MX2010008894A

MX2010008894A - Combinacion de vitamina d y 25-hidroxi-vitamina d3.

Info

Publication number: MX2010008894A
Application number: MX2010008894A
Authority: MX
Inventors: Swen Wolfram; Neil Robert Buck; Bruno H Leuenberger; Wouter Claerhout; Elisabeth Stoecklin; Kai Urban
Original assignee: Dsm Ip Assets Bv
Priority date: 2008-02-13
Filing date: 2009-02-12
Publication date: 2010-11-05
Also published as: JP5509503B2; US20160324877A1; CN106214683A; CN101951920A; KR20150139629A; IL207589A; JP2011512342A; BRPI0907952B1; AU2009214049A1; WO2009101132A1; AU2009214049B2; BRPI0907952A2; EA201001283A1; EP2240183A1; IL207589A0; KR20100126375A; US20120196057A1

Abstract

Se describen composiciones que comprenden Vitamina D (coleocalciferol y/o ergocalciferol) y 25-OH D3 (calcifediol), y uso de estas composiciones para afectar al menos la concentración, biodisponibilidad, metabolismo, o eficiencia de la vitamina D en un humano. Se describen también formas y dosificaciones de la composición, así como también procesos para la fabricación de una formulación secada por aspersión.

Description

COMBINACIÓN DE VITAMINA D Y 25-HIDROXI-VITAMINA D CAMPO DE LA INVENCION La presente invención concierne a una composición que comprende Vitamina D (colecalciferol y/o ergocalciferol ) y 25-hidroxi- Vitamina D3 ( calcifediol ) , y uso de j esa composición para afectar al menos a la concentración, biodisponibilidad, metabolismo, o eficiencia de la Vitamina D.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La vitamina D (por ejemplo, ergocalciferql y I colecalciferol ) es un grupo de compuestos solubles en grasa definidos por su actividad biológica. Una deficiencia de vitamina D causa raquitismo en niños y osteomalacia en adultos. Pero puede tener lugar toxicidad después de ingesta crónica de más de 100 veces la ración diaria recomendada ^ RDA, siglas del ingles Recommended Daily Allowance) (es decir,j 5 - 15 µg o 200-600 UI de vitamina D) por varios meses. Para la I vitamina D, "El umbral para toxicidad es de 500 a 600 mcg/kg de peso corporal por día. En general, los adultos no deben de consumir más de tres veces la RDA por periodos de tiempo prolongados" (Garrison y Somer, The Nutrition Desk Reference, Tercera Ed., Mc-Graw-Hill , pág. 82, 1997). Puede tener lugar hipercalcemia a una concentración sanguínea 25- hidroxi- vitamina D mayor que 375 nmoles/L. Más recientemente, se identificó que un nivel superior seguro de Vitamina D es al menos 250 µ9/ ?3 (10?00 UI) (Hathcock y colaboradores, Am. J. Clin. Nutr. 85:6-18, 2007). Sé ha mostrado que la ingestión de ésta como un suplemento i dietético da como resultado una concentración sanguínea de aproximadamente 200 nmoles/L de 25-hidroxi- vitamina D. | La vitamina D es una pro-hormona que se ha i i hidroxilado en el hígado para producir 25-hidroxi-vitamina D í i ( calcifediol ; 25-OH vitamina D; 25-OH D) , la cual luego sufre i otra hidroxilación en el riñon y otros tejidos para producir 1, 25- dihidroxi- vitamina D, la forma hormonal activa de la i vitamina D. 1, 25- dihidroxi- Vitamina D es liberada en la sangre, enlaza a la proteína que enlaza a la vitamina D (DBP) , y es transportada a tejidos objetivo. El enlace entre 1, 25- dihidroxi-vitamina D y el receptor de la vitamina D permite al complejo actuar como un factor de transcripción en los núcleos de las células. i La deficiencia de vitamina D puede promover la resorción ósea. Puede también modular la función dej los sistemas cardiovascular, inmune, y muscular. Estudios 1 j epidemiológicos encontraron asociación entre la ingesta de í vitamina D y su efecto sobre la presión sanguínea jo el metabolismo de glucosa. La actividad de la vitamina D j está bajo control retroalimentario negativo por medio de la hormona de la paratiroides . Se han administrado ambas, la vitamina D y la 25-OH D3 como productos farmacéuticos en el pasado, la vitamina D, está, por supuesto, ampliamente disponible; 25-OH D3 ¦ fue previamente comercializada en U.S. A. por Organon USA baj el nombre "CALDEROL", pero actualmente está en la lista de fármacos discontinuados de la FDA. Era una cápsula de gelatina que contenia aceite de maíz y 25-OH D3. 1 Una forma liquida de 25-OH D3 es actualmente comercializada en España por FAES Farma bajo el nombr;e de "HIDROFEROL" en una solución oleosa. j Se ha usado en la alimentación animalj la combinación de vitamina D y 25-OH D3. 25-OH D3 para uso én la alimentación está comercialmente disponible de DSM bajo el nombre "ROVIMIX HY-D". I Tritsch y colaboradores (US 2003/0170324) desóribe una composición en pre-mezcla alimentaria de al menos 25-OH i D3 en una cantidad entre 5 % y 50 % (en peso) disueltja en aceite y un antioxidante, un agente encapsulador de goticulas de 25-OH D3 y aceite, y un aditivo nutritivo (por ejemplo, Vitamina D3) . La pre-mezcla puede ser añadida a alimentos aviar, porcino, canino o felino. Esta composición estabiliza 25-OH D3 contra la oxidación. ¡ Simoes-Nunes y colaboradores (US 2005/0064018) describen la adición de una combinación de 25-OH vitamina D3 y Vitamina D3 a la alimentación animal. En particular, aproximadamente 10 µg/kg a aproximadamente 100 µg/kg de 25-OH i Vitamina D3 y aproximadamente 200 Ul/kg a aproximadamente 4,000 ül/kg de Vitamina D3 son añadidos a alimento porcino. Esta adición mejora la resistencia ósea del cerdo. ' Stark y colaboradores (US 5,695,794) describieron la adición de una combinación de 25-OH Vitamina D3 y Vitamina D3 a alimento aviar para mejorar los efectos de dicondroplasia tibiana. Borestein y colaboradores, US 5,043,170 describen la combinación de Vitamina D3 y ya sea 1- alfa- hidroxi-colecalciferol o 1-alfa, 25- dihidroxi-colecalciferol 'para mejorar la resistencia del huevo y la resistencia de las patas en gallinas ponedoras y en gallinas de edad avanzada. Chung y colaboradores, O 2007/059960 describen que marranas alimentadas con una dieta que contenga tanto í Vitamina D3 como 25- hidroxi- Vitamina D3 habían mejorado el status de salud general, estructura corporal, tamaño y salud de las carnadas, y otros parámetros de producción. También se describe un suplemento alimenticio humano con 25-OH D3, j pero I su intervalo de dosificación, 5 - 15 microgramos por kg de peso corporal, el cual iguala a una dosificación diaria extremadamente alta de 300-900 microgramos por humano es muy alto .

Los documentos anteriormente mencionados no exponen o sugieren el uso de una combinación de Vitamina D y 25-QH D3 como un producto farmacéutico, alimenticio, o nutracéútico i para humanos o sus efectos sobre la salud humana. Formas y dosificaciones de esta composición proporcionan efectos deseables sobre el uso de la Vitamina D en humanos ¦ (por I ejemplo, farmacocinéticos) . Las cinéticas de dosificación tanto con vitamina D como con 25-OH D3 en humanos no han ¡ sido estudiadas previamente a nuestro conocimiento. Se describen posteriormente otras ventajas y mejoras o serán obvias a I partir de la presente descripción.

