MXPA00009116A

MXPA00009116A - Biodisponibilidad incrementada de luteina y zeaxantina en humanos y aves de corral usando lisolectina y lecitina.

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Publication number: MXPA00009116A
Application number: MXPA00009116A
Authority: MX
Inventors: David J Sanders
Original assignee: Kemin Foods Lc
Priority date: 1998-03-18
Filing date: 1999-03-17
Publication date: 2003-07-28
Also published as: EP1063898A4; AU745973B2; BR9908891A; WO1999047001A1; EP1063898A1; AU3098899A

Abstract

Un método para incrementar la absorción de carotenoides y, más específicamente, para incrementar la absorción y biodisponibilidad de luteina y zeaxantina en humanos y cerdos por medio del uso de lisolecitina y leciti

Description

BIODISPONIBILIDAD INCREMENTADA DE LUTEINA Y ZEAXANTINA EN HUMANOS Y AVES DE CORRAL USANDO LISOLECITINA Y LECITINA DESCRIPCION DE LA INVENCION La invención se refiere generalmente a la absorción de carotenoides y más específicamente, al incremento de la absorción y biodisponibilidad de luteina y zeaxantina en humanos y aves de corral por el uso de lisolecitina y lecitina . Los carotenoides se han usado por mucho tiempo como agentes colorantes de alimentos importantes. En particular, las xantofilas se agregan a los alimentos para aves de corral de manera que a la ingestión, las xantofilas se acumulen en la piel y las yemas de huevo. Los pollos absorben específicamente el pigmento luteina de lípido soluble (3,3'-dihidroxi-a-caroteno) y lo depositan intacto en el cuerpo y la grasa subcutánea, tejidos queratináceos (plumas y picos), y huevos, particularmente la yema. La acumulación de luteina y su isómero estructural zeaxantina imparten un color amarillo al pollo y a sus huevos que es comercialmente deseable . Se ha hecho la hipótesis de que los carotenoides reducen el riesgo de ciertos tipos de cánceres en humanos a través de su acción como antioxidantes que extinguen el oxigeno singlete y otras especies oxidantes terminando con eso las reacciones de cadena de radicales libres y limitando el daño de la oxidación celular. De los diecinueve carotenoides identificados a la fecha en el plasma humano, la luteina está entre los más comunes y se sabe que exhibe fuertes capacidades antioxidantes. La estructura de la luteina es : El grupo hidroxilo alilico en la posición C-31 del grupo e-terminal de la luteina se oxida fácilmente como resultado de la activación por el doble enlace cercano. El grupo hidroxilo no alilico en la posición C-3 del grupo ß-terminal también puede activar el carbono C-4 alilico al doble enlace haciendo este carbono altamente susceptible a la oxidación directa. Mientras que los procesos químicos para la síntesis de la luteina son conocidos, tales procesos son ineficientes y caros. La luteina extraída de pétalos de caléndula está disponible comercialmente en una diversidad de formas . La estructura de la zeaxantina es: Las lisolecitinas (lisofosfatidilcolina, lisofosfatidiletanolamina,. etc.) ha mostrado tener una diversidad de acciones biológicas, todas centradas alrededor de la modificación de la permeabilidad de la membrana celular. Tales efectos incluyen transferencia incrementada de ambos cationes y moléculas más grandes a través de las membranas celulares en lineas de células cultivadas (Duan, J. and M . P. Moffat (1991) "Protective effects of D . L-carnitine against arrhythmias induced by lisophosphatidylcholine or reperfusion" , Eur. J. Pharmacology, 192: 355-363; Boachie-Ansah, et al., (1991) "Effect of combined acidosis, lactate and lisophosphaticylcholine on action potentials and ionic currents in ventricular mycocytes", J. Mol. Cell Cardiol . , 23 (Supp. V), S. 80. En un nivel macroscópico se supone que este efecto particular puede resultar en la porción incrementada de nutrientes en el intestino animal (Patente del Reino Unido No. 9205014.5) . Esto se ha considerado por un incremento en la eficiencia de transporte de la membrana inducida por la incorporación de lisolecitina dentro de la membrana acompañada por la mejoría en la formación micelar en el intestino debido a la incorporación de lisolecitina dentro de la micela. Se supone que estos dos efectos incrementan ambos las cantidades de ácidos grasos biológicamente disponibles del intestino (en micelas) y la eficiencia de absorción de los ácidos grasos (transporte de membrana incrementado) .

Estructuralmente, las lecitinas son diglicéridos de fosfatidilo, por lo cual se quiere decir que uno de los tres grupos hidroxilo del glicerol (propano-1 , 2 , 3-triol ) está ocupado por un grupo fosfato, el cual a su vez está unido a una alquilamina polar. Los restantes dos hidroxilos de la glicerina están ocupados por ácidos grasos de cadena larga. La estructura de la licitina es: Asi, la lecitina, como un diglicérido de fosfatidilo, tiene un extremo polar cargado y uno altamente hidrofóbico - los requisitos principales de un emulsificador . La eliminación del ácido graso en la posición central por la fosfolipasa A produce lisolecitinas cuyas propiedades químicas difieren notablemente de aquellas de las lecitinas debido a la mayor hidrofilicidad de su extremo polar. Se ha encontrado que el ácido graso que permanece sobre la lisolecitina es generalmente insaturado (Dawson, et al., (1990) "Fatty acid composition of the neutral lipid and phospholipid fractions of mechanically deboned chicken meat", Poultry Science, 64: 1411-1419. El transporte de membrana incrementada en la presencia de lisolecitina se cree que ocurre por medio de alteración en la permeabilidad de la membrana debido directamente a la alta polaridad y potencial de enlace hidrógeno del extremo hidrofilico de la lisolecitina (Sidik, K. and M. J. Smerdon (1990) "Bleomycin induced DNA damage and repair in human cells permeabilized with lisolecithin" . Cáncer Research USA, 50:1613-1619; Kaminskas, E. and J. C. Li, (1989) "DNA fragmentation in permeablised cells and nuclei", Biochem. J. 261: 17-21. Se requieren niveles suficientes de acumulación de luteina y zeaxantina en la piel y yemas de los huevos de aves de corral para proporcionar el nivel de pigmentación demandado por el consumidor. La luteina y zeaxantina se absorben adicionalmente por los humanos en donde están presentes en la sangre y se depositan en la región macular de la retina asi como otras partes del cuerpo. Niveles suficientes de luteina y zeaxantina necesitan absorberse por el cuerpo humano para proporcionar los niveles biológicos deseados de estos compuestos, y tales niveles pueden jugar un papel en la prevención y tratamiento de enfermedad, que incluye melanomas y otros cánceres, como se discutió previamente . Se cree adicionalmente que la luteina y la zeaxantina son efectivas en la prevención y tratamiento de la degeneración macular. En consecuencia, se desea un método para incrementar la absorción y biodisponibilidad de estos compuestos.

