MX2008016167A

MX2008016167A - Metodos y composiciones para el tratamiento de condiciones oftalmicas via modulacion de actividad de megalina.

Info

Publication number: MX2008016167A
Application number: MX2008016167A
Authority: MX
Inventors: Nathan L Mata; Yun Han
Original assignee: Sirion Therapeutics Inc
Priority date: 2006-06-22
Filing date: 2007-06-22
Publication date: 2009-02-10
Also published as: CN101500594A; JP2009541357A; US20090098145A1; KR20090029814A; AU2007260872A1; RU2009101646A; EP2037951A2; CA2655036A1; WO2007150046A2; WO2007150046A3

Abstract

Se describen compuestos que provoca ceguera nocturna irreversible que pueden ser usados para tratar condiciones oftálmicas asociadas con la sobreproducción de productos de desperdicio que se acumulan durante el curso de ciclo visual. Se proporcionan métodos y composiciones que usan tales compuestos y sus derivados para tratar por ejemplo degeneraciones y distrofias maculares o para aliviar síntomas asociados con tales condiciones oftálmicas. Tales compuestos y sus derivados pueden ser usados como terapia de un solo agente o en combinación con otros agentes o terapias.

Description

METODOS Y COMPOSICIONES PARA EL TRATAMIENTO DE CONDICIONES OFTALMICAS VIA MODULACIÓN DE ACTIVIDAD DE MEGALINA ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La retina de los vertebrados contiene dos tipos de células fotorreceptoras - bastones y conos. Los bastones están especializados para visión bajo bajas condiciones de luz. Los conos son menos sensibles, proporcionan visión a altas resoluciones temporales y espaciales y proporcionan percepción del color. Bajo condiciones de luz de día, la respuesta del bastón es saturada y la visión es moderada totalmente por los conos. Ambos tipos de células contienen una estructura llamada el segmento externo que comprende una pila de discos membranosos. Las reacciones de transducción visual toman lugar sobre las superficies de estos discos. La primera etapa en la visión es la absorción de un fotón mediante una molécula de opsina-pigmento (rodopsina) , que involucra una isomerización 11-cis a completamente trans del cromóforo. Antes de que se pueda mantener la sensibilidad a la luz, el retinal completamente trans resultantes puede ser convertido de regreso a 11-cis-retinal en un proceso de múltiples enzimas que toman lugar en el epitelio del pigmento retinal (RPE) , una monocapa de células adyacentes a la retina. Actualmente, las opciones de tratamiento para condiciones oftálmicas están limitadas, especialmente para condiciones oftálmicas que involucran la retina y/o mácula.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Se describen en la presente métodos y composiciones para el tratamiento de una condición oftálmica en el ojo de un mamífero que incluye administrar al mamífero una cantidad efectiva de un agente que modula la actividad de un miembro de la familia del gen receptor LDL en la retina y/o células de epitelio del pigmento retinal en el ojo del mamífero. En una modalidad, el miembro de la familia genética del receptor LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal en el ojo es megalina, una proteína megalina-relacionada, LRP, o una proteína LRP-relacionada . En otra modalidad, el miembro de la familia genética del receptor LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal en el ojo es megalina o una proteína megalina-relacionada . En una modalidad adicional, el miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células del epitelio de pigmento retinal en el ojo de megalina. En una modalidad adicional, el miembro de familia genética LDL en la retina y/o células de epitelio del pigmento retinal en el ojo es LRP o una proteína LRP-relacionada. En una modalidad adicional, el miembro de la familia genética del receptor LDL en la retina y/o células de epitelio del pigmento retinal del ojo es LRP. En una modalidad, el miembro de la familia genética de acuerdo con el receptor de LDL y la retina y/o células de epitelio del pigmento retinal en el ojo es la proteína megalina-relacionada.

En una modalidad adicional, el miembro de la familia genética de receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal en el ojo es una proteína LRP-relacionada . En otra modalidad, el miembro de la familia del gen receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio retinal en el ojo es una proteína que comprende las secuencias de péptido enlistadas en la Figura 3. En una modalidad, el miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal en el ojo de un mamífero es un receptor de proteína de enlace de retinoides. En otra modalidad, el miembro de la familia genética de receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal en el ojo de un mamífero es RBP y/o receptor de IRBP. En otra modalidad, el miembro de la familia genética del receptor LDL en la retina y/o células de epitelio del pigmento retinal en el ojo de un mamífero es STRA6 o una proteína STRA6-relacionada . En otra modalidad, el miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal en el ojo de un mamífero es STRA6. En otra modalidad, el miembro de la familia genética de receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal en el ojo de un mamífero es una proteína STRA6-relacionada . Los miembros de la familia genética del receptor LDL están presentes sobre la membrana basal y membrana apical de las células RPE en el ojo. En algunas modalidades, los receptores sobre la membrana basal de las células de RPE no son lo mismos como los receptores sobre la membrana apical de células de RPE en el ojo . En algunas modalidades, los receptores sobre la membrana basal de células RPE son los mismos como los receptores sobre la membrana apical de células de RPE. En algunas modalidades, un agente modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL sobre la membrana basal de células RPE en el ojo. En algunas modalidades, un agente modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL sobre la membrana apical de células de RPE en el ojo. En algunas modalidades, un agente modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL sobre la membrana basal de RPE y no modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL sobre la membrana apical de células de RPE. En algunas modalidades, un agente modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL sobre la membrana basal de células de RPE y modula la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL sobre la membrana apical de células de RPE. En algunas modalidades, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a proteína de enlace de vitamina, lipoproteinas , proteínas inmunes- y estrés-relacionadas, proteínas de enlace de hormona de esteroide, hormonas y precursores, péptidos, enzimas e inhibidores de enzimas, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina, fármacos y toxinas, RAP, calcio (Ca2+) o citocromo c. En algunas modalidades, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a proteínas de enlace de vitamina, proteínas portadoras, lipoproteínas, proteínas inmune- y estrés-relacionadas, proteínas de enlace de hormona de esteroide, hormonas y precursores, péptidos, enzimas e inhibidores de enzimas, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteínas de enlace de odorante, transtiretina; fármacos y toxinas polibásicos, RAP, calcio (Ca2+) o citocromo c. En algunas modalidades, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a proteínas de enlace de vitamina, lipoproteínas, proteínas inmune- y estrés-relacionadas, proteínas de enlace de hormona de esteroides, hormonas y precursores, péptidos, enzimas e inhibidores de enzimas, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina; fármacos polibásicos y toxinas, RAP, calcio (Ca2+) o citocromo c. En una modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a retinol, retinal, un complejo de retinol-RPB, un complejo de retinol RBP-TTR, una proteína de enlace de retinoide interfotorreceptor (IRBP) , un complejo de retinol-IRBP, un complejo de retinal -URBP, transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de vitamina D; apolipoproteína B, apolipoproteína E, apolipoproteína J/clusterina, apolipoproteína H; cadenas ligeras de inmunoglobulina , PAP-1, 2-microglobulina; proteína-estrógenos de enlace de hormona sexual, proteína-andrógenos de enlace de andrógeno; hormona paratiroides , histidina, factor de crecimiento epidérmico, prolactina, tiroglobulina; inhibidor-1 activador de plasminógeno (PAI-1) , urocinasa-PAI - 1 , tPA-PAI-1, pro-urocinasa, lipoproteína lipasa, plasminógeno, ß-amilasa, ß?-microglobulina, lisozima; albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina ; aminoglicósidos , polimixina N, aprotinina, tricosantina, gentamicina, RAP, Ca2+ o citocromo c. En una modalidad, la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a fármacos y toxinas. En una modalidad, la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a fármacos polibásicos y toxinas. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a fármacos catiónicos y toxinas. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a fármacos de amina catiónicos y toxinas. En una modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a antibacterianos, antipsicóticos , antidepresivos, antiarrítmicos, antianginales , agentes anoréxicos o agentes que disminuyen el colesterol . En una modalidad, la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace de un miembro de la familia genética del receptor de LDL a aminoglicósidos . En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace de un miembro de la familia genética del receptor de LDL a arbekacina, gentamicina, kanamicina, neomicina, paramicina, ribostamicina, lividomicina, amikacina, dibekacina, butakacina, tobramicina, estreptomicina, dihidrostroptomicina, sisomicina, verdamicina, netilmicina o butikacina. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace de un miembro de la familia genética del receptor de LDL a arbekacina, gentamicina o kanamicina. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace de un miembro de la familia genética del receptor de LDL a gentamicina . En otra modalidad, la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace de un miembro de la familia genética del receptor de LDL a antimalariales , fármacos antibióticos, fármacos antituberculosis, fármacos antifungales , fármacos de SNC, fármacos cardiovasculares, fármacos antineoplásicos , fármacos dermatológicos, fármacos anti-inflamatorios, fármacos inmunomoduladores , anticonceptivos orales, hormonas, desferoxamina, niacina, warfarina o fármacos simpatomiméticos . En otra modalidad, la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace de un miembro de la familia genética del receptor de LDL a cloroquina, quinina, aminoglicósidos , esparsomicina, clioquinol, etambutol, miconazol, fenotiazinas , clorpromazina, amitriptilina, lisergido, nifedipino, amiodarona, 5-fluorouracilo, tamoxifeno, carmustina, clorambucilo, cis-platino, mitotano, mostaza de nitrógeno, nitrosoureas , vinblastina, vincristina, doxorubicina, etrenitato, cantaxantina, isotretinoina, corticosteroides , ibuprofeno, indometacina, fenilbutazona, tilorona (antiviral) alfa interferón, anticonceptivos orales, clomifeno, deferoxamina, niacina, warfarina, dipivefrina, fenilefrina o epinefrina. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a proteínas de enlace de vitamina. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a proteínas de enlace de retinoide. En una modalidad adicional, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a retinol, RBP, un complejo de retinol-TBP, un complejo de retinol RBP-TTR, IRBP, o un complejo de retinol IRBP. En una modalidad adicional, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a retinol, un complejo de retinol-RBP o un complejo de retinol-RBP-TTR. En una modalidad adicional, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a IRBP o un complejo con retinol IRBP. En una modalidad adicional, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a IRBP, un complejo de retinol-IRBP o un complejo de retinal-IRBP. En una modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de proteínas de enlace de vitamina, lipoproteínas , proteínas inmune- y estrés-relacionadas , proteínas de enlace de hormona de esteroide, hormonas y precursores, péptidos, enzimas e inhibidores de enzimas, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace odorante, transtiretina; fármacos y toxinas, RAP, calcio (Ca2+) o citocromo c. En una modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de proteína de enlace de vitamina, lipoproteínas , proteínas inmune- y estrés-relacionadas , proteínas de enlace de hormona esteroide, hormonas y precursores, péptidos, enzimas e inhibidores de enzimas, albúmina, lactoferrina , hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina, fármacos polibásicos y toxinas, RAP, calcio (Ca2+) o citocromo c. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de retinol, un complejo de retinol-RPB, un complejo de retinol -RPB-TTR, una proteína de enlace de retinoide de interfotorreceptor (IRPB) , un complejo de retinol-IRPB, transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de transcobalamina-vitamina B12 , cobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de vitamina D, apolipoproteína B, apolipoproteína E, apolipoproteína J/clusterina, apolipoproteína H; cadenas ligeras de inmunoglobulina, PAP-1, ß2 -microglobulina, proteína-estrógenos de enlace de hormona sexual, proteína-andrógenos de enlace de andrógenos; hormona paratiroides , insulina, factor de crecimiento epidérmico, prolactina, tiroglobulina ; inhibidor-1 activador de plasminogeno (PAI-1) , urocinasa-PAI-1, tPA-PAI-1, pro-urocinasa, lipoproteína lipasa, plasminogeno, ß-amilasa, ß?-microglobulina, lisozima, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina; aminoglicósidos , polimixina B, aprotinina, tricosantina, gentamicina, RAP, Ca2+ o citocromo c. En una modalidad, la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de fármacos y toxinas. En una modalidad, la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de fármacos polibásicos y toxinas. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de fármacos polibásicos y toxinas. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de fármacos catiónicos y toxinas. En una modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de antibacterianos, antipsicóticos , antidepresores, antiarrítmicos, antianginales , agentes anoréxicos o agentes que disminuyen el colesterol. En una modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de aminoglicósidos. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de arbekacina, gentamicina, kanamicina, neomicina, paramicina, ribostamicina, lividomicina, amikacina, dibekacina, butakacina, tobramicina, estreptomicina, dihidrostroptomicina, sisomicina, verdamicina, netilmicina o butikacina. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de arbekacina, gentamicina o kanamicina. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de gentamicina . En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de antimalariales , fármacos antibióticos, fármacos antituberculosis, fármacos antifungales , fármacos de SNC, fármacos cardiovasculares, fármacos antineoplásicos , fármacos dermatológicos, fármacos anti-inflamatorios , fármacos inmunomoduladores, anticonceptivos orales, hormonas, desferoxamina , niacina, warfarina o fármacos simpatomiméticos . En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de fármacos antibióticos . En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de cloroquina, quinina, aminoglicósidos , esparsomicina, clioquinol, etambutol, miconazol, fenotiazinas , clorpromazina, amitriptilina , lisergido, nifedipino, amiodarona, 5-fluorouracilo, tamoxifeno, carmustina, clorambucilo . cis- platino, mitotano, mostaza de nitrógeno, nitrosoureas , vinblastina, vincristina, doxorubicina, etrenitato, cantaxantina, isotretinoina, corticosteroides , ibuprofeno, indometacina, fenilbutazona, tilorona (antiviral) alfa interferón, anticonceptivos orales, clomifeno, deferoxamina, niacina, warfarina, dipivefrina, fenilefrina o epinefrina. En una modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de retinol, un complejo de retinol-RBP, un complejo de retinol -RBP-TTR o un complejo de retinol -IRBP . En una modalidad, la trancitosis es exocitosis. En otra modalidad, la trancitosis es endocitosis. En otra modalidad, la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el transporte a través de un epitelio de por lo menos una célula de epitelio del segmento retinal de retinol, un de retinol -RBP-TTR o un complejo de retinol-IRBP . En una modalidad, el agente incrementa la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL. En otra modalidad, el agente disminuye la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL. En una modalidad, el agente se enlaza al miembro de la familia genética del receptor de LDL sobre la membrana basal en las células epiteliales del pigmento retinal. En otra modalidad, el agente que se enlaza al miembro de la familia genética del receptor de LDL sobre la membrana apical de las células de epitelio del pigmento retinal. En una modalidad, el agente se enlaza a proteína de enlace de retinol. En otra modalidad, el agente se enlaza a transtiretina . En otra modalidad, el agente que se enlaza a la proteína de enlace de retinoide de interfotorreceptor (IRBP) . En una modalidad, el agente modula la expresión del miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal. En otras modalidades, el agente disminuye la expresión del miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal. En una modalidad, el agente incrementa la expresión del miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal. En una modalidad, el agente es seleccionado de entre un anticuerpo, un polipéptido, un ácido nucleico, un ácido polinucleico, un polímero, proteínas asociadas con receptor (RAP) (un tipo chaperona que está diseñada especialmente para ayudar en la biosíntesis y transporte intracelular de receptores endocíticos) o fragmentos de los mismos, un compuesto orgánico de bajo peso molecular, proteínas de enlace de vitaminas, lipoproteínas , proteínas inmune- y estrés-relacionadas, proteínas de enlace de hormonas de esteroides, hormonas y precursores, péptidos, enzimas e inhibidores de enzimas, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina, fármacos y toxinas, RAP, calcio (Ca2+) , excavadores de calcio, agentes reductores y citocromo c. En una modalidad, el agente es seleccionado de entre un anticuerpo, un polipéptido, un ácido nucleico, un ácido polinucleico, un polímero, una proteína asociada con receptor (RAP) o fragmentos de los mismos, un compuesto orgánico de bajo peso molecular, proteínas de enlace de vitaminas, lipoproteínas , proteínas inmune- y estrés-relacionadas, proteínas de enlace de hormonas de esteroides, hormonas y precursores, péptidos, enzimas e inhibidores de enzimas, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina; fármacos y toxinas, RAP, calcio (Ca2+) , excavadores de calcio, agentes reductores y citocromo c. En otra modalidad, el agente es anticuerpo, un polipéptido, un ácido nucleico, un ácido polinucleico, un polímero, proteínas asociadas con receptor (RA09 o fragmentos de los mismos, un compuesto orgánico de bajo peso molecular, retinol, un complejo de retinol-RBP, un complejo de retinol RBP-TTR, una proteína de enlace de retinoide interfotorreceptor (IRBP) , un complejo de retinol -IRBP, transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de vitamina D; apolipoproteína B, apolipoproteína E, apolipoproteína J/clusterina, apolipoproteína H; cadenas ligeras de inmunoglobulina, PAP-1, 2-microglobulina; proteína-estrógenos de enlace de hormona sexual, proteína-andrógenos de enlace de andrógeno; hormona paratiroides , histidina, factor de crecimiento epidérmico, prolactina, tiroglobulina; inhibidor-1 activador de plasminógeno (PAI-1) , urocinasa-PAI - 1 , tPA-PAI-1, pro-urocinasa, lipoproteína lipasa, plasminógeno, ß-amilasa, ß?-microglobulina, lisozima; albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina ; aminoglicósidos , polimixina N, aprotinina, tricosantina , gentamicina ; RAP, fragmentos de RAP, Ca2+, excavadores de calcio, agentes reductores o citocromo c. En una modalidad, el agente es un anticuerpo. En otra modalidad, el agente es un polipéptido. En otra modalidad, el agente es un ácido nucleico. En otra modalidad, el agente es un ácido polinucleico . En otra modalidad, el agente es un polímero. En otra modalidad, el agente es un aminoglicósido o derivado del mismo. En otra modalidad, el agente es RAP o fragmentos del mismo. En una modalidad adicional, el agente es un compuesto orgánico de bajo peso molecular. En otra modalidad, el agente es un dominio de un miembro de la familia genética del receptor de LDL. En otra modalidad, el agente es un dominio de megalina. En otra modalidad, el agente es un fragmento de proteína de enlace de un retinoide. En otra modalidad, el agente es un fragmento de megalina.

En una modalidad, la cantidad efectiva del agente es administrada sistemáticamente al mamífero. En otra modalidad, la cantidad efectiva del agente es administrada oralmente al mamífero. En otra modalidad, la cantidad efectiva del agente es administrada intravenosamente al mamífero. En una modalidad, la cantidad efectiva del agente es administrada oftálmicamente al mamífero. En una modalidad adicional, la cantidad efectiva del agente es administrada mediante iontoforesis . En otra modalidad adicional, la cantidad efectiva del agente es administrada mediante inyección al mamífero. En una modalidad, el mamífero es un humano. En otra modalidad, un método para el tratamiento de una condición oftálmica en el ojo de un mamífero que incluye administrar al mamífero una cantidad efectiva de un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética de LDL en la retina y/o células de epitelio del pigmento retinal en el ojo del mamífero incluye múltiples administraciones de la cantidad efectiva del agente. En otra modalidad, el tiempo entre múltiples administraciones es de por lo menos una semana. En otra modalidad, el tiempo entre múltiples administraciones es de por lo menos un día. En una modalidad adicional, el compuesto es administrado en una base diaria. En una modalidad, el método incluye además administrar por lo menos un agente adicional seleccionado del grupo que consiste de un inductor de producción de óxido nítrico, un agente anti- inflamatorio, un antioxidante aceptable fisiológicamente, un mineral aceptable fisiológicamente, un fosfolípido cargado negativamente, un carotenoide, una estatina, un fármaco anti-angiogénico, un inhibidor de metaloproteinasa de matriz, ácido 13 -cis-retinoico o un compuesto que tiene la estructura de Fórmula (A) : Fórmula (A) en donde : Xx es seleccionado del grupo que consiste de NR2, 0, S, CHR2; R1 es en donde x es 0, 1, 2, o 3 ; L1 es un solo enlace o -C(0)-; R2 es una porción seleccionada del grupo que consiste de H, (Ci-C4) alquilo, F, (Ci-C4) fluoroalquilo, (Ci-C4) alcoxi , -C(0)0H, -C(0) -NH2, - (Ci-C4) alquilamina, -C (0) - (C1-C4) alquilo, -C(0) - (Ci-C ) fluoroalquilo, -C (O) - (C1-C4) alquilamina y -C(0) - (Ci-C4)alcoxilo y R3 es H o una porción, opcionalmente sustituida con 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente, seleccionados del grupo que consiste de (C2-C7) alquenilo, (C2-C7) alquinilo, arilo, (C3-C7) cicloalquilo, (C5-C7) cicloalquenilo y un heterociclo.

En una modalidad, se encuentran compuestos de Fórmula (A) con la condición de que R3 no es H cuanto ambos x es 0 y L1 es un solo enlace o un metabolito activo o un profármaco o solvato estable farmacéuticamente del mismo, En una modalidad, el agente adicional es un inductor de producción de óxido nítrico. En una modalidad, el inductor de producción de óxido nítrico es seleccionado de entre citrulina, ornitina, L-arginina nitrosada, L-arginina nitrosilada, N-hidroxi-L-arginina nitrosada, N-hidroxi-L-arginina nitrosilada, L-homoarginina nitrosada y L-homoarginina nitrosilada. En una modalidad, el agente adicional es un agente anti - inflamatorio . En otra modalidad, el agente adicional es un agente anti- inflamatorio seleccionado de entre un fármaco anti-inflamatorio no esteroidal, un inhibidor de lipoxigenasa, prednisona, dexametasona y un inhibidor de ciclooxigenasa . En una modalidad, el agente adicional es por lo menos un antioxidante aceptable fisiológicamente. En otra modalidad, el agente adicional es un agente oxidante aceptable fisiológicamente seleccionado de entre vitamina C, vitamina E, beta-caroteno, coenzima Q y 4 -hidroxi-2 , 2 , 6 , 6-tetrametilpiperadin-iV-oxilo . En una modalidad, el agente adicional es por lo menos un mineral aceptable fisiológicamente. En otra modalidad, el agente adicional es un mineral aceptable fisiológicamente seleccionado de entre un compuesto de cinc (II) , un compuesto de Cu (II) y un compuesto de selenio (II) . En una modalidad, el agente adicional es un fosfolípido cargado negativamente. En otra modalidad, el fosfolípido cargado negativamente es fosfatidilglicerol . En otra modalidad, el agente adicional es un carotenoide . En otra modalidad, el agente adicional es un carotenoide seleccionado de entre luteína y zeaxantina. En otra modalidad, el agente adicional es una estatina. En otra modalidad, el agente adicional es una estatina seleccionada de entre rosuvastatina, pitivastatina, simvastatina, pravastatina, cerivastatina, mevastatina, velostatina, fluvastatina, compactina, lovastatina, dalvastatina, fluindostatina, atorvastatina, atorvastatina calcio y dihidrocompactina . En una modalidad, el agente adicional es un fármaco anti-angiogénico o. En una modalidad, el agente adicional es un fármaco anti-angiogénico seleccionado de entre Rhufab V2 , triptofañil -tR A sintetasa, un aptámero anti-VEGF con recubrimiento de PEG, escualamina, acetato de anecortavo, profármaco de Combretastatina A4 , Macugen™, mifepristona, acetonuro de subtenon triamcinolona, triamcinolona acetonida cristalina intravítrea, AG3340, acetonuro de fluocinolona y VEGF-Trap. la inyección de Pegaptanib sodio es un inhibidor anti-VEGF aprobado por la FDA para el tratamiento de AMD e n húmedo y vendido bajo el nombre comercial de Macugen™.

En otra modalidad, el agente adicional es un inhibidor de metaloproteinasa de matriz. En otra modalidad, el agente adicional es un inhibidor de metaloproteinasa de matriz seleccionado de entre inhibidores de tejido de metaloproteinasas, a2-macroglobulina, una tetraciclina, un hidroxamato, un quelante, un fragmento M P sintético, una succinil mercaptopurina, un fosfonamidato y un ácido hidroxamínico . En una modalidad, el agente adicional es ácido 13-cis-retinoico . En una modalidad, el agente adicional tiene la estructura de Fórmula (A) : Fórmula (A) en donde : Xi es seleccionado de entre NR2, O, S, CHR2; R1 es (CHR^x-lZ-R3, en donde x es 0, 1, 2, o 3 ; L1 es un solo enlace o -C(0)-; R2 es una porción seleccionada de entre H, (Ci-C4) alquilo, F, (Ci-C4) fluoroalquilo, (C1-C4) alcoxi , -C(0)0H, -C(0)-NH2, - (Ci-C4) alquilamina, -C (0) - (C1-C4) alquilo, -C (O) - ( Q1. - C4 ) fluoroalquilo , -C (O) - (C1-C4) alquilamina y -C (O) - (Ci-C4) alcoxilo y R3 es H o una porción, opcionalmente sustituida con 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente, seleccionados del grupo que consiste de (C2-C7) alquenilo, (C2-C7) alquinilo , arilo, (C3-C7) cicloalquilo, (C5-C7) cicloalquenilo y un heterociclo . En otra modalidad, los compuestos de de Fórmula (A) se muestran con la condición que R3 no sea H cuando ambos de x es 0 y L1 es un simple enlace o un metabolito activo o un profármaco o solvato aceptable farmacéuticamente del mismo. En otra modalidad, , X1 es NR2, en donde R2 es H o ( Ci - C4 ) alquilo . En otra modalidad, x es 0 . En una modalidad adicional, x es 1 y L1 es -C(O)-. En otra modalidad, R3 es un arilo opcionalmente sustituido. En todavía otra modalidad, R3 es un heteroarilo opcionalmente sustituido. En una modalidad adicional, X1 es H y R3 es un arilo opcionalmente sustituido. En una modalidad adicional, el grupo arilo tiene un sustituyente . Incluso en una modalidad adicional, El sustituyente es una porción seleccionada de entre halógeno, OH , 0 ( Ci - C4 ) alquilo, NH ( Ci -C4) alquilo, 0 ( Ci - C4 ) fluoroalquilo y N [ ( Ci - C4 ) alquilo] 2 · En una modalidad adicional, el sustituyente es OH . En otra modalidad, el arilo es un fenilo.

En una modalidad, el o un metabolito activo o un profármaco o solvato aceptable farmacéuticamente del mismo. En otra modalidad, el agente adicional es 4-hidroxifenilretinamida; 4 -metoxifenilretinamida o un metabolito o un profármaco o solvato farmacéuticamente del mismo. En una modalidad adicional, los dos o más agentes son administrados conjuntamente. En modalidades adicionales, los dos o más agentes son administrados separadamente. En algunas modalidades, los dos o más agentes son administrados en la misma composición farmacéutica. En algunas modalidades, los dos o más agentes son administrados en composiciones farmacéuticas separadas. En algunas modalidades, los métodos descritos en la presente incluyen previa administración del agente adicional . En algunas modalidades, los métodos descritos en la presente incluyen la administración subsecuente del agente adicional . En algunas modalidades, los métodos descritos en la presente incluyen tanto la administración seria como subsecuente del agente adicional . En otra modalidad, el método incluye además administrar al mamífero una terapia seleccionada de entre reoferesis extracorpórea, translocación retinal limitada, terapia fotodinámica, aplicación de láser de drusen, cirugía de agujero macular, cirugía de translocación macular, Movimiento Phu, Terapia de Haz de Protones, cirugía de desprendimiento retinal y vitrea, escleral buckle, cirugía submacular, termoterapia transpupilar, terapia de Fotosistema I, estimulación con microcorriente , interferencia de AR , administración al ojo de medicaciones tales como yoduro de fosfolina o ecotiofato o inhibidores de anhidrasa carbónica, implante de microchips, terapia de célula de tallo, terapia de reemplazo genético, terapia de gen de ribozima, trasplante de fotorreceptor/células retínales, fotocoagulación por láser y acupuntura . En una modalidad, el método incluye además monitorear la formación de drusen en el ojo del mamífero. En una modalidad adicional, el método incluye además medir niveles de lipofucsina en el ojo del mamífero mediante autofluorescencia . En una modalidad adicional, el método incluye además medir la agudeza visual en el ojo del mamífero. En otra modalidad, el método incluye llevar a cabo un examen de campo visual en el ojo del mamífero. En otra modalidad, el examen de campo visual es un examen de campo visual . En otra modalidad, el método incluye además medir la autofluorescencia de N-retiniliden-fosfatidiletanolamina, dihidro-iV-retiniliden-N-retinil-fosfatidiletanolamina, N-retiniliden-N-retinil-fosfatidiletanolamina, dihidro-N-retiniliden-W-retinil -etanolamina y/o N-retiniliden-fosfatidiletanolamina en el ojo del mamífero. En una modalidad, la condición oftálmica es degeneración macular. En otra modalidad, la degeneración macular es degeneración macular juvenil. En otra modalidad, la degeneración macular juvenil es Enfermedad de Stargardt . En otra modalidad, la degeneración macular es degeneración macular relacionada con la edad en forma seca. En todavía otra modalidad, la degeneración macular es distrofia de cono-bastón. En una modalidad, la condición oftálmica es una retinopatía relacionada con el fármaco o inducida por el fármaco . En una modalidad, el humano es portador del alelo ABCA4 mutante por la enfermedad de Stargardt o tiene un gen de ELOV4 mutante. En otra modalidad, el método incluye determinar si el mamífero es portador del alelo ABCA4 mutante o tiene el alelo ELOV4 mutante por la enfermedad de Stargardt. En una modalidad, la administración del agente protege en ojo del mamífero de la luz inducida por daño. En otra modalidad, la condición oftálmica es el padecimiento de atrofia geográfica y/o degeneración del fotorreceptor . En una modalidad, el método descrito en la presente incluye un tratamiento adicional por degeneración retinal. En otra modalidad, el humano tiene una condición o rasgo oftálmico seleccionado de entre la enfermedad de Stargardt, retinitis pigmentosa recesiva, distrofia de cono-bastón recesiva, degeneración macular relacionada con la edad seca, macular relacionada con la edad exudativa, distrofia de cono-bastón, retinitis pigmentosa, una degeneración retinal basada en lipofucsina, degeneración del fotorreceptor y atrofia geográfica . En una modalidad, el método descrito en la presente incluye además medir la velocidad de lectura y/o agudeza de lectura del mamífero. En otra modalidad, el método descrito en la presente incluye además medir el número y/o tamaño del escotoma en el ojo del mamífero. En todavía otra modalidad, el método descrito en la presente incluye además medir el tamaño y/o número de las flexiones de atrofia geográfica en el ojo del mamífero . En una modalidad, la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células del epitelio del pigmento retinol en el ojo es la remoción de lipofucsina del epitelio de pigmento retinal. En otra modalidad, la actividad de Megalina es la remoción de lipofucsina del epitelio de pigmento retinal. En una modalidad adicional, el agente incrementa la remoción de lipofucsina del epitelio de pigmento retinal. En otra modalidad, se describen en la presente composiciones farmacéuticas que incluyen una cantidad efectiva de un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en las células del epitelio de pigmento retinal en el ojo de un mamífero y un portador aceptable farmacéuticamente. En otra modalidad descrita en la presente se encuentran composiciones farmacéuticas que incluyen una cantidad efectiva de un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en el ojo de un mamífero y un portador aceptable farmacéuticamente. En modalidades adicionales, las composiciones farmacéuticas que incluyen un portador aceptable farmacéuticamente que es apropiado para administración oftálmica . Otros objetos, elementos y ventajas de los métodos y composiciones descritos en la presente se harán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada. Sin embargo, se debe entender que la descripción detallada y los ejemplos específicos, en tanto que indican modalidades específicas, son dados a manera de ilustración solamente, puesto que varios cambios y modificaciones dentro del espíritu y alcance de la invención se harán evidentes para aquellos experimentados en el arte de esta descripción detallada. Todas las referencias citadas en la presente, en las que se incluyen patentes, solicitudes de patente y publicaciones, son incorporadas por medio de la presente por referencia en su totalidad.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 ilustra miembros representativos de la familia genética del receptor de LDL.

