MX2009001630A - Composiciones en nanoparticulas. - Google Patents

Abstract

Se da a conocer un método de terapia basada en nanopartículas para un sujeto mamífero. El método utiliza nanopartículas, y/o nanopartículas con superficies externas que contienen una fracción de afinidad efectiva paras enlazarse específicamente con una superficie biológica hacia la cual se dirige la terapia, y un recubrimiento polimérico hidrofílico. El recubrimiento polimérico hidrofílico se forma de cadenas poliméricas ya sea covalentemente enlazadas o bien adsorbidas superficialmente a los componentes poliméricos. Después de que se alcanza una biodistribución deseada de las nanopartículas, el agente de afinidad se enlaza con la superficie objetivo y ayuda a internalizar las nanaopartículas.

Description

COMPOSICIONES EN NANOPARTÍCULAS Campo de la Invención La presente invención se refiere a una composición terapéutica, y a un método que emplea, como el vehículo de suministro, formulaciones en nanopartículas. Las nanopartículas comprenden opcionalmente una fracción de afinidad sobre las superficies externas de las nanopartículas para el enlace efectivo y la internalización de los tejidos objetivo. Las nanopartículas opcionalmente comprenden también un recubrimiento superficial de polímeros hidrofílicos para la estabilidad estérica y una circulación prolongada. Antecedentes de la Invención Las nanopartículas se pueden utilizar para una variedad de propósitos terapéuticos, en particular para llevar agentes terapéuticos hacia las células objetivo mediante la administración sistémica de nanopartículas. Por una variedad de razones, puede ser deseable proteger a un agente terapéutico utilizando una nanopartícula. Con el objeto de explotar los efectos terapéuticos de la clase de fármacos de bisfosfonato, se debe alterar la distribución del fármaco de una manera tal que el agente terapéutico pueda interactuar efectivamente de una manera específica con una superficie objetivo hacia la que se dirija la terapia. Por consiguiente, es deseable proporcionar una composición terapéutica en nanopartículas.

Breve Descripción de la Invención En u n aspecto, la invención incluye un método de terapia basada en nanopartículas para un sujeto mamífero, el cual incluye administrar sistémicamente al sujeto, nanopartículas que contienen : (i) una matriz polimérica; y (ii) un agente terapéutico. La matriz polimérica proporciona la protección de un agente terapéutico que de otra manera estará en una forma de solución en las formulaciones tradicionales, y se distribuirá rápidamente a todo el cuerpo. Las nanopartículas basadas en vesículas, tales como las formulaciones liposomales, son otro planteamiento para administrar agentes terapéuticos para el suministro dirigido de fármacos. En el caso de los bisfosfonatos, se encontró de una manera sorprendente que estas formulaciones vesiculares pueden realmente provocar hipocalcemia, debido al secuestro de calcio dentro de la vesícula desde el medio circundante después de la administración sistémica. Esto puede conducir eventualmente a toxicidad (referencia: patente de Liposomas). Se evitará este secuestro de los iones de calcio, en el caso de las nanopartículas basadas en matriz polimérica, como se describe en esta invención, y por lo tanto, se espera que estas formulaciones ofrezcan una seguridad superior en relación con los sistemas basados en vesículas. En otro aspecto, la invención incluye un método de terapia basada en nanopartículas para un sujeto mamífero , el cual incluye administrar sistémicamente al sujeto, nanopartículas que contienen: (i) una matriz polimérica; (ii) un agente terapéutico; (iii) un recubrimiento polimérico hidrofílico para la estabilidad estérica y para una circulación prolongada; y opcionalmente, (iv) una fracción de afinidad efectiva para enlazarse específicamente a una superficie objetivo hacia la cual se dirija la terapia. El recubrimiento polimérico hidrofílico se forma de cadenas poliméricas que se enlazan de una manera covalente a los componentes superficiales de la matriz polimérica de las nanopartículas, o bien se adsorben sobre la superficie de la matriz polimérica mediante interacciones de carga. En una modalidad, la matriz polimérica contiene iones de calcio. En una modalidad, cuando se va a administrar un agente terapéutico a una región objetivo, la fracción de afinidad es un ligando efectivo para enlazarse específicamente con un receptor en la región objetivo, y las nanopartículas incluyen al agente terapéutico en una forma atrapada. Un ejemplo de esta modalidad es el tratamiento de un tumor sólido, en donde la fracción de afinidad es efectiva para enlazarse específicamente con un receptor o antígeno específico del tumor, las nanopartículas tienen un tamaño promedio de entre aproximadamente 10 nanómetros y aproximadamente 500 nanómetros, e incluyen un fármaco atrapado.