I SUMARIO DE LA INVENCION j Sorprendentemente se encontró que el incremento de 25-OH D en plasma incrementa sinérgicamente cuando aj una persona se le administra una combinación de Vitamina D y 25- ¡ OH D3. Este efecto es observado rápidamente, y es! más pronunciado después de aproximadamente las primeras 1 seis horas. Adicionalmente, el incremento en los niyeles plasmáticos es sostenido durante aproximadamente 206 horas. Por consiguiente, esta invención comprende una combinación de Vitamina D ( colecalciferol y/o ergocalciferol ) y 25-OH D3 ( calcifediol ) para uso como un producto farmacéutico en humanos. Un posible uso de una composición tal es como un agente anti-osteoporosis, aunque la combinación de esta invención es adecuada para cualquier indicación en donde 'este implicada una deficiencia en Vitamina D o 25-OH D. ; i Adicionalmente, se encontró, de conformidad; con esta invención que la combinación de 25-OH D3 y Vitamina D regula sinérgicamente (ya sea sobre-regula o sub-regula) un I número sinérgico de genes responsables de la Vitamina D, incluyendo un alto número de genes que no son responsablés en i la presencia de Vitamina D ni de 25-OH D3 solas. Este es un resultado sorprendente, que no es explicado por el módelo actual del metabolismo de la Vitamina D, el cual postula que i virtualmente toda la vitamina D es primero metabolizada en 25-OH D. I La combinación, de conformidad con esta invención, I proporciona dos ventajas significativas: ' 1) Da como resultado una respuesta plasmática I sinérgica y rápida de 25-OH D; 2) Conduce a una constante inesperadamente prolongada y pronunciada de los niveles plasmáticos de 25-OH D. Estos son objetivos especialmente importantes ! del tratamiento de la deficiencia de Vitamina D: una corrección rápida del status sub-óptimo de Vitamina D y ' una concentración plasmática estable y prolongada para asegurar suficiente suministro de todos los tejidos dependientes de la Vitamina D. Otro aspecto de esta invención es un alimento, alimento funcional, suplemento alimenticio o nutracéutico para consumo humano que contenga 25-OH D3, y preferiblemente una combinación de Vitamina D y 25-OH D3. j BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS ! La Figura 1, muestra Diagramas de Venn de grupos de sondas expresadas diferencialmente por genes de roedor 'para i los grupos con los miembros traseros descargados (grupo "HU") y los de tratamiento (Vitamina D3, 25-OH D3 o la combinación) . La Figura 2, muestra Diagramas de Venn de grupos de i sondas expresadas diferencialmente por genes entre el grupo de tratamiento con 25-OH D3 y el grupo de tratamiento con la combinación de 25-OH D3 + Vitamina D3. La Figura 3, muestra Diagramas de Venn de grupos de sondas expresadas diferencialmente para genes entre el grupo I de tratamiento con Vitamina D3 y el grupo de tratamiento con la combinación de 25-OH D3 + Vitamina D3. < La Figura 4, es un análisis de enriquecimiento (efectuado con GeneGo MetaCore) del grupo de 1745 sondas expresadas diferencialmente por genes entre el grupo HU y el grupo que recibió un tratamiento con la combinación de 25-OH D3 y Vitamina D3. En dicha gráfica, en la ordenada "Y" situada en el lado derecho, los significados son los siguientes: 1 = Desarrollo_desarrollo de músculo esquelético, 2 = Proteolisis_ubiquitina-proteolisis proteasómica , !3 = Transcripción_procesamiento de mARN, 4 = Ciclo celular_Gl-S, 5 = Translación_regulación de inicio, 6 = Daño de ADN_£unto de control, 7 = Transcripción_regulación transcripcionad de receptores nucleares, 8 = Citoesqueleto_regulación dé la redistribución del citoesqueleto, 9 = Adhesión celular_adhesión de matriz celular mediada por integriná, 10 = Inflamación_señalización por anfoterina. La Figura 5, muestra Diagramas de Venn de grupos de sondas expresadas diferencialmente en el grupo de tratamiento con 25-OH D3 + Vitamina D3 y grupos de sondas para genes de músculo esquelético seleccionados. I La Figura 6, muestra Diagramas de Venn de grupos de sondas expresadas diferencialmente en el grupo de tratamiento con 25-Hidroxi-vitamina D3 y grupos de sondas por genes de músculo esquelético seleccionados. j La Figura 7, muestra Diagramas de Venn dei los j grupos de sondas expresadas diferencialmente en el grupo de I tratamiento con Vitamina D3 y los grupos de sondas por genes de músculo esquelético seleccionados. j DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Como se usa en el transcurso de la especificación y reivindicaciones, el término "Vitamina D", significa ya sea la Vitamina D3 ( colecalciferol ) y/o la Vitamina1 D2 ( ergocalciferol ) . Los humanos son incapaces de elaborar la Vitamina D2 (ergocalciferol ) , pero son capaces de usarla Icomo i una fuente de Vitamina D. La Vitamina D2 puede ! ser I sintetizada por varios vegetales y a menudo es usada ' en I suplementos con Vitamina D como un equivalente a la Vitamina D3. ? j "Metabolito de Vitamina D", significa cualquier I metabolito de Vitamina D diferente de 25-Hidroxi-vitamina D3. f "25-OH D3", se refiere específicamente a \ 25- hidroxi-vitamina D3. j "25-OH D", se refiere al metabolito 25-hidroxilado ya sea de la Vitamina D2 o bien de la Vitamina D3, la cuál es i la forma circulante principal encontrada en plasma. En una modalidad, se proporciona una composición farmacéutica adecuada para uso humano, la cual comprende ! Vitamina D, 25-OH D3, y un antioxidante aceptable j farmacéuticamente, y al menos un portador aceptable farmacéuticamente en forma de tableta, cápsula, o inyectable. Esta invención se dirige también hacia ¡ una composición farmacéutica humana en la cual los ingredientes I i activos consisten esencialmente de una combinación de Vitamina D y 25-OH D3; y más preferiblemente, los ingredientes activos consisten esencialmente de ¡ una combinación de Vitamina D3 y 25-OH D3.

En otra modalidad, se proporciona un equipo,! el cual consiste de dosificaciones múltiples, separadas de Vitamina D o de Vitamina D3 junto con una dosificación dej 25- OH D3. Ellas pueden estar encerradas en un contendor:) por I ejemplo, botella, empaque vesicular, o un soporte \ con frasquitos. Adicionalmente , son proporcionados en el equipo instrucciones para administrar la composición como una dosificación a un humano. En otra modalidad, se proporciona una composición adecuada para uso humano, la cual consiste de al menos! una formulación de 25-OH D3 y un antioxidante aceptable farmacéuticamente, secada por aspersión. La composición juede comprender adicionalmente la formulación de Vitamina D jo de í Vitamina D3 secada por aspersión. Alternativamente ,¡ la composición puede ser una mezcla de Vitamina D o de Vitamina D3 y 25-OH D y un antioxidante aceptable farmacéuticamente a j partir de la cual es preparada una formulación secada por aspersión. 0, se proporciona un equipo que consiste separadamente de una primera composición de al menosj una formulación de Vitamina D o de Vitamina D3 secada j por aspersión y un antioxidante aceptable farmacéuticamente y una segunda composición de al menos una formulación de 25-OH D3 secada por aspersión.

En aún otro aspecto, se proporciona un proceso para fabricar una formulación secada por aspersión. Al ráenos Vitamina D, 25-OH D3, o ambas son disueltas en un aceite adecuado tal como triglicéridos de cadena intermedia, aceite de coco, o aceite de palma, para proporcionar una fase no acuosa. La fase no acuosa y la fase acuosa son emulsificadas . i ¦ La emulsión es rociada y secada hasta un polvo. Alternativamente, la Vitamina D o la Vitamina D3 y 25- H D3 i son secadas por aspersión separadamente hasta un polvo, luego son mezclados entre si. j En otro aspecto, se proporciona un método de administrar Vitamina D y 25-OH D3 a un humano. Con lo cual, la concentración de 25-OH D puede ser incrementada o i mantenida en plasma, sangre o suero; una concentraciójn en estado estacionario de 25-OH D puede ser lograda en sangre, plasma, o suero; la posibilidad de predecir la concentración de 25-OH D en plasma o suero puede ser creciente. j La concentración pico de 25-OH D lograda por medio ! de dicha administración puede ser desde 30 mmoles/L a 375 I nmoles/L, preferiblemente desde aproximadamente 120 nmoles/L a aproximadamente 300 nmoles/L. La concentración en estado estacionario de 25-OH D lograda por medio de dicha administración es preferiblemente desde aproximadamente 60 nmoles/L.

