MX2013003321A

MX2013003321A - Biomarcadores de lesion renal.

Info

Publication number: MX2013003321A
Application number: MX2013003321A
Authority: MX
Inventors: John A Kellum; Kai Singbartl
Original assignee: Univ Pittsburgh
Priority date: 2010-09-24
Filing date: 2011-09-19
Publication date: 2013-10-25
Also published as: AU2011305786A1; EA201390439A1; US20200150132A1; EP2619577A4; KR20140001863A; WO2012040073A2; US11693014B2; BR112013006935B1; EP2619577A2; EP2619577B1; JP5998143B2; US20120077690A1; CN103189745A; KR101981745B1; BR112013006935A2; AU2011305786B2; US20240118289A1; CA2811658A1; JP2013539030A; WO2012040073A3

Abstract

La invención se refiere al campo de la prevención y tratamiento de enfermedad renal. El tratamiento de la enfermedad del riñón puede adaptarse dependiendo de la necesidad para, o la esperanza de diálisis a largo plazo. Por ejemplo, la predicción del tratamiento con diálisis a largo plazo puede determinarse monitoreando biomarcadores de orina relacionados con el desarrollo de la enfermedad renal crónica. Por ejemplo, un transcurso de tiempo normalizado de aproximadamente catorce Días midiendo el receptor de muerte 5 de ácido hialurónico, y/o el factor de crecimiento de transformación ß1 puede utilizarse para establecer el riesgo de recuperación frente a la no recuperación en pacientes que han sufrido de lesión renal aguda.

Description

BIOMARCADORES DE LESION RENAL Campo de la Invención Esta invención se refiere al campo de la prevención y el tratamiento de enfermedad renal. El tratamiento de la enfermedad renal puede adaptarse dependiendo de las necesidades de, o la esperanza de, la diálisis a largo plazo. Por ejemplo, la predicción del tratamiento de diálisis a largo plazo puede determinarse monitoreando los biomarcadores de la orina relacionados con el desarrollo de la enfermedad renal crónica. Por ejemplo, un transcurso de tiempo normalizado de aproximadamente 14 días que mide el ácido hialurónico, el receptor 5 de muerte, y/o la transformación del factor del crecimiento ß? puede utilizarse para establecer el riesgo de la recuperación contra' la no recuperación en pacientes que han sufrido de una lesión renal aguda .

Antecedentes de la Invención La enfermedad renal crónica (CKD, por sus siglas en inglés) se cree que es una de las más grandes preocupaciones de salud y con un crecimiento más rápido que enfrenta el mundo en desarrollo. En los Estados Unidos solamente, 26 millones de personas tienen CKD y otros 20 millones más están en riesgo aumentado. CKD conduce a la diálisis y a la enfermedad cardiaca de tal forma que los costos médicos Ref. 240126 asociados totalizan billones de dólares. Una causa principal de CKD es la lesión renal aguda (AKI, por sus siglas en inglés) que también está asociada con costos para el cuidado de la salud sustancialmente incrementados, especialmente si se requiere de diálisis (o una técnica de soporte renal relacionada) .

La enfermedad renal crónica puede desarrollarse como resultado de muchos diferentes factores, pero más notablemente, la predisposición genética y/o la lesión renal aguda. El grado de lesión renal también está asociado con un aumento en incremento en la mortalidad a largo plazo. Por ejemplo, las fatalidades que aparecen dentro un año después del alta del hospital pueden ser tan altas como 64% para pacientes con AKI severa que requiere diálisis. Además, los marcadores actualmente utilizados de la función/lesión renal, tales como los niveles de creatinina sérica, son pobres en la discriminación del resultado a largo plazo de la enfermedad renal. Independientemente del factor de iniciación, la enfermedad renal crónica tiene una alta proporción de pacientes que requieren diálisis a largo plazo (es decir, por ejemplo, terapia de reemplazo renal o RRT) .

Este tratamiento es costoso, consumidor de tiempo y puede dar como resultado efectos secundarios adversos, que incluyen, pero no se limitan a, estenosis de vasos sanguíneos y/o trombosis.

De esta forma, el desarrollo de un biomarcador que permita una temprana identificación y la posterior estratificación de los pacientes con AKI y que también pronostique la recuperación de la función renal, es una herramienta clínica de gran necesidad en la técnica.

Breve Descripción de la Invención Esta invención se refiere al campo de la prevención y el tratamiento de la enfermedad renal. El tratamiento de la enfermedad renal puede adaptarse dependiendo de las necesidades para, o la esperanza de, la diálisis a largo plazo. Por ejemplo, la predicción del tratamiento de diálisis a largo plazo puede determinarse a través del monitoreo de los biomarcadores en la orina relacionados con el desarrollo de la enfermedad renal crónica. Por ejemplo, un transcurso de tiempo normalizado de aproximadamente 14 días midiendo el ácido hialurónico, el receptor 5 de muerte y/o el factor de crecimiento de transformación £1 pueden utilizarse para establecer el riesgo de recuperación frente a la no recuperación en pacientes que han sufrido de lesión renal aguda .

En una modalidad, la presente invención contempla métodos y composiciones para el diagnóstico, el diagnóstico diferencial, y estratificación del riesgo, el monitoreo, la clasificación y determinación de los regímenes de tratamiento en sujetos que sufren o están en riesgo de sufrir una lesión en la función renal, una función renal reducida y/o una falla renal aguda a través de la medición de uno o más marcadores de lesión renal de la presente invención.

En una modalidad, la presente invención contempla un método que comprende: a) proporcionar; i) un paciente que exhibe por lo menos un síntoma de una lesión renal aguda; ii) una muestra del fluido biológico obtenida del paciente, en donde la muestra comprende por lo menos un biomarcador renal; b) medir un valor del paciente que comprende por lo menos un valor del biomarcador renal en la muestra; y c) pronosticar la probabilidad de recuperación renal para el paciente con base en el valor del paciente. En una modalidad, la recuperación renal se pronostica que ocurra dentro de al menos 60 días a partir del inicio de la lesión renal aguda. En una modalidad, la muestra se obtiene dentro de al menos 14 días desde el inicio de la lesión renal. En una modalidad, la muestra se obtiene dentro de un día del inicio de la lesión renal. En una modalidad, la predicción comprende correlacionar el valor del paciente con un valor de umbral . En una modalidad, el valor de umbral pronosticado comprende un valor de ácido hialurónico urinario. En una modalidad, un valor de umbral que pronostica el ácido hialurónico urinario es de aproximadamente 12 g/mg de creatinina. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado para el valor del ácido hialurónico urinario comprende un área por debajo del valor de la curva característica de operación del receptor (AUC ROC, por sus siglas en inglés) de al menos 0.70. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado comprende un valor de ácido hialurónico y por lo menos un valor de señal clínica. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado para el valor del ácido hialurónico urinario y. al menos un valor de señal clínica comprende un área por debajo del valor de la curva característica de operación del receptor (AUC ROC) de al menos 0.75. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado comprende un valor del factor de crecimiento de transformación urinario ß?. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado para el valor del factor de crecimiento de transformación urinario Si es de aproximadamente 274 pg/mg de creatinina En una modalidad, el valor de umbral pronosticado para el valor del factor de crecimiento de transformación ß? comprende un área por debajo del valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.70. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado comprende el valor del factor de crecimiento de transformación urinario ß? y al menos un valor de una señal clínica. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado para el factor de crecimiento de transformación urinario ß? y por lo menos un valor de una señal clínica comprende un área por debajo del valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.74. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado comprende un valor del receptor 5 de muerte urinaria. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado para el valor 5 del receptor de muerte urinario es de aproximadamente 2.7 pg/mg de creatinina En una modalidad, el valor de umbral pronosticado para el valor del receptor de muerte urinaria 5 comprende un área por debajo del valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.70. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado comprende un valor del receptor 5 de muerte urinaria y un valor de señal clínica. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado para el valor del receptor 5 de muerte urinaria y por lo menos un valor de señal clínica comprende un área por debajo del valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.76. En una modalidad, el valor de umbral pronosticado comprende por lo menos un valor de señal clínica. En una modalidad, el valor de señal clínica se selecciona del grupo que consiste de la edad, la clasificación SOFA, el índice de comorbilidad Charlson, o la clasificación APACHE II. En una modalidad, el al menos un valor de la señal clínica comprende un área por debajo del valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.71. En una modalidad, el valor del paciente comprende por lo menos dos valores de señales clínicas, en una modalidad los al menos dos valores de señales clínicas comprenden un área combinada por debajo del valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.74. En una modalidad, los al menos dos valores de señales clínicas comprenden la edad, y el índice de comorbilidad Charlson.

En una modalidad, la presente invención contempla un método para evaluar el estado renal que identifica una estratificación del riesgo de un sujeto que comprende: a) proporcionar; i) un paciente que exhibe por lo menos un síntoma de una lesión renal aguda; ii) una muestra del fluido biológico obtenida del paciente, en donde la muestra comprende por lo menos un biomarcador renal; b) medir un valor del paciente que comprende por lo menos un valor del biomarcador renal en la muestra; y c) correlacionar el valor del paciente con un valor de biomarcador de umbral en donde se identifica la estratificación del riesgo. En una modalidad, la correlación además identifica un valor de biomarcador renal positivo en operación. En una modalidad, la correlación además identifica un valor de marcador de biomarcador renal negativo operativo. En una modalidad, el valor del paciente comprende un valor de ácido hialurónico urinario y por menos un valor de señal clínica. En una modalidad, el valor del paciente comprende un valor del factor de crecimiento de transformación SI. En una modalidad, el valor del paciente comprende un valor del receptor 5 de muerte. En una modalidad, el valor del paciente además comprende por lo menos un valor de señal clínica. En una modalidad, la muestra se obtiene dentro del al menos 14 días desde el inicio de la lesión renal aguda. En una modalidad, la estratificación del riesgo comprende un criterio de riesgo modificado, lesión, falla, pérdida (RIFLE) , seleccionado del grupo que consiste de Etapa I, Etapa II, o Etapa III. En una modalidad, la Etapa I comprende una categoría de riesgo. En una modalidad, la Etapa II comprende una categoría de lesión. En una modalidad, la Etapa III comprende una categoría de falla. En una modalidad, la estratificación del riesgo comprende asignar una probabilidad de la recuperación renal. En una modalidad, la probabilidad de recuperación renal comprende el valor del biomarcador que tiene un área por debajo de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) por arriba del valor de umbral de aproximadamente 0.70. En una modalidad, la estratificación del riesgo comprende asignar una probabilidad de no recuperación renal. En una modalidad, la probabilidad de no recuperación renal comprende el valor del biomarcador que tiene un área por debajo de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) que comprende determinar un riesgo de consecuencia clínica del paciente. En una modalidad, el riesgo de consecuencia clínica comprende una mejora en la función renal. En una modalidad, el riesgo de consecuencia clínica comprende una función renal reducida. En una modalidad, la función renal reducida comprende lesión renal. En una modalidad, la lesión renal es progresiva. En una modalidad, el riesgo de consecuencia clínica comprende una categoría de pérdida. En una modalidad, el riesgo de consecuencia clínica comprende un riesgo de consecuencia clínica que se correlaciona con el área del valor del paciente bajo la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) . En una modalidad, la probabilidad de la categoría de pérdida aumenta dentro de un valor AUC ROC en el intervalo de aproximadamente 0.5-0.3. En una modalidad, la probabilidad de la categoría de pérdida disminuye por arriba de un valor AUC ROC de 0.5. En una modalidad, la probabilidad de la categoría de falla renal de etapa terminal aumenta por debajo de un valor AUC ROC de 0.3. En una modalidad, la probabilidad de la categoría de falla renal de la etapa terminal disminuye por arriba del valor AUC ROC de aproximadamente 0.3. En una modalidad, la estratificación de riesgo comprende determinar un riesgo en cuestión para una función renal reducida futura. En una modalidad, el riesgo en cuestión para una función renal reducida futura aumenta por debajo de un valor AUC ROC de 0.5. En una modalidad, el riesgo en cuestión para una función renal reducida futura disminuye por arriba de un valor AUC ROC de 0.5. En una modalidad, la función renal reducida futura es probablemente que ocurra dentro de los 180 días del tiempo en el cual se obtuvo la muestra del fluido corporal del sujeto. En una modalidad, la función renal reducida futura es probable que ocurra dentro de un periodo de tiempo seleccionado del grupo que comprende 18 meses, 120 días, 90 días, 60 días, 45 días, 30 días, 21 días, 14 días, 7 días, 5 días, 96 horas, 72 horas, 48 horas, 36 horas, 24 horas, 12 horas, o menos. En una modalidad, la función renal reducida ocurre a las 0 horas del momento en el cual se obtuvo la muestra del fluido corporal del sujeto, por lo tanto proporcionando un diagnóstico de la afección actual.

En una modalidad, la presente invención contempla un método que comprende: a) proporcionar un sujeto que comprende por lo menos un factor de riesgo pre-existente para enfermedad renal; y b) seleccionar el sujeto para una estratificación de riesgo con base en por lo menos un factor de riesgo preexistente de enfermedad renal. En una modalidad, el factor de riesgo pre-existente comprende un biomarcador renal. En una modalidad, el biomarcador renal se selecciona del grupo que comprende ácido hialurónico urinario, factor de crecimiento de transformación urinario 1ß, receptor de muerte urinaria 5. En una modalidad, la estratificación del riesgo comprende un criterio de riesgo modificado, lesión, falla o pérdida (RIFLE, por sus siglas en inglés) seleccionado del grupo que comprende la Etapa I, Etapa II, o Etapa III. En una modalidad, la Etapa I comprende una categoría de riesgo. En una modalidad, la Etapa II comprende una categoría de lesión.

En una modalidad, la Etapa III comprende una categoría de falla. En una modalidad, la estratificación de riesgo comprende una categoría de enfermedad renal en la etapa terminal. En una modalidad, la categoría de riesgo comprende un valor AUC ROC en el intervalo entre aproximadamente 0.6-0.7. En una modalidad, la categoría de lesión comprende un valor AUC ROC en el intervalo de aproximadamente 0.5-0.6. En una modalidad, la categoría de falla comprende un valor AUC ROC en el intervalo de entre aproximadamente 0.4.0.5. En una modalidad, la categoría de pérdida comprende un valor AUC ROC en el intervalo de aproximadamente 0.3-0.4.

En una modalidad, la categoría de enfermedad renal en etapa terminal comprende un valor AUC ROC por debajo de 0.3. En una modalidad, la enfermedad renal se selecciona del grupo que consiste de enfermedad re-renal, enfermedad renal intrínseca, enfermedad de falla renal aguda post-renal. En una modalidad, el sujeto además comprende por lo menos una afección médica seleccionada del grupo que consiste experimentar o haber experimentado cirugía vascular mayor, bypass de arteria coronaria, u otra cirugía cardiaca,- un sujeto que tiene falla cardiaca congestiva pre-existente , preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, enfermedad de arteria coronaria, proteinuria, insuficiencia renal, filtración glomerular por debajo del intervalo normal, fibrosis, creatinina sérica por arriba del intervalo normal o septicemia. En una modalidad, el sujeto además comprende la exposición a por lo menos un compuesto seleccionado del grupo que consiste de fármacos anti-inflamatorios no esferoidales, ciclosporinas , tacrolimus, aminoglicósidos , foscarnet, etilenglicol , hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radio-opacos, o estreptozotrocina . En una modalidad, el sujeto se selecciona para estratificación de riesgo con base en un diagnóstico existente de una lesión seleccionada del grupo que comprende función renal, función renal reducida o falla renal aguda.

En una modalidad, la presente invención contempla un método para diagnosticar una lesión renal en un sujeto. En una modalidad, el método además comprende evaluar un estado renal para evaluar si el sujeto ha sufrido o no de una lesión en la función renal, una función renal reducida o ARF. En estas modalidades, la medición den ensayo, por ejemplo, una concentración medida de HA, DR5, y/o TGF i, se correlaciona con la aparición o no aparición de un cambio en el estado renal. En una modalidad, un método diagnóstico comprende diagnosticar la aparición o no aparición de una lesión en la función renal. En una modalidad, la medición del ensayo se correlaciona con la aparición o no aparición de tal lesión. En una modalidad, el método de diagnóstico comprende diagnosticar la aparición o no aparición de la función renal reducida. En una modalidad, la medición del ensayo se correlaciona con la aparición o no aparición de una lesión que causa una función renal reducida. En una modalidad, el método de diagnóstico comprende diagnosticar la aparición o no aparición de ARF. En una modalidad, la medición del ensayo se correlaciona con la aparición o no aparición de una lesión que causa ARF. En una modalidad, el método de diagnóstico comprende diagnosticar a un sujeto que está en la necesidad de terapia de reemplazo renal. En una modalidad, la medición del ensayo se correlaciona con la necesidad de terapia de reemplazo renal. En una modalidad, el método de diagnóstico comprende diagnosticar a un sujeto que está en la necesidad de trasplante renal. En una modalidad, la medición del ensayo se correlaciona con la necesidad de trasplante renal .

En una modalidad, cada una de las concentraciones medidas puede compararse con un valor de umbral. En una modalidad, las concentraciones medidas cada una puede compararse con un valor de umbral, en donde se identifica ya sea un "marcador de lesión renal positivo en operación" o un "marcador de lesión renal negativo en operación" .

En una modalidad, la presente invención contempla un método que comprende monitorear un estado renal de un sujeto. En una modalidad, el monitoreo se correlaciona con la aparición o no aparición de un cambio en el estado renal en el sujeto. En una modalidad, el estado renal se reduce. En una modalidad, el sujeto sufre de una lesión en la función renal. En una modalidad, el sujeto sufre de una falla renal aguda. En una modalidad, el sujeto está en riesgo de una lesión en la función renal debido a la pre-existencia de uno o más factores de riesgo para ARF pre-renal, renal intrínseco o post-renal. En una modalidad, la(s) concentración (s) medida puede compararse con un valor de umbral. En una modalidad, la(s) concentración (s) medida puede cada una compararse con el valor de umbral, en donde se identifica un "marcador de lesión renal positivo en operación" o un "marcador de lesión renal negativo en operación" .

En una modalidad, la presente invención contempla un método para clasificar una lesión renal en un sujeto. En una modalidad, el método comprende evaluar el estado renal en un sujeto. En una modalidad, el estado renal determina una lesión renal selecciona del grupo que comprende pre-renal, renal intrínseco o post-renal. En una modalidad, el estado renal determina la lesión renal seleccionada del grupo que comprende de lesión tubular aguda, glomerulonefritis aguda, nefritis tubulointersticial aguda, nefropatía vascular aguda, o enfermedad infiltrada. En una modalidad, el estado renal asigna una probabilidad de que el sujeto avanzará hacia un estado RIFLE particular. En una modalidad, la medición del ensayo, por ejemplo, en una concentración medida de HA, DR5, y/o TGFpi. En una modalidad, la concentración medida se correlaciona con una clasificación de lesión particular y/o sub-clasificación de lesión. En una modalidad, la concentración medida puede compararse con el valor de umbral. En una modalidad, la concentración medida está por arriba del umbral, en donde se asigna una clasificación particular. En una modalidad, la concentración medida está por debajo del umbral, en donde puede asignarse una clasificación diferente.

En una modalidad, la presente invención contempla un método, que comprende: a) proporcionar; i) un paciente, en donde el paciente exhibe una lesión renal aguda; ii) por lo menos dos muestras de orina derivadas del paciente; b) detectar el ácido hialurónico persistente elevada en las muestras de orina; c) pronosticar que el paciente requiere diálisis a largo plazo. En una modalidad, cuando las muestras se recolectan en el primero y 14 días después del inicio de la terapia de reemplazo para lesión renal severa. En una modalidad, el método además comprende diagnosticar el paciente con enfermedad renal crónica. En una modalidad, el diagnóstico ocurre por lo menos 60 días después de la lesión renal. En una modalidad, el método además comprende inscribir al paciente en un programa de prevención de enfermedad renal crónica.

En una modalidad, la presente contempla un método, que comprende a) proporcionar; i) un paciente, en donde el paciente exhibe una lesión renal aguda, en donde el paciente está riesgo de desarrollar enfermedad renal- crónica; ii) por lo menos dos muestras de orina derivadas del paciente; b) detectar el ácido hialurónico persistente elevado en las muestras de orina; c) tratar al paciente con enfermedad renal crónica preventiva. En una modalidad, el tratamiento se inicia en el día 14 después de la enfermedad renal.

En una modalidad, la presente invención contempla un método que contempla: a) proporcionar; i) un paciente que ha sufrido de una lesión renal aguda; ii) obtener una pluralidad de niveles de ácido hialurónico urinario y de creatinina del paciente, en donde los niveles se obtienen con el tiempo; b) construir un nivel del transcurso del tiempo con ácido hialurónico urinario, en donde el transcurso del tiempo se normaliza contra los niveles de creatinina urinaria; y c) pronosticar el desarrollo de la enfermedad renal crónica. En una modalidad, en donde el pronóstico incluye la terapia de reemplazo renal a largo plazo (es decir, por ejemplo, diálisis.

Definiciones Como se utiliza en la presente, una "lesión en la función renal" es una reducción mensurable abrupta (es decir, por ejemplo, dentro de 14 días, preferiblemente 7 días, más preferiblemente dentro de 72 horas, y aún de preferencia dentro de 48 horas) en una medición de la función renal. Tal lesión en la función renal podría identificarse, por ejemplo, a través de una disminución en el grado de filtración glomerular (GFR, por sus siglas en inglés) o una GFR estimada (eGFR) , una reducción en el resultado en la orina, un aumento en la creatina sérica, un aumento en la cistatina C sérica, o un requerimiento de terapia de reemplazo renal (es decir, por ejemplo, diálisis), etc.

Como se utiliza en la presente, una "mejora en la función renal" es un aumento mensurable abrupto (por ejemplo, dentro de 14 días, preferiblemente dentro de 7 días, más preferiblemente dentro de 72 horas, y aún más preferiblemente dentro de 48 horas) en una medición de la función renal. Lo métodos preferidos para medir y/o estimar CFR se describen a continuación .

Como se utiliza en la presente,, "función renal reducida" es una reducción abrupta (es decir, por ejemplo, dentro de 14 días, preferiblemente dentro de 7 días, más preferiblemente dentro de 72 horas, y aún más preferiblemente dentro de 48 horas) en la función renal identificada por un aumento absoluto en la creatinina sérica de más de o. igual a 0.1 mg/dl (> 8.8 pmol/l) , un aumento del porcentaje en la creatinina en suero mayor que o igual a 20% (1.2 veces de la línea base) , o una reducción en el resultado de la orina (oliguria documentada de menos de 0. 5 ml/kg por hora) .

Como se utiliza en la presente, "falla renal aguda" o "ARF" es una reducción abrupta (es decir, por ejemplo, dentro de 14 días, preferiblemente dentro de 7 días, más preferiblemente dentro de 72 horas, y aún más preferiblemente dentro de 48 horas) en la función renal identificada por un aumento absoluto en la creatinina sérica de más de o igual a 0.3 mg/dl (> 26.4 mol/l) , un aumento del porcentaje en la creatinina en suero mayor que o igual a 50% (1.5 veces de la línea base) , o una reducción en el resultado de la orina (oliguria documentada de menos de 0. 5 ml/kg por hora durante al menos 6 horas) . Este término es sinónimo de "lesión renal aguda" o "AKI" .