La invención consiste de un método y compuestos para incrementar la absorción y biodisponibilidad de carotenoides en humanos y aves de corral por el uso de lisolecitina y lecitina. Se hace una formulación que comprende la adición de un tensioactivo, que incluye ya sea lisolecitina o lecitina o ambas, a un carotenoide, que incluye ya sea luteína y zeaxantina o una mezcla de ambas. El rango de tensioactivo a carotenoide está entre aproximadamente 5% y aproximadamente 30% en peso. La formulación se suministra como un suplemento alimenticio y resulta en una absorción y biodisponibilidad incrementada de los carotenoides. Un objeto de la presente invención es proporcionar un suplemento alimenticio que incluye un carotenoide el cual incrementa la absorción del carotenoide por un animal o humano al que se suministra el suplemento. Otro objeto de la presente invención es proporcionar un método para incrementar la absorción y biodisponibilidad de los carotenoides en suplementos alimenticios. Aun otro objeto de la presente invención es proporcionar un método parea incrementar la absorción y disponibilidad de luteína y zeaxantina extraída de pétalos de caléndula . Estos y otros objetos de la invención se volverán conocidos para una persona experta en la técnica con la revisión y entendimiento de esta especificación, los dibujos asociados, y las reivindicaciones anexas. BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una representación gráfica de los resultados del análisis NEPA de yemas de huevo para determinar la toma del pigmento en pollos alimentados con una diversidad de dietas que incluyen dietas control y dietas suplementadas con aditivos alimenticios de la presente invención. La Figura 2 es una representación gráfica de la Figura en Espacio Cromático L* a* b* en el Manual de Operación del Minolta Chroma Meter II. La Figura 3 es una representación gráfica de los resultados del análisis de reflectancia colorimétrica de las yemas de huevo de pollos alimentados con alimento para aves de corral tratado y sin tratar con lisolecitina . Las Figuras 4 y 5 son representaciones gráficas de los resultados del análisis NEPA de yemas de huevo para determinar la toma del pigmento en pollos alimentados con una diversidad de dietas que incluyen dietas control y dietas suplementadas con aditivos alimenticios de la presente invención . La Figura 6 es una representación gráfica de las propiedades emulsificantes de la lisolecitina y las mediciones del retardo de la fase de separación durante el tiempo . Los carotenoides , particularmente las luteínas xantofilicas y zeaxantina, son importantes como colorantes en alimentos para animales, particularmente alimentos para aves de corral. Las fuentes comercialmente disponibles de las xantofilas incluyen los productos de Kemin Industries, Inc., que son extractos de caléndula {Tagetes erecta) y se venden bajo las marcas ORO GLO® Liquid and FloraGLO® Lutein (20% Líquido) . El ORO GLO® Liquid tiene 7 gramos de actividad de xantofila por libra (como se determina por un método condensado de la Association of Official Analytical Chemists, paragraph 43.108, y disponible de Kemin Industries, Inc., part no. 02205) . La FloraGLO® Lutein (20% Liquida) tiene 20% de luteína y 0.86% de zeaxantina. Las fuentes de xantofila se han usado como aditivos para alimentos de animales para incorporar los pigmentos dentro de los tejidos corporales y los productos de los animales. Se ha desarrollado un método y una formulación para incrementar el nivel de absorción y biodisponibilidad de los carotenoides. Una formulación que contiene luteína y zeaxantina se combina con lecitina y con lisolecitina en una concentración de entre aproximadamente 5% hasta aproximadamente 30% en peso. La fuente de luteína y zeaxantina se mezcla con la fuente de lecitina o lisolecitina y la mezcla se agrega al alimento para el animal. El alimento tratado se suministra a los animales durante un periodo predeterminado de tiempo y los tejidos corporales y los productos animales se probaron por el contenido de xantofila. Se encontró que el alimentos tratado incrementa la cantidad de las xantofilas incorporadas por el animal por entre aproximadamente 2% y aproximadamente 50% sobre el alimento control que incluyó las mismas cantidades de xantofilas pero el cual no se había combinado con lecitina o lisolecitina . En particular, una cantidad de una fuente líquida de xantofilas se mezcló con una fuente líquida de lecitina o lisolecitina a alta velocidad durante un período extenso de tiempo para mezclar completamente los ingredientes. La mezcla se agregó a un alimento bajo en xantofilas en una- mezcladora para asegurar la distribución uniforme. Se formuló un alimento control usando el mismo alimento bajo en xantofila al cual se agregó la misma cantidad de la fuente de xantofila líquida también en un mezclador para asegurar la distribución uniforme. El alimento tratado y el alimento control se suministraron a grupos separados de pollos durante aproximadamente un mes. Se recolectaron los huevos de ambos grupos y se analizaron usando la prueba NEPA para el contenido de pigmento. El contenido de pigmento de los huevos mostró un contenido de pigmento incrementado en los pollos suministrados con la dieta tratada que corresponde a pollos que se les habla suministrado una dieta sin tratar que incluye hasta 50% de concentraciones más altas de xantofila. Al combinar la fuente de xantofila con lecitina o lisolecitina antes de la incorporación en un alimento animal, la absorción y biodisponibilidad de las xantofilas incrementó por hasta 50%. La acumulación de luteina y zeaxantina en la yema da respuestas colorimétricas que son lineales con respecto al pigmento agregado. Maruisch, W. L. and J. C. Bauernfeind "Oxycarotenoids in poultry feed" in: Carotenoids as Colorants and Vitamin A Precursors, J. C. Bauernfeind, ed., 1981, Academic Press, pp. 330ff. En contraste, la observación visual da resultados que ajustan una curva logarítmica en la cual la percepción de las diferencias en el color se vuelve muy difícil a altos niveles de contenido de pigmento. Además, la masa actual de pigmento incorporado dentro de la yema puede determinarse con el método espectroscópico basado en extracción de AOAC No. 17.004 (Journal of the Association of Official Analytical Chemists, JAOAC, 1958, 41:274; 1973, 56:272), también conocido como la prueba NEPA. La prueba NEPA tiene la ventaja de medir los niveles de pigmento actuales más que medir los cambios en los colores percibidos o reflejados. En consecuencia, la absorción incrementada de las xantofilas puede medirse objetivamente. Experimento 1 Se condujo una prueba de alimentación durante un periodo de 28 días consecutivos. La prueba usó doscientas veinticuatro aves cruzadas blancas Leghorn Hyline W36, de 29 semanas de edad al inicio del estudio. Las aves se alojaron en jaulas en series de ocho o nueve aves. A todas las aves se les suministró una dieta baja en pigmento durante un mes inmediatamente antes del inicio de la prueba. La composición de la dieta baja en xantofila usada en este estudio se muestra en la Tabla 1. Cada tratamiento se suministró a tres jaulas de la replica teniendo ya sea ocho o nueve aves. Las aves restantes recibieron alimentación control baja en xantofila. La producción de huevos se onitoreó durante la prueba y el alimento de prueba restante para cada tratamiento se pesó para determinar el consumo de alimento. TABLA 1: COMPOSICION DE DIETA PARA AVES DE CORRAL LIBRE DE XANTOFILA Ingrediente Porcentaj e sorbo 25.90 mij o 5.00 Avena 12.50 Trigo 9.00 Cebada 5.00 Corazones de girasol 5.00 Mitades de trigo 2.50 Pulpa de betabel 2.50 Harina de soya al 47.5% 12.00 Habichuelas extruidas al 38% 5.00 Harina de carne al 50% 5. 