MXPA00001199A - Inductor de respuesta de hipersensibilidad proveniente de erwinia amylovora, su uso y gen codificante - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a una proteína o polipéptido aislado que induce una respuesta de hipersensibilidad en plantas, asícomo una molécula de ADN aislada que codifica para la proteína o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad. Esta proteína o polipéptido aislado y la molécula de ADN aislada, se pueden utilizar para impartir resistencia a enfermedades a plantas, para incrementar el crecimiento de plantas y/o para controlar insectos en plantas. Esto se puede lograr mediante la aplicación de la proteína o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad, en una forma no infecciosa, a plantas o semillas de planta bajo condiciones efectivas para impartirle resistencia a enfermedades, para incrementar el crecimiento de plantas y/o para controlar insectos en las plantas o en las plantas crecidas a partir de las semillas de planta. Alternativamente, se pueden proporcionar plantas transgénicas o semillas de planta transgénicas transformadas con una molécula de ADN que codifica para una proteína o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad y las plantas transgénicas o las plantas provenientes de las semillas de planta transgénicas se hacen crecer bajo condiciones efectivas para impartirles resistencia a enfermedades, para incrementar el crecimiento y/o para controlar insectos en las plantas o en las plantas crecidas a partir de las semillas de planta

Description

INDUCTOR DE RESPUESTA DE HIPERSENSIBILIDAD PROVENIENTE DE ERSflNIA -AMF OVORA, SU USO Y GEN CODIFICANTE CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un inductor de respuesta de ipersenbilidad proveniente de Erwinia amyl?V ra y a su uso. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las interacciones entre patógenos bacterianos y sus huéspedes plantas, por lo general caen en dos categorías: (1) compatibles (patógeno-huésped) que causan crecimiento bacteriano intercelular, desarrollo de síntomas y desarrollo de enfermedad en la planta huésped; y (2) incompatibles (patógeno-no huésped) , dando como resultado la respuesta de hipersensibilidad, que es un tipo particular de interacción incompatible, sin síntomas de enfermedad progresiva. Durante las interacciones compatibles en las plantas huésped, las poblaciones bacterianas se incrementan drásticamente y se presentan síntomas progresivos. Durante las interacciones incompatibles, las poblaciones bacterianas no • se incrementan y no se presentan síntomas progresivos. La respuesta de hipersensibilidad ("RH") es una necrosis rápida y localizada que está asociada con la defensa activa de las plantas contra numerosos patógenos REF.: 32720 (Kiraly, Z., "Defenses Triggered by the Invader: Hypersensitivity", páginas 201-224 en: Plant Disease: An Advanced Treatise, Vol, 5, J. G. Horsfall y E. B. Cowling, ed. Academic Press, Nueva York (1980); Kle ent, Z., "Hypersensitivity", páginas 149-177 en: Phytopathogenic Prokaryotes, Vol. 2, M. S. Mount y G. H Lacy, ed. Academic Press" Nueva York (1982) ) . La respuesta de hipersensibilidad inducida por bacterias se observa fácilmente como un colapso tisular si altas concentraciones (> 10 células/ml) de un patógeno de rango limitado de huéspedes tal como Pseudomonas syringae o Erwinia amylovora se infiltran en las hojas de plantas no huéspedes (la necrosis ocurre sólo en células de plantas aisladas a menores niveles de inoculo) (Klement, Z., "Rapid Detection of Pathogenicity of Phytopathogenic Pseudomonads", Nature 199: 299-300; Klement, et al . , "Hypersensitive Reaction Induced by Phytopathogenic Bacteria in the Tobacco Leaf", Phytopathology 54: 474-477 (1963); Turner, et al . , "The Quantitative Relation Between Plant and Bacterial Cells Involved in the Hypersensitive Reaction", Phytopathology 64: 885-890 (1974); Klement, Z., "Hypersensitivity", páginas 149-177, en Phytopathogenic Prokaryotes, Vol. 2, M.

S. Mount y G. H. Lacy, ed. Academic Press, Nueva York (1982) ) . Las capacidades de inducir la respuesta de hipersensibilidad en un no huésped y de ser patógeno en un huésped, parecen estar ligadas. Tal co o observó Klement, Z., "Hypersensitivity", páginas 149-177, en Phytopathogenic Prokaryotes, Vol. 2, M. S. Mount y G. H. Lacy, ed. Academic Press, Nueva York, estos patógenos también causan necrosis fisiológicamente similares, aunque retardadas, en sus interacciones con huéspedes compatibles. Además, la capacrdad de producir la respuesta de hipersensibilidad o patogénesis, depende de un conjunto común de genes, denominado hrp (Lindgren, P. B., et al . , "Gene Cluster of Pseudomonas syringae pv. "phaseolicola" Controls Pathogenicity of Bean Plants and Hypersensitivity on Nonhost Plants", J. Bacteriol. 168: 512-22 (1986); Willis, D. K. et al . , "hrp Genes of Phytopathogenic Bacteria", Mol . Plant-Microbe Interact., 4: 132-138 (1991)). En consecuencia, la respuesta de hipersensibilidad puede guardar indicios tanto de la naturaleza de la defensa de la planta como del fundamento de la patogenicidad bacteriana. Los genes hrp están ampliamente distribuidos en patógenos gram negativos de plantas, en donde están agrupados, conservados y .en algunos casos son intercambiables (Willis, D. K. et al . , "hrp Genes, of Phytopathogenic Bacteria", Mol. Plant-Microbe Ineteract., 4: 132-138 (1991); Bonas, U., "hrp Genes of Phytopathogenic Bacteria", páginas 79-98, en: Current Topics in Microbiology and Immunology: Bacterial Pathogenesis of Plants and Animáis - Molecular and Celular Mechanisms, J. L. Dangl, ed. Springer-Verlag, Berlin (1994) ) . Varios genes hrp codifican para componentes de una ruta de secreción proteica similar a la usada por Yersinia, Shigella y Salmonella spp. para secretar proteínas esenciales en enfermedades animales (Van Gijsegem, et al . , "Evolutionary Conservation of Pathogenicity Determinants Among Plant and Animal Pathogenic Bacteria", Trends Microbiol, 1: 175-180 (1993) ) . En {., amylovora , P. syringae y P. solanacearum, los genes hrp se ha demostrado que controlan la producción y secreción de inductores de proteina ricos en glicina de la respuesta de hipersensibilidad (He, S. Y., et al . , 2Psudomonas Syringae pv. Syringae HarpinPss: a Protein that is Secreted via the Hrp Pathway and Elicits the Hypersensitive Response in Plants", Cell, 73: 1255-1266 (1993), Wei, Z.-H., et al . , "Hrpl of Erwinia amylovora Functions in Secretion of Harpin and is a Member of a New Protein Family", J. Bacteriol, 175: 7958-7967 (1993); Arlat, M. et al . , "PopAl, a Protein Which Induces a Hypersensitive-like Response on Specific Petunia Genotypes, is Secreted via the Hrp Pathway of Pseudomonas solanacearum" , EMBO, J. 13: 543-553 (1994)). La primera de estas proteínas fue descubierta en E. amyl ovora Ea321, que es una bacteria que causa la roya de fuego de plantas rosáceas y fue designada como harpina (Wei, Z.-M., et al . , "Harpin, Elicitor of the Hypersensitive Response Produced by the plant Pathogen Erwinia amylovora " , Science, 257: 85-88 (1992)). Mutaciones en el gen hrpN codificante revelaron que el inductor de respuesta de hipersensibilidad es requerido por E. -amylovora para inducir una respuesta de hipersensibilidad en hojas de tabaco no huéspedes y provocar los síntomas de la enfermedad en la pera, que es altamente susceptible. La proteina PopAl de P. solanacearum GMI1000 tiene propiedades físicas similares y también induce la respuesta de hipersensibilidad en hojas de tabaco, las cuales no son un huésped para esta cepa (Arlat, et al . , "PopAl, a Protein Which Induces a Hypersensitive-like Response on Sepecific Petunia Genotypes, is Secreted via the Hrp Pathway of Psudomonas solanacearum" , EMBO J. 13: 543-53 (1994)). Sin embargo, las mutantes de P. solanacearum popA todavía inducen la respuesta de hipersensibilidad en el tabaco y provocan la enfermedad en el jitomate. Asi pues, la función de estos inductores de la respuesta de hipersensibilidad ricos en glicina puede variar ampliamente entre patógenos gram negativos de las plantas. Otros inductores de la respuesta de hipersensibilidad patógenos para plantas han sido aislados - € - y sus genes codificantes han sido clonados y secuenciados. Estos incluyen: Erwinia chrysanthemi (Bauer, et al . , "Erwinia chrysanthemi HarpinEch: Soft-Rot Pathogenesis", MPMI 8 (4): 484-91 (1995)); Erwinia carotovora (Cui, et al . , "The RsmA~ Mutants of Erwj*nia carotovora subsp. carotovora Strain Ecc71 Overexpress rpNEcc and Elicit a Hypersensitive Reaction-like Response in Tobacco Leaves", MPMI 9 (7): 565-73 (1966)); Erwinia stewartii (Ah ad, et al . , , "Harpin is not Necessary for the Pathogenicity of Erwinia stewartii on Maize", 8th Int'l. Cong. Molec. Plant-Microb. ínter., Julio 14-19, 1996 y Ahmad, et al . , "Harpin is not Necessary for the Pathogenicity of Erwinia stewartii on Maize", Ann. Mtg. Am. Phytopath. Soc., Julio 27-31, 1996) ; y Psudomonas syringae pv. syringae (Publicación Internacional WO 94/26782 de Cornell Research Foundation, Inc. ) . La presente invención presenta avances en el esfuerzo de identificar, clonar y secuenciar proteínas o péptidos inductores de respuesta de hipersensibilidad provenientes de patógenos de plantas. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una proteína o polipéptido aislado que induce una respuesta de hipersensibilidad en plantas, así como a una molécula de ADN aislado que codifica para la proteína o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad. La proteína o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad se puede utilizar para impartirle resistencia a la enfermedad a plantas, para incrementar el crecimiento de plantas y/o para controlar insectos. Esto involucra la aplicación de la proteína o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad, en una forma no infecciosa, a plantas o semillas de plantas, bajo condiciones efectivas para impartir resistencia a la enfermedad, para incrementar el crecimiento de la planta y/o para controlar insectos en plantas o plantas que crecen a partir de las semillas. Como alternativa a la aplicación de la proteína o polipéptido inductor de respuesta . de hipersensibilidad a plantas o semillas de plantas con el fin de impartirles resistencia a la enfermedad, para incrementar el crecimiento de la planta y/o para controlar insectos en las plantas, se pueden utilizar plantas o semillas de planta transgénicas. Cuando se utilizan plantas transgénicas, esto involucra proporcionar una planta transgénica transformada con una molécula de ADN que codifica para una proteina o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad y hacer crecer la planta bajo condiciones efectivas para impartirle resistencia a enfermedades, para incrementar el crecimiento de la planta y/o para controlar insectos en las plantas o plantas crecidas a partir de las semillas. Alternativamente, se puede proporcionar y plantar en el suelo una semilla de planta transgénica transformada con la molécula de ADN que codifica para la proteína o polipéptido inductor de respuesta de hipers^nsibilidad. Después, la planta es propagada bajo condiciones efectivas para impartirle resistencia a enfermedades, para incrementar el crecimiento de la planta y/o para controlar insectos en las plantas o en las plantas crecidas a partir de las semillas. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Las Figuras 1A-D muestran construcciones de mutagénesis, complementación y heterólogas y la homología y complementación de mutantes por .el locus avrE de P. syringae para el operón dspE de E. amyl ovora . Las cajas con linea punteada son ORFs no caracterizados; un triángulo obscuro indica un hrp (i.e., gen codificante para un inductor de respuesta de hipersensibilidad) ; las cajas son secuencias reguladoras que preceden a muchos genes hrp; y los triángulos claros indican otro promotor. Las líneas gruesas delinean el ADN para el cual la secuencia fue aumentada. La Figura ÍA muestra el grupo de genes dsp/hrp de E. amylovora en el pCPP430. Los nombres y tipos de proteina codificados en el operón están indicados arriba.

B, BamHI; E, EcóRI ; H, HíndlII. Las medias flechas indican promotores internos sin similitud al concenso hrp. La Figura IB muestra la región cadena abajo del h pN conteniendo el operón dspE. Los círculos marcan mutaciones por deleción e inserciones de transposones representativos: negro, no patógenos y HR (i.e., inductor de respuesta de hipersensibilidad) o HR reducida ( dsp) ; gris, virulencia reducida y HR; blanco, tipo silvestre. El T104 yace dentro del área marcada con la flecha doble de línea punteada. K, Tn5miniKm; P, Tn5phoA; T, Tnl0tetr; ?, mutación por deleción. La caja gris es una zona de ADN rico en A/T. La Figura 1C muestra las clonas y subclonas del operón dspE. Las designaciones del plásmido están indicadas a la izquierda y los promotores provenientes de vectores a' la derecha. Los sitios de restricción utilizados para la subclonación no mostrados anteriormente, se muestran entre paréntesis. Un signo "+" alineado con un círculo, representa una mutación en B e indica que la subclona complementa esa mutación. La Figura ID muestra el locus avrE (unidades de transcripción III y IV) de P. syringae pv. tomato DC3000 en el pCPP2357. También está indicado el por ciento de identidad de aminoácidos de las proteínas predichas AvrE y AvrF con respecto a las proteínas DspE y DspF. Los rectángulos negros son terminadores de transcripción (repeticiones invertidas) . La complementación de mutaciones mostradas en la Figura IB, se ilustran como en la Figura 1C anterior. La Figura 2 muestra la expresión de longitud completa y de la mitad N-terminal de la DspE en E. coli DH5a recombinante. Lisados de las células portadores de pCPP1259 conteniendo el operón completo dspE (carril A) ; pCPP50, que es el vector de clonación (carril B) ; o pCPP1244, que contiene sólo la mitad 5' del gen dspE (carril C) , fueron sometidos a una SDS-PAGE, seguido por una tinción con Azul de Coomassie. Las bandas correspondientes a la DspE (carril A) y a la mitad N-terminal de la DspE (carril C) están marcadas con flechas. La migración de marcadores peso molecular está indicada a la izquierda. Las Figuras 3A-D muestran la función del dspe en la patogenicidad e indución de HR. La Figura 3A muestra una pera inmadura 4 días después de la inoculación con (de izquierda a derecha) las cepas Ea321, Ea321 sp£?l554 ó Ea321dsp£?1554 portadora de la mitad 5' del dspE en pCPP1237. La Figura 3B muestra una hoja de soya de tipo Norchief 24 horas después de la infiltración con (1) Ea321, (2) Ea321dsp£?l554, (3) Ea321hrpN: : Tn5 (Wei, et al . , Science, 257: 85-88 (1992), la cual se incorpora en la presente como referencia) y (4) Ea321hrpL: : Tn5 (Wei, et ai., J. Bacteriol., 177: 6201-10 (1995), la cual se incorpora en la presente como referencia) . La Figura 3C muestra una hoja de tabaco 48 horas después de la infiltración con una serie de diluciones paralelas de suspensiones de las cepas (izquierda) Ea321 y (derecha) Ea321dSp£?1554. Las concentraciones infiltradas (de arriba hacia abajo) fueron 1 x 10 10, 1 x 109, 5 x 108 y 5 x ufc/ml. La Figura 3D es similar a la Figura 3C, excepto que se utilizaron la cepa más virulenta Ea273 y la