En otra modalidad, la 25-OH D3> sola o en combinación con Vitamina D es el ingrediente activo en un I alimento, suplemento alimenticio o nutracéutico adecuado para consumo humano. Las dosificaciones de la 25-OH y/o D3 pueden ¡ ser iguales a las presentes en el producto farmacéutico, 'pero preferiblemente tenderán hacia los intervalos inferiores. Los suplementos alimenticios y nutracéuticos pueden estar e!n la forma de tabletas, cápsulas u otras formas de dosificación convenientes. El alimento puede ser una bebida o alimento, y si se desea, puede también contener otros compuestos i efectivos nutricionalmente tal como otras vitaminas, minerales, y los similares. j La deficiencia de vitamina D es una condición predominante especialmente en la población de edad avanzada y en aquellas que sufren de inmovilidad crónica independientemente de la edad. Esta puede ser debida a la falta general de exposición a la luz del sol, a una habilidad disminuida del cuerpo para fabricar vitamina D o a metabolizarla eficientemente, o a otras numerosas causas!'. Por consiguiente, un aspecto de esta invención es el uso de la combinación de Vitamina D y de 25-OH D3 en una población de edad avanzada. Como se usa en el transcurso de la presente, el término "edad avanzada", abarca a aquellos individuos, que están sobre 65 años de edad, preferiblemente sobre 70, y aún sobre 80. En otra modalidad, esta combinación de 25-OH D3 y I Vitamina D es adecuada para gente que está en riesgo de desarrollar condiciones caracterizadas por deficiencia o I insuficiencia de Vitamina D. Estas incluirían especialmente I adultos, incluyendo mujeres post-menopáusicas (es decir, de aproximadamente 45 años o más viejas) y hombres que tengan aproximadamente 45 años de edad o más viejos.; Es especialmente adecuado para individuos que no reciben mucha exposición a los rayos solares, tal como la gente; que i tradicionalmente usa ropa larga, que no sale regularmente, o que usa protector solar cuando se expone a los rayos solares, o viven en áreas geográficas, significativamente al norte o al sur del ecuador, donde los rayos solares son menos intensos. ¡ í ' La combinación de Vitamina D y de 25-OH D3 puede ser administrada una vez al día', una vez por semana, ó una vez por mes. Sorprendentemente, se encontró, de conformidad con esta invención, que por liberación de una combinación de vitamina D y 25-OH D3, los niveles plasmáticos de 25-jOH D incrementan sinérgicamente . Este efecto es observado I i rápidamente, y es más pronunciado después de aproximadamente las primeras seis horas. Adicionalmente, el incremento en los niveles plasmáticos es sostenido (aunque a un nivel más bajo, pero aún clínicamente efectivo) , por al menos aproximadamente 206 horas. Por consiguiente, esta invención ofrece dos ventajas distintas sobre tratamientos previos de las formas individuales de Vitamina D: el efecto rápido proporciona biodisponibilidad aguda, mientras que los niveles plasmáticos elevados sostenidos aseguran la biodisponibilidad prolongada . En aún otro aspecto, se proporciona un método de usar una formulación secada por aspersión de al menos ¿5-OH D3 por administración de ésta a un humano. Otro aspecto de esta invención es un método de proporcionar Vitamina D o sus metabolitos a un humano con un síndrome de mala absorción (por ejemplo, afectado por la enfermedad celíaca, intolerancia al glúten, o síndrome; del i intestino delgado) administrando la combinación de Vitamina D y de 25-OH D3. Otro aspecto de esta invención es un métodp de proporcionar metabolitos de Vitamina D a un humano con función hepática deteriorada, en donde el humano no puede procesar la Vitamina D en 25-hidroxi-vitamina D eficientemente proporcionando al humano una combinaciójn de Vitamina D y 25-hidroxi-vitamina D3. ' La Vitamina D y 25-OH D3 pueden ser obtenidas a partir de cualquier fuente, y una composición de éstas puede ser preparada usando tecnología convencional. En general, ¡ cristales de Vitamina D, 25-OH D3, o ambas (separadamente o juntos) son disueltos en un aceite con calentamiento y agitación. Preferiblemente, el aceite es transferido en un recipiente y calentado. Después, se añade al recipiente la vitamina D, 25-OH D3 o ambas, mientras se mantiene la temperatura de aceite o incrementándola con el tiempo!. La composición es agitada para disolver los cristales de Vitamina D, 25-OH D3, o ambas. Antes de adición del aceite, los cristales pueden ser reducidos de tamaño por molienda y/o tamizado para mejorar la disolución. La composición puede ser agitada por movimiento, rotación del recipiente, mezclado, homogeneización, recirculación, o ultrasonicación .

