MX2012014416A - Tratamiento de cancer de sangre. - Google Patents

Abstract

Profármacos activados por hipoxia, como por ejemplo, TH-281, TH-302, y TH-308, son útiles para el tratamiento de varios cánceres de sangre, como leucemias agudas, leucemias crónicas, MDS, MF, y mieloma múltiple.

Description

TRATAMIENTO DE CÁNCER DE SANGRE CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se relaciona con el tratamiento de cáncer sanguíneo mediante la aplicación de profármacos activados por hipoxia y se relaciona con el campo de la biología celular, química medicinal, medicina, biología molecular, y farmacología.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION El cáncer sanguíneo se. refiere a una clase de cánceres que ataca a la sangre, médula ósea, y/o al sistema linfático. Esta clase de cánceres incluye leucemia y mieloma múltiple, de las cuales todas1 pueden ser enfermedades amenazantes contra la vida por lo cual son necesarios nuevos y más eficientes tratamientos.

La relación entre células de cáncer y el microentorno tumoral afecta al crecimiento y a la supervivencia de células cancerosas (ver Hiruma y colaboradores, Blood. 2009; 113 (20) : 894-4902, y Podar y colaboradores, Leukemia 2009; 23(1),: 10-24, cada uno de los cuales se incorpora a la presente como referencia) . La hipoxia, o bajo nivel de oxígeno, es una característica del microentorno de muchos tumores sólidos y resulta de la pobre ¦ vascularización que caracteriza a muchos tumores sólidos. Alto potencial metastático ,y pobre pronóstico se correlacionan altamente con hipoxia en tumores sólidos.

La investigación clínica ha intentado dirigirse hacia terapias para las regiones hipóxicas de tumores sólidos por muchos años sin éxito notable., No obstante, recientemente ha surgido una nueva clase prometedora de profármacos activados por hipoxia (ver la Patente U.S. No. 7,550,496, incorporada a la presente como referencia) , y la mayoría de los compuestos prometedores en esa clase, llamados TH-302 (ver las Publicaciones de Patentes Nos. 2007/002931; 2008/083101; y 2010/048330, cada una de las cuales es incorporada a la presente como referencia) , están actualmente en pruebas clínicas avanzadas.

No obstante, dado el papel prominente del sistema circulatorio en oxigenar los tejidos y la falta de éxito clínico con las terapias anteriores dirigidas hacia hipoxia, no ha habido apreciación que las, terapias dirigidas hacia hipoxia puedan satisfacer la necesidad por nuevas terapias para cáncer sanguíneo. La presente invención satisface esta necesidad.

SUMARIO DE LA INVENCION En la presente se proporcionan métodos para tratar varios cánceres de la sangre, tales como leucemias agudas (AML y ALL) , leucemias crónicas (CML y CLL) , mielofibrosis idiopática, síndrome mielodisplástico (MDS) , y mieloma múltiple, que comprenden administrar una cantidad efectiva terapéuticamente de un profármaco activado por hipoxia, incluyendo, pero no limitándose a un compuesto de fórmula en donde Y2 es 0, S, NR6, NC0R6, o NS02R6, en donde R6 es (Ci-C6) -alquilo, Ci-C6-heteroalquilo, arilo, o heteroarilo; R3 y R4 son seleccionados independientemente del grupo que consiste de 2- haloalquilo, 2-alquilsulfonioxialquilo, 2- heteroalquilsulfoniloxialquilo, 2- arilsulfoniloxialquilo., y 2-heteroalquilsulfoniloxialquilo; Rx tiene la fórmula L-Z3; L es C(Zi)2; cada \ independientemente es hidrógeno, halógeno, Ci-C6-alquilo, Ci-Cg-heteroalquilo, arilo, heteroarilo, C3-C8-cicloalquilo, heterociclilo, Ci-C6^acilo, Ci-C6-heteroacilo, aroilo, o heteroaroilo; o L es: Z3 es un grupo bioreductor que tiene una fórmula seleccionada del grupo que consiste de: en donde cada Xi es independientemente N o CR8; X2 es NR7, S, u O; cada R7 es independientemente Ci-C6-alquilo, Ci-C6-heteroarilo, C3-C8-cicloalquilp, heterociclilo, arilo o heteroarilo; y R8 es independientemente hidrógeno, halógeno, ciano, CHF2, CF3, C02H, amino, Ci-C6-alquilo, Ci-C6-heteroalquilo, Ci-C6-cicloalquilo, Ci-C6-alcoxi , Ci-C6-alquilamino, Ci-C6-dialquilamino, arilo, CON(R7)2; Ci-C6-acilo, Ci-C6-heteroacilo, aroilo o heteroaroilo; o una sal de los mismos aceptable farmacéuticamente.1 En varias modalidades de la invención, el compuesto utilizado en esta invención es un compuesto de fórmula I este es TH-281, TH-302, o TH-308 (estructuras proporcionadas posteriormente) .

En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado como una terapia de agente individual ("agente" es usado indistintamente con "fármaco" en la presente) para tratar 'un cáncer de la sangre seleccionado del grupo que consiste de AML, ALL, CML, CLL, MDS, y MF, incluyendo formas recurrentes o resistentes de estos cánceres. En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado por cinco días consecutivos de un ciclo de 21 dias, y la dosis es de entre 120 y 575 mg/m2/día, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/dia. En algunas modalidades, las cinco dosis diarias se extienden durante 8 dias. En una modalidad, se usa pimonidazol como un marcador de hipoxia e infusionado durante 20 minutos a una dosificaicón de 0.5 g/m2 disuelto en solución salina al 0.9% aproximadamente diez y seis (±6) horas antes de una biopsia de médula ósea. La dosis máxima de pimonidazol puede ser mantenida en 1.0 gramo para pacientes con un área superficial corporal (BSA) > 2.0 m2.

Se ha demostrado que estos métodos de la invención son eficientes en pruebas clínicas. Dos pacientes de AML tratados con TH-302 a la dosis de 120 mg/m /día tuvieron enfermedad estable. Un paciente con ALL tratado con TH-302 a la dosis de 170 mg/m2/día tuvo una respuesta parcial en biopsia de médula ósea después del ciclo 1. Dos pacientes (uno con AML y uno con ALL) tratados con TH-302 a la dosis de 240 mg/m2/día y un paciente tratado con TH-302 a la dosis de 330 mg/m2/día tuvo enfermedad estable después del ciclo 1.

En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado como terapia de agente individual para tratar mieloma múltiple, incluyendo formas recurrentes o resistentes de esta enfermedad, incluyendo pero no limitándose a pacientes que han fracasado en la terapia de bortezomib t/o lenalidomida (o talidomida) . En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado en los días 1, 4, 8, y 11 de un ciclo dé 21 días, y la dosis está entre 120 y 575 mg/m2/día, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/día.

En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado como una terapia de combinación con bortezomib para tratar mieloma múltiple, incluyendo las formas recurrentes o resistentes , de esta enfermedad, en pacientes, incluyendo pero sin limitarse a quienes han fracasado en la terapia con bortezomib y/o lenalidomida (o talidomida) . En una modalidad, TH^-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado en los días 1, 4, 8, y 11 de un ciclo de 21 días, y la dosis está entre 120 y 575 mg/m2/día, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/día. El bortezomib es administrado como se suministra comercialmente y es aprobado a una dosis de 1.3 mg/m2/día o a una dosis de 1.0 mg/m2/día en el mismo ciclo. En una modalidad, Th-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado al menos 2 horas antes del bortezomib. Ver la Pub. De patente No. 2010/048330, incorporada a la presente como referencia.

En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado como una' terapia de combinación con lenalidomida y dexametasona para tratar mieloma múltiple, incluyendo las formas recurrentes o resistentes de esta enfermedad, en pacientes incluyendo pero no limitados a aquellos que han fracasado en la ; terapia de bortezomib y/o lenalidomida (o talidomida) . En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado en los días 1, 4, 8, y 11 de un ciclo de 21 días, y la dosis está entre 120 y 575 mg/m2/día, incluyendo, por ejemplo, 1 dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/día. La lenalidomida es administrada como se suministra comercialmente y es aprobada a una dosis de 25 mg en los días 1 a 14 y la dexametasona es administrada como de suministra comercialmente y es aprobada a una dosis de 40 mg en los días 1 a 4 y 9 a 12 del mismo ciclo. En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula > I es administrado en los días 1, 4, 8, 11, 15, 18 de un ciclo de 28 días, y la dosis está entre 120 y 575 mg/m2/día, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg m2/dia. La lenolidomida es administrada como se suministra cpmercialmente y es aprobada a una dosis de 25 mg en los días 1 a 21 y la dexametasona es administrada como se suministra comercialmente y es aprobada a una dosis de 40 mg en os días 1· a 4, 9 a 12 y 17 a 20 del mismo ciclo de 28 días.

En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I se proporciona en frasquitos de 100 mg, liofilizada, y disuelta en (dextrosa al 5% en agua) D5W y administrada intravenosamente durante aproximadamente 30 a 60 minutos vía una bomba de infusión. El volumen de infusión depende de la dosis total dada (en mg) durante la infusión. Si se esta infusionando < 1000 mg,, se usan para infusión 500 ce de D5W. Si la dosis total es 1000, 1000 ce de D5 son usados para infusión. , En varias modalidades de la invención, se usa un biomarcador de hipoxia para seleccionar pacientes para tratamiento y/o identificar pacientes que respondan a la terapia.

Estos y otros aspectos y modalidades de la invención se describen con detalle adicional posteriormente.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE IA INVENCIÓN Definiciones En esta especificación y en las reivindicaciones que siguen, se hará referencia a' numerosos términos que se definirán para tener los significados siguiente. Todas las designaciones numéricas, por ejemplo, pH, temperatura, tiempo, concentración, y peso, que incluyen intervalos, son aproximaciones que típicamente pueden variarse (+) o (-) en incrementos de 0.1, 1.0 o 10.0 según sea apropiado. Todas las designaciones numéricas pueden comprenderse como precedidas por el término "aproximadamente". Los reactivos descritos en la presente son ejemplares y equivalentes a los que pueden ser conocidos en el arte.

La forma singular "un, una uno" y "el, ella, ello" incluye referencias al plural a menos que el contexto claramente dicte de otra manera.

El término "que comprende" significa que cualquiera de los elementos citados son necesariamente incluidos y otros elementos pueden incluirse opcionalmente . "Que consiste esencialmente de" significa que cualquiera de los elementos citados son incluidos necesariamente, elementos que afectarían materialmente las características básicas y nuevas de los elementos enlistados son excluidos, y otros elementos pueden ser opcionalmente incluidos. "Que consiste de" significa que todos los elementos diferentes de los enlistados son excluidos. Las modalidades definidas por cada uno de estos términos están en el alcance de esta invención.

Ciertos términos relacionados con la fórmula I se definen a continuación.

