MX2014011745A - Metodos para aumentar la eficacia de terapia basada en cd37. - Google Patents

Metodos para aumentar la eficacia de terapia basada en cd37.

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Abstract

Se proporcionan métodos para mejorar el éxito de terapias para el cáncer que se dirigen a CD37. También se proporcionan kits que comprenden un reactivo útil en los métodos.

Description

METODOS PARA AUMENTAR LA EFICACIA DE TERAPIA BASADA EN CD37 CAMPO DE LA INVENCION El campo de la invención generalmente se refiere a aumentar la eficacia del tratamiento de enfermedades de células B caracterizada por la sobreexpresión de CD37 humano. Más específicamente, la invención se refiere a un tratamiento más eficaz de pacientes propensos a o a quienes se les diagnosticó enfermedades de células B, por ejemplo, cáncer o enfermedad autoinmune, donde las células expresan CD37 como se determina por el ensayo de expresión génica, con un antagonista de CD37, por ejemplo, un inmunoconjugado de CD37.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION El cáncer es una de las causas principales de muerte en el mundo desarrollado con más de un millón de personas diagnosticadas con cáncer y 500.000 muertes por año solamente en Estados Unidos de América. En general se estima que más de 1 de cada 3 personas desarrollará alguna forma de cáncer durante su vida .
El antígeno de leucocito CD37 ("CD37"), también denominado GP52-40, tetraspanina-26 , o TSPAN26, es una proteína transmembrana de la superfamilia tetraspanina (Maecker et ál, 1997 FASEB J. 11:428-442). Es una proteína glicosilada intensamente con cuatro dominios transmembrana que se expresa en células B durante las etapas pre-B a células B maduras Ref . : 251139 periféricas, pero está ausente en la diferenciación terminal a células plasmáticas. (Link et ál . , 1987, J Pathol . 152:12-21). El antígeno CD37 solo se expresa débilmente en células T, células mieloides y granulocitos (Schwartz-Albiez et ál . 1988, J. Immunol., 140(3)905-914). Sin embargo, CD37 también se expresa en células B malignas tales como los que fundan el linfoma no Hodgkin (NHL) y leucemia linfoide crónica (CLL) (Moore et al. 1986, J Immunol . 137 (9) : 3013 -8) . Este perfil de expresión sugiere que CD37 representa una diana terapéutica prometedora para neoplasias de células B, y actualmente, existe una necesidad médica clara no satisfecha de productos terapéuticos más eficaces para las neoplasias de células B.
SUMARIO DE LA INVENCION La presente invención se basa en el descubrimiento de un intervalo dinámico de expresión de CD37 en cáncer y el descubrimiento de que los cánceres con niveles aumentados de expresión de CD37 reaccionan más al tratamiento con anticuerpos anti-CD37 o inmunoconjugados anti-CD37. La presente invención permite de forma ventajosa el tratamiento de pacientes que tienen mayor probabilidad de responder a tratamiento administrando agentes terapéuticos, es decir, anticuerpos anti-CD37 o inmunoconjugados anti-CD37, a pacientes que se descubre tienen un nivel de expresión aumentado de CD37.
En una modalidad, la invención proporciona un método para aumentar la eficacia de la terapia del cáncer con un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37, donde el método comprende administrarle a un sujeto que tiene cáncer un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37, donde se detectó la expresión aumentada del gen o proteína CD37 en una muestra cancerosa del sujeto usando un método de detección que distingue entre intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una muestra cancerosa que expresa CD37 en comparación con la intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una o más muestras de referencia.
En otra modalidad, la invención proporciona un método para identificar un cáncer como posiblemente sensible a tratamiento con un anticuerpo anti-CD37, o inmunoconjugado anti-CD37 que comprende (a) medir el nivel de expresión de CD37 en una muestra cancerosa obtenida del cáncer del sujeto, donde medir comprende el uso de un método de detección que distingue entre intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una muestra cancerosa que expresa CD37 en comparación con intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una o más muestras de referencia; (b) determinar una puntuación de intensidad de tinción o uniformidad de tinción de CD37 para la muestra cancerosa; y (c) comparar la puntuación de intensidad de tinción o uniformidad de tinción de CD37 determinada en el paso (b) con un valor relativo determinado midiendo la expresión de proteína CD37 en al menos una muestra de referencia, donde la al menos una muestra de referencia es una muestra de tejido, célula, o sedimento celular que no es sensible al tratamiento con un anticuerpo anti-CD37, o un inmunoconj gado anti-CD37, y donde una puntuación de intensidad de tinción de CD37 para la muestra determinada en el paso (b) que es mayor que el valor relativo identifica el cáncer como sensible a tratamiento con un anticuerpo anti-CD37, o un inmunoconjugado anti-CD37.
En otra modalidad, la invención proporciona un método para identificar un cáncer que probablemente responda a un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37 que comprende (a) poner en contacto una muestra biológica que comprende células del cáncer con un agente que se une a la proteína CD37 de superficie celular; (b) detectar la unión del agente que se une a la proteína CD37 de superficie celular de la muestra biológica de (a) ; (c) asignar una puntuación a la unión del paso (b) , donde la puntuación se asigna en función de la comparación con una o más muestras de referencia; y (d) comparar la puntuación en el paso (c) con la puntuación de un tejido o célula de referencia, donde una puntuación para el nivel de CD37 de cáncer que es mayor que la puntuación para una muestra de referencia que expresa CD37 negativo o bajo o una puntuación para el nivel de CD37 de cáncer que es igual o mayor que la puntuación de una muestra de referencia que expresa CD37 alto identifica el cáncer como probable de responder a un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD.
En otra modalidad, la invención proporciona un método para identificar un sujeto que tiene cáncer como probable a responder a un régimen de tratamiento de baja dosis de anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37, que comprende: (a) poner en contacto una muestra biológica que comprende células del cáncer con un agente que se une a la proteína CD37 de superficie celular; (b) detectar la unión del agente a la muestra biológica de (a) ; (c) asignar una puntuación a la unión del paso (b) , donde la puntuación se asigna en función de la comparación con una o más muestras de referencia; y (d) comparar la puntuación en el paso (c) con la puntuación de un tejido o célula de referencia, donde una puntuación para el nivel de CD37 de cáncer que es mayor que la puntuación para una muestra de referencia que expresa CD37 negativo o bajo o una puntuación para el nivel de CD37 de cáncer que es igual o mayor que la puntuación de una muestra de referencia que expresa CD37 alto identifica el cáncer como probable de responder a una baja dosis de anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37.
En otra modalidad, la invención proporciona un método para optimizar un régimen terapéutico con un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37 para un sujeto que tiene cáncer, que comprende: (a) detectar el nivel de expresión de CD37 en una muestra cancerosa obtenida del sujeto; (b) comparar el nivel de expresión de CD37 en la muestra cancerosa con la expresión de CD37 en una muestra de referencia; (c) determinar una puntuación de intensidad de tinción de CD37 para la muestra cancerosa; y (d) administrar una dosis aumentada de anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti- CD37 al sujeto si la puntuación es baja o administrar una dosis reducida de un anticuerpo anti-CD37 o un inmunoconjugado anti-CD37 al sujeto si la puntuación es alta.
En otra modalidad, la invención proporciona un método para detectar la expresión de CD37 de superficie celular en células cancerosas en una muestra cancerosa de un sujeto, que comprende: (a) obtener una muestra cancerosa, donde la muestra está fijada con formalina e incrustada en parafina; (b) poner en contacto la muestra cancerosa con un anticuerpo que se une específicamente a CD37 de superficie celular; (c) medir la unión del anticuerpo en (b) con CD37 de superficie celular en la muestra cancerosa usando un método de detección que puede distinguir entre intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una muestra que expresa CD37 en comparación con intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una o más muestras de referencia; y (d) asignar una puntuación de expresión de CD37 al CD37 luego de comparar el nivel de intensidad de tinción o uniformidad de tinción de CD37 de superficie celular en la muestra cancerosa con una o más muestras de referencia.
En algunas modalidades, la detección es mediante inmunohistoquímica (IHC) . La IHC puede ser IHC calibrada que puede distinguir diferentes niveles de expresión de CD37.
En algunas modalidades, el método de detección produce un intervalo de intensidad de tinción para muestras que tienen expresión baja de CD37 de superficie celular, expresión intermedia de CD37 de superficie celular, o expresión alta de CD37 de superficie celular.
En algunas modalidades, el método de detección distingue entre intensidad de tinción y uniformidad de tinción en una muestra cancerosa que expresa CD37 en comparación con una muestra de referencia.
En algunas modalidades, la muestra cancerosa o la muestra biológica tiene una puntuación de intensidad de tinción mayor que 1 para la expresión de CD37 mediante inmunohistoquímica . En algunas modalidades, la muestra cancerosa o la muestra biológica tiene una puntuación de intensidad de tinción de 2 , 3, o 3+ para la expresión de CD37 mediante inmunohistoquímica. En algunas modalidades, la muestra cancerosa o la muestra biológica tiene una puntuación de intensidad de tinción de 2, 3, o 3+ para la expresión de CD37 mediante inmunohistoquímica en una muestra fijada con formalina e incrustada en parafina. En algunas modalidades, la muestra cancerosa o la muestra biológica tiene una uniformidad de tinción para expresión de CD37 que es homogénea. En algunas modalidades, la muestra cancerosa o la muestra biológica tiene una puntuación de intensidad de tinción de 2, 3, o 3+ para CD37 y una uniformidad de tinción que es heterogénea u homogénea.
En algunas modalidades, la inmunohistoquímica se realiza manualmente. En algunas modalidades, la inmunohistoquímica se realiza usando un sistema automático.
En algunas modalidades, la muestra de referencia es una muestra de referencia positiva o una muestra de referencia negativa. En algunas modalidades, la muestra de referencia comprende células, sedimentos celulares o tejido.
En algunas modalidades, la detección comprende detectar la expresión de CD37 con un anticuerpo que se une específicamente a CD37 de superficie celular. En algunas modalidades, el anticuerpo además comprende un reactivo de detección que se selecciona del grupo que consiste en: una enzima, un fluoróforo, una etiqueta radioactiva, y un luminóforo. En algunas modalidades, el reactivo de detección se selecciona del grupo que consiste en: biotina, digoxigenina , fluoresceína, tritio y rodamina. En algunas modalidades, el anticuerpo es clon CT1.
En algunas modalidades, la concentración del anticuerpo es de alrededor de 1 a alrededor de 10 yg/mL o de alrededor de 2 , 1 a alrededor de 8,4 yg/mL, de alrededor de 4 a alrededor de 5 yg/mL, o 2,1, 4,2, o 8,4 ug/mL. En una modalidad, la concentración del anticuerpo (por ejemplo, clon CT1) es 4,2 g/mL.
En algunas modalidades, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en linfomas de células B, NHL, leucemia linfoblástica de células B precursoras/linforna y neoplasmas de células B maduras, leucemia linfocítica crónica de células B (CLL) /linforna linfocítico pequeño (SLL) , leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de células del manto (MCL) , linfoma folicular (FL) , (FL) de bajo grado, grado intermedio y alto grado, linfoma central folicular cutáneo, linfoma de células B de zona marginal, linfoma de células B de zona marginal de tipo MALT, linfoma de células B de zona marginal nodal, linfoma de células B de zona marginal de tipo esplénico, leucemia de células pilosas, linfoma de células B grande difuso (DLBCL) , linfoma de Burkitt (BL) , plasmacitoma, mieloma de células plasmáticas, trastorno linfoproliferativo post-transplante, macroglobulinemia de Waldenstrom y linfoma de células grandes anaplásico (ALCL) .
La presente invención también proporciona artículos de fabricación que comprenden un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37, un recipiente y un prospecto o etiqueta que indica que el anticuerpo o inmunoconjugado se puede usar para tratar un cáncer caracterizado por la expresión de CD37 a un nivel de 2 , 3 o 3+ medido por IHC.
La presente invención también proporciona una combinación de kits farmacéuticos y de diagnóstico que comprende un anticuerpo anti-CD37 de murino para usarse en el diagnóstico y un anticuerpo anti-CD37 o inmunocon ugado anti-CD37 para usarse en la terapia. En algunas modalidades, el anticuerpo de diagnóstico es un anticuerpo de detección que es capaz de detectar expresión de CD37 mediante IHC.
La presente invención también proporciona un kit de diagnóstico que comprende un anticuerpo de detección que se puede unir específicamente a CD37 de superficie celular, un reactivo para inmunohistoquímica (IHC) y una o más muestras de referencia estandarizadas, donde las muestras de referencia estandarizadas comprenden células, sedimentos celulares o muestras de tejido fijadas con formalina e incrustadas en parafina y donde una o más muestras de referencia estandarizadas son de células, sedimentos celulares o tejidos que no expresan CD37, con expresión baja de CD37, con expresión intermedia de CD37 o expresión alta de CD37. Ejemplos de las muestras de referencia se describen en la presente en los Ejemplos.
En algunas modalidades, el artículo o kit es uno donde la IHC es IHC calibrada que puede distinguir diferentes niveles de expresión de CD37. En algunas modalidades, la IHC calibrada produce un intervalo de intensidad de tinción para muestras que tienen expresión baja de CD37 de superficie celular, expresión intermedia de CD37 de superficie celular, o expresión alta de CD37 de superficie celular. En algunas modalidades, la IHC distingue entre intensidad de tinción y uniformidad de tinción en una muestra que expresa CD37 en comparación con una muestra de referencia. En algunas modalidades, la IHC se realiza en una muestra incrustada en parafina fijada con formalina. La IHC se puede realizar manualmente o se puede realizar usando un sistema automático .
En algunas modalidades, el artículo o kit comprende un inmunoconjugado CD37 que comprende un anticuerpo anti-CD37, un enlazador y una citotoxina. En algunas modalidades, el anticuerpo anti- CD37 es CD37-3, CD37-38, o CD37-50 quimérico o humanizado.
En algunas modalidades, el anticuerpo anti-CD37 es un anticuerpo que se selecciona del grupo que consiste en: un anticuerpo que comprende el polipéptido de SEQ ID NO: 56 y el polipéptido de SEQ ID NO: 73, un anticuerpo que comprende el polipéptido de SEQ ID NO: 57 y el polipéptido de SEQ ID NO: 74, un anticuerpo que comprende el polipéptido de SEQ ID NO: 58 y el polipéptido de SEQ ID NO: 74, un anticuerpo que comprende el polipéptido de SEQ ID NO: 62 y el polipéptido de SEQ ID NO: 78, un anticuerpo que comprende el polipéptido de SEQ ID NO: 63 y el polipéptido de SEQ ID NO: 79, y un anticuerpo que comprende el polipéptido de SEQ ID NO: 65 y el polipéptido de SEQ ID NO: 81.
En algunas modalidades, el enlazador se selecciona del grupo que consiste en un enlazador escindible, un enlazador no escindible, un enlazador hidrofílico, y un enlazador basado en ácido dicarboxílico . En algunas modalidades, el enlazador se selecciona del grupo que consiste en: 4- (2-piridilditio) pentanoato de N-succinimidilo (SPP) o 4- (2-piridilditio) -2 -sulfopentanoato de N-succinimidilo (sulfo- SPP); 4-(2-piridilditio)butanoato de N-succinimidilo (SPDB) o 4- (2-piridilditio) -2-sulfobutanoato de N-succinimidilo (sulfo-SPDB) ; 4-(maleimidometil) ciclohexanocarboxilato de N-succinimidilo (SMCC) ; 4-(maleimidometil) ciclohexanocarboilato de N-sulfosuccinimidilo (sulfoSMCC) ; N-succinimidil-4- (yodoacetil) -aminobenzoato de (SIAB) ; y N-succinimidil- [ (N-maleimidopropionamido) -tetraetilenglicol] éster de (NHS-PEG4-maleimida) . En algunas modalidades, el enlazador es 4- (maleimidometil) ciclohexanocarboxilato de N-succinimidilo (SMCC) . En algunas modalidades, la citotoxina se selecciona del grupo que consiste en maitansinoide, análogo de maitansinoide, benzodiazepina , taxoide, CC-1065, análogo de CC-1065, duocarmicina, análogo de duocarmicina, calicheamicina, dolastatina, análogo de dolastatina, auristatina, derivado de tomaimicina, y derivado de leptomicina o un profármaco de citotoxina. En algunas modalidades, la citotoxina es un maitansinoide. En algunas modalidades, el maitansinoide es (2 ' ) -deacetil- (21 ) - (3-mercapto-l-oxopropil) -maitansina o N (21 ) -deacetil-N2 - (4-mercapto-4-metil-l-oxopentil) -maitansina. En algunas modalidades, el maitansinoide es N (2 ') -deacetil-N (2 ')- (3-mercapto-l-oxopropil) -maitansina (DM1) . En algunas modalidades, el inmunoconjugado comprende el anticuerpo huCD37-3, SMCC, y DM1.
En algunas modalidades, una combinación de kit farmacéutico y de diagnóstico comprende además una o más muestras de referencia. En algunas modalidades, la muestra de referencia es una muestra de referencia positiva o una muestra de referencia negativa. En algunas modalidades, la muestra de referencia comprende células, sedimentos celulares o tejido.
En algunas modalidades, un anticuerpo de detección para su uso en el kit como se proporciona en la presente además comprende un reactivo de detección que se selecciona del grupo que consiste en: una enzima, un fluoróforo, una etiqueta radioactiva, y un luminóforo. En algunas modalidades, el reactivo de detección se selecciona del grupo que consiste en: biotina, digoxigenina, fluoresceína, tritio, y rodamina. La concentración de anticuerpo en un kit puede ser de alrededor de 1 a alrededor de 10 µg/mL o alrededor de 2,1 a alrededor de 8,4 g/mL, alrededor de 4 a alrededor de 5 yg/mL, o 2,1, 4,2, o 8,4 µg/mL o 4,2 g/mL.
En algunas modalidades, un kit comprende un control de expresión baja de CD37, y el control de expresión baja de CD37 es células tumorales Namalwa o RL. En algunas modalidades, un kit comprende un control de expresión alta de CD37, y el control de expresión alta de CD37 se selecciona del grupo que consiste en: las líneas celulares Daudi y Ramos y una línea celular transfectada de forma estable o transitoria con CD37. En algunas modalidades, la línea celular transfectada de forma estable o transitoria con CD37 es 300-19/CD37.
En algunas modalidades, el anticuerpo o inmunoconjugado anti-CD37 es un anticuerpo o inmunoconjugado como se describe en la solicitud publicada internacional n.° WO 2011/112978 o O 2012/135740, cada una de las cuales se incorpora a la presente mediante esta referencia en su totalidad.
BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS Figura 1. Tinción de inmunohistoquimica (IHC) de CD37 en células 300-19 no transfectadas (izquierda) y células 300-19 transfectadas con CD37 humano (huCD37) .
Figura 2. Tinción de IHC de CD37 en pulpa blanca de tejido de bazo humano con aumento lOx (izquierda) y 40x (derecha) .
Figura 3. Resultados de la tinción de IHC para CD37 obtenidos con el método manual optimizado para células Daudi, Ramos y RL. Los niveles de expresión de CD37 obtenidos por citometría de flujo cuantitativa se proporcionan abajo de cada imagen.
Figura 4. Histogramas de citometría de flujo obtenidos luego de la tinción con anticuerpo anti-CD37 etiquetado con PE (líneas en negrita) en comparación con muestras no teñidas (líneas finas) usando líneas Daudi, Ramos y RL.
Figura 5. Resultados de tinción de IHC para CD37 en células Daudi y para CD20 en células RL obtenidos con el método manual optimizado. Las células que expresan niveles de antígeno de CD37 y CD20 similares muestran un patrón de tinción similar.
Figura 6. Resumen de puntuaciones de tinción para CD37 obtenidos con el método manual optimizado para muestras de linfoma en comparación con puntuaciones de tinción para CD20.
Figura 7. Fotos representativas de muestras de pacientes con NHL teñidas para CD37 usando el método manual optimizado.
