MX2015002435A

MX2015002435A - Anticuerpo monoclonal anti-poli-n-acetil glucosamina (pnag) y usos del mismo para la prevencion o el tratamiento de una infeccion bacteriana que expresa pnag.

Info

Publication number: MX2015002435A
Application number: MX2015002435A
Authority: MX
Inventors: Astrid Rey; Cathy Cantalloube; Meng Li; Lei Tang; Daniel Vlock
Original assignee: Sanofi Sa
Priority date: 2012-08-24
Filing date: 2013-08-22
Publication date: 2015-06-22
Also published as: SG11201500892UA; HK1211298A1; AU2013305705A1; WO2014031822A1; JP2015526474A; CN104955840A; EP2888278A1; US20150210755A1; CA2882889A1

Abstract

Se proporcionan métodos para el tratamiento o la prevención de infecciones microbianas (por ejemplo, una infección bacteriana) en las que la patología subyacente implica un microbio que expresa PNAG (por ejemplo, una bacteria que expresa PNAG). Los métodos de la invención implican generalmente administrar al sujeto una cantidad eficaz de un anticuerpo que se une específicamente a PNAG. Tales métodos son particularmente útiles para el tratamiento de infecciones nosocomiales por estafilococos (por ejemplo, S. epidermidis y S. aureus).

Description

ANTICUERPO MONOCLONAL ANTI-POLI-N-ACETIL GLUCOSAMINA Y USOS DEL MISMO PARA LA PREVENCIÓN EL TRATAMIENTO DE UNA INFECCIÓN BACTERIANA QUE EXPRESA PNAG Solicitudes Relacionadas Esta solicitud reclama prioridad a la Solicitud Provisional de Estadounidense No. de Serie 61 /693,001 , presentada el 24 de agosto de 2012 y la Solicitud Francesa No. 1356743, presentada el 9 de julio 2013, cada una de las cuales se incorpora en el presente documento como referencia en su totalidad.

Antecedentes de la Invención Estafilococo áureo (S. aureus) es una causa importante de infecciones potencialmente mortales en el mundo desarrollado. La mayoría de las infecciones por S. aureus adquiridas en un hospital son ahora resistentes a la mayoría de los antibióticos comunes y se conocen como S. aureus resistentes a la meticilina (MRSA por sus siglas en inglés). La incidencia de las infecciones por MRSA se ha incrementado radicalmente en la última década, produciéndose en casos adquiridos en una comunidad y adquiridos en el hospital. Se ha convertido en el agente patógeno más común causante de infecciones nosocomiales. En la década de los años 1990, el número de infecciones nosocomiales por MRSA se triplicó a pesar de las recomendaciones actuales para el control de infecciones (Noskin et al., Arch Intern Med . 165: 1756- 61 , 2005).

En general se acepta que la incidencia de MRSA está aumentando rápidamente y está sumamente subestimada. Un estudio reciente ha encontrado que hasta un 20% de los 4.4 millones de pacientes ingresados en unidades de cuidados intensivos en Estados Unidos de America , se han infectado o colonizados por MRSA. Ese mismo estudio señaló que hasta el 30% de esos pacientes desarrollan infecciones secundarias por MRSA después del alta.

La terapia actual para el MRSA se basa generalmente en el uso del antibiótico vancomicina. Sin embargo, desde finales de 1990 ha habido un aumento de la incidencia de S. aureus resistente a la vancomicina. Por consiguiente, existe una necesidad en la téenica de métodos alternativos para el tratamiento o la prevención de infecciones por S. aureus que no se basen en el uso de antibióticos.

Breve Descripción de la Invención La presente invención proporciona métodos para el tratamiento o la prevención de infecciones microbianas (por ejemplo, una infección bacteriana) en los que la patología subyacente implica un microbio que expresa PNAG (por ejemplo, S. aureus). Los métodos de la invención implican generalmente administrar al sujeto una cantidad eficaz de un anticuerpo que se une específicamente a PNAG. Los métodos de la invención implican generalmente administrar al sujeto una cantidad eficaz de un anticuerpo que se une específicamente a PNAG. Tales metodos son particularmente útiles para el tratamiento de infecciones nosocomiales por estafilococos (por ejemplo, S. epidermidis y S. aureus). 5 Por consiguiente, en un aspecto, la invención proporciona un método para tratar o prevenir una infección bacteriana que expresa poli-N-acetil glucosamina (PNAG por sus siglas en inglés) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-PNAG, en 10 donde el anticuerpo se administra a una dosis de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 20 mg/kg.

En una modalidad, el anticuerpo se administra a una dosis de aproximadamente 10, aproximadamente 15, aproximadamente 17 o aproximadamente 20 mg/kg. En ciertas ís modalidades ejemplares, el anticuerpo se administra a una dosis de aproximadamente 0.8, 1.0, 4.3, 5.0, 8.6, 10.0, 12.9 o 17.2 mg/kg.

En otra modalidad, la dosis administrada alcanza un nivel sérico de anticuerpo anti-PNAG de al menos 10 mg/ml. 20 En otra modalidad, la actividad opsonizante del suero del sujeto permanece esencialmente constante durante al menos 50 días después de la administración del anticuerpo.

En ciertas modalidades, el anticuerpo tiene una semivida en suero de al menos 25 días. 25 En ciertas modalidades, el anticuerpo se administra como una dosis única. En otras modalidades, el anticuerpo se administra en dosis múltiples.

En ciertas modalidades, la dosificación y la programación de al menos una dosis se basa en una determinación de la semivida sérica del anticuerpo en el sujeto y/o de la actividad opsonizante in vitro del suero del sujeto, contra bacterias que expresan PNAG.

En ciertas modalidades, el anticuerpo se administra por infusión intravenosa. En una modalidad , la infusión intravenosa se administra durante aproximadamente 30 a aproximadamente 120 minutos. En ciertas modalidades, el volumen de la infusión intravenosa es de aproximadamente 100 mi.

En ciertas modalidades, el sujeto tiene una infección bacteriana que expresa PNAG. En otras modalidades, el sujeto tiene riesgo de desarrollar una infección bacteriana que expresa PNAG.

En una modalidad, la infección es una infección pulmonar, infección articular, infección del endocardio, infección de la piel, infección de tejidos blandos o una septicemia.

En otra modalidad, el anticuerpo se administra antes, después o durante un procedimiento médico. En ciertas modalidades, el procedimiento médico es la instalación de un implante quirúrgico en el sujeto. En modalidades a modo de ejemplo, el implante quirúrgico es una endoprótesis, catéter, cánula, prótesis o marcapasos.

En ciertas modalidades, el sujeto es un humano.

En ciertas modalidades, la infección bacteriana que expresa PNAG comprende Estafilococo. En una modalidad , el estafilococo es S. epidermidis o S. aureus. En una modalidad ejemplar, el S. aureus es S. aureus resistente a la meticilina.

En ciertas modalidades, los metodos de la invención comprenden determinar el título sérico eficaz del anticuerpo administrado usando un ensayo in vitro de opsonofagocitosis.

En ciertas modalidades, el anticuerpo está en una formulación que comprende: 10.2 mg/ml de anticuerpo anti-PNAG; NaP04 20 mM; y NaCI 150 mM, en donde el pH de la formulación es 6.5.

En ciertas modalidades, el anticuerpo es un anticuerpo humano. En ciertas modalidades, el anticuerpo comprende una región variable de la cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de HCDR1 , HCDR2 y HCDR3 mostradas en SEC ID Nos. : 1 , 2 y 3, respectivamente. En ciertas modalidades, el anticuerpo comprende una región variable de la cadena ligera que comprende las secuencias de aminoácidos de LCDR1 , LCDR2 y LCDR3 mostradas en SEC I D Nos. : 4, 5 y 6, respectivamente. En modalidades particulares, el anticuerpo comprende una región variable de la cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de HCDR1 , HCDR2 y HCDR3 mostradas en SEC ID Nos. : 1 , 2 y 3, respectivamente, y una región variable de la cadena ligera que comprende secuencias de aminoácidos de LCDR1 , LCDR2 y LCDR3 mostradas en SEC I D Nos. : 4, 5 y 6, respectivamente. En otra modalidad , el anticuerpo comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID No. : 7. En otra modalidad , el anticuerpo comprende una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID No.: 8. En aún otra modalidad, el anticuerpo comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID No. : 7, y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID No. : 8.

Breve Descripción de los Dibujos Figura 1 representa los resultados de un ensayo con ratones in vivo que mide la actividad protectora de F598 (SAR279356) contra una infección con S. pneumoniae en el tracto respiratorio.

Figura 2 representa los resultados de un ensayo con ratones in vivo que mide la actividad protectora de F598 contra una infección de la piel con S. aureus.

Figura 3 representa la semivida serica de F598 en sujetos humanos a diversas dosis.

Figura 4 representa el perfil de actividad de F598 en suero humano a diversas dosis, como se mide usando un ensayo opsonofagocítico in vitro.

Figura 5 representa el perfil de actividad de F598 en suero humano a diversas dosis, como se mide usando un ensayo de destrucción opsonofagocítica in vitro.

Dese ri pción Detallada de la Invención La presente invención proporciona métodos para el tratamiento o la prevención de infecciones microbianas (por ejemplo, una infección bacteriana) en los que la patología subyacente implica un microbio que expresa PNAG (por ejemplo, S. aureus). Los métodos de la invención implican generalmente administrar al sujeto una cantidad eficaz de un anticuerpo que se une específicamente a PNAG. Tales métodos son particularmente útiles para el tratamiento de infecciones nosocomiales por estafilococos (por ejemplo, S. epidermidis y S. aureus).

