MX2014010492A - Proceso mejorado para la produccion de fibrinogeno y fibrinogeno producido por este. - Google Patents
Proceso mejorado para la produccion de fibrinogeno y fibrinogeno producido por este.Info
- Publication number
- MX2014010492A MX2014010492A MX2014010492A MX2014010492A MX2014010492A MX 2014010492 A MX2014010492 A MX 2014010492A MX 2014010492 A MX2014010492 A MX 2014010492A MX 2014010492 A MX2014010492 A MX 2014010492A MX 2014010492 A MX2014010492 A MX 2014010492A
- Authority
- MX
- Mexico
- Prior art keywords
- fibrinogen
- process according
- chelating agent
- concentration
- glycine
- Prior art date
Links
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 title claims abstract description 171
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 title claims abstract description 171
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 title claims abstract description 170
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 65
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 50
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 19
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims abstract description 35
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 39
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 29
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 18
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 15
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 claims description 14
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 14
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 claims description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 14
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 12
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 9
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 9
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 9
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 claims description 8
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 8
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 claims description 8
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229940105784 coagulation factor xiii Drugs 0.000 claims description 7
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 7
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 claims description 7
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 6
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 claims description 6
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- 108090000481 Heparin Cofactor II Proteins 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 4
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 4
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 3
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 claims description 2
- FTEDXVNDVHYDQW-UHFFFAOYSA-N BAPTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)C1=CC=CC=C1OCCOC1=CC=CC=C1N(CC(O)=O)CC(O)=O FTEDXVNDVHYDQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 2
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 2
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 claims description 2
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims description 2
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 claims description 2
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 claims description 2
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 1
- RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N Diethylenetriamine Chemical compound NCCNCCN RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000004032 Heparin Cofactor II Human genes 0.000 claims 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 claims 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 claims 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 11
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 9
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 8
- 239000000535 fibrinogen concentrate Substances 0.000 description 8
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 8
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 7
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 5
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 5
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 4
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 4
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 4
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 4
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- -1 sulfopropyl functional groups Chemical group 0.000 description 4
- 208000002004 Afibrinogenemia Diseases 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 3
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 102100030500 Heparin cofactor 2 Human genes 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 3
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 3
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- JWICNZAGYSIBAR-LEEGLKINSA-N (4s)-4-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]acetyl]amino]-5-[[2-[[(2s)-3-carboxy-1-[[(2s)-1-[[1-[[(2s)-1-[[(2s)-4-carboxy-1-[[2-[[2-[[2-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-4-(diaminomethylideneamino Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CC=CC=C1 JWICNZAGYSIBAR-LEEGLKINSA-N 0.000 description 2
- XFCMNSHQOZQILR-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2-methylprop-2-enoyloxy)ethoxy]ethyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOCCOC(=O)C(C)=C XFCMNSHQOZQILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-ZXXMMSQZSA-N D-iditol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 2
- 229940122601 Esterase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 108010080379 Fibrin Tissue Adhesive Proteins 0.000 description 2
- 101800000974 Fibrinopeptide A Proteins 0.000 description 2
- 102400000525 Fibrinopeptide A Human genes 0.000 description 2
- 239000012605 Fractogel® EMD TMAE Substances 0.000 description 2
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 2
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 2
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 201000007182 congenital afibrinogenemia Diseases 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229950007919 egtazic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000002329 esterase inhibitor Substances 0.000 description 2
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000004023 fresh frozen plasma Substances 0.000 description 2
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- 239000003106 tissue adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010016075 Factor I deficiency Diseases 0.000 description 1
- 101800003778 Fibrinopeptide B Proteins 0.000 description 1
- 102400001063 Fibrinopeptide B Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010059484 Haemodilution Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 1
- 102100035140 Vitronectin Human genes 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229910010293 ceramic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012504 chromatography matrix Substances 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 description 1
- 108010073651 fibrinmonomer Proteins 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N glycidyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCC1CO1 VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000014666 liquid concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 1
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 208000008864 scrapie Diseases 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/75—Fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Proceso para purificar fibrinógeno de un fibrinógeno de una fuente que contiene fibrinógeno por precipitación de fibrinógeno por un agente de precipitación de una solución que contiene fibrinógeno en presencia de uno o más agente(s) quelante(s) y remoción del sobrenadante de la pasta de fibrinógeno, caracterizado porque el fibrinógeno se extrae de la pasta que forma una fracción líquida que contiene fibrinógeno y un residuo no disuelto, que se separa del líquido.
Description
PROCESO MEJORADO PARA LA PRODUCCION DE FIBRINOGENO Y
FIBRINOGENO PRODUCIDO POR ESTE
CAMPO DE LA INVENCION
La presente invención se relaciona con un proceso para purificar fibrinógeno a partir de una fuente que contiene fibrinógeno, un producto de fibrinógeno obtenible de acuerdo con el proceso de la invención así como también una resina de intercambio aniónico seleccionada del grupo que consiste de un material de soporte que comprende una cadena principal de polímero hidroxilado con grupos amino terciario o cuaternario injertado para purificación o producción de un producto de fibrinógeno .
ANTECEDENTES DE LA INVENCION
Fibrinógeno, también conocidos como factor I de coagulación, juega un papel en las hemostasias y el sanado de heridas. Este es una glicoproteína sintetizada en el hígado con un peso molecular aparente de 340,000 Da, está compuesto de dos dímeros, cada uno de estos construye tres pares de cadenas de polipéptidos no idénticas llamadas AOÍ, ?ß y ? unidas por puentes de bisulfuro. Este circula en la corriente sanguínea con una concentración de aproximadamente 1.5 - 4.0 mg/ml . Con la herida de los vasos sanguíneos, las plaquetas sanguíneas se activan y forman un tapón. El fibrinógeno está involucrado en la hemostasia primaria por la reticulación de
Ref. 250537
adición de las plaquetas activadas.
En la activación paralela se inicia la coagulación en cascada. En el punto final, el fibrinógeno se convierte en fibrina por la liberación proteolítica del fibrinopéptido A y - con una velocidad más lenta - el fibrinopéptido B por trombina. El monómero de fibrina soluble se ensambla en dobles fibrilos torcidos trenzados. Posteriormente, estos fibrilos se disponen de forma lateral, originando fibras más gruesas. Estas fibras después se reticulan por la FXIIIa en una red de fibrina, que estabiliza el tapón de plaquetas por interacciones de fibrina con plaquetas activadas, originando un coágulo estable.
Trastornos y deficiencias
La afibrinogenemia congénita es un padecimiento raro de sangrado, donde los pacientes sufren de una inadecuada coagulación de la sangre debido a la ausencia o malfuncionamiento del fibrinógeno. Este padecimiento médico puede originar episodios espontáneos de sangrado o sangrado excesivo después de un traumatismo menor o durante los procedimientos de intervención.
Las deficiencias adquiridas en el fibrinógeno son mucho más comunes que la afibrinogenemia y puede inducirse por hemodilución u otros eventos como pérdida sanguínea durante la cirugía, traumatismo, coagulación intravascular diseminada (DIC, por sus siglas en inglés) o sepsis.
Las deficiencias de fibrinógeno pueden corregirse a niveles normales de fibrinógeno en el plasma de 1.5-4 g/1 por terapia de reemplazo con infusión intravenosa de plasma fresca congelada o crioprecipitación. Sin embargo, estos tratamientos se ven afectados con el riesgo de la introducción de patógenos, p.ej., virus o priones, en un paciente y existen al generar trastornos adicionales. De esta forma es aconsejable aplicar intravenosamente composiciones de fibrinógeno con virus inactivo para restaurar el fibrinógeno a niveles fisiológicos en una forma segura.