Como se utiliza en la presente, el término "relacionado con una señal para la presencia o cantidad" de un anali o se refiere a mediciones de ensayo que utilizan una forma estándar calculada con concentraciones conocidas del analito de interés. Un experto en la técnica entenderá que las señales obtenidas del ensayo por lo general son el resultado directo de los complejos formados entre estos, por ejemplo, uno o más anticuerpos y la biomolécula objetivo (es decir, por ejemplo, un analito) y/o polipéptidos que contienen un (unos) epxtopo(s) al cual, por ejemplo, se unen los anticuerpos. A pesar de que tales ensayos pueden detectar un biomarcador de longitud completa y el resultado del ensayo puede expresarse como una concentración del biomarcador de interés, la señal del ensayo es actualmente un resultado de tales polipéptidos "inmunoreactivos" presentes en la muestra.

Como el término se utiliza en la presente, un ensayo de "configurar para detectar" un analito si un ensayo puede generar una señal detectable indicativa de la presencia o cantidad de una concentración fisiológicamente relevante del analito. Por ejemplo, un anticuerpo epítopo usualmente en el orden de ocho aminoácidos, tal como un inmunoensayo puede configurarse para detectar un marcador de interés que también detectará polipéptidos relacionados con la secuencia marcadora, mientras los polipéptidos contengan el (los) epítopo (s) necesario para unirse al anticuerpo o anticuerpos utilizados en ensayo.

El término "marcador relacionado" como se utiliza en la presente con respecto a un biomarcador tal como uno de los biomarcadores renales (es decir, por ejemplo, un marcador de lesión renal) descrito en la presente. Un marcador relacionado puede también referirse a uno o más fragmentos, variantes, etc., de un marcador particular o su progenitor biosintético que puede detectarse como un reemplazo para el marcador mismo o como biomarcadores independientes. El término también se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor biomarcador en complejo con especies adicionales, tales como proteínas de unión, receptores, heparina, lípidos, azúcares, etc .

El término "sujeto" o "paciente" como se utiliza en la presente se refiere a un organismo humano o no humano. De esta forma, los métodos y composiciones descritas en la presente son igualmente aplicables tanto a una enfermedad en humanos como veterinaria. Adicionalmente , a pesar de que un sujeto o paciente es preferiblemente un organismo vivo, la invención descrita en la presente puede utilizarse en análisis post-mortem también. Los sujetos o pacientes preferidos son humanos, que como se utilizan en la presente se refieren a humanos vivos que reciben cuidado médico para una enfermedad o afección.

El término "analito" como se utiliza en la presente, se refiere a un compuesto o molécula medida.

Preferiblemente, un analito se mide en una muestra (es decir, por ejemplo, una muestra de fluido corporal) . Tal muestra puede obtenerse de un sujeto o paciente, o puede obtenerse de materiales biológicos previstos a ser provistos al sujeto o paciente. Por ejemplo, una muestra puede obtenerse de un riñon que se está evaluando para un posible trasplante en un sujeto, tal como una medición del analito puede utilizarse para evaluar un riñon para un daño preexistente.

El término "muestra de fluido corporal" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier muestra de fluido corporal obtenido con el propósito de diagnóstico, pronóstico, clasificación o evaluación de un sujeto de interés, tal como un paciente o donador de trasplante. En ciertas modalidades, tal muestra puede obtenerse con el propósito de determinar el resultado de una afección médica en operación o en el efecto del régimen de tratamiento en una afección médica. Las muestras en el fluido corporal preferidas incluyen, pero no se limita a, sangre, suero, plasma, fluido cerebroespinal, orina, saliva, esputo, o efusiones pleurales. Además, ciertas muestras del fluido corporal pueden analizarse más fácilmente siguiendo un procedimiento de fraccionamiento o purificación, por ejemplo, separación de la sangre entera en componentes de suero o plasma.

El término "diagnóstico" como se utiliza en la presente, se refiere a métodos a través de los cuales el personal médico entrenado puede estimar y/o determinar la probabilidad (es decir, por ejemplo, una probabilidad) de sí el paciente sufre o no de una enfermedad o afección dada. En el caso de la presente invención, "diagnóstico" incluye la correlación de los resultados de un ensayo (es decir, por ejemplo, un inmunoensayo) para un biomarcador de la presente invención, opcionalmente junto con otras señales clínicas, para determinar la aparición o no aparición de una lesión renal aguda o una falla renal aguda para un sujeto o paciente del cual se obtiene la muestra y se ensaya. Tal diagnóstico se "determina" , si no pretende implicar que el diagnóstico es 100% preciso. De esta forma, por ejemplo, un nivel de biomarcador medido por debajo de un umbral de un diagnóstico predeterminado puede indicar una mayor probabilidad de la aparición de una enfermedad de un sujeto con relación a un nivel biomarcador medido por arriba del umbral del diagnóstico predeterminado que puede indicar una probabilidad menor de la aparición de la misma enfermedad.

El término "pronóstico" como se utiliza en la presenté, se refiere a una probabilidad (es decir, por ejemplo, una probabilidad) de que ocurrirá un resultado clínico específico. Por ejemplo, un nivel o un cambio en el nivel de un indicador de pronóstico, que a su vez está asociado con una probabilidad en aumento de morbidez (por ejemplo, empeoramiento de la función renal, ARF futura, o muerte) es referido como siendo "indicativo de una probabilidad aumentada" de un resultado adverso en un paciente .

El término criterio "RIFLE", como se utiliza en la presente, se refiere a una evaluación clínica cuantitativa del estado renal utilizado para establecer las clasificaciones renales de Riesgo, Lesión, Falla, Pérdida y Enfermedad Renal en Etapa Terminal con base en una definición uniforme de la lesión renal aguda (AKI, por sus siglas en inglés). Kellum, Crit. Care Med. 36: S141-45 (2008); y Ricci y otros, Kidney Int. 73, 538-546 (2008), cada una de las cuales.se incorpora por referencia en su totalidad.

El término, "criterio RIFLE modificado", como se utiliza en la presente, proporciona clasificaciones alternativas para la estratificación de pacientes AKI, y puede incluir, Etapa I, Etapa II, y/o Etapa III. Mehta y otros, Crit. Care 11:R31 (2007), la cual se incorpora por referencia en su totalidad.

El término, "Etapa I", como se utiliza en la presente, se refiere a una estratificación de riesgo que comprende la categoría de Riesgo RIFLE, caracterizada por un aumento en la creatinina sérica de más de o igual a 0.3 mg/dl (> 26.4 ymol/l) y/o un aumento a más de o igual a 150% (1.5-veces) de la línea base. Alternativamente, la categoría puede definirse a través de un resultado de la orina menor de 0.5 ml/kg por hora por más de 6 horas.

El término, "Etapa II", como se utiliza en la presente, se refiere a una estratificación de riesgo que comprende una categoría de lesión RIFLE, caracterizada por un aumento en la creatinina sérica a más de 200% (> 2-veces) de la línea base. Alternativamente, la categoría puede definirse a través de un resultado de la orina menor de 0.5 ml/kg por hora por más de 12 horas.

El término, "Etapa III" , como se utiliza en la presente, se refiere a una estratificación de riesgo que comprende una categoría de falla RIFLE, caracterizada por un aumento en la creatinina sérica a más de 300%) (>3 veces) de la línea base y/o creatinina sérica > 354 raol/l acompañada por un aumento agudo de por lo menos 44 pmol/l. Alternativamente, la categoría puede definirse a través de un resultado de la orina menor de 0.3 ml/kg por hora durante 24 horas o anuria durante 12 horas.

El término "categoría de riesgo" , como se utiliza en la presente, se refiere a una clasificación RIFLE en donde, en términos de creatinina sérica, significa cualquier aumento de al menos 1.5 veces de la línea base, o la producción de orina de < 0.5 ml/kg peso corporal/hora durante aproximadamente 6 horas .

El término "categoría de lesión" como se utiliza en la presente, se refiere a una clasificación RIFLE en donde, en términos de creatinina sérica, significa cualquier aumento de al menos 2.0 veces de la línea base o la producción de orina <0.5 ml/kg/hr durante 12 h.

El término "categoría de falla" como se utiliza en la presente incluye, una clasificación RIFLE en donde, en términos de creatinina sérica significa cualquier aumento de al menos 3.0 veces de la línea base o una creatinina en la orina de >355 µp>1/1 (con un aumento de >44) o un resultado de la orina 0.3 ml/kg/hr durante 2'4 h, o anuria durante al menos 12 horas.

El término "categoría de pérdida" como se utiliza en la presente, se refiere a un resultado de consecuencia clínica y/o una clasificación RIFLE en donde el resultado de consecuencia clínica se caracteriza por la necesidad persistente de terapia de reemplazo renal por más de 4 semanas .

El término "categoría de Enfermedad Renal de Etapa Termina" o "categoría ESRD" como se utiliza en la presente, se refiere a un riesgo de consecuencia clínica y/o una clasificación RIFLE, caracterizada por la necesidad de diálisis durante más de 3 meses.

El término "riego de consecuencia clínica" como se utiliza en la presente se refiere a un pronóstico médico dirigido hacia ya sea recuperación renal o no recuperación renal .

El término "biomarcador renal" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier compuesto biológico relacionado con el desarrollo progresivo de la enfermedad renal crónica. En particular, un biomarcador renal puede ser un marcador de lesión renal. Por ejemplo, un biomarcador renal puede comprender ácido hialurónico, receptor 5 de muerte, factor de crecimiento de transformación SI, o cualquiera de sus metabolitos y/o derivados.

El término "biomarcador positivo en operación" como de utiliza en la presente, se refiere a cualquier biomarcador que se determina como siendo elevado en sujetos que sufren de una enfermedad o afección, con relación a compuestos que no sufren de esta enfermedad o afección.

El término "biomarcador negativo en operación" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier biomarcador que se determina como estando reducido a sujetos que sufren de una enfermedad o afección, con relación a sujetos que no sufren de esta enfermedad o afección.

El término "valor del biomarcador renal positivo en operación" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier probabilidad aumentada (es decir, por ejemplo, probabilidad aumentada) de sufrir una lesión futura en la función renal asignada a un sujeto cuando la concentración del biomarcador medida está por arriba de un valor de umbral especificado, con relación a la probabilidad asignada cuando la concentración del biomarcador medido está por debajo del valor de umbral especificado. Alternativamente, cuando la concentración del biomarcador medida está por debajo de un valor de umbral especificado, una probabilidad aumentada de no aparición de una lesión en la función renal puede asignarse al sujeto con relación a la probabilidad asignada cuando la concentración del biomarcador medida está por arriba del valor de umbral especificado. Alternativamente, cuando la concentración del biomarcador medida está por debajo del valor de umbral, puede asignarse una mejora de la función renal al sujeto. Un marcador de lesión renal positiva en operación puede incluir pero no se limita a, una probabilidad aumentada de uno o más de: lesión renal aguda, avance hacia un estado de empeoramiento de AKI, mortalidad, un requerimiento de terapia de reemplazo renal, un requerimiento para el retiro de toxinas renales, enfermedad renal en etapa terminal, falla cardiaca, infarto, infarto al miocardio, avance hacia la enfermedad renal crónica, etc.

El término "valor de biomarcador renal negativo en operación" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier probabilidad aumentada (es decir, por ejemplo, probabilidad aumentada) de sufrir una lesión futura en la función renal asignada a un sujeto cuando la concentración del biomarcador medida está por debajo de un valor de umbral especificado, con relación a la probabilidad asignada cuando la concentración del biomarcador medido está por arriba del valor de umbral. Alternativamente, cuando la concentración del biomarcador medida está por arriba de un valor de umbral, una probabilidad aumentada de no aparición de una lesión en la función renal puede asignarse al sujeto con relación a la probabilidad asignada cuando la concentración del biomarcador medida está por debajo del valor de umbral. Alternativamente, cuando la concentración del biomarcador medida está por arriba del valor de umbral, puede asignarse una mejora de la función renal al sujeto. Un marcador de lesión renal negativo en operación puede incluir, pero no se limita a, una probabilidad aumentada de uno o más de: lesión renal aguda, avance hacia un estado de empeoramiento de AKI, mortalidad, un requerimiento de terapia de reemplazo renal, un requerimiento para el retiro de toxinas renales, enfermedad renal en etapa terminal, falla cardiaca, infarto, infarto al-miocardio, avance hacia la enfermedad renal crónica, etc.

El término "pre-existente" y "pre-existencia" como se utilizan en la presente, significa cualquier factor de riesgo (es decir, por ejemplo, un biomarcador renal) existente en el momento que se obtiene la muestra del fluido corporal del sujeto.

El término "pronosticar" como se utiliza en la presente, se refiere a un método para formar un pronóstico y/o asignación de estratificación del riesgo, en donde una persona médicamente entrenada analiza la información del biomarcador, y opcionalmente con señales clínicas relevantes y/o información demográfica.

El término "enfermedad/falla/lesión renal aguda" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier agravamiento progresivo de la función renal sobre horas a días, resultando en la retención de desperdicios de nitrógeno (tales como urea nitrógeno) y creatinina en la sangre. La retención de estas sustancias también puede ser referida como, azotemia. En: Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47 va Ed, McGraw Hill, New York, páginas 785-815, incorporada aquí por referencia en su totalidad.

El término "enfermedad/falla/lesión renal crónica" como se utiliza en la presente, se refiere a una afección médica en donde los síntomas ilustrativos pueden incluir, pero no se limitan a, hiperfosfatemia (es decir, por ejemplo, > 4.6 mg/dl) o menores índices de filtración glomerular (es decir, por ejemplo, <90 ml/minuto por 1.73 m2 de superficie corporal) . Sin embargo muchos pacientes con CKD pueden tener niveles de fosfato séricos normales junto con una reducción sostenida en el índice de filtración glomerular durante 3 o más meses, o un GFR normal junto con la evidencia sostenida de una anormalidad estructural del riñon. En algunos casos, los pacientes diagnosticados con enfermedad renal crónica se colocan en hemodiálisis para mantener la homeostasis sanguínea normal (es decir, por ejemplo, niveles de urea o fosfato) . Alternativamente, "enfermedad renal crónica" se refiere a una afección médica en donde un paciente ya sea i) ha tenido una reducción sostenida en GFR <60 mi/min por 1.73 m2 de la superficie corporal durante 3 o más meses; o ii) tiene una normalidad estructural o funcional de la función renal durante 3 meses o más aún en la ausencia de GFR reducida. Las anormalidades estructurales anatómicas del riñon podrían definirse como, pero no se limitan a, microalbuminuria o proteinuria o hematuria persistentes o la presencia de quistes renales . La falla renal crónica (enfermedad renal crónica) también puede resultar de una pérdida anormal de la función renal durante meses a años. In: Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47a. Ed, McGra Hill, New York, páginas 785-815, incorporada aquí por referencia en su totalidad.

El término "aproximadamente" como se utiliza en el contexto de cualquiera de las mediciones del ensayo se refiere a +/ - 5% de una medición dada.

El término "asintomático" como se utiliza en la presente, se refiere a un paciente y/o sujeto que no tiene una enfermedad y/o lesión renal, en donde un síntoma de enfermedad y/o lesión renal puede incluir, pero no se limita a, tener un índice de filtración glomerular reducida (es decir, por ejemplo entre aproximadamente 70 - 89 ml/min por 1.73 m2 de la superficie corporal) durante menos de 3 meses.

El término "índice de filtración glomerular" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier medición capaz de determinar la función renal. En general, un índice de filtración glomerular normal está en el intervalo de entre aproximadamente 120 - 90 ml/minuto por 1.73 m2 de superficie corporal. La función renal comprometida se asume cuando los índices de filtración glomerular son menores de 90 ml/minuto por 1.73 m2 de superficie corporal. La falla renal es probable cuando los índices de filtración glomerular caen por debajo de aproximadamente 30 ml/minuto por 1.73 m2 de superficie corporal. La diálisis frecuentemente se inicia cuando los índices de filtración glomerular caen por debajo de aproximadamente 15 ml/minuto por 1.73 m de superficie corporal .

El término "falla renal" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier pérdida aguda, repentina y/o crónica de la habilidad de los ríñones para eliminar los desperdicios y la orina concentrada sin la pérdida de electrolitos .

El término "muestra biológica" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier sustancia derivada de un organismo vivo. Por ejemplo, una muestra puede derivarse de la sangre como una muestra de orina, muestra de suero o una muestra de plasma, y una muestra de sangre entera. Alternativamente, una muestra puede derivarse de un tejido recolectado, por ejemplo, a través de una biopsia. Tal muestra tisular puede comprender, por ejemplo, tejido de riñon, tejido vascular y/o tejido de corazón. Una muestra biológica también pueden comprender fluidos corporales que incluyen, pero no se limitan a, orina, saliva, o transpiración.

El término "reactivo" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier sustancia utilizada para producir una reacción química para así detectar, medir, producir, etc., otras sustancias.

El término "anticuerpo" como se utiliza en la presente se refiere a cualquier péptido o polipéptido derivado de, modelado después de, o sustancialmente codificado a través de, un gen de inmunoglobulina o genes de inmunoglobulina, o sus fragmentos, capaces de específicamente unirse a un antígeno o epítopo. Ver, por ejemplo, En: Fundamental Immunology, 3a. Edición, W.E. Paul, ed. , Raven Press, N.Y. (1993); Wilson y otros, J. Immunol . Met ods 175:267-273 (1994); y Yarmush y otros, J. Biochem. Biophys . Methods 25:85-97 (1992). El término anticuerpo incluye, pero no se limita a, porciones de unión a antígeno, es decir, "sitios de unión a antígeno" ejemplificados por fragmentos, sub-secuencias y/o regiones determinantes de complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés) ) que retienen la capacidad de la unión del antígeno, incluyendo, pero no limitándose a: i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que comprende los dominios VL, VH, CL o (¾; (ii) un fragmento F(ab' )2# un fragmento divalente que comprende dos fragmentos Fab enlazados a través de un puente de disulfuro en la región de bisagra; (iii) un fragmento Fa que comprende los dominios VH y VL; (iv) un fragmento Fv que comprende los dominios VL y VH de un brazo individual de un anticuerpo, (v) fragmento dAb (Ward y otros, Nature 341 :544-546 (1989)), que comprende un dominio VH; o (vi) una región determinante de complementariedad aislada (CDR) . Los anticuerpos de cadena individual también se incluyen por referencia en el término "anticuerpo" .

El término "epítopo" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier determinante antigénica capaz de específicamente unirse a un anticuerpo. Los e'pítopos usualmente despliegan moléculas de superficies químicamente activas tales como aminoácidos o cadenas laterales de azúcar y usualmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas.

Los epítopos conformacionales o no conformacionales pueden distinguirse en si la unión al formador pero no al anterior puede perderse en la presencia de solventes de desnaturalización.

El término "correlación" como se utiliza en la presente, con referencia al uso de biomarcadores , se refiere a la comparación de la presencia y/o cantidad de cualquier biomarcador ( s) en un paciente a su presencia y/o cantidad en personas que se sabe que sufren de, o que se sabe que están en riesgo de, una afección dada,- o en personas que están libres de una afección dada. Por lo general, esto toma la forma de la comparación de un resultado de ensayo o en la forma de una concentración del biomarcador a un umbral predeterminado seleccionado como siendo indicativo de la aparición o no aparición de la enfermedad o la probabilidad de algún resultado futuro.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 presenta datos ilustrativos que muestran la excreción de ácido hialurónico en la orina normalizado a creatinina en la orina en pacientes que exhiben lesión renal aguda. Las muestras se tomaron entre 1 y 14 días después del inicio de la terapia de reemplazo para lesión renal aguda severa (es decir, DI, D7 y D14) . Los datos mostrados representan datos en pacientes que ya sea se recuperaron o no se recuperaron 28 días después de la lesión renal (R28 y NR28, respectivamente).

La Figura 2 presenta datos ilustrativos que muestran diferencias absolutas entre muestras de orina tomadas en DI, D7 y/o D14 de pacientes que ya sea se recuperaron o no recuperaron 28 días después de la lesión renal (R28 y NR28, respectivamente) .

La Figura 3 presenta datos ilustrativos que muestran diferencias absolutas entre muestras de orina tomadas en DI, D7 y/o D14 de pacientes que ya sea se recuperaron o no recuperaron 60 días después de la lesión renal (R60 y R60, respectivamente) .

La Figura 4 presenta datos ilustrativos que muestran diferencias relativas entre muestras de orina tomadas en DI, D7 y/o D14 de pacientes que ya sea se recuperaron o no recuperaron 28 días después de la lesión renal (R28 y NR28, respectivamente) .

La Figura 5 presenta datos ilustrativos que muestran diferencias relativas entre muestras de orina tomadas en DI, D7 y/o D14 de pacientes que ya sea se recuperaron o no recuperaron 60 días después de la lesión renal (R60 y NR60, respectivamente).

La Figura 6 presenta datos ilustrativos que muestran la alta sensibilidad de la predicción de la diálisis en pacientes 60 días después de la lesión renal, cuando la excreción HA estuvo persistentemente elevada entre DI y D14.

La Figura 7 presenta datos ilustrativos que muestran los datos de la proporción de TGF^l/creatinina en la orina durante los primeros 21 después del inicio de un AKI. Las proporciones pueden ser significativamente superiores en pacientes que no recuperaron en ambos el día 7 y el día 14.

Descripción Detallada de la Invención Esta invención está relacionada con el campo de la prevención y el tratamiento de enfermedad renal. El tratamiento de la enfermedad renal puede adaptarse dependiendo de las necesidades para, o la esperanza de, la diálisis a largo plazo. Por ejemplo, la predicción del tratamiento de diálisis a largo plazo puede determinarse monitoreando los biomarcadores en la orina relacionados con el desarrollo de la enfermedad renal crónica. Por ejemplo, un transcurso de tiempo normalizado de aproximadamente 14 días midiendo el ácido hialurónico, el receptor de muerte 5, y/o el factor de crecimiento de transformación SI pueden utilizarse para establecer el riesgo de la recuperación contra la no recuperación en pacientes que han sufrido de una lesión renal aguda.

Se ha deseado desde hace mucho tiempo en la técnica de que si los esfuerzos de investigación para tratar AKI y evitar CRD podrían adaptarse de acuerdo al pronóstico a largo plazo, podría implementarse una estrategia clínica más efectiva. Utilizando tal método, los pacientes con pronóstico de no recuperar la función renal podrían selectivamente ser provistos con un tratamiento agresivo. Inversamente, los pacientes con un pronóstico favorable podrían prescindir de intervenciones más agresivas y sus potenciales efectos adversos.

Varias modalidades presentadas en la presente, han resueltos varios problemas en la técnica que hasta ahora han prevenido la habilidad de los médicos para pronosticar precisamente que pacientes se recuperarán, y que pacientes no se recuperarán, de enfermedad y/o lesión renal.