I. Definiciones Con el fin de que la presente invención pueda entenderse más fácilmente, se definen primero ciertos términos.

Como se usa en el presente documento, las expresiones "poli-N-acetil glucosamina" o "PNAG" se refieren a un polímero de monómeros de N-acetil glucosamina unidos a través de un enlace beta 1 -6. Las expresiones también incluyen poli-N-acetil glucosamina parcial o completamente desacilada.

Como se usa en el presente documento, la expresión "infección bacteriana que expresa PNAG" se refiere a una infección microbiana que comprende un microbio que expresa PNAG (por ejemplo, S. aureus ).

Como se usa en el presente documento, la expresión "infección nosocomial" se refiere a una infección adquirida en un hospital o a partir de un procedimiento medico realizado dentro o fuera de un hospital. Infecciones nocosomiales ejemplares incluyen sepsis (infección en la sangre), infección en el sitio de una intervención quirúrgica o neumonía adquirida por hospitalización .

Como se usa en el presente documento, la expresión "prevención de una infección nocosomial" se refiere a una inhibición o reducción de la gravedad de una infección .

Como se usa en el presente documento, el término "anticuerpo" se refiere a moléculas de inmunoglobulina que comprenden cuatro cadenas polipeptídicas, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, así como a multímeros de las mismas (por ejemplo, IgM). Cada cadena pesada comprende una región variable de la cadena pesada (abreviada VH) y una región constante de la cadena pesada. La región constante de la cadena pesada está compuesta por tres dominios, CH1 , CH2 y CH3. Cada cadena ligera comprende una región variable de la cadena ligera (abreviada VL) y una región constante de la cadena ligera. La región constante de la cadena ligera comprende un dominio (CL1 ). Las regiones VH y VL pueden subdividirse además en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de la complementariedad (CDRs por sus siglas en inglés), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones de soporte (FR por sus siglas en ingles). Cada VH y VL está compuesta por tres CDRs y cuatro FRs, dispuestas desde el extremo amino al extremo carboxi en el siguiente orden: FR1 , CDR1 , FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

Como se usa en el presente documento, la expresión "porción que se une a antígeno" de un anticuerpo incluye cualquier polipéptido o glicoproteína de origen natural, obtenible enzimáticamente, sintético o modificado genéticamente, que se une específicamente a un antígeno para formar un complejo. Los fragmentos de un anticuerpo que se unen a antígeno se pueden obtener, por ejemplo, a partir de moléculas de anticuerpo completas, usando cualquiera de las téenicas convencionales adecuadas, como digestión proteolítica o técnicas de ingeniería genética recombinante, que implican la manipulación y la expresión de ADN que codifica dominios variables y, opcionalmente constantes de anticuerpos. Ejemplos de porciones que se unen a antígeno no limitantes incluyen : (i) fragmentos Fab; (ii) fragmentos F(ab')2; (iii) fragmentos Fd; (iv) fragmentos Fv; (v) moléculas de cadena sencilla Fv (scFv); (vi) fragmentos dAb; y (vii) unidades de reconocimiento mínimo que consisten en los residuos de aminoácidos que imitan la región hipervariable de un anticuerpo (por ejemplo, una región determinante de complementariedad (CDR) aislada). Otras moléculas modificadas genéticamente, como diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos y minicuerpos, tambien se incluyen en la expresión "porción que se une a antígeno".

Como se usa en el presente documento, el término "CDR" o "región determinante de complementariedad" significa los sitios no contiguos que se combinan con el antígeno que se encuentran dentro de la región variable de ambos polipéptidos de cadena pesada y ligera. Estas regiones particulares han sido descritas por Kabat et al. , J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) y Kabat et al. , Sequences of protein of immunological interest. (1991 ), y por Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901 -917 (1987) y por MacCallum et al. , J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996) en donde las definiciones incluyen solapamientos o subconjuntos de residuos de aminoácidos cuando se comparan entre sí. Los residuos de aminoácidos que comprenden las CDRs según se han definido en cada una de las referencias citadas anteriormente, se muestran a efectos de comparación. Preferiblemente, el término "CDR" es una CDR como ha sido definida por Kabat, basándose en comparaciones de secuencias.

Como se usa en el presente documento, la expresión "residuos de aminoácidos de regiones soporte (FR)" se refiere a aquellos aminoácidos en la región de soporte de una cadena de Ig. La expresión "región de soporte" o "región FR" como se usa en el presente documento, incluye los residuos de aminoácidos que forman parte de la región variable, pero que no forman parte de las CDRs (por ejemplo, usando la definición de Kabat de CDRs).

Por lo tanto, una región de soporte variable tiene entre aproximadamente 100-120 aminoácidos de longitud, pero incluye solo los aminoácidos fuera de las CDRs.

Como se usa en el presente documento, la expresión "se une específicamente a" se refiere a la capacidad de un anticuerpo o un fragmento del mismo que se une a antígeno para unirse a un antígeno con una Kd de al menos aproximadamente 1 x 10~6M , 1 x 10 7M, 1 x 10 8M , 1 x 1 CT9M, 1 x 10 1°M, 1 x 10 1 1 M , 1 x 10 12M , o más, y/o de unirse a un antígeno con una afinidad que es al menos dos veces mayor que su afinidad hacia un antígeno no específico.

Como se usa en el presente documento, el termino "antígeno" se refiere al sitio de unión o al epítopo reconocido por un anticuerpo o una porción del mismo que se une a antígeno.

Como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad eficaz" se refiere a aquella cantidad de un anticuerpo o una porción del mismo que se une a antígeno, que se une a PNAG, que es suficiente para efectuar el tratamiento, el pronóstico o el diagnóstico de una infección bacteriana que expresa PNAG , como se describe en el presente documento, cuando se administra a un sujeto. Una cantidad terapéuticamente eficaz variará dependiendo del sujeto y del estado de la enfermedad que se está tratando, el peso y la edad del sujeto, la gravedad de la afección de la enfermedad , la forma de administración y similares, que puede ser determinada fácilmente por un experto ordinario en la teenica. Las dosificaciones adecuadas para la administración están generalmente dentro del intervalo de aproximadamente 0.0001 a 1000 mg/kg , y más normalmente de 0.1 a 100 mg/kg (por ejemplo, aproximadamente 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1 , 2 , 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 mg/kg), del peso corporal del huésped. Por ejemplo, las dosificaciones pueden estar dentro del intervalo de aproximadamente 0.5 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg (por ejemplo, de aproximadamente 4.3 a aproximadamente 12.9 mg/kg). Las dosis intermedias en los intervalos anteriores también se entiende que están dentro del alcance de la invención , por ejemplo, aproximadamente 0.9, 4.3, 8.6, 12.9 o 17.2 mg/kg. Los regímenes de dosificación se pueden ajustar para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Una cantidad eficaz también es una en la que cualquier efecto tóxico o perjudicial (es decir, efectos secundarios) de un anticuerpo o de una porción del mismo que se une a antígeno, se reduce al mínimo y/o se supera por los efectos beneficiosos.

Como se usa en el presente documento, el término "sujeto" incluye cualquier animal humano o no humano.

II. Microbios que Expresan PNAG Los métodos de la invención se pueden usar para tratar o prevenir una infección microbiana (por ejemplo, bacteriana) que expresa poli-N-acetil glucosamina (PNAG) en un sujeto. PNAG es expresada por una variedad de microbios, incluyendo bacterias y hongos. En general, una infección causada por cualquier microbio que expresa PNAG se puede tratar o prevenir usando los metodos de la invención . Las bacterias que expresan PNAG susceptibles de tratamiento usando los métodos descritos en este documento incluyen, sin limitación, estafilococos (por ejemplo, S. epidermis, S. aureus (por ejemplo, S. aureus multirresistente a los medicamentos)), S. carnosus, S. haemolyticus, Pseudomonas aeruginosa, E. coli (por ejemplo, E. coli 0157: H7 y E. coli CFT073), Yersinia pestis, Yersinia entercolitica, Xanthomonas axonopodis, Pseudomonas fluorescens, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Actinobacillus pleuropneumoniae, Ralstonia solanacearum, Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis y Bordetella bronchiseptica. En ciertas modalidades ejemplares, el microbio que expresa PNAG es S. aureus (por ejemplo, S. aureus multirresistente a los medicamentos), III. Infecciones Nosocomiales La invención proporciona métodos para tratar o prevenir una infección bacteriana nosocomial que expresa PNAG , en un sujeto mediante la administración al sujeto de una cantidad eficaz de un anticuerpo que se une específicamente a PNAG.

Cualquier procedimiento médico, si se lleva a cabo dentro o fuera de un hospital, que conlleva un riesgo para un paciente de desarrollar una infección bacteriana que expresa PNAG, se puede tratar o prevenir usando los métodos de la invención . Ejemplos de tales procedimientos médicos incluyen, sin limitación , la cirugía y la implantación de un dispositivo quirúrgico (por ejemplo, cateter, cánula, prótesis, respirador, respirador mecánico, válvula cardiaca de reemplazo y marcapasos). Dispositivos quirúrgicos a modo de ejemplo incluyen, sin limitación: catéteres venosos centrales; catéteres de diálisis peritoneal; prótesis ortopédicas; malla ortopédica; dispositivos ¡ntracardiacos como válvulas artificiales, marcapasos y endoprótesis; implantes cocleares; implantes de mama; tubos endotraqueales; prótesis fonatoria; y lentes intraoculares.