Aunque existe fibrinógeno en preparaciones llamado pegamento de fibrina, adhesivo de fibrinógeno, pegamento tisular y similar, estas preparaciones se planean para uso tópico en polvos, pastas, espumas o en combinación con telas como emplastos en heridas, estas no son útiles para aplicación intravenosa ya que su consistencia y composición inmediatamente iniciarían eventos trombóticos cuando se inyectaran. Estas preparaciones adicionalmente contienen trombina, sales de calcio y cantidades relativamente altas del factor XIII de coagulación. Ejemplos de estas preparaciones se dan en los documentos US-A1-2008/003272 , 0-A-95/22316 o Al-2008/181878.
Se conocen procesos para la producción de fibrinógeno de los documentos EP-A1-1 240 200 que se relacionan con un método para purificar fibrinógeno a partir de una solución
que contiene fibrinogeno, que comprende, la aplicación de una solución que contiene fibrinogeno a una matriz de intercambio iónico, bajo condiciones tales que el fibrinogeno se une a la matriz, lavando la matriz de intercambio iónico con una solución amortiguadora que comprenden al menos un ácido ?-amino, eluyendo el fibrinogeno de la matriz con un amortiguador que consiste de Tris 10 mM, citrato 10 m , sacarosa 45 mM y NaCl con una concentración de 200 mM a 1.0 M, Y opcionalmente recuperar el fibrinogeno del eluato.
El documento EP-A1-0 771 324 se refiere a un proceso para la producción de un concentrado de fibrinogeno libre de virus que se obtiene al sujetar una fracción de plasma solubilizada que contiene fibrinogeno a un tratamiento de desactivación viral química, es decir, un tratamiento de solvente/detergente S/D, sujetando la fracción inactiva-viral resultante a precipitación en una solución que contiene un aminoácido con un pH ácido para obtener un sobrenadante, filtrando el sobrenadante para obtener un concentrado de fibrinogeno purificado, y recuperando el concentrado de fibrinogeno purificado. El concentrado de fibrinogeno recuperado se sujeta a radiación ultravioleta para una segunda desactivación viral. El producto se solubiliza y liofiliza previo a un tercer paso de desactivación viral.
El documento EP-A1-1 519 944 enseña el uso de una matriz de cromatografía con afinidad por iones metálicos
inmovilizados bajo condiciones que el fibrinógeno y el plasminógeno se unen a la matriz, y eluyendo selectivamente el fibrinógeno y 93% del plasminógeno por separado de la matriz .
El documento EP-A1-0 555 135 describe un método para la producción de un fibrinógeno aplicable por purificación de una solución de fibrinógeno por medio de un gel de intercambio aniónico a base de agarosa reticulada que comprende grupos amina cuaternarios. El fibrinógeno producido se dice que está libre del factor VIIIc.
El documento EP-A1-1 457 497 se refiere a un proceso para remover virus en soluciones de fibrinógeno se caracteriza por la estabilización y congelamiento de la solución y descongelación de esta. La separación de materiales insolubles se presenta previo a la dilución de la proteína y está seguido por nanofiltración de la solución resultante utilizando filtros de un tamaño de poro menores de 35 nm.
El documento US-Al-2006/0009376 también describe un método para la producción de fibrinógeno, seguido de la dilución y precipitación repetidas del fibrinógeno para remover el factor XIII.
El documento O-A2-2009/155626 se refiere a un proceso para la purificación de fibrinógeno por la solubilidad del crioprecipitado o Fracción I-Cohn en una solución EDTA con un
intervalo de temperatura de 3°C a 5°C, seguido por la precipitación fraccionada en un intervalo de temperatura de 2°C a 4°C y la dilución del último precipitado en una solución de EDTA. La desactivación viral con reactivos S/D y la nanofiltración para mejorar la seguridad de patógenos se realiza en presencia de EDTA. La inhibición de cantidades residuales de proteasas en el concentrado se realiza por la adición de AT-III, cofactor- II de heparina e inhibidor de la esterasa Cl .
El documento US-B2 -7 , 919 , 592 describe un método para remover virus de las soluciones de fibrinógeno por la adición de sustancias caotrópicas, elegidas de arginina, guanidina, citrulina y urea, estas sales o derivados y posterior filtración a través de nanofiltros de diferentes tamaños de poros .
Goheen, S.C. et al., reporta en Journal of Chromatography A. 816 (1998) 89-96, acerca de la cromatografía de intercambio iónico HPLC de las proteínas del plasma albúmina, fibrinógeno, e inmunoglobulina (G) en materiales de columnas no porosas que contienen ya sea amina cuaternaria o grupos funcionales de sulfopropilo.
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION
Un objetivo de la invención es proporcionar un concentrado de fibrinógeno producido con pasos dedicados a la eliminación y/o desactivación de patógenos en el proceso de
producción a fin de superar reacciones adversas o el desarrollo de la enfermedad relacionada con patógenos. Estos patógenos se seleccionan de los grupos de bacterias, virus y priones, tal como proteína priónica scrapie (PrPsc) .
La nanofiltración es un método en principio conocido para remover virus de proteínas que pasan a través del nanofiltro, pero la separación de virus del fibrinógeno por nanofiltración es retador ya que el fibrinógeno es una proteína muy grande y viscosa que resulta frecuentemente en el taponado de los poros del filtro y eventual pérdida de producto . Un método para superar este problema es ayudar a las sustancias caotrópicas a mejorar la capacidad de filtración como se enseña por el documento US-B2 7,919,592, aunque la nanofiltración de una solución de fibrinógeno diluida producida de acuerdo con el proceso de la Solicitud Internacional WO-Al-2012/038410 describió capacidad de filtración comparable sin la adición de sustancias caotrópicas. Las sustancias caotrópicas de acuerdo con la invención son aquellas como se definen en el documento US-B2-7,919,592 incorporadas como referencia y que designan como arginina, guanidina, citrulina y urea, sus sales o derivados.
Otro objetivo de esta solicitud es proporcionar un proceso para la producción de un concentrado a un nivel industrial, es decir, varios cientos a miles de litros de materia prima, tal como sangre o plasma sanguíneo, aunque
también es posible una producción a pequeña escala, es decir, desde 1/10 de litro a algunos litros.
Estos y otros objetivos se realizan por un proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 18, un producto como se reclama en las reivindicaciones 19 a 24 se pueden obtener por el proceso de la invención y el uso de la reivindicación 25.
De acuerdo con la presente invención se ha observado sorprendentemente que la precipitación de una pasta de fibrinógeno intermediario en presencia de una o más sustancias quelantes seguido por extracción de fibrinógeno del compuesto intermediario proporcionó una solución de fibrinógeno de mejor capacidad de filtración que aquel producido por el proceso del documento WO-Al-2012/038410.