Figura 8. Actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de huCD37-3-SMCC-DM1 en ratones CB.17 SCID hembra que tienen xenoinjertos de SU-DHL-4.
Figura 9. Actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de anticuerpo huCD37-3, huCD37-3-SMCC-DMl, y quimioterapéuticos estándar en ratones SCID que tienen xenoinjertos de tumor humano DoHH2.
Figura 10. Actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de huCD37-3-SMCC-DMl en ratones SCID que tienen xenoinjertos de tumor humano DoHH2.
Figura 11. Actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de anticuerpo huCD37-3, huCD37-3 -S CC-DM1 , Ofatumumab, y Bendamustina en ratones SCID que tienen xenoinjertos de tumor humano JVM-3.
Figura 12. Actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de huCD37-3-SMCC-DMl en ratones SCID que tienen xenoinjertos de tumor humano JVM-3.
Figura 13. Distribución de puntuación en linfoma de células grandes (DLBCL) usando métodos de tinción automáticos.
Figura 14. Distribución de puntuación en linfoma de células pequeñas que incluye linfoma folicular (FL) . Linfoma de células de manto (MCL) , linfoma de células B de zona marginal tipo MALT, linfoma de células B de zona marginal, linfoma de células pequeñas no clasificadas, y muestras de linfoma no Hodgkin no clasificado (NHL) usando métodos de tinción automáticos.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención proporciona métodos para tratar enfermedades de células B tales como cáncer y enfermedades autoinmunes y para aumentar la eficacia o la probabilidad de respuesta al tratamiento de las enfermedades caracterizadas por la sobreexpresión de CD37. La presente invención se basa en el descubrimiento de métodos para detectar un intervalo dinámico de expresión de CD37 en un cáncer y enfermedades autoinmunes en comparación con tejido normal negativo y el descubrimiento de que las células B con altos niveles de expresión de CD37 reaccionan más al tratamiento con anticuerpos anti-CD37 o inmunoconjugados anti-CD37. También se proporcionan kits que comprenden uno o más reactivos útiles para poner en práctica los métodos de la invención .
I. Definiciones Para facilitar el entendimiento de la presente invención, se definen a continuación una cantidad de términos y frases.
El término CD37 tal como se usa en la presente, se refiere a cualquier CD37 nativo, salvo que se indique lo contrario. CD37 también se denomina GP52-40, antígeno de leucocitos CD37, y Tetraspanina-26. El término "CD37" comprende CD37 "de longitud completa" no procesado, así como cualquier forma de CD37 que resulte del procesamiento en la célula. El término también abarca las variantes de CD37 que ocurren de forma natural, por ejemplo, variantes de empalme, variantes alélicas e isoformas. Los polipéptidos de CD37 descritos en la presente se pueden aislar de una variedad de fuentes, tales como muestras biológicas humanas o de otra fuente, o se pueden preparar mediante métodos recombinantes o sintéticos.
El término "expresión aumentada" o "alta expresión" de CD37 se refiere a una muestra que contiene niveles elevados de expresión de CD37 en comparación con un control de referencia negativo o bajo o en comparación con una muestra sana o no enferma del miso tejido o tipo celular. En un ejemplo, la expresión de CD37 se mide por IHC y se le da una puntuación de intensidad de tinción o una puntuación de uniformidad de tinción en comparación con controles calibrados que exhiben puntuaciones definidas (por ejemplo, se le da una puntuación de intensidad de 3 a la muestra de prueba si la intensidad se comparara con el nivel de control calibrado 3 o se le da una puntuación de intensidad de 2 a la muestra de prueba si la intensidad se puede comparar con el control calibrado de nivel 2) . Por ejemplo, una puntuación de 1, 2, 3, o 3+ o más, preferentemente una puntuación de 2 , 3, 3+, o más, por inmunohistoquímica indica la expresión aumentada de CD37. Una uniformidad de tinción que es heterogénea u homogénea también indica expresión de CD37 aumentada. Las puntuaciones de intensidad de tinción y uniformidad de tinción se pueden usar solas o en combinación (por ejemplo, 2 homo, 2 hetero, 3 homo, 3 hetero, etc.) . En otro ejemplo, un aumento en la expresión de CD37 se puede determinar por detección de un aumento de al menos 2 veces, al menos 3 veces, o al menos 5 veces con relación a valores de control (por ejemplo, nivel de expresión en una muestra biológica, tejido o célula de un sujeto sin cáncer o con un cáncer que no tiene valores elevados de CD37) .
El término "sobreexpresión" de CD37 en una muestra de tumor, tejido o célula particular se refiere a CD37 (un polipéptido de CD37 o un ácido nucleico que codifica el polipéptido) que está presente en un nivel mayor que el que está presente en tejido no enfermo o células del mismo tipo u origen u otras células en la proximidad de un tumor o cáncer. La sobreexpresión se puede ocasionar, por ejemplo, por mutación, amplificación génica, transcripción aumentada, o traducción aumentada.
Una "muestra de referencia" se puede usar para correlacionar y comparar los resultados obtenidos en los métodos de la invención de una muestra de prueba. Las muestras de referencia pueden ser células (por ejemplo, líneas celulares, sedimentos celulares) o tejido. Los niveles de CD37 en la "muestra de referencia" pueden ser una cantidad absoluta o relativa, un intervalo de cantidad, una cantidad mínima y/o máxima, una cantidad promedio, y/o una cantidad media de CD37. Los métodos de diagnóstico de la invención implican una comparación entre los niveles de expresión de CD37 en una muestra de prueba y un "valor de referencia" . En algunas modalidades, el valor de referencia es el nivel de expresión del CD37 en una muestra de referencia. Un valor de referencia puede ser un valor predeterminado y también se puede determinar a partir de muestras de referencia (por ejemplo, muestras biológicas de control) sometidas a prueba en paralelo con las muestras de prueba. Un valor de referencia puede ser un valor de corte simple, tal como valor medio o promedio o un intervalo de valores, tal como un intervalo de confianza. Los valores de referencia se pueden establecer para varios subgrupos de individuos, tales como individuos predispuestos al cáncer, individuos con cáncer de etapa temprana o tardía, individuos masculinos y/o femeninos, o individuos sometidos a una terapia contra el cáncer. Los ejemplos de muestras o valores de referencia negativa y muestras o valores de referencia positiva se describen en la presente.
En algunas modalidades, la muestra de referencia es una muestra de un tejido sano, en particular un tejido correspondiente que no está afectado por cáncer. Estos tipos de muestras de referencia se denominan muestras de control negativo o muestras de referencia. En otras modalidades, la muestra de referencia es una muestra de un tumor que expresa CD37. Estos tipos de muestras de referencia se denominan muestras de control positivo. Las muestras de control positivo también se pueden usar como un indicador comparativo para el tipo (hetero contra homo) y/o grado (0, 1, 2, 3, 3+) de intensidad de tinción, que se correlaciona con el nivel de expresión de CD37. Las muestras comparativas de control positivo también se denominan muestras de referencia calibradas. Como se muestra en los Ejemplos, las referencias de C37 bajo o sin CD37 incluyen pulpa roja del bazo (por ejemplo, monocitos y glóbulos rojos) y células T y las referencias de expresión de CD37 alto incluyen pulpa blanca del bazo (por ejemplo, células B) . Para las líneas celulares, ejemplos de no expresores incluyen células 300-19 y los expresores altos incluyen células Daudi, Ramos, y RL. Otra referencia de CD37 alto positivo es una línea celular transfectada de forma estable o transitoria con CD37 (por ejemplo, 300-19/CD37) . Niveles de referencia positivos y negativos apropiados de CD37 para un cáncer particular se pueden determinar midiendo los niveles de CD37 en uno o más sujetos apropiados, y los niveles de referencia se pueden adaptar a poblaciones específicas de sujetos (por ejemplo, un nivel de referencia se puede emparejar por edad de modo que se puedan hacer comparaciones entre niveles de CD37 en muestras de sujetos de determinada edad y niveles de referencia para un estado de enfermedad particular, fenotipo o falta de este en determinado grupo de edad) . Los niveles de referencia también se pueden adaptar a técnicas específicas que se usan para medir niveles de CD37 en muestras biológicas (por ejemplo, inmunoensayos , etc.) , donde los niveles de CD37 pueden diferir según la técnica específica que se use.
El término "anticuerpo primario" en la presente se refiere a un anticuerpo que se une específicamente al antígeno de la proteína diana en una muestra. Un anticuerpo primario es generalmente el primer anticuerpo usado en un procedimiento inmunohistoquímico (IHC) . En una modalidad, el anticuerpo primario es el único anticuerpo usado en un procedimiento IHC. El término "anticuerpo secundario" en la presente se refiere a un anticuerpo que se une específicamente a un anticuerpo primario, formando así un puente entre el anticuerpo primario y un reactivo posterior, si hubiera. El anticuerpo secundario es generalmente el segundo anticuerpo usado en un procedimiento inmunohistoquímico . El término "anticuerpo terciario" en la presente se refiere a un anticuerpo que se une específicamente a un anticuerpo secundario, formando así un puente entre el anticuerpo secundario y un reactivo posterior, si hubiera.
Una "muestra" de la presente invención es de origen biológico en modalidades específicas, tal como de organismos eucariotas. En modalidades preferidas, la muestra es una muestra humana, pero también se pueden usar muestras animales en la práctica de la invención. Fuentes no taxativas de una muestra para su uso en la presente invención incluyen tejido sólido, aspirados de biopsia, extractos fluidos, sangre, plasma, suero, líquido cefalorraquídeo, fluido linfático, las secciones externas de la piel, tractos respiratorio, intestinal, y genitourinario, lágrimas, saliva, leche, tumores, órganos, cultivos celulares y/o constituyentes de cultivos celulares, por ejemplo. Una "muestra cancerosa" es una muestra que contiene una célula cancerosa. La presente invención es útil para muestras de tejido sólido donde la cantidad de material disponible es pequeña. El método se puede usar para examinar un aspecto de expresión de CD37 o un estado de una muestra, que incluye, de modo no taxativo, comparar diferentes tipos de células o tejidos, comparar diferentes etapas de desarrollo, y detectar o determinar la presencia y/o tipo de enfermedad o anormalidad.
Para los fines de la presente, una "sección" de una muestra de tejido se refiere a una sola parte o porción de una muestra de tejido, por ejemplo, un pequeño corte de tejido o células de una muestra de tejido. Se entiende que se pueden tomar varias secciones de muestras de tejido y someterse a análisis de acuerdo con la presente invención. En algunos casos, la porción o sección seleccionada de tejido comprende una población homogénea de células. En otros casos, la porción seleccionada comprende una región de tejido, por ejemplo, el lumen es un ejemplo no taxativo. La porción seleccionada puede ser tan pequeña como una célula o dos células, o puede representar muchos miles de células, por ejemplo. En la mayoría de los casos, la recolección de células es importante, y mientras la invención ha sido descrita para su uso en la detección de componentes celulares, el método también se puede usar para detectar componentes no celulares de un organismo (por ejemplo, componentes solubles en la sangre como un ejemplo no taxativo) .
"Correlacionar" significa comparar, de cualquier modo, el rendimiento y/o los resultados de un primer análisis con el rendimiento y/o los resultados de un segundo análisis. Por ejemplo, se pueden usar los resultados de un primer análisis al realizar el segundo análisis y/o se pueden usar los resultados de un primer análisis para determinar si se debería realizar un segundo análisis y/o se pueden comparar los resultados de un primer análisis con los resultados de un segundo análisis. En una modalidad, la expresión aumentada de CD37 se correlaciona con la probabilidad aumentada de la eficacia de una terapia anti-cáncer dirigida a CD37.
El término "anticuerpo" se refiere a una molécula de inmunoglobulina que reconoce y se une específicamente a una diana, tal como una proteína, polipéptido, péptido, carbohidrato, polinucleótido, lípido, o combinaciones de los anteriores a través de al menos un sitio de reconocimiento de antígeno dentro de la región variable de la molécula de inmunoglobulina. Tal como se usa en la presente, el término "anticuerpo" comprende anticuerpos policlonales intactos, anticuerpos monoclonales intactos, fragmentos de anticuerpo (tales como Fab, Fab 1 , F(ab' )2, y fragmentos Fv) , mutantes Fv de cadena simple (scFv) , anticuerpos multispecíficos tales como anticuerpos bispecíficos generados a partir de al menos dos anticuerpos intactos, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos, proteínas de fusión que comprenden una porción de determinación de antígeno de un anticuerpo, y cualquier otra molécula de inmunoglobulina modificada que comprende un sitio de reconocimiento de antígeno siempre que los anticuerpos exhiban la actividad biológica deseada. Un anticuerpo puede ser de cualquiera de las cinco clases fundamentales de inmunoglobulinas : IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, o subclases (isotipos) de estas (por ejemplo, IgGl, IgG2 , IgG3, IgG4 , IgAl y IgA2) , según la identidad de sus dominios constantes de cadena pesada denominados alfa, delta, epsilon, gamma, y mu, respectivamente. Las diferentes clases de inmunoglobulinas tienen estructuras de subunidades y configuraciones tridimensionales diferentes y conocidas. Los anticuerpos pueden ser sin tratamiento o conjugados con otras moléculas tales como toxinas, radioisótopos, etc.
Un anticuerpo "bloqueador" o un anticuerpo "antagonista" es uno que inhibe o reduce la actividad biológica del antígeno al que se une, tal como CD37. En determinadas modalidades, los anticuerpos bloqueadores o anticuerpos antagonistas inhiben sustancial o completamente la actividad biológica del antígeno. De forma conveniente, la actividad biológica se reduce en 10%, 20%, 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, o hasta 100%.
El término "anticuerpo anti-CD37" o "un anticuerpo que se une a CD37" se refiere a un anticuerpo que es capaz de unirse a CD37 con suficiente afinidad de modo que el anticuerpo es útil como un agente de diagnóstico y/o terapéutico al dirigirse a CD37. El alcance de la unión de un anticuerpo anti-CD37 con una proteína no CD37 no relacionada es menor que alrededor del 10% de la unión del anticuerpo a CD37 según se mide, por ejemplo, mediante un radioinmunoensayo (RIA) . En determinadas modalidades, un anticuerpo que se une a CD37 tiene una constante de disociación (Kd) de <1 µ?, <100 nM, <10 nM, <1 nM, o <0,1 nM. Ejemplos de anticuerpos anti-C37 se conocen en la técnica y se describen en la solicitud publicada estadounidense n.° 2011/0256153, que se incorpora a la presente mediante esta referencia.
El término "fragmento de anticuerpo" se refiere a una porción de un anticuerpo intacto y se refiere a las regiones variables de determinación antigénica de un anticuerpo intacto. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen de modo no taxativo fragmentos Fab, Fab' , F(ab' )2 y Fv; anticuerpos lineales; anticuerpos de cadena simple, y anticuerpos multiespecífieos formados a partir de fragmentos de anticuerpo.
Un "anticuerpo monoclonal" se refiere a una población de anticuerpo homogénea implicada en el reconocimiento altamente específico y unión de un epítopo o determinante antigénico simple. Esto es opuesto a los anticuerpos policlonales que típicamente incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes antigénicos. El término "anticuerpo monoclonal" comprende tanto anticuerpos intactos como de longitud completa así como fragmentos de anticuerpo (tales como Fab, Fab1, F(ab')2, Fv) , mutantes de cadena simple (scFv) , proteínas de fusión que comprenden una porción de anticuerpo, y cualquier otra molécula de inmunoglobulina modificada que comprende un sitio de reconocimiento de antígeno. Además, "anticuerpo monoclonal" se refiere a los anticuerpos realizados de cualquier cantidad de maneras que incluyen de modo no taxativo hibridoma, selección de fago, expresión recombinante, y animales transgénicos .
El término "epítopo" o "determinante antigénico" se usan de manera intercambiable en la presente y se refieren a aquella porción de un antígeno capaz de reconocerse y unirse específicamente mediante un anticuerpo particular. Cuando el antígeno es un polipéptido, los epítopos se pueden formar tanto a partir de aminoácidos contiguos como de aminoácidos no contiguos yuxtapuestos por plegamiento terciario de una proteína. Los epítopos formados a partir de aminoácidos contiguos típicamente se retienen tras la desnaturalización de proteínas, mientras que los epítopos formados por plegamiento terciario típicamente se pierden tras la desnaturalización de proteínas. Un epítopo típicamente incluye al menos 3, y más normalmente, al menos 5 u 8-10 aminoácidos en una conformación espacial única.
"Afinidad de unión" generalmente se refiere a la tensión de la suma total de las interacciones no covalentes entre un único sitio de unión de una molécula (por ejemplo, un anticuerpo) y su compañero de unión (por ejemplo, un antígeno) . A menos que se indique lo contrario, tal como se usa en la presente, "afinidad de unión" se refiere a la afinidad de unión intrínseca que refleja una interacción 1:1 entre los miembros de un par de unión (por ejemplo, anticuerpo y antígeno) . La afinidad de un molécula X con su compañera Y puede estar representada generalmente por la constante de disociación (Kd) . La afinidad se puede medir usando métodos comunes conocidos en la técnica, que incluyen los descritos en la presente. Los anticuerpos de baja afinidad generalmente se unen a antígeno lentamente y tienden a disociarse fácilmente mientras que los anticuerpos de alta afinidad generalmente se unen a antígeno más rápido y tienden a permanecer unidos más tiempo. Se conoce en la técnica una variedad de métodos para medir la afinidad de unión; cualquiera de estos se puede usar para los fines de la presente invención. Modalidades ilustrativas específicas se describen a continuación.
"O mejor" cuando se usa en la presente para referirse a una afinidad de unión se refiere a una unión más fuerte entre una molécula y su compañero de unión. "O mejor" cuando se usa en la presente se refiere a una unión más fuerte representada por un valor Kd numérico menor. Por ejemplo, un anticuerpo que tiene una afinidad por un antígeno de "0,6 nM o mejor", la afinidad del anticuerpo para el antígeno es <0,6 nM, es decir, 0,59 nM, 0,58 nM, 0,57 nM, etc. o cualquier otro valor menor que 0,6 nM.
La frase "sustancialmente similar" o "sustancialmente igual", tal como se usa en la presente, denota un grado suficientemente alto de similitud entre dos valores numéricos (generalmente uno asociado con un anticuerpo de la invención y el otro asociado con un anticuerpo de referencia/comparación) de modo que un experto en la técnica consideraría la diferencia entre los dos valores de poca importancia biológica y/o estadística o ninguna dentro del contexto de las características biológicas medidas por los valores (por ejemplo, valores Kd) . La diferencia entre los dos valores es menor que alrededor de 50%, menor que alrededor de 40%, menor que alrededor de 30%, menor que alrededor de 20%, o menor que alrededor de 10% en función del valor para el anticuerpo de referencia/comparación.
Un polipéptido, anticuerpo, polinucleótido, vector, célula, o composición que está "aislado" es un polipéptido, anticuerpo, polinucleótido, vector, célula, o composición que está en una forma que no se encuentra en la naturaleza. Los polipéptidos , anticuerpos, polinucleótidos , vectores, células, o composiciones aislados incluyen aquellos que fueron purificados hasta un grado que ya no están en la forma en que se encuentran en la naturaleza. En algunas modalidades, un anticuerpo, polinucleótido, vector, célula, o composición que está aislado es sustancialmente puro.
Tal como se usa en la presente, "sustancialmente puro" se refiere a material que es al menos 50% puro (es decir, libre de contaminantes) , al menos 90% puro, al menos 95% puro, al menos 98% puro, o al menos 99% puro.
El término " inmunoconjugado" o conjugado" como se usa en la presente se refiere a un compuesto o un derivado de este que está unido a un agente de unión celular (es decir, un anticuerpo anti-CD37 o fragmento de este) y se define por una fórmula genérica: C-L-A, donde C = citotoxina, L = enlazador, y A = agente de unión celular o anticuerpo anti-CD37 o fragmento de anticuerpo. Los inmunoconjugados también se pueden definir por la fórmula genérica en orden inverso: A-L-C.