I. Lesión y/o Enfermedad Renal El riñon es responsable de la excreción de agua y solutos del cuerpo. Sus funciones incluyen el mantenimiento del balance de ácido-base, la regulación de las concentraciones de electrolito, el control del volumen de la sangre, y la regulación de la presión sanguínea. Es decir, la pérdida de la función renal a través de lesión y/o la enfermedad da como resultado una morbidez y mortalidad sustancial. Una explicación detallada de las lesiones renales es provista en Harrison's Principies of Internal Medicine, 17a. Ed., McGraw Hill, New York, páginas 1741-1830, que se incorpora por referencia en su totalidad. Los ríñones se localizan en el costado (parte trasera del abdomen superior en ambos lados de la columna espinal) . Están profundos dentro del abdomen y están protegidos por la columna vertebral, la caja torácica inferior, y los músculos fuertes de la espalda. Esta ubicación protege a los ríñones de muchas fuerzas externas. Están bien acolchados por una razón, los ríñones son órganos altamente vasculares, lo que significa que tienen un gran suministro sanguíneo. Si ocurre una lesión, puede dar como resultado un sangrado severo .

Los ríñones pueden lesionarse a través del daño a los vasos sanguíneos que los suministran o los drenan.

Esto puede ser en la forma de aneurisma, fístula arteriovenosa, bloqueo arterial, o trombosis de vena renal. El grado de sangrado depende de la ubicación y el grado de la lesión. Los ríñones también pueden sangrar profusamente si de dañan centralmente (o en el interior) , esto esta es una lesión amenazadora de la vida. Afortunadamente, la mayor parte de las lesiones renales causadas por un trauma romo ocurren periféricamente, solamente causando una contusión en los ríñones (usualmente un proceso auto-limitante) .

Las personas con afecciones renales no diagnosticadas, tales como angiomiolipoma (tumor benigno) , obstrucción de la unión ureteropélvica (obstrucción UPJ congénita o adquirida) y otros trastornos, son más susceptibles a lesiones renales y más probablemente tendrán serias complicaciones si ocurren. Otras causas de lesión renal y sangrado son los procedimientos médicos. Las biopsias renales, colocaciones del tubo de nefrostomía, y otras cirugías pueden causar una conexión anormal entre una arteria y una vena (fístula arteriovenosa) . Esto es usualmente un problema auto-limitante , pero una cercana observación es usualmente necesaria. La lesión al riñon también dañará el tracto urinario, causar la fuga de la orina del riñon.

Cada riñon filtra aproximadamente 1700 litros de sangre por día y concentra el fluido y los productos de desperdicio en aproximadamente 1 litro de orina por día. Debido a esto, los ríñones reciben más exposición a sustancias tóxicas en el cuerpo que cualquiera de los otros órganos. Por consiguiente, son altamente susceptibles a lesión de sustancias tóxicas. La nefropatia analgésica es uno de los tipos más comunes de daño tóxico al riñon. La exposición a plomo, productos de limpieza, solventes, combustibles u otros químicos nefrotóxicos (aquellos que pueden ser tóxicos al riñon) pueden dañar los ríñones. La extensiva formación de productos de desperdicios corporales, tales como ácido úrico (que pueden ocurrir con gota o con el tratamiento de médula espinal, nodos linfoides, u otros trastornos), también pueden dañar los ríñones.

La inflamación (irritación con inflamación y la presencia de células inmunitarias extra) causadas por respuestas inmunitarias a medicamentos, infección, u otros trastornos también pueden lesionar las estructuras de riñon, usualmente causando varios tipos de glomerulonefritis o necrosis tubular aguda (muerte tisular) . Los trastornos autoinmünitarios también pueden dañar los ríñones. La lesión al riñon puede dar como resultado un daño a corto plazo con síntomas mínimos o sin síntomas. Alternativamente, puede ser amenazante de la vida debido al sangrado y el choque asociado o puede resultar en una falla renal aguda o una falla renal crónica .

Las lesiones en la uretra (daños a los tubos que llevan la orina desde los ríñones a la vejiga), también pueden ser causadas por traumas (roma o penetrante) , complicaciones de procedimientos médicos, y otras enfermedades en retroperitoneo tales como fibrosis retroperitoneal (RPF, por sus siglas en inglés) , sarcomas retroperitoneales , o cánceres positivos de nodos linfoides metastáticos . Las terapias médicas (tales como las cirugías OB/GYN, antes de la radiación o la quimioterapia, y las cirugías abdominopélvicas previas) aumentan el riesgo de lesiones de la uretra.

A. Falla Renal Aguda La falla renal aguda (repentina) es la pérdida repentina de habilidad de los ríñones para eliminar los desperdicios y la orina concentrada sin la pérdida de electrolitos. Existen muchas posibles causas del daño renal incluyendo, pero no limitándose a, un disminuido flujo sanguíneo, que puede ocurrir con una extremadamente baja presión sanguínea causada por trauma, cirugía, enfermedades serias, choque séptico, hemorragia, quemaduras o deshidratación, necrosis tubular aguda (ATN, por sus siglas en inglés) , infecciones de directamente lesión en el riñon tales como pielonefritis o septicemia aguda, obstrucción del tracto urinario (uropatía obstructiva) , enfermedad renal autoinmunitaria tal como nefritis intersticial o síndrome nefrítico agudo, trastornos que causan coágulos dentro de los vasos sanguíneos delgados del riñon, púrpura trombótica trombocitopénica idiopática (ITTP, por sus siglas en inglés) , reacción a transfusión, hipertensión maligna, escleroderma, síndrome hemolítica-urémica, trastornos del nacimiento, tales como separación de la placenta con sangrado o placenta previa.

Los síntomas de falla renal aguda pueden incluir, pero no se limitan a, disminución en la cantidad de orina (oliguria) , obturaciones de micción (anuria) , micción excesiva en la noche, inflamación de tobillos, pies y piernas, inflamación generalizada, retención de fluidos, sensación disminuida, especialmente en las manos o pies, apetito disminuido, sabor metálico en la boca, hipo persistente, cambios en el estado mental o el humor, agitación, somnolencia, letargía, delirio o confusión, cambios de humor, problemas para poner atención, alucinaciones, movimientos lentos, torpes, convulsiones, temblor en las manos (agitación) , náusea o vómito, puede durar por días, obtener moretones fácilmente, sangrado prologado, sangrado de la nariz, heces con sangre, dolor en los costados (entre las costillas y las caderas) , fatiga, mal aliento, o alta presión sanguínea.

La falla renal aguda (ARF) también puede ser referida como lesión renal aguda (AKI) , y puede caracterizarse por una reducción abrupta es decir, por ejemplo, típicamente detectada dentro de 48 horas a una semana) en el índice de filtración glomerular (GFR) . Está pérdida de la capacidad de filtración da como resultado la retención de nitrógeno (urea y creatinina) , y productos de desperdicio no nitrógenos que normalmente se excretan por el riñon, una reducción en la salida de la orina, o ambos. Se reporta que la ARF complica aproximadamente 5% de las admisiones en hospital, 4-15% de la cirugía de bypass cardiopulmonar, y hasta el 30% de admisiones de cuidado intensivo. ARF puede caracterizarse como pre-renal, renal intrínseca o post-renal en causalidad. La enfermedad renal intrínseca además puede dividirse en anormalidades glomerulares , tubulares, intersticiales y vasculares. Las causas principales de ARF se describen en asociación con sus factores de riesgo respectivos y se resumen a continuación. Ver, Tabla 1; In: Merck Manual, 17a ed. , Capítulo 222, y que se incorpora por referencia en su totalidad.

Tabla 1. Factores de Riesgo de Falla Renal Aguda Representativos En el caso de ARF isquémica, el curso de la enfermedad puede dividirse en cuatros f ses . Durante una fase de inicio, que dura de horas a días, la perfusión reducida del riñon evoluciona en lesión. La ultrafiltración glomerular se reduce, el flujo del filtrado se reduce debido a los residuos dentro de los tübulos, y la fuga inversa del filtrado a través del epitelio dañado ocurre. La lesión renal puede mediarse durante esta fase a través de reperfusión del riñon. La iniciación es seguida por una fase de extensión que se caracteriza por una lesión isquémica continua e inflamación y puede involucrar el daño endotelial y la congestión vascular. Durante la fase de mantenimiento, que dura de 1 a 2 semanas, ocurre la lesión de la célula renal, y la filtración glomerular y la salida de la orina alcanza un mínimo. Una fase de recuperación puede seguir en la cual se rapara el epitelio renal y la GFR gradualmente se recupera. A pesar de esto, el índice de supervivencia en sujetos con ARF puede ser bajo como el 60%.

La lesión renal aguda causada por agentes de radiocontraste (también denominados medios de contraste) y otras neurotoxinas tales como ciclosporina, antibióticos que incluyen aminoglicósidos y fármacos anticancerígenos tales como cisplatina se manifiestan durante el periodo de días a aproximadamente 1 semana. La nefropatia inducida por el contraste (CIN, que es AKI causada por agentes de radiocontraste) se cree que es causada por la vasoconstricción intrarenal (conduciendo a lesión isquémica) y de la generación de especies de oxígeno reactivas que son directamente tóxicas para las células epiteliales tubulares renales. CIN clásicamente se presenta como aguda (inicio dentro de 24-48 horas), pero reversible (pico 3-5 días, resolución dentro de 1 semana) , surgiendo en el nitrógeno urea en la sangre y la creatinina sérica.

Un criterio comúnmente reportado para definir y detectar AKI es una elevación abrupta (típicamente dentro de aproximadamente 2-7 días o dentro de un periodo de especialización) de la creatina sérica. A pesar del uso de la elevación de creatinina sérica para definir y detectar AKI está bien establecido, la magnitud de la elevación de la creatinina sérica y el tiempo sobre el cual se mide para definir AKI varía considerablemente entre las publicaciones. Tradicionalmente, los aumentos relativamente grandes en creatinina sérica tales como 100%, 200%, un aumento de al menos 100% a un valor sobre 2 mg/dl y otras definiciones se utilizaron para definir AKI. Sin embargo, la reciente tendencia ha sido hacia el uso de elevaciones de creatinina sérica más pequeñas para definir AKI.

Por ejemplo, las relaciones entre la creatinina sérica elevada y AKI han sido reportadas como estando asociadas con riesgos para la salud Praught y otros, Curr Opin Nephrol Hypertens 14:265-270 (2005); y Chertow y otros, J Am Soc Nephrol 16:3365-3370 (2005) (ambas referencias se incorporan por referencia en su totalidad) . Como se describe en estas publicaciones, el empeoramiento agudo de la función renal (AKI) y un riesgo aumentado de muerte y otros resultados perjudiciales se sabe que están asociados con muy pequeños incrementos en la creatinina sérica. Estos aumentos en la creatinina pueden determinarse como un valor relativo (en porcentaje) o un valor nominal. Los aumentos relativos en creatinina sérica tan pequeños como 20% de un valor de pre-lesión han sido reportados para indicar el empeoramiento preciso de la función renal (AKI) y un riesgo a la salud aumentado, pero el valor reportado más común para definir AKI y el riesgo a la salud incrementado es un aumento relativo de al menos 25%. Los aumentos nominales tan pequeños como 0.3 mg/dl, 0.2 mg/dl o aún 0.1 mg/dl se han reportado para indicar el empeoramiento de la función renal y un riesgo aumentado de muerte. Se han utilizado varios periodos de tiempo para la creatina sérica para elevar sobre estos valores de umbral utilizados para definir AKI, por ejemplo, en el intervalo de 2 días 3 días, 7 días, o un periodo variable definido por un tiempo en que el paciente está en el hospital o la unidad de cuidados intensivos. Esto estudios indican que no existe una elevación de creatinina sérica de umbral particular, o periodo de tiempo para la elevación) , para el empeoramiento de la función renal o AKI, sino más bien un aumento continuo en el riesgo sobre una magnitud en aumento de la elevación de la creatinina sérica.

Otro estudio con relación a los niveles de creatina sérica con los índices de mortalidad post -cirugía . Después de la cirugía del corazón, los pacientes con una caída ligera en la creatinina sérica (por ejemplo, entre aproximadamente -0.1 a -0.3 mg/dl) tuvieron un índice de mortalidad más bajo, en donde los pacientes tuvieron un mayor índice de mortalidad asociado con caídas más grandes en la creatinina sérica (es decir, por ejemplo, más de o igual a -0.4 mg/dl), o un aumento en la creatinina sérica. Lassnigg y otros, J" Am Soc Nephrol 15:1597-1605 (2004), incorporada aquí por referencia en su totalidad. Estos hallazgos sugieren que aún cambios muy ligeros en la función renal, como se detectan por pequeños cambios en la creatinina dentro de 48 horas de la cirugía, pueden ser predictivos de un resultado del paciente.

Un sistema de clasificación unificado que utiliza creatinina sérica para definir AKI en ensayos clínicos y en lá práctica clínica fue propuesto para estratificar pacientes AKI. Bellomo y otros, Crit Care 8 (4 ) : R204 - 212 (2004), que se incorpora por referencia en su totalidad. Por ejemplo, una elevación de creatinina sérica de 25% puede definir una nefropatía inducida por contraste. cCollough y otros, Rev Cardiovasc Med. 7(4): 177-197 (2006), incorporada por referencia en su totalidad. A pesar de que varios grupos proponen criterios ligeramente diferentes para utilizar creatinina sérica para detecta AKI, el consenso es que los pequeños cambios en la creatina sérica, tales como 0.3 mg/dl (es decir, por ejemplo, aproximadamente 25%) son suficientes para detectar AKI que caracteriza el empeoramiento de la función renal, y que la magnitud del cambio en la creatinina sérica puede ser un indicador de la severidad del AKI y el riesgo de mortalidad.

A pesar de que la medición de la creatinina sérica durante un periodo de días es un método aceptado para detectar y diagnosticar pacientes con AKI, la creatinina sérica generalmente es referida como teniendo varias limitaciones en el diagnóstico, la evaluación del monitoreo de pacientes AKI . El periodo de tiempo para que la creatinina sérica se eleve a aproximadamente 0.3 mg/dl (25%) se considera un diagnóstico para AKI que puede ser desde 48 horas o más dependiendo de la definición utilizada.

Ya que la lesión celular en AKI puede ocurrir durante un periodo de horas, las elevaciones en creatinina sérica detectada a las 48 horas o más pueden ser un indicador tardío de lesión, y basándose en la creatinina sérica de esta forma retrasar el diagnóstico de AKI. Además, la creatina sérica no es un reivindicador del estado exacto del riñon y el tratamiento que necesita durante las fases más agudas de AKI cuando la función renal cambia rápidamente. Hasta que se defina por algunas modalidades de la presente invención, no existen métodos para determinar si algunos pacientes con AKI se recuperarían completamente, o si algunos necesitarían diálisis (ya. sea a corto plazo o largo plazo) , o si algunos tendrían otros resultados perjudiciales incluyendo, pero no limitándose a, muerte, eventos cardiacos adversos principales o enfermedad renal crónica. Debido a la creatinina sérica es un marcador del índice de filtración, no se diferencia entre las causas de AKI (pre-renal, intrínseca renal, obstrucción post-renal, ateroembólica, etc.), o la categoría o ubicación de la lesión en la enfermedad renal intrínseca (por ejemplo, tubular, glomerular o intersticial en origen) . La salida de la orina está similar limitada.

Estas limitaciones acentúan la necesidad del mejores métodos para detectar y evaluar AKI, particularmente en las etapas temprana y subclínica, pero también en etapas tardías cuando la recuperación y la reparación del riñon pueden ocurrir. Además, existe la necesidad de identificar mejor a los pacientes que están en riesgo de tener AKI.

B. Falla Renal Crónica A diferencia de la falla renal aguda, la falla renal crónica empeora lentamente. Por lo general resulta de cualquier enfermedad que causa la pérdida gradual de la función renal. Puede estar en el intervalo de distinción ligera a falla renal severa. La falla renal crónica puede conducir a una enfermedad renal en etapa tardía (ESRD, por sus siglas en inglés) .

La falla renal crónica usualmente ocurre durante un número de años como las estructuras internas del riñon se dañan lentamente. En las etapas tardías, puede no haber síntomas. De hecho, el avance puede ser tan lento que los síntomas no aparecen hasta que la función renal es menor de 1 décimo de lo normal.

La falla renal crónica y ESRD afecta más de 2 de 1,000 personas en los Estados unidos. La diabetes y la presión sanguínea son las dos causas más comunes y representan la mayor parte de los casos. Otros casos principales incluyen, pero no se limitan a, síndrome de Alport, nefropatía analgésica, glomerulonefritis de cualquier tipo (una de las causas más comunes) , puedas e infección en el riñon, uropatía obstructiva, enfermedad renal policística, o nefropatía de reflujo.

La falla renal crónica resulta en una formulación del fluido y productos de desperdicio en el cuerpo, conduciendo a la formación de productos de desperdicio de nitrógeno en la sangre (azotemia) y en general una salud enferma. La mayor parte de los sistemas corporales se afectan a través de la falla renal crónica.

Los síntomas iniciales pueden incluir, pero no se limitan a, fatiga, hipo frecuente, sensación de enfermedad general, picazón generalizada (prurito) , dolores de cabeza, náusea, vómito o pérdida de peso no intencional. Además, los síntomas tardíos pueden incluir, pero no se limita a, sangre en el vómito o en las heces, estado de alerta disminuido, incluyendo somnolencia, confusión, delirio, orcoma, sensación disminuida .en las manos, pies u otras áreas, fáciles contusiones o sangrado, salidas de orina y aumentadas o disminuidas, espacios o calambres musculares, convulsiones, o cristales blancos en o sobre la piel (escarcha urémica) .

Los niveles circulantes de citocinas y otros marcadores de inflamación son marcadamente elevados en pacientes con falla renal crónica. Esto podría ser causado por una generación aumentada, reducción disminuida o ambos. Sin embargo, no está bien establecido a que grado la función renal per se contribuye al entorno pro-inflamatorio urémico. Las relaciones entre la inflamación en el grado de filtración glomerular (GFR) se reportaron en 176 pacientes (edad, 52 +/-1 año; GFR, 6.5 +/- 0.1 ml/min) cerca del inicio de la terapia de reemplazo renal. Pecoits-Filho y otros, "Associations between circulating inflammatory markers and residual renal function in CRF patients" Am J Kidney Dis . 41 (6) : 1212-1218 (2003) . Por ejemplo, los niveles circulantes de proteína reactiva C de alta sensibilidad (hsCRP) , factor alfa de necrosis tumoral (TNF-alfa) , interleucina- 6 (IL-6) , hialuronano, y neopterina se midieron después de ayuno durante la noche. Los pacientes posteriormente se subdividieron en dos grupos de acuerdo con GFR media (6.5 ml/min) . A pesar del estrecho intervalo de GFR (1.8 a 16.5 ml/min) , los niveles de hsCRP, hialuronano, y neopterina fueron significativamente mayores en el subgrupo con GFR menores, y correlaciones significativamente negativas se observaron entre GFR e IL-6 (rho= -0.18; P <0.05), hialuronano (rho = -0.25; P <0.001), y neopterina (rho = -0.32; P <0.0005) . En un análisis multivariable , la edad y GFR estuvieron asociados con inflamación pero la enfermedad cardiovascular y la diabetes mellitus no. Estos resultados muestran que un GFR bajo per se está asociado con el estado inflamatorio, sugiriendo una eliminación renal perjudicada de citocinas pro-inflamatorias , una generación aumentada de citocinas en uremia, o un efecto adverso de inflamación en la función renal .

C. Diálisis La diálisis (es decir, por ejemplo, terapia de reemplazo renal) , es un método para remover las sustancias tóxicas (impurezas o desperdicios) de la sangre cuando los ríñones son incapaces de hacerlo y pueden llevarse a cabo utilizando varios diferentes métodos. Por ejemplo, la diálisis peritoneal puede filtrar los desperdicios mediante el uso de una membrana peritoneal dentro del abdomen. El abdomen se rellena con soluciones especiales que ayudan a remover las toxinas. Las soluciones permanecen- en el abdomen durante un tiempo y después se drenan. Esta forma de diálisis puede llevarse a cabo en casa, pero debe hacerse cada día. Alternativamente, la hemodiálisis puede llevarse a cabo a través de la circulación de la sangre a través de filtros especiales fuera del cuerpo. La sangre fluye a través de un filtro, junto con las soluciones que ayudan a remover las toxinas .

La diálisis utiliza formas especiales de acceder la sangre en los vasos sanguíneos . El acceso puede ser temporal o permanente. El acceso temporal toma la forma de catéteres de diálisis, tubos huecos colocados en las venas grandes que pueden soportar flujos sanguíneos aceptables. La mayor parte de los catéteres se utilizan en situaciones de emergencia durante periodos de tiempo corto. Sin embargo, los catéteres denominados catéteres perforados pueden utilizarse durante periodos de tiempo prolongados, aún de semanas a meses. El acceso permanente se crea a través de la unión quirúrgica de una arteria a una vena. Esto permite que la vena reciba sangre a alta presión, conduciendo al adelgazamiento de la pared de la vena. Esta vena puede manejar perforaciones repetidas y también proporciona excelentes de los niveles del flujo sanguíneo. La conexión entre una arteria y una vena puede hacerse utilizando los vasos sanguíneos (una fístula arteriovenosa, o AVF) , o un puente sintético (injerto arteriovenoso, o AVG) . La sangre se desvía del punto de acceso en el cuerpo hacia una máquina de diálisis. Aquí, la sangre fluye contra corriente a una solución especial denominada el dializato. Los desequilibrios químicos e impurezas de la sangre se corrigen en la sangre que regresa al cuerpo. Típicamente, la mayor parte de los pacientes experimenta hemodiálisis durante tres sesiones cada semana. Cada sesión dura 3-4 horas.

El propósito de la diálisis es ayudar a las funciones del riñon incluyendo, los filtros para la sangre, la remoción de los productos de desperdicio, la regulación del agua corporal, mantenimiento del balance de los electrolitos o mantenimiento del pH de la sangre que permanece entre 7.35 y 7.45. Además, la diálisis puede reemplazar algunas de las funciones de los ríñones que no están trabajando apropiadamente que por el contrario darían como resultado la muerte de un paciente.

La diálisis se utiliza más frecuentemente en pacientes que tienen falla renal, pero también puede también fácilmente eliminar fármacos o venenos en situaciones agudas. Esta técnica puede salvar la vida en personas con falla renal aguda o crónica.

II. Biomarcadores Renales Urinarios Actualmente, no existen tratamientos efectivos para mejorar la recuperación renal, o para mejorar el resultado renal a corto y largo plazo, después de AKI . Además, los métodos para pronosticar la recuperación también faltan. El papel emergente de los biomarcadores para la detección temprana de la enfermedad renal y/o lesión renal pueden ayudar a identificar nuevas herramientas de pronóstico para pronosticar resultados clínicos renales. Los candidatos potenciales para biomarcadores de recuperación renal incluyen, pero no se limitan a, moléculas expresadas con trayectorias que conducen a la regeneración y proliferación, así como marcadores de fibrosis y apoptosis. Además, los biomarcadores de lesión renal también pueden servir para distinguir la resolución temprana, y por lo tanto probabilidades aumentadas de recuperación.

La lesión renal aguda (AKI) tiene un grado de incidencia estimado de aproximadamente 2000 por millón de población y este grado está en aumento. Ali y otros, "Incidence and outcomes in acute kidney injury: a comprehensive population-based study" J Am Soc Nephrol 18 : 1292-1298 (2007) .