Se ha observado sorprendentemente, que una adición de una sola vez de una pequeña cantidad al menos de un agente quelante previo a la precipitación, origina una concentración de agente quelante total de aproximadamente 3-10 mM, es suficiente para la presente invención para proporcionar tanto excelente rendimiento como capacidad de filtración, aun con nanofiltros que proporcionan retención de partículas de < 35 nm. Las cantidades residuales del agente quelante removido corriente abajo que proporciona un producto final, es decir, una concentración de fibrinógeno que está libre de agente quelante dentro del límite de detección, que es menor a 0.08
pg/ml para EDTA. Un producto libre de agentes quelantes es preferible como, por ejemplo, EDTA es un anticoagulante conocido. De esta forma la presencia de EDTA en cantidades sustanciales es contraproducente para los efectos de un producto fibrinogeno.
Por consiguiente, todos los amortiguadores utilizados corriente abajo de la precipitación, p.ej., equilibrio-, lavado-, o amortiguadores de elución utilizados para la cromatografía u el amortiguador utilizado durante la concentración por ultra/diafiltración, debe estar libre de agentes quelantes de Ca2+, que se define enseguida. Las cantidades residuales de los agentes quelantes eventualmente presentes son removibles de una solución que contiene fibrinogeno por ultra/diafiltración . Esta remoción se desarrolla ventajosamente por ultra/diafiltración al final del proceso en particular durante la concentración o formulación, si fuera necesario. La aplicación sistémica de un producto de fibrinogeno libre de agentes quelantes por medio de la vía intravenosa permite el tratamiento de afibrinogenemia congénita y deficiencias adquiridas de fibrinogeno. La aplicación de este concentrado de fibrinogeno estandarizado permite rápido tratamiento en situaciones de emergencia sin descongelamiento que consume tiempo o plasma fresco congelado y carga con volumen disminuido y propiedades de coagulación seguras debido a la composición esencialmente
constante. Mayores concentraciones del factor XIII de coagulación, comparadas con los productos descritos en el documento O-A1-2012/038410 también soportan la administración tópica en heridas o el uso como pegamento tisular.
Se observó sorprendentemente, que una adición de los inhibidores de proteasa en cualquier paso del proceso de la invención fue innecesario cuando la pasta de fibrinógeno intermediario se precipitó en presencia de una o más sustancia quelante. El uso de los inhibidores de proteasa tal como los inhibidores de proteasa Cl, inhibidores de tripsina, inhibidores de trombina, antitrombina- III (AT-III) , cofactor-II de heparina, aprotinina, pepestatina, leupeptina y en particular ácido epsilón-aminocaproico (e-ACA) para evitar la degradación de fibrinógeno se conoce de la literatura de la técnica previa. El concentrado de fibrinógeno de la presente invención ni mostró una actividad proteolítica medible ni una concentración AT-III medible.
En general, el proceso de la invención para la purificación o producción de fibrinógeno de fuentes que contienen fibrinógeno comprende los pasos de:
formar un precipitado enriquecido con fibrinógeno al agregar un agente quelante previo a la adición al menos de un agente de precipitación a la fuente que contiene fibrinógeno ;
- aislar el precipitado enriquecido fibrinógeno
p.ej., por centrifugación del precipitado;
extracción de fibrinógeno del precipitado enriquecido de fibrinógeno en un medio acuoso evita el agente quelante y por medio de esto forma una solución que contiene fibrinógeno, opcionalmente seguido por filtración y/o ultra/diafiltración;
sujetar a cromatografía la solución que contiene fibrinógeno en una fase estacionaria que tiene grupos de fuerte intercambio aniónico por el contacto de la solución con la fase bajo condiciones tales que el fibrinógeno se une a la fase;
seguido por una elución del fibrinógeno desde la fase estacionaria por medio de una solución acuosa que tiene una mayor fuerza iónica que la fuerza iónica del paso anterior, produciendo una fracción enriquecida de fibrinógeno que se recolecta:
-opcionalmente seguido por pasos posteriores de dilución y/o concentración de la fracción enriquecida de fibrinógeno;
y relleno adicionalmente de la fracción enriquecida de fibrinógeno en frascos adecuados, aunque se omite la adición de los inhibidores de proteasa.
En una modalidad del proceso de producción de la invención la fuente que contiene fibrinógeno se selecciona del grupo que consiste de, plasma sanguíneo, fracciones de plasma, tal como la fracción I, o crioprecipitado, cultivos celulares que
producen fibrinógeno y/o sobrenadantes de los cultivos celulares. Si el crioprecipitado no se usa como materia prima, se produce un compuesto que contiene fibrinógeno tal como materia prima por métodos bien conocidos descritos por Cohn, Kistler-Nitschmann y modificaciones de estos.
Para obtener un producto farmacéuticamente útil es ventajoso que la fuente que contiene fibrinógeno se sujete al menos a un proceso de desactivación de virus por ejemplo un proceso detergente solvente como se describe en el documento EP-A1-0 131 740 incorporado como referencia.
De acuerdo con otra modalidad de la invención la desactivación del virus se desarrolla previo a formar un precipitado enriquecido con fibrinógeno. Sin embargo, también es posible desarrollar una desactivación del virus en una etapa diferente.
Aun de acuerdo con otra modalidad de la invención la remoción de sustancias de desactivación de virus se desarrolla por extracción oleosa y/o cromatografía con intercambiadores aniónicos fuertes . Otro método para la remoción de virus es la nanofiltración, debido al bajo contenido de polímeros después de la nanofiltración de la extracción de fibrinógeno puede desarrollarse también con filtros < 35 nm sin la adición de sustancias caotrópicas.
Un típico agente de precipitación que se usa en el proceso producción de la invención se selecciona del grupo
que consiste de aminoácidos como la glicina, polietilenglicol o altas concentraciones de sal, en donde la sal contiene iones metálicos monovalentes, en particular se seleccionan del grupo de metales alcalinos, o amoniaco.
Aun de acuerdo con otra modalidad de la invención la extracción de fibrinógeno del precipitado enriquecido de fibrinógeno se desarrolla con un amortiguador que tiene un pH de 7.5 a 8.5 durante 10 a 120 minutos.
De acuerdo con otra modalidad de la invención la fase estacionaria tiene grupos aminos terciarios o cuaternarios.
Los pasos de la cromatografía en el proceso de producción de la invención puede desarrollarse en particular en una columna.
Típicamente la forma de almacenamiento de la fracción rellena enriquecida de fibrinógeno es en estado líquido, estado congelado, preferentemente a < -15°C, más preferentemente por debajo de -30°C, o como liofilizado.
El proceso de la invención comprende en detalle los pasos de
a) solubilización del crioprecipitado, solubilizado a pH neutro,
b) sujetar la solución a adsorción con Al (OH) 3 y remover el gel resultante,
c) desactivar el virus de la solución resultante del paso b) por un tratamiento (S/D) solvente/detergente,
extracción de los reactivos S/D con aceite vegetal y poner en contacto la fase acuosa con una resina TMAE,
d) agregar al menos un agente quelante para obtener una concentración del agente quelante por ejemplos de 3 mM a 100 mM en la fase acuosa resultante del paso c) ,
e) precipitación de fibrinógeno de la fase acuosa que contiene el agente quelante del paso d) , al agregar glicina hasta que se alcanza una concentración final de aproximadamente glicina 1M, y separar la pasta de fibrinógeno resultante,
f) extracción del fibrinógeno de la pasta de fibrinógeno por un amortiguador TRIS 20 mM a un pH de aproximadamente 8.0, filtración y,
g) cargar la solución filtrada del paso f) en una resina de intercambio aniónico que comprende grupos de trimetil-amino injertados a una cadena principal de polímero metacrílico hidroxilado por medio de grupo de enlace y lavando libremente las sustancias de enlace con un amortiguador de lavado de aproximadamente 12.0 mS/cm de conductividad,
h) la elución de fibrinógeno con un amortiguador de elución que contiene aproximadamente 1.5 g/1 de citrato de sodio, aproximadamente 7.0 g/1 de cloruro de sodio y aproximadamente 10.0 g/1 glicina, en particular ajustado a un pH de aproximadamente 7.0 y una conductividad de 13.1-15
mS/cm,
i) filtrar sobre al menos un nanofiltro,
j) concentrar, formular, rellenar el filtrado estéril y opcionalmente liofilización .