Preferiblemente, el aceite puede ser calentado en el recipiente a una temperatura desde aproximadamente 80 |°C a aproximadamente 85 °C, los cristales calibrados ! son i introducidos en el recipiente y el contenido de éste es agitado para disolver los cristales en el aceite. | El "aceite" puede ser cualquier aceite, lipido o grasa comestible adecuados: por ejemplo aceite de babasú, aceite de coco, aceite de corozo, sebo de murumiru, aceite de corazón de palma, o aceite de tucum. El aceite puede ser natural, sintético, semi-sintético, o cualquier combinación de éstos. El aceite natural puede ser derivado de cualquier fuente (por ejemplo, animal, vegetal, hongos, marina); el aceite sintético o semisintético puede ser producido ; por i medio de tecnologías convenientes. Preferiblemente, el aceite i es una mezcla de triglicéridos vegetales de cadena media, principalmente ácidos cáprico y caprilico, o aceite de palma i o de coco o mezclas de éstos. La composición puede contener I opcionalmente uno o más ingredientes adecuados tal como,! por ejemplo, y un antioxidante, conservador, agentes' de I i disolución, tensoactivos, agentes ajustadores de pH o I reguladores, humectantes aceptables farmacéuticamente^, y cualquier combinación de éstos. Los anteriormente mencionados son ejemplos de portadores aceptables farmacéuticamente. ¡ Los antioxidantes adecuados incluyen tocoferol, i tocoferoles mezclados, tocoferoles de fuentes naturales o i sintéticas, hidroxi-tolueno butilado (BHT) , hidroxi-anisol butilado (BHA) , antioxidantes naturales como extracto de romero, galato de propilo, y cualquier otro usado en la fabricación de productos farmacéuticos para humános . Preferiblemente, el antioxidante es tocoferol. ¡ Los conservadores adecuados incluyen metil parabeno, propil parabeno, sorbato de potasio, benzoato de sodio, ácido benzoico, y cualquier combinación de éstos. Los agentes de disolución adecuados incluyen solventes orgánicos o inorgánicos: por ejemplo, alcoholes, hidrocarburos clorados, y cualquier combinación de éstos. Los tensoactivos adecuados pueden ser aniónicos, catiónicos, o no iónicos: por ejemplo, palmitato de ascorbilo, polisorbatos , polietilenglicoles , y cualquier combinación de éstos. Agentes ajustadores de pH adecuados o reguladores incluyen ácido citrico-citrato de sodio, ácido fosfórico-fosfato de sodio, ácido acético-acetato de sodio, y cualquier combinación de éstos, j Los i humectantes adecuados incluyen glicerol, sorbitol, polietilenglicol , propilenglicol , y cualquier combinación de j éstos. Una vez formada, la composición oleosa puede| ser incorporada en varias composiciones diferentes útiles, algunas de las cuales se discuten posteriormente. ! Por ejemplo, pueden formarse emulsiones, las cuales puedenj ser opcionalmente encapsuladas o secadas por aspersión. , Una variedad de emulsiones pueden ser preparadas combinando las composiciones no acuosas descritas anteriormente con una composición acuosa. La emulsión puede ser de cualquier tipo. Las emulsiones adecuadas incluyen emulsiones de aceite en agua, emulsiones de agua en aceite, emulsiones anhiáras, emulsiones sólidas, y micro-emulsiones. j Las emulsiones pueden ser preparadas por medio de cualquier tecnología conveniente. La emulsión contiene una composición acuosa y una composición no acuosa (por ejemplo, aceite) en donde ésta última comprende Vitamina D, 25-OH D3, o ambas (separadamente o juntas) disueltas en un aceite en una cantidad de entre aproximadamente 3 % y aproximadamente 50 % en peso con base en el peso total de la composición oleosa. Como se usa en la presente, "composición acuosa" y "fase acuosa" son usadas indistintamente. Generalmente, la I emulsión puede contener desde aproximadamente 20 ^% a aproximadamente 95 % de una composición acuosa, y desde j aproximadamente 5 % a aproximadamente 80 % de una composición i no acuosa. Preferiblemente, no obstante, la emulsión contiene desde aproximadamente 85 % a aproximadamente 95 % en volumen) de una composición acuosa, y desde aproximadamente 5 % a i I aproximadamente 15 % (en volumen) de una composición no acuosa. De manera conveniente, la composición no acuosa puede estar dispersa como gotículas en la composición acuosa. Por ¡ ejemplo, las gotículas pueden tener un diámetro medio de I menos de aproximadamente 500 nm en la composición acuosa. De manera conveniente, las gotículas tienen un diámetro medio de entre aproximadamente 150 nm y aproximadamente 300 nm. ' En una modalidad particularmente ventajosa] la emulsión contiene un agente encapsulador , el cual facilita la i encapsulación de la composición oleosa después! de procesamiento adicional de la emulsión (por ejemplo, : por secado por aspersión) . El agente encapsulador puede ser cualquier sustancia comestible capaz de encapsular la composición oleosa. Preferiblemente el agente encapsulador es predominantemente un material coloidal. Dichos materiales incluyen almidones, proteínas de fuentes animales (incluyendo gelatinas) , proteínas de fuentes vegetales, caseína, pectjina, alginato, agar, maltodextrinas, sulfonatos de lignina, derivados de celulosa, azúcares, sacáridos, sorbitoles, gomas, y cualquier combinación de éstas. j I Los almidones adecuados incluyen: almidones vegetales (por ejemplo, CAPSUL® o HI-CAP® de National Starch & Chemical Corp., New York, NY) , otros almidones alimenticios modificados, y cualquier combinación de éstos.

Preferiblemente, el almidón es el almidón vegetal modificado CAPSUL®. Las proteínas adecuadas de fuentes animales incluyen: gelatinas (por ejemplo gelatinas bovinas, gelatinas ¡ porcinas (Tipo A o Tipo B) con diferentes números de B.loom, gelatinas de pescado) , proteína de leche descremada, caseínato, y cualquier combinación de éstas. Preferiblemente, la proteína animal es una gelatina. Las proteínas de fuentes vegetales adecuadas incluyen: proteína de papa (por ejemplo, í ALBUREX® de Roquette Preres Societé Anonyme, Lesjtrem, Francia) , proteína de guisante, proteína de soya, y cualquier I combinación de éstas. Preferiblemente, la proteina vegetal es la proteina de papa ALBUREX®. Las maltodextrinas adecuadas con un equivalente de dextrosa diferente incluyen: maltodextrina 5, maltodextrina 10, maltodextrina 15, maltodextrina 20, maltodextrina 25, y cualquier combinación de éstas. Preferiblemente, la maltodextrina es maltodextrina 15. Los derivados de celulosa adecuados incluyen: ¡etil I celulosa, metiletil celulosa, hidroxi-propil celulosa, hidroxi-propilmetil celulosa, carboximetil celulosa, y cualquier combinación de éstas. Los sacáridos adecuados incluyen lactosa, sacarosa, o cualquier combinación de éstas. Preferiblemente, el sacárido es sacarosa. Las gomas adecuadas incluyen: goma arábiga, goma de algarrobilla, goma de carragenano, y cualquier combinación de éstas. Preferiblemente la goma es goma arábiga. ! Cuando la emulsión contiene un agente encapsulador, el agente encapsulador puede estar disperso en agua por medio de cualquier tecnología conveniente para formar una , fase acuosa. La fase acuosa puede ser una solución o una mezcla dependiendo de las propiedades de los componentes seleccionados. Los componentes seleccionados pueden ser dispersos por medio de cualquier tecnología conveniente I incluyendo: homogeneización, mezclado, emulsificación, recirculación, mezclado estático, ultrasonicación, agitación, calentamiento, o cualquier combinación de éstas. : La viscosidad de la fase acuosa resultante puede ser entonces ajustada, según se desee, por medio de la adición de agua. La composición acuosa de la emulsión puede contener opcionalmente cualquier otro material adecuado incluyendo, pero no limitándose a, aquellos discutidos anteriormente con referencia a la composición no acuosa. Preferiblementei, la composición acuosa puede incluir, un agente encapsulador, un agente formador de película, un plastificante, un conservador, un antioxidante, o cualquier combinación de i éstos. Los conservadores adecuados incluyen metilparabeno, propilparabeno, ácido sórbico, sorbato de potasio, benzoato de sodio, y cualquier combinación de éstos. Los antioxidantes ¡ adecuados incluyen ascorbato de sodio, ácido ascórbico, ácido cítrico, y cualquier combinación de éstos. Preferiblemente, la fase acuosa contiene un almidón alimenticio modificado, tal como octenil succinil almidón (CAPSUL®) , maltodextrina, y ascorbato de sodio. Otra fase acuosa preferida contiene proteína de papa (ALBUREX®) , maltodextrina 20, y ascorbato de sodio. Los componentes seleccionados pueden ser disueltos en agua por medi de cualquier tecnología conveniente, preferiblemente agitación. La mezcla es preferiblemente homogeneizada hasta que j está uniforme y libre de grumos. Preferiblemente, la homogeneización es llevada a cabo a una temperatura entre aproximadamente 50 °C y aproximadamente 80 °C. La viscosidad final de la fase acuosa resultante puede entonces ser ajustada a la viscosidad deseada, preferiblemente a aproximadamente 250 mPa-s a aproximadamente 450 mPa-s,¡ más ! preferiblemente desde 300 mPa · s a aproximadamente 400 mPa*s, aún más preferiblemente aproximadamente 385 mPa-s, ¡para producción aperlada, o 60 mPa · s a 300 mPa-s, ¡para formulaciones secadas por aspersión.