Un "enlazador" es un resto químico que es capaz de unir un compuesto, normalmente un fármaco, tal como maitansinoide , a un agente de unión celular tal como un anticuerpo anti-CD37 o un fragmento de este de forma estable y covalente. Los enlazadores pueden ser susceptibles o sustancialmente resistentes a la escisión inducida por ácido, la escisión inducida por luz, la escisión inducida por peptidasa, la escisión inducida por esterasa y la escisión de enlace de disulfuro, en condiciones en las que el compuesto o el anticuerpo permanece activo. Enlazadores adecuados son conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, grupos disulfuro, grupos tioéter, grupos de ácido lábil, grupos fotilábiles, grupos de peptidasa lábil y grupos de esterasa lábil. Los enlazadores también incluyen enlazadores cargados y formas hidrofílicas de estos como se describe en la presente y se conoce en la técnica.
Los términos "cáncer" y "canceroso" se refieren a o describen la condición fisiológica en mamíferos en los cuales una población de células se caracteriza por un crecimiento celular no regulado. Los ejemplos de cáncer incluyen, de modo taxativo, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia. Ejemplos más particulares de "cáncer" o enfermedades "tumorigénicas" incluyen linfornas de células B que incluyen NHL, leucemia/linforna linfoblástica de células B precursores y neoplasmas de células B maduros, tales como leucemia linfocítica crónica de células B (CLL) /linforna linfocítico pequeño (SLL) , leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de células de manto (MCL) , linfoma folicular (FL) , que incluyen FL de grado bajo, grado intermedio y grado alto, linfoma de centro folicular cutáneo, linfoma de células B de zona marginal (tipo ALT, tipo nodal y esplénico) , leucemia de células pilosas, linfoma de células B grandes difusas (DLBCL) , linfoma de Burkitt (BL) , plasmacitoma, mieloma de células plasmáticas, trastorno linfoproliferativo post-transplante y linfoma de células grandes anaplásicas (ALCL) .
"Tumor" y "neoplasma" se refieren a cualquier masa que resulte de la proliferación o el crecimiento celular excesivo, ya sea benigna (no cancerosa) o maligna (cancerosa) que incluye lesiones precancerosas .
Los términos "célula cancerosa", "célula tumoral" y equivalentes gramaticales se refieren a la población total de células derivada de un tumor o una lesión precancerosa, que incluye células no tumorigénicas , que comprende el volumen de la población celular tumoral y células madre tumorigénicas (células madre cancerosas) . Tal como se usa en la presente, el término "célula tumoral" se modificará por el término "no tumorigénico" cuando se refiere solamente a aquellas células tumorales que carecen de la capacidad de renovarse y diferenciarse para distinguir aquellas células tumorales de las células madre cancerosas .
El término "sujeto" se refiere a cualquier animal (por ejemplo, un mamífero) que incluye, de modo no taxativo humanos, primates no humanos, roedores, y similares, que serán los destinatarios de un tratamiento particular. Típicamente, los términos "sujeto" y "paciente" se usan de forma intercambiable en la presente con relación a un sujeto humano.
Administración "en combinación con" uno o más agentes terapéuticos adicionales incluye la administración simultánea (concurrente) y consecutiva en cualquier orden.
El término "formulación farmacéutica" se refiere a una preparación que está de tal forma que permite que la actividad biológica de un ingrediente activo sea eficaz, y que no contiene ningún componente adicional que sea inaceptablemente tóxico para un sujeto al cual se le administraría la formulación. La formulación puede ser estéril.
Una "cantidad eficaz" de un anticuerpo como se describe en la presente es una cantidad suficiente para realizar un fin específicamente deseado. Una "cantidad eficaz" se puede determinar de forma empírica y de forma rutinaria, con relación al fin deseado.
El término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un anticuerpo u otro fármaco eficaz para tratar "una enfermedad o trastorno" en un sujeto o mamífero. En el caso del cáncer, la cantidad terapéuticamente eficaz del fármaco puede reducir el número de células cancerosas; reducir el tamaño de tumor; inhibir (es decir, disminuir hasta cierto punto o detener) la infiltración de células cancerosas en órganos periféricos; inhibir (es decir, disminuir hasta cierto punto o detener) la metástasis tumoral; inhibir, hasta cierto punto, el crecimiento tumoral y/o aliviar hasta cierto punto uno o más síntomas asociados con el cáncer. Véase la definición en la presente de "tratar" . En la medida en que el fármaco pueda prevenir el crecimiento y/o destruir las células cancerosas existentes, este puede ser citoestático y/o citotóxico. Una "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, con dosificaciones y durante períodos de tiempo necesarios para alcanzar el resultado profiláctico deseado. Comúnmente, aunque no necesariamente, dado que se utiliza una dosis profiláctica en sujetos antes o en una etapa temprana de la enfermedad, la cantidad profilácticamente eficaz será menor que la cantidad terapéuticamente eficaz.
El término "responde favorablemente" generalmente se refiere a ocasionar un estado beneficioso en un sujeto. Con relación al tratamiento del cáncer, el término se refiere a proporcionar un efecto terapéutico en el sujeto. Los efectos terapéuticos positivos en cáncer se pueden medir de una cantidad de formas (Véase, W.A. Weber, J. Nucí. Med. 50:1S-10S (2009)). Por ejemplo, se pueden usar técnicas de inhibición de crecimiento tumoral, expresión de marcador molecular, expresión de marcador sérico, e imaginología molecular para evaluar la eficacia terapéutica de un terapéutico anti-cáncer. Con respecto a la inhibición del crecimiento tumoral, de acuerdo a normas NCI, un T/C= 42% es el nivel mínimo de actividad antitumoral. Un T/C <10% se considera un nivel de actividad antitumoral alto, con T/C (%) = volumen de tumor medio del tratado/ volumen de tumor medio del control x 100. También se puede usar supervivencia sin evolución (PFS) , supervivencia sin enfermad (DFS) o supervivencia general (OS) para evaluar la eficacia terapéutica de un terapéutico anti-cáncer.
PFS, DFS, y OS se pueden medir con normas establecidas por National Cáncer Institute y U.S. Food and Drug Administration para la aprobación de nuevos fármacos. Véase Johnson et ál, (2003) J. Clin. Oncol . 21 (7): 1404-1411. "Supervivencia sin evolución" (PFS) también denominado "Evolución de tiempo a tumor" (YIP) indica el tiempo durante y posterior al tratamiento por el que el cáncer no crece. Supervivencia sin evolución incluye la cantidad de tiempo por el que los pacientes han experimentado una respuesta completa o una respuesta parcial, así como la cantidad de tiempo por el que los pacientes han experimentado una enfermedad estable. "Supervivencia sin enfermedad" (DFS) se refiere al tiempo durante y posterior al tratamiento por el que el paciente permanece sin enfermedad. "Supervivencia general" (OS) se refiere a una prolongación de la expectativa de vida en comparación con individuos o pacientes sin tratamiento.
La palabra "etiqueta" cuando se usa en la presente se ref ere a un compuesto o composición detectable que está conjugado directa o indirectamente al anticuerpo para generar un anticuerpo "etiquetado" . La etiqueta se puede detectar por sí misma (por ejemplo, etiquetas de radioisótopo o etiquetas fluorescentes) o en el caso de una etiqueta enzimática, puede catalizar la alteración química de un compuesto o composición de sustrato que se puede detectar.
Un "agente quimioterapéutico" es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer, sin perjuicio del mecanismo de acción. Las clases de agentes quimioterapéuticos incluyen, de modo no taxativo: agentes alquilantes, antimetabolitos, alcaloides antimitóticos de origen vegetal, antibióticos citóxicos/antitumorales , inhibidores de topoisomerasa, anticuerpos, fotosensibilizadores , e inhibidores de cinasa. Los agentes quimioterapéuticos incluyen compuestos usados en "terapia dirigida" y quimioterapia convencional.
Términos tales como "tratar" o "tratamiento" o "aliviar" se refieren a medidas terapéuticas que curan, enlentecen, reducen los síntomas de, y/o detienen la evolución de una afección o trastorno patológico diagnosticado. Por lo tanto, los que necesitan tratamiento incluyen los que ya fueron diagnosticados con o se sospecha que padezcan el trastorno. Las medidas preventivas o profilácticas se refieren a medidas terapéuticas que previenen y/o enlentecen el desarrollo de una afección o trastorno patológico dirigido. Por lo tanto, los que necesitan medidas profilácticas o preventivas incluyen aquellos predispuestos a tener el trastorno y aquellos en quienes se debe prevenir el trastorno. En determinadas modalidades, un sujeto se "trata" exitosamente por cáncer de acuerdo con métodos de la presente invención si el paciente muestra uno o más de lo siguiente: una reducción en la cantidad o ausencia total de células cancerosas; una reducción en el tamaño tumoral; inhibición o ausencia de infiltración de células cancerosas en órganos periféricos que incluyen por ejemplo, propagación del cáncer en tejido blando y hueso; inhibición o ausencia de metástasis tumorales; inhibición o ausencia de crecimiento tumoral; alivio de uno o más síntomas asociados con el cáncer específico; morbidez y mortalidad reducidas; mejora en la calidad de vida, reducción de tumorigenicidad, frecuencia tumorigénica o capacidad tumorigénica de un tumor; reducción en la cantidad o frecuencia de células madre cancerosas en un tumor; diferenciación de células tumorigénicas de un estado no tumorigénico; o alguna combinación de efectos.
Tal como se usa en la presente descripción y en las reivindicaciones, las forma singulares "un", "una" y "el" incluyen las formas plurales salvo que el contexto especifique claramente lo contrario.
Se entiende que cuando las modalidades se describen en la presente con el lenguaje "que comprende", otras modalidades análogos descritas en términos de "consiste en" y/o "consiste esencialmente en" también se proporcionan.
El término "y/o" como se usa en una frase tal como "A y/o B" en la presente pretende incluir "A y B", "A o B", "A," y "B." Asimismo, el término "y/o" como se usa en la frase tal como "A, B y/o C" pretende comprender cada una de las siguientes modalidades: A, B, y C; A, B, o C; A o C; A o B; B o C; A y C; A y B; B y C; A (solo) ; B (solo) y C (solo) .
II. Muestras biológicas Las muestras biológicas normalmente se fijan con un fijador.
Los fijadores de aldehido tales como formalina (formaldehído) y glutaraldehído se usan típicamente. Las muestras fijadas usando otras técnicas de fijación tales como inmersión en alcohol (Battifora and Kopinski, J. Histochem. Cytochem. (1986) 34:1095) también son adecuadas. Las muestras usadas también se pueden usar incrustar en parafina. En una modalidad, las muestras están fijadas con formalina e incrustadas en parafina (FFPE) . En otra modalidad, el bloque FFPE está teñido con hematoxilina y eosina antes de seleccionar una o más porciones para análisis para seleccionar una o más áreas específicas para la muestra de núcleo de FFPE. Los métodos para preparar bloques de tejido a partir de estos especímenes de partículas fueron usados en estudios de IHC previos de varios factores de pronóstico, y/o son conocidos por los expertos en la técnica (véase, por ejemplo, Abbondanzo et ál . , Am J Clin Pathol . mayo de 1990/93 (5) : 698-702; Allred et ál . , Arch Surg. enero de 1990 ; 125 (1) : 107- 13 ) .
En resumen, todo órgano o tejido intacto se puede cortar en pedazos bastante pequeños e incubar en varios fijadores (por ejemplo, formalina, alcohol, etc.) para diferentes períodos de tiempo hasta que el tejido esté "fijo". Las muestras pueden ser virtualmente cualquier tejido intacto retirado quirúrgicamente del cuerpo. Las muestras se pueden cortar en uno o más pedazos razonablemente pequeños que se ajustan al equipo de forma rutinaria usado en laboratorios histopatológicos . El tamaño de los pedazos cortados típicamente varía de unos pocos milímetros a unas pocos centímetros. La muestra biológica también pueden ser extractos fluidos, sangre, plasma, suero, líquido cefalorraquídeo, aspirado de médula ósea, biopsia de médula ósea, fluido linfático o preparaciones esplénicas .
III. Conjugados de anticuerpo de detección La presente invención además proporciona anticuerpos contra CD37, generalmente del tipo monoclonal, que se encuentran enlazados con al menos un agente para formar un conjugado de anticuerpo de detección. Para aumentar la eficacia de las moléculas del anticuerpo como diagnóstico es convencional enlazar o unir covalentemente o formar complejos con al menos una molécula o resto deseado. La molécula o resto puede ser, de modo no taxativo, al menos una molécula reportera. Una molécula reportera se define como cualquier resto que se puede detectar usando un ensayo. Ejemplos no taxativos de moléculas reporteras que fueron conjugadas con anticuerpos incluyen enzimas, radioetiquetas , haptenos, etiquetas fluorescentes, moléculas fosforescentes, moléculas quimioluminescentes , cromóforos, moléculas luminiscentes, moléculas de fotoafinidad, ligandos y/o partículas coloreadas, tales como biotina.
Cualquier anticuerpo de suficiente selectividad, especificidad o afinidad se puede emplear como la base para un conjugado de anticuerpo de detección. Las propiedades se pueden evaluar usando metodología de clasificación inmunológica convencional conocida para los expertos en la técnica. Los sitios para la unión a moléculas activas biológicas en la molécula de anticuerpo, además de los sitios de unión al antígeno canónico, incluyen sitios que residen en el dominio variable que se puede unir al antígeno. Además, el dominio variable se ve implicado en la unión propia del anticuerpo (Kang et ál., 1988) y contiene epítopos (idiotopos) reconocidos por anti-anticuerpos (Kohler et ál. , 1989) .
Determinados ejemplos de conjugados de anticuerpos son aquellos conjugados donde el anticuerpo está enlazado a una etiqueta detectable. "Etiquetas detectables" son compuestos y/o elementos que se pueden detectar debido a sus propiedades funcionales específicas y/o características químicas, el uso de estas le permite al anticuerpo al que están unidas ser detectado, y/o ser cuantificado adicionalmente si se desea.
Muchos agentes de imaginología apropiados se conocen en la técnica, como los métodos para su unión a anticuerpos (véase, por ejemplo, patentes estadounidenses n.° 5,021,236, 4,938,948 y 4,472,509, que se incorporan a la presente mediante esta referencia. Los restos de imaginología usados pueden ser iones paramagnéticos ; isótopos radioactivos ; fluorocromos ; sustancias detectables por RMN; y/o imaginología de rayos X, por ejemplo.
Ejemplos de etiquetas fluorescentes contempladas para su uso como conjugados incluyen Alexa 350, Alexa 430, Alexa 488, AMCA, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665, BODIPY-FL, BODIPY- 6G, BODIPY-TMR, BODIPY-TRX, azul Cascade, Cy3 , Cy5,6-FAM, Dylight 488, Isotiocianato de fluoresceína (FITC) , proteína fluorescente verde (GFP) , HEX, 6-JOE, verde Oregon 488, verde Oregon 500, verde 0regon514, azul Pacific, ficoeritrina, REG, verde Rodamina, rojo Rodamina, tetrametil rodamina (TMR) , Renografina, ROX, TAMRA, TET, Tetrametilrodamina, rojo Texas, y derivados de estas etiquetas (es decir, análogos halogenados, modificados con isotiocianato u otro enlazador para conjugación, etc.), por ejemplo.
Los conjugados de anticuerpo de detección contemplados en la presente invención incluyen los que se usan in vitro, donde el anticuerpo está enlazado a un ligando de unión secundaria y/o a una enzima (una etiqueta de enzima) que generará un producto coloreado tras el contacto con un sustrato cromogénico. Ejemplos de enzimas adecuadas incluyen ureasa, fosfatasa alcalina, peroxidasa de hidrógeno (rábano picante) y/u oxidasa de glucosa. Ligandos de unión secundaria preferidos son compuestos de biotina y/o avidina y estreptavidina . El uso de las etiquetas es conocido por los expertos en la técnica y se describe por ejemplo en las patentes estadounidenses n.° 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149 y 4,366,241; que se incorporan a la presente mediante esta referencia.
Las moléculas que contienen grupos azido también se pueden usar para formar enlaces covalentes con proteínas a través de intermedios de nitreno reactivo que se generan por luz ultravioleta de baja intensidad (Potter & Haley, 1983) . En particular, los análogos 2- y 8-azido de nucleótidos de purina fueron usados como fotosondas dirigidas al sitio para identificar proteínas de unión a nucleótidos en extractos celulares brutos (Owens & Haley, 1987; Atherton et ál . , 1985) . Los nucleótidos 2-y 8-azido también se usaron para mapear dominios de unión a nucleótidos de proteínas purificadas (Khatoon et ál . , 1989; King et ál . , 1989; y Dholakia et ál . , 1989) y se pueden usar como agentes de unión a anticuerpos.
Varios métodos se conocen en la técnica para la unión o conjugación de un anticuerpo a su resto de conjugado. Algunos métodos de unión implican el uso de un complejo de quelato metálico que emplea, por ejemplo, un agente de quelación orgánico tal como anhídrido del ácido dietilentriaminapentacético (D PA) ; ácido etilentriaminatetraacético; N-cloro-p-toluenosulfonamida; y/o tetracloro-3 -6 -difenilglicouril-3 unido al anticuerpo (patentes estadounidenses n.° 4,472,509 y 4,938,948, que se incorporan a la presente mediante esta referencia) . Los anticuerpos monoclonales también se pueden hacer reaccionar con una enzima en presencia de un agente de acoplamiento tal como glutaraldehído o periodato. Los conjugados con marcadores de fluoresceína se preparan en presencia de estos agentes de acoplamiento o mediante reacción con un isotiocianato . En la patente estadounidense n.° 4,938,948, la imaginología de tumores de mama, por ejemplo, se logra usando anticuerpos monoclonales , y los restos de imaginología detectable se unen al anticuerpo usando enlazadores tales como metil-p-hidroxibenzimidato o N-succinimidil-3- (4 -hidroxifenil) propionato .
En otras modalidades, se contempla la derivación de inmunoglobulinas por la introducción selectiva de grupos sulfhidrilo en la región Fe de una inmunoglobulina usando condiciones de reacción que no alteran el sitio de combinación de anticuerpo. Los conjugados de anticuerpo producidos de acuerdo con esta metodología se describen para exhibir longevidad, especificidad y sensibilidad mejoradas (patente estadounidense n.° 5,196,066, que se incorpora a la presente mediante esta referencia). La unión específica del sitio de las moléculas efectoras o reporteras, donde la molécula reportera o efectora está conjugada con un residuo de carbohidrato en la región Fe, también se describió en la bibliografía (O'Shannessy et ál . , 1987).
En otras modalidades de la invención, las inmunoglobulinas están radiomarcadas con núclidos tales como tritio. En modalidades adicionales, se usan las partículas de nanooro (tales como tamaños de alrededor de 0,5 nm-40 nm) y/o puntos cuánticos (Hayward, Calif.).
IV. Enzimas y sustratos (cromógenos) El uso de sustratos e indicadores se contempla para la detección de CD37, tal como los ejemplos de modalidades proporcionados a continuación, por ejemplo.
La peroxidasa de rábano picante (HRP) es una enzima que forma primero un complejo con peróxido de hidrógeno y luego provoca su descomposición, resultando en agua y oxígeno atómico. Como muchas otras enzimas, HRP y algunas actividades tipo HRP se pueden inhibir por exceso de sustrato. El complejo formado entre HRP y exceso de peróxido de hidrógeno es catalíticamente inactivo y en ausencia de un donante de electrón (por ejemplo, sustancia cromogénica) se inhibe de forma inversa. Es el exceso de peróxido de hidrógeno y la ausencia de un donante de electrón lo que ocasiona la inactivación de actividades de HRP endógena.
