MXPA00002896A

MXPA00002896A - Antagonista del receptor de vitronectina

Info

Publication number: MXPA00002896A
Application number: MXPA/A/2000/002896A
Authority: MX
Inventors: Dirk Heerding
Original assignee: Miller William H; Smithkline Beecham Corporation
Priority date: 1997-09-24
Filing date: 2000-03-23
Publication date: 2001-12-04

Abstract

Se describen un compuesto de la fórmula (I):el cual es un antagonista del receptor de vitronectina y esútil en el tratamiento de osteoporosis, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

ANTAGONISTA DEL RECEPTOR DE VITRONECTINA CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a un compuesto farmacéuticamente activo que inhibe al receptor de vitronectina y que es útil para el tratamiento de inflamación, cáncer y trastornos cardiovasculares, tales como ateroesclerosis y restenosis, y enfermedades en las que la resorción de hueso es un factor, tales como osteoporosis.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las integrinas son una superfamilia de receptores de adhesión a célula, los cuales son glucoproteínas de transmembrana expresadas en una variedad de células. Estos receptores de adhesión a superficie de células incluyen gpl Ib/Illa (el receptor de fibrinógeno) y avß3 (el receptor de vitronectina). El receptor de fibrinógeno gpllb/llla es expresado sobre la superficie de plaquetas, y media la agregación de las plaquetas y la formación de un coágulo hemostático en el sitio de una herida sangrante. Philips y otros, Blood, 1998, 71 , 831. El receptor de vitronectina vß3 es expresado en un número de células, incluyendo células endoteliales, de músculo liso, de osteoclasto y tumorales, y, de esta manera, tiene una variedad de funciones. El receptor avß3 expresado sobre la membrana de las células de osteoclasto media la lesión de osteoclastos a la matriz de hueso, un paso clave en el proceso de resorción de hueso. Ross y otros, J. Biol. Chem., 1987, 262, 7703. Una enfermedad caracterizada por una excesiva resorción de hueso es la osteoporosis. El receptor vß3 expresado en células de músculo liso aórtico humano media su migración en la neoíntima, un proceso que puede llevar a la restenosis después de una angioplastia coronaria percutánea. Brown y otros, Cardiovascular res., 1994, 28, 1815. Además, Brooks y otros, Cell 1994, 79, 1157 ha mostrado que un antagonista de avß3 es capaz de promover la regresión de tumores induciendo la apoptosis de vasos sanguíneos angiogénicos. De esta manera, los agentes que bloquean el receptor de vitronectina serian útiles para tratar enfermedades, tales como osteoporosis, restenosis y cáncer. Se conoce ahora que el receptor de vitronectina se refiere a tres integrinas diferentes, designadas avß?, avß3 y avßs- Horton y otros, Int. J. Exp. Pathol., 1990, 71 , 741. avß? se une a fibronectina y vitonectrina. avß3 se une a una gran variedad de ligandos, incluyendo fibrina, fibrinógeno, laminina, trombospondina, vitronectina, factor de von Willebrand, osteopontina y sialoproteína de hueso I. vßs se une a vitronectina. El receptor de vitronectina avß5 ha mostrado estar implicado en la adhesión a células de una variedad de tipos de células, incluyendo células endoteliales microvasculares, (Davis y otros, J. Cell. Biol., 1993, 51 , 206), y se ha confirmado su papel en la angiogénesis. Brooks y otros, Science, 1994, 264, 569. Esta integrina es expresada sobre vasos sanguíneos en tejido de granulación de heridas humanas, pero no en piel normal. Se conoce que el receptor de vitronectina se une a proteínas de matriz de hueso que contienen el motivo de tri-péptido Arg-gly-Asp (o RGD). De esta manera, Horton y otros, Exp. Cell Res. 1991 , 195, 368, describen que los péptidos que contienen RGD y un anticuerpo receptor de anti-vitronectina (23C6) inhiben la resorción de dentina y la expansión de células por osteoclastos. Además, Sato y otros, J. Cell Biol. 1990, 111 , 1713 describe que la equistatina, un péptido de veneno de serpiente que contiene la secuencia de RGD, es un potente inhibidor de resorción de hueso en cultivos de tejido, e inhibe la unión de los osteoclastos al hueso. Se ha descubierto ahora que cierto compuesto es un potente inhibidor de los receptores avß3 y oc ßs- En particular, se ha descubierto que dicho compuesto es un inhibidor más potente del receptor de vitronectina que el receptor de fibrinógeno.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención comprende un compuesto de la fórmula (I) como el descrito más adelante en la presente, el cual tiene actividad farmacológica para la inhibición del receptor de vitronectina y es útil en el tratamiento de inflamación, cáncer y trastornos cardiovasculares, tales como ateroesclerosis y restenosis, y enfermadedes en las que la resorción de hueso es un factor, tales como osteoporosis. Esta invención es también una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Esta invención también es un método para tratar enfermedades que son mediadas por el receptor de vitronectina. En un aspecto particular, los compuestos de esta invención son útiles para tratar ateroesclerosis, restenosis, inflamación, cáncer y enfermedades en las que la resorción de hueso es un factor, tales como osteoporosis.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Esta invención comprende un compuesto novedoso que es un inhibidor más potente del receptor de vitronectina que el receptor de fibrinógeno. El compuesto novedoso comprende un núcleo de benzazepina en el cual está presente un sustituyente que contiene nitrógeno sobre uno de los anillos aromáticos de seis miembros de la benzazepina, y un sustituyente alifático que contiene una porción acida está presente sobre el anillo de siete miembros de la benzazepina. Se cree que el sistema de anillo de benzazepina interactúa favorablemente con el receptor de vitronectina y que orienta las cadenas laterales sustituyentes sobre los anillos de seis y siete miembros para que también puedan interactuar favorablemente con el receptor. Se prefiere que aproximadamente doce a catorce enlaces covalentes interventores por medio de la vía intramolecular más corta existirán entre el grupo ácido sobre el sustituyente alifático del anillo de siete miembros de la benzazepina y el nitrógeno del sustituyente que contiene nitrógeno sobre uno de los anillos aromáticos de seis miembros de la benzazepina. Esta invención comprende un compuesto de la fórmula (I): o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Este compuesto es ácido (S)-8-[3-(4-metilp¡ridin-2-ilam¡no)-1-propiloxi]-3-oxo-2-[4-(trifluorometil)bencil]-2,3,4, 5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acético. El compuesto de la fórmula (I) inhibe la unión de vitronectina y otros péptidos que contienen RGD al receptor de vitronectina. La inhibición del receptor de vitronectina en osteoclastos inhibe la resorción de hueso osteoclástico y es útil en el tratamiento de enfermadades en las que la resorción de hueso está asociada con la patología, tales como osteoporosis y osteoartritis. En otro aspecto, esta invención es un método para estimular la formación de hueso que comprende administrar un compuesto de la fórmula (I) que ocasiona un incremento en la liberación de osteocalcina. La producción de hueso incrementada es un beneficio claro en estados de enfermedad en los que hay una deficiencia de masa de hueso mineralizada o se desea la remodelación del hueso, tales como curación de fracturas y la prevención de fracturas de hueso. Las enfermedades y trastornos metabólicos que resultan en la pérdida de la estructura del hueso también se beneficiarían de dicho tratamiento. Por ejemplo, hiperparatiroidismo, enfermedad de Paget, hipercalcemia de malignidad, lesiones osteolíticas producidas por metástasis de hueso, pérdida de hueso debido a la inmovilización o deficiencia de hormona de sexo, enfermedad de Behct, osteomalacia, hiperostosis y osteopetrosis, se beneficiarían a partir de la administración de un compuesto de esta invención. Además, ya que el compuesto de la presente invención inhibe los receptores de vitronectina en un número de tipos de células diferentes, dicho compuesto sería útil en el tratamiento de trastornos inflamatorios, tales como artritis reumatoide y psoriasis, y enfermedades cardiovasculares tales como ateroesclerosis y restenosis. El compuesto de la fórmula (I) de la presente invención puede ser útil para el tratamiento o prevención de otras enfermedades incluyendo, pero no limitadas a, trastornos tromboembólicos, asma, alergias, síndrome de tensión respiratoria en adulto, enfermedad de injerto contra hospedero, rechazo de transplante de órgano, choque séptico, eccema, dermatitis por contacto, enfermedad inflamatoria del intestino y otras enfermedades autoinmunes. El compuesto de la presente invención también puede ser útil para la sanación de heridas.

El compuesto de la presente invención también es útil para el tratamiento, incluyendo la prevención, de trastornos angiogénicos. El término trastornos angiogénicos según se usa en la presente, incluye condiciones que implican la neovascularización anormal. Cuando el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos sea la causa de, o contribuya a, la patología asociada con una enfermedad, la inhibición de la angiogénesis reducirá loe efectos dañinos de la enfermedad. Un ejemplo de dicha enfermedad blanco es la retinopatía diabética. Cuando el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos se requiera para soportar el crecimiento de un tejido dañino, la inhibición de la angiogénesis reducirá el suministro de sangre al tejido y contribuirá de esta manera a la reducción en la masa del tejido en base a los requerimientos de suministro de sangre. Ejemplos incluyen el crecimiento de tumores en donde la neovascularización es un requerimiento continuo para que el tumor crezca, y el establecimiento de metástasis de tumores sólidos. De esta manera, el compuesto de la presente invención inhibe la angiogénesis de tejidos de tumor, evitando de esta manera la metástasis de tumor y el crecimiento del mismo. De esta manera, de acuerdo con los métodos de la presente invención, la inhibición de la angiogénesis usando el compuesto de la presente invención puede disminuir los síntomas de la enfermedad, y, en algunos casos, puede curar la enfermedad. Otro objetivo terapéutico para el compuesto de la presente invención son las enfermedades de ojo caracterizadas por neovascularización.

Dichas enfermedades de ojo incluyen trastornos neovasculares de la córnea, tales como transplante de córnea, queratitis herpética, queratitis luética, pterigio y paño neovascular asociado con el uso de lentes de contacto. Enfermedades de ojo adicionales incluyen también degeneración macular relacionada con la edad, histoplasmosis ocular presunta, retinopatía de prematuridad y glaucoma neovascular. Esta invención provee además un método para inhibir el crecimiento de tumores, que comprende administrar por pasos o en combinación física un compuesto de la fórmula (I) y un agente antineoplásico, tal como topotecano y cisplatina. También se incluyen en esta invención los profármacos de los compuestos de esta invención. Los profármacos se consideran cualesquiera vehículos covalentemente unidos que liberen el fármaco de origen activo de acuerdo con la fórmula (I) in vivo. De esta manera, en otro aspecto de esta invención están los profármacos novedosos, los cuales son también intermediarios en la preparación del compuesto de la fórmula (I), de la fórmula (II): o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otro aspecto más de esta invención están los intermediarios novedosos de la fórmula (lll): o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Las abreviaturas y símbolos usados comúnmente en las técnicas de péptidos y química se usan en la presente para describir los compuestos de esta invención. En general, las abreviaturas de aminoácidos siguen la nomenclatura de IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature como se describe en Eur. J. Biochem, 158, 9 (1984). Alquilo de C?-6 según se aplica en la presente, significa un grupo alquilo sustituido opcionalmente de 1 a 6 átomos de carbono, e incluye metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo y t-butilo. Alquilo de C?-6 incluye además pentilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo y hexilo y los isómeros alifáticos simples del mismo. Ciertos reactivos se abrevian en la presente. DCC se refiere a diciclohexilcarbodiimida, DMAP se refiere a dimetilaminopiridina, DIEA se refiere a diisopropiletilamina, EDC se refiere a clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida. HOBt se refiere a 1 -hidroxibenzotriazol, THF se refiere a tetrahidrofurano, DIEA se refiere a diisopropiletilamina, DEAD se refiere a azodicarboxilato de dietilo, PPh3 se refiere a trifenilfosfina, DIAD se refiere a azodicarboxilato de diisopropilo, DME se refiere a dimetoxietano, DMF se refiere a dimetilformamida, NBS se refiere a N-bromosuccinimida, Pd/C se refiere a un catalizador de paladio sobre carbón, PPA se refiere a ácido polifosfórico, DPPA se refiere a azida de difenilfosforilo, BOP se refiere a hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino)fosfonio, HF se refiere a ácido fluorhídrico, TEA se refiere a trietilamina, TFA se refiere a ácido trifluoroacético, PCC se refiere a clorocromiato de piridinio. Los compuestos de la fórmula (I) se preparan generalmente mediante los métodos descritos en Bondinelli y otros, solicitud de PCT WO 93/00095, publicada el 7 de enero de 1993, y Bondinelli y otros, solicitud de PCT WO 94/14776, cuya descripción completa se incorpora en la presente a manera de referencia. Además, el compuesto de la fórmula (I) se prepara mediante los métodos detallados en el esquema a continuación.