La Figura 2 ilustra la detección del receptor de LDL, megalina, en tejidos oculares de humano y de rata. (A) un anticuerpo criado contra megalina purificada (de riñon de rata) fue usado para detectar proteínas megalina-inmunorreactivas en los extractos preparados de tejidos de rata y humano. Un extracto de proteína preparado de riñon de rata fue usado como control positivo para este estudio. El análisis de inmunodetección muestra la banda de tamaño molecular apropiado en riñon de rata (Rata K, 6 µgí carril 1) y bandas correspondientes de tamaño molecular idéntico en retinas de rata (Rata, 60 g, carril 2) , RPE de rata (46 µg, carril 3) y RPE de humano (20 µg, carril 4) . La tiroglobulina, que existe tanto en forma de dímero (Mr ~ 670 kDa) y monómero (Mr - 335 kDa) fueron usadas como un estándar del tamaño. (B) determinación de expresión relativa de megalina en RPE de rata y retina mediante análisis de RT-PCR. Dos preparaciones separadas de RPE de rata y retina fueron analizadas con el fin de eliminar la posibilidad de contaminación de tejido. Dentro de cada preparación, cuatro muestras fueron analizadas (1 - 2 µg de AR total fueron usados por muestra) . Los datos mostraron que la expresión de megalina en RPE es ~ 15 veces más alta que aquella en retina. La Figura 3 ilustra la reducción en tamaño molecular de megalina ocular después del tratamiento mediante N-glicosidasa F (PNGasa F) . La megalina es conocida por estar altamente glicosilada. El tratamiento de megalina con PNGasa ha mostrado provocar una reducción en tamaño de proteína ya que las glicanas asociadas son removidas de la proteína. Muestras de tejido de ojera de rata fueron tratadas con PNGasa F (indicado por " + " en el panel A) . Las muestras de control se dejaron sin tratar (indicado por "-" en el panel A) . Las muestras fueron probadas con IgG de anti-megalina . El tejido de riñon de rata fue usado como testigo o control . Los datos muestran una reducción en tamaño molecular de megalina en seguida del tratamiento con PNGasa F. Las bandas de la muestra tratada y sin tratar fueron sometidas a proteolisis limitada seguida por secuenciacion de péptido. Los perfiles de péptidos de las dos muestras fueron idénticos (Panel B) . El análisis de MS/MS de uno de los péptidos reveló una secuencia que es única para megalina (Panel C) . La Figura 4 ilustra la secuenciacion de péptidos de proteína megalina-inmunorreactiva en RPE de rata. Las proteínas megalina-inmunorreactivas identificadas en la Figura 3 fueron extirpadas de un gel de acrilamida y sometidas a proteolisis limitada mediante tratamiento con tripsina. Los péptidos resultantes son separados mediante cromatografía líquida y analizados mediante disociación inducida por colisión en un espectrómetro de masas de electroatomización . Los péptidos secuenciados identificaron la proteína como una proteína 2 relacionada con receptor de lipoproteína de baja densidad, también conocida como megalina (acceso NM 030817.1 GI : 13562118) . La Figura 5 ilustra el sistema de cultivo celular de RPE humano usado para determinar la citolocalización de megalina que en experimentos de bloqueo de receptor para determinar el papel de megalina y otros receptores de lipoproteína en la adición de proteínas de enlace de holo-retinoides. Una representación esquemática del aparato usado para cultivar células de RPE humanas es mostrado en el panel A. Células de RPE son sem5bradas sobre una membrana que contiene laminina permeable que está localizada en la parte de un recipiente cilindrico. Un orificio en la parte superior de este recipiente permite el acceso a la superficie superior de la monocapa de células de RPE a través del medio apical . Esta unidad es colocada a un recipiente cilindrico más grande que proporciona acceso a la superficie inferior de la RPE a través del medio basal . El análisis mediante microscopio electrónico revela que las células de RPE cultivadas de esta manera demuestran una polarización apropiada de procesos apicales a la cámara apical (Panel B) . La Figura 6 ilustra la citolocalización de megalina en RPE humana. Imágenes confocales en fase de inmunorreactividad de megalina en cultivos de RPE humanas son mostradas. La inmunorreactividad de megalina aparece como fluorescencia verde. Los paneles muestran secciones de 1 µp? serial en la superficie de célula de RPE apical (superior izquierdo y que termina en la superficie basal (inferior derecha) . El patrón de teñido indica una localización apical -lateral de megalina. Una reconstrucción de la distribución en el eje Z confirma predominantemente la localización apical-lateral (panel inferior) . Se observa muy poco megalina en la superficie basal. La Figura 7 ilustra la absorción ilustrada por megalina de RBP-retinol en RPE humana. Las células de RPE absorben RBP-retinol basalmente de la circulación sanguínea. Además, las células RPE son también conocidas por sintetizar RPB y secretarla a través del polo apical de la célula. Experimentos de bloqueo de anticuerpo fueron efectuados para determinar si la megalina juega un papel en estos procesos. Un anticuerpo megalina-específico fue agregado a la cámara apical de los cultivos celulares de RPE. Las muestras de control recibieron una concentración equivalente de IgG de conejo pre-inmune. En seguida del período de tratamiento del anticuerpo (2 horas a 4°C), se agregó RBP-retinol (10 µ?) ya sea al medio apical (paneles A y B) o basal (paneles C y D) . La extensión de la absorción de RBP-retinol fue determinada mediante cuantificación de por HPLC de retinil ésteres completamente trans intracelulares (atRE) y retinol completamente- trans (atROL) . la espectroscopia de UV-vis de los picos eluidos cofirmó la identificación de atRE y atROl (recuadros, panel A) .

La absorción de TBP-retinol del medio apical fue ~ 3.5 veces más alto que la absorción del medio basal (compárense barras negras y rojas en el panel E) . El pre-tratamiento de células RPE con el anticuerpo megalina-específico inhibió tanto la absorción de RPE-retinol apical (panel B) y basal (panel D) (40% y 60% de inhibición, respectivamente, panel E) . Estos datos implican megalina en la absorción de RBP-retinol en células RPE. La Figura 8 ilustra la absorción de proteína de enlace de retinoide de interfotorreceptor (IRBP) mediante proteina relacionada al receptor de lipoproteína de baja densidad (LRP) y megalina. Un anticuerpo específico para la cadena pesada de LRP (Mr - 585 kDa) fue usado para probar la extensión en RPE humano. Los estudios inmunoespecífieos mostraron la expresión de LRP predominantemente en las superficies apicalmente de RPE (panel A) . Los análisis de inmunoabsorción proporcionaron que el LRP y anticuerpos de megalina no reaccionan de manera cruzada entre sí (panel B) . La localización apical de megalina y LRP (véase Figuras 6 y 8, respectivamente) , proporcionaron el ímpetu para determinar si estas proteínas pueden jugar un papel en la absorción de IRBP-retinol. Cultivos celulares de RPE fueron pre-tratados ya sea con IgG de conejo pre-inmune (panel C) , IgG de megalina (panel D) o IgG de LRP (panel E) por dos horas a 4°C antes de la aplicación apical de IRBP-retinol (10 µ?) . la extensión de la absorción de IRBP-retinol fue evaluada mediante cuantificación por HPLC de retinil esteres completamente trans (atRE) , que fue confirmado mediante espectroscopia uv-vis (interior, panel C) . Los datos revelaron inhibición significativa de IRBP-retinol mediante megalina como IgG de LRP inhibición de 30 y 40%, respectivamente, panel F) . La Figura 11 ilustra la inhibición de la absorción basal de RBP-retinol en RPE humano mediante RAP. La absorción de RBP-retinol de la circulación ocurre en las superficies básales de la RPE. Estudios de citolocalización, que revelaron receptores de LDL RAP-asociados sobre las membranas de plasma de RPE básales, proporcionaron el ímpetu para determinar si estos receptores pueden jugar un papel en la absorción basal de RBP-retinol. RAP actúa como chaperona para receptores de LDL mediante enlace a los dominios de enlace de ligando presentes sobre estos receptores. Así, RAP puede también ser utilizada como antagonista de enlace de ligando. RAP fue agregada a la cámara basal de cultivos celulares de RPE. Las muestras de control recibieron una concentración equivalente de IgG de conejo pre- inmune. Enseguida del período de tratamiento de anticuerpo (2 horas a 4°C) , se agregó RBP-retinol (10 µ?) al medio basal. La extensión de la absorción de RBP-retinol fue determinada mediante cuantificación de HPLC de retinil ásteres completamente trans intracelulares (atRE) y (atROL) . La espectroscopia de UV-vis de los picos eluídos confirmó la identidad de atRE y atROL (recuadros, panel A) . Las células de RPE que fueron tratadas IgG pre-inmune mostraron absorción robusta y esterificación de atROL (panel A) . En contraste, las células de RPE pre-tratadas con RAP (panel B) demuestra una absorción significativamente reducida de RBP-retinol. La cuantificación de los datos reveló una inhibición de 47% de RBP-retinol mediante RAP (panel C) . La Figura 12 ilustra el nivel de proteína de megalina en la ojera de ratones con diferentes niveles de RBP-retinol en el suero. Los receptores de LDL funcionan para absorber RBP-retinol a RPE. Ratón de expulsiones de RBP y ratones MPR-tratados tienen nivel de RBP-retinol en el suero más bajo. La expresión de megalina en los tejidos de ojera de estos ratones fue examinanda mediante inmunoabsorción. Las fracciones de membrana de ojeras de ratón fueron preparadas de ratón tipo silvestre (WT) , ratón de explus de RBP (RBP-/-) , ABCR nulo {abcr- 1'-) y ratones MPR-tratados (MPR) . Dos bandas inmunoreactivas fueron detectadas (indicadas por flechas blancas en la figura) . Los datos muestran la expresión reducida de ambas proteínas en ratones de RBP expulsados y ratones MPR-tratados en comparación con ratones tipo silvestre y de bloqueo de abcr de edad coincidente. La Figura 13 ilustra la absorción de RBP-retinol y IRBP-retinol a RPE humana. Holo-RBP e IRBP fueron marcados covalentemente con una sonda fluorescente (Alexa Fluor 488) .

Las proteínas marcadas (RBP* y IRBP*) fueron agregadas ya sea a los compartimientos básales (RBP*) o apicales (IRBP*) del sistema de cultivo de célula de RPE. Enseguida de una incubación de 1 hora a 37°C, el medio fue removido, las células fueron lavadas extensamente y las muestras de tejidos analizadas mediante microscopía de fluorescencia. Los datos mostraron absorción pronunciada tanto de RBP* como IRBP* a células de RPE indicando la presencia de un mecanismo endocítico . La Figura 14 ilustra que RAP inhibe la absorción basal de RBP-retinol y la absorción apical de IRBP-retinol. La absorción de IRBP* y RBP* por células de RPE fue monitoreada antes (paneles A y B, respectivamente) y después (paneles D y E, respectivamente) de tratamiento con el antagonista de receptor de LDL RAP. El tratamiento con RAP suprimió completamente la absorción basal de RBP* y la absorción apical de IRBP* . Estos datos indican que el proceso de absorción es moderado por receptores de LDL. Para asegurar que retinol fue también llevado a las células de RPE, las células fueron lavadas, recolectadas y analizadas en cuanto a contenido de retinoide mediante HPLC. La absorción de retinol a células de RPE da como resultado esterificación rápida dando como resultado la formación de retinil éster. La cuantificación de retinil ésteres demostró que las células de RPE no internalizan por supuesto retinol y lo esterifican a retinil ésteres (panel C) . El pre-tratamiento con RAP provocó una reducción de -50% en absorción de retinol tal como es medido por el contenido de retinil éster (panel F) . La Figura 15 ilustra que la transferencia de retinol a CRBP de IRBP-retinol procede a una velocidad mayor que de RBP-retinol. La velocidad más alta de absorción de retinol de IRBP-retinol en comparación con RBP-retinol (véase Figura 14, panel C) sugirió que la trans de retinol de IRBP-retinol al aceptor de retinol intracelular, proteína de enlace de retinol celular (CRBP) , puede proceder a una velocidad mayor. Para tratar esta posibilidad se incubó IRBP-retinol o RBP-retinol con una concentración equimolar de CRBP (10 µ?) y fue desplazamiento espectral monitoreado utilizando CRBP-retinol auténtico como espectro de referencia. Los espectros de excitación de CRBP-retinol (líneas discontinuas en los paneles A y B) son distintos de aquellos de ya sea de IRBP-retinol (trazas rojas en panel A) o RBP-retinol (trazas verdes en panel B) . Enseguida de 1 minuto de incubación a 37°C, hay un desplazamiento obvio en los espectros de excitación de IRBP-retinol indicando transferencia de retinol de IRBP a CRBP. En contraste, no se observó ningún desplazamiento en los espectros de excitación de RBP-retinol aún después de 2 horas de incubación con CRBP. La Figura 16 ilustra un modelo hipotético para la absorción de RBP-retinol e IRBP-retinol. La absorción de RBP- retinol de la RPE basal y la asociación subsecuente con CRBP requiere degradación de la proteína de RBP a través de la ruta lisosomal. En contraste, la asociación de retinol con CRBP de IRBP retinol puede proceder antes de la degradación de proteína ya que el retinol es transferido de IRBP directamente a CRBP.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Dos procesos fundamentales de la visión de los vertebrados sostienen la percepción de luz: transformación de la señal de luz en cambios químicos dentro de células fotoreceptoras y un proceso de regeneración que involucra las células epiteliales del pigmento retinal (RPE) . La isomerizacion del cromóforo del pigmento visual, 11-cis retinal a completamente- trans, dispara un conjunto de reacciones, denominadas colectivamente como fototransducción . Antes de que se pueda volver a ganar la sensibilidad de la luz, el retinal completamente- trans resultante se debe disociar de la apoproteína de opsina e isomerizarse a 11-cis-retinal . El producto fotolizado, retinal completamente- trans, es primero reducido a retinol completamente- trans en los fotoreceptores y luego convertido de regreso a 11-cis retinal en las RPE en un proceso enzimático denominado como el ciclo visual. (Rando, R.R. The Biochemistry of the Visual Cycle. Chem. Rev. 101, 1881-1896, 2001). Los fotoreceptores son separados de la superficie apical de las RPE por el espacio subretinal, que contiene un material extracelular especializado denominado como la matriz de interfotoreceptor (IPM) . La IPM modera interacciones clave entre los fotoreceptores y RPE incluyendo adhesión, fagocitosis, estabilidad de segmento externo, intercambio de nutrientes, desarrollo y tráfico de vitamina A en el ciclo visual. La vitamina A circula en la sangre y entra al ojo en forma de retinol completamente- trans . Esta forma es absorbida de la circulación por la membrana basal de las células de epitelio de pigmento retinal (RPE) , que convierten enzimáticamente el retinol completamente- trans a retinil ésteres completamente- rans. Las RPE contienen la maquinaria enzimática necesaria para la conversión de retinol ésteres completamente- trans a 11-cis retinal. El último retinoide es transportado de las RPE a segmentos externos del fotoreceptor (POS) en la retina, en donde se asocia con opsina para formar rodopsina . Una interacción importante que ocurre entre las RPE y fotoreceptores es el intercambio de retinoides en el ciclo visual. La proteína de enlace de retinoide de interfotoreceptor (IRBP) , una glicoproteína secretoria de fotoreceptor, participa en el ciclo visual al solubilizar los retinoides dentro de la IPM, al apuntar la administración del retinol completamente-trans a las RPE, al promover la liberación de 11-cis retinal de las RPE y al apuntar su administración a los segmentos externos. La IRBP es una glicoproteína con un peso molecular de aproximadamente 140 kDa. La secuencia de aminoácidos y cADN son conocidas. El tráfico de retinoides entre las RPE y la IPM es moderada por transcitosis moderada por receptor. Las IRBP y/o complejo de IRBP-retinol y/o complejo de IRBP-retinal se enlaza a proteínas de receptor, tales como, por ejemplo, miembros de la familia genética del receptor de LDL, sobre la membrana apical de células de RPE. En algunas modalidades, los miembros de la familia genética del receptor de LDL que se enlazan a IRBP y/o complejo de IRBP-retinol y/o complejo de IRBP-retinal son por ejemplo, megalina o proteínas relacionadas con megalina. Las RPE forman parte de la barrera retinal-sangre y también apoyan la función de células fotoreceptoras . La capa celular de RPE actúa como soporte para fotoreceptores que efectúan funciones tales como nutrientes y transporte de desperdicio, también como fagocitosis y POS de corte y degradación/procesamiento del POS fagocilizado dentro del aparato lisosomal (ácido) de las células de RPE. Sin embargo, este procesamiento es alterado por el medio ambiente prooxidante de la retina y es responsable por la formación intralisosomal y acumulación de lipofuscina, un polímero complejo de lípidos peroxidados y residuos de proteína. Los eventos oxidantes en las RPE han estado enlazados a estados de enfermedad tales como degeneración macular relacionada con la edad (AMD) . El inicio de AMD ha sido correlacionado con la acumulación de complejo y bioquímicos tóxicos (toxinas) en y alrededor de las RPE y lipofuscina en la RPE . La acumulación de estos compuestos retinotoxicos en el ojo es uno de los factores de riesgos conocidos más importantes en la etiología de AMD. En por lo menos algunas formas de degeneración macular, la acumulación de lipofuscina en las RPE es debido en parte a la fagocitosis de segmentos externos gastado de células de bastón. Los compuestos retinotóxidos que forman en los discos de segmentos externos de fotoreceptor de bastón. Los compuestos retinotoxicos en los discos son traídos a las RPE, en donde imparten fagocitosis adicional de POS y provocan apóptosis de las RPE. Las células fotoreceptoras , en las que se incluyen células de cono esenciales para la visión en el día, pierden soporte de RPE y mueren. Uno de los compuestos retinotoxicos formados en los discos de segmentos externos de bastón es N-retiniliden-N-retiniletanolamina (A2E) , que es un componente importante de las lipofuscinas retinotóxicas . A2E es formado normalmente en los discos pero en cantidades tan pequeñas que no deteriora la función de RPE en la fagocitosis. Sin embargo, en ciertas condiciones patológicas, tanto A2E se puede acumular en el disco que las RPE son "envenenadas" cuando el segmento externo está fagocitosado . Se ha demostrado que A2E deteriora las funciones de degradación lisosomal de las células de RPE in vitro al elevar el pH intralisosomal . El A2E es producido de retinal completamente- trans, uno de los intermediarios del ciclo visual de las células de bastón. Durante el ciclo visual normal, el retinal completamente-trans es producido a interior de los discos de segmento externo de bastón. El retinal completamente-trans puede reaccionar con fosfatidiletanolamina (PE) , un componente de la membrana del disco, para formar N-retiniliden-PE . La proteína de Rim (RmP) , un transportador de caset de enlace de ATP localizado en las membranas de discos de segmento externo de bastón, transportan luego el retinal completamente-trans y/o N-retiniliden-PE fuera del disco y al citoplasma del segmento externo de bastón. El medio ambiente ahí favorece la hidrólisis del N-retiniliden-PE. El retinal completamente-trans es reducido a retinol completamente-trans en el citoplasma del bastón. Luego el retinol completamente-trans cruza la membrana del plasma de segmento externo del bastón al espacio extracelular y es absorbido por las células de las RPE. El retinol completamente-trans es convertido por medio de una serie de reacciones a 11-cis-retinal , que regresa al fotoreceptor y continúa en el ciclo visual. Defectos en RmP pueden interrumpir el ciclo visual al impedir la remoción del retinal completamente-trans del disco. En una forma recesiva de degeneración macular llamada enfermedad de Stargardt, el gen que codifica RmP, abcr, es mutado y el transportador no es funcional. Como resultado, el retinal completamente- trans y/o N-retiniliden-PE son atrapados en el disco. Luego el N-retiniliden-PE puede reaccionar con otra molécula de retinal completamente- trans para formar A2E. Como se indica anteriormente, algo de A2E es formado aún bajo condiciones normales; sin embargo, su producción es incrementada extensamente cuando sus precursores se acumulan al interior de los discos debido al transportador defectuoso y pueden provocar mediante esto degeneración macular. Otra formas de degeneración macular pueden también resultar de patologías que resultan en la acumulación de lipofuscina. Una forma dominante de enfermedad de Stargardt, conocida como distrofia macular dominante autosomal enlazada a cromosoma 6 es provocada por una mutación en el gen que codifica el alargamiento de los ácidos grasos de cadena muy larga- , ELOV . Los discos mambranosos altamente organizados de los segmentos externos del fotoreceptor requieren lipoproteínas, colesterol y fosfolípidos para su formación. Las RPE pueden estar involucradas en la homeostasis de estos lípidos, lipoproteínas y colesterol en la retina. Las RPE poseen proteínas de receptor, tales como miembros de la familia genética del receptor de LDL, que absorben lipoproteínas y lípidos, también como lipoproteínas y lípidos dañados/peroxidados , tales como que aquellos que se acumulan en las RPE en el endotelio aórtico durante la deficiencia de vitamina E o en macrófagos durante la aterogénesis (Hayes et al. Retinal Pigment Epithelium Possesses Both LDL and Scavenger Receptor Activity. IOVS, vol . 30, no. 2, 225-232, 1989). La absorción de lipoproteínas peroxidadas puede acentuar y/o acelerar la disrupción de funcionamiento de RPE normales y contribuir a la patogénesis de AMD. La lipoproteína de baja densidad oxidada ha mostrado inhibir la fagocitosis del segmento externo de fotoreceptor en células de RPE (Gordiyenko et al. RPE cells Internalize Low-Density Lipoprotein (LDL) and Oxidixed LDL (oxLDL) in Large Quantities in vitro and in vivo. IOVS, vol. 45, no. 8, 2822-2829, 2004). Las RPE son capaces de internalizar LDL y acumular depósitos de LDL in vivo. También se ha demostrado que el LDL del plasma puede llegar a las RPE muy eficientemente en tanto transporta otras moléculas, tales como, por ejemplo, vitamina E también como LDL oxidado. También se ha demostrado que LDL es un vehículo de transporte para A2E a lisosomas de la RPE (Schutt et al. IOVS, vol. 41, no. 8, 2303-2308, 2000). La internalización de lipoproteínas oxidadas también puede ocurrir por medio del reconocimiento y enlace de los fosfolípidos oxidados sobre la superficie de la molécula de lipoproteína oxidada por proteínas de receptor, tal como, por ejemplo, miembros de la familia genética del receptor de LDL. En una modalidad, se encuentran métodos y composiciones para el tratamiento de una condición oftálmica en el ojo de un mamífero que incluye administrar al mamífero una cantidad efectiva de un agente que modula la actividad de un miembro de La familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal en el ojo del mamífero, en donde la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la absorción de lipoproteínas y/o lipoproteínas oxidadas. Información adicional con respecto a la organización anatómica del ojo de vertebrados, el ciclo visual para regeneración de rodopsina y la biogénesis de A2E-oxiranos es provista en la Solicitud de patente estadounidense No. 11/150,641, presentada el 10 de junio de 2005, solicitud de patente PCT No. US 2005/29455, presentada el 17 de agosto de 2005; solicitud de patente estadounidense No. 11/258,504, presentada el 25 de octubre de 2005; solicitud de patente estadounidense No. 11/296,909, presentada el 8 de diciembre de 2005; y solicitud de patente estadounidense No. 11/267,395, presentada el 4 de noviembre de 2005; el contenido de las cuales es incorporada en la presente por referencia en su totalidad .

Degeneraciones y distrofias maculares o retínales La degeneración macular (también denominada como degeneración retinal) es una enfermedad del ojo que involucra deterioro de la mácula, la porción central de la retina. Aproximadamente el 85% al 90% de los casos de degeneración macular son del tipo "seco" (atrófico o no neovascular) . En la degeneración macular seca, el deterioro de la retina está asociado con la formación de pequeños depósitos amarillos conocidos como drusen, bajo la mácula; además de la acumulación de lipofuscina en las RPE conduce a degeneración de fotoreceptor y atrofia geográfica. Estos fenómenos conducen al adelgazamiento y secado de la mácula. La administración de por lo menos un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de RPE, tales como por ejemplo, un agente modulador de megalina a un mamífero puede reducir la formación de o limitar el esparcimiento de degeneración del fotoreceptor y/o atrofia geográfica en el ojo del mamífero. En la degeneración macular "húmeda" se forman nuevos vasos sanguíneos (esto es, neovascularización) para mejorar el suministro sanguíneo al tejido retinal, específicamente debajo de la mácula, una porción de la retina que es responsable por la visión central aguda. Los nuevos vasos son fácilmente dañados y algunas veces se rompen, provocando sangrado y lesión al tejido circundante. Aunque la degeneración macular en húmedo solamente ocurre en aproximadamente 10 por ciento de todos los casos de degeneración macular, suma aproximadamente 90% de la ceguera relacionada con degeneración macular. Las proteínas que promueven el crecimiento llamado factor de crecimiento endotelial vascular o VEGF, han sido apuntadas para disparar este crecimiento de vasos anormal en el ojo. Este descubrimiento ha conducido a investigación agresiva de fármacos experimentales que inhiben o bloquean VEGF. Los estudios han demostrado que agentes anti-VEGF pueden ser usados para bloquear e impedir el crecimiento de vasos sanguíneos anormal. Tales agentes anti-VEGF detienen o inhiben la estimulación de VEGF, de tal manera que hay menos crecimiento de vasos sanguíneos. Tales agentes anti-VEGF pueden también ser exitosos en la anti-angiogénesis o bloqueo de la habilidad de VEGF para inducir el crecimiento de vasos sanguíneos debajo de la retina, también como fuga de vasos sanguíneos. La administración de por lo menos un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de RPE, tales como por ejemplo, un agente modulador de megalina, a un mamífero puede reducir la formación de o limitar el esparcimiento de degeneración macular relacionada con la edad en forma húmeda en el ojo del mamífero. Similarmente, un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, puede ser usado para tratar la neovascularización coroidal y la formación de vasos sanguíneos anormales debajo de la mácula del ojo de un mamífero.

La enfermedad de Stargardt es una distrofia macular que se manifiesta como una forma recesiva de degeneración macular con un inicio durante la niñez. Mutaciones en el gen de ABCA4 humano por proteína de Rim (RmP) son responsables de la enfermedad de Stargardt. Histológicamente, la enfermedad de Stargardt está asociada con la deposición de gránulos de pigmento de lipofuscina en las células de RPE . Las mutaciones en ABCA4 también han estado implicadas en retinitis pigmentosa recesiva, distrofia de cono-bastón recesiva y degeneración macular relacionada con la edad no exudante, aunque la prevalencia de mutaciones de ABCA4 en AMD es todavía incierta. Similar a la enfermedad de Stargardt, estas enfermedades están asociadas con una adaptación a la oscuridad del bastón retardada. La deposición de lipofuscina en células de RPE es también vista prominentemente en AMD, y algunos casos de retinitis pigmentosa. Además, una forma dominante autosomal de enfermedad de Stargardt es provocada por mutaciones en el gen de ELOV4 . Además, hay varios tipos de degeneraciones maculares que afectan a los niños, adolescentes o adultos que son conocidos comúnmente como degeneración macular de inicio prematuro o juvenil. Muchos de estos tipos son hereditarios y son observados como distrofias maculares en lugar de degeneración. Algunos ejemplos de distrofias maculares incluyen: distrofia de cono-bastón, distrofia de córnea, distrofia de Fuch, distrofia macular de Sorsby, enfermedad de Best y retinosquisis juvenil, también como enfermedad de Stargardt .

Absorción de retinol en tejidos oculares Los retinoides (vitamina A y sus análogos) son requeridos para mantener muchos procesos fisiológicos esenciales, en los que se incluyen reproducción normal, inmunidad normal, crecimiento normal y diferenciación celular y visión normal. Todos los retinoides presentes en el cuerpo deben ser adquiridos de la dieta. Enseguida del consumo de una comida rica en vitamina A, junto con otros lípidos de dieta, los retinoides de dieta (modificados como retinil esteres) son empacados en quilomicrones y almacenados en células esteladas hepáticas. Para satisfacer las necesidades del cuerpo por retinoides, el hígado secreta a la circulación retinol enlazado a una proteína de 21 kDa, proteína de enlace de retinol (RBP) . El retinol -RBP es encontrado en un complejo molar 1:1 con una proteína de 55kDa, trantiretina (TTR) . Antes de que la holoproteina de retinol -RBP pueda ser administrada a los tejidos objetivo extra-hepáticos, tales como el ojo, se debe enlazar con transtiretina (TTR). (Zanotti y Bemi, Vitam. Horm. , 69:271-95 (2004)). Es este complejo secundario el que permite que el retinol permanezca en la circulación por períodos prolongados. La asociación con TTR facilita la liberación de RBP de hepatocitos e impide la filtración glomerular y catabolismo renal de RBP. Una cepa de ratón deficiente en transtiretina es viable y fértil, todavía exhibe niveles significativamente disminuidos de retinol en el suero, proteína de enlace de retinol y hormona tiroides, confirmando el papel de la transtiretina para mantener los niveles normales de estos metabolitos en el plasma circulante (Episkopou et al., Proc Nati Acad Sci USA, 1993, 90, 2375-2379) . Además, la reabsorción de transtiretina por los ríñones es moderada por la megalina receptor de lipoproteína (Sousa et al., J" Biol Chem, 2000, 275, 38176-38181) . Esta reabsorción sirve como un medio para impedir la pérdida de hormona en la orina. La megalina, también conocida como gp330, es un miembro de la familia genética del receptor de LDL y está localizada en la ruta endocítica en células de túbulo próximas. La megalina es una proteína endocítica enlazada a la membrana de 600 kDa (en su forma glicosilada) que actúa como un receptor depurador para la absorción de proteínas de fluido tubular (Christensen et al., J. Am. Soc. Nephrol. 10: 2224-2236, 1999). Entre los ligandos que se enlazan a megalina con alta afinidad se encuentran la proteína portadora de vitamina, tales como, por ejemplo, proteínas de enlace de retinoide, tales como, por ejemplo, proteína de enlace de retinol (RBP) y proteína de enlace de retinoide de interfotoreceptor (IRBP) . La megalina es la proteína receptor endocítica más abundante en la ruta endocítica en las células de túbulo próximas y es responsable por la absorción endocítica de proteínas, incluyendo RBP, del ultrafiltrado glomerular. El complejo de retinol -RBP-TTR es administrado a los tejidos objetivo en donde el retinol es absorbido y utilizado para varios procesos celulares. La administración de retinol a las células por medio de la circulación por el complejo de RBP-TTR es la ruta principal a través de la cual las células y tejidos adquieren retinol. A diferencia de otros tejidos en el cuerpo, el ojo absorbe el retinol postprandial muy deficientemente. El ojo debe depender del retinol enlazado a RBP como su medio primario para adquirir el retinoide necesario para la formación de pigmento visual normal (Vogel et al., Biochemistry, 2002, 41, 15360-15368) .

Proteína de enlace de retinol (RBP) La proteína de enlace de retinol o RBP, es una cadena de un solo polipéptido, con un peso molecular de aproximadamente 21 kDa . La RBP ha sido clonada y secuenciada, y su secuencia de aminoácidos determinada. Colantuni et al., Nuc. Acids Res., 11:7769-7776 (1983). La estructura tridimensional de RBP revela una cavidad hidrofóbica especializada diseñada para enlazarse y proteger la vitamina soluble en grasa retinol.

En el plasma, aproximadamente el 95% del RBP del plasma está asociada con transtiretina (TTR) en un proporción de 1:1 mol/mol, en donde esencialmente toda la vitamina A en el plasma está enlazada a RBP. TTR es una proteína en el plasma bien caracterizada que consiste de cuatro subunidades idénticas con un peso molecular de 54,980. La estructura tridimensional completa, enlucidada por difracción de rayos X, revela beta-hojas extensas dispuestas tetrahédricamente . Blake et al., J. Mol. Biol., 121:339-356 (1978). El acomplej amiento de TTR a RBP-retinol se piensa que reduce la filtración glomerular de retinol, incrementando mediante esto la vida media de retinol y RBP en el plasma por aproximadamente tres veces . La absorción de retinol de su forma de retinol -RBP-TTR acoplada a las células, tales como retina y células de RPE, ocurre mediante el enlace de RBP a receptores celulares, tales como, por ejemplo, miembros de la familia genética del receptor de LDL, en células objetivo. En algunas modalidades, el miembro de la familia genética del receptor de LDL es megalina o una proteína megalina-relacionada . En algunas modalidades, el miembro de la familia genética del receptor de LDL es megalina. Esta interacción conduce a endocitosis del complejo de RBP-receptor y liberación subsecuente del retinol del complejo o enlace de retinol a proteínas de enlace de retinol celular (CRBP) y liberación subsecuente de apoRBP por las células al plasma. Otras rutas contemplan mecanismos alternativos para la entrada de retinol a las células, en las que se incluyen absorción de retinol solo la célula. Véase Blomhoff (1994) para una revisión. En los ríñones, se ha demostrado que RBP se enlaza a megalina purificada mediante experimentos de BIAcore y que la proteína de enlace de retinoide y retinol es encontrado en el orina de ratones megalina-deficientes pero está ausente en ratones de control (Christensen El. et al. J. Am. Soc. Nephrol . 10:685-695, 1999). RBP endógeno fue encontrado mediante inmunocitoquimica en los túbulos próximos de ratones de control pero estaba ausente en ratones bloqueados con megalina. Otros tejidos, tales como, por ejemplo, la retina y RPE, también expresan megalina o proteínas relacionadas con megalina y son capaces de enlazarse a RBP e internalizar RBP. A2E, el fluoróforo mayor de lipofuscina, es formado en degeneración macular o retinal o distrofia macular o retinal, incluyendo degeneración macular relacionada con la edad y enfermedad de Stargardt, debido a la producción en exceso del retinoide de ciclo visual, retinaldehído completamente trans, un precursor de A2E. La reducción de la cantidad de vitamina A, 11-cis-retinal y retinal completamente-trans en la retina y RPE, por consiguiente, sería benéfica para reducir A2E y la acumulación de lipofuscina y el tratamiento de degeneración macular relacionada con la edad. La reducción de los niveles de retinol en el suero es un procedimiento contemplado para el tratamiento de alteraciones oculares. Otro procedimiento para el tratamiento de alteración ocular es modular la absorción de retinol a los tejidos oculares. En un procedimiento, la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL que es expresado en la retina y/o células de RPE es modulada con un agente, de tal manera que el retinol, retinol -RBP y/o complejo de retinol -RBP-TTR es/son impedidos de enlazarse al (a los) receptor (es) , inhibiendo mediante esto la entrada del retinoide a las RPE y/o retina. En otro procedimiento, la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL que es expresado en retina y/o células de RPE es modulada con un agente, de tal manera que el retinol, retinol -RBP, retinol -RBP-TTR y/o complejo de retinol-IRBP se impide de enlazarse al (a los) receptor (es) . La inhibición del enlace de retinol, retinol-RBP, retinol -RBP-TTR y/o complejo de retinol-IRBP a un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de RPE puede someter a disrupción el ciclo visual. La disrupción del ciclo visual puede disminuir la cantidad o acumulación de químicos tóxicos que están presentes en la retina y/o células de RPE en ciertas condiciones oftálmicas. Se identifican en la presente proteínas receptoras pertenecientes a la familia genética del receptor de LDL en retina y células epiteliales de pigmento de retina (RPE) . En una modalidad, la proteína receptora perteneciente a la familia genética del receptor de LDL es un receptor de proteína de enlace de retinoide. En algunas modalidades, la proteína receptora es megalina. En algunas modalidades, la proteína receptora es una proteína megalina-relacionada . En algunas modalidades, la proteína receptora es LRP. En algunas modalidades, la proteína receptora es una proteína LRP-relacionada. En algunas modalidades, la proteína receptora es STRA6 ó una proteína STRA6-relacionada . En algunas modalidades, la proteína receptora es STRA6. En algunas modalidades, la proteína receptora es una proteína STRA6-relacionada . STRA6 ha sido identificado como receptor de membrana para proteína de enlace de retinol y evidencia es mostrada que STRA6 puede moderar la absorción celular de vitamina A. Información adicional concerniente a STRA6 se puede encontrar en la patente estadounidense No. 7,173,115, Kawaguchi R. et al., 2007, Science 315: 820-25 y Blaner W. 2007, Cell Metabolism 5: 164-66, que son todas incorporadas por referencia en su totalidad. Información adicional concerniente con la proteína STRA6 relacionada se puede encontrar en las solicitudes de patente US 2007/0128188, US 2003/0021788 y US 2002/0156252, que son todas incorporada por referencia en la presente en su totalidad. Se proporcionan en la presente métodos para prevenir, tratar o curar defectos visuales al antagonizar, agonizar y/o modular la actividad de receptores transcitóticos en retina y células de RPE, que pertenecen a la familia genética del receptor de LDL. En algunos casos, un receptor perteneciente a la familia genética del receptor de LDL en la membrana basal de la RPE es antagonizada con un agente de enlace de la familia genética del receptor de LDL, impidiendo así el enlace y absorción de RBP-retinol, RBP-retinol -TTR o retinol a las RPE. En otros casos, un receptor perteneciente a la familia genética del receptor de LDL sobre la membrana apical de las RPE es antagonizado por un agente de enlace de la familia genética del receptor de LDL, impidiendo así el enlace y transcitosis de retinol, retinal, IRBP-retinol , IRBP-retinal o IRBP hacia adentro o hacia afuera de las células de RPE.