Cuando se usa en sistemas de ensayos, HRP también se puede usar para convertir un sustrato definido en su cromógeno activado, provocando así un cambio de color. La enzima HRP puede estar conjugada con un anticuerpo, proteína, péptido, polímero u otra molécula por una cantidad de métodos. Los métodos se conocen en la técnica. La adición de glutaraldehído a una solución que contiene una mezcla de HRP y anticuerpo resultará en más moléculas de anticuerpo conjugadas entre sí más que con la enzima. En el procedimiento de dos pasos, HRP reacciona primero con reactivos bifuncionales . En la segunda etapa, solo HRP activada se mezcla con el anticuerpo, resultando en un etiquetado mucho más eficiente y nada de polimerización, HRP también se conjuga con (estrept) avidina usando el procedimiento de glutaraldehído de dos pasos. Esta forma se usa en procedimientos donde LAB y LSAB son un sustrato, por ejemplo. La conjugación con biotina también implica dos pasos, como la biotina debe derivar primero en el éster de biotinil -N-hidroxisuccinimida o en la hidrazida de biotina antes de que se haga reaccionar con los grupos epsilonamino de la enzima HRP. 3 , 31 -diaminobenzidina (DAB) es un sustrato para enzimas tales como HRP que produce un producto final pardo que es altamente insoluble en alcohol y otros solventes orgánicos. La oxidación de DAB también provoca polimerización, resultando en la capacidad de reaccionar con tetróxido de osmio y por lo tanto aumenta su intensidad de tinción y densidad de electrones. De los varios metales y métodos usados para intensificar la densidad óptica de DAB polimerizado, el cloruro de oro en combinación con sulfuro de plata parece ser el más exitoso. 3-amino-9-etilcarbazol (AEC) es un sustrato para enzimas tales como HRP, y tras la oxidación, forma un producto final color rojo rosa que es soluble en alcohol. Por lo tanto, los especímenes procesados con AEC no se deben sumergir en alcohol o soluciones alcohólicas (por ejemplo hematoxilina Harris) . En cambio, se debería usar una contratinción acuosa y medio de montaje. AEC es desafortunadamente propenso a una oxidación adicional y cuando se expone a exceso de luz perderá su intensidad. Por lo tanto se recomienda almacenar en la oscuridad. 4-Cloro-l-naftol (CN) es un sustrato para enzimas tales como HRP que se precipita como un producto final azul. Dado que CN es soluble en alcohol y otros solventes orgánicos, el espécimen no se debe deshidratar, exponer a contratinciones alcohólicas, o colocar en cubreobjetos con medio de montaje que contiene solventes orgánicos. A diferencia de DAB, CN tiende a esparcirse del sitio de precipitación.
Diclorhidrato de p-fenilendiamina /pirocatecol (reactivo Hanker-Yates) es un sustrato para enzimas tales como HRP que dan un producto de reacción azul-negro que es insoluble en alcohol y otros solventes orgánicos. Como DAB polimerizado, este producto de reacción puede estar osmicado. Diferentes resultados se han logrado con el reactivo Hanker-Yates en técnicas de inmunoperoxidasa .
La fosfatasa alcalina de intestino bovino (AP) (peso molecular 100 kD) retira (mediante hidrólisis) y transfiere grupos fosfato de ésteres orgánicos rompiendo el enlace P-0; se forma brevemente un enlace enzima-sustrato intermedio. Los activadores metálicos principales para AP son Mg++, Mn++ y Ca++.
AP no fue usado ampliamente en la inmunohistoquímicamente hasta la publicación del procedimiento no etiquetado de alcalina-fosfatasa anti-alcalina (APAAP) . Los complejos inmunes solubles usados en este procedimiento tienen pesos moleculares de aproximadamente 560 kD. La mayor ventaja del procedimiento APAAP en comparación con la técnica PAP es la falta de interferencia presentada por la actividad de peroxidasa endógena. Dado que la distracción posible de la actividad de peroxidasa endógena en la tinción PAP, la técnica APAAP se recomienda para su uso en frotis de sangre y médula ósea. La actividad de fosfatasa alcalina endógena del hueso, riñon, hígado y algunas células blancas se puede inhibir mediante la adición de 1 mM levamisol a la solución de sustrato, aunque se descubrió que 5 mM era más eficaz. Las fosfatasas alcalinas intestinales no se inhiben adecuadamente por levamisol .
En el método de tinción de fosfatasa inmunoalcalina, la enzima hidroliza ésteres de fosfato de naftol (sustrato) con compuestos fenólicos y fosfatos. Los fenoles se acoplan a sales incoloras de diazonio (cromógeno) para producir tintes azo insolubles y coloreados. Varias combinaciones diferentes de sustratos y cromógenos han sido usadas de forma exitosa.
El sustrato AP de fosfato AS-MX de naftol se puede usar en su forma ácida o como la sal de sodio. El sustrato de cromógeno Fast red TR y Fast Blue BB producen un producto final rojo o azul brilloso, respectivamente. Ambos son solubles en solventes alcohólicos y otros solventes orgánicos, por lo que se debe usar un medio de montaje acuoso. Se prefiere Fast Red TR cuando se tiñen frotis celulares.
Ejemplos adicionales de sustratos incluyen fosfato de naftol AS-BI, fosfato de naftol AS-TR y fosfato de 5-bromo-4-cloro-3-indoxilo (BCIP) . Otros cromógenos posibles incluyen Fast Red LB, Fast Garnet GBC, Nitro Blue Tetrazolio (NBT) y yodonitrotetrazolio Violet (INT) , por ejemplo.
V. Métodos de inmunodetección En modalidades aun adicionales, la presente invención se refiere a métodos de inmunodetección para unir, purificar, retirar, cuantificar y/o de otro modo detectar generalmente los componentes biológicos tales como CD37 como se contempla en la presente invención. Los anticuerpos preparados de acuerdo con la presente invención se pueden usar para detectar CD37. Algunos métodos de inmunodetección incluyen inmunohistoquímica, citometría de flujo, ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) , radioinmunoensayo (RIA) , ensayo inmunoradiométrico, fluoroinmunoensayo, ensayo quimioluminiscente , ensayo bioluminiscente , y trasferencia Western para mencionar algunos. Los pasos de varios métodos de inmunodetección útiles fueron descritos en la bibliografía científica, tales como, por ejemplo, Doolittle M H and Ben-Zeev O, Methods Mol Biol. 1999;109:215-37; Gulbis B and Galand P, Hum Pathol. diciembre de 1993;24(12) :1271-85; y De Jager R et ál. , Semin Nucí Med. abril de 1993;23(2) :l65-79, que se incorporan a la presente mediante esta referencia.
En general, los métodos de inmunounión incluyen obtener una muestra que se sospecha comprende proteína, polipéptido y/o péptido de ligando, y poner en contacto la muestra con un primer anticuerpo anti-ligando de acuerdo con la presente invención, según sea el caso, en condiciones eficaces para permitir la formación de inmunocomplejos.
En términos de detección de antígeno, la muestra biológica analizada puede ser cualquier muestra en la que se desea detectar CD37, tal como extracto fluido, sangre, plasma, suero, líquido cefalorraquídeo, fluido linfático, sección o espécimen de tejido, extracto de tejido homogenizado, aspirados de biopsia, una célula, formas separadas y/o purificadas de composiciones que contienen CD37, o cualquier fluido biológico. En algunas modalidades, se usan muestras o extractos de sangre, plasma, tejido o linfa.
Poner en contacto la muestra biológica elegida con el anticuerpo en condiciones eficaces y durante un período de tiempo suficiente para permitir la formación de complejos inmunes (complejos inmunes primarios) es generalmente cuestión de agregar simplemente la composición de anticuerpo a la muestra e incubar la mezcla durante un período de tiempo lo suficientemente extenso para que los anticuerpos formen complejos inmunes con, es decir, se unan a, cualquier antígeno de proteína ligando presente. Luego de este tiempo, la composición de muestra-anticuerpo, tal como sección de tejido, placa de ELISA, transferencia dot o transferencia western, se lavará generalmente para retirar cualquier especie de anticuerpo unido no específicamente, permitiendo que solo aquellos anticuerpos unidos específicamente dentro de los complejos inmunes primarios sean detectados .
En general, la detección de la formación de inmunocomplej os se conoce en la técnica y se puede lograr a través de la aplicación de varios enfoques. Estos métodos se basan generalmente en la detección de una etiqueta o marcador, tal como aquellas etiquetas radioactivas, fluorescentes, biológicas y enzimáticas. Las patentes estadounidenses que se refieren al uso de las etiquetas incluyen las patentes estadounidenses n.° 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149 y 4,366,241, que se incorporan a la presente mediante esta referencia. Por supuesto, uno puede encontrar ventajas adicionales a través del uso de un ligando de unión secundaria tal como un segundo anticuerpo y/o un arreglo de unión de ligando de biotina/avidina, como se conoce en la técnica.
El anticuerpo anti- ligando usado en la detección puede por sí mismo unirse a una etiqueta detectable, donde luego se tendría que detectar simplemente esta etiqueta, permitiendo así que se determine la cantidad de complejos inmunes primarios en la composición. De manera alternativa, el primer anticuerpo que se une dentro de los complejos inmunes primarios se puede detectar mediante un segundo agente de unión que tiene afinidad de unión por el anticuerpo. En estos casos, el segundo agente de unión puede estar enlazado a una etiqueta detectable. El segundo agente de unión es en sí mismo por lo general un anticuerpo, que por lo tanto se puede denominar anticuerpo "secundario". Los complejos inmunes primarios se ponen en contacto con el agente o anticuerpo de unión segundario etiquetado en condiciones eficaces y durante un período de tiempo suficiente para permitir la formación de complejos inmunes secundarios. Los complejos inmunes secundarios luego se lavan generalmente para retirar cualquier anticuerpo o ligando secundario etiquetado unido no específicamente, y el resto de la etiqueta en los complejos inmunes secundarios se detecta luego.
Otros métodos incluyen la detección de complejos inmunes primarios por un enfoque de dos pasos. Un segundo agente de unión, tal como un anticuerpo, que tiene afinidad de unión por el anticuerpo se usa para formar complejos inmunes secundarios como se describe anteriormente. Luego del lavado, los complejos inmunes secundarios se ponen en contacto con un tercer agente o anticuerpo de unión que tiene afinidad de unión por el segundo anticuerpo, nuevamente en condiciones eficaces y durante un período de tiempo suficiente para permitir la formación de complejos inmunes (complejos inmunes terciarios) . El tercer ligando o anticuerpo está enlazado a una etiqueta detectable, permitiendo la detección de los complejos inmunes terciarios así formados. Este sistema puede proporcionar amplificación de señal si se desea.
En otra modalidad, un anticuerpo monoclonal o policlonal biotinilado se usa para detectar el/los antígeno/s diana, y un anticuerpo de segundo paso luego se usa para detectar la biotina unidas a la biotina en complejo. En ese método la muestra a ser analizada se incuba primero en una solución que comprende el anticuerpo de primer paso. Si el antígeno diana está presente, algo del anticuerpo se une al antígeno para formar un complejo de anticuerpo/antígeno biotinilado. El complejo de anticuerpo/antígeno luego se amplifica por incubación en soluciones sucesivas de estreptadividina (o avidina) , ADN biotinilado, y/o ADN biotinilado complementario, y cada paso agrega sitios de biotina adicionales al complejo de anticuerpo/antígeno. Los pasos de amplificación se repiten hasta que se logra un nivel adecuado de amplificación, y en el punto la muestra se incuba en una solución que comprende el anticuerpo de segundo paso contra biotina. Este anticuerpo de segundo paso se etiqueta como por ejemplo con una enzima que se puede usar para detectar la presencia del complejo de anticuerpo/antígeno por histoenzimología usando un sustrato de cromógeno. Con amplificación adecuada, se puede producir un conjugado que es macroscópicamente visible.
En una modalidad, se usa inmunohistoquímica (IHC) para detección inmunológica . Usando IHC, la detección de CD37 en una muestra se puede lograr dirigiendo una muestra con una sonda, por ejemplo, un anticuerpo anti-CD37. La sonda puede estar enlazada ya sea directa o indirectamente a una etiqueta detectable o se puede detectar con otra sonda que está enlazada, ya sea directa o indirectamente a una etiqueta detectable.
En algunas modalidades, la IHC puede distinguir entre diferentes niveles de expresión de proteína, por ejemplo, IHC calibrado. En algunas modalidades, IHC puede distinguir la intensidad de tinción para muestras que tienen expresión baja de CD37 de superficie celular, expresión intermedia de CD37 de superficie celular, o expresión alta de CD37 de superficie celular .
En algunas modalidades, la IHC puede distinguir entre intensidad de tinción y uniformidad de tinción. En una modalidad, la detección inmunológica (por inmunohistoquímica) de CD37 se puntúa tanto para intensidad como para uniformidad (porcentaje de células teñidas-solo membrana) . Las escalas comparativas para expresión de CD37 para determinar intensidad se correlacionan como 0 - Negativo, 0-1 - Muy débil, 1 - Débil, 1-2 - Débil a Moderado, 2 - Moderado, 2-3 - Moderado a Fuerte, 3 - Fuerte, 3+ - Muy fuerte. Cuantitativamente, Puntuación 0 representa que no se observa tinción o se observa tinción de membrana en menos del 10% de las células tumorales . Puntuación 1 representa que se detecta una tinción de membrana leve/apenas perceptible en más del 10 % de las células tumorales. Las células tienen solo parte de su membrana teñida. Para Puntuación 2, se observa una tinción de membrana completa moderada en más del 10 % de las células tumorales. Por último, Puntuación 3 representa que se observa una tinción de membrana completa fuerte en más del 10 % de las células tumorales. Aquellas muestras con 0 o 1 de puntuación para expresión de CD37 se pueden caracterizar como que no sobreexpresan CD37, mientras que aquellas muestras con 2 o 3 puntuaciones se pueden caracterizar como que sobreexpresan CD37. Las muestras que sobreexpresan CD37 también se pueden puntuar con puntuaciones inmunohistoquímicas que corresponden al número de copias de moléculas de CD37 expresadas por célula o anticuerpos unidos por célula (ABC) y se pueden determinar bioquímicamente. Las escalas comparativas para el porcentaje de uniformidad de tinción de membrana celular de CD37 se correlaciona de la siguiente forma: 0 - Negativo, Focal - <25%, heterogéneo (hetero) - 25-75%, y homogéneo (homo) - =75%.
IHC se puede realizar de forma manual o usando un sistema automático (por ejemplo, usando un teñidor automático) . Por lo tanto, IHC se puede realizar en células, sedimentos celulares, tejidos, preparaciones de sangre, plasma, suero, o fluido linfático, etc. En algunas modalidades , las muestras son muestras fijadas. En algunas modalidades, las muestras son muestras incrustadas enparafina. En algunas modalidades, las muestras son muestras fijadas con formalina e incrustadas en parafina.
Otro método conocido de inmunodetección aprovecha la metodología inmuno-PCR (reacción de polimerasa en cadena) . El método PCR usa un complejo de ADN/biotina/estreptavidina/anticuerpo que se lava con un amortiguador de sal de pH bajo o alto que libera el anticuerpo. La solución de lavado resultante luego se usa para realizar una reacción PCR con cebadores adecuados con controles apropiados . En modalidades específicas, la enorme capacidad de amplificación y especificidad de PCR se puede usar para detectar una molécula de antígeno simple. La detección puede ocurrir en tiempo real.
Por ejemplo, se contempla el uso de PCR en tiempo real cuantitativo .
En una modalidad, se usa citometría de flujo para detección inmunológica . Por lo tanto por ejemplo, la cantidad de anticuerpos unidos por célula (ABC) se puede evaluar usando citometría de flujo. Una gran cantidad de anticuerpos anti-CD37 unidos por célula puede indicar niveles de expresión de CD37 altos y una alta probabilidad de ser propenso a tratamiento con un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado de este.
VI. Hibridación de ácidos nucleicos La hibridación in situ se realiza generalmente en secciones de células o tejidos fijos a portaobjetos. La hibridación in situ se puede realizar por varias metodologías convencionales (Véase por ejemplo, Leitch et ál . In situ Hybridization : a practical guide, Oxford BIOS Scientific Publishers, Microscopy handbooks v. 27 (1994) ) . En un procedimiento in situ, los tintes fluorescentes (tales como isotiocianato de fluoresceína (FITC) que fluoresce verde cuando lo provoca un láser de ion de argón) se usan para etiquetar una sonda de secuencia de ácido nucleico que es complementaria a una secuencia de nucleótidos diana en la célula. Cada célula que comprende la secuencia de nucleótidos diana se unirá a la sonda etiquetada, produciendo una señal fluorescente tras la exposición de las células a una fuente de luz de una longitud de onda apropiada para la excitación del fluorocromo específico usado.
Se pueden emplear varios grados de rigurosidad de hibridación. A medida que las condiciones de hibridación se vuelven más rigurosas, se requiere un mayor grado de complementariedad entre la sonda y la diana para formar y mantener un dúplex estable. La rigurosidad aumenta elevando la temperatura, reduciendo la concentración de sal o elevando la concentración de formamida. Agregar sulfato de dextrano o elevar su concentración también puede aumentar la concentración eficaz de sonda etiquetada para aumentar la tasa de hibridación y la intensidad de señal final. Luego de la hibridación, los portaobjetos se lavan en una solución que generalmente comprende reactivos similares a los encontrados en la solución de hibridación variando el tiempo de lavado de minutos a horas dependiendo de la rigurosidad requerida. Los lavados más prolongados o más rigurosos típicamente disminuyen el fondo no específico pero corren el riesgo de reducir la sensibilidad total .
Las sondas usadas en el análisis de hibridación nucleica pueden ser oligonucleótidos o polinucleótidos de ARN o ADN y pueden contener no solo nucleótidos de origen natural sino sus análogos, como digoxigenina dCTP, biotina dcTP 7-azaguanosina, azoditimidina, inosina o uridina, por ejemplo Otras sondas útiles incluyen sondas de péptidos y análogos de estas, ADN de gen ramificado, peptidomiméticos , ácido nucleico peptídico (PNA) y/o anticuerpos, por ejemplo.
Las sondas deberían tener una complementariedad suficiente a la secuencia de ácido nucleico diana de interés para que ocurra una unión específica y estable entre la secuencia de ácido nucleico diana y la sonda. El grado de homología requerido para la hibridación estable varía con la rigurosidad del medio de hibridación y/o el medio de lavado. Preferentemente, en la presente invención se usan sondas completamente homologas, pero los expertos en la técnica comprenderán fácilmente que en la presente invención se pueden usar sondas que presentan una homología menor pero suficiente (véase, por ejemplo, Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T. , Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, (1989)).
También se pueden generar sondas y elegirse por varios medios incluyendo, de modo no taxativo, mapeo por hibridación in situ, paneles de híbridos de célula somática o transferencia de manchas de cromosomas variados; análisis de enlace cromosómico; o se pueden clonar y aislarse de bibliotecas de cromosomas variados de líneas de células humanas o híbridos de células somáticas con cromosomas humanos, híbridos de célula somática de radiación, microdisección de una región de cromosoma o a partir de cromosomas artificiales de levadura (YAC) identificados por cebadores de PCR específicos de un sitio de cromosoma único u otros medios adecuados como un clon de YAC adyacente. Las sondas pueden ser ADN genómico, ADNc o ARN clonados en un plásmido, fago, cósmido, YAC, cromosomas artificiales bacterianos (BAC) , vector viral o cualquier otro vector adecuado. Las sondas se pueden clonar o sintetizar químicamente por métodos convencionales. Cuando se clonan, los fragmentos de ácido nucleico de sonda aislada se insertan típicamente en un vector, tal como un fago lambda, pBR322, M13 , o vectores que contienen el promotor SP6 o T7 y que se clonan como una biblioteca en un hospedador bacteriano.
[Véase, por ejemplo, Sambrook, J. , Fritsch, E. F. , Maniatis, . , Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, (1989) ] .