ESQUEMA I a) NaH, bromuro de 4-(trifluorometil)bencilo, DMF; b) H2, Pd(OH)2/C, MeOH; c) N-óxido de 2-[(3-hidroxi-1-propil)amino]-4-metilpiridina, DEAD, (Ph)3P, CH2CI2; d) ciclohexeno, 10% Pd/C, MeOH; e) NaOH 1.0 N, EtOH; f) HCl, H20. El compuesto de la fórmula 1-1 , preparado mediante los procedimientos generales descritos en Bondinelli y otros, solicitud de PCT WO 93/00095, publicada el 7 de enero de 1993, y Bondinelli y otros, solicitud de PCT WO 94/14776, se hace reaccionar con bromuro de 4-(trifluorometil)bencilo en presencia de una base adecuada, generalmente hidruro de sodio o bis(trimetilsilil)amida de litio, en un solvente aprótico, preferiblemente DMF, THF o mezclas de los mismos, para dar el producto bis-alquilado I-2. El éter 4-(trifluorometil)bencílico de I-2 puede removerse convenientemente mediante hidrogenólisis para proveer el fenol I-3. Los métodos para la hidrogenólisis de éteres bencílicos se conocen bien por los expertos en la técnica, y se describen en volúmenes de referencia adecuados, por ejemplo en Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis" (publicado por Wiley-lnterscience). El compuesto I-3 se hace reaccionar con N-óxido de 2-[(3-hidroxi-1-propil)amino]-4-metilpiridina en una reacción de copulación tipo Mitsunobu (Organic Reactions 1992, 42, 335-656; Synthesis 1981 , 1-28) para dar I-4. La reacción es mediada por el complejo formado entre azodicarboxilato de dietilo y trifenilfosfina, y es conducida en un solvente aprótico, por ejemplo THF, CH2CI2 o DMF. La porción de N-óxido de piridina de I-4 es reducida a la piridina I-5 correspondiente bajo condiciones de hidrogenación de transferencia usando un catalizador de paladio, preferiblemente metal de paladio sobre carbón activado, en un solvente inerte, por ejemplo metanol, etanol o 2-propanol. Ciclohexeno, 1 ,4-ciclohexadieno, ácido fórmico y sales de ácido fórmico, tales como formiato de potasio o formiato de amonio, se usan comúnmente como el reactivo de transferencia de hidrógeno en este tipo de reacción. El éster metílico de I-5 es hidrolizado usando una base acuosa, por ejemplo, LiOH en THF acuoso o NaOH en metanol o etanol acuoso, y la sal carboxilato intermediaria es acidificada con un ácido adecuado, por ejemplo TFA o HCl, para dar el ácido carboxílico I-6. Como alternativa, la sal carboxilato intermediaria puede ser aislada, si se desea, o una sal carboxilato del ácido carboxílico libre puede prepararse mediante métodos bien conocidos por los expertos en la técnica. Las sales acidas de adición del compuesto se preparan de manera normal en un solvente adecuado a partir del compuesto de origen y un exceso de un ácido, tal como ácido clorhídrico, bromhídrico, fluorhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, trifluoroacético, maleico, succínico o metansulfónico. Las sales catiónicas se preparan tratando el compuesto de origen con un exceso de un reactivo alcalino, tal como un hidróxido, carbonato o alcóxido, que contenga el catión adecuado, o con una amina orgánica adecuada. Cationes tales como Li+, Na+, K+, Ca++, Mg++ y NH4+ son ejemplos específicos de cationes presentes en sales farmacéuticamente aceptables. Esta invención provee también una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En consecuencia, el compuesto de la fórmula (I) puede usarse en la fabricación de un medicamento. Las composiciones farmacéuticas del compuesto de la fórmula (I) preparadas como se describió anteriormente en la presente pueden formularse como soluciones o polvos liofilizados para administración parenteral. Los polvos pueden reconstituirse mediante la adición de un diluyente adecuado u otro vehículo farmacéuticamente aceptable antes de usarse. La formulación líquida puede ser una solución de pH regulado, isotónica u acuosa. Ejemplos de diluyentes adecuados son solución salina isotónica normal, dextrosa al 5% normal en agua o solución de acetato de sodio o amonio de pH regulado. Dicha formulación es especialmente adecuada para la administración parenteral, pero también puede usarse para administración oral o contenerse en un inhalador de dosis medida o nebulizador para insuflación. Puede ser deseable añadir excipientes tales como polivinilpirrolidona, gelatina, hidroxicelulosa, acacia, polietilenglicol, manitol, cloruro de sodio o citato de sodio. Como alternativa, el compuesto puede ser encapsulado, tableteado o preparado en una emulsión o jarabe para administración oral. Los vehículos sólidos o líquidos farmacéuticamente aceptables pueden añadirse para mejorar o estabilizar la composición, o para facilitar la preparación de la composición. Los vehículos sólidos incluyen almidón, lactosa, sulfato de calcio dihidratado, tierra alba, estearato de magnesio o ácido esteárico, talco, pectina, acacia, agar o gelatina. Los vehículos líquidos incluyen jarabe, aceite de cacahuate, aceite de oliva, solución salina y agua. El vehículo puede incluir también un material de liberación prolongada tal como monoestearato de glicerilo o distearato de glicerilo, solo o con una cera.

La cantidad de vehículo sólido varía, pero de preferencia será de entre aproximadamente 20 mg a aproximadamente 1 g por unidad de dosis. Las preparaciones farmacéuticas se hacen siguiendo las técnicas convencionales de farmacología que incluyen pulverización, mezclado, granulado y compresión, cuando sea necesario, para formas de tableta; o pulverización, mezclado y rellenado para formas de cápsula de gelatina dura. Cuando se usa un vehículo líquido, la preparación estará en forma de un jarabe, elixir, emulsión o una suspensión acuosa o no acuosa. Dicha formulación líquida puede administrarse directamente p.o. o llenarse en una cápsula de gelatina suave. Para la administración rectal, el compuesto de esta invención también puede combinarse con excipientes tales como manteca de cacao, glicerina, gelatina o polietilenglicoles y moldearse en un supositorio. El compuesto descrito en la presente es un antagonistas del receptor de vitronectina, y es útil para tratar enfermedades en las que la patología subyacente sea atribuible a ligandos o células que interactúen con el receptor de victronectina. Por ejemplo, este compuesto es útil para el tratamiento de enfermedades en las que la pérdida de la matriz de hueso cree una patología. De esta manera, el presente compuesto es útil para el tratamiento de ostoeporosis, hiperparatiroidismo, enfermedad de Paget, hipercalcemina de malignidad, lesiones osteolíticas producidas por metástasis de hueso, pérdida de hueso debido a inmovilización o deficiencia de hormona de sexo. También se cree que el compuesto de esta invención tiene utilidad como agente antitumoral, antiangiogénico, antiinflamatorio y antimetastásico, y es útil en el tratamiento de ateroesclerosis y restenosis. El compuesto se administra ya sea oral o parenteralmente al paciente, de un manera tal que la concentración del fármaco sea suficiente para inhibir la resorción de hueso, u otra indicación tal. La composición farmacéutica que contiene el compuesto se administra a una dosis oral de entre aproximadamente 0.1 a aproximadamente 50 mg/kg de manera consistente con la condición del paciente. De preferencia, la dosis oral sería de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 20 mg/kg. Para una terapia aguda se prefiere la administración parenteral. Una infusión intravenosa del péptido en dextrosa al 5% en agua o solución salina normal, o una formulación similar con excipientes adecuados, es muy efectiva, aunque también es útil una inyección de bolo intramuscular. Típicamente, la dosis parenteral será de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 100 mg/kg; preferiblemente entre 0.1 y 20 mg/kg. El compuesto se administra una a cuatro veces al día a un nivel para lograr una dosis diaria total de aproximadamente 0.4 a aproximadamente 400 mg/kg/día. El nivel preciso y método mediante los cuales se administra el compuesto se determina fácilmente por un experto en la técnica, comparando el nivel del agente en la sangre con la concentración requerida para tener un efecto terapéutico. Esta invención provee además un método para tratar osteoporosis o inhibir la pérdida de hueso, el cual comprende administrar por pasos o en combinación física un compuesto de la fórmula (I) y otros inhibidores de resorción de hueso, tales como bisfosfonatos (es decir, alendronato), terapia de reemplazo de hormonas, antiestrógenos o calcitonina. Además, esta invención provee un método de tratamiento usando un compuesto de esta invención y un agente anabólico, tal como la proteína morfogénica de hueso, ¡proflavona, útil en la prevención de la pérdida de hueso y/o para incrementar la masa de hueso. Además, esta invención provee un método para inhibir el crecimiento de tumores, que comprende administrar por pasos o en combinación física un compuesto de la fórmula (I) y un agente antineoplásico. Los compuestos de la clase análoga de camptotecina, tales como topotecano, irinotecano y 9-aminocamptotecina, y complejos de coordinación de platino, tales como cisplatina, ormaplatina y tetraplatina, son grupos bien conocidos de agentes antineoplásicos. Los compuestos de la clase análoga de camoptotecina se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 5,004,758, 4,604,463, 4,473,692, 4,545,880, 4,342,776, 4,513,138, 4,399,276, Nos. de publicación de solicitud de patente de EP 0418 099 y 0 088 642. Wani y otros, J. Med Chem, 1986, 29, 2358, Wani y otros, J. Med. Chem., 1980, 23, 554, Wani y otros, J. Med. Chem., 1987, 30, 1774 y Nitta y otros, Proc. 14th International Congr. Chemotherapy., 1985, Anticancer Section 1 , 28, cuyas descripciones completas de cada una se incorporan en la presente a manera de referencia. El complejo de coordinación de platino, cisplatina, está disponible bajo el nombre comercial Platinol® de Bristol Myers-Squibb Corporation. Las formulaciones útiles para cisplatina se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 5,562.925 y 4,310,515, cuya descripción completa de cada una se incorpora en la presente a manera de referencia. En el método para inhibir el crecimiento de tumores que comprende administrar por pasos o en combinación física un compuesto de la fórmula (I) y un agente antineoplásico, el compuesto de coordinación de platino, por ejemplo cisplatina, se puede administrar usando una infusión intravenosa lenta. El vehículo que se prefiere es una solución de dextrosa/solución salina que contenga manitol. El régimen de dosificación del compuesto de coordinación de platino puede ser en base a aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg por metro cuadrado (mg/m2) de área de la superficie del cuerpo por curso de tratamiento. Las infusiones del compuesto de coordinación de platino pueden darse una o dos veces a la semana, y los tratamientos semanales se pueden repetir varias veces. Usando un compuesto de la clase análoga de campotecina en una administración parenteral, el curso de la terapia generalmente empleado es de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 300.0 mg/m2 de área de superficie del cuerpo al día durante aproximadamente cinco días consecutivos. De manera muy preferible, el curso de la terapia empleada para topotecano es de aproximadamente 1.0 a aproximadamente 2.0 mg/m2 de área de superficie del cuerpo al día durante aproximadamente cinco días consecutivos. De preferencia, el curso de la terapia se repite por lo menos una vez a un intervalo de aproximadamente siete días a aproximadamente veintiocho días.