El tema de la presente invención también es una fracción enriquecida de fibrinógeno obtenible de acuerdo con el proceso de producción de la invención.
El concentrado de fibrinógeno se llena en recipientes finales después de la filtración estéril y puede almacenarse en forma líquida, líquido congelado o liofilizado. Los recipientes adecuados son frascos de vidrio o botellas o bolsas de plástico eventualmente comprenden una membrana que permite la liofilización mientras la bolsa se sella herméticamente de los fluidos.
El fibrinógeno producido de acuerdo con este proceso se caracteriza por cantidades muy pequeñas de impurezas que determinan el nacimiento del producto y permite el tratamiento a largo plazo de las personas con necesidad. FXIII es preferentemente con la concentración contenida, porque soporta la estabilización de la fibrina formada, aunque se evita una sobrecarga de esta transglutaminasa .
El término "que comprende", "comprende" o "comprenden" también pueden reemplazarse por "que consiste", "consiste" o "consisten" sin alterar la descripción de la descripción.
BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS
La figura 1 muestra una Página-SDS con condiciones no reductoras mientras la figura 2 muestra una Página-SDS con condiciones reductoras de las mismas muestras.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION
Aunque en principio pueden usarse todas las fuentes que contienen fibrinógeno de acuerdo con la invención, el crioprecipitado es una fuente preferida y en lo siguiente el crioprecipitado sirve como una típica fuente de fibrinógeno en una mayor descripción del proceso de producción de la invención .
Típicamente el crioprecipitado se reconstituye o solubiliza bajo condiciones amortiguadoras adecuadas en particular a pH neutro aproximado (6.9-7.0 por ejemplo en un amortiguador en solución que contiene citrato de sodio y NaCl) , se sujeta a adsorción en particular con Al (OH) 3 y el gel resultante removido p.ej., centrifugación. El sobrenadante después puede desactivarse viralmente por ejemplo por tratamiento (S/D) solvente/detergente. Este método se conoce bien por una persona con experiencia y se ha descrito originalmente en el documento EP-A1-131 740. Se remueven en particular los compuestos S/D tal como Tritón (o- [4- (1, 1, 3, 3-tetrametilbutil) fenoxil] -polietoxietanol) y TnBP (fosfato de tri-n-butilo) por medio de la extracción con aceite de castor. Para una mayor purificación la fase acuosa
puede sujetarse a un proceso de cromatografía. Típicamente esto puede desarrollarse al poner en contacto la fase acuosa con un gel de intercambio aniónico fuerte, tri -metil -amino-etil (TMAE) injertado en el material de la matriz, tal como Fractogel® EMD-TMAE. Los buenos resultados se logran si la cromatografía se realiza con amortiguadores que tienen un valor de pH de 6.9-7.1 y una osmolaridad de 570-610 mosmol/1. Bajo estas condiciones el fibrinógeno no se une a la fase estacionaria y por lo tanto se encuentra en el flujo o el sobrenadante, el último si se realiza un proceso de cromatografía en lotes.
La solución de fibrinógeno sin enlace, que contiene típicamente alrededor de 40 g/1 (método turbidométrico de Clauss) se ajusta a pH = 7.0-8.0, a pH = 7.3-7.5, con un amortiguador que contiene al menos un agente quelante. Los agentes quelantes son agentes quelantes Ca2+ en particular ácido 1, 2-bis (o-amino) etano-N, , ' ,?' -tetracético (BAPTA) , ácido dietilen-triamina-pentacético (DTPA) , ácido etilendiamino-tetracético (EDTA) , ácido etilenglicol -tetracético (EGTA) y ácido nitrilo-triacético (NTA) con concentraciones de 3 mM a 100 mM, en particular de 5 mM a 50 mM, aún más en particular de 5 mM a 20 mM. Después de esto se agrega un agente de precipitación adecuado, por ejemplo glicina, se agregó al final con una concentración de 0.8-1.2 M, en particular 0.9-1.1 M la solución resultante puede
agitarse durante 60-120 min para precipitar fibrinógeno. La precipitación puede desarrollarse en un intervalo de temperatura de +4.1°C a +40°C, siempre que se omita la crioprecipitación, en particular en el intervalo de +5°C a 37°C, más en particular desde 5.1°C a 30°C, aún más en particular a 10°C-20°C. El precipitado que contiene fibrinógeno después puede separarse por la centrifugación y esta pasta de fibrinógeno intermediario puede almacenarse a = -60°C, preferentemente a -100°C a -65°C, durante al menos 6 meses, si la pasta de fibrinógeno intermediario no se procesa sin retraso, pero se prefiere un tiempo de almacenamiento de 1 día hasta 6 meses. Una sola precipitación p.ej., con glicina proporciona una pasta de fibrinógeno suficientemente pura para un posterior procesamiento.
El fibrinógeno después se extrae de su compuesto intermediario preparado por un amortiguador de 10-30 mM tri (hidroximetil ) aminometano (amortiguador Tris) libre de agente quelante con un valor de pH desde 7.5-8.5, en particular un amortiguador Tris 15-25 mM con pH = 7.5-8.5. La extracción se realiza durante 10-120 minutos, en particular durante 15-90 minutos, aún más en particular durante 20-60 minutos durante la agitación. La suspensión obtenida después puede filtrarse y ^sujetarse a ultra/diafiltración por ejemplo contra 5 veces del volumen de suspensión del mismo amortiguador o uno diferente.
La solución que contiene fibrinógeno resultante después se cargó sobre un gel de intercambio aniónico seleccionado de un grupo de grupos amino terciario o cuaternario como ligandos injertados a una matriz. Los grupos funcionales se seleccionan de dietil-amino-etilo (DEAE) bien conocido o, en caso de un gel de intercambio aniónico fuerte, de los grupos tal como trimetilamino, trimetilaminoetilo (TMAE) y otros grupos mientras el material de transporte puede componerse de celulosa, agarosa, sílice, material polimérico o cerámico. Pueden lograrse buenos resultados, en particular en la reducción de fibronectina y vitronectina, con los grupos trimetilamino injertados a un polímero metacrílico hidroxilado por medio de un grupo de enlace tal como GigaCap Q-650M®. Esto es muy sorprendente ya que el Marco-Prep High Q®, un copolímero metacrílico compuesto de dimetacrilato de dietilenglicol/metacrilato de glicidilo también con ligandos de trimetilamino pero carece de la funcionalidad hidroxilo en su cadena polimérica, es menos eficiente en la reducción de las dos proteínas. La reducción efectiva de la fibronectina densa es muy ventajosa para las filtraciones opcionales, tal como la ultra/diafiltración o nanofiltración, ya que el tiempo de vida de los filtros se incrementa debido al reducido tamponado. Si se planea que el proceso incluya nanofiltración, se prefiere desarrollar el proceso con una solución diluida, en particular con una cascada de
nanofiltros. El gel o resina cromatográfica está en particular equilibrado previamente con el mismo amortiguador como se usa para volver a suspender la pasta de fibrinógeno intermediario antes de aplicar la solución de fibrinógeno. Se lavaron las sustancias de enlace libremente con amortiguador de equilibrio seguido por amortiguador de lavado (1.5 g/1 de citrato de sodio, 6.0 g/1 de cloruro de sodio, ajustado a pH = 6.8-7.2, preferentemente 6.9-7.1, y que poseen la conductividad de 11.0-13.0 mS/cm a temperatura ambiente de 20-25°C) .