correspondiente mutante Ea273dspí.?l554 y las concentraciones variaron de 5 x 10 9 a 5 x 105 ufc/ml en incrementos logarítmicos. La Figura 4 muestra la expresión de una construcción GUS sin promotor fusionada con dspE en E. amyl ovora Ea273. Se hicieron crecer las cepas Ea273 y Ea213dspE: : uidA (un merodiploide conteniendo tanto el dspE de tipo silvestre como un dspE truncado fusionado con el gen uidA; barras negras) en medio LB o medio Hrp MM o se inocularon pera inmaduras. Las cepas Ea213dspE: : uidAhrpL: : Tn5 (barra gris obscuro) y Ea273?rcV: : Tn5-jid__ (barra gris claro) también se hicieron crecer en hrp MM. Los valores mostrados representan el promedio de muestras por triplicado normalizado para la concentración bacteriana. La desviación estándar está representada por líneas que se extienden desde cada barra. Los valores promedio de las tres muestras de Ea273 en cada ensayo, fueron restadas de y se agregaron las desviaciones estándar, a los correspondientes valores obtenidos para las otras cepas. — Las Figuras 5A-C muestran la función de avirulencia transgenérica de este operón dspE y la complementación de una mutante dspE con el locus avrE. Hojas de soya fueron ya sea infiltradas (véase Figura 5A) p con suspensiones 1 x 10 ufc/ml (izquierda) de P. syringae pv. glycinea, carril 4, conteniendo pCPP1250 (conteniendo el operón dspE) o (derecha) pML 122 (vector de clonación) y se fotografiaron 24 horas después a temperatura ambiente, o bien (véase la Figura 5B) , infiltradas con suspensiones de 8 x 10 ufc/ml de las mismas cepas y fotografiadas después de siete días a 22°C y humedad relativamente alta. El colapso tisular es evidente en ambas hojas en donde la cepa portadora del pCPP1250 estaba infiltrada. En la hoja incubada durante siete días, es evidente la clorosis que se extiende más allá del área infiltrada, que es típica de la enfermedad, en la mitad infiltrada con la cepa portadora del vector solamente. La sección obscura en el lado de la hoja infiltrada con la cepa portadora del pCPP1250, es una sombra causada por un doblez en la hoja. La Figura 5C muestra mitades de pera inoculadas con (de izquierda a derecha) Ea321, Ea321dsp£?l521 (pCPP2357, conteniendo el locus avrE) o Ea321 sp.E?l521 (pCPP2357 avrE: : Tn5uidA) y se fotografiaron después de siete días. Aungue los síntomas se reducen en gran medida en relación al tipo silvestre, la necrosis es evidente y se pueden observar gotas de exudado dentro del pozo de la fruta inoculada con la cepa dspE portadora del locus .avrE intacto. La fruta inoculada con la cepa dspE portadora de una clona interrumpida de avrE, no presenta síntomas. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una molécula de ADN aislada que tiene la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID No. 1 siguiente: ATGGAATTAA AATCACTGGG AACTGAACAC AAGGCGGCAG TACACACftGC CGCGCACAAC 60 CCTGTGGGGC ATGGTGTTGC CTTACAGCAG GGCAGCAGCA GCAGCftGCCC GCAAAATGCC 120 GCTGCATCAT TGGCGGCAGA AGGCAAAAAT CGTGGGAAAA TGCCGAGAAT TCACCAGCCA 180 TCTAC GCGG CTGATGGTAT CASCGCTGCT CACCAGCAAA AGAAATCCTT CRGTCTCAGG 240 GGCTGTTTGG GGACGAAAAA ATTtTCCftGA TOGGCACCGC AGGGCCAGCC AGGTACCACC 300 CACAGCAAAG GGGCAACATT GCGCGATCTG CTGGOGCGGG ?CGACGGCGA AACGCA--CAT 360 GAGGCGGCCG CGCCAGATGC GGCGCGTTTC ACCCGTTCGG GCGGCGTCAA AOGCCGCAAT 420 ATGGACGACA TGGCCGGGCG GCCAATGGTG AAAGGTGGCA GCGGCGAAGA TAAGGTACCA 480 ?CGCAGCAAA AACGGCATCA GCTGAACAAT TTTGGCCAGA TGCGCCAAAC GATGTTGAGC 540 AA?ATGGCTC ACCCGGCTTC ?GCCAACGCC GGCGATCGCC TGCAGCATTC ACCGCCGCAC 600 ATCCCGGGTA GCCACCACGA AATCAAGGAA GAACCGGTTG GCTCCACCAG CAAGGCAACA 660 ACGGCCCACG CAGACAGAGT GGAAATCGCT CAGGAAGATG ACGACAGCGA ATTCCAGCAA 720 CTGCATCAAC AG GGCTGGC GCGCGAACGG GAAAATCCAC CGCAGCCGCC CAAACTCGGC 780 GTTGCC?CAC CGATTAGCGC CAGGTTTCAG CCCAAACTGA CTGCGGTTGC GGAAAGCGTC 840 CTTGAGGGGA CAGATACCAC G AGTCACCC CTTAAGCCGC AATCAATGCT GAAAGGAAGT 900 GGAGCCGGGG TAACGCCGCT GGCGGTAACG CTGGATAAAG GCAAGTTGCA GCTGGCACCG 960 GATAATCCAC CCGCGCTCAA TACGTTGTTG AAGCAGACAT TGGGTAAAGA CACCCAGCAC 1020 TATCTGGCGC ACCATGCCAG CAGCGACGGT AGCCAGCATC TGCTGCTGGA CAACAAAGGC 1080 CACCTsTTTG ATATCAAAAG CACCGCCACC AGCTATAGCG TGCTGCACAA CAGCCACCCC 11 O GGTGAGATAA AGGGCAAGCT GGCGCAGGCG GGTACTGGCT CCGTCAGCGT AGAOGGTAAA 1200 ?GCGGCA?-SA TCTCGCTGGG GAGCGGTACG CAA-U?TC-U-A ?CAAAACAAT GCT?AGCC?A 1260 CCGGßGGAAG CSCACCGTTC CTTATTAACC sGCATTTGGC ACCATCCTOC TGGOSa-GCG 1320 CGGCCGCAGG GOMGTCA?T 035CCTGCAT GAOBACA??? TK-AIAT CT GCATCCOGAG 1380 CTGGßCGTAT CGCAATCTGC GGAT?AA6AT ACCCACAGCC AGCTGTCTCG CCACGCASAC 1440 GGT?AGCTCT ATGCGC?GAA AGACAAOCST ACCCTGCAAA AC TCICOSA TAATAAATC 1500 TCAGAAA?GC TGGTCGATAA AATCAAATCG TATTCOT-TTC ATCAGCGGGG GCAGG?CWCG 1560 ATXGGACGG ATACTCCOGG COSCCAT?AG A GAGTATTA TGCCCTCGCT GGKGGCGGCC 1620 CCGGAGAGCC ATATTTCCCT CAGCCTGCAT TTTGOCGATG CCCACCAGGG GTTATTGCAC 16(0 GGGAASTCGG AGCTTGAGGC ACAATCTCTC GOGATCAGCC ATGGGOGACT GGTTGTCGCC 1740 GAT?GCGAAG GCAAGCTGTT TAGCGCCGCC ATTCCGAAGC AAGGGGATGG AAACGAACTG 1800 AAAATGAAAG CCATGCCTCA GCATGCGCTC GATGAACRTT TTHGTCATG? CCACCAGATT 1860 TCTGGATTTT TCCATGACGA CCA GGCCAG CTTAATGCGC TGGTGAAAAA TAACTTCBGG 1920 CAGCAGCATG CCTGCCCGTT GGGTAAC---- -ATCAGTTTC ACCCCGGCTC GAACCTGACT 19S0 GATCCGCTGG TTATCGA AA T AGCTGGGG CTGCATCATA CCAATCCT5A ACCGCATGAG 2040 AT CTTGATA TGGGGCATTT AGGCA--CCTG GCGTTACAGG AGGGCAAGCT TCACXATTT 2100 GACCAGCTGA CCAAAGGCTC GA TGGCGCG GAG CAGATT GTAAGCAGCT GAAAAAAGGC 2160 CTGGATGGAG CAGCTTATCT ACTGAAAGAC GGTGAASTGA AACGCCTGAA TATTAATCAG 2220 AGCACCT-C7 TATCAAGCA CGGAACOGAA AACGT.J -.TI1 CCTGCCGC . TGTGCG--AAT 2280 AAACCGGAGC CGGGAGATGC CCTGCAAGGG CTGAATAAAG ACGATAAGGC CCAGGCCATG 2140 GCGGTGATTG GGGT---ATAA ATACCTGGC-- CTGACGGAAA AAGGGGACAT TCGCTCCTTC 2400 CAGATAAAAC CGGCACCCA GCAGTTGOAG CGGCCGGCAC AAACTCTCAG CCSCGAAGGT 2460 ATCAGCGGCG AACTGAAAGA CATTCATGTC GACCACAAGC AGAACCTGTA TGCCTTGACC 2520 CACGAGGGAG AGGTGTTTCA TCAGCCGCGT GAAGCCTGGC ?GA?TGGTGC CGAAAGCTU5C 2580 AGCTGGCACA AACTGGCGTT GCC?GftG?GT GAAAGTAAGC TAAAAAGTCT GGACATGAGC 2640 CATGAGCA-A AACCGATTCC CACCTTTGAA GACGGTAGCC AGCATCAGCT GAAGGCTGGC 2700 GGCTGGCACG CCTATGCGGC ACCTGAACGC GGGCCGCTCG CGGTGGGT--C CAGCGGTTCA 2760 CAAACOGTCT TTAACCGACT ??TG--AGGGG GTGAA?GCCA AGGTGATCCC AGGCAGCGGG 2820 TTGACGGTTA ACCTCTCGGC TCAGACGGGG GGAATGACCG GCGCCGAAGG GCGCAAGGTC 2880 AGCAGTAAAT TTTCCGAAAG GATCCGCGCC TATGCGTTCA ACCCAACAAT GTCCACGCCG 2940 CGACCGATTA AAAATGCTG TTATGCCACA CAGCACGGCT GGCAGGCGCG TGAGGGGTTG 3000 AAGCCGTTGT ACGftGATGCA GGGAGCGr-TG ATTAAACAAC TGGATGCGCA TAACGTTCGT 3060 CATAACGCGC CACAGCC GA rrT0C?G-isC AAAC?GGAAA CTCTOGATTT AGGOSAACAT 3120 GGCGCftGAAT TCCTTAACGA CAIGAAGCGC TTCCEt-GAOG AACTGGAGCA GACSTGCAACC 3180 CGTTCGGTG* C?eTTTrA8 TCA?CATCAG GGAGTGCTAA AAAGCAACGG TSAAATCAAT 3240 ?GCGAATTTA AGCCKTOGCC CGGCAAGGCG TTOGTCC?GA GCrrrA?CGT CAATCGCTCT 3300 GGTCAGGATC TAAGCAACTC ACTCCAACAG GCAGTACATG CCACGCCGCC ATCCGCAGAG 3360 ?GTAAACTGC AATCCATSCT GGGGCAl.i l 1 GTCAGTGCCG GGGTGGAT?T GAGTCATCAG 3420 AAGGGCGAGA TCCCGCTGGG COGCCWSCGC GATCOGAATG ATAAAACCGC ?CTGACCAAA 3480 TCGCGTTTAA 111TAGATAC CGTGACCATC GGTGAA TGC ATGA?CTGGC CGATAAGGCG 3540 AAA?-reC AT CTGACCATAA ACCCGATGOC GATCAGAT&A AACAGCTGCG CCSGCM-TTC 3600 GATACGCTGC GTGAAAAGCG GTATGAGAGC AATCüGGTOA AGCATTACAC CGATATGGG-. 3660 TTCACCCATA ATAAGGCGCT GGAAGCAAAC TATGATGOGG TCAAAGCCTT TATCAATGCC 3720 TTTAAGAAAG AGCACCACGC CGTCAATCTG ACCACGCGTA COSTACTCGA AT-ACAGGGC 3780 AGTGCGGAGC TGGCGAAGAA GCTCAAGAA? ACGCTGTTCT CC TGGACAs TGGTGAAAGT 3840 ATGAGCTTCA GCCGGTCATA TGGCGGGGGC GTCAGCACTG TCTTTGTGCC TACCCTTAGC 3900 AAGAAGGTGC CAGTTCCG-T GATCCCCGGA GCCGGCATCA CGCTGGATCG CGCCTATAAC 3960 CTGAGCTTCA CTCGTACC?G CGGCGGATTG AAC-TCAGTT TTGGCC-CGA CGGCGsssTG 4020 AGTGGTAAG . TCATGGTCGC TACCGGCCAT GATGTGATGC CCTATATGAC CGGTAAGAAA 4080 ACCAGTGCAG GTAACGCCAG TGACTGGTTG AGCGCAAAAC ATAAAATCAG CCOGGACTTG 4140 CGTATCGGCG CTGCTGTGAC TGGCACCCTG CAAGGAACGC TACAAAACAG CCTCAAGTTT 4200 AAGCTGACAG AGGA7GACCT GCCTGGCTTT ATCCATGGCT TG?CGC?TGG CACGTTG?CC 4260 CCGGCAGAAC TGTTCCAAAA GGGGATCGAA CATCftGATG? AGCAGGGCAG CAAACTGACG 4320 •7TTAGCGTCG ATACCTCGGC AAATCTGGAT CTCCCTGCCG GTATCAATCT GA?CG?AGAC 4380 GGCACTAAAC CAAAT--GTGT CACTGCCCGT GT?TCTGCCG GGCTAAGTGC ATCGGCAAAC 4440 CTGGCCGCCG GCTCCCCTOA ACGCAGCACC ACCTCTGGCC AGTTTGGCAG CACGACTTCG 4500 GCCAGC?ATA ACCGCCCAAC CTTCCTCAAC CGGCTCGGCG CGGGTGCTAA CCTGACGGCT 4560 GCTTTAGGGG TTGCCCATTC ATCTACGCAT GAAGGGAAAC CGGTCOGGAT CTTCCCGGCA 620 TTTACCTCGA CCAATGTTTC GGCAGOGCTG GCGCTGGATA ACCGTACCTC ACAGAGTATC 46B0 AGCCTGGAAT TGAAGCCCGC GGACCCGGTG ACCAGCAACG AT?TCAGCGA GTTGACCTCC 474 c ACG TGGGAA AACACTTTAA CGATAGCGCC ACAACGAAGA TGCTTGCCGC TCTCAAAGAG 4800 TTAGATGACG CTAAGCCCGC TCAACAACTG CATATTTT?C AGCAGCATTT CAGTGCAAAA 4860 GATGTCCTCC GTGATGAACC CTACGAGGCG GTGCCCAACC TGAAAAAACT GGTGATACGT 4920 CAACAGGCTG CGGACAGCCA CAGCATGGAA TTAGOATCTG CCAGTCACAG CACGACCTAC 4980 AATAATCTCT CGAGA?T??A TAATGAC3GC ATTGTCGAGC TSCXACACAA ?C?TTTCGAT S04C GCSGCATTAC taGCAAGCAC TGCCAA?CGT CTO3GTGAAA TGATG?AIA? CGATCCOGCA 5100 CTGAAAGATA TTATTAAGCA GCTGCAAAGr ?CGCCGTTCA GCBGOGCCAG OSTCTCßATG S160 GAGCTGAAAG ?TGGTCTGOG TGAGCAG?CG GAAAAAGCAA TACTGGACGG TAAGGTCGGT S220 CSTG?AGAAG TGGßAGTACT TTTCCAGGAT CGTAACAACT TGOGTGTTAA ATCGGTCAGC S2B0 GTCAGTCAGT COGTCAGCAA AAGCGAAQGC TTCAATACCC CAGCGCIGTT ACTGGGGACC 5340 ASCAACAGCG CTGCTATGAG CATGGAGCGC ?ACATCGGAA CCATTAATTT TAAATACGGC 5400 CAGGATCAGA ACACCCCACG GCGATTTACC CTGGAGGGTG GAATAfiCTCA GGCIAATCCG S460 CX?GTCGCAT CTGCGCrTAC TGATTTGAAG AAGGAASGGC TGGAAATGAA G?GCTAA 5S17 Esta molécula de ADN se conoce como el gen dspE.

Esta molécula de ADN aislada de la presente invención, codifica para una proteína o polipéptido que induce una respuesta de hipersensibilidad de patógeno de plantas, teniendo la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No. 2, tal como la siguiente: Met Glu Leu Lys Ser Leu Gly Thr Glu His Lys Ala Ala Val His Th- 1 5 10 15 Ala Ala His Asn Pro Val Gly His Gly Val Ala Leu Gln Gln Gly Se- 20 25 30 Ser Ser Ser Ser Pro Cln Asn Ala Ala Ala Ser Leu Ala Ala Glu Glv 40 5 Lys Asn Arg Gly Lys Met Pro Arg He His Gln Pro Ser Thr Ala Ale 50 55 60 Asp Gly He Ser Ala Ala His Gln Gln Lvs Lys Ser Phe Ser Leu A— €5 70 75 8rr Gly Cys Leu Gly Thr Lys Lys Phe Ser Arg Ser Ala Pro Gln Gly Glp 85 90 95 Pro Gly Thr Thr His Ser Lys Gly Ala Thr Leu Arg Asp Leu Leu Ale 100 105 110 Arg Asp Asp Gly Glu Thr Gln Ris Glu Ala Ala Ala Pro Asp Ala Ai, 115 120 125 Arg Leu Thr Arg Ser Gly Gly Val Lys Arg Arg Asn Met Asp Asp H— 130 135 140 Ala Gly Arg Pro Met Val Lys Gly Gly Ser Gly Glu Asp Lys Val P~ 14S 150 1S5 -.¡I Thr Gln Gln Lys Arg His Gln Leu Asn Asn Phe Gly Glll Met Arg Glr. 165 170 175 Thr Met Leu Ser Lys Met Ala His Pro Ala Ser Ala Asn Ala Gly Asp 180 1B5 190 Arg Leu Gln Hie Ser Pro Pro His He Pro Gly Ser His His Clu He 19S 200 205 Lyß Glu Glu Pro Val Gly Ser Thr Ser Lys Ala Thr Thr Ala His Ala 210 215 220 Asp Arg Val Glu He Ala Gln Glu Asp Asp Asp Ser Glu Phe Gln Gln 225 23° 235 • 240 Leu His Gln Gln Arg Leu Ala Arg Glu Arg Glu Asn Pro Pro Gln Pro 245 250 255 Pro Lys Leu Gly Val Ala Thr Pro He Ser Ala Arg Phe Gln Pro Lys 260 265 270 Leu Thr Ala Val Ala Glu Ser Val Leu Glu Gly Thr Asp Thr Thr Gln 27S 280 285 Ser PGD Leu Lys Pro Gln Ser Met Leu Lys Gly Ser Gly Ala Gly Val 290 295 300 Thr Pro Leu Ala Val Thr Leu Asp Lys Gly Lys Leu Gln Leu Ala Pro 305 310 315 320 Asp Asn Pro Pro Ala Leu Asn Thr Leu Leu Lys Gln Thr Leu Gly Lys 325 330 335 Asp Thr Gln His Tyr Leu Ala His His Ala Ser Ser Asp Gly Ser Glp 340 345 350 His Leu Leu Leu Asp Asn Lys Gly His Leu Phe Asp He Lys Ser Thr 355 360 365 Ala Thr Ser Tyr Ser Val Leu His Asn Ser Hie Pro Glv Glu He Lys 370 375 380 Gly Lys Leu Ala Gln Ala Gly Thr Gly Ser Val Ser Val ASD Gly Lv* 3ad 390 395 " 4¿0 Ser Gly Lys He Ser Leu Gly Ser Gly Thr Gln Ser His Asn Lys Thr 405 10 415 Met Leu Ser Gln Pro Gly Glu Ala His Arg Ser Leu Leu Thr Gly He 420 425 430 Trp Gln His Pro Ala Gly Ala Ala Arg Pro Gln Gly Glu Sex He Aro 435 440 445 9 Leu His Asp Asp Lys He His He Leu His Pro Glu Leu Gly Val Tro 450 455 60 Gln Ser Ala Asp Lys Asp Thr His Ser Gln Leu Ser Arg Gln Ala Ase 465 470 475 48C Gly Lys Leu Tyr Ala Leu Lys Asp Asn Arg Thr Leu Gln Asn Leu Ser <85 490 495 Asp Asn Lys Ser Ser Glu Lys Leu Val Asp Lys He Lys Ser Tyr Ser 500 505 510 Val Asp Gln Arg Gly Gln Val Ala He Leu Thr Asp Thr Pro Gly Arg 515 520 525 His Lys Met Ser He Met Pro Ser Leu Asp Ala Ser Pro Glu Ser His 530 535 540 He Ser Leu Ser Leu His Phe Ala Asp Ala His Gln Gly Leu Leu His 545 550 S55 560 Gly Lys Ser Glu Leu Glu Ala Gln Ser Val Ala He Ser His Gly Arg 565 570 575 Leu Val Val Ala Asp Ser Glu Gly Lys Leu Phe Ser Ala Ala He Pro 580 585 5S0 Lys Gln Gly Asp Gly Asn Glu Leu Lys Met Lys Ala Met Pro Gln His 595 600 605 Ala Leu Asp Glu His Phe Gly His Asp His Gln He Ser Gly Phe Phe £10 6X5 620 His Aep Asp His Gly Glp Leu Asn Ala Leu Val Lys Asn Aen Phe Arg 625 630 £35 640 Gln Gln His Ala Cys Pro Leu Gly Asn Asp His Gln Phe Hi «45 €SQ s Pro Gly 655 Trp Asn Leu Thr Asp Ala Leu Val He Asp Asn Gl 660 n Leu Gly Leu His 665 670 Hxs Thr Asn Pro Glu Pro His Glu He Leu Asp Met Gly His Leu Gl> 675 680 685 Ser Leu Ala Leu Gln Glu Gly Lys Leu His 690 Tyr Phe Asp Gln Leu Thr 695 700 Lys Gly Trp Thr Gly Ala Glu Ser Asp Cys Lys Gln Leu Lys Lys Glv 715 72D Leu Asp Gly Ala Ala Tyr Leu Leu Lys Asp Gly Glu Val Lys Arg Leu 725 730 735 Asn lie Asn Gln Ser Thr Ser Ser He Lys HiS Gly Thr Glu Asn ^ 740 745 750 Phe Ser Leu Pro Has Val Arg Asn Lys Pro Glu Pro Gly Asp Ala Leu 755 760 765 Gln Gly Leu Asn Lys Asp Asp Lys Ala Gln Ala Met Ala Val pe Gly 770 775 780 Val Asn Lys Tyr Leu Ala Leu Thr Glu Lys Gly Asp He Arg Ser Phe 785 790 7 79«5t BOO Gln He Lys Pro Gly Thr Gln Gln Leu Glu Arg Pro Ala Gln Thr Leu 805 810 ßls Ser Arg Glu Lys Gln Asn Leu Tyr Ala Leu Thr His Glu Gly Glu Val Phe His Gln 835 840 845 Pro Arg Glu Ala Trp Gln Asn Gly Ala Glu Ser Ser Ser Trp His Lys 850 855 860 Leu Ala Leu Pro Gln Ser Glu Sex Lys Leu ys Ser Leu Asp Met Ser 865 870 875 880 His Glu His Lys Pro He Ala Thr Phe Glu Asp Gly Ser Gln His Gln 885 890 895 Leu Lys Ala Gly Gly Trp His Ala Tyr Ala Ala Pro Glu Arg Gly Pro 900 905 910 Leu Ala Val Gly Thr Ser Gly Ser Gln Thr Val Phe Asn Arg Leu Mee 915 920 925 Gln Gly Val Lys Gly Lys Val He Pro Gly Ser Gly Leu Thr Val Lys 930 935 940 Leu Ser Ala Gln Thr Gly Gly Met Thr Gly Ala Glu Gly Arg Lys Va- 945 950 955 Ser Ser Lye Phe Ser Glu Arg He Arg Ala Tyr Ala Phe Asn Pro Thr 965 Q n 370 975 Met Ser Thr Pro Arg Pro He Lys Asn Ala Al 980 a Tyr Ala Thr Glp His 985 990 Gly Trp Gln Gly Arg Glu Gly Leu Lys Pro Leu Tyr Glu Met Gln Glv 1000 1005 Ala Leu lie Lys Gln Leu Asp Ala His Asn Val Arg His Asn Ala Pro 1010 1015 1020 Gln Pro Asp Leu Gln Ser Lys Leu Glu Thr Leu Asp Leu Gly Glu His 1035 1040 Gly Aia Glu Leu Leu Asn Asp Met Lys Arg phe Arg ^ ^ ^ ^ 1045 1050 1055 Gln Ser Ala Thr Arg Ser Val Thr Val Leu Gly Gln His Gln 1060 Gly Val 1065 1070 Leu Lys Ser Asn Gly Glu He Asn Ser Glu Phe Lys Pro Ser Pro Gly 1075 1080 2085 Lys Ala Leu Val Gln Ser Phe Asn Val Asn Arg Ser Gly Gln Asp Leu 1090 1095 1100 Ser Lys Ser Leu Gln Gln Ala Val His Ala Thr Pro Pro Ser Ala Glu 1105 1110 1115 1120 Ser Lys Leu Gln Ser Met Leu Gly His Phe Val Ser Ala Gly Val Asp 1125 1130 1135 Met Ser His Gln Lys Gly Glu He Pro Leu Gly Arg Gln Arg Asp Pro 1140 1145 1150 Asn Asp Lys Thr Ala Leu Thr Lys Ser Arg Leu He Leu Asp Thr Val 1155 1160 1165 Thr He Gly Glu Leu His Glu Leu Ala Asp Lys Ala Lys Leu Val Ser 1170 H75 1180 Asp Thr Leu Arg Glu Lye Arg Tyr Glu Ser Asn Pro Val Lys His Tvr 1205 1210 1215 *.