La composición farmacéutica puede formularse tanto con el compuesto de la fórmula (I) como con el agente antineoplásico en el mismo contenedor, pero la formulación se prefieren diferentes contenedores. Cuando se proveen ambos agentes en forma de solución, pueden estar contenidos en un sistema de infusión/inyección para su administración simultánea o en una disposición en línea. Para la administración conveniente del compuesto de la fórmula (I) y el agente antineoplásico al mismo o diferentes tiempos, se prepara un equipo que comprende, en un solo contenedor tal como una caja, cartón u otro contenedor, botellas individuales, bolsas, frascos u otros contenedores que tengan cada uno una cantidad efectiva del compuesto de la fórmula (I) para administración parenteral, como se describió arriba, y una cantidad defectiva del agente antineoplásico para administración parenteral, como se describió arriba. Dicho equipo puede comprender, por ejemplo, tanto agentes farmacéuticos en contenedores separados o el mismo contenedor, opcionalmente como tapones liofilizados, como contenedores de soluciones para reconstitución. Una variación de esto es incluir la solución para reconstitución y el tapón liofilizado en dos cámaras de un solo contenedor, los cuales pueden mezclarse antes de usar. Con dicha disposición, el agente antineoplásico y el compuesto de esta invención pueden empacarse por separado, como en dos contenedores, o liofilizarse juntos como un polvo y proveerse en un solo contenedor.

Cuando se proveen ambos agentes en forma de solución, pueden estar contenidos en un sistema de infusión/inyección para la administración simultánea o en una disposición en línea. Por ejemplo, el compuesto de la fórmula (I) puede ser una forma inyectable por vía intravenosa, o una bolsa de infusión unida en serie, por medios de tubos, al agente antineoplásico en una segunda bolsa de infusión. Mediante el uso de dicho sistema, un paciente puede recibir una inyección tipo bolo inicial o infusión del compuesto de la fórmula (I) seguida por una infusión del agente antineoplásico. El compuesto puede probarse en una de varias pruebas biológicas para determinar la concentración de compuesto que se requiera para tener cierto efecto farmacológico.

Inhibición de la unión a vitronectina Unión de [3H]-SK&F-107260 de fase sólida a a 3: Placenta humana o plaquetas humanas avß3 (0.1-0.3 mg/mL) en regulador de pH T (que contenía 2 mM de CaCI2 y octilglucósido al 1 %) se diluyó con regulador de pH T que contenía 1 mM de CaCI2, 1 mM de MnCI2, 1 mM de MgCI2 (regulador de pH A) y NaN3 al 0.05% y después se añadió inmediatamente a placas ELISA de 96 cavidades (Corning, Nueva York, NY) a 0.1 mL por cavidad. Se añadió 0.1-0.2 µg de avß3 por cavidad. Las placas se incubaron durante la noche a 4°C. En el momento del experimento, las cavidades se lavaron una vez con regulador de pH A y se incubaron con 0.1 mL de albúmina de suero de bovino al 3.5% en el mismo regulador de pH durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la incubación las cavidades se aspiraron completamente y se lavaron dos veces con 0.2 mL de regulador de pH A. Los compuestos se disolvieron en DMSO al 100% para dar una solución de abastecimiento 2 mM, la cual se diluyó con regulador de pH de unión (15 mM de Tris-HCl (pH 7.4), 100 mM de NaCI, 1 mM de CaCI2, 1 mM de MnCl2, 1 mM de MgCI2) hasta una concentración de compuesto final de 100 µM. Esta solución se diluyó después a la concentración de compuesto final necesaria. Se añadieron varias concentraciones de antagonistas no marcados (0.001 - 100 µM) a las cavidades por triplicado, seguidas por la adición de 5.0 nM de [3H]-SK&F-107260 (65 - 86 Ci/mmol). Las placas se incubaron durante una hora a temperatura ambiente. Después de la incubación las cavidades se aspiraron completamente y se lavaron una vez con 0.2 mL de regulador de pH A enfriado con hielo en forma de cavidad a cavidad. Los receptores se solubilizaron con 0.1 mL de SDS al 1 % y el [3H]-SK&F-107260 unido se determinó mediante conteo por escintilación líquida con la adición de 3 mL de Ready Safe en un contador de escintilación líquida LS Beckman, con una eficiencia del 40%. La unión no específica de [3H]-SK&F-107260 se determinó en presencia de 2µM de SK&F-107260 y fue consistentemente menor al 1% de la entrada de radioligando total. La IC50 (concentración del antagonista para inhibir 50% de unión de [3H]-SK&F-107260) se determinó por una rutina de adaptación de curva de cuadros finales y no lineales, la cual se modificó del programa LUNDON-2. La K¡ (constante de disociación del antagonista) se calculó de acuerdo con la ecuación: K¡=IC50/(1 + L/kd), en donde L y Kd fueron la concentración y la constante de disociación de [3H]-SK&F-107260, respectivamente. El compuesto de la presente invención inhibe la unión de vitronectina a SK&F 107260 en la escala de concentración de aproximadamente 0.003 micromolar. El compuesto de esta invención también se prueba para la resorción de hueso in vitro e in vivo en pruebas estándar en la técnica para evaluar la inhibición de la formación de hueso, tal como la prueba de formación de hueco descrita en EP 528 587, que también puede llevarse a cabo usando osteoclastos humanos en lugar de osteoclastos de rata, y el modelo de rata ovarectomizada, descrito por Wronski y otros, Cells and Materials 1991, Sup. 1 , 69-74.

Prueba de migración de células de músculo liso vascular Se usaron células de músculo liso aórtico de rata o humano. La migración de células se monitoreó en una cámara de cultivo de células Transwell usando una membrana de policarbonato con poros de 8 um (Costar). La superficie inferior del filtro se recubrió con victronectina. Las células se suspendieron en DMEM complementado con albúmina de suero de bovino al 0.2% a una concentración de 2.5 - 5.0 x 106 células/mL, y se pretrataron con compuesto de prueba a varias concentraciones durante 20 minutos a 20°C. El solvente solo se usó como control. Se colocaron 0.2 mL de la suspensión de células en el compartimiento superior de la cámara. El compartimiento inferior contenía 0.6 mL de DMEM complementado con albúmina de suero de bovino al 0.2%. La incubación se llevó a cabo a 37°C en una atmósfera de 95% de aire/5% de C02 durante 24 horas. Después de la incubación, las células que no migraron sobre la superficie superior del filtro se removieron mediante raspado suave. El filtro se fijó después en metanol y se tiñó con tinción Giemsa al 10%. Se midió la migración ya sea a) contando el número de células que habían migrado a la superficie inferior del filtro, o b) extrayendo las células teñidas con ácido acético al 10% seguidas por la determinación de la absorbancia a 600 nM.

Modelo de rata tiroparatiroidectomizada Cada grupo experimental consiste de 5-6 ratas Sprague-Dawley macho adultas (250-400 g de peso corporal). Las ratas son tiroparatiroidectomizadas (por el vendedor, Taconic Farms) 7 días antes de usarse. Todas las ratas reciben una dosis de reemplazo de tiroxina cada 3 días. Después de recibir las ratas, los niveles de calcio ionizado circulante se miden en sangre entera inmediatamente después de que se ha extraído mediante venipunción de la cola en tubos heparinizados. Las ratas incluyen si el nivel de Ca ionizado (medido con un analizador de pH de calcio Ciba-Corning modelo 634) es <1.2 mM/L. Cada rata es equipada con un catéter residente venoso y arterial para el suministro del material de prueba y para el muestreo de sangre respectivamente. Las ratas se ponen después en una dieta de alimento libre de calcio y agua desionizada. Se miden los niveles de Ca de línea de base y a cada rata se le administra vehículo de control o péptido de hormona paratiroidea 1-34 humana (hPTH1-34, dosis 1.25 ug/kg/h en solución salina/0.1 % de albúmina de suero de bovino, Bachem, Ca) o una mezcla de hPTH1-34 y material de prueba, mediante infusión intravenosa continua por medio del catéter venoso usando una bomba de jeringa externa. La respuesta calcémica de cada rata se mide a intervalos de dos horas durante el periodo de infusión de 6-8 horas.

Pruebas de resorción y adhesión de osteoclasto humano Las pruebas de reasorción y adhesión de hueco se han desarrollado y estandarizado usando osteoclastos humanos normales derivados de tejido de osteoclastoma. La prueba 1 se desarrolló para la medición de volúmenes de hueco de osteoclasto mediante microscopía confocal láser. La prueba 2 se desarrolló como un análisis de velocidad de emisión más alta en la cual fragmentos de colágeno (liberados durante la resorción) se miden mediante ELISA competitiva.

Prueba 1 (usando microscopía confocal láser) • Alícuotas de suspensiones de células derivadas de osteoclastoma humano se remueven de un almacenamiento de nitrógeno líquido, se calientan rápidamente a 37°C y se lavan x 1 en medio RPMI-1640 mediante centrifugación (1000 rpm, 5 minutos a 4°C). • El medio es aspirado y reemplazado con anticuerpo anti-HLA-DR de murino y después se diluye 1 :3 en medio RPMI-1640. La suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo y se mezcla frecuentemente. • Las células se lavan x 2 con RPMI-1640 frío seguidas por centrifugación (1000 rpm, 5 minutos a 4°C) y las células se transfieren después a un tubo centrifugo de 15 ml estéril. El número de células mononucleares se enumeran en una cámara contadora Neubauer mejorada. • Suficientes esferas magnéticas (5 / célula mononuclear), recubiertas con IgG de cabra anti-ratón (Dynal, Great Neck, NY) se remueven de su botella de abastecimiento y se colocan en 5 ml de medio fresco (esto deslava el conservador de azida tóxico). El medio se remueve movilizando las esferas sobre un imán y se reemplaza con medio fresco. • Las esferas se mezclan con las células y la suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo. La suspensión se mezcla frecuentemente. • Las células recubiertas con esferas se inmovilizan sobre un imán y las células restantes (fracción rica en osteoclastos) se decantan en un tubo centrífugo de 50 ml estéril. • Se añade medio fresco a las células recubiertas con esferas para desalojar cualquier osteoclasto atrapado. Este procedimiento de lavado se repite x 10. Después se descartan las células recubiertas con esferas. • Los osteoclastos viables son enumerados en una cámara de conteo, usando diacetato de fluoresceína para marcar las células vivas. Se usa una pipeta pasteur de plástico desechable de agujero amplio para añadir la muestra a la cámara • Los osteoclastos son peletizados mediante centrifugación y la densidad se ajusta al número adecuado en medio EMEM (el número de osteoclastos es variable de tumor a tumor), complementado con suero de becerro fetal al 10% y 1.7 g/litro de bicarbonato de sodio. • Alícuotas de 3 ml de la suspensión de células (por tratamiento de compuesto) se decantan en tubos centrífugos de 15 ml. Las células se peletizan mediante centrifugación. • A cada tubo se le añaden 3 ml del tratamiento de compuesto adecuado (diluido a 50 uM en el medio EMEM). También se incluyen los controles de vehículo adecuados, un control positivo (anticuerpo monoclonal de murino de receptor de anti-vitronectina [87MEM1] diluido a 100 ug/ml) y un control de isotipo (lgG2a diluido a 100 ug/ml). Las muestras se incuban a 37° durante 30 minutos. • Alícuotas de 0.5 ml de las células se siembran sobre portaobjetos de dentina estériles en una placa de 48 cavidades y se incuban a 37°C durante 2 horas. Cada tratamiento se analiza por cuadruplicado. • Los portaobjetos se lavan en seis cambios de PBS caliente (10 ml / cavidad en una placa de 6 cavidades) y después se colocan en medio fresco que contiene el tratamiento de compuesto o muestras de control. Las muestras se incuban a 37°C durante 48 horas.

