MX2015005307A - Combinacion. - Google Patents

Abstract

Una combinación novedosa que comprende un inhibidor de B-Raf, particularmente N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1,1-dimetiletil )-1,3-tiazol-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamid a o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, y/o el inhibidor de MEK N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-amin o)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido-[4,3-d]- pirimidin-1-il]-fenil}acetamida, o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato de la misma, y un inhibidor de EGFR, de forma adecuada cetuximab (Erbitux) o erlotinib; composiciones farmacéuticas que los comprenden y métodos para utilizar dichas combinaciones y composiciones en el tratamiento de afecciones en las cuales sea beneficiosa la inhibición de MEK y/o B-Raf y/o EGFR, por ejemplo, el cáncer.

Description

COMBINACIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un metodo para tratar el cáncer en un mamífero y a combinaciones útiles en dicho tratamiento. En particular, el método se refiere a una combinación novedosa que comprende un inhibidor de B-Raf, particularmente N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -d imeti leti I)- 1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y/o el inhibidor de MEK N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido[4,3-d]pirimidin-1 - il]fenil}acetamida, o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato de este, y un inhibidor de EGFR, de forma adecuada cetuximab (Erbitux) o erlotinib; composiciones farmacéuticas que los comprenden y métodos para utilizar dichas combinaciones y composiciones en el tratamiento de afecciones en las cuales la inhibición de MEK y/o B-Raf y/o EGFR es beneficiosa, p. ej., el cáncer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El tratamiento eficaz de los trastornos hiperproliferativos, incluido el cáncer, es un objetivo continuo en el campo de la oncología. En general, el cáncer resulta de la desregulación de los procesos normales que controlan la división celular, la diferenciación y la muerte celular apoptótica y se caracteriza por la proliferación de células malignas que tienen el potencial de un crecimiento ilimitado, expansión local y metástasis sistemica. La desregulación de los procesos normales incluye anomalías en las vías de transducción de señales y en la respuesta a los factores que difieren de las que se * encuentran en las células normales.

Una familia de enzimas grande importante es la familia de la enzima proteína cinasa. Actualmente, existen aproximadamente 500 proteínas cinasas conocidas diferentes. Las proteínas cinasas sirven para catalizar la fosforilación de una cadena lateral de aminoácidos en diversas proteínas mediante la transferencia del g-fosfato del complejo ATP-Mg2+ a dicha cadena lateral de aminoácidos. Estas enzimas controlan la mayoría de los procesos de señalización dentro de las células, mediante lo cual rigen la función, el crecimiento, la diferenciación y la destrucción celular (apoptosis) mediante la fosforilación inversa de los grupos hidroxilo de residuos de serina, treonina y tirosina en las proteínas. Los estudios han mostrado que las proteínas cinasas son reguladoras claves de muchas funciones celulares, incluida la transducción de señales, la regulación transcripcional, la motilidad celular y la división celular. También se ha demostrado que diversos oncogenes codifican las proteínas cinasas, lo que sugiere que las cinasas cumplen una función en la oncogénesis. Estos procesos están altamente regulados, generalmente, por vías intermezcladas complejas en donde cada cinasa será regulada por una o más cinasas. En consecuencia, la actividad aberrante o inadecuada de las proteínas cinasas puede contribuir con el aumento de los estados de enfermedad asociados con dicha actividad cinasa aberrante, incluidos trastornos proliferativos benignos y malignos, así como enfermedades derivadas de la activación inadecuada de los sistemas inmunitario y nervioso. Debido a su importancia fisiológica, variedad y ubicuidad, las proteínas cinasas se han convertido en una de las familias de enzimas más importantes y estudiadas en la investigación bioquímica y médica.

La familia de enzimas de proteína cinasa se clasifica, típicamente, en dos subfamilias principales: las proteínas tirosina cinasas y las proteínas serína/treonina cinasas, según el residuo de aminoácido que fosforilan. Las proteínas serina/treonina cinasas (PSTK), incluyen las proteínas cinasas dependientes de AMP cíclico y de GMP cíclico, la proteína cinasa dependiente de calcio y fosfolípidos, las proteínas cinasas dependientes de calcio y calmodulina, las caseína cinasas, las proteínas cinasas del ciclo de división celular y otras. Estas cinasas suelen ser citoplásmicas o asociadas con las fracciones de partículas de células, posiblemente mediante el anclaje de las proteínas. La actividad aberrante de la proteína serina/treonina cinasa se ha relacionado o se sospecha en múltiples patologías como la artritis reumatoide, la psoriasis, el choque séptico, la pérdida ósea, muchos cánceres y otras enfermedades proliferativas. En consecuencia, las serina/treonina cinasas y las vías de transducción de señales de las cuales forman parte son dianas importantes para el diseño del fármaco. Las tirosina cinasas fosforilan los residuos de tirosina. Las tirosina cinasas cumplen una función igualmente importante en la regulación celular. Estas cinasas incluyen diversos receptores para las moléculas como los factores de crecimiento y las hormonas, incluido el receptor del factor de crecimiento epidérmico, el receptor de insulina, el receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas y otros. Los estudios han indicado que muchas tirosina cinasas son proteínas transmembrana con los dominios receptores ubicados fuera de la célula y los dominios cinasa en el interior. También se está trabajando arduamente para identificar los moduladores de las tirosina cinasas.

Los receptores tirosina cinasa (RTK) catalizan la fosforilación de determinados residuos de aminoácidos de tirosilo en diversas proteínas, incluido ellas mismas, que rigen el crecimiento, la proliferación y la diferenciación celular.

Corriente abajo de los diversas RTK se encuentran varias vías de señalización, entre estas se encuentran la vía de las cinasas Ras-Raf-MEK-ERK. Actualmente, se entiende que la activación de las proteínas Ras GTPasa en respuesta a los factores de crecimiento, hormonas, citocinas, etc. , estimula la fosforilación y la activación de las cinasas Raf. Estas cinasas después fosforilan y activan las proteínas cinasas intracelulares M EK1 y MEK2, que a su vez fosforilan y activan otras proteínas cinasas, ERK1 y 2. Esta vía de señalización, también conocida como cascada citoplásmica o vía de proteína cinasa activada por mitógenos (MAPK), media las respuestas celulares para las señales de crecimiento. La función final es vincular la actividad del receptor en la membrana celular con la modificación de las dianas citoplásmicas o nucleares que rigen la proliferación, la diferenciación y la supervivencia celular.

La activación constitutiva de esta vía es suficiente para inducir la transformación celular. Se ha descubierto con frecuencia la activación desregulada de la vía de la cinasa MAP debido a la activación aberrante del receptor tirosina cinasa, las mutaciones Ras o las mutaciones Raf en los cánceres humanos y representa un factor importante para determinar el control del crecimiento anormal. En las neoplasias humanas, las mutaciones Ras son comunes y se han identificado en aproximadamente el 30 % de los cánceres. La familia Ras de las proteínas GTPasa (proteínas que convierten la guanosina trifosfato en guanosina difosfato) trasmite señales de los receptores del factor de crecimiento activados a los compañeros intracelulares corriente abajo. Se destacan entre las dianas reclutadas por Ras unido a la membrana activa, la familia Raf de serina/treonina proteína cinasas. La familia Raf está compuesta por tres cinasas relacionadas (A-, B- y C-Raf) que actúan como efectores corriente abajo de Ras. La activación de Raf mediada por Ras, a su vez, dispara la activación de M EK1 y MEK2 (cinasas MAP / ERK 1 y 2) que, a su vez, fosforila a ERK1 y a ERK2 (cinasas reguladas por señales extracelulares 1 y 2) sobre la tirosina-185 y la treonina-183. ERK1 y ERK2 activado se traslocan y se acumulan en el núcleo, en donde pueden fosforilar múltiples sustratos, incluido los factores de transcripción que controlan el crecimiento y la supervivencia celular.

Dada ta importancia de la vía Ras / Raf / M EK / ERK en el desarrollo de los cánceres humanos, los com ponentes de cinasa de la cascada de señalización se fusionan como dianas potencialmente importantes para la modulación del avance de la enfermedad en el cáncer y en otras enfermedades proliferativas.

M EK1 y MEK2 son miembros de una familia más grande de cinasas de especificidad doble (MEK1 -7) que fosforilan los residuos de treonina y tirosina de múltiples cinasas MAP. M EK1 y M EK2 son codificados por diferentes genes, pero comparten una alta homología (80 %) dentro de los dominios de cinasa catalíticos de extremo C y la mayoría de la región reguladora del extremo N. Las formas de los oncogenes de MEK1 y MEK2 no se han descubierto en los cánceres humanos, pero se ha demostrado que la activación constitutiva de MEK produce la transformación celular. Además de Raf, MEK también se puede activar por otros oncogenes. Hasta ahora, los únicos sustratos conocidos de MEK1 y MEK2 son ERK1 y ERK2. Esta especificidad de sustratos poco común sumada a la capacidad única de fosforilar los residuos de tirosina y treonina coloca a MEK1 y a MEK2 en un punto fundamental en la cascada de transducción de señales que permite que integre muchas señales extracelulares a la vía MAPK.

En consecuencia, se ha reconocido que un inhibidor de una proteína de la vía de la cinasa MAPK (p. ej . , MEK) debería ser importante tanto como un agente antiproliferativo, proapoptótico y antiinvasivo para utilizar en la contención y/o el tratamiento de una enfermedad proliferativa o invasiva.

Además, también se sabe que un compuesto que tiene actividad inhibidora de M EK reduce con eficacia la inhibición de la actividad de ERK1 /2 y la supresión de la proliferación celular (The Journal of Biological Chemistry, vol. 276, No. 4 pp. 2686-2692, 2001 ) y se espera que el compuesto muestre efectos sobre las enfermedades provocadas por la proliferación celular no deseada, como la génesis tumoral y/o el cáncer.

Se han identificado mutaciones en múltiples Ras GTPasas y en la cinasa B-Raf que pueden conducir a la activación sostenida y constitutiva de la vía MAPK, lo que produce en última instancia un aumento de la división y de la supervivencia celular. Como consecuencia, estas mutaciones se han vinculado fuertemente con el establecimiento, el desarrollo y el avance de una amplia gama de cánceres humanos. La función biológica de las cinasas Raf, y específicamente la de B-Raf, en la transducción de señales se describe en Davíes, H. , et al. , Nature (2002) 9: 1 -6; Garnett, M.J. y Marais, R., Cáncer Cell (2004) 6:313-319; Zebisch, A. y Troppmair, J . , Cell. Mol. Life Sci. (2006) 63:1314-1330; Midglcy, R.S. y Kerr, D.J., Crit. Rev. Onc/Hematol. (2002) 44: 109-120; Smith, R.A., et al. , Curr. Top. Med. Chem. (2006) 6: 1071 -1089; y Downward, J., Nat. Rev. Cáncer (2003) 3:1 1 -22.

Las mutaciones que se producen naturalmente de la cinasa B-Raf que activan la señalización de la vía MAPK se han encontrado en un alto porcentaje de melanomas humanos (Davies (2002) supra) y cánceres de tiroides (Cohen et al J. Nat. Cáncer Inst. (2003) 95(8) 625-627 y Kimura et al Cáncer Res. (2003) 63(7) 1454-1457), así como a frecuencias más bajas, aunque aún significativas, en los siguientes: Adenocarcinoma de Barret (Garnett et al., Cáncer Cell (2004) 6 313-319 y Sommerer et al Oncogene (2004) 23(2) 554-558), carcinomas del tracto biliar (Zebisch et al., Cell. Mol. Life Sci. (2006) 63 1314-1330), cáncer de mama (Davies (2002) supra), cáncer de cuello uterino (Moreno-Bueno et al Clin. Cáncer Res. (2006) 12(12) 3865-3866), colangiocarcinoma (Tannapfel et al Gut (2003) 52(5) 706-712), tumores del sistema nervioso central incluido tumores primarios del SNC como glioblastomas, astrocitomas y ependimomas (Knobbe et al Acta Neuropathol. (Berl.) (2004) 108(6) 467-470, Davies (2002) supra y Garnett et al., Cáncer Cell (2004) supra) y tumores secundarios del SNC (es decir, metástasis en el sistema nervioso central de tumores originados fuera del sistema nervioso central), cáncer colorrectal, incluido carcinoma de colon del intestino grueso (Yuen et al Cáncer Res. (2002) 62(22) 6451 -6455, Davies (2002) supra y Zebisch et al., Cell. Mol. Life Sci. (2006), cáncer gástrico (Lee et al Oncogene (2003) 22(44) 6942-6945), carcinoma de la cabeza y cuello incluido carcinoma de células escamosas de la cabeza y cuello (Cohén et al J. Nat. Cáncer Inst. (2003) 95(8) 625-627 y Weber et al Oncogene (2003) 22(30) 4757-4759), cánceres hematológicos incluido leucemias (Garnett et al., Cáncer Cell (2004) supra, particularmente leucemia linfoblástica aguda (Garnett et al. , Cáncer Cell (2004) supra y Gustafsson et al Leukemia (2005) 19(2) 310-312), leucemia mielógena aguda (AML) (Lee et al Leukemia (2004) 18(1 ) 170-172 y Christiansen et al Leukemia (2005) 19(12) 2232-2240), síndromes mielodisplásicos (Christiansen et al Leukemia (2005) supra) y leucemia mielógena crónica (Mizuchi et al Biochem. Biophys. Res. Commun. (2005) 326(3) 645-651); linfoma de Hodgkin (Figl et al Arch. Dermatol. (2007) 143(4) 495-499), linfoma no Hodgkin (Lee et al Br. J. Cáncer (2003) 89(10) 1958-1960), leucemia megacarioblástica (Eychene et al Oncogene (1995) 10(6) 1 159-1165) y mieloma múltiple (Ng et al Br. J. Haematol. (2003) 123(4) 637-645), carcinoma hepatocelular (Garnett et al., Cáncer Cell (2004), cáncer de pulmón (Brose et al Cáncer Res. (2002) 62(23) 6997-7000, Cohen et al J. Nat. Cáncer Inst. (2003) supra y Davies (2002) supra), incluido cáncer de pulmón de células pequeñas (Pardo et al EMBO J. (2006) 25(13) 3078-3088) y cáncer de pulmón de células no pequeñas (Davies (2002) supra), cáncer de ovario (Russell y McCIuggage J. Pathol. (2004) 203(2) 617-619 y Davies (2002) supra), cáncer endometrial (Garnett et al. , Cáncer Cell (2004) supra y Moreno-Bueno et al Clin. Cáncer Res. (2006) supra), cáncer de páncreas (Ishimura et al Cáncer Lett. (2003) 199(2) 169-173), adenoma pituitario (De Martino et al J. Endocrinol. Invest. (2007) 30(1 ) RC1 -3), cáncer de próstata (Cho et al Int. J. Cáncer (2006) 1 19(8) 1858-1862), cáncer de riñón (Nagy et al Int. J. Cáncer (2003) 106(6) 980-981 ), sarcoma (Davies (2002) supra) y cáncer de piel (Rodriguez-Viciana et al Science (2006) 31 1 (5765) 1287-1290 y Davies (2002) supra). La sobreexpresión de c-Raf se ha vinculado con AML (Zebisch et al. , Cáncer Res. (2006) 66(7) 3401 -3408, y Zebisch (Ceb. Mol. Life Sci. (2006)) y la eritroleucemia (Zebisch et al. , Cell. Mol. Life Sci. (2006).

En virtud de la función que cumple la familia Raf de cinasas en estos cánceres y estudios exploratorios con una gama de agentes preclínicos y terapeuticos, incluido uno dirigido selectivamente a la inhibición de la actividad de la cinasa B-Raf (King A.J., et al., (2006) Cáncer Res. 66:1 1 100-1 1 105), se acepta en general que los inhibidores de una o más cinasas de la familia Raf serán útiles para el tratamiento de dichos cánceres u otras afecciones asociadas con la cinasa Raf.

La mutación de B-Raf también se ha relacionado con otras afecciones, incluido el síndrome cardio-facio cutáneo (Rodriguez-Viciana et al Science (2006) 31 1 (5765) 1287-1290) y la enfermedad renal poliquística (Nagao et al Kidney Int. (2003) 63(2) 427-437).

El receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) es el receptor de la superficie celular para los miembros de la familia del factor de crecimiento epidérmico y se activa mediante la unión a ligandos específicos, incluido el factor de crecimiento epidérmico. Tras la activación, EGFR se somete a una transición de una forma de monómero inactivo a un homodímero activo (Yarden et al Biochemistry, 26 (5) 1443-1451 ). El homodímero estimula la actividad de la proteína tirosina cinasa intracelular. Como resultado, varios residuos de tirosina en el dominio del extremo C de EGFR se fosforilan (Downward et al, Nature 31 1 (5985) 483-485). Esta fosforilación produce la activación corriente abajo e inicia diversas cascadas de transducción de señales, principalmente las vías MAPK, Akt y JNK, lo que provoca eventualmente la síntesis del ADN y la proliferación celular (Oda et al Mol. Syst. Biol. 1 (1 )).

La sobreexpresión del receptor del factor de crecimiento epidermico (EGFR) se ha asociado con múltiples cánceres, incluido el cáncer de pulmón, el cáncer de ano y el glioblastoma (Walker et al, Hum. Pathol. 40(1 1 ) 1517-1527). La inhibición de EGFR muestra eficacia contra el cáncer, sin embargo, muchos pacientes desarrollan resistencia (Jackman et al Clin. Cáncer. Res. 15 (16) 5267-5273).

Cetuximab es un anticuerpo monoclonal y se une específicamente a EGFR en las células tumorales. La unión de cetuximab a EGFR bloquea la fosforilación y activa las cinasas asociadas con los receptores, lo que provoca la inhibición del crecimiento celular, la inducción de la apoptosis y la disminución de la metaloproteinasa de la matriz y la producción del factor de crecimiento endotelial vascular.