00 Suero entero 2. 50 Harina de pescado 1. 00 Calcio 5. 00 Dical al 18.5% 0. 90 Sal 0. 50 Vitaminas 0. 35 Minerales traza 0. 25 marca MYCO CURB® 0 .ll1 Metionina 0. 05 UNF-40 0. 05 marca TERMOX™ 0 .01252 1 Equivalente a 1 kg/ton. 2 Igual a 125 ppm. La fuente de xantofilas usada en la prueba fue liquido ORO GLO® que tiene un contenido de pigmento medido de 5.2 g/lb de actividad de xantofila. La fuente de lisolecitina usada fue lisolecitina marca Lysoprin adquirida de Lovesgrove Research (Aberystwyth, ales), producto no. 10544. Las proporciones para la aplicación objeto para ORO GLO® y Lysoprin se muestran en la Tabla 2. para los tratamientos con Lysoprin, se agregó 0.78, 1.17 y 1.56 Ib de liquido ORO GLO® a 0.23 Ib de Lysoprin. La mezcla se mezcló a alta velocidad en un mezclador Waring durante 15 minutos. Cada mezcla se vertió durante el mezclado dentro de un mezclador de banda que contiene 88.451 kg. ¦ (195 lbs . ) de alimento bajo en xantofila el cual había sido previamente tratado con 150 ppm de TERMOX® SECO (de Antitox, Buford, Georgia) y 1,000 ppm de MYCO CURB® líquido (de Kemin Industries, Inc.). Las dietas así producidas contienen el equivalente de 40, 60 y 80 gramos de actividad de xantofila por tonelada de alimento, respectivamente. El alimento control se preparó por la adición de 0.78, 1.17 y 1.56 Ib de líquido de ORO GLO® directamente al alimento bajo en xantofila sin la adición de Lysoprin. Se tomaron muestras de cada alimento y se analizaron por contenido de pigmento usando un método basado en AOAC, Párrafo 43.018, sin saponificación y cromatografía en columna. TABLA 2: PROPORCIONES DE APLICACION DE ORO GLO® Y LISOLECITINA EN UN ESTUDIO DE ABSORCION DE ALTO NIVEL DE LUTEINA INDUCIDA POR LISOLECITINA EN YEMAS DE HUEVO ORO GLO®(G Totales Lisolecitina de xantofila/Ton) (Lb/Ton) 0 0 40 0 60 0 80 0 0 2.28 40 2.37 60 2.30 80 2.28 Al final de la prueba se recolectó una docena de huevos de cada jaula. Los huevos se pesaron y analizaron por reflectancia de color y contenido de pigmento. Se seleccionaron tres huevos al azar de cada docena para evaluación de la yema. Los huevos seleccionados se rompieron y se separó la yema de la clara. Se determinó la reflectancia de color de acuerdo con los procedimientos delineados en el Manual de Operación para el Colorímetro Minolta (Chroma Meter II Reflectance Operation Manual E) . Después, las yemas se hicieron compuesto y se mezclaron completamente. Una muestra de 2.5 gramos se tomó de cada mezcla de yemas y se analizó por una modificación del método 17.004 de la AOAC (Journal of the Association of Official Analytical Chemists, JAOAC, 1958, 41:274; 1973, 56:272) en el cual el pigmento de yema total se extrae con acetona y se determina espectroscópicamente . El contenido de pigmento se estimó usando un valor El%/cm de 2,360 el cual se usa en los métodos de la AOAC para xantofila en alimentos, más que por los equivalentes de ß-caroteno. Durante el resto de esta descripción, los niveles de tratamiento serán referidos por el nivel objetivo de la actividad de xantofila total en gramos de xantofila por tonelada de alimento como se describe en la sección de Métodos y Materiales y la Tabla 2. La recolección de datos del huevo, (alimento/ave/día y un peso promedio de huevo) y contenido de pigmento se presenta en la Tabla 3. Como puede verse, la adición de lisolecitina a la dieta no hace diferencia numérica o estadística ya sea en el consumo de alimento por ave por día en el peso promedio del huevo. TABLA 3: DATOS NO ANALIZADOS DE LA PRUEBA DE GALLINA PONEDORA CON ALTO NIVEL DE LISOLECITINA: ALIMENTO CONSUMIDO POR AVE POR DIA, PESO DE HUEVO Y CONTENIDO DE PIGMENTO EN EL ALIMENTO Tratamiento (Gramos/Ton) Xantofila Lysoprin Alimento/Ave/ Peso Promedio de Pigmento del Día (Gramos) Huevo (Gramos) Alimento Medido (Gramos/Ton) 0 0 105.5 58 1 1.89a 40 0 97.9 59 9 41.78b 60 0 105.0 59 2 59.85° 80 0 102.4 58 .8 82.85d 0 200 106.7 60 .4 2.04a 40 200 101.8 61 .0 43.66b 60 200 106.8 60 .3 63.45c 80 200 97.7 57 .7 82.77d Promedio 103.0 59 .4 -- Desviación Estándar 5.0 1 .1 — d Las entradas en la columna sin sobrescritos comunes que difieran significativamente (P<0.05).

Existen dos estrategias que pueden usarse para evaluar el contenido de pigmento de las yemas de huevo. La primera es medir la masa actual del pigmento dentro de la yema. Esto puede hacerse, por ejemplo, por el método NEPA. El término "NEPA es un acrónimo para la National Egg Products Association la cual lo desarrolló originalmente. En forma modificada, se ha aceptado como un método estándar por la AOAC (Journal of the Association of Official Analytical Chemists, JAOAC, 1958, 41:274; 1973, 56:272). En este método, el pigmento se extrae de la yema y se cuantifica por espectroscopia visible en términos de \iq de pigmento por gramo de yema. La segunda propuesta es medir los cambios percibidos en color. Esto puede hacerse ya sea por un jurado de evaluación o por colorimetria de reflectancia . En este estudio, se utilizó éste último debido a su mayor sensibilidad a los cambios en el contenido de pigmento a altos niveles de pigmento y su más baja variabilidad versus evaluación del jurado (a todos los niveles de pigmento) . Ambos métodos NEPA y colorimetria de reflectancia deben correlacionarse con las ayudas para la perfección humana del color tales como Roche Fan ( aruisch, W. L. and J. C. Bauernfeind "Oxycarotenoids in poultry feed" in: Carotenoids as Colorants and Vitamin A Precursors, J. C. Bauernfeind, ed., 1981, Academic Press, pp . 330ff ) . Los resultados del análisis NEPA se muestran en la Tabla 4 y en la Figura 1. Como se estableció anteriormente, el método NEPA mide directamente la masa de pigmento extraído de la yema. En consecuencia, cualquier incremento en la cantidad de pigmento incorporado dentro de la yema puede observarse directamente sin considerar la percepción del color. Como puede verse en la Tabla 4, tratando el alimento para aves con lisolecitina resultó en un incremento estadísticamente válido (P<0.05) en el contenido de pigmento en yema versus el control en cada nivel de aplicación. La adición de lisolecitina sin pigmento adicional disponible no dio incremento estadístico en el contenido de pigmento. Estos resultados se muestran gráficamente como en la Figura 1. Este rango de pigmento (56.4 a 122.1 pg/g se correlaciona a un marcador Roche Fan aproximadamente 11 a 14, bien dentro del rango en el cual los cambios percibidos en el color de la yema son difíciles de diferenciar. TABLA 4: EL RESULTADO DEL ANALISIS DE YEMAS DE HUEVO POR NEPA Tratamiento (Gramos/Ton) Pigmento NEPA ORO GLO® Lysoprin ^gramos/gramo de yema) 0 0 3.0a 0 200 3.7a 40 0 56.4b 40 200 75. lc 60 0 77.6C 60 200 97.3d 80 0 107.3e 80 200 122. lf f Las entradas en la columna sin sobrescritos comunes que difieran significativamente (P<0.05) . El incremento en el contenido de pigmento es más dramático a 40 g de ORO GLO®/ton, en donde existe un incremento de 37.4% en el contenido de pigmento en yema con la adición de lisolecitina a la dieta. Para las dosis de pigmento de 60g/ton y 80g/ton, los incrementos fueron 28.3% y 9.2%, respectivamente. Como puede verse en la Tabla 4 y la Figura 1, no existe diferencia