Procedimiento de ácido fosfatasa resistente a trartrato (TRAP) (tinción selectiva para células del linaje de osteoclasto) • Los portaobjetos de hueso que contienen los osteoclastos unidos se lavan en solución salina de pH regulado con fosfato y se fijan en glutaraldehído al 2% (en cacodilato de sodio 0.2M) durante 5 minutos. • Después se lavan en agua y se incuban durante 4 minutos en regulador de pH TRAP a 37°C (0.5 mg/ml de naftol AS-BI fosfato disuelto en N,N-dimetilformamida y mezclado con regulador de pH de citrato 0.25 M (pH 4.5), que contiene 10 mM de tartrato de sodio. • Después de un lavado en agua fría los portaobjetos son sumergidos en regulador de pH de acetato frío (0.1 M, pH 6.2) que contiene 1 mg/ml de granate rojo rápido y se incuban a 4°C durante 4 minutos. • Se aspira el exceso del regulador de pH y los portaobjetos se secan al aire después de un lavado en agua. • Los osteoclastos positivos a TRAP (precipitado rojo ladrillo/púrpura) son enumerados mediante microscopía de campo brillante y después se remueven de la superficie de la dentina mediante sonificación. Los volúmenes de hueco se determinan usando el microscopio confocal Nikon/Lasertec ILM21W.

Prueba 2 (usando una lectura de ELISA) Los osteoclastos humanos son enriquecidos y preparados para el análisis del compuesto como se describen los pasos 9 iniciales de la prueba 1. Para claridad, estos pasos se repiten a continuación. • Alícuotas de suspensiones de células derivadas de osteoclastoma humano se remueven de un almacenamiento de nitrógeno líquido, se calientan rápidamente a 37°C y se lavan x 1 en medio RPMI-1640 mediante centrifugación (1000 rpm, 5 minutos a 4°C). • El medio es aspirado y reemplazado con anticuerpo anti-HLA-DR de murino y después se diluye 1 :3 en medio RPMI-1640. La suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo y se mezcla frecuentemente. • Las células se lavan x 2 con RPMI-1640 frío seguidas por centrifugación (1000 rpm, 5 minutos a 4°C) y las células se transfieren después a un tubo centrifugo de 15 ml estéril. El número de células mononucleares se enumeran en una cámara contadora Neubauer mejorada. • Suficientes esferas magnéticas (5 / célula mononuclear), recubiertas con IgG de cabra anti-ratón (Dynal, Great Neck, NY) se remueven de su botella de abastecimiento y se colocan en 5 ml de medio fresco (esto deslava el conservador de azida tóxico). El medio se remueve movilizando las esferas sobre un imán y se reemplaza con medio fresco. • Las esferas se mezclan con las células y la suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo. La suspensión se mezcla frecuentemente. • Las células recubiertas con esferas se inmovilizan sobre un imán y las células restantes (fracción rica en osteoclastos) se decantan en un tubo centrífugo de 50 ml estéril.

• Se añade medio fresco a las células recubiertas con esferas para desalojar cualquier osteoclasto atrapado. Este procedimiento de lavado se repite x 10. Después se descartan las células recubiertas con esferas. • Los osteoclastos viables son enumerados en una cámara de conteo, usando diacetato de fluoresceína para marcar las células vivas. Se usa una pipeta pasteur de plástico desechable de agujero amplio para añadir la muestra a la cámara • Los osteoclastos son peletizados mediante centrifugación y la densidad se ajusta al número adecuado en medio EMEM (el número de osteoclastos es variable de tumor a tumor), complementado con suero de becerro fetal al 10% y 1.7 g/litro de bicarbonato de sodio. A diferencia del método descrito arriba en la prueba 1 , los compuestos se analizan a 4 dosis para obtener una IC50, como se indica abajo: • Las preparaciones de osteoclasto se preincuban durante 30 minutos a 37°C con el compuesto de prueba (4 dosis) o controles. • Después son sembrados sobre portaobjetos de hueso cortical de bovino en cavidades de una placa de cultivo de tejido de 48 cavidades y se incuban durante 2 horas adicionales a 37°C. • Los portaobjetos de hueso se lavan en seis cambios de solución salina de pH regulado con fosfato caliente (PBS), para remover células no adherentes, y después se regresan a las cavidades de una placa de 48 cavidades que contiene compuesto fresco o controles.

• La placa de cultivo de tejido se incuba después durante 48 horas a 37°C. • Los sobrenadantes de cada cavidad se aspiran en tubos individuales y se analizan en una ELISA competitiva que detecta el c-telopéptido de colágeno tipo I que es liberado durante el proceso de resorción. Esta es una ELISA disponible comerciaimente (Osteometer, Dinamarca) que contiene un anticuerpo de conejo que reacciona de manera específica con una secuencia de 8 amino ácidos (Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg) que está presente en el telopéptido carboxi-terminal de la cadena a1 de colágeno tipo 1. Los resultados se exponen como % de inhibición de resorción en comparación con un control de vehículo.

Prueba de adhesión de osteoclasto humano Los osteoclastos humanos son enriquecidos y preparados para el análisis de compuesto como se describió arriba en los 9 pasos iniciales de la prueba 1. Para mayor claridad, estos pasos se repiten a continuación. • Alícuotas de suspensiones de células derivadas de osteoclastoma humano se remueven de un almacenamiento de nitrógeno líquido, se calientan rápidamente a 37°C y se lavan x 1 en medio RPMI-1640 mediante centrifugación (1000 rpm, 5 minutos a 4°C). • El medio es aspirado y reemplazado con anticuerpo anti-HLA-DR de murino y después se diluye 1 :3 en medio RPMI-1640. La suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo y se mezcla frecuentemente.

• Las células se lavan x 2 con RPMI-1640 frío seguidas por centrifugación (1000 rpm, 5 minutos a 4°C) y las células se transfieren después a un tubo centrifugo de 15 ml estéril. El número de células mononucleares se enumeran en una cámara contadora Neubauer mejorada. • Suficientes esferas magnéticas (5 / célula mononuclear), recubiertas con IgG de cabra anti-ratón (Dynal, Great Neck, NY) se remueven de su botella de abastecimiento y se colocan en 5 ml de medio fresco (esto deslava el conservador de azida tóxico). El medio se remueve movilizando las esferas sobre un imán y se reemplaza con medio fresco. • Las esferas se mezclan con las células y la suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo. La suspensión se mezcla frecuentemente. • Las células recubiertas con esferas se inmovilizan sobre un imán y las células restantes (fracción rica en osteoclastos) se decantan en un tubo centrífugo de 50 ml estéril. • Se añade medio fresco a las células recubiertas con esferas para desalojar cualquier osteoclasto atrapado. Este procedimiento de lavado se repite x 10. Después se descartan las células recubiertas con esferas. • Los osteoclastos viables son enumerados en una cámara de conteo, usando diacetato de fluoresceína para marcar las células vivas. Se usa una pipeta pasteur de plástico desechable de agujero amplio para añadir la muestra a la cámara • Los osteoclastos son peletizados mediante centrifugación y la densidad se ajusta al número adecuado en medio EMEM (el número de osteoclastos es variable de tumor a tumor), complementado con suero de becerro fetal al 10% y 1.7 g/litro de bicarbonato de sodio. • Los osteoclastos derivados de osteoclastoma son preincubados con compuesto (4 dosis) o controles a 37°C durante 30 minutos. • Las células son después sembradas sobre portaobjetos recubiertos con osteopontina (osteopontina humana o de rata, 2.5 ug/ml) y se incuban durante 2 horas a 37°C. • Se remueven las células no adherentes lavando los portaobjetos vigorosamente en solución salina de pH regulado y las células que permanecen sobre los portaobjetos se fijan en acetona. • Los osteoclastos se tiñen para ácido fosfatasa resistente a tartrato (TRAP), un marcado selectivo para células de este fenotipo (véase pasos 15-17), y son enumerados mediante microscopía de luz. Los resultados se expresan como % de inhibición de adhesión en comparación con un control de vehículo.

Prueba de adhesión de célula Células y cultivo de células Células de riñon embriónico humano (HEK293) se obtuvieron de ATCC (número de catálogo CRL 1573). Las células se cultivaron en medio esencial mínimo de Earl (EMEM) que contenía sales de Earl, suero de bovino fetal al 10%, glutamina al 1% y 1 % de penicilina-esteptomicina.

Construcciones y transfecciones Un fragmento EcoRI-Kpnl de 3.2 kb de la subunidad av y un fragmento Xbal-Xhol de 2.4 kb de la subunidad ß3 se insertaron en los sitios de clonación EcoRI-EcoRV del vector pCDN (Aiyar y otros, 1994) que contiene un promotor de CMV y un marcador seleccionable G418 mediante ligación de extremos rasurados. Para la expresión estable, células 80 x 106 HEK 293 se electrotransformaron con construcciones av+ß3 (20 µg de ADN de cada subunidad) usando un aparato Gene Pulser (Hensley y otros, 1994) y se colocaron sobre placas de 100 mm (5 x 105 células/placa). Después de 48 horas, el medio de crecimiento se complementó con 450 µg/mL de Geneticin (G418 sulfato, GIBCO-BRL, Bethesda, MD). Las células se mantuvieron en medio de selección hasta que las colonias fueron lo suficientemente grandes como para ser probadas.

Análisis inmunocitoguímico de células transfectadas Para determinar si los transfectantes HEK 293 expresaron el receptor de vitronectina, las células se inmovilizaron sobre portaobjetos de microscopio de vidrio mediante centrifugación, se fijaron en acetona durante 2 minutos a temperatura ambiente y se secaron al aire. La reactividad específica con 23C6, un anticuerpo monoclonal específico para el complejo av+ß3 se demostró usando un método inmunofluorescencia indirecto estándar.

Estudios de adhesión de célula Placas ELISA de 96 cavidades Corning se precubrieron durante la noche a 4°C con 0.1 mL de vitronectrina humana (0.2 µg/mL en medio RPM I). En el momento del experimento, las placas se lavaron una vez con medio RPMI y se bloquearon con BSA al 3.5% en medio RPMI durante 1 hora a temperatura ambiente. Las 293 células transfectadas se resuspendieron en medio RPMI, se complementaron con 20 mM de Hepes, pH 7.4 y 0.1 % BSA a una densidad de 0.5 x 106 células/mL. Se añadió 0.1 mL de suspensión de células a cada cavidad y se incubaron durante 1 hora a 37°C, en presencia o ausencia de varios antagonistas de vß3. Después de la incubación se añadieron 0.025 mL de una solución de formaldehído al 10%, pH 7.4, y las células se fijaron a temperatura ambiente durante 10 minutos. Las placas se lavaron 3 veces con 0.2 mL de medio RPMI y las células adherentes se tiñeron con 0.1 mL de azul de toluidina al 0.5% durante 20 minutos a temperatura ambiente. El exceso de tinción se removió mediante lavado extensivo con agua desionizada. El azul de toluidina incorporado en las células fue eluido mediante la adición de 0.1 mL de etanol al 50% que contenía 50 mM de HCl. La adhesión de células se cuantificó a una densidad óptica de 600 nm sobre un lector de placa de microtitulación (Titertek Multiskan MC, Sterling, VA).