El Cetuximab fue aprobado por la Administración de Drogas y Alimentos de los EE UU para su uso contra el cáncer. Es comercializado por Bristol-Myers Squibb con la marca comercial Erbitux®.

Aunque ha habido muchos avances recientes en el tratamiento del cáncer, aún existe la necesidad de un tratamiento más eficaz y/o mejorado de un individuo que sufre los efectos del cáncer. La presente invención aborda esta necesidad.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una combinación de un inhibidor de B-Raf y/o un inhibidor de MEK y un inhibidor de EGFR en el tratamiento del cáncer.

La presente invención se refiere a una combinación de agentes terapeuticos que es ventajosa sobre el tratamiento con cada agente cuando se administra solo y es ventajosa sobre el tratamiento con una combinación de un inhibidor de B-RAF y un inhibidor de MEK. En particular, se describe la combinación de fármacos que incluye el inhibidor de B-Raf: A/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 ,1 -dimetiletil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida o una sal farmacéuticamente aceptable de este y/o el inhibidor de MEK: solvato de dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido[4,3-d]pir¡midin-1 -il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este y cetuximab (Erbitux).

El inhibidor de MEK de la invención está representado por la estructura (I): o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable de este (se denominan, en su conjunto, “compuesto A”).

El inhibidor de B-Raf de la invención está representado adecuadamente por la estructura (II): o una sal farmacéuticamente aceptable de este (se denominan, en su conjunto, “compuesto B”).

Cetuximab (Erbitux) está compuesto por las regiones Fv(variable; unión al antígeno) del anticuerpo monoclonal EFGR murino 225 específico para la parte del extremo N de EGFR humano con las regiones constantes de cadena ligera kappa y de cadena pesada lgG1 humana. Se puede realizar de acuerdo con el procedimiento descrito en la patente estadounidense 6.217.866. Las secuencias de las regiones pesada y ligera correspondiente se enumeran a continuación: >Cadena pesada anti-EGFR QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGK GLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTA IYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN WY VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVM HEALHN HYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 1 ) >Cadena ligera anti-EGFR DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTN1HWYQQRTNGSPR LLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWP TTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGA (SEQ ID NO:2) En un primer aspecto de la presente invención, se proporciona una combinación que comprende: (i) un compuesto de la estructura (II) .

, (II) o una sal farmaceuticamente aceptable de este y/o (ii) un compuesto de la estructura (I) o un solvato o sal farmacéuticamente aceptables de este; y (iii) cetuximab (Erbitux).

En otro aspecto de la invención, se proporciona una combinación que comprende: metanosulfonato de A/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -d imetiletil)- 1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida y/o dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fen¡lamino)6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido[4,3-d]pirimidin-1 -il]fenil}acetamida y cetuximab (Erbitux).

En otro aspecto de la invención, se proporciona una combinación que comprende: dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido[4,3-d]pirimidin-1 -il]fenil}acetamida y cetuximab (Erbitux).

En otro aspecto de la presente invención, se proporciona una combinación que comprende: (i) un compuesto de la estructura (I I): - (II) o una sal farmacéuticamente aceptable de este; y/o (ii) un compuesto de la estructura (I): (l) o un solvato o sal farmacéuticamente aceptables de este; y (iii) cetuximab (Erbitux) para utilizar en la terapia.

En otro aspecto de la presente invención, se proporciona una combinación que comprende: (i) un com puesto de la estructura (I I): - (II) o una sal farmacéuticamente aceptable de este; y/o (ii) un compuesto de la estructura (I): (I) o un solvato o sal farmacéuticamente aceptables de este; y (iii) cetuximab (Erbitux), para utilizar en el tratamiento del cáncer.

En otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende: (i) un compuesto de fórmula (I): (I) o un solvato o sal farmacéuticamente aceptables de este; y/o (ii) un compuesto de fórmula (II): .

(I I) o una sal farmacéuticamente aceptable de este; y/o (iii) cetuximab (Erbitux) junto con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto, se proporciona el uso de una combinación que comprende i) un compuesto de la estructura (II): .

(II) o una sal farmacéuticamente aceptable de este; y/o (ii) un compuesto de la estructura (I) (I) o un solvato o sal farmacéuticamente aceptables de este; y (iii) cetuximab (Erbitux) en la fabricación de medicamentos para utilizar en combinación con el tratamiento del cáncer.

En otro aspecto, se proporciona un método de tratamiento del cáncer en un mamífero que comprende la administración a dicho mam ífero de una cantidad terapéuticamente eficaz de: (i) un compuesto de la estructura (II): (II) o una sal farmacéuticamente aceptable de este; y/o (ii) Un compuesto de la estructura (I) (i) o un solvato o sal farmacéuticamente aceptables de este; y (iii) cetuximab (Erbitux) En otro aspecto, se proporciona un método para tratar el cáncer en un ser humano que lo necesita que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de: /V-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1-dimetiletil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de este; y/o N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido[4,3-d]pirimidin-1 -il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este; y cetuximab (Erbitux).

En otro aspecto, se proporciona un método para tratar el cáncer en un ser humano que lo necesita que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de: metanosulfonato de A/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -dimetiletil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida; y/o solvato de dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido[4,3-d]pirimidin-1 -il]fenil}acetamida; y cetuximab (Erbitux).

En otro aspecto, se proporciona un método para tratar el cáncer en un ser humano que lo necesita que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de: solvato de dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido[4,3-d]pirimidin-1 -il]fenil}acetamida; y cetuximab (Erbitux).

En otro aspecto de la invención, se proporciona una combinación que comprende: metanosulfonato de /V-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -d imeti letil)- 1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida y cetuximab (Erbitux).

En otro aspecto, se proporciona un metodo para tratar el cáncer en un ser humano que lo necesita que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de: metanosulfonato de /\/-{3-[5-(2-amino-4-pir¡midinil)-2-(1 , 1 -d imeti letil)- 1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida; y cetuximab (Erbitux).

En otro aspecto de la presente invención se proporciona un método para tratar el cáncer en un mamífero que lo necesita que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de la invención, en donde la combinación se administra dentro de un período específico y durante un tiempo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Figura - 1 La figura 1 ilustra la inhibición del crecimiento celular por el compuesto A, el compuesto B y su combinación con cetuximab en las líneas celulares tumorales humanas.

Figura - 2 La figura 1 ilustra la inhibición del crecimiento celular por el compuesto A, el compuesto B y su combinación con erlotinib en las líneas celulares tumorales humanas.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Según se utiliza en la presente, el inhibidor de MEK N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido[4,3-d]pirimidin-1 -il]fenil}acetamida, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este, está representado por un compuesto de la estructura (I): (I) o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este. Por practicidad, el grupo de posibles compuestos y sales o solvatos se denomina, de forma conjunta, compuesto A, lo que significa que la referencia al compuesto A se referirá a cualquier compuesto o sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este en la alternativa.

Según la convención de denominación, el compuesto de la estructura (I) también se puede denominar, de forma adecuada, N-{ 3-[3-ciclopropil-5-[(2-fluoro-4-yodofenil)amino]-6,8-dimetM-2,4,7-trioxo-3,4,6, 7-tetrahidropirido[4,3-d]pirim id in-1 (2/-/)-il]fenil}acetamida.

Según se utiliza en la presente, el inhibidor de BRaf N-{ 3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -dimetiletil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, está representado por un compuesto de la estructura (II) .

, (II) o una sal farmaceuticamente aceptable de este. Por practicidad, el grupo de posibles compuestos y sales se denomina, de forma conjunta, compuesto B, lo que significa que la referencia al compuesto B se referirá a cualquier compuesto o sal farmacéuticamente aceptable de este en la alternativa.

Cetuximab (Erbitux) está compuesto por las regiones Fv(variable; unión al antígeno) del anticuerpo monoclonal EFGR murino 225 específico para la parte del extremo N de EGFR humano con las regiones constantes de cadena ligera kappa y de cadena pesada I g G 1 humana. El cetuximab es comercializado por Bristol-Myers Squibb con la marca comercial Erbitux®. Las secuencias de las regiones pesada y ligera se enumeran a continuación: >Cadena pesada anti-EG FR 1 QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGK GLEWLGVIWSGGNTDYN TPFTSRLSINKDNSKSQVFFKM NSLQSNDTAIYYCARALTYYDYE FAYWGQGTLVTVSAA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGA LTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSPKSC DKTHTCPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKS RWQQGNVFSCSVM HEALHN HYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO 1 .) >Cadena ligera anti-EGFR 1 DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTN 1HWYQQRTNGSPR LLIKYASESISG IPS RFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNN NWPTTFGAGTKL ELKRTVAAPSVFIFPP SDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESV TEQDSKDSTYSLSSTLT LSKADYEKH KVYACEVTHQGLSSPVTKSF RGA (SEQ ID NO 2.) El erlotinib es un inhibidor de EGFR conocido. Según se utiliza en la presente, el erlotinib se administra de forma adecuada en una dosis de 150 mg por día. Esta cantidad se puede aumentar o disminuir, en general, en incrementos de 50 mg, según sea necesario.

Según se utiliza en la presente, el término “combinación de la invención” se refiere a una combinación que comprende un inhibidor de BRAF; y/o un inhibidor de M EK; y un inhibidor de EGFR, de forma adecuada, el compuesto B; y/o el compuesto A; y cetuximab. En una modalidad alternativa de la invención, “combinación de la invención” se refiere a una combinación que comprende un inhibidor de BRAF y un inhibidor de EGFR, de forma adecuada, el compuesto B y Cetuximab.

Según se utiliza en la presente, el termino “neoplasma” se refiere a un crecimiento anormal de células o tejidos y se entiende que incluye crecimientos benignos, es decir, crecimientos no cancerosos, y malignos, es decir, crecimientos cancerosos. El término “neoplásico” significa de o relacionado con un neoplasma.

Según se utiliza en la presente, el término “agente” significa una sustancia que produce un efecto deseado en un tejido, sistema, animal, mamífero, ser humano u otro sujeto. En consecuencia, el término “agente antineoplásico” significa una sustancia que produce un efecto antineoplásico en un tejido, sistema, animal, mamífero, ser humano u otro sujeto. También se debe entender que un “agente” puede ser un compuesto único o una combinación o composición de dos o más compuestos.

Con el término "tratar" y sus derivados, según se emplean en la presente, se hace referencia a una terapia terapéutica. Con referencia a una afección particular, tratar significa: (1 ) mejorar la afección o una o más de las manifestaciones biológicas de la afección, (2) interferir con (a) uno o más puntos en la cascada biológica que producen o que son responsables de la afección o (b) una o más de las manifestaciones biológicas de la afección, (3) aliviar uno o más de los síntomas, efectos o efectos secundarios asociados con la afección o uno o más de los síntomas, efectos o efectos secundarios asociados con la afección o su tratamiento o (4) ralentizar el avance de la afección o de una o más de las manifestaciones biológicas de la afección.

Según se utiliza en la presente, se entiende que la "prevención" se refiere a la administración profiláctica de un fármaco para disminuir sustancialmente la probabilidad o la gravedad de una afección o una manifestación biológica de esta, o retrasar la aparición de dicha afección o la manifestación biológica de esta. El entendido en la téenica apreciará que la "prevención" no es un término absoluto. La terapia profiláctica es adecuada, por ejemplo, cuando un sujeto se considera con alto riesgo de desarrollar cáncer, como cuando un sujeto tiene antecedentes familiares fuertes de cáncer, cuando el sujeto se ha expuesto a una gran cantidad de radiación o cuando un sujeto ha estado expuesto a un carcinógeno.

Según se emplea en la presente, el término "cantidad eficaz" significa la cantidad de un fármaco o agente farmacéutico que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que busca, por ejemplo, un investigador o un médico. Además, el término “cantidad terapéuticamente eficaz” significa cualquier cantidad que, en comparación con un sujeto correspondiente que no ha recibido dicha cantidad, produce un mejor tratamiento, cura, prevención o mejora de una enfermedad, trastorno o efecto secundario, o una disminución en la tasa de avance de una enfermedad o trastorno. El término también incluye dentro de su alcance las cantidades eficaces para mejorar la función fisiológica normal.

La administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de las combinaciones de la invención son ventajosas sobre los compuestos componentes individuales en el hecho de que las combinaciones proporcionan una o más de las siguientes propiedades mejoradas en comparación con la administración individual de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto componente: i) un mayor efecto contra el cáncer que el agente único más activo, ii) actividad contra el cáncer sinérgica o altamente sinérgica, iii) un protocolo de dosificación que proporciona actividad contra el cáncer mejorada con un perfil de efectos secundarios reducido, iv) una reducción en el perfil de efectos tóxicos, v) un aumento en la ventana terapéutica o vi) un aumento en la biodisponibilidad de uno o más de los compuestos componentes.

Los compuestos A y/o B pueden contener uno o más átomos quirales o pueden ser capaces, de otro modo, de existir como enantiómeros. Por consiguiente, los compuestos de la presente invención incluyen mezclas de enantiómeros así como enantiómeros purificados o mezclas enriquecidas enantioméricamente. Además, se entiende que todos los tautómeros y las mezclas de tautómeros están incluidos dentro del alcance del compuesto A y del compuesto B.

Además, también se entiende que los compuestos A y B se pueden presentar, por separado o no, como solvatos. Según se utiliza en la presente, el término “solvato” se refiere a un complejo de estequiometría variable formado por un soluto. En la presente invención, los compuestos de la estructura (I) o (II) o una sal de estos y un disolvente. Dichos disolventes para el propósito de la invención pueden no interferir con la actividad biológica del soluto. Algunos ejemplos de disolventes adecuados incluyen, entre otros, agua, metanol, dimetilsulfóxido, etanol y ácido acético. En una modalidad, el disolvente utilizado es un disolvente farmacéuticamente aceptable. Algunos ejemplos de disolventes farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen, entre otros, agua, etanol y ácido acético. En otra modalidad, el disolvente utilizado es agua.

Los compuestos A y B pueden tener la capacidad de cristalizarse en más de una forma, una característica que se conoce como polimorfismo, y se entiende que dichas formas polimórficas (“polimorfos”) se encuentran dentro del alcance de los compuestos A y B. El polimorfismo, generalmente, se puede producir como una respuesta a los cambios en la temperatura o la presión o ambos y también puede derivar de las variaciones en el proceso de cristalización. Los polimorfos se pueden distinguir por diversas características físicas conocidas en la téenica como los patrones de difracción de rayos X, la solubilidad y el punto de fusión.

El compuesto A se describe y se reivindica, junto con sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables, como útil como inhibidor de la actividad de M EK, particularmente en el tratamiento del cáncer, en la solicitud internacional N.° PCT/JP2005/01 1082, que tiene la fecha de presentación internacional 10 de junio de 2005, el número de publicación internacional WO 2005/121 142 y la fecha de publicación internacional 22 de diciembre de 2005, cuya descripción se incorpora al presente mediante referencia. El compuesto A es el compuesto del ejemplo 4-1 . El compuesto A se puede preparar como se describe en la solicitud internacional N .° PCT/JP2005/01 1082. El compuesto A se puede preparar como se describe en la publicación de patente estadounidense N.° US 2006/0014768, publicada el 19 de enero de 2006, cuya descripción completa se incorpora a la presente mediante referencia.

De forma adecuada, el compuesto A se encuentra en la forma de un solvato de dimetilsulfóxido. De forma adecuada, el compuesto A se encuentra en la forma de un solvato seleccionado de: hidrato, ácido acético, etanol, nitrometano, clorobenceno, 1 -pentanci, alcohol isopropílico, etilenglicol y 3-metil-1 -butanol. Estos solvatos se puede preparar por un entendido en la téenica a partir de la descripción en la solicitud internacional N.° PCT/JP2005/01 1082 o la publicación de patente estadounidense N .° US 2006/0014768.

Se describe y se reivindica el compuesto B, junto con las sales farmacéuticamente aceptables de este, como útil como inhibidor de la actividad de BRaf, particularmente en el tratamiento del cáncer, en la publicación de patente PCT PCT/US09/42682. El compuesto B se representa en los ejemplos de 58a a 58e de la solicitud. La solicitud PCT se publicó el 12 de noviembre de 2009 como la publicación W02009/1 37391 y se incorpora al presente mediante referencia.

De forma adecuada, se puede preparar el compuesto B de acuerdo con los métodos que siguen: Método 1 : compuesto B (primera forma cristalina) - N-{ 3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -d i meti leti I)- 1 ,3-tiazol-4-M]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida .

Se calentó una suspensión de A/-{3-f5-(2-cloro-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -dimetiletil)- 1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida (196 mg, 0,364 mmol) y amoníaco en metanol 7M (8 mi, 56,0 mmol) en un tubo sellado a 90 °C durante 24 h. Se diluyó la reacción con DCM y se le añadió gel de sílice y se concentró. Se cromatografió el producto bruto sobre gel de sílice eluyendo con 100 % de DCM a 1 : 1 [DCM:(9:1 EtOAc:MeOH)]. Se concentraron las fracciones limpias para dar el producto bruto. Se repurificó el producto bruto mediante HPLC de fase inversa (un gradiente de acetonitrilo:agua con 0, 1 % de TFA en ambos). Se concentraron las fracciones limpias combinadas y se dividieron en DCM y NaHCO3 saturado. Se separó la capa de DCM y se secó sobre Na2SO4. Se obtuvo el compuesto del título, /V-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -dimetiletil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida (94 mg, 47 % de rendimiento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-Ó6) d ppm 10,83 (s, 1 H), 7,93 (d, J= 5,2 Hz, 1 H), 7,55 - 7,70 (m, 1 H), 7,35 - 7,43 (m, 1 H), 7,31 (t, J=6,3 Hz, 1 H), 7,14 - 7,27 (m, 3 H), 6,70 (s, 2 H), 5,79 (d, J=5, 13 Hz, 1 H), 1 ,35 (s, 9 H). MS (ESI): 519,9 [M + H] + .