Aproximadamente el 5% de las personas admitidas en unidades de cuidado * intensivo alrededor del mundo desarrollan AKI severa requiriendo diálisis. Uchino y otros, "Acute renal failure in critically ill patients: a multinational , multicenter study" JAMA 294:813-818 (2005) . Un estudio multi-centro de los Estados Unidos, reciente encontró que menos de solamente aproximadamente 60% de los pacientes sobreviven a AKI severa con función renal recuperada en dos meses. Palevsky y otros, "Intensity of renal support in critically ill patients with acute kidney injury" Engl J Med 359:7-20 (2008) . De esta forma, un gran número de pacientes con AKI avanzan en una enfermedad renal en etapa terminal (ESRD) .

Sin embargo, ya que solamente una fracción de los pacientes con AKI fallan en la recuperación de la función renal, las intervenciones dirigidas a mejorar la recuperación o proporcionar un soporte renal (por ejemplo, diálisis temprana) , no pueden dirigirse selectivamente de manera apropiada con algunos medios para determinar que pacientes se recuperaran y cuales no se recuperaran (por ejemplo, la disponibilidad de biomarcadores no invasivos) . Actualmente la predicción del riesgo clínico para recuperación después de AKI está extremadamente limitada. De esta forma, el desarrollo de un biomarcador no invasivo que permita la predicción temprana de la recuperación de la función renal es una gran necesidad en la técnica para administración de la enfermedad renal .

La identificación de tales biomarcadores no invasivos (y, por ejemplo, un biomarcador urinario) mejorará enormemente el pronóstico a largo plazo por lo tanto adaptando los esfuerzos de investigación para tratar AKI y evitar ESRD. En otras palabras, teniendo la habilidad de pronosticar que pacientes no recuperaran la función renal permite a un médico enfocarse en los limitados recursos en el desarrollo y aplicación de intervenciones de tratamientos agresivos en estos pacientes en riesgo pronosticado. Inversamente, los pacientes con un pronóstico favorable prescindirían de intervenciones más agresivas y sus afectos adversos potenciales, por lo tanto liberando los recursos médicos para aquellos en la necesidad y la reducción de costos médicos generales .

En una modalidad, la presente invención contempla métodos y composiciones para evaluar la función renal en un sujeto. Como se describe en la presente, la medición de varios marcadores de lesión renal descritos en la presente puede utilizarse para el diagnóstico, pronóstico, estrati icación del riesgo, evaluación de la etapa, monitoreo, categorización y una determinación de regímenes de diagnóstico y tratamiento adicionales en sujetos que sufren o están en riesgo de sufrir de una lesión en la función renal, una función renal reducida y/o falla renal aguda (también denominada lesión renal aguda) .

Los biomarcadores renales como se describen en la presente pueden utilizarse individualmente o en paneles, que comprenden una pluralidad de biomarcadores renales, para estratificación del riesgo. En una modalidad, la estratificación del riesgo, identifica sujetos en riesgo futuro: i) lesión en la función renal; ii) avance hacia una función renal reducida; iii) avance a ARF; o iv) una mejora en la función renal, etc. En una modalidad, la estratificación del riesgo diagnostica una enfermedad existente, que comprende identificar sujetos que: i) sufren de una lesión renal; ii) avanzaron hacia la función renal reducida; o iii) avanzaron hacia ARF, etc. En una modalidad, la estratificación del riesgo monitorea la deterioración y/o la mejora de la función renal, en una modalidad, la estratificación del riesgo pronostica un resultado médico futuro que incluye, pero no se limita a, una mejora o agravamiento de la función renal, un riesgo de mortalidad disminuido o aumentado, un riesgo aumentado o disminuido de que un sujeto que requerirá la iniciación o la continuación de la terapia de reemplazo renal (por ejemplo, hemodiálisis , diálisis peritoneal, hemofiltración y/o trasplante renal), un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto se recuperará de una lesión en la función renal, un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto se recuperará de ARF, un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto se avanzará hacia la enfermedad renal en etapa final, un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto avanzará hacia falla renal crónica, un riesgo disminuido o aumentado de que un sujeto sufrirá de rechazo al riñon trasplantado, etc.

En una modalidad, la presente invención contempla métodos para evaluar el estado renal en un sujeto. En una modalidad, el método proporciona una muestra de fluido corporal derivada del sujeto. En una modalidad, el método comprende llevar a cabo un ensayo utilizando la muestra de fluido corporal para detectar uno o más biomarcadores renales seleccionados del grupo que incluye, pero no se limitan a: Acido Hialurónico (HA) , receptor de muerte 5 (DR5) , o el factor de crecimiento de transformación ß? (TGFpi) . La medición del ensayo, por ejemplo, una concentración medida de HA, DR5, y/o TGF i, después se correlaciona con un valor de umbral para establecer el estado renal del sujeto.

Las correlaciones para establecer el estado renal del paciente pueden incluir, pero no se limitan a, la correlación de la medición del ensayo con uno o más de la estratificación del riesgo, diagnóstico, pronostico, determinación de la etapa, clasificación y monitoreo del sujeto como se describe en la presente. De esta forma, la presente invención utiliza uno o más biomarcadores renales de la presente invención para la evaluación de la enfermedad y/o lesión renal.

Puede utilizarse una variedad de métodos para llegar a un valor de umbral deseado para utilizarse en estos métodos. Por ejemplo, un valor de umbral puede determinarse de una población de sujetos normales mediante la selección de una concentración de biomarcador renal que representa el 75°, 85°, 90°, 95°, o 99° percentil del biomarcador según medido en sujetos normales.

Alternativamente, un valor de umbral puede determinarse de una población "enferma" de sujetos, por ejemplo, aquellos que sufren de una lesión o que tienen una predisposición a una lesión (por ejemplo, avance hacia ARF o algún otro resultado clínico tanto como la muerte, diálisis, trasplante renal, etc.), mediante la selección de una concentración del biomarcador renal que representa 75°, 85°, 90°, 95°, o 99° percentil del biomarcador según medido en tales sujetos enfermos. En otra alternativa, el valor de umbral puede determinarse de una medición anterior de un biomarcador renal en el mismo sujeto; es decir, un cambio temporal en el nivel de biomarcador en el sujeto puede utilizarse para asignar el riesgo al sujeto.

La explicación anterior no pretende implicar, sin embargo, que los biomarcadores renales contemplados en la presente se limitan a una comparación con los umbrales individuales correspondientes. Otros métodos para combinar resultados de ensayo pueden comprender el uso de la regresión logística multivariable , modelación log linear, análisis de red neural, análisis n de m, análisis de árbol de decisión, proporciones de cálculo de marcadores, etc. Esta lista no pretende ser limitante. En estos métodos, un resultado compuesto que se determina mediante la combinación de biomarcadores individuales puede tratarse como si por si mismo fuer un biomarcador; es decir, un valor de umbral quizás se determina por el resultado compuesto como se describe en la presente para biomarcadores individuales, y el resultado compuesto para un paciente individual comparado con su valor de umbral .

En una modalidad, la presente invención contempla un biomarcador de Ácido Hialurónico urinario (HA) para pronosticar la recuperación de la función renal después de lesión y/o enfermedad renal. En una modalidad, la identificación del biomarcador proporciona estratificación del paciente para adaptar la intensidad del tratamiento por lo tanto evitando complicaciones innecesarias a largo plazo.

En una modalidad, la presente invención contempla un método que comprende pronosticar el pronóstico a largo plazo de una lesión y/o enfermedad renal tempranamente después del inicio de la lesión y/o enfermedad renal. En una modalidad, el método pronostica la diálisis a largo plazo cuando el HA urinario está persistentemente elevado entre DI - D14 después del inicio de la terapia de reemplazo para lesión renal aguda severa. En una modalidad, el método pronostica la diálisis a largo plazo cunado el HA urinario esta persistentemente elevado entre DI - D14 después del inicio de la terapia de reemplazo para lesión renal aguda severa. En una modalidad, la diálisis a largo plazo comprende por lo menos sesenta días (60) después de la lesión renal. En una modalidad, la diálisis a largo plazo comprende por lo menos sesenta días (60) después del diagnóstico de la enfermedad renal .

Algunos datos provistos en la presente se recolectaron de cuarenta y tres (43) pacientes enrolados en un ensayo controlado distribuido aleatoriamente y muíti centro grande que estudia el efecto de diferentes dosis RRT en la supervivencia AKI . En una modalidad, la supervivencia AKI se correlaciono con el biomarcador de Ácido Hialurónico urinario (HA) . A pesar de que no es necesario entender el mecanismo de una invención, se cree que HA (por ejemplo, hialuronano o hialuronato) comprenden glicosaminoglicano no sulfatado, y se cree que se distribuye ampliamente en todo el tejido conectivo epitelial y neural. También se cree que HA es uno de los varios componentes dentro de la matriz extracelular y puede estar involucrado en la reparación y remodelación tisular mediante la mediación de la proliferación y la migración celular, la síntesis de la degradación de la matriz extracelular. Por ejemplo, el HA fragmentado se ha observado que se acumula durante la lesión tisular y puede estimular la expresión de los genes inflamatorios a través de una variedad de células inmunitarias en el sitio de la lesión. Además, la depuración perjudicial del HA se ha visto que da como resultado una inflamación persistente. 5 En una modalidad, el biomarcador pronostica una no recuperación de la función renal en donde la dependencia de la diálisis está en exceso de sesenta (60) días. En una modalidad, la no recuperación de la función renal comprende la elevación del biomarcador por arriba de su valor inicial 0 durante al menos catorce (14) días. En una modalidad, la predicción del biomarcador está soportada por un análisis característico de la operación del receptor (ROC) . En una modalidad, el análisis ROC proporciona cálculos que incluyen, pero no se limitan a, el área bajo la curva adaptada y/o el 5 área trapezoidal (Wilcoxon) . En una modalidad, el área bajo la curva es = 0.9686 que tiene un error estándar estimado = 0.0518. En una modalidad, el área trapezoidal (Wilcoxon) es = 0.9692 teniendo un error estándar estimado = 0.0568. Ver, Figura 5.

CA. Ácido Hialurónico El Ácido Hialurónico (HA) se cree que es un glicosaminoglicano tisular conectivo ubicuo que in vivo está presente como un componente de alta masa molecular de la mayor parte de las matrices extracelulares . HA no ha sido 5 identificado como un constituyente principal del corticointersticio renal normal. Hansell y otros, "Hyaluronan content in the kidney in different states of body hydration" Kidney Int 58:2061-2068 (2000). Sin embargo HA se expresa alrededor de las células epiteliales tubulares próximas renales (PTC, por sus siglas en inglés) después de tanto lesión renal aguda como crónica que es causada por numerosas enfermedades. Sibalic y otros, "Upregulated renal tubular CD44, hyaluronan, and osteopontin in kdkd mice with interstitial nephritis" Nephrol Dial Transplant 12:1344-1353 (1997) ; y Le ington y otros, "Expression of CD44 in kidney after acute ischemic injury in rats" A J Physiol Regul Integr Comp Physiol 278:R247-254 (2000). Además, la deposición aumentada de HA intersticial se correlaciona con ambas, la función de la proteinuria y renal en enfermedad renal progresiva. Sano y otros, "Localization and roles of CD44, hyaluronic acid and osteopontin in IgA nephropathy" Nephron 89:416-421 (2001).

La unión de HA a su receptor principal, CD44, promueve la inflamación a través de la interacción entre HA y CD44, expresado en células inflamatorias. Melin y otros, "Ischemia-induced renal expression of hyaluronan and CD44 in diabetic rats" Nephron Exp Nephrol 103:e86-94 (2006). La unión de HA/CD44 activa la trayectoria de la proteína cinasa activada por mitógeno (MAPK) y mejora la migración de PTC, un proceso que está implicado en la trans-diferenciación de celúla epitelial-fibroblasto y fibrosis renal progresiva. Yang y otros, "Dissection of key events in tubular epithelial to myofibroblast transition and its implications in renal interstitial fibrosis" Am J Pathol 159:1465-1475 (2001). En ríñones isquémicos de sujetos diabéticos el contenido de HA renal empieza a aumentar ya después de veinticuatro horas y significativamente de 1-8 semanas después de la isquemia-repercusión (I/R) . Okajima K: "Regulation of inflammatory responses by natural anticoagulants" Inmunol Rev 184:258-274 (2001) .

El Ácido Hialurónico (también conocido en la técnica como hialuronato e hialuronano, y abreviado como HA) , es un glucosaminoglicano que comprende una cadena de polisacárido no ramificada recta con unidades alternantes de N-acetil-D-glucosamina y ácido D-glucurónico . Laurent y otros, "Hyaluronan" FASEB J 6:2397-2404 (1992); y Delpech y otros, "Hyaluronan: fundamental principies and applications in cáncer" J Intern Med 242: 41-48 (1997). El HA está presente de manera ubicua en varios tipos de material biológico incluyendo tanto bacterias como animales. En humanos, el HA se encuentra en altas concentraciones en cordones umbilicales, en el humor vitreo de los ojos, en el cartílago y el fluido sinovial. Las pequeñas cantidades de HA están presentes en CSF, en la linfa, en la sangre, en el suero y la orina. Los niveles de HA han estado asociados con enfermedades tales como artritis reumatoide, cirrosis hepática y el tumor de ilms . HA está asociado con tumores no específicos en general, pero su uso no se ha aplicado hasta la fecha al descubrimiento, terapia y administración de tumores clínicos particulares. HA se conoce que juega un papel en varias afecciones patofisiológicas incluyendo cáncer .

Por ejemplo, los niveles de HA han demostrado que están elevados en ciertos modelos de tumor de animales (por ejemplo, carcinoma V2 en conejos) y cánceres humanos (por ejemplo, pulmón, tumor de Wilms, pecho, etc.). Knudson y otros, "The role and regulation of tumor associated hyaluronan" En: The Biology of Hyaluronan (J. Whelan, ed.), pp. 150-169, New York, Wiley Chichister (Ciba Foundation Symposium 143) , 1989) . En tejidos tumorales el HA soporta la adhesión y la migración de la célula tumoral y también ofrece una protección contra la vigilancia inmunitaria.

Algunos fragmentos de HA también se ha observado que estimulan la angiogénesis , y tales fragmentos se encuentran en la orina de pacientes con carcinoma de vejiga y tejidos tumorales. Sattar y otros, "Does hyaluronan have a role in endothelial cell proliferation of the synovium?" Semin Arthritis Rheum 22:37-43 (1992); Lokeshwar VB, Selzer MG. Differences in hyaluronic acid mediated functions and signaling in arterial, microvessel, and vein-derived human endothelial cells. J Biol Chem 2000; 275:27641-27649. Los fragmentos de ácido hialurónico se generan cuando HAase, una endoglicosidasa, degrada el polímero HA. Csoka TB, Frost GI, Stern R. Hyaluronidases in tissue invasión. Invasión Metástasis 1997;17:297-311; y 55. Roden L, Campbell P, Fraser JR, Laurent TC, Petroff H, Thompson JN. Enzymatic pathways of hyaluronan catabolism. En: helan J, editor. The Biology of Hyaluronan. New York: iley Chichi'Ster 1989:60-86. Una prueba HA ha sido sugerida para detectar carcinoma de vejiga, independientemente del grado del tumor. Lokeshwar VB, Obek C, Pham HT, ei D, Young MJ, Duncan RC. Urinary hyaluronic acid and hyaluronidase : markers for bladder cáncer detection and evaluation of grade. J Urol 2000; 163:348-356.

La eficacia de la prueba HA-HAase para monitorear la recurrencia del tumor en vejiga según comparado con BTA-Stat estándar se reportó recientemente. Lokeshwar y otros, Bladder Tumor Markers for Monitoring Recurrence and Screening Comparison of Hyaluronic Acid-Hyaluronidase and BTA-Stat Tests Cáncer 95:61-72 (2002). Este estudio sugiere que una prueba bioquímica tal como la prueba HA-HAase puede detectar la recurrencia del carcinoma en la vejiga antes de la cistoscopia. Si tal detección temprana puede proporcionar una ventaja clínica en términos de resultados, la cistoscopia ya no puede ser el estándar de oro final para decidir la sensibilidad, la especificidad y la precisión de la prueba en el monitoreo de la recurrencia. Un corolario interesante a esto sería el tratamiento de pacientes con carcinoma de próstata y el aumento del antígeno especifico de próstata después de la prostectomía radical o terapia por radiación de la prueba HA-HAase que puede ser un adjunto efectivo para citotoscopía para monitorear la recurrencia del carcinoma de vejiga. Con sobre 90% de sensibilidad y 86% de precisión la prueba HA-HAase puede ser un adjunto efectivo para cistoscopia para monitorear recurrencia de carcinoma de vejiga. Una prueba HA-HAase falso positiva lleva un riesgo significativo de recurrencia dentro de 5 meses. De esta forma, es posible que una combinación de pruebas bioquímicas pueda efectivamente monitorear la recurrencia del carcinoma de vejiga, lo cual puede permitir un mínimo de 50% de reducción en el número de procedimientos de cistoscopia de vigilancia .

La hialuronidasa (HAase) es una enzima endoglicosídica que degrada HA mediante la hidrólisis de las uniones acetilglucosamínicas en HA. La degradación limitada de HA a través de hialuronidasa da como resultado la generación de fragmentos HA de longitudes específicas (~ 3-25 unidades de disacárido) que son angiogénicas (West y otros, Angiogénesis induced by degradation products of hyaluronic acid. Science, 228: 1324-1326, 1985) . En vertebrados, la hialuronidasa puede categorizarse en dos clases, aquellas activas a un pH neutral (pH óptimo de 5.0), y aquellas activas a un pH ácido (pH 3.5-4.0) (Roden y otros, Enzymatic pathways of hyaluronan catabolism. En.- The Biology of hyaluronan, (J. helan, ed.), pp. 60-86, New York, Wiley Chichister (Ciba Foundation Symposium 143), 1989; West y otros, ibid. ; Gold, Purification and properties of hyaluronidase from human liver. Biochem. J., 205: 69-74, 1982; Fraser and Laurent, Turnover and metabolism of Hyaluronan. en: Biology of Hyaluronan, (J. Whelan, ed.), pp. 41-59, New York, Wiley Chichister (Ciba Foundation Symposium 143), 1989; Zhu y otros, Molecular cloning of a mammalian hyaluronidase reveáis identity with hemopexin, a serum heme-binding protein. J. Biol . Chem. , 269: 32092-32097, 1994; Lin y otros, A hyaluronidase activity of the sperm plasma membrane protein pH-20 enables sperm to penétrate the cumulus layer surrounding the egg. J. Cell Biol., 125: 1157-1163, 1995) .

Por ejemplo, la hialuronidasa testicular es de tipo neutral mientras que la hialuronidasa hepática tiene un pH óptimo. Las acciones concertadas de ambos HA e hialuronidasa se sabe que juegan papeles importantes durante el desarrollo embrionario, la vasculogénesis , la remodelación vascular, la vigilancia inmunitaria y el avance del tumor (McCormick and Zetter, Adhesive interactions in angiogenesis and metástasis. Pharmacol. Ther. , 53: 239-260, 1992; Hobarth y otros, Topical chemo-prophylaxis of superficial bladder cáncer by mitomycin C and adjuvant hyaluronidase , Eur. Urol . , 21: 206-210, 1992; Knudson y otros, The role and regulation of tumor-associated hyaluronan. En: The Biology of Hyaluronan (J. Whelan, ed.) 5 pp. 150-169, New York, Wiley, Chichester (Ciba Foundation Symposium 143), 1989; Lin y otros, Urinary hyaluronic acid is a Wilms' tumor marker. J". Ped. Surg. , 30: 304-308, 1995; Stern y otros, Hyaluronidase levéis in uriñe from Wilms' tumor patients. J". Nati. Canc. Inst. , 83: 1569-1574, 1991). CB . Receptor de muerte 5 El receptor de muerte 5 (DR5, por sus siglas en inglés) se cree que es un receptor pro-apoptótico que se activa a través del ligando inductor de apoptosis relacionado con el factor de necrosis tumoral (TRAIL, por sus siglas en 5 inglés) . TRAIL se cree que es una forma soluble de un ligando inductor de apoptosis endógeno que induce la apoptosis en un amplio intervalo de células y contribuye a la posterior inflamación y fibrosis. Los ratones deficientes de TRAIL o DR5 se han reportado como relativamente resistentes a la 0 aparición de inflamación y la posterior fibrosis. Wang y otros, "Over-expression of C/EBP-alpha induces apoptosis in cultured rat hepatic stellate cells depending on p53 and peroxisome proliferator-activated receptor-gamma" Biochem Biophys Res Commun 380:286-291 (2009); y Takeda y otros, "Death receptor 5 mediated-apoptosis contributes to cholestatic liver disease" Proc Nati Acad Sci US A 105:10895-10900 (2008) .

Los datos presentados en el presente documento ejemplifican un método de clasificación para una serie de proteínas urinarias que son relevantes para la inflamación, la septicemia, lesión renal aguda, y falla renal aguda. A partir de este panel, el receptor 5 de muerte urinario (DR5) se identificó como un biomarcador potencial de recuperación después de AKI severa. El receptor de muerte 5 (también conocido como TRAILR2) es parte de la súper familia del factor de necrosis tumoral (TNF, por sus siglas en inglés) , y es un receptor para el ligando que induce la apoptosis relacionada con el factor de necrosis tumoral (TRAIL) . Después de la unión de TRAIL a sus receptores (DR4 y DR5) se inicia una cascada de eventos que conduce a la activación y la apoptosis de NFkB . Shetty y otros, "Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) up-regulates death receptor 5 (DR5) mediated by NFkB activation in epithelial cell lines" Apoptosis 7:413-420 (2002).

En una modalidad, la presente invención contempla un biomarcador urinario que comprende DR5 capaz de pronosticar la recuperación de la función renal post-AKI. En una modalidad, la presente invención contempla un biomarcador urinario que comprende DR5 capaz de proporcionar a un paciente la estratificación para la intensidad del tratamiento post-AKI y la prevención de complicaciones a largo plazo.

Factor de crecimiento de transformación ß? El factor de crecimiento de transformación ß? (?T?ß?) se cree que es una proteína secretada que lleva a acabo muchas funciones celulares incluyendo pero no limitándose a la proliferación, diferenciación y apoptosis. TGF i puede actuar directamente a través de la estimulación de la síntesis de los componentes de la matriz extracelular y reduciendo la producción de colagenasa, o indirectamente a través de otros factores profibrogénicos tales como el factor de crecimiento tisular conectivo (CTGF, por sus siglas en inglés) que puede jugar un papel en la glomeruloesclerosis , la fibrosis intersticial, y la atrofia tubular que aparecen con la falla renal en la etapa terminal, independientemente de la etiología primaria. Wolf G. , "Renal injury due to renin-angiotensin-aldosterone system activation of the transforming growth factor-beta pathway" Kidney Int 70: 1914-1919 (2006) . TGF i también se expresa altamente después de la isquemia/reperfusión (I/R) y promueve la perdida de los vasos sanguíneos mediante la intrusión de la transición fenotípica de las células endoteliales para transdiferenciarse en el fenotipo de fibroblasto/miofibroblasto .