estadística, y muy poca diferencia numérica en el contenido de pigmento actual de la yema de 40g/ton de pigmento alimentado que contenía lisolecitina y en las yemas de pollos alimentados con 60g de pigmento/ton sin lisolecitina. A diferencia de la determinación directa de la masa del pigmento, los datos del colorímetro se obtienen y reportan como los valores L*, a* y b* los cuales corresponden a la posición del color reflejado en un sistema tridimensional. El valor L* es una medida de la brillantez (luminosidad) y a* y b* son coordenadas de cromaticidad a lo largo de los ejes verde-rojo y amarillo-azul respectivamente. El sistema de coordenadas se muestra gráficamente como en la Figura 2. Mientras que los cambios de color actuales pueden presentarse más precisamente en una gráfica tridimensional, es una práctica común para reportar los valores individuales L*. a* y b* . Los resultados colorimétricos se muestran como en la Tabla 5 y la Figura 3. Para la adición de un pigmento naranja tal como la luteina, se anticipa que incrementar el contenido de luteina resultará en un incremento en los valores a* y b*. Similarmente , conforme se incrementa el contenido de pigmento, la luminosidad total debe disminuir. Como puede verse en la Tabla 5 y la Figura 3, el valor L* disminuye como se anticipó, los valores de a* se incrementan con el incremento de los niveles de pigmento y b* sufre un incremento inicial en el valor amarillo con la adición del pigmento (40 g/ton) , seguido por poco o ningún cambio en los niveles de pigmento superiores. Este comportamiento se ajusta cercanamente a la región "tira de yema" de la región del triángulo de color de la CIE (Commission Internationale d'Eclairage) en la cual el incremento del contenido de pigmento se percibe en términos de un incremento en el componente de cclor rojo versus una contribución amarilla fija o decreciente. TABLA 5: RESULTADOS DEL ANALISIS DE LAS YEMAS DE HUEVO POR COLORIMETRO MINOLTA Tratamiento (Gramos/Ton) ORO GLC® Lysoprin L*† a* b* 0 0 66.81 -8.77a 24.21a 0 200 67.08 -9.13a 27.79b 40 0 62. 24 -2.89b 52.03d 40 200 61. 17 -0.38c 51.46c'd 60 0 61. 13 -0.19c 50.92c'd 60 200 59. 30 1.64d 47.89° 80 0 60. 14 2.28d'e 51.43c'd 80 200 59. 26 3.20e 49.78c'd a f Las entradas en la columna sin sobrescritos comunes que difieran significati amente (P<0 .05) † no evaluado estadísticamente. El valor L* contribuye a los cambios en la percepción del color, no a la cromaticidad . El sistema L*, a* b* se diseñó para imitar la percepción humana del color. Los cambios relativamente pequeños en L*, a* y b* con la adición de pigmento correlaciona bien con la conocida dificultad de percibir los cambios de color a los niveles de pigmento usados en este estudio. Considerando la falta de linearidad de la respuesta dentro del triángulo CIE a los cambios de color en la yema, el alto grado de linearidad en la respuesta del valor a* para el alimento sin tratar (Figura 3) con crecientes niveles de pigmento observados en este estudio deben de notarse. El coeficiente de correlación (R2) del alimento sin tratar es 0.999; es 0.973 del alimento tratado con lisolecitina . Más importantemente, los valores de a* obtenidos a partir de las yemas producidas con alimento tratado con lisolecitina que contiene 40 g/ton de ORO GLO© y el alimento sin lisolecitina que contiene 60 g/ton de ORO GLO® son los únicos miembros de un grupo estadísticamente homólogo (Tabla 4 y Figura 3) . Esta observación paraleliza exactamente el resultado de los análisis NEPA anteriores (Tabla 4) . La incorporación de altos niveles de Lisolecitina marca Lysoprin dentro de gallinas ponedoras activas para dietas de aves de corral suplementadas con pigmento fueron vistas por producir incrementos estadísticamente válidos en el contenido de pigmento de las yemas de huevo. Basados en los datos anteriores, un nivel de pigmento de 40 g de líquido/ton de ORO GLO® de alimento, con adición de lisolecitina al valor de aplicación usado en este estudio, mostrará un desempeño en el color de la yema equivalente a la adición de 60 g de líquido/ton de ORO GLO® de alimento sin lisolecitina. Experimento 2 Una prueba de alimentación duró veintiocho días. El estudio se condujo en 224 aves cruzadas blancas Leghorn Hyline 36, de 47 semanas de edad al inicio del estudio. A todas las aves se les suministró una dieta con bajo pigmento durante tres semanas inmediatamente antes del inicio de la prueba. La composición de la dieta baja en xantofila usada en este estudio se muestra en la Tabla 1. Cada tratamiento se suministró a tres réplicas de jaulas en series teniendo de ocho o nueve aves. Las aves restantes recibieron alimento control bajo en xantofila. La producción de huevo se monitoreó durante la prueba y el alimento de prueba restante para cada tratamiento se pesó para determinar el consumo de alimento. Las temperaturas del alojamiento variaron de 20.55°C a 29.44°C (69°F a 85°F) durante la prueba. El liquido ORO GLO® usado para la prueba tuvo un contenido de pigmento de 5.32 g/lb. Los proporciones de aplicación objetivo para el ORO GLO®, lisolecitina marca Lysoprin y lecitina de soya a granel se muestran en la Tabla 6. Para los tratamientos con Lysoprin y lecitina se mezclaron 55, 110 o 165 gramos de ya sea Lysoprin o lecitina con 550 gramos de liquido ORO GLO®. La mezcla se mezcló a alta velocidad en un mezclador Waring durante 7.5 minutos y a baja proporción durante 5 minutos. El ORO GLO® usado en el tratamiento control no se mezcló. El tratamiento se efectuó vertiendo cada una de las mezclas de pigmento anteriores en el alimento en un mezclador de banda que contiene 95.254 kg (210 lbs) de alimento bajo en xantofila el cual se habla tratado con 150 ppm de TERMOX seco y 1, 000 ppm de liquido YCO CURB®. El alimento control se preparó por la adición de cantidades apropiadas de liquido ORO GLO®, como se delinea en la Tabla 2, directamente al alimento bajo en xantofila sin la adición de Lysoprin o lecitina. Cada alimento tratado se corrió a través de un molino de martillos y un tamiz de molino para ayudar en la distribución del pigmento, después se pesó en lotes de 15.876 kg . (35 lbs . ) dentro de bolsas Kraft poli-recubierto. Se tomaron muestras de cada alimento y se analizaron por contenido de pigmento usando un método basado en la AOAC, Párrafo 43.018, sin saponificación y cromatografía en columna. TABLA 6: PROPORCIONES DE APLICACION DE ORO GLO®, LECITINA Y LISOLECITINA EN UN ESTUDIO DE TENSIOACTIVOS EN DIETAS PARA GALLINAS PONEDORAS ORO GLO® Tratamiento (Lb/Ton) (g Totales de xantofila/ton) 60 0 60 1.15 Leci1 60 1.15 Prin2 60 2.31 Leci 60 2.31 Prin 60 3.46 Leci 60 3.46 Prin 1 Leci = Lecitina de soya a granel. 