En una modalidad , la matriz polimérica contiene copolím eros de ácidos láctico y g licólico. Descripción Detallada de la I nvención I. Composición en Nanopartículas U na nanopartícula para utilizarse en la terapia basada en nanopartículas, tiene cuando menos una capa externa q ue tiene una superficie externa. Se apreciará que la nanopartícula puede incluir capas adicionales. En un caso, la capa externa se compone de u n polímero hid rofílico covalentemente en lazado que a su vez se enlaza de una manera covalente a una fracción de dirección . En otro caso, la capa externa consiste en un polímero hidrofílico covalentemente enlazado a una fracción de dirección en un extremo y en adición covalentemente enlazada , así como en interacciones electrostáticas con una fracción de carga sobre el otro extremo. La fracción de carga se selecciona a partir de diferentes aminoácidos o polímeros basados en aminoácidos, que tiene una carga opuesta a aquélla de la matriz polimérica. La nanopartícula comprende una matriz polimérica que contiene un catión divalente para proteger efectivamente al agente terapéutico de la lixiviación antes de exponerse para interactuar con su objetivo. La matriz de catión divalente aumenta la eficiencia de encapsulación y la carga de fármaco del agente terapéutico, y disminuye la permeabilidad del agente terapéutico a través de la nanopartícula al atrapar el fármaco. Una matriz de catión divalente ayuda a atrapar los agentes terapéuticos que sean altamente solubles. En adición , una matriz de catión divalente puede facilitar el suministro de los agentes terapéuticos al tumor de una manera más eficiente. En una modalidad, los iones de calcio incorporados en la nanopartícula ayudan a retener el fármaco activo para que no se disperse antes de que reaccione con el objetivo. Un agente terapéutico que se vaya a administrar a una célula o región objetivo, se atrapa en una nanopartícula. Como se utiliza en la presente, el agente terapéutico, compuesto, y fármaco, se utilizan de una manera intercambiable. El agente terapéutico atrapado puede ser cualquiera de un gran número de agentes terapéuticos que se pueden atrapar en matrices poliméricas, incluyendo agentes solubles en agua, compuestos lipofílicos, o agentes que se puedan unir establemente, por ejemplo mediante unión electrostática, a las superficies externas de las vesículas. Los compuestos solubles en agua de ejemplo incluyen la clase de fármacos de bisfosfonato. Los ejemplos de un agente terapéutico son los ácidos alcan-difosfónicos sustituidos, en particular los ácidos heteroaril-alcan-difosfónicos de la fórmula (I): en donde: R1 es un radical de heteroarilo de 5 miembros que contiene, como heteroátomos, de 2 a 4 átomos de nitrógeno, o 1 ó 2 átomos de nitrógeno, así como un átomo de oxígeno o de azufre, y el cual está ¡nsustituido o C-sustituido por alquilo inferior, fenilo, o fenilo que está sustituido por alquilo inferior, alcoxilo inferior, y/o halógeno, o por alcoxilo inferior, hidroxilo, di-alquilo inferior-amino, tioalquilo inferior, y/o halógeno, y/o está N-sustituido en un átomo de nitrógeno que es capaz de tener sustitución por alquilo inferior, alcoxilo inferior, y/o halógeno; y R2 es hidrógeno, hidroxilo, amino, tioalquilo inferior, o halógeno, y las sales de los mismos, la preparación de estos compuesto, composiciones farmacéuticas que los contienen, y el uso de los mismos como medicamentos. Los ejemplos de los radicales de heteroarilo de 5 miembros que contienen de 2 a 4 átomos de nitrógeno o 1 ó 2 átomos de nitrógeno, así como un átomo de oxígeno o de azufre como heteroátomos, son imidazolilo, por ejemplo imidazol-1 -ilo, imidazol-2-ilo, o imidazol-4-ilo, pirazolilo, por ejemplo pirazol-1 -ilo o pirazol-3-ilo, tiazolilo, por ejemplo tiazol-2-ilo o tiazol-4-ilo, o menos preferiblemente, oxazolilo, por ejemplo oxazol-2-ilo u oxazol-4-ilo, isoxazolilo, por ejemplo iso-oxazol-3-ilo o iso-oxazol-4-ilo, triazolilo, por ejemplo 1H-1,2,4-triazol-1-ilo, 4H-1 ,2,4-triazol-3-ilo o 4H-1 ,2,4-triazol-4-ilo o 21-1-1,2,3-triazol-4-ilo, tetrazolilo, por ejemplo tetrazol-5-ilo, tiadiazolilo, por ejemplo ,2,5-tiadiazol-3-ilo, y oxadiazolilo, por ejemplo 1,3,4-oxadiazol-2-ilo. Estos radicales pueden contener uno o más sustituyentes idénticos o diferentes, de preferencia uno o dos sustituyentes idénticos o diferentes seleccionados a partir del grupo mencionado al principio. Los radicales R1, insustituidos o sustituidos como se indica, son, por ejemplo, radicales de imidazol-2-ilo o imidazol-4-ilo, los cuales están insustituidos o C-sustituidos por fenilo, o por fenilo que está sustituido como se indica, o los cuales están C- o N-sustituidos por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, por ejemplo metilo, y son típicamente imidazol-2-ilo, 1-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-imidazol-2-ilo, tal como 1 -metil-imidazol-2-ilo, o 2- ó 5-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-imidazol-4-ilo, tal como 2-ó 5-metil-imidazol-4-ilo, radicales de tiazolilo insustituido, por ejemplo tiazol-2-ilo, o radicales de 1 H-1 ,2,4-triazol insustituidos o sustituidos por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, por ejemplo 1-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-1 H-1 ,2, 4-triazol-5-ilo, tal como 1 -metil-1 H-1 ,2,4-triazol-5-ilo, o imidazol-1 -ilo, pirazolil-1-ilo, 1 H-1 ,2,4-triazol-1 -ilo, 4H-1 ,2,4-triazol-4-ilo, o radicales de tetrazol-1 -ilo insustituidos o C-sustituidos por fenilo, o por fenilo que está sustituido como se indica, o por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, por ejemplo imidazol-1 -ilo, 2-, 4-, ó 5-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-imidazol-1 -ilo, tal como 2-, 4-, ó 5-metil-imidazol-1 -ilo, pirazol-1 -ilo, 3- ó 4-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-pirazol-1 -ilo, tal como 3- ó 4-metil-pirazol-1 -ilo, 1H, 1,2,4-tetrazol-1 -ilo, 3-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-1 H-1 ,2, 4-triazol-1-ilo, tal como 3-metil-1 H,2,4-triazol-1-ilo, 4H-1 ,2,4-triazo -ilo, 3-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-4H-1 ,2,4-triazol-4-ilo, tal como 3-metil-4H-1 ,2,4-triazol-4-ilo o 1 H-1 ,2,4-tetrazoM -ilo. Se entenderá que los radicales y compuestos calificados posteriormente en la presente mediante el término "inferior" significan típicamente aquéllos que contienen hasta 7 átomos de carbono inclusive, de preferencia hasta 4 átomos de carbono inclusive. Los términos generales tienen, por ejemplo, los siguientes significados: Alquilo inferior es, por ejemplo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, etilo, propilo, o butilo, y también isobutilo, butilo secundario, o butilo terciario, y además puede ser alquilo de 5 a 7 átomos de carbono, tal como pentilo, hexilo, o heptilo. Fenil-alq uilo inferior es, por ejemplo, fenil-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, de preferencia 1 -fenil-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como bencilo. Alcoxilo inferior es, por ejemplo, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo, butoxilo, isobutoxilo, butoxilo secundario, o butoxilo terciario. Di-alquilo inferior-amino es, por ejemplo, di-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-amino, tal como dimetil-amino, dietil-amino, N-etil-N-metil-amino, dipropil-amino, N-metil-N-propil-amino, o dibutil-amino. Tioalquilo inferior es, por ejemplo, tioalquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como tiometilo, tioetilo, tiopropilo, o tiobutilo, y también tioisobutilo, tiobutilo secundario, o tiobutilo terciario. Halógeno es, por ejemplo, halógeno que tiene un número atómico de hasta 35 inclusive, tal como flúor, cloro, o bromo. Las sales de los compuestos de la fórmula (I) son en particular las sales de los mismos con bases farmacéuticamente aceptables, tales como las sales de metales no tóxicos derivadas a partir de los metales de los grupos la, Ib, Na, y llb, por ejemplo las sales de los metales alcalinos, de preferencia las sales de sodio o potasio, las sales de los metales alcalinotérreos, de preferencia las sales de calcio o magnesio, las sales de cobre, aluminio o zinc, y también las sales de amonio con amoníaco o con aminas orgánicas o bases de amonio cuaternario, tales como las aminas alifáticas libres o C-hidroxiladas, de preferencia las mono-, di-, o tri-alquilo inferior-aminas, por ejemplo metil-amina, etil-amina, dimetil-amina, o dietil-amina; las mono-, di-, o tri-(hidroxi-alquilo inferior)-aminas, tales como etanol-amina, dietanol-amina, o trietanol-amina; tris-(hidroxi-metil)-amino-metano o 2-hidroxi-terbutil-amina, o N-(hidroxi-alquilo inferior)-N,N-di-alquilo inferior-aminas o N-(poli-hidroxi-alquilo inferior)-N-alquilo inferior-aminas, tales como 2-(dimetil-amino)-etanol o D-glucamina, o hidróxidos de amonio alifático cuaternario, por ejemplo con hidróxido de tetrabutil-amonio. En relación con esto, también se debe mencionar que los compuestos de la fórmula (I) también se pueden obtener en la forma de sales internas, en el entendido de que el grupo R1 sea suficientemente básico. Por consiguiente, estos compuestos también se pueden convertir en las sales de adición de ácido correspondientes mediante el tratamiento con un ácido prótico fuerte, tal como un ácido halohídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfónico, por ejemplo ácido metan-sulfónico o ácido p-toluen-sulfónico, o ácido sulfámico, por ejemplo ácido N-ciclohexil-sulfámico. En una modalidad, los agentes terapéuticos son compuestos de la fórmula (I), en donde: R1 es un radical de imidazolilo, pirazolilo, 2H-1 ,2,3-triazolilo, 1 H-1 ,2,4-triazolilo, o 4H-1 ,2,4-triazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, tiazolilo, o tiadiazolilo, el cual está insustituido o C-sustituido por uno o dos miembros seleccionados a partir de alquilo inferior, alcoxilo inferior, fenilo, o fenilo que a su vez está sustituido por uno o dos miembros seleccionados a partir de alquilo inferior, alcoxilo inferior, y/o halógeno, hidroxilo, di-alquilo inferior-amino, tioalquilo inferior y/o halógeno, y/o está N-sustituido en un átomo de nitrógeno que es capaz de tener sustitución por alquilo inferior o fenil-alquilo inferior que está insustituido o sustituido por uno o dos miembros seleccionados a partir de alquilo inferior, alcoxilo inferior, y/o halógeno; y R2 es hidrógeno, hidroxilo, amino, tioalquilo inferior, o halógeno, y las sales de los mismos, en especial las sales internas y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos con bases. En una modalidad, los agentes terapéuticos son compuestos de la fórmula (I), en donde: R1 es un radical de imidazolilo, pirazolilo, 2H-1 ,2,3-triazolilo, o 4H-1 ,2,4-triazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, tiazolilo, o tiadiazolilo, el cual está insustituido o C-sustituido por uno o dos miembros seleccionados a partir de alquilo inferior, alcoxilo inferior, fenilo, o fenilo que a su vez está sustituido por uno o dos miembros seleccionados a partir de alquilo inferior, alcoxilo inferior y/o halógeno, hidroxilo, di-alquilo inferior-amino, tioalquilo inferior y/o halógeno, y/o está N-sustituido en un átomo de nitrógeno que es capaz de tener sustitución por alquilo inferior o fenil-alquilo inferior que está insustituido o sustituido por uno o dos miembros seleccionados a partir de alquilo inferior, alcoxilo inferior, y/o halógeno; y R2 es hidrógeno, hidroxilo, amino, tioalquilo inferior, o halógeno, y las sales de los mismos, en especial las sales internas y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos con bases. En una modalidad, los agentes terapéuticos son compuestos de la fórmula (I), en donde: R1 es un radical de imidazolilo, tal como imidazol-1 -ilo, imidazol-2-ilo o imidazol-4-??, un radical de 4H-1 ,2,4-triazolilo, tal como 4H-1 ,2,4-triazol-4-ilo, o un radical de tiazolilo, tal como tiazol-2-ilo, cuyo radical está insustituido o C-sustituido por uno o dos miembros seleccionados a partir de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metoxilo, fenilo, hidroxilo, di-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-amino, tal como dimetil-amino o dietil-amino, tioalquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como tiometilo, y/o halógeno que tiene un número atómico hasta de 35 inclusive, tal como cloro, y/o está N-sustituido en un átomo de nitrógeno que es capaz de tener sustitución por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, o fenil-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como bencilo; y R2 es de preferencia hidroxilo, o menos preferiblemente, hidrógeno o amino, y las sales de los mismos, en especial las sales internas y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos con bases. En una modalidad, los agentes terapéuticos son compuestos de la fórmula (I), en donde: R1 es un radical de imidazol-2- ó -4-ilo, el cual está insustituido o C-sustituido por fenilo, o C-o N-sustituido por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, por ejemplo imidazol-2-ilo, 1-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-imidazol-2-ilo, tal como 1-metil-imidazol-2-ilo, o 2- ó 5-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-imidazol-4-ilo, tal como 2- ó 5-metil-imidazol-4-ilo, o es un radical de tiazolilo insustituido, por ejemplo tiazol-2-ilo, o es un radical de IH-1,2,4-triazolilo, el cual está insustituido o sustituido por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, por ejemplo 1 -alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-1 H- ,2,4-triazol-5-ilo, tal como 1 -metil-1 H-1 ,2,4-triazol-5-ilo; y R2 es hidroxilo, o menos preferiblemente, hidrógeno, y las sales, en especial las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En una modalidad, los agentes terapéuticos son compuestos de la fórmula (I), en donde: R1 es un radical de imidazol-1 -ilo, pirazol-1 -ilo, 1H-1,2,4-triazol-1 -ilo, 4H-1 ,2,4-triazol-4-ilo, o tetrazol-1 -ilo, el cual está insustituido o C-sustituido por fenilo o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, por ejemplo imidazol-1 -ilo, 2-, 4- ó 5-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-imidazol-1 -ilo, tal como 2-, 4-, ó 5-metil-imidazol-1 -ilo, pirazol-1 -ilo, 3- ó 4-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-pirazol-1 -ilo, tal como 3- ó 4-met¡l-p¡razol-1 -ilo, 1H-1,2,4-tetrazol-1 -ilo, 3-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-1 H-1 ,2,4-triazol-1 -ilo, tal como 3-metil-1 H-1 ,2,4-triazol-1 -ilo, 4H-1 ,2,4-triazol-1 -ilo, 3-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-4H-1 ,2,4-triazol-4-ilo, tal como 3-metil-4H- ,2,4-triazol-4-ilo, o 1 H-tetrazol-1 -ilo; y R2 es hidroxilo, o menos preferiblemente, hidrógeno, y las sales, en especial las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En una modalidad, los agentes terapéuticos son compuestos de la fórmula (I), en donde: R1 es un radical de imidazolilo, el cual está insustituido o sustituido por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, por ejemplo imidazol-1 -ilo, imidazol-2-ilo, 1 -metil-imidazol-2-ilo, imidazol-4-ilo, o 2- ó 5-metil-imidazol-4-ilo; y R2 es hidroxilo, o menos preferiblemente, hidrógeno, y las sales, en especial las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En una modalidad preferida de la invención, las nanopartículas contienen un fármaco atrapado para el tratamiento de un tumor sólido, tal como ácido zoledrónico. La superficie externa de la nanopartícula puede contener un recubrimiento superficial de polímeros hidrofiücos comprendidos de cadenas poliméricas hidrofílicas, las cuales de preferencia están densamente empacadas para formar un recubrimiento tipo cepillo efectivo para proteger a los componentes superficiales de la nanopartícula. De conformidad con la invención, las cadenas poliméricas hidrofílicas se conectan a los polímeros de las nanopartículas químicamente, o son adsorbidas sin ningún enlace químico. La superficie externa de la nanopartícula puede contener fracciones de afinidad, efectivas para enlazarse específicamente a un objetivo, por ejemplo una superficie biológica tal como una membrana celular, una matriz celular, un tejido, o una superficie o región objetivo hacia la que se dirige la terapia basada en nanopartículas. La fracción de afinidad se enlaza a la superficie externa de la nanopartícula mediante unión covalente, así como mediante interacciones electrostáticas con los componentes superficiales y/o con el recubrimiento polimérico hidrofílico de las nanopartículas. La fracción de afinidad es un ligando efectivo para enlazarse específicamente y con una alta afinidad a las moléculas de enlace de ligando llevadas sobre el objetivo. Por ejemplo, en una modalidad, la fracción de afinidad es efectiva para enlazarse a un antígeno específico del tumor y/o a los receptores sobre-expresados en un tumor sólido, y en otra modalidad, la fracción de afinidad es efectiva para enlazarse a las células en un sitio de inflamación. En otra modalidad, la fracción de afinidad es una vitamina, polipéptido, o polisacárido, o un efector de proteína. Las nanopartículas de la presente invención son para utilizarse en la administración de un agente terapéutico a un objetivo. El agente terapéutico se atrapa dentro de la nanopartícula. La composición de nanopartículas de la presente invención se compone primordialmente de una matriz polimérica. Esta matriz polimérica es una que: (a) se puede formar mediante emulsión; (b) mediante precipitación o el método de depósito superficial; o (c) se puede formar mediante otros métodos de fabricación de nanopartículas conocidos en este campo. Los polímeros formadores de matriz de nanopartículas incluyen poliláctido, poliglicólido, y copolímeros de los polímeros anteriormente mencionados (comúnmente conocidos como ácidos poli-lácticos-glicólicos ó PLGA), poli-aminoácidos, copolímeros de poli-aminoácidos, glicosamino-glicanos, glicosamino-glicanos lipidados, etc.