Metodo 2: compuesto B (forma cristalina alternativa) - se combinó A/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -d i meti leti I )- 1 ,3-tiazol- 4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida 19,6 mg de A/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -di meti leti l)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida (se puede preparar de acuerdo con el ejemplo 58a) con 500 L de acetato de etilo en un recipiente de 2 mL a temperatura ambiente. La suspensión se sometió a ciclos de temperatura de entre 0-40 °C durante 48 h. Se dejó enfriar la suspensión resultante a temperatura ambiente y se recogieron los sólidos mediante filtración al vacío. Se analizaron los sólidos mediante análisis Raman, PXRD, DSC/TGA, que indicaron una forma cristalina diferente de la forma cristalina derivada del ejemplo 58a anterior.

Método 3: compuesto B (forma cristalina alternativa, lote grande) - A/-{3-[5-(2-am¡no-4-pirim¡d¡nil)-2-(1 , 1 -d imeti letil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida Etapa A: 3-{[(2,6-difluorofenil)sulfonil]amino}-2-fluorobenzoato de metilo Se cargó 3-amino-2-fluorobenzoato de metilo (50 g, 1 eq) a un reactor seguido de diclorometano (250 mL, 5 vol.). Se agitó el contenido y se enfrió a ~15 °C y se le añadió piridina (26,2 mL, 1 ,1 eq). Después del añadido de la piridina, se ajustó el contenido del reactor a ~15 °C y se inició el añadido de cloruro de 2,6-diflurorobencenosulfonilo (39,7 mL, 1 ,0 eq) mediante un embudo de adición. La temperatura durante el añadido se mantuvo a <25 °C. Después de que finalizó el añadido, se calentó el contenido a 20-25 °C y se mantuvo durante la noche. Se añadió acetato de etilo (150 m L) y se retiró diclorometano mediante destilación. Una vez completada la destilación, se diluyó la mezcla de reacción una vez más con acetato de etilo (5 vol.) y se concentró. Se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo (10 vol.) y agua (4 vol.) y se calentó el contenido a 50-55 °C con agitación hasta que se disolvieron todos los sólidos. Se dejaron reposar las capas y se separaron. Se diluyó la capa orgánica con agua (4 vol.) y se calentó el contenido a 50-55° durante 20-30 min . Se dejaron reposar las capas, se separaron y se evaporó el acetato de etilo a presión reducida hasta ~3 volúmenes. Se añadió acetato de etilo (5 vol.) y se evaporó nuevamente a presión reducida hasta ~3 volúmenes. Se añadió ciclohexano (9 vol.) al reactor y se calentó el contenido a reflujo durante 30 min, después se enfrió a 0 °C. Se filtraron los sólidos y se enjuagaron con ciclohexano (2 x 100 ml_). Se secaron al aire los sólidos durante la noche para obtener 3-{[(2,6-difluorofenil)sulfonil]amino}-2-fluorobenzoato de metilo (94, 1 g, 91 %).

Etapa B: /V-{3-[(2-cloro-4-pirimidinil)acetil]-2-fluorofenil}-2,6-difl uo roben ce nosulfonamida Se disolvió 3-{[(2,6-difluorofenil)sulfonil]amino}-2-fluorobenzoato de metilo (490 g, 1 equiv.), preparado, en general, de acuerdo con la etapa A anterior, en THF (2,45 L, 5 vol.) y se agitó y se enfrió a 0-3 °C. Se cargó solución 1 M de bis(trimetilsilil)amida de litio en THF (5,25 L, 3,7 equiv.) a la mezcla de reacción, seguido del añadido de 2-cloro-4-metilpirimidina (238 g, 1 ,3 equiv.) en THF (2,45 L, 5 vol.). Se agitó la reacción durante 1 h. Se inactivó la reacción con HCI 4,5 M (3,92 L, 8 vol.). Se retiró la capa acuosa (capa inferior) y se desechó. Se concentró la capa orgánica a presión reducida hasta ~2L. Se añadió IPAC (acetato de isopropilo) (2,45 L) a la mezcla de reacción que despues se concentró a ~2 L. Se añadieron IPAC (0,5 L) y MTBE (2,45 L) y se agitaron durante la noche bajo N2. Se filtraron los sólidos. Los sólidos y el filtrado madre se añadieron nuevamente y se agitaron durante varias horas. Se filtraron los sólidos y se lavaron con MTBE (~5 vol.). Se colocaron los sólidos en un horno de vacío a 50 °C durante la noche. Se secaron los sólidos en un horno de vacío a 30 °C durante el fin de semana para obtener /V-{3-[(2-cloro-4-pirimidinil)acetil]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida (479 g, 72 %).

Etapa C: A/-{3-[5-(2-cloro-4-pirimidinil)-2-(1 ,1-dimetiletil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida Se cargó un recipiente de reactor con /V-{3-[(2-cloro-4- pmmidinil)acetil]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfona miada (30 g, 1 eq), seguido de diclorometano (300 mL). Se enfrió la suspensión de reacción a ~10 °C y se añadió N-bromosuccinimida (“NBS”) (12,09 g, 1 eq) en 3 porciones aproximadamente iguales, agitando durante 10-15 minutos entre cada añadido. Despues del añadido final de NBS, se calentó la mezcla de reacción a -20 °C y se agitó durante 45 min. Se añadió agua (5 vol.) al recipiente de reacción, se agitó la mezcla y se separaron las capas. Se añadió nuevamente agua (5 vol.) a la capa de diclorometano, se agitó la mezcla y se separaron las capas. Se concentraron las capas de diclorometano a -120 mL. Se añadió acetato de etilo (7 vol.) a la mezcla de reacción y se concentró a ~120 mL. Se añadió dimetilacetamida (270 mL) a la mezcla de reacción y se enfrió a ~10 °C. Se añadió 2,2-dimetilpropanotioamida (1 ,3 g, 0,5 eq) en 2 porciones iguales al contenido del reactor con agitación durante ~5 minutos entre los añadidos. Se calentó la reacción a 20-25 °C. Después de 45 min, se calentó el contenido del recipiente a 75 °C y se mantuvo durante 1 ,75 horas. Se enfrió la mezcla de reacción a 5 °C y se cargó agua (270 mi) lentamente manteniendo la temperatura por debajo de 30 °C. Se cargó acetato de etilo (4 vol.), se agitó la mezcla y se separaron las capas. Se cargó nuevamente acetato de etilo (7 vol.) a la capa acuosa y se agitó y se concentró el contenido. Se cargó nuevamente acetato de etilo (7 vol.) a la capa acuosa y se agitó y se concentró el contenido. Se combinaron las capas orgánicas y se lavaron con agua (4 vol.) 4 veces y se agitaron durante la noche a 20-25 °C. Se concentraron las capas orgánicas con calor y vacío a 120 mL. Se calentó el contenido del recipiente a 50 °C y se añadió lentamente heptanos (120 mL). Después del añadido de heptanos, se calentó el contenido del recipiente a reflujo y se enfrió a 0 °C y se mantuvo durante ~2 h. Se filtraron los sólidos y se enjuagaron con heptanos (2 x 2 vol). Se secó el producto sólido al vacío a 30 °C para obtener h/-{3-[5-(2 -cloro-4-piri m id in i l)-2-( 1 , 1 -dimetiletil)- 1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida (28,8 g, 80 %).

Etapa D: /V-{3-[5-(2-am¡no-4-pirimid¡nil)-2-(1 , 1 -d i metí leti I) - 1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida En un reactor a presión de 1 gal, se calentó una mezcla de N-{3-[5-(2-cloro-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -d imeti leti I )- 1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida (120 g), preparado de acuerdo con la etapa C anterior, e hidróxido de amonio (28-30 %, 2,4 L, 20 vol.) en el reactor a presión sellado a 98-103 °C y se agitó a esta temperatura durante 2 horas. La reacción se enfrió lentamente a temperatura ambiente (20 °C) y se agitó durante la noche. Se filtraron los sólidos y se lavaron con una cantidad mínima del licor madre y se secaron al vacío. Se añadieron los sólidos a una mezcla de EtOAc (15 vol.)/ agua (2 vol.) y se calentó hasta la disolución completa a 60-70 °C y se retiró y desechó la capa acuosa. Se cargó la capa de EtOAC con agua (1 vol.) y se neutralizó con HCI ac. a ~pH 5, 4-5, 5 y se le añadió agua (1 vol.). Se retiró la capa acuosa y se desechó a 60-70 °C. Se lavó la capa orgánica con agua (1 vol.) a 60-70 °C y se retiró y se desechó la capa acuosa. Se filtró la capa orgánica a 60 °C y se concentró a 3 volúmenes. Se cargó EtOAc (6 vol.) en la mezcla y se calentó y se agitó a 72 °C durante 10 min , después se enfrió a 20 °C y se agitó durante la noche. Se retiró EtOAc mediante destilación al vacío para concentrar la mezcla de reacción a ~3 volúmenes. Se mantuvo la mezcla de reacción a ~65-70 °C durante ~30 min. Se cargaron cristales de producto que tenían la misma forma cristalina que los que se prepararon en el ejemplo 58b (y que se pueden preparar mediante el procedimiento del ejemplo 58b) anterior en suspensión de heptanos. Se añadió lentamente heptano (9 vol.) a 65-70 °C. Se agitó la suspensión a 65-70 °C durante 2-3 horas y se enfrió lentamente a 0-5 °C. Se filtró el producto, se lavó con EtOAc/heptano (3/1 v/v, 4 vol.) y se secó a 45 °C al vacío para obtener A/-{3-[5-(2-amino-4-pirim¡din¡l)-2-(1 , 1 -d imeti letil)- 1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida (102,3 g, 88 %).

Método 4: compuesto B (sal mesilato) - metanosulfonato de N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 ,1 -dimetiletil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluo rofen il}-2,6-difluorobencenosulfonam ida .

A una solución de A/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -dimetiletil)-1 , 3-t iazol-4-i l]-2-f I u o rofen i l}-2 , 6- difluorobencenosulfonamida (204 mg , 0,393 mmol) en isopropanol (2 mL), se le añadió ácido metanosulfónico (0, 131 mL, 0,393 mmol) y se dejó que la solución se agitara a temperatura ambiente durante 3 horas. Se formó un precipitado blanco, se filtró la suspensión y se enjuagó con éter dietílico para dar el producto del título como un sólido cristalino blanco (210 mg, 83 % de rendimiento). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-Ó6) d ppm 10,85 (s, 1 H) 7,92 - 8,05 (m, 1 H) 7,56 - 7,72 (m, 1 H) 6,91 - 7,50 (m, 7 H) 5,83 - 5,98 (m, 1 H) 2, 18 - 2,32 (m, 3 H) 1 ,36 (s, 9 H). MS (ESI): 520,0 [M+H]\ Método 5: compuesto B (modalidad de sal mesilato alternativa) metanosulfonato de /V-{3-[5-(2-am¡no-4-p¡r¡mid¡n¡l)-2-(1 , 1 -d imeti letil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida Se combinó /V-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 ,1 -dimetiletil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida (según se puede preparar de acuerdo con el ejemplo 58a) (2,37 g, 4,56 mmol) con acetonitrilo prefiltrado (5,25 vol. , 12,4 mL). Se añadió una solución prefiltrada de ácido mésico (1 , 1 eq., 5,02 mmol, 0,48 g) en H2O (0,75 eq., 1 ,78 mL) a 20 °C. La temperatura de la mezcla resultante se elevó a 50-60 °C mientras se mantenía una velocidad de agitación baja. Una vez que la temperatura de la mezcla alcanzó los 50-60 °C, se añadió una suspensión de semillas de metanosulfonato de /V-{3-[5-(2-amino-4-p¡rimidin¡l)-2-(1 , 1 -dimetiletil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6-difluorobencenosulfonamida (1 ,0 % p/p suspendido en 0,2 vol. de acetonitrilo prefiltrado) y se dejó reposar la mezcla con agitación a una velocidad lo suficientemente rápida como para evitar la sedimentación de los sólidos a 50-60 °C durante 2 h. Se enfrió la mezcla a 0-5 °C a 0,25 °C/min y se mantuvo a 0-5 °C durante 6 h. Se filtró la mezcla y se lavó la torta húmeda dos veces con acetonitrilo prefiltrado. El primer lavado consistió en 14,2 mi (6 vol.) acetonitrilo prefiltrado y el segundo lavado consistió en 9,5 mi (4 vol.) de acetonitrilo prefiltrado. El sólido húmedo se secó a 50 °C al vacío y produjo 2,39 g (85, 1 % de rendimiento) de producto.

Típicamente, las sales de la presente invención son sales farmaceuticamente aceptables. Las sales comprendidas dentro del término "sales farmacéuticamente aceptables" se refieren a sales no tóxicas de los compuestos de la presente invención. Las sales de los compuestos de la presente invención pueden comprender sales de adición de ácido derivadas de un nitrógeno sobre un sustituyente en un compuesto de la presente invención. Las sales representativas incluyen las siguientes: acetato, bencensulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicollilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidrobromuro, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, maleato de monopotasio, mucato, napsilato, nitrato, N-metilglucamina, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, potasio, salici lato , sodio, estearato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietioduro, trimetilamonio y valerato. Otras sales, que no son farmaceuticamente aceptables, pueden ser útiles para la preparación de los compuestos de la presente invención y forman otro aspecto de la invención. Las sales pueden ser preparadas fácilmente por un entendido en la téenica.

Aunque es posible que, para utilizar en terapia, los compuestos A y B se pueden administrar como el químico bruto, es posible presentar el ingrediente activo como una composición farmacéutica. En consecuencia, la invención proporciona además composiciones farmacéuticas, que incluyen un compuesto A y/o un compuesto B y/o Cetuximab y uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. Los compuestos A, B y Cetuximab son según se describió arriba. Los portadores, diluyentes o excipientes deben ser aceptables en el sentido de que sean compatibles con los otros ingredientes de la formulación, capaces de una formulación farmacéutica y no perjudiciales para el receptor de estos. De conformidad con otro aspecto de la invención, también se proporciona un proceso para la preparación de una composición farmacéutica que incluye mezclar un compuesto A y/o un compuesto B y/o Cetuximab con uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. Dichos elementos de las combinaciones farmacéuticas utilizadas se pueden presentar en combinaciones farmaceuticas separadas o se pueden formular juntos en una composición farmacéutica. En consecuencia, la invención además proporciona una combinación de com posiciones farmacéuticas una de las cuales incluye el compuesto A y uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables; y/o una composición farmacéutica que contiene el compuesto B y uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables; y/o una composición farmacéutica que contiene Cetuximab y uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

El compuesto B y/o el compuesto A y cetuximab se pueden utilizar en cualquiera de las combinaciones descritas en la presente. Erlotinib se puede sustituir por cetuximab en cualquiera de las combinaciones descritas en la presente.

Las composiciones farmacéuticas se pueden presentar en formas de dosis unitarias que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por dosis unitaria. Como lo saben los entendidos en la téenica, la cantidad de ingrediente activo por dosis dependerá de la afección que se esté tratando, la vía de administración y la edad , el peso y la afección del paciente. Las composiciones de dosificación unitaria que se prefieren son aquellas que contienen una dosis o una subdosis diaria, o una fracción adecuada de estas, de un ingrediente activo. Además, dichas composiciones farmacéuticas se pueden preparar a través de cualquiera de los métodos conocidos en la técnica farmacéutica.

Los compuestos A y B se pueden administrar a través de cualquier vía adecuada. Las vías adecuadas incluyen la vía oral, rectal, nasal, tópica (incluido bucal y sublingual), vaginal y parenteral (incluido subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal y epidural). Se apreciará que la vía preferida puede variar, por ejemplo, con la afección del receptor de la combinación y el cáncer que se vaya a tratar. También se apreciará que cada uno de los agentes administrados se puede administrar a través de la misma vía o por vías diferentes y que los compuestos A y B se pueden formular juntos o en composiciones farmacéuticas separadas. Cetuximab (Erbitux) se administra mediante inyección lenta en una vena.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración oral se pueden presentar como unidades separadas como cápsulas o comprimidos; polvos o granulos; soluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; espumas o cremas batidas comestibles; o emulsiones líquidas de aceite en agua o emulsiones líquidas de agua en aceite.

Por ejemplo, para la administración oral en forma de un comprimido o cápsula, se puede combinar el componente de fármaco activo con un portador inerte, oral, no tóxico y farmacéuticamente aceptable tal como etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos se preparan mediante la trituración del compuesto hasta un tamaño fino adecuado y la mezcla con un portador farmacéutico triturado de forma similar como un carbohidrato comestible, como, por ejemplo, almidón o manitol. También pueden estar presentes agentes saborizantes, conservantes, dispersantes y colorantes.

Las cápsulas se realizan mediante la preparación de una mezcla de polvo según se describió arriba y un revestimiento de gelatina formado de relleno. Se pueden añadir deslizantes y lubricantes como sílice coloidal, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilenglicol sólido a la mezcla de polvo antes de la operación de relleno. También se puede añadir un agente desintegrante o solubilizante como agar-agar, carbonato de calcio o carbonato de sodio para mejorar la disponibilidad del medicamento cuando se ingiere la cápsula.