2 Prin = Lisolecitina marca Lysoprin. Al final de la prueba se recolectó una docena de huevos de cada jaula junto con el exceso de alimento tratado y los datos de producción. Los huevos se pesaron y se analizó el contenido de pigmento. Se seleccionaron tres huevos al azar de cada docena para la evaluación de la yema. Los huevos se rompieron y se separó la yema de la clara. Las yemas se combinaron después y se mezclaron completamente. Una muestra de 2.5 gramos se tomó de cada combinación de yema y se analizó por una modificación del método de AOAC 17.004 en el cual el pigmento de la yema total se extrae con acetona y se determina espectroscópicamente . El contenido de pigmento se determinó comparando la absorbancia del extracto a 450 mm en una curva estándar de ß-caroteno. Los resultados se convirtieron a y se reportaron como equivalentes de ß-caroteno BCE/g de yema) . La recolección de datos de los huevos ( alimentación/ave/día ) y el contenido de pigmento se presenta en la Tabla 7. Como puede verse, la adición de lisolecitina a la dieta no hizo diferencia numérica o estadística en el consumo de alimento por ave por día. Sin embargo, todos los alimentos tratados con tensioactivo mostraron un contenido de pigmento final estadísticamente menor (P<0.01) con el control tratado sin tensioactivo. TABLA 7: DATOS NO ANALIZADOS DE LA PRUEBA DE GALLINAS PONEDORAS CON LECITINA VERSUS LISOLECITINA: ALIMENTO CONSUMIDO POR AVE POR DIA, CONTENIDO DE PIGMENTO INICIAL Y FINAL EN EL ALIMENTO Xantofilia Tratamiento Alimento/ Pigmento Pigmento (g/ton) (Lbs/Ton) Ave/Día (g) Inicial Final Medido Medido (g/Ton) (g/Ton) 60 0 103.5 61.10 51. ld 60 1.15 Leci1 107.8 60.40 44.9ab 60 1.15 Prin2 103.3 65 .60 45.2a 60 2.31 Leci 103.3 59 .30 45.9abc 60 2.31 Prin 109.1 67 .60 47.9C 60 3.46 Leci 106.4 59 .80 46.9bc 60 3.46 Prin 108.8 59 .40 44.3a Promedio 106.03 61 .89 46.6 Desviación Estándar 3 .33 2.33 s~ Las entradas en la columna sin sobrescritos comunes que difieran significativamente (P<0.05) . 1 Leci = Lecitina de soya a granel . 2 Prin = Lisolecitina marca Lysoprin. Los resultados del análisis ???? se muestran en la Tabla 8 y Figura 4. Como se estableció anteriormente, el método NEPA mide directamente la masa del pigmento extraído de la yema. Así, cualquier incremento en la cantidad de pigmento incorporado dentro de la yema puede observarse directamente sin considerar la percepción del color. Como puede verse en la Tabla 8, el tratamiento del alimento de aves de corral suplementados con 60 g/ton de xantofilas con 2.31 lbs/ton con suplemento de lisolecitina líquida marca Lysoprin o lisolecitina de soya a granel resultó en incrementos estadísticamente válidos (P<0.001) en el contenido de pigmento de la yema versus control. Además, el alimento tratado con 2.31 lb/ton de Lysoprin mostró un contenido de pigmento estadísticamente mayor que el alimento tratado con lecitina a ese nivel. En contraste, el tratamiento ya sea con 1.15 lb/ton o 3.46 lb/ton con ya sea Lysoprin o lecitina no mostró incremento en el contenido de pigmento de la yema versus ya sea entre sí o el control. Notablemente, en el nivel más alto de tratamiento de tensioactivo, la acumulación del pigmento en la yema fue menor que en el nivel de tratamiento de 2.31 lb/ton. Adicionalmente , aunque el alimento control mostró la estabilidad más alta de pigmento (ver Tabla 7), dio el nivel de acumulación de pigmento más bajo (Tabla 8) . Estos resultados se muestran gráficamente como en la Figura 4. TABLA 8: RESULTADOS DEL ANALISIS DE LAS YEMAS DE HUEVO POR NEPA Tratamiento Pigmento NEPA (µ? Cambio en BCE1/g de Yema) Pigmentación (% ORO GLO® (g/Ton) Lysoprin (Lb/Ton) vs. Control) 60 0 84.6a 0 60 1.15 Leci2 89.6ab 5 91 60 1.15 Prin3 86.8a 2 60 60 2.31 Leci 96. lc 13 59 60 2.31 Prin 109.8d 29 79 60 3.46 Leci 86.6a 2 36 60 3.46 Prin 94.6b 11 82 1 BCE = Equivalentes de ß-Caroteno a_d Las entradas en la columna sin sobrescritos comunes que difieran significativamente (P<0.05) . 2 Leci = Lecitina de soya a granel. 3 Prin = Lisolecitina marca Lysoprin. La adición de lisolecitina a la dieta para aves de corral resulta en mejorías estadísticas en la incorporación del pigmento dentro de la yema del huevo. El incremento más grande, 29.79%, se vio en un nivel de tratamiento con Lysoprin de 2.31 lb/ton. Además, este estudio muestra que un efecto similar aunque más pequeño, puede observarse usando lecitina en lugar de lisolecitina. La adición de 2.31 lb/ton de lecitina dio un incremento de 13.59% en el pigmento de la yema, las mejorías estadísticas en la acumulación de pigmento ocurren a pesar de la estabilidad del pigmento estadísticamente menor en los alimentos tratados con tensioactivo . Experimento 3 Se hizo una prueba de alimentación durante 28 días. Se usaron doscientas veinticuatro aves cruzadas Leghorn Hyline W36 blancas, de 47 semanas de edad al inicio del estudio. Todas las aves se alimentaron con una dieta baja en pigmento durante tres semanas inmediatamente antes del inicio de la prueba. La composición de la dieta baja en xantofila usada en este estudio se muestra en la Tabla 1. Cada tratamiento se administró a tres replicas de jaulas en series teniendo de ocho o nueve aves. Las aves restantes recibieron alimento control bajo en xantofila. La producción de huevos se monitoreó durante la ' prueba y el alimento de prueba restante para cada tratamiento se pesó para determinar el consumo de alimento. Las temperaturas del alojamiento variaron de 14.44° a 22.22°C (58° a 72°F) durante la prueba. El liquido ORO GLO® usado para la prueba tuvo un contenido de pigmento de 5.4 g/lb. Los valores objetivo de aplicación para los suplementos ORO GLO®, LYSOFORTE y lisolecitina de Lysoprin se muestran en la Tabla 9. Puesto que el LYSOFORTE es una suspensión al 10% de Lysoprin sobre un portador inerte, las proporciones de aplicación de LYSOFORTE se fijaron en 10 veces las de Lysoprin. Asi, un tratamiento de 2.2 lb/ton de LYSOFORTE se diseñó para igualar una aplicación de 0.22 lb/ton de Lysoprin. Para los tratamientos con Lysoprin, 10.5, 42 y 105 gramos de Lysoprin se mezclaron con 352 gramos de liquido ORO GLO®. La mezcla se mezcló en un mezclador de alta velocidad Waring durante 15 minutos. El tratamiento se efectuó vertiendo cada una de las mezclas de pigmento anteriores en la alimentación en un mezclador de banda que contiene 95,254 kg. (210 lbs) de un alimento bajo en xantofila el cual había sido previamente tratado con 150 ppm de TERMOX seco y 1,000 ppm de líquido MYCO CURB®. Los tratamientos con LYSOFORTE se prepararon agregando 105 y 420 gramos de LYSOFORTE (Lysoprin al 10%) al mezclador después de la adición del pigmento. El alimento control se preparó por la adición de cantidades apropiadas de liquido ORO GLO®, como se delineó en la Tabla 2, directamente al alimento bajo en xantofila sin la adición de Lysoprin o LYSOFORTE. Se tomaron muestras de cada alimento y se analizaron por contenido de pigmento usando un método basado en el AOAC, Párrafo 43.018, sin saponificación y cromatografía en columna. TABLA 9: PROPORCIONES DE APLICACION DE ORO GLC® Y LISOLECITINA EN UN ESTUDIO DE DIETAS PARA GALLINAS PONEDORAS CON ALTO NIVEL DE LISOLECITINA.

Al . final de la prueba, se recolectó una docena de huevos de cada jaula. Los huevos se pesaron y analizaron por reflectancia de color y contenido de pigmento. Se seleccionaron tres huevos al azar de cada docena para evaluación de la yema. Los huevos se rompieron y se separó la yema de la clara. Las yemas se combinaron y mezclaron completamente. Una muestra de 2.5 gramos se tomó de cada combinación de yema y se analizó con una modificación del método 17.004 de la AOAC en el cual el pigmento de yema total se extrajo con acetona y se determinó espectroscópicamente . El contenido de pigmento se determinó comparando la absorbancia del extracto a 450 nm en una curva estándar de ß-caroteno. Los resultados se convirtieron a y se reportaron como equivalentes de ß-caroteno (]iq BCE/g de yema) . La recolección de datos de los huevos (alimento/ave/dia y peso promedio de huevo) y contenido de pigmento se presenta en la Tabla 10. Como puede verse, la adición de lisolecitina a la dieta no hizo diferencia numérica o estadística en el consumo de alimento por ave por día o en el peso promedio de huevo.