Prueba de unión de ayßg en fase sólida: El receptor de vitronectrina avß3 se purificó de placenta humana. La preparación del receptor se diluyó con 50 mM de Tris-HCl, pH 7.5, 100 mM de NaCI, 1 mM de CaCI2, 1 mM de MnCI2, 1 mM de MgCI2 (regulador de pH A) y se añadió íntimamente a placas ELISA de 96 cavidades a 0.1 ml por cavidad. Se añadió 0.1-0.2 µg de avß3 por cavidad. Las placas se incubaron durante la noche a 4°C. En el momento del experimento, las cavidades se lavaron una vez con regulador de pH A y se incubaron con 0.1 ml de albúmina de suero de bovino al 3.5% en el mismo regulador de pH durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la incubación las cavidades se aspiraron completamente y se lavaron dos veces con 0.2 ml de regulador de pH A. En una prueba de competencia de [3H]-SK&F-107260, se añadieron varias concentraciones de antagonistas no marcados (0.001-100 µM) a las cavidades, seguidas por la adicción de 5.0 nM de [3H]-SK&F-107260. Las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la incubación las cavidades fueron aspiradas completamente y se lavaron una vez con 0.2 ml de regulador de pH A enfriado con hielo en forma de cavidad a cavidad. Los receptores se solubilizaron con 0.1 ml de SDS al 1% y el [3H]-SK&F-107260 unido se determinó mediante conteo por escintilación líquida con la adición de 3 ml de Ready Safe en un contador de escintilación líquida Beckman LS 6800, con 40% de eficiencia. La unión no específica de [3H]-SK&F-107260 se determinó en presencia de 2 µM de SK&F-107260 y fue consistentemente menor al 1% de la entrada de radioligando total. La IC50 (concentración del antagonista para inhibir 50% de unión de [3H]-SK&F-107260) se determinó mediante una rutina de adaptación de curva de cuadros finales y no lineal que se modificó del programa LUNDON-2. La K¡ (constante de disociación del antagonista) se calculó de acuerdo con la ecuación de Cheng y Prusoff: K¡ = IC5o/ (1 + L/Kd), en donde L y Kd fueron la concentración y la constante de disociación de [3H]-SK&F-107260, respectivamente.

Inhibición de la unión de GPIIb-llla mediada por RGD Purificación de GPIIb-llla Diez unidades de plaquetas humanas lavadas y caducadas (obtenidas de la Cruz Roja) se usaron mediante agitación suave en octilglucósido al 3%, 20 mM de Tris-HCl, pH 7.4, 140 mM de NaCI, 2 mM de CaCI2 a 4°C durante 2 h. El usado se centrifugó a 100,000 g durante 1 h. El sobrenadante obtenido se aplicó a una columna de lentil lectin sefarosa 4B de 5 mL (E.Y. Labs) preequilibrada con 20 mM de Tris-HCl, pH 7.4, 100 mM de NaCI, 2 mM de CaCI2, 1% de octiglucósido (regulador de pH A). Después de una incubación de 2 horas la columna se lavó con 50 mL de regulador de pH A frío. El GPIIb-llla retenido en lectina se eluyó con regulador de pH A que contenía dextrosa al 10%. Todos los procedimientos se llevaron a cabo a 4°C. El GPIIb-llla obtenido fue >95% puro según se muestra mediante electroforesis con gel de SDS poliacrilamida.

Incorporación de GPIIb-llla en liposomas Una mezcla de fosfatidilserina (70%) y fosfatidilcolina (30%) (Avanti Polar Lipids) se secó a las paredes de un tubo de vidrio bajo una corriente de nitrógeno. GPIIb-llla purificado se diluyó a una concentración final de 0.5 mg/mL y se mezcló con los fosfolípidos en una relación proteína:fosfolípido de 1 :3 (p/p). La mezcla se resuspendió y se sonificó en un sonificador de baño durante 5 minutos. La mezcla se realizó después durante la noche usando tubos para diálisis de corte con un peso molecular de 12,000- 14,000 contra un exceso de 1000 veces de 50 mM de Tris-HCl, pH 7.4, 100 mM de NaCI2 (con 2 cambios). Los liposomas que contenían GPIIb-llla se centrifugaron a 12,000 g durante 15 minutos y se resuspendieron en el regulador de pH de diálisis a una concentración de proteína final de aproximadamente 1 mg/mL. Los liposomas se almacenaron -70°C hasta que fueran requeridos.

Unión competitiva a GPlIb-llla La unión al receptor de fibrinógeno (GPIIb-llla) se probó mediante un método de unión competitiva indirecto usando [3H]-SK&F-107260 como un ligando tipo RGD. La prueba de unión se llevó a cabo en un ensamble de placa de filtración de 96 cavidades (Millipore Corporation, Bedford, MA) usando membranas Durapore hidrofílicas de 0.22 um. Las cavidades se precubrieron con 0.2 mL de 10 µg/mL de polilisina (Sigma Chemical Co., San Luís, MO.) a temperatura ambiente durante 1 hora para bloquear la unión no específica. Se añadieron varias concentraciones de benzazepinas no marcadas a las cavidades por cuadruplicado. [3H]-SK&F-107260 se aplicó a cada cavidad a una concentración final de 4.5 nM, seguido por la adición de 1 µg de los liposomas que contenían GPIIb-llla de plaqueta purificados. Las mezclas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. El [3H]-SK&F-107260 unido a GPIIb-llla se separó del no unido mediante filtración usando un múltiple de filtración Millipore, seguido por el lavado con regulador de pH enfriado con hielo (dos veces, cada una de 0.2 mL). La radioactividad unida que permanecía sobre los filtros se contó en 1.5 mL de Ready Solve (Beckman Instruments, Fullerton, CA) en un contador de escintilación líquida Beckman (modelo LS6800), con eficiencia de 40%. La unión no específica se determinó en presencia de SK&F-107260 no marcado, 2 µM, y fue consistentemente menor que 0.14% de la radioactividad total añadida las muestras. Todos los puntos de datos son la media de determinaciones por cuadruplicado. Los datos de unión de competencia se analizaron mediante un procedimiento de adaptación de curva de cuadros finales no lineal. Este método provee la IC50 de los antagonistas (concentración del antagonista que inhibe la unión específica de [3H]-SK&F-107260 por 50% en equilibrio). La IC50 está relacionada con la constante de disociación de equilibrio (Ki) del antagonista en base a la ecuación de Cheng y Prusoff: Ki = IC50/(1 +L/Kd), en donde L es la concentración de [3H]-SK&F-107260 usada en la prueba de unión competitiva (4.5 nM), y Kd es la constante de disociación de [3H]-SK&F-107260 que es 4.5 nM como se determina por el análisis de Scatchard. El compuesto de esta invención tiene una afinidad para el receptor de vitronectina en relación con el receptor de fibrinógeno de más de 10:1. Este compuesto tiene una relación de actividad de más de 100:1. La eficacia del compuesto de la fórmula (I) solo o en combinación con un agente antineoplásico puede determinarse usando varios modelos de tumor de ratón transplantables. Véase patentes de E.U.A. Nos. 5,004,758 y 5,633,016 para detalles de estos modelos. Los siguientes ejemplos no están diseñados de ninguna manera para limitar el alcance de esta invención, sino que se proveen para ilustrar cómo hacer y usar los compuestos de esta invención. Muchas otras modalidades serán fácilmente aparentes para aquellos expertos en la técnica.

EJEMPLOS Datos generales Los espectros de resonancia magnética nuclear (1H RMN) se registraron a 250 o 400 MHz. Los desplazamientos químicos se reportan en partes por millón (d) hacia abajo del tetrametilsilano estándar interno (TMS). Las abreviaturas para los datos de RMN son como sigue: s = banda individual, d = doblete, t = triplete, q = cuarteto, m = bamda múltiple, dd = doblete de dobletes, dt = doblete de tripletes, app = aparente, br = amplia. J indica la constante de copulación de RMN medida en Hertz. CDCI3 es deuteriocloroformo, DMSO-d6 es hexadeuteriodimetilsulfóxido y CD3OD es tetradeuteriometanol. Los espectros infrarrojos (IR) se registraron en modo de transmisión, y las posiciones de banda se reportan en números de onda inversos (cm"1). Los espectros de masas se obtuvieron usando técnicas de electroaspersión (EA) o de ionización FAB. Los análisis elementales se llevaron a cabo por Quantitative Technologies Inc., Whitehouse, NJ. Los puntos de fusión se tomaron en una aparato de punto de fusión Thomas-Hoover y no están corregidos. Todas las temperaturas se reportan en grados centígrados. Se usaron de placas de capa delgada Analtech Silica Gel GF y E. Merck Silica Gel 60 F-254 para la cromatografía de capa delgada. Se llevaron a cabo cromatografías tanto de vaporización como de gravedad en gel de sílice E. Merck Kieselgel 60 (230-400 mallas). Las CLAR analítica y preparativa se llevaron a cabo en cromatógrafos Rainin o Beckman. ODS se refiere a un soporte cromatográfico de gel de sílice derivada de octadecilsililo. 5 µ Apex-ODS indica un soporte cromatográfico de gel de sílice derivada de octadecilsililo que tiene un tamaño de partícula nominal de 5 µ, hecho por Jones Chromatography, Littleton, Colorado. YMC ODS-AQ® es un soporte cromatográfico de ODS y es una marca registrada de YMC Co., Ltd., Kyoto, Japón. PRP-1® es un soporte cromatográfico polimérico (estireno-divinilbenceno) y es una marca registrada de Hamilton Co., Reno, Nevada. Celite® es un auxiliar de filtración compuesto de tierra diatomácea lavada con ácido, y es una marca registrada de Manville Corp., Denver, Colorado.