"Acilo" se refiere a -CO-alquilo, en donde alquilo es como se define en la presente. .

"Aroilo" se refiere a -CO-arilo, en donde arilo es como se define en la presente.

MAlcoxi se refiere a -O^alquilo, en donde alquilo es como se define en la presente.

"Alquenilo" se refiere a un radical hidrocarburo monovalente lineal o a un radical hidrocarburo monovalente ramificado que tiene el número de átomos de carbono indicados en el prefijo y que contiene al menos un doble enlace, pero no más de tres dobles enlaces. Por^ ejemplo, [C2-C ) -alquenilo incluye, etenilo, propenilo, 1,' 3- butadienilo y los similares. Alquenilo puede ser sustituido opcionalmente con sustituyentes, incluyendo por ejemplo, deuterio ("D"), hidroxilo, amino, mono o di (Ci-Ce) -alquilamino, halo, éter C2-C6-alquenilico, ciano, nitro, etinilo, Ci-C6- alcoxi, Ci~ &-alquiltio, -COOH, -CONH2, mono- o di (Ci-C6) alquilcarboxamido, -S02NH2, -OS02- (C!-C6) -alquilo, , mono o di (Ci- C6) alquilsulfonamido, arilo, héteroarilo, alquilo o heteroalquilsulfoniloxi, y arilo o heteroarilsulfoniloxi . "Alquilo" se refiere á un radical hidrocarburo monovalente saturado lineal o a un radical hidrocarburo monovalente saturado ramificado que tiene el número de átomos de carbono indicados en el prefijo. Como se usa en esta descripción, los prefijos (Ci-Cqq) , Ci-qq y Ci-Cqq, en donde qq es un entero de 2 a 20, tienen el mismo significado. Por ejemplo, (Ci-C6) -alquilo, Ci-6-a,lquilo- , o Ci-C6-alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo; 2- propilo, n-butilo, 2-butilo, ter-butilo, pentilo, y los similares. Para cada una de las definiciones en la presente (por ejemplo, alquilo, alquenilo, alcoxi, etc.), cuando no se incluye un prefijo para indicar el número de átomos^ de carbono de la cadena principal en una porción alquilo,', el radical o porción de éste tendrá seis o menos átomos ' de carbono en la cadena principal. (Ci-C6) -alquilo puede ser sustituido opcionalmente con sustituyentes , incluyendo por! ejemplo, deuterio ("D"), hidroxilo, amino, mono o di (Ci-Ce) alquilamino, halo, éter C2-C6 alquenilico, ciano, nitro, etenilo, etinilo, Ci-Cg-alcoxi, Ci-Ce-alquiltio, -COOH, -CONH2,' mono- o di (Ci-C6) -alquilcarboxamido, -S02NH2, -0S02- (Ci-C6) -alquilo, mono o di (Ci-C6) alquilsulfonamido, arilo, heteroarilo, alquilsulfoniloxi, heteroalquilsulfoniloxi, arilsulfoniloxi o heteroarilsulfoniloxi .

"Alquilamino" o mono-alquilamino se refieren a -NH-alquilo, en donde alquilo es como se define en la presente.

"Alquinilo" se refiere a un radical hidrocarburo monovalente lineal o a un radical hidrocarburo monovalente ramificado que tiene el número de átomos de carbono indicados en el prefijo y que contiene al menos un triple enlace, pero no más de dos triples enlaces. Por ejemplo, (C2-C6) alquenilo incluye, etinilo, propinilo, y los, similares. Alquinilo puede ser sustituido opcionalmente con 'sustituyentes, incluyendo, por ejemplo, deuterio ("D") , hidroxilo, amino, mono o di (Ci- Q) -alquilamino, halo, éter C2-C6-alquenílico, ciano, nitro, etenilo, C!-C6- alcoxi, Ci-C6- alquiltio, -COOH, -CONH2, mono-o di (Ci-C6) -alquilcarboxamido, -S02NH2, -0S02- (Ci-C6) -alquilo, mono o di (Ci-C6) -alquilsulfonamido, arilo, heteroarilo, alquilo o heteroalquilsulfoniloxi , y arilo o heteroarilsulfoniloxi .

"Arilo" se refiere a . un radical hidrocarburo aromático monovalente monociclico o biciclico de 6 a 10 átomos en el anillo los cuales son sustituidos independientemente con uno a ocho sustituyentes, preferiblemente uno, dos, tres, cuatro de cinco sustituyentes seleccionados de deuterio ("D") ,, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, halo, nitro, ciano, hidroxilo, alcoxi, amino, acilamino, mono- alquilamino, di-alquilamino, haloalquilo, haloalcoxi, heteroalquilo, COR (donde R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, 1 cicloalquil-alquilo, fenilo o fenilaquilo) , - (CR' R" ) n-COOR (dónde n es un entero de 0 a 5, R' y R" son independientemente .hidrógeno o alquilo, y R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, fenilo o fenilalquilo) o - (CR' R" ) n-CONRxRy (donde n es un entero de o a 5, R' y R" son independientemente hidrógeno o alquilo, y Rx y Ry son seleccionados independientemente de hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, fenilo o fenilalquilo) . En una modalidad, Rx y Ry juntos son cicloalquilo o heterociclilo. Más específicamente, el término arilo incluye, pero no se limita a, fenilo, bifenilo, 1-naftilo, y 2- naftilo, y las formas sustituidas de éstos.

"Cicloalquilo" se refiere a un radical hidrocarburo cíclico monovalente de tres a siete carbonos en el anillo. El grupo cicloalquilo puede tener uno o más dobles enlaces y puede también ser opcionalmente sustituido independientemente con uno, dos, tres o cuatro sustituyentes seleccionados de alquilo, fenilo opcionalmente sustituido, o -C (0) Rz (donde Rz es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, amino, mono-alquilamino, di-alquilamino, hidroxilo, alcoxi, o fenilo opcionalmente sustituido) . Más específicamente, el término cicloalquilo incluye, por ejemplo, cicíopropilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, fenilciclohexilo, 4- carboxiciclohexilo, 2-carboxamidociclohexenilo, 2- dimetilaminocarbonil-ciclohexilo, y los similares.

"Dialquilamino" o di-alquilamino se refiere a -N (alquilo) 2 , en donde alquilo es como se define en la presente.

"Heteroalquilo" se refiere a un radical alquilo como se define en la presente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de ciano, 0RW, NRxRy, y -S(0)pRz (donde p es un entero de 0 a 2) , en el entendimiento de que el punto de fijación del radical heteroalquilo es a través de un átomo de carbono del radical heteroalquilo. Rw es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, arilo, aralquilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, carboxamido, o mono- o di-alquilcarbamoilo . Rx es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, arilo o aralquilo. Ry es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, arilo, aralquilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, carboxamido, mono1- o di- alquilcarbamoilo o alquilsulfonilo . Rz es hidrógeno (a condición de que n sea 0), alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, arilo, aralquilo, amino, mono-alquilamino, di-alquilamino, o hidroxialquilo . Ejemplos representativos incluyen, por ejemplo, 2- hidroxietilo, 2, 3- dihidroxipropilo, 2-metoxietilo, benciloximetilo, 2- cianoetilo, y 2-metilsulfonil-etilo . Para cada uno de los anteriores, Rw, Rx, Ry, y Rz pueden ser sustituidos, adicionalmente por amino, halo, flúor, alquilamino, di-alquilamino, OH o alcoxi. Adicionalmente, el prefijo que indica el número de átomos de carbono (por ejemplo, (C1-C10) se refiere al número total de átomos de carbono en la porción del grupo heteroalquilo exclusive de las porciones ciano, , -0RW, -NRxRy, o S(0)pRz. En una modalidad, Rx y Ry juntos son cicloalquilo o heterociclilo.

"Heteroarilo", se refiere a un radical monovalente, monociclico, biciclico o triciclico de 5 a 12 átomos en el anillo que tiene al menos un anillo aromático que contiene uno, dos, o tres heteroátomos en ,el anillo seleccionados de N, O, o S, siendo C los átomos del anillo restantes, en el entendimiento de que el punto de fijación del radical heteroarilo estará sobre un anillo aromático. El anillo heteroarilo es sustituido oppionalmente, de manera independiente con uno a ocho sustdtuyentes , preferiblemente uno, dos, tres o cuatro sustituyentes , seleccionados de alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, halo, nitro, ciano, hidroxilo, alcoxi, amino, acilamino, monoalquilamino, dialquilamino, haloalquilo, haloalcoxi, heteroalquilo, -COR (donde R es hidrógeno, alquilo, fenilo, o fenilalquilo, (CR' R") n-COOR (donde n es un entero de 0 a 5, R' y R" son independientemente hidrógeno o a.lquilo, y R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, fenilo o fenilalquilo) , o- (CR' R" ) n-CONRxRy (donde n es un entero de 0 a 5, R' y R" son independientemente .hidrógeno o alquilo, y Rx y RY son, independientemente entre si, hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, fenilo o fenilalquilo. En una modalidad, Rx y Ry juntos son cicloalquilo o heterociclilo . Más específicamente, el término heteroarilo incluye, pero no se limita a, piridilo, furanilo, tienilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, imidazolilo, isoxazolilo, pirrolilo, pirazolilo, piridazinilo, pirimidinilo, benzofuranilo, ' tetrahidrobenzofuranilo, isobenzofuranilo, benzotiazolilo, benzoisotiazolilo, benzotriazolilo, indolilo, isoindolilo, benzoxazolilo, quinolilo, tetrahidroquinolinilo, isoquinolilo, bencimidazolilo, bencisoxazolilo ?· benzotienilo, indazolilo, pirrolopirimidinilo, indolizinilo, pirazolopiridinilo, triazolopiridinilo, pirazolopirimidinilo, triazolopirimidinilo, pirrolotriazinilo, pirazolotriazinilo, triazolotriazinilo, pirazolotetrazinilo, hexaaza-indenilo, y heptaaza-indenilo y los derivados de éstos. A menos que se indique de otra manera, la distribución de los heteroátomos en el anillo puede ser cualquier distribución permitida por las características de enlace de los átomos del anillo constituyentes . "heterociclilo" o "cicloheteroalquilo" se refiere a un radical cíclico no aromático saturado o insaturado de 3 a 8 átomos en el anillo en el cual uno a cuatro átomos del anillo son heteroátomos seleccionados de 0, NR (donde R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, picloalquil-alquilo, fenilo o fenilalquilo) , P(=0)0Rw, o S(0)p ' (donde p es un entero de 0 a 2), siendo C los átomos del anillo restantes, en donde uno o dos átomos de C pueden ser remplazados opcionalmente por un grupo carbonilo. El anillo heterociclilo puede ser sustituido opcionalmente de manera independiente con uno, dos, tres o cuatro sustituyentes seleccionados de alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, halo, nitro, 'ciano, hidroxilo, alcoxi, amino, mono-alquilamino, di-alquilamino, haloalquilo, haloalcoxi, -COR (donde R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, !fenilo o fenilalquilo) , - (CR' R") n-C00R (n es un entero dé 0 a 5, R' y R" son independientemente hidrógeno o alquilo, y R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, fenilo o fenilalquilo), o - (CR' R" ) n-C0NRxRy (donde n es un entero de 0 a 5, R' y R" son independientemente hidrógeno o alquilo, Rx y Ry son, independientemente entre 1 sí, hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo; fenilo, o fenilalquilo) . Más específicamente el término heterociclilo incluye, pero no se limita a piridilo, tetrahidropiranilo, N- metilpiperidin- 3- ilo, N- metilpirrolidin- 3- ilo, 2- pirrolidin- 1- ilo, furilo, quinolilo, tienilo, benzotienilo, pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, pirrolidinio, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofuranilo, 1, 1- dioxo- hexahidro- 1?6- tiopiran- 4- ilo, tetrahidroimidazo [ 4 , 5-c] piridinilo, imidazolinilo, piperazinilo, y piperidin- 2- solamente y los derivados de éstos. El prefijo que indica el número de átomos de carbono (por ejemplo, C3-C10) se refiere al número total de átomos de carbono en la porción del grupo cicloheteroalquilo o heterociclilo exclusive del número de heteroátomos .