Además, cuando se desee o sea necesario, también se pueden añadir aglutinantes, lubricantes, agentes desintegrantes y agentes colorantes adecuados para la granulación, la mezcla de polvo se puede pasar por la máquma de comprimidos y el resultado serán trozos de forma imperfecta que se quiebran y forman gránulos. Se pueden lubricar los gránulos e incorporar en la mezcla. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas como acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras y similares. Los lubricantes utilizados en estas formas de dosificación incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegradores incluyen, entre otros, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma xantana y similares. Los comprimidos se formulan, por ejemplo, mediante la preparación de una mezcla de polvo, granulación o precompresión, añadido de un lubricante y desintegrante y compresión para formar comprimidos. Se prepara una mezcla de polvo mediante la mezcla del compuesto, se tritura de forma adecuada, con un diluyente o base según se describió arriba y, opcionalmente, con un aglutinante como carboximetilcelulosa, un aliginato, gelatina o polivinilpirrolidona, un retardante de solución como parafina, un acelerador de resorción como una sal cuaternaria y/o un agente de absorción como bentonita, caolín o fosfato de dicalcio. La mezcla de polvo se puede granular mediante la humectación con un aglutinante como un jarabe, pasta de almidón, mucílago de acacia o soluciones de materiales celulósicos o poliméricos y forzado a través de una pantalla. Como alternativa, para evitar la unión a los troqueles que forman el comprimido mediante el añadido de ácido esteárico, una sal estearato, talco o aceite mineral. La mezcla lubricada se comprime en comprimidos. Los compuestos de la presente invención también se pueden combinar con un portador inerte que fluye libremente y comprimir en comprimidos directamente sin pasar por las etapas de granulación o precompresión. Se puede proporcionar un recubrimiento protector transparente u opaco que consiste en un recubrimiento de sello de shellac, un recubrimiento de azúcar o un material polimérico y un recubrimiento de esmalte de cera. Se pueden añadir tintes a estos recubrimientos para distinguir las diferentes dosificaciones unitarias.

Se pueden preparar fluidos orales como soluciones, jarabes y elíxires en forma de dosificación unitaria de modo que una determinada cantidad contenga una cantidad predeterminada del compuesto. Se pueden preparar los jarabes mediante la disolución del compuesto en una solución acuosa saborizada adecuadamente, mientras se preparan los elíxires mediante el uso de un vehículo alcohólico no tóxico. Se pueden form ular suspensiones mediante la dispersión del compuesto en un vehículo no tóxico. Tambien se pueden añadir solubilizantes y emulsionantes como alcoholes isostearílicos etoxilados y éteres de sorbitol de polioxietileno, conservantes, aditivos de sabor como aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina u otros edulcorantes artificiales y similares.

Cuando sea adecuado, se pueden microencapsular las composiciones para administración oral. La composición también se puede preparar para prolongar o sostener la liberación como por ejemplo mediante el recubrimiento o la inclusión del material particulado con polímeros, ceras o similares.

Los agentes para utilizar de acuerdo con la presente invención también se pueden administrar en forma de sistemas de administración de liposomas, tales como vesículas unilamelares pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas multilamelares. Los liposomas pueden formarse a partir de una variedad de fosfolípidos como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.

Los agentes para utilizar de acuerdo con la presente invención también se pueden administrar mediante el uso de anticuerpos monoclonales como portadores individuales a los cuales se unen las moléculas de compuesto. Los compuestos también se pueden acoplar con polímeros solubles como portadores de fármacos diana. Dichos polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamida-fenol, polihid roxietil-aspartamidefenol o polietilenóxidopolilisina sustituido con residuos de palmitoilo. Además, los compuestos se pueden acoplar a una clase de polímeros biodegradables útiles para lograr la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, poliepsilon caprolactona, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos y copolímeros de bloque anfipáticos o reticulados de hidrogeles.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración transdérmica se pueden presentar como parches discretos diseñados para permanecer en contacto con la epidermis del receptor durante un período prolongado. Por ejemplo, el ingrediente activo se puede suministrar desde el parche mediante iontoforesis como se describe, en general, en Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986).

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración tópica se pueden formular como ungüentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, pulverizadores, aerosoles o aceites.

Para los tratamientos del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo, la boca y la piel, las composiciones se aplican, preferentemente, como un ungüento tópico o crema. El ingrediente activo, cuando se form ula en un ungüento, puede emplearse con una base de ungüento parafínica o miscible en agua. De manera alternativa, el ingrediente activo puede formularse en una crema con una base cremosa de aceite en agua o una base de agua en aceite.

Las composiciones farmaceuticas adaptadas para la administración tópica al ojo incluyen gotas para los ojos en donde el ingrediente activo se disuelve o se suspende en un portador adecuado, especialmente un disolvente acuoso.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración tópica en la boca incluyen grageas, pastillas y enjuagues bucales.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración rectal se pueden presentar como supositorios o como enemas.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración nasal en donde el portador es un sólido incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula por ejemplo en el intervalo de entre 20 y 500 micrones, que se administra de la manera en la cual se realiza la inhalación, p. e j . , mediante inhalación rápida a través de las fosas nasales desde un recipiente con el polvo que se sostiene cerca de la nariz. Las composiciones adecuadas en donde el portador es un líquido para administración como un pulverizador nasal o como gotas nasales, incluyen soluciones acuosas o de aceite del ingrediente activo.

Las composiciones farmaceuticas adaptadas para administración por inhalación incluyen polvos de partículas finas o rocíos que se pueden generar por medio de diversos tipos de aerosoles presurizados de dosis medida, nebulizadores o insufladores.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o composiciones para pulverización.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración parenteral incluyen soluciones inyectables estériles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, soluciones amortiguadoras, bacteriostáticos y solutos que tornan la formulación isotónica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las composiciones se pueden presentar en recipientes de dosis unitaria o de dosis múltiple, por ejemplo ampollas selladas y recipientes, y se pueden almacenar en condiciones de liofilización que únicamente requieren la adición del portador líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones inyectables extemporáneas se pueden preparar a partir de polvos estériles, gránulos y comprimidos.

Se debe entender que además de los ingredientes mencionados anteriormente en particular, las composiciones pueden incluir otros agentes convencionales en la téenica que tienen en cuenta el tipo de formulación en cuestión, por ejemplo los adecuados para la administración oral pueden incluir agentes saborizantes.

El compuesto B y el compuesto A se pueden utilizar en combinación de acuerdo con la invención mediante la administración simultánea en una composición farmacéutica unitaria que incluye ambos compuestos. Alternativamente, la combinación se puede administrar por separado en composiciones farmacéuticas separadas, cada una de las cuales incluye uno de los compuestos A y B de forma secuencial en donde, por ejemplo, se administra primero el compuesto A o el compuesto B y el otro se administra en segundo lugar. Dicha administración secuencial puede ser próxima en el tiempo (p. ej . , simultánea) o lejana en el tiempo. Además, no importa si los compuestos se administran en la misma forma de dosificación, p. ej. se puede administrar un compuesto por vía tópica y se puede administrar el otro compuesto por vía oral. De forma adecuada, ambos compuestos se administran por vía oral.

Por lo tanto, en una modalidad, se administran una o más dosis del compuesto A simultáneamente o por separado con una o más dosis del compuesto B y una o más dosis de cetuximab (Erbitux).

En una modalidad, se administran una o más dosis del compuesto A simultáneamente o por separado con una o más dosis de cetuximab (Erbitux).

En una modalidad, se administran una o más dosis del compuesto B simultáneamente o por separado con una o más dosis de cetuximab (Erbitux).

En una modalidad, se administran múltiples dosis del compuesto A simultáneamente o por separado con múltiples dosis del compuesto B y múltiples dosis de cetuximab (Erbitux).

En una modalidad, se administran múltiples dosis del compuesto A simultáneamente o por separado con múltiples dosis de cetuximab (Erbitux).

En una modalidad, se administra una dosis del compuesto A simultáneamente o por separado con múltiples dosis del compuesto B y una dosis de cetuximab (Erbitux).

En una modalidad, se administran una o más dosis del compuesto A simultáneamente o por separado con una dosis de cetuximab (Erbitux).

En todas las modalidades anteriores, se puede administrar primero el compuesto A o se puede administrar primero el compuesto B, cuando está presente, o se puede administrar primero cetuximab (Erbitux).

Las combinaciones se pueden presentar como un kit de combinación. Con el termino “kit de combinación” o “kit de partes”, según se utilizan en la presente, se hace referencia a la composición o composiciones farmacéuticas que se utilizan para administrar el compuesto A, el compuesto B y cetuximab (Erbitux) de acuerdo con la invención. Cuando los compuestos A y B se administran simultáneamente, el kit de combinación puede contener el compuesto A y el compuesto B en una composición farmacéutica única o en composiciones farmacéuticas separadas, como un comprimido, y cetuximab (Erbitux) en un recipiente. Cuando los compuestos A y B no se administran simultáneamente, el kit de combinación contendrá el compuesto A, el compuesto B en composiciones farmacéuticas separadas y cetuximab (Erbitux), en donde el compuesto A y el compuesto B se encuentran en un único paquete o el compuesto A y el compuesto B se encuentran en composiciones farmacéuticas separadas en paquetes separados.

En un aspecto, se proporciona un kit de partes que comprende los siguientes componentes: el compuesto A asociado con diluyentes y portadores farmacéuticamente aceptables, el compuesto B, cuando está presente, asociado con diluyentes y portadores farmacéuticamente aceptables y cetuximab (Erbitux).

En una modalidad de la invención, el kit de partes comprende los siguientes componentes: el compuesto A asociado con diluyentes o portadores farmacéuticamente aceptables: el compuesto B, cuando está presente, asociado con diluyentes o portadores farmacéuticamente aceptables; y cetuximab (Erbitux), en donde los componentes se proporcionan de una forma que es adecuada para la administración secuencial, separada y/o simultánea.

En una modalidad, el kit de partes comprende: un primer recipiente que comprende el compuesto A asociado con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable; y, cuando está presente, un segundo recipiente que comprende el compuesto B asociado con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable; y un tercer recipiente que comprende cetuximab (Erbitux).

El kit de combinación también se puede proporcionar por instrucción, como instrucciones de dosificación y administración. Dichas instrucciones de dosificación y administración pueden ser del tipo que se proporciona a un médico, por ejemplo, en una etiqueta de producto fármaco, o pueden ser del tipo que proporciona un médico, como instrucciones a un paciente.

El término “dosis de carga”, según se utiliza en la presente, significa una dosis única o un régimen de duración corta del compuesto A o del compuesto B o cetuximab (Erbitux) que tiene una dosificación superior a la dosis de mantenimiento administrada al sujeto, por ejemplo, para aumentar rápidamente el nivel de concentración del fármaco en sangre. De forma adecuada, un régimen de duración corta para utilizar en la presente será de: 1 a 14 días; de forma adecuada, de 1 a 7 días; de forma adecuada, de 1 a 3 días; de forma adecuada, de tres días; de forma adecuada, de dos días; de forma adecuada, de un día. En algunas modalidades, la “dosis de carga” puede aumentar la concentración en sangre del fármaco a un nivel terapéuticamente eficaz. En algunas modalidades, la “dosis de carga” puede aumentar la concentración en sangre del fármaco a un nivel terapeuticamente eficaz en conjunto con una dosis de mantenimiento del fármaco. La “dosis de carga” se puede administrar una vez al día o más de una vez al día (p. ej . , hasta 4 veces al día). De forma adecuada, la “dosis de carga" se administrará una vez al día. De forma adecuada, la dosis de carga será una cantidad de 2 a 100 veces la dosis de mantenimiento; de forma adecuada, de 2 a 10 veces; de forma adecuada, de 2 a 5 veces; de forma adecuada, 2 veces; de forma adecuada, 3 veces; de forma adecuada, 4 veces; de forma adecuada, 5 veces. De forma adecuada, la dosis de carga se administrará durante entre 1 y 7 días; de forma adecuada, entre 1 y 5 días; de forma adecuada, entre 1 y 3 días; de forma adecuada, durante 1 día; de forma adecuada, durante 2 días; de forma adecuada, durante 3 días, seguido de un protocolo de dosificación de mantenimiento.

El término “dosis de mantenimiento”, según se utiliza en la presente, significa una dosis que se administra en serie (por ejemplo, al menos dos veces) y que tiene como fin aumentar lentamente los niveles de concentración en sangre del compuesto a un nivel terapéuticamente eficaz o mantener dicho nivel terapéuticamente eficaz. La dosis de mantenimiento se administra, generalmente, una vez al día y la dosis diaria de la dosis de mantenimiento es inferior a la dosis diaria total de la dosis de carga.

De forma adecuada, las combinaciones de la presente invención se administran dentro de un “período específico”.

El término “período específico” y sus derivados, según se utiliza en la presente, hace referencia al intervalo entre la administración del primer compuesto de la combinación y el último compuesto de la combinación. Por ejemplo, si el compuesto A se administra primero, el compuesto B segundo y cetuximab (Erbitux) tercero, el intervalo entre la administración del compuesto A y cetuximab (Erbitux) es el período específico. Cuando un componente de la invención se administra más de una vez al día, el período específico se calcula basándose en la primera administración de cada componente en un día específico. Las administraciones de un compuesto de la invención posteriores a la primera durante un día específico no se consideran cuando se calcula el período específico.

De forma adecuada, si el compuesto A, opcionalmente el compuesto B y cetuximab (Erbitux) se administran dentro de un “período específico” y no se administran de forma simultánea, se administran ambos en un plazo de aproximadamente 24 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 24 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 12 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 12 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 1 1 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 1 1 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 10 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 10 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 9 horas - en este caso, el período especifico será de aproximadamente 9 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 8 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 8 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 7 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 7 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 6 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 6 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 5 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 5 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 4 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 4 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 3 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 3 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 2 horas - en este caso, el período específico será de aproximadamente 2 horas; de forma adecuada, se administrarán en un plazo de aproximadamente 1 hora - en este caso, el período específico será de aproximadamente 1 hora y se considera administración simultánea.

De forma adecuada, cuando la combinación de la invención se administra durante un “período específico”, los compuestos se coadminístrarán durante “un período”.

El término “período” y sus derivados, cuando se utiliza en la presente con referencia al compuesto A y al compuesto B, significa que el compuesto A y, opcionalmente, el compuesto B se administran por una cantidad de días consecutivos indicada, seguido opcionalmente por una cantidad de días consecutivos en donde se administra solo uno de los compuestos componentes.

El término “período”, y sus derivados, cuando se utiliza en la presente con referencia al cetuximab (Erbitux) significa que cetuximab (Erbitux) se administra aproximadamente una vez por semana por una cantidad indicada de semanas consecutivas.

Con respecto a la administración en el “período específico”: de forma adecuada, el compuesto A, opcionalmente el compuesto B y cetuximab (Erbitux) se administrarán dentro de un período especifico durante al menos un día - en este caso, el período será de al menos un día; de forma adecuada, durante el transcurso del tratamiento, el compuesto A, opcionalmente el compuesto B y cetuximab (Erbitux) se administrarán dentro de un período específico durante al menos 3 días consecutivos - en este caso, el período será de al menos 3 días; de forma adecuada, durante el transcurso del tratamiento, el compuesto A, opcionalmente el compuesto B y cetuximab (Erbitux) se administrarán dentro de un período específico durante al menos 5 días consecutivos - en este caso, el período será de al menos 5 días; de forma adecuada, durante el transcurso del tratamiento, el compuesto A, opcionalmente el compuesto B y cetuximab (Erbitux) se administrarán dentro de un período específico durante al menos 7 días consecutivos - en este caso, el período será de al menos 7 días; de forma adecuada, durante el transcurso del tratamiento, el compuesto A, opcionalmente el compuesto B y cetuximab (Erbitux) se administrarán dentro de un período específico durante al menos 14 días consecutivos - en este caso, el período será de al menos 14 días; de forma adecuada, durante el transcurso del tratamiento, el compuesto A, opcionalmente el compuesto B y cetuximab (Erbitux) se administrarán dentro de un período específico durante al menos 30 días consecutivos - en este caso, el período será de al menos 30 días. En todos los períodos específicos anteriores, de forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra aproximadamente una vez por semana.

De forma adecuada, si los componentes no se administran durante un “período específico”, se administran de forma secuencial. El término “administración secuencial”, y sus derivados, según se utiliza en la presente, significa que el primer componente de la combinación del compuesto A, opcionalmente, el compuesto B o cetuximab (Erbitux) se administran durante uno o más días consecutivos, seguido de la administración del segundo componente de la com binación durante uno o más días consecutivos, seguido de la administración del último componente en la combinación durante uno o más días consecutivos. Además, se considera en la presente un descanso de fármaco que se utiliza entre la administración secuencial del compuesto A, opcionalmente, el compuesto B y cetuximab (Erbitux). Según se utiliza en la presente, un descanso de fármaco es un período de días después de la administración secuencial de uno o más del compuesto A, el compuesto B y cetuximab (Erbitux) y antes de la administración de otro componente de la invención. De forma adecuada, el descanso de fármaco será un período de días seleccionados de: 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 1 1 días, 12 días, 13 días y 14 días.

Con respecto a la administración secuencial: de forma adecuada, el compuesto B se administrará primero en la secuencia, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux). De forma adecuada, el compuesto B se administra durante entre 1 y 30 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 30 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas. De forma adecuada, el compuesto B se administra durante entre 1 y 21 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 21 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas. De forma adecuada, el compuesto B se administra durante entre 1 y 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas. De forma adecuada, el compuesto B se administra durante 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante 7 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas. De forma adecuada, el compuesto B se administra durante 7 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante 7 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas.

De forma adecuada, el compuesto A se administrará primero en la secuencia, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux). De forma adecuada, el compuesto A se administra durante entre 1 y 30 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 30 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas. De forma adecuada, el compuesto A se administra durante entre 1 y 21 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 21 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas. De forma adecuada, el compuesto A se administra durante entre 1 y 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas. De forma adecuada, el compuesto A se administra durante 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas. De forma adecuada, el compuesto A se administra durante 7 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante 7 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas.

De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administrará primero en la secuencia, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A. De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana durante 1 -10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 30 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 30 días consecutivos. De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana durante 1 -10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 21 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 21 días consecutivos. De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana durante 1 -10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 14 días consecutivos. De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana durante 1 -10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante 14 días consecutivos. De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana durante 1 -10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante 7 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante 7 días consecutivos.