Las sondas preferentemente se etiquetan, tal como con un fluoróforo, por ejemplo. Ejemplos de fluoróforos incluyen, de modo no taxativo, quelatos de tierra rara (quelatos de europio) , Texas Red, rodamina, fluoresceína, dansilo, Lisamina, umbeliferona, ficoeritrina, ficocianina o fluoróforos comercialmente disponibles tales como SPECTRUM ORANGE™ y SPECTRUM GREEN™ y/o derivados de uno cualquiera o más de los que anteceden. Múltiples sondas usadas en el ensayo se pueden etiquetar con más de un color fluorescente o de pigmento distinguible. Estas diferencias de color proporcionan un medio para identificar las posiciones de hibridación de las sondas específicas. Además, las sondas que no están espacialmente separadas se pueden identificar por una luz de color o pigmento diferente que resulta de la mezcla de otros dos colores (por ejemplo, rojo claro+verde=amarillo) pigmento (por ejemplo, azul+amarillo=verde) o usando un conjunto de filtros que pasa solo un color por vez.
Las sondas se pueden etiquetar directamente o indirectamente con el fluoróforo, utilizando metodología convencional conocida por un experto en la técnica.
VII. Kits de detección y composiciones La invención también proporciona kits para usar en la puesta en práctica de la presente invención como se describe en la presente. Estos kits pueden comprender recipientes, cada uno con uno o más de los diversos reactivos (típicamente en forma concentrada) utilizados en los métodos, incluyendo, por ejemplo, uno o más agentes de unión (anticuerpos) , ya unidos a un marcador u opcionalmente con reactivos para acoplar un agente de unión a un anticuerpo o molécula de ácido nucleico (así como el marcador en sí mismo) ; amortiguadores, los trifosfatos de nucleótido apropiados (por ejemplo, dATP, dCTP, dGTP, dTTP, dUTP, ATP, CTP, GTP y UTP) , transcriptasa inversa, polimerasa de ADN, polimerasa de ARN y uno o más cebadores específicos de secuencia o degenerados para usarse en la detección de moléculas de ácido nucleico por amplificación y/o reactivos e instrumentación para el aislamiento (opcionalmente por microdisección) para respaldar la puesta en práctica de la invención. Típicamente también se incluirá una etiqueta o un indicador que describe, o un conjunto de instrucciones para el uso de, componentes de un kit en un método de detección de ligandos de la presente invención, donde las instrucciones se pueden asociar con un prospecto y/o el embalaje del kit o los componentes de este.
En aun otras modalidades, la presente invención se refiere a kits de inmunodetección para usarse con los métodos de inmunodetección descritos anteriormente. Debido a que los anticuerpos generalmente se usan para detectar CD37, los anticuerpos preferentemente se incluirán en el kit. Por lo tanto, los kits de inmunodetección comprenderán, en un medio de recipiente adecuado, un primer anticuerpo que se une a CD37 y/u opcionalmente , un reactivo de inmunodetección y/o además opcionalmente, una proteína de CD37 o una célula o muestra que contiene una proteína de CD37.
Los reactivos de inmunodetección del kit pueden adoptar una de varias formas, incluyendo esas etiquetas detectables que se asocian con y/o se unen al anticuerpo dado. Las etiquetas detectables que se asocian con y/o se unen a un ligando de unión secundario también están contempladas. Ejemplos de ligandos secundarios son los anticuerpos secundarios que tienen afinidad de unión por el primer anticuerpo.
Otros reactivos de inmunodetección adecuados para usarse en los kits de la presente incluyen el reactivo de dos componentes que comprende un anticuerpo secundario que tiene afinidad de unión por el primer anticuerpo, junto con un tercer anticuerpo que tiene afinidad de unión por el segundo anticuerpo, el tercer anticuerpo está unido a una etiqueta detectable. Como se destaca anteriormente, una cantidad de ejemplos de etiquetas se conoce en la técnica y/o todas esas etiquetas se pueden utilizar de forma adecuada en conexión con la presente invención.
Los kits también pueden comprender uno o más agentes terapéuticos para el tratamiento del cáncer, tal como un inmunoconjugado anti-CD37 y/o un agente quimioterapéutico .
El kit también puede comprender un reactivo de detección de CD37 usado para medir la expresión de CD37 en un sujeto que comprende un reactivo de detección de CD37 e instrucciones de uso. En una modalidad, el reactivo de detección de CD37 comprende una proteína, péptido de unión a CD37 o una sonda molecular (es decir, ácido nucleico) . En otra modalidad, el reactivo de detección de CD37 es un anticuerpo anti-CD37. En otra modalidad, el kit comprende además un anticuerpo secundario que se une al anticuerpo anti-CD37. En una modalidad, el anticuerpo específico de CD37 se incluye a una concentración de 2,1, 4,2 y 8,4 g/mL. En otra modalidad, el anticuerpo se incluye en solución concentrada con instrucciones para que las diluciones logren una concentración final de 2,1, 4,2 y 8,4 µg/mL. En otra modalidad, el kit comprende además un reactivo de detección que se selecciona del grupo que consiste en: una enzima, un fluoróforo, una etiqueta radioactiva y un luminóforo. En otra modalidad, el reactivo de detección se seleccionad el grupo que consiste en: biotina, digoxigenina, fluoresceína, tritio y rodamina.
El kit también puede incluir instrucciones para la detección y puntuación de la expresión de CD37. El kit también puede incluir muestras de control o referencia. Ejemplos no taxativos de muestras de control o referencia incluyen sedimentos celulares o líneas celulares de cultivo de tejidos derivadas de muestras de tejido normal negativo (control negativo) o tumor (control positivo) . Ejemplos de líneas celulares de control positivo incluyen Daudi , Ramos, Namalwa y un control negativo incluye Colo205 y líneas celulares transfectadas de forma estable o transitoria con un vector de expresión que expresa CD37.
VIII. Agentes de unión a CD37 Cualesquiera anticuerpos que se unen a CD37 se pueden usar en los métodos de detección de la presente invención. Ejemplos de anticuerpos anti-CD37 terapéuticamente eficaces que se pueden usar en los métodos de la presente se pueden encontrar en la solicitud estadounidense publicada n.° 2011/0256153, que se incorpora a la presente mediante esta referencia. Por ejemplo, el anticuerpo anti-CD37 puede ser CD37-3, CD37-12, CD37-38, CD37-50, CD37-51, CD37-56 o CD37-57 de ratón, quimérico o humanizado. La secuencia de aminoácidos de longitud completa de CD37 se conoce en la técnica y también se proporciona en la presente como se representa en la SEQ ID NO: 1. Un anticuerpo específicamente útil para la detección de CD37 es el clon CTl de anti-huCD37 monoclonal de ratón (Leica # NCL-CD37) . Un ejemplo de anticuerpo anti-CD37 terapéuticamente eficaz es huCD37-3-SMCC-DMl . El polipéptido de SEQ ID NO: 57 corresponde a la versión 1, 0 de cadena pesada de dominio variable de huCD37-3.
El polipéptido de SEQ ID NO: 58 corresponde a la versión 1,1 de cadena pesada de dominio variable de huCD37-3 y el polipéptido de SEQ ID NO: 74 corresponde a la cadena ligera de dominio variable de huCD37-3, respectivamente. En determinadas modalidades, el anticuerpo CD37 puede comprender una cadena ligera codificada por el ADN de plásmido recombinante phuCD37-3LC (Designación de depósito ATCC PTA-10722, depositado en ATCC (10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110) el 18 de marzo de 2010) . En determinadas modalidades, el anticuerpo CD37 puede comprender una cadena pesada codificada por el ADN de plásmido recombinante phuCD37-3HCv.1.0 (Designación de depósito ATCC PTA-10723, depositado en ATCC el 18 de marzo de 2010) . En determinadas modalidades, el anticuerpo CD37 puede comprender una cadena ligera codificada por el ADN de plásmido recombinante phuCD37-3LC (PTA-10722) y una cadena pesada codificada por el ADN de plásmido recombinante phuCD37-3HCv.1.0 (PTA-10723). En determinadas modalidades, el anticuerpo CD37 puede comprender las VL-CDR codificadas por el ADN de plásmido recombinante phuCD37-3LC (PTA-10722) y las VH-CDR codificadas por el ADN de plásmido recombinante phuCD37-3HCv.1.0 (PTA-10723).
A continuación se proporcionan ejemplos de inmunoconjugados de CD37 útiles en los métodos terapéuticos de la invención.
IX. Inmunoconjugados de CD37 La presente invención también aumenta la eficacia de los conjugados (también denominados en la presente inmunoconjugados) , que comprenden anticuerpos anti-CD37, fragmentos de anticuerpos, equivalentes funcionales, anticuerpos mejorados y sus aspectos como se describe en la presente, unidos o conjugados a una citotoxina (fármaco) o profármaco. Ejemplos de anticuerpos e inmunoconjugados de CD37 se pueden encontrar en la solicitud estadounidense publicada n.0 2011/0256153, que se incorpora a la presente mediante esta referencia. Un inmunoconjugado terapéutico particularmente eficaz de la invención comprende el anticuerpo huCD37-3 descrito anteriormente.
Fármacos y profármacos adecuados son conocidos en la técnica. En determinadas modalidades, los fármacos y profármacos son agentes citotóxicos. El agente citotóxico usado en el conjugado citotóxico de la presente invención puede ser cualquier compuesto que resulta en la muerte de una célula, o induce la muerte celular, o de alguna forma reduce la viabilidad celular e incluye, por ejemplo, maitansinoides y análogos de maitansinoides, benzodiazepinas , taxoides, análogos de CC-1065 y CC-1065, duocarmicinas y análogos de duocarmicinas, tales como calicheamicinas, dolastatina y análogos de dolastatina incluyendo auristatinas, derivados de tomaimicina, derivados de leptomicina, metotrexato, cisplatino, carboplatino, daunorubucina, doxorubicina, vincristina, vinblastina, melfalán, mitomicina C, clorambucilo y morfolino doxorubicina. En determinadas modalidades, los agentes citotóxicos son maitansinoides y análogos de maitansinoides.
El fármaco o profármaco puede, por ejemplo, estar unido al anticuerpo anti-CD37, tal como huCD37-3, o fragmento de este a través de un enlace disulfuro. La molécula de unión o agente de reticulación comprende un grupo químico reactivo que puede reaccionar con el anticuerpo anti-CD37 o fragmento de este. En determinadas modalidades, los grupos químicos reactivos para que reaccionen con el agente de unión celular son ésteres de N-succinimidilo y ésteres de N-sulf osuccinimidilo . Además, la molécula enlazadora comprende un grupo químico reactivo, en determinadas modalidades un grupo ditiopiridilo que puede reaccionar con el fármaco para formar un enlace disulfuro. En determinadas modalidades, las moléculas enlazadoras incluyen, por ejemplo, 3- (2-piridilditio) propionato de N-succinimidilo (SPDP) (véase, por ejemplo, Carlsson et ál.( Biochem. J. , 173: 723-737 (1978)), 4- (2-piridilditio) butanoato de N-succinimidilo (SPDB) (véase, por ejemplo, patente estadounidense n. ° 4, 563, 304) , 4- (2-piridilditio) 2-sulfobutanoato de N-succinimidilo (sulfo-SPDB) (véase publicación estadounidense n.° 20090274713), 4- (2-piridilditio) pentanoato de N-succinimidilo (SPP) (véase, por ejemplo, número de registro CAS 341498-08-6) , 2-iminotiolano o anhídrido acet ilsuccínico .
También se pueden preparar conjugados de anticuerpo y maitansinoide con enlaces no escindióles. Estos reticuladores se describen en la técnia (véase ThermoScientific Pierce Crosslinking Technical Handbook y publicación de solicitud de patente estadounidense n. ° 2005/0169933) e incluyen, de modo no taxativo, 4- (maleimidometil) ciclohexanocarboxilato de N-succinimidilo (SMCC) , N-succinimidil-4- (N-maleimidometil) -ciclohexano-l-carboxi- (6-amidocaproat o) , que es un análogo de "cadena larga" de SMCC (LC-SMCC) , ácido K-maleimidoundecanoico N- succinimidil éster (KMUA) , (N- succinimidil éster del ácido ß-maleimidopropanoico (BMPS) , N-succinimidil éster del ácido ?-maleimidobutírico (GMBS) , N-succinimidil éster del ácido e-maleimidocaproico (EMCS) , éster de m-maleimidcbenzoil-N-hidrcxisuccinimida (MBS) , éster de N- (a-maleimidoacetoxi) - succinimida (AMAS) , succinimidil-6- (ß-maleimido ropionamido)hexanoato(SMPH) , N- succinimidil 4- (p-maleimidofenil) -butirato (SMPB) , y N- (p-maleimidofenil) isocianato (PMPI) , N-succinimidil -4- (yodoacetil) -aminobenzoato (SIAB) , yodoacetato de N-succinimidilo (SIA) , bromoacetato de N-succinimidilo (SBA) , y 3 - (bromoacetamido) ropionato de N-succinimidilo (SBAP) . En determinadas modalidades, el anticuerpo se modifica con reactivos de reticulación tales como 4- (N-maleimidometil) -ciclohexano-1-carboxilato de succinidimilo (SMCC) , sulfo-SMCC, éster de maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida (MBS) , sulfo-MBS o succinimidil-yodoacetato, como se describe en la biografía, para introducir 1-10 grupos reactivos (Yoshitake et ál, Eur. J. Biochem. , 101:395-399 (1979) ; Hashida et ál, J. Applied Biochem. , 56-63 (1984) ; y Liu et ál, Biochem. , 18:690-697 (1979) ) .
La presente invención incluye aspectos donde la relación molar promedio del agente citotóxico (por ejemplo, maitansinoide) al agente de unión celular en el conjugado de agente citotóxico y agente de unión celular es de alrededor de 1 a alrededor de 10. Los términos "MAR", "relación maitansinoide-Ab" , "carga de fármaco", "DAR" y "relación fármaco-Ab" se pueden usar en la presente para caracterizar la relación del agente citotóxico al agente de unión celular en un conjugado que comprende un compuesto maitansinoide como el agente citotóxico y un anticuerpo o fragmento de este como el agente de unión celular. Por lo tanto, en algunas modalidades, el MAR es de alrededor de 1 a alrededor de 10, alrededor de 2 a alrededor de 7, alrededor de 3 a alrededor de 5, alrededor de 2 , 5 a alrededor de 4,5 (por ejemplo, alrededor de 2 , 5 , alrededor de 2 , 6 , alrededor de 2,7, alrededor de 2,8, alrededor de 2,9, alrededor de 3,0, alrededor de 3,1, alrededor de 3,3, alrededor de 3,4, alrededor de 3,5, alrededor de 3,6, alrededor de 3,7, alrededor de 3,8, alrededor de 3,9, alrededor de 4,0, alrededor de 4,1, alrededor de 4,2, alrededor de 4,3, alrededor de 4,4, alrededor de 4,5), alrededor de 3,0 a alrededor de 4,0, alrededor de 3,2 a alrededor de 4,2, alrededor de 4,5 a 5,5 (por ejemplo, alrededor de 4,5, alrededor de 4,6, alrededor de 4,7, alrededor de 4,8, alrededor de 4,9, alrededor de 5,0, alrededor de 5,1, alrededor de 5,2, alrededor de 5,3, alrededor de 5,4, alrededor de 5,5) . En un aspecto, el promedio de la cantidad de moléculas de fármaco que se pueden unir a un agente de unión celular puede ser de alrededor de 2 a alrededor de 8 (por ejemplo, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1). En determinadas modalidades , el fármaco es iV^-deacetil-N2' - (3-mercapto-l-oxopropil) -maitansina (DM1) o iV2' -deacetil -N2 ' - (4 - mercapto-4-metil-l-oxopentil) maitansina (DM4) . Por lo tanto, en una modalidad determinada, el anticuerpo huCD37-3 está conjugado a DM1 o DM4.
X. Correlación de expresión y eficacia terapéutica de CD37 En determinadas modalidades, la invención proporciona un método para identificar sujetos con una mayor probabilidad de responder a terapias anticancerígenas que se dirigen a CD37. La invención se basa, en parte, en el descubrimiento de que los niveles elevados de expresión de CD37 se correlacionan con la eficacia de agentes terapéuticos anticancerosos que se dirigen a CD37 y el descubrimiento de métodos de detectar un intervalo dinámico de expresión de CD37 en muestras de células B.
La evaluación de muestras de pacientes y la correlación con la eficacia in vivo con modelos de xenoinjerto demuestra el poder del análisis de expresión para elegir los pacientes con más probabilidad de responder al tratamiento. IHC proporciona una puntuación para la expresión de CD37 en células tumorales: 0 (sin expresión) a 3+ (niveles muy altos de expresión) . Las puntuaciones de muestras 1, 2, 3, o 3+ para la expresión de CD37 (o 2, 3, o 3+ ) tienen una mayor probabilidad de responder a terapias anticancerígenas dirigidas a CD37 a dosis relevantes desde el punto de vista clínico de inmunoconjugados de CD37 (por ejemplo, 0,1 a 10 o más mg/kg de dosis de xenoinjerto de un inmunoconjugado de CD37 puede aproximarse a 3,0 a 400 mg/m2 en pacientes) . Por lo tanto, la identificación de individuos con una alta puntuación de CD37 ayudaría a identificar a esos individuos que probablemente respondan a una dosificación clínicamente relevante. Como se describe en más detalle a continuación, la sensibilidad a los agentes terapéuticos de CD37 puede correlacionarse con una puntuación de CD37 de 2 o más, especialmente con el nivel 3 de puntuación. Además, la expresión de niveles más uniformes de CD37 también se puede usar como indicador de la correlación de la expresión de CD37 con beneficio terapéutico. Por lo tanto, una uniformidad de tinción homogénea o una combinación de mayor intensidad con una uniformidad de tinción heterogénea podría indicar una mayor expresión de CD37. Por ejemplo, las puntuaciones mayores que 2 hetero se pueden usar como criterio de selección de un paciente para el tratamiento con un agente terapéutico de CD37.
El análisis de expresión de CD37 también identifica pacientes donde los niveles disminuidos de una terapia anticancerígena dirigida a CD37 ("terapia de dosis baja") puede ser eficaz para causar respuestas antitumorales . Como se comprende en la técnica, los compuestos se administran generalmente a la dosificación más baja que logra la respuesta terapéutica deseada. Esto es específicamente importante para agentes terapéuticos que provocan efectos secundarios clínicos y frecuentemente indeseados . La capacidad de reconocer a esos sujetos con niveles de expresión de CD37 elevados permite minimizar la dosificación del agente terapéutico dirigido a CD37, reduciendo así los posibles efectos secundarios, mientras se mantiene la eficacia terapéutica .
XI. Composiciones farmacéuticas y métodos terapéuticos Los agentes de unión a CD37 (incluyendo anticuerpos, inmunoconjugados y polipéptidos) son útiles en una variedad de aplicaciones incluyendo, de modo no taxativo, métodos de tratamiento terapéutico, tales como el tratamiento del cáncer. En determinadas modalidades, los agentes son útiles para inhibir el crecimiento tumoral, inducir la diferenciación, reducir el volumen de tumor y/o reducir la tumorigenicidad de un tumor. Los métodos de uso pueden ser métodos in vitro, ex vivo, o in vivo. En determinadas modalidades, el agente o anticuerpo o inmunoconjugado o polipéptido de unión a CD37 es un antagonista del CD37 humano al que se une.
En determinadas modalidades, la enfermedad tratada con el agente de unión a CD37 o antagonista (por ejemplo, un anticuerpo o inmunoconjugado de huCD37-3) es un cáncer. En determinadas modalidades, el cáncer se caracteriza por tumores que expresan CD37 al que el agente de unión a CD37 (por ejemplo, anticuerpo) se une.