EJEMPLO 1 Preparación de ácido (S)-8-r3-(4-met¡lpiridin-2-ilam¡no)-1-propiloxi1-3- oxo-2-r4-(trifluorometil)bencill-2,3,4,5-tetrah¡dro-1 H-2-benzazepin-4- acético PREPARACIÓN 1 Preparación de (±)-8-hidroxi-3-oxo-2,34,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4- acetato de metilo a) 4-bromo-3-bromometilanisol Una mezcla de 2-bromo-5-metoxitolueno (20 g, 0.10 moles), N-bromosuccinimida (19.6 g, 0.11 moles), peróxido de benzoilo (1 g, 4 mmoles) y cloruro de metileno (200 ml), fue irradiada durante 18 horas con una lámpara inundante para efectuar reflujo suave. La mezcla se enfrío entonces a -10°C durante varias horas, y la solución se decantó de la succinimida precipitada. La solución se concentró, y el residuo se cristalizó a partir de cloroformo/hexano para dar el compuesto del título (19.7 g, 70%) como prismas de color amarillo pálido: 1H RMN (CDCI3) d 7.45 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 6.99 (d, J = 3 Hz, 1 H), 6.74 (dd, J = 8.9, 3 Hz, 1 H), 4.55 (s, 2 H) 3.80 (s, 3 H). b) 3-bis(ter-butox¡carbon¡l)am¡nometil-4-bromoanisol Una mezcla de 4-bromo-3-bromometilanisol (24 g, 86 mmoles) y di-ter-butil iminodicarboxilato de potasio (24 g, 94 mmoles) en dimetilformamida (200 ml), fue agitada bajo argón a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se concentró entonces bajo vacío, y el residuo se separó entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó (MgS0 ), y se concentró. El residuo se recristalizó a partir de hexano para dar el compuesto del título (15 g, 42%) como un sólido blanco: 1H RMN (CDCI3) d 7.40 (d, J = 8.6 Hz, 1 H)), 6.68 (m, 2 H), 4.81 (s, 2 H), 3.74 (s, 3 H), 1.44 (s, 18 H). c) (±)-3-carbometox¡-4-f2-bis(ter-butox¡carbonil)aminometil-4 metoxi-fenin-3-butenoato de metilo Un matraz de 500 ml fue cargado con 3-bis(ter-butoxicarbonil)-aminometil-4-bromoanisol (15 g, 36 mmoles), itaconato de dimetilo (7.5 g, 47 mmoles), tri-o-tolilfosfina (1 g, 3 moles), acetato de paladio (0.4 g, 2 mmoles), diisopropiletilamina (12.8 ml, 72 mmoles) y propionitrilo (150 ml). La mezcla se purgó con argón (varios ciclos de evacuación/flujo de argón), y se calentó entonces a reflujo bajo argón durante 1 hora. Se dejó que la reacción se enfriara a temperatura ambiente, y se vertió entonces en éter etílico enfriado con hielo (500 ml). El precipitado resultante se removió mediante filtración, y el producto filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo de 10 a 20% en hexano) para dar el compuesto del título (11.8 g, 66%) como un aceite de color amarillo pálido: 1H RMN (CDCI3) d 7.94 (s, 1 H), 7.15 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 6J7 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 6.76 (s, 1 H), 4.73 (s, 2 H), 3.81 (s, 3 H), 3.79 (s, 3 H), 3J1 (s, 3 H), 3.38 (s, 2 H), 1.45 (s, 18 H). d) (±)-3-carbometoxi-4-í2-b¡s(ter-butoxicarbonil)am¡nometil-4 metoxi-fenillbutanoato de metilo Un recipiente de presión cargado con (±)-3-carbometox¡-4-[2-bis(ter-butoxicarbonil)aminometil-4 metoxifeniljbutenoato de metilo (11.8 g), acetato de etilo (120 ml) y paladio a 10% sobre carbón (1 g), fue agitado bajo 3.16 kg/cm2 de hidrógeno durante 18 horas. La mezcla se filtró entonces, y el producto filtrado se concentró para dar el compuesto del título (12 g, 100%) como un aceite incoloro: 1H RMN (CDCI3) d 7.00 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 6J1 (m, 2 H), 4.81 (s, 2 H), 3J5 (s, 3 H), 3.66 (s, 3H), 3.63 (s, 3 H), 3.05 (m, 2 H), 2J3 (m, 2 H), 2.42 (dd, J = 16.0, 4.8 Hz, 1 H), 1.44 (s, 18 H). e) (±)-3-carbometoxi-4-f2-(aminomet¡l)-4-metox¡fenil1butanoato de metilo Una solución de (±)-3-carbometoxi-4-[2-bis-(ter-butoxicarbonil)-am¡nometil-4-metoxifenil]butanoato de metilo (12 g) en cloroformo (100 ml) y ácido trifluoroacético (50 ml), fue agitada bajo argón a temperatura ambiente durante 4 horas. La solución se concentró entonces bajo vacío para dar el compuesto del título (10 g, 100%) como un aceite viscoso: MS (ES) m/e 296.2 (M + H)+. f) (±)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepina-4acetato de metilo Una solución de (±)-3-carbometoxi-4-[2-(aminometil)-4-metoxifenilj-butanoato de metilo (10 g, 24 mmoles) y trietilamina (17 ml, 120 mmoles) en tolueno (100 ml), fue calentada a reflujo durante 18 horas. La reacción se concentró entonces, y el residuo se separó entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo, y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (MgS0 ) y se concentraron para producir el compuesto del título (4.8 g, 76%) como un sólido de color canela: MS (ES) m/e 264.2 (M+H)+. g) (+)-8-h¡drox¡-3-oxo-2,3,4,5-tetrah¡dro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo Se añadió en porciones cloruro de aluminio anhidro (7.6 g, 57 mmoles) a una solución agitada de (±)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo (3.0 g, 11 mmoles) y etanotiol (4.2 ml, 57 mmoles) en cloruro de metileno (100 ml) a 0°C bajo argón. La mezcla resultante se dejó calentando a temperatura ambiente, se agitó durante la noche y se concentró entonces. El residuo se trituró con agua con hielo, y el sólido resultante se recogió mediante filtración y se secó para dar el compuesto del título (2.64 g, 91 %) como un sólido blanquecino: MS (ES) m/e 250.2 (M+H)+.

PREPARACIÓN 2 Separación mediante CLAR de los enantiómeros de (±)-8-hidroxi-3-oxo- 2,3A5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetato de metilo a) (R)-(+)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo y (S)-(-)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrah¡dro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo Se resolvió (±)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo en sus enantiómeros mediante CLAR quiral usando las siguientes condiciones: columna Diacel Chiralpak AS® (21.2 x 250 mm), fase móvil de EtOH, velocidad de flujo de 7 ml/minuto, detección de luz UV a 254 nm, inyección de 70 mg; tR para (R)-(+)-8-hidroxi-3-oxo-2, 3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo = 21.5 min; tR para (S)-(-)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo = 39.1 min.

PREPARACIÓN 3 Separación mediante CLAR de los enantiómeros de (±)-8-metoxi-3-oxo- 2,3A5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4-acetato de metilo a) (RH+)-8-metoxi-3-oxo-2,3.4,5-tetrah¡dro-1H-2-benzazepin-4-acetato de metilo y (SH-)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrah¡dro-1 H-2-benzazep¡n-4-acetato de metilo Se resolvió (±)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo en sus enantiómeros mediante CLAR quiral usando las siguientes condiciones: columna Diacel Chiralpak AS® (21.2 x 250 mm), fase móvil de CH3CN, velocidad de flujo de 15 ml/minuto, detección de luz UV a 254 nm, inyección de 500 mg; tR para (R)-(+)-8-metoxi-3-oxo-2, 3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo = 10.2 minutos; tR para (S)-(-)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo = 19.0 minutos.

PREPARACIÓN 4 Desmetilación de (S)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin- 4-acetato de metilo a) (S)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo Una solución de (S)-8-metoxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo (15.0 g, 0.057 moles) en CHCI3 (160 ml), se añadió gota a gota durante 30 minutos a una solución de tribromuro de boro (20.53 ml, 0.217 moles) en CHCI3 (160 ml) a -8°C bajo argón, manteniendo la temperatura entre -5°C y 0°C. La mezcla de reacción se agitó a aproximadamente -8°C durante 30 minutos, y se añadió entonces MeOH (200 ml), gota a gota inicialmente, manteniendo la temperatura a aproximadamente 0°C. La mezcla de reacción se concentró para dar un aceite viscoso el cual fue reconcentrado a partir de MeOH (100 ml). El aceite se disolvió en H20/MeOH, y una pequeña cantidad de sólido oscuro se removió mediante filtración. El producto filtrado se neutralizó (a pH 7) con hidróxido de sodio a 50%, depositando un sólido blanco. El pH de la suspensión se ajustó a 4.5 mediante la adición de una pequeña cantidad de ácido acético, y el sólido se recogió y se secó en vacío para dar el compuesto del título (9J g, 68%). El producto se puso a prueba para pureza quiral mediante CLAR: columna Chiralpak AS® (4.6 x 50 mm), fase móvil de EtOH a 100%, velocidad de flujo de 0.5 ml/minuto, detección de luz UV a 215 nm; tR=7.5 min (enantiómero S, 99%); tR=4.4 min (enantiómero R, 1 %).

PREPARACIÓN 5 Preparación de (S)-8-hidroxi-3-oxo-2-r4-(trifluorometil)bencin-2,3,4,5- tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo mediante alquilación de (S)-8-hidroxi-3-oxo-2,3 ,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo a) (S)-3-oxo-8-f4-(tr¡fluoromet¡l)benc¡lox¡1-2-r4-(tr¡fluorometil)-bencil1-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo A una solución de (S)-8-hidroxi-3-oxo-2,3,4,5-tetrahidro-2-1 H-benzazepin-4-acetato de metilo (0.31 g, 1.24 mmoles) y bromuro de 4-(trifluorometil)bencilo (0.89 g, 3J2 mmoles) en DMF (10 ml), se añadió NaH (suspensión a 60% en aceite, 0.11 g, 2J5 mmoles). Después de agitación a temperatura ambiente durante 4 horas, el volumen de la DMF se removió bajo vacío. El residuo se separó entre NaHC03 saturado y EtOAc. La fase acuosa se extrajo con EtOAc, y los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaCI saturado, se secaron sobre Na2S0 y se concentraron para dar un aceite claro (0.90 g). La cromatrogafía radial (acetona a 5%/CH2CI2, gel de sílice, placa de 6 m), dio el compuesto del título (0.53 g) como una espuma blanca. MS (ES) m/e 566.1 (M+H)+. b) (S)-8-h¡droxi-3-oxo-2-f4-(tr¡fluorometil)bencin-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo Se cargó un matraz de hidrogenación Parr con (S)-3-oxo-8-[4-(tr¡fluorometil)benc¡loxi]-2-[4-(trifluorometil)bencil]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo (0J8 g, 1.38 mmoles) y catalizador de Pearlman (20 mg) en MeOH (20 ml). Después de hidrogenación a 3.51 kg/cm2 durante 24 horas, el matraz de reacción se ventiló, y catalizador se removió mediante filtración. La remoción del solvente dio una espuma blanca (0.60 g). La cromatografía radial (acetona a 5%/CH2CI2, gel de sílice, placa de 6 m), dio el compuesto del título (0.42 g) como una espuma blanca. 1H RMN (250 MHz, CDCI3) d 7.50 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.23 (d,J=8.5 Hz, 2H), 6.90 (d,J=7.5 Hz, 1 H), 6.67 (dd,J=7.5, 3.4 Hz, 1 H), 6.39 (d,J=3.4 Hz, 1 H), 5.05 (m, 2H), 4.35 (d,J=15.4 Hz, 1 H), 3.85 (m, 1 H), 3J0 (s, 3H), 3.60 (m, 1 H), 2.95 (m, 4H), 2.45 (dd,J=17.1 , 5.1 Hz, 1 H).