De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administrará primero en la secuencia, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B. De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana durante 1 -10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 30 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 30 días consecutivos. De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana durante 1 -10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 21 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 21 días consecutivos. De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana durante 1 -10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 14 días consecutivos. De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana durante 1 -10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante 14 días consecutivos. De forma adecuada, cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana durante 1 -10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante 7 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante 7 días consecutivos.

De forma adecuada, el compuesto A se administrará primero en la secuencia, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux), seguido de la administración opcional del compuesto B. De forma adecuada, el compuesto A se administra durante entre 1 y 30 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 30 días consecutivos. De forma adecuada, el compuesto A se administra durante entre 1 y 21 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 21 días consecutivos. De forma adecuada, el compuesto A se administra durante entre 1 y 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante entre 1 y 14 días consecutivos. De forma adecuada, el compuesto A se administra durante 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante 14 días consecutivos. De forma adecuada, el compuesto A se administra durante 7 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración opcional del compuesto B durante 7 días consecutivos.

De forma adecuada, el compuesto B se administrará primero en la secuencia, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux), seguido de la administración del compuesto A. De forma adecuada, el compuesto B se administra durante entre 1 y 30 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 30 días consecutivos. De forma adecuada, el compuesto B se administra durante entre 1 y 21 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 21 días consecutivos. De forma adecuada, el compuesto B se administra durante entre 1 y 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante entre 1 y 14 días consecutivos. De forma adecuada, el compuesto B se administra durante 14 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante 14 días consecutivos. De forma adecuada, el compuesto B se administra durante 7 días consecutivos, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración de cetuximab (Erbitux) una vez por semana durante entre 1 y 10 semanas, seguido de un descanso de fármaco opcional, seguido de la administración del compuesto A durante 7 días consecutivos.

En los protocolos de administración de dosificación anteriores, se entiende que en una modalidad de la invención, el compuesto B se combina con cetuximab (Erbitux) y que los protocolos también se aplican a la combinación del compuesto B y cetuximab (Erbitux).

Se entiende que después de una administración durante un “período específico” y una administración “secuencial” se puede seguir con un protocolo de dosificación de repetición o un protocolo de dosificación alternativo y un descanso de fármaco puede preceder al protocolo de dosificación de repetición o al protocolo de dosificación alternativo.

De forma adecuada, la cantidad de compuesto A (basada en el peso de la cantidad sin sal/no solvatada) administrada como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención será una cantidad seleccionada de entre aproximadamente 0, 125 mg y aproximadamente 10 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 0,25 mg y aproximadamente 9 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 0,25 mg y aproximadamente 8 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 0,5 mg y aproximadamente 8 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 0,5 mg y aproximadamente 7 mg ; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 7 mg; de forma adecuada, la cantidad será aproximadamente 5 mg . En consecuencia, la cantidad de compuesto A administrada como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención será una cantidad seleccionada de entre aproximadamente 0, 125 mg y aproximadamente 10 mg. Por ejemplo, la cantidad de compuesto A administrada como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención puede ser 0, 125 mg, 0,25 mg, 0,5 mg, 0,75 mg, 1 mg, 1 ,5 mg, 2 mg, 2,5 mg, 3 mg, 3,5 mg, 4 mg, 4,5 mg, 5 mg, 5,5 mg, 6 mg, 6,5 mg, 7 mg, 7,5 mg, 8 mg, 8,5 mg, 9 mg, 9,5 mg, 10 mg.

De forma adecuada, la cantidad seleccionada de compuesto A se administra entre 1 y 4 veces al día. De forma adecuada, la cantidad seleccionada de compuesto A se administra dos veces al día. De forma adecuada, la cantidad seleccionada de compuesto A se administra una vez al día. De forma adecuada, la administración del compuesto A comenzará como una dosis de carga. De forma adecuada, la dosis de carga será una cantidad de 2 a 100 veces la dosis de mantenimiento; de forma adecuada, de 2 a 10 veces; de forma adecuada, de 2 a 5 veces; de forma adecuada, 2 veces; de forma adecuada, 3 veces; de forma adecuada, 4 veces; de forma adecuada, 5 veces. De forma adecuada, la dosis de carga se administrará durante entre 1 y 7 días; de forma adecuada, entre 1 y 5 días; de forma adecuada, entre 1 y 3 días; de forma adecuada, durante 1 día; de forma adecuada, durante 2 días; de forma adecuada, durante 3 días, seguido de un protocolo de dosificación de mantenimiento.

De forma adecuada, la cantidad de compuesto B (basada en el peso de la cantidad sin sal/no solvatada) administrada como parte de la com binación de acuerdo con la presente invención será una cantidad seleccionada de entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 600 mg. De forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 30 mg y aproximadamente 300 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 30 mg y aproximadamente 280 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 40 mg y aproximadamente 260 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 60 mg y aproximadamente 240 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 80 mg y aproximadamente 220 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 90 mg y aproximadamente 210 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 100 mg y aproximadamente 200 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 1 10 mg y aproximadamente 190 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 120 mg y aproximadamente 180 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 130 mg y aproximadamente 170 mg; de forma adecuada, la cantidad se seleccionará de entre aproximadamente 140 mg y aproximadamente 160 mg; de forma adecuada, la cantidad será 150 mg. En consecuencia, la cantidad de compuesto B administrada como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención será una cantidad seleccionada de entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 300 mg. Por ejemplo, la cantidad de compuesto B administrada como parte de la combinación de acuerdo con la presente invención se selecciona, de forma adecuada, de 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 85 mg, 90 mg, 95 mg, 100 mg, 105 mg, 1 10 mg, 1 15 mg, 120 mg, 125 mg, 130 mg, 135 mg, 140 mg, 145 mg, 150 mg, 155 mg, 160 mg, 165 mg, 170 mg, 175 mg, 180 mg, 185 mg , 190 mg, 195 mg, 200 mg, 205 mg, 210 mg , 215 mg, 220 mg, 225 mg, 230 mg, 235 mg, 240 mg, 245 mg, 250 mg, 255 mg, 260 mg, 265 mg, 270 mg, 275 mg, 280 mg, 285 mg, 290 mg, 295 mg y 300 mg. De forma adecuada, la cantidad seleccionada de compuesto B se administra entre 1 y 4 veces al día. De forma adecuada, la cantidad seleccionada de compuesto B se administra dos veces al día. De forma adecuada, la cantidad seleccionada de compuesto B se administra una vez al día.

De forma adecuada, la administración del compuesto B comenzará como una dosis de carga. De forma adecuada, la dosis de carga será una cantidad de 2 a 100 veces la dosis de mantenimiento; de forma adecuada, de 2 a 10 veces; de forma adecuada, de 2 a 5 veces; de forma adecuada, 2 veces; de forma adecuada, 3 veces; de forma adecuada, 4 veces; de forma adecuada, 5 veces. De forma adecuada, la dosis de carga se administrará durante entre 1 y 7 días; de forma adecuada, entre 1 y 5 días; de forma adecuada, entre 1 y 3 días; de forma adecuada, durante 1 día; de forma adecuada, durante 2 días; de forma adecuada, durante 3 días, seguido de un protocolo de dosificación de mantenimiento.

Cetuximab (Erbitux) se administra en una cantidad de dosificación de entre 50 mg/m2/semana y aproximadamente 700 mg/m2/semana; de forma adecuada, entre 100 mg/m2/semana y aproximadamente 600 mg/m2/semana; de forma adecuada, entre 200 mg/m2/semana y aproximadamente 500 mg/m2/semana.

En una modalidad, Cetuximab (Erbitux) se administra una vez por semana con una administración inicial de una cantidad de entre 400mg/m2/semana y aproximadamente 500 mg/m2/semana y cada administración posterior es de una cantidad de entre 200mg/m2/semana y 300 mg/m2/semana.

Una modalidad de la presente invención proporciona una combinación del compuesto A, administrada una vez al día; opcionalmente, el compuesto B, administrada una o dos veces al día; y Cetuximab administrada de acuerdo con el protocolo mencionado anteriormente, durante un período de al menos 8 semanas, de forma adecuada, durante un período de al menos 4 semanas, de forma adecuada, durante un período de al menos 2 semanas, de forma adecuada, durante un período de al menos 10 días, de forma adecuada, durante un período de al menos 7 días, de forma adecuada, los tres compuestos se administran el primer día de cada período de 7 días y el compuesto A se administra diariamente y, opcionalmente, el compuesto B se administra una o dos veces al día.

Según se emplean en la presente, todas las cantidades especificadas para el compuesto A y el compuesto B se indican como la cantidad de compuesto libre o compuesto sin sal.

MÉTODO DE TRATAMIENTO Las combinaciones de la invención tienen utilidad en los trastornos en donde la inhibición de MEK y/o B-Raf y/o EGFR es beneficiosa.

La presente invención tambien proporciona una combinación de la invención para utilizar en terapia, particularmente en el tratamiento de trastornos en donde la inhibición de MEK y/o B-Raf y/o EGFR es beneficiosa, particularmente el cáncer.

Otro aspecto de la invención proporciona un método de tratamiento de un trastorno en donde la inhibición de MEK y/o B-Raf y/o EGFR es beneficiosa, que comprende la administración de una combinación de la invención.

Otro aspecto de la presente invención proporciona el uso de una combinación de la invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno en donde la inhibición de MEK y/o B-Raf y/o EGFR es beneficiosa.

Típicamente, el trastorno es un cáncer tal que la inhibición de MEK y/o B-Raf y/o EGFR tenga un efecto beneficioso. Algunos ejemplos de cánceres que son adecuados para el tratamiento con una combinación de la invención incluyen, entre otros, las formas primarias y metastásicas del cáncer de cuello y cabeza, de mama, de pulmón, de colon, de ovario y de próstata. De forma adecuada, el cáncer se selecciona de: cáncer de cerebro (gliomas), glioblastomas, astrocitomas, glioblastoma multiforme, síndrome de Bannayan-Zonana, enfermedad de Cowden, enfermedad de Lhermitte-Duclos, de mama, cáncer de mama inflamatorio, tumor de Wilm, sarcoma de Ewing, rabdomiosarcoma, ependimoma, meduloblastoma, de colon, de cabeza y cuello, de riñón, de pulmón, de hígado, melanoma, de ovario, de páncreas, de próstata, sarcoma, osteosarcoma, tumor de células gigantes del hueso, de tiroides, leucemia linfoblástica de células T, leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia de células pilosas, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielógena aguda, AML, leucemia neutrofílica crónica, leucemia de células T linfoblástica aguda, plasma ci to a, leucemia de células grandes inmunoblástica, leucemia de células del manto, leucemia mega cari oblástica de mieloma múltiple, mieloma múltiple, leucemia megacariocítica aguda, leucemia promielocítica, eritroleucemia, linfoma maligno, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma linfoblástico de células T, linfoma de Burkitt, linfoma folicular, neuroblastoma, cáncer de vejiga, cáncer urotelial, cáncer de pulmón, cáncer de vulva, cáncer de cuello uterino, cáncer endometrial, cáncer de riñón, mesotelioma, cáncer de esófago, cáncer de glándulas salivales, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer de nasofaringe, cáncer bucal, cáncer de la boca, G IST (tumor estromal gastromtestinal) y cáncer de testículos.

Además, algunos ejemplos de cánceres que se tratarán incluyen el adenocarcinoma de Barret; carcinomas del tracto biliar; cáncer de mama; cáncer de cuello uterino; colangiocarcinoma; tumores del sistema nervioso central incluido tumores del SNC primarios como glioblastomas, astrocitomas (p. ej . , glioblastoma multiforme) y ependimomas y tumores del SNC secundarios (es decir, metástasis en el sistema nervioso central de tumores originados fuera del sistema nervioso central); cáncer colorrectal incluido carcinoma de colon del intestino grueso; cáncer gástrico; carcinoma de cabeza y cuello incluido carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello; cánceres hematológicos incluido leucemias y linfomas como la leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielógena aguda (AM L), síndromes mielodisplásicos, leucemia mielógena crónica, linfoma Hodgkin, linfoma no Hodgkin, leucemia megacarioblástica, mieloma múltiple y eritroleucemia; carcinoma hepatocelular; cáncer de pulmón incluido cáncer de pulmón de células pequeñas y cáncer de pulmón no microcítico; cáncer de ovario; cáncer endometrial; cáncer de páncreas; adenoma pituitario; cáncer de próstata; cáncer renal; sarcoma; cánceres de piel incluido melanomas; y cánceres de tiroides.

De forma adecuada, la presente invención se refiere a un método para tratar o disminuir la gravedad de un cáncer seleccionado de: cáncer de cerebro (gliomas), glioblastomas, astrocitomas, glioblastoma multiforme, síndrome de Bannayan-Zonana, enfermedad de Cowden, enfermedad de Lhermitte-Duclos, de mama, de colon, de cabeza y cuello, de riñón, de pulmón, de hígado, melanoma, de ovario, de páncreas, de próstata, sarcoma y de tiroides.

De forma adecuada, la presente invención se refiere a un método para tratar o disminuir la gravedad de un cáncer seleccionado de cáncer de ovario, de mama, de páncreas y de próstata.

De forma adecuada, la presente invención se refiere a un método para tratar o disminuir la gravedad de síndromes precancerosos en un mam ífero, incluido un ser humano, en donde el síndrome precanceroso se selecciona de: neoplasia intraepitelial cervical, gammapatía monoclonal de significado incierto (MGUS), síndrome mielodisplásico, anemia aplásica, lesiones de cuello uterino, nevos de piel (premelanoma), neoplasia intraepitelial prostática (intraductal) (PIN), carcinoma ductal in situ (DCIS), pólipos de colon y hepatitis o cirrosis grave.

De forma adecuada, la presente invención se refiere a un método para tratar o disminuir la gravedad de un cáncer que es de tipo salvaje o muíante para Raf y KRAS y de tipo salvaje o muíante para PI3K/Pten. Esto incluye pacientes de tipo salvaje para Raf, KRAS y PI3K/PTEN , m utantes para Raf, KRAS y PI3K/PTEN , mutantes para Raf y de tipo salvaje para KRAS y PI3K/PTEN y de tipo salvaje para Raf y KRAS y mutantes para PI3K/PTEN .

Se sabe que el compuesto B presenta un efecto antitumoral sobre los cánceres que contienen una mutación BRAF, combinaciones del compuesto B y cetuximab; y combinaciones del compuesto A (M EKi), el compuesto B y cetuximab son adecuadas para el tratamiento de cánceres que contienen una mutación B-Raf. El compuesto B es menos eficaz para tratar cánceres sin una mutación BRAF y las combinaciones del compuesto A y cetuximab son adecuadas para el tratar de cánceres con y sin una mutación BRAF.

Se espera que las combinaciones del compuesto A y cetuximab y que las combinaciones del compuesto B y cetuximab presenten menos toxicidad que las combinaciones de: compuesto A, compuesto B y cetuximab. Las combinaciones del compuesto A y cetuximab y que las combinaciones del compuesto B y cetuximab son, además, combinaciones adecuadas de la invención.

El termino “de tipo salvaje”, según se entiende en la téenica, se refiere a una secuencia de polinucleótidos o polipéptidos que se produce en una población nativa sin modificación genética. Según se entiende en la técnica, un "mutante" incluye una secuencia de polinucleótidos o polipéptidos que tiene al menos una modificación a un aminoácido o ácido nucleico correspondiente al aminoácido o ácido nucleico que se encuentra en un polipéptido o polinucleótido de tipo salvaje, respectivamente. Incluido en el término mutante se encuentra el polimorfismo de nucleótido único (SNP) en donde existe una sola distinción de par de bases en la secuencia de una cadena de ácido nucleico en comparación con la cadena de ácido nucleico que se encuentra de forma más predominante (de tipo salvaje).

Los cánceres que son de tipo salvaje o mutantes para Raf, de tipo salvaje o mutantes para PI3K/Pten y de tipo salvaje o mutantes se identifican mediante métodos conocidos.

Por ejemplo, se pueden identificar células tumorales Raf o PI3K/PTEN de tipo salvaje o mutantes mediante técnicas de amplificación de ADN y secuenciamiento, teenicas de detección de ADN y ARN , incluido, entre otros, análisis de transferencia Northern y Southern, respectivamente, y/o diversas tecnologías de biochip y de matriz. Se pueden detectar polipéptidos de tipo salvaje y mutantes a través de diversas técnicas incluidas, entre otras, técnicas de inmunodiagnóstico como ELISA, análisis de transferencia Western o inmunocitoquímica. De forma adecuada, se pueden utilizar polimerización activada por pirofosfoorólisis (PAP) y/o métodos de PCR. Liu, Q et al; Human Mutation 23:426-436 (2004).

Las combinaciones de la invención se pueden utilizar solas o en combinación con uno o más agentes terapéuticos diferentes. Por lo tanto, la invención proporciona, en otro aspecto, una combinación adicional que comprende una combinación de la invención con otro agente o agentes terapéuticos, composiciones y medicamentos que comprenden la combinación y el uso de la combinación adicional, composiciones y medicamentos en una terapia, en particular en el tratamiento de enfermedades susceptibles a la inhibición de MEK y/o la cinasa B y/o EGFR.

En una modalidad , se puede utilizar una combinación de la invención con otros métodos terapéuticos de tratamiento del cáncer. En particular, en la terapia antineoplásica, la terapia de combinación con otros agentes quimioterapéuticos, hormonales, de anticuerpos, así como tratamientos quirúrgicos y/o de radiación diferentes a los mencionados anteriormente también se prevé. Por lo tanto, las terapias de combinación de acuerdo con la presente invención incluyen la administración del compuesto B; y/o el compuesto A y cetuximab, así como el uso opcional de otros agentes terapeuticos incluido otros agentes antineoplásicos. Dicha combinación de agentes se puede administrar junta o por separado y, cuando se administra por separado, esto puede ocurrir de forma simultánea o secuencial en cualquier orden y de forma cercana o remota en el tiempo. En una modalidad, la combinación farmacéutica incluye el compuesto A, el compuesto B y Cetuximab y, opcionalmente, al menos un agente antineoplásico adicional. En una modalidad, la combinación farmacéutica incluye el compuesto A y cetuximab y, opcionalmente, al menos un agente antineoplásico adicional.