Thr Asp Met Gly Phe Thr His Asn Lys Ala Leu Glu Ala Asn Tyr Asp 1220 1225 1230 Ala Val Lys Ala Phe He Asn Ala Phe Lys Lys Glu His His Gly Val 1235 1240 1245 Asn Leu Thr Thr Arg Thr Val Leu Glu Ser Gln Gly Ser Ala Glu Leu 1250 1255 1260 Ala Lys Lys Leu Lys Asn Thr Leu Leu Ser Leu Asp Ser Gly Glu Ser 1265 1270 1275 1280 Met Ser Phe Ser Arg Ser Tyr Gly Gly Gly Val Ser Thr Val Phe Val -.285 1290 1295 Pro Thr Leu Ser Lys Lys Val Pro Val Pro Val He Pro Gly Al* Gly 1300 1305 1310 He Thr Leu Asp Arg Ala Tyr Asn Leu Ser Phe Ser Arg Thr Ser Gly 1315 1320 1325 Gly Leu Asn Val Ser Phe Gly Arg Asp Gly Gly Val Ser Gly Asn He 1330 1335 1340 Met Val Ala Thr Gly His Asp Val Met Pro Tyr Met Thr G y Lys Lys 1345 1350 1355 1 133660 Thr Ser Ala Gly Asn Ala Ser Asp Trp Leu Ser Ala Lyfi His Lys He 1365 1370 1275 Ser Pro Asp Leu Arg He Gly Ala Al¡ Val Ser Gly Thr Leu Gln Glv 1380 "85 1390 Thr Leu Glp Asn Ser Leu Lys Phe Lys Leu Thr Glu Asp Glu Leu Pro 1395 1400 1405 GlY Pro Ala Glu Leu Leu Glp Lys Gly He Glu Hie Gln Met Lys Gln Gly Ser Lys Leu 1425 1430 Thr 1435 1440 Phe Ser Val Asp Thr Ser Ala Asn Leu Asp Leu Arg Ala Gly lie Asn 1445 1450 1455 Leu Asn Glu Asp Gly Ser Lys Pro Asn Gly Val Thr Ala Arg Val Ser 1 60 14« 1470 Ala Gly Ser Thr Thr Ser Gly Gln Phe Gly Ser Thr Thr Ser Ala Ser Asn Asn 1490 1495 1500 Arg Pro Thr Phe Leu Asn Gly Val Gly Ala Gly Ala Asn Leu Thr Ala 1505 1510 1515 1S20 Ala Leu Gly Val Ala His Ser Ser Thr His Glu Gly Lys Pro Val Gly 1525 1S30 1535 He Phe Pro Ala Phe Thr Ser Thr Asn Val Ser Ala Ala Leu Ala Leu 1540 1545 1550 Asp Asn Arg Thr Set Gln Ser He Ser Leu Glu Leu Lys Arg Ala Glu 1555 1560 1565 ro Val Thr Ser Asn Asp He Ser Glu Leu Thr Ser Thr Leu Gly Lys 1570 1575 1580 His Phe Lys Asp Ser Ala Thr Thr Lye Met Leu Ala Ala Leu Lys Giu 15BS 1590 1595 1600 Leu Asp Asp Ala Lys Pro Ala Glu Gln Leu Hie He Leu Gln Gln Hxs ?«05 ?e?o 1615 Phe Ser Ala Lys Asp Val Val Gly Asp Glu Arg Tyr Glu Ala Val Arg 1€20 1625 1630 Asn Leu Lys Lys Leu Val He Arg Gln Cln Ala Ala Asp Ser His Ser 1635 1640 1645 Met Glu Leu Gly Ser Ala Ser Hxs Ser Thr Thr Tyr Asn Asn Leu Ser 1650 1655 1660 Arg He A=n Asn Asp Gly He Val Glu Leu Leu H.?s Lys His Phe Asp 1665 1670 1675 16B0 Ala Ala Leu Pro Ala Ser Ser Ala Lys Arg Leu Gly Glu Met Met Asn 1685 1690 1695 Asn Asp Pro Ala Leu Lys Asp He He Lye Gln Leu Gln Ser Thr Pro *700 1705 1710 Phe Ser Ser Ala Ser Val Sex Met Glu Leu Lys Asp Gly Leu Arg Glu 1715 1720 1725 Gln Thr Glu Lys Ala He Leu Asp Gly Lys Val Gly Arg Glu Glu Val 1730 1735 1740 Gly Val Leu Phe Gln Asp Arg Asn Asn Leu Arg Val Lys Ser Val Ser 1745 1750 1755 1760 Val Ser Gln Ser Val Ser Lys Ser Glu Gly Phe Asn Thr Pro Ala Leu 1765 1770 1775 Leu Leu Gly Thr Ser Asn Ser Ala Ala Met Ser Met Glu Arg Asn He 1780 1785 1790 Gly Thr He Asn Phe Lys Tyr Gly Gln Asp Gln Asn Thr Pro Arg Arg 1795 1800 1805 Phe Thr Leu Glu Gly Gly He Ala Gln Ala Asn Pro Gln Val Ala Ser 1810 1B15 1820 Ala Leu Thr Asp Leu Lys Lys Glu Gly Leu Glu Met Lys Ser 1825 1830 1835 Esta proteina o polipéptido es de aproximadamente 198 kDa y tiene un pl de 8.98. La presente invención se refiere a una molécula de ADN aislada que tiene la secuencia nucleotidica de la SEQ ID No. 3 siguiente: ATGACATCGT CACAGAGCG CGTTGAAAGG TTTTTACAGT ATTTCTCCG.: CGGGTGTAAA 60 ACGCCCATAC AT TGAAAGA CGGGGTGTGC GCCCTGXATA ACGAACAAGA TGAGGAGGCG 120 scGGTGCT--s AACTACCGCA ACACMCGAC AGCCTGGGAC TACACGGCCG AATCATTGA5 180 GCTGACCCAC AAACTTCAAT AACCCTCTAT TCGATGCTAT T?CAGCTG?A TTTTGAAATG 240 GCGCCCATGC CCGGCTOTTG GCTGGCGCTG GATGAACTGC ACRACGTGCG TT-rAlx.--.---' 300 CAGCAGTCCC TGGAGC-ATC-T GGATGAA3CA AGTTTTAGCG A?ATCGTT?G CGGCTTCATC 360 GAACATGCGG CAGAAGTGCG TGAGTATATA GCGCAATTAG ACGAGAGTAG CGCGG ATAA 420 Éste es conocido como el gen dspF. Esta molécula de ADN aislada de la presente invención codifica para una proteina o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No. 4 siguiente: Met Thr Ser Ser Gln Gln Arg Val Glu Arg Phe Leu Gln Tyr Phe Ser l __ 5 ao 1S Ala Gly Cys Lys Thr Pro He His Leu Lys Asp Gly Val Cys Al --Cl- 30 Tyr Asn Glu Gln Asp Glu Glu Ala Ala Val Leu Glu val Pro Gl Ser Asp ser Leu Leu Leu His Cys Arg He He Glu Ala As-. c. 50 55 60 P XO Gln Thr Ser He Thr Leu Tyr Ser Met Leu Leu Gln Leu Asn Phe G-... --.. 65 70 75 *AU "et Ala Ala Met Arg Gly Cys Trp Leu Ala Leu Asp Glu Leu His Asn Val 90 95 Arg Leu Cys Pbe Gln Gln Ser Leu Glu His LeU Asp Glu Ala Ser Phe 1 . n0n0 105 110 Ser Asp He Val Ser Gly Phe He Glu His Ala Ala Glu Val A , „. 115 120 12" al Ar9 Glu Tyr He Ala G n Leu Asp Glu Ser Ser Ala Ala 130 135 Esta proteina o polipéptido es de aproximadamente 16 kDa y tiene un pl de 4.45.

Los fragmentos del polipéptido o proteina inductora de respuesta de hipersensibilidad anterior, quedan abarcados dentro de la presente invención.

Se pueden producir fragmentos adecuados por varios medios. En el primero, subclonas del gen que codifica para la proteina inductora de la presente invención, se producen mediante manipulación genética molecular convencional, subclonando fragmentos génicos. Después, las subclonas se expresan in vi tro o in vivo en célula~S bacterianas para obtener una pequeña proteina o péptido, el cual se puede probar con respecto a la inducción de actividad de conformidad con el procedimiento que se describe más adelante. Como alternativa, se pueden producir fragmentos de una proteina inductora por digestión de una proteina inductora de longitud completa con enzimas proteoliticas, tales como quimiotripsina o proteinasa A de Staphylococcus, o tripsina. Es probable que las diferentes enzimas proteolíticas rompan a las proteínas inductoras en diferentes sitios, basándose en la secuencia de aminoácidos de la proteína inductora. Algunos de los fragmentos que se obtienen de la proteolisis, pueden ser inductores activos de resistencia. En otro enfoque, basándose en el conocimiento de la estructura primaria de la proteína, se pueden sintetizar fragmentos del gen de la proteína inductora utilizando la técnica RCP, junto con conjuntos específicos de cebadores, seleccionados para representar porciones particulares de la proteína. Posteriormente, estos fragmentos se pueden clonar en un vector apropiado para incrementar la expresión de un péptido o proteína truncada. También se puede utilizar la síntesis química para preparar fragmentos adecuados. Tal síntesis se lleva a cabo utilizando secuencias de aminoácidos conocidas del inductor que se está preparando. Alternativamente, se somete un inductor de longitud completa a altas temperaturas y presiones, lo cual producirá fragmentos. Después, estos fragmentos se pueden separar por los procedimientos convencionales (e.g., cromatografía, EGPA-DSS) . Así mismo (o alternativamente) se pueden modificar variantes, por ejemplo, mediante la deleción o adición de aminoácidos que tengan, una influencia mínima sobre las propiedades, estructura secundaria y naturaleza hidropática del polipéptido. Por ejemplo, un polipéptido se puede conjugar con una secuencia de señal (o líder) en el extremo N-terminal de la proteína, lo cual dirige, durante o después de la traducción, la transferencia de la proteína. El polipéptido también se puede conjugar con un ligando u otra secuencia para facilitar la síntesis, purificación o identificación del polipéptido. Las moléculas de ADN adecuadas son aquellas que se hibridizan con una molécula de ADN que comprende una secuencia nucleotídica de las SEQ ID No. 1 y 3, bajo condiciones estrictas. Un ejemplo de tales condiciones altamente estrictas adecuadas es cuando la hibridación se lleva a cabo a 65°C durante 20 horas, en un medio que contiene NaCl 1 M, Tris-HCl 50 mM, pH 7.4, AEDT 10 mM, dodeciisulfato de sodio al 0.1%, ficol al 0.2%, poliv±nilpirrolidona al 0.2%, albúmina sérica bovina al 0.2%, 50 µg/ml de ADN de E. coli . Sin embargo, cualquier molécula de ADN que se hibridice con una molécula de ADN que comprenda la secuencia nucleotídica de las SEQ ID No. 1 y 3, bajo tales condiciones estrictas, no debe ser idéntica a los ácidos nucleicos que codifican para las proteínas o polipéptidos inductores de respuesta de hipersensibilidad de E. amyl ovora (tal como se describe en Wei, Z.-M.,- et al . , "Harpin, Elicitor of the Hypersensitive Response Produced by the Plant Pathogen Erwinia amylovora" , Science, 257: 85-88 (1992), la cual se incorpora en la presente como referencia) , Erwinia chrysan themi (tal como se describe en Bauer, et ai., "Erwinia chrysantemi HarpinEch^ Soft-Rot Pahtogenesis", MPMI, 8 (4): 484-91 (1995), la cual se incorpora en la presente como referencia) , Erwinia carotovora (tal como se describe en Cui, et al . , "The RsmA- Mutants of Erwinia carotovora subsp. carotovora Strain Ecc71 Overexpress hrpNEcc and Elicit a Hypersensitive Reaction-like Response in Tobacco Leaves", MPMI, 9 (7) : 565-73 (1966), la cual se incorpora en la presente como referencia) , Erwinia stewartii (tal como se describe en Ahmad, et al . , "Harpin is not Necessary for the Pathogenicity of Erwinia steawartii on Maize", 8th Int'l. Cong. Molec. Plant-Microb. ínter., Julio 14-19, 1996 y Ahmadr- et al . , "Harpin is not Necessary for the Pathogenicity of Erwinia stewartii on Maize", Ann. Mtg. Am. Phytopath. Soc., Julio 27-31, 1996), la cual se incorpora en la presente como referencia) y Pseudomonas syringae pv. syringae (Publicación Internacional WO 94/26782 de Cornell Research Foundation, Inc., la cual se incorpora en la presente como referencia) . La proteina o polipéptido de la presente invención de preferencia se produce en forma purificada (preferiblemente cuando menos aproximadamente 80%, de preferencia 90% de pureza) mediante las técnicas convencionales. Típicamente, la proteina o polipéptido de conformidad con la presente invención, se secreta en el medio de crecimiento de células huésped recombinantes. Alternativamente, la proteína o polipéptido de conformidad con la presente invención se produce, pero no se secreta, en el medio de crecimiento. En tales casos, para aislar la proteina, la célula huésped (e.g., E. coli ) portadora de un plásmido recombinante se propaga, se lisa por sonicación, se calienta, o por tratamiento químico y el homogenizado se centrifuga para remover los restos bacterianos. Después el sobrenadante se somete a una precipitación secuencial con sulfato de amonio. La fracción que contiene el polipéptido o proteína de la presente invención, se somete a filtración en gel en un dextrán o columna de poliacrilamida de tamaño apropiado, para separar las proteínas. Si es necesario, la fracción proteica puede ser purificada adicionalmente por CLAR (Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento) . La molécula de ADN que codifica para el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad, se puede incorporar en células utilizando la tecnología convencional de ADN recombinante. Generalmente esto incluye insertar la molécula de ADN en un sistema de expresión al cual la molécula de ADN es heteróloga (i.e., normalmente no está presente). La molécula de ADN heteróloga es insertada en el sistema de expresión o vector, en una orientación de sentido apropiada y con un marco de lectura correcto. El vector contiene los elementos necesarios para la transcripción y traducción de las secuencias codificadoras de proteína insertadas. La Patente Norteamericana No. 4,237,224 de Cohén y Boyer, la cual se incorpora en la presente como referencia, describe la producción de sistemas de expresión en forma de plásmidos recombinantes, utilizando rompimiento con enzimas de restricción y ligación con ADN ligasa. Estos plásmidos recombinantes, posteriormente, se introducen por medio de transformación y se replican en cultivos unicelulares incluyendo células de organismos procarióticos y eucarióticos crecidas en cultivo de tejidos. Los genes recombinantes también se pueden introducir en virus, tales como el virus vaccina. Los virus recombinantes se pueden generar por transcripción de plásmidos en células infectadas con virus. Los vectores adecuados incluyen, pero no se limitan a, los siguientes vectores virales tales como el sistema de vector lambda gtll, gt WES.tB, Charon 4 y vectores plasmídicos tales como pBR322, pBR325, pACYC177, pACYC1084, pUC8, pUC9, pUC18, pUC19, pLG339, pR290, pKC37, pKC37, pKClOl, SV 40, pBluescript II SK +/- o KS +/- (véase "Stratagene Cloning Systems" Catalog (1993) de Stratagene, La Jolla, Calif., EUA, la cual se incorpora en la presente como referencia) , pQE, pIH821, pGEX, serie pET (véase F. W. Studier et al . , "Use of T7 RNA Polymerase to Direct Expression of Cloned Genes", Gene Expression Technology, Vol. 185 (1990), la cual se incorpora en la presente como referencia) y cualquier derivado de los mismos. Las moléculas recombinantes se pueden introducir en células mediante transformación, particularmente transducción, conjugación, movilización o electroporación. Las secuencias de ADN se clonan en el vector utilizando los procedimientos de clonación estándar de la técnica, tales como los descritos por Sambrook et al . , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Laboratory, Cold Springs Harbor, Nueva York (1989), la cual se incorpora en la preseTite como referencia. Se puede utilizar una variedad de sistemas huésped-vector para expresar la secuencia o secuencias codificadoras de proteínas. Principalmente, el sistema vector debe ser compatible con la célula huésped utilizada. Los sistemas huésped-vector incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: bacterias transformadas con ADN de bacteriófagos, ADN de plásmidos o ADN de cósmidos; microorganismos tales como levaduras que contienen vectores de levaduras; sistemas de células de mamíferos infectadas con virus (e.g., virus vaccinia, adenovirus, etc.); sistemas de células de insectos infectadas con virus (e.g., baculovirus); y células de planta infectadas con bacterias. Los elementos de expresión de estos vectores varían en su fuerza y especificidad. Dependiendo del sistema huésped-vector utilizado, se puede utilizar cualquiera de un número de elementos de transcripción y traducción adecuados. Diferentes señales genéticas y eventos de procesamiento controlan muchos niveles de la expresión génica (e.g., transcripción del ADN y traducción del ARN mensajero (ARNm) ) . La transcripción del ADN depende de la presencia de un promotor, el cual es una secuencia de ADN que dirige la unión de la ARN polimerasa y por lo tanto promueve la síntesis de ARNm. Las secuencias de ADN de promotores eucaríoticos difieren de aquellas de los promotores procarióticos. Además, los promotores eucarióticos y señales genéticas que los acompañan, podrían no ser reconocidos ni funcionar en un sistema procariótico y, además, los promotores procarióticos no son reconocidos y no funcionan en células eucarióticas. De manera similar, la traducción del ARNm en procariotes depende de la presencia de señales procarióticas apropiadas, las cuales difieren de aquellas de los eucariotes. La eficiente traducción del ARNm en procariotes, requiere un sitio de unión al ribosoma denominado secuencia de Shine-Dalgarno ("SD") en el ARNm. Esta secuencia es una pequeña secuencia nucleotídica del ARNm que está localizada antes del codón de inicio, normalmente AUG, la cual codifica para la metionina amino-terminal de la proteína. Las secuencias SD son complementarias al extremo 3' del 16S ARNr (ARN ribosomal) y probablemente promueven la unión del ARNm a los ribosomas duplicándose con el ARNr para permitir un posicionamiento correcto del ribosoma. Para mayor información sobre la maximización de la expresión génica, véase Roberts y Lauer, Methods in Enzymology, 68: 473 (1979), la cual se incorpora en la presente como referencia. Los promotores varían en su "fuerza" (i.e., su capacidad de promover la transcripción. Para propósitos de expre-sar un gen clonado, es deseable utilizar promotores fuertes con el fin de obtener un alto nivel de transcripción y, por ende, de expresión del gen. Dependiendo del sistema de células huésped utilizado, se puede utilizar cualquiera de un número de promotores adecuados. Por ejemplo, cuando se clona en E. coli, sus bacteriófagos o plásmidos, se pueden utilizar promotores tales como el promotor del fago T7, el promotor Jac, promotor trp, promotor recA, promotor de ARN ribosomal, promotores PR y P del colifago lambda y otros, incluyendo pero no limitándose a lacUV5, ompF, bla , lpp y similares, para dirigir altos niveles de transcripción de los segmentos de ADN adyacentes. Adicionalmente, se puede utilizar un promotor híbrido trp-lacUV5 ( tac) u otros promotores de E. coli producidos por ADN recombinante u otras técnicas de síntesis de ADN, para obtener la transcripción del gen insertado. Las cepas de células huésped bacterianas y los vectores de expresión se pueden seleccionar de tal manera que inhiban la acción del promotor a menos de que sea específicamente inducida. En ciertas operaciones, la adición de inductores específicos es necesaria para una eficiente transcripción del ADN insertado. Por ejemplo, el operón lac es inducido mediante la adición de lactosa o IPTG (isopropiltio-beta-D-galactósido) . Una variedad de otros operones, tales como trp -. pro, etc . , están bajo diferentes controles. También se requieren de señales de iniciación específicas para la eficiente transcripción y traducción de genes en células procarióticas. Estas señales de iniciación de transcripción y traducción pueden variar de "fuerza", la cual es medida por la cantidad de ARN mensajero específico del gen y la cantidad de proteína sintetizada, respectivamente. El .vector de expresión de ADN, que contiene un promotor, también puede contener cualquier combinación de varias señales "fuertes" de iniciación de transcripción y/o traducción. Por ejemplo, una traducción eficiente en E. coli requiere una secuencia SD de aproximadamente 7-9 bases hacia 5' con respecto al codón de iniciación ("ATG"), para obtener un sitio de unión al ribosoma. Así pues, cualquier combinación SD-ATG que pueda ser utilizada por los ribosomas de la célula huésped, puede ser empleada. Tales combinaciones incluyen, pero no se limitan a, la combinación SD-ATG del gen ero o del gen N del colifago lambda de genes de E. coli de triptofano E, D, C, o A. Adicionalmente, se puede utilizar cualquier combinación SD-ATG producida por ADN recombinante u otras técnicas que incluyen la incorporación de nucleótidos sintéticos. Una vez que la molécula aislada de ADN que codifica para el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad ha sido clonada en un sistema de expresión, se puede incorporar fácilmente a una célula huésped. Tal incorporación se puede llevar a cabo mediante las diversas formas de transformación anteriormente descritas, dependiendo del sistema vector/huésped celular utilizado. Las células huésped adecuadas incluyen, pero no se limitan a, bacterias, virus, levaduras, células de mamíferos, de insectos, de plantas y similares. La presente invención además se refiere a métodos para impartir resistencia a enfermedades a plantas, incrementar el crecimiento de plantas y/o efectuar el control de insectos para plantas. Estos métodos incluyen la aplicación de un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad en una forma no infecciosa, a la totalidad o una parte de una planta o de una semilla de planta, bajo condiciones en las cuales el polipéptido proteína entra en contacto con la totalidad o una parte de las células de la planta o de la semilla de planta. Alternativamente, la proteina o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad se puede aplicar a plantas tales como semillas recuperadas de tales plantas, siendo capaces de impartir resistencia a enfermedades a las plantas, de incrementar el crecimiento de la planta y/o de efectuar un control de insectos. Como alternativa para la aplicación de un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad en plantas o semillas de plantas, con el fin de impartirles resistencia a enfermedades, de tener un efecto sobre el crecimiento de la planta y/o para controlar insectos en las plantas crecidas a partir de las semillas, se pueden utilizar plantas transgénicas o semillas de plantas transgénicas. Cuando se utilizan plantas transgénicas, esto incluye proporcionar una planta transgénica transformada con una molécula de ADN que codifica para un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad y hacer crecer la planta bajo condiciones efectivas para permitir que la molécula de ADN le imparta resistencia a enfermedades, que incremente el crecimiento de la planta y/o que efectúe un control de insectos. Alternativamente, se puede proporcionar una semilla de planta transgénica transformada con una molécula de ADN que codifica para un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad y se puede plantar en el suelo. Después la planta se propaga a partir de la semilla plantada bajo condiciones efectivas para permitir que la molécula de ADN le imparta resistencia a enfermedades a la planta, incremente el crecimiento de la planta y/o controle insectos. La modalidad de la presente invención en donde se aplica el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad a la planta o a la semilla de planta, se puede llevar a cabo de varias maneras, incluyendo: 1) la aplicación de un polipéptido o proteína inductora aislada; 2) la aplicación de bacterias que no causan enfermedad y que están transformadas con genes que codifican para un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad; y 3) la aplicación de bacterias que causan enfermedad en algunas especies de plantas (pero en aquella a la cual se aplica) y que contienen naturalmente un gen que codifica para el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad. En una modalidad de la presente invención, el polipéptido o proteína inductora de respuesta • de hipersensibilidad de conformidad con la presente invención, se puede aislar de Erwinia amylovora tal como se describe en los Ejemplos que se presentan más . adelante. Sin embargo, de preferencia el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad aislada de conformidad con la presente invención, se produce de manera recombinante y se purifica de la manera anteriormente descrita. En otras modalidad de la presente invención, el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersénsibilidad de conformidad con la presente invención, se puede aplicar a plantas o a semillas de plantas, mediante la inoculación de bacterias que contienen genes que codifican para el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad. Tales bacterias deben ser capaces de secretar o exportar el polipéptido o proteína, de manera que el inductor pueda entrar en contacto con las células de la planta o de la semilla de planta. En estas modalidades, el péptido o proteína . inductora de respuesta de hipersensibilidad es producido por las bacterias in planta o en las semillas o justo antes de la introducción de las bacterias a las plantas o a las semillas. En una modalidad de la aplicación bacteriana de la presente invención, las bacterias no causan la eternidad y han sido transformadas (e.g., por recombinación) con genes que codifican para un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad. Por ejemplo, E. coli, la cual no induce una respuesta de hipersensibilidad en plantas, puede ser transformada con genes que codifican para un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad y después se aplican a plantas. También se pueden utilizar otras especies bacterianas diferentes a E. coli en esta modalidad de la presente invención. Otra modalidad de la aplicación bacteriana de la presente invención, las bacterias causan enfermedad y contienen un gen natural que codifica para un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad. Ejemplos de tales bacterias se presentaron anteriormente. Sin embargo, en esta modalidad, estas bacterias son aplicadas a plantas o a sus semillas que no son susceptibles de sufrir la enfermedad causada por las bacterias. Por ejemplo, Erwinia amylovora causa enfermedad en manzanas o peras, pero no en j.itomate. Sin embargo, tales bacterias inducirán una respuesta de hipersensibilidad en el jitomate. De conformidad con esta modalidad de la presente invención, Erwinia amylovora se puede aplicar a plantas de jitomate o sus semillas para incrementar el crecimiento sin causar enfermedad en esa especie. El método de la presente invención se puede utilizar para tratar una amplia variedad de plantas o sus semillas, para impartirles resistencia a enfermedades, aumentar el crecimiento y/o controlar insectos. Algunas plantas adecuadas incluyen las dicotiledóneas y monocotiledóneas. Particularmente, las plantas de cultivo pueden incluir: alfalfa, arroz, trigo, cebada, centeno, algodón, girasol, cacahuate, maíz, papa, papa dulce, frijol, chícharo, achicoria, lechuga, endivia, col, col de Bruselas, remolacha, chirivía, nabo, coliflor, brócoli, rábanoT espinaca, cebolla, ajo, berenjena, pimienta, cilantro, zanahoria, chayóte, calabaza, calabacín, pepino, manzana, pera, melón, cítricos, fresa, uva, frambuesa, piña, soya, tabaco, jitomate, sorgo y caña de azúcar. Ejemplos de plantas ornamentales adecuadas son: Arabidopsis thaliana, Saintpaulia, petunia, geranio, poinsettia, crisantemo, clavel y zinnia. Con respecto al uso de la proteína o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad de la presente invención para impartir resistencia a enfermedades, no se puede conferir una inmunidad absoluta contra infecciones, pero la gravedad de la enfermedad se reduce y se retarda el desarrollo de los síntomas. El número de lesiones, el tamaño de las mismas y el - grado de esporulación de patógenos fúngicos, todos ellos disminuyen. Este método para impartir resistencia a enfermedades tiene el potencial de tratar enfermedades previamente intratables, de tratar enfermedades sistémicamente, las cuales no se pueden tratar por separado debido al costo y evitar el uso de agentes infecciosos o materiales ambientalmente peligrosos. El método para impartir resistencia a patógenos a las plantas de conformidad con la presente invención, es útiles para impartir resistencia a una amplia variedad de patógenos, incluyendo virus, bacterias y hongos. La resistencia, inter alia, a los siguiente virus se puede alcanzar por el método de la presente invención: virus del mosaico del tabaco y virus del mosaico del tomate. La resistencia inter alia, a las siguientes bacterias también se puede impartir a las plantas de conformidad con la presente invención: Pseudomonas solancearum, Psudomonas syringae pv. tabaci y Xanthomonas campestris pv. pelargonii . Las plantas pueden volverse resistentes, inter alia, a los siguientes hongos mediante el uso del método de la presente invención: Fusari um oxysporum y Phytophthora infestans . Con respecto al uso de la proteína o péptido inductor de respuesta de hipersensibilidad de la presente invención para incrementar el crecimiento de plantas, se puede lograr el aumento o la promoción del crecimiento de varias formas de plantas. Esto puede ocurrir tan pronto como la planta empieza a crecer desde la semilla o en una etapa posterior de la vida de la planta. Por ejemplo, el crecimiento de planta de conformidad con la presente invención produce un mayor rendimiento, incrementa la cantidad de semillas producidas, incrementa el porcentaje de semillas germinadas, incrementa la biomasa, se obtienen más frutos y más grandes, se obtiene una coloración más temprana en los frutos y una maduración más tremprana en la planta y los frutos. Como resultado, la presente invención proporciona un beneficio económico significativo a los agricultores. Por ejemplo, la germinación temprana y la maduración temprana permiten que crezcan cultivos en áreas de temporada corta de crecimiento, en donde de otra manera no sería posible su cultivo en esa ubicación. El aumento del porcentaje de semillas germinadas, da como resultado mejores cosechas en pie y un uso más eficiente de las semillas. El mayor rendimiento, el incremento de tamaño y de la producción de biomasa, permiten generar mayores ingresos en una tierra dada. Otro aspecto de la presente invención se refiere a efectuar cualquier forma de control de insectos de plantas. Por ejemplo, el control de insectos de conformidad con la presente invención incluye prevenir que los insectos entren en contacto con las plantas a las cuales se ha aplicado el inductor de respuesta de hipersensibilidad, evitando el daño causado directamente por el insecto a las plantas por su alimentación, causando que los insectos se vayan desde estas plantas, matando a los insectos próximos a las plantas, interfiriendo con la alimentación de las larvas del insecto de tales plantas, evitando que los insectos colonicen a las plantas huésped, evitando que los insectos colonizadores liberen fitotoxinas, etc. La presente invención también previene los daños subsecuentes a una enfermedad de las plantas como resultado de una infestación por insectos. La presente invención es efectiva contra una amplia variedad de insectos. El gusano barrenador del maíz europeo es una de las principales plagas del maíz (maíz dentado y dulce) , pero también se alimenta de más de 200 especies de plantas, incluyendo la judía verde, el frijolillo, la alubia de lima y soyas comestibles, especies de pimienta, papa y jitomate más muchas especies de hierbas. Las plagas de larvas de insectos adicionales que dañan a una amplia variedad de .cosechas de vegetales incluyen las siguientes: oruga negra de la remolacha, largarta de la col, gusano de la mazorca, gusano cogollero (oruga negra del maíz) , polilla de la col (polilla espalda de diamante) , gusanillo de la col, gusanillo de la cebolla, gusanillo de la semilla de maíz, gusano barrenador del pepino, gusanillo de la pimienta y gusanillo alfiler del jitomate. Colectivamente, este grupo de plagas de insectos representa el grupo económicamente más importante de plagas para la producción de vegetales a nivel mundial. El método de la presente invención que incluye la aplicación del polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad, se puede llevar a cabo a través de una variedad de procedimientos cuando se trata la totalidad o una parte de la planta, incluyendo las hojas, los tallos, las raíces, propárgulos (e.g., cortes), etc. Esto podría (pero no necesariamente) incluir la infiltración del polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad a la planta. Los métodos de aplicación adecuados incluyen rociado de alta o baja presión, inyección y abrasión de hojas antes de llevar a cabo la aplicación del inductor. Cuando se tratan semillas de plantas, de conformidad con la modalidad de aplicación de la presente invención, la proteína o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad se puede aplicar por rociado de baja o alta presión, revestimiento, inmersión o inyección. Otros procedimientos de aplicación adecuados pueden ser ideados por los técnicos en la materia, siempre y cuando sean capaces de poner en contacto el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad con células de la planta o semillas de la planta. Una vez tratadas con el inductor de respuesta • de hipersensibilídad de la presente invención, las semillas se pueden plantar en suelo natural o artificial y cultivar utilizando los procedimientos convencionales para producir plantas. Después de que las plantas han sido propagadas a partir de las semillas tratadas de conformidad con la presente invención, las plantas se pueden tratar con una o más aplicaciones de la proteína o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad, para impartirles resistencia a enfermedades, para incrementar el crecimiento de la planto y/o controlar los insectos en las plantas. El polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad se puede aplicar a plantas o semillas de plantas, de conformidad con la presente invención, solo o mezclado con otros materiales. De manera alternativa, el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad que puede aplicar por separado a plantas con otros materiales que son aplicados en diferentes momentos . Una composición adecuada .para tratar plantas o semillas de plantas de conformidad con la modalidad de aplicación de la presente invención, contiene un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad en un vehículo. Los vehículos adecuados incluyen agua, soluciones acuosas, lechadas o polvos deshidratados. En esta modalidad, la composición contiene más de 500 nM del polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad. Aunque no sea requerido, esta composición puede contener aditivos adicionales incluyendo fertilizantes, insecticidas, fungicidas, nematicidas y mezclas de los mismos. Los fertilizantes adecuados incluyen (NH4)2N03-Un ejemplo de un insecticida adecuado es el malatión. Los fungicidas útiles incluyen al Captan. Otros aditivos adecuados incluyen agentes reguladores de pH, agentes humectantes, agentes de revestimiento y agentes abrasivos. Estos materiales se pueden utilizar para facilitar el proceso de la presente invención. Además, el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad se puede aplicar a semillas de plantas con otras formulaciones y materiales de tratamiento convencionales para semillas, incluyendo arcillas y polisacáridos. En la modalidad alternativa de la presente invención que incluye el uso de plantas transgénicas y semillas transgénicas, no es necesario aplicar de manera tópica a las plantas o a las semillas el polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad. En vez de esto, las plantas transgénicas transformadas con una molécula de ADN que codifica para un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hipersensibilidad son producidas de conformidad con los procedimientos conocidos en la técnica. El vector anteriormente descrito puede ser microinyectado directamente en las células de la planta mediante el uso de micropipetas, para transferir mecánicamente el ADN recombinante . Cross ay, Mol. Gen. Genetics, 202: 179-85 (1985), la cual se incorpora en la presente como referencia. El material genético también se puede transferir a las células de la planta utilizando propilenglicol. Krens, et al . , Nature, 296: 72-74 (1982), la cual se incorpora en la presente como referencia. Otro enfoque para transformar las células de plantas con un gen que les imparte resistencia a los patógenos, es el bombardeo de partículas (también conocido como transformación .biolística) de la célula huésped. Esto se puede llevar a cabo de varias maneras. La primera incluye impulsar partículas inertes o biológicamente activas en las células. Esta técnica se describe en las Patentes Norteamericanas Nos. 4, 945,.050; 5,036,006 y 5,100,792; todas de Sanford et al . , las cuales se incorporan en la presente como referencia. En general, este procedimiento incluye impulsar partículas biológicamente activas o inertes en las células bajo condiciones efectivas para que penetren la superficie externa de la célula y para que se incorporen en el interior de la misma. Cuando se utilizan partículas inertes, el vector puede ser introducido en la célula mediante el revestimiento de las partículas con el vector conteniendo el ADN heterólogo. Alternativamente, la célula blanco puede ser rodeada por el vector de tal manera que el vector sea transportado hacia el interior de la célula por la partícula. Las partículas biológicamente activas (e.g., células bacterianas desecadas que contienen el vector y el ADN heterólogo) también se pueden impulsar hacia el interior de células de plantas. ~~ Todavía otro método de introducción es la fusión de protoplastos con otras entidades, ya sea minicélulas, células, lisosomas u otros cuerpos de superficie lipídica fusionables. Fraley, et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 79: 185963 (1982), la cual se incorpora en la presente como referencia. La molécula de ADN también se puede introducir en las células de planta por electroporación. Fromm et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 82: 5824 (1985), la cual se incorpora en la presente como referencia. En esta técnica se someten a electroporación protoplastos de la planta en presencia de plásmidos que contienen el cartucho de expresión. Se aplican impulsos eléctricos de alto campo de fuerza, los cuales permeabilizan de manera reversible las biomembranas, permitiendo la introducción de los plásmidos. Los protoplastos de planta sometidos a electroporación, reconforman la pared celular, se dividen y se regeneran. Otro método para introducir la molécula de ADN en las células de planta, es infectar una célula de planta con Agrobacterium tumefaciens o A. rhizogenes, previamente transformadas con el gen. En condiciones apropiadas conocidas en la técnica, las células de planta transformadas se hacen crecer para formar brotes o raíces y desarrollarse hasta ser plantas adultas. En general, este procedimiento incluye inocular el tejido de la planta con una suspensión de bacterias e incubar el tejido durante 48 a 72 horas en un medio de regeneración, sin antibióticos a 25-28°C. Agrobacteri um es un género representativo de la familia gram negativa Rhizobiaceae. Esta especie es responsable de agallas en corona (A. tumefaciens) y de la enfermedad de raíz pilosa (A. rhizogenes) . Las células de planta con tumores de agalla en corona y raíces pilosas, son inducidas a producir derivados de aminoácidos conocidos como opinas, las cuales son catabolizadas sólo por las bacterias. Los genes bacterianos responsables de la expresión de las opinas son una fuente conveniente de elementos de control para cartuchos de expresión quimérica. Además, la evaluación de la presencia de opinas se puede utilizar para identificar el tejido transformado. Las secuencias genéticas heterólogas se pueden introducir en las células de planta apropiadas, por medio del plásmido Ti de A. tumefaciens o del plásmido Ri de A. rhizogenes. El plásmido Ti o Ri es transmitido a las células de planta en la infección por AgroJacterium y se integra de manera estable al genoma de la planta. J. Schell, Science, 237: 1176-83 (1987), la cual se incorpora en la presente como referencia. Después de la transformación, las células de planta transformadas se deben regenerar. ~ La regeneración de la planta a partir de protoplastos cultivados se describe en Evans et al . , Handbook of Plant Cell Cultures, Vol. 1, MacMillan Publishing Co., Nueva York, 1983); y Vasil I. R. (ed.), Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Acad. Press, Orlando, vol. I (1984) y vol. III (1986), las cuales se incorporan en la presente como referencia. Es sabido que prácticamente todas las plantas pueden ser regeneradas a partir .de células o tejidos cultivados, incluyendo pero no limitándose a, todas las principales especies de caña de azúcar, remolacha de azúcar, algodón, árboles frutales y legumbres. Los mecanismos de regeneración varían de una especie a otra de plantas, pero en general se proporciona una suspensión de protoplastos transformados o una caja, de petri que contenga explantes transformados. El callo tisular se forma y se puede inducir la formación de brotes en los callos y subsecuentemente se enraizan. Alternativamente, se puede inducir la formación de embriones en el tejido calloso. Estos embriones germinan como embriones naturales para formar plantas . El medio de cultivo generalmente contendrá varios aminoácidos y hormonas, tales como auxina y citocininas. También es ventajoso agregar ácido glutámico y prolina al medio, especialmente para especies tales como maíz y alfalfa. La eficiente regeneración dependerá del medio, del genotipo y del historial de cultivo. Si se controlan estas tres variables, entonces por lo general la regeneración es reproducible y repetible. Después de que el cartucho de expresión está incorporado de manera estable en las plantas transgénicas, éste se puede transferir a otras plantas por cruce sexual. Se puede utilizar cualquiera de un número de técnicas de reproducción, dependiendo de la especie a ser cruzada. Una vez que se producen plantas transgénicas de este tipo, las plantas mismas pueden ser cultivadas de conformidad con los procedimientos convencionales, con la presencia del gen que codifica para el inductor de respuesta de hipersensibilidad, dando como resultado la resistencia a enfermedades, un incremento de la planta y/o el control de insectos sobre la planta. Alternativamente, se colectan semillas transgénicas de las plantas transgénicas. Esta semillas posteriormente se pueden plantar en el suelo y cultivar utilizando los procedimientos convencionales para producir plantas transgénicas. Las plantas transgénicas se propagan a partir de semillas transgénicas plantadas bajo condiciones efectivas para impartir resistencia a enfermedades a las plantas, para incrementar su crecimiento y/o controlar los insectos. Toda vez que no se desea apegar a una teoría, tal resistencia a enfermedades, incremento del crecimiento y/o control de insectos, puede estar mediado por el ARN o puede ser el resultado de la expresión del polipéptido o proteína inductora. Cuando se utilizan plantas y semillas transgénicas de conformidad con la presente invención, adicionalmente pueden ser tratadas con los mismos materiales que se utilizan para el tratamiento de plantas y semillas, a las cuales se les aplica un polipéptido o proteína inductora de respuesta de hípersensibilidad. Estos otros materiales, incluyendo inductores de respuesta de hipersensibilidad, pueden ser aplicados a las plantas transgénicas y a las semillas transgénicas mediante los procedimientos anteriormente descritos, incluyendo rociado de alta o baja presión, inyección, revestimiento e inmersión. De manera similar, después de que las plantas han sido propagadas a partir de semillas de plantas transgénicas, las plantas se pueden tratar con una o más aplicaciones del inductor de respuesta de hipersensibilidad, para impartirles resistencia a enfermedades, incrementar el crecimiento y/o controlar insectos. Tales plantas también se pueden tratar con los agentes de tratamiento de plantas convencionales (e.g., insecticidas, fertilizantes, etc.). Otro aspecto de la presente invención es utilizar las proteínas o polipéptidos inductores para diseñar moléculas que inactivarán, destruirán o se unirán a estas proteínas o polipéptidos. Como estos inductores se encuentran en patógenos de plantas, particularmente Erwinia amylovora, los patógenos mismos pueden ser neutralizados por las moléculas diseñadas, de tal manera que ' la enfermedad y/o la respuesta de hipersensibilidad se previenen o se alteran. Ejemplos de moléculas para prevenir la enfermedad son anticuerpos, tales como anticuerpos monoclonales o policlonales, dirigidos contra las proteínas o polipéptidos inductores de la presente invención o porciones de enlace de los mismos. Otros ejemplos de moléculas para prevenir enfermedad incluyen fragmentos de anticuerpos, mitades de anticuerpos, derivados híbridos, sondas y otras construcciones moleculares . La producción de anticuerpos monoclonales se puede efectuar por las técnicas conocidas en este campo. Básicamente, el proceso incluye primero obtener células inmunes (linfocitos) del bazo de un mamífero (e.g., un ratón) que ha sido previamente inmunizado, ya sea in vivo o in vitro, con el antígeno de interés (e.g., una proteína o polipéptido inductor de la presente invención o porciones de enlace del mismo) . Después, los linfocitos secretores de anticuerpos son fusionados con células de mieloma (murins) o células transformadas, las cuales son capaces de replicarse indefinidamente en cultivo celular, produciendo de esta manera una línea celular inmortal secretora de inmunoglobulinas. Las células fusionadas resultantes o hibridomas se cultivan y las colonias resultantes se analizan con respecto a la producción de los anticuerpos monoclonales deseados. Las colonias productoras de tales anticuerpos se clonan y se hacen crecer ya sea in vivo o in vi tro para producir grandes cantidades del anticuerpo. Una descripción del fundamento teórico y de la metodología práctica de fusión de tales células, pueden consultarse en Kohler y Milstein, Nature, 356: 495 (1975), la cual se incorpora en la presente como referencia. Los linfocitos de mamífero se inmunizan mediante una inmunización in vi vo del animal (e.g., un ratón) con las proteínas o polipéptidos inductores de la presente invención o porciones de enlace de los mismos. Tales inmunizaciones se repiten conforme sea necesario a intervalos de hasta varias semanas, para obtener un título suficiente de anticuerpos . Después del último refuerzo con el antígeno, los animales son sacrificados y se les extirpa el bazo. La fusión con células del mieloma de mamífero u otros socios de fusión capaces de replicarse indefinidamente en cultivo celular, se efectúa mediante las técnicas conocidas y estándar, por ejemplo, mediante el uso de polietilenglicol ("PEG") u otros agentes fusionantes (véase Milstein y Kohler, Eur. J. Immunol., 6: 511 (1976), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Esta línea celular inmortal, la cual de preferencia es murina, pero también puede derivarse de células de otras especies de mamíferos, incluyendo pero no limitándose a ratas, se selecciona para que sea deficiente de las enzimas necesarias para la utilización de ciertos nutrientes, que sea capaz de crecer rápido y que tenga una buena capacidad de fusión. Muchas de tales líneas celulares son conocidas para los técnicos en la materia y otras se describen con regularidad. Los procedimientos para inducir anticuerpos policlonales también son conocidos. Típicamente, tales anticuerpos se pueden inducir mediante la adminsitración de las proteínas o polipéptidos inductores de la presente invención o porciones de enlace de los mismos, por vía subcutánea, a conejos albinos de Nueva Zelanda que primero fueron sangrados para obtener suero preinmune. Los antígenos se pueden inyectar a un volumen total de 100 µl por sitio en seis sitios diferentes. Cada material inyectado contendrá un adyuvante en su activo de polioles plurónicos o gel acrilamida pulverizado conteniendo la proteína o polipéptido, después de una electroforesis en gel de "poliacrilamida con SDS. Posteriormente, los conejos son sangrados dos semanas después de la primera inyección y periódicamente reforzados con el mismo antígeno tres veces cada seis semanas. Después se toma una muestra de suero 10 después de cada refuerzo. Los anticuerpos policlonales se recuperan del suero por cromatografía de afinidad, utilizando el antígeno correspondiente para capturar el anticuerpo. Finalmente, los conejos son sacrificados con pentobarbital 150 mg/kg por