Los datos presentados en la presente clasifican una serie de proteínas urinarias relacionadas con la fisiología renal. De este panel, el factor de crecimiento de transformación urinario ß 1 (TGF-ß?) se identificó como un biomarcador potencial de la función renal después de AKI severa. TGF-ß? es un factor de crecimiento en el desarrollo embriológico y en la sanación y reparación tisular. TGF-ß? se sabe que está involucrado en la señalización de la célula epitelial renal. Sakurai y otros, "An in vitro tubulogenesis system using cell lines derived from the embryonic kidney shows dependence on múltiple soluble growth factors" Proc Nati Acad Sci USA 94:6279-6284 (1997) .

En una modalidad, la presente invención contempla un biomarcador urinario que comprende TGF-ß? capaz de pronosticar la recuperación de la función renal post-AKI. En una modalidad, la presente invención contempla un biomarcador urinario que comprende TGF-ß? capaz de proveer a un paciente la estratificación para la intensidad del tratamiento post- AKI y la prevención de complicaciones a largo plazo.

D . Resultados de ensayos clínicos. 1. Diseño experimental un estudio de recuperación renal reciente (BioMARK) fue un estudio de cohorte de observación conducido como una parte de observación conducido como una parte del estudio de la Red de Ensayo de Falla Renal Aguda (en la presente referido como estudio ????) de Veterans Affairs/National Institutes of Health (VA/NIH) . El estudio ATN comprendió un ensayo prospectivo, multicentral de dos estrategias de terapia de reemplazo renal en pacientes críticamente enfermos con lesión renal aguda. El estudio ATN se condujo entre Noviembre del 2003 y Julio del 2007 en 27 centros médicos de la administración de veteranos y afiliados a la Universidad. Todos los pacientes adultos (18 años de edad o mayores) tuvieron AKI clínicamente consistente con necrosis tubular aguda (definida como una configuración clínica de lesión isquémica o nefrotóxica y oliguria o creatinina sérica incrementada) y que requirieron terapia de reemplazo renal (RRT, por sus siglas en inglés) , así como falla de uno o más de los sistemas de órganos no renales o septicemia.

El criterio de exclusión incluyo: i) creatinina sérica de la línea base mayor de 2 mg/dl en hombres o más de 1.5 mg/dl en mujeres; ii) AKI clínicamente que se cree que es debido a una etiología diferente de la necrosis tubular aguda; iii) trasplante de riñon anterior; iv) embarazo; v) encarcelación; vi) un peso mayor de 120 kilogramos; vii) no candidatos para RRT; viii) estado moribundo; o ix) pacientes que no se espera que sobrevivan 28 días debido a una afección médica irreversible. Los pacientes elegibles no habían experimentado más de una sesión de hemodiálisis intermitente o diálisis de baja eficiencia sostenida o más de 24 horas de terapia de reemplazo renal continua antes de la distribución aleatoria.

Como un sub-estudio del ensayo ATN, algunos pacientes enrolados en la University of Pittsburgh Medical Center, Pittsburgh VA Medical Center, Cleveland Clinical Foundation, University of Texas Health Science Center at Houston, y Washington University Medical Center fueron solicitados para experimentar mediciones seriales de biomarcadores prospectivos seleccionados (es decir, por ejemplo Acido Hialurónico, factor de crecimiento de transformación ß?, o receptor de muerte 5) . Este estudio en particular requirió una forma de consentimiento adicional para la determinación de los biomarcadores, y un total de 76 casos de estos 5 centros estuvieron disponibles para análisis y se incluyeron en el estudio. La aprobación se obtuvo de Institutional Review Boards of the University de Pittsburgh y todos los sitios participantes. 2. Recolección y Análisis de datos Los registros médicos de los participantes en el estudio se revisaron prospectivamente para obtener los datos de hospitalización, incluyendo las características demográficas de la línea base, la función renal serial, y/o la presencia de oliguria (como se define por la salida de orina < 400 ml/Días) . La presencia de septicemia se definió mediante el uso del criterio del síndrome de respuesta inflamatorio sistémico.

La definición de recuperación renal se modificó del grupo de iniciativa de calidad de diálisis aguda de la segunda conferencia del consenso internacional (ADQI, por sus siglas en inglés) . La recuperación de la función renal se define a través de la supervivencia a largo plazo o la independencia de la diálisis. La no recuperación se define por la no supervivencia o la independencia de la diálisis.

Las muestras de orina frescas se obtuvieron en los siguientes tiempos: Día 1, Día 7 y Día 14 después del enrolamiento. Después de la centrifugación de la orina durante 5 minutos a 1000 x g a 4°C, las muestras de orina se alicuotaron y almacenaron a -80° C. No se descongelaron las muestras y se volvieron a congelar después del estudio. Las concentraciones de creatinina en orina se midieron utilizando un ensayo enzimático comercialmente disponible (DZ072B, Diazyme labs, California, USA); el HA urinario se midió utilizando un ensayo comercialmente disponible (Echelon Biosciences, Salt Lake City, USA) ; y el ?T?ß? se midió utilizando un ensayo comercialmente disponible (R&D, inneapolis , USA) . Todos se midieron de acuerdo con las instrucciones respectivas del fabricante. DR5 se midió a través de un ensayo quimioluminiscente utilizando un analizador automatizado (IMMULITE; Diagnostic Products Corp, Los Angeles, California) .

El resultado de la recuperación con independencia de la diálisis se definió como apareciendo en el día 60. Las características de la línea base se compararon entre pacientes que se recuperaron de AKI en el día 60 después del enrolamiento y aquellos que fallaron en la recuperación. Los datos continuos se expresaron como media ± SD y se compararon utilizando la prueba t de student o la prueba de la suma de rango ilcoxon. Los datos categóricos se expresaron como proporciones y se compararon utilizando la prueba chi-cuadrada o la prueba exacta de Fisher. Los niveles biomarcadores renales se normalizaron a través de las concentraciones de creatinina en la orina y se analizaron en cada punto en el tiempo. Se llevó a cabo después un análisis utilizando el cambio relativo más grande dentro de los primeros 14 días según comparado con el día 1 y la última medición disponible para cada paciente. Después se adaptó una regresión logística al grupo de datos para evaluar la asociación entre cada biomarcador potencial y la recuperación de AKI. En consecuencia, el área bajo la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) se generó para evaluar la precisión de la predicción de cada biomarcador renal. Los puntos de recorte óptimos se determinaron a través de la suma mayor de la sensibilidad y la especificidad. Para evaluar la habilidad de la predicción aditiva de cada biomarcador renal a los predictores clínicos tradicionales, se identificó un modelo de predicción clínico con base en el análisis AUC ROC, y después se agregó cada biomarcador renal individualmente a este modelo clínico. Las AUC ROC de los modelos combinados se compararon con las AUC ROC del modelo clínico. Todos los análisis se llevaron a cabo utilizando SAS 9.0 (SAS Institute, Cary, NC) a un nivel de significancia de 0.05. 3. Resultados Las características clínicas de los 76 pacientes se resumen en la Tabla 2.

Tabla 2: Señales Demográficas y Clínicas a. Resumen Día 1 Hubo números iguales de pacientes en el grupo con recuperación y sin recuperación. No se encontraron diferencias significativas entre los grupos con recuperación y sin recuperación en términos de edad, raza, función renal de línea base, o puntuaciones de evaluación clínica, en el Día 1 (es decir, por ejemplo, puntuaciones APACHE II y/o puntuaciones de Falla Renal ICU ARF Clínicas Cleveland) . La edad media, tiempo de estancia en ICU antes de la distribución aleatoria, índice de comorbilidad Charlson, puntuación total SOFA en el Día 1 todas fueron significativamente más altas en el grupo sin recuperación cuando se comparó con el grupo con recuperación. La isquemia se observó cómo teniendo el porcentaje más alto (97.4%) para la causalidad AKI en el grupo sin recuperación cuando se compara con el 76.3% en el grupo con recuperación. La septicemia también se vio como siendo la responsable de AKI más seguido en el grupo sin recuperación que en el grupo con recuperación (71.05%) frente a 60.53%, respectivamente). b. Predicción de Recuperación en el Día 60 Se clasificaron cinco (5) diferentes modelos de combinaciones de biomarcadores individuales para la mejor área por debajo de la curva ROC (AUC ROC) para pronosticar la recuperación en el Día 60. Ver, Tabla 3.

Tabla 3 : Correlaciones del Modelo Biomarcador Urinario Pronosticando Recuperación en el Día 60 Los datos demuestran que HA en el Día 14, T?ß? en el Día 14, y los últimos valores disponibles de DR5 fueron los mejores predictores de la recuperación de AKI con AUC ROC en el intervalo de 0.70 a 0.89. El modelo clínico optimizado fue una combinación de edad y el índice de comorbilidad de Charlson, que indica una AUC ROC significativa de 0.74 para la recuperación de AKI. Se observaron grandes mejoras de AUC ROC cuando se agregaron biomarcadores renales urinarios al modelo clínico. Las AUC ROC de las señales del modelo clínico combinadas con cambios relativas de HA, DR5, y ?T?ß? fueron 0.83, 0.86, 0.84 y 0.91 respectivamente , en donde AUC ROC llega a 0.97 cuando el HA del Día 14 se combina con la edad (P<0.001 en todos los modelos anteriores; Tabla 4).

Tabla 4: Predicción Mejorada Utilizando.

Combinaciones del Modelo Clínico Los puntos en el tiempo más significativos para cada marcador de orina se decidieron seleccionando los valores AUC ROC máximos. Se determinó un umbral clínico mediante la identificación de la suma máxima de sensibilidad y especificidad de los cinco modelos anteriores. Ver, Tabla 3. El HA del Día 14 se observó que tiene el valor más alta de sensibilidad 0.93 y especificidad 0.83 a 12 mcg/mg.Cr. A pesar de ser más bajo en sensibilidad, los últimos valores disponibles de DR5, y TGF i en el Día 14 también se determinaron como siendo predictivos . Ver, Tabla 5.

Tabla 5 : Umbrales de Biomarcador Urinario No se encontraron diferencias significativas con respecto a la función renal de línea base, la combinación de septicemia, puntuaciones APACHE II o intensidad RRT entre los grupos con recuperación y sin recuperación. Sin embargo, se encontró que los pacientes en el grupo sin recuperación eran mayores, más probablemente con isquemia renal, incurrieron en una permanencia más larga en ICU antes de RRT, más co-morbideces y mayores puntuaciones SOFA. Los datos sugieren que una combinación de edad, puntuación total SOFA en el Día 1 y el índice de comorbilidad Charlson comprenden un modelo predictivo clínico preferido.

Estos datos también demuestran que el cambio relativo de biomarcadores urinarios HA, · DR5, y TGF i están significativamente correlacionados con resultados AKI adversos. Estos tres (3) biomarcadores renales representan los procesos biológicos de deposición de matriz extracelular en operación, apoptosis celular, trans-diferenciación de fenotipo de célula intrínseca y lesión de célula epitelial tubular, respectivamente. Aunque no es necesario entender el mecanismo de la invención, se cree que ya que los valores del Día 1 representan la intensidad de insultos y respuestas de célula interna, el cambio relativo de estos biomarcadores renales podría representar el grado de recuperación independientemente de las características de la línea base individuales. Además, una fuerte asociación entre HA del Día 14 con los resultados sugiere que la deposición de la matriz extracelular puede jugar un papel en el proceso de recuperación del riñon.

III. Mediciones del Ensayo del Estado Renal La habilidad de la medición de un ensayo biomarcador renal particular para la distinción entre dos poblaciones puede establecerse utilizando el análisis ROC. Por ejemplo, las curvas ROC establecidas de una "primera" sub-población (es decir, por ejemplo, una población predispuesta a uno o más cambios futuros en el estado renal) y una "segunda" sub-población (es decir, por ejemplo, una población no predispuesta a uno o más cambios futuros en el estado renal) . El cálculo de estas curvas ROC y el establecimiento del área por debajo de estas curvas ROC cuantifica el poder predictivo de la medición del ensayo específico. En algunas modalidades, el poder predictivo establecido por las mediciones de ensayo descritas en la presente comprende una AUC ROC mayor de 0.5, preferiblemente al menos 0.6, más preferiblemente 0.7, aún más preferiblemente al menos 0.8, de preferencia al menos 0.9, y más de preferencia al menos 0.95.

A. Inmunoensayos En general, los inmunoensayos involucran poner en contacto una muestra que contiene, o se sospecha que contiene un biomarcador de interés con al menos un anticuerpo que específicamente se une al biomarcador. Después se genera una señal detectable indicativa de la presencia o cantidad de complejos formados por la unión de los polipéptidos en la muestra al anticuerpo. La señal detectable después se relaciona con la presencia o cantidad del biomarcador en la muestra. Se han reportado numerosos métodos y dispositivos con respecto a la detección y análisis de biomarcadores biológicos. Ver, por ejemplo, Patentes de E.U.A. 6,143,576; 6,113,855; 6,019,944; 5,985,579; 5,947,124; 5,939,272; 5,922,615; 5,885,527; 5,851,776; 5,824,799; 5,679,526; 5,525,524; y 5,480,792, y The Immunoassay Handbook, David Wild, ed. Stockton Press, New York, 1994, cada uno de los cuales se incorpora en la presente por referencia en su totalidad, incluyendo todas las tablas, figuras y reivindicaciones .

Numerosos dispositivos y métodos de inmunoensayo pueden utilizar las moléculas marcadas en varios formatos de ensayo de emparedado, competitivos o no competitivos, para generar una señal que se relaciona con la presencia o cantidad del biomarcador de interés. Los formatos de ensayo adecuados también incluyen métodos cromatográficos, de espectrometría de masas, y "blotting" de proteína. Adicionalmente , ciertos métodos y dispositivos, tales como biosensores e inmunoensayos ópticos, pueden utilizarse para determinar la presencia o cantidad de analitos sin la necesidad de una molécula marcada. Ver, por ejemplo, Patentes de E.U.A. 5,631,171; y 5,955,377, cada uno de los cuales se incorpora en la presente por referencia en su totalidad, incluyendo todas las tablas, figuras y reivindicaciones. La instrumentación robótica para realizar estos inmunoensayos está comercialmente disponible incluyendo, pero no limitándose a, los sistemas Beckman ACCESS®, Abbott AXSYM®, Roche ELECSYS®, Dade Behring STRATUS®. Pero puede utilizarse cualquier inmunoensayo adecuado, por ejemplo, inmunoensayos enlazados a enzima (ELISA, por sus siglas en inglés) , radioinmunoensayos (RIA, por sus siglas en inglés) , ensayos de unión competitivos, y similares.

Los anticuerpos u otros polipéptidos pueden inmovilizarse en una variedad de soportes sólidos para utilizarse en inmunoensayos. Las fases sólidas que pueden utilizarse para inmovilizar miembros específicos incluyen, pero no se limitan a aquellos desarrollados y/o utilizados en fases sólidas en ensayos de unión de fase sólida. Los ejemplos de fases sólidas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, filtros de membrana, papeles a base de celulosa, perlas (incluyendo partículas poliméricas, de látex y paramagnéticas) , vidrio, obleas de silicón, micro-partículas, ( nanopartículas , TentaGels, AgroGels, geles PEGA, geles SPOCC, y placas de múltiples cavidades. Por ejemplo, una tira de ensayo podría prepararse recubriendo el anticuerpo o una pluralidad de anticuerpos en un arreglo de soporte sólido. Esta tira después podría sumergirse en la muestra de prueba y después procesarse rápidamente a través de pasos de lavado y detección para generar una señal mensurable, tal como un punto de color. Los anticuerpos u otros polipéptidos pueden unirse a zonas específicas de los dispositivos del ensayo ya sea por conjugación directa a una superficie del dispositivo del ensayo, o por unión indirecta. En un ejemplo del caso anterior, los anticuerpos u otros polipéptidos pueden inmovilizarse en partículas u otros soportes sólidos, y ese soporte sólido inmovilizarse en la superficie del dispositivo.

En ciertas modalidades, un método de ensayo de biomarcador renal urinario comprende un inmunoensayo . Por ejemplo, los anticuerpos para utilizarse en tales ensayos pueden unirse específicamente a un epítopo de un biomarcador renal de interés, y también pueden unirse a uno o más polipéptidos que están "relacionados" con el mismo, como ese término se define en la presente antes. En una modalidad, el biomarcador renal de interés es un marcador de longitud completa (es decir, por ejemplo, una proteína) . En una modalidad, el biomarcador renal de interés es un marcador de fragmento de proteína (es decir, por ejemplo, un péptido) . Están disponibles numerosos formatos de inmunoensayo compatibles con las muestras de fluido corporal incluyendo, pero no limitándose a, orina, sangre, suero, saliva, lágrimas, y plasma.

A este respecto, las señales detectables obtenidas de un inmunoensayo pueden ser un resultado directo de complejos formados entre uno o más anticuerpos, y la biomolécula objetivo (es decir, por ejemplo, un analito) y polipéptidos que contiene el (los) epítopo(s) necesario (s) al cual se unen los anticuerpos. A pesar de que tales ensayos pueden detectar el biomarcador de longitud completa y el resultado del ensayo expresarse como una concentración de un biomarcador de interés, la señal del ensayo puede realmente ser un resultado de todos los polipéptidos "inmuno-reactivos" presentes en la muestra.

La expresión de los biomarcadores también puede determinarse por medio de otros de los inmunoensayos , incluyendo mediciones de proteína (es decir, por ejemplo, dot blots, western blots, métodos cromatográficos , espectrometría de masas, etc.), y mediciones de ácido nucleico (cuantificación de ARNm) . Esta lista no pretende ser limitante .

Los pasos del método anteriores no deberán interpretarse significando que las mediciones del ensayo del biomarcador renal se utilizan en aislamiento en los métodos descritos en la presente.

Más bien, pueden incluirse variables adicionales u otras señales clínicas en los métodos descritos en la presente. Por ejemplo, estratificación del riesgo, diagnóstico, clasificación, monitoreo, etc., los métodos como se describe en la presente pueden combinarse con una o más señales clínicas relevantes para la población de pacientes que incluyen, pero no se limitan a, información demográfica (por ejemplo, peso, sexo, edad, raza) , historial médico (por ejemplo, historial familiar, tipo de cirugía, enfermedad preexistente tal como aneurisma, falla cardíaca congestiva, preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, enfermedad de arteria coronaria, proteinuria, insuficiencia renal, o septicemia, tipo de exposición a toxina tal como NSAID, ciclosporinas , tácrolimus, aminoglicósidos , foscarnet, etilenglicol , hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radio-opacos, o estreptozotocina) , variables clínicas (por ejemplo, presión sanguínea, temperatura, ritmo respiratorio) , puntuaciones de riesgo (puntuación APACHE, puntuación PREDICT, Puntuación de Riesgo TIMI para UA/NSTEMI, Puntuación de Riesgo de Framingham) , un índice de filtración glomerular, una velocidad de filtración glomerular estimada, un grado de producción de orina, una concentración de creatinina en suero o plasma, una concentración de creatinina en orina, una excreción fraccional de sodio, una concentración de sodio en orina, una proporción de creatinina en orina a creatinina en suero o plasma, una gravedad específica de orina, una osmolaridad en orina, una proporción de nitrógeno urea en orina a nitrógeno urea en plasma, una proporción de BU a creatinina en plasma, un índice de falla renal calculado como sodio en orina / (creatinina en orina/creatinina en plasma), una concentración de neutrófilo gelatinasa (NGAL, por sus siglas en inglés) en suero plasma, una concentración NGAL en orina, una concentración de cistatina C en suero o plasma, una concentración de troponina cardíaca en suero o plasma, una concentración de BNP en suero o plasma, una concentración de NTproBNP en suero o plasma, y una concentración de proBNP en suero o plasma. Otras mediciones de la función renal que pueden combinarse con una o más mediciones del ensayo del biomarcador renal se describen en la presente más adelante. En: Harrison's Principies of Internal Medicine, 17a. Ed. , McGraw Hill, New York, páginas 1741-1830; y En: Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47a. Ed, McGraw Hill, New York, páginas 785-815, cada una de las cuales se incorpora en la presente por referencia en su totalidad.

Cuando se mide más de un biomarcador, los biomarcadores individuales pueden medirse en muestras obtenidas al mismo tiempo, o pueden determinarse de muestras obtenidas a diferentes tiempos (por ejemplo, anterior o posterior) . Los biomarcadores individuales también pueden medirse en las mismas o diferentes muestras de fluidos corporales. Por ejemplo, un biomarcador renal puede medirse en una muestra de suero o plasma y otro biomarcador renal puede medirse en una muestras de orina. Además, la asignación de una probabilidad puede combinar una medición de ensayo de biomarcador renal con los cambios temporales en una o más variables adicionales.

B. Etiquetas Detectables La generación de una señal detectable de la etiqueta detectable puede llevarse a cabo utilizando varios métodos ópticos, acústicos, y electromecánicos. Los ejemplos de modos de detección incluyen, pero no se limitan a, fluorescencia, detección radioquímica, reflectancia, absorbencia, amperometría, conductancia, impedancia, interferometría, elipsometría, etc. En ciertos de estos métodos, el anticuerpo de la fase sólida puede acoplarse a un transductor (por ejemplo, enrejado de difracción, sensor electromecánico, etc.) para la generación de una señal, mientras en otros, se genera una señal mediante un transductor que está espacialmente separado del anticuerpo de fase sólida (por ejemplo, un fluorómetro que utiliza una fuente de excitación de luz y un detector óptico) . Esta lista no pretende ser limitante. Los biosensores a base de anticuerpos también pueden utilizarse para determinar la presencia o cantidad de analitos que opcionalmente eliminan la necesidad de una molécula marcada.

Los ensayos biológicos requieren métodos para la detección, y uno de los métodos más comunes para cuantificación de las mediciones del ensaye es conjugar una etiqueta detectable con una proteína o ácido nucleico que tiene afinidad con uno de los componentes en el sistema biológico que se está estudiando. Las etiquetas detectables en los inmunoensayos descritos anteriormente pueden incluir, pero no se limitan a, moléculas que son por sí mismas detectables (por ejemplo, fracciones fluorescentes, etiquetas electroquímicas, etiquetas ecl (luminiscencia electroquímica) , quelatos metálicos, partículas metálicas coloidales etc.) así como moléculas que pueden detectarse indirectamente mediante la producción de un producto de reacción detectable (por ejemplo, enzimas tales como peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, etc.) o a través del uso de una molécula de unión específica que por sí misma puede ser detectable (por ejemplo, un anticuerpo marcado que se une al segundo anticuerpo, biotina, digoxigenina, maltosa, oligohistidina, 2 , 4 -dintrobenceno, fenilarsenato, ADNss, ADNds, etc.).

La preparación de los conjugados de fases sólidas y etiquetas detectables por lo general comprende el uso de entrelazadores químicos. Los reactivos entrelazadores pueden involucrar al menos dos grupos reactivos, y se dividen generalmente en entrelazadores homofuncionales (que contiene grupos reactivos idénticos) y entrelazadores heterofuncionales (que contienen grupos reactivos no idénticos) .