El fibrinógeno después puede eluirse de la columna cromatográfica con un amortiguador de elución que contiene 1.5 g/1 de citrato de sodio, y 10.0 g/1 de glicina en particular se ajusta al mismo intervalo de pH mientras el amortiguador de levado p.ej., HC1 y/o NaOH y se ajusta con aproximadamente 7.0 g/1 de NaCl con la conductividad de 13.1-15 mS/cm a temperatura ambiente de 20°C -25°C. Aproximadamente se recupera en el eluato el 74% del fibrinógeno aplicado dentro de la columna, aunque la fibronectina está casi completamente removida del eluato que contiene fibrinógeno. Ventajosamente una filtración en particular se desarrolla una nanofiltración .
La solución de fibrinógeno filtrado puede concentrarse más por ultra/diafiltración en aproximadamente 20-26 g/1 y filtrado estéril con membranas con tamaño de poro = 0.2 µt?.
Las personas con experiencia en la técnica que otras concentraciones, tal como 1-19.9 g/1 o 26.01-30 g/1 o aun mayor también son alcanzables . El concentrado de fibrinógeno de la presente invención también puede formularse con aditivos como estabilizadores conocidos por la persona con experiencia tal como carbohidratos, p.ej., sacarosa, trehalosa, aminoácidos, p.ej., glicina, histidina, alanina, arginina, y detergentes, p.ej., polioxietileno- (20) -sorbitan-monooleato (TWEEN 80®) . Este filtrado estéril en masa se almacena a -60°C o menos, en particular -65°C a -80°C, antes de ser estéril filtrado por un segundo tiempo y relleno en recipientes finales y se seca por congelación opcionalmente o se llena directamente en recipientes finales y opcionalmente se seca por congelamiento sin una segunda filtración estéril.
No es necesario agregar otros amortiguadores, estabilizadores, inhibidores de proteasa, como AT-III, cofactor II de heparina e inhibidor de esterasa Cl, u otros compuestos, como el factor de coagulación XIII (F XIII) . El factor de coagulación XIII está presente en el concentrado con actividades de = 0.05 UI por mg de fibrinógeno (método Clauss) , en particular con actividades de 0.05-0.30 Ul/mg. El concentrado de fibrinógeno de la presente invención se caracteriza más por un bajo contenido de compuestos de peso molecular más alto que el fibrinógeno (HMW) , determinado como % del área total por cromatografía por exclusión de tamaño a
280 nm. El concentrado de fibrinógeno de la presente invención contiene menos de 11% de HMW, en particular 2-10% cuando la concentración del agente quelante fue al menos 3 mmol/1. El uso de agentes quelantes con concentraciones al menos de 5 mmol/1 reduce el contenido de HMW a 2-6%. Algo de albúmina también puede estar presente en una concentración de aproximadamente 16 ng por mg de fibrinógeno. La actividad antitrombina-III (AT-III) y proteolítica no fueron detectables, es decir, una concentración de AT-III menor de 0.2 Ul/ml y una actividad proteolítica menor de 2 U por litro (< 2 U/1), que es igual a menos de 0.01 de UI de At-III por mg de fibrinógeno y menor de 0.1 mU actividad proteolítica por mg de fibrinógeno, cuando se midió en una solución del producto final que contiene fibrinógeno en una concentración de 20 mg/ml. La invención además se explica por los siguientes ejemplos no limitantes.
Ejemplo I:
El crioprecipitado, producido por el plasma por métodos establecidos, se reconstituyó o solubilizó a aproximadamente pH neutro, se sujetó a la adsorción con Al (OH) 3 y el gel resultante removido por centrifugación. El sobrenadante después se desactivó su actividad viral por el tratamiento (S/D) solvente/detergente. Los compuestos S/D, de acuerdo con el documento EP-A1-0 131 740 se extrajeron con aceites vegetales y se puso en contacto la fase acuosa con Fractogel®
EMD-TMAE. Se emplearon condiciones cromatográficas (valor pH de 6.9-7.1 y una osmolaridad de 570-610 mosmol/1) bajo las cuales el fibrinógeno no se unió al gel y por lo tanto se encontró en el flujo o el sobrenadante.
La solución de fibrinógeno no unido se mezcló con EDTA hasta que la concentración de EDTA alcanzó 10 mM y la solución de fibrinógeno que contiene el EDTA se agitó a aproximadamente 15°C durante alrededor de 60 minutos después de la adición de glicina (concentración final 1 mol/1 y pH = 7.4) para precipitar fibrinógeno. El precipitado que contiene fibrinógeno después se separó por centrifugación, produciendo una pasta de fibrinógeno de compuesto intermediario.
El fibrinógeno se extrajo por agitación durante 30 minutos a partir del intermediario preparado por medio de un amortiguador Tris 20 mM (pH = aproximadamente 8.0) ausencia de un agente quelante y la suspensión obtenida después se filtró y sujetó a ultra/diafiltración .
La solución que contiene fibrinógeno resultante después se carga en el GigaCap Q-650M® y el gel o resina cromatográfica se equilibró previamente con el mismo amortiguador Tris como se usó para la nueva suspensión antes de aplicar la solución de fibrinógeno. Las sustancias unidas libremente se lavaron con el amortiguador de equilibrio seguido por el lavado con un amortiguador de lavado (1.5 g/1 de citrato de sodio, 6.0 g/1 cloruro de sodio, se ajustó a
aproximadamente pH 7.0 y una conductividad de aproximadamente 12.0 mS/cm) . El fibrinógeno después se eluyó de la columna de cromatografía con un amortiguador de elución (1.5 g/1 de citrato de sodio, y 10.0 g/1 de glicina ajustada al mismo pH como el amortiguador de lavado y se ajustó con alrededor de 7.0 g/1 de NaCl a la conductividad de 13.1-15 mS/cm) . Se desarrolló la nanofiltración por el paso sucesivo de la solución de fibrinógeno sobre los nanofiltros con tamaño de poro decrecientes desde 75 nm bajando a < 35 nm.
Se concentró la solución de fibrinógeno resultante, se formuló y se filtró de forma estéril. Este filtrado estéril en masa se almacenó durante 5 días a -80°C antes de que se filtrara de forma estéril durante un segundo tiempo y se rellenó en recipientes finales. Una parte de los recipientes finales se liofilizaron mientras la otra parte se mantuvo como una formulación líquida. No se observaron cantidades detectables de agentes quelantes en el producto liofilizado o el concentrado líquido.
Se completó la reconstitución de los liofilizados por la adición de agua para inyección (WFI, por sus siglas en inglés) hasta la concentración antes de la liofilización .