La emulsión puede ser formada emulsificandó la composición no acuosa y la fase acuosa por cualquier medio, incluyendo homogeneización, esfuerzo cortante rotor-estator, esfuerzo cortante a alta presión y cavitación, agitación de alta velocidad o por esfuerzo cortante, o cualquier combinación de éstos. El volumen y la viscosidad dé la emulsión pueden ser ajustados preferiblemente por medio de la adición de agua después de emulsificación. Preferiblemente, composiciones no acuosas y acuosas son emulsificadasí por homogeneización. Preferiblemente, la emulsión no deberá contener algún mineral, metal de transición, o peróxido, j Como se indicó anteriormente, la emulsión puede ser incorporada o empleada al producir otras composiciones útiles, especialmente aceites encapsulados , por ejemplo, polvos secados por aspersión. Generalmente, el aceite i encapsulado comprende una composición oleosa y un agente de encapsulación que encapsula la composición oleosa, en donde la composición oleosa contiene Vitamina D, 25-OH D3, o ambas disueltas en el aceite en una cantidad entre aproximadamente 5 % y aproximadamente 50 % en peso con base en el peso total de la composición oleosa. El aceite encapsulado puede: ser Í producido por medio de la tecnología conveniente: : por I ejemplo, secando una emulsión descrita anteriormente 1 por medio de cualquier tecnología convencional, incluyendo sécado por aspersión, secado por congelación, secado en lecho fluidizado, secado en bandejas, adsorción, y cualquier ¡ combinación de éstos. Preferiblemente, el aceite encapsulado es producido por secado por aspersión de una emulsión! que i ¡ tenga una fase acuosa descrita anteriormente que contenga un I agente encapsulador ; los parámetros de secado por aspersión son dictados por las características físicas deseadas en el aceite encapsulado final. Dichos parámetros físicos incluyen tamaño de partícula, forma y fluencia del polvo, y contenido de agua. Preferiblemente, el aceite está en una cantidad de menos de aproximadamente 30 %, menos de aproximadamente 20 %, menos de aproximadamente 10 %, o menos de aproximadamenté 5 % en peso con base en el peso total del aceite encapsulado. El aceite encapsulado deberá tener buena fluencia y la Vitamina D y/o 25-OH D3 deberá estar distribuida homogéneamente en toda la composición. Convenientemente, el aceite encapsulado es un polvo. Cualquier otro aditivo adecuado puede ser añadido al aceite encapsulado. Un aditivo tal puede seir un agente de fluencia tal como dióxido de silicio, para incrementar la fluencia del aceite encapsulado.

La composición puede ser proporcionada en la forma de una tableta, cápsula (por ejemplo, dura o blanda) , o inyección (por ejemplo, aceite o emulsión) . Pueden ' ser empacados en una forma de dosificación diaria individual.' Dosificaciones ¡ Diariamente . Una composición de conformidad con la Í invención en la cual los dos ingredientes activos son para ser administrados separadamente, contiene Vitamina D o 25-OH D3 en una cantidad desde aproximadamente 1 µg a aproximadamente 50 g, preferiblemente aproximadamente 5 : µg y I 25 µg. Alternativamente, una dosificación individual diariamente que tenga tanto Vitamina D como 25-OH D3 contiene cada ingrediente activo en una cantidad desde aproximadamente 1 µ? a aproximadamente 50 µg, preferiblemente 5 y 25 ^g .

La proporción de la dosificación de la Vitamina D a 25-OH puede ser desde aproximadamente 50 :i a aproximadamente 1:50, más preferiblemente desde aproximadamente 25:1 a aproximadamente 1:25, y aún' más preferiblemente desde aproximadamente 6:1 a aproximadamente 1:6. Las dosificaciones separadas, múltiples, pueden ser empacadas en un equipo (o contenedor) individual. Por ejemplo, el equipo puede consistir de treinta dosificaciones diarias separadas de ambos ingredientes activos separadamente (es decir, sesenta dosificaciones separadas) , o combinadas (es decir, treinta dosificaciones que contengan ambos ingredientes activos). Pueden incluirse en el equipo instrucciones para administrar las dosificaciones a un I humano . Semanalmente . Una dosificación individual semanal contiene Vitamina D o 25-OH D3 en una cantidad desde aproximadamente 7 µg a aproximadamente 350 µg; y preferiblemente desde aproximadamente 35 a 175 \ g . I Alternativamente, una dosificación semanal individual uede contener tanto Vitamina D como 25-OH D3, cada una enj ,una cantidad desde aproximadamente 7 µg a aproximadamente 350 µg, i y preferiblemente desde aproximadamente 35 a 175µgw La i proporción de la dosificación de Vitamina D a 25-OH D3 puede ser desde aproximadamente 50:1 a aproximadamente 1:50, más preferiblemente desde aproximadamente 25:1 a aproximadamente I 1:25, y aún más preferiblemente desde aproximadamente 6:1 a aproximadamente 1:6.

Mensualmente . Una dosificación individual mensualmente contiene Vitamina D o 25-OH D3 en una cantidad desde 30 µg a aproximadamente 1500 µ?, preferiblemente aproximadamente 75 µg a aproximadamente 500 j µ?.

Alternativamente, una dosificación individual mensualmente puede contener tanto Vitamina D como 25-OH D cada una en una cantidad desde 30 iq a aproximadamente 1500 µ?, preferiblemente aproximadamente 75 µg a aproximadamente1 500 . Un equipo puede contener uno, dos, tres, seis, siete, ocho, nueve, diez, once o doce semanales o mensuales. i Las proporciones de las dosificaciones de Vitamina D a 25-OH D3 deben variar entre 50:1 a aproximadamente 1:50, más preferiblemente desde aproximadamente 25:1: ' a aproximadamente 1:25, y aún más preferiblemente clesde ! aproximadamente 6:1 a aproximadamente 1:6.

Se ha encontrado que una proporción de dosificación i de aproximadamente 1:6 25-OH D3 a D3 es particularmente benéfica al (es decir en elevados. \ I Por consiguiente, otro aspecto de esta invencipn es un método de mantener un nivel plasmático prolongado de al menos 60 mmoles/L de 25-OH de encima del nivel de referencia administrando una combinación de Vitamina D y 25-OH! D3.

Preferiblemente la Vitamina D es Vitamina D3.

Como se usa en el transcurso de esta solicitud y í reivindicaciones, "prolongado", significa el periodo¡ de tiempo que inicia a 4 horas después de ingestión de Vitámina D y 25-OH y finaliza hasta al menos 12 horas. i Otro aspecto de esta invención es un método de i mantener unos niveles plasmáticos crecientes de 25-OH D( por al menos 30 nmoles/L encima del nivel de referencia por al menos una semana por administración de una combinación de 25- i OH D3 y Vitamina D. Preferiblemente la Vitamina D es Vitámina D3. , Otro aspecto de esta invención es un método de incrementar los niveles plasmáticos de 25-OH D por al menos 30 nmoles/L, encima de los niveles de referencia por al menos una semana administrando una combinación de 25-OH ,D3 y j Vitamina D. Preferiblemente la Vitamina D es Vitamina D3.

Otro aspecto de esta intervención es un método de incrementar los niveles plasmáticos de 25-OH D en al menos 30 I nmoles/L encima de los niveles de referencia agudamente, es decir, en 2 horas después de administrar una combinación de 25-OH D3 y Vitamina D y mantener niveles plasmáticos de al menos 30 nmoles/L, encima del nivel de referencia por al menos una semana. Preferiblemente la Vitamina D es Vitamina D3. Como se puede apreciar, una de las ventajas de la administración de ambas 25-OH D3 y Vitamina D, preferiblemente Vitamina D3 es que la cantidad circulante de 25-OH D rápidamente incrementa, y que el incrementó es sostenido. Si uno administra dosificaciones más bajas, tal como las recomendadas para un régimen diario, el incremento absoluto en plasma, será por supuesto, inferior al qup se demostró en la dosis más alta en el Ejemplo, es decir, el incremento será de menos de 30 nmoles/L. No obstante; el patrón de respuesta global es el mismo, es decir, hajy un incremento rápido y una constante prolongada en donde el incremento sobre la linea de referencia es conservado. Aunque la magnitud de la respuesta es más baja, hay aún la ventaja de que los niveles plasmáticos son estables a lo largo del día. Por consiguiente, todos los tejidos son abastecidos óptimamente con 25-OH D. | Otra ventaja de esta invención es que por administración de ambas, Vitamina D y 25-OH ¡ D3, j preferiblemente Vitamina D3, los niveles de 25-QH D circulante pueden alcanzar más fácilmente un nivel predeterminado y que este nivel predeterminado puede! ser sostenido por una extensión de tiempo predecible. Por consiguiente, el número de individuos que no responden a la terapia con Vitamina D puede ser minimizado. Por ejemplo, individuos con funciones hepáticas deterioradas, o condiciones similares, pueden ahora tener los niveles de 25- t OH D más normalizados. ANALISIS GENETICO Para demostrar bioactividad creciente de la combinación, se efectuó un análisis del microelemento genético de tejido muscular expuesto a Vitamina D, 25-OHj D3 y la combinación. Se dan los detalles en el Ejemplo 2, usando un modelo en suspensión de patas traseras de roedor. ¡Como puede verse, hay un incremento dramático en el número de genes activados o regulados (ya sea sobre-regulados o ' sub-regulados) cuando la combinación de las dos es liberada en comparación con la administración individual. Como se cree actualmente que la vasta mayoría de Vitamina D es convertida en 25-OH D después de ingestión y procesamiento en el hígado, este es un resultado sorprendente.