La presente invención proporciona métodos para tratar cáncer que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente de unión a CD37 a un sujeto (por ejemplo, un sujeto que necesita tratamiento). En determinadas modalidades, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en linfomas de células B, NHL, leucemia linfoblástica de células B precursoras/linforna y neoplasmas de células B maduras, leucemia linfocítica crónica de células B (CLL) /linforna linfocítico pequeño (SLL) , leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de células del manto (MCL) , linfoma folicular (FL) , (FL) de bajo grado, grado intermedio y alto grado, linfoma central folicular cutáneo, linfoma de células B de zona marginal, linfoma de células B de zona marginal de tipo MALT, linfoma de células B de zona marginal nodal, linfoma de células B de zona marginal de tipo esplénico, leucemia de células pilosas, linfoma de células B grande difuso (DLBCL) , linfoma de Burkitt (BL) , plasmacitoma, mieloma de células plasmáticas, trastorno linfoproliferativo post-transplante, macroglobulinemia de Waldenstrom y linfoma de células grandes anaplásico (ALCL) . En determinadas modalidades, el sujeto es un ser humano.
La presente invención también proporciona métodos para inhibir el crecimiento tumoral usando los anticuerpos u otros agentes descritos en la presente. En determinadas modalidades, el método para inhibir el crecimiento tumoral comprende poner en contacto la célula con un agente de unión a CD37 (por ejemplo, anticuerpo) in vitro. Por ejemplo, una línea celular inmortalizada o una línea celular de cáncer que expresa CD37 se cultiva en un medio al que se agrega el anticuerpo u otro agente para inhibir el crecimiento tumoral. En algunas modalidades, las células tumorales se aislan de la muestra de un paciente tal como, por ejemplo, una biopsia de tejido, efusión pleural o muestra sanguínea y se cultiva en un medio al que se le agrega un agente de unión a CD37 para inhibir el crecimiento tumoral.
En algunas modalidades, el método para inhibir el crecimiento tumoral comprende poner en contacto el tumor o células tumorales con el agente de unión a CD37 (por ejemplo, anticuerpo) in vivo. En determinadas modalidades, el contacto de un tumor o célula tumoral con un agente de unión a CD37 se realiza en un modelo animal. Por ejemplo, los agentes de unión a CD37 se pueden administrar a xenoinjertos que expresan uno o más CD37 que se cultivaron en ratones inmunodeprimidos (por ejemplo, ratones NOD/SCID) para inhibir el crecimiento tumoral. En algunas modalidades, el agente de unión a CD37 se administra al mismo tiempo o un poco después de la introducción de células tumorigénicas al animal para evitar el crecimiento tumoral. En algunas modalidades, el agente de unión a CD37 se administra como un agente terapéutico luego de que las células tumorigénicas crecieron a un tamaño especificado.
En determinadas modalidades, el método para inhibir el crecimiento tumoral comprende administrarle a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente de unión a CD37. En determinadas modalidades, el sujeto es un ser humano. En determinadas modalidades, el sujeto tiene un tumor o se le extirpó un tumor .
Por lo tanto, en determinadas modalidades la invención proporciona métodos para tratar el cáncer usando un anticuerpo CD37-3 (por ejemplo, quimérico, humanizado o totalmente humano) o inmunoconjugado de este, donde el cáncer se identifica, usando los métodos descritos en la presente, por tener una expresión aumentada de CD37. En determinada modalidad, el inmunoconjugado de CD37-3 es huCD37-3 -S CC-DM1.
En determinadas modalidades, las formulaciones se preparan para almacenamiento y uso combinando un anticuerpo purificado o agente de la presente invención con un vehículo farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, portador, excipiente) (Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20a Edición Mack Publishing, 2000) . Los vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen, de modo no taxativo, amortiguadores no tóxicos tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico y metionina; conservantes (por ejemplo, cloruro de octadecildimetilbencil amonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; alcohol fenólico, butílico o bencílico; alquilparabenos , tales como metil o propil-parabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol ; 3-pentanol y m-cresol) ; polipéptidos de bajo peso molecular (por ejemplo, menos que alrededor de 10 residuos de aminoácidos) ; proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina; carbohidratos tales como monosacáridos, disacáridos, glucosa, mañosa o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; azúcares tales como sucrosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sales tales como sodio; complejos metálicos (por ejemplo, complejos de proteína Zn) y tensioactivos no- iónicos tales como TWEEN o polietilenglicol (PEG) .
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar en cualquier cantidad de formas para tratamiento local o sistémico. La administración puede ser tópica (tal como a las membranas mucosas incluyendo administración vaginal y rectal) tal como parches transdérmicos, ungüentos, lociones, cremas, geles, gotas, supositorios, pulverizadores, líquidos y polvos; administración pulmonar (por ejemplo, por inhalación o insuflación de polvos o aerosoles, incluyendo por un nuebulizador; intratraqueal , intranasal, epidérmica y trasdérmica) ; oral; o parenteral incluyendo inyección o infusión intravenosa, intraarterial , subcutánea, intraperitoneal o intramuscular; o intracraneal (por ejemplo, intratecal o intraventricular) .
Un anticuerpo o inmunoconjugado de la invención se puede combinar en una formulación de combinación farmacéutica o régimen de dosificación como terapia de combinación, con un segundo compuesto que tiene propiedades anticancerígenas. El segundo compuesto de la formulación de combinación farmacéutica o régimen de dosificación preferentemente presenta actividades complementarias al ADC de la combinación de modo que no se afecten negativamente entre sí. También se proporcionan las composiciones farmacéuticas que comprenden el agente de unión a CD37 y el segundo agente anticancerígeno.
Para el tratamiento de la enfermedad, la dosificación apropiada de un anticuerpo o agente de la presente invención depende del tipo de enfermedad a ser tratada, la gravedad y transcurso de la enfermedad, la respuesta de la enfermedad, si el anticuerpo o agente se administra a efectos terapéuticos o preventivos, terapia previa, historia clínica del paciente y así sucesivamente, a criterio del médico tratante. El anticuerpo o agente se puede administrar una vez o durante una serie de tratamientos que duran desde varios días hasta varios meses o hasta que se encuentre una cura o se logre una disminución del estado de enfermedad (por ejemplo, reducción del tamaño del tumor) . Los programas de dosificación óptima se pueden calcular a partir de medidas de acumulación de fármaco en el cuerpo del paciente y variarán dependiendo de la potencia relativa de un anticuerpo o agente individual. El médico que administra puede determinar fácilmente las dosificaciones óptimas, metodologías de dosificación y velocidades de repetición. En determinadas modalidades, la dosificación es de 0,01 a 100 mg por kg de peso corporal, y se puede administrar una vez o más por día, semana, mes o año. En determinadas modalidades, el anticuerpo u otro agente de unión a CD37 se administra semanalmente, una vez cada dos semanas o una vez cada tres semanas. En determinadas modalidades, la dosificación del anticuerpo u otro agente de unión a CD37 es de alrededor de 0,1 mg a alrededor de 20 mg por kg de peso corporal. El médico tratante puede calcular las velocidades de repetición para dosificación en función de los tiempos de residencia medidos y concentraciones del fármaco en fluidos o tejidos corporales.
La terapia de combinación puede proporcionar "sinergia" y ser "sinérgica", es decir, el efecto logrado cuando los ingredientes activos usados juntos es mayor que la suma de los efectos que resultan de usar los compuestos por separado. Se puede lograr un efecto sinérgico cuando los ingredientes activos se: (1) formulan conjuntamente y administran o suministran de forma simultánea en una formulación de dosificación unitaria combinada, (2) administran de manera alternada o en paralelo como formulaciones separadas, o (3) mediante algún otro régimen. Cuando se administra en terapia alternada, se puede obtener un efecto sinérgico cuando los compuestos se administran o suministran secuencialmente, por ejemplo, por diferentes inyecciones en jeringas separadas. En general, durante la terapia alternada, se administra secuencialmente una dosificación eficaz de cada ingrediente activo, es decir, en serie, mientras que en la terapia de combinación, se administran a la vez dosis eficaces de dos o más ingredientes activos.
Las modalidades de la presente descripción se pueden identificar adicionalmente mediante referencia a los siguientes ejemplos no taxativos, que describen en detalle la preparación de determinados anticuerpos de la presente descripción y métodos para usar anticuerpos de la presente descripción. Será evidente para los expertos en la técnica que se pueden poner en práctica muchas modificaciones, tanto a los materiales como a los métodos, sin alejarse del alcance de la presente descripción.
EJEMPLOS Se entiende que los ejemplos y las modalidades descritos aquí se presentan únicamente con el fin de ilustrar la invención y que se sugiere a los expertos en la técnica diversas modificaciones o cambios y estos deben incluirse dentro de la esfera y el espíritu de la presente solicitud.
Ejemplo 1 Tinción inmunohistoquímica de CD37 en muestras de células - métodos manuales Se usaron tejidos y sedimentos de célula fijados con formalina e incrustados en parafina como muestras de prueba con los siguientes reactivos y condiciones de tinción.
Se tiñeron biopsias de linfoma de paciente fijadas con formalina e incrustadas en parafina (FFPE) con el clon CT1 de anticuerpo anti-CD37 de murino (muIgGl, Leica, Cat# NCL-CD37) , clon L26 de anticuerpo anti-CD20 de murino (muIgG2a, Dako Cytomation, Cat# M 07 55) y los anticuerpos muIgGl y muIgG2a de control de isotipo respectivos de Coulter de la siguiente forma. Los portaobjetos que contienen muestras se hornearon a 60 °C durante 30 min en un horno de secado y se desparafinaron y rehidrataron por inmersión secuencial en los siguientes solventes: xilenos, ETOH absoluto, 95% de ETOH y agua. Luego de retirar el antígeno en amortiguador Borg a pH 9,5 (Biocare Medical) en un decloaker, los portaobjetos se lavaron con PBS (Gibco) y las secciones se bloquearon en PBS que contiene 2% de suero de caballo normal (Vector Labs) y un bloque de avidina y biotina (4 gotas/mL, Vector Labs) durante 30 min. Para preparar soluciones de trabajo de anticuerpos primarios, cada uno de los artículos de control de isotipo y de prueba de CD37 se diluyó a 4,0 µg/mL en diluyente [PBS que contiene suero de caballo normal al 2% y biotina (4 gotas/mL) ] . Cada uno de los artículos de control de isotipo y de prueba de CD20 se diluyó a 0,5 g/mL en diluyente. Los portaobjetos se lavaron en PBS y se incubaron a temperatura ambiente durante 60 minutos con los artículos de prueba (anti-CD37 o anti-CD20) , o artículos de control (muIgGl o muIgG2a) , seguido de una incubación de 30 minutos con 10 µg/mL de un anticuerpo secundario de IgG antirratón de caballo biotinilado (H+L) (Vector Labs) . Los portaobjetos se lavaron nuevamente en PBS y se incubaron durante 40 minutos con complejo de avidina-biotina-peroxidasa (Vector Labs) para detectar el anticuerpo secundario unido. La incubación durante 5 minutos con DAB (3, 3-diaminobenzidina tetraclorhidrato, Dako Cytomation) dio como resultado la señal de color. Los portaobjetos que contenían secciones de tejido desarrollado se contratiñeron por inmersión en un recipiente lleno de hamatoxilina (Biocare Medical) durante 4 min. A los portaobjetos se les retiró el exceso de tinción seguido de una inmersión rápida en solución de carbonato de litio (0,135 M LÍ2CO3 de solución acuosa, Sigma Aldrich) que mejora la tinción de azul nuclear. Los portaobjetos se deshidrataron a través de dos enjuagues cada uno de 95% y 100% de ETOH, seguido de cuatro lavados de Xileno durante 1 min cada uno. Los cubreobjetos se montaron en los portaobjetos usando medio De montaje (Richard Alian Scientific) .
Las muestras de FFPE derivaron de microarreglos de tumor, así como bloques de tejido humano de tres tumores de CLL diferentes, como se destaca en la Tabla 1.
Tabla 1 : Muestras de prueba FFPE El artículo de prueba de CD37, clon CT1 de anticuerpo anti-CD37 de murino, se evaluó para determinar la especificidad de unión al antígeno huCD37. Usando los métodos de tinción de IHC informados, las secciones FFPE de 300-19 y 300-19 transfectadas con sedimentos celulares huCD37 (300-19/huCD37) se tiñeron y evaluaron para determinar CD37. El artículo de prueba de CD37 tiñó específicamente células 300-19/ huCD37 y no tuvo tinción en las células 300-19 (3 homo y negativas, respectivamente, véase Figura 1) . Estos resultados demuestran que el clon CT1 se dirige específicamente al antígeno huCD37. (Figura 1). Las secciones FFPE de bazo normal humano también se tiñeron y evaluaron para determinar CD37. Como se muestra en la Figura 2, la pulpa blanca del bazo (que contiene folículos linfoides ricos en linfocitos B) mostró una fuerte tinción de CD37, mientras que la pulpa roja del bazo (que contiene monocitos y glóbulos rojos) mostró poco y nada de tinción de CD37.
La inmunorreactividad de cada artículo de prueba y control con tejidos y sedimentos celulares fue determinada por el patólogo consultante, el Dr. David Dorfman. Las muestras se categorizaron primero como de célula grande, que consiste en linfoma de células B grande difuso (DLBCL) , o de célula pequeña, que consiste en linfoma de células del manto (MCL) , tejido linfoide asociado con la mucosa (MALT) , linfoma folicular (FL) , leucemia linfocítica crónica (CLL) , leucemia linfocítica pequeña (SLL) . El grupo de célula pequeña se categorizó adicionalmente en los subtipos de célula pequeña respectivos.
Para cada tejido evaluado, se informó una descripción de la intensidad de tinción y uniformidad de tinción. La puntuación de intensidad y escalas de uniformidad de tinción se describen en la Tabla 2. La puntuación final informada para cada muestra de tejido evaluada es la puntuación del artículo de prueba menos la puntuación del artículo de control respectivo. El nivel de ABC (anticuerpos unidos por célula) para cada muestra se calculó comparando la puntuación de tinción con los controles de sedimento celular calibrados.
Tabla 2. Puntuación de intensidad y escalas de uniformidad usadas para evaluar la inmunorreactividad del clon CT1 de anticuerpo CD37 con muestras de tejido FFPE .
Los niveles de expresión de CD37 en líneas celulares de tumor se determinaron usando un conjugado de PE y anticuerpo anti-CD37 y el sistema QuantiBRITE (BD Biosciences) . En el estudio se incluyeron varias líneas celulares malignas de células B. Para obtener valores de ABC confiables, los experimentos de unión con un conjugado de anticuerpo y PE se deberían realizar a una concentración de saturación (concentración a la cual todos los sitios de unión disponibles son ocupados por el conjugado) . Para determinar esta concentración para el conjugado de PE y anticuerpo anti-CD37, los experimentos de unión se realizaron en un panel de líneas celulares positivas para CD37 con varios niveles de expresión de CD37. Las células se incubaron con un amplio intervalo de concentración de conjugado de PE durante dos horas sobre hielo, se lavaron con amortiguador FACS (PBS con 1% de BSA) , se fijaron con 1% de formaldehído en PBS y se analizaron en un citómetro de flujo FACSCalibur (BD Biosciences) . Se determina la concentración a la cual el conjugado satura los sitios de unión a la superficie celular en todas las líneas celulares evaluadas. En experimentos de ABC de unión posteriores se usó el conjugado PE a esa concentración. Cada muestra se analizó por duplicado o triplicado; se realizaron varios experimentos independientes en cada línea celular.
Los valores de anticuerpos unidos por célula (ABC) se determinaron para CD37 para cada una de las líneas celulares de control positivo, Daudi , Ramos y RL, usando métodos de citometría de flujo mediante la tinción de células con una concentración de saturación de anticuerpo anti-CD37 etiquetado con ficoeritrina (PE) (huCD37-PE) . Las condiciones de tinción inmunohistoquímica se optimizaron luego para CD37 de modo que las células de control positivo Daudi, Ramos y RL, que expresan cada una un nivel uniforme de CD37 y un valor de ABC diferente por citometría de flujo, también mostraron niveles variados de intensidad de tinción por IHC (véase Figura 3 y Figura 4) . Daudi y Ramos presentaron tinción homogénea con alta intensidad, mientras que la tinción de RL fue de una intensidad menor con un patrón heterogéneo. Las tendencias de intensidad de tinción de CD37 observadas de los sedimentos celulares corresponden a los valores de ABC informados, donde mayores valores de ABC de 360.000 y 120.000 de ABC resultaron en una tinción más intensa que un valor de ABC de 55.000. Los resultados de tinción y valores de ABC respectivos se enumeran en la Tabla 3. La tinción de CD20 se optimizó de modo que las puntuaciones de tinción para CD20 y CD37 fueran similares en sedimentos celulares que expresan niveles similares de CD20 y CD37, respectivamente (véase Figura 5) .
Tabla 3. Valores de ABC y resultados de tinción respectivos para CD37 en líneas celulares.
Entre los tipos de células neoplásicas evaluadas, CD37 se expresó predominantemente en B-NHL (Tabla 4) . Se demostraron varios niveles de expresión de CD37 uniforme en NHL de células B incluyendo subtipos tales como FL, linfoma MALT, DLBCL, BL y MCL por inmunohistoquímica (véase Figura 6) . Como se demuestra en la Figura 6, la mayoría de las muestras de NHL mostró expresión de CD37 con una puntuación de IHC = 2. Esto corresponde al nivel de tinción de sedimentos de línea celular de control tal como Daudi, Ramos y RL con valores de ABC = 55.000. En la Figura 7 se ilustran fotografías representativas que presentan muestras de linfoma teñidas para determinar CD37. Las muestras de linfornas de células T y mieloma múltiple (MM) no mostraron tinción para CD37 ni CD20.
Tabla 4. Resumen de resultados de tinción de CD37 y CD20 en tipos de célula neoplásica.
Ejemplo 2 Actividad antitumoral de anticuerpo huCD37-3 y huCD37-3-SMCC-DMl en ratones SCID CB.17 hembra con xenoinjertos SU-DHL-4 (DLBCL humano) En este estudio, se evaluó la actividad antitumoral (volumen de tumor mediano, mm3)de anticuerpo CD37-3 y huCD37-3-SMCC-DMl en ratones SCID hembra con tumores SU-DHL-4 subcutáneos, un modelo de linfoma de células B grandes difuso. Los ratones se dividieron aleatoriamente en grupos (n = 10 por grupo) según el peso corporal. El tratamiento fue el día después de la división aleatoria y los grupos incluyeron un grupo de control dosificado con PBS (200 pL/inyección) , anticuerpo huCD37-3 y conjugado huCD37-3-SMCC-DMl no escindible. Los tratamientos se administraron como un único bolo intravenoso de 10 mg de proteína/kg/inyección para anticuerpo y huCD37-3 -SMCC-DMl . Todos los tratamientos fueron bien tolerados sin pérdida de peso corporal como con animales de control de PBS . Diez de diez animales de control de PBS desarrollaron tumores (100% de tasa de arraigo de tumor) , alcanzando un volumen de tumor medio de 1000 mm3 a los 37 días después de la inoculación de células. Se calcularon los volúmenes de tumor promedio y medio para cada grupo de tratamiento. Además, para cada tratamiento, se calculó un valor % de T/C que corresponde al volumen de tumor medio de cada grupo tratado dividido por el volumen de tumor medio del grupo tratado con vehículo. Un tratamiento con un valor de % de T/C de 42% o menos se considera activo, mientras que un tratamiento con un valor de % de T/C de 12% o menos se considera altamente activo.
Un tratamiento intravenoso simple de anticuerpo huCD37-3 (10 mg/kg/inyección) era activo en este estudio con un 32% de T/C; sin embargo no hubo sobrevivientes sin tumores (TFS) . huCD37-3 -SMCC-DMl (10 mg/kg/inyección) era altamente activo con % de T/C de 1 % . En la Figura 8 se muestra la actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de huCD37-3 -SMCC-DMl solo como un tratamiento intravenoso simple (10 mg/kg/inyección).