Se desarrollaron los ejemplos II-XII de la misma forma que el ejemplo I pero comprendió la variación del tipo y concentración de agentes quelantes así como también variaciones del tiempo. Aunque los parámetros similares al
contenido de proteína, el contenido de fibrinógeno-antígeno o contenido de fibrinopéptido-A no se influenciaron significativamente por estas variaciones cuando se normalizaron a 1 mg de fibrinógeno, se observó que el contenido de compuestos de mayor peso molecular que el fibrinógeno (HMW, por sus siglas en inglés) , determinado por la cromatografía por exclusión de tamaño, excedió el 10% cuando la concentración del agente de formación de complejos fue menor de 3 mmol/1. Se preparó el ejemplo XIII de acuerdo con el proceso del documento O-A1-2012/038410 , es decir, cualquier agente quelante presente durante la purificación. Los resultados de estas variaciones se resumen en la tabla 1. Tabla 1
Un conjunto de experimentos se desarrollaron para determinar un intervalo del tiempo de extracción adecuado como un compromiso entre el rendimiento y la pureza del compuesto intermediario de fibrinógeno extraído. El intervalo
del tiempo de extracción adecuado se determinó que está entre 10 a 120 minutos ya que el tiempo de extracción menor proporcionó un compuesto intermediario muy puro con el costo de la producción de fibrinógeno, aunque los tiempos de extracción que exceden los 120 minutos se observaron que algunas impurezas comenzaron a disolverse de nuevo sin una ganancia significativa en la producción de fibrinógeno.
Comparación con el documento WO-Al-2012/038410
Se representa una diferencia entre la presente invención y el documento WO-Al-2012/038410 por la adición de un agente quelante previo a la precipitación de fibrinógeno por un agente de precipitación adecuado, como glicina, y el reemplazo del siguiente paso de una nueva suspensión en el documento WO-Al-2012/038410 por una extracción. La modificación origina un incremento inesperado de la actividad del factor XIII de coagulación en el producto final de la presente invención, es decir, hasta 0.30 Ul/mg de fibrinógeno (concentración de fibrinógeno 20-25 mg/ml; determinado por el método Clauss) , así como también un mayor rendimiento.
La figura 1 muestra una Página-SDS en condiciones no reductoras que describe menos compuestos de alto peso molecular en los productos típicos producidos de acuerdo con el proceso de la presente invención (carriles 6-11 también indicados como "+") comparado con el producto de la solicitud de patente WO-Al-2012/038410 (carriles 2-5 también se indicó
como "-") . La banda de la proteína más cercana al 250 kD representa fibrinógeno mientras aquellos arriba de la banda de fibrinógeno son compuestos de peso molecular mayor. La banda de la proteína en aproximadamente 50 kD representa albúmina. El carril 1 muestra los marcadores de peso molecular.
La figura 2 muestra una Página-SDS con condiciones reductoras. Los productos probados son los mismos que en la figura 1 y en el mismo orden y se indican consecutivamente de la misma forma que en la figura 1, es decir, "+" para los productos preparados por un proceso de acuerdo con la presente invención, mientras "-" indican productos preparados por un proceso de acuerdo con el documento WO-A1-2012/038410. Las bandas mayores de aproximadamente 50-70 kD representa las cadenas- , -ß y -? de fibrinógeno. La banda de proteínas de aproximadamente 100 kD representa el dimero de la cadena-? de fibrinógeno. La banda tenue de aproximadamente 30 kD es causada por los fragmentos de fibrinógeno. El carril 1 muestra los marcadores de peso molecular.
Comparación con el documento WO-A2-2009/155626
Se investigaron las diferencias entre los productos de la presente invención y aquellos del documento del documento WO-A2 -2009/155626 por análisis de productos preparados por los procesos de W0-A2 -2009/155626 , en particular por combinación de los ejemplos 1 y 6 descritos, que origina un
producto nanofiltrado y liofilizado. Se observó que el producto del documento WO-A2-2009/155626 tuvo 1% de productos de peso molecular más pesado que fibrinógeno, determinado por cromatografía de exclusión de tamaño, y una actividad del factor XIII de coagulación de aproximadamente 0.41 Ul/mg de fibrinógeno .
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.
Claims (25)
1. Proceso para purificar fibrinógeno a partir de una fuente de fibrinógeno por precipitación del fibrinógeno por medio de un agente de precipitación con una solución que contiene fibrinógeno en presencia de uno o más agente (s) quelante(s) y remoción del sobrenadante de la pasta de fibrinógeno, caracterizado porque el fibrinógeno se extrae de la pasta que forma un fibrinógeno que contiene una fracción líquida, y un residuo insoluble, que se separa del líquido, mientras se omite la adición de uno o más inhibidor (es) de proteasa.
2. Proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se selecciona uno o más inhibidor (es) de proteasa Cl, inhibidores de tripsina, inhibidores de trombina, antitrombina- III (AT-III) , cofactor-II de heparina, aprotinina, pepestatina, leupeptina y ácido epsilón-aminocaproico .
3. Proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque uno o más de los agente (s) quelante(s) es un agente quelante Ca2+ seleccionado del ácido 1, 2-bis (o-amino) etano-?,?,?' ,?' -tetracético (BAPTA) , ácido dietilen-triamina-pentacético (DTPA) , ácido etilendiamino-tetracético (EDTA) , ácido etilenglicol-tetracético (EGTA) y ácido nitrilo- riacético (NTA) .
4. Proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la concentración del agente quelante está en el intervalo de 3 mM a 100 mM.
5. Proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la concentración del agente quelante está en el intervalo de 5 mM a 50 mM.
6. Proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la concentración del agente quelante está en el intervalo de 5 mM a 20 mM.
7. Proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque el fibrinógeno se precipita en un intervalo de temperatura desde 4.1°C a 40°C, en particular en el intervalo desde 5°C a 37°C, por el agente de precipitación que se selecciona particularmente del grupo que consiste de aminoácidos, polietilenglicol , o una sal con altas concentraciones o combinaciones de estos, en donde la sal contiene iones metálicos monovalentes, en particular se selecciona del grupo de metales alcalinos o amonio.
8. Proceso de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el agente de precipitación es un aminoácido, como la glicina, en particular aproximadamente glicina 1M.
9. Proceso de conformidad con las reivindicaciones 7 a 8, caracterizado porque la pasta de fibrinógeno se extrae durante 10 a 120 minutos, preferentemente en amortiguador TRIS aproximadamente 20 mM con un pH aproximadamente de 8.0 para obtener una fracción líquida.
10. Proceso de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el amortiguador TRIS se anula con los agentes quelantes.
11. Proceso de conformidad con las reivindicaciones 9 o 10, caracterizado porque la fracción líquida se filtra para producir un filtrado que se pone en contacto con una resina de intercambio aniónico que comprende grupos trimetil-amino injertados a una cadena principal de polímero metacrílico hidroxilado por medio del grupo de enlace y lavando libremente las sustancias de enlace, preferentemente con un amortiguador de lavado de aproximadamente 12.0 mS/cm de conductividad.
12. Proceso de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el fibrinógeno se desorbe de la resina de intercambio aniónica por medio de un amortiguador de elución que contiene citrato de sodio, cloruro de sodio y glicina, preferentemente alrededor de 1.5 g/1 de citrato de sodio, aproximadamente 7.0 g/1 de cloruro de sodio y alrededor de 10.0 g/1 de glicina, en particular ajustado a un pH de aproximadamente 7.0 y una conductividad de 13.1-15 mS/cm.
13. Proceso de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la solución del fibrinógeno extraído por desorción se nanofiltra para obtener una fracción nanofiltrada .