"Heteroacilo" se refiere a -CO-heteroalquilo, en donde heteroalquilo es como se define en la presente.

"Heteroaroilo" se refiere a -CO-heteroarilo, en donde heteroarilo es como se define en la presente.

"Rsuisulfoniloxi" se refiere a Rsui-S (=0) 2-0- e incluye alquilsulfoniloxi, ' heteroalquilsulfoniloxi, cicloalquilsulfoniloxi , ' heterociclilsulfoniloxi, arilsulfoniloxi y heteroarilsulfoniloxi en . donde Rsui es alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo respectivamente, y> en donde alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo son como se definieron en la presente. Ejemplos de alquilsulfoniloxi incluyen Me-S (=0) 2-0-, Et-S (=0) 2-0-, CF3-S (=0)2-0- y los similares, y ejemplos de arilsulfoniloxi incluyen : en donde Rar es H, metilo, o bromo.

"Sustituyentes" se refiere a, junto con sustituyentes particularmente descritos en la definición de cada uno de los grupos anteriores, ' aquellos seleccionados de: deuterio, -halógeno, -0R' , --NR'R", -SR' , -SiR'R"R'", 0C(0)R', -C(0)R', -C02R' , -CONR'R"', -0C(0)NR'R", -NR"C(0)R', -NR' -C (0) R"R' " , -NR"C(0)2R', -NH-C (NH2) =NH, -NR' C (NH) =NH, -NH-C (NH2) =NR' , -S(0)R', -S(0)2R', -S(0)2NR'R", -NR'S(0)2R", -CN, -N02, -R' , N3, perfluoro (C1-C4) alcoxi, y perfluoro (Ci-C4) alquilo, en un número que varia .desde cero al número total de valencias abiertas sobre el radical; y donde R' , R" y R' " son seleccionados independientemente de hidrógeno, Ci-8-alquilo, C3-6-cicloalquilo, C2-3-álquenilo, C2-8-alquinilo, arilo y heteroarilo no sustituidos,1 (arilo no sustituido)- Ci-4-alquilo, y ariloxi-Ci-4-alquilo no sustituido, arilo sustituido con 1 a 3 halógenos, Ci-8-alquilo no sustituido, Cl-8-alcoxi o grupos Ci-8-tioalcoxi, > o grupos aril-Ci_4-alquilo no sustituidos. Cuando R' y R" están fijados al mismo átomo de nitrógeno, pueden combinarse con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 3-, 4-, 5-, 6-, o 7 miembros. Por ejemplo, -NR' R" significa que incluye 1- pirrolidinilo y 4-morfolinilo. Otros sustituyentes adecuados incluyen cada uno de los sustituyentes arilo anteriores fijados a un átomo del anillo mediante una atadura alquil eno de 1 a 4 átomos de carbono. Dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo opcionalmente, pueden ser remplazados con un sustituyente de la fórmula -T2-C(0)— (CH2)q-U3-, en donde T2 y U3 son independientemente -NH-, -O-, -CH2- o un enlace simple, y q es un entero de 0 a 2. Alternativamente, dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo arilo o; heteroarilo pueden ser opcionalmente remplazados con un sustituyente de la fórmula -A-(CH2)r_B-, en donde A y B son independientemente -CH2-, -0-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(0)2NR'- o un enlace simple, y r es un entero de 1 a 3. Uno de los, enlaces simples del nuevo anillo asi formado opcionalmente puede ser remplazado con un doble enlace. Alternativamente, dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo opcionalmente pueden ser remplazados con un sustituyente de la fórmula - (CH2) S-X5- (CH2) t-, e!n donde s y t son independientemente enteros de 0 a 3> y X5 es -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(0)2- o -S(0)2NR'-. El sustituyente R' en -NR' - y -S(0)2 R'- es seleccionado de hidrógeno o Ci-6 alquilo no sustituido .

Ciertos compuestos utilizados en la presente invención poseen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos) o dobles enlaces, los , racematos, diastereómeros, isómeros geométricos, regioisómeros e isómeros individuales (por ejemplo, enantiómeros separados) todos están previstos para ser abarcados en el alcance; de la presente invención. Los compuestos de la presente . invención también pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen dichos compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden ser radiomarcados con isótopos radioactivos, como por ejemplo, y sin limitación, tritio(3II), iodo-125 (125I), o carbono-14 (14C) . Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sea radioactivos o no, están previstos para ser abarcados en el alcance de la presente invención.

A continuación se definen otros términos relacionados con esta invención. ! "Agudo" en el contexto de cánceres de sangre, se refiere al transcurso de tiempo relativamente corto en el cual estos cánceres pueden volverse extremadamente serios y aún conducir a la muerte de un paciente (por ejemplo, pueden ser fatales en tan poco como unas cuantas semanas si se dejan sin tratar) y se diferencian de cánceres de sangre "crónicos" los cuales no tienen efectos extremadamente debilitantes sobre o conducir a la muerte de un paciente durante muchos años. "leucemias agudas" se refiere a ALL, AML, y los similares. "Leucemias crónicas" se refiere a CLL, CML, mielofibrosis, y los similares.

"Leucemia linfoblástica .aguda (ALL)" se refiere a un cáncer de sangre, particularmente a un cáncer que afecta a los glóbulos blancos, y se caracteriza por hiperproliferación de linfoblastos,. En ALL, glóbulos blancos inmaduros, malignos se multiplican continuamente y son sobreproducidos en la médula ósea. Células de ALL desplazan a las células normales en la, médula ósea y pueden metastatizar a otros órganos. ALL es también conocido como leucemia linfocitica aguda y leucemia aguda de la niñez.

"Leucemia Mieloide (Mielogenosa ) Aguda (AML) " se refiere a un cáncer de la sangre en el cual glóbulos blancos conocidos como "células mieloides" se vuelven cancerosas. En AML, la médula ósea produce células sanguíneas anormales denominados "mieloblastos" , provocando el remplazo de células sanguíneas normales con células anormales y disruptando la función normal de la médula ósea. Con la producción anormal de células "blasto", la producción de células de médula ósea normales es inhibida, causando una' deficiencia de glóbulos rojos, glóbulos blancos normales1, y plaquetas, provocando efectos perjudiciales tales como, anemia, vulnerabilidad a hematomas y sangrado, y riesgo creciente de infección.

"Administrar" o "administración de" un fármaco a un paciente (y equivalentes gramaticales de esta frase) se refiere tanto a la administración 'directa, la cual puede ser administración a un paciente por un profesional médico o puede ser auto administración, como a administración indirecta, la cual puede ser el acto de prescribir un fármaco. Por ejemplo, un médico que instruye a un paciente para auto administrarse un fármaco y/o proporciona una prescripción a un paciente para un fármaco que le es administrado. 1 "Cáncer de sangre" se refiere a una malignidad hematológica que involucra hiperproliferación anormal o crecimiento maligno y/o metástasis de una célula de la sangre. Cánceres de sangre incluyen, sin limitación, leucemias agudas (AML y ALL) , leucémias crónicas (C L y CLL) , mielofibrosis idiopática (MF, . también conocida como metaplasia mieloide angiogénica ó AMM) , linfoma, síndrome mielodisplástico (MDS) , y mieloma múltiple.

"Trasplante de células madre de médula ósea" se refiere a remplazar una médula ósea de paciente con médula ósea nueva. En estos trasplantes, se usan fármacos de quimioterapia para destruir las células madre en la médula ósea (incluyendo aquellas que crean linfocitos enfermos), y luego, células madres de sangre de adulto saludable de un donador (trasplante alogénico) o de la médula ósea del propio paciente (trasplante autólogo) son infusionadas en la sangre, en donde se desplazan a la médula ósea y comienzan a elaborar células sanguíneas saludables.

"Leucemia linfocítica (o linfoide) crónica (CLL)" se refiere a un cáncer de sangre que afecta a linfocitos de células B. Las células B se originan en la médula ósea y se desarrollan en los ganglios linfáticos. En CLL, las células B crecen de manera descontrolada y se acumulan en la médula ósea y sangre, en donde desplazan a células de la sangre saludables. Cuando la enfermedad avanza, CLL da como resultado ganglios linfáticos, bazo e hígado inflamados.

"Leucemia mielogenosa crónica (CML)" se refiere a un cáncer de sangre en el cual la médula ósea produce granulocitos , algunos de los cuales nunca maduran en glóbulos blancos. Los glóbulos blancos "inmaduros" se denominan "blastos". Con el tiempo los granulocitos y blastos crecen fuera de control y dan como resúltado una deficiencia de plaquetas y glóbulos rojos en la médula ósea. Pacientes de CML pueden tener una mutación genética llamada el "cromosoma Filadelfia". Este cromosoma causa que la médula ósea elabore ciertas tirosina quinasas que' dan como resultado el desarrollo de granulocitos o blástos. Algunos pacientes de CML tienen una forma de la¦ enfermedad resistente a tratamiento con inhibidores dé tirosina quinasas. CML incluye, sin limitación, leucemia mielogenosa crónica, leucemia mieloide crónica, leucemia mielocitica crónica, y leucemia granulocitica crónica (CGL) .