Se llevó a cabo un estudio adicional para evaluar el anticuerpo CD37-3 y huCD37-3- SMCC-DMl en ratones SCID hembra con tumores SU-DHL-4 subcutáneos como se describe en el Ejemplo 17 de (solicitud publicada estadounidense n.° 2011/0256153, que se incorpora a la presente mediante esta referencia) . Los animales se dividieron aleatoriamente por peso corporal en grupos de tratamiento y se trataron una vez el día 15 después de la inoculación de células con 10 mg/kg de huCD37-3 Ab o huCD37-3-SMCC-DMl . El valor de % de T/C el día 38 después de la inoculación de células correspondieron a 34% o 4% para huCD37-3 o huCD37-3-SMCC-DMl, respectivamente. El día 74 después de la inoculación de células, el tratamiento de huCD37-3 -SMCC-DM1 dio como resultado 8 de 10 sobrevivientes sin tumores. No se observó TFS en los grupos de control de anticuerpo huCD37-3 o de vehículo de PBS. El conjugado huCD37-3-SMCC-D l también mostró una fuerte eficacia a únicas dosis de 2 , 5 o 5 mg/kg en este modelo con valores de % de T/C el día 37 después de la inoculación de células de 18% y 6%, respectivamente. Por lo tanto, huCD37-3-SMCC-DMl fue altamente activo en el modelo SU-DHL-4 a una única dosis de 10 mg/kg y fue activo a una única dosis de 2,5 mg/kg.
Ejemplo 3 Eficacia antitumoral de huCD37 anticuerpo huCD37, huCD37-3-SMCC-DMl y productos quimiterapéuticos de estándar de cuidado en ratones SCID con xenoinjertos de DoHH2, un modelo de linfoma celular de humano En este estudio, la actividad antitumoral del anticuerpo huCD37-3, huCD37-3-SMCC- DM1, anticuerpo Rituximab® y CVP (ciclofosfamida, vincristina y prednisona) se investigaron en ratones SCID hembra con tumores DoHH2 subcutáneos, un modelo de linfoma folicular humano. Once días después de la inoculación de células, se dividieron aleatoriamente ochenta y un ratones en 9 grupos (n = 9 por grupo) por volumen de tumor. El tratamiento comenzó el día después de la división aleatoria (Día 12) y los grupos incluyeron un grupo de control dosificado con PBS (200 \xl¡/ inyecc ión ) , seis grupos administrados con dosis intravenosas únicas de anticuerpo huCD37-3 o conjugado huCD37 - 3 - SMCC -DM1 a 10, 5 o 2,5 mg/kg, un grupo administrado con seis dosis intravenosas de anticuerpo Rituximab a 2 mg/kg, dos veces por semana por tres y un grupo administrado con una única dosis intravenosa de ciclofosf amida a 40 mg/kg y vincristina a 0,5 mg/kg, junto con cinco dosis orales diarias de prednisona a 0,2 mg/kg.
Tratamientos únicos a 10, 5 y 2,5 mg/kg de anticuerpo huCD37-3 y conjugado huCD37 - 3 - SMCC - DM1 así como anticuerpo rituximab a 2 mg/kg/ inyección, 2qw x 3, fueron bien tolerados sin pérdida de peso corporal como con los animales de control de PBS. El tratamiento con CVP fue tóxico con una muerte de animal relacionada con el fármaco y 12% de pérdida de peso corporal media (nadir al día 18) . Este animal se excluyó de los análisis de datos.
Nueve de diez animales de control de PBS desarrollaron tumores (100% de tasa de arraigo de tumor), alcanzando un volumen de tumor medio de 800 mm3 a los 19 días después de la inoculación de células. Se calcularon los volúmenes de tumor promedio y medio para cada grupo de tratamiento. Los tratamientos intravenosos simples con 2,5 y 5 mg/kg de anticuerpo huCD37-3 y conjugado huCD37-3 -SMCC-DMl , así como anticuerpo Rituximab® (2 mg/kg, dos veces por semana por tres) fueron inactivos en este estudio con > 42% de T/C. El tratamiento intravenoso simple con 10 mg/kg de anticuerpo huCD37-3 y conjugado huCD37 -3 -SMCC-DMl fue activo con 37% y 16% de T/C, respectivamente. El tratamiento con las dosis y programa de CVP administrado, aunque altamente activo con 2% de T/C, estuvo por encima de la dosis tolerada para este régimen. En la Figura 9 se muestra la actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de anticuerpo huCD37-3, huCD37-3-SMCC-DMl y productos quimioterapéuticos estándar en ratones SCID con xenoinjertos de tumor humano DoHH2. En la Figura 10 se muestra la actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de huCD37- 3 -SMCC-DMl solo como un tratamiento intravenoso simple (10 mg/kg/inyección) en este modelo.
Ejemplo 4 Eficacia antitumoral de anticuerpo huCD37-3, huCD37-3 -SMCC-DMl y agentes de estándar de cuidado en ratones SCID con xenoinjeros JVM-3, un modelo de leucemia linfocítica crónica de células B humanas (CLL) En este estudio, la actividad antitumoral del anticuerpo huCD37-3, el conjugado no escindible huCD37-3 -SMCC-DMl y dos agentes de estándar de cuidado: Ofatumumab, un anticuerpo que se dirige a CD20 y Bendamustina, un agente quimioterapéutico, se evaluaron en un modelo de leucemia linfocítica crónica de células B humanas usando células JVM-3 (CD37+/CD20+) implantadas subcutáneamente en ratones SCID hembra. Seis días después de la inoculación de células, se dividieron aleatoriamente noventa ratones en nueve grupos (n = 10 por grupo) por volumen de tumor. El tratamiento se inició el día después de la división aleatoria y los grupos incluyeron un grupo de control dosificado con PBS (200 yL/inyección) , anticuerpo huCD37-3 y conjugado huCD37-3 -SMCC-DMl no escindible, anticuerpo Ofatumumab y Bendamustina. Los tratamientos se administraron como una única dosis intravenosa de 10, 5 y 2,5 mg/kg para anticuerpo huCD37-3 y huCD37-3 -SMCC-DMl a 5 mg/kg, dos veces por semana por tres para Ofatumumab y como una única dosis de 50 mg/kg para Bendamustina.
Tratamientos únicos a 10, 5 y 2, 5 mg/kg de anticuerpo huCD37-3 y conjugado huCD37-3 -SMCC-DMl así como anticuerpo Ofatumumab a 5 mg/kg/inyección, 2qw x 3, fueron bien tolerados sin pérdida de peso corporal como con los animales de control de PBS. El tratamiento con Bendamustina fue tolerado con 8% de pérdida de peso corporal media (nadir al día 9) . Diez de diez animales de control de PBS desarrollaron tumores (100% de tasa de arraigo de tumor) , alcanzando un volumen de tumor medio de 500 mm3 a los 16 días después de la inoculación de células. Se calcularon los volúmenes de tumor promedio y medio para cada grupo de tratamiento. Los resultados se graficaron contra días después de la inoculación para el volumen de tumor medio y para el volumen de tumor promedio. El tratamiento con agentes de estándar de cuidado Ofatumumab (5 mg/kg, dos veces por semana por tres) y Bendamustina (dosis intravenosa simple de 50 mg/kg) fueron activos en este estudio con 39% y 31% de T/C, respectivamente. Los tratamientos intravenosos simples con 2, 5 mg/kg de anticuerpo huCD37-3 y conjugado huCD37-3-SMCC-DMl fueron inactivos en este estudio con > 42% de T/C. El tratamiento intravenoso simple con 10 mg/g de anticuerpo huCD37-3 y conjugado huCD37-3-SMCC-DMl fue activo con 29% y 26% de T/C, respectivamente y el tratamiento con una dosis intermedia (5 mg/kg de inyección simple) de anticuerpo huCD37-3 y conjugado huCD37-3-SMCC-DMl fue activo con 31% y 16%) de T/C, respectivamente. En la Figura 11 se muestra la actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de anticuerpo huCD37-3 , huCD37-3-SMCC-DMl, Ofatumumab y Bendamustina en ratones SCID con xenoinjertos de tumor humano JVM-3. En la Figura 12 se muestra la actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de huCD37-3-SMCC-DMl solo como un tratamiento intravenoso simple (10 mg/kg/inyección) en este modelo.
Ejemplo 5 Correlación de actividad antitumoral (volumen de tumor medio, mm3) de huCD37-3-SMCC-DMl solo como un tratamiento intravenoso simple (10 mg/kg/inyección) en modelos de xenoinjerto con puntuaciones de tinción de IHC El efecto antitumoral de huCD37-3-SMCC-DMl se evaluó en tres modelos de xenoinjerto de linfoma como se describe en los Ejemplos 2, 3 y 4 y se correlacionó con la expresión de CD37 respectiva, determinada por IHC como se describe en el Ejemplo 1. Las muestras FFPE preparadas a partir de modelos de tumor de xenoinjerto de ratón se evaluaron para determinar la positividad de CD37 usando el método de ensayo manual descrito en el Ejemplo 1. Los tejidos de xenoinjerto de ratón FFPE derivados de las siguientes líneas celulares mostraron los siguientes patrones de tinción: SU-DHL-4 mostró patrones de tinción homogéneos con nivel 3 de intensidad; DOHH-2 mostró patrones de tinción homogéneos con niveles 2 y 3 de intensidad; JVM-3 mostró patrones de heterogéneos con niveles 2 y 3 de intensidad. En las Figuras 8, 10 y 12 se muestran fotografías representativas de xenoinjertos de tumor y actividad in vivo respectiva de un único tratamiento intravenoso de huCD37-3-SMCC-DMl (10 mg/kg/inyección) . En la Tabla 5 se enumera un resumen de la actividad in vivo y puntuaciones de tinción de CD37 respectivas para cada xenoinjerto. Entre los tres xenoinjertos evaluados, el tumor con mayor expresión (3 homo) también mostró la mayor actividad cuando se trató con huCD37-3-SMCC-DMl . Los otros 2 modelos mostraron menor expresión y menor actividad.
Tabla 5. Actividad in vivo de huCD37-3-SMCC-DMl y puntuaciones de tinción de CD37 respectivas en modelos de Ejemplo 6 Tinción inmunohistoquímica de CD37 en muestras fijadas con formalina e incrustadas en parafina (FFPE) - métodos automáticos.
El ensayo de tinción por IHC usó el clon CTl de anticuerpo anti-CD37 de murino (Leica Cat# NCL-CD37) como el articulo de prueba y control de isotipo de IgGl de murino (Leica, Cat# MOPC21 AB) y se llevó a cabo en el equipo de tinción automático Leica Bond RX. La cera de parafina se retiró cuando los portaobjetos que contenían muestras se hornearon a 60 °C. Luego el exceso de cera de parafina se retiró con solución Dewax (Leica) . Luego de retirar el antígeno en solución de eliminación de epítopo unido 1 a pH 6,0 (ER1, Leica), las secciones se bloquearon en 3-4% de peróxido. Para preparar las soluciones de trabajo de anticuerpos primarios, los artículos de control de isotipo y de prueba de CD37 se diluyeron cada uno a 4,2 ug/mL en diluyente de anticuerpo. Los portaobjetos se incubaron con el artículo de prueba (anti-CD37) o artículo de control (muIgGl) , seguido de incubación con el reactivo post primario (IgG anti- atón de conejo, Leica) , luego por incubación con un polímero (HRP-IgG anti-conejo de cabra, Leica) . Los portaobjetos se desarrollaron por incubación con DAB (3 , 3 -diaminobenzidina tetraclorhidrato , Leica) dando como resultado la señal de color. Los portaobjetos que contienen secciones de tejido desarrollado se contratiñeron con hematoxilina (Leica) luego se les retiró el exceso de tinción y se deshidrataron a través de una serie de 95% y 100% de inmersión de ETOH, seguido de inmersión en xileno. Los cubreobjetos se montaron en los portaobjetos usando medio de montaje (Richard Alian Scientific) .
Todas las muestras teñidas se evaluaron y puntuaron. Las muestras de control se evaluaron primero seguido de muestras de prueba (secciones enteras y puntuaciones individuales de los microarreglos de te j ido) . Para cada tejido de tumor o sedimento celular evaluado, se informó una descripción de la intensidad de tinción y proporción respectiva de células tumorales teñidas. Se registró la tinción asociada a la membrana para cada muestra. Cuando se evaluaron puntuaciones duplicadas de un paciente, solo se incluyó la puntuación más alta en el análisis. Si la puntuación describe solo tinción citoplásmica, entonces la puntuación final se informó que era cero (0) . Se le dieron puntuaciones de intensidad y uniformidad a cada muestra como se describe en la Tabla 6. Se puntuaron los patrones de distribución e intensidad de tinción respecto de la tinción de IgG de control (no específico) . La intensidad se puntuó en una escala de 0 a 3 (0 = sin tinción, 1 = débil, 2 = moderada y 3 = fuerte) y la distribución se puntuó como focal (<25% de células teñidas) , heterogénea (25-75% de células teñidas) y homogénea (>75% de células teñidas) . En el tejido normal, solo las subestructuras definidas se evaluaron al calcular la intensidad y producción.
Tabla 6. Sistema de puntuación por IHC que consiste en escalas de intensidad y uniformidad Las muestras de tumor FFPE derivaron de micro arreglos de tumor, así como bloques de tejido humano.
Las células (células tumorales o células transfectadas) estaban fijadas con formalina e incrustadas en parafina (FFPE) . Las muestras de sedimento celular FFPE que se demostró que presentaban varios intervalos de expresión de CD37 por citometría de flujo (Daudi, Ramos, Namalwa y Colo205) , tejidos humanos normales (bazo y amígdalas) y muestras de tejido de linfoma no Hodgkin se usaron para caracterizar los controles positivos y negativos y para el análisis de especificidad.
Para determinar las condiciones de ensayo, se evaluó un intervalo de diluciones de artículo de control y de prueba para seleccionar condiciones que presentan un nivel apropiado de sensibilidad . Se real izaron experimentos en un panel de muestras FFPE incluyendo sedimentos celulares positivos para CD37 , tej ido humano normal y micro arreglos de tej ido que consisten en muestras de l infoma no Hodgkin positivas para CD37 . Cada muestra se tiñó con una dilución en serie de concentraciones de artículo de prueba (2 , 1, 4 , 2 y 8 , 4 µ<^/???) o artículo de control . Todas las muestras se evaluaron y puntuaron por un patólogo certificado y se categorizaron como de célula pequeña (linfoma folicular [EL] , linfoma de células del manto [MCL] , linfoma de células B de zona marginal de tipo MALT, linfoma de células B de zona marginal, linfoma de células pequeñas no clasificado, linfoma no Hodgkin no clasificado [NHL] ) o de célula grande (DLBCL) . Las intensidades de tinción relativas para cada dilución se compararon para cada muestra para identificar la dilución óptima . El criterio de dilución óptimo fue una dilución que 1) no provocó tinción de fondo en muestra teñidas con control de isotipo 2) no provocó tinción en controles de tej ido negativo teñidos con artículo de prueba y 3) diferenció entre varios niveles de expresión de CD37 asociada a la membrana entre muestras de prueba que representan la indicación de interés (por ejemplo, DLBCL, FL, CLL) . La concentración del artículo de prueba de 4, 2 g/mL se identificó experimentalmente como una dilución óptima y por lo tanto es una concentración particularmente útil . En la Tabla 7 se muestra un resumen de resultados de tinción para muestras de linfoma de células grandes y en la Figura 13 se muestra una gráf ica de la distribución de puntuación para cada concentración . En la Tabla 8 se muestra un resumen de resultados de tinción para muestras de linfoma de células pequeñas y en la Figura 14 se ilustra una gráfica de la distribución de puntuación para cada concentración.
Tabla 7. Distribución de tinción en muestras de linfoma de células grandes Tabla 8. Distribución de tinción en muestras de linfoma de células pequeñas en 3 concentraciones Ejemplo 7 Identificación y caracterización de controles que caracterizan el intervalo dinámico de los métodos de tinción automatizados por ensayo Controles de calidad: La zona del manto y la zona marginal del bazo humano normal y la zona germinal y zona del manto de las amígdalas se usaron como controles positivos en cada ensayo para verificar que el procedimiento de tinción tuviera el desempeño esperado. Las áreas interfoliculares de las amígdalas humanas normales y la pulpa roja del bajo normal humano se usaron como controles negativos. Estos controles se usaron como controles de verificación de ensayo durante las fases de optimización y validación. Estos resultados se evaluaron para confirmar que los controles seleccionados proporcionan resultados coherentes y para confirmar que abarcan el intervalo dinámico del ensayo. En la Tabla 9 se enumeran los ejemplos de puntuaciones de tinción para los controles de calidad a cuatro concentraciones de tinción (2,1, 4,2, 8,4 y 16,7 g/mL) e indican que la concentración del anticuerpo primario afectó los resultados de tinción de las muestras evaluadas.
Tabla 9.
Ejemplo 8 Análisis de rendimiento del método de tinción automático El uso deseado de este ensayo es detectar específicamente la capacidad de reproducción de CD37 y con la sensibilidad apropiada para diferenciar varios niveles y uniformidad de expresión de CD37 asociada a la membrana (intervalo dinámico óptimo) en neoplasias malignas de células B. Por lo tanto, la especificidad, capacidad de reproducción y sensibilidad se consideran criterios de rendimiento.
La especificidad y sensibilidad del ensayo de estudio se caracterizó mediante tinción y evaluación de un panel de microarreglos de tejido. Se observó que la tinción confirma que la tinción positiva está coherentemente ubicada en el tejido tumoral con componentes de tejido adyacente normales incluyendo estroma, vasos sanguíneos y tejido de órgano normal con tinción negativa o positiva según se esperaba. Para cada subtipo de neoplasia maligna de célula B, se observó la distribución de puntuaciones de tinción entre microarreglos de tejido. Una distribución similar de puntuaciones sugiere que el método tuvo un buen desempeño y no fue demasiado sensible a variaciones mínimas en varias condiciones de fijación y procesamiento. La exactitud del ensayo de estudio también se investigó evaluando la capacidad de reproducción dentro de las corridas y entre las corridas del ensayo usando muestras FFPE que consistían en sedimentos de células que expresan varios niveles de CD37: Daudi (expresión alta de CD37) ; Ramos (expresión intermedia de CD37) ; Namalwa (expresión baja de CD37) y Colo205 (negativa) . Además, se incluyeron muestras de bazo humano normal (dos muestras) , amígdala de humano normal y una muestra de linfoma de zona marginal. Para la capacidad de reproducción dentro de las corridas, se colocaron nueve portaobjetos que contenían cada uno una sección de cada control en ubicaciones aleatorias en el Leica Bond RX. Para la capacidad de reproducción entre las corridas, se tiñeron tres portaobjetos que contenían secciones de las mismas muestras tres días diferentes. Todos los portaobjetos tanto de capacidad de reproducción dentro de las corridas como entre las corridas se evaluaron y se encontró que se podían reproducir .
Ejemplo 9 Una puntación de tinción de CD37 por IHC se correlaciona con la actividad de huCD37-3-SMCC-DMl La potencia y especificidad de huCD37-3 -SMCC-DM1 se analiza contra líneas celulares positivas para CD37 con un amplio intervalo de expresión de CD37. El nivel de expresión de CD37 se determina por citometría de flujo como se describe en el Ejemplo 1. De manera alternativa, el nivel de la expresión de CD37 se determina por IHC usando un método de tinción manual como se describe en el Ejemplo 1 o por IHC usando un método de tinción automático como se describe en los Ejemplos 6-8. La potencia se evalúa usando modelos de xenoinjerto in vivo como se describe en los Ejemplos 2-4. La dosificación de huCD37-3 -SMCC-DM1 se realiza intravenosamente a dosis tales como 10 mg/kg, 5 mg/kg o 2, 5 mg/kg. Además, se pueden usar células positivas para CD37 adecuadas con bajos niveles de expresión de CD37 tales como, por ejemplo, Namalwa. Para verificar la especificidad de actividad, se pueden incluir líneas de células negativas para CD37, tales como Colo205 en los experimentos .
Todas las publicaciones, patentes, solicitudes de patente, sitios de internet y números de acceso/secuencias de bases de datos (incluyendo tanto secuencias de polinucleótidos como de polipéptidos) citadas en la presente se incorporan a la presente mediante referencia en su totalidad a todos los efectos en la misma medida que si se indicara que cada publicación, patente, solicitud de patente, sitio de internet o número de acceso/secuencia de bases de datos individuales se incorpora de manera específica e individual mediante referencia.