El experto en la téenica apreciará que en el caso de un sujeto inmunosuprimido, el mero hecho de que el sujeto esté en un hospital (o en otro entorno que puede albergar un microbio que expresa PNAG) identifica a este sujeto como en riesgo de desarrollar una infección bacteriana que expresa PNAG (por ejemplo, en el pulmón , el tracto urinario o en una herida abierta) incluso si no recibe un procedimiento quirúrgico.

IV. Anticuerpos anti-PNAG Cualquier anticuerpo que se une a PNAG e inhibe la formación de una infección bacteriana que expresa PNAG se puede usar en los métodos de la invención. Secuencias de aminoácidos a modo de ejemplo de VH , VL y CDR adecuadas de anticuerpos para uso en la invención , se exponen en la Tabla 1 .

Tabla 1. Secuencias de aminoácidos de VH, VL y CDR de anticuerpos anti-PNAG ejemplares.

En ciertas modalidades, el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antígeno, comprende una o varias secuencias de aminoácidos de la región CDR seleccionadas entre el grupo que consiste de SEC ID No.: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21 y 22.

En otras modalidades, el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antígeno, comprende secuencias de aminoácidos de la región HCDR3, HCDR2 y HCDR1 seleccionadas entre el grupo que consiste de: a) SEC I D No. : 1 , 2 y 3; b) SEC ID No. : 9, 10 y 1 1 ; y c) SEC I D No. : 17, 18 y 19, respectivamente.

En otras modalidades, el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antígeno, comprende las secuencias de aminoácidos de la región LCDR3, LCDR2 y LCDR1 seleccionadas a partir del grupo que consiste de: a) SEC I D No. : 4, 5 y 6; b) SEC I D No. : 12, 13 y 14; y c) SEC ID No. : 20, 21 y 22, respectivamente.

En otras modalidades, el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antígeno, comprende las secuencias de aminoácidos de la región HCDR3, HCDR2, HCDR1 , LCDR3, LCDR2 y LCDR1 seleccionadas a partir del grupo que consiste de: a) SEC I D No. : 1 , 2, 3, 4, 5 y 6; b) SEC I D No. : 9, 10, 21 , 12, 13 y 14; y c) SEC I D No. : 17, 18, 21 , 20, 21 y 22, respectivamente En otras modalidades, el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antígeno, comprende las secuencias de aminoácidos de la región VH mostradas en SEC ID No. : 7, 15 y/o 23.

En otras modalidades, el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antígeno, comprende las secuencias de aminoácidos de la región VL mostradas en SEC ID No. : 8, 16 y/o 5 24.

En otras modalidades, el anticuerpo o el fragmento del mismo que se une a antígeno, comprende las secuencias de aminoácidos de la región VH y VL seleccionadas a partir del grupo que consiste de: SEC ID No. : 7 y 8; SEC I D No. : 15 y 16; y ío SEC ID No. : 23 y 24, respectivamente.

V. Ensayos Opsonofagocíticos En un aspecto, la invención proporciona ensayos opsonofagocíticos para la medición del título funcional de anticuerpos anti-PNAG en el suero de un sujeto. Tales metodos 15 implican generalmente: obtener suero a partir de un paciente; poner en contacto el suero con células fagocíticas, complemento y bacterias que expresan PNAG; y medir la cantidad de fagocitosis de las bacterias en presencia y en ausencia del suero. En ciertas modalidades, al sujeto se le ha administrado un 20 anticuerpo anti-PNAG (por ejemplo, el anticuerpo F598 descrito en este documento) antes de la modalidad del ensayo opsonofagocítico.

En ciertas modalidades, la cantidad de fagocitosis se mide determinando el número de bacterias destruidas durante el 25 ensayo. En otras modalidades, la cantidad de fagocitosis se mide determinando la cantidad de bacterias fagocitadas durante el ensayo. Tal medición de la fagocitosis se puede lograr, por ejemplo, marcando con fluorescencia las células bacterianas y determinando la absorción de bacterias marcadas por las células fagocíticas usando un clasificador de células activado con fluorescencia (FACS por sus siglas en inglés).

Las células fagocíticas adecuadas incluyen, sin limitación HL60 diferenciadas. Las bacterias adecuadas para el uso en los ensayos opsonofagocíticos de la invención incluyen, sin limitación cepas de S. aureus MN8 o MN8m. Para el ensayo FACS, las bacterias se pueden marcar con cualquier flúor detectable con FACS incluyendo, sin limitación, 5,6 carboxifluoresceína succinimidil éster. En ciertas modalidades, los ensayos de fagocitosis se realizan usando S. aureus marcado con 5,6 carboxifluoresceína succinimidil éster.

VI. Administración Terapéutica y Formulaciones La invención proporciona métodos para tratar o prevenir la infección bacteriana que expresa PNAG mediante la administración a un sujeto que lo requiera, de una composición que comprende un anticuerpo anti-PNAG , o un fragmento del mismo que se une a antígeno. De acuerdo con los métodos de la presente invención , una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-PNAG que se administra a un sujeto, variará dependiendo, por ejemplo, del antagonista, del tipo de infección , del estado, la edad y el tamaño (por ejemplo, peso corporal o área de superficie corporal) del sujeto, así como de la vía de administración, y de otros factores bien conocidos por los expertos ordinarios en la teenica.

En ciertas modalidades, la cantidad de anticuerpo anti-PNAG que se administra a un sujeto se expresa en términos de miligramos de anticuerpo por kilogramo de peso corporal del sujeto (es decir, mg/kg). En una modalidad, los métodos de la presente invención incluyen la administración de un anticuerpo anti-PNAG a un sujeto a una dosis de aproximadamente 0.0001 a 1000 mg/kg, y más generalmente de 0.1 a 100 mg/kg (por ejemplo, aproximadamente 0.2, 0.3, 0.4 , 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 mg/kg). Por ejemplo, las dosificaciones pueden estar dentro del intervalo de aproximadamente 0.5 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg. En otras modalidades, las dosificaciones ejemplares pueden estar dentro del intervalo de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 mg/kg, de aproximadamente 12 a aproximadamente 20 mg/kg, de aproximadamente 13 a aproximadamente 20 mg/kg, de aproximadamente 15 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg , o de aproximadamente 18 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg. Las dosis intermedias en los intervalos anteriores también se entiende que están dentro del alcance de la invención (por ejemplo, aproximadamente 1 (por ejemplo, 0.9), aproximadamente 5 (por ejemplo, 4.3), aproximadamente 10 (por ejemplo, 8.6) , aproximadamente 15 (por ejemplo, 12.9) o aproximadamente 20 (por ejemplo, 17.2) mg/kg).

En ciertas modalidades, la dosis de anticuerpo anti-PNAG administrada al sujeto es desde aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1000 mg por dosis (por ejemplo, de 5 aproximadamente 1 a 100 mg , de 100 a 200 mg, de 200 a 300 mg, de 300 a 400 mg, de 500 a 600 mg , de 600 a 700 mg, de 700 a 800 mg, de 800 a 900 mg o de 900 a 1000 mg) .

El tiempo preciso de administración del anticuerpo anti- PNAG se puede ajustar según las necesidades del paciente. En el ío caso de un tratamiento profiláctico para inhibir la formación de una infección bacteriana que expresa PNAG en un sujeto, el anticuerpo anti-PNAG se puede proporcionar en cualquier momento antes de la exposición al microbio que expresa PNAG (por ejemplo, despues del ingreso en un hospital o al inicio de un 15 procedimiento médico). Por ejemplo, el anticuerpo anti-PNAG se puede administrar entre 0 y 240 horas antes de la exposición al microbio que expresa PNAG, por ejemplo, aproximadamente 0.5, 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22 , 23, 24, 30, 40, 60, 80, 90, 100, 1 10, 1 10, 120, 130, 140, 20 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230 y/o 240 horas.

En ciertas modalidades, los métodos de la presente invención incluyen administrar dosis múltiples de un anticuerpo anti-PNAG a un sujeto, durante un periodo de tiempo especificado. Por ejemplo, el anticuerpo anti-PNAG se puede 25 administrar una vez, aproximadamente una vez a la semana, aproximadamente una vez cada dos semanas (q2w por sus siglas en ingles), o aproximadamente una vez al mes (q4w por sus siglas en inglés). En ciertas modalidades, los métodos de la invención incluyen la administración de una primera dosis de un anticuerpo anti-PNAG a un sujeto en un primer momento, seguido de la administración de al menos una segunda dosis de un anticuerpo anti-PNAG al sujeto en un segundo momento. La primera y la segunda dosis, en ciertas modalidades, pueden contener la misma cantidad de anticuerpo anti-PNAG. El tiempo transcurrido entre la primera y la segunda dosis puede ser desde aproximadamente unas pocas horas a varias semanas. Por ejemplo, el segundo momento (es decir, el momento en que se administra la segunda dosis) puede ser desde aproximadamente 1 hora a aproximadamente 7 semanas después del primer momento (es decir, el momento en que se administra la primera dosis). Según ciertas modalidades ejemplares de la presente invención, el segundo momento puede ser aproximadamente 1 hora, aproximadamente 4 horas, aproximadamente 6 horas, aproximadamente 8 horas, aproximadamente 10 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 2 días, aproximadamente días, aproximadamente 4 días, aproximadamente días, aproximadamente 6 días, aproximadamente 7 días, aproximadamente semanas, aproximadamente 4 semanas, aproximadamente semanas, aproximadamente 8 semanas, aproximadamente 10 semanas, aproximadamente 12 semanas, aproximadamente 14 semanas o más después del primer momento. En ciertas modalidades, el segundo momento es aproximadamente 1 semana o aproximadamente 2 semanas. Se 5 prefiere que el segundo momento sea de aproximadamente 2 semanas. La tercera dosis y las dosis siguientes pueden administrarse de modo similar en el transcurso del tratamiento del paciente. Se prefiere que la tercera dosis se administre aproximadamente 2 semanas después de la segunda dosis, y que ío una cuarta dosis se administre aproximadamente 2 semanas después de la tercera dosis.