"Terapia de combinación"1 se refiere al uso de dos o más fármacos en terapia, es decir, el uso de un profármaco activado por hipoxia como se describe en la presente junto con fármacos convencionales usados para tratar cáncer de sangre es una terapia de combinación. Administración en "combinación" se refiere a la administración de dos agentes (por ejemplo, un profármaco activado por hipoxia y un agente conocido para tratar un cáncer dé la sangre) en cualquier manera en la cual los efectos farmacológicos de ambos se manifiestan en el paciente al mismo tiempo. Por consiguiente, i la administración en combinación no requiere que una sola composición farmacéutica, la misma: forma de dosificación, o aún la misma ruta de administración sea usada para administración de ambos agentes o , que los dos agentes sean administrados al mismo tiempo precisamente. Por ejemplo, y sin limitación, se contempló que uno o más de los siguientes agentes pueden ser administrado ¦ en combinación con un profármaco activado por hipoxia de conformidad con la presente invención: alemtuzumab (Campan®, Genzyme) , amsacrina, asparaginasa (también' denominada crisantaspasa) , bendamustina, bortezomib, busulfan, carmustina, clorambucil, ciclofosfamida, citarabina (ara-C) , daunorubicin, dexametasona , doxorubicin , (Adriamycin®, Bedford laboratorios) , etoposida, fludarabina, hidroxiurea, agentes hipometilantes , incluyendo pero no limitándose a, azacitidina y decitabina, idarubicin, agentes inmunomoduladores que incluyen, sin limitación, lenalidomida y talidomida, agentes inmunosupresores , incluyendo sin limitación, globulina antitimocito (ATG) y ciclosporina , alfa-interferon 2b, mercaptopurina (6-MP), melfalan, : metotrexato, o fatuzumab (Arzerra®, GlaxoSmithKline and Genmab) , prednisona, rituximab (Rituxan®, Genentech) , teniposida, talidomida, tioguanina, topotecan, inhibidores de tirosina quinasa, incluyendo pero sin limitarse a imatinib, dasatinib, y nilotinib, y vincristina.

"Profármaco activado por¦ hipoxia" se refiere a un fármaco que es menos activo o inactivo bajo normoxia que bajo hipoxia o anoxia. Los profármacos activados por hipoxia incluyen fármacos que son activados por una variedad de agentes reductores y enzimas re'ductoras, incluyendo sin limitación enzimas que transfieren electrones individuales (tales como citocromo P450 reductasas) y enzimas que transfieren dos electrones (o que transfieren hidruros) (ver las Publicaciones de Solicitudes de Patentes U.S. Nos. 2005/0256191, 2007/0032455, y 2009/0136521, y Publicaciones de Solicitudes de Patentes PCT Nos1. 2000/064864, 2004/087075, y WO 2007/002931, cada una de las cuales se incorpora a la presente como referencia) . Los profármacos activados por hipoxia útiles en los métodos de la presente invención son compuestos de fórmula I, que incluyen pero no se limitan a compuestos donde Z3, como se definió por esa fórmula, es una porción 2- nitroimidazol . Ejemplos de profármacos activados por hipoxia particulares útiles en los métodos de la invención incluyen sin limitación, TH-281, TH-302, y TH308. Los métodos de síntesis y formulación de TH-302 y otros compuestos de fórmula I, se describen en la Publicación de PCT Nos. WO 2007/002931 y WO 2008/083101, cada una de las cuales se incorpora a la presente como referencia.

"Mieloma múltiple (MM) " se refiere a un cáncer de la sangre que tiene malignidad de células B clónales caracterizado por la acumulación' de células plasmáticas neoplásticas en la médula ósea. Hay varios tipos de mieloma múltiple, que incluyen mieloma múltiple indolente (SM ) , leucemia de células plasmáticas, mieloma no secretor, mieloma osteoesclerótico (síndrome de POEMS,) , plasmacitoma solitario (también llamado mieloma solitario del hueso) , y plasmacitoma extramedular .

"Síndrome mielodisplástico (MDS) " se refiere a un cáncer de la sangre que se presenta cuando la médula ósea detiene la producción de células 1 sanguíneas saludables y en vez de ellas produce células sanguíneas inmaduras que funcionan pobremente. Esto da como resultado la producción de demasiadas células sanguíneas defectuosas y no suficientes células sanguíneas saludables. En personas con MDS, el trastorno comienza cuando tiene lugar un defecto en una célula madre en la médula ósea. Esta célula madre, a su vez, produce células sanguíneas que portan el mismo defecto. Estas células defectuosas crecen hasta exceder el número de células sanguíneas saludables y viven más tiempo. Estas células defectuosas pueden también destruir a otras células madre demasiado pronto, dando como resultado conteo sanguíneo bajo. Las células anormales también desplazan a las células saludables. MDS puede progresar con el tiempo a leucemia mielogenosa aguda.

"Mielofibrosis" se refiere a un tipo de leucemia crónica que disrupta la producción normal de células sanguíneas del cuerpo. La mielofibrosis puede tener lugar por sí sola (mielofibrosis primaria) o puede tener lugar como un resultado de otro trastorno de médula ósea (mielofibrosis secundaria) . La mielofibrosis avanzada empeora progresivamente y eventualmente se pude desarrollar a una forma más seria de leucemia.

"Paciente" o "sujeto" se refiere a mamíferos, particularmente humanos, pero también a animales como simios, ganado, caballos, perros, gatos, ¦ y roedores que sufren de cáncer de la sangre.

"Recurrente o resistente > " se refiere a un tipo de cáncer de la sangre que es resistente al tratamiento con un agente, o responde al tratamiento con un agente pero regresa sin ser resistente a ese agente, !o responde al tratamiento con un agente pero regresa resistente a ese agente.

"Terapia de agente individual" o "monoterapia" se refiere a usar un solo fármaco para tratar una enfermedad, es decir, el uso de un profármaco activado por hipoxia como por ejemplo, TH-302 como el único agente químico para tratar un cáncer de la sangre. La administración de paliativos y/o vitaminas y/u otros agentes que son administrados para propósitos diferentes de tratar directamente la enfermedad pueden ser administrados en terapia1 de un agente individual. Un paciente que se somete a terapia de un agente individual puede también someterse a terapia de radiación y/o a cirugía.

"Quimioterapia estándar" se refiere al tratamiento con fármacos de conformidad con instrucciones de marcado de la FDA y/o buenas prácticas clínicas. La quimioterapia estándar es bien conocida por loes expertos en las artes médicas .

"TH-281" se refiere al compuesto de fórmula: ??-302" se refiere al compuesto de fórmula: TH-308" se refiere al compuesto de fórmula: "Cantidad efectiva terapéuticamente" de un fármaco o de un agente se refiere a una cantidad del fármaco o del agente que, cuando se administra a 1 un paciente con cáncer de la sangre, tendrá el efecto terapéutico previsto, por ejemplo, alivio, mejoramiento, paliación o eliminación de una o más manifestaciones del cáncer de la sangre en el paciente. Un efecto terapéutico no ocurre necesariamente por administración de una dosis, y . puede ocurrir solamente después de administración de una serie de dosis efectivas terapéuticamente. Por consiguiente, una cantidad efectiva terapéuticamente puede ser administrada en una o más administraciones.

"Tratar" o "tratamiento de" una condición o paciente se refiere a tomar medidas para obtener resultados benéficos o deseados, incluyendo, resultados clínicos. Para propósitos de esta invención, resultados clínicos benéficos o deseados incluyen, pero no se limitan a, alivio o mejoramiento de uno o más síntomas de cáncer de la sangre; disminución del grado de 1 enfermedad; retardo o desaceleración del progreso de la, enfermedad; mejoramiento, paliación, o estabilización del estado de enfermedad; u otros resultados benéficos.

Métodos de Tratamiento La hipoxia puede ser relevante para hematopoyesis de médula normal, la formación: de células sanguíneas a partir de células madre hematopoyéticas (Lennon y colaboradores, J. Cell Physiol., 2001; 187(3): 345-355; Morrison y colaboradores, J. Neurqsci., 2000; 20(19): 7370-7376; y Parmar y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 2007; 10 (13) : 5431-5436, cada uno de los cuales se incorpora a la presente como referencia) . La presente invención se origina en parte del descubrimiento de que la hipoxia es relevante en la etiología y patogénesis de hematopoyesis anormal, pero la administración de profármacos activados por hipoxia de fórmula I podría dirigirse selectivamente hacia hematopoyesis anormal, proporcionando un nuevo tratamiento para cánceres de sangre como leucemias, linfomas, y mieloma múltiple .

En un aspecto, la presente invención proporciona un método de tratar un cáncer de la sangre que comprende administrar una cantidad efectiva terapéuticamente de un profármaco activado por hipoxia de fórmula I. En varias modalidades, el profármaco activado por hipoxia es seleccionado del grupo que consiste de TH-281, TH-302, y TH-308. En una modalidad importante, el profármaco es TH-302. El profármaco activado por hipoxia ' es administrado en una cantidad efectiva terapéuticamente 'a un paciente en necesidad de dicho tratamiento, tratando así el cáncer de sangre. Cánceres de sangre ilustrativos susceptibles de tratamiento incluyen aquellos seleccionados de mieloma múltiple, una leucemia aguda, una leucemia ! crónica, una leucemia mielogenosa crónica en fase avanzada (CML) , síndrome mielodisplástico, un MDS de 'alto riesgo, MF, una mielofibrosis avanzada, una leucemia linfocítica crónica (CLL) , y una forma recurrente o resistente de cualquiera de las anteriores.

En una modalidad, el, profármaco activado por hipoxia administrado es HT-302. En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado como una infusión intravenosa de 30 minutos diariamente por 5 días cada 21 días. En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado en un ciclo de dosificaicón de una semana que incluye administración una vez diaria por 5 días seguidos por 2 dias de no administración de TH-302. En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmulai I es administrado por 3 o más de dichos ciclos. En varias modalidades, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado por hasta aproximadamente 25 a aproximadamente 50 de dichos ciclos. En una modalidad la cantidad efectiva terapéuticamente es una dosis diaria de aproximadamente 120 mg/m2 a aproximadamente 460 mg/m2. En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado una vez por semana. En una modalidad, la cantidad efectiva terapéuticamente es una dosis de una vez por semana de aproximadamente 575 mg/m2 a aproximadamente 670 mg/m2. En una modalidad, la cantidad efectiva terapéuticamente es una dosis de una vez por semana de aproximadamente 240 mg/m2 administrada en ciclos de 3 semanas. En varis modalidades, , la cantidad efectiva terapéuticamente es una dosis diaria de aproximadamente 240 mg/m2 a aproximadamente 480 mg/m2 administrada en los dias 1 y 8 de un ciclo de 3 semanas que , puede repetirse una, dos, tras, o más veces.