vía intravenosa. Éste y otros procedimientos para inducir la producción de anticuerpos policlonales, se describen en E. Harlow, et al . , editores, Antivodies : A Laboratory Manual (1988), la cual se incorpora en la presente como referencia. Además de utilizar anticuerpos completos, el proceso de la presente invención incluye el uso . de porciones de enlace de tales anticuerpos. Tales porciones de enlace incluyen los fragmentos Fab, f(ab') y Fv. Estos fragmentos de anticuerpo se pueden preparar por los procedimientos convencionales tales como fragmentación proteolítica, tal como se describe en J. Goding, Monoclonal Antibodies: Principies and Practice, pp. 98-118 (N.Y. Academic. Press, 1983), la cual se incorpora en la presente como referencia. Alternativamente, el proceso de la presente invenc±ón puede utilizar sondas o ligandos encontrados ya sea en la naturaleza o preparados sintéticamente por procedimientos de ADN recombinante u otros procedimientos biológicos o moleculares. Tales sondas o ligandos son moléculas que se unen a las proteínas o polipéptidos inductores de la presente invención o a las porciones de enlace de los mismos. Los genes de avirulencia ( avr) (véase Vivían, A., et al . , Microbiology, 143: 693-704 (1997); Leach, J. E., et al . , Annu. Rev. Phytopathol . , 34: 153-179 (1966); Dangl, J. L. "Bacterial Pathogenesis of Plants and Animáis: Molecular and Cellular Mechanisms", en Current Topics in Microbiology and Immunology, Dangl, J. L., et al . , (Springer, Berlín), Vol. 192, pp. 99-118 (1994), las cuales se incorporan en la presente como referencia) , generan señales que disparan respuestas de defensa que causan resistencia a enfermedades en plantas con los correspondientes genes de resistencia (R) . Típicamente, los genes avr se aislan mediante la expresión de una biblioteca de cósmidos proveniente de un patógeno en otro patógeno y se seleccionan para un rango de huéspedes estrecho. Los genes avr tradicionalmente se han considera como determinantes negativos de especificidad de huésped a nivel raza-cultivar, pero algunos, incluyendo el locus avrE del patógeno bacteriano Pseudomona syringae patovar (pv.) tomato- (Kobayashi, D. Y., et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 86: 157-61 (1989), la cual se incorpora en la presente como referencia) , restringen el rango de huéspedes al nivel de patovar-especie o a nivel de especie-especie (Whalen, M. C, et al . , Proc . Nati. Acad. Sci. EUA, 85: 6743-47 (1988); Swarup, S., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact . , 5: 204-3 (1992), las cuales se incorporan en la presente como referencia) . Muchos genes avr, incluyendo el avrE, son regulados por Hrp. Los genes avrE y avrPphE (Mansfield, J., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact., 7: 726-39 (1994), la cual se incorpora en la presente como referencia) están físicamente ligados a los genes hrp. Cuando se expresan in trans, el locus avrE hace que P. syringae pv. glycinea, quien causa la roya bacteriana en la soya, sea avirulenta en todos los cultivares (Lorang, J. M., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact . , 8: 49-57 (1995), la cual se incorpora en la presente como referencia) . El locus comprende dos unidades de transcripción convergentes, una precedida por un promotor s putativo y la otra, por una caja hrp, que es una secuencia encontrada cadena arriba de muchos de los genes hrp y avr que son regulados positivamente por el factor sigma alternativo HrpL (Innes, R. ., et al . , C Bacteriol., 175: 4859-69 (1993); Shen, H., et al . , J. Bacteriol., 175: 5916-24 (1993); Xiao, Y., et al . , J. Bacteriol . , 176: 3089-91 (1994), las cuales se incorporan en la presente como referencia) . La expresión de ambas transcripciones requiere el HrpL. El locus avrE contribuye cuantitativamente a la virulencia de P. syringae pv. tomato cepa PT23 en hojas de jitomate, pero no en la cepa DC3000 (Lorang, J. M., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact., 8: 49-57 (1995); Lorang, J. M., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact., 7: 508-515 (1994)). Así pues, los genes avr en patógenos de plantas se ligan a los genes de resistencia a enfermedades en las plantas que son susceptibles a ese patógeno. En vista de la homología de las moléculas de ADN de la presente invención con los genes avr en patógenos de plantas, estas moléculas de ADN se pueden utilizar para identificar los correspondientes genes de resistencia a enfermedades de plantas. Tal identificación se lleva a cabo mediante las técnicas de reproducción de plantas tradicionales, en las cuales un patógeno portador del gen avr es inoculado a las plantas en selección para rastrear la herencia o identificar la alteración de la resistencia. Una vez identificado, el gen de la resistencia se puede aislar mediante cualguiera de dos procedimientos que se ha probado que tienen éxito en años recientes (véase Staskawicz, et al . , Science, 68: 661-67 (1995)). Estos procedimientos son de clonación y mutagénesis insercional o marcado de transp?sones basados en la posición o basados en el mapa. Debido a que puede no haber cultivares insensibles a la DspE (susceptibles a Psudomonas portadoras de dspE; cada uno de los cuatro cultivares de soya probados respondió a la dspE) , la clonación basada en el mapa (la cual requiere cruzas entre líneas susceptibles y resistentes para identificar la posición del gen de resistencia en relación con los otros genes) podría no ser factible. El procedimiento preferido es más probable que incluya la mutagénesis por inserción, utilizando el gen dspE o una proteína para identificar las líneas que han perdido el producto de la dspE debido a una marca de transposón del correspondiente gen de resistencia. EJEMPLOS Ejemplo 1 - Técnicas de ADN Recombinante. El aislamiento de ADN, digestiones con enzima de restricción, ligamiento, transformación de Escherichia coli y construcción e hibridización de colonias para seleccionar una biblioteca genómica de P. syringae pv. tomato DC3000, se realizaron de la manera descrita por Sambrook, et al . (Sambrook, J., et al . , Molecular cloning: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY) (1989), la cual se incorpora en la presente como referencia) . La biblioteca fue construida utilizando el pCPP47 (Bauer, D. W., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact., 10: 3159-379 (1997), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Excepto cuando se anote lo contrario, se utilizaron cepas de E. coli DH5 y E. coli DH5a como huéspedes para las clonas de ADN y se utilizaron como vectores los plásmidos pBluescript o pBC (Stratagene, La Jolla, CA) . E. amylovora fue transformada por electroporación de la manera ya descrita (Bauer, D. W., en "Molecular Genetics of Pathogenicity of Erwinia amylovora : Techniques, Tools and their Applications", (Ph. D. Thesis) , Universidad de Cornell, Ithaca, NY (1990) , la cual se incorpora en la presente como referencia) . Los plásmidos se movilizaron en E. amylovora y P. syringae utilizando el pRK2013 (Figurski, D., et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 76: 1648-1652 (1979), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Ejemplo 2 - Secuenciación y análisis de nucleótídos. La secuencia de nucleótidos de la región dsp de E. amylovora cepa Ea321, se determinó utilizando subclonas del pCPP430 (Beer, S. V., et al . , en Advances in Molecular Genetics of Plant-Microbe Interactions, Hennecke, H., et al . , eds. (Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, Países Bajos), pp. 53-60 (1991), la cual se incorpora en la presente como referencia) . La secuencia nucleotídica del locus avrE se determinó utilizando clonas del pCPP2357, una clona seleccionada de una biblioteca de cósmidos genómicos de P. syringae pv. tomato DC3000, basada en hibridación con el operón hrpRS de P. syringa pv. syringae y se encontrón, con base en la secuenciación parcial, que contenía el locus av-r--_J La secuenciación de nucleótidos se realizó en las Instalaciones de Secuenciación Biotecnológica de Cornell en un secuenciador modelo 377 (Perkin Elmer/Applied Biosystems División, Foster City, CA) . El ensamblaje, análisis y comparaciones de las secuencias se realizaron utilizando los programas del paquete de software GCG versión 7.1 (Genetics Computer Groups, Inc., Madison, Wl) y DNASTAR (DNASTAR, Inc., Madison, Wl). Las búsquedas en bases de datos se realizaron utilizando el paquete BLAST (Altschul, S. F., et al . , Proc . Nat. Acad. Sci. EUA, 87: 5509-5513 (1990) la cual se incorpora en la presente como referencia) . Ejemplo 3 - Expresión de DspE y DspE' en E. coli . El operón dspE fue clonado en dos pieza en pCPP50, que es un derivado de PINIII113-A2 (Duffaud, G. D., et al . , en Metods in Enzymology, Wu, R., et al . , eds.

(Academic Press, Nueva York), 153: 492-50 (1987), la cual se incorpora en la presente como referencia) , con un poliligador expandido, obteniéndose el pCPP1259. La expresión en el pCPP 1259 está dirigida por el promotor Ipp de E. coli, bajo el control del operador lac. Una clona intermedia, el pCPP1244, que se extiende desde el inicio del operón hasta el sitio ---a-i-HI enmedio del dspE, también fue aislado. Se hicieron crecer cepas de E. coli DH5a conteniendo pCPP1259 y pCPP1244, en medio LB a 37 °C, hasta una DO620 de 0.3. Después se añadió isopropiltio-ß-D-galactósido a una concentración 1 mM y las células se incubaron hasta que alcanzaran una DO620 de 0.5. Las células se concentraron dos veces, se usaron y se sometieron a SDS-PAGE de la manera previamente descrita (Sambrook, J., et al . , Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY) (1989) , la cual se incorpora en la presente como referencia), utilizando acrilamida al 7.5%. Se incluyeron células que contenían pCPP50 como comparación. Las proteínas fueron visualizadas mediante una tinción con Azul de Coomassie. Ejemplo 4 - Mutagénesis por deleción de dspE. Se eliminaron 1554 pb del fragmento HíndlII-BamHI del dspE en pCPP1237 utilizando los sitios únicos Stul y Smal . La clona sometida a la mutagénesis se insertó en el vector suicida pKNGlOl (Kaniga, K., et al . , Gene, 109: 137-42 (1991), la cual se incorpora en la presente como referencia) utilizando la cepa E. coli SMIO?pir como huésped, obteniéndose el pCPP1241. La mutación, designada como ?1554, fue transferida a cepas de E. amylovora utilizando un marcador de exclusión tal como se describió previamente (Bogdanove, A. J., et al . , J. Bacteriol., 178: 1720-30 (1996), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Se eliminaron 1521 pb del fragmento 3' J?indIII del dspE en el pPCPP1246, utilizando dos sitios BstEll que se hicieron romos con el fragmento de Ke?ow. Esta mutación, denominada ?1521, fue transferida a cepas de E. amylovora de la manera anteriormente descrita. Ejemplo 5 - Ensayos de patogenicidad. Para las cepas de E. amylovora, se pipetearon p suspensiones celulares de 5 x 10 unidades formadoras de colonia (ufe) por ml, en pozos cortados en una pera Bartlett inmadura o se inocularon en manzanas Jonamac y en brotes de algodón y se llevaron a cabo los ensayos de la manera previamente descrita (Beer, S. V., en Methods in Phytobacteriology, Klement, Z., et al . , eds. (Adadémiai Kiadoó, Budapest), pp. 373-374 (the "1990); Aldwinckle, H. S., et al . , Phytopathology, 66: 1439-44 (1976), las cuales se incorporan en la presente como referencia) . Para P. syringae pv. glycinea, se infiltraron paneles de hojas primarias de 2 semanas de edad de brotes de soya ( Glycine max, cultivar Norchief) con suspensiones bacterianas de 8 x 10 ufc/ml para el ensayo de HR que se presenta a continuación. Después las plantas se cubrieron con bolsas de plástico transparentes y se incubaron bajo luz fluorescente (16 horas/día) a 22 °C durante 5-7 días. Las hojas se calificaron con respecto a necrosis y clorosis. Ejemplo 6 - Ensayos de HR. Paneles de hojas de tabaco (Nicotiana tabacum L. ?xanthi' ) se infiltraron ' con suspensiones de células bacterianas de la manera previamente descrita (Wei, Z. M., et al . , Science, 257: 85-88 (1992); Bauer, D. W., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact., 4: 493-99- (1991), las cuales se incorporan en la presente como referencia) . Hojas primarias de retoños de soya de 2 semanas de edad (hojas secundarias emergiendo) fueron infiltrados con suspensiones de células bacterianas al igual que en el tabaco. Las plantas se evaluaron con respecto a la HR (colapso tisular) después de 24-48 horas en el laboratorio. Se suspendieron cepas de E. amylovora en solución reguladora de KP04 5 mM, pH 6.8 y cepas de P. syringae en MgCl2 10 mM. Ejemplo 7 - Ensayos GUS.

Las células 1) se hicieron crecer en caldo LB hasta una DO620 de 0.9-1.0; 2) se hicieron crecer en medio LB hasta DO620 de 0.5 y después se lavaron y resuspendieron en medio mínimo inductor de genes hrp (Hrp MM; Huynh, T. V., et al . , Science, 345: 1374-77 (1989), la cual se incorpora en la presente como referencia) hasta una DO620 de 0.2 y se incubaron a 21 °C durante 36 horas hasta una DO620 final de 0.9-1.0; ó 3) se hicieron crecer en caldo LB hasta una DO620 de 0.5, se lavaron y se concentraron dos veces en solución reguladora de KPO4 5 mM, pH 6.8 y después se transfirieron a pozos recién cortados en hojas de pera y se incubaron de la misma manera que en el ensayo de patogenicidad, durante 36 horas. Las células fueron evaluadas con respecto a la actividad de ß-glucuronidasa (GUS) esencialmente de conformidad con Jefferson (Jefferson, R. A., Plant Molecular Biology Repórter, 5: 387-405 (1987), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Para las células en LB o Hrp MM, se mezclaron 50 µl con 200 µl de solución de extracción GUS (NaHP04 50 mM, pH 7.0, ß-mercaptoetanol 10 mM, Na2EDTA 10 mM, laurilsarcosina de sodio al 0.1%, Tritón X-100 al 0.1%) conteniendo 4-metilumbeliferil-ß-D-glucurónido 2 mM como substrato y se incubaron a 37 °C durante 100 minutos. Para las células en la pera, el tejido que rodeaba el pozo fue cortado utilizando una perforadora del #4 y se homogenizó en solución reguladora KPO4 5 MM, pH 6.8. Se mezclaron 200 µl del homogenizado con 800 µl de solución reguladora de extracción GUS con substrato y se incubó de la manera anteriormente descrita. Las reacciones se detuvieron mediante la adición de Na2CÜ3 hasta una concentración final de 0.2 M, en un volumen total de 2 ml . Se midió la fluorescencia utilizando un fluorómetro TKO 100 Mini-Fluorometer (Hoefer Scientific Instruments, San Francisco, CA) . Para todas las muestras, se estimó la concentración celular por dilución en placa y las lecturas fluorométricas p se convirtieron en pinoles de substrato hidrolizado/10 ufc/min, según Miller (Miller, J. H., A Short Course in Bacterial Genetics: A Laboratory Manual and Handbook for Escherichia coli and Related Bacteria (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, NY) (1992), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Ejemplo 8 - La región "específica de enfermedad" (dsp) de E. amylovora, consiste de un operón de dos genes de 6.6 kb. El mapeo de las inserciones de transposón previas (Steinberger, E. M., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact., 1: 135-44 (1988), la cual se incorpora en la presente como referencia) que abolen la patogenicidad pero que no tienen la capacidad de inducir una HR, confirmó la presencia de la región "específica de enfermedad" (dsp) cadena abajo del gen hrpN en la cepa Ea321, al igual que lo reportado en la cepa CFBP1430 (Barny, A. M., et al . , Mol. Microbiol., 4: 777-86 (1990), la cual se incorpora en la presente como referencia) . La secuencia de aproximadamente 15 kb de ADN cadena- abajo del hrpN de la cepa Ea321, se determinó y reveló varios marcos de lectura abierta (ORFs, Fig. 1) . Un ORF, en un operón aparente de 6.6 kb con un ORF más pequeño, se extendían en el área en la cual se mapearon las inserciones dsp. Estos dos ORFs fueron designados dspE y dspF y el operón dspE. El dspE está precedido (empezando 70 pb cadena arriba del codón de inicio) por la secuencia GGAACCN15CAACATAA, la cual coincide o casa con la secuencia concensual del promotor dependiente de HrpL o "?rpbox" de E. amyl ovora (Kim, J. H., et al . , J. Bacteriol., 179: 1690-97 (1997); Kim, J. H. et al . , J. Bacteriol., 179: 1690-97 (1997), las cuales se incorporan en la presente como referencia) y se asemeja mucho a la caja hrp de los genes hrp y avr de P. syringae (Xiao, Y., et al . , J. Bacteriol., 176: 3089-91 (1994), la cual se incorpora - en la presente como referencia) . Inmediatamente cadena abajo del dspF, hay un ADN rico en A/T, seguido por un ORF (ORF7) muy similar al gen spvR de Salmonella typhimurium, que es un miembro de la familia lysR de genes reguladores (Caldwell, A. L. y Gulig, P. A., J. Bacteriol., 173: 7176-85 (1991), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Inmediatamente cadena arriba del operón dspE, hay un gen regulado por Hrp, el gen hrpW, que codifica para una nueva harpina. El producto deducido del dspE contiene 1838 residuos de aminoácidos y es hidrofílico. El peso molecular predicho, de 198 kD, fue confirmado mediante la expresión en E. coli (Fig. 2) . La expresión de una clona intermediaria conteniendo sólo la mitad 5' del dspE, produjo una proteína con la movilidad predicha correspondiente, lo cual sugiere que la mitad N-terminal de la proteína podría formar un dominio estable independiente. La DspF, que se predecía que tendría 16 kD, sería acida (pl, 4.45) y predominantemente a-helicoidal, con a-hélices antipáticas en su extremo C-terminal, es físicamente similar a factores de virulencia de bacterias patógenas para animales (Wattiau, P., et al . , Mol. Microbiol., 20: 255-62 (1996) , la cual se incorpora en la presente como referencia) . Ejemplo 9 - Se requiere del dspE para la roya de fuego. Dos deleciones dentro del marco en el gen dspE (Fig. 1) se hicieron en una cepa Ea321 y Ea273 (cepas de baja y alta virulencia, respectivamente) . La primera (?1554) corresponde a los residuos de aminoácido G203 a G720 y la segunda (?1521) a los residuos de aminoácido T?064 a Vi57o- Cada deleción eliminó la capacidad de ambas cepas de causar la roya de fuego cuando se inocularon en peras inmaduras (Fig. 3), retoños de manzana o retoños de cotoneaster. La ?1554 se complementó por una clona portadora sólo de la porción traslapada de la mitad 5' del gen dspE, lo cual sugiere además que el extremo N-terminal de la proteína forma un dominio estable (Figs. 1 y 3) . Ejemplo 10 - El operón dspE contribuye cuantitativamente y de panera dependiente de cepa, a la inducción de HR por E. amylovora. en tabaco y no es requerido para la inducción HR por E. a ylovora en la soya. Las inserciones de transposones en la región dsp reducen la capacidad de E. amylovora para inducir la HR en el tabaco (Barny, A. M., et al . , Mol. Microbiol., 4: 777-86 (1990), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Se infiltraron diluciones en serie de suspensiones de las cepas mutantes d-.pi.?l554 de Ea321 y Ea273, en hojas de tabaco junto a sus progenitores de tipo silvestre, para evaluar la función del dspE en la inducción de HR (Fig. 3) . Todas las cepas fueron capaces de inducir la HR, pero la cepa Ea321dsp£.?l554, en una base por célula, fue casi diez veces menos efectiva que la de tipo silvestre para inducir un colapso tisular. Sin embargo, no hubo diferencias observables en la inducción de HR entre las cepas Ea273 y Ea273dspi.?l554. La cepa Ea321dsp£?l554 indujo HR de tipo natural en hojas de soya de tipo Acmé, Centennial, Harasoy y Norchief (Fig. 3) . Ejemplo 11 - El operón dspE es regulado por Hrp. Una construcción de gen uidA sin promotor, fue clonada cadena abajo del fragmento dspE en el pCPP1241 que fue utilizado para introducir la mutación ?1554 (Fig. 1) en dos cepas de tipo silvestre de E. amylovora (esta construcción consiste de un gen dspE truncado en 3' con deleción interna) . El plásmido resultante pCPP1263, fue movilizado en las cepas Ea321 y Ea273. Las cepas patógenas en las cuales la integración del plásmido había conservado una copia intacta del dspE y cepas no patógenas en las cuales se había mutado la copia nativa del dspE, fueron aisladas. Todas las cepas se evaluaron con respecto a actividad GUS en medio de Luria Bertani (LB) y en medio Hrp MM, y las cepas patógenas se evaluaron con respecto a su actividad en peras. Se obtuvieron altos niveles de actividad en cepas incubadas en medio Hrp MM y en peras, pero no en medio LB. El nivel de expresión en medio Hrp MM fue equivalente al de una fusión hrcV-uidA ("G73", Wei, et a-Z., J. Bacteriol., 177: 6201-10 (1995), la cual se incorpora en la presente como referencia) utilizada como control positivo. No hubo diferencias significativas en los niveles de expresión de la fusión dspE-uidA en cepas silvestres y mutantes dspE, lo cual indica que el dspE probablemente no es autorregulado. La expresión de la fusión dspE-uidA en mutantes hrpL de Ea321 y Ea273, en medio ¿r-rp MM, fue dos órdenes de magnitud más baja que la observada en cepas HrpL+ . Los datos de la cepa Ea273 y derivados se muestran en la Fig. 4. Ejemplo 12 - Los genes dspE y dspF son homólogos a los genes en el locus avrE de Pseudomonas syringae pv. toma o. Una búsqueda BLAST (Altschul, S. F., et al . , J. Mol. Biol., 215: 403-10 (1990), la cual se incorpora en la presente como referencia) de las bases de datos genéticas, reveló similitudes del dspE con una secuencia parcial del locus avrE de P. syringae pv. tomato (Lorang, J. M., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact, 8 :_ 49-57 (1995), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Se construyó una biblioteca de cósmidos de ADN genómico de P. syringae pv. tomato DC3000 y se aisló una clona que se traslapaba con el grupo de genes hrp y que contenía el locus avrE (pCPP2357). Se determinó la secuencia de nucleótidos completa del locus avrE, revelando el homólogo de dspE (que codifica para una proteína de 1795 aminoácidos de 195 kD, con 30% de identidad) sólo en un operón previamente designado como unidad de transcripción III y un homólogo de dspF (que codifica para una proteína de 129 aminoácidos de 14 kD con 43% de identidad) a final del operón yuxtapuesto y opuesto previamente designado como unidad de transcripción IV (Fig. 1) . Estos genes fueron designados como avrE y avrF. La mitad C-terminal de la DspE y el alineamiento AvrE (proveniente de V8 5 de la DspE) muestra una mayor conservación (33% de identidad) que la mitad N-terminal (26% de identidad) . La AvrE contiene una unidad (residuos de aminoácidos A450 a T457) cnservada en las proteínas de unión a ATP y de unión a GTP ("P-loop"; Saraste, M., et al . , Trends Biochem. Sci., 15: 430-34 (1990) , la cual se incorpora en la presente como referencia) . Sin embargo, esta unidad no está conservada en la DspE y su significado funcional en la AvrE, si lo tiene, no está claro. Las identidades de aminoácidos se distribuyeron equitativamente a lo largo de la DspF y la alineación AvrF, y la AvrF comparte las características físicas predichas de la DspF. Cadena arriba del avrF, compitiendo con el operón, hay un gen de 2.5 kb sin similitudes con secuencias presentes en las bases de datos genéticas . Ejemplo 13 - El operón dspE funciona como un locus de avirulensia.