Efectos tóxicos de fármacos y toxinas Una variedad de alteraciones o condiciones oculares son el resultado de tratamiento con fármacos y toxinas. Por ejemplo, antibióticos, tales como aminoglicósidos , son usados frecuentemente en oftalmología para tratar o impedir infecciones bacterianas. Se sabe que estos antibióticos son ototóxicos, nefrotóxicos también como tóxicos retínales. (D'Amico et al. Retinal Toxicity of Intravitreal Gentamicin Invest. Ophthalm. Vis. Sci. 25:564-572, 1984; Campochiaro et al. Arch. Ophthalmol . 113 (3 ): 262 -263 , 1995; Grizzard, Arch Ophthalmol. 112 (1) : 48-53 , 1994). Los aminoglicósidos tales como, por ejemplo, arbecacina, gentamicina, canamicina, neomicina, paramicina, ribostamicina, lividomicilia, amicacina, dibecacina, butacacina, tobramicina, estreptomicina, dihidroestroptomicina, sisomicina, verdamicina, netilmicina y buticacina han mostrado acumularse en tejido ocular y/o ejercer efectos tóxicos en el ojo. En una modalidad, un agente impide el enlace de un antibiótico a un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE . En otra modalidad, se proporciona un agente en la presente que impide el enlace de y transcitosis de un antibiótico por un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE. Otras alteraciones del ojo están relacionadas con fármacos que exhiben toxicidad ocular. Ciertos fármacos farmacéuticos se acumulan en la retina y/o células de RPE en el ojo. En ciertos casos, fármacos terapéuticos son metabolizados en tejidos oculares, tales como, por ejemplo, retina y/o células de RPE en el ojo. La retina, repleta con citocromos P450 y mieloperoxidasa, pueden servir para activar xenobióticos a oxidantes, dando como resultado lesión ocular. Estos agentes activados pueden formar directamente aductos retínales o pueden disminuir concentraciones de glutationa reducidas oculares. (Toler, Exp. Biol . Med. 229:607-615, 2004). En una modalidad, la inhibición del enlace de fármacos terapéuticos a miembros de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE reduce la toxicidad ocular relacionada con el uso de dichos fármacos terapéuticos. En otra modalidad, el enlace y transcitosis de un fármaco terapéutico por un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y células de RPE es inhibida por un agente descrito en la presente. Las retinopatías son divididas en dos categorías amplias, retinopatías simples o no proliferativas y retinopatías proliferativas . Las retinopatías simples incluyen los defectos identificados por el abultamiento de las pareces de vasos, mediante sangrado al ojo, mediante grupos pequeños de células retínalas muertas llamadas exudados de lana de algodón y por vasos cerrados. Esta forma de retinopatía es considerada moderada. Las formas proliferativas o severas de retinopatías incluyen los defectos identificados por vasos sanguíneos recién nacidos, mediante tejido de cicatriz formado dentro del ojo, mediante vasos sanguíneos cerrados que están fuertemente dañados y por la retina que se rompe de la mala de vasos sanguíneos que nutre (desprendimiento retinal) . Una variedad de efectos retínales inducidos por fármacos terapéuticos han sido observados en el curso de tratamiento médico. (LeBlanc et al. Regulatory Toxicology and Pharmacology 28, 124-132, 1998). Fármacos en una variedad de clases terapéuticas han mostrado algunos efectos tóxicos en el ojo. Fármacos que han mostrado algunos efectos retínales inducidos por fármaco incluyen: - antimalariales , tales como, por ejemplo, cloroquina, quinina; fármacos antibióticos, tales como por ejemplo, aminoglicósidos, espasomicina, clioquinol; - fármacos antituberculosis, tales como, por ejemplo, etambutol ; fármacos antifungales , tales como, por ejemplo, miconazol ; fármacos de SNC, tales como, por ejemplo, fenotiazinas , tales como, por ejemplo, clorpromazina, amitriptilina, lisérgido; - fármacos cardiovasculares, tales como, por ejemplo, nifedipino, amiodarona; - fármacos antineoplásicos , tales como, por ejemplo, 5-fluorouracilo, tamoxifeno, carmustina, clorambucilo, cis-platino, mitotano, mostaza de nitrógeno, nitroso ureas, vinblastina, vincristina, doxorubicina ; - fármacos dermatológicos, tales como, por ejemplo, etretinato, cantaxantina, isotretinoína ; fármacos anti-inflamatorios , tales como, por ejemplo, corticosteroides , ibuprofeno, indometacina, fenilbutazona ; fármacos inmunomoduladores , tales como, por ejemplo, tilorona (antiviral) alfa interferón; - anticonceptivos orales; - hormonas, tales como, por ejemplo, clomifeno; otros, tales como, por ejemplo, deferoxamina, niacina, warfarina; - fármacos simpatomiméticos , tales como, por ejemplo, dipivefrina, fenilefrina, epinefrina. Las RPE junto con la pared capilar constituye la barrera sangre-retinal . La entrada de fármacos terapéuticos a la retina y/o células de RPE en el ojo se lleva a cabo mediante transcitosis moderada por receptor. En algunas modalidades, los fármacos terapéuticos se enlazan a un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de RPE en el ojo y sufren transcitosis moderada por receptor. Se proporcionan en la presente métodos y composiciones para el tratamiento y/o prevención de efectos secundarios tóxicos retínales atribuidos a fármacos terapéuticos. En una modalidad, el enlace de un fármaco terapéutico, que exhibe toxicidad ocular, a un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE es inhibido por un agente de enlace de la familia genética del receptor de LDL, tal como, por ejemplo, agente de enlace de megalina. En otra modalidad, un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE es antagonizado con un agente de enlace de la familia genética del receptor de LDL, impidiendo así el enlace y absorción de un agente terapéutico a la retina y/o células de RPE. En una modalidad, el fármaco terapéutico es un fármaco antibiótico. En otra modalidad, el fármaco terapéutico es una aminoglicósido . En algunas modalidades, el fármaco terapéutico retinal -tóxico es enlazado a una lipoproteína o una proteína portadora, tal como, por ejemplo, albúmina o lactoferrina . El enlace de la proteína portadora o lipoproteína al miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE proporciona otro medio para la entrada del fármaco terapéutico retinal -tóxico a la retina y/o células de RPE. En una modalidad, un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE es antagonizado con un agente de enlace de la familia genética del receptor de LDL, impidiendo así el enlace y absorción de una proteína portadora o liproteína a la retina y/o células de RPE.

Familia genérica del receptor de LDL Las proteínas individuales pueden poseer uno o más dominios de monómero discretos. Estas proteínas son frecuentemente llamadas proteínas de mosaico. Por ejemplo, miembros de la familia genética del receptor de (LDL) lipoproteína de baja densidad contienen cuatro dominios estructurales principales: las repeticiones de dominio A ricas en cisteína, repeticiones semejantes a precursor de factor de crecimiento epidérmico, un dominio de transmembrana y un dominio citoplásmico . La familia genética del receptor de LDL incluye el receptor de lipoproteína de baja densidad (LDL) , receptores de lipoproteína de muy baja densidad (VLDL-R) , receptor 2 de apolipoproteína E, proteína LDL receptor-relacionada (LRP) y megalina. Los miembros de familia tienen las siguientes características: 1) expresión de célula-superficie; 2) enlace de ligando extracelular que consiste de repeticiones de dominio A; 3) requerimiento de calcio para el enlace de ligando; 4) reconocimiento de proteína receptor-asociada y apolipoproteína (apo) E; 5) dominio de homología del precursor de factor de crecimiento epidérmico (EGF) que contiene repeticiones de YWTD; 6) región de una sola extensión de membrana; y 7) endocitosis moderada por receptor de varios ligandos. Véase Hussain et al., The Mammalian Low-Density Lipoprotein Receptor Family, (1999) Annu. Rev. Nutr. 19: 141-72. Todavía, los miembros se enlazan a varios ligandos estructuralmente disimilares. Las proteínas de la familia genérica del receptor de lipoproteína de baja densidad (LDL) (Neels, J. G. et al., Fibrinolysis Proteolysis 12, 219-240, 1998), son un grupo de receptores de transmembrana de mosaico relacionados de estructura similar y enlace de un intervalo diverso de ligandos de proteína en sus ectodominios . Los ligandos enlazados a cualquiera de los miembros de la familia genética del receptor de LDL son internalizados mediante endocitosis clásica (Chen et al., J. Biol. Chem. 265, 3116-3123, 1990). En humanos, el grupo de proteínas de la familia genética del receptor de LDL conocidas incluyen, por ejemplo, el receptor de LDL (Russell, D. et al., Cell 37, 577-585, 1984), la proteína LDL receptor-relacionada (LRP) (Herz, J. et al., EMBO J. 7, 4119-4127, 1988; Kristensen, T. et al., FEBS Lett . 276, 151-155, 1990), el receptor de lipoproteína de muy baja densidad (VLDLR) (Webb, J. C. et al. Hum. Mol. Genet. 3, 531-537, 1994), el receptor de apoE (apoER2) (Kim et al. J. Biol . Chem. 271, 8373-8380, 1996), megalina/gp330/LRP2 (Hjalm, G. et al. Eur. J. Biochem. 239, 132-137, 1996), LRP6 (Brown et al. Biochem. Biophys . Res. Commun. 248, 879-888, 1998) y LRP7 (Hey, P. J. et al., Gen (Amst) . 216, 103-111, 1998; Dong, Y. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 251, 784 790, 1998). Véase Figura 1. Los miembros de la familia genética del receptor de LDL son una familia de proteínas de membrana tipo I de un solo paso que moderan la absorción de varias cargas de proteína a células vía la ruta endocítica (Krieger, M. and Herz, J. Structures and functions of multiligand lipoprotein receptors: macrophage scavenger receptors and LDL receptor-related protein (LRP) . Annu. Rev. Biochem. 63, 601-637, 1994) . Cada receptor se enlaza muchas proteínas de carga diferentes y continúa reciclándose a y de la superficie celular. Algunos ligandos se pueden enlazar a diferentes miembros de la familia genética del receptor de LDL. Algunos ligandos se pueden enlazar a solamente un miembro de la familia genética del receptor de LDL. En algunas modalidades, algunos miembros de la familia genética del receptor de LDL se pueden enlazar al mismo ligando. En otras modalidades, solamente un miembro de la familia genética del receptor de LDL se puede enlazar a un ligando particular. En otras modalidades, los miembros de la familia genética del receptor de LDL que son expresados en diferentes tipos de tejidos se enlazan al mismo ligando. En otras modalidades, los miembros de la familia genética del receptor de LDL expresados en diferentes tipos de tejido no se enlazan al mismo ligando. En algunas modalidades, miembros de la familia genética del receptor de LDL que son expresados en diferente porciones de una célula se enlazan al mismo ligando. En otra modalidad, miembros de la familia genética del receptor de LDL que son expresados en diferentes porciones de una célula se enlazan al mismo ligando. En algunas modalidades, un miembro de la familia genética del receptor de LDL que está presente sobre la membrana basal de células de RPE se enlaza al mismo ligando que también se enlaza a un miembro de la familia genética del receptor de LDL que está presente sobre la membrana apical de células de RPE. En algunas modalidades, un miembro de la familia genética del receptor de LDL que está presente sobre la membrana basal de células de RPE no se enlaza al mismo ligando que se enlaza a un miembro de la familia genética del receptor de LDL que está presente sobre la membrana apical de células de RPE. Miembros de la familia genética del receptor de LDL son caracterizados por poseer cinco porciones estructurales comunes : a) Repeticiones ricas en cisteína tipo enlace de ligando (complemento) ; b) Repeticiones ricas en cisteína semejantes al receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF) ; c) dominios de tirosina-triptófano-treonina-ácido aspártico (YWTD) ; d) un solo segmento de extensión de membrana; y e) una cola citoplásmica que incluyen 1-3 porciones de NPxY. La región amino-terminal contiene repeticiones tipo enlace de ligando, se estira de aproximadamente 40 aminoácidos que son cada uno caracterizados por tres enlaces de disulfuro internos, en grupos de dos y once repeticiones individuales. La mayoría de los ligandos a estos receptores interactúan con estos dominios de enlace de ligando. La presencia de múltiples dominios de enlace de ligando conduce a varios modos de enlace de ligando a los receptores. En algunos miembros de la familia genética del receptor de LDL, hay múltiples sitios de enlace independientes para una variedad de ligandos. Para algunos ligandos, hay solamente un solo sitio de enlace de alta afinidad sobre el receptor. En algunos casos, dos o más ligandos diferentes con diferentes sitios de enlace podrían ser aptos de enlazarse al receptor simultáneamente. En algunos casos, una proteína de receptor se puede enlazar a numerosos ligandos estructuralmente distintos con alta afinidad como resultado de: la presencia de múltiples repeticiones tipo enlace de ligando en la proteína receptora, la superficie de contorno única y distribución de carga para cada repetición y de múltiples interacciones tanto entre el ligando como el receptor. Algunos ligandos pueden reconocer diferentes combinaciones de estas repeticiones de manera secuencial, en tanto que otros parecen reconocer repeticiones de grupos separados. Se ha reportado que RAP ocupa dos sitios de enlace sobre la proteína receptora megalina (Beeg, EJ. Br. J. Clin. Pharmacol . 39, 597-603, 1995), mientras que aproximadamente 60-100 moléculas del compuesto orgánico de bajo peso molecular gentamicina se enlazan por proteina de megalina (Schmitz, C. J. Biol. Chem. 227, 618-622, 2002). Las repeticiones ricas en cisteína tipo enlace de lindo (complemento) contienen un número de residuos cargados negativamente que son aptos de enlazarse a ligandos catiónicos (véase, por ejemplo, US 2003/0202974, incorporada por referencia) . En algunas modalidades, el enlace de ligandos catiónicos se lleva a cabo mediante interacciones iónicas con la proteína receptora. Los dominios de enlace de ligando son seguidos por repeticiones tipo precursor del factor de crecimiento epidérmico (EGF) rico en cistaina, separadas por regiones separadoras eficientes de cistaina. Las regiones separadoras contienen porciones de YWTD responsables por la liberación dependiente de pH de ligandos en compartimientos endosomales. Las porciones de YWTD flanqueadas por repeticiones tipo precursor de EGF son denominadas como el dominio de homología de precursor de EGF. En LRP y gp330, los dominios de homología de precursor de EGF son ya sea seguidos por otro dominio de enlace de ligando o una región separadora. En contraste con sus dominios extracelulares , las colas citoplásmicas de los diferentes receptores comparten muy poca similaridad de secuencia, con la excepción de una porción de aminoácido corta caracterizada por la secuencia de consenso NPxY, que designa la porción de tetra-aminoácido asparagina-prolina-X-tirosina (en donde X representa cualquier aminoácido) , que ha demostrado moderar el agrupamiento del receptor de LDL en fosos recubiertos antes de la endocitosis (Willnow T.E. et al. Nature Cellular Biology, vol 1, E157-E162, 1999) . Algunos miembros de la familia genética del receptor de LDL, tales como el receptor de LDL y VLDL receptor, contienen un dominio de azúcar O-enlazado en el espacio extracelular próximo al segmento de extensión de membrana individual . Miembros de la familia genética del receptor de LDL han sido secuenciados, tales como por ejemplo: LRP (proteína relacionada con el receptor de LDL; receptor de alfa-2-macroglobulina) CADN:X13916 M_002332 gen: AH003324 LRP2 (megalina; gp330; gp600) cADN: U33837 gen: NT_002176 receptor 2 de apolipoproteína E (receptor 2 de ApoE 2; LRP8) cADN: D50678 gen: SEG_D86389S receptor de lipoproteína de muy baja densidad (receptor de VLDL) cADN: D16493 gen: SEG_HUMVLDLR LRP1B CADN: N _018557 GEF-7 cADN: AB011540 Receptor de LDL Las células absorben colesterol de la sangre mediante la endocitosis de lipoproteínas de baja densidad (LDL) utilizando el receptor de LDL. Después del enlace de su ligando, los receptores de LDL se agrupan en los pozos recubiertos en la membrana del plasma. Esto es luego seguido por la formación e internalización de vesiculos endocíticos, hidrólisis de lipoproteínas sometidas a endocitosis y lisosomas y liberación de los lípidos al citoplasma (Brown et al. A receptor-mediated pathway for cholesterol homeostasis. Science. 232, 34-47 (1986)). El receptor de LDL juega un papel clave en la homeostasis de colesterol al modelar la internalización celular de apolipoproteína B y/o apolipoproteína E (apoE) que contienen lipoproteínas. El receptor de LDL tiene un dominio citoplásmico de 50 residuos que contiene una secuencia de NPxY (Asn-Pro-x-Tyr, en donde x representa cualquier aminoácido) que apunta este receptor a pozos recubiertos con clatrina. La porción extracelular contiene un dominio de azúcar 0-enlazado y dos grupos de repeticiones ricas en cisteína. El primer grupo rico en cisteína, que está ubicado próximo al dominio de azúcar O-enlazado, tiene homología con las repeticiones semejantes al factor de crecimiento epidérmico que están separadas por cinco copias de una repetición, cada uno contiene un tetrapéptido común, tirosina-triptófano-treonina-ácido aspártico (Y TD) . La homología del factor de crecimiento epidérmico parece necesaria para que el receptor de LDL sufra un cambio conformacional dependiente de ácido que libera ligandos dentro de los endosomas, permitiendo que los receptores sin ocupar se reciclen de nuevo a la superficie celular. El segundo grupo rico en cisteína contiene siete repeticiones semejantes a complemento, que son responsables por el enlace a las apolipoproteína de ligandos B y E.

Proteína receptor de LDL relacionada (LRP) La proteína relacionada con el receptor de LDL (LRP) es más grande que pero estructuralmente similar a otros miembros de la familia genética del receptor de LDL. (Herz et al. J. Clin. Invest. 108:779-784, 2001; Willnow et al. Nature Cell Biology, vol . 1, E157-E162, 1999; Kreiger et al. Structures and functions of multiligand lipoprotein receptors : macrophage scavenger receptors and LDL receptor-related protein (LRP). Annu. Rev. Biochem. 63:601-637 (1994)). LRP es sintetizado como un precursor de 600 kDa (LRP 600) que es escindido para generar un fragmento de 515 kDa amino terminal (LRP 515) y un fragmento de 85 kDa carboxilo-terminal (LRP85) . LRP 515 alberga todos los sitios de enlace de ligando conocidos y permanece asociado no covalentemente con LRP 85, que contiene el afianzador de membrana y el dominio citoplásmico . Como se usa en la presente, "LRP" se refiere a una proteína cuya secuencia de codificación de cADN tiene por lo menos un 75% de identidad de nucleótidos con cADN:X13916 NM_002332; gen: AH003324. Como se usa en la presente, "proteína LRP-relacionada" se refiere a una proteína que pertenece a la familia genética del receptor de LDL y tiene más de 50% de homología a LRP; o reacciona con alta especificidad a anticuerpos anti-LRP (específico) . Mientras que el receptor de LDL parece actuar solamente en el metabolismo de lipoproteína, LRP y otros miembros de esta familia, parecen tener otras funciones distintas. Entre las muchas funciones de LRP, se ha demostrado que cilomicrones son absorbidos en el hígado por la acción endocitótica de LRP. Otros ligandos de enlace de LRP incluyen: - proteinasas y complejos inhibidores: tales como, por ejemplo, complejos de a2M-proteinasa complejos, complejos de proteína de zona de embarazo-proteinasa (PZP) , t-PA, u-PA, t-PA:PAI-l, u-PA:PAI-l, uPA : proteinasa nexina 1, inhibidor de ruta de factor de tejido, elastasa-ai-antitripsina, o¡i-antitripsina, inhibidor Cl; - lipoproteínas : tales como, por ejemplo, apo E, apo E-enriquecida con ß-VLDL, lipoproteína lipasa, VLDL enriquecida con lipoproteína lipasa, ß-VLDL enriquecida con lipoproteína lipasa, lipasa hepática; - agentes de coagulación de la sangre o aglomeración de la sangre: tales como, por ejemplo, Factor IXa, Factor Villa, Factor VIIa/TFPI, antitrombina III, THPI, heparina co-factor II; - proteínas de chaperona : tales como, por ejemplo, HSP-96, RAP; proteínas de matriz: tales como, por ejemplo, trombospondina-1 , trombospondina-2 ; - otras moléculas: tales como, por ejemplo, exotoxina A de pseudomonas, lactoferrina, RAP, o¡2-macroglubulina, remanentes cilomicrónicos, complemento C3 , proteína activadora de espingolípido (SAP), rinovirus, proteína de VIH-Tat, MMP-13, MMP-9, la hormona de tirotropina, el co-factor cobalamina y la proteína lisosomal saposina; RBP e iRBP .

Megalina La megalina, también conocida como gp330 ó LRP2 , es una proteína de superficie celular de 600 kDa en su forma glicosilada, que es expresada sobre muchas superficies epiteliales del cuerpo humano en los que se incluyen los tubos próximos renales, la cóclea del oído interno y el epitelio ciliar del ojo (Christensen et al. Essential Role of Megalin in Renal Proximal Tubule for Vitamin Homeostasis. J. Am. Soc . Nephrol. 10: 2224-2236, 1999). Como se muestra en la presente, por lo menos una proteína de megalina o por lo menos una proteína megalina-relacionada es también expresada en la retina y células de RPE en el ojo. La secuencia de cADN deducida de megalina de rata y humana codifica una proteína de aproximadamente 600 kDa, que exhibe todas las marcas distintivas de un receptor endocítico de la familia genética del receptor de LDL. La megalina es un receptor de transcitosis de superficie celular tipo 1 con un solo dominio de transmembrana. La megalina pertenece a la familia genérica del receptor de lipoproteína de baja densidad (LDL) . La megalina es un receptor de endocitosis de superficie celular tipo 1 con un solo dominio de transmembrana, una cola citoplásmica corta y una porción amino-terminal grande que se extiende al espacio extracelular . La región amino-terminal contiene repeticiones ricas en cisteína tipo enlace de ligando (complemento) , que son estiramientos de aproximadamente 40 aminoácidos cada uno que son caracterizados por tres enlaces de disulfuro interno. Estos repeticiones constituyen los sitios de enlace para ligandos y se ha demostrado que varios ligandos se enlazan al mismo o sitios estrechamente relacionados en el segundo grupo de repeticiones de enlace de ligando (Orlando RA. et al. Proc. Nati. Acad. Sci . USA 94:2368-2373, 1997). Además, la megalina alberga repeticiones tipo precursor de factor de crecimiento epidérmico (EGF) ricos en cisteína, separados por regiones separadoras deficientes de cisteína. Las regiones separadoras contienen porciones de YWTD responsables por la liberación dependiente de pH de ligandos en compartimientos endosomales. La cola citoplásmica de megalina porta tres copias de una porción de NPxY, que dirige los receptores a los pozos recubiertos. La megalina no contiene un dominio de azúcar 0-enlazado, que es encontrado en algunos receptores de la familia genética, tales como, por ejemplo, el receptor de LDL y el receptor de VLDL. La porción extracelular de megalina y LRP se asemejan a múltiples copias del dominio de receptor de LDL. La identidad de secuencia de aminoácidos global entre megalina y otros miembros de la familia varía entre 30 y 50%. La secuencia para el receptor de megalina es mostrado como : - cADN:U33837 - gen: NT_002176 El gen de megalina humano está localizado en el cromosoma 2q24-q31 (Korenberg JR. et al. Genomics 22:88-93, 1994) . A diferencia del receptor de LDL, cuyo papel primario es moderar la absorción celular de lipoproteínas cargadas por colesterol, la megalina, LRP y otros miembros de la familia genética del receptor de LDL, se enlazan y/o reconocen una variedad de ligandos estructuralmente distintos con alta afinidad. Se ha demostrado que la megalina funciona como un receptor depurador promiscuo involucrado principalmente en la absorción de proteínas, vitaminas solubles en lípido y hormonas de esteroide en tejidos que expresan el receptor. Los ligandos de enlace de megalina incluyen una larga lista de diversas proteínas y sustancias químicas. Los Ligandos de enlace de megalina incluyen: - proteínas de enlace de vitamina, que incluyen, por ejemplo, transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de vitamina D, proteína de enlace de retinol, proteína de enlace de retinoide de interfotoreceptor; lipoproteínas , que incluyen, por ejemplo, apolipoproteína B, apolipoproteína E, apolipoproteína J/clusterina, apolipoproteína H/S2-glicoproteína-I ; proteínas inmune- y estrés-relacionadas, que incluyen, por ejemplo, cadenas ligeras de inmunoglobulina, PAP-1, S2-microglobulina; - proteínas de enlace de hormona esteroide, que incluyen, por ejemplo, estrógenos de proteína de enlace de hormona sexual, androgenos de proteína de enlace de andrógeno; - hormonas y precursores, que incluyen, por ejemplo, hormona paratiroides , insulina, factor de crecimiento epidérmico, prolactina, tiroglobulina ; - enzima e inhibidores de enzima, que incluyen, por ejemplo, PAI-1, PAI-l-urocinasa, PAI-l-tPA, pro-urocinasa , lipoproteína lipasa, plasminógeno, ß-amilasa, Sl-microglobulina, lisozima, aprotinina; - otras proteínas portadoras, que incluyen, por ejemplo, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina; - péptidos y hormonas de bajo peso molecular, que incluyen, por ejemplo, PTH, insulina, S2-microglobulina , factor de crecimiento epidérmico, prolactina, lisozima, citocromo c; fármacos y toxinas, que incluyen, por ejemplo, aminoglicósidos, gentamicina, polimixina B, aprotinina, tricosanina ; - anticuerpos, que incluyen, por ejemplo anticuerpo anti-megalina, anticuerpo de megalina anti-rata de conejo, IgG pre-inmune de conejo; - otros ligandos incluyen, por ejemplo, RAP, Ca2+, citocromo c, retinol, retinal, EDTA, tiroglobulina , plasminógeno, albúmina, lactoferrina . La megalina interactúa con su ligandos por medio de los dominios extracelulares del receptor. El enlace ocurre ya sea por medio de interacciones de proteína-proteína complejas (si el ligando es una proteína) o por medio de simple interacción iónica de sustancias cargadas positivamente con arreglos de aminoácidos cargados negativamente a las repeticiones tipo complemento (si el ligando es un compuesto químico) . El enlace de vitaminas lípido-solubles y hormonas de esteroide a megalina son indirectos y moderados por medio de interacción del receptor con proteína portadoras específicas que transportan estas sustancias en el plasma, tales como, por ejemplo, proteína de enlace de retinol o proteína de enlace de retinoide de interfotoreceptor . "Megalina", como se usa en la presente, se refiere a una proteína que es expresada en la retina o células epiteliales de pigmento retinal de un mamífero, cuya secuencia de codificación de cADN tiene por lo menos un 75% de identidad de nucleótidos ya sea con la secuencia de cADN de megalina humana que tiene el número de acceso genético U04441 revelada en Korenberg, J. R. et al. {Genomics. 1994 Jul 1 ; 22 (1) : 88-93 , 1994), número de acceso genético U33837 revelado en Hjalm, G., et al. (Eur J Bioche . 239 (1) : 132-7 , 1996)) o la secuencia de cADN de megalina de rata que tiene el número de acceso de gen L34049 revelado en Saito et al. {Proc. Nati. Acad. Sci . USA, 91 : 9725-9729, 1994) . Como se usa en la presente, "proteína megalina-relacionada" se refiere a una proteína que pertenece a la familia genética del receptor de LDL y tiene más de 50% de homología a megalina; o reacciona con alta especificidad a anticuerpos anti-megalina (específico) ; "Ligando de enlace de megalina" significa: (1) una sustancia que se enlaza con megalina, (2) una sustancia que es incorporada a una célula mediante endocitosis por un mecanismo que es moderado por megalina o (3) una sustancia que por sí misma se enlaza a una sustancia descrita en (1) o (2) de esta definición. El término "ligando de enlace de megalina endógena" significa un ligando de enlace de megalina que se origina o es producido dentro de un mamífero. "Identidad de nucleótido" significa la alineación de secuencia de una secuencia de nucleótidos calculada contra otra secuencia de nucleotidos, por ejemplo la secuencia de nucleotidos de megalina humana. Específicamente, el término se refiere al porcentaje de coincidencias o correspondencias de residuos entre por lo menos dos secuencias de nucleotidos alineadas utilizando un algoritmo estandarizado. Tal algoritmo puede insertar espacios en las secuencias que son comparadas de manera estandarizada y reproducible con el fin de optimizar la alineación entre las secuencias, obteniendo mediante esto una comparación más significativa. El por ciento de identidad entre secuencias de nucleotidos es determinada preferiblemente utilizando los parámetros predeterminados del algoritmo CLUSTAL W tal como es incorporado en la versión 5 del programa de alineación de secuencias MEGALIGN™. Este programa es parte del conjunto LASERGENE™ de programas de análisis biológicos moleculares (DNASTAR, Madison is.). CLUSTAL es descrito en Thompson 1994) . "Secuencia de nucleotidos" y "polinucleótido" se refieren a DNA o RNA, ya sea en forma de una sola hebra o de doble hebra. El término "secuencia de nucleotidos complementaria" se refiere a una secuencia de nucleotidos que se recoce (enlaza) a otra secuencia de nucleotidos de acuerdo con el apareamiento de un nucleótido de guanidina (G) con un nucleótido de citidina (C) y nucleótido de adenosina (A) con un nucleótido de timidina (T) , excepto en ARN en donde un T es reemplazado con un nucleótido de uridina (U) de tal manera que U se enlaza con A. Miembros de la familia genética del receptor de LDL son expresados en diferentes tipos de tejidos. Los miembros de la familia genética del receptor de LDL son expresados en retina y células RPE, también como en el riñon. La megalina es expresada en retina y células de RPE en el ojo, también como en el riñon.