En otra modalidad, de conformidad con los métodos de la presente tecnología para tratar cánceres de sangre, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado en combinación con otro agente anticáncer. En una modalidad, el otro fármaco anticáncer es Velcade® (bortezomib, Millenium Pharmaceuticals) o lenalidomida (Revlimid®, Cellgene) . Cuando se administra en combinación con otro fármaco anticáncer, en una modalidad, TH-302 u oro compuesto de fórmula I es administrado antes de administrar el otro fármaco anticáncer. Por ejemplo, TH-302 puede ser administrado el día anterior a la administración del otro fármaco anticáncer, o si los dos fármacos son administrados en el mismo día, entonces TH-302 u otro compuesto de fórmula I puede¦ ser administrado desde al menos 30 minutos hasta 4 horas o aún 8 horas antes del otro fármaco anticáncer. Ver la Pub. De PCT No. O 2008/083101, incorporada a la presente como1 referencia. En varias modalidades, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado como una monoterapia por 1 a 2 ciclos antes de que la terapia de combinación sea iniciada por administración de un segundo fármaco anticáncer. \ En varias modalidades de monoterapias y terapias de combinación, cada ciclo de administración de TH-302 u otro compuesto de fórmula I es un ciclo de una semana incluyendo administración diaria por 5 días seguidos por 2 días de no administración de TH-302.

En varias modalidades, se emplea un método de la invención como un primer, segundo, tercer o última línea de tratamiento. Como se usa en la presente, una "primera línea" o "segunda línea" o "tercera línea" de tratamiento se refiere a un lugar en el orden de tratamiento con diferentes medicamentos u otra terapias recibidas por un paciente. Regímenes de tratamiento de primera línea son tratamientos dados primero, mientras que terapias de segunda o tercera línea se dan después de la terapia de primera línea o después de la terapia de segunda línea, respectivamente. Por consiguiente, terapia de primera línea es el "primer tratamiento para una enfermedad o condición". En picantes con cáncer, terapia de primera línea, algunas veces mencionada como "terapia primaria" o "tratamiento primario", puede ser cirugía, quimioterapia, terapia de radiación, o una combinación de estas terapias. Típicamente, a un paciente se le da un régimen de quimioterapia subsecuente (terapia de segunda o tercera línea) , ya sea porque el paciente no mostró una respuesta clínica positiva ? mostró solamente una subclínica en una terapia de primera o de segunda línea o mostró una respuesta clínica 1 positiva pero después experimentó una recurrencia, algunas veces con enfermedad ahora resistente a la terapia anterior que provocó respuesta positiva anterior.

En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado como terapia de un agente individual para tratar un cáncer de la sangre, incluyendo las formas recurrentes o resistentes de estos cánceres. En una modalidad, el TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado por 5 días consecutivos de un ciclo de 21 días, y la dosis está entre 120 y 575 mg/m2/dia, incluyendo por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/iri2/día. En algunas modalidades, las cinco dosis diarias son distribuidas durante 8 días. En una modalidad, se usa pimonidazol u otro marcador de hipoxia adecuado como un marcador de hipoxia y es infusionado durante 20 minutos a una dosificaicón de 0.5 g/m2 disuelto en solución salina al 0.9% aproximadamente diez y seis (+6) horas antes de una biopsia de médula ósea. La dosis máxima de pimonidazol puede conservarse en 1.0 gramo para pacientes con BSA > 2.0.

Se ha demostrado que estos métodos de la invención son eficientes en ALL y AML. Dos pacientes con AML tratados con TH-302 a la dosis diaria de 120 mg/m2 tuvieron enfermedad estable. Un paciente con ALL tratado con TH-302 a la dosis de 170 mg/m2/día tuvo una respuesta parcial basada en la normalización del conteo de blastós que se midió mediante ¦ biopsia de médula ósea después del ciclo 1. Un paciente con AML y un paciente con ALL tratados con TH-302 a la dosis de 240 mg/m2/día tuvo enfermedad estable después del ciclo 1. Un paciente con ALL tratado con TH-302 a la dosis de 330 mg/m2/día tuvo enfermedad estable después del ciclo 1.

En una modalidad, un paciente tratado de conformidad con la presente invención es seleccionado para tratamiento que comprende administrar un profármaco activado por hipoxia solo o en combinación 1 con otro agente, con base en el paciente que tiene el cromosoma Filadelfia; en otra modalidad, un paciente tal es diagnosticado como que tiene una leucemia crónica tal como una, CML o una leucemia aguda tal como ALL o AML. Los métodos adecuados para detectar el cromosoma Filadelfia son bien conocidos en el arte por un experto en la materia. Ver, por ejemplo, Sawyers, The New England Journal of Medicine, ¡ 1999, 340 (17 ): 1330-40, incorporada a la presente como refe'rencia. En otra modalidad, al paciente seleccionado se le administra una cantidad efectiva terapéuticamente del profármaco activado por hipoxia, tratando así el cáncer 1 del paciente de cáncer seleccionado. Los métodos de tratamiento de cáncer de la sangre como se describieron en la '( presente son útiles para dichos tratamientos. En una modalidad, el profármaco activado por hipoxia administrado es TH-302. : Los métodos de preparación de y composiciones farmacéuticas de profármacos activados por hipoxia, y otros métodos de tratar cáncer administrando varios profármacos activados por hipoxia de fórmula . I se describen en Duan y colaboradores, J. Med. Chem. :2008, 51, 2412-2420, y Publicaciones de PCT Nos. 2007/002931, 2008/083101, y 2010/048330, cada una de las cuales se incorpora a la presente como referencia. Otros métodos de tratamiento de cánceres de la sangre, que pueden¦ ser usados en combinación con los métodos de la presente invención son conocidos por el experto en el arte, y se describen, por ejemplo, en las descripciones de producto encontradas en el 2010 o ediciones más recientes del Physician's Desk Reference. Medical Economic Company, Inc., Oradell, NJ; Goodman & Gilman' s The pharmacological basis of therapeutics . , Eds . Hardman y colaboradores, McGraw-Hill, New Yor'k (US) 2011, 12ava. Ed., y en publicaciones del U.S. Food and Drugs Administration y del NCCN Guidelines (National Comprehensive Cáncer Network) . Dichos métodos descritos y conocidos pueden ser modificados apropiadamente por un experto en el arte, a la vista de esta descripción, para practicar los métodos de tratamiento de la presente tecnología.

En una modalidad, el TH-302 es proporcionado en frasquitos de 100 mg, liofilizado, y disuelto en D5 y administrado intravenosamente (IV). durante aproximadamente 30 a 60 minutos vía una bomba de1, infusión. El volumen de infusión depende de la dosis total dada (en mg) durante la infusión. Si <1000 mg están siendo infusionados , 500 ce de D5W son usados para infusión. Si la dosis total es >1000 ce, se usan 1000 ce de D5 para infusión.

Los métodos de la invención se describen ahora en el contexto cánceres de sangre particulares.

Leucemias Agudas : ALL y AML En una modalidad el cáncer de la sangre tratado de conformidad con los métodos de la invención es una leucemia aguda. En una modalidad, la leucemia aguda es una leucemia aguda recurrente o resistente. Para tratar ALL, AML, otras leucemias agudas, y los cánceres de sangre, se administra TH-302 u otro compuesto de fórmula I a una frecuencia y en cantidades descritas en la presente. En varias modalidades, TH-302 u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado como un agente individual, es decir, ningún fármaco previsto para tratar el cáncer de sangre es administrado contemporáneamente. Eñ varias modalidades, TH-302 u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado en combinación con otro (s) fármaco (s) de cáncer. En las terapias de combinación de la invención, el (los) otros fármaco (s) es (son) administrado ( s ) , en algunas modalidades, en frecuencias y .cantidades, y vía rutas, sustancialmente similares si no idénticas a las empleadas convencxonalmente .

En una modalidad, la leucemia aguda es leucemia linfoblástica aguda (ALL) . En una modalidad, la ALL es ALL recurrente o resistente. En una !modalidad, el paciente es inadecuado para tratamiento con¦ quimioterapia estándar o indisponible para sufrir quimioterapia estándar. En una modalidad, el paciente es positivo al cromosoma Filadelfia (P ).

En una modalidad, TH-302,u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado en combinación con una terapia de fármaco y/o sin fármaco usada convencionalmente para tratar ALL. Ejemplos de dichos fármacos incluyen, sin limitación, alemtuzumab (Campath®, Genzyme) , amsacrina, asparaginasa (también llamadacrsantaspasa) , ciclofosfamida, citarabina (ara-C) , daunorubicina, doxorubicina 1 (Adriamicin®, Bedford Laboratories), etoposida, mercaptopurina (6-MP), metotrexate, ofatuzumab (Arzerra®, GalxoSmithKline y Genmab) , rituximab (Rituxan®, Genentech) , teniposida, tioguanina, y vincristina. Un ejemplo de una terapia sin fármaco adecuada incluye, sin limitación, radiación y/o trasplante de células madres de médula ósea.

En una modalidad, un paciente con ALL es tratado administrando TH-302 durante 5 días consecutivos de un ciclo de 21 días, y la dosis es de entre 120 y 575 mg/m2/dia, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/dia. En algunas modalidades, las cinco dosis diarias se distribuyen durante 8 días.

En una modalidad, la leucemia aguda es leucemia mielogenosa aguda (AML) . En una !inodalidad, la ALM es ALM recurrente o resistente. En otra modalidad, la AML es leucemia promielosítica aguda. En una modalidad, el paciente es inadecuado para quimioterapia estándar o indispuesto a someterse a quimioterapia estándar. En una modalidad, el paciente es positivo al cromosoma Filadelfia (Ph) .

En una modalidad, TH-302 >u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado en combinación con una terapia de fármaco y/o sin fármaco usada convencionalmente para tratar AML. Ejemplos de dichos fármacos incluyen, sin limitación, 'citarabina, daunorubicina, etoposida, idarubicina, tioguanina,1 y vincristina. Un ejemplo de una terapia sin fármaco adecuada incluye, sin limitación, radiación y/o trasplante de células madres de médula ósea.

En una modalidad, un paciente con AML, incluyendo pero sin limitación leucemia prómielocítica, es tratado administrando TH-302 durante cinco' días consecutivos de un ciclo de 21 días, y la dosis es de entre 120 y 575 mg/m2/dia, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/dia. En algunas modalidades, las cinco dosis diarias se distribuyen durante 8 días.

Leucemias Crónicas: CML, ,CLL, y Mielofibrosis En otras modalidades, el cáncer de la sangre tratado es una leucemia crónica. En una modalidad, la leucemia aguda es una leucemia crónica recurrente o resistente. Para tratar CLL, CML, .otras leucemias crónicas y otros cánceres de la sangre, ??,-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado a una frecuencia y en cantidades descritas en la presente. En varias modalidades, TH-302 u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado como un agente individual, es decir sin que otro fármaco previsto para tratar el ' cáncer de la sangre sea administrado contemporáneamente. En varias modalidades, TH-302 u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado en combinación con otro(s) fármaco (s) anticáncer. En las terapias de combinación de la invención, se administra (n) el (los) otro(s) fármaco (s), en algunas modalidades, en frecuencias y cantidades, y vía rutas, sustancialmente similares si no idénticas a las empleadas convencionalmente .

En una modalidad, la leucemia crónica es leucemia mieloginosa crónica (CML) . En una modalidad, la CML es CML recurrente o resistente. En una modalidad, la CML está en fase acelerada o de blasto y/o es 'inadecuada para tratamiento con quimioterapia estándar o indispuesta para someterse a quimioterapia estándar.