TABLA 10: DATOS NO ANALIZADOS DE LA PRUEBA POR GALLINAS PONEDORAS CON ALTO NIVEL DE LISOLECITINA: ALIMENTO CONSUMIDO POR AVE POR DIA, PESO DEL HUEVO Y CONTENIDO DE PIGMENTO DEL ALIMENTO Xantofila Tratamiento Alimento/ Peso Promedio Pigmento Inicial (G/Ton) (Lb/Ton) Ave/Día (g) del Huevo (g) Medido (g/Ton) 0 0 106.7 65.19 5.30a 40 0 108.6 64.89 44.92b 60 0 103.7 66.14 67.36c 40 0.22 Lysoprin 105.2 64.16 42.73b 40 0.88 Lysoprin 106.9 64.97 45.49b 40 2.2 Lysoprin 109.4 66.30 42 02b 40 2.2 LYSOFORTE 105.1 64 .70 39 72b 40 8.8 LYSOFORTE 106.2 62 .43 39 42b Promedio 106.48 64 .85 Desviación Estándar 1.87 1. 21 c Las entradas en la columna sin sobrescritos comunes que difieran significativamente (P<0.05). Los resultados del análisis NEPA se muestran en la Tabla 11 y Figura 5. Como se estableció anteriormente, el método NEPA mide directamente la masa del pigmento extraído de la yema. Así, cualquier incremento en la cantidad de pigmento incorporado dentro de la yema puede observarse directamente sin considerar la percepción del color. Como puede verse en la Tabla 11, el tratamiento del alimento para aves de corral suplementado con 40 g/ton de xantofilas con suplemento de lisolecitina de Lysoprin líquido resultó en incrementos estadísticamente válidos (P<0.05) en el contenido de pigmento de la yema versus control en cada nivel de tratamiento con Lysoprin. En contraste, la adición de suplemento de lisolecitina de LYSOFORTE seco no produjo incrementos estadísticamente validos en el contenido de pigmento de la yema. Para un suplemento de xantofila de 40 gt/ton, en el nivel de tratamiento de 2.2 lb/ton, hubo una disminución estadísticamente válida en el contenido de pigmento de la yema versus alimento que no había sido tratado con LYSOFORTE. Estos resultados se muestran gráficamente como en la Figura 5. TABLA 11: RESULTADOS DEL ANALISIS DE YEMAS DE HUEVO POR NEPA Tratamiento (Gramos/Ton) Pigmento NEPA (µ? Por ciento de Cambio BCE/g de Yema) vs. 40g/ton de ORO GLO® ORO GLO® Lysoprin 0 0 2 24a -- 40 0 52 85c 0 60 0 76 30g 44.37086 40 0. 22 Lysoprin 55 37d 4.768212 40 0. 88 Lysoprin 57 69e 9.157994 40 2 .2 Lysoprin 60 36f 14.21003 40 2. 2 LYSOFORTE 49 03b -7.228 40 8. 8 LYSOFORTE 53 93c 2.043519 f Las entradas en la columna sin sobrescritos comunes que difieran significativamente (P<0.05) . La incorporación de lisolecitina de Lysoprin en dieta para aves de corral suplementadas con pigmento para gallinas ponedoras activas que producen incrementos estadísticamente válidos en el contenido de pigmento de las yemas de huevo. Basados en los datos anteriores, un nivel de pigmento de 40 g de líquido/ton de ORO GLO® de alimento, con la adición de lisolecitina a los proporciones de aplicación usadas en este estudio, mostrarán un se desempeñamiento en el color de la yema entre aquél del alimento sin tratar de 40 g/ton y 60 g/ton. Por el contrario, la adición de suplemento de lisolecitina de LYSOFORTE seco no mejoró la incorporación de pigmento. Experimento 4 Ciento veinte aves cruzadas Leghorn Hyline 36 blancas, alojadas en jaulas en series se utilizaron en la prueba para gallinas ponedoras. Las gallinas tenían 84 semanas de edad al inicio de la prueba. Antes de la recolección de los huevos, a las aves se les dio las dietas experimentales y agua ad libitum durante 28 días. Cada jaula en serie, conteniendo ocho aves, se usó como una unidad experimental. Cada dieta experimental se suministro a tres jaulas al azar colocadas en la instalación para gallinas ponedoras . Junto con la prueba de gallina ponedora, se desarrolló una prueba de ensayo experimental de la calidad de los lotes de Lysoprin. Esta prueba se basa en las propiedades emulsificadoras de agua en aceite de la lisolecitina versus lecitina. Una correlación cercana de los resultados de este ensayo y los resultados de la prueba, por ejemplo producto de alta calidad como se determina en el ensayo que lleva a la pigmentación mejorada de yema, permitiría que este ensayo se usará como una prueba de control de calidad para los lotes de lisolecitina entrantes. Las dietas experimentales se prepararon de la siguiente forma. Cinco muestras de 95.254 kg. (210 lbs . ) de la dieta baja en xantofila de la Tabla 1 se suplementaron con uno de los siguientes: 2.2 lbs/ton de Lysoprin, un producto comercial alternativo (Blendmax 322D liquido) , 11 lbs/ton de LYSOFORTE, y un control sin tratar. Además cada muestra se trató con 8 lbs/ton de liquido marca ORO GLO® y 2 lbs/ton de liquido marca MYCO CURB®. Los productos de lisolecitina líquidos se mezclaron con el líquido ORO GLO® en un mezclador Waring durante un minuto antes de tratar el alimento. Los productos de lisolecitina y/o pigmento se agregaron al alimento en los niveles indicados vertiendo lentamente el aditivo en el alimento durante el mezclado en un mezclador de banda. Después de correrlo a través de un molino de martillo con un tamiz de molino, se pesaron 15.876 kg. (35 lbs.) de cada tratamiento dentro de bolsas Kraft poli-recubiertas. La prueba de aseguramiento de calidad se llevó a cabo de la siguiente forma. Se agregaron 1.6 g de Lysoprin líquido y 8 g de LYSOFORTE seco para separar muestras de 100 mi de aceite de ca óla. Estas soluciones se mezclaron después completamente, después de los cual se filtró el LYSOFORTE para eliminar todo el material portador. Al mismo tiempo, se preparó una solución de 15% de NaCl . Se agregaron cincuenta mi de soluciones de lisolecitina y 50 mi de solución de 15% de NaCl a un vaso de 150 mi. Los materiales se mezclaron con un bio-homogenizador a 10,000 rpm durante 15 segundos. La emulsión se transfirió inmediatamente a un cilindro graduado de 100 mi. El volumen de la fase inferior (la solución libre de 15% de NaCl) de la emulsión se observó en el momento cero y después cada cinco minutos durante un periodo de 60 minutos . También se corrió para la comparación de un blanco de aceite de cañóla y el 15% de NaCl . Para el análisis de los pigmentos, seis huevos por tratamiento, dos de cada una de las tres réplicas, se seleccionaron al azar. Las yemas se separaron de la clara y se limpiaron adicionalmente con una toalla de papel. Las yemas de los huevos se combinaron, pesaron y homogenizaron con un bio-homogenizador . Primero se dirigieron los puntajes de abanico de las yemas. Se colocó diez gramos del material de yema de huevo compuesto de cada tratamiento en una caja petri de plástico de 60 x 15 rara Falcon 1007. Seis individuos en la instalación de investigación se les pidió determinar los puntajes de abanico de colores de cada composición de yema. Los puntajes de abanico se analizaron después a un nivel de 95% de confianza usando el procedimiento de comparación múltiple de Duncan ( Statgraphics Plus, Manugistics, Inc., 1995) . La intensidad (L) de la pigmentación roja (a) y amarilla (b) se midió usando un colorímetro Minolta CR-300. De nuevo, se colocó 10 g de las composiciones de yema de huevo de cada tratamiento en una caja de petri de plástico de 60 x 15 mm Falcon 1007. Para medir el L*a*b de cada tratamiento, la muestra se colocó en la parte superior de la cabeza de medición con un orificio abierto para la cabeza de color. Las mediciones de L*a*b se replicaron dos veces para cada muestra. Los puntajes de L, a y b se analizaron después a un nivel de confianza de 95% usando un procedimiento de comparación múltiple de Duncan. Los equivalentes de ß-caroteno se dirigieron de acuerdo al método de AOAC de 17.002 a 17.004. El pigmento de huevo medido o equivalentes de ß-caroteno se analizaron después a un nivel de confianza de 95% usando un procedimiento de comparación múltiple de Duncan. Los resultados del ensayo rápido de los dos lotes de Lysoprin liquido, el LYSOFORTE seco y el producto competitivo (Blendmax 322D) usado en la prueba pueden verse en la Figura 6. El ensayo se basa en las propiedades emulsificantes de la lisolecitina y mide el retraso de la separación de la fase durante el tiempo cuando se mezcla una solución de cloruro de sodio/agua y una solución de aceite-lisolecitina . Los tres productos líquidos mostraron un retraso significativo en la separación de la fase. Dados estos resultados, el mejor emulsificador del grupo parece ser el producto Blendmax 322D, seguido por los dos lotes de Lysoprin. No se vio efecto para el LYSOFORTE seco.