En una modalidad, la terapia contra el cáncer adicional es quirúrgica y/o radioterapia.

En una modalidad, la terapia contra el cáncer adicional es al menos un agente antineoplásico adicional.

Cualquier agente antineoplásico que tenga actividad contra un tumor susceptible de ser tratado se puede utilizar en la combinación. Los agentes antineoplásicos típicos útiles incluyen, entre otros, agentes antimicrotúbulos como diterpenoides y vinca alcaloides; complejos coordinadores de platino; agentes alquilantes como mostazas de nitrógeno, oxazafosforinas, alquilsulfonatos, nitrosoureas y triazenos; agentes antibióticos como antracielinas, actinomicinas y bleomicinas; inhibidores de la topoisomerasa II como epipodofilotoxinas; antimetabolitos como análogos de pirimidina y purina y compuestos antifolato; inhibidores de la topoisomerasa I como camptotecinas; hormonas y análogos hormonales; inhibidores de la vía de transducción de señales; inhibidores de la angiogénesis de tirosina no receptora; agentes inmunoterapéuticos; agentes proapoptóticos, e inhibidores de la señalización del ciclo celular.

Agentes antimicrotúbulo o antimitóticos: los agentes antimicrotúbulos o antimitóticos son agentes específicos de fase activos contra los microtúbulos de las células tumorales durante M o la fase de la mitosis del ciclo celular. Algunos ejemplos de agentes antimicrotúbulos incluyen, entre otros, diterpenoides y vinca alcaloides.

Los diterpenoides, que se derivan de fuentes naturales, son agentes contra el cáncer específicos de fase que funcionan en las fases G2/M del ciclo celular. Se cree que los diterpenoides estabilizan la subunidad de b-tubulina de los microtúbulos, mediante la unión con esta proteína. El desensamblaje de la proteína parece ser inhibido con la detención de la mitosis y la muerte celular a continuación. Algunos ejemplos de diterpenoides incluyen, entre otros, paclitaxel y su análogo docetaxel.

Paclitaxel, 5b,20-broc?-1 ,2a,4,7b, 10 b, 13a-hexa-hidroxitax-1 1 -en-9-ona 4,10-diacetato 2-benzoato 13-éster con (2R,3S)-N-benzoil-3-fenilisoserina; es un producto de diterpeno natural aislado del tejo del Pacífico Taxus brevifolia y se comercializa como una solución inyectable TAXOL®. Es un miembro de la familia taxano de terpenos. Paclitaxel ha sido aprobado para uso clínico en el tratamiento del cáncer de ovario refractario en Estados Unidos (Markman et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991 ; McGuire et al. , Ann . Intem , Med. , 1 1 1 :273, 1989) y para el tratamiento del cáncer de mama (Holmes et al. , J . Nat. Cáncer I n st. , 83: 1797, 1991 ). Es un candidato potencial para el tratamiento de los neoplasmas en la piel (Einzig et. al. , Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. , 20:46) y los carcinomas de cabeza y cuello (Forastire et. al. , Sem . Oncol. , 20:56, 1990). El compuesto también muestra potencial para el tratamiento de la enfermedad renal poliquística (Woo et. al., Nature, 368:750. 1994), el cáncer de pulmón y la malaria. El tratamiento de los pacientes con paclitaxel produce la supresión de la médula ósea (múltiples linajes celulares, Ignoff, R.J. et. al, Cáncer Chemotherapy Pocket Guide, 1998) relacionada con la duración de la dosificación por encima de una concentración umbral (50 nM) (Kearns, C.M . et. al. , Seminars in Oncology , 3(6) p.16-23, 1995).

Docetaxel, (2R,3S)- N-carboxi-3-fen¡lisoserina,N-ferc-butil éster, 13-éster con 5b-20-broc?-1 ,2a, 4, 7b, 10b, 13a-hexahidroxitax-1 1 -en-9-ona 4-acetato 2-benzoato, trihidrato; se comercializa como una solución inyectable como TAXOTERE®. Docetaxel está indicado para el tratamiento del cáncer de mama. El Docetaxel es un derivado semisintético del paclitaxel q. v. , que se prepara utilizando un precursor natural, 10-deacetil-bacatina III, extraído de la espina del tejo europeo.

Los vinca alcaloides son agentes antineoplásicos específicos de fase derivados de la planta vincapervinca. Los vinca alcaloides actúan en la fase M (mitosis) del ciclo celular mediante la unión específica a la tubulina. En consecuencia, la molecula de tubulina unida no puede polimerizar en los microtúbulos. Se cree que la mitosis es detenida en la metafase con la posterior muerte celular. Algunos ejemplos de vinca alcaloides incluyen, entre otros, vinblastina, vincristina y vinorelbina.

La vinblastina, la vincaleucoblastina sulfato, se comercializa como VELBAN® como una solución inyectable. Aunque es posible que se indique como una terapia de segunda línea de diversos tumores sólidos, se indica principalmente en el tratamiento del cáncer testicular y de diversos linfomas incluida la enfermedad de Hodgkin; y los linfomas linfocíticos e histiocíticos. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis de la vinblastina.

La vincristina, vincaleucoblastina, 22-oxo-, sulfato, se comercializa como ONCOVIN® como una solución inyectable. La vincristina se indica para el tratamiento de las leucemias agudas y también ha resultado útil en los regímenes de tratamiento de los linfomas malignos de Hodgkin y no Hodgkin. La alopecia y los efectos neurológicos son los efectos secundarios más comunes de la vincristina y, en menor medida, se producen efectos de mielosupresión y mucositis gastromtestinal.

La vinorelbina, 3’,4’-didehidro -4’-deoxi-C'-norvincaleucoblastina [R-(R*,R*)-2,3-dihidroxibutanodioato (1 :2) (sal)], disponible a nivel comercial como una solución inyectable de tartrato de vinorelbina (NAVELBINE®), es un vinca alcaloide semisintético. La vinorelbina se indica como un agente único o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos, como cisplatina, en el tratamiento de diversos tumores sólidos, particularmente cánceres de pulmón no microcítico, de mama avanzado y de próstata refractario hormonal. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis más común de la vinorelbina.

Complejos de coordinación de platino: los complejos de coordinación de platino son agentes contra el cáncer no específicos de fase, que son interactivos con el ADN . Los complejos de platino ingresan en las células tumorales, sufren acuación y forman reticulaciones intra- e intercadena con el ADN que produce efectos biológicos adversos al tumor. Algunos ejemplos de complejos de coordinación de platino incluyen, entre otros, oxaliplatino, cisplatino y carboplatino.

El cisplatino, cis-diaminadicloroplatino, se comercializa como PLATINOL® como una solución inyectable. El cisplatino está indicado principalmente para el tratamiento del cáncer testicular y de ovario metastásico y para el cáncer de vejiga avanzado.

El carboplatino, platino, diamina [1 , 1 -ciclobutano-dicarboxilato(2-)-0,0’], se comercializa como PARAPLATIN® como una solución inyectable. El carboplatino está indicado principalmente en el tratamiento de primera y segunda línea del carcinoma de ovario avanzado.

Agentes alquilantes: los agentes alquilantes son agentes contra el cáncer no específicos de fase y electrófilos fuertes. Típicamente, los agentes alquilantes forman enlaces covalentes, mediante alquilación, con al ADN mediante restos nucleofílicos de la molécula de ADN como grupos fosfato, amino, sulfhidrilo, hidroxilo, carboxilo e imidazol. Dicha alquilación interrumpe la función del ácido nucleico y produce la muerte celular. Algunos ejemplos de agentes alquilantes incluyen, entre otros, mostazas de nitrógeno como ciclofosfamida, melfalán y clorambucilo; alquil sulfonatos como busulfán; nitrosoureas como carmustina; y triazenos como dacarbazina.

La ciclofosfamida, 2-[bis(2-clo roetil)amino] tetra hidro-2H-1 , 3,2-oxazafosforina 2-óxido monohidrato, se comercializa como una solución inyectable o en comprimidos como CYTOXAN®. La ciclofosfamida se indica como un agente único o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos, en el tratamiento de los linfomas malignos, mieloma múltiple y leucemias.

El melfalán, 4-[bis(2-cloroetil)amino]-L-fenilalanina, se comercializa como una solución inyectable o en comprimidos como ALKERAN®. El melfalán se indica para el tratamiento paliativo del mieloma múltiple y el carcinoma epitelial de ovario que no se puede extraer. La supresión de la médula ósea es el efecto secundario limitante de la dosis más común del melfalán.

El clorambucilo, ácido 4-[bis(2-cloroetil)amino]benceno-butanoico, se comercializa como LEUKERAN® comprimidos. El clorambucilo se indica para el tratamiento paliativo de la leucemia linfática crónica y los linfomas malignos como el linfosarcoma, linfoma folicular gigante y la enfermedad de Hodgkin.

El busulfán, 1 ,4-butanodiol dimetanosulfonato, se comercializa como MYLERAN® comprimidos. El busulfán se indica para el tratamiento paliativo de la leucemia mielógena crónica.

La carmustina, 1 ,3-[bis(2-cloroetil)-1 -nitrosourea, se comercializa como viales únicos de material liofilizado como BiCNU®. La carmustina se indica para el tratamiento paliativo como un agente único o en combinación con otros agentes para los tumores cerebrales, mieloma múltiple, enfermedad de Hodgkin y linfomas no Hodgkin.

La dacarbazina, 5-(3,3-dimetil-1 -triazeno)-imidazol-4-carboxamida, se comercializa como viales únicos de material como DTIC-Dome®. La dacarbazina se indica para el tratamiento del melanoma metastásico maligno y en combinación con otros agentes para el tratamiento de segunda línea de la enfermedad de Hodgkin.

Antineoplásicos antibióticos: los antineoplásicos antibióticos son agentes no específicos de fase, que se unen o se intercalan con el ADN. Típicamente, dicha acción produce complejos de ADN estables o ruptura de la cadena, que interrumpe la función normal de los ácidos nucleicos que producen la muerte celular. Algunos ejemplos de agentes antineoplásicos antibióticos incluyen, entre otros, actinomicinas como dactinomicina, antrocielinas como daunorrubicina y doxorrubicina; y bleomicinas.

La dactinomicina, tambien denominada actinomicina D, se comercializa en forma inyectable como COSMEGEN®. La dactinomicina se indica para el tratamiento del tumor de Wilm y el rabd omi osarcoma.

La daunorrubicina, (8S-cis-)-8-acetil-10-[(3-amino-2,3,6-trideoxi-a-L-lixo-hexopiranosil)oxi]-7,8,9, 10-tetrahidro-6,8, 11 -trihidroxi-1 -metoxi-5, 12 naftacenodiona clorhidrato, se comercializa en forma de inyectable liposomal como DAUNOXOME® o como un inyectable como CERUBIDINE®. La daunorrubicina se indica para la inducción de la remisión en el tratamiento de la leucemia no linfocítica aguda y el sarcoma de Kaposi asociado con el V1H avanzado.

La doxorrubicina, (8S, 10S)-10-[(3-amino-2,3,6-trideoxi-a-L-lixo-hexopiranosil)oxi]-8-glicoloil, 7,8,9, 10-tetrahidro-6,8, 1 1 -trihidroxi-1 -metoxi-5, 12 naftacenodiona clorhidrato, se comercializa en forma inyectable como RUBEX® o ADRIAMYCIN RDF®. La doxorrubicina se indica principalmente para el tratamiento de la leucemia linfoblástica aguda y la leucemia mieloblástica aguda, pero tambien es un componente útil en el tratamiento de algunos tumores sólidos y linfomas.

La bleomicina, una mezcla de antibióticos glicopeptídicos citotóxicos aislados de una cepa de Streptomyces verticillus, se comercializa como BLENOXANE®. La bleomicina se indica como un tratamiento paliativo, como un agente único o en combinación con otros agentes, del carcinoma de células escamosas, linfomas y carcinomas de testículos.

Inhibidores de la topoisomerasa II : los inhibidores de la topoisomerasa I I incluyen, entre otros, epipodofilotoxinas.

Las epipodofilotoxinas son agentes antineoplásicos específicos de fase derivados de la planta mandrágora. Las epipodofilotoxinas afectan, típicamente, las células en las fases S y G2 del ciclo celular mediante la formación de un complejo ternario con la topoisomerasa II y ADN que provoca rupturas de la cadena de ADN. Las rupturas de la cadena se acumulan y se produce la muerte celular. Algunos ejemplos de epipodofilotoxinas incluyen, entre otros, etopósido y tenipósido.

El etopósido, 4’-demetil-epipodofilotoxina 9[4,6-0-(R )-etilideno-p-D-glucopiranosida], se comercializa como una solución inyectable o cápsulas como VePESID® y se conoce comúnmente como VP-16. El etopósido se indica como un agente único o en combinación con otros agentes de quimioterapia, en el tratamiento de cánceres testicular y de pulmón no microcítico.

El tenipósido, 4’-demetil-epipodofilotoxina 9[4,6-0-(R )-tenilideno-p-D-glucopiranosida], se comercializa como una solución inyectable como VUMON® y se conoce comúnmente como VM-26. El tenipósido se indica como un agente único o en combinación con otros agentes de quimioterapia, en el tratamiento de la leucemia aguda en niños.

Agentes neoplásicos antimetabolitos: los agentes neoplásicos antimetabolitos son agentes antineoplásicos específicos de fase que actúan en la fase S (síntesis de ADN) del ciclo celular mediante la inhibición de la síntesis de ADN o mediante la inhibición de la síntesis de base de purina o pirimidina y que limita así la síntesis de ADN. En consecuencia, la fase S no avanza y se produce la muerte celular. Algunos ejemplos de agentes antineoplásicos antimetabolitos incluyen, entre otros, fluorouracilo, metotrexato, citarabina, mecaptopurina, tioguanina y gemcitabina.

El 5-fluorouracilo, 5-fluoro-2,4- (1 H ,3H) pirimidinadiona, se comercializa como fluorouracilo. La administración de 5-fluorouracilo produce la inhibición de la síntesis de ti m i d i lato y tambien se incorpora en el ARN y el ADN . El resultado, típicamente, es la muerte celular. El 5-fluorouracilo se indica como un agente único o en combinación con otros agentes de quimioterapia, en el tratamiento de carcinomas de mama, de colon, de recto, de estómago y de páncreas. Otros análogos de fluoropirimidina incluyen el 5-fluoro desoxiuridina (floxuridina) y el 5-fluorodesoxiuridina monofosfato.

La citarabina, 4-amino-1 - -D-arabinofuranosil-2 (1 H)-pirimidinona, se comercializa como CYTOSAR-U® y se conoce como Ara-C. Se cree que la citarabina presenta especificidad de fase celular en la fase S mediante la inhibición del alargamiento de la cadena de ADN a través de la incorporación terminal de citarabina en la cadena de ADN creciente. La citarabina se indica como un agente único o en combinación con otros agentes de quimioterapia, en el tratamiento de la leucemia aguda. Otros análogos de citidina incluyen 5-azacitidina y 2’,2’-difluorodesoxicitidina (gemcitabina).

La mercaptopurina, 1 ,7-dihidro-6H-purina-6-tiona monohidrato, se comercializa como PURINETHOL®. La mercaptopurina presenta especificidad de fase celular en la fase S mediante la inhibición de la síntesis de ADN a través de un mecanismo aún no especificado. La mercaptopurina se indica como un agente único o en combinación con otros agentes de quimioterapia, en el tratamiento de la leucemia aguda. Un análogo de la mercaptopurina útil es la azatioprina.

La tioguanina, 2-amino-1 ,7-dihidro-6H-purina-6-tiona, se comercializa como TABLOID®. La tioguanina presenta especificidad de fase celular en la fase S mediante la inhibición de la síntesis de ADN a través de un mecanismo aún no especificado. La tioguanina se indica como un agente único o en combinación con otros agentes de quimioterapia, en el tratamiento de la leucemia aguda. Otros análogos de purina incluyen la pentostatina, eritrohidroxinoniladenina, fosfato de fludarabina y cladribina.

La gemcitabina, 2’-desoxi-2’, 2’-difluorocitidina monoclorhidrato (b-isómero), se comercializa como GEMZAR®. La gemcitabina presenta especificidad de fase celular en la fase S y mediante el bloqueo del avance de las células a través de los límites G1 /S. La gemcitabina se indica en combinación con la cisplatina en el tratamiento del cáncer de pulmón no microcítico localmente avanzado y sola en el tratamiento del cáncer de páncreas localmente avanzado.

El metotrexato, ácido N-[4[[(2,4-diamino-6-pteridinil) metiljmetilamino] benzoil]-L-glutámico, se comercializa como metotrexato de sodio. El metotrexato presenta efectos de la fase celular específicamente en la fase S mediante la inhibición de la síntesis de ADN, reparación y/o replicación mediante la inhibición de la reductasa ácida dihid rofólica que se requiere para la síntesis de los nucleótidos de purina y el timidilato. El metotrexato se indica como un agente único o en combinación con otros agentes de quimioterapia, en el tratamiento de coriocarcinoma, leucemia de las meninges, linfoma no Hodgkin y carcinomas de mama, de cabeza, de cuello, de ovario y de vejiga.

Inhibidores de la topoisomerasa I: las camptotecinas, incluido, la camptotecina y los derivados de la camptotecina están disponibles o se encuentran en desarrollo como inhibidores de la topoisomerasa I. Se cree que la actividad citotóxica de las camptotecinas está relacionada con la actividad inhibidora de la topoisomerasa I . Algunos ejemplos de camptotecinas incluyen, entre otros, irinotecán, topotecán y las diversas formas ópticas de 7-(4-metilpiperaz¡no-metileno)-10, 1 1 -etilenodioxi-20-camptotecina descritos abajo.