En una modalidad, TH-302 u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado en combinación con una terapia de fármaco y/o sin fármaco usada convencionalmente para tratar CML. Ejemplos de dichos fármaco incluyen, sin limitación, inhibidores de tirosina quinasa, incluyendo pero sin limitarse á imatinib, dasatinib, y nilotinib, hidroxiurea, alfa-interferón 2b, y busulfan. Un ejemplo de una terapia sin fármaco adecuada incluye, sin limitación, radiación y/o trasplante de células madres de médula ósea.

En una modalidad, un paciente con CML, es tratado administrando TH-302 durante cinco días consecutivos de un ciclo de 21 días, y la dosis es de Centre 120 y 575 mg/m2/día, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/día. En algunas modalidades, las cinco dosis diarias se distribuyen durante 8 días.

En una modalidad, la leucemia crónica es leucemia linfocítica crónica (CLL) . En una 'modalidad, la CLL es CLL • , recurrente o resistente. En una' modalidad, el paciente es inadecuado para tratamiento con quimioterapia estándar o indispuesto para someterse a quimipterapia estándar.

En una modalidad, TH-3021 u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado en combinación con una terapia de fármaco y/o sin fármaco usada convencionalmente para tratar CLL. Ejemplos de dichos fármaco incluyen, sin limitación, inhibidores de alemtuzumab, bandamustina, clorambucil, ciclofosfamida, fludarabina, y rituximab. Un ejemplo de una terapia sin fármaco adecuada incluye, sin limitación, radiación y/o trasplante de células madres de médula ósea.

En una modalidad, un paciente con CLL, es tratado administrando TH-302 durante cinco días consecutivos de un ciclo de 21 dias, y la dosis es de entre 120 y 575 mg/m2/dia, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/dia. En algunas modalidades, lias cinco dosis diarias se distribuyen durante 8 dias.

En una modalidad, la leucemia crónica es mielofibrosis (MF) . En una modalidad, la mielofibrosis es mielofibrosis avanzada. En una modalidad la mielofibrosis es recurrente o resistente. En una modalidad, la mielofibrosis (ya sea diagnosticada o no y/o i tratada previamente) se caracteriza porque el paciente tiene uno o más de (1) concentración de hemoglobina de menos de 10 g/dL, (2) conteo plaquetario de menos de 100 x 109/L y/o conteo de células sanguíneas de menos de 4 x 109/L o mayor a 30 x 109/L, y (3) esplenomegalia mayor que o igual¦ a 10 cm abajo del margen costal izquierdo. En una modalidad el paciente es inadecuado para tratamiento con quimioterapia estándar o indispuesto para someterse a quimioterapia estándar.

En una modalidad, TH-302, u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado en combinación con una terapia de fármaco y/o sin fármaco usada convencionalmente para tratar MF. Ejemplos de dichos fármaco incluyen, sin limitación, hidroxiurea. Un ejemplo de una terapia sin fármaco adecuada incluye, sin limitación, radiación y/o trasplante de células madres de médula ósea.

Síndrome Mielodisplástico' En una modalidad, el cáncer de la sangre tratado de conformidad con los métodos de la invención es síndrome mielodisplástico (MDS) . En una modalidad, el MDS es MDS de alto riesgo, lo que significa que ,el paciente tiene una mas alta probabilidad de desarrollar AML, en comparación con MDS que no es de alto riesgo. En una modalidad, la MDS de alto riesgo es una leucemia mielomonocítica crónica recurrente o resistente (CML) caracterizada por' más de 5% de blastos de médula ósea. En una modalidad, la MDS es una anemia , resistente, caracterizada , usando la clasificación de la Organización Mundial de la Salud (WHO) , por exceso de blastos RAEB-1 o RAEB-2. Para tratar MDS y otros cánceres de la sangre, se administra TH-302 u otro compuesto de fórmula I a una frecuencia y cantidades descritas en la presente. En varias modalidades, TH-302 u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I, es administrado como un agente individual, es decir, sin que otro fármaco previsto para tratar el cáncer de la ^sangre sea administrado contemporáneamente. En varias modalidades, TH-302 u otro profármaco activado por hipoxia dé fórmula I es administrado en combinación con otro(s) fármaco (s) anticáncer. En las terapias de combinación de la invención, los otros fármacos son administrados, en algunas modalidades, en frecuencias y cantidades, y vía rutas, sustancialmente similares si no idénticas a las empleadas convencio'nalmente .

En una modalidad, TH-302 'u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado en combinación con una terapia de fármaco y/o sin fármaco usada convencionalmente para tratar MDS. Ejemplos de dichos fármacos incluyen, sin limitación,' citarabina, idarubicina, topotecan, agentes hipometiladores tales como azacitidina y decitabina, agentes inmunomoduladores como lenalidomida y talidomida, y agentes inmunosupresores como globulina antitimiocito (ATG) y ciclosporina . Un ejemplo de una terapia sin fármaco adecuada incluye, sin limitación, radiación y/o trasplante de células madres de médula ósea.

En una modalidad, un paciente con MDS es tratado administrando TH-302 por cinco diás consecutivos de un ciclo de 21 días, y la dosis es de entre 120 y 575 mg/m2/día, incluyendo, por ejemplo dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/dia. En algunas modalidades,, las cinco dosis diarias se pueden distribuir en 8 días.

Mieloma Múltiple En una modalidad, el cáncer de la sangre tratado de conformidad con los métodos de la invención es mieloma múltiple (MM) . En una modalidad, el MM es recurrente o resistente, incluyendo pero no limitándose a MM resistente a lenalidomida o talidomida y MM resistente a bortezomib. Para tratar MM y otros cánceres de la sangre, se administra TH-302 u otro compuesto de fórmula I ; a una frecuencia y en cantidades descritas en la presente. En varias modalidades, TH-302 u otro profármaco activado por hipoxia es administrado como un agente individual, es decir, sin que otro fármaco previsto para tratar el cáncer de la sangre sea administrado contemporáneamente.

En una modalidad de los' métodos de la invención para tratar MM y otros cánceres de la sangre, el TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado en los días 1, 4, 8 y 11 de un ciclo de 21 días, y 1 la dosis es de entre 120 y 575 mg/m2/dia, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/día.

En varias modalidades, TH-302 u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado en combinación con otros fármacos anticáncer. En las terapias de combinación de la invención, , los otros fármacos son administrados, en algunas modalidades, en frecuencias y cantidades, y via rutas, sustancialmente similares si no idénticas a las empleadas convenciónalmente .

En una modalidad, TH-302 u otro profármaco activado por hipoxia de fórmula I es administrado en combinación con una terapia de fármaco y/o sin fármaco usada convenciónalmente para tratar MM. Ejemplos de dichos fármacos incluyen sin limitación, ;bortezomib, carmustina, ciclofosfamida, dexametasona, doxorubicin, idarubicin, lenalidomida , melfalan, prednisona, talidomida, y vincristina. Un ejemplo de terapias sin fármaco adecuadas incluye, sin limitación, radiación¦ y/o trasplante de células madres de médula ósea.

En una modalidad, TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado como una terapia de combinación con bortezomib para tratar MM, incluyendo las formas recurrentes o resistentes de esta enfermedad, incluyendo pero no limitándose a pacientes que han fracasado previamente la terapia de bortezomib y/o lenalidomida (o talidomida) . En una modalidad, el TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado en los días 1, 4, 8, y 11 de un ciclo de 21 dias, y la dosis es de entre 120 y 575 mg/m2/dia, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 1 340, y 480 mg/m2/dia. El bortezomib es administrado como sé suministra comercialmente en las dosis aprobadas por la FDA de 1.0 mg/m2/dia o 1.3 mg/m2/dia en el mismo ciclo. En 1 una modalidad, TH-302 es administrado al menos 30 minutos a 4 horas, es decir, al menos 2 horas, antes del bortezomib. Ver la Publicación de PCT No. 2010/048330, incorporada a la presente como referencia.

En una modalidad, TH-302, es administrada como una terapia de combinación con lenalidomida y/o dexametasona para tratar mieloma múltiple, incluyendo las formas recurrentes o resistentes de esta enfermedad, incluyendo pero no limitándose a pacientes que han fracasado en la terapia de bortezomib y/o lenalidomida (o talidomida) . En una modalidad, el TH-302 u otro compuesto de fórmula I es administrado en los dias 1, 4, 8 y 11 de un ciclo de 21 dias, y la dosis es de entre 120 y 575 mg/m2/dia, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, y 480 mg/m2/dia. En esta modalidad, la 5 lenalidomida es administrada como se suministra comercialmente a la dosis aprobada de la FDA de 25 mg en los días 1 a 14, y dexametasona 1 es administrada como se suministra comercialmente a la dosis aprobada de la FDA de 40 mg en los días 1 a 4 y 9 a 12 del mismo ciclo. En otra modalidad, el TH-302 es administrado en los días 1, 4, 8, 11, 15, 18 de un ciclo de 28 días, y la dosis es de entre 120 y 575 mg/m2/dia, incluyendo, por ejemplo, dosis de 180, 240, 340, y 480 mg/m2/día; la lenalidomida es administrada como se suministra comercialmente a las dosis aprobadas de la FDA de 25 mg en los dias 1 a 21; y la dexametasona también es administrada como se suministra comercialmente a la dosis aprobada de la FDA de 40 mg en los1 dias l a 4, 9 a 12 y 17 a 20 del mismo ciclo.

Marcadores Hipóxicos En varias modalidades de la invención, se usa un marcador de hipoxia para seleccionar pacientes para tratamiento y/o para identificación de pacientes que responden (o no responden) a la terapia. Los marcadores de hipoxia se han desarrollado en el transcurso de estudios que muestran que la hipoxia promueve fenotipos de tumores sólidos más agresivos y se asocian con la resistencia a la radiación y a muchas quimioterapias, asi como también con la probabilidad de invasión de tumor y pobre supervivencia del pacientes. En particular, células, a pO2<10 mm de Hg resisten el efecto ionizante de radioterapia y el efecto citotóxico de quimioterapia. El foco necrótico hipóxico con células tumorales pseudoerapalizantes es uno de los aspectos que definen glioblastoma (GBM) , por ejemplo. Por consiguiente, se ha considerado una variedad de métodos para valorar el grado de hipoxia en xenotrasplantes y tumores de pacientes, y, de conformidad con la invención, estos métodos, modificados adecuadamente y practicados como se describe en la presente, se usan en ciertas modalidades de los métodos de la invención I para seleccionar pacientes y valorar la respuesta a la terapia. En general, la invención proporciona métodos para identificar pacientes adecuados1 para terapia con un profármaco activado por hipoxia en el cual se usa un marcador de hipoxia para identificar que ¡un cáncer de paciente es í hipóxico, y entonces el paciente es tratado con un profármaco activado por hipoxia, es decir, a mayor grado de hipoxia, más probablemente el paciente responderá a terapia con un profármaco activado por hipoxia. Los expertos en el arte apreciaran, a la vista de esta descripción, que estos métodos son útiles en todos los cánceres, no solamente en los cánceres de sangre.