Cubilina La cubilina, una proteína membrana-asociada de 460 kDa que se co-localiza con megalina en algunos tipos de tejidos, puede facilitar el proceso endocítico al secuestrar un ligando sobre la superficie celular antes de la internalización moderada por megalina del ligando cubilina-enlazado . El ligando se puede enlazar a cubilina también como directamente a megalina. Sin embargo, la cubilina parece no ser apta de moderar la endocitosis por sí misma pero la megalina se puede asociar físicamente con cubilina y moderar su internalización. La secuencia de cubilina es mostrado como: - cADN:XM_011904 - gen :NT_008682 (Homo sapiens chromosome 10 working draft sequence segment) Proteína receptor-asociada (RAP) El procesamiento normal de LRP, megalina y otros miembros de la familia genética del receptor de LDL requiere la presencia de RAP, una proteína de 39 kDa (Bu, G. et al., J". Biol. Chem. 271, 22218-22224, 1996; Strickland, D. K. e t al., J. Biol. Chem. 266, 13364-13369, 1991). RAP parece consistir de tres dominios homólogos (Bu, G. , et al., EMBO J. 14, 2269-2280, 1995; Ellgaard, L. et al., Eur. J. Biochem. 244, 544-551, 1997; Rail, S. C. et al., J". Biol. Chem. 273, 24152-24157, 1998; Medved, L. V. et al., J". Biol. Chem. 274, 717-727, 1999), de las cuales el dominio 1 se ha mostrado que consiste de un haz de tres hélices (Nielsen, P. R. et al., Proc. Nati. Acad. Sci . U.S.A. 94, 7521-7525, 1997) . RAP interactúa con todos los miembros de la familia genética del receptor de LDL y es un antagonista universal para todas las interacciones de receptor/1igando . Los dominios de RAP 1 y 3 (RAPd3) son ambos de enlace de receptor ( arshawsky, I. et al. J. Biol. Chem. 268, 22046-22054, 1993), pero solamente el dominio 3 es suficiente para imitar las funciones semejantes a chaperona de RAP en las células (Obermoeller, L. M. et al., J. Biol. Chem. 272, 10761-10768, 1997; Savonen, R. et al., J". Biol. Chem. 274, 25877-25882, 1999.). El dominio 2 de RAP es un sustrato para la cinasa de proteína cA P-dependiente (Petersen, C.M. et al., EMBO J. 15, 4165-4173, 1996) pero tiene solamente una afinidad muy baja por LRP y megalina en comparación con los dominios 1 y 3 de RAP (Tauris, J. et al., FEBS Lett . 429, 27-30, 1998.). Las regiones autónomas de RAP humano incluyen el dominio 1 (posiciones de aminoácidos 18-112) , dominio 2 (posiciones de aminoácidos 113-218) y dominio 3 (posiciones de aminoácidos 219-323) . RAP ha mostrado tener una secuencia mostrado en: XM_003315, Gen: AH006949. RAP se enlaza con alta afinidad a LRP (KD = 4 nM) y antagoniza las propiedades de enlace de ligando de este receptor, impidiendo que modere la internalización celular de ligandos (Williams et al. A novel mechanism for controlling the activity of a2 -macroglobulin receptor/low density lipoprotein receptor-related protein. Múltiple regulatory sites for 39-kDa receptor-associated protein. J\ Biol. Chem. 267 , 9035-9040, 1992) . LRP contiene múltiples sitios de enlace de ligando, cada uno regulado independientemente por RAP. RAP también se enlaza con alta afinidad a gp330 (KD = 8 nM) (Kounnas et al. The 39kDa receptor-associated protein interacts with two members of the low density lipoprotein receptor family, o¡2 -macroglobulin receptor and glycoprotein gp330. J. Biol. Chem. 267, 21162-21166, 1992) y el receptor VLDL (KD = 0.7 nM) (Battey et al. The 39kDa receptor-associated protein regulates ligand binding by the very low density lipoprotein receptor. J. Biol. Chem. 269, 23268-23273, 1994), pero con afinidad más baja al receptor de LDL (KD = 500nM) , y antagoniza las propiedades de enlace de ligando de estos receptores también. RAP agregado exógenamente o la sobreexpresión de de RAP inhiben ambos la actividad de miembros de la familia genética del receptor de LDL ( illnow et al. Inhibition of chylomicron remnant uptake by gene transfer of a receptor anatagonist. Science, 264, 1471-1474, 1994) . Véase también Figura 10, que muestra que RAP exógeno inhibe la absorción de RBP-retinol en células de RPE. Es posible aislar dominios mínimos de RAP, tales como péptidos, que llevan a cabo los dominios funcionales mínimos del enlace de receptor e inhibición y así también funcionan como antagonistas de los miembros de la familia genética del receptor de LDL. En una modalidad, una sustancia derivada de RAP es un péptido que incluye un dominio de función mínima que tiene a lo más 104 aminoácidos, preferiblemente de 20 a 60 aminoácidos. En particular, son dominios de proteína funcionales mínimos. Estos péptidos tienen a lo más 104 aminoácidos, preferiblemente de 20 a 60 aminoácidos. Un dominio preferido son las posiciones de aminoácidos 219-323 de RAP. Otro dominio preferido son las posiciones de aminoácidos 18-112 de RAP. Estudios de expulsión genética han demostrado que las células que carecen de RAP exhiben una reducción en la expresión de miembros de la familia genética del receptor de LDL, supuestamente debido a que RAP impide el enlace prematuro de ligandos recién sintetizados a miembros de la familia genética del receptor de LDL y precipitación del receptor dentro del retículo endoplásmico (ER) . En un modelo de ratón con un defecto de gen RAP inducido (ratón expulsado) , la absorción de agentes terapéuticos es reducida por hasta 50% en comparación con modelos de ratón que no poseen el defecto genético de RAP ( illnow et al. Proc. Nati. Acad. Sci . 92:4537-4541, 1995) . En una modalidad, un método para evaluar si los miembros de la familia genética del receptor de LDL en la retina y RPE son responsables por la absorción celular de ligandos y/o agentes contemplados en la presente, que incluye: Administrar un ligando o agente a un ratón defectuoso de gen de RAP (ratón expulsado) - Administrar un ligando o agente a un ratón tipo silvestre (que no posee el defecto genético de RAP) - Evaluar la cantidad de ligando o agente en la retina y/o células de RPE del modelo de animal y animal de control. En este modelo, la contribución de los procesos responsables por la absorción de los ligandos o agentes a la retina y/o células de RPE llevada a cabo por los miembros de la familia genética del receptor de LDL pueden ser cuantificados . La cantidad de acumulación intracelular del ligando o agente en el ratón defectuoso de gen de RAP en comparación con ratones con suficiente RAP indica si el mecanismo de acumulación intracelular es moderado por miembros de la familia genética del receptor de LDL o por algún otro mecanismo. El experimento mencionado anteriormente puede también ser llevado a cabo al utilizar un modelo de ratón con un defecto genético de megalina inducido (ratón expulsado; Nykjaer et al. Cell, 96, 507-515) . En estos modelos de animal, la contribución de megalina u otros procesos moderados por receptor o independientes de receptor a la absorción de ligando o agente a la retina y células de RPE puede ser probada. La cantidad de acumulación intracelular del ligando o agente en comparación con un control que tiene suficiente megalina indica si el mecanismo de acumulación intracelular es por medio de enlace de megalina o algún otro mecanismo. En algunas modalidades, el ligando es retinol, complejo de RBP-retinol o complejo de RBP-retinol-TTR. En algunas modalidades, el ligando es IRBP, IRBP-retinol o IRBP-retinal. En algunas modalidades, el ligando es un fármaco o toxina. En otra modalidad, el ligando es una antibiótico. En otra modalidad, el ligando es una aminoglicósido . En algunas modalidades, agentes contemplados en la presente pueden ser conjugados a RAP o un polipéptido de RAP, en la diagnosis, profilaxis o tratamiento de enfermedades y condiciones asociadas con la retina y células de RPE, véase, por ejemplo, US 20060029609, que es incorporada por referencia.

TERMINOLOGÍA QUÍMICA Y BIOQUÍMICA A no ser que se definan de otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado como es entendido comúnmente por aquel de habilidad en el arte con el cual la materia reivindicada pertenece. A no ser que se afirme de otra manera, los términos de reivindicación y términos químicos usados en la presente son como se define en la solicitud de patente estadounidense No. 11/150,641, presentada el 10 de junio de 2005, que es incorporada por referencia en la presente para aquel propósito. Todas las patentes, solicitudes de patente, solicitudes y publicaciones publicadas, secuencias de Genbank, sitios web y otros materiales publicados a los que se hace referencia en toda la revelación, a no ser que se indique de otra manera, son incorporadas por referencia en su totalidad. En el caso de que haya una pluralidad de definiciones para términos en la presente, aquellos en esta sección prevalecen. En donde se hace referencia a una dirección de URL u otra de tal identificador o dirección, se entiende que tales identificadores pueden cambiar e información particular en internet puede ir y venir, pero la información equivalente puede ser encontrada al buscar en internet. La referencia a las mismas evidencia la disponibilidad y diseminación pública de tal información. Se comprenderá que tanto que la descripción general anterior como la siguiente descripción detallada son ejemplares y explicativas solamente y no son restrictivas de la materia reivindicada. En esta solicitud, el uso del singular incluye el plural, a no ser que se afirme específicamente de otra manera.

En esta solicitud, el uso de "o" significa "y/o" a no ser que se afirme de otra manera. Además, el uso del término "que incluye" también como otra formas, tales como "incluye", y "incluido", no es limitante. Los encabezados de secciones usados en la presente son por propósitos de organización solamente y no serán interpretados como limitantes de la materia descrita. Todos los documentos o porciones de documentos, citados en la solicitud en los que se incluye, pero no limitados a, patentes, solicitudes de patente, artículos, libros, manuales y tratados son incorporados expresamente en la presente por referencia en su totalidad para cualquier propósito. El término "grupo protector" se refiere a porciones químicas que bloquean algunas o todas las porciones reactivas e impiden que tales grupos participen en reacciones químicas hasta que el grupo protector es removido. Es preferido que cada grupo protector sea removible por un medio diferente. Los grupos protectores que son escindidos bajo condiciones de reacción totalmente disparatadas satisfacen el requerimiento de remoción diferencia. Los grupos protectores pueden ser removidos mediante ácido, base e hidrogenólisis . Grupos tales como tritilo, dimetoxitritilo, acetal y t-butildimetilsililo son ácido lábiles y pueden ser usados para proteger porciones reactivas carboxi e hidroxi en presencia de grupos amino protegidos con grupos Cbz, que son removibles por hidrogenólisis y grupos Fmoc, que son base lábiles. Las porciones reactivas de ácido carboxílico e hidroxi pueden ser bloqueadas con grupos base lábiles tales como, sin limitación, metilo, etilo y acetilo en presencia de aminas bloqueadas con grupos ácido lábiles tales como t-butil carbamato o con carbamatos que son tanto como ácido y base estables pero hidrolíticamente removibles. Las porciones reactivas de ácido carboxílico e hidroxi pueden también ser bloqueadas con grupos protectores hidrolíticamente removibles tales como el grupo bencilo, en tanto que los grupos amina aptos de enlace de hidrógeno con ácidos pueden ser bloqueados con grupos base lábiles tales como Fmoc. Las porciones reactivas de ácido carboxílico pueden ser protegidas mediante conversión a derivados de éster simple como se ejemplifica en la presente o pueden ser bloqueados con grupos protectores removibles oxidantemente tales como 2,4-dimetoxibencilo, en tanto que los grupos amino co-existentes pueden ser bloqueados con silil carbamatos fluoruro lábiles. Los grupos de bloqueo de alilo son útiles en presencia de grupos protectores ácido y base puesto que los primeros son estables y pueden ser removidos subsecuentemente mediante catálisis de metal o catálisis de pi-ácido. Por ejemplo, un ácido carboxílico alil -bloqueado puede ser desprotegido con una reacción Pd°-catalizada en presencia de grupos protectores carbamato t -butilo ácido lábiles o grupos de acetato de aminoácido base-lábiles. Todavía otra forma de grupo protector es una resina a la cual un compuesto o intermediario puede ser anexado. En tanto que el residuo esté anexado a la resina, aquel grupo funcional es bloqueado y no puede reaccionar. Una vez liberado de la resina, el grupo funcional está disponible para reaccionar. Grupos comúnmente bloqueadores/protectores pueden ser seleccionados de: pMBn trityl acetyl Fmoc Otros grupos protectores son descritos en Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed. , John Wiley & Sons, New York, NY, 1999, que es incorporado en la presente por referencia en su totalidad. El término "opcionalmente sustituido" significa que el grupo al que se hace referencia puede estar sustituido con uno o más grupo (s) adicional (es) seleccionados individual e independientemente de alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalicíclico, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto, alquiltio, ariltio, ciano, halo, carbonilo, tiocarbonilo, isocianato, tiocianato, isotiocianato, nitro, perhaloalquilo, perfluoroalquilo, sililo y amino, en los que se incluyen grupos amino mono- y di -sustituidos y los derivados protegidos de los mismos. Los grupos protectores que pueden formar los derivados protectores de los sustituyentes anteriores son conocidos para aquellos de habilidad en el arte ' y pueden ser encontrados en referencias tales como Greene y Wuts. Los compuestos presentados en la presente pueden poseer uno o más centros quirales y cada centro puede existir en configuración R o S. Los compuestos presentados en la presente incluyen todas las formas diastereoméricas , enantioméricas y epimericas también como las mezclas apropiadas de los mismos. Los estereoisómeros pueden ser obtenidos, si se desea, mediante métodos conocidos en el arte, tal como, por ejemplo, la separación de estereoisómeros mediante columnas cromatográficas quirales. Los métodos y formulaciones descritos en la presente incluyen el uso de N-óxidos, formas cristalinas (también conocidas como polimorfos) o sales aceptables farmacéuticamente de un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL, tal como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, también como metabolitos activos de estos compuestos que tienen el mismo tipo de actividad. En algunas situaciones, los compuestos pueden existir como tautómeros. Todos los tautómeros están incluidos dentro del alcance de los compuestos presentados en la presente. Además, el agente que modula miembros de la familia genética del receptor de LDL descritos en la presente puede existir en forma sin solvatar también como formas solvatadas con solventes aceptables farmacéuticamente tales como agua, etanol y los semejantes. La formas solvatadas de los compuestos presentados en la presente también son considerados revelados en la presente. Como se usa en la presente, los aminoácidos, que se presentan en las varias secuencias de aminoácidos que aparecen en la presente, son identificados de acuerdo con sus abreviaturas de tres letras o una letra bien conocidas. Los nucleótidos, que se presentan en los varios fragmentos de ADN, son designados con designaciones de una sola letra estándar usada sistemáticamente en el arte (véase, Tabla 1) . Como se usa en la presente, residuo de aminoácido se refiere a un aminoácido formado en la digestión química (hidrólisis) de un polipéptido en sus enlaces de péptido. Los residuos de aminoácidos descritos en la presente están, en ciertas modalidades, en la forma isomérica "L" . los residuos en la forma isomérica "D" pueden ser sustituidos por cualquier residuo de aminoácido "L" , en tanto que la propiedad funcional deseada sea retenida por el polipéptido. NH2 se refiere al grupo amino libre presente en el término amino de un polipéptido. COOH se refiere al grupo carboxi libre presente en el término carboxilo de un polipéptido. En consistencia con la nomenclatura de polipéptidos estándar descrita en J". Biol . Chem. , 243:3552 59 (1969) y adoptada en 37 C.F.R. §§ 1.821-1.822, las abreviaturas para residuos de aminoácido son mostradas en la siguiente Tabla: Tabla 1. Tabla de Correspond Se debe notar que todas las secuencias de residuos de aminoácidos representadas en la presente por fórmulas tienen una orientación de izquierda a derecha en la dirección convencional de término amino a término carboxilo. Además, la frase "residuo de aminoácido" es definida ampliamente para incluir los aminoácidos enlistados en el Tabla de Correspondencia y modificados y aminoácidos inusuales, tales como aquellos a los que se hace referencia en 37 C.F.R. §§1.821-1.822 e incorporados en la presente por referencia. Además, se debe notar que un guión al comienzo o final de una secuencia de residuos de aminoácidos indica un enlace de péptido a una secuencia adicional de uno o más residuos de aminoácidos o a un grupo terminal amino tal como NH2 o a un grupo terminal carboxilo tal como COOH. En un péptido o proteína, sustituciones conservadoras apropiadas de aminoácidos son conocidas para aquellos de habilidad en el arte y se pueden efectuar en general sin alterar la actividad biológica de la molécula resultante. Aquellos de habilidad en este arte reconocerán que, en general, sustituciones de un solo aminoácido en regiones no esenciales de un polipéptido no alteran sustancialmente la actividad biológica (véase, por ejemplo, Watson et al. Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, The Benj amin/Cummings Pub. co . , p.224) . Tales sustituciones pueden ser efectuadas de acuerdo aquellas resumidas en la TABLA 2 como sigue TABLA 2 Otras sustituciones son también permisibles y pueden ser determinadas empíricamente o de acuerdo con sustituciones conservadoras conocidas. Como se usa en la presente, el término "compuesto de enlace selectivo" se refiere a un agente que se enlaza selectivamente a cualquiera porción de uno o más receptores objetivo. Como se usa en la presente, el término "se enlaza selectivamente" se refiere a la habilidad de un agente de enlace selectivo para enlazarse a un receptor objetivo con afinidad mayor que la que se enlaza a un receptor no objetivo. En ciertas modalidades, enlace específico se refiere al enlace a un objetivo con una afinidad que es por lo menos 10, 50, 100, 250, 500, 1000 o más veces mayor que la afinidad por un no obj etivo . Como se usa en la presente, el término "receptor objetivo" se refiere a un receptor o una porción de un receptor apto de ser enlazado por un compuesto de enlace selectivo. En ciertas modalidades, un receptor objetivo es un miembro de la familia genética del receptor de LDL. En algunas modalidades, el receptor objetivo es un receptor de proteína de enlace de retinoide. En algunas modalidades, el receptor de proteína de enlace de retinoide es un miembro de la familia genética del receptor de LDL. Como se usa en la presente, "agente" se refiere a cualquier sustancia que es capaz de interactuar con un miembro de la familia genética del receptor de LDL, modulando mediante esto la actividad de dicha proteína receptora. Como se usa en la presente, el término "modulador" se refiere a un compuesto que altera una actividad de una molécula. Por ejemplo, un modulador puede provocar un incremento o disminución en la magnitud de una cierta actividad de una molécula, tal como, por ejemplo, un miembro de la familia genética del receptor de LDL, en comparación con la magnitud de la actividad en ausencia del modulador. En ciertas modalidades, un modulador es un inhibidor, que disminuye la magnitud de una o más actividades de una molécula. En ciertas modalidades, un inhibidor impide completamente una o más actividades de una molécula. En ciertas modalidades, modulador es un activador, que incrementa la magnitud de por lo menos una actividad de una molécula. En ciertas modalidades la presencia de un modulador da como resultado una actividad que no se presenta en ausencia del modulador. Un agente que modula una actividad biológica de un polipéptido sujeto, tal como un miembro de la familia genética del receptor de LDL, incrementa o disminuye la actividad por lo menos aproximadamente 10%, por lo menos aproximadamente 15%, por lo menos aproximadamente 20%, por lo menos aproximadamente 25%, por lo menos aproximadamente 50%, por lo menos aproximadamente 100% o por lo menos aproximadamente 2 veces, por lo menos aproximadamente 5 veces o por lo menos aproximadamente 10 veces o más cuando se compara con un control apropiado . El término "ligando" se refiere a cualquier molécula que se enlaza a un sitio específico sobre otra molécula, tal como, por ejemplo, un miembro de la familia genética del receptor de LDL. El término "ligando endógeno" o "ligando de enlace endógeno" significa un ligando que se origina o es producido dentro de un mamífero. El término "modula" abarca un incremento o disminución, una estimulación, inhibición o bloqueo en la actividad medida cuando se compara con un control apropiado. Un agente que "modula el nivel de expresión de un ácido nucleico" en un célula es uno que efectúa un incremento o disminución de por lo menos aproximadamente 1.25 veces, por lo menos aproximadamente 1.5 veces, por lo menos aproximadamente 2 veces, por lo menos aproximadamente 5 veces, por lo menos aproximadamente 10 veces, o más en el nivel (esto es, una cantidad) de mAR y/o polipéptido enseguida del contacto de la célula con un agente candidato en comparación con un control que carece del agente. Agentes que se enlazan a miembros de la familia genética del receptor de LDL en la retina y células de RPE tendrán en general una afinidad mayor a la proteína receptora que un ligando que se presenta de manera estable en la naturaleza, tal como, por ejemplo proteína de enlace de retinoide. El agente tendrá por lo menos 2 veces mayor afinidad al miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y células de RPE que la proteína de enlace de retinoide. En otra modalidad, el agente tendrá por lo menos 5 veces mayor afinidad al miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y células de RPE que una proteína de enlace de retinoide. En otra modalidad, el agente tendrá por lo menos 10 veces mayor afinidad por un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y células de RPE que una proteína de enlace de retinoide. La afinidad por el receptor es medida mediante métodos estándar conocidos en el arte. Como se usa en la presente, "proteína de enlace de retinoide" se refiere a cualquier proteína portadora que es apta de enlazarse a retinoides. A no ser que se defina específicamente una proteína de enlace de retinoide particular, proteínas de enlace de retinoide incluyen, por ejemplo, proteína de enlace de retinol (RBP) , proteína de enlace de retinoide intersticial (IRBP) , proteína de enlace de retinaldehído (RALBP) , proteína de enlace de retinol celular (CRBP) y proteína de enlace de retinaldehído celular (CRALBP) . Como se usa en la presente, "proteína de enlace de retinoide interfotoreceptor" y "proteína de enlace de retinol intersticial" son usados intercambiablemente y se refieren a la misma proteína. Como se usa en la presente, el término "actividad moderada por el receptor" se refieren a cualquier actividad biológica que resulta, ya sea directa o indirectamente, del enlace de un ligando a un receptor. Como se usa en la presente, el término "agonista" se refiere a un compuesto, la presencia del cual da como resultado una actividad biológica de un receptor que es la misma como la actividad biológica resultante de la presencia de un ligando que se presenta de manera estable en la naturaleza para el receptor . Como se usa en la presente, el término "agonista parcial" se refiere a un compuesto, la presencia del cual da como resultado una actividad biológica de un receptor que es del mismo tipo como aquel resultante de la presencia de un ligando que se presenta de manera estable en la naturaleza para el receptor, pero de una magnitud más baja. Como se usa en la presente, el término "antagonista" se refiere a un compuesto, la presencia del cual da como resultado una disminución en la magnitud de una actividad biológica de un receptor. En ciertas modalidades, la presencia de un antagonista da como resultado la inhibición completa de una actividad biológica de un receptor. Como se usa en la presente, la IC50 se refiere a una cantidad, concentración o dosificación de un compuesto de prueba particular que obtiene un 50% de inhibición de una respuesta máxima, tal como modulación de actividad de receptor de andrógeno, en un análisis que mide tal respuesta. Como se usa en la presente, EC50 se refiere a una dosificación, concentración o cantidad de un compuesto de prueba particular que produce una respuesta dependiente de la dosis al 50% de expresión máxima de una respuesta particular que es inducida, provocada o potenciada por el compuesto de prueba particular. Los términos "polipéptido" , "péptido" y "proteína" , usados intercambiablemente en la presente, se refieren a una forma polimérica de aminoácidos de cualquier longitud, que pueden incluir aminoácidos que se presentan de manera estable en la naturaleza, aminoácidos codificados y aminoácidos sin codificar, aminoácidos modificados química o bioquímicamente, derivados o diseñados, análogos de aminoácido, peptidomiméticos y depsipéptidos y polipéptidos que tienen cadenas fundamentales de péptido cíclicas, biciclicas, depsicíclicas o depsibicíclicas modificadas. El término también incluye proteínas conjugadas, proteínas de fusión, en las que se incluye pero no limitadas a proteínas de fusión de GST, proteínas de fusión con una secuencia de aminoácidos heterólogo, proteínas de fusión con secuencias líder heterólogas y homologas, proteínas de fusión con o sin residuos de metionina N-terminales, proteínas con recubrimiento de PEG y proteínas marcadas inmunológicamente . También incluidas en este término se encuentran variaciones de proteínas que se presentan de manera estable en la naturaleza, en donde tales variaciones son homologas o sustancialmente similares a la proteína que se presenta de manera estable en la naturaleza, también como homólogos correspondientes de diferentes especies. Variantes de secuencias de polipéptido incluyen inserciones, adiciones, cancelaciones o sustituciones en comparación con los polipéptidos sujetos. El término también incluye aptámeros de péptidos . Como se usa en la presente, el término "tejido-selectivo" se refiere a la habilidad de un agente para modular una actividad biológica en un tejido a un grado mayor o menor que modula una actividad biológica en otro tejido. Las actividades biológicas en los diferentes tejidos pueden ser las mismas o pueden ser diferentes. Las actividades biológicas en la difusión tejidos pueden ser moderadas por el mismo tipo de receptor objetivo. Por ejemplo, en ciertas modalidades, un compuesto tejido-selectivo puede modular la actividad biológica asociada con un miembro de la familia genética del receptor de LDL en un tejido y fallar en modular o modular a un grado menor, la actividad biológica asociada con un miembro de la familia genérica del receptor de LDL en otro tipo de tejido. Un "fragmento activo" es un fragmento que tiene funciones estructurales, reguladoras o bioquímicas de una molécula que se presenta de manera estable en la naturaleza o cualquier función relacionada con o asociada con un proceso metabólico o fisiológico. Por ejemplo, un fragmento demuestra actividad cuando participa en una interacción molecular con otra molécula, cuando tiene valor terapéutico para aliviar una condición de enfermedad o cuando tiene valor profiláctico para impedir o reducir la presencia de enfermedad o cuando incluye una respuesta inmune a la molécula. Fragmento de polipéptidos activos incluyen aquellos que exhiben actividad similar, pero no necesariamente idéntica a una actividad de un polipéptido resumido en la presente. La actividad puede incluir una actividad deseada mejorada o una actividad indeseada disminuida . "Expresión" de una molécula de ácido nucleico se refiere a la conversión de la información a un producto genético. Un producto genético puede ser el producto transcripcional directo de un gen (por ejemplo, mARN, tARN, rRNA, AR antisentido, ribozima, ARN estructural, o cualquier otro tipo de ARN) o una proteína producida por traducción de un mARN. Los productos genéticos también incluyen ARN, que son modificados, por ejemplo mediante procesos tales como coronación, poliadenilación, metilación y edición y proteínas modificada por, por ejemplo, metilación, acetilación, fosforilación, ubiquitinación, ADP-ribosilación, miristilación y glicosilación . Un "gen" , para los propósitos de la presente revelación, incluye una región de ADN que codifica un producto genético, también como todas las regiones de ADN que regulan la producción del producto genético, ya sea que las secuencias reguladoras estén o no adyacentes a secuencias de codificación y/o secuencias transcritas. Así, un gen incluye, pero no está limitado necesariamente a secuencias de promotor, terminadores , secuencia reguladoras de traducción tales como sitios de enlace de ribosoma y sitios de entrada de ribosoma interno, mejoradores, silenciadores, aislantes, elementos de frontera, orígenes de replicación, sitios de anexión de matriz y las regiones de control de sitio.

El término "anticuerpo" se refiere una proteína generada por el sistema inmune que es capaz de reconocer y enlazarse a un antígeno específico. Anticuerpos y métodos para fabricar anticuerpos, son conocidos comúnmente en el arte. Como se usa en la presente, el término "anticuerpo" abarca preparaciones de anticuerpo policlonales y monoclonales, también como preparaciones que incluyen anticuerpos híbridos, anticuerpos alterados, anticuerpos quiméricos y anticuerpos humanizados, también como: moléculas de anticuerpo híbridas (quiméricas); fragmentos de F(ab')2 y F(ab); moléculas de Fv (heterodímeros no covalentes; moléculas de Fv de una sola cadena (sFv) ; constructos de fragmentos de anticuerpo diméricos y triméricos; minicuerpos; moléculas de anticuerpo humanizadas; y, cualesquier fragmentos funcionales obtenidos de tales moléculas, en donde tales fragmentos retienen el enlace específico . Un "antígeno" es una sustancia que provoca una respuesta inmune. Un "epítopo" es el sitio de una molécula antigénica a la cual un anticuerpo se enlaza. Una "anticuerpo agonista" es uno que imita, mejora, estimula o activa la función de una molécula con la cual el agonista interactúa. Un "anticuerpo antagonista" es uno que compite, inhibe o interfiere con la actividad de una molécula con la cual el antagonista interactua. Por ejemplo, un anticuerpo antagonista se puede enlazar al receptor sin inducir una respuesta activa. Un "fragmento de enlace de antígeno (fragmento Fab) " es un heterodímero disulfuro-enlazado, cada cadena del cual contiene un dominio de región constante de inmunoglobulina (C) y un dominio de región variable (V) ; la yuxtaposición de los dominios V forma el sitio de enlace de antígeno. Los dos fragmentos de Fab de una molécula de inmunoglobulina intacta corresponden a sus dos brazos, que contiene comúnmente regiones de cadena ligera apareadas con los dominios de V y Cl de las cadenas pesadas. Un "fragmento cristalizable del fragmento (fragmento Fe) " es la porción de una molécula de anticuerpo que interactua con moléculas efectoras y células. Incluye las porciones carboxi-terminales de las cadenas pesadas de inmunoglobulina. Las diferencias funcionales entre isótopos de cadena pesada radican principalmente en el fragmento de Fe. La "región constante" de un anticuerpo es su región efectora y determina la clase funcional del anticuerpo. La región constante de una cadena pesada o cadena ligera está localizada en o cerca del término carboxilo. La "región variable" de un anticuerpo es la región que se enlaza al antígeno; proporciona especificidad de anticuerpo. La región variable de una cadena pesada o ligera está localizada en o cerca del término amino. Un fragmento de "VH" contiene la región variable de una cadena pesada; un fragmento de "VL" contiene la región variable de una cadena ligera . Una "inmunoglobulina" es una molécula de anticuerpo. Una "cadena pesada" es la más grande de las dos clases de cadenas de polipéptidos que se combinan para formar moléculas de inmunoglobulina . La clase de la cadena pesada determina la clase de la inmunoglobulina, por ejemplo, IgG, IgA, IgE, IgD o IgM. Una "cadena ligera" es la más pequeña de las dos clases de cadenas de polipéptidos que se combina para formar moléculas de inmunoglobulina. Las cadenas ligeras son clasificadas en general en dos clases, kappa y lambda, en base a diferencias estructurales en sus regiones constantes. La "región que determina la complementareidad (cdr) " es la estructura tridimensional de un anticuerpo que proporciona especificidad antigénica. Un "fragmento de estructura" es aquella región del dominio variable que contiene secuencias relativamente invariantes y cae entre las regiones hipervariables . Las regiones de estructura proporcionan un andamio de proteína para las regiones hipervariables. Un anticuerpo "humanizado" es un anticuerpo que contiene en su mayoría secuencias de inmunoglobulina humanas.

Este término es usado en general para referirse a una inmunoglobulina no humana que ha sido modificada para incorporar porciones de secuencias humanas y puede incluir un anticuerpo humano que contiene secuencias de inmunoglobulina completamente humanas . Un "anticuerpo de una sola cadena" es un fragmento de Fab que incluye solamente el dominio de V de una cadena pesada enlazada por un péptido a un dominio V dominio de una cadena ligera . Un "anticuerpo policlonal" es una mezcla de anticuerpos de diferentes especificidades, como en el suero de un animal inmunizado a varios antígenos o epítopos. Un "anticuerpo monoclonal" es una composición de anticuerpo que tiene una población de anticuerpos homogénea. El término no está limitado con respecto a la especie o fuente del anticuerpo, ni por la manera en la cual es elaborado. El término abarca inmunoglobulinas enteras y fragmentos de inmunoglobulina . Métodos para fabricar anticuerpos policlonales y monoclonales son conocidos en el arte. Los anticuerpos policlonales son generados al inmunizar un animal apropiado, tal como un ratón, rata, conejo, oveja o cabra, con un antígeno de interés, de tal manera que una célula de tallo transformada con un gen que codifica un antígeno. Con el fin de mejorar la inmunogenicidad, el antígeno puede ser enlazado a un portador antes de la inmunización. Los portadores apropiados son comúnmente macromoléculas metabolizadas lentamente grandes tales como proteínas, polisacáridos , ácidos polilácticos , ácidos poliglicólicos , aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácidos, agregados de lípido (tales como gotas de aceite o liposomas) y partículas de virus inactivas. Tales portadores son bien conocidos para aquellos de habilidad ordinaria en el arte. Además, el antígeno puede ser conjugado a un toxoide bacteriano, tal como un toxoide de difteria, tétanos, cólera, etc., con el fin de mejorar la inmunogenicidad del mismo. El término "se enlaza específicamente", en el contexto de enlace de anticuerpo, se refiere a la alta avidez y/o alta afinidad de enlace de un anticuerpo a un polipéptido específico o más exactamente, a un epítopo de un polipéptido específico. El enlace de anticuerpo a tal epítopo sobre un polipéptido puede ser más fuerte que el enlace del mismo al anticuerpo o a cualquier otros epítopos, particularmente otros epítopos que pueden estar presentes en moléculas en asociación con o en la misma muestra o con el polipéptido de interés. Por ejemplo, cuando un anticuerpo se enlaza más fuertemente a un epítopo que a otro, el ajuste de las condiciones de enlace puede dar como resultado el enlace del anticuerpo casi exclusivamente al epítopo específico y no a cualquier otro epítopo en el mismo polipéptido y no a cualquier otro polipéptido que no comprende el epítopo. Anticuerpos que se enlazan específicamente a un polipéptido sujeto pueden ser aptos de enlazarse a otros polipéptidos a un nivel débil pero todavía detectable (por ejemplo, 10% o menos del enlace mostrado al polipéptido de interés) . Tal enlace débil o enlace de fondo, es fácilmente discernible del enlace de anticuerpo específico a un polipéptido sujeto, por ejemplo, mediante el uso de controles apropiados. En general, los anticuerpos de la invención se enlazan a un polipéptido específico con una afinidad de enlace de 10"7 M o mayor (por ejemplo, 10~8 M, 10"9 , 10"10 M, 10"11 M, etc.). Una "enfermedad" es una condición patológica, anormal y/o peligrosa para un organismo. El término incluye condiciones, síndromes y alteraciones. "Tratamiento", "tratar" y los semejantes, como se usan en la presente, se refieren a la obtención de un efecto farmacológico y/o fisiológico deseado, que cubre cualquier tratamiento de una condición o alteración patológica en un mamífero, en los que se incluyen un humano. El efecto puede ser profiláctico en términos de prevenir completa o parcialmente una alteración o síntoma del mismo y/o puede ser terapéutico en términos de cura parcial o completa o por la alteración y/o efecto adverso atribuible a la alteración. Esto es, "tratamiento" incluye (1) impedir que la alteración se presente o recurra en un sujeto que puede estar predispuesto a la alteración pero que todavía no ha sido diagnosticado por lo general, (2) inhibir la alteración, tal como detener su desarrollo, (3) detener o terminar la alteración o por lo menos síntomas asociados con los mismos, de tal manera que el huésped ya no sufre de la alteración o sus síntomas, de tal manera que cause regresión de la alteración o sus síntomas, por ejemplo, al restaurar o reparar una función perdida, faltante o defectuosa o estimular un proceso ineficiente o (4) aliviar, callar o mejorar la alteración o síntoma asociado con el mismo, en donde la mejora es usada en un sentido amplio para referirse a por lo menos una reducción en la magnitud de un parámetro. Como se usa en la presente, "fragmento" se propone un polipéptido, por ejemplo, dominios de proteína, que consisten de solamente una parte de la secuencia y estructura de proteína de plena longitud intacta. El fragmento puede incluir una cancelación C-terminal, una cancelación de N-terminal y/o una cancelación interna del polipéptido natural. Un fragmento de una proteína incluirá en general por lo menos aproximadamente 5-10 residuos de aminoácidos continuos de la molécula de plena longitud, preferiblemente por lo menos aproximadamente 20-25 residuos de aminoácidos continuos de la molécula de plena longitud y más preferiblemente por lo menos aproximadamente 20-50 o más residuos de aminoácidos continuos de la molécula de plena longitud o cualesquier número entero entre 5 aminoácidos de la secuencia de plena longitud. Como se indica anteriormente, una entidad "biológicamente activa" o una entidad que tiene "actividad biológica" es una que tiene funciones estructurales, reguladoras o bioquímicas de una molécula que se presenta de manera estable en la naturaleza o cualesquier función relacionada con o asociada con un proceso metabólico o fisiológico. Fragmentos de polipéptidos biológicamente activos son aquellos que exhiben actividad similar pero no necesariamente idéntica a una actividad de un polipéptido de plena longitud. La actividad biológica puede incluir una actividad deseada mejorada o una actividad indeseable disminuida. Por ejemplo, una actividad demuestra actividad biológica cuando participa en una interacción molecular con otra molécula o contiene valor terapéutico para aliviar la condición de enfermedad o cuando tiene valor profiláctico e incluye una respuesta inmune a la molécula o cuando tiene valor de resultado en determinar la presencia de la molécula. Umn polipéptido biológicamente activo o fragmento del mismo incluye uno que puede participar en una reacción biológica, por ejemplo, como un factor de transcripción que se combina con otros factores de transcripción para inicio de transcripción o que puede servir como un epítopo o inmunógeno para estimular una respuesta inmune, tal como producción de anticuerpos o que puede transportar moléculas hacia dentro o fuera de las células o que puede efectuar una actividad catalítica, por ejemplo, polimerización o actividad de nucleasa o que puede participar en transducción de señal para enlazarse a receptores, proteínas o ácidos nucleicos, activando enzimas o sustratos. Un polipéptido "aislado", "purificado" o " sustancialmente aislado" o un polipéptido en "forma sustancialmente pura", "en forma sustancialmente purificada", en "pureza sustancial" o como un "aislado" es uno que está sustancialmente libre de otros materiales con los cuales está asociado en la naturaleza u otra secuencia de polipéptidos que no incluye una secuencia o fragmento de los polipéptidos sujetos. Sustancialmente libre significa que menos de aproximadamente 90%, menos de aproximadamente 80%, menos de aproximadamente 70%, menos de aproximadamente 60% o menos de aproximadamente 50% de la composición está compuesta de materiales diferentes al polipéptido aislado. En donde por lo menos 99% de las macromoléculas totales es el polipéptido aislado, el polipéptido es por lo menos 99% puro y la composición comprende menos de aproximadamente 1% de contaminantes. Tales polipéptidos aislados pueden ser polipéptidos recombinantes , polipéptidos modificados, marcados y de fusión y polipéptidos sintetizados químicamente, que en virtud u origen o manipulación no están asociados con todos o una porción de los materiales con los cuales están asociados en la naturaleza, están enlazados a moléculas diferentes a aquellas con las cuales están enlazados en la naturaleza o no se presentan de manera estable en la naturaleza.