Se observaron diferencias significativas entre los puntajes de abanico de las yemas tratadas con lisoprin lote 2000795 representando el mejor. Como se ve en la Tabla 12, el puntaje de abanico medio de las yemas tratadas con lysoprin lote 200795 fue significativamente mayor que el del control y los otros puntajes de abanico medios, mientras que el tratamiento con LYSOFORTE seco mostró la puntaje de abanico más baja. TABLA 12: PUNTAJES DE ABANICO MEDIOS DE LAS YEMAS TRATADAS CON PRODUCTOS DIFERENTES DE LISOLECITINA Tratamiento Puntaje de Abanico Medio Control 8.5a Lysoprin (lote 200795) 9.58b Lysoprin (lote 250795) 8.42a LYSOFORTE /lote 5053086) 8.0a Producto competitivo (Blendmax 322D) 8.5a a,b Diferentes sobrescritos indican diferencias significativas (P<0.05) . Los resultados de las medidas del colorímetro Minolta se encuentran en la Tabla 13. Cuando se comparan con el control y los otros tratamientos, el LYSOFORTE seco exhibe la puntuación L menor reflejando menos pigmentación mientras que el Lysoprin lote 200795 resultó en un pico rojo significativamente más fuerte el cual probablemente cuente por la consideración más alta del abanico.

TABLA 13: MEDICION DE L, a y b DE YEMAS TRATADAS CON DIFERENTES PRODUCTOS DE LISOLECITINA Medición de Pigmento Tratamiento L a b Control 52.15b -0.3f 45.75i Lysoprin (lote 200795) 52.5C 0.9h 47.0k Lysoprin (lote 250795) 51.9a -0.059 46.15j LYSOFORTE (lote 5053086) 54.0d -1.0e 49.01 Producto competitivo (Blendmax 322D) 52.5° 0.05g 46.85k Diferentes sobrescritos dentro de cada columna indican diferencias significativas (P<0.05) . Los resultados del método de equivalencia de beta-caroteno (Tabla 14) confirman lo que se observó usando el método de puntaje de abanico. El Lysoprin lote 200795 mejora la pigmentación por 15% mientras que los otros dos tratamientos de lisolecitina liquida tuvieron un efecto menor. Las yemas de huevo tratadas con el LYSOFORTE seco, sin embargo, mostraron una reducción significativa en la pigmentación . TABLA 14: EQUIVALENTES DE ß-CAROTENO (]iG/G DE YEMAS TRATADAS CON DIFERENTES PRODUCTOS DE LISOLECITINA Equivalentes de ß-Caroteno (ug/g) TRATAMIENTO Rep. 1 Rep. 2 Media % Cambio Control 68.89 70.44 69.67b Lysoprin (lote 200795) 80 61 80.48 80.54e 15.6 Lysoprin (lote 250795) 74 06 73. 12 73 .59c 5. 6 LYSOFORTE (lote 5053086) 63 05 63. 33 63 .19a -9 .3 Producto competitivo (Blendmax 322D) 76 69 79. 15 77 .92d 11 .8 e Sobrescritos diferentes indican diferencias significativas (P<0.05) . Los resultados de la prueba de gallina ponedora muestran concluyentemente lo que se observó en una prueba previa, que el Lysoprin líquido cuando se incluye dentro de un alimento para gallina ponedora a un nivel de 0.11% puede mejorar la pigmentación de las yemas de huevo por hasta 15%, mientras que el LYSOFORTE seco disminuye actualmente la eficiencia de la toma y/o acumulación del pigmento. En lo que concierne a la eficiencia, se observaron variaciones sustanciales entre los diferentes lotes de lisolecitina líquida. En esta prueba el lote 20.095 fue superior sobre un producto de Central Soya, Blendmax 322D. Los resultados de esta prueba también indican que existe una correlación positiva aunque limitada, entre los resultados del ensayo rápido y los resultados de la prueba de gallina ponedora. Los tres lotes de Lysoprin líquido que se desempeñaron bien en la prueba de gallina ponedora también se desempeñaron bien en el ensayo rápido mientras que el producto LYSOFORTE seco falló en ambas, tanto en el ensayo rápido como en la prueba de gallina ponedora. El ensayo rápido, sin embargo, falló en predecir el orden de se desempeñamiento que se vio en la prueba de gallina ponedora (por ejemplo, Blendmax 322D se desempeñó mejor en el ensayo rápido pero fue inferior en la prueba) . En segundo lugar, las propiedades emulsificantes de los productos de lisolecitina se ven consistentemente solamente en el aceite de cañóla, no sin embargo en el aceite de maíz o el aceite mineral. El producto Blendmax 322D sin embargo, mostró también un buen efecto en el aceite mineral. Experimento 5 El estudio se dirigió durante 28 días. Se usaron doscientos veinticuatro aves cruzadas Leghorn Hyline 36 blancas, alojadas en jaulas en series de ocho o nueve aves. Las gallinas tenían 21 semanas de edad al inicio de la prueba. Durante tres semanas antes de la prueba las aves se alimentaron con una dieta baja de xantofila como se detalla en la Tabla 1. La temperatura en el alojamiento durante la prueba varió de 20°C a 32°C. Las muestras experimentales de ORO GLO® se prepararon de la siguiente forma. A cantidades iguales de Kermin Amarillo el tensioactivo como se indica en la Tabla 15 se mezcló hasta que la mezcla fue homogénea. La mezcla se agregó después al portador seco. Estas fórmulas experimentales se aplicaron a la masa de alimento para aves de corral bajo en grasa, bajo en xantofila. Se preparó una mezcla de aceite de soya y grasa para aves de corral 1:1 y se aplicó a la mitad de cada tratamiento. Los tratamientos usados en esta prueba se listan posteriormente: TABLA 15: TRATAMIENTOS DE ALIMENTO DE GALLINA PONEDORA Xantofilas Tensioactwo Grasa Tratamiento (Teórico) kg/ton Agregada kg/ton Control — — — ORO GLO® seco 30gfon — — OGD + Aceite de maíz 30gfon 0.916 kgton de Aceite de maíz — OGD+ Lysoprin 30gfon 0.916kgjtonde Lysoprin — OGD+ Lecitina 30gton 0.916 kg/ton de Leátina — OGD; Dieta alta en grasa 30gton — 36.6 OGD + Aceite de maíz; dieta alta en 30gton 0.9 6 kg/ton de Aceite de Maíz 36.6 grasa OGD + Lysoprin; dieta alta en grasa 30gfon 0.916 kg/ton de Lysoprin 36.6 OGD + Leátina; dieta alta en grasa 30gtan 0.916 kgiton de Leátina 36.6 También se agregó liquido marca MYCO CURB® a cada tratamiento en 0.916 kg/ton . Se hizo la mezcla de las muestras del invento en un mezclador de banda a baja velocidad. Cada tratamiento se pesó dentro de bolsas Kraft poli-recubiertas, después de correrlo a través de un molino de martillos con un tamiz de molino. Se tomaron muestras y se analizaron por contenido de pigmento sin saponificación o cromatografía. A cuatro jaulas seleccionadas al azar se les administró cada uno de los nueve tratamientos. El alimento y el agua se dio ad libitum durante la duración de la prueba. Los huevos de cada jaula se recolectaron y contaron cada día. En el último día de la prueba los huevos de cada jaula se recolectaron para análisis. Las muestras de los huevos de cada jaula se pesaron para determinar el peso promedio del huevo y cinco huevos de cada docena se seleccionaron al azar y se reunieron con el tratamiento apropiado. Estos huevos se rompieron y las yemas se separaron de las claras, se hicieron composiciones y se mezclaron completamente, de lo cual se analizó una muestra de 2.5 g por equivalencia de ß-caroteno por el método 958.05 de la AOAC, y los puntajes de abanico de Roche. La conversión del pigmento se calculó de acuerdo a la siguiente fórmula: Conversión de Pigmento (%) = 100% x (BCE) x (peso en yema)x (huevos/día/gallina) (Pigmento) x (alimento/gallina/día) Para el análisis estadístico se dirigió un análisis de varianza con una prueba de rango múltiple de Duncan. La Tabla 16 exhibe los resultados de la determinación cuantitativa de los pigmentos y la conversión de pigmento en las yemas de los huevos. La adición de ORO GLO© al alimento bajo en pigmento aumentó la pigmentación de 7.49 a 52.00 de equivalentes de ß-caroteno. La inclusión de 4% o 36.6 kg/ton de aceite de soya/grasa para aves de corral 1:1 aumentó la pigmentación de 52.00 a 65.2 de equivalentes de ß-caroteno. La adición de 36.6 kg/ton de aceite de soya/grasa para aves de corral 1:1 a la dieta resultó en una conversión de pigmento 35.0% mejor comparado con la dieta baja en pigmento. Cuando se agregó aceite de maíz, lecitina o Lysoprin hasta una concentración final de 0.916 kg/ton de alimento con el ORO GLO® seco a la dieta baja en grasa o alta en grasa, la lecitina mostró el incremento mayor en pigmentación y conversión de pigmento (22.2% sobre el control de ORO GLO®) para la dieta baja en grasa, mientras que el Lysoprin resultó en el mejor incremento para la dieta alta en grasa (23.3% sobre el control de ORO GLO®/alta grasa). Sin embargo, los tratamientos de tensioactivo de la dieta baja en grasa no fueron estadísticamente diferentes entre cada uno. También se monitoreó la productividad de huevo de las gallinas ponedoras durante la duración de la prueba. Los resultados se muestran en la Tabla 17. No se dieron diferencias significativas en la productividad de huevo para los diversos tratamientos.