El operón dspE fue clonado en el pML 122 (Labes, M., et al . , Gene, 89: 37-46 (1990), la cual se incorpora en la presente como referencia) cadena abajo del promotor nptll y esta construcción pCPP1250, fue movilizada en la cepa P. syringae pv. glycinea estirpe 4. La cepa resultante, pero no una cepa control que contenía el pML 122, indujo la HR en cultivares de soya Acmé, Centennial, Harasoy y Norchief; en plantas Norchief incubadas bajo condiciones conductivas, la estirpe 4 portadora del pCPP1250 fracasó en causar síntomas de la enfermedad, mientras que la cepa control causó necrosis y clorosis que se diseminaron desde el punto de inoculación (Fig. 5) . Ejemplo 14 - El avrE complementa mutaciones del dspE. El cósmido pCPP2357 fue movilizado en cepas Ea321 mutantes en dspE ?1554 y ?1521. . Las transconjugantes resultantes fueron patógenas, pero de baja virulencia. La cepa Ea321dsp.E?1521, portadora del pCPP2357 con una inserción de transposón en el gen avrE, no fue patógena, lo cual demuestra que la complementación observada era específica de avrE (Figs. 1 y 5) . Se observaron los mismos resultados para las transconjugantes de la mutante Ea273dsp£?1521. Sólo treinta genes avr bacterianos han sido descubiertos. La plétora de genes avr se piensa es el resultado de una "lucha de guerra evolutiva" (Dangl, J. L., en Bacterial Pathogenesis of Plants and Animáis: Molecular and Cellular Mechanisms (Cúrrente Topics in Microbiology and Ii-munology) , Dangl, J. L., ed. (Springer, Berlín), 192: 99-118 (1994) , la cual se incorpora en la presente como referencia) , que es un proceso reiterativo de selección, contra ~ selección de vida a genes R y modificación o substitución de genes avr que fue descubierta originalmente por Flory quien construyó la hipótesis de que "durante su evolución paralela el huésped y el parásito desarrollaron sistemas génicos complementarios" (Flor, H. H., Adv. Genet. , 8: 29-54 (1956), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Sin embargo, sólo unos cuantos genes avr (incluyendo el avrE de la cepa PT23) desempeñan funciones detectables en la virulencia o patogénesis en su fondo genético nativo (Lorang, J. M., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact., 7: 508-15 (1994); Kearney, B., et al . , Nature, 346: 385-86 (1990); Swarup, S., et al . , Phytopathology, 81: 802-808 (1991); De Feyter, R. D., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact., 6: 225-37 (1993); Ritter, C, et al . , Mol. Plant-Microbe Interact., 8: 444-53 (1995), las cuales se incorporan en la presente como referencia) y la fuerza selectiva que dirige el mantenimiento en genomas patógenos de muchos de estos factores limitantes de rango de huésped, todavía es un misterio. Sin embargo, en la actualidad está claro que varias proteínas Avr son distribuidas en las células de plantas por la ruta Hrp (Gopalan, S., et al . , Plant Celli, 8: 1095-1105 (1996); Tang, X., et al . , Science, 274: 2060-63 (1996); Scofield, S. R., et al . , Science, 274: 2063-65 (1996); Leister, R. T., et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 93: 15497-15502 (1996); Van Den Ackerveken, G., et al-. , Cell, 87: 1307-16 (1996), las cuales se incorporan en la presente como referencia) y, por lo tanto, es probable que sean fundamentalmente factores de virulencia que interactúan (de manera directa o indirecta a través de productos enzimáticos) con huéspedes blanco para promover el parasitismo. La mutación de tales blancos (seleccionada debido a una reducida susceptibilidad) así como la evolución de proteínas R que reconocen a las proteínas Avr, forzaría la adquisición o evolución de nuevas proteínas Avr o proteínas modificadas y daría como resultado la proliferación de genes avr. Acumulativamente, estos procesos coevolutivos es probable que derivaran en una tendencia a desarrollar genes a.v-r con efectos cuantitavos y redundantes en la patogénesis, en vez de tener funciones de importancia crítica (Alfano, J. R., et al . , Plant Cell, 8: 1683-16988 (1996), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Se ha encontrado que los homólogos dspE y avrE contribuyen a la enfermedad en grados drásticamente diferentes. El locus de avirulencia puede substituir transgénicamente el operón de patogenicidad y la fusión de avirulencia del dspE se extiende a través de los géneros patógenos también. Estos hallazgos respaldan la hipótesis de que los genes avr tienen una función primaria en la enfermedad. Además, soportan y extienden el modelo coevolutivo de la proliferación de genes avr anteriormente discutido y tienen implicaciones prácticas con respecto al control de la roya de fuego y otras enfermedades bacterianas de plantas de hoja perenne. A partir del modelo se puede predecir que la contribución relativa a la patogenicidad de un factor particular, reflejaría, en parte, la historia genética del patógeno, específicamente, el grado de coevolución con su huésped o sus huéspedes. El dspE es requerido para la patogenicidad; el avrE tiene un fenotipo de virulencia cuantitavo y dependiente de cepa. De manera consistente con la predicción, la evolución de los correspondientes genes R y la modificación de los blancos de los factores de virulencia patogénicos es probable que hayan ocurrido más a menudo y hasta un mayor grado con el tiempo en los huéspedes herbáceos típicamente infectados por patovares de P. syringae, en comparación con huéspedes leñosos con los cuales presumiblemente evolucionó E. amylovora .

Alternativa o adicionalmente, la adquisión del dspE (a través de la evolución o de transferencia horizontal) por E. amylovora, pudo haber ocurrido relativamente más recientemente que la adquisición del avrE por P. syringae, lo cual deja menos tiempo para la coevolución que conduzca a la modificación o al desarrollo de una función redundante. También se podría establecer la hipótesis partiendo de este modelo, de que los factores de virulencia podrían estar conservados entre patógenos, pero individualmente adaptados para evitar la detección en un huésped particular. Resultados preliminares de hibridaciones de inmunoelectrotransferencia tipo Southern, sugieren que P. syringae pv. glycinea es portadora de un homólogo av-rl-, el cual, si es funcional, apoyaría esta hipótesis. De manera similar, los homólogos de los genes específicos de cultivar de soya avrA y avrD de P. syringae pv. tomato, existen en P. syringae pv. glycinea (Kobayashi, D. Y., et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 86: 157-161 (1989), la cual se incorpora en la presente como referencia) . La homología y capacidades del dspE y avrE para funcionar transgénicamente, extienden el modelo de proliferación de genes avr. Los componentes principales de una evolución hacia un factor múltiple de virulencia podrían ser la procuración de genes que codifican para nuevos factores de virulencia provenientes de patógenos heterólogos y la conservación de un sistema de distribución de factores de virulencia funcionalmente cosmopolita (y posiblemente la conservación de una señal de blanco de ruta Hrp universal en los factores mismos) , lo cual podría hacer posible su despliegue. De hecho, muchos genes avr están en plásmidos y dispersos entre cepas de patógenos (Dangl., J. L., en Bacterial Pathogenesis of Plants and Animáis: Molecular and Cellular Mechanisms (Current Topics in Microbiology and Immunology) , Dangl, J. L., ed. (Springer, Berlín), 192: 99-118 (1994), la cual se incorpora en la presente como referencia) y genes hrp individuales están conservados y aún intercambiables (Arlat, M., et al . , Mol . Plant-Microbe Interact., 4: 593-601 (1991); Laby, R. J., et al . , Mol. Plant-Microbe Interact., 5: 412-19 (1992), las cuales se incorporan en la presente como referencia) . La presencia de dspE y avrE en distintos géneros, sugiere la transferencia o horizontal de un locus ancestral y, aunque el dspE y avrE son homólogos y relacionados con hrp, la función transgénica de estos genes sugiere que las rutas Hrp en E. amylovora y P. syringae han permanecido insensibles a las diferencias cumuladas entre las DspE y AvrE con la evolución. Se predice que aún proteínas similares a Avr no homologas, funcionarán a lo largo de los géneros de bacterias patógenas . Todavía queda por demostrarse si la función de avirulencia del locus dspE depende de la ruta Hrp. Esto parece probable y será importante deteminar la localización de los productos de los genes dspE y dspF en la interacción planta-bacteria. La similitud física de la DspF (y AvrF) con los" chaperones requeridos para la secreción tipo III de factores de virulencia en bacterias patógenas de animales (Wattiau, P., et ai., Mol. Microbiol., 20: 255-62 (1996), la cual se incorpora en la presente como referencia) es intrigante y nueva en bacterias fitopatógenas . El requerimiento de estos chaperones parece deberse a una función diferente a dirigir al blanco la ruta de secreción (Woestyn, S., et al . , Mol. Microbiol., 20: 1261-71 (1996), la cual se incorpora en la presente como referencia) : los chaperones pueden estabilizar proteínas, mantener proteínas en una conformación apropiada para la secreción o prevenir la polimerización prematura o asociación con otras proteínas. Posiblemente la DspF se une a la DspE (y la AvrF se une a la AvrE) y desempeña una función similar, lo cual podría ser particularmente importante para esta última proteína, debido a su gran tamaño y su naturaleza de múltiples dominios. El operón dspE es el primer locus de avirulencia descrito en E. amylovora . Un homólogo de av-r-Rxv de Xanthomonas campestris (Whalen, M. C, et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 85: 6743-47 (1988), la cual se incorpora en la presente como referencia) se ha encontrado cerca del operón dspE (Kim, J. F., en Molecular Characterization of a Novel Harpin and Two hrp Secretory Operons of Erwuinia amylovora and a hrp Operon of E. chrysanthemi (P . D. ThesisT, Universidad de Cornell, Ithaca, NY (1997) ) . La resistencia monogénica (mediada por genes R) a la roya de fuego no ha sido reportada, pero se ha observado una virulencia diferencial de cepas de E. amylovora en cultivares de manzana (Norellin, J. L., et al . , Phytopathology, 74: 136-39 (1984), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Así mismo, algunas cepas de E. amylovora infectan Rubus spp. y no plantas pomáceas, y viceversa (Starr, M. P., et al . , Phytopathology, 41: 915-19 (1951), la cual se incorpora en la presente como referencia) . Debe determinarse si el operón dspE y el homólogo avrRxv u otros inductores potenciales, desempeñan una función en estas especificidades. Aunque el operón dspE dispara respuestas de defensa en la soya cuando se expresa en P. syringae pv. glycinea, no es requerido para la HR de la soya inducida por E. amylovora . Tampoco se requiere el hrpN (Fig. 3) . Es posible que E. amylovora deba tener uno u otro entre dspE y hrpN, para inducir la HR en la soya. Sin embargo, se ha observado que la harpina purificada no induce HR en la soya, lo cual sugiere la explicación alternativa de que E. amylovora es portadora de otro gen avr reconocido por esta planta. El reconocimiento de señales de avirulencia de E. amylovora en la soya, indica la presencia de uno o más genes 2- que podrían ser útiles para construir árboles de manzana y pera resistentes a la roya de fuego. La resistencia mediada por genes R al patógeno de manzanas Venturia inaequalis (Willis, E. B., et al . , Ann. Rev.

Phytopathol. , 7: 223-46 (1969), la cual se incorpora en la presente como referencia) y la transformación exitosa- de manzanas con atacin E para el control de la roya de fuego (Norelli, J. L., et al . , Euphytica, 77: 123-28 (1994), la cual se incorpora en la presente como referencia) son prueba de la factibilidad de tales enfoques. La resistencia mediada por genes i? a la roña de la manzana ha sido resuelta en el campo (Parisi, L., et al . , Phytopathology, 83: 533-37 (1993), la cual se incorpora en la presente como referencia) , . pero el requerimiento del dspE en la enfermedad, favorece la durabilidad relativa de un gen R específico de dspE (Kearney, B., et al . , Nature, 346: 385-86 (1990), la cual se incorpora en la presente como referencia) . La selección de avirulencia del dspE y otros genes de E. amylovora en patógenos de plantas genéticamente rastreables tales como Arabidopsis, podría ensanchar el cúmulo de genes R candidatos y acelerar su aislamiento. Se podría utilizar un enfoque similar para aislar genes R efectivos contra otras enfermedades de plantas leñosas. Además, si el operón dspE está ampliamente conservado, tal como se sugiere por su homología con el locus avrE, un gen R correspondiente podría ser efectivo contra una variedad de patógenos, tanto en plantas leñosas como en herbáceas. La proteína DspE nativa (no desnaturalizada) no ha sido producida en cantidad suficiente para probar su capacidad de inducir la HR (i.e., respuesta de hipersensibilidad) , de manera similar a los inductores de respuesta de hipersensibilidad (i.e., por aplicación exógena) . Por lo tanto, no se ha demostrado que el dspE de E. amylovora induzca la HR cuando se aplica aplantas en forma de un material libre de células aislado. Sin embargo, cuando se transfiere el gen que codifica para la proteína a otra bacteria (junto con el gen más pequeño dspF) , e.g., Pseudomonas syringae, la cual ordinariamente causa la enfermedad en ciertas plantas, la bacteria receptora ya no causa la enfermedad, sino que induce la HR. El mecanismo de esto no se conoce con seguridad, pero se sospecha que incluye (y se está reuniendo evidencia de esto) un mecanismo en el cual la célula bacteriana en realidad inyecta la proteína DspE en las células de la planta viva, disparando el desarrollo de un colapso de las células de la planta (i.e., la HR) . Presumiblemente, cuando la proteína DspE está en células de plantas vivas, podría hacer señales a la planta para que desarrollara resistencia a insectos y patógenos. ~~ Con base en la similitud de las características físicas predichas de la DspF con aquellas de las proteínas chaperonas conocidas de patógenos animales, se cree que esta pequeña proteína es una chaperona de la DspE. Los chaperones en patógenos animales se unen en el citoplasma a proteínas específicas por ser secretadas. Parecen ser necesarios para la secreción de las proteínas, pero no son secretados ellos mismos. La evidencia sugiere que los chaperones no participan directamente en dirigir las proteínas secretadas hacia el aparato de secreción. En vez de esto, podrían actuar para estabilizar las proteínas en el citoplasma y/o para prevenir su agregación o asociación prematura con otras proteínas (e.g., proteínas bacterianas que dirigen el transporte a través de la membrana de la célula huésped) . El gen dspE no es portador de similitudes con genes conocidos, excepto el avrE. La función enzimática (i.e., que resulta en la producción de una molécula secundaria que induce la HR) de la DspE no se puede excluir hasta el momento. De hecho, se conoce un producto del gen avr que induce indirectamente la HR, catalizando la síntesis de una molécula inductora difundible. Sin embargo, la explicación más simple para la función inductora de HR observada del operón dspE expresado en especies de pseudomonas, es que la proteína codificada por el gen~dspE es secretada desde la bacteria y posiblemente transformada en el interior de la célula de la planta, en donde dispara directamente respuestas de defensa de la planta, causando la HR y este proceso es mediado por un producto génico de resistencia específica que reconoce (actúa como receptor de) a la proteína DspE. De hecho, cuatro genes avr que dependen del aparato secretor Hrp para fusionar cuando se expresan en bacterias, se ha demostrado que causan HR cuando son expresados transgénicamente dentro de células de plantas. Se ha demostrado que uno de estos codifica para una proteína que interactúa directamente con el producto de su correspondiente gen de resistencia. Finalmente, debe determinarse si la DspE induce respuestas de defensa en la planta desde el exterior o en el interior de las células de planta, directamente o a través de una molécula secundaria, con el fin de definir aplicaciones prácticas de esta proteína y su gen codificante como inductores de respuestas de defensa en plantas. Aunque la presente invención ha sido descrita con detalle para el propósito de ilustración, debe entenderse que tales detalles son únicamente para ese propósito y que los técnicos en la materia pueden realizar variaciones sin apartarse del espíritu y los alcances de la presente invención, tal como queda definida por las siguientes reivindicaciones .