PREPARACIÓN 6 Preparación de (S)-8-hidroxi-3-oxo-2-r4-(trifluorometil)benc¡n-2,3,4,5- tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo mediante síntesis enantioselectiva a) 4-bromo3-bromometilanisol A una solución agitada de 4-bromo-3-metilanisol (100 g, 497 mmoles) en diclorometano seco (500 ml) se añadió N-bromosuccinimida (97 g, 545 mmoles), seguido de peróxido de benzoilo (6 g, 25 mmoles). La reacción se sometió a reflujo suavemente con una lámpara de inundación de 150 watts con un reflector colocado a aproximadamente 30.48 cm del matraz de reacción. Después de 24 horas, la reacción se concentró mediante evaporación giratoria hasta la mitad de su volumen, y se dejó asentar durante 4 horas. El precipitado blanco que se formó se filtró, y se enjuagó con un pequeño volumen de diclorometano. El producto filtrado se concentró hasta sequedad, y el sólido resultante se trituró con hexanos y se filtró. La desecación bajo vacío dio el compuesto del título (100.25 g, 72%) como agujas blancas: GC tR=6.56 min (columna de metil silicón HP de 530 µm x 20 m, flujo del vehículo de He de 20 ml/min, temperatura inicial de 100°C, tiempo inicial de 1 min, velocidad de 10°C/min, temperatura final de 200°C, tiempo final de 1 min); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.44 (d,J=10 Hz, 1 H), 6.99 (d,J=3 Hz, 1 H), 6J3 (dd, 1 H), 4.55 (s, 2H), 3.80 (s,3H). b) 3-fN-(4-trifluorometilbenc¡l)aminomet¡l1-4-bromoanisol A una solución agitada de 4-bromo-3-bromometilanisol (35 g, 125 mmoles) en DMSO anhidro (50 ml) y THF seco (50 ml), se añadió 4-trifluorometilbencilamina (30 g, 171 mmoles) seguido de trietilamina (18 ml, 129 mmoles). Después de agitación durante 18 horas a temperatura ambiente, la reacción se concentró, se diluyó con NaOH acuoso a 1 N (250 ml), y se extrajo con Et20 (2 x 250 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2S04), y se concentraron hasta sequedad. El residuo que quedó se purificó mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (EtOAc de 10 a 20%/CHCI3) para dar el compuesto del título (34.17 g, 73%): TLC (EtOAc a 20%/CHCI3) Rf 0.63; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.59 (d,J=8.2 Hz, 2H), 7.49 (d,J=8.2 Hz, 2H), 7.43 (d,J=8.6 Hz, 1 H), 6.96 (d,J=3.1 Hz, 1 H), 6J0 (dd, 1 H), 3.86 (s, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 1.75 (br s, 1 H). c) 3-[N-(ter-butox¡carbonip-N-(4-tr¡fluorometilbencil)aminometil1-4-bromoanisol A una solución agitada de 3-[N-(4-trifluorometilbencil)-aminometil)aminometil]-4-bromoanisol (34.17 g, 91 mmoles) en THF seco (100 ml), se añadió bicarbonato de di-ter-butilo (22 g, 101 mmoles). La reacción se agitó bajo argón durante 18 horas (se observó producción vigorosa de gas). La concentración y la cromatografía de gel de sílice (EtOAc de 5 a 10%/hexano) dieron el compuesto del título (41.09 g, 95%) como un aceite claro: TLC (sílice, EtOAc a 20%/hexano) Rf 0.44; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.57 (d,J=8.3 Hz, 2H), 7.40 (d,J=8.3 Hz, 2H), 7.39-7.33 (m, 2H), 6.83 y 6J2 (2 s, 1 H), 6.71 (dd, 1 H), 4.54 y 4.50 (2 s, 2H), 4.43 (s, 2H), 3J5 (s, 3H), 1.47 (s, 9H). d) 2-[N-(ter-butoxicarbon¡l)-N-(4-tr¡fluorometilbencil)aminometin-4-metoxicinamato de metilo Una solución de 3-[N-(ter-butoxicarbonil)-N-(4-trifluoromet¡lbencil)-aminometil]-4-bromoanisol (37.08 g, 78 mmoles), acrilato de metilo (35 ml, 390 mmoles), acetato de paladio (0.88 g, 3.9 mmoles), tri-o-tolifosfina (2.38 g, 7.8 moles) y diisopropiletilamina (31 ml, 178 mmoles) en acetonitrilo (200 ml) se desoxigenó (3 ciclos de evacuación/purga con argón), y se calentó entonces a reflujo bajo argón (baño de aceite ajustado a 80°C). Después de 6 horas, se añadieron más acetato de paladio (0.88 g, 3.9 mmoles) y tri-o-tolifosfina ((2.38 g, 7.8 mmoles), y la reacción se agitó bajo reflujo durante otras 18 horas. La reacción se concentró hasta sequedad, y el residuo se recogió en 1 :1 de Et20/éter de petróleo (300 ml), y se dejó reposar durante 4 horas. Un precipitado de color gris se filtró y se lavó con un volumen pequeño de 1 :1 de Et20/éter de petróleo (100 ml). El producto filtrado de color rojo anaranjado se concentró y se purificó mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (acetato de etilo a 15%/hexanos). El residuo resultante se recogió en hexano, y la mezcla se dejó reposar durante varias horas y se filtró entonces para remover un precipitado de color amarillo. La concentración del producto filtrado dejó el compuesto del título (34.52 g, 92%) como un aceite denso de color amarillo: TLC (sílice, EtOAc a 20%/hexanos) Rf 0.45; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.80 (br s, 1 H), 7.57 (d,J=8.1 Hz, 2H), 7.53 (d,J=8.6 Hz, 1 H), 7.29 (br s, 2H), 6.83 (dd, 1 H), 6J2 (br s, 1 H), 6.23 (d,J=15J Hz, 1 H), 4.58 y 4.53 (2 br s, 2H), 4.46 y 4.37 (2 br s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 1.49 (s, 9H). e) 2-[N-(fer-butox¡carbonil)-N-(4-tr¡fluorometilbencil)aminometil1-4-metoxidihidrocinamato de metilo A Pd/C a 10% (5g, 4J mmoles, humedecido previamente con DMF), se añadió una solución de 2-[N-ter-butoxicarbonil)-N-(4-trifluorometilbencil)-aminometil]-4-metoxicinamato de metilo (34.52 g, 72 mmoles) en metanol (100 ml). La mezcla se agitó bajo hidrógeno (3.51 kg/cm2) en un aparato Parr durante 7 horas, y se filtró entonces a través de una almohadilla de Celite® para remover el catalizador. El producto filtrado se concentró para producir el compuesto del título (34.15 g, 98%) como un aceite incoloro: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.58 (d,J=8.1 Hz, 2H), 7.31 (br s, 2H), 7.09 (d,J=8.4 Hz, 1 H), 6J6 (dd, 1 H), 6.66 (s, 1 H), 4.47 (br s, 2H), 4.40 (br s, 2H), 3J6 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 2J9 (br s, 2H), 2.47 (t, 2H), 1.48 (s, 9H). f) Acido 2-fN-fer-butoxicarbonil)-N-(4-tr¡fluoromet¡lbenciO-amino-metin-4-metoxidihidrocinámico A una solución agitada de ácido 2-[N-ter-butoxicarbonil)-N-(4-trifluorobencil)aminometil]-4-metoxidihidrocinám¡co (34.15 g, 71 mmoles) en dioxano (150 ml), se añadió NaOH acuoso a 1 N (85 ml, 85 mmoles). La reacción turbia se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La solución homogénea resultante se neutralizó con HCl acuoso a 1 N (85 ml, 85 mmoles), y se extrajo con acetato de etilo (2x250 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (250 ml), se secaron (MgS0 ) y se concentraron para dar el compuesto del título (34.60 g, 100%) como un aceite claro denso: TLC (95:4:1 de CHCI3/MeOH/HOAc) Rf 0.49; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.58 (d,J=8.1 Hz, 2H), 7.30 (br s, 2H), 7.09 (d,J=8.4 Hz, 1 H), 6J8 (dd, 1 H), 6.65 (d,J=2.6 Hz, 1 H), 4.47 (br s, 2H), 4.42 (br s, 2H), 3J6 (s, 3H), 2.81 (br s, 2H), 2.53 (t, 2H), 1.47 (s, 9H). g) 2-fN-(fer-butox¡carbon¡l)N-(4-tr¡fluorometilbenc¡l)am¡nometin-4-metoxidihidrocinamida de (R)-4-bencil-2-oxazolidinonilo A una solución agitada de ácido 2-[N-(ter-butoxicarbonil)N-(4-trifluorometilbencil)aminometil]-4-metoxidihidrocinámico (34.60 g, 71 mmoles) y piridina (6.9 ml, 85 mmoles) en diclorometano seco (200 ml) bajo argón, se añadió fluoruro cianúrico (4.4 ml, 48 mmoles) mediante una jeringa. La reacción se agitó durante 4 horas a temperatura ambiente. La suspensión densa resultante se filtró a través de una almohadilla de Celite®, y se enjuagó con un volumen pequeño de diclorometano seco (50 ml). El producto filtrado claro se vertió en un embudo de separación, y se lavó con agua enfriada con hielo (500 ml). La desecación (MgS04) y la concentración dejaron el fluoruro ácido crudo (34.70 g, 100%), el cual se usó sin purificación adicional. A una solución agitada de (R)-4-bencil-2-oxazolidinona (13.8 g, 78 mmoles) en THF seco (300 ml) bajo argón a -78°C, se añadió mediante una jeringa una solución de n-Buli en hexanos (2.5 M, 30 ml, 75 mmoles). La reacción se agitó a -78°C durante 15 minutos, y entonces se añadió mediante una jeringa una solución del fluoruro ácido anterior (34.70 g, 71 mmoles) en THF seco (100 ml). La reacción se agitó durante 1 hora a -78°C, se extinguió entonces con NH CI saturado y se extrajo con acetato de etilo (2x200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (400 ml), se secaron (MgS04), y se concentraron hasta sequedad. La purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (acetato de etilo a 20%/hexanos), dio el compuesto del título (40.34 g, 90%) como un aceite claro denso: TLC (EtOAc a 20%/hexano) Rf 0.21 ; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.58 (d,J=8.1 Hz, 2H), 7.33-7.26 (m, 5H), 7.16 (m, 3H), 6J7 (dd, 1 H), 6.67 (d,J=2.5 Hz, 1 H), 4.62 (m, 1 H), 4.60-4.40 (m, 4H), 4.16 (m, 2H), 3J6 (s, 3H), 3.27 (dd, 1 H), 3.21-3.10 (m, 2H), 2.88 (br s, 2H), 2J2 (dd, 1 H), 1.48 (s, 9H). h) 3-[2-rN-(fer-butox¡carbon¡l)-N-(4-trifluorometilbencil)-am¡nomet¡l1-4-metoxifen¡n-2(S)-metoxicarbonilmet¡l-prop¡onamida de (R)-4-bencil-2-oxazolidinonilo A una solución agitada de 2-[N-(ter-butoxicarbonil)-N-(4-trifluorometilbencil)aminometil]-4-metoxidihidrocinamida de (R)-4-bencil-2-oxazolidinonilo (40.30 g, 64 mmoles) en THF seco (300 ml) a -78°C, se añadió una solución de bis(trimetilsilil)amida de litio (70 ml, 1 M en THF, 70 mmoles) mediante una jeringa. Después de 30 minutos, se añadió mediante una jeringa bromoacetato de metilo (30 ml, 317 mmoles). Después de otros 30 minutos a -78°C, se dejó que la reacción se calentara a -20°C y se agitó durante otras 6 horas. La reacción se extinguió con NH CI saturado (400 ml), y se extrajo con acetato de etilo (2x200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (300 ml), se secaron (MgS04), y se concentraron hasta sequedad. La purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (acetato de etilo a 20%/hexanos), dio el compuesto del título (38.62 g, 86%) como un sólido blanco: la CLAR (Altex Ultrasphere™-Si 5u, EtOAc a 20%/hexano) mostró que aproximadamente 20% del material de partida no alquilado estaba todavía presente. La CLAR de la mezcla de reacción cruda dio un rendimiento de 90% para la reacción; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.57 (d,J=8.1 Hz, 2H), 7.40-7.11 (m, 8H), 6J1 (dd, 1 H), 6.63 (d,J=2.7 Hz, 1 H), 4.57-4.34 (m, 6H), 4.03 (d,J=8.6 Hz, 1 H), 3.85 (t, 1 H), 3J2 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.28 (dd, 1 H), 2.90 (dd, 1 H), 2.86-2.71 (m, 2H), 2J0 (dd, 1 H), 2.44 (m, 1 H), 1.48 y 1.46 (2s, 9H). i) (S)-8-metox¡-3-oxo-2-(4-trifluorometilbencil)-2,3,4,5-tetrahidro- 1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo A una solución agitada de 3-[2-[N-ter-butoxicarbonil)-N-(4-trifluorometilbencil)aminometil]-4-metoxifenil]-2-(S)-metoxicarbonilmetil-propionamida de (R)-4-bencil-2-oxazolidinonilo (38.0 g, 54 mmoles) en THF (300 ml) y agua (100 ml), se añadió gota a gota a 0°C durante 30 minutos una solución de H202 a 30% (18.9 ml) y LiOH H20 (2.3 g, 55 mmoles) en agua (62 ml). La solución turbia se agitó durante otra hora a 0°C. La solución homogénea resultante se trató lentamente con una solución de sulfito de sodio (34.3 g, 272 mmoles) en agua (175 ml) a 0°C, y entonces se acidificó con una solución enfriada en hielo de HCl concentrado (35 ml) en agua (150 ml). La reacción se extrajo con acetato de etilo (2x200 ml), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (400 ml), se secaron (MgS0 ) y se concentraron hasta sequedad. El residuo resultante se trató con HCl a 4.0 M en dioxano (400 ml) con agitación a temperatura ambiente (se observó producción lenta de gas). Después de 1 hora, la reacción se concentró y se volvió a concentrar a partir de 1 :1 de CHCI3/tolueno (2x), y entonces el residuo (37.65 g) se absorbió en DMF seca (400 ml). A esta solución con agitación bajo argón a 0°C en un matraz Dewar, se añadieron trietilamina (15.3 ml, 109 mmoles) y NaHC03 (22.9 g, 273 mmoles), seguido de difenilfosforil azida (13 ml, 60 mmoles). Después de agitación durante 24 horas a 0°C, la reacción se concentró hasta sequedad. El residuo se absorbió en acetato de etilo (400 ml), y se lavó secuencialmente con agua (300 ml) y salmuera (300 ml). La desecación (MgS0 ), concentración y cromatografía instantánea sobre gel de sílice (acetato de etilo a 35%/hexanos), dieron el compuesto del título (16.87 g, 74%) como un aceite denso claro: TLC (EtOAc a 40% /hexano) Rf 0.50; MS (ES) m/e 422.3 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.52 (d, J=8.1 , 2H), 7.29 (d, J=8.1 Hz, 2H), 7.02 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 7J5 (dd, 1 H), 6.36 (d, J=2J Hz, 1 H), 5.18 (d, J=16.5 Hz, 1 H), 4.96 (d, J=15.4 Hz, 1 H), 4.48 (d, J=15.4 Hz, 1 H), 3.87 (m, 1 H), 3J4 (d, J=16.5 Hz,1 H), 3J3 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.08 (dd, 1 H), 3.02 (dd, 1 H), 2.95 (dd, 1 H), 2.48 (dd, 1 H). j) (S)-8-h¡droxi-3-oxo-2-(4-tr¡fluorometilbencil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo Una solución de tribromuro de boro en CH2CI2 (1.0 M, 160 ml, 160 mmoles) fue añadida gota a gota durante 30 minutos a una solución de (S)-8-metox¡-3-oxo-2-(4-trifluorometilbencil)-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo (16.67 g, 39.6 mmoles) en CH2CI2 (150 ml) a -20°C bajo argón. Después de otras 1.5 horas de -15 a -20°C, la reacción se volvió a enfriar a -20°C y se extinguió mediante la adición cuidadosa, gota a gota, de MeOH (160 ml). La reacción se agitó de -10 a 0°C durante 1 hora, y se concentró entonces en el evaporador giratorio. El residuo se volvió a concentrar a partir de MeOH (2x). La purificación mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (acetato de etilo de 50 a 100%/hexanos), dio el compuesto del título (14.87g, 92%) como un sólido blanco: [a]o-81.80 (c, 1.0, MeOH); TLC (sílice, EtOAc a 50%/hexano) Rf 0.54; MS (ES) m/e 408.2 (M+H)+; 1H RMN (400, CDCI3 + DMSO-d6 a 2%) d 7.53 (d, J=8.1 Hz, 2H), 7.31 (d, J=8.1 Hz, 2H), 6.93 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 6J0 (dd, 1 H), 6.41 (d, J=2.3 Hz, 1 H), 5.16 (d, J=16.4 Hz, 1 H), 5.01 (d, J=15.6 Hz, 1 H), 4.39 (d, J=15.6 Hz, 1 H), 3.84 (m, 1 H), 3J3 (d, J=16.4 Hz, 1 H), 3.71 (s, 3H), 3.01 (dd, 1 H), 2.98 (m, 1 H), 2.90 (dd, 1 H), 2.47 (dd, 1 H).