En algunas modalidades, el anticuerpo anti-PNAG se administra mediante infusión. En algunas modalidades, la infusión se administra más de dos horas. En algunas modalidades, el 15 anticuerpo anti-PNAG se administra al sujeto en condiciones de ayuno. En algunas modalidades, el anticuerpo anti-PNAG se diluye en solución salina normal (cloruro de sodio al 0.9%) antes de la infusión. En modalidades específicas, el anticuerpo anti- PNAG se diluye en 100 mi de solución salina normal. 20 En cierta modalidad , la dosificación del anticuerpo anti- PNAG se ajusta para lograr determinada concentración plasmática de anticuerpo o de toxina, por ejemplo, 1 -1000 ug/ml. En ciertas modalidades, la concentración de anticuerpo en plasma es mayor que 10 ug/ml. 25 La invención proporciona métodos para usar composiciones terapeuticas que comprenden un anticuerpo anti-PNAG. Las composiciones terapéuticas de la invención se administrarán con vehículos, excipientes y otros agentes adecuados que se incorporan en formulaciones para proporcionar una transferencia, un transporte y una tolerancia mejorada, y similares. En ciertas modalidades, la composición terapéutica comprende un anticuerpo anti-PNAG en un amortiguador que comprende NaP04 20 mM y NaCI 150 mM, a pH 6.5. En una modalidad particular, la composición terapéutica comprende 10.2 mg/ml de anticuerpo anti-PNAG.

Se pueden encontrar una multitud de formulaciones adecuadas en el vademécum conocido por todos los químicos farmacéuticos: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton , PA. Estas formulaciones incluyen, por ejemplo, polvos, pastas, ungüentos, gelatinas, ceras, aceites, lípidos, vesículas que contienen lípidos (catiónicos o aniónicos) (por ejemplo LI POFECTIN® ) , conjugados de ADN, pastas de absorción anhidras, emulsiones de aceite en agua y de agua en aceite, emulsiones en Carbowax (polietilenglicoles de diverso peso molecular), geles semisólidos, y mezclas semisólidas que contienen Carbowax. Ver también Powell et al., "Compendium of excipiente for parenteral formulations", PDA (1998), J . Pharm. Sci. Technol. , 52:238-31 1.

Se conocen diversos sistemas de administración y se pueden usar para administrar la composición farmacéutica de la invención, por ejemplo, encapsulación en liposomas, micropartículas, microcápsulas, endocitosis mediada por receptores (ver, por ejemplo, Wu et al. (1987), J. Biol. Chem. , 262:4429-4432). Los metodos de introducción incluyen, pero se limitan a la vía intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intranasal, epidural y oral. La composición se puede administrar a través de cualquier vía conveniente, por ejemplo, por infusión o por inyección en bolo, mediante absorción a través de revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo, la mucosa oral, la mucosa rectal e intestinal, etcétera) y se puede administrar junto con otros agentes bioactivos. La administración puede ser sistémica o local. El anticuerpo anti-PNAG se puede administrar por vía parenteral o subcutánea.

La composición farmacéutica también se puede administrar en una vesícula, en particular un liposoma (ver Langer (1990), Science, 249: 1527-1533) . En ciertas situaciones, la composición farmacéutica se puede administrar en un sistema de liberación controlada, por ejemplo, con el uso de una bomba o de materiales poliméricos. En otra modalidad, un sistema de liberación controlada puede colocarse cerca del objetivo de la composición , con lo que solo se requiere una fracción de la dosis sistémica.

Las preparaciones inyectables pueden incluir formas de dosificación para inyecciones intravenosas, subcutáneas, intracutáneas e intramusculares, inyección local, infusiones por vía intravenosa, etcetera. Estas preparaciones inyectables se pueden preparar por métodos conocidos públicamente. Por ejemplo, las preparaciones inyectables se pueden preparar, por ejemplo, disolviendo, suspendiendo o emulsionando el anticuerpo o su sal descrita anteriormente en un medio acuoso estéril o en un medio oleoso usado de modo convencional para las inyecciones. Un medio acuoso para las inyecciones puede ser, por ejemplo, una solución salina fisiológica, una solución isotónica que contiene glucosa y otros agentes auxiliares, etcétera, que se puede usar junto con un agente solubilizante adecuado, como un alcohol (por ejemplo, etanol) , un polialcohol (por ejemplo, propilenglicol, polietilenglicol), un tensioactivo no iónico [por ejemplo, polisorbato 80, HCO-50 (un aducto de polioxietileno (50 moles) del aceite de ricino hidrogenado)], etcétera. Como medio oleoso se usa, por ejemplo, aceite de sésamo, aceite de soja, etcétera, el cual se puede usar junto con un agente solubilizante, como benzoato de bencilo, alcohol bencílico, etcétera. La inyección preparada de este modo se puede cargar en una ampolla adecuada.

De forma ventajosa, las composiciones farmacéuticas para el uso oral o parenteral, descritas anteriormente se preparan en formas farmacéuticas en una dosis unitaria adecuada para ajustarse a una dosis de los ingredientes activos. Tales formas farmacéuticas en una dosis unitaria incluyen, por ejemplo, comprimidos, píldoras, cápsulas, inyecciones (ampollas), supositorios, etcetera.

De acuerdo con los métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-PNAG, o un fragmento del mismo que se une a antígeno, se puede administrar al sujeto usando cualquier dispositivo o mecanismo aceptable. Por ejemplo, la administración puede realizarse usando una jeringa y una aguja, o con una pluma reusable y/o un dispositivo de administración para automyección. Los métodos de la presente invención incluyen el uso de numerosos dispositivos de suministro de pluma reusables y/o para autoinyección para administrar un anticuerpo anti-PNAG (o una formulación farmacéutica que comprende el antagonista) . Ejemplos de tales dispositivos incluyen, pero no se limitan a AUTOPEN® (Owen Mumford, Inc. , Woodstock, Reino Unido), pluma DISETRONIC® (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Suiza), pluma HUMALOG MIX 75/25®, pluma HUMALOG® , pluma HUMALI N 70/30® (Eli Lilly and Co. , Indianapolis, I N), NOVOPEN® I, I I y I I I (Novo Nordisk, Copenhague, Dinamarca), NOVOPEN JUNIOR® (Novo Nordisk, Copenhague, Dinamarca), pluma BD® (Becton Dickinson , Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN® , OPTI PEN PRO® , OPTI PEN STARLET® , y OPTICLIK® (Sanofi-Aventis, Francfort, Alemania), por nombrar unos cuantos. Los ejemplos de plumas desechables y/o dispositivos para la administración de una autoinyección que tienen aplicaciones para la administración subcutánea de una composición farmacéutica de la presente invención incluyen , pero no se limitan a la pluma SOLOSTAR® (Sanofi-Aventis), FLEXPEN® (Novo Nordisk) y KWI KPEN® (Eli Lilly), el automyector SURECLICK® (Amgen , Thousand Oaks, CA), PENLET® (Haselmeier, Stuttgart, Alemania), EPI PEN (Dcy, L. P.) y la pluma HUMI RA® (Abbott Labs, Abbott Park, IL), por nombrar unos cuantos.

El uso de un microinfusor para administrar una composición terapeutica a un sujeto también se contempla en el presente documento. Como se usa en la presente en el presente documento, el término "microinfusor" significa un dispositivo de administración subcutánea diseñado para administrar lentamente grandes volúmenes (por ejemplo, hasta aproximadamente 2.5 mi o más) de una formulación terapéutica a lo largo de un periodo de tiempo prolongado (por ejemplo, aproximadamente 10, 15, 20, 25, 30 o más minutos). Ver, por ejemplo, los documentos U .S. 6,629,949; US 6,659,982; y Meehan et al. , J. Controlled Release 46:107-1 16 (1996). Los microinfusores son particularmente útiles para la administración de grandes dosis de proteínas terapéuticas contenidas en soluciones de concentración alta (por ejemplo, aproximadamente 100, 125, 150, 175, 200 o más mg/ml) y/o soluciones viscosas.

Vil. Forma de Dosificación Unitaria Farmacéutica En ciertas modalidades de la invención, el anticuerpo anti-PNAG se envasa en una forma de dosificación unitaria. El término "forma dosificación unitaria" como se usa en la especificación y las reivindicaciones se refiere a unidades físicamente discretas, adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y animales, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo (por ejemplo, de aproximadamente 10 a aproximadamente 5000 mg de anticuerpo anti-PNAG (por ejemplo, aproximadamente 102 mg de anticuerpo anti-PNAG)) calculada para producir el efecto terapeutico deseado junto con el diluyente, soporte o vehículo requerido farmacéuticamente. Los requisitos para las formas de dosificaciones unitarias novedosas de esta invención están dictados y dependen directamente de (a) las características únicas del material activo y el efecto terapéutico particular a conseguir, y (b) la limitación inherente en la téenica de elaboración de un material activo tal para el uso terapéutico en humanos, como se describe en esta especificación, siendo estas características de la presente invención. Ejemplos de formas de dosificaciones unitarias, adecuadas de acuerdo con esta invención son frascos, comprimidos, cápsulas, pastillas, supositorios, paquetes de polvos, obleas, sellos, ampollas, múltiples segregados de cualquiera de las formas anteriores, y otras formas como se describen en el presente documento. Los ingredientes activos que se van a usar como agentes terapéuticos se pueden preparar fácilmente en la forma de dosificación unitaria con el uso de materiales farmacéuticos que están disponibles en la técnica y se pueden preparar por procedimientos establecidos.