Los métodos de detección provistos en la presente pueden ser cualitativos o cuantitativos. Así, como se usa en la presente, los términos "detectable " , "identificar", "determinar" y los semejantes, se refieren tanto a determinaciones cuantitativas y cualitativas e incluyen "medición". Por ejemplo, los métodos de detección incluyen métodos para detectar la presencia y/o nivel de polinucleótido o polipéptido en una muestra biológica y métodos para detectar la presencia y/o nivel de actividad biológica de polinucleótido o polipéptido en una muestra. "Muestra biológica" como se usa en la presente, incluye fluidos biológicos tales como sangre, suero, plasma, orina, fluido cerebroespinal, lágrimas, saliva, linfo, fluido de diálisis, fluido de lavado, semen y otras muestras de líquidos o tejidos de origen biológico. Incluye células o células derivadas de las mismas y la progenie de las mismas, en las que se incluyen células en cultivo, supernadantes celulares y lisados celulares. Incluye fluidos derivados de cultivo de órganos o de tejido, muestras de biopsias de tejido, muestras de biopsia de tumor, muestras de deposición y fluidos extraídos de tejidos fisiológicos. Células disociadas de tejidos sólidos, secciones de tejido y lisados celulares son incluidos, la definición también incluye muestras que han sido manipuladas de cualquier manera después de su objeción, tal como mediante tratamiento con reactivos, solubilización o enriquecimiento de ciertos componentes, tales como polinucleótidos o polipéptidos . También incluidos en el término se encuentran derivados y fracciones de muestras biológicas. Una muestra biológica puede ser usada en un análisis de diagnóstico o análisis de monitoreo. Como se usa en la presente, el término "ácido nucleico" se refiere a polinucleótidos de una sola hebra y/o polinucleótidos de doble hebra, tales como ácido desoxirribonucleico (ADN) y ácido ribonucleico (ARN) también como análogos o derivados ya sea de ARN o ADN. Las moléculas de ácido nucleico son polímeros lineales de nucleotidos, enlazados por enlaces de 3 ',5' fosfodiéster . El ADN, ácido desoxirribonucleico, el grupo azúcar es desoxirribosa y las bases de los nucleotidos son adenina, guanina, timina y citosina. El ARN, ácido ribonucleico, tiene ribosa como el azúcar y el uracilo reemplaza a timina. También incluido en el término "ácido nucleico" se encuentran análogos de ácidos nucleicos tales como ácido nucleico de péptido (PNA) ; ADN fosforotioato y otros de tales análogos y derivados o combinaciones de los mismos. Como se usa en la presente, el término "polinucleótido" se refiere a un oligómero o polímero que contiene por lo menos dos nucleotidos enlazados o derivaos de nucleotidos, en los que se incluyen un ácido desoxirribonucleico, (ADN) , un ácido ribonucleico (ARN) y un derivado de ADN o ARN que contiene, por ejemplo, un análogo de nucleótido o un enlace de "cadena fundamental" que se une a un enlace de fosfodiéster, por ejemplo, un enlace de fosfodiéster, un enlace de fosforamidato, un enlace de diéster de metilfosfonato, un enlace de fósforotioato, un enlace de tioéster o un enlace de péptido (ácido nucleico de péptido) . El término "oligonucleótido" también es usado en la presente como sinónimo con "polinucleótido" · aunque aquellos experimentados en el arte reconocen que oligonucleótidos, por ejemplo, cebadores de PCR, en general son menos de aproximadamente 50 a 100 nucleótidos de longitud. Un polinucleótido también puede contener uno o más enlaces que son relativamente resistentes a escisión, por ejemplo, un cebador de oligonucleótido quimérico, que puede incluir nucleótidos enlazados por enlaces de ácido nucleico de péptidos y por lo menos un nucleótido en el extremo 3 ' , que está enlazado por un enlace de fosfodiéster o los semejantes y es apto de ser extendido por una polimerasa. Secuencias de ácido nucleico de péptido pueden ser preparadas utilizando métodos bien conocidos (véase por ejemplo, eiler et al. (1997) Nucleic acids Res. 25. 27'92 -27'99) . Un polinucleótido puede ser una porción de una molécula de ácido nucleico más grande, por ejemplo, una porción de un gen, que puede contener una región polimórfica o una porción de una región extragénica de un cromosoma, por ejemplo, una porción de una región de repeticiones de nucleotidos tales como los sitios de repetición de tándem corto (STR) , un número variable de sitios de repeticiones en tándem (VNTR) , un sitio de microsatélite o un sitio de minisatélite . Un polinucleótido que también puede ser de una sola hebra o de doble hebra en los que se incluyen, por ejemplo, un híbrido de ADN-AR o puede ser de triple hebra o de cuatro hebras. En donde el polinucleótido es ADN de doble hebra, puede estar en una configuración de A, B, L o Z y un solo polinucleótido puede contener combinaciones de tales configuraciones. Como se usa en la presente, un ADN u homólogo de ácido nucleico se refiere a un ácido nucleico que incluye una secuencia de nucleotidos conservada preseleccionada, tal como una secuencia que codifica un polipéptido terapéutico. El término " sustancialmente homólogo" significa que tiene por lo menos 80%, por lo menos 90% o por lo menos 95% de homología del mismo o un porcentaje menor de homología o identidad y actividad biológica conservada. Los términos "homología" e "identidad" son usados frecuentemente de manera intercambiable. A este respecto, el por ciento de homología o identidad puede ser determinado, por ejemplo, al comparar información de secuencia utilizando un programa de computadora de GAP. El programa GAP utiliza el método de alineación de programa de Needleman y Wunsch (J. Mol. Biol. 48. 443 (1970), tal como está revisado por Smith y Waterman {Adv. Appl . Math. 2: 482 (1981). Brevemente, el programa de GAP define similaridad como el número de símbolos alineados (por ejemplo, nucleótidos o aminoácidos) que son similares, divididos por el número total de símbolos en la secuencia más corta de las dos secuencias. Los parámetros designados para el programa GAP pueden incluir. (1) una matriz de comparación unitaria (que contiene un valor de 1 para identidades y 0 para no identidades) y la matriz de comparación ponderada de Gribslov y Burgess, Nucí. Acids Res. 14: 6745 (1986) como se describe por Schwatz y Dayhoff, editores, ATLAS OF PROTEIN SEQUENCE AND STRUCTURE, National Biomedical Research Foundation, pp. 353 358 (1979); (2) una penalidad de 3.0 para cada paso y una penalidad de 0.10 adicional para cada símbolo en cada espacio y (3) ninguna penalidad para espacios del extremo. Siempre cualesquier dos moléculas de ácidos nucleicos tienen secuencias de nucleótidos que son por lo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% "idénticas" se pueden determinar utilizando algoritmos de computadora conocidos tales como el programa "FASTA", utilizando por ejemplo, los parámetros determinados tales como en Pearson y Lopman, Proc . Nati. Acad. Sci. EUA 85: 2444 (1988). Alternativamente, se puede usar la función BLAST de las bases de datos del Centro Nacional para Biotecnología de Información (National Center for Biotechnology Information) para determinar la identidad.

En general, las secuencias son alineadas de tal manera que se obtiene la secuencia de orden superior. "Identidad" per se tiene un significado reconocido en el arte y puede ser calculada utilizando técnicas publicadas. (Véase por ejemplo, Computational Molecular Biology, Lesk, A.M. , ed. , Oxford University Press, Nueva York, 1988; Biocomputing : Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed. , Academic Press, Nueva York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M. y Griffin, H.G., eds . , Humana Press, Nueva Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987 y Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. y Devereux, J., eds., M Stockton Press, Nueva York, 1991) . En tanto que existen un número de métodos para medir la identidad entre dos secuencias de polinucleótidos o polipéptidos , el término "identidad" es bien conocido para los técnicos experimentados en el arte (Carrillo, H y Lipton, D., SIAM J Applied Math 48:1073 (1988)). Métodos usados comúnmente para determinar la identidad o similaridad entre dos secuencias incluyen pero no están limitados a aquellos revelados en Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop, ed. , Academic Press, San Diego, 1994 y Carillo, H. & Lipton, D. , SIAM J Applied Math 48:1073 (1988). Métodos para determinar la identidad y similaridad son codificados en programas de computadora. Los métodos de programa de computadora para determinar identidad y similaridad entre dos secuencias incluyen pero no están limitados al paquete de programas CGC (Devereux, J. , et al . , Nucleic Acids Research 12(1) :387 (1984)), BLASTP, BLASTN, FASTA (Atschul, S.F., et al., J. Molec . Biol . 215:403 (1990)). Por consiguiente, como se usa en la presente, el término "identidad" representa una comparación entre un polipéptido o polinucleotido de prueba y uno de referencia. Por ejemplo, un polipéptido de prueba puede ser definido como cualquier polipéptido que es 90% o más idéntico a un polipéptido de referencia. Como se usa en la presente, el término por lo menos "90% idéntico a" se refiere a por ciento de identidad de 90 a 99.99 en relación con los polipéptidos de referencia. La identidad a un nivel de 90% o más es indicadora de del hecho de que, suponiendo por propósitos de ej emplificación una longitud de polipéptido de prueba y una longitud de polipéptido de referencia de 100 aminoácidos fue comparado. No más del 10% (por ejemplo, 10 de 100) aminoácidos en el polipéptido de prueba difieren de aquel de los polipéptidos de referencia. Comparaciones similares se pueden efectuar entre polipéptidos de prueba y polipéptidos de referencia. Tales diferencias pueden ser representadas como mutaciones puntuales distribuidas aleatoriamente en toda la longitud de una secuencia de aminoácidos o pueden ser agrupadas en uno o más sitios de longitud variable hasta el máximo permisible, por ejemplo, 10/100 diferencias de aminoácidos (aproximadamente 90% de identidad) . Las diferencias son definidas como sustituciones o cancelaciones de ácidos nucleicos o aminoácidos. El término sustancialmente idéntico o sustancialmente homólogo o similar varía con el contexto como se entiende por aquellos experimentados en el arte relevante y significa en general por lo menos 60% o 70%, preferiblemente significa por lo menos 80%, 85% o más preferiblemente por lo menos 90% y más preferiblemente por lo menos 95% de identidad. Como se usa en la presente, sustancialmente puro significa suficientemente homogéneo para aparecer libre de impurezas fácilmente detectables tal como se determina mediante métodos de análisis estándar, tal como cromatografía de capa delgada o cromatografía de capa fina (TLC) , electroforesis de gel, cromatografía líquida de alto desempeño (HPLC) y espectrometría de masas (MS) , usados por aquellos de habilidad en el arte para determinar tal pureza o suficientemente puro que la purificación adicional no alteraría de manera detectable las propiedades físicas y químicas, tal como actividades enzimáticas y biológicas de la sustancia, métodos para la purificación de compuestos para producir compuestos sustancialmente puros químicamente son conocidos para aquellos experimentados en el arte. Un compuesto sustancialmente puro químicamente puede sin embargo ser una mezcla de estereoisómeros . En tales instancias, la purificación adicional podría incrementar la actividad específica del compuesto.

SÍNTESIS DE CIERTOS AGENTES QUE MODULAN LA ACTIVIDAD DE MIEMBROS DE LA FAMILIA GENÉTICA DEL RECEPTOR DE LDL La síntesis de agentes que modulan la actividad de miembros de la familia genética del receptor de LDL, por ejemplo, receptores de proteínas de enlace de retinoide, se pueden llevar a cabo utilizando técnicas de síntesis estándar conocidas para aquellos de habilidad en el arte o utilizando métodos conocidos en el arte en combinación con métodos descritos en la presente. Véase por ejemplo, Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 2004/0102650; Um, S. J., et al., Chem. Pharm. Bull . , 52:501-506 (2004). Además, varios de los agentes que modulan la actividad de miembros de la familia genética del receptor de LDL pueden ser comprados de varios proveedores comerciales. Como guía adicional los siguientes métodos de síntesis pueden ser utilizados. En algunas modalidades, los miembros de la familia genética del receptor de LDL se enlazan a ligandos similares. En algunas modalidades, miembros de la familia genética del receptor de LDL que son expresados en diferentes tejidos o células son aptos de enlazarse a los mismos ligandos o agentes. En algunas modalidades, un agente que interactúa con un miembro de la familia genética del receptor de LDL en un tejido o célula diferente a las células de la retina y/o RPE, es también apto de interactuar con un miembro de la familia genética del receptor de LDL en células de retina y/o RPE. Agentes capaces de interactuar con un miembro de la familia genética del receptor de LDL son conocidos en el arte y son contemplados en la presente. Por ejemplo, US 2003/0202974, WO 06/037335, WO 03/080103, US 2004/0198705, WO 04/084876, US 2006/0029609, US 2005/0026823, US 2005/0100986, US 2005/0089932, US 2005/0042227, US 2004/0204357, US 2004/0198705, US 2004/0049010, US 2003/0202974, US 2003/0181660, US 2003/0082640, US 2003/0157561 y US 2003/0077672 (todas incorporadas por referencia) . Los agentes que modulan la actividad de miembros de la familia genética del receptor de LDL en células de retina y/o del epitelio de pigmento retinal en el ojo son preferiblemente identificados por lo métodos referidos en la presente. Los agentes podrían ser, por ejemplo, anticuerpos, polipéptidos , ácidos nucleicos, ácidos polinucleicos , polímeros, ligandos de enlace endógeno, compuestos orgánicos de bajo peso molecular, excavadores de Ca2+, agentes reductores y fragmentos y derivados de cualquiera de estos. En una modalidad, el agente inhibe competitivamente el ligando o acomplej amiento de un retinol a una proteína de enlace de retinol (RBP) o retinol o a una proteína de enlace de retinol de interfotorreceptor (IRBP) . tal compuesto podría ser por ejemplo, un compuesto que interactúa específicamente ya sea en el compuesto de retinol o con la proteína de enlace de retinol o con la proteína de enlace de retinoide de interfotorreceptor de una manera que inhibe estéricamente la asociación adicional ya sea con e compuesto de retinol o con la proteína de enlace de retinol de o con la proteína de enlace de retinoide de interfotorreceptor (véase por ejemplo, Publicación de Patente Estadounidense No. 2006/0094063, incorporada por referencia) . En otra modalidad, el agente inhibe competitivamente el enlace de una proteína de enlace de retinoide o proteína de enlace de retinoide de interfotorreceptor a un miembro de la familia genética del receptor de LDL en células de retina y/o células epiteliales de pigmento retinal . Tal agente podría ser por ejemplo, un compuesto que interactúa específicamente con proteína de enlace de retinoide o proteína de enlace de retinoide interfotorreceptor o con el miembro de la familia genética del receptor de LDL en células de retina y/o células epiteliales del pigmento retinal de una manera que inhibe estéricamente la asociación o asociación adicional ya sea de proteína de enlace de retinoide o de proteína de enlace de retinoide interfotorreceptor con el miembro de la familia genética del receptor de LDL en células de retina y/o células epiteliales de pigmento retinal. En todavía otra modalidad, el agente que inhibe competitivamente el enlace de una proteína de enlace de retinoide a un co-receptor de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en células de retina y/o células epiteliales de pigmento de retina. En otra modalidad, el agente inhibe el enlace de una proteína de enlace de retinoide a un miembro de la familia genética del receptor de LDL al bloquear una cantidad suficiente de sitios de enlace sobre la proteína receptora y/o bloquear la proteína de enlace de retinoide de tal manera que mantiene el efecto terapéutico normal pero es inhibida del enlace a la proteína de receptor y células de retina y/o células RPE. En algunas modalidades, el agente es apto de enlazarse a una cantidad suficiente de sitios de enlace con la proteína receptora en las células de retina y/o células de RPE, inhibiendo mediante esto el enlace de la proteína de enlace de retinoide a las proteínas receptoras en células de retina y/o RPE. En algunas modalidades, el agente es apto de enlazarse a la proteína receptora en células de retina y/o RPE y por consiguiente inhibir el enlace de una proteína de enlace de retinoide a la proteína receptora. En algunas modalidades, el agente es apto de enlazarse a la proteína de enlace de retinoide, previniendo mediante esto que se enlace a la proteína receptora en células de retina y RPE. En otra modalidad, el agente inhibe competitivamente el enlace de un fármaco terapéutico a un miembro de la familia genética de LDL en células de retina y/o células epiteliales de pigmento retinal. En otra modalidad, el agente inhibe competitivamente el enlace de un fármaco antibiótico a un miembro de la familia genética de LDL en células de retina y/o células epiteliales de pigmento retinal. En otra modalidad, el agente inhibe la absorción del competitivamente el enlace de un aminoglicósido a un miembro de la familia genética de LDL en células de retina y/o células epiteliales de pigmento retinal. En todavía una modalidad adicional, el agente que incrementa la absorción del retinoide en células de retina y/o células epiteliales de pigmento retinal. En una modalidad adicional, el agente incrementa el enlace de RBP o IRBP al miembro de la familia genética de LDL. En otra modalidad, el agente impide el enlace de retinol, RBP, complejo de RBP-retinol, IRBP, IRBP-retinol , TTR o RBP-retinol-TTR al miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de RPE. En otra modalidad, el agente impide la absorción de retinoides en retina y/o células de RPE. En otra modalidad, el agente impide la absorción de un fármaco terapéutico en retina y/o células de RPE. En otra modalidad, el agente impide la absorción de un fármaco antibiótico en la retina y/o células de RPE. En otra modalidad, el agente impide la absorción de un fármaco aminoglicósido en la retina y/o células de RPE. En otra modalidad, el agente impide la absorción de gentamicina en retina y/o células de RPE. En todavía otra modalidad, el agente tiene el potencial para alterar la expresión de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células epiteliales del pigmento retinal. Por ejemplo, el agente puede disminuir la expresión de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en una célula que expresa normalmente cual miembro de la familia genética del receptor LDL o alternativamente el agente puede incrementar la expresión de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en una célula. Por ejemplo, se sabe que MPR reduce los niveles de retinol y RBP en el suero. El tratamiento crónico de ratones con MPR puede dar como resultado la expresión disminuida de proteínas de la familia genética del receptor de LDL identificadas en el RPE que es responsable por trancitosis de RBP, estableciendo así una relación entre las proteínas de la familia genética del receptor de LDL en el RPE y RBP-retinol en el suero. Otros métodos para alterar la expresión de un miembro de la familia genética del receptor de LDL son conocidos en el arte. Por ejemplo, una secuencia de ácido nucleico fue utilizada para alterar la expresión de un miembro de la familia genética del receptor LDL. Véase por ejemplo, Publicación de Patente Estadounidense No. 2004/0198705, párrafos [0176] a [0186] y WO 2005/070965. Además, el agente puede tener el potencial para alterar la expresión de un co-receptor de un miembro de la familia genética del receptor LDL en una célula. Por ejemplo, el agente puede disminuir la expresión de un co-receptor de un miembro de la familia genética del receptor LDL en una célula que expresa normalmente un miembro de la familia genética del receptor LDL o alternativamente el agente puede incrementar la expresión de un co-receptor de un miembro de la familia genética del receptor LDL en una célula. El agente contemplado en la presente puede ser seleccionado de una biblioteca de compuestos que se presentan de manera estable en la naturaleza y con compuestos sintéticos, que son probados aleatoriamente por alteración del enlace.

Polipéptidos y proteínas En una modalidad, el agente es un polipéptido. Por ejemplo, tales polipéptidos podrían ser seleccionados del grupo que consiste de dominios del receptor de proteína de enlace de RBP y fragmentos de los mismos, dominios de co-receptor de proteínas de enlace de RBP y fragmentos de los mismos, ligandos endógenos que se enlazan a aquellos del gen de receptor de LDL, proteínas de enlace de retinoide modificadas o fragmentos de las mismas, fragmentos de proteínas de enlace de retinoide, antagonistas de la familia genética del receptor de LDL, tal como proteínas asociadas al receptor (RAP) y homólogos funcionales de cualquiera de estos. En una modalidad, el agente es un dominio de un miembro de la familia genética del receptor LDL que se puede enlazar a una proteína de enlace de retinoide. Preferiblemente, dicho dominio del miembro de la familia genética del receptor LDL es capaz de enlazarse a una proteína de enlace de retinoide, tal como RBP o IRBP. En una modalidad, el dominio es un dominio de megalina. En una modalidad, el dominio es un dominio de LRP. Se ha mostrado que las repeticiones tipo complemento de LRP son aptos de enlazarse a una proteína designada como RAP. Más específicamente, cualesquiera de las 8 repeticiones del tipo complemento del grupo 11 de LRP son aptos de enlazarse a RAP con la excepción de la repetición 8, que difiere del resto en que carece de un aminoácido cargado negativamente (Andersen et al., 2000, J". Biol . Chem. 275: 21017-21024). Así, es preferido que el dominio del miembro de la familia genética del receptor LDL incluya por lo menos una repetición tipo complemento, más preferiblemente, por lo menos dos repeticiones tipo complemento. Otros dominios de la familia genética del receptor LDL son contemplados, tales como un dominio de la familia genética del receptor LDL que incluye por ejemplo, 2 repeticiones tipo complemento, 3 repeticiones tipo complemento, 4 repeticiones tipo complemento, 5 repeticiones tipo complemento, 6 repeticiones tipo complemento, 7 repeticiones tipo complemento, 8 repeticiones tipo complemento, 9 repeticiones tipo complemento, 10 repeticiones tipo complemento, 11 repeticiones tipo complemento o más de 11 repeticiones tipo complemento. En una modalidad preferida, el dominio del miembro de la familia genética del receptor LDL incluye 2 repeticiones tipo complemento. Para dominios específicos de miembros de la familia genética del receptor LDL, véase por ejemplo, US 2004/0198705, párrafos [0143] a [0164] . En otra modalidad, el polipéptido es un fragmento de una proteína de enlace de retinoide. Preferiblemente, tal fragmento es apto de asociarse con un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y células de RPE . Además, tal fragmento de una proteína de enlace de retinoide no es apto de enlazarse o asociarse con un retinoide, tal como por ejemplo, retinol. En tal caso, el fragmento de una proteína de enlace de retinoide se puede enlazar a miembros de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE e inhibir mediante esto el enlace de un complejo de retinol-RBP o un complejo de retinol con RPB-TTR con dicho miembro de la familia genética del receptor de LDL. En una modalidad, el agente es un fragmento de RAP que se puede asociar con un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de RPE que pueden enlazar a proteínas de enlace de retinoide. En otra modalidad, el agente es un ligando endógeno a cualesquiera de los miembros de la familia genética del receptor de LDL. Miembros de la familia genética del receptor de LDL son conocidos por compartir ligandos endógenos comunes (véase anteriormente) . Ejemplos de ligandos endógenos a miembros de la familia genética del receptor de LDL, tales como LRP y megalina son representados anteriormente. En una modalidad, el polipéptido es una cadena ligera (Klassen et al. Light Chains are a Ligand for Megalin. J. Appl . Physiol. 98:257-263, 2005). En una modalidad, el polipéptido es un antagonista a un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE . Los polipéptidos pueden ser seleccionados en cuanto a su habilidad para modular la actividad de miembros de la de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE. En una modalidad, los polipéptidos son seleccionados en cuanto a su habilidad para inhibir la región de retinoide a células de RPE. En otra modalidad, los polipéptidos son seleccionados en cuanto a su habilidad para inhibir la absorción de IRBP-retinol y/o RPE-retinol a células de RPE. En otra modalidad, los polipéptidos son seleccionados en cuanto a su habilidad para inhibir la absorción de fármaco terapéutico a la retina y/o células de RPE. En otra modalidad, los polipéptidos son seleccionados en cuanto a su habilidad para inhibir la porción de fármacos antibióticos, tales como por ejemplo, fármacos de aminoglicósidos a la retina y/o células de RPE. Ácidos nucleicos En una modalidad, el agente es una secuencia de ácidos nucleicos. Preferiblemente, tal secuencia de ácidos nucleicos altera potencialmente la expresión de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE . En una modalidad, el miembro de la familia genética del receptor de LDL es un receptor de la proteína de enlace de retinoide . En una modalidad, una secuencia de ácidos nucleicos incluye una secuencia de ADN que codifica por un ARN anti-sentido o un ARN de interferencia pequeño (siARN) de un miembro de la familia genética del receptor de LDL que está presente en retina y/o células de RPE o la secuencia de ácidos nucleicos es un ARN antisentido de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y células RPE. Homólogos de los mismos están también dentro del alcance de la presente revelación. En algunas modalidades, el miembro de la familia genética del receptor de LDL es una proteína de enlace de retinoide . Además, la secuencia de ácidos nucleicos puede incluir una secuencia de ácidos nucleicos anti-antígeno, que es apto de hibridizarse con un gen que codifica un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE e inhibir mediante esto la transición de dicho gen. Tal secuencia de ácidos nucleicos de antígeno puede ser apta de hibridizarse a cualquier parte de dicho gen, por ejemplo, al promotor y/o intrones y/o exones de dicho gen. El ácido nucleico antigen puede ser cualquier clase de ácido nucleico, por ejemplo, ADN, ARN, LNA o PNA o siARN. Como se usa en la presente, el término "ARN antisentido" se propone abarcar una secuencia de ARN transcrita de la cadena de ADN sin codificación de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE o una secuencia de ARN que es apta de hibridizarse a un miembro de mARN de la familia genética del receptor de LDL bajo condiciones severas o fragmentos del mismo. Si las secuencias de ácidos nucleicos es una secuencia de ADN que codifica un ARN antisentido de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE u homólogos de los mismos, tal secuencia de nucleotidos es enlazada a la secuencia relativamente a la secuencia de nucleotidos que dirigen la transducción de dicha secuencia de ADN en las células de la modalidad particular revelada en la presente. En otra modalidad, la secuencia de ácidos nucleicos incluye secuencias que codifican un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE u homólogos de los mismos o fragmentos de los mismos. Tal secuencia de ácidos nucleicos está preferiblemente enlazada o unida relativamente a secuencias de nucleotidos que dirigen la transcripción de dicha secuencia de ADN en la célula de la modalidad particular de la invención. Una variedad de las secuencias de nucleótidos que dirige la transcripción de secuencias de ADN son conocidas por la persona experimentada en el arte y tales secuencias deben ser seleccionadas de acuerdo con la necesidad específica en el caso individual. Por ejemplo, tales secuencias podrían ser secuencias de promotor o secuencias de mejorador de origen procarióntico, eucarióntico o viral o podrían ser secuencias sintéticas . La secuencia de ácidos nucleicos puede ser incluida dentro de un vector y cualquier vector apropiado conocido por la persona experimentada en el arte puede ser usado. Un vector es apto de liberar la molécula de ácidos nucleicos a una célula huésped. Tal vector contiene secuencias de ácidos nucleicos que no son encontrados naturalmente adyacentes a la secuencia de ácidos nucleicos del miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE. un vector es un plásmido que puede ser usado para transferir secuencias de ADN de un organismo a otro. Un vector es un constructo replicable que podría ser cualquier ácido nucleico en los que se incluyen ADN, ARN, LNA y PLA. una vez transformado a un huésped apropiado, el vector se replica y funciona independientemente del genoma huésped o puede en algunas instancias, integrarse al genoma mismo.

Comúnmente, el vector es un vector viral derivado, un vector retroviral derivado, un fago, un plásmido, un cósmido, un fragmento de ADN integrable (esto es, integrable al genoma huésped mediante recombinación) , bacterias o células eurcatiónticas .

Compuestos orgánicos de bajo peso molecular En algunas modalidades, el agente que modula la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE es un compuesto orgánico de bajo peso molecular. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene una carga positiva. En algunas modalidades, tal compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene más de una carga positiva. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene 2 cargas positivas. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene 3 cargas positivas. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene 4 cargas positivas. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene 5 cargas positivas. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene 1, 2, 3, 4 o más de 4 cargas positivas. Al seleccionar un compuesto orgánico de bajo peso molecular con cargas positivas, es posible bloquear un número suficiente de sitios de enlace sobre la proteína receptora. Es conocido que los sitios de enlace en miembros de la familia genética del receptor de LDL contienen residuos de aminoácidos aniónicos que son aptos de interactuar con especies catiónicas (véase anteriormente) . En algunas modalidades, los compuestos orgánicos de bajo peso molecular provistos en la presente tienen un grupo amino. En algunas modalidades, el compuesto de bajo peso molecular tiene dos grupos amino. En algunas modalidades, el compuesto de bajo peso molecular tiene más de un grupo amino. En algunas modalidades, el compuesto de bajo peso molecular tiene una funcionalidad (grupo) que puede aceptar un donador. En algunas modalidades, el compuesto de bajo peso molecular tiene más de una funcionalidad (grupo) que puede aceptar un protón. En algunas modalidades, el compuesto de bajo peso molecular tiene más de una funcionalidad (grupo) que puede aceptar más de un protón. Funcionalidades apropiadas que pueden aceptar un protón son grupos amino. En algunas modalidades, el compuesto de bajo peso molecular tiene la estructura de Fórmula (I) : Fórmula (I) en donde L es un enlace, arilo, heteroarilo que contiene 0-3 átomos de N, C3-C8 carbocicloalquilo, C3-C8 heterocicloalquilo que contiene 0-3 átomos de N, en donde el arilo, heteroarilo, carbocicloalquilo o heterocicloalquilo está opcionalmente sustituido con O (oxo) , OH, fenilo, haluro, C1-C4 alquilo, C2-C4 alquenilo, C2-C4 alquinilo, heteroarilo, aril- (Ci-C alquilo), heteroaril- (Ci-C4 alquilo) , heterocicloalquilo- (Ci-C4 alquilo) , cicloalquiloalquilo, O- (C1-C4 alquilo), 0(COR10), -C02H, -C02R10, -C(0)R10, -CON(R10)2, -NHC(0)R10, -C (OH) (R10)2, tetrazolilo, C (0)NHS02R10, -CHOHCF3, -COCF3/ -S02NHC (O) R10 o -N(R10)2, en donde cada R10 es independientemente H o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado de alquilo inferior, fluoroalquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior, C3-C6 cicloalquilo, fenilo o bencilo; R1 y R2 son cada uno independientemente seleccionadas de un enlace y C1-C10 alquilo, en donde el C1-C10 alquilo está opcionalmente sustituido por lo menos una vez con un sustituyente seleccionado de entre O, OH, fenilo, amina (NH2) , imina (NH) , halógeno, alquilo, alquenilo o alquinilo, alquilo inferior sustituido, alquenilo inferior sustituido o alquinilo, arilo, heterociclilo, heteroarilo, aril- (Cx-C4) -alquilo, heteroaril- (Cx-C4) -alquilo, heterociclil - (Ci-C4) -alquilo, cicloalquilalquilo, cicloalquilo, alcoxi, carboxi, trifluorometilo, ciano, amino o nitro, en donde cualquiera de los carbonos en el QL-CIO alquilo está reeemplazado opcionalmente por oxígeno, nitrógeno, azufre o silicio; R3, R4, R5 y R6 individualmente son seleccionados de entre hidrógeno, OH, trifluorometilo, C(NH) H2, ciano, amino, nitro, y opcionalmente un grupo sustituido seleccionado entre alquilo, heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, fenilo, bencilo, arilo, heterocicloalquilo, heteroarilo, aril- (Ci-C ) -alquilo, heteroaril- (C1-C4) -alquilo, heterociclil - (C1-C4) -alquilo, cicloalquilalquilo, cicloalquilo, en donde los grupos que están opcionalmente sustituidos tienen un sustituyente seleccionado de entre H, 0 (oxo) , OH, fenilo, imina (NH) , halógeno, Ci-C4 alquilo, C2-C4 alquenilo o C2-C alquinilo, arilo, heterociclilo, heteroarilo, aril- (Ci-C4) -alquilo, heteroaril- (Cx-C4) -alquilo, heterociclil- (Ci-C ) -alquilo, cicloalquilalquilo, cicloalquilo, alcoxi, carboxi , trifluorometilo, ciano, amino y/o nitro o uno o más de R3, R4, R5 y R6 es un enlace a L o uno o más de R3, R4, R5 y R6 está enlazado a otro R1, R2, R3, R4, R5, R6 y/o a L, formando entre estos un anillo en donde N' y N' 1 tienen opcionalmente un grupo adicional anexado a este formando así una sal de amonia cuaternario y sales farmacéuticamente aceptables, N-óxidos farmacéuticamente aceptables, metabolitos farmacéuticamente activos, profármacos farmacéuticamente aceptables y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos. En algunas modalidades, N' y N1 1 están separados por al menos 4 átomos . En algunas modalidades, L es seleccionado de entre ciclopentilo, furano, tienilo, pirrol, imidazol, oxazol, pirrolidina, tetrahidrofurano y tetrahidrotiofeno . En algunas modalidades, L es furano o pirriol. En algunas modalidades, L es tetrahidrofurano . En algunas modalidades, L es seleccionado de entre piridina, pirimidina, tetrahidropirano, pieridina, piperazina, ciclohexilo y fenilo. En algunas modalidades, L es ciclohexilo o fenilo. En algunas modalidades, L es un enlace. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene la estructura de Fórmula (II) : Formula (?), en donde cada R9 es seleccionado independiente de entre H, OH, O- (Ci-C4 alquilo), O (COR10) , haluro, C1-C4 alquilo, (C1-C4 alquil) -amino, -N(R10)2 y arilo y las otras variables son como se describe en la presente. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene la estructura de Fórmula (III) : Formula (??), en donde : cada R9 es seleccionado independiente de entre H, OH, 0- (C1-C4 alquilo), 0(C0R10), haluro, C1-C4 alquilo, (C1-C4 alquil) -amino, -N(R10)2y arilo y las otras variables son como se describe en la presente . En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene la estructura de Fórmula (IV) : Formula (TV). en donde : cada n es independientemente 0, 1, 2 o 3 y las variables son como se describe anteriormente en la presente.