Por consiguiente, otro aspecto de esta invención es un proceso de activar o de regular genes humanos responsables de la Vitamina D y de 25-OH D que comprende, administrar a una persona una combinación de Vitamina D ¦ y de 25-OH D3. : Se presentan los siguientes Ejemplos no limitantes para ilustrar mejor la invención. EJEMPLOS EJEMPLO 1 FORMULACION Y ENSAYO CLINICO i Formulación Materiales y Métodos j Se proporcionaron formulaciones de 25-OH D3 se†adas por aspersión como un polvo. Resumiendo, se disolvieron 25-OH D3 y DL-a-tocoferol en un aceite de triglicéridos de cadena media, luego se emulsificaron en una solución acuosa de almidón modificado, sacarosa y ascorbato de sodio. La ! emulsión fue rociada en un secador por aspersión eh la presencia de dióxido de silicio. El polvo resultante! fue colectado cuando el contenido de agua (LOD) fue inferior a 4 % y se tamizó a través de 400 µta. Se empacó y selló en bolsas de aluminio, luego se. almacenó en un área seca con temperatura inferior a 15 °C y se usó en 12 meses de su fabricación. | Se fabricaron tres lotes separados. En detallé, se produjo una matriz mezclando por 120 minutos en una unidad í procesadora FRYMIX con un agitador de ancla a 70 °C bajo I vacio y que consistió de: , i ? 17.300 kg de agua (WBI) ? 13.460 kg de almidón alimenticio modificado (CAPSUL HS) ? 3.270 kg de sacarosa ? 0.730 kg de ascorbato de sodio I Se preparó una fase oleosa mezclando por 35 minutos I en un reactor de doble pared con propulsor agitador a 82i°C y que consistió de: j ? 0.550 kg de aceite BERGABEST MCT 60/40 ¡ ! ? 0.049 kg de calcifediol (HY-D USP) j ? 0.183 kg de DL-a-tocoferol j ! La fase oleosa fue transferida a la matriz en la í unidad procesadora FRYMIX y fue pre-emulsificada con su molino coloidal interno (60 min, 70 °C) . La pre-emulsióñ fue i circulada a través de un homogeneizador de alta presión (20 min) . La emulsión con una viscosidad de 60 mPa · s a 90 mPa · s a 70 °C fue transferida sobre la bomba de alta presión ¡a la tobera de aspersión. Como agente fluidizante, se alimentó en la torre dióxido de silicio (SIPERNAT 320 DS) , aunque se contempló que otras formas de dióxido de silicio pueden también ser adecuadas. Los parámetros de aspersión y sécado i se enlistan a continuación. i Para cada uno de los tres lotes de 25-OH D3; se obtuvo un promedio de 8.4 kg de polvo secado pro aspersión con aproximadamente 0.25 % de contenido de 25-OH D3. Los otros componentes de la formulación son: 73.2 % de almidón alimenticio modificado, 17.6 % de sacarosa, 4.0 %' de ascorbato de sodio, 3.0 % de triglicéridos de cadena media, 1.0 % de dióxido de silicio, y 1.0 % de DL-a-tocoferol . | Se proporcionó la formulación de Vitamina D3 sécada por aspersión como un polvo. Resumiendo, La Vitamina D3 y DL- ? a-tocoferol se disolvieron en un aceite de triglicéridos de cadena media, luego se emulsificaron en solución acuosa de almidón modificado, sacarosa, y ascorbato de sodio] La emulsión fue atomizada en un secador por aspersión en la presencia de dióxido de silicio. El polvo resultante, fue colectado cuando el contenido de agua (LOD) fue inferior a 4 % y fue tamizado para remover los grumos grandes. Fue almacenado en un área seca con temperatura inferior a 15 °C.

La estabilidad fue buena, y la vida de anaquel puede ser prolongada durante 12 meses. j Ensayo Clínico Sujetos ¡ Se reclutaron mujeres post-menopáusicas (50 a 70 años de edad) , saludables, usando el consentimiento declarado y seleccionadas usando el criterio siguiente: 25-OH jD en i suero entre 20 nmoles/L y 50 nmoles/L, índice de masa corporal entre 18 kg/m2 y 27 kg/m2, presión sanguínea inferior a 146/95 mm de Hg, calcio en suero inferior a 2.6 nmol s/L, glucosa en ayunas inferior a 100 mg/dl, ningún ejercicio de I alta intensidad más de tres veces por semana, ningún I tratamiento para hipertensión, sin uso de altas dosis de vitamina D o suplemento de calcio o fármaco que afecté el metabolismo óseo (por ejemplo, bifosfonato, calcitoriina, moduladores del receptor de estrógeno, terapia de reemplazo hormonal, hormona paratiroidea ) , y sin visitar lugares "soleados" durante el estudio. ¡ I Los sujetos fueron asignados aleatoriamente a! uno j de siete grupos de tratamiento (es decir, bolus como dosis individual, y bolus como dosis en combinación, diariamente, I ' semanalmente) . Cada grupo incluyó cinco sujetos. Fueron seguidos por cuatro meses en Zürich, Suiza durante 1 el invierno. \ ¡ Estudio Clínico 1 i El objetivo fue estudiar y comparar I las características farmacocinéticas de la Vitamina D y de 25-OH D3 administradas a humanos. Se investigaron cantidades iguales de ambas sustancias. El régimen se basó en 20 µ??/día (o su equivalente sobre una base semanal) de 25-OH D3. J Como la concentración de referencia pre-existente máxima de 25-OH í 1 D será de 50 nmoles/L no se anticipó que los sujetos se aproximarían al intervalo en el que se ha observado la perturbación en la homeóstasis de Ca++. Para propósitos comparativos, es necesario administrar cantidades equímolares ya sea de Vitamina D o bien de 25-OH D3. Con respecto a la administración de Vitamina D, la dosis se consideró que! fue suficiente para superar la variación de fondo y proporcionar i la dosis eficiente a los participantes. j I Diariamente: 120 administraciones 1 1. 25-OH D3 20 µq ' 2. Vitamina D3 20 µq (800 UI) ! Semanalmente : 16 administraciones J 3. 25-OH D3 140 µq \ 4. Vitamina D3 140 µq (5600 UI) ; Bolus: administración individual ! 5. 25-OH D3 140 µq j 6. Vitamina D3 140 µq (5600 UI) Bolus: administración combo 7. D3 y 25(OH)D3 140 µq (5600 UI) + 140 µq 1 Cápsulas de gelatina dura, las cuales fueron empacadas en botellas, contenían ya sea 20 µq o 140 µ'? de Vitamina D o bien de 25-OH D3 secada por aspersión; por cápsula. Cada dosificación es consumida oralmente en el desayuno. La duración del estudio es cuatro meses para los grupos "Diariamente" y "Semanalmente" . Los sujetos enrolados en el grupo de "Bolus" consumieron oralmente una dosificación individual en la segunda visita del estudio y fueron seguidos por cuatro meses adicionales.