14. Proceso de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la fracción obtenida se concentra, formula, filtra de forma estéril y/o se llena en recipientes finales adecuados.
15. Proceso de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque los recipientes finales se seleccionan de frascos o botellas de vidrio o bolsas de plástico eventualmente comprende una membrana.
16. Proceso de conformidad con la reivindicación 13 o 15, caracterizado porque la fracción obtenida se liofiliza.
17. Proceso de conformidad con la reivindicación 1 o 16, caracterizado porque comprende los pasos de a) solubilización del crioprecipitado, solubilizado alrededor de pH neutro, b) someter la solución a adsorción con Al (OH) 3 y remover el gel resultante, c) desactivar el virus de la solución resultante del paso b) por un tratamiento (S/D) solvente/detergente, extracción de los reactivos S/D con aceite vegetal y poner en contacto la fase acuosa con una resina TMAE, con un valor de pH de 6.9-7.1 y una osmolaridad de 570-610 mosmol/1, d) agregar al menos un agente quelante para obtener la fase acuosa resultante del paso c) , e) precipitación de fibrinógeno de la fase acuosa que contiene el agente quelante del paso d) , al agregar glicina hasta que se alcanza una concentración final de aproximadamente glicina 1M, y separar la pasta de fibrinógeno resultante, f) extracción del fibrinógeno de la pasta de fibrinógeno por un amortiguador TRIS 20 mM a un pH de aproximadamente 8.0, filtración y, g) cargar la solución filtrada del paso f) en una resina de intercambio aniónico que comprende grupos de trimetil-amino injertados a una cadena principal de polímero metacrílico hidroxilado por medio de grupo de enlace y lavando libremente las sustancias de enlace con un amortiguador de lavado de aproximadamente 12.0 mS/cm de conductividad, h) elución de fibrinógeno con un amortiguador de elución que contiene aproximadamente 1.5 g/1 de citrato de sodio, aproximadamente 7.0 g/1 de cloruro de sodio y aproximadamente 10.0 g/1 glicina, en particular ajustado a un pH de aproximadamente 7.0 y una conductividad de 13.1-15 mS/cm, i) filtrar sobre al menos un nanofiltro, j) concentrar, formular, rellenar por filtrado estéril y opcionalmente liofilización .
18. Proceso de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la concentración del agente quelante en la fase acuosa es de 3 mM a 100 mM.
19. Producto de fibrinogeno obtenible de acuerdo con la reivindicación 18, caracterizado porque tiene menos de 11% de los compuestos de mayor peso molecular que el fibrinogeno, determinado como % del área total por cromatografía de exclusión de tamaño a 280 nm.
20. Producto de fibrinogeno obtenible de acuerdo con la reivindicación 18, caracterizado porque tiene 2-10% de compuestos de mayor peso molecular que el fibrinogeno.
21. Producto de fibrinogeno obtenible de acuerdo con la reivindicación 18, caracterizado porque tiene 2-6% de compuestos de mayor peso molecular que el fibrinogeno.
22. Producto de fibrinogeno obtenible de conformidad con las reivindicaciones 19 a 21, caracterizado porque tiene actividad del factor XIII de coagulación en concentraciones de 0.05-0.30 Ul/mg fibrinogeno.
23. Producto de fibrinogeno obtenible de conformidad con las reivindicaciones 19 a 21, caracterizado porque no tiene cantidades detectables de actividad antitrombina- III (AT-III) y proteolitica, es decir, una concentración de AT-III menor de 0.2 Ul/ml y una actividad proteolitica menor de 2 U por litro (< 2 U/1), que es igual a menos de 0.01 de UI de AT-III por mg de fibrinógeno y menor de 0.1 mU actividad proteolítica por mg de fibrinógeno, cuando se midió en una solución del producto final que contiene fibrinógeno en una concentración de 20 mg/ml .
24. Producto fibrinógeno de conformidad con la reivindicación 19 a 23, caracterizado porque este se liofiliza .
25. Uso de una resina de intercambio aniónico seleccionado del grupo que consiste de un material de soporte que comprende una cadena principal de polímero hidroxilado con grupos amino terciarios o cuaternarios injertados para la purificación o producción de un producto de fibrinógeno al menos de una de las reivindicaciones 19 a 24 en un proceso al menos de una de las reivindicaciones 1 a 18.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261610030P | 2012-03-13 | 2012-03-13 | |
| EP12159276 | 2012-03-13 | ||
| PCT/EP2013/054983 WO2013135684A1 (en) | 2012-03-13 | 2013-03-12 | Improved process for production of fibrinogen and fibrinogen produced thereby |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MX2014010492A true MX2014010492A (es) | 2014-11-14 |
| MX351340B MX351340B (es) | 2017-10-11 |
Family
ID=49160276
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MX2014010492A MX351340B (es) | 2012-03-13 | 2013-03-12 | Proceso mejorado para la produccion de fibrinogeno y fibrinogeno producido por este. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10112972B2 (es) |
| EP (1) | EP2825555B1 (es) |
| CN (1) | CN104321340B (es) |
| AU (1) | AU2013231321B2 (es) |
| ES (1) | ES2642383T3 (es) |
| MX (1) | MX351340B (es) |
| RU (1) | RU2663792C2 (es) |
| WO (1) | WO2013135684A1 (es) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20130112031A (ko) | 2010-09-20 | 2013-10-11 | 옥타파마 아게 | 피브리노겐의 생산 방법 |
| AU2013231321B2 (en) | 2012-03-13 | 2017-05-25 | Octapharma Ag | Improved process for production of fibrinogen and fibrinogen produced thereby |
| US20140154233A1 (en) | 2012-12-05 | 2014-06-05 | Csl Limited | Method of purifying therapeutic proteins |
| US10188965B2 (en) | 2012-12-05 | 2019-01-29 | Csl Behring Gmbh | Hydrophobic charge induction chromatographic depletion of a protein from a solution |
| CN104231072B (zh) * | 2014-10-09 | 2017-03-22 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种从冷沉淀提取凝血因子ⅷ的废料中提取人纤维蛋白原的制备工艺 |
| KR101841587B1 (ko) | 2016-01-12 | 2018-05-14 | 주식회사 녹십자홀딩스 | 피브리노겐의 정제방법 |
| CN109111043B (zh) * | 2018-09-16 | 2021-11-09 | 苏州渭中科技发展有限公司 | 一种高盐高cod废水的处理方法 |
| CN113214384B (zh) * | 2021-04-26 | 2023-10-10 | 泰州博莱得利生物科技有限公司 | 犬纤维蛋白原的制备方法及其产品 |
Family Cites Families (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4116635A (en) | 1977-03-14 | 1978-09-26 | Jaeger Mark A | General purpose in vitro anticoagulant |
| DE3203775A1 (de) | 1982-02-04 | 1983-08-11 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Fibrinogenzubereitung, verfahen zu ihrer herstellungund ihre verwendung |
| DE3230849A1 (de) | 1982-08-19 | 1984-02-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Pasteurisiertes human-fibrinogen (hf) und verfahren zu dessen herstellung |