Adicionalmente, el polímero se selecciona para alcanzar un grado de fluidez o rigidez especificado, para controlar la estabilidad de la nanopartícula en el suero, y para controlar la velocidad de liberación del agente atrapado en la nanopartícula. La rigidez de la nanopartícula, determinada por el polímero, también puede tener un papel en la fusión de la nanopartícula a una célula objetivo, como se describirá. Las nanopartículas de la invención pueden contener un recubrimiento polimérico hidrofílico hecho de cadenas poliméricas, las cuales se enlazan a la superficie de la nanopartícula. Estas cadenas poliméricas hidrofílicas se incorporan en la nanopartícula incluyendo entre aproximadamente el 1 y el 20 por ciento molar de conjugado de polímero hidrofílico-matriz polimérica. Los polímeros hidrofílicos adecuados para utilizarse en el recubrimiento polimérico incluyen poli-vinil-pirrolidona, poli-vinil-metil-éter, poli-metil-oxazolina, poli-etil-oxazolina, poli-hidroxi-propil-oxazolina, poli-hidroxi-propil-metacrilamida, poli-metacrilamida, poli-dimetil-acrilamida, poli-hidroxi-propil-metacrilato, poli-hidroxi-etil-acrilato, h id roxi-meti l-celulosa, h id roxi-eti l-celulosa, polietilenglicol, poliglicerina y poli-aspartamida, ácido hialurónico, copolímero de polioxietileno-polioxipropileno (poloxámero), lecitina, poli-alcohol vinílico. En una modalidad preferida, el polímero hidrofílico es polietilenglicol (PEG), de preferencia como una cadena de PEG con un peso molecular de entre 500 y 10,000 dáltones, más preferiblemente de entre 2,000 y 10,000 dáltones, y de una manera muy preferible de entre 1,000 y 5,000 dáltones. En otra modalidad preferida, el polímero hidrofílico es poli-glicerina (PG), de preferencia una cadena de PG con un peso molecular de entre 400 y 2,000 dáltones, más preferiblemente de entre 500 y 1,000 dáltones, y de una manera muy preferible de entre 600 y 700 dáltones. La composición de nanopartículas de la presente invención puede contener una fracción de afinidad. La fracción de afinidad es en general efectiva para enlazarse específicamente a un objetivo, es decir, una superficie biológica tal como una superficie o membrana celular objetivo, receptores de superficie celular, una matriz celular, una región de placa, o similares. Las fracciones de afinidad se enlazan a la superficie de la nanopartícula mediante la unión directa al componente polimérico de la matriz polimérica, o mediante la unión a la cadena polimérica hidrofílica, como se describirá. En una modalidad, la fracción de afinidad es un ligando efectivo para enlazarse específicamente con un receptor en la región objetivo, más específicamente, un ligando para enlazarse a un receptor sobre una célula objetivo. Los ejemplos no limitantes de los ligandos adecuados para este propósito se enlistan en la Tabla 1.