Se determinaron concentraciones plasmáticas de¡ 25- i OH D (por ejemplo pico y estado estacionario), obteniendo muestras de los sujetos a varios tiempos después de que la dosificación fuera ingerida. Para propósitos de selección y para establecer valores de referencia, se obtuvo una muestra de sangre antes del enrolamiento en el estudio y el j laboratorio clínico midió Vitamina D, 25-OH D3, calcio, creatinina, albúmina, y glucosa en ayunas en el suero^. El lunes de la Semana 1 del estudio, se evaluaron durante 24 horas: la farmacocinética de Vitamina D, 25-OH D, y lj 25-dihidroxi- Vitamina D en suero; marcadores en sueroj , (es decir, Vitamina D, 25-OH D, calcio, creatinina, albúmina, PTH, GOT, GPT, ALP, triglicéridos , HDL, LDL, colesterol total, bALP, y glucosa en ayunas); y marcadores en orina (es decir, calcio, creatinina, y DPD) . Se tomaron muestras diarias por los días restantes de la Semana 1 y el Lunes de la Semana 2, para evaluar Vitamina D, 25-OH D en suero; marcadores en suero (es decir, calcio, creatinina, albúmina; y marcadores en orina (es decir, calcio, creatinina) Las evaluaciones continuaron los Lunes de las Semanas 3, 5, 7, 9, 11, 13, y 15. El Lunes de la Semana 16, se tomaron muestras para evaluar la farmacocinética de Vitamina D, 25-OH D, y 1, 25- dihidroxi- Vitamina D en suero; marcadores en suero (es decir, Vitamina D, 25-OH D, calcio, creatinina, albúmina, PTH, GOT, GPT, ALP, triglicéridos , HDL, LDL, colesterol total, bALP, y glucosa en ayunas); y marcadores en orina (es decir, calcio, creatinina, y DPD) . i Resultados I La Tabla 1 muestra el incremento en los niveles plasmáticos de 25-OH D después de una dosificación de 140 µg j ¦ de 25-OH D3, una dosificación de 140 µg de Vitamina D !o la dosificación combinada de 140 µg de 25-OH D3 + 140 µ¾ de Vitamina D. Se obtuvieron muestras de sangre de conformidad con la programación de tiempo expuesta. ' Tabla 1 Como se mostró anteriormente, hubo un incremento í sinérgico en la respuesta de 25-OH D plasmática después de una administración combinada de 140 µg de 25-OH D3 + 140 µg de Vitamina D. El efecto fue especialmente pronunciado durante las primeras seis horas. Además, una administración combinada produjo incremento sostenido en los nijveles plasmáticos de 25-OH D de al menos 30 nmoles/L de 2 á 206 horas (es decir hasta 8.5 días, o durante 1 semana). Después de administración de 140 µg de 25-OH D3, un incremento en los niveles plasmáticos de 25-OH D de al menos 30 nmoles/L se observó entre 4 y 49 horas solamente, mientras que nós e i observó ningún incremento de esa magnitud después| de administración de 140 µg de Vitamina D sola. \ Por consiguiente, una administración combinada de 140 µg de 25-OH D + 140 µg de Vitamina D2 proporcionój dos ventajas significativas: dio como resultado una respuesta j plasmática sinérgica y rápida de 25-OH D y conduce al una constante de los niveles plasmáticos de 25-OH D inesperadamente prolongada y pronunciada, estos son objetivos especialmente importantes del tratamiento de la deficiencia de Vitamina D; la corrección rápida del status de Vitamina D sub-óptimo y una concentración plasmática estable y prolongada para asegurar suficiente suministro de todos los tejidos dependientes de Vitamina D. ! EJEMPLO 2 DATOS DEL MICROELEMENTO GENETICO El objetivo de este estudio fue probar los efectos de la Vitamina D3, 25'-OH D3, y la combinación de Vitamina; D3 y 25-OH D3 en un modelo de atrofia de músculo esquelético usando ratones BalbC donde la suspensión de la cola conduce a atrofia del músculo esquelético en las patas traseras descargadas de los animales. Inicialmente este modelo fue establecido en ratas para simular el vuelo espacial en humanos y es comúnmente usado en otros campos científicos para estudiar la pérdida de masa muscular esquelética u ósea. Los resultados se consideran indicadores1 de I condiciones humanas como sarcopenia (pérdida degenerativa de masa muscular esquelética y de resistencia durante el proceso i de envejecimiento) o inmovilización del músculo esquelético (por ejemplo, después de reposo en cama prolongado debijdo a fracturas, cirugía o traumatismo) .

Métodos. Para nuestro estudio se aleatorizaron ratones hembras BalbC de nueve meses de edad, al principio, del estudio en cuatro grupos con 10 animales por grupo. ! 1. Grupo control: patas traseras descargadas (HÜ) 2. Grupo de Vitamina D3: HU + tratamient† de Vitamina D3 | ¡ i 3. Grupo de 25-OH D3 : HU + tratamiento de 25-OHj D3 4. Grupo de Vitamina D + 25-OH D3 : HU + tratamiento de Vitamina D3 y 25-OH D3 (combinación) Los animales fueron colocados en jaulas especiales por una duración de siete días; todos los animales fueron alojados separadamente y tuvieron libre acceso a alimentación y agua ad libitum. Todos los animales fueron tratados dos veces por sonda al principio del experimento y 3 horas antes de la sección: 1. el grupo control recibió vehículo (gelatina) 2. el grupo D3 recibió Vitamina D3 (50 µg kg de peso corporal) . 3. el grupo de 25-OH D3 recibió 25-OH D3 (50 ¿ig/kg de peso corporal) 4. el grupo de combinación recibió Vitamina D3 + 25-OH D3 (50 + 50 µg/kg de peso corporal) j ¦ i Al final del estudio el músculo gastrocnemiusj fue sacado y congelado directamente en nitrógeno líquido para análisis adicional. Para identificar cambios en la expresión genética y desplazamientos de análisis en los niveles de mARN j en el músculo gastrocnemius se usaron las microredes Affymetrix Mouse 430-2 junto con la versión 27 (Diciembre de 2008) de los archivos de anotación de Affymetrix para este I tipo de red. La red contiene "grupos de 45, 000 sondas I para analizar el nivel de expresión de más de 39,000 transcritos y I variantes a partir de más de 34,000 genes de ratón y aglomerados UniGene bien caracterizados" (Affymetrix, 20Q9) . Se aisló el ARN total usando el protocolo de Trizol j usado comúnmente. El ARN fue cuantificado usando análisis espectrofotométrico . Se evaluó también cualitativament|e: la integridad de las muestras de ARN total en un bioanalizador Agilent 2100. Se preparó entonces el ARN para el ciclo uno de síntesis de cADN . Se usó un control poli-A ARN para esta etapa para proporcionar controles positivos exógenos para monitorear el proceso completo de marcado de objetivos eucarióticos . Se hizo la primera síntesis de cADN, el cADN es depurado del cADN de doble hebra. Se sintetizó entonces un j cARN marcado con biotina, se depuró y cuantificó usando un espectrofotómetro a 2 60 /280 nm. Es importante que el ¡ cARN I objetivo sea fragmentado antes de hibridización sobre una red de sondas GeneChip para obtener sensibilidad de ensayo óptima. Después de fragmentación las sondas son hibridizadas sobre los microelementos (microelementos de Affymetrix IXIouse j 4 30 - 2 ) . Los microelementos son lavados y teñidos enj 'las estación fluídica de Affymetrxix y explorada en explorador de microelementos genéticos. Los datos son entonces transferidos del explorador para análisis adicional usando el "software" de Genedata (Expressionist 5 . 0 : Refiner Array y Analyst )j . La interpretación de los datos y la trayectoria de análisis se hizo con la versión en línea del paquete GeneGo Met core ( V5 . 2 construcción 17389 ) . j El "Refiner Array" evalúa datos de microredes ; para ! resultados de calidad y mediciones problemáticas, de indicadores. Proporciona un grupo de algoritmos) de normalización y métodos de condensación validados para ¡ pre- procesar y resumir automáticamente los datos de microred brutos para análisis estadístico subsecuente. El análisis de los datos de microred reveló genes (mARNs) que fueron expresados diferencialmente entre el grupo HU y los grupos de HU + tratamiento (Vitamina D3, 25-OH D3 o combinación) . Nuestros hallazgos clave son ', 1. Una combinación de 25-OH D3 y Vitamina D3 cambia más grupos de sondas por genes que 25-OH D3; la cual a su vez cambia más grupos de sondas por genes que la Vitamin'a D3 (Tabla 1) . a. En comparación con el grupo control HU, el grupo que recibió el tratamiento en combinación (D3 + 25-hidroxi-Vitamina D3) tuvo significativamente más grupos de sondas cambiadas por genes (1745) que el grupo que recibió un tratamiento con solamente 25-OH D3 (1263) . ' ? b. En comparación con el grupo control HU, el grupo que recibió un tratamiento con 25-OH D3 ; tuvo significativamente más grupos de sondas cambiadas por genes (1263) que el grupo que recibió un tratamiento con Vitamina D3 (385) ¡error!.. no se encontró la fuente de la referencia. 2. Un tratamiento en combinación de + Vitamina D3 tuvo más grupos de sondas comunes expresadas diferencialmente por genes con el tratamiento 25-OH D3| que con el tratamiento con Vitamina D3. ¡ I a. -61 % de los grupos de sondas expresados diferencialmente por genes en el grupo de 25-OH D3 son también expresados diferencialmente en el grupo con 25-OH D3 + Vitamina D3 (769 de 1263, Figura 2). b. ~46 % de los grupos de sondas expresados diferencialmente por genes en el grupo de Vitamina D3 j son también expresados diferencialmente en el grupo de 25-OH D3 + Vitamina D3 (177 de 385, Figura 3) . c. Un tratamiento con la combinación de 25-OH |D3 y Vitamina D3 tuvo el impacto más significativo sobre i los genes del proceso de desarrollo muscular, como se ilustra en las Figuras 4, 6 y 7. ¡ d. Los genes involucrados son parte de j ,las siguientes categorías principales en contracción de músculo esquelético, desarrollo muscular y mantenimiento muscular (Tabla 2) . j 3. Para grupos de sondas de genes seleccionados del músculo esquelético, un tratamiento con la combinación de 25- ¡ OH D3 y Vitamina D3 mostró expresiones más altas que! los tratamientos con solamente Vitamina D3 o solamente 25-OH D3. í 5. Tabla '3 Tabla 1. Grupos de sondas expresadas diferencialmente por genes entre el grupo de tratamiento, con HU y el grupo de tratamiento con HU + Vitamina D3, 25-OH D3, o combinación .

