se agrega sobre la parte superior de las muestras hasta que toda la superficie fue cubierta, y las muestras se incubaron una hora a temperatura ambiente sin agitación. Después de incubación, el PRP se retira cuidadosamente por aspiración y 3 ml de amortiguador Tyrode (138 M NaCl, 2.9 mM KCl, 12 mM bicarbonato de sodio, pH 7.4) se agregó suavemente a cada pozo. Las placas se agitaron ligeramente en un agitador orbital por 15 minutos; la solución se cambió y el lavado se repitió. La solución de lavado se aspiró y 2.0 ml de fijativo de Karnovsky (25 ml de formaldehído + 5 ml 25% glutaraldehído + 20 ml de una solución al 23% de NaH2P04-H20 + 77% de NaHP04 anhidro) se agregó a cada pozo. La placa fue envuelta con para-película e incubó durante la noche con ligera agitación. El fijador se aspiró y las muestras se lavaron tres veces cada una con agua pura, 15 minutos por cada lavado. Las muestras luego se deshidrataron .con una serie de etanol de 25, 50, 75, y 100%', por 15 minutos cada uno. Las muestras se mantuvieron a 4°C en 100% de etanol hasta montarse (hasta 4 días) . Se montaron las muestras y revistieron con Pd/Au y observaron utilizando un microscopio electrónico de exploración JEOL 840. Se tomaron fotos de áreas diferentes en la superficie de muestra a varias amplificaciones para dar una vista representativa . de cada muestra. Las plaquetas se cont.aron y juzgaron por el grado de activación utilizando descripciones morfológicas con base en Goodman y colaboradores, Scanning Electron Microscopy (Microscopía Electrónica de Exploración) /1984/I, 279-290 (1984) . Los resultados de SEM para dos experimentos de conexión de plaquetas representativos, se ilustran en las Tablas 12 y 13. De las fotografías SEM, densidades superficiales de plaquetas ligadas se estimaron. Las densidades mas bajas de plaquetas se encontraron en el polímero compuesto 33C consistentemente en ambos substratos. El polímero de Compuesto 32C también tuvo bajas densidades de plaquetas consistentemente. Las morfologías de plaquetas predominantes se resume.n en la Tabla 13. Plaquetas que fueron redondas o dendríticas se interpretaron menos activas; mientras que plaquetas que se separan o están totalmente dispersas y mostraron una agregación substancial, se interpretaron como más extensamente activadas. Para PE,, el substrato sin revestir tuvo las densidades más altas de plaquetas así como la morfología de plaquetas más completamente dispersas. Para PVC, la superficie sin revestir fue deficiente pero no la peor superficie. Tabla 12. Densidades de Plaquetas en superficies modificadas (plaquetas/cm2 x 10"6) .

Tabla 13. Morfología de plaquetas conectadas a superficies modificadas .

Los reactivos poliméricos se desempeñaron en forma óptima al reducir la conexión de plaquetas y activación en ' ambos substratos. Los reactivos heterobifuncionales 8 y 9 se desempeñaron similarmente al reactivo polimérico 32C. Los reactivos heterobifuncionales 18 y 19 fueron similares a o peores que el substrato no revestido dependiendo del substrato. Ejemplo 39 Implantes Agudos, de Vena Yugular de Perro, con Catéteres Modificados con los Compuestos 6, 7 Superficies modificadas con los Compuestos 6, 7 se probaron utilizando un modelo de implantes agudos de vena yugular de perro. Muestras de control y modificadas en superficies se implantaron por una hora en las venas yugulares externas de 15 perros de cruza mixta de 25 kg . La conexión de plaquetas autólogas, etiquetadas con ?In se verificaron espacial y cuantitativamente en tiempo real utilizando formación de imagen de cámara gamma. En cada experimento, el perro se anestesió con pentobarbital y sujetó en una posición supina. No se suministró anticoagulante a los animales antes de o durante los experimentos . Noventa ml de sangre se extrae en citrato/dextrosa (9:1 v/v) y las plaquetas se aislaron y etiquetaron con 1:L1In-oxina. Las plaquetas etiquetadas se reinfundieron en el perro y dejó que circularan por 20 minutos. En rápida sucesión, una varilla modificada con un derivado de ácido graso y una varilla de control sin revestir se implantaron bilateralmente en las venas yugulares externas izquierda y derecha. Al utilizar una varilla de control no revestido en cada experimento, se tomó en cuenta cualquier variabilidad en la respuesta de animales individuales a los materiales implantados . Inmediatamente después de inserción de las varillas, la región del cuello del perro se verificó continuamente por una hora con una cámara gamma digital Picker 4/15, para seguir en tiempo real la conexión de plaquetas sobre las varillas. La cámara gamma permitió tanto cuantificación digital como resolución espacial de las cuentas radiactivas. Los datos recolectados con la cámara se transfieren a una micro-computadora dedicada para calcular las velocidades de adhesión de plaquetas relativas en los materiales revestido y de control . Después de una hora de exploración, el animal se heparinizó sistemáticamente, para detener cualquier trombogenésis adicional, y sometió a eutanasia con una inyección intravenosa de KCl. Cada vena yugular se expone y abre longitudinalmente para revelar la varilla en sitio en la vena. Después de que las varillas se fotografían, se retiran y se desprende el tramo, liofiliza y pesa. Tabla 14.