El irinotecán HCI, (4S)-4, 1 1 -dietil-4-hidroxi-9-[(4-piperidinopiperidino) carboniloxi]-1 H-pirano[3’,4’,6,7]indolizino[1 ,2-b]qumolina-3, 14(4H , 12H)-diona clorhidrato, se comercializa como la solución inyectable CAMPTOSAR®. El irinotecán es un derivado de la camptotecina que se une, junto con su metabolito activo SN-38, al complejo de topoisomerasa I - ADN. Se cree que la citotoxicidad se produce como resultado de las rupturas de la cadena doble irreparables provocadas por la interacción de la topoisomerasa I : ADN : irintecón o el complejo ternario SN-38 con las enzimas de replicación. El irinotecán se indica para el tratamiento del cáncer metastásico de colon o recto.

El topotecán HCI, (S)-10-[(dimetilam¡no)metil]-4-et¡l-4,9-dihidrox¡-1 H-pirano[3’,4’,6,7]indoliz¡no[1 ,2-b]qumolina-3, 14-(4H , 12H)-diona monoclorhidrato, se comercializa como la solución inyectable HYCAMTIN©. El topotecán es un derivado de la camptotecina que se une a la topoisomerasa I - complejo de ADN y evita la nueva ligadura de las rupturas de cadena única provocadas por la topoisomerasa I en respuesta a la cepa torsional de la molecula de ADN. El topotecán se indica para el tratamiento de segunda línea del carcinoma metastásico de ovario y el cáncer de pulmón de células pequeñas.

Hormonas y análogos hormonales: las hormonas y los análogos hormonales son compuestos útiles para el tratamiento de cánceres en donde existe una relación entre las hormonas y el crecimiento y/o el no crecimiento del cáncer. Algunos ejemplos de hormonas y análogos hormonales útiles para el tratamiento del cáncer incluyen, entre otros, adrenocorticosteroides como prednisona y prednisolona que son útiles en el tratamiento del linfoma maligno y la leucemia aguda en niños; la aminoglutetimida y otros inhibidores de la aromatasa como anastrozol, letrazol, vorazol y exemestano útiles en el tratamiento del carcinoma adrenocortical y el carcinoma de mama dependiente de hormonas que contiene receptores de estrógeno; progestrinas como acetato de megestrol útil en el tratamiento del cáncer de mama dependiente de hormonas y el carcinoma endometrial; estrógenos, andrógenos y antiandrógenos como flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona y 5a- reductasas como finasterida y dutasterida, útil en el tratamiento del carcinoma de próstata e hipertrofia prostética benigna; antiestrógenos como tamoxifén, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, yodoxifeno, así como moduladores del receptor de estrógeno selectivos (SERMS) como los que se describen en las patentes estadounidenses N .° 5.681 .835, 5.877.219 y 6.207.716, útiles en el tratamiento del carcinoma de mama dependiente de hormonas y otros cánceres susceptibles; y la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) y sus análogos que estimulan la liberación de la hormona leutinizante (LH) y/o la hormona estimuladora de folículos (FSH) para el tratamiento del carcinoma de próstata, por ejemplo, agonistas de LHRH y antagonistas como acetato de goserelina y leuprolide.

Inhibidores de la vía de transducción de señales: los inhibidores de la vía de transducción de señales son aquellos inhibidores que bloquean o que inhiben un proceso químico que evoca un cambio intracelular. Según se emplea en la presente, este cambio es la proliferación o la diferenciación celular. Los inhibidores de la transducción de señales útiles en la presente invención incluyen inhibidores de los receptores tirosina cinasa, tirosina cinasas no receptoras, bloqueadores del dominio SH2/SH3, serina/treonina cinasas, fosfotidil i n osito I-3 cinasas, señalización de mio-inositol y oncogenes Ras.

Diversas proteínas tirosina cinasas catalizan la fosforilación de los residuos tirosilo específicos en diversas proteínas que participan en la regulación del crecimiento celular. Dichas proteínas tirosina cinasas se pueden clasificar ampliamente como cinasas receptoras o no receptoras.

Las tirosina cinasas receptoras son proteínas transmembrana que tienen un dominio de unión a ligandos extracelular, un dominio transmembrana y un dominio de tirosina cinasa. Las tirosina cinasas receptoras participan en la regulación del crecimiento celular y, en general, se denominan receptores del factor de crecimiento. Se ha demostrado que la activación inadecuada o incontrolada de muchas de estas cinasas, es decir, la actividad del receptor del factor de crecimiento de cinasa aberrante, por ejemplo, mediante la sobrexpresión o mutación, produce un crecimiento celular descontrolado. En consecuencia, la actividad aberrante de dichas cinasas se ha vinculado con el crecimiento del tejido maligno. En consecuencia, los inhibidores de dichas cinasas pueden proporcionar metodos de tratamiento del cáncer. Los receptores del factor de crecimiento incluyen, por ejemplo, el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFr), receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFr), erbB2, erbB4, ret, receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFr), tirosina cinasa con dominios de homología del factor de crecimiento epidérmico y similar a inmunoglobulina (TIE-2), receptor del factor de crecimiento de insulina-l (IGFI), factor estimulador de la colonia de macrófagos (cfms), BTK, ckit, cmet, receptores del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), receptores de Trk (TrkA, TrkB y TrkC), receptores de efrina (eph) y el protooncogen de RET. Varios inhibidores de los receptores de crecimiento se encuentran en desarrollo e incluyen antagonistas de ligandos, anticuerpos, inhibidores de tirosina cinasa y oligonucleótidos antisentido. Los receptores del factor de crecimiento y los agentes que inhiben la función del receptor del factor de crecimiento se describen, por ejemplo, en Kath, John C. , Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818; Shawver et al DDT Vol 2, No. 2, febrero de 1997; y Lofts, F. J . et al, “Growth factor receptors as targets”, New Molecular Targets for Cáncer Chemotherapy, ed. Workman , Paul y Kerr, David, CRC press 1994, Londres.

Las tirosina cinasas, que no son cinasas receptoras del factor de crecimiento se denominan tirosina cinasas no receptoras. Las tirosina cinasas no receptoras útiles en la presente invención, que son dianas o posibles dianas de los fármacos contra el cáncer, incluyen cSrc, Lck, Fyn, Yes, Jak, cAbl, FAK (cinasa de adhesión focal), tirosina cinasa de Brutons y Bcr-Abl. Dichas cinasas no receptoras y agentes que inhiben la función de las tirosina cinasas no receptoras se describen en Sinh, S. y Corcy, S.J ., (1999) Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research 8 (5): 465 - 80; y Bolen, J.B., Brugge, J.S. , (1997) Annual review of Immunology. 15: 371 -404.

Los bloqueadores del dominio SH2/SH3 son agentes que interrumpen la unión del dominio SH2 o SH3 en diversas enzimas o proteínas adaptadoras incluido, la subunidad PI3-K p85, la familia de cinasas Src, moleculas adaptadoras (Shc, Crk, Nck, Grb2) y Ras- GAP. Los dominios SH2/SH3 como dianas para los fármacos contra el cáncer se plantean en Smithgall, T.E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 34(3) 125-32.

Inhibidores de serina/treonina cinasas incluido los bloqueadores de la cascada de la cinasa MAP que incluyen los bloqueadores de las cinasas Raf (rafk), cinasa regulada extracelular o mitógeno (M EK) y cinasas reguladas extracelulares (ERK); y bloqueadores del miembro de la familia de proteína cinasa C incluido bloqueadores de PKC (alfa, beta, gamma, épsilon, mu, lambda, iota, zeta). La familia de la cinasa IkB (IKKa, IKKb), las cinasas de la familia PKB, los miembros de la familia de cinasa akt y las cinasas receptoras de TGF beta. Dichas serina/treonina cinasas y sus inhibidores se describen en Yamamoto, T , Taya, S , Kaibuchi, K. , (1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803; Brodt, P, Samani, A. y Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology, 60. 1 101 -1 107; Massague, J . , Weis-Garcia, F. (1996) Cáncer Surveys. 27:41 -64; Philip, P.A. y Harris, A L. (1995), Cáncer Treatment and Research. 78: 3-27, Lackey, K. et al B100rganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226; patente estadounidense N.° 6.268.391 ; y Martinez-lacaci, L. , et al, Int. J. Cáncer (2000), 88(1 ), 44-52.

Los inhibidores de los miembros de la familia de cinasas fosfotidil inositol-3 incluido los bloqueadores de la PI3-cinasa, ATM, DNA-PK y Ku también son útiles en la presente invención. Dichas cinasas se plantean en Abraham, R.T. (1996), Current Opinión in Immunology. 8 (3) 412-8; Canman, C.E. , Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301 -3308; Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935-8; y Zhong, H . et al, Cáncer res, (2000) 60(6), 1541 -1545.

También son útiles en la presente invención los inhibidores de señalización de Myo-inositol como los bloqueadores de la fosfolipasa C y los análogos de miomositol. Dichos inhibidores de señales se describen en Powis, G. y Kozikowski A. , (1994) New Molecular Targets for Cáncer Chemotherapy ed ., Paul Workman y David Kerr, CRC press 1994, Londres.

Otro grupo de inhibidores de la vía de transducción de señales son los inhibidores del oncogen Ras. Dichos inhibidores incluyen los inhibidores de farnesiltransferasa, geranil-geranil transferasa y CAAX proteasas así como oligonucleótidos antisentido, ribozimas e inmunoterapia. Se ha demostrado que dichos inhibidores bloquean la activación de ras en las células que contienen el muíante de tipo salvaje ras, mediante lo cual actúan como agentes antiproliferación. La inhibición del oncogen Ras se plantea en Scharovsky, O.G. , Rozados, V. R. , Gervasoni, S I . Matar, P. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8; Ashby, M.N. (1998), Current Opinión in Lipidology. 9 (2) 99 - 102; y BioChim. Biophys. Acta, (19899) 1423(3): 19-30.

Como se mencionó arriba, los antagonistas del anticuerpo a la unión al ligando de la cinasa receptora también puede servir como inhibidores de la transducción de señales. Este grupo de inhibidores de la vía de transducción de señales incluye el uso de anticuerpos humanizados al dominio de unión al ligando extracelular de las tirosina cinasas receptoras. Por ejemplo, el anticuerpo específico Imclone C225 EGFR (véase Green, M.C. et al, Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cáncer Treat. Rev. , (2000), 26(4), 269-286); el anticuerpo Herceptin ® erbB2 (véase Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancererbB Family Receptor Tyrosine Kinases, Breast cáncer Res., 2000, 2(3), 176-183); y el anticuerpo específico 2CB VEGFR2 (véase Brekken, R.A. et al, Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice, Cáncer Res. (2000) 60, 51 17-5124).

Agentes antiangiogénicos: los agentes antiangiogénicos incluido los inhibidores de MEKngiogénesis no receptora también pueden ser útiles. Los agentes antiangiogénicos como aquellos que inhiben los efectos del factor de crecimiento endotelial vascular, (por ejemplo, el anticuerpo del factor de crecimiento celular endotelial antivascular bevacizumab [Avastin™] y los compuestos que actúan a través de otros mecanismos (por ejemplo, linomida, inhibidores de la función de la integrina anb3, endostatina y angiostatina); Agentes inmunoterapéuticos: los agentes utilizados en los regímenes inmunoterapéuticos también pueden ser útiles en combinación con las combinaciones de la presente invención. Los enfoques inmunoterapéuticos, incluido, por ejemplo, los enfoques ex vivo e in-vivo al aumento de la inmunogenicidad de las células tumorales del paciente, como la transfección con citocinas como la interleucina 2, interleucina 4 o el factor estimulador de colonia de granulocitos-macrófagos, enfoques para disminuir la anergia de las células T, enfoques que utilizan células inmunes transfectadas como células dendríticas transfectadas con citocinas, enfoques que utilizan las líneas celulares tumorales transfectadas con citocinas y enfoques que utilizan anticuerpos antiidiotípicos.

Agentes proapoptóticos: los agentes utilizados en los regímenes proapoptóticos (p. ej . , oligonucleótidos antisentido bcl-2) también se pueden utilizar en la combinación de la presente invención.

Inhibidores de la señalización del ciclo celular: los inhibidores de la señalización del ciclo celular inhiben las moléculas que participan en el control del ciclo celular. Una familia de proteína cinasas denominada cinasas dependientes de ciclina (CDK) y su interacción con una familia de proteínas denominadas ciclinas controla el avance a través del ciclo celular eucariota. La activación e inactivación coordinadas de diferentes complejos de ciclina/CDK es necesaria para el avance normal a través del ciclo celular. Varios inhibidores de la señalización del ciclo celular se encuentran en desarrollo. Por ejemplo, se describen ejemplos de cinasas dependientes de ciclina, incluido CDK2, CDK4 y CDK6 e inhibidores de estas, por ejemplo, en Rosania et al, Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10 (2 ) : 215-230.

En una modalidad , una combinación de la presente invención comprende además al menos un agente antineoplásico seleccionado de agentes antimicrotúbulos, complejos de coordinación de platino, agentes alquilantes, agentes antibióticos, inhibidores de la topoisomerasa II, antimetabolitos, inhibidores de la topoisomerasa I, hormonas y análogos hormonales, inhibidores de la vía de transducción de señales, inhibidores de la MEKngiogenesis de tirosina no receptora, agentes inmunoterapéuticos, agentes proapoptóticos e inhibidores de señalización del ciclo celular.

En una modalidad, una combinación de la presente invención comprende además al menos un agente antineoplásico que es un agente antimicrotubular seleccionado de diterpenoides y vinca alcaloides.

En otra modalidad, el al menos un agente antineoplásico es un diterpenoide.

En otra modalidad, el al menos un agente antineoplásico es un vinca alcaloide.

En una modalidad, la combinación de la presente invención comprende además al menos un agente antineoplásico que es un complejo de coordinación de platino.

En otra modalidad, el al menos un agente antineoplásico es paclitaxel, carboplatina o vinorelbina.

En otra modalidad, el al menos un agente antineoplásico es carboplatina.

En otra modalidad, el al menos un agente antineoplásico es vinorelbina.

En otra modalidad, el al menos un agente antineoplásico es paclitaxel.

En una modalidad , una combinación de la presente invención comprende además al menos un agente antineoplásico que es un inhibidor de la vía de transducción de señales.

En otra modalidad , el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de una cinasa receptora del factor de crecimiento VEGFR2, TIE2, PDGFR, BTK, erbB2, EGFr, IGFR-1 , TrkA, TrkB, TrkC o c-fms.

En otra modalidad , el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de una serina/treonina cinasa rafk, akt o PKC-zeta.

En otra modalidad, el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de una tirosina cinasa no receptora seleccionado de la familia src de cinasas.

En otra modalidad, el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de c-src.

En otra modalidad, el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor del oncogen Ras seleccionado de los inhibidores de farnesilo transferasa y geranilgeranil transferasa.

En otra modalidad, el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de una serina/treonina cinasa seleccionada del grupo que consiste en PI3K.

En otra modalidad, el inhibidor de la vía de transducción de señales es un inhibidor de EGFr/erbB2 doble, por ejemplo, N-{3-cloro-4-[(3-flu o robe ncil) oxi]fenil}-6-[5-({[2-(metanosulfonil) etil]amino}metil)-2-furil]-4-qumazolinamina (estructura abajo): En una modalidad, la combinación de la presente invención comprende además al menos un agente antineoplásico que es un inhibidor de la señalización del ciclo celular.

En otra modalidad, el inhibidor de la señalización del ciclo celular es un inhibidor de CDK2, CDK4 o CDK6.

En una modalidad , el mam ífero en los métodos y usos de la presente invención es un ser humano.

Según se indica, las cantidades terapéuticamente eficaces de las combinaciones de la invención (compuesto B y/o com puesto A y cetuximab (Erbitux)) se administran a un ser humano. Típicamente, la cantidad terapéuticamente eficaz de los agentes administrados de la presente invención dependerá de varios factores incluidos, por ejemplo, la edad y el peso del sujeto, la afección precisa que requiere tratamiento, la gravedad de la afección, la naturaleza de la formulación y la vía de administración. Por último, la cantidad terapéuticamente eficaz quedará a criterio del médico tratante.

Las combinaciones de la presente invención se prueban en cuanto a su eficacia, propiedades beneficiosas y sinérgicas de acuerdo con los procedimientos conocidos. De forma adecuada, las combinaciones de la invención se prueban en cuanto a su eficacia, propiedades beneficiosas y sinérgicas, en general, de acuerdo con los siguientes ensayos de proliferación celular de combinación. Se colocaron las células en placas de 384 pocilios a 500 células/pocillo en medio de cultivo adecuado para cada tipo de célula, complementado con 10 % de FBS y 1 % de penicilina/estreptomicina y se incubaron durante la noche a 37 °C, 5 % de CO2- Se trataron las células en forma de grilla con dilución del compuesto A (20 diluciones, incluso sin compuesto, de diluciones de 2 veces a partir de 1 -20 mM según el compuesto) de izquierda a derecha en una placa de 384 pocilios y también se trataron con el compuesto B (20 diluciones, incluso sin compuesto, de diluciones de 2 veces a partir de 1 -20 mM según el compuesto) de arriba a abajo en una placa de 384 pocilios; y también se trataron con cetuximab (Erbitux) y se incubaron como se indicó arriba durante otras 72 horas. En algunos casos, los compuestos se añadieron de forma escalonada y el tiempo de incubación se pudo extender hasta 7 días. Se midió el crecimiento celular utilizando el reactivo CelITiter-Glo®, de acuerdo con el protocolo del fabricante y se lcyeron las señales en un lector PerkinElmer EnVision™ configurado para el modo de luminiscencia con una lectura de 0,5 segundos. Se analizaron los datos como se describió arriba.