Las preparaciones siguientes son ilustrativas de la preparación de las formas de dosificaciones unitarias de la presente invención, y no se interpretarán como limitantes. Varias formas de dosificación pueden prepararse realizando la presente invención. Por ejemplo, una dosificación unitaria por frasco puede contener 1 mi, 2 mi, 3 mi, 4 mi, 5 mi, 6 mi, 7 mi, 8 mi, 9 mi, 10 mi, 15 mi o 20 mi de anticuerpo anti-PNAG o un fragmento del mismo que tiene desde aproximadamente 10 a aproximadamente 5000 mg de anticuerpo anti-PNAG . En una modalidad, la forma de dosificación comprende 102 mg de anticuerpo anti-PNAG en 10 mi. Si es necesario, estas preparaciones se pueden ajustar a una concentración deseada añadiendo un diluyente esteril a cada frasco. En una modalidad, los ingredientes de la formulación de la invención se suministran por separado o mezclados entre sí en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, como polvo seco liofilizado o concentrado exento de agua en un envase herméticamente sellado como un frasco, una ampolla o un sobre, indicando la cantidad de agente activo. Cuando la composición se va a administrar por infusión, puede dispensarse con un frasco de infusión que contiene solución salina o agua estéril de calidad farmacéutica. Cuando la composición se administra mediante inyección , se puede proporcionar una ampolla de agua estéril para inyectables o solución salina, de forma que los ingredientes se pueden mezclar antes de la administración.

Las formulaciones de la invención incluyen composiciones de fármaco a granel útiles para preparar composiciones farmacéuticas (por ejemplo, composiciones que son adecuadas para administrar a un sujeto o un paciente) que se pueden usar en la preparación de formas de dosificaciones unitarias. En una modalidad preferida, una composición de la invención es una composición farmaceutica. Tales composiciones comprenden una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz de uno o varios agentes profilácticos o terapéuticos (por ejemplo, un anticuerpo anti-PNAG u otro agente profiláctico o terapéutico) y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Preferentemente, las composiciones farmacéuticas se formulan para que sean adecuadas para la vía de administración a un sujeto.

En una modalidad específica, la expresión "farmacéuticamente aceptable" significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno federal o estatal, o indicada en la Farmacopea de los Estados Unidos de América u otra farmacopea reconocida generalmente para uso en animales, y más particularmente en humanos. El término "vehículo" se refiere a un diluyente, adyuvante (por ejemplo, adyuvante de Freund (completo e incompleto)), excipiente o vehículo con el que se administra el agente terapéutico. Tales vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, como agua y aceites, incluyendo los derivados del petróleo, de origen animal, vegetal o sintético, como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. El agua es un vehículo inerte preferido cuando la composición farmacéutica se administra por vía intravenosa. También pueden usarse soluciones salinas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol como vehículos líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Los excipientes farmaceuticos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, carbonato cálcico, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche desnatada deshidratada, glicerol, propilenglicol, agua, etanol y similares. La composición, si se desea, también pueden contener cantidades minoritarias de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes amortiguadores del pH. Estas composiciones pueden tomar la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, comprimidos, píldoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida y similares. La formulación oral puede incluir vehículos habituales como las calidades farmacéuticas de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, celulosa, carbonato de magnesio, etcétera. Los ejemplos de vehículos farmacéuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences", de E.W. Martin. Tales composiciones contendrán una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz del anticuerpo, preferentemente en forma purificada, junto con una cantidad adecuada de vehículo para proporcionar la forma para una administración apropiada al paciente. La formulación debe adecuarse al modo de administración.

Generalmente, los ingredientes de las composiciones de la invención se administran por separado o mezclados entre sí en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, como un polvo seco liofilizado o un concentrado exento de agua en un recipiente sellado hermeticamente, como una ampolla o un sobrecito, indicando la cantidad de agente activo. Cuando la composición se va a administrar por infusión, puede dispensarse con un frasco de infusión que contiene solución salina o agua estéril de calidad farmacéutica. Cuando la composición se administra mediante inyección, se puede proporcionar una ampolla de agua estéril o solución salina para inyectables, de forma que los ingredientes se pueden mezclar antes de su administración.

La invención también proporciona que la formulación se envase en un recipiente herméticamente sellado como una ampolla o un sobrecito, indicando la cantidad de anticuerpo. En una modalidad, la formulación de la invención que comprende un anticuerpo se administra como un polvo liofilizado seco o un concentrado esterilizado exento de agua en un recipiente cerrado herméticamente y se puede reconstituir, por ejemplo, con agua o solución salina hasta la concentración apropiada para la administración a un sujeto. En una modalidad determinada, la formulación de la invención que comprende el anticuerpo anti-PNAG se administra como un polvo liofilizado estéril seco en un recipiente cerrado herméticamente en una dosificación unitaria de al menos 50 mg, más preferiblemente al menos 75 mg, al menos 100 mg, al menos 150 mg, al menos 200 mg, al menos 250 mg, al menos 300 mg, al menos 350 mg, al menos 400 mg , al menos 450 mg, al menos 500 mg, al menos 600 mg, al menos 700 mg , al menos 800 mg , al menos 900 mg, al menos 1000 mg, al menos 1 100 mg, al menos 1200 mg , al menos 1300 mg , al menos 1400 mg , al menos 1500 mg, al menos 1600 mg, al menos 1700 mg , al menos 1800 mg, al menos 1900 mg , al menos 2000 mg, al menos 2100 mg, al menos 2200 mg, al menos 2300 mg, al menos 2400 mg, al menos 2500 mg, al menos 2600 mg , al menos 2700 mg , al menos 2800 mg , al menos 2900 mg o al menos 3000 mg de anticuerpo. En una modalidad particular, el anticuerpo anti-PNAG se administra como una unidad de dosificación liofilizada esteril de 102 mg. La formulación liofilizada de la invención que comprende un anticuerpo debe estar almacenada a entre 2 y 8°C en su envase original y el anticuerpo se debe administrar en un plazo de 24 horas, incluyendo un plazo de 12 horas, 6 horas, 5 horas, 3 horas o 1 hora después de haber sido reconstituido. La formulación de la invención que comprende anticuerpos se puede formular como formas neutras o salinas. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las formadas con aniones, como los derivados de los ácidos clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etcétera, y las formadas con cationes, como los derivados de los hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio y férrico, isopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanol, histidina, procaína, etcétera.

VIII. Terapias de Combinación En ciertos aspectos, la presente invención incluye métodos para tratar o prevenir una infección bacteriana que expresa PNAG que comprenden administrar a un sujeto que requiera un tratamiento de este tipo, un anticuerpo anti-PNAG, o un fragmento del mismo que se une a antígeno, en combinación con al menos un agente terapeutico adicional. Los agentes terapéuticos adecuados adicionales incluyen, sin limitación , agentes antibacterianos (por ejemplo, antibióticos). Los agentes antibacterianos adecuados incluyen, sin limitación, penicilina G, penicilina V, ampicilina, amoxicilina, bacampicilina, cefotaxima, cielacilina, epicilina, hetacilina, pivampicilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina, fiucloxacilina, carbenicilina, ticarcilina, avlocilina, mezlocilina, piperacilina, amdinocilina, cefalexina, cefradina, cefadoxil, cefaclor, cefazolina, cefuroxima axetilo, cefamandol, cefonicida, cefoxitina, cefotaxima, ceftizoxima, cefinenoxina, ceftriaxona, moxalactama, cefotetan, cefoperazona, ceftazidma, imipenem, clavulanato, timentina, sulbactam, neomicina, eritromicina, metronidazol, cloranfenicol, clindamicina, lincomicina, vancomicina, trimetoprim-sulfametoxazol, aminoglucósidos, qumolonas, tetraciclinas y rifampicina (ver, por ejemplo, Goodman and Gilman's, Pharmacological Basics of Therapeutics, 8a ed. , 1993, McGraw Hill Inc). La cantidad de agente terapéutico adicional que se administra en la terapia de combinación se puede determinar fácilmente usando métodos de rutina conocidos y fácilmente disponibles en la téenica.

IX. Biomarcadores y Genotipado En ciertas modalidades, la invención proporciona metodos para tratar o prevenir una infección bacteriana que expresa PNAG mediante la administración a un sujeto de una composición que comprende un anticuerpo anti-PNAG, o un fragmento del mismo que se une a antígeno, en donde se modifica el nivel de uno o varios biomarcadores en el sujeto (por ejemplo, aumento, disminución, etcétera, según sea el caso) después de la administración.

Como apreciará una persona con experiencia ordinaria en la téenica, un aumento o disminución de un biomarcador se puede determinar comparando el nivel del biomarcador medido en el sujeto en un momento definido después de la administración del anticuerpo anti-PNAG, con el nivel del biomarcador medido en el sujeto antes de la administración (es decir, la “medición de referencia”). El momento definido en el que el biomarcador se puede medir puede ser, por ejemplo, aproximadamente 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 día, 6 días, 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 14 días, 15 días, 20 días, 21 días, 28 días, 35 días, 40 días, 42 días, 49 días o más después de la administración del anticuerpo anti-PNAG .

De acuerdo con ciertas modalidades de la presente invención , un sujeto puede mostrar un aumento o una disminución del nivel de uno o varios biomarcadores, después de la administración de un anticuerpo anti-PNAG al sujeto. Por ejemplo, despues de la administración de un anticuerpo anti-PNAG, un sujeto puede mostrar un aumento o una disminución de un biomarcador en aproximadamente un 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95% o más.