Los entrelazadores homobifuncionales que se acoplan a través de aminas, sulfhidrilos o no reaccionan específicamente están disponibles de muchas fuentes comerciales. La maleimidas, haluros de alquilo y arilo, alfa-haloacilos y piridil disulfuros son grupos reactivos tiol y se cree que reaccionan con sulfhidrilo para formar enlaces de tiol éter, mientras los disulfuros piridilo reaccionan con sulfhidrilos para producir disulfuros mixtos. El producto de piridil disulfuro es divisible.

Los imidoésteres también son muy útiles para entrelazadores de proteína-proteína. Una variedad de entrelazadores heterobifuncionales , cada uno combinando diferentes atributos para la exitosa conjugación, está comercialmente disponible.

C. Ensayos de Acido Hialurónico El ácido hialurónico urinario puede determinarse primero recolectando especímenes de orina anulados (muestra limpia) que se almacenaron a -20°C hasta ensayarse. El ensayo HA puede basarse en un ensayo a base de placas ELISA para hialuronano utilizando la región del dominio Gl de proteoglicano biotinilado (unión de HA) . Fosang y otros, Matrix, 10:306-313 (1990). En una modalidad, el ensayo puede modificarse utilizando placas de micro- titulación de 96 cavidades recubiertas con HA de cordón umbilical humano (25 g/ml) que se incubó con diluciones seriales de especímenes de orina en salina regulada en pH de fosfato (PBS, por sus siglas en inglés) +0.05% de Tween 20 (PBS+Tween) , y una proteína de unión a HA de cartílago nasal de bovino biotinilado (1 g/ml) . Después de la incubación a temperatura ambiente por 16 h, las cavidades se lavaron en PBS+Tween. La proteína de unión a HA unida en estas cavidades se cuantificó utilizando un sistema de detección de avidina-biotina y sustrato ABTS (ácido 2 , 21 azino-bis (3 -etil-benztiazolin- 6 -sulfónico) ) (Vector Laboratories, Burlingame, California). Se puede preparar una gráfica estándar graficando la absorbencia (405 nm) contra las concentraciones del HA del cordón umbilical humano (ng/ml) . Utilizando esta gráfica, la concentración de HA en cada dilución del espécimen de orina puede calcularse. De las varias determinaciones, la concentración de HA media en cada muestra se determinó, y después normalizó a la concentración de creatinina (mg/ml) en la muestra de orina.

El ensayo HA antes descrito de la invención ha demostrado que detecta cáncer de vejiga a una sensibilidad de aproximadamente 88% utilizando un límite de corte de apro i adamente 500 ng/ml.

Lokeshwar, y otros, Methods for detection and evaluation of bladder cáncer Patente de Estados Unidos 6,350,571 (incorporada en la presente por referencia) . Aunque no es necesario entender el mecanismo de una invención, se cree que los límites de corte de la concentración de HA pueden variar, y la población diseminada debe tomarse en consideración. El establecimiento del corte del límite de la concentración de HA para llegar a los predictores apropiados para diálisis a largo plazo puede involucrar la consideración de factores que incluyen, pero no se limitan a, edad, dieta, concentración de la proteína en la muestra, influencia ambiental, antecedentes genéticos, estado de hidratación, historial médico, condición física, sexo, peso y similar.

En una modalidad, el ensayo HA comprende adsorber HA en la superficie de una fase sólida. A pesar de que no es necesario entender el mecanismo de la invención, se cree que el HA puede derivarse de cualquier fuente conveniente, tal como del cordón umbilical humano. La fase sólida puede ser cual fase sólida convencional, incluyendo nitrocelulosa y similar, y preferiblemente cavidades de micro-titulación. Después de adsorber el HA en la fase sólida, la superficie de la fase sólida preferiblemente se lava utilizando regulador (es) de pH convencional. Debido a que la fase sólida aún tiene más sitios en su superficie que son capaces de acoplarse al HA u otras moléculas, se prefiere que antes de la adición de la muestra, se adicione una sustancia de bloqueo para así cubrir cualquier parte de la fase sólida en donde el HA no ha sido adsorbido. Los ejemplos de sustancias de bloqueo adecuadas incluyen ?-globulina y albúmina derivada de vacas u otros animales. La albúmina de suero de bovino es preferida. Después de bloquear los sitios libres de la fase sólida, la superficie de la fase sólida preferiblemente se lava utilizando regulador (es) de pH convencional.

Después, se agrega la proteína de unión HA (HABP) en el soporte sólido recubierto en la presencia de una muestras de fluido biológico recolectado de una persona que se sospecha que tiene lesión renal, y se incuba bajo condiciones de tal forma que el HABP puede unirse al HA recubierto en el soporte sólido y el HA urinario (si está presente) . El tiempo de incubación y las condiciones pueden variar dentro de amplios límites, pero un tiempo de incubación de aproximadamente 4 a aproximadamente 16 horas, y una temperatura de incubación de aproximadamente 4°C a aproximadamente 37°C son satisfactorias, Sin embargo, tiempos de incubación más largos o más cortos, y temperaturas de incubación más altas o más bajas también son posibles.

El HABP adecuado para utilizarse con los ensayos de esta invención puede fácilmente purificarse de un número de fuentes, tales como cartílago nasal de bovino (Tengblad, Biochim. Biophys . Acta, 578: 281-289, 1979), cartílago de laringe de puerco (Fosang y otros, Matrix, 10: 306-313, 1990) . Después de la unión del HABP al HA recubierto y/o la muestra de HA, la superficie de la fase sólida preferiblemente se lava utilizando regulador (es) de pH convencional. Después, la cantidad de HABP unido al HA recubierto en el soporte sólido se determina. Preferiblemente, el HABP está biotinilado, y el HABP unido se visualiza después de la incubación con un conjugado de avidina-enzima y cualquier sustrato para la enzima genera un producto de color. Tal sistema de detección no utiliza radioactividad como una etiqueta, múltiples marcadores (es decir, moléculas de enzima) que se inmovilizan para cada HABP unido al soporte sólido, y la señal (es decir, el producto de color) se amplifica a través de la producción de la enzima. Sin embargo, cualquier sistema marcador convencional puede utilizarse junto con el HABP.

Los ejemplos de sistemas marcadores adecuados incluyen, enzimas, fluorescencia, quimioluminiscencia, enzima-sustrato, marcadores de isótopo, radio etiquetas, y similares. Preferiblemente, la determinación de la cantidad de HABP unida al HA recubierto en el soporte sólido es a través del sistema de detección de avidina-biotina . Otro sistema marcador útil utiliza sulfato de queratina y anticuerpos reactivos al sulfato de queratina. Los niveles de HA urinarios pueden útilmente determinarse utilizando un lector de placas de micro- itulación, y puede extrapolarse de una gráfica estándar. La cantidad de HABP acoplado con el HA recubierto después puede correlacionarse con la existencia de cáncer de vejiga en el paciente de cual se recolectó la muestra del fluido biológico.

Para el ensayo HA, preferiblemente se utiliza ácido hialurónico purificado como un estándar.

Los fragmentos de unión HA utilizados en el ensayo anterior pueden aislarse del HA de cordón umbilical humano (. aproximadamente .500 mg) por digestión con 20,000 unidades de hialuronidasa testicular (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.), a 37°C en diferentes intervalos de tiempo. Los fragmentos HA generador se separaron en una columna Sephadex G-50 (1.5 x 120 cm) . Se recolectaron y ensayaron fracciones de 10 mi para el contenido de ácido urónico (Bitter y Muir, A modified uronic acid carbazole reaction. Anal. Biochem., 4:330-334, 1962) . Las fracciones se combinaron para dar tres preparaciones, Fl, F2 y F3. El número de extremos de reducción en cada fracción se determinó por el ensayo Dygert (Dygert y otros, Determination of reducing sugars with improved precisión. An l. Biochem., 13: 367-374, 1965). Ya que cada polisacárido lineal de HA o su fragmento contiene un solo extremo de reducción, la longitud de cadena de cada fragmento se calculó del número de extremos de reducción por mol de ácido urónico. El intervalo de tamaño de los oligosacáridos en cada fracción también se determinó mediante la incorporación de HA marcado con 3H (preparado como se describe en Lokeshwar y otros, Ankyrin binding domain of CD44(GP85) is required for the expression of hyaluronic acid-mediated adhesión function. J. Cell Biol . , 126 1099-1109, 1994) durante la digestión del HA y el análisis de los fragmentos mediante electroforesis con gel y fluorografía.

Por consiguiente, en una modalidad de esta invención, la diálisis a largo plazo puede pronosticarse por la medición cuantitativa de HA en una muestra de fluido biológico (tal como, por ejemplo, un espécimen de orina) recolectada de un paciente que se sospecha que tiene lesión y/o enfermedad renal. Puede utilizarse cualquier metodología de ensayo convencional para determinar la presencia y la medición de HA, incluyendo radioensayos , ensayos de emparedado, ensayos de inhibición y similares. Sin embargo, HA preferiblemente se mide en un ensayo de unión competitivo. Más preferiblemente, el ensayo de la invención trabaja en la misma forma que una prueba ELISA, pero no hace uso de mecanismos con complemento de anticuerpo.

En una modalidad, la diálisis a largo plazo puede pronosticarse utilizando un método, que comprende: (a) recubrir un soporte sólido (preferiblemente, cavidades de micro-titulación) con HA; (b) poner en contacto e incubar la proteína de unión HA (HABP) con el soporte sólido recubierto en la presencia de una muestra de fluido biológico (tal como una muestra de orina) recolectada de una persona que se sospecha que tiene una lesión y/o enfermedad renal, bajo condiciones tales que el HABP puede unirse al HA recubierto en el soporte sólido y el HA en la muestra (si está presente) ; (c) determinar la cantidad de HABP unido al HA recubierto en el soporte sólido, y determinar en el mismo la cantidad de HA presente en la muestra.

, A pesar de que no es necesario entender el mecanismo de la invención, se cree que cuando el HA está presente en la muestra, se unirá menos HABP al HA recubierto, como se determina mediante, por ejemplo, la comparación con un estándar. En otras palabras, una reducción en la cantidad de HABP unido al HA recubierto (es decir, según comparado con los controles) significaría HA elevado presente en la muestra. En una modalidad, el HA urinario elevado es predictivo de diálisis a largo plazo.

En una modalidad, el método además puede comprender la detección de una señal asociada con, o producida por, el HABP unido. A pesar de que no es necesario entender el mecanismo de la invención, se cree que la cantidad de HABP unido al HA recubierto en el soporte sólido puede utilizarse para determinar en el mismo la cantidad de HA presente en la muestra. Por ejemplo, puede utilizarse un lector de placas de micro-titulación para medir la absorbencia del producto de color como una medida indirecta del HABP biotinilado unido al soporte sólido (por ejemplo, un conjugado de avidina-enzima y sustrato marcado se utiliza para generar el producto de color) . La absorbencia máxima puede obtenerse incubando las cavidades recubiertas con HA con regulador de pH solo en la ausencia de cualquier HA o muestra que contiene HA. Una gráfica estándar después puede preparase graficando la absorbencia contras ng/cavidad o 0.2 mi de HA. Utilizando esta gráfica estándar, la concentración de HA (ng/ml) en cada dilución de la muestra puede calcularse. De varias determinaciones puede determinarse la concentración de HA media en cada muestra. La concentración de creatinina puede determinarse de tal forma que las concentraciones de HA pueden normalizarse.

En una modalidad, la predicción de si un paciente requerirá diálisis a largo plazo puede determinarse mediante los siguientes cálculos derivados del nivel HA urinario normalizado: HA (ng/ml) extrapolado de una gráfica del transcurso del tiempo x factor de dilución/mg/ml de proteína urinaria. Por ejemplo, una lectura de baja absorbencia sería indicativa de una cantidad significativa de HA en la muestra de orina, que por sí misma sería indicativa de la necesidad de diálisis a largo plazo en el paciente. 1. Aislamiento de HA y fragmentos HA de Orina del Paciente Los especímenes de orina de sujetos y pacientes normales pueden concentrarse lio veces y dializarse extensivamente contra PBS . Aproximadamente se aplicaron 2 mi de cada espécimen dializado (aproximadamente .20 mg de proteína) a una columna Sepharose 6 CL-B (1.5 x 120 cm) (Pharmacia, Piscataway, N.J.) equilibrada con PBS. La columna se corrió en PBS a 7 ml/hr y se recolectaron fracciones de 3.5 mi. Las fracciones se ensayaron para HA por el ensayo de tipo ELISA como se describe anteriormente. Ya que los marcadores de proteína globular estándar y los polisacáridos lineales tales como HA y fragmentos HA tiene diferentes formas, la columna se calibró utilizando HA de vena umbilical humana (Mr . aproximadamente .2 x 106 D) y los fragmentos HA, Fl, F2 y F3.

El ensayo de tipo ELISA, puede involucrar el uso de una proteína de unión HA biotinilada para determinar la concentración de HA en especímenes de orina. Debido a que los niveles HA urinarios (es decir, normalmente en cantidades en ng) se encuentran como estando influenciados por el estado de hidratación y la producción de orina, estos niveles se normalizaron al contenido de creatinina urinario.

D. Correlaciones del Ensayo En algunas modalidades, la medición del ensayo del biomarcador renal se correlaciona con uno o más cambios futuros en la función renal. En una modalidad, la estratificación del riesgo comprende la determinación de la probabilidad del sujeto (es decir, por ejemplo, probabilidad) de una futura mejora en la función renal.

En una modalidad, la medición del ensayo del biomarcador renal se correlaciona con una probabilidad de tal mejora futura en la función renal. En una modalidad, el método correlaciona una probabilidad de tal futura lesión en la función renal. En una modalidad, la estratificación del riesgo comprende determinar un riesgo de avance en el sujeto hacia falla renal aguda (ARF, por sus siglas en inglés) .

En una modalidad, la medición del ensayo del biomarcador renal se correlaciona con una probabilidad de tal avance hacia falla renal aguda (ARF) . En una modalidad, el método de estratificación del riesgo comprende determinar el riesgo en consecuencia del sujeto.

En una modalidad, la medición del ensayo se correlaciona con la probabilidad de la aparición de un resultado crónico relacionado con una lesión renal padecida por el sujeto.

En consecuencia, el (los) valor (es) de concentración medidos cada uno puede compararse con un valor de umbral, en donde se identifica cualquier "marcador de lesión renal negativo en operación". En una modalidad, la estratificación del riesgo comprende determinar el riesgo del sujeto a una función renal reducida futura. En algunas modalidades, el método asigna una probabilidad, riesgo, o probabilidad de que tal evento de interés sea más o menos probable que ocurra dentro de 180 Días del tiempo en el cual se obtuvo la muestra de fluido corporal del sujeto. En algunas modalidades, la posibilidad asignada, riesgo o probabilidad se relaciona con un evento de interés que ocurre dentro de un período de tiempo que incluye, pero no se limita a, 18 meses, 120 Días, 90 Días, 60 Días, 45 Días, 30 Días, 21 Días, 14 Días, 7 Días, 5 Días, 96 horas, 72 horas, 48 horas, 36 horas, 24 horas, 12 horas, o menos. Alternativamente, la asignación de un riesgo a las 9 horas del tiempo en el cual se obtuvo la muestra de fluido corporal del sujeto es equivalente al diagnóstico de una afección actual.

La selección de un umbral de diagnóstico involucra, entre otras cosas, la consideración de la probabilidad de enfermedad, distribución de diagnósticos verdaderos y falsos en diferentes umbrales de prueba, y estima las consecuencias del tratamiento (o una falla a tratar) con base en el diagnóstico. Por ejemplo, cuando se considera administrar una terapia específica que es altamente eficaz y tiene un bajo nivel de riesgo, se necesitan pocas pruebas porque los médicos pueden aceptar incertidumbres de diagnóstico sustanciales. Por el otro lado, en situaciones en donde las opciones de tratamiento son menos efectivas y más riesgosas, los médicos por lo general necesitan un mayor grado de certidumbre en el diagnóstico. De esta forma, un análisis de costo/beneficio está involucrado en la selección del umbral del diagnóstico. 1. Umbrales Los umbrales adecuados pueden determinarse en una variedad de formas. Por ejemplo, un umbral de diagnóstico recomendado para el diagnóstico de infarto al miocardio agudo utiliza troponina cardíaca, en donde el umbral del diagnóstico se fija en él 97.5avo percentil de la concentración de troponina medida en una población normal . Otro método para determinar un umbral de diagnóstico comprende medir muestras seriales del mismo paciente, en donde un resultado de la "línea base" anterior se utiliza para monitorear los cambios temporales en un nivel del biomarcador .

Los estudios de población también pueden utilizarse para seleccionar umbrales. Por ejemplo, la Característica Operativa del Receptor ("ROC", por sus siglas en inglés) se origina del campo de la teoría de detección de señal desarrollado durante la Segunda Guerra Mundial para el análisis de imágenes de radar y el análisis ROC por lo general se utiliza para seleccionar un umbral para la distinción de una sub-población "enferma" de una sub-población "no enferma" . El poder predictivo balancea las apariciones de falsos positivos (es decir, por ejemplo, cuando las pruebas de la persona son positivas, pero realmente no tiene la enfermedad) y falsos negativos (es decir, por ejemplo, cuando las pruebas de la persona son negativas, sugiriendo que está saludable, cuando realmente tiene la enfermedad) . Para trazar una curva ROC, el grado de verdadero positivo (TPR, por sus siglas en inglés) y el grado de falso positivo (FPR, por sus siglas en inglés) se determinan según el umbral de decisión varía continuamente. Ya que TPR es equivalente a la sensibilidad y FPR es igual a (1 - especificidad) , la gráfica ROC algunas veces se denomina la gráfica de sensibilidad contra (1 - especificidad) . Una prueba perfecta tendrá un área bajo la curva ROC 1.0; una prueba aleatoria tendrá un área de 0.5. Un valor de umbral se selecciona para proporcionar un nivel aceptable de especificidad y sensibilidad usualmente determinado sumando los valores de especificidad con los valores de sensibilidad. En consecuencia, entre mayor es el valor de umbral calculado, mayor es la potencia predictiva de la medición del ensayo específico bajo análisis.

En este contexto, "enfermo" significa hacer referencia a una población que tiene una característica (es decir, por ejemplo, la presencia de una enfermedad o afección o la aparición de algún resultado) y "no enferma" , población que carece de las mismas características. A pesar que un solo umbral de decisión es la aplicación más simple de tal método, pueden utilizarse umbrales de decisiones múltiples. Por ejemplo, por debajo de un primer umbral, la ausencia de enfermedad puede asignarse con relativamente alta confianza, y por arriba de un segundo umbral la presencia de la enfermedad también puede asignarse con una relativamente alta confianza. Entre los dos umbrales puede considerarse un intermedio. Esto pretende ser ilustrativo en naturaleza solamente .

Además de las comparaciones del valor de umbral, otros métodos para correlacionar mediciones de ensayo a una clasificación de paciente (es decir, por ejemplo, la aparición o no aparición de la enfermedad, la posibilidad de un resultado, etc.) incluyen, pero no se limitan a, árboles de decisión, grupos de reglas, métodos Bayesianos, y métodos de red neural. Estos métodos pueden producir valores de probabilidad que representan el grado al cual un sujeto o paciente pertenece a una clasificación de una pluralidad de clasificaciones .

También se pueden utilizar múltiples umbrales para evaluar el estado renal en un sujeto y/o paciente.

Por ejemplo, un método de umbral múltiple puede comprender una "primera" sub-población que está predispuesta a uno o más cambios futuros en el estado renal, la aparición de una lesión, una clasificación, etc., con una "segunda" sub-población que no está predispuesta en un solo grupo. Este grupo de combinación después se subdivide en tres o más partes iguales (es decir, por ejemplo, tertiles, cuartiles, quintiles, etc., dependiendo del número de sub-divisiones) . Una proporción de probabilidad ser asigna a los sujetos con base en la subdivisión en la cual caen. Si se considera una modalidad de tertil, se puede utilizar el tertil más alto o más bajo como una referencia para la comparación de las otras subdivisiones. A esta subdivisión de referencia se asigna una proporción de probabilidad de 1. Al segundo tertil se le asigna una proporción de probabilidad que es relativa al primer tertil. Es decir, alguien en el segundo tertil será'3 veces más probable que sufra de uno o más cambios futuros en el estado renal en comparación con alguien en el primer tertil. Al tercer tertil también se le asigna una proporción de probabilidad que es relativa al primer tertil. 2. Especificidad y Sensibilidad En algunas modalidades, la concentración medida de uno o más biomarcadores renales, o una composición de tales biomarcadores , puede tratarse como variables continuas. Por ejemplo, cualquier concentración de biomarcador particular puede convertirse en una probabilidad correspondiente de una reducción futura en la función renal para el sujeto, la aparición de una lesión, una clasificación, etc. Alternativamente, un valor de umbral puede proporcionar un nivel aceptable de especificidad y sensibilidad en la separación de una población de sujetos en "depósitos" tales como una "primera" sub-población (por ejemplo, que está predispuesta a uno o más cambios futuros en el estado renal, la aparición de una lesión, una clasificación, etc.) y una "segunda" sub-población que no está tan predispuesta.

En una modalidad, un valor de umbral se selecciona para separar una primera y segunda poblaciones en una o más de las mediciones de la precisión de prueba: i) una proporción de probabilidad mayor de 1, preferiblemente al menos aproximadamente 2 o más o aproximadamente 0.5 o menos, más preferiblemente al menos aproximadamente 3 o más o aproximadamente 0.33 o menos, aún más preferiblemente al menos aproximadamente 4 o más o aproximadamente 0.25 o menos, de preferencia al menos aproximadamente 5 o más o aproximadamente 0.2 o menos , y más de preferencia al menos aproximadamente 10 o más o aproximadamente 0.1 o menos; ii) una especificidad mayor de 0.5, preferiblemente al menos aproximadamente 0.6, más preferiblemente al menos aproximadamente 0.7, aún más preferiblemente al menos aproximadamente 0.8, de preferencia al menos aproximadamente 0.9 y más de preferencia al menos aproximadamente 0.95, con una sensibilidad correspondiente mayor de 0.2, preferiblemente mayor de aproximadamente 0.3, más preferiblemente mayor de aproximadamente 0.4, aún más preferiblemente al menos aproximadamente 0.5, de preferencia aproximadamente 0.6, aún más preferiblemente mayor de aproximadamente 0.7, aún más preferiblemente mayor de aproximadamente 0.8, más preferiblemente mayor de aproximadamente 0.9, y más de preferencia mayor de aproximadamente 0.95; iii) una sensibilidad mayor de 0.5, preferiblemente al menos aproximadamente 0.6, más preferiblemente al menos aproximadamente 0.7, aún más preferiblemente al menos aproximadamente 0.8, de preferencia al menos aproximadamente 0.9 y más de preferencia al menos aproximadamente 0.95, con una especificidad correspondiente mayor de 0.2, preferiblemente mayor de aproximadamente 0.3, más preferiblemente mayor de aproximadamente 0.4, aún más preferiblemente al menos aproximadamente 0.5, de preferencia aproximadamente 0.6, aún más preferiblemente mayor de aproximadamente 0.7, aún más preferiblemente mayor de aproximadamente 0.8, más preferiblemente mayor de aproximadamente. 0.9, y más de preferencia mayor de aproximadamente 0.95; iv) al menos aproximadamente 75% de sensibilidad, combinada con al menos aproximadamente 75% de especificidad; una proporción de posibilidad positiva (calculada como sensibilidad/ (l-especificidad) ) mayor de 1, al menos aproximadamente 2, más preferiblemente al menos aproximadamente 3 , aún más preferiblemente al menos aproximadamente 5, y más de preferencia al menos aproximadamente 10; o v) una proporción de posibilidad negativa (calculada como (1 -sensibilidad) /especificidad) de menos de 1 , menos de o igual a aproximadamente 0.5, más preferiblemente menos de o igual a aproximadamente 0.3, y más de preferencia menos de o igual a aproximadamente 0.1.