TABLA 16 : PIGMENTACION DE LAS YEMAS DE HUEVO CONFORME SE DETERMINO POR LOS METODOS DE EQUIVALENCIA DE ß-CAROTENO Y PUNTAJE DE ABANICO Pigmenb Equ'walentesde Conversión de en alimento (karoteno Pigmento Tratarniento (g/bn) Piir^deabank» (%) Control n/a 7.49a 2.1a n/a OROGLO®seco 27.5 52.00» 7.7".c 16.14a OGD+Ao8tedemaíz 26.5 53.18" 7.2" 17.49a-b OGD+Lysoprin 28.9 53.81 b 7.1 " 18.10a b CCD+Leátra 26.9 62.31c 7.5b.c 19.77a." OGD; Dieta alta en grasa 24.4 65.20c 8.1cd 21.79a,b,c OGD+Acete de maíz ¡dieta alta en grasa 22.7 71.22? 8.0c.d 21.48a'1" OGD + Lysoprin; dieta ate en grasa 23.2 75.411 8.5« 26.88"= OGD + LficÉia; dieta alta en grasa 24.2 72.30d 8.1c'd 23.40 -c Di ferente s s obres critos indi can di ferenci a s signi fi cat ivas ( P<0 . 05 ) TABLA 17 : PRODUCTIVIDAD COMO HUEVOS /GALLINA/DIA Huevos/ PesodeYema Peso de huevo Tratamiento gaiiafclía (g) Control 0.804 13.5 55.5 ORO GLO® seco 0.837 13.7 53.8 OGD +Acetede maíz 0.886 13.3 54.9 OGD + Lysoprin 0.908 13.7 55.7 CXÜD+ ÜBcitina 0.857 13.7 55.7 OGD; Dieta alta en grasa 0.839 13.6 54.6 OGD+Acete ele maíz; dieta afta en grasa 0.754 13.4 54.4 OGD + Lysoprin; dieta alta en grasa 0.895 13.7 55.4 OGD+ Ledtria; dieta alta en grasa 0.815 13.3 56.4 observó que una dieta alta en grasa conduce una conversión de pigmento y una utilización de pigmento más alta comparada con una dieta baja o sin grasa. Adicionalmente parece que mientas que la lecitina se desempeña mejor en una dieta baja en grasa, el Lysoprin se desempeña mejor en una dieta alta en grasa como se mide por la conversión de pigmento. La primera observación puede explicarse razonablemente por el hecho de que la toma por el ave y la acumulación de las moléculas carotenoides hidrofóbicas en la yema de huevo es más efectiva cuando se dispersa en la grasa en el intestino del animal. La segunda observación, sin embargo, parece reflejar un efecto más especifico con una eficiencia mucho mayor para la lecitina y el Lysoprin cuando se compara con la mezcla de aceite de soya/grasa para aves de corral. Mientras que el 4% de grasa se agregó al alimento, el aceite de maíz, la lecitina y el Lysoprin se mezclaron dentro del producto ORO GLO® en solamente 0.1% con relación al alimento final. Este efecto puede ser aún más pronunciado de lo que se refleja en los resultados de este estudio. Los pollos comen de acuerdo a su requerimiento de energía. Consumen menos alimento y, así, menos pigmento cuando se suministra una dieta de alta energía. Los resultados de este estudio no se corrigieron para la reducción en la toma de alimento cuando se consumió alimento con alta grasa. Puede especularse que la cercana proximidad entre los lípidos y los carotenoides en el producto ORO GLO® contribuye a la eficiencia observada. Como se ha investigado en diversas ocasiones (5), la lisolecitina cuando se compara con la lecitina contiene un 1-2% adicional de lípidos lisofosfatidilo los cuales parecen ser responsables de las propiedades emulsificadoras mejoradas del Lysoprin. Parece que el Lysoprin puede presentar eficiencia completa como un agente emulsificador solamente en una dieta suplementada con una cierta cantidad de grasa. Los resultados de este y estudios previos sugieren la posibilidad de incluir Lysoprin o lecitina en un producto comercial para una eficiencia mejorada de pigmentación. Con la lecitina o el Lysoprin incluido en un producto pigmentador puede lograrse una pigmentación deseada con menos pigmento y/o menos grasa. También, el suplemento de solamente pigmento amarillo podría llevar a puntajes de pigmentación más altos.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para incrementar la absorción y biodisponibilidad de carotenoides en humanos y aves de corral, caracterizado porque comprende las etapas de: a. combinar una tensioactivo con un carotenoide en donde la relación del tensioactivo al carotenoide está entre aproximadamente 5% y aproximadamente 30% por peso, y b. suministrar la combinación a humanos o aves de corral .
2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el tensioactivo se selecciona del grupo que incluye lecitina y lisolecitina .
3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el carotenoide se selecciona del grupo que incluye xantofilas.
4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el carotenoide se selecciona del grupo que incluye luteina y zeaxantina
5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el tensioactivo es uno o más tensioactivos seleccionados del grupo que incluye lecitina y lisolecitina y el carotenoide es uno o más carotenoides seleccionados del grupo que incluyen luteina y zeaxantina.
6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque los carotenoides se obtienen de pétalos de Tagetes erecta.
7. Un método para incrementar la absorción de carotenoides en los tejidos y yemas de huevo aves de corral, caracterizado porque comprende las etapas de: a. combinar uno o más tensioactivos seleccionados del grupo que incluye lecitina y lisolecitina con uno o más carotenoides seleccionados del grupo que incluye luteina y zeaxantina, en donde la relación del tensioactivo al carotenoide está entre aproximadamente 5% y aproximadamente 30% por peso; y b. suministrar la composición a aves de corral
8. Un método para incrementar la absorción de carotenoides en los tejidos, incluyendo la región sanguínea y macular de la retina, de humanos caracterizado porque comprende las etapas de: a. combinar uno o más tensioactivos seleccionados del grupo que incluye lecitina y lisolecitina con uno o más carotenoides seleccionados del grupo que incluye luteina y zeaxantina, en donde la relación del tensioactivo al carotenoide está entre aproximadamente 5% y aproximadamente 30% por peso; y b. suministrar la composición a humanos.
9. Un suplemento alimenticio para incrementar la absorción y biodisponibilidad de carotenoides en humanos y aves de corral, caracterizado porque comprende: a. un carotenoide; y b. un tensioactivo en donde el rango de tensioactivo a carotenoide está entre aproximadamente 5 % y aproximadamente 30% por peso.
10. El suplemento alimenticio de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el carotenoide se selecciona del grupo que incluye xantofilas.
11. El suplemento alimenticio de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el carotenoide se selecciona del grupo que incluye luteina y zeaxantina.
12. El suplemento alimenticio de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el tensioactivo se selecciona del grupo que incluye lecitina y lisolecitina.
13. El suplemento alimenticio de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque los carotenoides se obtienen a partir de pétalos de Tagetes erecta.