Tradicionalmente, la norma de oro para medir hipoxia ha sido el uso de una sonda sensible al oxigeno polarográfico, la cual proporciona medición directa de la tensión de oxigeno tisular. No obstante, este método tiene limitaciones, como la incapacidad para diferenciar entre foco necrótico y viable, la inaccesibilidad de muchos tejidos tumorales, incluyendo los asociados con malignidades hematológicas de la médula ósea, y la falta de medios prácticos para aplicar la técnica en gran escala. Pimonidazol y EF5, ambos compuestos de 2- nitroimidazol , son marcadores de hipoxia que, via identificación inmunohistoquimica de pimonidazol o aductos de la proteína EF5, pueden dar un estimado confiable de hipoxia relevante radio-biológicamente. El oxigeno molecular compite con equivalentes reductores de una manera tal que el enlace de pimonidazol (y EF5) es inhibido efectivamente a concentraciones de oxígeno superiores a 14 micromolares . 1 Este método identifica confiablemente células hipóxicas viables específicamente (las células necróticas no pueden met'abolizar el pimonidazol o EF5) .

Otros marcadores hipóxicos que se han identificado en estudios pre-clínicos que son adecuados para uso de conformidad con los métodos de la invención incluye GLUT-1, HIF-la. CA-IX, LDH-A, osteopontin, marcadores de micro-ARN, que incluyen pero no se limitan a miR-210 y VEGF. Cada una de estas proteínas, o ARNs es sobre, regulada en hipoxia, y pueden ser detectadas mediante biopsia de tumor. Más convenientemente, no obstante, algunos de estos marcadores, es decir, CA-IX, LDH-A, osteopontin, marcadores de microARN, incluyendo pero no limitándose 1 a MiR-210 y VEGF, serán detectables en la sangre, suero, ' o plasma de un paciente, permitiendo el uso de una prueba de sangre simple, en vez de una biopsia de tumor, para ser usados para seleccionar pacientes para terapia de profármacos activados por hipoxia.

Además, los estudios han examinado la relación espacial entre hipoxia de tumor valorada mediante inmunohistoquimica y autoradiografia de [18F]-FDG y [18F]-FMISO e imagenologia PET, y pueden : emplearse estos compuestos y trazadores de PET similares, tales como [18F]-EF5, [18F]-FAZA, y [18F]-HX4, de conformidad con los métodos de la invención. Además de autoradiografia e imagenolgia PET se pueden usar también imagenologia MRI de hipoxia, en particular, puede usarse MRI mejorado por contraste dinámico (DCE-MRI) para identificar cánceres hipóxicos e identificar asi a pacientes ideales para tratamiento con profármacos activados por hipoxia.

Cuando se administró ' la Hipoxisonda®- 1- (clorhidrato de pimonidazol, comercializada por Hipoxyprobe, Inc.), ya sea IV u oralmente, es1 distribuida a todos los tejidos en el cuerpo incluyendo el cerebro pero solamente forma aductos con proteínas en las células que tienen una concentración de oxígeno inferior a 14 micromolares (equivalente a p02 de 10 mm de Hg a 37 grados Celsius) . La hipoxisonda-lMAbl es un anticuerpo monoclonal IgGl de ratón que detecta aductos de proteínas de la Hipoxisonda-1 en células hipóxicas. Típicamente, este reactivo es añadido a cada muestra de tejido. Se usan reactivos de anticuerpo secundario fluorescente o cromogénico, de conformidad con la invención para revelar donde se han formado aductos de la Hipoxisonda-1 en el tejido hipóxico.

Además de estos marcadores de hipoxia hay otros marcadores que pueden ser usados para seleccionar pacientes por terapia de profármacos activados por hipoxia. Los profármacos activados por hipoxia de la invención son activados por reductasas, de modo , que biopsias o pruebas de sangre muestran a un paciente tiene niveles superiores de una reductasa activadora, como POR (óxido reductasa P450) , SR (metionina sintasa reductasa) , ,y/o NOS (óxido nítrico sintasa) , demuestran que un paciente responderá más probablemente a la terapia de ' profármaco activado por hipoxia. Además, el daño al ÁDN inducido por estos profármacos activados por hipoxia es reparado por el sistema HDR (también conocido como HR) , y á niveles más bajos de la proteína en este sistema, incluyendo, pero no limitándose a BRCA, FANC, XPF (también conocido como ÉRCC4), XRCC2 y/o XRCC3, en la sangre o biopsia de tumor de un paciente, más probablemente el paciente responderá a la terapia de profármacos activados por hipoxia., Por consiguiente, los , métodos de la invención incluyen métodos para determinar si un paciente es adecuado para o es respondedor a un método terapéutico de la invención.

La presente invención ha1 sido descrita en sumario y en detalle, se ilustrada y no se limita mediante los siguientes ejemplos.

EJEMPLOS Ejemplo 1. Determinación In Vivo del Nivel de Hipoxia en Médula Ósea En este ejemplo, se demostró la naturaleza hipóxica de mieloma múltiple mediante la tinción de la médula ósea de ratones 5T33MM y no tratados previamente con el marcador de hipoxia exógena pimonidazol y el marcador de hipoxia endógena, factor inducible de hipoxia la (HIF-la) . Los resultados demuestran que células de mieloma múltiple residen en el entorno de médula ósea más 'hipóxico. Ver también, la referencia Hu y colaboradores, Blood 116(9): 1524-1527, 2010, incorporada a la presente como referencia. Se demostraron también los efectos de TH-302 sobre lineas celulares de , mieloma múltiple in vitro, que se, enfocan hacia una apoptosis y ciclo celular asi como también !a las rutas de señalización asociadas en mieloma múltiple. Además, se demostraron los efectos terapéuticos de TH-302 en el tratamiento de mieloma múltiple en el ratón 5T33vv.

Considerando el papel ¡potencial déla hipoxia en hematopoyesis y en el progreso ,de mieloma múltiple en la médula ósea, se midió el nivel de oxigeno en la médula ósea de ratones 5T33MM y no tratados previamente, el cual simula la enfermedad humana (Ver, Vanderkerken y colaboradores, Immunol. Rev. 2003; 194:196-206, incorporado a la presente como referencia) , mediante la valoración de marcadores de hipoxia endógenos y exógenos pimonidazol y HIF-la. Tanto el marcador exógeno pimonidazol como el marcador endógeno HIF-lafueron crecientes en la médula ósea de ratones 5T33 en contraste con la positividad débil' y esporádica de marcadores de hipoxia en ratones no tratados previamente, demostrando que una mayoría de células de mieloma múltiple se localiza en un nicho extensivamente hipóxico. Los resultados demostraron la naturaleza hipóxica de médula ósea de mieloma múltiple y normal. Ver también, Giuliani y colaboradores, "Oxygen tensión in the bone marrow (BM) of: parents with malignant and indolent monoclonal gammopathy: role of hypoxy and hipoxia-inducible factor (HIF) -la in 'the regulation of gene 1 expression and pro-angiogenic profiles of CD138+ cells", Blood. 2009 ; 114( 22 ) : 175-176, incorporado a la presente como referencia. Otros (Ria y colaboradores, "Hypoxia-inducible factor-1 en múltiple myeloma progression", Blood, 2009 ; 114( 22 ) : 720 y Azab y colaboradores, "Role of hypoxxa in the progression and disemination of múltiple myeloma", Blood, 2009; 114( 22 ) : 175, cada uno de los cuales se incorpora a la presente como referencia) han reportado que puede haber un papel para médula ósea hipóxica én otros cánceres de sangre como linfornas y leucemias.

El ciclo celular de células Go/Gl inducido por TH-302 se detiene en células 5T33vt en una manera selectiva de hipoxia. La detención del ciclo de células Go/Gl inducido por TH-302 dependió de la expresión de la ciclina Dl/2/3 subreguladora, CDK4/6, p21, p27 y pRb. La apoptosis especifica activada por TH-302 de una manera dependiente de la dosis en células LP-1 bajo hipoxia. TH-302 (5 µ?) indujo apoptosis en células LP-1. TH-302 (5 µ?) disminuyó la acumulación de HIF-?a en células RPMI-8226 hipóxicas. Se redujo la secreción de VEGFa por TH-302 en células 5T33vt. *p<0.05, **p<0 . 01 , ***p<0 . 001 , en comparación con 20 % de 02 (n=3) .

Ejemplo 2 . Pruebas in vitro de TH-302 Este ejemplo demuestra que el nicho hipóxico de mieloma múltiple puede servir también como un objetivo de tratamiento. Los datos demuestran que el profármaco activado por hipoxia, TH-302, exhibe potente citotoxicidad in vitro dependiente de la dosis en células de mieloma múltiple con selectividad hipóxica. Para demostrar los efectos inhibidores de crecimiento de TH-302 sobre células de mieloma múltiple se analizó la apoptosis y distribución de fase del ciclo celular después del tratamiento con el fármaco. El análisis del ciclo celular mostró que HT-302 indujo 1 la detención del ciclo de células Go/Gl bajo condiciones hipóxicas en células Karpas-707, LP-1, MMS1, y RPMI-8226. La tinción Western reveló adicionalmente que el efecto de TH-302 sobre la maquinaria del ciclo celular fue mediado por ,1a expresión de la ciclina Dl/2/3 subreguladora, CDK4/6, p21cip-l, p27kip-l y pRb, mientras que la expresión de CDK2 permaneció sin perturbación, como se observó en células de mieloma múltiple RPMI-8226, LP-1, MMS1 y Karpas-707: Además, el análisis de la citometria de flujo demostró que la apoptosis dependiente de la dosis inducida por TH-302 tanto en células de mieloma múltiple de roedor y humano en condiciones hipóxicas, se observaron resultados similares en .células RPMI-8226, 5T33vt, MMS1, Karpas-707. La tinción Western adicionalmente demostró quela apoptosis activada por TH-302 fue mediada por la subregulación de las proteínas antiapoptóticas BCL-2 y BCL-xL, así como también la subregulación de la expresión de la proteína proapoptótica escindida caspasa-3, 8, 9 y ADP-ribosa polimerasa (PARP) . En contraste con la toxicidad específica de hipoxia, TH-302 muestra muy baja toxicidad en condiciones normóxicas aún a concentraciones altas, se encontraron también resultados similares en células RPMI-8226, 5T33vt, MMS1, Karpas-707. Además, se demostró que la producción de HIF-la, un regulador de la respuesta hipóxica (Hose y colaboradores, "Induction of angiogénesis by normal and malignant plasma cells", Blood. 2009; 114 ( 1 ): 128-143 , incorporado a la presente como referencia), disminuyó con el tratamiento de TH-302. La expresión de HIFla en una conducción hipóxica se redujo después de exposición a TH-302 (se encontraron también resultados similares en células 5T33vt, LP-1, Karpas-707), por consiguiente, la secreción de VEGFa, la cual es un gen objetivo en la dirección de la expresión genética de HIF , disminuyó también significativamente. Al emplear un grupo de mezclas gaseosas definidas (0%, 1%, 1.25%, 1.5%, , 2%, 3%, 20% de 02) para tratamiento del fármaco de las células de mieloma múltiple, se probó la activación de Th-302 dependiente de la concentración de oxígeno en células de mieloma múltiple RPMI-8226, LP-1, MMS1 y 5T33vt. Los resultados indicaron que, bajo estas condiciones de prueba, el umbral de activación de Th-302 fue < a 1.5% de 02 - Cuando ¡ la concentración de O2 se redujo a 0%, la fracción de células apoptóticas incrementó a aproximadamente 70 a 75%.