Tabla 1 . Pares de Ligando-Receptor y Célula Objetivo Asociada Carcinomas Epiteliales, Células Folato Receptor de Folato Totipotentes de Médula Ósea Vitaminas solubles en agua Receptor de vitamina Diferentes células Fosfato de piridoxilo CD4 Linfocitos CD4+ Apolipoproteínas LDL Hepatocitos de hígado, Células endoteliales vasculares Insulina Receptor de insulina Receptor de Células endoteliales Tranferrina transferrina (cerebro) Galactosa Asialoglicoproteína Hepatocitos de hígado Células endoteliales Sialil-Lewis* Selectina E,P activadas Células epiteliales VEGF Flk-1 ,2 tumorales Células epiteliales FGF básico Receptor de FGF tumorales EGF Receptor de EGF Células epiteliales VCAM-1 Integrina-A4l2>2 Células endoteliales vasculares Células endoteliales ICAM-1 lntegrina-aLR2 vasculares Células endoteliales PECA -1/CD31 lntegrina-avB3 vasculares Fibronectina lntegrina-avB3 Plaquetas activadas Células de músculo liso Osteopontina Integrina-a^ y a?ß5 en placas atero- escleróticas Células endoteliales Secuencias RGD de lntegrina-av¾3 tumorales, células de proteínas de matriz músculo liso vascular Los ligandos enlistados en la Tabla 1 se pueden utilizar, en una modalidad de la invención, para dirigir las nanopartículas hacia las células objetivo específicas. Por ejemplo, se puede incorporar en las nanopartículas un ligando de folato unido al polímero en la matriz polimérica o al extremo distal de una cadena de PEG. Una cadena de PEG, como se utiliza en la presente, pretende especificar una cadena de PEG que tenga una longitud (peso molecular) seleccionada de tal manera que el ligando, cuando se incorpore en la nanopartícula, se enmascare o se proteja mediante el recubrimiento superficial de las cadenas poliméricas hidrofílicas. Un ligando de folato enlazado a la superficie incorporado sobre la nanopartícula es efectivo para enlazarse a los receptores de folato sobre las células epiteliales para la administración de un agente terapéutico atrapado a la célula objetivo, por ejemplo, la administración de un agente neoplásico para el tratamiento de carcinomas epiteliales. La fracción de afinidad es un péptido corto que tiene actividad de enlace de células, y es efectiva para competir con un ligando por un sitio receptor. La inhibición del evento de enlace de ligando-célula receptora da como resultado la detención de un proceso de infección. Las matrices poliméricas conteniendo al agente atrapado se preparan de acuerdo con los métodos bien conocidos, tales como los mencionados anteriormente, típicamente emulsión, doble emulsión, y microencapsulación. El compuesto que se vaya a suministrar se incluye en el medio orgánico, en el caso de un compuesto lipofílico, o bien se incluye en el medio acuoso, en el caso de un agente terapéutico soluble en agua. De una manera alternativa, el agente terapéutico se puede cargar en las matrices previamente formadas antes de administrarse a los sujetos. II. Preparación de Nanopartículas A. Preparación del recubrimiento polimérico liberabie Las cadenas poliméricas hidrofílicas se unen a la nanopartícula a través de un enlace, que puede disociarse en respuesta a un estímulo seleccionado. En una modalidad, el enlace es un enlace peptídico, de éster, o de disulfuro. Un compuesto enlazado con péptido se prepara, por ejemplo, mediante el acoplamiento de un poli-alquil-éter, tal como PEG, con una amina. El PEG tapado en el extremo se activa con un reactivo de acoplamiento de carbonil-di-imidazol, para formar el compuesto de imidazol activado. Entonces se acopla el PEG activado con la amina N-terminal del tripéptido de ejemplo mostrado. El grupo amina del péptido se puede utilizar entonces para acoplarse con un grupo carboxilo, a través de un reactivo de acoplamiento de carbodi-imida convencional, tal como diciclohexil-carbodi-imida (DCC). El compuesto enlazado con éster se puede preparar, por ejemplo, mediante el acoplamiento de un ácido polimérico, tal como un poli-ácido láctico, con el grupo alcohol terminal de un poli-alquil-éter, utilizando alcohol por medio de un agente de acoplamiento de anhídrido. De una manera alternativa, se puede utilizar un fragmento de enlace corto que contenga un enlace de éster interno y grupos de extremo adecuados, tales como grupos amina primaria, para acoplar el poli-alquil-éter con el polímero formador de matriz a través de enlaces de amida o carbamato. B. Unión de fracción de afinidad Como se describe anteriormente, las nanoparticulas de la presente invención pueden contener una fracción de afinidad unida a la superficie de las nanoparticulas recubiertas con PEG. La fracción de afinidad se une a las nanoparticulas mediante la unión directa a los componentes superficiales de la nanopartícula, o a través de un brazo espaciador corto o atadura, dependiendo de la naturaleza de la fracción.