En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular tiene la estructura de Fórmula (V) : Formula (V); cada n es independientemente 0, 1, 2 o 3 y las otras variables son como se describe en la presente . En algunas modalidades, cada n es 1. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular es seleccionado de entre 1 , 2 , -diaminoetano; 1,3-diaminopropano; 1, 4-diaminobutano; 1, 5-diaminopentano; 1,6-diaminohexano; 1 , 7-diaminoheptano; 1 , 8-diaminooctano; 3-metilamino-1- (4 -metilpiperazino) -propan-2-ol ; 4-piperazinoanilina; diclorhidrato de 1- (3-clorofenil) iperazina; piperazin-2-ona HCl ; 2- [4- (2-aminoetil) -piperazin-l-il] -etilamina; pierazina; 2 , 4-diamino-6-fenil-l, 3 , 5-triazina; 3,5-diamino-1 , 2 , 4-triazol ; melanoamida ; arginina HCl; piperidina; 2 , 5-piperazindiona; piperazina anhidra; piperazin-2 -ona HCl; y diclorhidrato de 1- (2 -pirimidil ) iperazina y sales aceptables farmacéuticamente de los mismos. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular es seleccionado de entre 2- [4- (2-aminoetil) piperazin-l-il] -etilamina; 3-metilamino-l- (4-metilpiperazin) -propan-2-ol y piperazina. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular es piperazina. En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular es seleccionado de entre 1 , 2 -diaminoetano ; 1,3-diaminopropano; 1, 4-diaminobutano; 1, 5-diaminopentano; 1,6-diaminohexano; 1 , 7 -diaminoheptano y 1 , 8 -diaminooctano . En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular es seleccionado de entre 1 , 2 -diaminoetano; 1,4-diaminobutano; 1 , 5-diaminopentano; 1 , 6 -diaminohexano y 1,7-diaminoheptano . En algunas modalidades, el compuesto orgánico de bajo peso molecular es 1 , 6-diaminohexano . En una modalidad, el agente es seleccionado de entre 4,4' -diaminodicilohexilmetano ; 1 ,3-bis(aminometil)-ciclohexaiio p-xililendiaiiiina ? ; l-(pirid-4-il)-piperazma ((piperidin-1- il)metil)benoil]piperidina ; diclorhidrato de 2 .5.6-tetranietil-1.4-xililendiamina C(- diclorhidrato de 2 -dimetil-1.4-xililendiaraiiia 2??G dibrorahidrato de ¾a'- (dimetilaniino)-p-xikno I : dicloruro de ¾a'-(trimetilamonio 2,5- diuietil- p-xilcno (Sigma/Aldrich SI 11333), N-(4-giianidinometil- a ; diclorhidrato de 4-(amútotnetil)benzaniidUia ; 4- diclorhidrato de aminometil-2.3,5,6-tetracloro-bencil diclorhidrato de ^aininoraetil^-^S-G-tehafluoro-bencilamina ? ß¾ : dicioriudrato de 2.6-dialil-l.2.3,5,6,7- hcxahidropirrolo[3,4-flisoindol ^ ; diclorhidrato de 2-(4-amii)oinetil-fenil)-etilai) ; diclorhidrato de 2-(4-(2-arainoetil)fenil)etanainina ??^ ; 3-(4-metilpiperazin-l -il)propaii-l H2N * ^ — N — ^ H — amina ^ — / ; diclorhidrato de 2-ammo-l-(4-(aminometil)fenil)etan l HCI Ha ¾? NH2 ; diclorhidrato de I,4-di(2-aniino-l-hidrqxietil)benceno ^ 3HC, H2 — \ / — N— triclorhidrato de 4-{4-metilpiperazin-l-il)butan-l-amina > — ' — t ; triclorhidrato de 2- piperazin- 1 -il)etananiina ; triclorhidrato de 3-(piperazin- 1 -il)propan-l -amina 3HCI a- -N NH 2Ha "2N ; 3-(4.4-dimetilpiperazin-l-il)-propan-I -amina — t ; / \ 3HCI triclorhidrato de l-(2-<Tmmoetil)pip idto-4-amiiw H2N- . ¿c l-(3-aminopropil) / \ 3na piperidin-4-amina H2N ; diclorhidrato de 2-{piperidiii-4-il)etanamina diclorhidrato de idicloriiidrato de (2R,3S.4S.5R)-2.5-bis(guanidinometil>tetrahidrofvim diclortüdrato (2R S,4S,5R)-2-(2-ain½ tetrahidro- : dklorhidrato de (2R,3S;4R,5R.6S)-5-aniino-2-(2-aininoetil)- ?«-t-?? HO- -H HO- — H 2HCI H-I-OH ^NHj En otra modalidad, el agente es seleccionado de entre 4,4'-diauiiiiodiciclohexilmetano trans- l ,4-dianiinociclohexano NHz ; 1 -bis{amktometil) :ickihexano xililendiamina de 2.3.5.6-tctrametil-l,4-xililendiaaiina diclorhidrato de 2,5-dimetil-1.4- dibromhidrato de (dimetilaniino)-p-xileno o- N dicloruro de a,a'- (tr.mctUamoiuo)-2.5-dimetil-p->dlino ^ / : N-(4-guaiiidinometil- IbencilVguanidina diclorhidrato de 3-aminometilbenzaniidÍna ; 4-diclorhidrato de ; diclorhidrato de --uTHnoiiietil- 2.3.5 )-tetiafhioro4)encilaiiiiiia diclorhidrato de 2-(4-aminometil- ienil)-etilaniina ^N ; diclorhidrato de 1.4-(diamino)bcnceno diclorlvidrato de 2 4-(2-a.n oetii)feiul)etananima ; diclorhidrato de -K4-(aiuiuoinetil)fenil)etanol ; diclorhidrato de ?a HCI 1 ,4-di(2-am ino-1 - hidroxietil)benceno En una modalidad, el agente es seleccionado de entre trans- 1.4-diaminociclohexano ; 1.3-bis(aininonietil)-ciclohexano ^ ; l,4-bis(aminometil)- cic ; p-xililendianiina 2; m-xililendiamina O- de a,a-(dimetilamino) p-x dicloruro de a,a'- (hünetilainonio)-2.5-diinetil-p-xileno ; N- 4-euanidinom¿til-bencil)-guanidina HQ NH, NH, "? I 2 i HCi diclorhidrato de 3-aminometilbenzamidina i rnH diclorhidrato de 4-(aminometil)ben2amtdina diclorhidrato de 2-(4-aminometil-fenil)-etilamina ci- V ?a ?a diclorhidrato de 1.4-di(2-aniiiio-l-hidroxietil)benceno HzN ^ En mía modalidad, el agente es seleccionado de entre diclorhidrato de (2R,3S,4S,5R)-2,5-1>ií> (arainoinetil>tetiahidrofuran-3.4-diol ; diclorhidrato de (2R,3S,4S,5R)-2,5-bis dieloriúdrnto de (2R,3S,4S,5R)-2,5-bis diclorhidrato de (2R,3S,4S,5R)- clorhidrato de diclorhidrato de (2S,3S,4R.5S,6S)-5-aniino-2 aininonietil)-6-nietoxi etraludro-2H-piran-3,4-diol diclorhidrato de (2JR.3S.4R,5R,6S 5-amÍBo-2-(2-ammoetil)- En una modalidad, el agente es diclorhidrato de (2R.3S.4S.5R)-2.5-bis(aminonietil>tetrahidro diclorhidralo de 2,6-dialil HCI -N 1.2.3,5,6,7-hexahidropirrolo[3,4-f]isoindol Ha En una modalidad, el agente es seleccionado de entre l-(pirid-4-ü)-piperazina V " \ / ? — H— 3-(4-metilpiperazin-l-ü)pi pan-l -amina — 1 ; triclorhidrato de 2-(4-metilpiperazin-l-il)- / \ 3HCI — ^ ^ — etanamida HaN ; triclorhidrato de 4-(4-metilpiperazin-l-il)-butan-l- amina : triclorhidrato de 2-(piperazin-l-íl) etanamina lorhidrato de 3-ípiperazin-l-il) propan-1 -amina / \ 3HCI N^-NH2 triolorliidrato de l-(2-miiinoetil)piperídin-4-amiiia H H2^N —~^ ^ ¦ triclorhidrato de 1 -(3-aminopropil) piperidin-4-amina drato de 2-(piperidin-4-U)etanainina NH 2HCI ; diclorhidrato de 3-(piperidin-4-il)propan-l -amina

[00293] En una modalidad, el agente es seleccionado de entre 3-(4-metilpiperazin-l-il)propan-l -amina HjN ^N H— s — / ; triclorhidrato de 4-(4-metilpiperazin-l-il)butan-l -amina , k 3HCI / \ H2N— \ J — N N— ^ — ' ^ — / ; 3-<4,4-dimetilpiperazin-l-il)-propan-l -amina HN ) — ( NH y diclorliidrato de 4-(piperidin-4-il)piperidina — — , 2HO modalidad, el agente es seleccionado de entre diclorhidrato de (2R,3R,4R,5R)-1,6- H2N^ HO-T—H HO- •H 2HCI H- ¦OH H" •OH diaminohexan-^AS-tetraol NH2 . diciorhidrato de (2S?3R,4R,5R)-l,6-dianiinohexan-2,3,4,5- tetraol iclorhidrato de (2S,3R,4S,5R)-l,6-dianiinohexan-2,3:4,5-tetraol 'NH, En otra modalidad, el agente es seleccionado de entre trans 1 , 4 -diaminociclohexano; 1 , 3 -bis (aminometil ) -ciclohexano ; 1.4-bis (aminometil) -ciclohexano; p-xililendiamina ; m-xililendiamina; 1- (4- (pirid-4-il) -piperazina; diclorhidrato de 2.5-dimetil-l, 4-xililen-diamina; dibromhidrato de a,a'- (dimetilamino) -p-xileno (Sigma/Aldrich S111333) . En una modalidad, el compuesto es seleccionado de entre trans 1 , 4 -diaminociclohexano; 1, 3 -bis (aminometil) -ciclohexano; 1, 4-bis (aminometil) -ciclohexano; p-xililendiamina; m-xililendiamina; diclorhidrato de 2 , 5 -dimetil - 1.4 -xililen- diamina; dibromhidrato de , ' - (dimethylamino) -p-xileno . En otra modalidad, el compuesto es seleccionado de entre trans 1 , -diaminociclohexano; p-xililendiamina ; m-xililendiamina; diclorhidrato de 2 , 5-dimetil-l, 4-xililendiamina; 1- (pirid-4-il) -piperazina, dibromhidrato de a, ' - (dimetilamino) -p-xileno . En otra modalidad, el compuesto es seleccionado de entre p-xililendiamina; 1- (pirid-4-il) -piperazina, dibromhidrato de a, a 1 - (dimetilamino) -p-xileno . En otra modalidad, el compuesto es seleccionado de entre trans p-xililendiamina y dibromhidrato de a,a'- (dimetilamino) -p-xileno. En una modalidad, los compuestos orgánicos de bajo peso molecular inhiben la absorción de retinoides a células RPE. En otra modalidad, los compuestos orgánicos de bajo peso molecular inhiben la absorción de RBP-retinol y/o IRBP-retinol a células RPE. En otra modalidad, los compuestos orgánicos de bajo peso molecular inhiben la absorción de fármacos terapéuticos retinal -tóxicos a células RPE.

Derivados de aminoglicósidos En otra modalidad, un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE es un derivado de aminoglicósidos. Se ha demostrado que los aminoglicósidos se enlazan a miembros de la familia genética del receptor de LDL. Véase por ejemplo, O 2004/084876. Se ha demostrado que derivados de aminoglicosidos tienen potencial como antagonistas de miembros de la familia genética del receptor de LDL. Véase por ejemplo, WO 2004/084876. En una modalidad, el agente es un derivado de gentamicina, Polimixina B, Aprotinina, Tricosantina, amikacina, kanamicina, neomicina, netilmicina, paromomicina, estreptomicina, tobramicina o apramicina. En una modalidad, el agente es un derivado de gentamicina, Polimixina B, Aprotinina, o Tricosantina. En otra modalidad, el agente es un derivado de gentamicina, Polimixina B, Aprotinina o Tricosantina. En otra modalidad, el agente es un derivado de gentamicina. En otra modalidad, el agente es un derivado de gentamicina seleccionado de entre garoseamina, purposamina y 2 -desoxiestreptamina .

Depuradores de Ca2+ Se sabe que los miembros de la familia genética del receptor de LDL se enlazan a Ca2+, ' que se considera que contribuyen a la estabilidad del receptor y a mantener el receptor en su conformación natural, que es crucial para el enlace de ciertos ligandos al receptor (Andersen et al. J. Biol. Chem. Vol 275, no. 28, 21017-21024, 2000). Ciertos ligandos de proteínas tales como por ejemplo, RBP, IRBP y RAP se enlazan a la proteína receptora en su coformación natural . En algunas modalidades, el agente es un depurador de Ca2+ usado para modular la actividad del miembro de la familia genétoca del receptor de LDl en retina y/o células RPE. En algunas modalidades, el depurador de Ca2+ disminuye la estabilidad de la proteína receptora. En algunas modalidades, el depurador de Ca2+ es EDTA. En algunas modalidades, el depurador de Ca2+ es agregado con un segundo agente .

Agentes reductores de disulfuro Las repeticiones ricas en cisteína tipo enlace de ligando (complemento) que están presentes en los miembros de la familia genética del receptor de LDL contienen múltiples fuentes de disulfuro que constribuyen a la estructura tridimensional de la proteína receptora (Andersen et al. J. Biol. Chew. Vol 275, no. 28, 21017-21024, 2000). Ciertos ligandos de proteínas tales como por ejemplo, RBP e IRBP, reconocen y se enlazan a miembros de la familia genética del receptor de LDL solamente cuando la proteína receptora está en su forma natural. La reducción de los puentes de disulfuro interrumpen la conformación natural de las proteínas receptoras e inhiben significativamente el enlace del ligando proteína (véase por ejemplo, US 2003/0202974) . En una modalidad, el agente es un agente reductor. En otra modalidad, el agente reduce los grupos disulfuro en la proteína receptora.

Polímeros En algunas modalidades, el agente es un polímero. En algunas modalidades, el polímero tiene por lo menos una carga positiva. En algunas modalidades, el polímero tiene más de una carga positiva. En una modalidad, el polímero es polilisina. En otra modalidad, el polímero es un derivado de polilisina. otros polímeros contemplados en la presente incluyen aquellos revelados en O 2004/084876 y WO 2006/037335. Son contemplados los polímeros de cualquiera de los péptidos o proteínas descritos en la presente. Moduladores de anticuerpos incluyen anticuerpos que se enlazan específicamente a un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE y activan la proteína receptora, tal como enlace de receptor-ligando que inicia la transducción de señal; los anticuerpos que se enlazan específicamente un miembro de la familia genética del receptor de LDL e inhiben el enlace de otra molécula al polipéptido, impidiendo así la activación de una ruta de transducción de señal; anticuerpos que se enlazan a un miembro de la familia genética del receptor de LDL para modular la transcripción; y anticuerpos que se enlazan a un miembro de la familia genética del receptor de LDL para modular la traducción. Un anticuerpo que modula una actividad biológica de un miembro de la familia genética del receptor de LDL o polinucleótidos del mismo, incrementa o disminuye la actividad o enlace por lo menos aproximadamente 10%, por lo menos aproximadamente 15%, por lo menos aproximadamente 20%, por lo menos aproximadamente 25%, por lo menos aproximadamente 50%, por lo menos aproximadamente 100% o por lo menos aproximadamente 2 veces, por lo menos aproximadamente 5 veces o por lo menos aproximadamente 10 veces o más cuando es comparado con un control apropiado. En una modalidad, un anticuerpo interfiere específicamente con la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE . Más específicamente, el anticuerpo se enlaza específicamente al dominio extracelular de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE. En una modalidad, el agente es una intracuerpo. Los intracuerpos son moléculas de anticuerpo de una sola cadena expresados intracelularmente diseñadas para enlazarse específicamente e desactivar moléculas objetivo al interior de células. Los intracuerpos han sido usados en análisis celulares y en organismos enteros (Chen et al., Hum. Gen Ther. 5:595 (1994); Hassanzadeh et al., FEBS Lett. 437:75 (1998). Vectores de expresión inducibles pueden ser construidos con intracuerpos que reaccionan específicamente con un receptor de proteína que pertenece a la familia genética del receptor de LDL que es expresado en retina y/o células RPE. Estos vectores pueden ser introducidos a las células huésped y organismos modelo. En una modalidad, el agente consiste de anticuerpos "artificiales", por ejemplo, anticuerpos y fragmentos de anticuerpos producidos y seleccionados in vi tro. En algunas modalidades, estos anticuerpos son desplegados sobre la superficie de un bacteriófago u otra partícula viral, como se describe anteriormente. En otras modalidades, los anticuerpos artificiales están presentes como proteínas de fusión con una proteína estructural viral o de bacteriófago, en los que se incluyen, pero no limitados a, proteína M13 de gen III. Métodos para producir tales anticuerpos artificiales son bien conocidos en el arte (patentes estadounidenses Nos. 5,516,637; 5,223,409; 5,658,727; 5,667,988; 5,498,538; 5,403,484; 5,571,698; y 5,625,033). Los anticuerpos artificiales, seleccionados por ejemplo, en base al enlace de fago para antígenos seleccionados, pueden ser fusionados a un fragmento de Fe de una inmunoglobulina para uso como un terapéutico, como se describe, por ejemplo, en US 5,116,964 o WO 99/61630. Los anticuerpos pueden ser usados para modular la actividad biológica de células, ya sea directa o indirectamente. Un anticuerpo sujeto puede modular la actividad de una célula objetivo, con la cual tiene interacción primaria o puede modular la actividad de otras células al ejercer efectos secundarios, esto es, cuando los objetivos primarios interactúan o se comunican con otras células. Los anticuerpos provistos en la presente pueden ser administrados a mamíferos, particularmente para propósitos terapéuticos y/o diagnósticos en humanos . En una modalidad, el agente es un anticuerpo. En otra modalidad, el anticuerpo es un anticuerpo humano o anticuerpo humanizado. En otra modalidad, el anticuerpo es un anticuerpo policlonal, anticuerpo monoclonal, anticuerpo de una sola cadena, anticuerpo agonista, un anticuerpo agonista, un anticuerpo neutralizante o fragmentos activos de los mismos. En una modalidad, el fragmento activo de un anticuerpo es un fragmento que se enlaza específicamente a un antígeno o un epítopo. En una modalidad, el fragmento activo es un fragmento de enlace de antígeno, un fragmento de Fe, un fragmento de edr, un fragmento de VH, un fragmento de VL o fragmento de estructura. En una modalidad, el anticuerpo incluye por lo menos uno dominio seleccionado de una región variable de una inmunoglobulina, una región constante de una inmunoglobulina, una cadena pesada de una inmunoglobulina, una cadena ligera de una inmunoglobulina y una región de enlace de antígeno de una inmunoglobulina. En una modalidad, el anticuerpo incluye por lo menos una cadena ligera de una inmunoglobulina.

Aptámeros de péptido Otro agente apropiado para modular una actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE es un aptámero de péptido. Los aptámeros de péptidos son péptidos o polipéptidos pequeños que actúan como inhibidores dominantes de función de proteína. Los aptámeros de péptidos se enlazan específicamente a proteínas objetivo, bloqueando su actividad funcional (Kolonin et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 95:14266 (1998). Debido a la naturaleza altamente selectiva de los aptámeros de péptido, pueden ser usados no solamente para apuntar a una proteína específica, sino también para apuntar a funciones específicas de una proteína dada (por ejemplo, una función de señalización) . Además, los aptámeros de péptido pueden ser expresados de manera controlada mediante el uso de promotores que regulan la expresión de manera temporal, espacial o inducible. Los aptámeros de péptido actúan dominantemente, por consiguiente, pueden ser usados para analizar proteínas para las cuales mutantes de pérdida de función no están disponibles. Los aptámeros de péptido que se enlazan con alta afinidad y especificidad a una proteína objetivo pueden ser aislados mediante una variedad de técnicas conocidas en el arte. Los aptámeros de péptido pueden ser aislados de bibliotecas de péptido aleatorias mediante selecciones de dos híbridos de levadura (Xu et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 94:12473 (1997). Pueden también ser aislados de bibliotecas de fago (Hoogenboom et al., Immunotechnology 4:1 (1998) o péptidos/bibliotecas generados químicamente.

Ligandos de enlace endógenos a los miembros de la familia genética del receptor de LDL Como se describe anteriormente, el término "ligando de enlace endógeno" se propone incluir una sustancia primaria endógena que se enlaza a un miembro de la familia genética del receptor de LDL, en las que se incluyen megalina y proteínas semejantes a megalina, también como una sustancia endógena secundaria que se enlaza al ligando de enlace primario del miembro de la familia genética del receptor de LDL cuando la sustancia de enlace primaria es enlazada al miembro de la familia genética del receptor de LDL. Aquellos experimentados en el arte apreciará en base a la presente descripción, que el ligando endógeno particular detectado y medido dependerá de una diversidad de factores, en los que se incluyen por ejemplo, la habilidad del ligando para ser fácilmente detectable si es absorbido a la retina y/o células RPE. Una variedad de ligandos de enlace de megalina son conocidos que existen, en los que se incluyen, por ejemplo, aquellos enlistados anteriormente (véase también, Chistensen, I. L. y Willnow, T. E. J. Am. Soc . Nephrol. 10, 2224-2236, 1999). El ligando de enlace de megalina endógeno preferido tal como se presenta en la presente incluye proteína de enlace de retinoide y proteína de enlace de retinoide interfotoreceptor . Ligandos de enlace de megalina endógenos adicionales pueden ser identificadosp mediante uno o más de los métodos descritos en Christensen et al. (1992), Chistensen, I. L. y Willnow, T. E. (1999) J. Am. Soc. Nephrol . 10, 2224-2236; Cui , S. et al . (1996) Am. J. Physiol . 271, F900-F907; Gburek, J. et al . (2002) J. Am. Soc. Nephrol . 13, 423-430; Hilpert et al . (1999), J. Biol . Chem. 274, 5620-5625; Kanalas, J. J. y Makker, S. P. (1991) J". Biol . Chem. 266, 10825-10829; Kounnas, M. Z. et al . (1992) J. Biol. Che . 267, 21162-21166; Kounnas, M. Z. et al . (1993) J. Biol . Chem. 268, 14176-14181; Kounnas, M. Z. et al (1995) J". Biol . Chem. 270, 13070-13075; Moestrup, S. K. et al . (1993) J. Biol . Chem. 268, 16564-16570; Moestrup, S. K. et al . (1995) J. Clin. Invest. 96, 1404-1413; Moestrup, S. K. et al . (1996) Proc. Natl . Acad. Sci. USA 93, 8612-8617; Moestrup, S. K. et al . (1998) J. Clin. Invest. 102, 902-909; Nykjaer, A. et al. (1999) Cell 96, 507-515; Orlando, R. A. et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 6698-6702; Orlando, R. A. et al. (1998) J. Am. Soc. Nephrol. 9, 1759-1766; Stefansson, S. et al . (1995-A) J. Cell Sci. 108, 2361-2368; Stefansson, S. et al. (1995-B) J". Biol. Chem. 270, 19417-19421; ilnow, T. E. et al. (1992; J. Biol. Chem. 267, 26172-26180; Wilnow, T. E. et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 8460-8464; y Zheng, G. et al. (1998) Endocrinology 139, 1462-1465. Se apreciará por aquellos de habilidad en el arte, en base a la presente descripción, que el método de detección y cuantificación de ligando de enlace de megalina endógenos puede incluir cualquiera de un número de herramientas analíticas disponibles. Por ejemplo, tales métodos pueden incluir el uso de HPLC, NMR o al utilizar métodos de inmunoanálisis estándar conocidos en el arte. Tales inmunoanálisis incluyen, pero no están limitados a, sistemas de análisis competitivos y no competitivos utilizando técnicas tales como RIA, ELISA, inmunoanálisis de "emparedado", análisis inmunoradiométricos , reacciones de precipitina de difusión de gel, análisis de inmunodifusión, inmunoanálisis in situ (utilizando, por ejemplo, oro coloidal, marcadores enzimáticos o marcadores de radioisótopos), Western blots, análisis de gel 2 -dimensional , reacciones de precipitación, análisis de inmunofluorescencia, análisis de proteína A y análisis de inmunoelectroforesis .

IDENTIFICACIÓN DE REGIONES DE ENLACE DE LIGANDO Las repeticiones de enlace de ligando tipo complemento dentro de la familia genética del receptor de LDL son responsables por el reconocimiento de ligandos. (Herz et al., LRP:a multifunctional scavenger and signaling receptor. The Journal of Clinical Investigation, vol 108, no. 6, pp779-784, 2001) . Las propiedades de reconocimiento de ligando de la familia genética del receptor de LDL identificados en la presente se puede llevar a cabo mediante métodos conocidos en el arte. Brevemente y a manera de ejemplo solamente, regiones responsables para el enlace de un número de ligandos se puede llevar a cabo utilizando los siguientes métodos.

"Minireceptores" de los receptores identificados pueden ser preparados al fusionar varios grupos de repeticiones de enlace de ligando a los dominios de extensión de membrana y citoplásmicos de receptor y medir su habilidad para moderar la internalización celular de ligandos enseguida de su expresión en células. (Willnow et al., Molecular dissection of ligand binding sites on the low density lipoportein receptor related protein. J. Biol . Chew. 269:15827-15832, 1994). Otro procedimiento puede involucrar probar fragmentos de receptor recombinantes solubles que representan cada uno de los grupos en el receptor por la habilidad para enlazarse a varios ligandos in vitro (Springer, TA. An extracellular beta-propellar module predicted in lipoprotein and scavenger receptors, tyrosine kinases, epidermal growth factor precursor, and extra cellular matrix components. J". Mol. Biol. 283:837-862, 1998) . El enlace de numerosos ligandos estructuralmente distintos con alta afinidad surge de la presencia de múltiples repeticiones tipo enlace de ligando en los receptores, de la superficie de contorno única y distribución de carga para cada repetición y de múltiples interacciones tanto entre el ligando como el receptor. Algunos ligandos pueden reconocer repeticiones diferentes de manera secuencia, en tanto que otros parecen reconocer repeticiones de grupos separados (Herz et al., LRP:a multifunctional scavenger and signaling receptor.

The Journal of Clinical Investigation, vol 108, no. 6, pp779-784, 2001) .

ANÁLISIS Métodos para determinar si los agentes se enlazan a y/o modulan la actividad de miembros de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE son conocidos en el arte. Por ejemplo, análisis descritos el arte incluyen aquellos resumidos en: US 2003/0202974, WO 06/037335, WO 03/080103, US 2004/0198705, WO 04/084876, US 2006/0029609, US 2005/0026823, US 2005/0100986, US 2005/0089932, US 2005/0042227, US 2004/0204357, US 2004/0198705, US 2004/0049010, US 2003/0202974, US 2003/0181660, US 2003/0082640, US 2003/0157561, US 2003/0077672, Chistensen, et al. (1999) J. Am. Soc. Nephrol . 10, 2224-2236; Cui, S. et al. (1996) Am. J. Physiol. 271, F900-F907; Gburek, J. et al. (2002) J. Am. Soc. Nephrol. 13, 423-430; Hilpert et al. (1999), J. Biol. Chem. 21A, 5620-5625; Kanalas, J. J. y Makker, S. P. (1991) J. Biol. Chem. 266, 10825-10829; Kounnas, M. Z. et al. (1992) J". Biol. Chem. 267, 21162-21166; Kounnas, M. Z. et al. (1993) J. Biol. Chem. 268, 14176-14181; Kounnas, M. Z. et al (1995) J. Biol. Chem. 270, 13070-13075; Moestrup, S. K. et al. (1993) J. Biol. Chem. 268, 16564-16570; Moestrup, S. K. et al. (1995) J. Clin. Invest. 96, 1404-1413; Moestrup, S. K. et al. (1996) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93, 8612-8617; Moestrup, S.