PREPARACIÓN 7 Preparación de N-óxido de 2-í(3-hidroxi-1-propil)amino1-4-metilpiridina a) N-óxido de 2-r(3-hidrox¡-1-prop¡l)am¡no"|-4-met¡lpir¡dina Se calentó a reflujo una mezcla de N-óxido de 2-cloro-4-metilpiridina (12.1 g, 0.068 mmoles) (Brown, E. V. J. Amer. Chem. Soc. 1957, 79, 3565), 3-amino-1 -propanol (10.33 ml, 0.14 mmoles), NaHC03 (28 g, 0.34 mmoles) y alcohol ter-amílico (70 ml). Después de 16 horas, la reacción se enfrío, se diluyó con CH2CI2 (300 ml), y se filtró mediante succión para remover los materiales ¡nsolubles. El producto filtrado se concentró y se volvió a concentrar a partir de tolueno para dejar un aceite amarillo. La recristalización a partir de CH2CI2/Et20, dio el compuesto del título (10.87 g, 88%) como un sólido de color amarillo: TLC (MeOH a 15%/CH2CI2) Rf 0.44; 1H RMN (400, CDCI3) d 7.92 (d, J=6.7, 1 H), 7.28 (br t, 1 H), 6.43 (s, 1 H), 6.33 (dd, J=6.6, 2.1 Hz, 1 H), 3J3 (t, j=5.7 Hz, 2H), 3.47 (q, H=6.3 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.82-1.88 (m, 2H); MS (ES) m/e 183 (M+H)+.

PREPARACIÓN 8 Preparación de ácido (S)-8-r3-(4-metilpiridin-2-ilamino)-1-propiloxil-3- oxo-2-r4-trifluorometil)benc¡n-2,3,4,5-tetrahidro-1H-2-benzazepin-4- acético a) (S)-8-[3-(4-met¡l-1-oxop¡r¡din-2-ilamino)-1-propiloxi1-3-oxo-2-[4-tr¡fluorometil)bencil1-2,3,4,5-tetrah¡dro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo A (S)-8-hidrox¡-3-oxo-2-[4-(trifluorometil)bencil]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo (0.42 g, 1.03 mmoles) y Ph3P (0.41 g, 1.56 mmoles) en CH2CI2 (6 ml) a 0°C, se añadió gota a gota una solución de N-óxido de 2-[(3-h¡drox¡-1-propil)amino]-4-metilpiridina (0.28 g, 1.54 mmoles) y azodicarboxilato de dietilo (0.24 ml, 1.52 ml). Cuando la adición concluyó, se removió el baño de hielo, y la reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de 20 horas, el solvente se removió y el producto se aisló mediante cromatografía instantánea (CHCI3 a 100% para MeOH a 10%/CHCI3, gel de sílice) para dar el compuesto del título (0.57 g) como un aceite claro. MS (ES) m/e 572.2 (M+H)+. b) (S)-8-f3-(4-metilpir¡din-2-ilamino)-1-propiloxi1-3-oxo-2-í4-(tr¡fluoro-metil)benc¡n-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo A (S)-8-[3-(4-metil-1 -oxo-piridin-2-ilamino)-1 -propiloxi]-3-oxo-2-[4-(trifluorometil)bencil]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo (0.57 g, 1.00 mmoles) y ciclohexeno (1.00 ml, 9.87 mmoles) en MeOH (10 ml), se añadió Pd/C a 10% (0.11 g). La reacción se calentó hasta reflujo durante 20 horas. Después de enfriar la reacción a temperatura ambiente, se removió el catalizador mediante filtración, y el solvente se removió bajo vacío para dar una espuma blanca (0.49 g). La cromatografía radial (MeOH a 5%/CHCI3), gel de sílice, placa de 6 mm) dio el compuesto del título (0.42 g) como una espuma blanca. MS (ES) m/e 556.1 (M+H)+. c) Acido (S)-8-[3-(4-met¡lpiridin-2-ilamino)-1-propiloxi1-3-oxo-2-f4-(trifluorometil)benc¡n-2,3,4,5-tetrah¡dro-1 H-2-benzazep¡n-4-acét¡co A (S)-8-[3-(4-met¡lpiridin-2-ilamino)-1 -propiloxi]-3-oxo-2-[4- (trifluoro-metil)bencil]-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-2-benzazepin-4-acetato de metilo (0.42 g, 0J5 mmoles) en EtOH (2 ml), se añadió NaOH a 1 N (1.50 ml, 1.50 mmoles). Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas, el volumen del solvente se removió bajo vacío. El residuo se acidificó (pH=3) con HCl a 1 N, se congeló y se liofilizó hasta sequedad. Se añadió agua al residuo, y se neutralizó hasta pH=7 con NaHC03 saturado. La capa acuosa se extrajo con CHCI3, los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2S04, y se concentraron para dar una espuma blanca (0.47 g). La cromatografía radial (MeOH a 10%/CHCI3, gel de sílice, placa de 6 mm), dio el compuesto del título (0.30 g) como un sólido blanco. MS (ES) m/e 542.2 (M+H)+. Análisis calculado para C29H30F3N3O4-3.5 H20: C, 57.61 ; H, 6.17; N, 6.95. Encontrado: C, 57.6; H, 5.30; N, 6.38.

EJEMPLO 2 Composición para unidad de dosis parenteral Se hace una preparación que contiene 20 mg del compuesto del ejemplo 1 como un polvo seco estéril como sigue: 20 mg del compuesto se disuelven en 15 mL de agua destilada. La solución se filtra bajo condiciones estériles en una ampolleta de dosis múltiples de 25 mL y se liofiliza. El polvo es reconstituido mediante la adición de 5% de dextrosa en agua (D5W) para inyección intravenosa o intramuscular. La dosificación se determina entonces por el volumen de inyección. Puede hacerse una dilución subsecuente mediante la adición de un volumen medido de esta unidad de dosificación a otro volumen de D5W para inyección, o una dosis medida puede añadirse a otro mecanismo para suministrar el fármaco, tal como una botella o bolsa para la infusión por goteo intravenoso u otro sistema de inyección-infusión.

EJEMPLO 3 Composición para unidad de dosis oral Se prepara una cápsula para administración oral mezclando y moliendo 50 mg del compuesto del ejemplo 1 con 75 mg de lactosa y 5 mg de estearato de magnesio. El polvo resultante se tamiza y se rellena en una cápsula de gelatina dura.

EJEMPLO 4 Composición para unidad de dosis oral Se prepara una tableta para administración oral mezclando y granulando 20 mg de sacarosa, 150 mg de sulfato de calcio dihidratado y 50 mg del compuesto del ejemplo 1 con una solución de gelatina al 10%. Los granulos húmedos se tamizan, se secan, se mezclan con 10 mg de almidón, 5 mg de talco y 3 mg de ácido esteárico y se comprimen para formar una tableta. La descripción anterior detalla completamente cómo hacer y usar la presente invención. Sin embargo, la presente invención no está limitada a las modalidades particulares descritas anteriormente en la presente, sino que incluye todas las modificaciones de la misma que estén dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones. Las diferentes referencias a boletines, patentes y otras publicaciones que se citan en la presente comprenden el estado de la técnica y están incorporadas en la presente a manera de referencia como si se describieran completamente.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2.- Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

3.- Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , un agente antineoplásico y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

4.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada además porque el agente antineoplásico es topotecano.

5.- Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada además porque el agente antineoplásico es cisplatina.

6.- Un compuesto de acuerdo con la fórmula (II): o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

7.- Un compuesto de acuerdo con la fórmula (lll): o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

8.- Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 para usarse como un medicamento.

9.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 , en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades en las cuales el antagonismo del receptor de avß3 sea indicado.

10.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 , en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades en las cuales el antagonismo del receptor de avß5 sea indicado.

11.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 , en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de osteoporosis.

12.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 , en la fabricación de un medicamento para la inhibición de la angiogénesis.

13.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 , en la fabricación de un medicamento para la inhibición del crecimiento tumoral o metástasis tumoral.

14.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 , en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de ateroesclerosis o restenosis.

15.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 , en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de inflamación.

16.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 y de un agente antineoplásico, en la fabricación de un medicamento para la inhibición del crecimiento tumoral en combinación física o para la administración por pasos.

17.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en el que el agente antineoplásico es topotecano.

18.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en el que el agente antineoplásico es cisplatina.

19.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 y de un inhibidor de resorción de hueso, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de osteoporosis en combinación física o para la administración por pasos.