LISTADO DE SECUENCIAS (1) INFORMACIÓN GENERAL: (i) SOLICITANTES: Cornell Research foundation, Inc. (ii) TÍTULO DE LA INVENCIÓN: INDUCTOR DE RESPUESTA DE HIPERSENSIBILIDAD PROVENIENTE DE ERWINIA AMYLOVORA, SU USO Y EL GEN CODIFICANTE liii) NUMERO DE SECUENCIAS: 5 (iv) DIRECCIÓN POSTAL: (A) DESTINATARIO: Nixon, Hargrave, Devans & Doyle LLP (B) CALLE: P.O. Box 1051, Clinton Square (C) CIUDAD: Rochester (D) ESTADO: Nueva York (E) PAÍS: EUA (F) CÓDIGO POSTAL: 14603 (v) FORMA LEGIBLE EN COMPUTADORA (A) TIPO DE MEDIO: Disco flexible (B) COMPUTADORA: PC compatible con IBM (C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Reléase #1.0, Versión #1,30 (vi) DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL: (A) NUMERO DE SOLICITUD: (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: (C) CLASIFICACIÓN: (vii) DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR: (A) NUMERO DE SOLICITUD: US 60/055,105 (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: 06-AGOSTO-1997 (viii) INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE: (A) NOMBRE: Goldman, Michael L. (B) NUMERO DE REGISTRO: 30,727 (C) NUMERO DE REFERENCIA/CÉDULA: 19603 1662 (ix) INFORMACIÓN POR TELECOMUNICACIONES: (A) TELÉFONO: (716) 263-1304 (B) TELEFAX: (716) 263-1600 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 1: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 5517 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 1: ATGGAATTAA AATCACTGGG AACTGAACAC AAGGCGGCAG TACACACAGC GGOGCACAAC 60 CCTGTGGGGC ATGGTGTTGC CTTACAGCAG GGCAGCAGCA GCAGCAGCCC GCAAAATGCC 120 GCTGCATCAT TGGCGGCAGA AGGCAñAAAT CGTGGGAAAA TGCCGAGAAT TCACCAGCCA 180 TCTACTGCGG CTGATGGTAT CAGCGCTGCT CACCAGCAAA AGAAATCCTT CAGTCTCAGG 240 GGCTGTTTGG GGACGAAAAA ATTTTCCftGA TOGGCACCGC AGGGCCAGCC AGGTACCACC 300 CACAGCAAAG GGGCAACATT GCGCGATCTG CTGGCGCGGG ACGACGGCGA AACGCAGCAT 360 GAGGCGGCCG CGCCAGATGC GGCGCGTTTG ACCCGTTCGG GCGGCGTCAA ACGCCGC?AT 420 ATGGACGACA TGGCCGGGCG GCCAATGGTG AAAGGTGGCA GCGGCGAAGA TARGGTACCA 480 ?CGCAGCAAA AACGGCATCA GCTGAACAAT TTTGGCCAGA TGOGCCAAAC GATGTTGAGC 540 AA?ATGGCTC ACCCGGCTTC AGCCAACGCC GGCGATCGCC TGCAGCATTC ACCGCCGCAC 600 ATCCCGGGTA GCCACCACGA AATCAAGGAA GAACCGGTTG GCTCCACCAG CAAGGCAACA 660 ACGGCCCACG CAGACAGAGT GGAAATCGCT CAGGAAGATG ACGACAGCGA ATTCCAGCAA 720 CTGCATCAAC AGCGGCTGGC GCGCGAACGG GAAAATCCAC CGCAGCCGCC CAAACTCGGC 780 GTTGCC?CAC CGATTAGCGC CAGGTTTCAG CCCAAACTGA CTGCGGTTGC GGAAAGCGTC 840 CTTGAGGGGA CAGATACCAC GCAGTCACCC CTTAAGCCGC AATCAATGCT GAAAGGAAGT 900 GGAGCCGGGG TAACGCCGCT GGCGGTAACG CTGGATAAAG GCAAGTTGCA GCTGGCACCG 960 GATAATCCAC COGCGCTCAA TACGTTGTTG AAGCAGACAT TGGGTAAAGA CACCCAGCAC 1020 TATCTGGCGC ACCATGCCAG CAGCGACGGT AGCCAGCATC TGCTGCTGGA CAACAAAGGC 1080 CACCTGTTTG ATATCAAAftG CACOGCCACC AGCTATAGCG TGCTGCACAA CAGCCACCCC 1140 GGTGAGATAA AGGGCAAGCT GGCGCAGGCG GGTACTGGCT CCGTCAGCGT AGACGGTAAA 1200 AGCGGCAAGA TCTCGCTGGG GAGCGGTACG CAAAGTCACA ACAAAACAAT GCTAAGCCAA 1260 CCGGGGGAAG CGCACCGTTC CTTATTAACC GGCATTTGGC AGCftTCCTGC TGGQSO-GCG 1320 CGGCCGCAGG GCGAGTCAAT COGCCTGCAT GACGAC--AAA TTCATATCCT GCATCOGGAG 13BO CTGGßCGTAT GGCAATCTGC GGATAAAGAT ACCO-CAGCC ACCTGTCTCG CCAGßCAGAC 1440 GGTAAGCTCT ATGCGCTGAA AGACAACCGT ACCCTGCAAA ACCTCTCCGA TAATAAATCC 1S00 TCAGAAAAGC TGGTCGATAA AATCAAATOG TATTCCGTTG ATCAGCGGGG GCAGGTCGCG ZS60 ATCCTGACGG ATACTCCCGG CCGCCATAAG ATGAGTATTA TGCCCTCGCT GGATGCTTCC 1620 CCGGAGAGCC ATATTTCCCT CAGCCTGCAT TTTGCCGA1G CCCACCAGOG GTTATTGCAC 1680 GGGAAGTCGG AGCTTGAGGC ACAATCTGTC GCGATCAGCC ATGGGCGACT GGTTGTGGCC 17 0 GATA?CGAAG GCAAGCTGTT TAGCGCCGCC ATTCCGñAGC AAGGGGATGG AAACGAACTG 1800 Añ-y-TGAAAG CCATGCCTCA GCATGCGCTC GRTGAACATT TTGGTCATGA CCACCAGATT 1860 TCIGGATTTT TCCATGACGA CCACGGCCAG CTTAATGCGC TGGTGAAAAA TAACTTCAGG 1920 CAGCAGCATG CCTGCCCGTT GGGTAACGAT CATCAGTTTC ACC-C-GCTG GAACCTGACT 1980 GATGCGCTGG TTATCGACAA TCAGCTGGGG CTGCATCATA CCAATCCT 5A ACCGCATGAG 2040 ATTCTTGATA TGGGGCATTT AGGCAGCC-TG GCGTTACAGG AGGGCAAGCT TCACTATTTT 2100 GACCAGCTGA CCAAAGGGTG GACTGGCGCG GAGTCAGATT GTAAGCAGCT GAAAAAAGGC 2160 CTGGATGG--G CAGCTTATCT ACTGAAAGAC CGTGAAGTGA AACGCCTCAA TATTAATCAG 2220 AGCACCT-CT CTATCAAGCA CGGAAC-GAA AACGTTTTTT CGCTGCCGCA TGTGCGCAAT 2280 AAACCGGAGC CGGGAGATGC CCTGCAAGGG CTGAATAAAG ACGATAAGGC CC?GGCCATC 2340 GCGGTGATTG GGGTAAATAA ATACCTGGCG CTGACGGAAA AAGGGGACAT T GCTCCTTC 2400 CAGATAAAAC CCGGCACCCA GCAGTTGGAG CGGCCGGCAC AAACTCTCñG CCGCGAAGGT 2460 ATCAGCGGOG AACTGAAAGA CATTCATGTC GACCACAAGC AGAACCTGTA TGCCTTGACC 2520 CACGAGGGAG AGGTGTTTCA TCAGCCGCGT GAAGCCTGGC AGAATGGTGC CGAAAGCAGC 2580 AGCTGGCACA AACTGGCGTT GCCACAGAGT GAAAGTA?GC TAAAAAGTCT GGACATGAGC 2640 CATGAGCACA AACCGATTGC CACCTTTGAA GACGGTAGCC AGCATCAGCT GAAGGCTGGC 2700 GGCTGGCACG CCTATGCGGC ACCTGAAOGC GGGCOGCTGG CGGTGGGTAC CAGCGGTTCA 2760 CAAACCGTCT TTAACCGACT AATGCAGGGG GTGAAAGGCA AGGTGATCCC AGGCAGCGGG 2820 TTGACGGTTA AGCTCTCGGC TCAGAOGGGG GGAATGACCG GCGCCGAAGG GCGCAAGGTC 2880 AGCAGTAAAT TTTCCsAAAG GATCCGCGCC TATGCGTTCA ACCCAACAAT GTCCACGCCG 2940 CGACCOATTA AAAATGCTGC TTATGCCACA CAGCACGGCT GGCAGGCGCG TGAGGGGTTG 3000 AAGC GTTGT ACGAGATGCA GGGAGCGCTG ATTAAACAAC TGGATGCGCA TAACGTTCGT 3060 CATAACGCGC CACAGCCAGA TTTßOkGftGC AAACTSGAAA CTCTCGATTT AGGCGAACAT 3120 GGCGCAGAAT TGCTTAACGA CATG?AGCGC TTCCGCGACG AACTGGAGCA GAGTGCAACC 3180 CGTTCGGTGA CCGTTTT?GG TCAACATCAC GGAGTGCTAA ?AAGCAACGG TGAAATCAAT 3240 AGOG?ATTTA AGCCATCGCC CGGCAAGGCG TTGGTCCAGA GCTTrAACGT CAATCGCTCT 3300 GGTCAGGATC TAAGCAAGTC ACTGCAACAG GC?GTACATG CCACGCCGCC ATCCGCAGAG 3360 AGT?AACTGC AATCCATGCT GGGGCACTTT GTCAGTGCCG GGG?GGATAT GAGTCATCAG 3420 AAGGGOGAGA TCCCGCTGGG CCGCCAGCGC GATCOGAATG ATAA-ACCGC A-T-ACCAAA 3480 TCGCGTTTAA TTTTAGATAC CGTGACCATC GGTGAACTGC ATGAACTGGC CGATAAGGCG 3540 AAACTG5TAT CTGACCATAA ACCCGATGCC GATCAGATAA AACBGCTGCG CCAGCAGTTC 3600 GATACGCTGC GTGAAAAGCG GTATGAGAGC AATCCGGTGA ASCATTACAC CGATATGGGC 3660 TTCACCCATA ATA-U-CCGCT GGAAGCAAAC TATGA7GCGG TCAAAGCCTT TATCAATGCC 3720 TTTAAGAAAG AGCACCACGG CGTCAATCTG ACCACGCGTA CCGTACTGGA ATCACAGGGC 3780 AC-GCGGAGC TGGCGAAGAA GCTCAAGAAT ACGCTGTTGT CCCTGGACAG TGGTGAAAGT 3840 ATGAGCTTCA GCCGGTCATA TGGCGGGGGC GTCAGCACTG TCTTTGTGCC TACCCTTAGC 3900 AAGAAGGTGC CAGTTCC--GT GATCCCCGGA GCCGGCATCA CGCTGGATCG CGCCTATAAC 3960 CTGAsCTTCA CTCGTACCAG CGGCGGATTG AAC-TCACTT TTGGCCGCGA CGGCGGGGTG 4020 AGTGGTAAC-- TCATGGTCGC TACCGGCCAT GATGTGATGC CCrATATGAC CGGTAAGAAA 4080 ACCAGTGCAG GTAACGCCAG TGACTGGTTG AGCGCAAAAC ATAAAATCAG CCCGGACTTG 4140 CGTATCGGCG CTGCTGTGAG TGGCACCCTG CAAGGAACGC TACAAAACAG Ct-TGAAGTTT 420D AAGCTGACAG AGGATGAGCT GCCTGGCTTT ATCCATGGCT TGACGCATGG CACGTTGACC 4260 CCGGCAGAAC TGTTGCAAAA GGGGATCGAA CATCAGATGA AGCAGGGCAG CAAACTGACG 4320 •TTAGCGTCG ATACCTCGGC AAATCTGGAT CTGCGTGCCG GTATCAATCT GAACGAAGAC 4380 GGCAGTAAAC CAAATGGTGT CACTGCCCGT GTTTCTGCCG GGCTAAGTGC ATCGGCAAAC 4440 CTGGCCGCCG GCTCGCGTGA ACGCAGCACC ACCTCTGGCC AGTTTGGCAG CACGACTTCG 4500 GCCAGCAATA ACCGCCCAAC CTTCCTCAAC GGGGTCGGCG CGGGTGCTAA CCTGACGGCT 4560 GCTTTAGGGG TTGCCCATTC ATCTACGCAT GAAGGGAAAC CGGTOGGGAT CTTCCCGGCA 4620 TTTACCTCGA CCAATGTTTC GGCAGCGCTG GCGCTGGATA ACCGTACCTC ACAGAGTATC 4680 AGCCTGGAAT TGAAGCGCGC GGAGCCGGTG ACCAGCAACG ATATCAGCGA GTTGACCTCC 7 0 ACGCTGGGAA AACACTTTAA GGATAGCGCC ACAACGAAGA TGCTTGCCGC TCTCAAAGAG 4800 TTAGATGACG CTAAGCCCGC TGAACAACTG CATATTTT?C AGCAGCATTT CAGTGCAAAA 4860 GATGTCGTCG GTGATGAACG CTACGAGGCG GTGCGCAACC TGAAAAAACT GGTGATACGT 920 CAACAGGCTG CGGACAGCCA CAGCATGGAA TTaGOATCTG CCAGTCACAS CACGACCTAC 4980 AATAATCTGT CGAGAATAAA TAATGA03GC ATTGTCGAGC TGCTACACAA ACAlVlUiAT 5040 GCGGCATTAC CAGCAAGCAG TGCCAAACGT CTTGGTGAAA TGATGAATAA CGATCCGGCA 5100 CTGAAAGATA TTATTAAGC-- GCTGCAAAsT ACGCCGTTCA GCAGCGCCAG CGTCTCGATG 5160 GAGCTGAAAG ATGGTCTGsG TGAGCAGACG GAAAAAGCAA TACTGGACGG TAAGsTCGGT 5220 CGTGAAGAAG TGGGAíGTACT TTTCCAGGAT OGTAACAACT TGOGTGTTAA ATCGGTCAGC S2T0 GTCAGTCAGT CCGTCAGCAA AAGCGAAGGC TTCAATACCC CAGCGCTGTT ACTGGGGACG 5340 A5CAACAGCG CTGCTATGAG CATOGAGCGC AACATCGGAA CCATTAATTT TAAATACGGC 5400 CAGGATCAGA ACACCCCACG GCGATTTACC CTGGAGGGTG GAATAGCTCA GGCTAATCCG 5460 CAGGTCGCAT CTGCGCTTAC TGATTTGAAG AAGGAAGGGC TGGAAATGAA GAGCTAA 5S17 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 2: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1838 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 2: Met Gl? Leu Lys Ser Leu Gly Thr Glu His Lys Ala Ala Val His Th- 1 5 10 1S Ala Ala His Asn Pro Val Gly His Gly Val Ala Leu Gln Gln Gly «e- 20 25 3o Ser Ser Ser Ser Pro Gln Asn Ala Ala Ala Ser Leu Ala Ala Glu Glv 40 5 Lys Asn Arg Gly Lys Met Pro Arg He His Gln Pro Ser Thr Ala Ale 50 55 60 Asp Gly He Ser Ala Ala His Gln Gln Lvs Lys Ser Phe Ser Leu A*-c €5 70 5 Bt ' - Gly Cys Leu Gly Thr Lys Lys Phe Ser Arg Ser Ala Pro Gln Gly Glr 85 90 95 Pro Gly Thr Thr His Ser Lys Gly Ala Thr Leu Arg Asp Leu Leu Aii 1O0 105 110 Arg Asp Asp Gly Glu Thr Gln His Glu Ala Ala Ala Pro Asp Ala Al 115 120 125 Arg Leu Thr Arg Ser Gly Gly Val Lys Arg Arg Asn Met Asp Asp M- 130 135 140 Ala Gly Arg Pro Met Val Lys Gly Gly Ser Gly Glu Asp Lys Val p~> 145 150 155 ?e: Thr Gli. Gln Lys Arg His Gln Leu Asn Asn Phe Gly Gli. Met Arg Glr. 165 170 175 Thr Met Leu Ser Lys Met Ala His Pro Ala Ser Ala Asn Ala Gly Asp 180 1B5 190 Arg Leu Gln His Ser Pro Pro His He Pro Gly Ser His His Glu He 195 200 205 Lys Glu Glu Pro Val Gly Ser Thr Ser Lys Ala Thr Thr Ala His Ala 210 215 220 Asp Arg Val Glu He Ala Gln Glu Asp Asp Asp Ser Glu Phe Gln Gln 225 230 235 240 Leu His Gln Gln Arg Leu Ala Arg Glu Arg Glu Asn Pro Pro Gln Pro 245 250 255 Pro Lys Leu Gly Val Ala Thr Pro He Ser Ala Arg Phe Gln Pro Lys 260 265 270 Leu Thr Ala Val Ala Glu Ser Val Leu Glu Gly Thr Asp Thr Thr Gln 275 280 285 Ser Pro Leu Lys Pro Gln Ser Met Leu Lys Gly Ser Gly Ala Gly Val 290 295 300 Thr Pro Leu Ala Val Thr Leu Asp Lys Gly Lys Leu Gln Leu Ala Pro 305 310 315 320 Asp Asn Pro Pro Ala Leu Asn Thr Leu Leu Lys Gln Thr Leu Gly Lys 325 330 335 Asp Thr Gln His Tyr Leu Ala His His Ala Ser Ser Asp Gly Ser Gln 340 345 350 His Leu Leu Leu Asp Asn Lys Gly His Leu Phe Asp He Lys Ser Thr 355 360 365 Ala Thr Ser Tyr Ser Val Leu His Asn Ser His Pro Gly Glu He Lys 370 375 3B0 Gly Lys Leu Ala Gln Ala Gly Thr Gly Ser Val Ser Val Asp Gly Lys 385 390 395 400 Ser Gly Lys He Ser Leu Gly Ser Gly Thr Gln Ser His Asn Lys Thr 405 410 415 Met Leu Ser Gln Pro Gly Glu Ala His Arg Ser Leu Leu Thr Gly He 420 425 430 Trp Gln His Pro Ala Gly Ala Ala Arg Pro Gln Gly Glu Ser He Arg 435 440 15 Leu His Asp Asp Lys He His He Leu His Pro Glu Leu Gly Val Trp 450 455 4g0 Gln Ser Ala Asp Lys Asp Thr His Ser Gln Leu Ser Arg Gln Ala Asp 465 470 475 48C Gly Lys Leu Tyr Ala Leu Lys Asp Asn Arg Thr Leu Gln Asn Leu Ser 485 490 95 Asp Asn Lys Ser Ser Glu Lys Leu Val Asp Lys He Lys Ser Tyr Ser 500 505 520 Val Asp Gln Arg Gly Gln Val Ala He Leu Thr Asp Thr Pro Gly Arg 515 520 525 His Lys Met Ser He Met Pro Ser Leu Asp Ala Ser Pro Glu Ser His 530 535 540 He Ser Leu Ser Leu His Phe Ala Asp Ala His Gln Gly Leu Leu His 545 550 5S5 5fi0 Gly Lys Ser Glu Leu Glu Ala Gln Ser Val Ala He Ser His Gly Arg 565 570 575 Leu Val Val Ala Asp Ser Glu Gly Lys Leu Phe Ser Ala Ala He Pro 580 5B5 590 Lys Gln Gly Asp Gly Asn Glu Leu Lys Met Lys Ala Met Pro Gln Hie 595 600 605 Ala Leu Asp Glu His Phe Gly His Asp His Gln He Ser Gly Phe Phe 610 615 620 Hie Asp Asp His Gly Glp Leu Asn Ala Leu Val Lys Asn Aen Phe Arg 625 «0 €35 640 Gln Gln His Ala Cys Pro Leu Gly Asn Asp His Gln Phe His Pro Gly 645 €50 655 Trp Asn Leu Thr Asp Ala Leu Val He Asp Asn Gln Leu Gly Leu His 660 665 670 His Thr Asn Pro Glu Pro His Glu He Leu Asp Met Gly His Leu Glv - 675 680 685 Ser Leu Ala Leu Gln Glu Gly Lys Leu His Tyr Phe Asp Gln Leu Thr 690 695 700 Lys Gly Trp Thr Gly Ala Glu Ser Asp Cys Lys G n Leu Lys Lys Gly 705 710 715 720 Leu Asp Gly Ala Ala Tyr Leu Leu Lys Asp Gly Glu Val Lys Arg Leu 725 730 735 Asn He Asn Gln Ser Thr Ser Ser He Lys His Gly Thr Glu Asn Val 740 745 50 phe Ser Leu Pro His Val Arg Asn Lys Pro Glu Pro Gly Asp Ala Leu 755 760 765 Gln Gly Leu Asn Lys Aep Asp Lys Ala Gln Ala Met Ala Val He Gly 770 775 780 Val Asn Lys Tyr Leu Ala Leu Thr Glu Lys Gly Asp He Arg Ser Phe 785 790 795 B00 Gln He Lys Pro Gly Thr Gln Gln Leu Glu Arg Pro Ala Gln Thr Leu 805 810 B15 Ser Arg Glu Gly He Ser Giy Glu Leu Lys Asp He His Val Asp His 820 825 830 Lys Gln Asn Leu Tyr Ala Leu Thr His Glu Gly Glu Val Phe His Gln 835 840 845 Pro Arg Glu Ala Trp Gln Asn Gly Ala Glu Ser Ser Ser Trp His Lys 850 as>5 860 Leu Ala Leu Pro Gln Ser Glu Sex Lys Leu Lys Ser Leu Asp Met Ser 06 870 875 880 His Glu His Lys Pro He Ala Thr Phe Glu Asp Gly Ser Gln His Gln 885 890 895 Leu Lys Ala Gly Gly Trp His Ala Tyr Ala Ala Pro Glu Arg Gly Pro 900 905 910 Leu Ala Val Gly Thr Ser Gly Ser Gln Thr Val Phe Asn Arg Leu Met 915 920 925 Gln Gly Val Lys Gly Lys Val He Pro Gly Ser Gly Leu Thr Val Lys 930 935 940 Leu Ser Ala Gln Thr Gly Gly Met Thr Gly Ala Glu Gly Arg Lys Val 9 5 950 955 960 Ser Ser Lys Phe Ser Glu Arg He Arg Ala Tyr Ala Phe Asn Pro Thr 965 970 975 Met Ser Thr Pro Arg Pro He Lys Asn Ala Ala Tyr Ala Thr Glp Hie 980 985 90 Gly Trp Gln Gly Arg Glu Gly Leu Lys Pro Leu Tyr Glu Met Gln Gly 995 1000 !005 Ala Leu He Lys Gln Leu Asp Ala His Asn Val Arg Hie Asn Ala Pro 1010 1015 1020 Gln Pro Asp Leu Gln Ser Lys Leu Glu Thr Leu Asp Leu Gly Glu His 1025 1030 1035 1040 Gly Ala Glu Leu Leu Asn Asp Met Lys Arg Phe Arg Asp Glu Leu Glu 1045 1050 1055 Gln Ser Ala Thr Arg Ser Val Thr Val Leu Gly Gln His Gln Gly Val !