K. et al. (1998) J. Clin. Invest. 102, 902-909; Nykjaer, A. et al. (1999) Cell 96, 507-515; Orlando, R. A. et al. (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89, 6698-6702; Orlando, R. A. et al. (1998) J". Am. Soc. Nephrol . 9, 1759-1766; Stefansson, S. et al. (1995-A) J. Cell Sci. 108, 2361-2368; Stefansson, S. et al. (1995-B) J. Biol. Chem. 270, 19417-19421; Wilnow, T. E. et al. (1992) J. Biol. Chem. 267, 26172-26180; Wilnow, T. E. et al. (1996) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93, 8460-8464; y Zheng, G. et al. (1998) Endocrinology 139, 1462-1465. La identificación de un agente que interactúa con (esto es, se enlaza y/o modula la actividad de) un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células RPE puede ser detectada utilizando cualquier método conocido. Métodos apropiados incluyen: un sistema de dos híbridos de levadura (Zhu et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 94:13,063 (1997); Fields et al., Nature 340:245 (1989); patente estadounidense No. 5,283,173; Chien et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88:9578 (1991); un método de dos híbridos de célula mamífera; un análisis de transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET) ; un análisis de transferencia de energía de resonancia de bioluminiscencia (BRET) ; un análisis de apagado de fluorescencia; un análisis de anisotropía de fluorescencia (Jameson et al., Methods Enzymol . 246:283 (1995); un análisis inmunológico; y un análisis que involucra el enlace de una proteína marcada detectablemente a un proteína inmovilizada . Métodos para detectar la presencia y actividad biología de miembros de la familia genética del receptor de LDL en un muestra biológica son conocidos. Los análisis usados serán apropiados a la actividad biológica del miembro particular de la familia genética del receptor de LDL. Así, por ejemplo, en donde la actividad biológica es enlace a una segunda macromolécula, el análisis detecta el enlace de proteína-proteína, enlace de proteína-ADN, enlace de proteína-carbohidrato o enlace de proteína-lípido, como sea apropiado, utilizando análisis bien conocidos. En donde la actividad biológica es transducción de señal (por ejemplo, transmisión de una señal desde fuera de la célula al interior de la célula) o transporte, se usa un análisis apropiado, tal como medición de concentración de ion de calcio intracelular, medición de cambios de conductancia de membrana o medición de concentración de ión potasio intracelular. Se proporcionan en la presente métodos para detectar la presencia o medir el nivel de receptores de proteína de enlace de retinoide normal o anormal que pertenecen a la familia genética del receptor de LDL en una muestra biológica utilizando un anticuerpo específico. Los métodos incluyen en general poner en contacto la muestra con un anticuerpo específico y detectar el enlace entre el anticuerpo y moléculas de la muestra. El enlace de anticuerpo específico, cuando es comparado con un control apropiado, es una indicación de que un miembro de la familia genética del receptor de LDL de interés está presente en la muestra. Una variedad de métodos para detectar interacciones de anticuerpo-antígeno específicas son conocidos en el arte, por ejemplo, métodos inmunohistológicos estándar, inmunoprecipitación, inmunoanálisis de enzima y radioinmunoanálisis . Brevemente, los anticuerpos son agregados a una muestra de célula, e incubados por un período de tiempo suficiente para permitir el enlace al epítopo, usualmente por lo menos aproximadamente 10 minutos. El anticuerpo puede ser marcado con radioisótopos, enzimas, elementos fluorescentes, quimioluminiscentes, u otros marcadores para la detección directa. Alternativamente, se pueden usar pares de enlace específico, que involucran, por ejemplo, un anticuerpo o reactivo de segunda etapa que es marcado detectablemente , como se describe anteriormente. Tales reactivos y sus métodos de uso son bien conocidos en el arte. Métodos para identificar agentes que modulan una actividad biológica de un miembro de la familia genética del receptor de LDL son conocidos. Los métodos incluyen en general poner en contacto una agente de prueba con una muestra que contiene el polipéptido sujeto, tal como un miembro de la familia genética del receptor de LDL y analizar la actividad biológica del elemento sujeto de la familia genética del receptor de LDL en presencia del agente de prueba. Un incremento o una disminución en la actividad biológica analizada en comparación con la actividad en un control apropiado (por ejemplo, una muestra que comprende un miembro sujeto de la familia genética del receptor de LDL en ausencia del agente de prueba) es una indicación de que la sustancia modula una actividad biológica del polipéptido sujeto. La mezcla de componentes es agregada en cualquier orden que proporciona la interacción requerida. Métodos para identificar un agente, particularmente un agente biológicamente activo que modula el nivel de expresión de ácido nucleico de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en células son conocidos. El método incluye: combinar un agente candidato a ser probado con una célula que comprende un ácido nucleico que codifica el miembro de la familia genética del receptor de LDL y determinar el efecto del agente sobre la expresión del miembro de la familia genética del receptor de LDL. Agentes que disminuyen una actividad biológica de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE pueden encontrar uso en el tratamiento de condiciones o alteraciones asociadas con la actividad biológica de la molécula. Por ejemplo, la regulación de la expresión de miembros de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE puede ser usada para tratar alteraciones oftálmicas. Un nivel disminuido de expresión de miembros de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE puede reducir la cantidad de retinol, retinol-RBP, y/o retinol -RBP-TTR que es absorbido en la retina y células RPE que normalmente expresan los miembros de la familia genética del receptor de LDL. Un nivel disminuido de expresión de miembros de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE puede reducir la cantidad del fármaco terapéutico (esto es, aquellos que producen efectos secundarios oculares-tóxicos indeseables) que es absorbida a la retina y/o células de RPE que normalmente expresan los miembros de la familia genética del receptor de LDL. Un nivel disminuido de expresión de miembros de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE puede reducir la cantidad de antibióticos, tales como, por ejemplo, aminoglicósidos , que es absorbida en la retina y células de RPE que normalmente expresan los miembros de la familia genética del receptor de LDL. Alternativamente, algunas modalidades detectarán agentes que incrementan una actividad biológica. En una modalidad, células de RPE son tratadas con RBP-retinol y/o IRBP-retinol y un agente presentado en la presente. Después de un período de tiempo, las células son aisladas y analizadas en cuanto al contenido de retinol (en los que se incluyen contenido de RBP y contenido de IRBP) . La cantidad de retinol que es encontrada dentro de las células de RPE, en comparación con un control (células de RPE que son tratadas con RBP-retinol y/o IRBP-retinol y sin un agente presentado en la presente) proporcionará una indicación del efecto del agente sobre la actividad moderada por el receptor (esto es, inhibición de transcitosis moderada por RBP-retinol o IRBP-retinol) . En otra modalidad, las células RPE son tratadas con un fármaco terapéutico, tales como, por ejemplo, un fármaco antibiótico y un agente presentado en la presente. El fármaco terapéutico contribuirá a los efectos tóxicos en los tejidos oculares, tales como, por ejemplo, retina y/o células RPE. Después de un período de tiempo, las células son aisladas y analizadas en cuanto a contenido de fármaco terapéutico. La cantidad de fármaco terapéutico que es encontrada en la retina y/o células RPE en comparación con un control (retina y/o células RPE que son tratadas con el fármaco terapéutico, sin un agente presentado en la presente) proporcionará una indicación del efecto del agente sobre la actividad moderada por el receptor (esto es, inhibición de transcitosis moderada por receptor de fármaco terapéutico) . Los agentes que incrementan la actividad biológica de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE pueden encontrar uso en el tratamiento de condiciones oftálmicas asociadas con una deficiencia en la actividad biológica. Por ejemplo, la actividad biológica incrementada de un miembro de la familia genética del receptor de LDL y conducir a transcitosis incrementada en retina y/o células RPE y así incrementar ya sea las concentraciones de retinoide en dichas células o impedir la acumulación de retinoides y/o químicos tóxico en dichas células. Una variedad de diferentes agentes candidatos pueden ser seleccionados por los métodos anteriores. Los agentes candidatos abarcan numerosas clases química, como se describe anteriormente. Agentes candidatos son obtenidos de una amplia variedad de fuentes en las que se incluyen bibliotecas de compuestos sintético o naturales. Numerosos medios están disponibles para la síntesis aleatoria y directa de una amplia variedad de compuestos orgánicos y biomoléculas, en las que se incluyen expresión de oligonucleótidos y oligopéptidos aleatorizados . Por ejemplo, bibliotecas de péptido aleatorias obtenidas mediante selecciones de dos híbridos de levadura (Xu et al., Proc. Nati. Acad. Sci . USA 94:12473 (1997), bibliotecas de fago (Hoogenboom et al., Immunotechnology 4:1 (1998) o bibliotecas generadas químicamente. Alternativamente, bibliotecas de compuestos naturales en forma de extractos bacterianos, fúngales, plantas y animales están disponibles o son producidos fácilmente, en los que se incluyen anticuerpos producidos después de inmunización de un animal con polipéptidos sujetos, o fragmentos de los mismos o con los polinucleótidos de codificación. Adicionalmente , bibliotecas o compuestos producidos natural o sintéticamente son fácilmente modificados por medio de medios químicos, físicos y bioquímicos convencionales y pueden ser usados para producir bibliotecas combinacionales . Además, agentes farmacológicos conocidos pueden ser sometidos a modificaciones químicas dirigidas o aleatorias, tales como acilación, alquilación, esterificación y amidificación, etc., para producir análogos estructurales. En una modalidad, un método para evaluar si un agente está modulando la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL se lleva a cabo con un modelo de animal .

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Otro aspecto son composiciones farmacéuticas que comprenden un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina y un diluyente, excipiente o portador aceptable farmacéuticamente . Otro aspecto son composiciones farmacéuticas que comprenden a agente modulador de megalina y un diluyente, excipiente o portador aceptable farmacéuticamente.

El término "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, con otros componentes químicos, tales como portadores, estabilizantes, diluyentes, agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes y/o excipientes. La composición farmacéutica facilita la administración del compuesto a un organismo. Existen múltiples técnicas para administrar un compuesto en el arte en los que se incluyen pero no limitados a: administración intravenosa, oral, en aerosol, parenteral, oftálmica, pulmonar y tópica. El término "portador" se refiere a compuestos o agentes químicos relativamente no tóxicos que facilitan la incorporación de un compuesto a células o tejidos. El término "diluyente" se refiere a compuestos químicos que son usados para diluir el compuesto de interés antes de su administración. Los diluyentes pueden también ser usados para estabilizar compuestos debido a que pueden proporcionar un medio ambiente más estable. Sales disueltas en soluciones de pH regulado (que también proporcionan control o mantenimiento de pH) son utilizadas como diluyentes en el arte, en los que se incluyen, pero no limitados a solución salina de pH regulado de fosfato. El término "aceptable fisiológicamente" se refiere a un material, tal como un portador o diluyente, que no abroga la actividad biológica o propiedades del compuesto y es no tóxico . El término "sal aceptable farmacéuticamente" se refiere a una formulación de un compuesto que no provoca irritación significativa a un organismo al cual es administrada y no abroga la actividad biológica y propiedades del compuesto. Sales aceptables farmacéuticamente pueden ser obtenidas al hacer reaccionar un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, con ácidos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido salicílico y los semejantes. Sales aceptables farmacéuticamente pueden también ser obtenidas al hacer reaccionar un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina con una base para formar un sal, tal como una sal de amonio, una sal de metal alcalino, tal como una sal de sodio o potasio, una sal de metal alcalinotérreo, tal como una sal de calcio o magnesio, una sal de bases orgánicas tales como diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina, tris (hidroximetil ) metilamina y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y los semejantes o mediante otros métodos conocidos en el arte. Un "metabolito" de un compuesto revelado en la presente es un derivado de aquel compuesto que es formado cuando el compuesto es metabolizado . El término "metabolito activo" se refiere a un derivado biológicamente activo de un compuesto que es formado cuando el compuesto es metabolizado. El término "metabolizado" se refiere a la suma de procesos (en los que se incluye, pero no limitados a, reacciones de hidrólisis y reacciones catalizadas por enzimas) mediante los cuales una sustancia particular es cambiada por un organismo. Así, las enzimas pueden producir alteraciones estructurales específicas a un compuesto. Por ejemplo, citocromo P450 cataliza una variedad de reacciones oxidantes y reductoras en tanto que las uridina difosfato glucuroniltransferasas cataliza la transferencia de una molécula ácido glucuronico activadas a alcoholes aromáticos, alcoholes alifáticos, ácidos carboxílieos, aminas y grupos sulfhidrilo libres. Información adicional en cuanto a metabolismo se puede obtener de The Pharmacological Basis de Therapeutics, 9a Edición, McGraw-Hill (1996) . Los metabolitos de los compuestos revelados en la presente pueden ser identificados ya sea por administración de compuestos a un huésped y análisis de muestras de tejido del huésped o mediante incubación de compuestos con células hepáticas in vitro y análisis de los compuestos resultantes.

Ambos métodos son bien conocidos en el arte. Un "profármaco" se refiere a un agente que es convertido al fármaco padre in vivo. Los profármacos son frecuentemente útiles debido a que, en algunas situaciones, pueden ser más fáciles de administrar que el fármaco padre. Pueden por ejemplo estar biodisponibles mediante administración oral mientras que el padre no. El profármaco puede también tener solubilidad mejorada en composiciones farmacéuticas con respecto al fármaco padre. Un ejemplo, sin limitación, de un profármaco sería un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, que es administrado como un éster (el "profármaco") para facilitar la transmisión a través de una membrana celular en donde la solubilidad del agua es perjudicial a la movilidad pero que luego es que hidrolizada metabólicamente al ácido carboxílico, la entidad activa, una vez al interior de la célula en donde la solubilidad en agua es benéfica. Un ejemplo adicional de un profármaco podría ser un péptido corto (poliaminoácido) enlazado a un grupo ácido en donde el péptido es metabolizado para revelar la porción activa. Los agentes que modulan la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE descritos en la presente pueden ser administrados a un paciente humano per se o en composiciones farmacéuticas en donde son mezclados con otros ingredientes activos, como una terapia de combinación o portador (es) o excipiente (s) apropiado (s) . Técnicas para la formulación y administración de los compuestos de la presente solicitud se pueden encontrar en "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" , 20a ed. (2000) .

RUTAS DE ADMINISTRACIÓN Rutas de administración apropiadas pueden ser, por ejemplo, oral, rectal, transmucosal , transdérmica, pulmonar, oftálmica o administración intestinal; administración parenteral, en las que se incluyen inyecciones intramuscular, subcutánea, intravenosa, inyecciones intramedulares también como inyecciones intratecal, inyección intraventricular directa, intraperitoneal , intranasal o intraocular. Alternativamente, se puede administrar el compuesto de manera local en lugar de manera sistémica, por ejemplo, vía inyección del compuesto directamente a un órgano, frecuentemente en un depósito o formulación de liberación sostenida. Además, se puede administrar el fármaco en un sistema de administración de fármaco apuntado, por ejemplo, en un liposoma recubierto con anticuerpos específico de órgano. Los liposomas serán apuntados a y absorbidos selectivamente por el órgano. Además, el fármaco puede ser provisto en forma de una formulación de liberación rápida, en forma de una formulación de liberación extendida o en forma de una formulación de liberación intermedia.

COMPOSICIÓN/FORMULACIÓN Las composiciones farmacéuticas que comprenden un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, pueden ser manufacturadas de una manera que es en si misma conocida, por ejemplo por medio de procesos de mezcla, disolución, granulación, fabricación de grageas, levigación, emulsificación, encapsulación, atrapamiento o compresión convencionales . Las composiciones farmacéuticas pueden ser formuladas de manera convencional utilizando uno o más portadores aceptables fisiológicamente que comprenden excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activo en preparaciones que pueden ser usadas farmacéuticamente. La formulación apropiada es dependiente de la ruta de administración escogida. Cualquiera de las técnicas bien conocidas, portadores y excipientes pueden ser usados como apropiado y como se entiende en el arte; por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, anterior. Los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, pueden ser administrados en una variedad de maneras, en las que se incluyen todas las formas de administración local al ojo. Adicionalmente , los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, pueden ser administrados sistémicamente , tal como oral o intravenosamente. Los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, pueden ser administrados tópicamente al ojo y pueden ser formulados en una variedad de composiciones oftálmicas administrables tópicamente, tales como soluciones, suspensiones, geles o pomadas. Así, "administración oftálmica" abarca, pero no está limitada a, inyección intraocular, inyección subretinal, inyección intravítrea, administración periocular, inyecciones subconjuntivas , inyecciones retrobulbares , inyecciones intracamerales (en las que se incluyen la cámara anterior o cámara vitrea) , inyecciones o implantes sub-Tenon, soluciones oftálmicas, suspensiones oftálmicas, pomadas oftálmicas, implantes oculares e insertos oculares, soluciones intraoculares , uso de iontoforesis , incorporación en soluciones de irrigación quirúrgicas y paquetes (a manera de ejemplo solamente, una compresa de algodón saturada insertada en el fornix) . La administración de una composición al ojo da como resultado en general contacto directo de los agentes con la córnea, a través de la cual por lo menos una porción de los agentes administrados pasan. Frecuentemente, la composición tiene un tiempo de residencia efectivo en el ojo de aproximadamente 2 a aproximadamente 24 horas, más comúnmente alrededor de 4 a aproximadamente 24 horas y más comúnmente alrededor de 6 a aproximadamente 24 horas. Una composición que comprende un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, puede tomar ilustrativamente la forma de un líquido en donde los agentes están presentes en solución, en suspensión o ambos. Comúnmente, cuando la composición es administrada como una solución o suspensión, una primera porción del agente está presente en solución y una segunda porción del agente está presente en forma de partículas, en suspensión en una matriz líquida. En algunas modalidades, una composición líquida puede incluir una formulación de gel . En otras modalidades, la composición líquida es acuosa. Alternativamente, la composición puede tomar la forma de una pomada . Composiciones útiles pueden ser una solución acuosa, suspensión o solución/suspensión, que puede ser presentada en forma de colirio. Una dosificación deseada puede ser administrada vía un número conocido de gotas al ojo. Por ejemplo, para un volumen de gota de 25 µ?, la administración de 1-6 gotas con la administración de 25-150 µ? de la composición. Las composiciones acuosas contienen comúnmente de alrededor de 0.01% a aproximadamente 50%, más comúnmente alrededor de 0.1% a alrededor de 20%, todavía más comúnmente alrededor de 0.2% a aproximadamente 10%, y más comúnmente alrededor de 0.5% a aproximadamente 5% en peso/volumen de un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina. Comúnmente, las composiciones acuosas tienen pH y osmolalidad aceptables oftalmológicamente. "Aceptables oftalmológicamente" con respecto a una formulación, composición o ingrediente significa comúnmente que no tiene ningún efecto perjudicial persistente en el ojo tratado o en funcionamiento del mismo o sobre la salud general del sujeto que es tratado. Efectos transitorios tales como irritación menor o una sensación "picazón" son comunes con la administración oftálmica de agentes y consistentes con la formulación, composición o ingrediente en cuestión que es "aceptable oftalmológicamente" . La suspensión acuosa útil puede también contener uno o más polímeros como agentes de suspensión. Polímeros útiles incluyen polímeros solubles en agua tales como polímeros celulósicos, por ejemplo, hidroxipropil metilcelulosa, y polímeros insolubles en agua tales como polímeros que contienen carboxilo reticulado. Las composiciones útiles pueden también comprender un polímero mucoadhesivo aceptable oftalmológicamente, seleccionado por ejemplo de carboximetilcelulosa, carbómero (polímero de ácido acrílico) , poli (metilmetacrilato) , poliacrilamida, policarbofilo, copolímero de ácido acrílico/acrilato de butilo, alginato de sodio y dextrana . Composiciones útiles pueden también incluir agentes solubilizantes aceptables oftálmicamente para ayudar en la solubilidad de un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina. El término "agente solubilizante" incluye en general agentes que dan como resultado la formación de una solución micelar o una solución verdadera del agente. Ciertos surfactantes no iónicos aceptables oftalmológicamente, por ejemplo polisorbato 80, pueden ser útiles como agentes solubilizantes, como lo pueden ser glicoles, poliglicoles aceptables oftálmicamente, por ejemplo, polietilenglicol 400 y glicol éteres. Las composiciones útiles pueden también incluir uno o más agentes de ajuste del pH o agentes reguladores del pH aceptable oftalmológicamente, en los que se incluyen ácidos tales como acético, bórico, cítrico, láctico, fosfórico y clorhídrico; bases tales como hidróxido de sodio, fosfato de sodio, borato de sodio, citrato de sodio, acetato de sodio, lactato de sodio y tris-hidroximetilaminometano; y soluciones reguladoras del pH tales como citrato/dextrosa, bicarbonato de sodio y cloruro de amonio. Tales ácidos, bases y soluciones reguladoras del pH están incluidos en una cantidad de requerida para mantener el pH de la composición en un intervalo aceptable oftalmológicamente . Composiciones útiles pueden también incluir una o más sales aceptables oftalmológicamente en una cantidad requerida para traer la osmolalidad de la composición a un intervalo aceptable oftalmológicamente. Tales sales incluyen aquellas que tienen cationes de sodio, potasio o amonio y cloruro, citrato, ascorbato, borato, fosfato, bicarbonato, sulfato, tiosulfato o aniones de bisulfito; sales apropiadas incluyen cloruro de sodio, cloruro de potasio, tiosulfato de sodio, bisulfito de sodio y sulfato de amonio. Otras composiciones útiles pueden también incluir uno o más conservadores aceptables oftalmológicamente para inhibir la actividad microbiana. Conservadores apropiados incluyen sustancias que contienen mercurio tales como merfen y tiomersal; dióxido de cloro estabilizado; y compuestos de amonio cuaternario tales como cloruro de benzalconio, bromuro de cetiltrimetilamonio y cloruro de cetilpiridinio . Todavía otras composiciones útiles pueden incluir uno o más surfactantes aceptables oftalmológicamente para mejorar la estabilidad física o para otros propósitos. Surfactantes no iónicos apropiados incluyen glicéridos de ácido graso de polioxietileno y aceites vegetales, por ejemplo, polioxietileno (60) aceite de ricino hidrogenado; y polioxietileno alquiléteres éteres y alquilfenil éteres, por ejemplo, octoxinol 10, octoxinol 40. Todavía otras composiciones útiles pueden incluir uno o más antioxidantes para mejorar la estabilidad química en donde sea requerido. Antioxidantes apropiados incluyen, a manera de ejemplo solamente, ácido ascórbico y metabisulfito de sodio . Las composiciones de suspensión acuosa pueden ser empacadas en recipientes no resellables de una sola dosis. Alternativamente, recipientes resellables de múltiples dosis pueden ser usados, en cuyo caso es típico incluir un conservador en la composición. La composición oftálmica puede también tomar la forma de un artículo sólido que puede ser insertado entre el ojo y párpado o en el saco conjuntival, en donde libera el agente. La liberación es al fluido lágrima que baña la superficie de la córnea o directamente a la córnea misma, con la cual el artículo sólido está en general en contacto íntimo. Artículos sólidos apropiados para implante en el ojo de tal manera están en general compuestos principalmente de polímeros y pueden ser biodegradables o no biodegradables . Para inyecciones intravenosas, los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, pueden ser formuladas en soluciones acuosas, preferiblemente en soluciones reguladoras del pH compatible fisiológicamente tales como solución de Hank, solución de Ringer o solución reguladora del pH salina fisiológica. Para administración transmucosal , penetrantes apropiados a la barrera a ser permeada son usados en la formulación. Tales penetrantes son en general conocidos en el arte. Para otras inyecciones parenterales , las formulaciones apropiadas pueden incluir soluciones acuosas o soluciones no acuosas, preferiblemente con soluciones reguladoras del pH o excipientes compatibles fisiológicamente. Tales excipientes son en general conocidos en el arte. Para la administración oral, los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, pueden ser formulados fácilmente al combinar los compuestos activos con portadores o excipientes aceptables farmacéuticamente bien conocidos en el arte. Tales portadores permiten que los agentes descritos en la presente sean formulados como tabletas, polvos, pildoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, elixires, pastas aguadas, suspensiones y los semejantes, para ingestión oral por un paciente a ser tratado. Preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden ser obtenidas al mezclar uno o más excipiente sólidos con uno o más de los agentes descritos en la presente, opcionalmente moliendo la mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos, después de agregar auxiliares apropiado, si se desea, para obtener tabletas o núcleos de grageas. Excipientes apropiados son, en particular rellenos tales como azúcares, en los que se incluyen lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como: por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de papa, gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, celulosa microcristalina, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio; u otros tales como: polivinilpirrolidona (PVP o povidona) o fosfato de calcio. Si se desea, se pueden agregar agentes desintegrantes, tales como la croscarmelosa sodio reticulada, polivinilpirrolidona, agar o ácido algínico o una sal de los mismos tal como alginato de sodio . Los núcleos de grageas son provistos con recubrimientos apropiados. Para este propósito, soluciones de azúcar concentradas pueden ser usadas, que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol , polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y solventes orgánicos apropiados o mezclas de solventes. Tintes o pigmentos pueden ser agregados a las tabletas o recubrimientos de gragea para identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis de compuestos activos . Preparaciones farmacéuticas que pueden ser usadas oralmente incluyen cápsulas de empuje-encaje fabricadas de gelatina, también como cápsulas blandas, selladas fabricadas de gelatina y un plastificante , tal como glicerol o sorbitol . Las cápsulas de empuje-encaje pueden contener los ingredientes activos en mezcla con rellenos tal como lactosa, aglutinantes tales como almidones y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente estabilizadores. En cápsulas blandas, los compuestos activos pueden estar disueltos o suspendidos en líquidos apropiados, tales como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles líquidos. Además, se pueden agregar estabilizadores. Todas las formulaciones para administración oral deben estar en dosificaciones apropiadas para tal administración. Para administración bucal o sublingual, las composiciones pueden tomar la forma de tabletas, trocizcos o geles formulados de manera convencional . Otra formulación útil para administración de agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, emplean dispositivo de administración transdermica ("parches"). Tales parches transdérmicos pueden ser usados para proporcionar infusión continua o discontinua de los compuestos de la presente invención en cantidades controladas. La construcción y uso de parches transdérmicos para administración de agentes farmacéuticos es bien conocida en el arte. Véase, por ejemplo, patente estadounidense No. 5,023,252. Tales parches pueden ser construidos para administración continua, pulsátil o sobre demanda de agentes farmacéuticos. Todavía además, la administración transdérmica de los agentes se puede llevar a cabo por medio de parches iontoforéticos y los semejantes. Los parches transdérmicos pueden proporcionar administración controlada de los compuestos. La velocidad de absorción puede ser disminuida o frenada al utilizar membranas que controlan la velocidad o al atrapar el compuesto dentro de una matriz polimérica o gel . Inversamente, se puede usar mejoradores de absorción para incrementar la absorción. Formulaciones apropiadas para administración transdérmica pueden ser presentados como parches discretos y pueden ser emulsiones lipofílicas o soluciones acuosas de pH regulado, disueltos y/o dispersados en un polímero o un adhesivo. Los parches transdérmicos pueden ser colocados sobre diferentes porciones de cuerpo del paciente, incluyendo sobre el ojo. Dispositivos ionotoforéticos adicionales que pueden ser usados para administración ocular de agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, son el aplicador eyegate, creado y patentado por Optis France S.A. y el sistema de iontoforesis ocular Ocuphor™ desarrollado por Iomed, Inc. Para administración mediante inhalación, los agentes que modulan la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, son administrados convenientemente en forma de una presentación de atomización en aerosol de paquetes presurizados o un nebulizador, con el uso de un propelente apropiado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas apropiado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede ser determinada al proporcionar una válvula para administrar una cantidad medida. Cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina para uso en un inhalador o insuflador pueden ser formulados que contienen una mezcla en polvo del compuesto y una base de polvo apropiada tal como lactosa o almidón. Los compuestos pueden ser formulados para administración parenteral mediante inyección, por ejemplo, mediante inyección de bolo o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden estar presentadas en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampolletas o en recipientes de multi-dosis, con un conservador agregado. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o agentes de dispersión. Las formulaciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Adicionalmente , suspensiones de los compuestos activos pueden ser preparadas como suspensiones de inyección aceitosa apropiadas. Solventes o vehículos lipofílicos apropiados incluyen aceites grasos tales como aceite de sésamo o ásteres de ácidos grasos sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos o liposomas. Suspensiones de inyección acuosa pueden contener sustancias que incrementan la viscosidad de la suspensión, tal como carboximetil celulosa de sodio, sorbitol o dextrana. Opcionalmente , la suspensión puede también contener estabilizadores o agentes apropiados que incrementan la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para constitución con un vehículo apropiado, por ejemplo, agua libre de pirógeno estéril antes del uso. Los compuestos pueden también ser formulados en composiciones rectales tales como geles rectales, espuma rectal, aerosoles rectales, supositorios o enemas de retención, por ejemplo, que contienen bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos. Los compuestos pueden también ser formulados en composiciones vaginales o uretrales, en los que se incluyen supositorios vaginales o uretrales (bougies) , tampones medicados y tabletas vaginales . Además de las formulaciones descritas previamente, los compuestos pueden también ser formulados como una preparación de depósito. Tales formulaciones de larga acción pueden ser administradas mediante implante (por ejemplo subcutáneamente o intramuscular) o mediante inyección intramuscular. Así, por ejemplo, los compuestos pueden estar formulados con materiales poliméricos o hidrofobicos apropiados (por ejemplo como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico o como derivados escasamente solubles, por ejemplo, como una sal escasamente soluble. Las formas de depósito inyectables pueden ser elaboradas al formar matrices microencapsuladas (también conocidas como matrices de microencapsulación) de un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, en polímeros biodegradables . Dependiendo de la proporción de fármaco a polímero y la naturaleza del polímero particular empleado, la velocidad de liberación de fármaco puede ser controlada. Las formulaciones inyectables de depósito pueden también ser preparadas al atrapar el fármaco en liposomas o microemulsiones . A manera de ejemplo solamente, depósitos yuxtaesclerales posteriores pueden ser usados como modo de administración para agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina. La esclera es una capa avascular delgada, que consiste de una red de colágeno altamente ordenada que rodea la mayoría de ojo de los vertebrados. Puesto que la esclera es avascular puede ser utilizada como depósito de almacenamiento natural del cual el material inyectado no puede ser removido rápidamente o despejado del ojo. La formulación usada para la administración del compuesto a la capa escleral del ojo puede ser cualquier forma apropiada para aplicación a la esclera mediante inyección a través de una cánula con diámetro pequeño apropiado para inyección a la capa escleral. Ejemplos para formas de aplicación inyectables son soluciones, suspensiones o suspensiones coloidales. Alternativamente, otros sistemas de administración para compuestos farmacéuticos hidrofóbicos puede ser empleados. Liposomas y emulsiones son ejemplos bien conocidos de vehículos o portadores de administración para fármacos hidrofóbicos. Ciertos solventes orgánicos tales como iV-metilpirrolidona también pueden ser empleados, aunque usualmente al costo de mayor toxicidad. Adicionalmente , los compuestos pueden ser administrados utilizando un sistema de liberación sostenida, tales como matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen agente terapéutico. Varios materiales de liberación sostenida han sido establecidos y son bien conocidos por aquellos experimentados en el arte. Las cápsulas de liberación sostenida pueden liberar, dependiendo de su naturaleza química, los compuestos para unas pocas semanas hasta más de 100 días. Dependiendo de la naturaleza química y la estabilidad biológica del agente terapéutico, se pueden usar estrategias adicionales para la estabilización de proteína. Todas las formulaciones descritas en la presente se pueden beneficiar de antioxidantes, agentes quelantes de metal, compuestos que contienen tiol y otros agentes estabilizantes en general. Ejemplos de tales agentes estabilizantes, incluyen, pero no están limitados a: (a) aproximadamente 0.5% a aproximadamente 2% en peso/volumen de glicerol, (b) aproximadamente 0.1% a aproximadamente 1% en peso/volumen de metionina, (c) aproximadamente 0.1% a aproximadamente 2% en peso/volumen de monotioglicerol , (d) EDTA aproximadamente 1 mM a aproximadamente 10 mM, (e) aproximadamente 0.01% a aproximadamente 2% en peso/volumen de ácido ascórbico, (f) 0.003% a aproximadamente 0.02% en peso/volumen de polisorbato 80, (g) 0.001% a aproximadamente 0.05% en peso/volumen de polisorbato 20, (h) arginina, (i) heparina, (j) sulfato de dextrana, (k) ciclodextrinas , (1) polisulfato de pentosana y otros heparinoides , (m) cationes divalentes tales como magnesio y zinc; o (n) combinaciones de los mismos. Muchos de los agentes pueden ser provistos como sales con contraiones farmacéuticamente compatibles. Sales farmacéuticamente compatibles pueden ser formadas con muchos ácidos, en los que se incluyen pero no limitados a ácido clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico, tartárico, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más solubles en solventes acuosos u otros solventes protónicos que las correspondientes formas de ácido o base libres.

MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO PARA DETECCIÓN DE COMPUESTOS FLUORESCENTES La diagnosis prematura de enfermedades retínales, tales como, por ejemplo, degeneraciones maculares y/o distrofias maculares es importante con el fin de iniciar prontas intervenciones terapéuticas. La detección y/o medición de la presencia de compuestos fluorescentes en tejidos oculares es especulada en la publicación de patente estadounidense 2006/0099714, incorporada por referencia. Se proporcionan en la misma técnicas y métodos para la detección de compuestos fluorescentes tóxicos, tales como, por ejemplo, fosfolípidos oxidados y ácidos grasos oxidados, en tejidos oculares. Los fosfolípidos y ácidos grasos son encontrados abundantemente en retina y/o células RPE y son esenciales para el funcionamiento apropiado de RPE y células de retina. La presencia de y acumulación de compuestos tóxicos en las células de retina y/o RPE proporciona la base para enfermedades oculares, tales como, por ejemplo, degeneraciones maculares y/o distrofias maculares. La detección temprana de tales compuestos tóxicos en te idos oculares es importante con el fin de iniciar una pronta intervención terapéutica. La presencia de fosfolípidos oxidados y ácidos grasos en células de RPE y/o retina se ha correlacionado con la enfermedad ocular. Los fosfolípidos y ácidos grasos pueden sufrir oxidación inducida por la luz y/u oxidación química-inducida en células de retina y RPE. Los fosfolípidos oxidados y ácidos grasos oxidados son compuestos fluorescentes que son aptos de ser detectados mediante espectrometría de fluorescencia. Métodos para la detección de compuestos fluorescentes en tejidos oculares son presentados en la publicación de patente estadounidense 2006/0099714, incorporada por referencia. Los fosfolípidos oxidados y ácidos grasos oxidados tienen diferentes espectros de emisión fluorescentes que otros compuestos tóxicos retínales, tales como, por ejemplo, N-retiniliden-fosfatidiletanolamina, dihidro-N-retiniliden-N-retinil-fosfatidiletanolamina, N-retiniliden-N-retinil -fosfatidiletanolamina, dihidro-N-retiniliden-N-retiñí1-etanolamina y N-retiniliden- fosfatidiletanolamina .

En una modalidad, se proporciona en la presente un método para la diagnosis temprana de enfermedades retínales, tales como, por ejemplo, degeneraciones maculares y/o distrofias maculares que incluyen medir la presencia y/o cantidad de fosfolípidos oxidados (en los que se incluyen fosfatidil serina oxidada) y ácidos grasos oxidados (en los que se incluyen ácido docohexanoico) en tejidos oculares. En una modalidad, se proporciona en la presente un método para medir la presencia de fosfolípidos oxidados y/o ácidos grasos en una muestra. En algunas modalidades, la presencia de fosfolípidos y/o ácidos grasos oxidados en una muestra es determinada al iluminar la muestra con luz que tiene una longitud de onda de entre 300 y 400 nm y medir la fluorescencia de emisión de la muestra entre 400 y 500 nm. Los fosfolípidos y ácidos grasos son absorbidos por las células de RPE lentamente. Sin embargo, los fosfolípidos y ácidos grasos oxidados que son absorbidos a una velocidad de aproximadamente 10 veces aquella de los fosfolípidos y ácidos grasos sin oxidar. Los fosfolípidos oxidados y ácidos grasos oxidados son absorbidos por células de RPE mediante trancitosis moderada por receptor. En una modalidad, los fosfolípidos oxidados y ácidos grasos oxidados son absorbidos por células de RPE por miembros de la familia genética del receptor de LDL.