Se expresaron los resultados como un porcentaje del valor de t=0 y se graficaron contra la concentración del compuesto. Se normalizó el valor de t=0 al 100 % y representó la cantidad de celulas presentes en el momento del añadido del compuesto. Se determinó la respuesta celular para cada compuesto y/o combinación de compuestos utilizando un ajuste de curva de 4 o 6 parámetros de la viabilidad celular contra la concentración, utilizando el plug-in IDBS XLfit para el software Microsoft Excel y se determinando la concentración necesaria para una inhibición del 50 % del crecimiento celular (glC50). Se realizó la corrección de fondo mediante la sustracción de los valores de los pocilios que no contenían células. Para cada combinación de fármacos, se calculó un índice de combinación (Cl), exceso sobre agente único más alto (EOHSA) y exceso sobre Bliss (EOBIiss) de acuerdo con los métodos conocidos, como se describe en Chou y Talalay (1984) Advances in Enzyme Regulation, 22, 37 a 55; y Berenbaum, MC (1981 ) Adv. Cáncer Research, 35, 269-335.

A continuación, se demuestra la inhibición del crecimiento celular in vitro por el compuesto A (MEKi-trametinib), el compuesto B (BRAFi-dabrafenib) y su combinación, con inhibidores de EGFR, utilizando cetuximab o erlotinib, en las líneas celulares tumorales.

Métodos: Líneas celulares y condiciones de crecimiento Las líneas tumorales de colon humano, Colo-205, HT-29, RKO, SW1417, LS411 N y la línea de melanoma humano A375 eran de ATCC. Todas las líneas se cultivaron en medio RPMI 1640 que contenía 10 % de suero fetal bovino (FBS).

Ensayo de inhibición de crecimiento celular y análisis de datos combinados.

Se cultivaron todas las celulas durante un mínimo de 72 horas antes de la colocación en placas de las células. Se evaluaron las células en una placa de cultivo de tejido de 96 pocilios (NUNC 136102) de medio RPMI que contenía 10 % de FBS para todas las células a 500 células por pocilio. Aproximadamente 24 horas después de la colocación en placas, las células se expusieron a diez diluciones en serie de tres veces del compuesto B o la combinación del compuesto B y un inhibidor de EGFR, según se utiliza en la presente cetuximab o erlotinib, a una proporción molar constante de 10: 1 , con o sin el añadido de 3 nM de compuesto A. Se incubaron las células en presencia de los compuestos durante 7 días. Se determinaron los niveles de ATP mediante el añadido de Cell Titer Glo® (Promega) de acuerdo con el protocolo del fabricante. En resumen, se añadió Cell Titer Glo® a cada placa, se incubó durante 30 minutos y después se lcyó una señal luminiscente en el lector de placas SpectraMax L con un tiempo de integración de 0,5 seg.

Se calculó la inhibición del crecimiento celular después del tratamiento con el compuesto o con la combinación de compuestos durante 7 días y comparando la señal con las células tratadas con vehículo (DMSO). Se calculó el crecimiento celular con respecto a los pocilios de control tratados con vehículo (DMSO).

Resultados: Se determinó el efecto de la inhibición del crecimiento celular por el compuesto A inhibidor de MEK, el compuesto B inhibidor de BRAF y su combinación con un inhibidor de EGFR, según se utiliza en la presente cetuximab o erlotinib, en 5 líneas celulares tumorales de CRC humana muíante de BRAF V600E , Colo-205, HT-29, RKO, SW1417, LS41 1 N y líneas celulares de melanoma A375. Como se ejemplifica en la figura 1 (utilizando cetuximab) y en la figura 2 (utilizando erlotinib), las líneas Colo205, HT-29, LS41 1 N y A375 son sensibles al compuesto A y al compuesto B solos. SW1417 y RKO son resistentes al compuesto A y al compuesto B solos. Cetuximab o erlotinib solos fueron inactivos en las seis líneas. El añadido de cetuximab o erlotinib aumentó la sensibilidad y/o mejoró la inhibición del crecimiento celular por el compuesto B solo, o la combinación del compuesto A y el compuesto B en 3/5 líneas CRC mutantes BRAF, HT-29, LS41 1 N y SW1417. Los órdenes de sensibilidad a la inhibición del crecimiento celular son: EGFRi + compuesto A + compuesto B > compuesto A + compuesto B > compuesto B solo; EGFRi + compuesto A + compuesto B > EGFRi + compuesto B. En cambio, las otras 2 líneas CRC (Colo-205 y RKO) y la línea de melanoma (A375) no mostraron un beneficio en la combinación o mostraron poco beneficio con los tres EGFRi.

Las combinaciones de la presente invención se evalúan en los ensayos anteriores para determinar una utilidad terapeutica ventajosa en el tratamiento del cáncer.

Los siguientes ejemplos solo tienen fines ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la presente invención de ninguna forma.

Ejemplo 1 - Composición del kit La sucrosa, la celulosa microcristalina y los compuestos A y B de la combinación inventada, según se muestran en las tablas I y II abajo, se mezclan individualmente y se granulan en las proporciones que se muestran , con una solución de gelatina al 10 % . Los gránulos húmedos se filtran, se secan, se mezclan con el almidón, talco y ácido esteárico y despues se filtran y se comprimen en un comprimido. También se incluye un vil de cetuximab en el kit como se describe en la tabla I II. Alternativamente, se incluye un vil de erlotinib en el kit como se describe en la tabla IV.

Tabla I INGREDIENTES CANTIDADES dimetilsulfóxido de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo- 2 mg fenilamino)6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H- pirido[4,3-d]pirimidin-1-il]fenil}acetamida (el dimetilsulfóxido del compuesto A) Celulosa icrocristalina 300 mg sucrosa 4 mg almidón 2 mg talco 1 mg ácido esteárico 0,5 mg Tabla INGREDIENTES metanosulfonato de N-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(l,l- 200 mg dimetiletil)-1,3-tiazol-4-il]-2-fluorofenil}-2,6- difluorobencenosulfonamida, (la sal metanosulfonato del compuesto B) Celulosa microcristalina 200 mg sucrosa 10 mg almidón 40 mg talco 20 mg ácido esteárico 5 mg Tabla lll Se suministra cetuximab en una concentración de 2 mg/mL en un vial de uso único de 200 mg (100 mL).

Tabla IV Se suministra erlotinib en forma de comprimidos en una dosis de aproximadamente 150 mg.

Aunque las modalidades preferidas de la invención se ¡lustran con lo anterior, se entenderá que la invención no se limita a las instrucciones precisas descritas en la presente y que se reserva el derecho a todas las modificaciones que se encuentran dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Una combinación que comprende: (i) un compuesto de la estructura (I) O) o un solvato o sal farmaceuticamente aceptable de éste; (ii) cetuximab; y que contiene, opcionalmente, (iii) un compuesto de la estructura (II) (II) o una sal farmacéuticamente aceptable de éste. 2. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 1 , caracterizada porque el compuesto (I) se encuentra en la forma del solvato de sulfóxido de dimetilo, y el compuesto (I I) se encuentra en la forma de la sal de metansulfonato. 3. Una combinación que comprende: (i) un compuesto de la estructura (I) (I) o un solvato o sal farmaceuticamente aceptable de éste; y (ii) cetuximab. Una combinación que comprende: (i) un compuesto de la estructura (II) (II) o un solvato o sal farmacéuticamente aceptables de este; y (ii) cetuximab. 5. Un kit de combinación que comprende una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, junto con un portador o con portadores farmacéuticamente aceptables. 6. El kit de combinación de la reivindicación 5, caracterizado porque dicho compuesto de la estructura I, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de éste, cuando está presente, se proporciona en forma de comprimidos adecuados para la administración por vía oral. 7. El kit de combinación de la reivindicación 4 o de la reivindicación 5, caracterizado porque dicho compuesto de la estructura II, o una sal farmacéuticamente aceptable de éste, cuando está presente, se proporciona en forma de cápsulas adecuadas para la administración por vía oral. 8. El kit de combinación de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, caracterizado porque el cetuximab se proporciona en una forma adecuada para la administración intravenosa (IV). 9. El kit de combinación de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, caracterizado porque el cetuximab se proporciona en una forma adecuada para la adm inistración subcutánea. 10. El uso de una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer. 1 1 . Una combinación de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 9, para su uso en terapia. 12. Una combinación de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 9, para su uso en el tratamiento de cáncer. 13. Una composición farmacéutica que comprende una combinación de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 9, junto con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. 14. Un método para tratar el cáncer en un ser humano que lo necesite, el cual comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de la reivindicación 1 . 15. El método de la reivindicación 14, caracterizado porque el cetuximab se administra en una cantidad de entre 400 mg/m2 y 250 mg/m2. 16. El método de la reivindicación 15, caracterizado porque el cetuximab se administra en una cantidad de aproximadamente 400 mg/m2 administrada como una infusión intravenosa durante 2 horas. 17. El método de cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, caracterizado porque el cetuximab se co-administra con un compuesto de la estructura I, o con una sal farmacéuticamente aceptable o solvato de éste, y un compuesto de la estructura II , o una sal farmacéuticamente aceptable de éste. 18. El método de cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17, caracterizado porque el cáncer se selecciona de cáncer de cabeza y cuello, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de ovario, cáncer de próstata, gliomas, glioblastoma, astrocitomas, glioblastoma multiforme, síndrome de Bannayan-Zonana, enfermedad de Cowden, enfermedad de Lhermitte-Duclos, cáncer de mama inflamatorio, tumor de Wilm , sarcoma de Ewing, rabdomiosarcoma, ependimoma, meduloblastoma, cáncer de riñón, cáncer de hígado, melanoma, cáncer de páncreas, sarcoma, osteosarcoma, tumor de celulas gigantes del hueso, de tiroides, leucemia linfoblástica de células T, leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia de células pilosas, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielógena aguda, AM L, leucemia neutrofílica crónica, leucemia linfoblástica de células T aguda, plasmacitoma, leucemia macrocelular inmunoblástica, leucemia de células del manto, leucemia megacarioblástica de mieloma múltiple, mieloma múltiple, leucemia megacariocítica aguda, leucemia promielocítica, eritroleucemia, linfoma maligno, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma linfoblástico de células T, linfoma de Burkitt, linfoma folicular, neuroblastoma, cáncer de vejiga, cáncer urotelial, cáncer de vulva, cáncer de cuello uterino, cáncer endometrial, cáncer de riñón, mesotelioma, cáncer de esófago, cáncer de glándulas salivales, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer de nasofaringe, cáncer bucal, cáncer de la boca, GIST (tumor estromal gastromtestinal) y cáncer de testículos. 19. El método de cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, caracterizado porque el compuesto (I) se encuentra en la forma del solvato de sulfóxido de dimetilo, y el compuesto (II) se encuentra en la forma de la sal de metansulfonato. 20. El método de la reivindicación 15, caracterizado porque el cetuximab se administra en una cantidad de 250 mg/m2 infundida durante 1 hora. 21 . El metodo de la reivindicación 14, caracterizado porque la combinación consiste en un compuesto de la estructura (I) o en una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de éste, y cetuximab. 22. Una combinación o un kit de combinación para utilizarse en el tratamiento de cáncer, el cual comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de: N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-amino)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido[4,3-d]pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo y cetuximab, y que contiene, opcionalmente, metansulfonato de A/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 ,1 -dimetil-etil)-1 , 3-ti azol-4-i l]-2 -f I u oro-fe nil}-2,6-difluoro-bencen -su Ifon a mida, en donde la combinación se administra dentro de un período específico, y en donde la combinación se administra durante un tiempo. 23. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 22, caracterizado porque la cantidad de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-amino)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido-[4,3-d]-pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo se selecciona de entre aproximadamente 0.25 mg y aproximadamente 9 mg, y dicha cantidad se administra una vez al día, y la cantidad de metansulfonato de A/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 ,1 -dimetil-etil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamida, cuando está presente, se selecciona de entre aproximadamente 80 mg y aproximadamente 220 mg, y dicha cantidad se administra una o dos veces al día en una o más dosis, y la cantidad de cetuximab se selecciona de entre aproximadamente 200 mg/m2/semana y aproximadamente 450 mg/m2/semana. 24. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 23, caracterizado porque la N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-amino)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido-[4,3-d]-pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo y el metansulfonato de A/-{3-[5-(2-am i ho-4-pi ri m id i nil)-2-(1 , 1 -dimetil-etil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamida, cuando están presentes, se administran durante 7 días consecutivos, y el cetuximab se administra una vez durante los 7 días, seguido, opcionalmente, de uno o más ciclos de dosificación de repetición. 25. Una combinación o un kit de combinación para utilizarse en el tratamiento de cáncer, el cual comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una combinación de: N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-amino)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido-[4,3-d]-pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo y cetuximab, en donde la combinación se administra dentro de un período específico, y en donde la combinación se administra durante un tiempo. 26. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 25, caracterizado porque la cantidad de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-amino)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido-[4,3-d]-pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo se selecciona de entre aproximadamente 0.25 mg y aproximadamente 9 mg, y dicha cantidad se administra una vez al día, y la cantidad de cetuximab se selecciona de aproximadamente 250 mg/m2/semana. 27. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 26, caracterizado porque la N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-am¡no)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido-[4,3-d]-pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo se administra durante 7 días consecutivos, y el cetuximab se administra una vez durante los 7 días, seguido, opcionalmente, de uno o más ciclos de dosificación de repetición. 28. Una combinación que comprende: (i) un compuesto de la estructura (I) (I) o un solvato o sal farmaceuticamente aceptable de éste; (ii) erlotinib; y que contiene, opcionalmente, (iv) un compuesto de la estructura (II) . (II) o una sal farmaceuticamente aceptable de éste. 29. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 28, caracterizada porque el compuesto (I) se encuentra en la forma del solvato de sulfóxido de dimetilo, y el compuesto (I I) se encuentra en la forma de la sal de metansulfonato. 30. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 29, caracterizado porque la cantidad de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-amino)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido-[4,3-d]-pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo se selecciona de entre aproximadamente 0.25 mg y aproximadamente 9 mg, y dicha cantidad se administra una vez al día, y la cantidad de metansulfonato de /\/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 ,1 -dimetil-etil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamida, cuando está presente, se selecciona de entre aproximadamente 80 mg y aproximadamente 220 mg, y dicha cantidad se administra una o dos veces al día en una o más dosis, y la cantidad de erlotinib es de aproximadamente 150 mg. 31. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 30, caracterizado porque la N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-am¡no)-6,8-d¡metil-2,4,7-tr¡oxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido-[4,3-d]-pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo y el metansulfonato de A/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1-dimetil-etil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamida, cuando están presentes, se administran durante 7 días consecutivos, y el erlotinib se administra una vez al día durante los 7 días, seguido, opcionalmente, de uno o más ciclos de dosificación de repetición. 32. Una combinación o un kit de combinación para utilizarse en el tratamiento de cáncer, el cual comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una combinación de: N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-amino)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido[4,3-d]pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo, y erlotinib, en donde la combinación se administra dentro de un período específico, y en donde la combinación se administra durante un tiempo. 33. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 32, caracterizado porque la cantidad de N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-amino)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido-[4,3-d]-pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo se selecciona de entre aproximadamente 0.25 mg y aproximadamente 9 mg, y dicha cantidad se administra una vez al día, y la cantidad de erlotinib es de aproximadamente 150 mg. 34. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 33, caracterizado porque la N-{3-[3-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-yodo-fenil-amino)-6,8-dimetil-2,4,7-trioxo-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirido-[4,3-d]-pirimidin-1 -il]-fenil}-acetamida en sulfóxido de dimetilo se administra durante 7 días consecutivos, y el erlotinib se administra una vez al día durante los 7 días, seguido, opcionalmente, de uno o más ciclos de dosificación de repetición. 35. Una combinación o un kit de combinación para utilizarse en el tratamiento de cáncer, el cual comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una com binación de: metansulfonato de /V-{3-[5-(2-am¡no-4-pir¡mid¡nil)-2-(1 , 1 -di metil-eti I)- 1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamida, y erlotinib, en donde la combinación se administra dentro de un período específico, y en donde la combinación se administra durante un tiempo. 36. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 35, caracterizado porque la cantidad de metansulfonato de /\/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -dimetil-etil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamida se selecciona de entre aproximadamente 80 mg y aproximadamente 220 mg, y dicha cantidad se administra una o dos veces al día en una o más dosis, y la cantidad de erlotinib es de aproximadamente 150 mg. 37. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 36, caracterizado porque el metansulfonato N-{ 3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -dimetil-etil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamida se administra durante 7 días consecutivos, y el erlotinib se administra una vez al día durante los 7 días, seguido, opcionalmente, de uno o más ciclos de dosificación de repetición. 38. Una combinación o un kit de combinación para utilizarse en el tratamiento de cáncer, el cual comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una combinación de: metansulfonato de /V-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 , 1 -d i met i l-eti I)- 1 , 3-tiazo l-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamida, y cetuximab, en donde la combinación se administra dentro de un período específico, y en donde la combinación se administra durante un tiempo. 39. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 38, caracterizado porque la cantidad de metansulfonato de A/-{3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 ,1 -dimetil-etil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamida se selecciona de entre aproximadamente 80 mg y aproximadamente 220 mg, y dicha cantidad se administra una o dos veces al día en una o más dosis, y la cantidad de cetuximab se selecciona de aproximadamente 250 mg/m2/semana. 40. Una combinación o un kit de combinación de acuerdo con la reivindicación 39, caracterizado porque el metansulfonato N-{ 3-[5-(2-amino-4-pirimidinil)-2-(1 ,1 -dimetil-etil)-1 ,3-tiazol-4-il]-2-fluoro-fenil}-2,6-difluoro-bencen-sulfonamida se administra durante 7 días consecutivos, y el cetuximab se administra una vez durante los 7 días, seguido, opcionalmente, de uno o más ciclos de dosificación de repetición.