BREVE DESCRIPCION DE LAS SECUENCIAS SEQ ID N0:1 - CD37 humano MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAI SGIFT GIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVE KTIQ YGTNPEETAAEES DYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSC YNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGHLARSRHSADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHN NLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLAYR Secuencias de aminoácidos de CDR de cadena pesada variable Secuencias de aminoácidos de CDR de cadena l igera variable Secuencias de aminoácidos de cadena pesada variable Anticuerpo Secuencia de aminoácidos VH (SEQ ID NO) " muCD37-3 QVQVKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTTSGVSWVRQPPGKGLEWLGVIW i GDGSTNYHSALKSRLSIKKDHSKSQVFLKLNSLQTDDTATYYCAKGGYSLA ! HWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO:55) chCD37-3 ! 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NO:89) huCD37-3vl .O QVQVQESGPGLVAPSQTLSITCTVSGFSLTTSGVSWVRQPPG GLEWLGVIW GDGSTNYHPSLKSRLSIKKDHS SQVFL LNSLTAADTATYYCAKGGYSLA HWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV HKPSNT VDKKVEP SCD THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV WDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQ DWLNGKEYKC VSN ALPAPIEKT1S AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE Y TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:90) huCD37-3vl .l QVQVQESGPGLVAPSQTLSITCW GDGSTNYHSSLKSRLSI KDHS SQVFLKLNSLTAADTATYYCAKGGYSLA HWGQGTLVTVSSAST GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNM PSNT KVDKKVEPKSCD THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKP DTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH AKT PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE^SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID N0^91) muCD37-12 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTKYGMNWVKQAQG GL WMG 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Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (58)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:
1. Un método para aumentar la eficacia de la terapia del cáncer con un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37, caracterizado porque comprende administrarle a un sujeto que tiene cáncer un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37, en donde se detectó la expresión aumentada del gen o proteína CD37 en una muestra cancerosa del sujeto usando un método de detección que distingue entre intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una muestra cancerosa que expresa CD37 en comparación con la intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una o más muestras de referencia.
2. Un método para identificar un cáncer como sensible al tratamiento con un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37, caracterizado porque comprende: (a) medir el nivel de expresión de CD37 en una muestra cancerosa obtenida del cáncer, en donde la medición comprende el uso de un método de detección que distingue entre intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una muestra cancerosa que expresa CD37 en comparación con intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una o más muestras de referencia; (b) determinar una puntuación de intensidad de tinción de CD37 o puntuación de uniformidad de tinción para la muestra cancerosa y (c) comparar la puntuación de intensidad de tinción o uniformidad de tinción de CD37 determinada en el paso (b) a un valor relativo determinado midiendo la expresión de proteína CD37 en al menos una muestra de referencia, en donde la al menos una muestra de referencia es un tejido, célula o muestra de sedimento celular que no es sensible al tratamiento con un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37, y en donde una puntuación de intensidad de tinción de CD37 para la muestra determinada en el paso (b) que es mayor que el valor relativo identifica el cáncer como sensible al tratamiento con un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37.
3. Un método para identificar un cáncer que probablemente responda a un anticuerpo anti-CD37 o inmunocon ugado anti-CD37, caracterizado porque comprende: (a) poner en contacto una muestra biológica que comprende células del cáncer con un agente que se une a la proteína CD37 de superficie celular; (b) detectar la unión del agente que se une a la proteína CD37 de superficie celular de la muestra biológica de (a) ,· (c) asignar una puntuación a la unión del paso (b) , en donde la puntuación se asigna en comparación con una o más muestras de referencia; y (d) comparar la puntuación en el paso (c) con la puntuación de un tejido o célula de referencia, en donde una puntuación para el nivel de CD37 de cáncer que es mayor que la puntuación para una muestra de referencia que tiene una expresión de CD37 baja o negativa o una puntuación para el nivel de CD37 de cáncer que es igual o mayor que la puntuación para una muestra de referencia que tiene una expresión de CD37 alta identifica a el cáncer como probable a responder a un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37.
4. Un método para identificar un sujeto que tiene un cáncer como probable a responder a un régimen de tratamiento de baja dosis de anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37, caracterizado porque comprende: (a) poner en contacto una muestra biológica que comprende células del cáncer con un agente que se une a la proteína CD37 de superficie celular; (b) detectar la unión del agente a la muestra biológica de (a) ; (c) asignar una puntuación a la unión del paso (b) , en donde la puntuación se asigna en comparación con una o más muestras de referencia; y (d) comparar la puntuación en el paso (c) con la puntuación de un tejido o célula de referencia, en donde una puntuación para el nivel de CD37 de cáncer que es mayor que la puntuación para una muestra de referencia que tiene una expresión de CD37 baja o negativa o una puntuación para el nivel de CD37 de cáncer que es igual o mayor que la puntuación para una muestra de referencia que tiene una expresión de CD37 alta identifica a el cáncer como probable a responder a una baja dosis anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37.
5. Un método para optimizar un régimen terapéutico con un anticuerpo anti-CD37 o un inmunoconjugado anti-CD37 para un sujeto que tiene cáncer, caracterizado porque comprende: (a) detectar el nivel de expresión de CD37 en una muestra cancerosa obtenida del sujeto; (b) comparar el nivel de expresión de CD37 en la muestra cancerosa con la expresión de CD37 en una muestra de referencia; (c) determinar una puntuación de intensidad de tinción de CD37 para la muestra cancerosa; y (d) administrar una mayor dosis de un anticuerpo anti-CD37 o un inmunoconjugado anti-CD37 al sujeto si la puntuación es baja o administrar una menor dosis de un anticuerpo anti-CD37 o un inmunoconjugado anti-CD37 al sujeto si la puntuación es alta.
6. Un método para detectar la expresión de CD37 de superficie celular en células cancerosas en una muestra cancerosa de un sujeto, caracterizado porque comprende: (a) obtener una muestra cancerosa, en donde la muestra está fijada con formalina e incrustada en parafina; (b) poner en contacto la muestra con un anticuerpo que se une específicamente a CD37 de superficie celular; (c) medir la unión del anticuerpo en (b) a el CD37 de superficie celular en la muestra cancerosa usando un método de detección que puede distinguir entre intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una muestra que expresa CD37 en comparación con intensidad de tinción o uniformidad de tinción en una o más muestras de referencia; y (d) asignar una puntuación de expresión de CD37 a el CD37 después de comparar el nivel de intensidad de tinción o uniformidad de tinción de CD37 de superficie celular en la muestra cancerosa de tumor con una o más muestras de referencia.
7. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque la detección se realiza por inmunohistoquímica (IHC) .
8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la IHC es IHC calibrada que puede distinguir diferentes niveles de expresión de CD37.
9. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizado porque el método de detección produce un intervalo de intensidad de tinción para muestras que tienen expresión baja de CD37 de superficie celular, expresión intermedia de CD37 de superficie celular, o expresión alta de CD37 de superficie celular.
10. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, caracterizado porque el método de detección distingue entre intensidad de tinción y uniformidad de tinción en una muestra cancerosa que expresa CD37 en comparación con una muestra de referencia.
11. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque la muestra cancerosa o la muestra biológica tiene una puntuación de intensidad de tinción de 2, 3, o 3+ para la expresión de CD37 mediante inmunohistoquímica .
12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la muestra cancerosa o la muestra biológica tiene una puntuación de intensidad de tinción de 2, 3, o 3+ para la expresión de CD37 mediante inmunohistoquímica en una muestra fijada con formalina e incrustada en parafina.
13. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 10-12, caracterizado porque la muestra cancerosa o la muestra biológica tiene una uniformidad de tinción para expresión de CD37 que es homogénea.
14. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7-12 , caracterizado porque la muestra cancerosa o la muestra biológica tiene una puntuación de intensidad de tinción de 2 , 3, o 3+ para CD37 y una uniformidad de tinción que es heterogénea u homogénea .
15. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7-14, caracterizado porque la inmunohistoquímica se realiza de forma manual.
16. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7-14, caracterizado porque la inmunohistoquímica se realiza usando un sistema automático.
17. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16, caracterizado porque la muestra de referencia es una muestra de referencia positiva o una muestra de referencia negativa.
18. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-17, caracterizado porque la muestra de referencia comprende células, sedimentos celulares o tejido.
19. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-18, caracterizado porque la detección comprende detectar la expresión de CD37 con un anticuerpo que se une específicamente a CD37 de superficie celular.
20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el anticuerpo es CT1.
21. El método de conformidad con la reivindicación 19 o 20, caracterizado porque el anticuerpo además comprende un reactivo de detección que se selecciona del grupo que consiste en: una enzima, un fluoróforo, una etiqueta radioactiva y un luminóforo.
22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el reactivo de detección se selecciona del grupo que consiste en: biotina, digoxigenina, fluoresceína, tritio, rodamina y peroxidasa de rábano picante.
23. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19-22, caracterizado porque la concentración del anticuerpo es de alrededor de 1-10 ig/mh.
24. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la concentración del anticuerpo es de alrededor de 4-5 pg/mL.
25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la concentración del anticuerpo es de alrededor de 4,2 pg/mL.
26. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-25, caracterizado porque el cáncer se selecciona del grupo que consiste en linfomas de células B, NHL, leucemia linfoblástica de células B precursoras/linforna y neoplasmas de células B maduras, leucemia linfocítica crónica de células B (CLL) /linfoma linfocítico pequeño (SLL) , leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de células del manto (MCL) , linfoma folicular (FL) , (FL) de bajo grado, grado intermedio y alto grado, linfoma central folicular cutáneo, linfoma de células B de zona marginal, linfoma de células B de zona marginal de tipo MALT, linfoma de células B de zona marginal nodal, linfoma de células B de zona marginal de tipo esplénico, leucemia de células pilosas, linfoma de células B grande difuso (DLBCL) , linfoma de Burkitt (BL) , plasmacitoma, mieloma de células plasmáticas, trastorno linfoproliferativo post-transplante, macroglobulinemia de Waldenstrom y linfoma de células grandes anaplásico (ALCL) .
27. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-26, caracterizado porque la muestra cancerosa o la muestra biológica es un tejido, sangre, plasma, médula ósea o linfa.
28. Un artículo de fabricación caracterizado porque comprende un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37, un recipiente y un prospecto o etiqueta que indica que el anticuerpo o inmunoconjugado se puede usar para tratar un cáncer caracterizado por la expresión de CD37 a un nivel de 2 , 3 o 3+ medido por IHC.
29. Una combinación de kit farmacéutico y de diagnóstico caracterizada porque comprende un anticuerpo anti-CD37 de murino para usarse en el diagnóstico y un anticuerpo anti-CD37 o inmunoconjugado anti-CD37 para usarse en la terapia.
30. La combinación de kit farmacéutico y de diagnóstico de conformidad con la reivindicación 29, caracterizada porque el anticuerpo de diagnóstico es un anticuerpo de detección que puede detectar la expresión de CD37 por IHC.
31. Un kit de diagnóstico caracterizado porque comprende un anticuerpo de detección que se une específicamente a CD37 de superficie celular, un reactivo para inmunohistoquímica (IHC) y una o más muestras de referencia estandarizadas, donde las muestras de referencia estandarizadas comprenden células, sedimentos celulares o muestras de tejido fijadas con formalina e incrustadas en parafina y donde la una o más muestras de referencia estandarizadas son de células, sedimentos celulares o tejidos que no expresan CD37, con expresión baja de CD37 o expresión alta de CD37.
32. El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 28 o el kit de conformidad con la reivindicación 30 o 31, caracterizado porque la IHC es una IHC calibrada que puede distinguir diferentes niveles de expresión de CD37.
33. El artículo de fabricación o kit de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la IHC calibrada produce un intervalo de intensidad de tinción para muestras que tienen expresión baja de CD37 de superficie celular, expresión intermedia de CD37 de superficie celular, o expresión alta de CD37 de superficie celular.
34. El artículo de fabricación o el kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 28 o 30-33, caracterizado porque la IHC distingue entre intensidad de tinción y uniformidad de tinción en una muestra que expresa CD37 en comparación con una muestra de referencia.
35. El artículo de fabricación o kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 28 o 30-33, caracterizado porque la IHC se realiza en una muestra fijada con formalina e incrustada en parafina.
36. El artículo de fabricación o kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 28 o 30-33, caracterizado porque la IHC se realiza de forma manual.
37. El artículo de fabricación o kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 28 o 30-33, caracterizado porque la IHC se realiza usando un sistema automático.
38. El artículo de fabricación o kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 28-30 o 32-37, caracterizado porque el inmunoconjugado de CD37 comprende un anticuerpo anti-CD37, un enlazador y una citotoxina.
39. El artículo de fabricación o kit de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el anticuerpo anti-CD37 es CD37-3, CD37-38 o CD37-50 quimérico o humanizado.
40. El artículo de fabricación o kit de conformidad con la reivindicación 38 o 39, caracterizado porque el enlazador se selecciona del grupo que consiste en un enlazador escindible, un enlazador no escindible, un enlazador hidrofílico y un enlazador basado en ácido dicarboxílico .
41. El artículo de fabricación o kit de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el enlazador se selecciona del grupo que consiste en: 4- (2-piridilditio) entanoato de N-succinimidilo (SPP) o 4- (2-piridilditio) -2-sulfopentanoato de N-succinimidilo (sulfo-SPP) ; 4- (2-piridilditio) butanoato de N-succinimidilo (SPDB) o 4- (2-piridilditio) -2-sulfobutanoato de N-succinimidilo (sulfo-SPDB) ; 4 - (maleimidometil) ciclohexanocarboxilato de N-succinimidilo (SMCC) ; 4 - (maleimidometil) ciclohexanocarboilato de N-sulfosuccinimidilo (sulfoSMCC) ; N-succinimidil-4- (yodoacetil) -aminobenzoato (SIAB) y N-succinimidil- [ (N-maleimidopropionamido) -tetraetilenglicol] éster (NHS-PEG4- maleimida) .
42. El artículo de fabricación o kit de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque el enlazador es 4 - (maleimidometil ) ciclohexanocarboxilato de N-succinimidilo (SMCC) .
43. El artículo de fabricación o kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 38-42, caracterizado porque la citotoxina se selecciona del grupo que consiste en un maitansinoide , análogo de maitansinoide , benzodiazepina, taxoide, CC-1065, análogo de CC-1065, duocarmicina, análogo de duocarmicina, calicheamicina, dolastatina, análogo de dolastatina, auristatina, derivado de tomaimicina, y derivado de leptomicina o un profármaco de la citotoxina.
44. El artículo de fabricación o kit de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque la citotoxina es un maitansinoide .
45. El artículo de fabricación o kit de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque el maitansinoide es N (21 ) -deacetil-N (2 ' ) - (3-mercapto-l-oxopropil) -maitansina o N(2 ' ) -deacetil-N2 - (4-mercapto-4 -metil-1-oxopentil) -maitansina.
46. El artículo de fabricación o kit de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque el maitansinoide es N(2 ' ) -deacetil- (2 ' ) - (3-mercapto-l-oxopropil) -maitansina (DM1) .
47. El artículo de fabricación o kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 38-46, caracterizado porque el inmunoconjugado comprende el anticuerpo huCD37-3, el enlazador SMCC y el maitansinoide DM1.
48. La combinación de kit farmacéutico y de diagnóstico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 29-30 y 32-47, caracterizado porque comprende además una o más muestras de referencia .
49. La combinación de kit farmacéutico y de diagnóstico de conformidad con la reivindicación 48, caracterizada porque la muestra de referencia es una muestra de referencia positiva o una muestra de referencia negativa.
50. La combinación de kit farmacéutico y de diagnóstico de conformidad con la reivindicación 48 o 49, caracterizada porque la muestra de referencia comprende células, sedimentos celulares o tejido.
51. El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 30-37, caracterizado porque el anticuerpo de detección además comprende un reactivo de detección que se selecciona del grupo que consiste en: una enzima, un fluoróforo, una etiqueta radioactiva y un luminóforo.
52. El kit de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque el reactivo de detección se selecciona del grupo que consiste en: biotina, digoxigenina, fluoresceína, tritio, rodamina y peroxidasa de rábano picante.
53. El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 30-37 o 51-52, caracterizado porque la concentración del anticuerpo de detección es de alrededor de 1-10 µ9/t?]1? .
54. El kit de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque la concentración del anticuerpo de detección es de alrededor de 4-5 g/mL.
55. El kit de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque la concentración del anticuerpo de detección es de alrededor de 4,2 µg/mL.
56. El kit de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el control con expresión baja de CD37 es una célula tumoral Namalwa o RL.
57. El kit de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el control con expresión alta de CD37 se selecciona del grupo que consiste en: líneas celulares Daudi y Ramos y una línea celular transfectada de forma estable o transitoria con CD37.
58. El kit de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque la línea celular transfectada de forma estable o transitoria con CD37 es 300- 19/CD37.
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2610662C9 (ru) 2010-03-12 2017-07-24 Иммьюноджен, Инк. Cd37-связывающие молекулы и их иммуноконъюгаты
SG193447A1 (en) 2011-04-01 2013-10-30 Immunogen Inc Cd37-binding molecules and immunoconjugates thereof
WO2015175533A2 (en) * 2014-05-13 2015-11-19 Immunogen, Inc. Anti-cd37 immunoconjugate dosing regimens
JP6979877B2 (ja) * 2015-06-08 2021-12-15 デビオファーム インターナショナル， エス． アー． 抗ｃｄ３７イムノコンジュゲートおよび抗ｃｄ２０抗体の組み合わせ
US11104740B2 (en) * 2015-08-28 2021-08-31 Debiopharm International, S.A. Antibodies and assays for detection of CD37
EP3535297B1 (en) 2016-11-02 2022-08-10 Debiopharm International, S.A. Methods for improving anti-cd37 immunoconjugate therapy
CN107603276A (zh) * 2017-09-14 2018-01-19 郑州乐业生物科技有限公司 一种稳定的生物染色剂及其制备方法
CN110511900B (zh) * 2018-05-21 2023-08-04 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心 精子细胞表面标志物的筛选与应用
CN111579798A (zh) * 2020-05-29 2020-08-25 深圳市锦欣医疗科技创新中心有限公司 一种评估子宫内膜容受性的试剂盒及其使用方法
US20230184639A1 (en) * 2020-05-29 2023-06-15 Sony Group Corporation Information processing device, information processing method, computer program, and target molecule detection system
RU2767693C1 (ru) * 2021-03-03 2022-03-18 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" Способ морфометрической оценки прогноза течения диффузной B-крупноклеточной лимфомы по индексу доли опухолевых клеток, экспрессирующих pSTAT3 и pAKT1 в лимфатических узлах

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8318906B2 (en) * 2005-04-15 2012-11-27 The Regents Of The University Of California EMP2 antibodies and their therapeutic uses
PE20140196A1 (es) * 2007-08-09 2014-03-19 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-cd37
WO2009085576A2 (en) * 2007-12-28 2009-07-09 Spring Bioscience Corporation Positive control cell pellets for immunohistochemistry and methods of use thereof
SI2132228T1 (sl) * 2008-04-11 2011-10-28 Emergent Product Dev Seatle CD37 imunoterapevtik in kombinacija z njegovim bifunkcionalnim kemoterapevtikom
US20100135900A1 (en) * 2008-11-13 2010-06-03 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Cd37 immunotherapeutic combination therapies and uses thereof
NO331080B1 (no) * 2010-01-29 2011-09-26 Nordic Nanovector As Radioimmunkonjugater, farmasøytiske sammensetninger og kit omfattende det samme og anvendelse derav
RU2610662C9 (ru) * 2010-03-12 2017-07-24 Иммьюноджен, Инк. Cd37-связывающие молекулы и их иммуноконъюгаты
AU2011239583A1 (en) * 2010-04-15 2012-11-29 Alper Biotech, Llc Monoclonal antibodies against HER2 antigens, and uses therefor

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