Se han reportado varias mediciones de precisión de prueba y utilizado para determinar la efectividad de un biomarcador dado. Fischer y otros, Intensive Care Med. 29:1043-1051 (2003) .

Estas mediciones de precisión incluyen, pero no se limitan a, sensibilidad y especificidad, valores predictivos, proporciones de posibilidades, proporción de probabilidad de diagnóstico, y valores AUC ROC. Por ejemplo, los valores AUC ROC son iguales a la probabilidad de que un clasificador clasifique una instancia positiva aleatoriamente seleccionada más alta que una negativa aleatoriamente seleccionada. En consecuencia, un valor AUC ROC puede pensarse como un equivalente a la prueba U de Mann- hitney, que ensaya la diferencia media entre las puntuaciones obtenidas en los dos grupos considerados, si los grupos son de datos continuos, o para la prueba de ilcoxon de categorías.

Como se explicó anteriormente, las pruebas adecuadas pueden exhibir uno o más de los siguientes resultados en estas varias medidas: una especificidad mayor de 0.5, preferiblemente al menos 0.6, más preferiblemente al menos 0.7, aún más preferiblemente al menos 0.8, de preferencia al menos 0.9 y más de preferencia al menos 0.95, con una sensibilidad correspondiente mayor de 0.2, preferiblemente mayor de 0.3, más preferiblemente mayor de 0.4, aún más preferiblemente al menos 0.5, de preferencia 0.6, aún más preferiblemente mayor de 0.7, aún más preferiblemente mayor de 0.8, más preferiblemente mayor de 0.9, y más de preferencia mayor de 0.95; a sensibilidad mayor de 0.5, preferiblemente al menos 0.6, más preferiblemente al menos 0.7, aún más preferiblemente al menos 0.8, de preferencia al menos 0.9 y más de preferencia al menos 0.95, con una especificidad correspondiente mayor de 0.2, preferiblemente mayor de 0.3, más preferiblemente mayor de 0.4, aún más preferiblemente al menos 0.5, de preferencia 0.6, aún más preferiblemente mayor de 0.7, aún más preferiblemente mayor de 0.8, más preferiblemente mayor de 0.9, y más de preferencia mayor de 0.95; al menos 75% sensibilidad, combinada con al menos 75% de especificidad; un área de curva ROC mayor de 0.5, preferiblemente al menos 0.6, más preferiblemente 0.7, aún más preferiblemente al menos 0.8, de preferencia al menos 0.9, y más de preferencia al menos 0.95; una proporción de probabilidad diferente de 1, preferiblemente al menos aproximadamente 2 o más o aproximadamente 0.5 o menos, más preferiblemente al menos aproximadamente 3 o más o aproximadamente 0.33 o menos, aún más preferiblemente al menos aproximadamente 4 o más o aproximadamente 0.25 o menos, de preferencia al menos aproximadamente 5 o más o aproximadamente 0.2 o menos , y más de preferencia al menos aproximadamente 10 o más o aproximadamente 0.1 o menos; una proporción de posibilidad positiva (calculada como sensibilidad/ (1-especificidad) ) mayor de 1, al menos 2, más preferiblemente al menos 3, aún más preferiblemente al menos 5, y más de preferencia al menos 10; y/o una proporción de posibilidad negativa (calculada como (1-sensibilidad) /especificidad) de menos de 1, menos de o igual a 0.5, más preferiblemente menos de o igual a 0.3, y más de preferencia menos de o igual a 0.1.

E. Ensayos de Señales Clínicas Las señales clínicas adicionales pueden combinarse con la medición del ensayo del biomarcador renal de la presente invención para mejorar la sensibilidad y la especificidad de las correlaciones para la estratificación del riesgo, clasificación, diagnóstico, y/o pronóstico de una lesión y/o enfermedad renal. Estas incluyen, pero no se limitan a otros biomarcadores relacionados con el estado renal .

Los ejemplos que dictan el nombre del biomarcador común, seguido por el número de entrada Swiss-Prot para ese biomarcador o su progenitor, incluyen pero no se limitan a: Actina (P68133) ; proteína de unión de adenosina desaminasa (DPP4 , P27487) ; Alfa- 1-glicoproteína acida 1 (P02763); Alfa-1-microglobulina (P02760) ; Albúmina (P02768) Angiotensinogenasa (Renina, P00797) ; Anexina A2 (P07355) Beta-glucuronidasa (P08236) ; ?-2-microglobulina (P61679) Beta-galactosidasa (P16278) ; BMP-7 (P18075) ; Péptido natriurético del Cerebro (proBNP, BNP-32, NTproBNP; P16860) proteína Beta de unión a calcio (SlOO-beta, P04271) Anhidrasa carbónica (Q16790) ; Caseína Cinasa 2 (P68400) Cadherina-3 (P07858) ; Ceruloplasraina (P00450) ; Clusterina (P10909) ; Complemento C3 (P01024) ; Proteína rica en cisteína (CYR61 , 000622); Citocromo C (P99999) ; Factor de crecimiento epidérmico (EGF, P01133) ; Endotelina-1 (P05305) ; Fetuina-A Exosomal (P02765) ; Proteína de unión a ácido graso, corazón (FABP3, P05413) ; Proteína de unión a ácido graso, hígado (P07148) ; Ferritina (cadena ligera, P02793; cadena pesada P02794) ; Fructosa- 1 , 6 -bifosfatasa (P09467) ; GRO-alfa (CXCL1, (P09341) ; Hormona del crecimiento (P01241) ; Factor de crecimiento de hepatocito (P14210) ; Factor de crecimiento I de tipo insulina (P01343); Inmunoglobulina G; Cadenas ligeras de Inmunoglobulina (Kappa y Lambda) ; Interferón gamma (P01308) ; Lisozima (P61626) ; Interleucina- 1 alfa (P01583) Interleucina-2 (P60568) ; Interleucina-4 (P60568) Interleucina- 9 (PI 5248) ; Interleucina-12p40 (P29460) lnterleucina-13 (P35225) ; Interleucina-16 (Q14005) ; Molécula de adhesión de célula Ll (P32004) ; Lactato deshidrogenasa (P00338) ; Leucina Aminopeptidasa (P28838); Subunidad A-alfa de Meprina (Q16819) ; Subunidad A-beta de Meprina (Q16820) ; Midquina (P21741) ; MIP2-alfa (CXCL2 , P19875) ; MMP-2 (P08253); MMP-9 (P14780); Netrina-1 (095631); Endopeptidasa neutral (P08473) ; Osteopontina (P10451) ; Antígeno papilar renal 1 (RPA1) ; Antígeno papilar renal 2 (RPA2) ; Proteína de unión a Retinol (P09455) ; Ribonucleasa; Proteína de unión A6 a calcio S100 (P06703) ; Componente Amiloide Sérico P (P02743); Isoforma de intercambio de sodio/hidrógeno (NHE3, P48764); Espermidina/espermina Nl-acetiltransferasa (P21673) ; TGF-Betal (P01137) ; Transferrina (P02787) ; Factor 3 de Trefoil (TFF3 , Q07654) ; Proteína 4 de tipo peaje (000206) ; Proteína total; Antígeno de nefritis tubulointersticial (Q9UJ 2) ; Uromodulina (Proteína Tamm-Horsfall, P07911) . 1. Mejoras a la Estratificación del Riesgo Para propósitos de estratificación del riesgo el biomarcador de la señal clínica que mejora la determinación del estado renal incluye pero no se limita a: Adiponectina (Q 15848) ; Fosfatasa alcalina (P05186) ; Aminopeptidasa N (P15144) ; CalbindinD28k (P05937) ; Cistatina C (P01034); Subunidad 8 de FIFO ATPase (P03928) ; Gamma-glutamiltransferasa (P19440) ; GSTa (alfa-glutationa-S-transferasa, P08263); GSTpi (Glutationa-S-transíerasa P; GST Clase-??; P09211) ; IGFBP-1 (P08833); IGFBP-2 (P18065); IGFBP-6 (P24592) ; Proteína 1 de membrana integral 1 (Itml, P46977) ; Interleucina-6 (P05231) ; Interleucina- 8 (P10145); Interleucina-18 (Q14116) ; IP-10 (10 kDa de proteína inducida por interferón-gamma, P02778) ; IRPR (IFRDl, 000458) ; Isovalerilo-CoA deshidrogenasa (IVD, P26440) ; I-TAC/CXCL11 (014625); Queratina 19 (P08727) ; Kim-1 (Receptor 1 celular del virus de Hepatitis A, 043656); L-arginina : glicina amidinotransferasa (P50440) ; Leptina (P41 159) ; Lipocalin2 (NGAL, P80188); MCP-1 (P13500); MIG (Monoquina inducida por Gamma- interferón Q07325) ; MIP-la (P10147) ; MIP-3a (P78556) ; ???-lbeta (P13236) ; MIP-12 (Q16663); NAG (N-acetil -beta-D-glucosaminidasa, P54802); Transportador de ion orgánico (OCT2, 015244); Osteoprotegerina (014788); Proteína P8 (060356); Inhibidor 1 activador de plasminógeno (PAI-1, P05121) ; ProANP(l-98) (P01160) ; Proteína fosfatasa 1-beta (PPI-beta, P62140) ; Rab GDI-beta (P50395) ; Calicreina renal (Q86U61) ; cadena RT1.B-1 (alfa) de la proteína de membrana integral (Q5Y7A8) ; Miembro 1A de la superfamilia del receptor del factor de necrosis de tumor soluble (sTNFR-I, P19438) ; Miembro IB de la superfamilia del receptor del factor de necrosis de tumor soluble (sTNFR-II( P20333) ; Inhibidor tisular de metaloproteínasas 3 (TIMP-3, P35625) ; uPAR (Q03405) puede combinarse con la medición del ensayo del marcador de lesión renal de la presente invención.

F. Señales de Información Demográfica Otras señales clínicas que pueden combinar con las mediciones del biomarcador renal de la presente invención incluyen información demográfica que incluye pero no se limita a peso, sexo, edad, raza, historial médico, historial familiar, tipo de cirugía, enfermedades pre-existentes tales como aneurisma, falla cardíaca congestiva, preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, enfermedad de arteria coronaria, proteinuria, insuficiencia renal, o septicemia, tipo de exposición a toxina tal como NSAID, ciclosporinas, tacrolimus, aminoglicósidos , foscarnet, etilenglicol , hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radio-opacos, o estreptozotocina) , variables clínicas (por ejemplo, presión sanguínea, temperatura, ritmo respiratorio) , puntuaciones de riesgo (puntuación APACHE, puntuación PREDICT, Puntuación de Riesgo TIMI para UA/NSTEMI, Puntuación de Riesgo de Framingham) , una medición de la proteína total en orina, un índice de filtración glomerular, una velocidad de filtración glomerular estimada, un grado de producción de orina, una concentración de creatinina en suero o plasma, una medición del antígeno 1 papilar renal (RPA1) ; una medición del antígeno 2 papilar renal (RPA2) ; una concentración de creatinina en orina, una excreción fraccional de sodio, una concentración de sodio en orina, una proporción de creatinina en orina a creatinina en suero o plasma, una gravedad específica de orina, una osmolaridad en orina, una proporción de nitrógeno urea en orina a nitrógeno urea en plasma, una proporción de BUN a creatinina en plasma, y/o un índice de falla renal calculado como sodio en orina / (creatinina en orina/creatinina en plasma) . Otras medidas de la función renal que pueden combinarse con la medición del ensayo de lesión renal se describen en la presente posteriormente. En: Harrison's Principies of Internal Medicine, 17a. Ed. , McGraw Hill, New York, páginas 1741-1830; y En: Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47a. Ed, McGraw Hill, New York, páginas 785-815, cada una de las cuales se incorpora por referencia en su totalidad.

La combinación de las mediciones del biomarcador renal con mediciones de la señal clínica en esta forma puede comprender el uso de regresión logística multivariable , modelación log-lineal, análisis de red neural, análisis n- de -m, análisis de árbol de decisión, etc. Esta lista no pretende ser limitante.

G. Diagnósticos Renales Convencionales Como se observa anteriormente, los términos "lesión renal aguda (o de riñon) y "falla renal aguda (o de riñón) " , como se utilizan en la presente se definen generalmente, en parte, en términos de cambios en creatinina en suero de un valor de la línea base. Las definiciones más convencionales de ARF tienen elementos comunes, incluyendo pero no limitándose al uso de creatinina en suero y, por lo general, la cantidad producida de orina. Los pacientes pueden presentar disfunción renal sin una medida de la línea base disponible de la función renal para uso en esta comparación. En tal caso, se puede estimar un valor de creatinina en suero en la línea base asumiendo que el paciente inicialmente tuvo GFR normal . 1. Grado de Filtración Glomerular y Creatinina El grado de filtración glomerular (GFR, por sus siglas en inglés) se define generalmente como el volumen de fluido filtrado de los capilares glomerulares renales (riñon) en la cápsula de Bowman pero unidad de tiempo. El grado de filtración glomerular (GFR) puede calcularse midiendo cualquier químico que tiene un nivel estable en la sangre, y se filtra libremente pero no se readsorbe ni se secreta por los ríñones . GFR típicamente se expresa en unidades de ml/min: Mediante la normalización del GFR en el área de superficie corporal, un GFR de aproximadamente 75-100 ml/min por 1.73 m2 puede asumirse. Por consiguiente el grado es la cantidad de sustancia en la orina que se origina de un volumen de sangre calculable .

Existen varias diferentes técnicas utilizadas para calcular o estimar el grado de filtración glomerular (GFR o eGFR) . En la práctica clínica, sin embargo, la depuración de la creatinina se utiliza para medir GFR. La creatinina se produce naturalmente por el cuerpo (creatinina es un metabolito de creatina, que se encuentra en los músculos) . Se filtra libremente por la glomérula, pero también se secreta activamente por los túbulos renales en muy pequeñas cantidades de tal forma que la depuración de la creatinina sobre-estima el GFR actual en 10-20%. Este margen de error es aceptable considerando la facilidad con la cual se mide la depuración de la creatinina.

La depuración de la creatinina (CCr) puede calcularse si los valores de la concentración de creatinina en la orina (UCr) , la velocidad de flujo de la orina (V) , y la concentración de creatinina en plasma (PCr) son conocidos. Ya que el producto de la concentración en orina y la velocidad de flujo de la orina producen un grado de excreción de creatinina, la depuración de la creatinina también se dice que es el grado de excreción (UCrxV) dividido por su concentración en plasma. Esto se representa comúnmente de forma matemática como: UCr V CCr= PCr Comúnmente se lleva a cabo una recolección de orina de 24 horas, de la mañana con la vejiga vacía al contenido de la vejiga la siguiente mañana, después realizando una prueba de sangre comparativa: Ucr x volumen de 24 horas Co= Per x 24 x 60 minutos Para permitir la comparación de resultados entre personas de diferentes tamaños, el CCr por lo general se corrige para el área de superficie corporal (BSA, por sus siglas en inglés) y se expresa comparado con el hombre de tamaño promedio como ml/min/1.73 m2. A pesar de que la mayor parte de los adultos tienen un BSA que llega a 1.7 (1.6-1.9), los pacientes extremadamente obesos o delgados deberán tener su CCr corregido para su BSA actual : Q x 1.73 Cc corregido = BSA La precisión de una medición de depuración de creatinina (aun cuando la recolección esté completa) está limitada porque como la velocidad de filtración glomerular cae (GFR) la secreción de creatinina aumenta, y de esta forma la elevación de la creatinina en suero es menor. De esta forma, la excreción de la creatinina es mucho mayor que la carga filtrada, resultando en una sobre-estimación potencialmente grande del GFR (tanto como una diferencia de dos veces) . Sin embargo, para propósitos clínicos es importante determinar si la función renal es estable o está empeorando o mejorando. Esto por lo general se determina mediante el monitoreo de la creatinina en suero solamente. Al igual que la depuración de la creatinina, la creatinina en suero no será una reflexión precisa del GFR en la condición de estado no estable de la ARF. Sin embargo, el grado al cual la creatinina en suero cambia de la línea base reflejará el cambio en GFR. La creatinina en suero es rápida y fácilmente medida y es específica para la función renal.

Con el propósito de determinar la cantidad producida de orina sobre bases de ml/kg/hr, la recolección y la medición de la orina por horas es adecuada. En el caso en donde,, por ejemplo, solamente está disponible una cantidad producida de 24 horas acumulada, y no se proporciona el peso del paciente, se han descrito las modificaciones menores del criterio de cantidad producida de orina RIFLE. Por ejemplo, algunos han asumido un peso de paciente promedio de 70 kg, en donde los pacientes se asignan a una clasificación RIFLE con base en lo siguiente: <=35 ml/h (Riesgo), <21 ml/h (Lesión) o <4 ml/h (Falla) . Bagshaw y otros, Nephrol. Dial. Transplant . 23 : 1203-1210 (2008) . 2. Selección del Régimen de Tratamiento Una vez que se obtiene el renal diagnóstico, el médico puede fácilmente seleccionar un régimen de tratamiento que es compatible con el diagnóstico, tal como el inicio de la terapia de reemplazo renal, retirando el suministro de compuestos que se sabe son dañinos para el riñon, el trasplante de riñon, retrasar o evitar procedimientos que se sabe son dañinos para el riñon, modificar la administración de diuréticos, iniciar la terapia dirigida objetivo, etc. Se han explicado previamente varios tratamientos apropiados para numerosas enfermedades con relación a los métodos de diagnóstico como se describe en la presente. Ver, por ejemplo, Merck Manual of Diagnosis y Therapy, 17a. Ed. Merck Research Laboratories, Whitehouse Station, NJ, 1999. Además, ya que los métodos y composiciones que se describen en la presente proporcionan información del pronóstico, los biomarcadores renales de la presente invención pueden utilizarse para monitorear un curso de tratamiento. Por ejemplo, un estado de pronóstico mejorado, o un estado de pronóstico agravado puede indicar que un tratamiento particular es eficaz o no.

IV. Anticuerpos Los anticuerpos utilizados en los inmunoensayos se describen en la presente preferiblemente específicamente uniéndose a un marcador de lesión renal de la presente invención. El término "se une específicamente" no pretende indicar que un anticuerpo se une exclusivamente a su objetivo previsto, ya que, como se observó anteriormente, un anticuerpo se une. a cualquier polipéptido que despliegue el (los) epítopo(s) al cual se une el anticuerpo. Más bien, un anticuerpo "se une específicamente" si su afinidad para el objetivo previsto es aproximadamente 5 veces mayor cuando se compara con su afinidad para una molécula no objetivo que no despliega el (los) epltopo(s) apropiado. Preferiblemente la afinidad del anticuerpo será de al menos aproximadamente 5 veces, preferiblemente 10 veces, más preferiblemente 25 veces, de preferencia 50 veces, y más de preferencia 100 veces o más, mayor para una molécula objetivo que su afinidad para una molécula no objetivo. En algunas modalidades, los anticuerpos se unen con afinidades de al menos aproximadamente 107 NT1, y preferiblemente entre aproximadamente 108 M"1 a aproximadamente 109 M"1, aproximadamente 109 M"1 a aproximadamente 1010 M"1, o aproximadamente 1010 M"1 a aproximadamente 1012 M"1.

La afinidad puede calcularse como kd kdesacti ado/kactivado ( ^desacti ado es la constante del grado de disociación, kactivado es la constante de asociación y Kd es la constante de equilibrio) . La afinidad puede determinarse en equilibrio midiendo la fracción unida (r) del ligando marcado a varias concentraciones (c) . Los datos se grafican utilizando la ecuación de Scatchard: r/c = K(n-r) : en donde r = moles de ligando unido/moles del receptor en equilibrio; c = concentración de ligando libre en equilibrio,- K = constante de asociación en equilibrio; y n = número de sitios de unión a ligando por molécula receptora. Mediante el análisis gráfico, r/c se gráfica en el eje Y frente a r en el eje X, de esta manera produciendo una gráfica Scatchard. La medición de la afinidad del anticuerpo mediante el análisis es bien conocida en la técnica. Ver, por ejemplo, van Erp y otros, J Immunoassay 12:425-443 (1991); y Nelson y otros, Comput . Methods Programs Biomed. 27: 65-68 (1988).

Numerosas publicaciones explican el uso de la tecnología de despliegue de fago para producir y clasificar colecciones de polipéptidos para la unión a un analito seleccionado. Ver, por ejemplo, Cwirla y otros, Proc . Nati. Acad. Sci. USA 87: 6378-6382 (1990); Devlin y otros, Science 249:404-406 (1990); Scott y otros, Science 249:386-388 (1990); y Ladner y otros, Patente de E.U.A. No. 5,571,698 (todas las referencias en la presente se incorporan por referencia) . Un concepto básico de los métodos de despliegue de fago es el establecimiento de una asociación física entre el ADN que codifica un polipéptido a ser clasificado y el polipéptido. Esta asociación física es provista por la partícula de fago, que despliega un polipéptido como parte de una cápsida que envuelve el genoma del fago que codifica el polipéptido. El establecimiento de una asociación física entre los polipéptidos y su material genético permite la clasificación de masa simultánea de muy grandes números de fagos con llevan diferentes polipéptidos. El despliegue de fago de un polipéptido con afinidad a un objetivo se une al objetivo y este fago se enriquece por la clasificación de afinidad al objetivo. La identidad de los polipéptidos de este fago puede determinarse de sus respectivos genomas . Con el uso de estos métodos un polipéptido identificado como teniendo afinidad de unión a un objetivo deseado después puede sintetizarse en volumen mediante medios convencionales. Ver, por ejemplo, Patente de E.U.A. No. 6,057,098, que se incorpora en la presente en su totalidad, incluyendo todas las tablas, figuras y reivindicaciones.

Los anticuerpos generados por estos métodos después pueden seleccionarse primero clasificándolos por afinidad y especificidad los el polipéptido purificado de interés y, si se requiere, comparar los resultados de la afinidad y especificidad de los anticuerpos con los polipéptidos que se desea excluir de la unión. El procedimiento de clasificación puede involucrar la inmovilización de los polipéptidos purificados en cavidades separadas de la placa de micro-titulación. La solución que contiene un anticuerpo potencial o grupos de anticuerpos, después se colocar en las cavidades de micro-titulación respectivas y se incuba por aproximadamente 30 min a 2 h. Las cavidades de micro-titulación después se lavan y un anticuerpo secundario marcado (por ejemplo, un anticuerpo anti-ratón conjugado con fosfatasa alcalina si los anticuerpos producidos son anticuerpos de ratón) se agrega a las cavidades y se incuba por aproximadamente 30 min y después se lava. Se agrega el sustrato a las cavidades y aparecerá una reacción de color en donde el anticuerpo en el (los) polipéptido (s) inmovilizado está presente.