La presente invención incluye métodos para determinar si un sujeto es un paciente adecuado para el cual sería beneficiosa la administración de un anticuerpo anti-PNAG . Por ejemplo, si un individuo antes de recibir un anticuerpo anti-PNAG muestra un nivel de un biomarcador que significa una capacidad de respuesta potencial al tratamiento con un anticuerpo anti-PNAG, entonces ese individuo se identifica como un paciente adecuado para el cual la administración de un anticuerpo anti-PNAG sería beneficiosa.

En ciertas modalidades, la invención proporciona métodos para tratar o prevenir una infección bacteriana que expresa PNAG mediante la administración a un paciente que requiere tal tratamiento, de una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-PNAG , en donde se detecta en el sujeto la presencia o ausencia de uno o varios genotipos con polimorfismo de nucleótido único (SNPs por sus siglas en inglés).

La presente invención incluye métodos para determinar si un sujeto es un paciente adecuado para el cual sería beneficiosa la administración de un anticuerpo anti-PNAG. Por ejemplo, si un individuo, antes de recibir un anticuerpo anti-PNAG, muestra un genotipo SNP lo que significa una capacidad de respuesta potencial al tratamiento con un anticuerpo anti-PNAG, entonces ese individuo se identifica como un paciente adecuado para el cual sería beneficiosa la administración de un anticuerpo anti-PNAG.

X. Selección de una Población de Pacientes En ciertas modalidades, los metodos de la invención incluyen la selección de poblaciones específicas de pacientes para el tratamiento. Por ejemplo, los métodos de la invención pueden incluir la selección de un subconjunto de pacientes que tienen una infección bacteriana que expresa PNAG particular.

En ciertas modalidades, los métodos de la invención incluyen la selección de sujetos que han sido tratados previamente debido a una infección bacteriana que expresa PNAG, usando otros agentes terapéuticos, por ejemplo, antibióticos.

En ciertas modalidades, los métodos y las composiciones descritas en el presente documento se administran a poblaciones específicas de pacientes que son refractarias a uno o a varios agentes terapéuticos (distintos de los anticuerpos anti-PNAG descritos en este documento), por ejemplo, un antibiótico (por ejemplo, vancomicina o meticilina).

XI. Ejemplificación La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos que no se deben interpretar como una limitación adicional. El contenido de la Lista de Secuencias, las figuras y todas las referencias, patentes y solicitudes de patentes publicadas, citadas en toda esta solicitud, se incorporan expresamente en el presente documento como referencia.

Ejemplo 1. Producción de F598 El anticuerpo anti-PNAG F598 (descrito en la Patente Estadounidense Número 7,786,255, que se incorpora en el presente documento como referencia en su totalidad) se expresaba como una I g G 1 humana a partir de celulas CHO DG44. El anticuerpo se purificó usando cromatografía de afinidad con Proteína A y cromatografía de intercambio iónico posteriormente. La preparación final del anticuerpo se ajustaba a las normas adecuadas para la administración a sujetos humanos.

Ejemplo 2. Estudios Toxicológicos de F598 en Ratones Se realizaron dos estudios toxicológicos en ratones con dosis individuales siguiendo las recomendaciones de la FDA, del modo siguiente: A. Estudio de la Toxicidad Aguda con GLP en Ratones CD-1 con el Anticuerpo Monoclonal Humano F598 Los grupos de animales fueron inyectados a través de la vena de la cola con el control de vehículo o una dosis única de 1 , 10 y 100 mg/kg de F598, seguida de un período de observación de 14 días. Con todas las dosis no se observaron cambios desfavorables en la mortalidad/morbilidad y se anotaron los pesos corporales. En análisis de la patología clínica no se observaron cambios en la hematología, la química clínica y el peso de los órganos. No se observaron lesiones histopatológicas relacionadas con el tratamiento.

B. Estudio Toxicológico de Dosis Única sin GLP de F598 Mediante Administración por Vía Intravenosa (Bolo) a Ratones CD-1 con o sin Administración de Estafilococo aureus El potencial tóxico sistemico de F598 solo o seguido de la administración de S. aureus, se evaluó después de una sola administración intravenosa a ratones CD-1 . Dos grupos de animales, que comprende cada uno diez ratones machos y diez ratones hembra, recibieron F598 (10 mg/kg), en donde uno de estos grupos también recibió S. aureus (1 x 105 ufe) aproximadamente 4 horas después de la administración de F598. Un grupo de control constituido de manera similar recibió el vehículo (fosfato de sodio 10 mM, NaCI 150 mM , pH 6.5) con la misma dosis-volumen que F598 y también recibió la administración de S. aureus. Durante el estudio, se llevaron a cabo análisis del estado clínico, peso corporal, consumo de alimentos, temperatura corporal, hematología, química de la sangre, peso de los órganos y macropatología. No hubo muertes ni efectos que se consideraran que estaban claramente relacionados con el tratamiento o con una importancia toxicológica . Se concluyó que el tratamiento solo con F598 o seguido por la administración de S. aureus, no estaba asociado con ningún efecto sistémico que tuviera una relación clara con el tratamiento.

La dosis máxima tolerada y con nivel de efectos adversos no observados (NOAEL) de F598 no se determinó a partir de estos estudios, pero se consideró que era superior a 100 mg/kg para una única administración de una dosis intravenosa.

Ejemplo 3. Estudios de Reactividad Cruzada en Tejidos PNAG, el antígeno objetivo para el anticuerpo monoclonal F598, se expresa en los estafilococos, así como en otras especies bacterianas. Sin embargo, esta unión específica beta-1 -6 entre dos o más glucosaminas, no se ha descrito hasta la fecha, que se produzca en oligosacáridos de mamíferos. Para determinar si F598 mostraba alguna reactividad cruzada con el tejido normal, se realizaron estudios inmunohistoquímicos frente a un estudio completo de la FDA de muestras de tejidos humanos normales congelados.

Una evaluación de la reactividad cruzada tisular (TCR por sus siglas en ingles) completa se usó para la detección inmunohistoquímica de F598 y un control del isotipo con dos diluciones diferentes, a través de las muestras por triplicado de 33 tipos de tejido humano congelado. Los tejidos evaluados eran adrenal, de la vejiga, sangre, médula ósea, cerebro, cerebelo, corteza cerebral, mama, colon, endotelio, ojo, trompa de Falopio, corazón, riñón, hígado, pulmón , ganglio linfático, ovario, páncreas, paratiroides, pituitaria, placenta, próstata, músculo esquelético, piel, intestino delgado, médula espinal, bazo, testículos, timo, tiroides, uréter, cuello del útero y endometrio uterino. En los tejidos humanos normales, F598, a concentraciones de 0.1 y 0.3 ug/ml, no se unía a ninguno de los 33 tejidos humanos evaluados, con una tinción negativa o solo una tinción de fondo similar a la observada en el control de 5 isotipo IgG en todos los tejidos sometidos a ensayo.

Ejemplo 4. F598 es Protector en Modelos de Infección Preclínica Sistemica o Tisular in vivo.

La actividad protectora in vivo de F598 (administrado como un bolo intravenoso, 4 horas antes de la exposición a las ío bacterias) frente a infecciones del torrente sanguíneo, se determinó en un modelo murino de septicemia en ratones inmunocompetentes en los que S. aureus sensible a la meticilina (cepa MN8) se administró por vía intraperitoneal a 1 E + 06 UFC/ratón . La actividad protectora de F598 contra una infección 15 sistémica de los órganos se evaluó en modelos de infección de la piel y del tracto respiratorio, usando ratones inmunocompetentes infectados con S. aureus sensible a la meticilina (cepa Smith, administrada por vía intramuscular a 1 E + 02 UFC/ratón) y S. pneumoniae (cepa DSM1 1869, administrado por vía intranasal a 20 1 E + 08 UFC/ratón), respectivamente. Las diferencias en los recuentos de bacterias viables entre el control y los grupos tratados con fármaco se analizaron mediante ANOVA unidireccional, seguido por el ajuste de Dunnett para la multiplicidad . En la septicemia letal, las diferencias en la 25 supervivencia entre los grupos de control y los tratados con fármaco se presentaron usando un test Log Rank seguido por un ajuste de Bonferroni-Holm para la multiplicidad En el modelo de infección del tracto respiratorio con S. pneumoniae (Figura 1 ) y el modelo de infección de la piel con S. aureus (Figura 2), la administración de F598 4 horas antes del estímulo con bacterias, evitó el desarrollo de la infección en los ratones de una manera dependiente de la dosis. Se observó un efecto preventivo significativo a partir de F598 a 50 o 100 mg/ratón, para el modelo de infección pulmonar y del muslo, respectivamente, con un efecto máximo a 200 pg/ratón . En el modelo de infección del tracto respiratorio, el efecto de F598 era comparable al del antibiótico cefotaxima. El efecto protector de F598 tambien se mostró en un modelo de septicemia letal (Tabla 2) , en donde 300 pg/ratón de F598 evitaron un 70% de letalidad inducida por S. aureus.

Tabla 2. El efecto de dosis únicas de F598 sobre la prevención de septicemia con S. aureus en ratones Ejemplo 5. Estudio en Fase 1 de F598 A) Diseño General del Estudio Se realizó un estudio abierto, con dosis escalonadas en Fase 1 para evaluar la seguridad, la tolerabilidad, la farmacocinetica, la farmacodinámica y la inmunogenicidad de F598 administrado de forma intravenosa. El estudio se dividió en dos partes. La Parte 1 fue un solo estudio con dosis escalonadas. La Parte 2 determinó los efectos de una segunda dosis de F598. El nivel de dosis y el momento de la segunda dosis de F598 se determinaron mediante una revisión de los datos farmacocinéticos de la Parte 1 .