Hay una variedad de métodos disponibles para unir moléculas, por ejemplo fracciones de afinidad, a la superficie de las matrices poliméricas. En un método preferido, la fracción de afinidad se acopla con el polímero, mediante una reacción de acoplamiento descrita más adelante, para formar un conjugado de fracción de afinidad-polímero. Este conjugado se utiliza para la formación de las nanopartículas. En otro método, se incorpora un polímero formador de matriz activado para la unión covalente, u otra interacción (es decir, electrostática) de una fracción de afinidad, en las nanopartículas. En general, la unión de una fracción a un brazo espaciador se puede llevar a cabo mediante la derivación del polímero formador de matriz, típicamente PLGA, con un polímero hidrofílico, tal como PEG, que tenga un grupo terminal reactivo para la unión de una fracción de afinidad. Los métodos para la unión de ligandos con cadenas de PEG activadas, se describen en la técnica (Alien y colaboradores, 1995; Zalipsky, 1993; Zalipsky, 1994; Zalipsky, 1995a; Zalipsky, 1995b). En estos métodos, el grupo metoxilo terminal inerte del mPEG es reemplazado con un reactivo funcionalmente adecuado para las reacciones de conjugación, tal como un grupo amino o hidrazida. El PEG funcionalizado en el extremo se une a un lípido, típicamente DSPE. Los derivados de polímero-PEG funcionalizados se emplean en la formación de nanopartículas, y el ligando deseado se une al extremo reactivo de la cadena de PEG antes o después de la formación de las nanopartículas. En el planteamiento anteriormente mencionado, se tiene q ue establecer la eficiencia del en lace covale nte con el com ponente polimérico, depend iendo del polímero utilizado. Por consiguiente , en otro planteamiento, se puede utilizar un polímero bifu ncional para enlazar covalentemente u na fracción de dirección sobre u n extremo y una fracción de carga sobre el otro extrem o . La fracción de ca rga se selecciona de tal m anera q ue su ca rga es opuesta a aquélla del com ponente polimé rico utilizado para form ar la matriz polimérica . C. Preparación de nanopartículas Las nanopartículas se pueden preparar mediante una variedad de técnicas, tales como emulsión o doble emulsión . Típicamente, el polímero se disuelve en un solvente orgánico, y el fármaco se disuelve ya sea en el solvente orgánico o bien en la fase acuosa , dependiendo de su solubilidad relativa en estas dos fases. Se forma una emulsión de aceite en agua , y el solvente se difunde hacia fuera rápidamente, permitiendo que el polímero se precipite como nanopartículas. Este proceso es en general aplicable a los fármacos hidrofóbicos que son solubles en el mismo solvente que el polímero. Para los fármacos hidrofílicos, se puede emplear un proceso de emulsión doble de agua en aceite en ag ua (w/o/w) . El tamaño de partículas se determina por la entrada de energía, tal como mediante sonicación . Los polímeros de matriz utilizados en la formación de las nanopartículas de la presente invención de preferencia están presentes en de aproximadamente el 20 al 98 por ciento de la matriz.