<>eo 1065 1070 Leu Lys Ser Asn Gly Glu He Asn Ser Glu Phe Lys Pro Ser Pro Gly 1075 1080 1085 Lys Ala Leu Val Gln Ser Phe Asn Val Asn Arg Ser Gly Gln Asp Leu 1090 1095 1100 Ser Lys Ser Leu Gln Gln Ala Val His Ala Thr Pro Pro Ser Ala Glu 1105 1110 1115 1120 Ser Lys Leu Gln Ser Met Leu Gly His Phe Val Ser Ala Gly Val Asp 1125 1130 1135 Met Ser His Glp Lys Gly Glu He Pro Leu Gly Arg Gln Arg Asp Pro 1140 H45 1150 Asn Asp Lys Thr Ala Leu Thr Lys Ser Arg Leu He Leu Asp Thr Val 1155 H60 1165 Thr He Gly Glu Leu His Glu Leu Ala Asp Lys Ala Lys Leu Val Ser 1170 H75 1180 Asp His Lys Pro Asp Ala Asp Gln He Lys Gln Leu Arg Gln Gln Phe 3.1B5 1190 1195 1200 Asp Thr Leu Arg Glu Lye Arg Tyr Glu Ser Asp Pro Val Lys His Tyr 1205 1210 1215 Thr Asp Met Gly Phe Thr His Asn Lys Ala Leu Glu Ala Asn Tyr Asp 1220 1225 1230 Ala Val Lys Ala Phe He Asn Ala Phe Lys Lys Glu His His Gly Val 1235 1240 1245 Asn Leu Thr Thr Arg Thr Val Leu Glu Ser Gln Gly Ser Ala Glu Leu 12S0 125S 1260 Ala Lys Lys Leu Lys Asn Thr Leu Leu Ser Leu Asp Ser Gly Glu Ser 1265 1270 1275 1280 Met Ser Phe Ser Arg Ser Tyr Gly Gly Gly Val Ser Thr Val Phe Val 1285 1290 1295 Pro Thr Leu Ser Lys Lys Val Pro Val Pro Val He Pro Gly Ala Gly 1300 1305 1310 He Thr Leu Asp Arg Ala Tyr Asn Leu Ser Phe Ser Arg Thr Ser Gly 1315 1320 1325 Gly Leu Asn Val Ser Phe Gly Arg Asp Gly Gly Val Ser Gly Asn He 1330 1335 1340 Met Val Ala Thr Gly His Asp Val Met Pro Tyr Met Thr Gly Lys Lvs 1345 1350 1355 1360 Thr Ser Ala Gly Asn Ala Ser Asp Trp Leu Ser Ala Lye His Lys He 1365 1370 127S Ser Pro Asp Leu Arg He Gly Ala Ala Val Ser Gly Thr Leu Gln Clv "80 1385 1390 Thr Leu Gln Asn Ser Leu Lys Phe Lys Leu Thr Glu Asp Glu Leu Pro 1395 1400 1 05 Gly Phe He His Gly Leu Thr His Gly Tfar Leu Thr Pro Ala Glu Le 1410 1415 1420 Leu Gln Lye Gly He Glu His Gln Met Lys Gln Gly Ser Lys Leu 7 1425 1430 1435 Phe Ser Val Asp Thr Ser Ala Asn Leu Asp Leu Arg Ala Gly He 1445 1450 145 Leu Asn Glu Asp Gly Ser Lys Pro Asn Gly Val Thr Ala Arg Va 1460 1465 1470 Ala Gly Leu Ser Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Gly Ser Arg G 1475 1480 1485 Ser Thr Thr Ser Gly Gln Phe Gly Ser Thr Thr Ser Ala Ser Asn Asn 1490 1495 1500 Arg Pro Thr Phe Leu Asn Gly Val Gly Ala Gly Ala Asn Leu Thr Ala 1S05 1S10 ISIS 1520 Ala Leu Gly Val Ala His Ser Ser Thr His Glu Gly Lys Pro Val Gly 1525 1530 1535 He Phe Pro Ala Phe Thr Ser Thr Asn Val Ser Ala Ala Leu Ala Leu 1540 1545 1550 Asp Asn Arg Thr Ser Gln Ser He Ser Leu Glu Leu Lys Arg Ala Glu 1555 1560 1565 pro Val Thr Ser Asn Asp He Ser Glu Leu Thr Ser Thr Leu Gly Lys 1570 1575 1580 His Phe Lys Asp Ser Ala Thr Thr Lye Met Leu Ala Ala Leu Lys Giu 15BS 1590 1595 1600 Leu Asp Asp Ala Lys Pro Ala Glu Gln Leu Hie lie Leu Gln Gln His 160S 1610 1615 Phe Ser Ala Lys Asp Val Val Gly Asp Glu Arg Tyr Glu Ala Val Arg 1620 1625 1630 A=n Leu Lys Lys Leu Val He Arg Gln Gln Ala Ala Asp Ser His Ser 1635 1640 1645 Met Glu Leu Gly Ser Ala Ser His Ser Thr Thr Tyr Asn Asn Leu Ser 1650 1655 1660 Arg He Asn Asn Asp Gly He Val Glu Leu Leu His Lys His Phe Asp 1665 1670 1675 1680 Ala Ala Leu Pro Ala Ser Ser Ala Lys Arg Leu Gly Glu Met Met Asn 1685 1690 1695 Asn Asp Pro Ala Leu Lys Asp He He Lys Gln Leu Gln Ser Thr Pro 1700 1705 1710 Phe Ser Ser Ala Ser Val Ser Met Glu Leu Lys Asp Gly Leu Arg Glu 1715 1720 1725 Gln Thr Glu Lys Ala He Leu Asp Gly Lys Val Gly Arg Glu Glu Val 1730 1735 1740 Gly Val Leu Phe Gln Asp Arg Asn Asn Leu Arg Val Lys Ser Val Ser 1745 1750 1755 1760 Val Ser Gln Ser Val Ser Lys Ser Glu Gly Phe Asn Thr Pro Ala eu 1765 1770 1775 Leu Leu Gly Thr Ser Asp Ser Ala Ala Met Ser Met Glu Arg Asn He 1780 1785 1790 Gly Thr He Asn Phe Lys Tyr Gly Gln Asp Gln Asn Thr Pro Arg Arg 1795 1800 1805 Phe Thr Leu Glu Gly Gly He Ala Gln Ala Asn Pro Gln Val Ala Ser 1810 1B15 1820 Ala Leu Thr A3 Leu Lys Lys Glu Gly Leu Glu Met Lys Ser 1825 1830 1835 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 3: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 420 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 3: ATGACATCGT CACAGCAGCG GGTTGAAAGG TTTTTACAGT ÁTTTCTCÜGC CGGGTGTAAA eo ACGCCCATAC ATCTGAAAG? CGGGGTGTGC GCCCTGTATA ACGAACAAGA TGAGGAGGOG 120 GCGGTGCTGG AAGTACCGCA ACACAGCGAC AGCCTGTTAC TACACTGCCG AftTCATTGAS 180 GCTGACCCAC AAACTTCAAT AACCCTGTAT TCGATGCTAT TACAGCTGAA TTTTGAAATG 240 GCGGCCATGC GCGGCTGTTG GCTGGCGCTG GATGAACTGC ACAACGTGCG TTTATGTTTT 300 CAGCAGTCGC TGGAGCATCT GGATGAAGCA AGTTTTAGCG ATATCGTTAG CGGCTTCATC 360 GAACATGCGG CAGAAGTGCG TGAGTATATA GCGCAATTAG ACßftGAGTAG CGCGGCATAA 420 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 4: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 139 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 4: Met Thr Ser Ser Gln Gln Arg Val Glu Arg Phe Leu Gln Tyr Phe Ser 10 15 Ala Gly Cys Lys Thr Pro He His Leu Lys Asp Gly Val Cys Ala Leí- 20 25 30 Tyr Asn Glu Gln Asp Glu Glu Ala Ala Val Leu Glu Val Pro Gln K;-. 35 <0 45 Ser Asp Ser Leu Leu Leu His Cys Arg He He Glu Ala Asp Pro Gln SO 55 60 Thr Ser He Thr Leu Tyr Ser Met Leu Leu Gln Leu Asn Phe Glu Met 65 70 75 80 Ala Ala Met Arg Gly Cys Trp Leu Ala Leu Asp Glu Leu His Asn Val 85 90 95 Arg Leu Cys Pbe Gln Gln Ser Leu Glu His Leu Asp Glu Ala Ser Phe 100 105 no Ser Asp He Val Ser Gly Phe He Glu His Ala Ala Glu Val Arg Glu 115 120 125 Tyr He Ala Gln Leu Asp Glu Ser Ser Ala Ala 130 135 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 5: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 29 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico) (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 5: GGAACCNNNN NNNNNNNNNN NCAACATAA Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (43)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecedente, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: _ 1. Una molécula de ADN aislada, caracterizada porque codifica para una proteina o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad, en donde la molécula de ADN aislada se selecciona del grupo que consiste de (a) una molécula de ADN que comprende la secuencia nucleotidica de la SEQ ID No. 1 ó 3, (b) una molécula de ADN que codifica para una proteina que comprende la secuencia de aminoácidos de La SEQ ID No. 2 ó 4, (c) una molécula de ADN que se hibridiza con una molécula de ADN que comprende la secuencia nucleotidica de la SEQ ID No. 1 ó 3, bajo condiciones estrictas y (d) una molécula de ADN complementaria a las moléculas de ADN de los incisos (a) , (b) y (c) .
2. 2. Una molécula de ADN aislada de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la molécula de ADN es una molécula de ADN que comprende la secuencia nucleotidica de la SEQ ID No. 1 ó 3.
3. 3. Una molécula de ADN aislada de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la molécula de ADN es una molécula de ADN que codifica para una proteina que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No. 2 ó 4.
4. 4. Una molécula de ADN aislada de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la molécula de ADN es una molécula de ADN que se hibridiza con una molécula de ADN que comprende la secuencia nucleotidica de la SEQ ID No. 1 ó 3, bajo condiciones estrictas. ~
5. 5. Una molécula de ADN aislada de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la molécula de ADN es una molécula de ADN complementaria a las moléculas de ADN de los incisos (a) , (b) y (c) .
6. 6. Un vector de expresión transformado con la molécula de ADN de conformidad con la reivindicación 1.
7. 7. Un vector de expresión de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la molécula de ADN está en una orientación de sentido apropiada y con un marco de lectura correcto.
8. 8. Una célula huésped transformada con la molécula de ADN de conformidad con la reivindicación 1.
9. 9. Una célula huésped de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque la célula huésped se selecciona del grupo que consiste de una célula de planta o un célula bacteriana.
10. 10. Una célula huésped de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque la molécula de ADN es' transformada con un vector de expresión.
11. 11. Una planta transgénica transformada con la molécula de ADN de conformidad con la reivindicación 1.
12. 12. Una planta transgénica de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque la planta se selecciona del grupo que consiste de alfalfa, arroz, trigo, cebada, centeno, algodón, girasol, cacahuate, maiz, papa, papa dulce, frijol, chícharo, achicoria, lechuga, endivia, col, col de Bruselas, remolacha, chirivia, nabo, coliflor, brócoli, rábano, espinaca, cebolla, ajo, berenjena, pimienta, cilantro, zanahoria, chayóte, calabaza, calabacín, pepino, manzana, pera, melón, cítricos, fresa, uva, frambuesa, piña, soya, tabaco, jitomate, sorgo y caña de azúcar.
13. 13. Una planta transgénica de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque la planta se selecciona del grupo que consiste de Arabidopsis thaliana , Saintpaulia, petunia, geranio, poinsettia, crisantemo, clavel y zinnia.
14. 14. Una semilla de planta transgénica transformada con la molécula de. ADN de conformidad con la reivindicación 1.
15. 15. Una semilla de planta transgénica de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque la semilla de planta se selecciona del grupo que consiste de alfalfa, arroz, trigo, cebada, centeno, algodón, girasol, cacahuate, maiz, papa, papa dulce, frijol, chícharo, achicoria, lechuga, endivia, col, col de Bruselas, remolacha, chirivia, nabo, coliflor, brócoli, rábano, espinaca, cebolla, ajo, berenjena, pimienta, cilantro, zanahoria, chayóte, calabaza, calabacín, pepino, manzana, pera, melón, cítricos, fresa, uva, frambuesa, piña, soya, tabaco, jitomate, sorgo y caña de azúcar.
16. 16. Una semilla de planta transgénica de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque la semilla de planta se selecciona del grupo que consiste de Arabidopsis thaliana , Saintpaulia, petunia, geranio, poinsettia, crisantemo, clavel y zinnia.
17. 17. Una proteina o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad aislado, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de una proteina o polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID No. 2 ó 4 y una secuencia de aminoácidos codificada por un ácido nucleico que se hibridiza con una molécula de 7?DN que comprende la secuencia nucleotidica de la SEQ ID No. 1 ó 3.
18. 18. Una proteina o polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la proteina o polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID No. 2 ó 4.
19. 19. Una proteina o polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la proteina o polipéptido es codificado por un ácido nucleico que se hibridiza con una molécula de ADN que comprende la secuencia nucleotidica de la SEQ ID No. 1 ó 3.
20. 20. Un método para impartir resistencia a enfermedades a las plantas, caracterizado porque comprende: _ aplicar una proteina o polipéptido de conformidad con la reivindicación 17 en una forma no infecciosa, a una planta o semilla de planta, bajo condiciones estrictas, para impartirle resistencia a enfermedades.
21. 21. Un método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque las plantas son tratadas durante la aplicación.
22. 22. Un método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque las semillas de planta son tratadas durante la aplicación, en donde el método además comprende: plantar las semillas tratadas con el inductor de respuesta de ipersensibilidad, en suelo natural o artificial y propagar las plantas a partir de las semillas plantadas en el suelo.
23. 23. Un método para incrementar el crecimiento de plantas, caracterizado porque comprende: aplicar una proteina o polipéptido de conformidad con la reivindicación 17 en una forma no infecciosa a la planta o a la semilla de planta, bajo condiciones efectivas para incrementar el crecimiento de la planta.
24. 24. Un método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque las plantas son tratadas durante la aplicación.
25. 25. Un método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque las semillas de planta son tratadas durante la aplicación, en donde el método además comprende: plantar las semillas tratadas con el inductor de respuesta de hipersensibilidad, en suelo natural o artificial y propagar las plantas a partir de las semillas plantadas en el suelo.
26. 26. Un método para controlar insectos de plantas, caracterizado porque comprende: aplicar una proteina o polipéptido de conformidad con la reivindicación 17 en una forma no infecciosa a una planta o semilla de planta, bajo condiciones efectivas para controlar insectos.
27. 27. Un método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque las plantas son tratadas durante la aplicación.
28. 28. Un método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque las semillas de planta son tratadas durante la aplicación, en donde el método además comprende : plantar las semillas tratadas con el inductor de respuesta de hipersensibilidad en suelo natural o artificial y ~ propagar las plantas a partir de las semillas plantadas en el suelo.
29. 29. Un método para impartir resistencia a enfermedades a las plantas, caracterizado porque comprende: proporcionar una planta transgénica o semilla de planta transgénica transformada con una molécula de ADN de conformidad con la reivindicación 1 y hacer crecer la planta transgénica o plantas transgénicas producidas a partir de semillas de planta transgénica, bajo condiciones efectivas para impartirles resistencia a enfermedades.
30. 30. Un método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque se proporciona una planta transgénica.
31. 31. Un método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque se proporciona una semilla de planta transgénica.
32. 32. Un método para incrementar el crecimiento de plantas, caracterizado porque comprende: proporcionar una planta transgénica o semilla de planta transgénica transformada con una molécula de ADN de conformidad con la reivindicación 1 y hacer crecer la planta transgénica o plantas transgénicas producidas a partir de semillas de planta transgénicas, bajo condiciones efectivas para incrementar el crecimiento de la planta.
33. 33. Un método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque se proporciona una planta transgénica.
34. 34. Un método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque se proporciona una semilla de planta transgénica.
35. 35. Un método para el control de insectos de plantas, caracterizado porque comprende: proporcionar una planta transgénica o semilla de planta transgénica transformada con una molécula de ADN de conformidad con la reivindicación 1 y hacer crecer la planta trapsgénica o plantas transgénicas producidas 'a partir de semillas de plantas transgénicas, bajo condiciones efectivas para controlar insectos.
36. 36. Un método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque se proporciona una planta transgénica.
37. 37. Un método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque se proporciona una semilla de planta transgénica.
38. 38. Una composición caracterizada porque comprende: una proteina o polipéptido de conformidad con la reivindicación 17 y un vehiculo.
39. 39. Una composición de conformidad con la reivindicación 38, caracterizada porque además comprende un aditivo que se selecciona del grupo que consiste de fertilizantes, insecticidas, fungicidas, nematicidas y mezclas de los mismos.
40. 40. Un anticuerpo o porción de unión al mismo, caracterizado porque reconoce una proteina o polipéptido de conformidad con la reivindicación 17.
41. 41. Un anticuerpo o porción de unión al mismo al mismo, de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
42. 42. Un anticuerpo o porción de unión al mismo de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo policlonal.
43. 43. Un método para alterar la enfermedad o respuesta de hipersensibilidad en una planta, caracterizado porque comprende: proporcionar la planta con un anticuerpo o porción de unión al mismo de conformidad con la reivindicación 40, y causar que el anticuerpo o la porción de unión al mismo se una a una proteina o polipéptido inductor de respueS'ta de hipersensibilidad bajo condiciones efectivas para alterar la enfermedad o la respuesta de hipersensibilidad. RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una proteina o polipéptido aislado que induce una respuesta de hipersensibilidad en plantas, asi como una molécula de ADN aislada que codifica para la proteina o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad. Esta proteina o polipéptido aislado y la molécula de ADN aislada, se pueden utilizar para impartir resistencia a enfermedades a plantas, para incrementar el crecimiento de plantas y/o para controlar insectos en plantas. Esto se puede lograr mediante la aplicación de la proteina o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad, en una forma no infecciosa, a plantas o semillas de planta bajo condiciones efectivas para impartirle resistencia a enfermedades, para incrementar el crecimiento de plantas y/o para controlar insectos en las plantas o en las plantas crecidas a partir de las semillas de planta. Alternativamente, se pueden proporcionar plantas transgénicas o semillas de planta transgénicas transformadas con una molécula de ADN que codifica para una proteina o polipéptido inductor de respuesta de hipersensibilidad y las plantas transgénicas o las plantas provenientes de las semillas de planta transgénicas se hacen crecer bajo condiciones efectivas para impartirles resistencia a enfermedades, para incrementar el crecimiento y/o para controlar insectos en las plantas o en las plantas crecidas a partir de las semillas de planta.