Tabla Grupos de sondas xpresadas diferencialmente genes de músculo quelético seleccionados entre el grupo de tratamiento con HU y; los grupos otros de tratamiento. ¡ Parámetro Genes de músculo expresados diferencialmente comparados con HU HU Desmina; mioneurina; tropomiosina 1, aljfa- Vitamina t r ompomi o s i na - e, beta; gen I de miopatía miotubular relacionada con el cromosoma X: HU + 25-OH Desmina; distonina; factor 2A mejorador ¡ de D3 miocitos; mioneurina; miosina Vljlb; miosina, polipéptido 6 ligero, álcali, Sin músculo y de músculo liso; miosina, quinása de polipéptido ligero; proteina relacionada con miotubularina; proteina 4 i relacionada con miotubularina; proteina 6 relacionada con miotubularina; tropomiosjina 2, beta; gen I de miopatía miotubular relacionada con el cromosoma X ! HU Calsecuestrin 2; desmina; distoni.na; i Vitamina distrofina, distrofia muscular; factor ¡ 2a + 25-OH mejorador de miocitos; factor 2C mejorador de miocitos; factor 2D mejorador de miocitos; ! Tabla 2 (Continuación) I Tabla 3: Patrones de expresión para genes seleccionados de músculo esquelético La invención descrita y reclamada en la presente no se limita en alcance por las modalidades especificas contenidas en la presente, ya que estas modalidades están previstas como ilustraciones de varios aspectos de la invención. Cualquiera de las modalidades equivalentes están previstas en el alcance de esta invención. Realmente, varias modificaciones de la invención además de las mostradas y descritas en la presente serán obvias para los expertos en el arte a partir de la descripción anterior. Dichas modificaciones están también previstas en el alcance de¡ las reivindicaciones anexas. En caso de conflicto, controlará la presente descripción incluyendo las definiciones. I

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. - Una composición farmacéutica adecuada para¡ uso humano, caracterizada porque comprende Vitamina D y 25-OH D3. i I

2. - Una composición de conformidad con) 1 la reivindicación 1, caracterizada porque comprende adicionalmente un antioxidante aceptable farmacéuticamente, y al menos un portador aceptable farmacéuticamente en una forma de tableta, cápsula, o inyectable. i

3. - Una composición de conformidad con! la reivindicación 1, caracterizada porque es aperlada encapsulada o secada por aspersión. ! j

4. - Uso de 25-OH D3 y Vitamina D para elaborar un medicamento humano para uso en el alivio de síntjomas consistentes con una deficiencia de 25-OH D.

5. - Un alimento, suplemento alimenticio o ? nutracéutico adecuado para uso humano caracterizado porque comprende 25-OH -vitamina D3. 1

6. - Un alimento, suplemento alimenticio o nutracéutico, de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado adicionalmente porque comprende Vitamina D. |

7. - Un equipo caracterizado porque comprende dosificaciones separadas, múltiples de: ; i i a) Vitamina D y j b) 25-Oh D3.

8. - Un equipó de conformidad con la reivindicación i i 7, caracterizado adicionalmente porque comprende al menojs un t ¡ elemento del grupo seleccionado de: un contenedor, e instrucciones para administra la composición como una dosificación a un humano. j

9. - Un equipo de conformidad con cualquiera de, las reivindicaciones 7-8, caracterizado porque están presentés al menos siete dosificaciones separadas, múltiples. j

10. - Un equipo de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque están presentes al menos treinta i dosificaciones separadas. |

11. - Un método de incrementar o de mantener la concentración de 25-OH D3 en sangre, suero o plasma humario, o i de lograr una concentración en estado estacionario de 25-j-QH D i deseada en sangre, suero, o plasma humano, o de incrementar la capacidad de predecir la concentración de 25-OH p en sangre, suero o plasma humano, caracterizado porque comprende administrar Vitamina D y 25-OH D3 a un humano.

12. - Un método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la Vitamina D y 25-OH D3. son i administradas como formas de dosificación separadas. ¡ I

13. - Un método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la Vitamina D y 25-OH D3 1 son administradas en la misma forma de dosificación.

14. - Un método de mantener un nivel plasmático i prolongado de 25-OH D en un humano de al menos 60 nmoles/L sobre el nivel de referencia, caracterizado porque comprende administrar una combinación de Vitamina D y de 25-OH D3.

15. - Un método de incrementar los niveles i plasmáticos de 25-OH D en un humano por al menos 30 nmoles/L sobre el nivel de referencia, caracterizado porque comprende administrar una combinación de 25-OH D3 y Vitamina D pór al menos una semana. j

16. - Un método de incrementar rápidamente los niveles plasmáticos de 25-OH D en un humano en 2 horas, caracterizado porque comprende administrar una combinación de 25-OH D3 y Vitamina D. i i i

17. - Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 16 caracterizado porque el humano s de edad avanzada.

18. - Un método de conformidad con una de! las reivindicaciones 11 a 16, caracterizado porque el humano tiene un síndrome de mala absorción (por ejemplo, afecjtado por enfermedad celiaca, intolerancia al gluten, o síndrome del intestino corto) . |

19. - Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 16, caracterizado porque el humano tiene la función hepática deteriorada. ,

20. - Un método de activar o de regular genes humanos responsables de la Vitamina D y 25-OH D, caracterizado porque comprende administrar a una persona una combinación de Vitamina D y 25-OH D3.