Ejemplo 3. Administración In vivo de TH-302 para el Tratamiento de Mieloma Múltiple TH-302 de prueba en el ratón 5T33MMvv demostró que el tratamiento in vivo con TH-302 mejoró muchos parámetros patológicos. Ratones 5T33MMvv fueron tratados profilácticamente con TH-302 por 3 semanas. A partir del día 1, se observó lo siguiente. ' TH-302 indujo apoptosis significativa de células de mieloma múltiple (para TH-302 administrado a 12.5 mg/kg 2.5 veces; a 25 mg/kg, 2.1 veces; y a 50 mg/kg, 3.1 veces), la secreción paraproteínica disminuyó (a 12.5 mg/kg, disminuyó 32%; a 25 mg/kg disminuyo 77%; y a 50 mg/kg, disminuyó 54%), y la densidad de microvasos (MVD) disminuyó significativamente (a 12.5 mg/kg, disminuyó 19%; a 25 mg/kg, disminuyó 20%; y a 50 mg/kg, disminuyó 26%) en la médula ósea ratón 5T33MMvv tratado, en comparación con ratones 5T33MMvv tratados con vehículo. Por consiguiente, el efecto citotóxico de TH-302 sobre ¡el cáncer se asoció con la naturaleza hipóxica de células de mieloma múltiple en la médula ósea. Además, los datos de ratones sin tratamiento previo tratados con TH-302 no mostraron toxicidad sustancial en términos de peso corporal, hemoglobina (HGB) , conteo de glóbulos rojos (RBC) , conteo de glóbulos blancos (WBC) , hematocritos (HCT) y densidad : de microvasos (MVD) , en comparación con ratones sin tratamiento previo tratados con vehículo, indicando además el efecto activado por hipoxia específico de TH-302 y la hipoxia limitada en la médula ósea normal .

Ejemplo 3. Prueba in vitro de TH-302 en combinación con bortezomib Este ejemplo demuestra que la combinación de TH-302 y bortezomib induce sinérgicamente apoptosis, como se pone en evidencia al inducir escisión de poli (ADP-ribosa) olimerasa y caspasa-3/8/9. Para determinar adicionalmente el mecanismo de inducción de apoptosis mediante esta combinación, se probó el efecto de Th-302, bortezomib y la combinación sobre proteínas de la familia Bcl-2 antiapoptóticas y proapoptóticas usando inmunotincióh . Los resultados mostraron que el miembro BH-3 o proapoptóticp Noxa y la escisión de BID fueron inducidos tanto por bortezomib como por TH-302. Además, la expresión de Bcl-2 antiapoptótico y Bcl-xL fue decreciente tanto por TH-302 como por bortezomib; no obstante, cl-1 antiapoptótico se acumuló con bortezomib pero disminuyó con TH-302, indicando que Th-302 puede superar la resistencia a bortezomib vía Mcl-1 objetivo.

Ejemplo 4. Administración in vivo de TH-302 en combinación con bortezomib para el tratamiento de mieloma múltiple La combinación de TH-302! y Bortezomib probada en el modelo de ratón 5T33MMvv demuestra que el tratamiento de combinación in vivo mostró mejoramiento impresionante en múltiples parámetros de la enfermedad, indujo disminución significativa de la carga de tumor, secreción de paraproteina y densidad de microvasos (MVD) , en comparación con ratones 5T33MMvv tratados con TH-302 o bortezomib solos (p<0.01).

Tomados juntos, los resultados demuestran células de mieloma múltiple residen en un microentorno de médula ósea extensivamente hipóxico. El tratamiento activado por hipoxia con TH-302 como una monoterapia muestra eficiencia en el tratamiento de mieloma múltiple tanto in vivo como in vitro. Los conclusiones en esta prueba indican que dirigirse hacia el nicho hipóxico de la médula ósea proporciona una estrategia de tratamiento útil y nueva para mieloma múltiple y otros cánceres de sangre, donde1 la región hipóxica de la médula ósea puede producir la formación de células madres de cáncer y a varios cánceres de sangre.

Ejemplo 5. Administración clínica de TH-302 para el Tratamiento de Leucemia Avanzada 1 Se condujeron investigaciones clínicas para determinar la seguridad, tolerancia y respuestas de la enfermedad relevantes clínicamente de TH-302 en pacientes con leucemias agudas, leucemia mielogenosa crónica de fase avanzada (CIVIL) , síndromes mielodisplásticos de alto riesgo, mielofibrosis avanzada o leucemia linfocítica crónica resistente o recurrente (CLL) . Se administró TH-302 como una infusión intravenosa de 30 a 60 minutos diariamente durante 5 días seguidos por dos semanas sin terapia. Cuando fuera necesario, los 5 días de dosificación pudieran distribuirse durante 8 días. Pacientes que completaron exitosamente un ciclo de tratamiento de 3 semanas sin evidencia de toxicidad significativa o enfermedad progresiva relacionada con el tratamiento continuaron el tratamiento y pudieron recibir tratamiento por hasta seis ciclos.

Se trataron 21 pacientes en el estudio a dosis diarias de TH-302 que variaron desde 120 mg/m2 a 460 mg/m2.

Todos los sujetos tuvieron ya sea AML o ALL y generalmente habían recibido múltiples terapias previas para su enfermedad antes de enrolarse para el estudio. Dos pacientes con AML tratados con TH-302 a la dosis de 120 mg/m2 tuvieron enfermedad estable, incluyendo un paciente que tuvo su dosis escalonada a 170 mg/m2/día después del ciclo 2 cuando su conteo de blastos periféricos disminuyó después de cada ciclo de TH-302, mientras que sus contep plaquetario fue mejorando gradualmente.

Un paciente con ALL tratado con TH-302 a la dosis de 170 mg/m2 tuvo una respuesta parcial basada en la normalización del conteo de blastos de la médula ósea que se midió mediante biopsia de la médula ósea después del ciclo 1. Un paciente con AML y un paciente con ALL tratado con TH-302 a la dosis de 240 mg/m2/dia tuvo enfermedad estable después del ciclo 1. Un paciente con ALL tratado con TH-302 a la dosis de 330 mg/m2/día tuvo enfermedad estable después del ciclo 1.

Estos resultados muestran que los métodos de la invención son efectivos en el tratamiento de cánceres de la sangre .

Aunque se han ilustrado y descrito ciertas modalidades en los ejemplos expuestos anteriormente, se comprenderá que pueden hacerse cámbios y modificaciones en los métodos expuestos anteriormente para práctica de la presente tecnología de conformidad con el experto en el arte sin alejarse de la presente tecnología en sus aspectos más amplios como se define en las siguientes reivindicaciones.

Se ha descrito amplia y genéricamente la invención.

Ada uno de los agrupamientos subgenéricos y especies más estrechas que caen en la descripción genérica también forma parte de la invención. Esto incluye la descripción genérica de la invención con una condición o limitación negativa que remueve cualquier tema a ¡ partir del género, independientemente de si o no el material excisado es citado específicamente en la presente. ' Además, donde se : describen aspectos o características de la invención en términos de grupos de Markush, los expertos en el arte reconocerán que la invención se describe también así en términos de cualquier miembro i individual o subgrupo de miembros del grupo de Markush.

Claims (11)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito la ' presente invención, se considera como novedad y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. - Un método de tratar un cáncer de sangre caracterizado porque comprende ; administrar una cantidad efectiva terapéuticamente de un profármaco activado por hipoxia seleccionado del grupo que consiste de TH-281, TH-302, TH-308 a un paciente en necesidad de dicho tratamiento, tratando de ese modo el cáncer.

2. - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el cáncer de sangre tratado es seleccionado del grupo que consiste de mieloma múltiple, una leucemia aguda, una leucemia mieloginosa crónica en fase avanzada (CML) un síndrome mielodisplástico de alto riesgo ( DS) , una mielofibrosis avanzada ( F) , o una leucemia linfocítica crónica resistente o recurrente (CLL) .

3. - El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el cáncer' de sangre tratado es una leucemia aguda que es ya sea una leucemia aguda recurrente o una resistente.

4. - El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el cáncer de sangre tratado es una leucemia aguda que es ya sea leucemia linfoblástica aguda resistente o recurrente (ALL) o bien una leucemia mielogenosa aguda resistente o recurrente (AML) .

5. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el paciente es inadecuado para quimioterapia estándar.

6. - El método de , conformidad con las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el profármaco activado por hipoxia administrado es TH-302.

7. - El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque TH-302 es ( administrado como terapia de agente individual por cinco días consecutivos, o cinco de ocho días consecutivos, de un cicló de 21 dias, y la cantidad efectiva terapéuticamente es 120 mg:/m2/dia a 575 mg/m2/dia.

8. - El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque TH-302 es , administrado como terapia de agente individual para tratar ,mieloma múltiple, en los dias 1, 4, 8 y 11 de un ciclo de 21 dias, y la cantidad efectiva terapéuticamente es 120 mg/m2/dia a 575 mg/m2 /día.

9. - El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque TH-302 és administrado como una terapia de combinación que comprende adicionalmente bortezomib para tratar mieloma múltiple, en los días 1, 4, 8, y 11 de un ciclo de 21 días, y la cantidad efectiva terapéuticamente es 120 mg/m2/dia a 575 mg/m2/dia.

10. - El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque TH-302 es administrado como una terapia de combinación que comprende adicionalmente lenalidomida y dexametasona para tratar mieloma múltiple, en los días 1, 4, 8, y 11 de un cicló de 21 días, y la cantidad efectiva terapéuticamente es 120 mg/m2/día a 575 mg/m2/dia.

11. - El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque TH-302 es administrado como una terapia de combinación que ' comprende adicionalmente lenalidomida y dexametasona para tratar mieloma múltiple en los dias 1, 4, 8, 11, 15, 18 de un ciclo de 28 días, y la cantidad efectiva terapéuticamente es 120 mg/m2/dia a 575 mg/m2/dia.