Todavía otro procedimiento de preparación de nanopartículas adecuado para la preparación de las nanopartículas de la presente invención, es un método de inyección de solvente. En este procedimiento, se inyecta una mezcla de los polímeros, disueltos en un solvente, en un medio acuoso, con agitación, para formar las nanopartículas. El solvente se remueve mediante una técnica adecuada, tal como diálisis o evaporación. Las nanopartículas de preferencia se preparan para tener tamaños sustancialmente homogéneos en un intervalo de tamaños seleccionado, típicamente entre aproximadamente 10 nanómetros y aproximadamente 500 nanómetros, de preferencia entre 50 nanómetros y aproximadamente 300 nanómetros, y muy preferiblemente entre 80 nanómetros y aproximadamente 200 nanómetros. Cuando se desee, las nanopartículas se pueden secar, tal como mediante evaporación o liofilización, y se vuelven a suspender en cualquier solvente deseado. Cuando las nanopartículas se liofilizan, se pueden agregar azúcares no reductores antes de la liofilización o durante la formulación de las nanopartículas, para proporcionar estabilidad. Unos de estos azúcares son manitol, sacarosa, trehalosa. Otros agentes estabilizantes pueden incluir aminoácidos, es decir, glicina. La nanopartícula que tiene una matriz de catión divalente se puede hacer mediante la adición de un solvente que contenga un catión divalente durante la preparación de la nanopartícula.

Las na nopartículas se pueden volver a suspender en la solución acuosa mediante centrifugación suave de la solución . La rehidratación se puede llevar a cabo a tem peratu ra a m biente o a otras tem peraturas apropiadas para la com posición de las nanopartículas y su contenido interno . III. Método de Tratamiento La invención incluye, en un aspecto, un método de terapia basada en nanopartículas para un sujeto mamífero, el cual incluye administrar sistémicamente al sujeto, nanopartículas que contienen : (i) una matriz de catión divalente; y (ii) un agente terapéutico. La matriz de catión divalente proporciona la protección de un agente terapéutico que de otra manera pod ría filtrarse hacia fuera de la formulación liposomal tradicional sobre el anaquel y una vez introducido en el cuerpo. En otro aspecto, la invención incluye un método de terapia basada en nanopartículas para un sujeto mam ífero, el cual incluye administrar sistémicamente al sujeto, nanopartículas que contienen : (i) una matriz de catión divalente; (ii) un agente terapéutico; (iii) un recubrimiento polimérico hidrofílico para la estabilidad y para una circulación prolongada; y opcionalmente, (iv) una fracción de afinidad efectiva para enlazarse específicamente a una superficie objetivo hacia la cual se dirija la terapia .