Comparación de conexión de plaquetas en PU modificado con los Compuestos 6, 7.

La superficie PU revestida se desempeñó de manera significativamente mejor que la superficie no revestida, reduciendo la adhesión de plaquetas en esta prueba aguda de compatibilidad de sangre. Ejemplo 40 Implantes de Válvula Mitral de Oveja de Cinco Meses, Utilizando Válvulas de Corazón, de Hule Silicona _ Modificadas Válvulas cardíacas de hule de silicona (SR= Silicone Rubber) se modifican con los reactivos 14, 15. El reactivo se prepara a 5 mg/ml en IPA y aplica utilizando los procedimientos que se describen en el Ejemplo 28, en tres revestimientos a la superficie de las porciones SR de una válvula de tres hojas polimérica. Las válvulas se esterilizan utilizando óxido de etileno e implantan en la posición mitral en ovejas juveniles utilizando los procedimientos descritos previamente Irwin, E.D. y colaboradores L. Invest. Surg. 6 133-141 (1993) . Tres válvulas tratadas con los reactivos se implantan. Las válvulas se dejan en un sitio por aproximadamente 150 días. Al final del período de implante, las ovejas se sacrifican y los corazones se explantan. La válvula, incluyendo el tejido cardíaco circundante se retira y coloca en formalina amortiguada. Las válvulas se examinan visualmente y fotografían. La apariencia de las hojas de válvula explantadas deberán mejorarse por el revestimiento. Las válvulas revestidas deberán tener un mínimo trombo en la superficie de la hoja, mientras que las válvulas SR sin revestir tendrán substancial trombo que cubre la mayor parte de la superficie de la hoja. Además, el trombo presente en la superficie puede mineralizarse significativamente, sin resultado adicional detrimental que potencialmente recortará la vida útil de la válvula.

Claims (33)

1. REIVINDICACIONES 1. Un reactivo para utilizar en preparar una superficie de biomaterial pasivante, el reactivo se caracteriza porque comprende un grupo reactivo latente y un ácido alifático bifuncional, ambos grupos se conectan covalentemente a un espaciador, en una forma que permita que el grupo reactivo latente se active a fin de conectar el reactivo a la superficie, y que permita al ácido alifático del reactivo agregado atraer y ligar una porción proteinácea a fin de pasivar la superficie.
2. 2. Un reactivo de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el reactivo es de la fórmula general (X)ra-Y- (Z')n en donde X es un grupo reactivo latente, Y es un radical espaciador y Z es un ácido alifático bifuncional, en donde m y n independientemente son _> 1.
3. 3. Un reactivo de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque el ácido alifático bifuncional comprende una región aniónica en la forma de un ácido carboxílico.
4. 4. Un reactivo de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque el ácido alifático bifuncional comprende un ácido graso.
5. 5. Un reactivo de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la porción proteinácea comprende albúmina.
6. 6. Un reactivo de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el espaciador comprende un espaciador covalente a fin de proporcionar un reactivo hetero-bifuncionál .
7. 7. Un reactivo de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el espaciador comprende una estructura principal polimérica a fin de proporcionar un reactivo polimérico.
8. 8. Un reactivo de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizado porque la estructura principal polimérica se elige del grupo que consiste de estructuras principales poliméricas sintéticas seleccionadas del grupo que consiste de oligómeros, hómopolímeros y copolímeros que resultan de la polimerización por condensación o adición y polímeros de origen natural .
9. 9. Un reactivo de acuerdo con la reivindicación 8, caracterizado porque el reactivo se elige del grupo que consiste de copolímeros de poliacrilamida fotoactivables, polivinil pirrolidonas fotoactivables y polisiloxanos fotoactivables, cada uno que contiene múltiples grupos de ácido graso secundarios y múltiples grupos fotoactivables secundarios .
10. 10. Un reactivo de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el espaciador se elige del grupo que consiste de espaciadores alifáticos, espaciadores poliméricos, y heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de 0, N y S.