Los anticuerpos así identificados después además pueden analizarse por afinidad y especificidad en el diseño de ensayo seleccionado. En el desarrollo de los inmunoensayos para proteína objetivo, la proteína objetivo purificada actúa como un estándar con el cual, se juzga la sensibilidad y especificidad del inmunoensayo utilizando los anticuerpos que han sido seleccionados. Debido a que la afinidad de unión de varios anticuerpos puede diferir; ciertos pares de anticuerpos (por ejemplo, en ensayos de emparedado) pueden interferir entre sí estéricamente, etc., el funcionamiento del ensayo de un anticuerpo puede ser una medida más importante que la afinidad y especificidad absolutas de un anticuerpo .

V. Kits En algunas modalidades, la presente invención también contempla dispositivos y kits para llevar a cabo los métodos como se describe en la presente. Los kits adecuados comprenden reactivos suficientes para llevar a cabo el ensayo para al menos uno de los marcadores de lesión renal descritos, junto con instrucciones para realizar las comparaciones de umbral descritas .

En ciertas modalidades, los reactivos para realizar tales ensayos son provistos en un dispositivo de ensayo, y tales dispositivos de ensayo pueden incluirse en tal kit . Los reactivos preferidos pueden comprender uno o más anticuerpos de fase sólida, el anticuerpo de fase sólida comprende el anticuerpo que detecta el (los) objetivo (s) previsto (s) del marcador unido a un soporte sólido. En el caso de inmunoensayos de emparedado, tales reactivos también pueden incluir uno o más anticuerpos detectablemente marcados, el anticuerpo detectablemente marcado comprende un anticuerpo que detecta el (los) objetivo (s) previsto (s) del marcador unido a una etiqueta detectable . Los elementos opcionales adicionales que pueden ser provistos como parte de un dispositivo de ensayo se describen en la presente más adelante .

En algunas modalidades, la presente invención proporciona kits para el análisis de los marcadores de lesión renal descritos. El kit comprende reactivos para el análisis de al menos una muestra de prueba que comprende al menos un anticuerpo que es un marcador de lesión renal. El kit también puede incluir dispositivos e instrucciones para llevar a cabo una o más e correlaciones de diagnóstico y/o pronóstico como se describe en la presente. Los kits preferidos comprenderán un par de anticuerpos para realizar el ensayo de emparedado, o una especie marcada para realizar el ensayo competitivo, para el analito. Preferiblemente, un par de anticuerpos comprende un primer anticuerpo conjugado a una fase sólida y un segundo anticuerpo conjugado a una etiqueta detectable, en donde cada uno del primero y segundo anticuerpos se unen a un marcador de lesión renal. Más preferiblemente cada uno de los anticuerpos es un anticuerpo monoclonal . Las instrucciones para utilizar el kit y realizar las correlaciones pueden estar en la forma de marcación, que se refiere a cualquier material escrito o grabado que se adjunta a, o por el contrario acompaña a un kit en cualquier momento durante su fabricación, transporte, venta o uso. Por ejemplo, el término marcación comprende la publicación de folletos y panfletos, materiales de empaque, instrucciones, casetes de audio o video, discos de computadora, así como directamente impresos en los kits.

En una modalidad, la invención contempla los kits de diagnóstico para pronosticar la diálisis a largo plazo. En una modalidad, el kit comprende HA y/o HAase, HABP y un marcador HABP conjugado a un marcador, y reactivos auxiliares adecuados para utilizarse en la detección de la presencia de HA y/o HAase en una muestra biológica (es decir, por ejemplo, una muestra de orina) . Un ejemplo de un kit de diagnóstico contemplado por esta invención es un dispositivo de prueba de varilla indicadora convencional.

En una modalidad, un dispositivo de prueba de varilla indicadora puede soportar un ensayo HA para pronosticar la diálisis a largo plazo. Por ejemplo, al utilizar metodología convencional se puede utilizar una fase sólida en la forma de una varilla indicadora para el ensayo HA, como se describe anteriormente. En una modalidad, la varilla indicadora puede cubrirse o impregnarse con HA, en donde la varilla indicadora puede utilizarse para ensayar cualquier fluido biológico, incluyendo pero no limitándose a orina .

Experimental En algunas modalidades, la presente invención está bien adaptada para llevar a cabo los objetos y obtener los objetivos y ventajas mencionadas, así como aquellos inherentes en la presente. Los ejemplos provistos en la presente son representativos de las modalidades preferidas, son ilustrativos, y no pretenden limitar el alcance de la invención .

Ejemplo 1 Acido Hialurónico Normalizado En Muestras de Orina de Humano El ácido hialurónico se determinó en orina de humano como se describe anteriormente . Se generó un transcurso de tiempo recolectando y analizando HA en la orina durante dos semanas (es decir, catorce Días; D1-D14) . Los datos presentados muestran pacientes que se recuperaron y pacientes que no se recuperaron a los veintiocho (28) Días después de sufrir una lesión renal, (es decir, por ejemplo, R28 = pacientes que se recuperaron; y NR28 = pacientes que no se recuperaron) . Durante el período de recolección de (14) Días las muestras se analizaron en el Día 1 (DI) , Día 7 (D7) , y Día 14 (D14) . Ver, Figura 1.

Los datos demuestran que para los pacientes que se recuperaron, el ácido hialurónico fue más alto en el DI y disminuyó progresivamente en el D7 y D14. En contraste, for pacientes que no se recuperaron, el ácido hialurónico aumento establemente durante el mismo período de tiempo. Claramente, los datos sugieren que el ácido hialurónico se correlaciona con la recuperación de una lesión renal.

Ejemplo 2 Niveles de Acido Hialurónico Normalizados Absolutos En Muestras de Orina de Humano Los datos en este ejemplo examinan las diferencias entre niveles de ácido hialurónico absolutos normalizados por arriba de las muestras tomadas en el DI, D7 , y/o D14 después de la lesión renal recolectada de acuerdo con el Ejemplo 1 para pacientes que muestran recuperación en ambos, veintiocho Días (R28) y sesenta Días (R60) después de la lesión renal, y pacientes que no se recuperaron (NR28 y NR60) .

Los datos muestran que entre el Día 1 y el Día 7, así como entre el Día 1 y el Día 14, los pacientes que se recuperaron demostraron claras reducciones en la excreción de ácido hialuronico normalizado (es decir, por ejemplo, la excreción de ácido hialuronico absoluto disminuyó durante este período de tiempo) . La diferencia entre el Día 7 y el Día 14, sin embargo, sin importancia significa que el grado de excreción no cambió. En contraste, en pacientes que no se recuperaron la diferencia entre el Día 1 y el Día 7, así como entre el Día 1 y el Día 14 demostró claros aumentos en la excreción de ácido hialuronico normalizado (es decir, por ejemplo, la excreción de ácido hialuronico absoluto aumentó en este período de tiempo) . También, el grado de excreción no cambió entre el Día 7 y 14. Ver, Figuras 2 y 3.

Ejemplo 3 Niveles de Acido Hialurónico Normalizado Relativos en Muestras de Orina de Humano Este ejemplo vuelve a graficar los datos de acuerdo con el Ejemplo 2 para además ilustrar la magnitud de las diferencias entre pacientes que se recuperaron y pacientes que no se recuperaron. En particular, los datos se expresan como un porcentaje (es decir, D7 ÷ DI, D14 ÷ DI, D7 ÷ D14 , o D14 ÷ D7) .

Los datos muestran que en pacientes que se recuperaron la excreción de ácido hialurónico relativa disminuyó progresivamente entre el Día 1 y el Día 14, en donde la diferencia relativa entre el Día 14 y el Día 7 es casi sin importancia. Esto es consistente con la interpretación de los datos anteriores sugiriendo que el ácido hialurónico se reduce en pacientes con recuperación de la lesión renal con el tiempo. En contraste, los datos muestran que en pacientes que no se recuperaron la excreción de ácido hialurónico relativa permaneció elevada durante todo el período de tiempo. Esto es consistente con la interpretación de los datos anteriores sugiriendo que el ácido hialurónico es elevado en pacientes que no se recuperaron de lesión renal con el tiempo. Ver, Figuras, 4 y 5.

Ejemplo 4 Predicción De Diálisis A Largo Plazo en el D14 Después De Lesión Renal Los datos presentados de acuerdo con el Ejemplo 2 se analizaron y volvieron a graficar para evaluar la relación entre Verdaderos Positivos y Falsos Positivos. En particular, bajo las condiciones en donde hubo una elevación persistente de HA/creatinina urinaria (es decir, la diferencia entre las mediciones de DI y D14) hubo una alta sensibilidad para pronosticar que el paciente estaría en diálisis a largo plazo en el D60 después de la lesión renal. Ver, Figura 6. En conclusión, los datos sugieren que en pacientes que demostraron un HA urinario persistentemente elevado entre el D1-D14 después de lesión renal estarán en diálisis en (y más probablemente después) el D60.

Ejemplo 5 TGF-ß? Pronostica Recuperación Renal Post-AKI Este estudio fue auxiliar para un ensayo controlado distribuido aleatoriamente multicentral más grande que estudio el efecto de diferentes dosis de terapia de reemplazo renal en la supervivencia de AKI que incluyó 24 pacientes.

El TGF-ß? urinario fue significativamente mayor en el Día 14 después del inicio de AKI en pacientes que fallaron en la recuperación de la función renal en el Día 60 según comparado con aquellos que no se recuperaron (p <0.01). Ver, Figura 7.

Los valores TGF-ß? urinarios pronosticaron la recuperación renal en el Día 60, utilizando muestras recolectadas en el Día 14 después del inicio de AKI y que tienen un Area Bajo la Curva Característica del Operador del Receptor (AUC ROC) de 0.81 (error estimado estándar = 0.09). Además, si se considera el cambio en TGF-ß? urinario, del Día 1 al Día 14, el área bajo la curva AUC ROC aumenta a 0.84 (p <0.01). TGF-ß? se midió utilizando un kit ELISA comercialmente disponible kit (RyD Systems, Minneapolis, MN) .

Ejemplo 6 El Receptor de Muerte 5 (DR5) Predice Recuperación Renal Post-AKI Este estudio fue auxiliar para un ensayo controlado distribuido aleatoriamente multicentro más grande que estudia el efecto de diferentes dosis de terapia de reemplazo renal en la supervivencia de AKI incluyendo 25 sujetos.

El DR5 urinario fue significativamente mayor en el Día 14 después del inicio de AKI en sujetos que fallaron en la recuperación de la función renal en el Día 60 según comparado con los que no se recuperaron. Ver, Tabla 6.

Tabla 6. Valores DR5 para los que recuperaron y no recuperaron la función renal en el Día 60. (A) Valores Medios DR5 desplegados en para los Días 1 y 14, lo que no se recuperaron y los que se recuperaron. (B) Valores DR5 log Medios desplegados por los Días 1 y 14, los que se recuperaron y los que no se recuperaron.

Los valores DR5 urinarios pronosticaron la recuperación renal en el Día 60, utilizando las muestras recolectadas en el Día 14 después del inicio de la AKI y teniendo un Area Bajo la Curva Característica del Operador del Receptor (AUC ROC) de 0.90 (p<0.02). DR5 se midió utilizando un kit de prueba comercialmente disponible (Invitrogen, Carlsbad, CA) . El sistema del ensayo se basó en una plataforma de perlas Luminex® extracelular que se mutliplexó con citocina inflamatoria 5-plex, + IL-10, TNF-Ri, y TNF-R2.

A pesar de que la invención ha sido descrita y ejemplificada con suficiente detalle para los expertos en esta técnica para hacerla y utilizarla, varias modificaciones, y mejoras deberán ser evidentes sin apartase del espíritu y alcance de la invención. Los ejemplos provistos en la presente son representativos de las modalidades preferidas, son ilustrativos, y no son previstos como limitaciones al alcance de la invención. Las modificaciones en la presente y otros usos se les ocurrirán a los expertos en la técnica. Estas modificaciones están abarcadas dentro del espíritu de la invención y se definen por el alcance de las reivindicaciones.

Será fácilmente evidente para un experto en la técnica que pueden hacerse varias sustituciones y modificaciones a la invención descrita en' la presente sin apartarse del alcance y espíritu de la invención.

Todas las patentes y publicaciones mencionadas en la especificación son indicativas de los niveles de los que tienen experiencia ordinaria en la técnica a la cual pertenece la invención. Todas las patentes y publicaciones se incorporan en la presente por referencia al mismo grado como si cada publicación individual se indicará específica e individualmente a ser incorporada por referencia.

La invención ilustrativamente descrita en la presente de manera adecuada puede practicarse en la ausencia de cualquier elemento o elementos, limitación o limitaciones que no se describen específicamente en la presente. De esta forma, por ejemplo, en cada instancia en la presente cualquiera de los términos "que comprende", "que consiste esencialmente de" y "que consiste de" pueden reemplazarse con cualquiera de los otros dos términos . Los términos y expresiones que han sido utilizados se utilizaron como términos de descripción y no de limitación, y no hay ninguna intención de que en el uso de tales términos y expresiones se excluyan cualesquiera equivalentes de las características mostradas y descritas o sus porciones, pero se reconoce que son posibles varias modificaciones dentro del alcance de la invención reivindicada. De esta forma, se debe entender que a pesar de que la presente invención ha sido descrita específicamente por las modalidades preferidas y las características opcionales, la modificación y variación de los conceptos descritos en la presente pueden ser utilizadas por los expertos en la técnica, y que tales modificaciones y variaciones se consideran dentro del alcance de esta invención como se define por las reivindicaciones anexas.

Otras modalidades se establecen dentro de las siguientes reivindicaciones.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un método caracterizado porque comprende: a) proporcionar; i) un paciente que exhibe al menos un síntoma de lesión renal aguda; y ii) una muestra de fluido biológico obtenida del paciente, en donde la muestra comprende al menos un biomarcador renal; b) medir un valor del paciente que comprende al menos un valor del biomarcador renal en la muestra; y c) pronosticar la probabilidad de recuperación renal para el paciente con base en el valor del paciente.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la probabilidad pronosticada de recuperación renal ocurre dentro de al menos sesenta Días desde el inicio de la lesión renal aguda.

3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la muestra se obtiene dentro de al menos al menos catorce Días desde el inicio de la lesión renal aguda .

. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la muestra se obtiene dentro de al menos un Día desde el inicio de la lesión renal aguda.

5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la predicción comprende correlacionar el valor del paciente con un valor de umbral.

6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el valor de umbral comprende un valor de ácido hialurónico urinario.

7. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el valor de umbral del ácido hialurónico urinario es de aproximadamente 12 g/mg d creatinina .

8. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el valor de umbral para el valor del ácido hialurónico urinario comprende un área bajo el valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.70.

9. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el valor de umbral comprende un valor de ácido hialurónico y al menos un valor de señal clínica.

10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el valor de umbral para el valor del ácido hialurónico urinario y el al menos un valor de señal clínica comprende un área bajo el valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.75,

11. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el valor de umbral comprende un valor ß? del factor de crecimiento de transformación urinario.

12. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el valor de umbral para el valor Bl del factor de crecimiento de transformación urinario es de aproximadamente 274 pg/mg de creatinina.

13. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el valor de umbral para tal valor ß? del factor de crecimiento de transformación urinario comprende un área bajo el valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.70.

14. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el valor de umbral comprende tal valor ß? del factor de crecimiento de transformación urinario y al menos un valor de señal clínica.

15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el valor de umbral para tal valor ß? del factor de crecimiento de transformación urinario y al menos un valor de señal clínica comprenden un área bajo el valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.74.

16. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el valor de umbral comprende un valor del receptor de muerte 5 urinario.

17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el valor de umbral para el valor del receptor de muerte 5 urinario es de aproximadamente 2.7 ng/mg de creatinina.

18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el valor de umbral para el valor del receptor de muerte 5 urinario comprende un área bajo el valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.70.

19. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el valor de umbral comprende el valor del receptor de muerte 5 urinario y un valor de señal clínica .

20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el valor de umbral para el valor del receptor de muerte 5 urinario y al menos un valor de señal clínica comprende un área bajo el valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.76.

21. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el valor de umbral comprende al menos un valor de señal clínica.

22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el valor de señal clínica se selecciona del grupo seleccionado del grupo que consiste de edad, puntuación SOFA, índice de comorbilidad Charlson, y puntuación APACHE II score.

23. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque al menos un valor de señal clínica comprende un área bajo el valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.71.

24. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el valor del paciente comprende al menos dos valores de señal clínica.

25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque al menos dos valore de señal clínica comprenden un área bajo el valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) de al menos 0.74.

26. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque al menos os valore de señal clínica comprenden la edad y el índice de comorbilidad Charlson.

27. Un método caracterizado porque comprende: a) proporcionar; i) un paciente que exhibe al menos un síntoma de lesión renal aguda; ii) una muestra de fluido biológico obtenida del paciente, en donde la muestra comprende al menos un biomarcador renal ,· b) medir un valor del paciente que comprende al menos un valor del biomarcador renal en la muestra; y c) correlacionar el valor del paciente con un valor de biomarcador de umbral en donde se identifica la estratificación del riesgo.

28. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la correlación además identifica un valor del biomarcador renal positivo en operación.

29. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la correlación además identifica un valor del biomarcador renal negativo en operación.

30. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el valor del paciente comprende un valor de ácido hialurónico urinario y al menos un valor de señal clínica.

31. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el valor del paciente comprende un valor de factor de crecimiento de transformación ß? .

32. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el valor del paciente comprende un valor del receptor de muerte 5.

33. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el valor del paciente además comprende al menos un valor de señal clínica.

34. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la muestra se obtiene dentro de al menos al menos catorce Días desde el inicio de la lesión renal aguda .

35. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende una categoría de Riesgo.

36. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende una categoría de Lesión.

37. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende una categoría de Falla.

38. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende asignar una posibilidad de recuperación renal.

39. El método de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque la posibilidad de recuperación renal comprende el valor del biomarcador que tiene un área bajo la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) por arriba del valor de umbral de aproximadamente 0.70.

40. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende asignar una posibilidad de no recuperación renal.

41. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque la posibilidad de no recuperación comprende el valor del biomarcador que tiene un área bajo la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) por debajo del valor de umbral de aproximadamente 0.70.

42. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende determinar un riesgo de consecuencia clínica del paciente .

43. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el riesgo de consecuencia clínica comprende la mejora en la función renal.

44. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el riesgo de consecuencia clínica comprende una función renal reducida.

45. El método de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque la función renal reducida comprende una lesión renal.

46. El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque la lesión renal es progresiva.

47. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el riesgo de consecuencia clínica comprende una categoría de Pérdida.

48. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el riesgo de consecuencia clínica comprende una categoría de Riesgo Renal en Etapa Terminal .

49. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque una posibilidad de la aparición de tal riesgo de consecuencia clínica está correlacionada con un área del paciente bajo el valor de la curva característica operativa del receptor (AUC ROC) .

50. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque la posibilidad de la categoría de Pérdida aumenta dentro del valor AUC ROC en el intervalo de entre aproximadamente 0.5 - 0.3.

51. El método de conformidad con la reivindicación 49,. caracterizado porque la posibilidad de la categoría de Pérdida disminuye por arriba de un valor AUC ROC de 0.5.

52. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque la posibilidad de la categoría de Falla Renal en Etapa Terminal aumenta por debajo del valor AUC ROC de 0.3.

53. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque la posibilidad de la categoría de Falla Renal en Etapa Terminal disminuye por debajo de un valor AUC ROC de aproximadamente 0.3.

54. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende determinar el riesgo del sujeto para una función renal reducida futura.

55. El método de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque el riesgo del sujeto para una función renal reducida futura aumenta por debajo del valor AUC ROC de 0.5.

56. El método de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque el riesgo del sujeto para una función renal reducida futura disminuye por debajo del valor AUC ROC de 0.5.

57. El método de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque .la futura función renal reducida posiblemente ocurrirá dentro de los 180 Días del tiempo en el cual se obtuvo la muestra de fluido corporal del sujeto.

58. El método de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque la futura función renal reducida posiblemente ocurrirá dentro de un período de tiempo seleccionado del grupo que consiste de 18 Meses, 120 Días, 90 Días, 60 Días, 45 Días, 30 Días, 21 Días, 14 Días, 7 Días, 5 Días, 96 horas, 72 horas, 48 horas, 36 horas, 24 horas, 12 horas y menos .

59. El método de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque la futura función renal reducida ocurre a las 0 horas dentro del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal del sujeto, por lo tanto proporcionando un diagnóstico de una afección actual.

60. Un método, caracterizado porque comprende: a) proporcionar un sujeto que comprende al menos un factor de riesgo preexistente para una enfermedad renal; y b) seleccionar el sujeto para una estratificación del riesgo con base en al menos un factor de riesgo preexistente de enfermedad.

61. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque el factor de riesgo preexistente comprende un biomarcador renal .

62. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque el biomarcador renal se selecciona del grupo que consiste de ácido hialurónico urinario, factor de crecimiento de transformación 1ß urinario, y receptor de muerte 5 urinario.

63. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende una categoría de Riesgo.

64. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende una categoría de Lesión.

65. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende una categoría de Falla.

66. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende una categoría de Pérdida.

67. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la estratificación del riesgo comprende una categoría de Enfermedad Renal en Etapa Terminal .

68. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la categoría de Riesgo comprende un valor AUC ROC en el intervalo entre aproximadamente 0.6 -0.7.

69. El método de conformidad con la reivindicación 64, caracterizado porque la categoría de Lesión comprende un valor AUC ROC en el intervalo entre aproximadamente 0.5 -0.6.

70. El método de conformidad con la reivindicación 65, caracterizado porque la categoría de Falla comprende un valor AUC ROC en el intervalo entre aproximadamente 0.4 -0.5.

71. El método de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque la categoría de Pérdida comprende un valor AUC ROC en el intervalo entre aproximadamente 0.3 0.4.

72. El método de conformidad con la reivindicación 67, caracterizado porque la categoría de Enfermedad Renal en Etapa Terminal comprende un valor AUC ROC por debajo de 0.3.

73. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque la enfermedad renal se selecciona del grupo que consiste de enfermedad pre-renal, enfermedad pre-renal intrínseca, y enfermedad de falla renal aguda post-renal .

74. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque el sujeto además comprende al menos una afección médica seleccionada del grupo que consiste de experimentar o haber experimentado cirugía vascular principal, bypass de arteria coronaria, u otra cirugía cardíaca; un sujeto que tiene una falla cardíaca congestiva preexistente, preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, enfermedad de arteria coronaria, proteinuria, insuficiencia renal, filtración glomerular por debajo del intervalo normal, cirrosis, creatinina en suero por arriba de intervalo normal, y septicemia.

75. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque el sujeto además comprende la exposición a al menos un compuesto seleccionado del grupo que consiste de fármacos anti- inflamatorios no esteroidales , ciclosporinas , tacrolimus, aminoglicosidos , foscarnet, etilenglicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radio-opacos, o estreptozotocina .

76. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque el sujeto además se selecciona para la estratificación del riesgo con base en un diagnóstico existente de una lesión seleccionada del grupo que consiste de función renal, función renal reducida, y falla renal aguda .