El recubrimiento polimérico hidrofílico se forma de cadenas poliméricas que se enlazan de una manera covalente o se adsorben superficialmente a los componentes superficiales de las nanopartículas. Las nanopartículas administradas se dejan circular sistémicamente hasta que se alcanza una biodistribución deseada de las nanopartículas, para exponer de esta manera al agente de afinidad a la superficie objetivo. En una modalidad preferida, las nanopartículas se utilizan para el tratamiento de un tumor sólido. Las nanopartículas incluyen un fármaco anti-tumoral en una forma atrapada, y se dirigen hacia la región del tumor mediante una fracción de afinidad efectiva para enlazarse específicamente a un antígeno específico del tumor. Por ejemplo, las nanopartículas se pueden dirigir hacia las células endoteliales vasculares de los tumores, incluyendo un ligando del factor de crecimiento endotelial vascular en la nanopartícula, para su unión selectiva con los receptores Flk-1,2 expresados sobre las células endoteliales tumorales en proliferación. En esta modalidad, las nanopartículas se dimensionan entre aproximadamente 10 y 200 nanómetros, de preferencia de 50 a 150 nanómetros, y de una manera muy preferible de 80 a 120 nanómetros. Se ha demostrado que las nanopartículas en este intervalo de tamaños son capaces de entrar a los tumores a través de los "huecos" presentes en el revestimiento de células endoteliales de la vasculatura tumoral [Yuan y colaboradores (1995)]. En una modalidad, los agentes terapéuticos se seleccionan a partir de los compuestos de la fórmula (I). Los compuestos de la fórmula (I), y las sales de los mismos, tienen valiosas propiedades farmacéuticas. En particular, tienen una acción reguladora pronunciada sobre el metabolismo del calcio en los animales de sangre caliente. De una manera más particular, efectúan una inhibición notoria de la resorción ósea en las ratas, como se puede demostrar en el procedimiento experimental descrito en Acra Endocrino!., Volumen 78, páginas 613-24 (1975), por medio del aumento inducido por la PTH en el nivel de calcio en suero después de la administración subcutánea de dosis en el intervalo de aproximadamente 0.01 a 1.0 miligramos/kilogramo, así como en el modelo de rata TPTX (tiroparatiroidectomizada) por medio de la hipercalcemia inducida por la vitamina D3 después de la administración subcutánea de una dosis de aproximadamente 0.0003 a 1.0 miligramos. La calcemia tumoral inducida por los tumores Walker 256 de la misma manera es inhibida después de la administración peroral de aproximadamente 1.0 a 100 miligramos/ kilogramo. En adición, cuando se administra subcutáneamente en una dosificación de aproximadamente 0.001 a 1.0 miligramos/ kilogramo en el procedimiento experimental de acuerdo con Newbould, Brit. J. Pharmacol., Volumen 21, página 127 (1963), y de acuerdo con Kaibara y colaboradores, J. Exp. Med., Volumen 159, páginas 1388-96 (1984), los compuestos de la fórmula (I), y las sales de los mismos, efectúan una notoria inhibición del progreso de las condiciones artríticas en las ratas con artritis adyuvante. Por consiguiente, son eminentemente adecuados para utilizarse como medicamentos para el tratamiento de las enfermedades que estén asociadas con el deterioro del metabolismo del calcio, por ejemplo condiciones inflamatorias de las articulaciones, procesos degenerativos en cartílagos articulares, de osteoporosis, periodontitis, hiperparatiroidismo, y de los depósitos de calcio en los vasos sanguíneos o implantes protésicos. También se logran resultados favorables en el tratamiento de las enfermedades en las que se observe un depósito anormal de sales de calcio pobremente solubles, como en las enfermedades artríticas, por ejemplo, espondilitis anquilosante, neuritis, bursitis, periodontitis, y tendinitis, fibrodisplasia, osteoartrosis, o arteriosclerosis, así como aquéllas en las que el síntoma principal sea una descomposición anormal del tejido corporal duro, por ejemplo hipofosfatasia hereditaria, estados degenerativos de cartílagos articulares, osteoporosis de diferente procedencia, enfermedad de Paget, y osteodistrofia fibrosa, y también las condiciones osteolíticas inducidas por tumores. Después de la administración de las nanopartículas, por ejemplo la administración intravenosa, y después de que haya transcurrido tiempo suficiente para permitir que se distribuyan las nanopartículas a través del sujeto y sean extravasadas hacia dentro del tumor, la fracción de afinidad de las nanopartículas proporciona el enlace y la internalización hacia dentro de las células objetivo. En una modalidad, el recubrimiento superficial hidrofílico se une a las nanopartículas mediante un enlace sensible al pH, y los enlaces se liberan después de que las nanopartículas se hayan extravasado hacia dentro del tumor, debido a la naturaleza hipóxica de la región del tumor. A partir de lo anterior, se puede apreciar la manera en que se satisfacen diferentes características y objetos de la invención. Las nanopartículas de la presente invención proporcionan un método para dirigir las nanopartículas. El recubrimiento superficial hidrofílico reduce la absorción de las nanopartículas, alcanzando un largo tiempo de vida en la circulación sanguínea para la distribución de las nanopartículas. Después de la distribución, las fracciones de afinidad unidas a las nanopartículas permiten hacer la presentación multi-valente y el enlace con el objetivo. Los siguientes ejemplos ilustran los métodos para la preparación, caracterización, y utilización de las nanopartículas de la presente invención. Los ejemplos de ninguna manera pretenden limitar el alcance de la invención. Aunque la invención se ha descrito con respecto a las modalidades particulares, será aparente para los expertos en la técnica que se pueden hacer diferentes cambios y modificaciones sin apartarse de la invención. EJEMPLOS En los siguientes ejemplos, se prepararon nanopartículas mediante el método de emulsión doble. Todas las muestras se procesaron mediante sonicación, evaporación, centrifugación, y liofilización, en la presencia de agua o manitol al 5 por ciento (u otro agente de volumen adecuado, es decir, sacarosa).