Aproximadamente 18 sujetos hombres y mujeres fueron inscritos en estudio unicéntrico en Fase I para obtener 18 sujetos evaluables. Este estudio fue diseñado para evaluar la seguridad y la tolerabilidad de F598 en voluntarios sanos. Aproximadamente 12 sujetos fueron incluidos en la Parte 1 .

Se podía seleccionar un sujeto para participar en el estudio si él/ella cumplía los siguientes criterios: voluntario adulto sano; al menos 18 años de edad; una función hematológica, hepática y renal normal fue definida mediante los intervalos normales de ensayos de laboratorio; sin potencial para tener hijos; o uso de un anticonceptivo médicamente aceptable; los hombres que no están esterilizados quirúrgicamente deben estar practicando un régimen anticonceptivo médicamente aceptable; las mujeres deben haberse hecho una prueba de embarazo en suero que sea negativa; estar dispuesto a regresar a las instalaciones del estudio para una evaluación posterior al tratamiento; los sujetos para la Parte 2 se consideraron asequibles y capaces de cumplir con el protocolo de tratamiento con dosificaciones repetidas y las evaluaciones prescritas; y el sujeto debía firmar un consentimiento de que está informado y estaba dispuesto y era capaz de cumplir con el protocolo de tratamiento y las evaluaciones prescritas.

Un sujeto se excluía del estudio si el/ella no cumplía alguno de los criterios siguientes: tratamiento previo con anticuerpos humanos/humanizados; historial de disfunción de órganos vitales; enfermedad o afección concomitante que incluye alteraciones de las pruebas de laboratorio, que en opinión del investigador podrían interferir con la modalidad del estudio o podrían ser un riesgo inaceptable para el paciente; infección o alguna afección médica subyacente grave que pueda afectar a la capacidad del sujeto para recibir el tratamiento del protocolo; mujeres que están embarazadas o en periodo de lactancia; tener una afección o trastorno inestable (por ejemplo, trastorno psiquiátrico, historial reciente de abuso de sustancias) o se cree que es poco fiable o incapaz de cumplir con los requisitos del protocolo; o ha recibido algún producto o dispositivo de la investigación 30 días antes de la inscripción en este estudio.

Parte 1- Administración Única de F598 Todos los sujetos fueron observados durante un mínimo de 50 días para estimar la semivida de eliminación terminal (T½) de una sola administración de F598. La dosis inicial fue de 1 .0 mg/kg/día que se administró mediante infusión intravenosa durante 30 minutos el Día 1 (ver Tabla 3). El primer sujeto de cada nivel de dosis se observó durante un mínimo de 3 días antes de que el resto de los sujetos de ese grupo se pudiera tratar. La dosificación escalonada tuvo lugar solo despues de que se hubiera observado al último sujeto en cada nivel de dosis durante un mínimo de 3 días y no se hubiera observado una toxicidad relacionada con el fármaco > CTCAE de grado 2 (determinada de acuerdo con NCI CTCAE, versión 4.02).

Tabla 3 Grupos de dosificación para el estudio en fase 1 de F598 Parte 2 - Dos Administraciones de F598 Después de revisar los datos de seguridad , tolerancia, PK, pD e inmunogenicidad de la Parte 1 , seis sujetos adicionales recibieron dos dosis de F598. El nivel de dosis y el momento de la segunda dosis de F598 se determinaron mediante una revisión de los datos farmacocinéticos de la Parte 1 . La dosificación y la programación para la Parte 2 se basan en la determinación de la semivída en suero de F598 - y el nivel serico de anticuerpos protectores, medido por el ensayo de opsonización pD. Un nivel sérico de 10 ug/ml de F598 se cree que es protector. El nivel 5 protector de anticuerpo puede ser más largo que la semivida. La medida y la evaluación de esos parámetros en la Parte 1 proporcionan una información para la selección de una dosis adecuada y una programación para la Parte 2.

F598 para inyección se administró como un líquido ío transparente, incoloro en ampollas de un solo uso de vidrio transparente, conteniendo cada 10 mi una solución de F598 (preparada a una concentración de 10.2 mg/ml en NaP04 20 mM, NaCI 150 mM , pH 6.5).

Todas las dosis de F598 se administraron por vía 15 intravenosa, a través de una infusión de 30 minutos. Sin embargo, la duración de la infusión podría ampliarse hasta un máximo de 2 horas, si era necesario por consideraciones de la tolerancia de un sujeto determinado. La solución para la infusión se preparó cada día usando condiciones asépticas. Antes de la preparación de la 20 solución de la infusión, el número requerido de frascos de F598 se llevó a temperatura ambiente mediante calentamiento al aire ambiente durante al menos 1 hora. A continuación, el volumen requerido de solución de F598 se retiró de los frascos, un volumen equivalente de solución salina normal (NaCI al 0.9%) fue 25 retirado de una bolsa de infusión de solución salina de 100 mi, y el anticuerpo F598 se añadió a la bolsa de infusión para proporcionar un volumen de infusión final de 100 mi. Una vez preparada, la solución de infusión se mantuvo a temperatura ambiente hasta que se completó la infusión . La infusión se inició en un plazo de 2 horas despues de la preparación de la solución para infusión.

B) Resultados del Estudio Ejemplar en Fase 1 Sujetos adultos sanos en 5 cohortes (N = 4 por dosis) recibieron dosis únicas de F598 (0.86, 4.3, 8.6, 12.9 o 17.2 mg/kg) en forma de infusión intravenosa durante 2 horas. Las muestras de la preinfusión y la postinfusión se obtuvieron a lo largo de los siguientes 50 días y se realizaron evaluaciones convencionales de la salud física de los voluntarios para determinar la seguridad. La presencia de F598 en el suero de los receptores se evaluó usando un ELISA específico de I g G 1 humana para detectar la unión a PNAG y las propiedades PK del AcMo analizado. Las evaluaciones farmacodinámicas (PD por sus siglas en inglés) se realizaron usando un ensayo de destrucción opsonofagocítica (OPK por sus siglas en inglés) ¡n vitro y un ensayo opsonofagocítico basado en citometría de flujo (OPA por sus siglas en inglés).

Los ensayos de destrucción opsonofagocítica se realizaron combinando suero humano aislado con complemento de conejo, células HL-60 diferenciadas y S. aureus (cepa MN8m) e incubando con rotación a 37°C durante 90 minutos. Después de la incubación, los tubos se sometieron a ultrasonidos durante 5 minutos en un baño de agua ultrasónico (Fisher Scientific, No. FB15050), se diluyeron 100 veces en TSB que contenía Tween 80 al 0.05% y se sembraron logarítmicamente en placas de TSA usando un dispensador en espiral (I UL, Ensemmenseur Spiral Easy Jet). El título de anticuerpos de PNAG en suero se determinó cuantificando el número de colonias resultantes en cada placa. En el ensayo, S. aureus (cepa MN8m) se preparó mediante el cultivo durante 16 horas a 37°C en TSB + 2% de NaCI, con agitación a 240 rpm. Cuando el cultivo bacteriano alcanzó aproximadamente una DOeoo de 0.4, las bacterias se diluyeron 200x en HBSS/0.1 % de gelatina. El complemento de conejo recién nacido (No. de lote 31061 No. 21832L, PelFreez Biologicals) fue preadsorbido sobre proteína G-sefarosa (Sigma No. P3296-5ML) durante 1 hora a 4°C. Antes del uso, se permitió que las células HL-60 se diferenciaran durante 3-4 días en RPM 11640/FBS al 10%/Glutamax 1 x/0.8% de DMF a una concentración celular de 4x105 células/ml.

Los ensayos opsonofagocíticos se realizaron mediante la combinación de suero humano aislado con complemento de conejo, células HL-60 diferenciadas y S. aureus marcado con fluorescencia (cepa MN8m) y la incubación con rotación a 37°C durante 30 minutos. El título de anticuerpos de PNAG en suero se determinó mediante la cuantificación de la cantidad de bacterias fagocitadas por las células HL60 usando un aparato FACS. En el ensayo se usó una cepa de S. aureus MN8 marcada con 5,6 carboxifluoresceína succinimidil ester (Molecular Probes No. C-131 1 ). Las células HL60 diferenciadas se lavaron previamente dos veces en amortiguador (la segunda etapa de lavado se realizó durante al menos 20 minutos) y se diluyeron hasta una concentración de 2.5 x 104 células/40 mI en amortiguador del ensayo.

Los resultados mostrados en la Tabla 4 y en la Figura 3, Figura 4 y Figura 5 muestran que F598 mostraba una semivida de eliminación terminal larga (~20-30 días), un aclaramiento sistémico bajo de 0.0699 - 0.0851 ml/h/kg y un volumen de distribución aparente bajo de 53.4 a 67.0 ml/kg. Se observó un aumento dependiente de la dosis de la actividad opsonofagocítica. Para cada dosis, esta actividad era máxima partiendo de la dosis posterior al primer momento (4 horas) y no disminuyó con el tiempo (hasta el día 50).

Tabla 4. Farmacocinética de F589 en sujetos humanos Ejemplo 6. Estudio en Fase 2a de F598 A) Diseño del estudio Un estudio en Fase 2a aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo se realizó para evaluar la farmacocinetica, la farmacodinámica y la seguridad de una dosis intravenosa única de F598 en pacientes hospitalizados en la unidad de cuidados intensivos y con ventilación mecánica. Se trataron seis pacientes en este estudio. Se podía seleccionar un sujeto para participar en el estudio si él/ella estaba hospitalizado en la unidad de cuidados intensivos y tenía ventilación mecánica.