| US4540573A (en) | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| FR2686883B1 (fr) | 1992-02-04 | 1994-05-13 | Aquitaine Develop Transf Sanguin | Procede de fabrication de fibrinogene de tres haute purete, fibrinogene de tres haute purete obtenu ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. |
| US5330974A (en) * | 1993-03-01 | 1994-07-19 | Fibratek, Inc. | Therapeutic fibrinogen compositions |
| JP3591837B2 (ja) | 1994-02-17 | 2004-11-24 | ニューヨーク・ブラッド・センター・インコーポレイテッド | フィブリン膠およびリポソームを含有する生物学的生体接着剤組成物、その製造方法および使用 |
| ES2139227T5 (es) | 1994-07-14 | 2011-05-04 | Caf-Dcf Département Central De Fractionnement De La Croix Rouge S.C.R.L. | Concentrado de fibrinógeno obtenido de plasma sanguíneo, procedimiento e instalación para su preparación. |
| US6037457A (en) | 1997-01-31 | 2000-03-14 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method for recombinant fibrinogen production |
| ATE328007T1 (de) | 1998-09-24 | 2006-06-15 | Pharming Intellectual Pty Bv | Reinigung von fibrinogen aus flüssigkeiten mittels ausfällung und hydrophobischer- interaktion-chromatographie |
| US6447774B1 (en) | 1998-11-18 | 2002-09-10 | Aventis Behring Gmbh | Stabilized protein preparations for a tissue adhesive |
| US7572769B2 (en) | 1998-12-23 | 2009-08-11 | Csl Behring Gmbh | Fibrin adhesive granulate and method for its preparation |
| US6579537B2 (en) | 1999-02-12 | 2003-06-17 | Baxter Aktiengesellschaft | Method for producing fibronectin and fibrinogen compositions using a polyalkylene glycol and glycine or β-alanine |
| RU2158130C1 (ru) * | 1999-12-17 | 2000-10-27 | Нижегородское государственное предприятие по производству бактерийных препаратов фирма "ИмБио" | Способ получения фибриногена |
| AU2398801A (en) | 1999-12-20 | 2001-07-03 | Mitsubishi Pharma Corporation | Virus-free plasma protein compositions treated with porous membrane and process for producing the same |
| NZ518692A (en) | 1999-12-23 | 2004-08-27 | Csl Ltd | Purified fibrinogen free of destabilising levels of plasminogen and other proteases obtained from a Fraction I paste |
| EP1148063A1 (de) | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| IL136552A (en) | 2000-06-05 | 2005-05-17 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Method for the inactivation of viruses by a solvent - detergent combination and by nanofiltration |
| IL144446A0 (en) | 2001-07-19 | 2002-05-23 | Prochon Biotech Ltd | Plasma protein matrices and methods for their preparation |
| DE10211632A1 (de) | 2002-03-15 | 2003-10-09 | Aventis Behring Gmbh | Verfahren zur Abtrennung von Viren aus einer Proteinlösung durch Nanofiltration |
| GB0216001D0 (en) | 2002-07-10 | 2002-08-21 | Nat Blood Authority | Process and composition |
| DE10231757A1 (de) | 2002-07-13 | 2004-01-22 | Creavis Gesellschaft Für Technologie Und Innovation Mbh | Verfahren zur Herstellung einer tensidfreien Suspension auf wässriger basis von nanostrukturierten, hydrophoben Partikeln und deren Verwendung |
| DE10261126A1 (de) | 2002-08-13 | 2004-03-04 | Aventis Behring Gmbh | Lagerungsstabile, flüssige Fibrinogen-Formulierung |
| AT501088A2 (de) | 2002-12-18 | 2006-06-15 | Bio Prod & Bio Eng Ag | Stabile therapeutische proteine |
| ES2214967B1 (es) | 2003-03-06 | 2005-06-16 | Probitas Pharma, S.A | Procedimiento para la eliminacion de virus en soluciones de fibrinogeno y fibrinogeno obtenido por dicho procedimiento. |
| DE102004009400A1 (de) | 2004-02-24 | 2005-09-08 | Zlb Behring Gmbh | Fibrinogen Reinigung |
| EP1888537B1 (en) | 2005-05-26 | 2013-09-11 | Janssen R&D Ireland | Process for preparing 4-[(1,6-dihydro-6-oxo-2-pyrimidinyl)amino benzonitrile |
| FR2887883B1 (fr) | 2005-06-29 | 2007-08-31 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de separation des proteines fibrinogene, facteur xiii et colle biologique d'une fraction plasmatique solubilisee et de preparation de concentres lyophilises desdites proteines |
| US7968682B2 (en) | 2006-12-12 | 2011-06-28 | Oregon Health & Science University | Degradation-resistant fibrinogen sealants |
| HUE028626T2 (en) | 2008-06-23 | 2016-12-28 | Bio-Products & Bio-Engineering Ag | Stable, functionally intact, virus-inactivated fibrinogen during storage |
| CN101703763B (zh) | 2009-11-05 | 2012-07-11 | 绿十字(中国)生物制品有限公司 | 人纤维蛋白原的生产方法 |
| KR20130112031A (ko) | 2010-09-20 | 2013-10-11 | 옥타파마 아게 | 피브리노겐의 생산 방법 |
| AU2013231321B2 (en) | 2012-03-13 | 2017-05-25 | Octapharma Ag | Improved process for production of fibrinogen and fibrinogen produced thereby |
| US20140154233A1 (en) | 2012-12-05 | 2014-06-05 | Csl Limited | Method of purifying therapeutic proteins |
-
2013
- 2013-03-12 AU AU2013231321A patent/AU2013231321B2/en active Active
- 2013-03-12 MX MX2014010492A patent/MX351340B/es active IP Right Grant
- 2013-03-12 RU RU2014139974A patent/RU2663792C2/ru active
- 2013-03-12 ES ES13709190.6T patent/ES2642383T3/es active Active
- 2013-03-12 CN CN201380013042.2A patent/CN104321340B/zh active Active
- 2013-03-12 EP EP13709190.6A patent/EP2825555B1/en not_active Revoked
- 2013-03-12 WO PCT/EP2013/054983 patent/WO2013135684A1/en active Application Filing
- 2013-03-12 US US14/382,712 patent/US10112972B2/en active Active
-
2018
- 2018-09-19 US US16/136,003 patent/US11401300B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2013231321A1 (en) | 2014-09-11 |
| US11401300B2 (en) | 2022-08-02 |
| RU2663792C2 (ru) | 2018-08-09 |
| US20150045539A1 (en) | 2015-02-12 |
| ES2642383T3 (es) | 2017-11-16 |
| MX351340B (es) | 2017-10-11 |
| WO2013135684A1 (en) | 2013-09-19 |
| AU2013231321B2 (en) | 2017-05-25 |
| US10112972B2 (en) | 2018-10-30 |
| CN104321340B (zh) | 2018-11-09 |
| EP2825555B1 (en) | 2017-07-12 |
| RU2014139974A (ru) | 2016-05-10 |
| EP2825555A1 (en) | 2015-01-21 |
| CN104321340A (zh) | 2015-01-28 |
| US20190016755A1 (en) | 2019-01-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11401300B2 (en) | Process for production of fibrinogen and fibrinogen produced thereby | |
| US9938318B2 (en) | Process for production of fibrinogen | |
| US7550567B2 (en) | Fibrinogen purification | |
| AU2003244850B2 (en) | Processes for the preparation of fibrinogen | |
| ES2736283T3 (es) | Procedimientos para aislar hemoderivados a partir de un material hemoderivado empobrecido en proteína interalfainhibidora | |
| NO324659B1 (no) | Utvinning av von Willebrand-faktor ved kationebytterkromatografi samt preparat inneholdende slik faktor og anvendelse derav. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Grant or registration |