Los siguientes ejemplos se fabricaron sin ningún catión divalente, y esta formulación proporcionó una carga de fármaco muy baja en la matriz. Ejemplo A 1. ZOL446 30 mg/mL (PVA al 2.8%/regulador Tris, pH de 8). 2. PLGA, 50:50, MW 90,000 30 mg/mL (en cloruro de metileno). 3. PVA 3% (regulador Tris, pH de 8 + cloruro de calcio). La solución de fármaco del paso 1 se agrega a la solución polimérica del paso 2 mediante sonicación. Esta emulsión primaria se agrega a la solución de PVA del paso 3, y se continúa la sonicación. Las nanopartículas se cosechan mediante la evaporación del solvente, lavado y centrifugación. El producto se liofiliza en la presencia de agua o manitol al 5 por ciento. Ejemplo B 1. ZOL446 30 mg/mL (PVA al 2.8%/regulador Tris, pH de 8). 2. PLGA, 50:50, MW 50,000 30 mg/mL (en cloruro de metileno). 3. PVA 3% (regulador Tris, pH de 8 + cloruro de calcio). La solución de fármaco del paso 1 se agrega a la solución polimérica del paso 2 mediante sonicación. Esta emulsión primaria se agrega a la solución de PVA del paso 3 , y se continúa la sonicación . Las nanopartícu las se cosechan mediante la evaporación del solvente, lavado y centrifugación . El producto se liofiliza en la presencia de ag ua o manitol al 5 por ciento. Ejemplo C 1 . ZOL446 30 mg/mL (PVA al 2.8%/regulador Tris, pH de 8). 2. PLGA, 50:50, MW 1 0,000 30 mg/mL (en cloru ro de metileno). 3. PVA 3% (regulador Tris, pH de 8 + cloruro de calcio). La solución de fármaco del paso 1 se agrega a la solución polimérica del paso 2 mediante sonicación . Esta emulsión primaria se agrega a la solución de PVA del paso 3, y se contin úa la sonicación . Las nanopartículas se cosechan mediante la evaporación del solvente, lavado y centrifugación . El producto se liofiliza en la presencia de agua o manitol al 5 por ciento. Ejemplo D 1 . ZOL446 1 0 mg/mL (PVA al 1 %/reg ulador Tris, pH de 8). 2. PLGA, 50:50, MW 10,000 50 mg/mL (en acetato de etilo). 3. PVA 5% (regulador Tris, pH de 8 + cloruro de calcio). La solución de fármaco del paso 1 se agrega a la solución polimérica del paso .2 mediante sonicación. Esta emulsión primaria se agrega a la solución de PVA del paso 3, y se continúa la sonicación. Las nanopartículas se cosechan mediante la evaporación del solvente, lavado y centrifugación. El producto se liofiliza en la presencia de agua o manitol al 5 por ciento. Ejemplo E 1. ZOL446 30 mg/mL (PVA al 2.8%/regulador Tris, pH de 8). 2. PLGA, 50:50, MW 90,000 30 mg/mL (en cloruro de metileno). 3. PVA 3% (regulador Tris, pH de 8). La solución de fármaco del paso 1 se agrega a la solución polimérica del paso 2 mediante sonicación. Esta emulsión primaria se agrega a la solución de PVA del paso 3, y se continúa la sonicación. Las nanopartículas se cosechan mediante la evaporación del solvente, lavado y centrifugación. El producto se liofiliza en la presencia de agua o manitol al 5 por ciento. Ejemplo F 1. ZOL446 10 mg/mL (PVA al 2.8%/regulador Tris, pH de 8). 2. PLGA, 50:50, MW 140,000 50 mg/mL (en acetato de etilo). 3. PVA 1% (regulador Tris, pH de 8 + cloruro de calcio). La solución de fármaco del paso 1 se agrega a la solución polimérica del paso 2 mediante sonicación. Esta emulsión primaria se agrega a la solución de PVA del paso 3, y se continúa la sonicación. Las nanopartículas se cosechan mediante la evaporación del solvente, lavado y centrifugación. El producto se liofiliza en la presencia de agua o manitol al 5 por ciento. Ejemplo G 1. ZOL446 0.4 mg/mL (Poloxámero al 1%, HCI 0.1N). 2. PLGA, 50:50, MW 75,000 4 mg/mL (en acetona). 3. Poloxámero 1%. La solución polimérica del paso 2 se agrega a la solución de fármaco del paso 1 mediante mezcla. Se evapora la acetona y se recolectan las nanopartículas. El producto se liofiliza en la presencia de manitol al 5 por ciento.

Claims (11)

REIVIN DICACION ES

1 . Un método para administrar ácido zoledrónico a un sujeto mamífero, el cual comprende administrar sistémicamente u na composición de nanopartículas que comprende una matriz polimérica de PLGA con iones de calcio, en donde la matriz polimérica de PLGA contiene ácido zoledrónico.

2. El método de la reivindicación 1 , en donde la composición de nanopartículas tiene un tamaño de partícula promedio de aproximadamente 1 0 nanómetros (nm) a aproximadamente 500 nanómetros.

3. El método de la reivindicación 1 , en donde la composición de nanopartículas comprende además un polímero hidrofílico.

4. El método de la reivindicación 1 , en donde la composición de nanopartículas comprende además una fracción de afin idad .

5. Una composición de nanopartículas, la cual comprende una matriz polimérica de PLGA con iones de calcio, en donde la matriz polimérica de PLGA contiene ácido zoledrónico como un agente terapéutico.

6. La composición de nanopartículas de la reivindicación 5 , la cual comprende además u n polímero hidrofílico.

7. La composición de nanopartículas de la reivindicación 5, la cual comprende además u na fracción de afinidad.

8. Una composición de nanopartículas, la cual comprende: (a) ácido zoledrónico como un agente terapéutico; (b) una matriz polimérica de PLGA con iones de calcio; (c) un recubrimiento polimérico hidrofílico; y (d) una fracción de afinidad.

9. La composición de nanopartículas de la reivindicación 8, en donde la fracción de afinidad es un ligando efectivo para enlazarse específicamente con un receptor de superficie celular sobre la superficie objetivo.

10. La composición de nanopartículas de la reivindicación 8, en donde la fracción de afinidad es efectiva para enlazarse específicamente a un receptor y/o antígeno específico del tumor.

11. La composición de nanopartículas de la reivindicación 8, la cual tiene un tamaño de partícula promedio de aproximadamente 10 nanómetros a aproximadamente 500 nanómetros. RESUM EN Se da a conocer un método de terapia basada en nanopartículas para u n sujeto mamífero. El método utiliza nanopartículas, y/o nanopartículas con superficies externas que contienen una fracción de afinidad efectiva para enlazarse específicamente con una superficie biológica hacia la cual se dirige la terapia, y un recubrimiento polimérico hidrofílico. El recubrimiento polimérico hidrofílico se forma de cadenas poliméricas ya sea covalentemente enlazadas o bien adsorbidas superficialmente a los componentes poliméricos. Después de que se alcanza u na biodistribución deseada de las nanopartículas, el agente de afinidad se enlaza con la superficie objetivo, y ayuda a internalizar las nanopartículas.