11. 11. Un reactivo para utilizar en preparar una superficie pasivadora, el reactivo se elige del grupo que consiste de mono-2- (carboximetil) hexadecanamidopoli (etilen glicol) 200 mono-4-benzoilbenzil éter, mono-3-carboxiheptadecanamidspoli (etilen glicol) 20C mono - 4 -benzoilbenzil éter, mono-2- (carboximetil) hexandecanamido-tetra (etilen glicol) mono-4 -benzoilbenzil éter, mono-3-carboxihepta-decanamidotetra (etilen glicol) mono-4-benzoilbenzil éter, N- [2- (4-benzoilbenziloxi) etil] -2- ( carboximetil ) hexadecanamida , N- [2 - ( 4 -benzoilbenziloxi) etil] -3 -carboxiheptadecanamida, N- [12- (benzoilbenziloxi) dodecil] -2- (carboximetil) hexadecanamida, N- [12- (benzoilbenziloxi) dodecil] -3-carboxi-heptadecanamida, N - [ 3 - ( 4 - b e n z o i l b e n z am i d o ) p r op i l ] - 2 - ( carboximet i l ) hexadenami da , N - [ 3 - ( 4 -benzoilbenzamida) propil] -3 -carboxiheptadecanamida, N- (3-benzoilf enil) -2- (carboximetil) hexadecanamida, N- (3-benzoilf enil) -3 -carboxiheptadecanamida, N- (4-benzoilfenil) - 2- (carboximetil) hexadecanamida, poli (etilen glicol) 200 mono-15-carboxipentadecil mono-4-benzoilbenzil éter, y mono-15-carboxipentan-decanamidopoli (etilen glicol) 200 mono- -benzoilbenzil éter.
12. 12. Un reactivo para utilizar en preparar una superficie pasivante, el reactivo se elige del grupo que consiste de: copolímeros de punto extremo fotorreactivos de monómeros de ácido graso de acrilamida de la fórmula: ? s? Copolímeros aleatorios fotorreactivos N-vinilpirrolidona y monómeros de ácido graso de la fórmula : en donde los monómeros mostrados en cada polímero están presentes en secuencias aleatorias y concentraciones relativas .
13. 13. Un .intermediario para utilizar en preparar un reactivo de acuerdo con la reivindicación 1, el intermediario se elige del grupo que consiste de N-[3-Metacrilamido) propil] -2- (carboximetil) exadecanamida, N- [3-Metacrilamido) propil] -3 -carboxiheptadecanamida N- [3- (4-Benzoilbenzamido) propil] metacrilamida y N- (2-Mercaptoetil) -3 , 5-bis (4-benzoilbenziloxi) benzamida.
14. 14. Un método para preparar una superficie de biomaterial pasivante, el método se caracteriza porque comprende las etapas de revestir una superficie de biomaterial con un reactivo de acuerdo con la reivindicación 1, y activar el o los grupos reactivos latentes bajo condiciones adecuadas para ligar covalentemente el reactivo con la superficie.
15. 15. Un método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el reactivo comprende un espaciador divalente a fin de proporcionar un reactivo heterobifuncional.
16. 16. .Un método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el espaciador comprende una estructura principal polimérica a fin de proporcionar un reactivo polimérico.
17. 17. Un método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el biomaterial se elige del grupo que consiste de poliolefinas, poliestirenos, poli (metil) metacrilatos, poliacrilonitrilos, poli (vinilacetatos) , poli (vinilalcoholes) , cloruros de poli (vinilo) , polioximetilenos, policarbonatos, poliamidas, poliimidas, poliuretanos, fenólicos, resinas amino epoxi, poliésteres, siliconas, plásticos basados en celulosa y plásticos tipo hule.
18. 18. Un método para preparar una superficie de biomaterial pasivante, el método se caracteriza porque comprende las etapas de: (a) proporcionar una superficie derivatizada con especies nucleofílicas, (b) reaccionar la superficie con una molécula reactiva bajo condiciones adecuadas para reaccionar la molécula reactiva con las especies nucleofílicas a fin de formar un ácido alifático bifuncional conectada a la superficie por un enlace covalente.
19. 19. Un método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque las especies nucleofílicas comprenden un grupo amina y la molécula reactiva comprende un grupo anhídrido adaptado para abrirse en la presencia de las especies nucleofílicas y formar un enlace amida con él .
20. 20. Un método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la molécula reactiva comprende anhídrido n-tetradecilsuccínico.
21. 21. Un biomaterial pasivante que comprende una superficie de biomaterial que tiene conectado covalentemente uri reactivo de acuerdo con la reivindicación 1.
22. 22. Una superficie de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque el biomaterial se elige del grupo que consiste de poliolefinas, poliestirenos, poli (metil) metacrilatos, poliacrilonitrilos, poli (vinilacetatos) , poli ( vinil alcoholes), polímeros que contienen cloro tales como cloruro de poli (vinilo) , polioximetilenos, policarbonatos, poliamidas, poliimidas, poliuretanos, feriólicos, resinas amino epoxi, poliésteres, siliconas, plásticos basados en celulosa y plásticos tipo hule.