F598 se formuló como un líquido a una concentración de 17.0 mg/ml. El fármaco se administró mediante infusión intravenosa en 250 mi de solución salina normal (NaCI al 0.9%) más de 2 horas para ambos regímenes de dosis. Los pacientes recibieron una dosis única del fármaco a una concentración de o bien 8.6 mg/kg o 12.9 mg/kg.

El placebo era una solución salina (NaCI al 0.9%) , que se administró mediante infusión intravenosa en 250 mi durante 2 horas.

Los pacientes fueron observados durante un total de 91 días. Los pacientes fueron seleccionados 1 día antes de la dosificación , proporcionándoles una inyección intravenosa de F598 el día 1 , con una visita de seguimiento a los 90 días.

Se calcularon los siguientes parámetros farmacocinéticos (PK) para F598 usando un método no compartimentalizado: concentración serica al final de la infusión (Ceo ), área bajo la curva de concentración sérica en función del tiempo, desde el tiempo 0 hasta el tiempo al último en tiempo real , tiempo de la última concentración medida en suero (tiast), área bajo la curva de la concentración sérica en función del tiempo extrapolado al infinito (AUC por sus siglas en inglés), semivida terminal (t /2z), aclaramiento corporal total de un fármaco a partir del suero (CL), y volumen de distribución en estado estacionario (Vss).

Los criterios de valoración de la eficacia/farmacodinámica fueron los siguientes. No había criterio de valoración primario. Los criterios de valoración secundarios fueron: farmacodinámica: títulos opsónicos a lo largo del tiempo; inmunogenicidad: anticuerpos anti-humanos humanos (HAHA por sus siglas en inglés); eficacia exploratoria: infecciones documentadas causadas por agentes patógenos que expresan PNAG hasta el día 28; y eficacia exploratoria: duración de la ventilación mecánica, estancia en la UCI , estancia hospitalaria, mortalidad a los 28 días y 90 días por cualquier causa.

Los criterios de valoración de la seguridad fueron : reacciones agudas a la infusión , eventos adversos emergentes del tratamiento (TEAE por sus siglas en inglés) hasta el día 90 y hematología y química de la sangre convencionales, y cultivos de sangre y cultivos de aspirados endotraqueales (ETA por sus siglas en inglés) (en pacientes con ventilación mecánica).

Los tiempos de muestreo para la farmacocinetica/farmacodinámica y los métodos bioanalíticos fueron los siguientes: • PK: Tiempos de muestreo: las muestras de sangre se recogieron antes de la dosis, 1 , 2 horas después de la dosis (al final de la infusión) y 8 horas el Día 1 , a continuación, los Días 2, 5, 7, 14, 21 , 28, 56, 70 y 90 después de la dosis.

Métodos bioanalíticos: las concentraciones séricas de F598 se determinaron mediante un ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) validado con un límite inferior de cuantificación (LLOQ) de 0.0858 mg/ml • Anticuerpos anti-F598 humanos (HAHA): Tiempos de muestreo: las muestras de sangre se recogieron antes de la dosis, a continuación, los días 14, 28, 56 y 90 después de la dosis.

Métodos bioanalíticos: el suero HAHA fue detectado por un inmunoensayo por electroquimioluminiscencia validado (ECL).

PD: - Tiempos de muestreo: prueba de opsonofagocitosis (OPA): Día 1 : antes de la dosis, 2 horas (después de finalizar la infusión), Día 2, 7, 14, 28, 56, 90; prueba de destrucción (OPK) muéstreos: Día 1 : antes de la dosis, 2 horas (después de finalizar la infusión), Día 14, Día 28, Día 90.

Métodos bioanalíticos OPA: Matriz: suero / Téenica analítica: OPA / Límite inferior de cuantificación : NA / Volumen del ensayo: NA / Sitio del bioanálisis: Flowapps / Metodo de referencia: FA-440.

Métodos bioanalíticos OPK: Matriz: suero / Téenica analítica: OPA / Límite inferior de cuantificación: NA / Volumen del ensayo: NA / Sitio del bioanálisis: Flowapps / Método de referencia: FA-445.

Los métodos estadísticos fueron del modo siguiente. Los análisis primarios eran resúmenes de las variables PK (Ce0i, AUCiast, AUC, CL, Vss, t1 /22 y tiast) usando estad ística descriptiva por dosis. Los análisis se basaron en la población PK que consistía en todos los pacientes aleatorizados con al menos una función de datos PK evaluable. La población de seguridad se definió como todos los pacientes que se habían asignado aleatoriamente y a los que se había administrado la medicación del estudio mediante infusión, independientemente de si se había completado la infusión o no. Los datos de seguridad se resumieron mediante el tratamiento real o dosis recibida, a menos que se indicara lo contrario. Las tablas de incidencia de eventos adversos fueron presentadas a través del tratamiento real o dosis recibida, clasificación por sistema y órgano (SOC por sus siglas en inglés) y término preferido (PT).

B) Resultados Los resultados del estudio en Fase 2a fueron los siguientes. Seis pacientes recibieron la infusión de F598; 2 recibieron el placebo, 2 recibieron 8.6 mg/kg de F598 y 2 recibieron 12.9 mg/kg de F598. Solo los pacientes a los que se administró la infusión de F598 se consideraron para PK, seguridad y otras determinaciones exploratorias.

Los parámetros PK de F598 despues de una sola dosis IV se resumen en la Tabla 5 a continuación.

Tabla 5. Valores individuales de los parámetros farmacocinéticos de F598 a intervalo; las muestras PK no se recogieron más allá del momento correspondiente a t ast aunque estaba previsto recogerlas hasta el Día 90 (T2160 h); b No calculado, debido a que no se tomaron muestras al final de la infusión en un sujeto c No calculado, debido a la extrapolación de AUC > 30% en un sujeto Todos los valores se expresan con tres cifras significativas

Claims

REIVINDICACIONES

1 . Un metodo para tratar o prevenir una infección bacteriana que expresa poli-N-acetil glucosamina (PNAG) en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-PNAG, en donde el anticuerpo se administra a una dosis de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 20 mg/kg .

2. El método de la reivindicación 1 , en donde el anticuerpo se administra a una dosis de aproximadamente 10, aproximadamente 15, aproximadamente 17 o aproximadamente 20 mg/kg.

3. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la dosis administrada alcanza un nivel sérico de anticuerpos anti-PNAG de al menos 10 mg/ml.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la actividad opsonizante del suero del sujeto permanece esencialmente constante durante al menos 50 días después de la administración del anticuerpo.

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo tiene una semivida sérica de al menos 25 días.

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo se administra como una dosis única.

7. El metodo de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo se administra en dosis múltiples.

8. El método de la reivindicación 7, en donde la dosificación y la programación de al menos una dosis se basa en una determinación de la semivida sérica del anticuerpo en el sujeto y/o de la actividad opsonizante in vitro del suero del sujeto frente a bacterias que expresan PNAG .

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo se administra mediante infusión intravenosa.

10. El método de la reivindicación 9, en donde la infusión intravenosa se administra durante aproximadamente 30 a aproximadamente 120 minutos.

1 1 . El método de la reivindicación 9, en donde el volumen de la infusión intravenosa es de aproximadamente 100 mi.

12. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el sujeto tiene una infección bacteriana que expresa PNAG.

13. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el sujeto tiene riesgo de desarrollar una infección bacteriana que expresa PNAG .

14. El método de la reivindicación 13, en donde la infección es una infección pulmonar, infección articular, infección del endocardio, infección de la piel, infección de tejidos blandos o septicemia.

15. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo se administra antes, después o durante un procedimiento médico. 5

16. El método de la reivindicación 15, en donde el procedimiento médico es la colocación de un implante quirúrgico en el sujeto.

17. El método de la reivindicación 16, en donde el implante quirúrgico es una endoprótesis, un catéter, una cánula, ío una prótesis o un marcapasos.

18. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el sujeto es un humano.

19. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la infección bacteriana que expresa PNAG 15 comprende Estafilococo.

20. El método de la reivindicación 19, en donde el estafilococo es S. epidermidis o S. aureus.

21 . El método de la reivindicación 20, en donde el S. aureus es S. aureus resistente a meticilina. 20

22. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además determinar el título sérico eficaz del anticuerpo administrado usando un ensayo opsonofagocítico in vitro.

23. El método de cualquiera de las reivindicaciones 25 precedentes, en donde el anticuerpo está en una formulación que comprende: i) 10.2 mg/ml de anticuerpo anti-PNAG; ii) NaP04 20 mM ; y iii) NaCI 150 mM ; en donde el pH de la formulación es 6.5.

24. El metodo de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo es un anticuerpo humano.

25. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo comprende una región variable de la cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de HCDR1 , HCDR2 y HCDR3 mostradas en SEC I D Nos. : 1 , 2 y 3, respectivamente.

26. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo comprende una región variable de la cadena ligera que comprende las secuencias de aminoácidos de LCDR1 , LCDR2 y LCDR3 mostradas en SEC ID Nos. : 4, 5 y 6, respectivamente.

27. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo comprende una región variable de la cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de HCDR1 , HCDR2 y HCDR3 mostradas en SEC I D Nos. : 1 , 2 y 3, respectivamente, y una región variable de la cadena ligera que comprende las secuencias de aminoácidos de LCDR1 , LCDR2 y LCDR3 mostradas en SEC ID Nos. : 4, 5 y 6, respectivamente.

28. El metodo según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID No. : 7. 5

29. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo comprende una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID No. : 8.

30. El método de cualquiera de las reivindicaciones ío precedentes, en donde el anticuerpo comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID No. : 7, y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID No. : 8. 15