23. 23. Una superficie de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la superficie se coloca in vivo bajo condiciones adecuadas para permitir que se atraigan moléculas de albúmina y liguen a fin de pasivar a la superficie.
24. 24. Un artículo médico fabricado a partir de un biomaterial pasivante de conformidad con la reivindicación 21.
25. 25. Un artículo médico de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el artículo comprende un dispositivo médico que contacta con sangre para aplicación in vivo.
26. 26. Una superficie dé biomaterial pasivado que comprende una sup'erficie de la reivindicación 23, que tiene un material proteináceo ligado.
27. 27. Un biomaterial pasivante que comprende una superficie de biomaterial que tiene ligado covalentemente un reactivo de conformidad con la reivindicación 11.
28. 28. Una superficie de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el biomaterial se elige del grupo que consiste de poliolefinas, poliestirenos, poli (metil) metacrilatos, poliacrilonitrilos, • poli (vinilacetatós) , poli ( vinil alcoholes) , polímeros que contienen cloro tales como cloruro de poli (vinilo) , polioximetilenos, policarbonatos, poliamidas, poliimidas, poliuretanos, fenólicos, resinas amino epoxi, poliésteres, silíconas, plásticos basados en celulosa y plásticos tipo hule.
29. 29. Una superficie de conformidad con la reivindicación 27, caracterizada porque la superficie se coloca in vivo bajo condiciones adecuadas para permitir que moléculas de albúmina se atraigan y liguen a fin de pasivar la superficie.
30. 30. Un artículo médico fabricado a partir de un biomaterial pasivante de conformidad con la reivindicación 27.
31. 31. Un artículo médico de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado el artículo comprende un dispositivo médico que contacta con sangre para aplicación in vi vo .
32. 32. Una superficie de biomaterial pasivado que comprende la superficie de la reivindicación 29, que tiene un material proteináceo ligado. 33. Un biomaterial pasivante caracterizado porque comprende una superficie biomaterial que tiene ligado covalentemente un reactivo de conformidad con la reivindicación 12. 34. >Una superficie de conformidad con la reivindicación 33, caracterizada porque el biomaterial se elige del grupo que consiste de poliolefinas, poliestirenos, poli (metil) metacrilatos, poliacrilonitrilos, poli (vinilacetatos) , poli (vinil alcoholes), polímeros que contienen cloro tales como cloruro de poli (vinilo) , polioximetilenos, policarbonatos, poliamidas, poliimidas, poliuretanos, fenólicos, resinas amino epoxi, poliésteres, siliconas, plásticos basados en celulosa y plásticos tipo hule . 35. Una superficie de conformidad con la reivindicación 33, caracterizada porque la superficie se coloca in vivo bajo condiciones adecuadas para permitir que moléculas de albúmina se atraigan y liguen a fin de pasivar la superficie. 36. Un artículo médico fabricado a partir de un biomaterial pasivante de conformidad con la reivindicación
33. 33. 37. Un artículo médico de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado el artículo comprende un dispositivo médico que contacta con sangre para aplicación in vivo . 38. Una superficie de biomaterial pasivado que comprende una superficie de la reivindicación 35, que tiene un material proteináceo ligado 39. U 'biomaterial pasivante que comprende una superficie preparada de acuerdo con el método de la reivindicación 18. 40. Una superficie de conformidad con la reivindicación 39, caracterizada porque el biomaterial se elige del grupo que consiste de poliolefinas, poliestirenos, poli (metil) metacrilatos, poliacrilonitrilos, poli (vinilacetatos) , poli ( vinil alcoholes), polímeros que contienen cloro tales como cloruro de poli (vinilo) , polioximetilenos, 'policarbonatos, poliamidas, poliimidas, poliuretanos, fenólicos, resinas amino epoxi, poliésteres, siliconas, plásticos basados en celulosa y plásticos tipo hule. 41. Una superficie de biomaterial pasivado, que comprende una superficie de biomaterial que tiene ligado covalentemente un reactivo de conformidad con la reivindicación 39, la superficie se coloca in vivo bajo condiciones adecuadas para permitir que se atraigan moléculas de albúmina y liguen a fin de pasivar la superficie . 42. Un artículo médico fabricado a partir de un biomaterial pasivante de conformidad con la reivindicación 39. 43. Un artículo médico de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado el artículo comprende un dispositivo médico que contacta sangre, para aplicación in vivo. 44. Una superficie de biomaterial pasivado que comprende una superficie de la reivindicación 41, que tiene un material proteináceo ligado.