MÉTODOS DE TRATAMIENTO, DOSIFICACIONES Y TERAPIAS DE COMBINACIÓN El término "mamífero" significa todos los mamíferos en los que se incluyen humanos. Los mamíferos incluyen a manera de ejemplo solamente, humanos, primates no humanos, vacas, perros, gatos, cabras, ovejas, cerdos, ratas, ratones y conej os . El término "cantidad efectiva" como se usa en la presente se refiere a aquella cantidad de compuesto que es administrado que aliviará alguna extensión uno o más de los síntomas de la enfermedad, condición o alteración que es tratada . Las composiciones que contienen el (los) compuesto (s) descritos en la presente pueden ser administradas para tratamientos profilácticos y/o terapéuticos. El término "tratamiento" es usado para referirse ya sea a tratamientos profilácticos y/o terapéuticos. En aplicaciones terapéuticas, las composiciones son administradas a un paciente que ya sufre de una enfermedad, condición o alteración, en una cantidad suficiente para curar o por lo menos detener parcialmente los síntomas de la enfermedad, alteración o condición. La cantidad efectiva para esto dependerá de la severidad y curso de la enfermedad, alteración o condición, terapia previa, estatus de salud del paciente y respuesta a los fármacos y el juicio del médico de tratamiento. Se considera dentro de la habilidad de aquel experimentado en el arte determinar tales cantidades terapéuticamente efectivas mediante experimentación de rutina (por ejemplo, una prueba clínica de escalamiento de dosis) . En aplicaciones profilácticas, las composiciones que contienen los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de RPE, tales como por ejemplo, agentes moduladores de megalina, descritos en la presente, son administrados a un paciente susceptible de o de otra manera el riesgo de una enfermedad, condición o alteración particular. Tal cantidad es definida como una "cantidad o dodis profilácticamente efectiva". En este uso, las cantidades precisas también dependen del estatus de salud del paciente, peso y los semejantes. Se considerará dentro de la habilidad de aquellos experimentados en el arte determinar tales cantidades profilácticamente efectivas mediante experimentación de rutina (por ejemplo, una prueba clínica de tratamiento de dosis) . Los términos "mejorar" o "que mejora" significa incrementar o prolongar ya sea en potencia o duración un efecto deseado. Así, con respecto a mejorar el efecto de agentes terapéuticos, el término "que mejora" -se refiere a la habilidad de incrementar o mejorar, ya sea en potencia o duración, el efecto de otros agentes terapéuticos en un sistema. Una "cantidad efectiva que mejora" como se usa en la presente, se refiere a una cantidad apropiada para mejorar el efecto de otro agente terapéutico en un sistema deseado. Cuando se usa en un paciente, cantidades efectivas para este uso dependerán de la severidad y curso de enfermedad, alteración o condición, terapia previa, el estatus de salud del paciente y respuesta a los fármacos y el juicio del médico del tratamiento. En el caso en donde la condición del paciente no mejora, a discreción del médico, la administración del compuesto puede ser administrada crónicamente, esto es, por un período de tiempo extenso, en los que se incluyen en toda la vida del paciente con el fin de mejora o de otra manera controlar o limitar los síntomas de la enfermedad o condición del paciente. En el caso en donde el estatus del paciente mejora, a discreción del médico, la administración de los compuestos puede ser administrada continua o temporalmente suspendida por una cierta duración de tiempo (esto es, "variaciones de fármaco" ) . Una vez que se ha presentado mejora de las condiciones del paciente, una dosis de mantenimiento es adminisrtada si es necesario. Subsecuentemente, la dosificación o la frecuencia de administración o ambos, pueden ser reducidas como función de los síntomas, a un nivel en el cual la enfermedad, alteración o condición mejorada es retenida, los pacientes pueden sin embargo, requerir tratamiento intermitente en una base a largo plazo después de cualquier recurrencia de síntomas . La cantidad de un agente dado que corresponderá a tal cantidad variará dependiendo de factores tales como compuesto particular, condición de enfermedad y su severidad, la identidad (por ejemplo, peso) del sujeto o huésped en necesidad de tratamiento, pero puede no obstante ser determinada sistemáticamente de manera conocida en el arte de acuerdo con las circunstancias particulares que rodean su caso, en los que se incluyen, por ejemplo, el agente específico que es administrado, la ruta de administración, la condición que es tratada y el sujeto o huésped que es tratado. En general, sin embargo, las dosis usadas para el tratamiento del humano adulto estará comúnmente en el intervalo de 0.02-5000 mg por día, preferiblemente 1-1500 mg por día. La dosis deseada puede ser presentada convenientemente en una sola dosis o como dosis divididas administradas simultáneamente (o en un período de tiempo corto) o a intervalos apropiados (por ejemplo, dos, tres, cuatro o más subdosis por día) . En ciertas circunstancias, puede ser apropiado administrar por lo menos uno de los agentes que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE, tales como por ejemplo, agentes moduladores de megalina, descritos en la presente (o una sal, éster, amida, profármaco o sulfato aceptable farmacéuticamente) en combinación con otro agente terapéutico. A manera de ejemplo solamente, su uno de los efectos secundarios experimentados por un paciente al recibir uno de los compuestos en la presente es inflamación, entonces puede ser apropiado administrar un agente anti-inflamatorio en combinación con el agente trerapéutico inicial. 0 de otra forma, a manera de ejemplo solamente, la efectividad terapéutica de uno del agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE, tales como por ejemplo, agentes moduladores de megalina, descritos en la presente puede ser mejorada mediante administración de un adyuvante (esto es, por sí mismo el adyuvante puede solamente tener el beneficio terapéutico mínimo pero en combinación con otro agente terapéutico, el beneficio terapéutico global al paciente es mejorado) . De otra manera, a manera de ejemplo solamente, el beneficio experimentado por un paciente puede ser incrementado al administrar uno de los agentes que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE, tales como por ejemplo, agentes moduladores de megalina, descritos en la presente con otro agente terapéutico (que también incluye un réginem terapéutico) que también tiene beneficio terapéutico. A manera de ejemplo solamente, en el tratamiento por degeneración macular que involucra administración de uno de los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como por ejemplo, agentes moduladores de megalina descritos en la presente, el beneficio terapéutico incrementado puede resultar al también proporcionar al paciente con otros agentes terapéuticos o terapias por degeneración macular. En cualquier caso, sin consideración de la enfermedad, alteración o condición que es tratada, el beneficio global experimentado por el paciente puede simplemente ser aditivo de los dos agentes terapéuticos o el paciente puede experimentar un beneficio sinergístico . Ejemplos no limitantes específicos de posibles terapias de combinación incluyen el uso de por lo menos un agente que modula un miembrto de la gamilia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE, tales como por ejemplo, agente modulador de megalina, con inductores de óxido nítrico (NO) , estatinas, fosfolípidos cargados negativamente, antioxidantes, minerales, agentes anti-inflamatorios, agentes anti-angiogénicos, inhibidores de metaloproteinasa de matriz, carotenoides , ácido 13 -cis-retinoico o un compuesto que tiene la estructura de Fórmula (A) : Formula(A) en donde : Xx es seleccionado a partir del grupo que consister de NR2, 0, S, CHR2; R1 es (CHR2)X-L1-R3, en donde x es 0, 1, 2, o 3; L1 es un solo enlace -C(0)-; R2 es una porción seleccionada del grupo que consiste de H, (Ci-C4) alquilo, F, (C1-C4) fluoroalquilo, (C1-C4) alcoxilo, -C(0)0H, -C(0)-NH2, - (C1-C4) alquilamina, -C (O) - (C1-C4) alquilo, -C (O) - (C1-C4) fluoroalquilo, -C (O) - (C1-C4) alquilamina y -C(0) -(Ci-C4) alcoxilo y R3 es H o una porción opcionalmente sustituida con 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente, seleccionados a partir del grupo que consiste de (C2-C7) alquenilo, (C2-C7) alquinilo, arilo, (C3-C7) cicloalquilo, (C5-C7) cicloalquenilo, y un heterociclo. En varias instancias, agentes de combinación apropiados pueden caer dentro de múltiples categorías (a manera de ejemplo solamente, luteína es un antioxidante y un carotenoide) . Además, el agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, pueden también ser administrados con agentes adicionales que pueden proporcionar beneficio al paciente, en las que se incluyen a manera de ejemplo solamente ciclosporina A. Además, los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células de RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, pueden también ser usados en combinación con procedimientos que pueden proporcionar beneficio adicional o sinergístico al paciente, en los que se incluye, a manera de ejemplo solamente, el uso de reoferesis extracorporea (también conocida como filtración diferencial de membrana) , el uso de telescopios en miniatura implantables , fotocoagulación de drusen por láser y terapia de microestimulación . Se ha demostrado que el uso de anti -oxidantes beneficia a los pacientes con degeneraciones maculares y distrofias maculares. Véase, por ejemplo, Arch. Ophthalmol . , 119: 1417-36 (2001); Sparrow, et al., J. Biol . Chem. , 278:18207-13 (2003). Ejemplos de antioxidantes apropiados que podrían ser usados en combinación con un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, incluyen vitamina C, vitamina E, beta-caroteno y otros carotenoides, conenzima Q, 4-hidroxi-2 , 2 , 6 , 6-tetrametilpiperidina-N-oxilo (también conocido como Tempol) , luteína, hidroxitolueno butilado, resveratrol, un análogo de trolox (PNU-83836-E) y extracto de bilberry. También se ha demostrado que el uso de ciertos minerales beneficia a pacientes con degeneraciones y distrofias maculares. Véase, por ejemplo, Arch. Ophthalmol., 119: 1417-36 (2001) . Ejemplos de minerales apropiados que podrían ser usados en combinación con por lo menos un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agente modulador de megalina, incluyen minerales que contienen cobre, tales como óxido cúprico (a manera de ejemplo solamente) ; minerales que contienen zinc, tales como óxido de zinc (a manera de ejemplo solamente); y compuestos que contienen selenio. El uso de ciertos fosfolípidos cargados negativamente también ha mostrado beneficiar a pacientes con degeneraciones y distrofias maculares. Véase, por ejemplo, Shaban & Richter, Biol. Chem. , 383:537-45 (2002); Shaban, et al., Exp. Eye Res., 75:99-108 (2002). Ejemplos de fosfolípidos cargado negativamente apropiados que podrían ser usados en combinación con por lo menos un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agente modulador de megalina, incluyen cardiolipina y fosfatidilglicerol . Fosfolípidos cargados positivamente y/o neutros pueden también proporcionar benéfico para pacientes con degeneraciones y distrofias maculares cuando son usados en combinación con agentes moduladores de megalina. El uso de ciertos carotenoides se ha correlacionado con el mantenimiento de fotoprotección necesaria en células fotoreceptoras . Los carotenoides son pigmentos amarillo a rojo que se presentan de manera estable en la naturaleza del grupo de terpenoide que pueden ser encontrados en plantas, algas, bacterias y ciertos animales, tales como aves y almejas. Los carotenoides son una clase grande de moléculas en las cuales más de 600 carotenoides que se presentan de manera estable en la naturaleza han sido identificados. Los carotenoides incluyen hidrocarburos (carotenos) y sus derivados alcohólicos oxigenados (xantófilos) . Incluyen actinioeritrol , astaxantina, cantaxantina, capsantina, capsorubina, ß-8 ' -apo-carotenal (apo-carotenal) , ß-12 ' -apo-carotenal, -caroteno, ß-caroteno, "caroteno" (una mezcla de a- y ß-carotenos) , ?-carotenos, ß-criptoxantina , luteína, licopeno, violeritrina, zeaxantina y ésteres de miembros que contienen hidroxilo o carboxilo de los mismos. Muchos de los carotenoides se presentan de manera estable en la naturaleza como formas isoméricas cis- y trans-, en tanto que los compuestos sintéticos son frecuentemente mezclas racémicas . En humanos, la retina acumula de manera selectiva principalmente dos carotenoides: zeaxantina y luteína. Se piensa que estos dos carotenoides ayudan a proteger la regina debido a que son antioxidantes poderosos y absorben la luz azul . Estudios con codornices establecen que grupo criados con dieta deficiente de carotenoides tuvieron retinas con bajas concentraciones de zeaxantina y sufrieron de daños por luz severo, como se hace evidente por un número muy alto de células fotoreceptoras apoptóticas, en tanto que el grupo con altas concentraciones de zeaxantina tuvo daños mínimos. Ejemplos de carotenoides apropiados para combinación con por lo menos un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agente modulador de megalina, incluyen luteína y zeaxantina, también como cualquiera de los carotenoides mencionados anteriormente. Inductores de óxido nítrico apropiados incluyen compuestos que estimulan en NO endógeno o elevan los niveles del factor de relajación derivado de endotelio endógeno (EDRF) in vivo o son sustratos para óxido nítrico sintasa. Tales compuestos incluyen, por ejemplo, L-arginina, L-homoarginina y N-hidroxi-L-arginina, en los que se incluyen sus análogos nitrosados y nitrosilados (por ejemplo, L-arginina nitrosada, L-arginina nitrosilada, N-hidroxi-L-arginina nitrosada, N-hidroxi-L-arginina nitrosilada, L-homoarginina nitrosada y L-homoarginina nitrosilada) , precursores de L-arginina y/o sales aceptables fisiológicamente de las mismas, en las que se incluye, por ejemplo, citrulina, ornitina, glutamina, lisina, polipéptidos que comprenden por lo menos uno de estos aminoácidos, inhibidores de la enzima arginasa (por ejemplo, N-hidroxi -L-arginina y ácido 2 (S) -amino-6-boronohexanoico) y los sustratos para óxido nítrico sintasa, citocinas, adenosina, bradiquinina, calreticulina, bisacodilo y fenolftaleína . EDRF es un factor de relajamiento vascular secretado por el endotelio y ha sido identificado como óxido nítrico o un derivado estrechamente relacionado del mismo (Palmer et al., Nature, 327:524-526 (1987); Ignarro et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84:9265-9269 (1987)). Las estatinas sirven como agentes de disminución de lípidos y/o inductores de óxido nítrico apropiados. Además, se ha demostrado una relación entre el uso de la estatina y el inicio retardado o desarrollo retardado de degeneración macular. G. McGwin, et al., British Journal of Ophthalmology, 87:1121-25 (2003). Así, las estatinas pueden proporcionar beneficio a un paciente que sufre de una condición oftálmica (tales como las degeneraciones y distrofias maculares y las distrofias retínales) cuando son administradas en combinación con los agentes moduladores de megalina. Estatinas apropiadas incluyen, a manera de ejemplo solamente, rosuvastatina, pitivastatina, simvastatina, pravastatina, cerivastatina, mevastatina, velostatina, fluvastatina, compactina, lovastatina, dalvastatina , fluindostatina, atorvastatina, atorvastatina calcio (que es a sal de semicalcio de atorvastatina) y dihidrocompactina . Agentes antiinflamatorios apropiados con los cuales los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, pueden ser usados incluyen, a manera de ejemplo solamente, aspirina y otros salicilatos, cromolina, nedocromilo, teofilina, zileuton, zafirlukast, montelukast, pranlukast, indometacina e inhibidores de lipoxigenasa; fármacos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID) (tales como ibuprofeno y naproxina) ; prednisona, dexametasona, inhibidores de ciclooxigenasa (esto es, inhibidores de COX-1 y/o COX-2 tales como Naproxen™ o Celebrex™) ; estatinas (a manera de ejemplo solamente, rosuvastatina, pitivastatina, simvastatina, pravastatina, cerivastatina, mevastatina, velostatina, fluvastatina , compactina, lovastatina, dalvastatina, fluindostatina, atorvastatina, atorvastatina calcio (que es la sal de semicalcio de atorvastatina) y dihidrocompactina) ; y esteroides disasociados . Los inhibidores de metaloproteinasas de matriz (MMP) apropiados pueden también ser administrados en combinación con los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, con el fin de tratar condiciones o síntomas oftálmicas asociados con degeneraciones maculares o retínales. Se sabe que los MMP hidrolizan la mayoría de los componentes de la matriz extracelular . Estas proteinasas juegan un papel central en muchos procesos biológicos tales como remodelado de tejido normal, embriogénesis, cicatrización de heridas y angiogénesis . Sin embargo, se ha observado expresión excesiva de MMP en muchos estados de enfermedad, en los que se incluyen degeneración macular. Muchos MMP han sido identificados, la mayoría de los cuales son endopeptidasas de zinc de multidominio . Un número de inhibidores de metaloproteinasa son conocidos (véase por ejemplo la revisión de MMP inhibitors by Whittaker M. et al, Chemical Reviews 99 (9) :2735-27 '6 (1999)). Ejemplos representativos de Inhibidores de MMP incluyen inhibidores de tejido de metaloproteinasas (TIMP) (por ejemplo, TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3 ó TIMP-4), a2-macroglobulina , tetraciclinas (por ejemplo, tetraciclina, minociclina y doxiciclina) , hidroxamatos (por ejemplo, BATIMASTAT, MARIMISTAT y TROCADE) , quelantes (por ejemplo, EDTA, cisteína, acetilcisteína, D-penicilamina y sales de oro) , fragmentos de MMP sintéticos, succinil mercaptopurinas , fosfonamidatos y ácidos hidroxamínicos . Ejemplos de inhibidores de MMP que pueden ser usados en combinación con un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, incluyen a manera de ejemplo solamente, cualquiera de los inhibidores mencionados anteriormente. Se ha demostrado que el uso de fármacos antiangiogénicos o anti-VEGF también proporciona beneficio para pacientes con degeneraciones y distrofias maculares. Ejemplos de fármacos antiangiogénicos o anti-VEGF apropiados que podrían ser usados en combinación con por lo menos un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, Agente modulador de megalina, incluyen Rhufab V2 (Lucentis™) , Triptofanil-tARN sintetasa (TrpRS) , EyeOOl (++++ Anti-VEGF Pegylated Aptamer) , esqualamina, Retaane™ 15 mg (acetato anecortavo para suspensión de depósito; Alcon, Inc.), combretastatina A4 profármaco (CA4P) , Macugen™, Mifeprex™ (mifepristona - ru486) , acetonuro de triamcinolona subtenon, acetonuro de triamcinolona cristalina intravítreo, Prinomastat (AG3340 - inhibidor de metaloproteinasa de matriz sintético, Pfizer) , acetonuro de fluocinolona (en los que se incluyen implante intraocular de fluocinolona, Bausch & Lomb/Control Delivery Systems) , inhibidores de VEGFR (Sugen) y VEGF-Trap (Regeneron/Aventis) . Otras terapias farmacéuticas que han sido usadas para aliviar el deterioro visual pueden ser usadas en combinación con por lo menos un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agente modulador de megalina. Tales tratamientos incluyen pero no están limitados a agentes tales como Visudyne™ con el uso de un láser no térmico, PKC 412, Endovion (NeuroSearch A/S) , factores neurotróficos , en los que se incluyen a manera de ejemplo factor neurotrófico glial-derivado y factor neurotrófico ciliar, diatazem, dorzolamina, Phototrop, 9 -cis-retinal , medicación del ojo (incluyendo Ecoterapia) en los que se incluyen yoduro de fosfolina o ecotiopato o inhibidores de anhidrasa carbónica, AE-941 (AEterna Laboratories, Inc.), Sirna-027 (Sirna Therapeutics , Inc.), pegaptanib (NeXstar Pharmaceutics/Gilead Sciences), neurotrofinas (en las que se incluyen, a manera de ejemplo solamente, NT-4/5, Genentech) , Cand5 (Acuity Pharmaceuticals) , ranibizumab (Genentech) , INS-37217 (Inspire Pharmaceuticals) , antagonistas de integrina (en los que se incluyen aquellos de Jerini AG y Abbott Laboratories) , EG-3306 (Ark Therapeutics Ltd.), BD -E (BioDiem Ltd.), talidomida (como se usa, por ejemplo, por EntreMed, Inc.), cardiotrofina-1 (Genentech), 2-metoxiestradiol (Allergan/Oculex) , DL-8234 (Toray Industries) , NTC-200 (Neurotech) , tetratiomolibdato (Universidad de Michigan) , LYN-002 (Lynkeus Biotech) , compuesto microalgal (Aquasearch/Albany, Mera Pharmaceuticals) , D-9120 (Celltech Group pie) , ATX-S10 (Hamamatsu Photonics) , TGF-beta 2 (Genzyme/Celtrix) , inhibidores de tirosina cinasa (Allergan, SUGEN, Pfizer) , NX-278-L (NeXstar Pharmaceuticals/Gilead Sciences) , Opt-24 (OPTIS Francia SA) , neuroprotectores de ganglio celular retinal (Cogent Neurosciences) , derivados de N-nitropirazol (Texas A&M University System) , KP-102 (Krenitsky Pharmaceuticals) y ciclosporina A. Véase publicación de solicitud de patente estadounidense No. 20040092435. En cualquier caso, los múltiples agentes terapéuticos (uno de los cuales es uno de los agentes que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, descritos en la presente) pueden ser administrados en cualquier orden o aún simultáneamente. Si es simultáneamente, los múltiples agentes terapéuticos pueden ser provistos en una sola forma, forma unificada o en múltiples formas (a manera de ejemplo solamente, ya sea como una sola pildora o como dos pildoras separadas) . Uno de agentes terapéuticos puede ser administrado en múltiples dosis, o ambos pueden ser dados como múltiples dosis. Si no es simultánea, la sincronización entre las múltiples dosis puede variar de más de cero semanas a menos de cuatro semanas. Además, los métodos de combinación, composiciones y formulaciones no estarán limitadas al uso de solamente dos agentes; se contempla el uso de múltiples combinaciones terapéuticas. A manera de ejemplo solamente, un agente modulador de megalina puede ser provisto con por lo menos un antioxidante y por lo menos un fosfolípido cargado negativamente; o un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, puede ser provisto con por lo menos un antioxidante y por lo menos un inductor de producción de óxido nítrico; o un agente que modula un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, un agente modulador de megalina, puede ser provisto con por lo menos un inductor de producción de óxido nítrico y por lo menos un fosfolípido cargado negativamente; y así sucesivamente. Además, los agentes que modulan un miembro de la familia genética del receptor de LDL en retina y/o células RPE, tales como, por ejemplo, agentes moduladores de megalina, pueden ser usados en combinación con procedimientos que pueden proporcionar beneficio adicional o sinergístico al paciente. Los procedimientos conocidos, propuestos o considerados que alivian deterioro visual incluyen pero no están limitados a "translocación retinal limitada" , terapia fotodinámica (en los que se incluyen a manera de ejemplo solamente, PDT receptor-apuntada, Bristol-Myers Squibb, Co.; porfímero de sodio para inyección con PDT; verteporfina, QLT Inc.; rostaporfina con PDT, Miravent Medical Technologies; talaporfina sodio con PDT, Nippon Petroleum; motexafina lutecio, Pharmacyclics , Inc.), oligonucleótidos antisentido (en los que se incluye a manera de ejemplo, productos probados Novagali Pharma SA e ISIS-13650, Isis Pharmaceuticals) , fotocoagulación por láser, aplicación de láser de drusen, cirugía de agujero macular, cirugía de translocación macular, telescopios en miniatura implantables , angiografía de movimiento Phi (también conocida como terapia de Micro-Láser y tratamiento de vaso de alimentación) , terapia de haz de protones, terapia de microestimulación, cirugía de desprendimiento retinal y vitreo, Scleral Buckle, cirugía submacular, termoterapia transpupilar, terapia de fotosistema I, uso de interferencia de ARN (ARNi) , reoferesis extracorporea (también conocida como filtración diferencial de membrana y Reoterapia) , implante de microchip, terapia de célula de tallo, terapia de reemplazo genético, terapia genética de ribozima (en los que se incluyen terapia genética por elemento de respuesta de hipoxia, Oxford Biomedica; Lentipak, Genetix; PDEF terapia genética, GenVec) , trasplante de células de fotoreceptor/retinales (en las que se incluyen células epiteliales retínales transplantables , Diacrin, Inc.; trasplante de célula retinal, Genesys, Inc.) y acupuntura. Combinaciones adicionales que pueden ser usadas para beneficiar a un individuo incluyen usar pruebas genéticas para determinar si el individuo es portador de un gen mutante que es conocido por estar correlacionado con ciertas condiciones oftálmicas. A manera de ejemplo solamente, se piensa que los defectos en el gen ABCA4 humano están asociados con cinco fenotipos retínales distintos en los que se incluyen enfermedad de Stargardt, distrofia de cono-bastón, degeneración macular relacionada con la edad y retinitis pigmentosa. Además, una forma dominante autosomal de enfermedad de Stargardt es provocada por mutaciones en el gen ELOV4. Véase Karan, et al., Proc. Nati. Acad. Sci . (2005). Los pacientes que poseen cualquiera de estas mutaciones se espera que encuentren beneficio terapéutico y/o profiláctico en los métodos descritos en la presente.

EJEMPLOS ILUSTRATIVOS Cultivo de RPE - Células de RPE humanas fueron recolectadas de tejido post-mortem y cultivadas en medio esencial mínimo de Eagle sin calcio (EMEM; Sigma Chemical, St . Louis, MO) con aditivos hasta que las células residentes proliferaron, alcanzaron confluencia y fueron liberada al medio. Estas células sin anexar fueron recolectadas y cultivadas sobre cámaras de Millicell con filtros de policarbonato (Millipore, Bedford, MA, USA) recubiertos con laminina de ratón (Collaborative Research, Bedford, MA) . Las cámaras de Millicell fueron mantenidas en placas de múltiples cavidades, que permitieron la separación de compartimientos de medio apical y basal . Reactivos - Medios de MEM con sales de Earle y glutamina fueron de Cellgro (Herndon, VA) . La megalina de antirata de conejo fue una donación del Dr. Michele Marino (Universidad de Pisa, Italia) . El p330 anti -humano de conejo fue obtenido de Fitzgerald Industries International, Inc. (Concord, MA) . La IgG pre-inmune de conejo fue obtenida de Santa Cruz Technologies (Santa Cruz, CA) y la proteína receptor-asociada (RAP) fue obtenida de Oxford Biomedical Research (Oxford, MI) . La proteína de enlace de retinol humano (RBP) fue expresada en E. coli. La proteína fue purificada mediante intercambio iónico y cromatografía de exclusión de tamaño enseguida de la desnaturalización y re-plegado en presencia de retinol (Sigma, St Louis, Mo.) . La proteína de enlace de retinoide intersticial bovina (IRBP) fue preparada a partir de retinas de bovino congeladas. Brevemente, las retinas congeladas fueron colocadas en una solución reguladora del pH isotónica y agitados moderadamente durante toda la noche a 4°C. las proteínas solubles fueron removidos del homogenizado mediante centrifugación y el IRBP fue purificado del sobrenadante mediante ConA de sepharose secuencial y cromatografía de intercambio iónico. Se usó SDS-PAGE para verificar RBP e IRBP. Inmunoci toquímica - Para la microscopía confocal , cultivos de RPE sobre filtros se fijaron en paraformaldehído al 4%, deshidratados serialmente en etanol y embebidos en Epon. En algunos casos, las células fueron permeabilizadas con metanol durante 5 minutos a -20 °C después de la fijación. Las secciones fueron analizadas utilizando un microscopio confocal de barrido de láser Leica (TCS-SP2, Leica, Exton, PA) . Se recolectaron una serie de secciones de 1 µp? x-y (en cara) . Cada imagen de x-y individual de los cultivos celulares de RPE teñidos representan una proyección tridimensional de toda la sección óptica (suma de todas las imágenes en la pila) . Los paneles del microscopio fueron compuestos utilizando AdobePhotoshop 5.5. Barra = 40 µ?t?. Los anticuerpos usados son descritos anteriormente. Los anticuerpos secundarios incluían Alexa 488 y Alexa 594 anti-ratón de conejo (Molecular Probes, Eugene, OR) .

Absorción moderada por megalina de proteína de enlace de retinol y proteína de enlace de retinoide intersticial en células RPE humanas - Un anticuerpo megalina-específico (0.2 µg/ml) o RAP (0.5 9/??1) , fue agregado ya sea al compartimiento basal o apical del cultivo celular de RPE y las muestras fueron incubadas durante 2 horas a 4°C. Se agregó ya sea RBP-retinol (30 µ?) o IRBP-retinol (10 µ?) al compartimiento apropiado la incubación fue reanudada a 37°C por 1 hora. Enseguida de la incubación, el medio fue removido de ambos compartimientos y decantado. Las células de RPE fueron removidas del soporte de filtro y procesadas como se describe posteriormente en la presente . Preparación y Extracción del Tejido - Doscientos cincuenta microlitros de PBS que contiene EDTA 5 mM (pH 7.2) fueron agregados al compartimiento apical y usados para agitar las células del inserto de filtro. La suspensión celular fue transferida a un tubo de centrifuga de 1.5 mi y las células fueron centrifugadas a 14,000 x g durante 5 minutos. El sobrenadante fue descartado y la pelotilla celular fue lavada con 100 µ? adicionales de PBS. Enseguida de una segunda centrifugación, la pelotilla de células de RPE fue suspendida en 50 µ? de ddH20. Luego las membranas celulares fueron tratadas con 100 µ? de MeOH y 10 µ? de NH2OH 1 M. Las muestras fueron incubadas a temperatura ambiente durante 5 minutos. Los retinoides fueron extraídos a 300 µ? de diclorometano (CH2C12) .

Enseguida de la mezcla y centrifugación (14,000 x g, 1 minuto) la parte superior (fase orgánica) fue removida y decantada. La fase acuosa (inferior) fue re-extraída dos veces más con alícuotas de 300 µ? de CH2C12. Las fases orgánicas fueron acumuladas y el solvente fue llevado a sequedad bajo una corriente de gas nitrógeno. Los residuos de muestra fueron resuspendidos en 210 µ? de hexano para análisis mediante HPLC. HPLC - Los extractos de retinoide fueron analizados con una cromatografía líquida de alto desempeño (HPLC) serie Agilent 1100 equipado con un detector de arreglo de fotodiodo utilizando una columna de sílice (Agilent Zorbax Rx-Sil 4.6 mm x 250 mm, Agilent, Palo Alto, CA) y un gradiente de dioxano en n-hexano a una velocidad de flujo de 2 mL/min. Preparación de membranas megalina-enriquecidas a partir de tejido entero - La centrifugación de densidad de sacarosa fue usada para separar los constituyentes membranosos de muestras de riñon, retina y RPE-ojera (RPE más coroide y esclera). Enseguida de la disección, las muestras de tejido fueron homogeneizadas en una solución reguladora del pH que contiene sacarosa 0.25 M (pH 7.5). Los homogenizados fueron centrifugados a 27,000 x g durante 20 min. La fracción del sobrenadante fue descartada y la pelotilla resultante (Pl) fue homogeneizada en una solución reguladora del pH que contiene CHAPS al 0.5%. La centrifugación fue repetida para generar una pelotilla insoluble, que fue descartada y una fracción de proteína CHAPS-soluble (CS) . La fracción de CS fue usada como la fuente de proteína para todos los experimentos de inmunoabsorción . Esta fracción fue también usada en estudios de des-glicosilación (tratamiento con 1 unidad de endoglicosidasa F por ^g de proteína) para examinar el efecto de la remoción de carbohidrato sobre la movilidad electroforética . En algunos experimentos, Pl fue resuspendida en tritón al 1% con el fin de inmunoprecipitar óptimamente proteínas megalina-inmunoreactivas . Secuenciación de péptido - Proteínas megalina-inmunoreactivas fueron cortadas de un gel de SDS-PAGE y colocadas en tubos de Eppendorf siliconizados . Las muestras de gel fueron desteñidas con 200 µ? de solución de desteñido (Sigma) . Después del desteñido, las piezas de gel fueron secadas y 5 unidades de PNGasa F (Sigma) fueron agregadas seguida por incubación a 37°C durante 30 minutos. Se agregó agua para cubrir las piezas de gel y la incubación a 37°C fue reanudada por 12 - 16 horas. La solución de incubación fue descartada y las piezas de gel fueron lavadas con agua y sonificadas a temperatura ambiente. Las piezas de gel fueron llevadas a sequedad bajo vacío. Se agregó tripsina (0.4 //g, Sigma) y la muestra fue incubada durante 30 minutos a 37°C. Enseguida de la incubación, 50 µ? de la solución reguladora del pH de reacción de Tripsina (Sigma) fueron agregados a la muestra de gel y la incubación a 37°C fue reanudada durante 12 - 16 horas. Después de la incubación, la solución de reacción fue decantada y se agregaron 50 µ? de la solución de extracción de péptido (Sigma) para eluír los péptidos. Enseguida de la incubación a 37 °C durante 30 min y agitación vigorosa intermitente, la solución que contiene péptido fue removida y combinada con la solución de reacción decantada. El volumen de muestra fue reducido a -10 µ? mediante evaporación bajo vacío. Las muestras preparadas en esta manera fueron analizadas mediante espectroscopia de masa sobre un cromatógrafo líquido capilar acoplado a un espectrómetro de masas de ionización de electroatomización (ESI-LC/MS) como se describe posteriormente en la presente. ESI-LC/MS - Un cromatógrafo líquido capilar serie Agilent 1100 fue usado para la cromatografía. Los péptidos fueron separadas mediante cromatografía de fase inversa utilizando una columna Zorbax 300SB-C18 (0.5 x 250 mm) . Un gradiente de acetonitrilo, que contiene ácido acético al 0.2% y ácido heptafluorobutírico al 0.005%, fue bombeado a través de la columna a 5 µ?/min. La temperatura de la columna fue mantenida a 50 °C. El eluído de la columna fue administrado a un espectrómetro de masas de ionización de electroatomización en línea (LCQ Deca XP plus, Thermo, San José, CA) . La fuente de ESI fue programada con los siguientes parámetros: voltaje de atomización = 4.04 kV, voltaje de capilar = 42.34 V, temperatura del capilar = 275.20°C, lente de tubo = 20 V. La energía de fragmentación de helio varió entre 25 - 30% para disociar óptimamente los fragmentos de péptido. Análisis de inmunoabsorción - Las muestras de proteína que fueron usadas para análisis de inmunoabsorción fueron resuspendidas en solución reguladora del pH de carga de SDS . Estas muestras fueron sometidas a electroforesis sobre geles de Tris-acetato al 3-8% (Invitrogen, Carlsbad, CA) y luego transferidos a una membrana de PVDF. La membrana fue bloqueada con leche al 5% en Tween 20 al 0.1% disuelto en solución salina de pH regulado con Tris (TBST) y luego incubada con anticuerpos primarios apropiados a 4°C durante 12 - 16 horas. Los anticuerpos usados para western blot incluían el anticuerpo policlonal de megalina anti-rata de conejo (5 ^g/ml) y anti-suero policlonal de RAP anti-humano de conejo (dilución 1:500) . Después de cuatro lavados con TBST, la membrana fue incubada con IgG de anti-conejo de cabra peroxidasa de rábano-conjugada (dilución 1:100,000). La membrana fue lavada cuatro veces, revelada con sustrato ChemiGlow West (Alfa Innotech, San Leandro, CA) y luego visualizada por un probador de imagen de luminiscencia (FluorChem de Alpha Innotech) . Ratones ABCA4 desactivados. ABCA4 codifica la proteína de rim (RmP) , un transportador de caset de enlace de ATP (ABC) en los discos de segmento externo de fotoreceptores de de bastón y cono. El sustrato transportado para RmP es desconocido. Ratones generados con una mutación de cancelación en el gen abca4, véase Weng et al., Cell, 98:13-23 (1999), son útiles para el estudio de función de RmP también como para selección in vivo de la efectividad por sustancias candidato. Estos animales manifiestan el fenotipo ocular complejo: (i) degeneración del fotoreceptor lenta, (ii) recuperación retardada de sensibilidad de bastón enseguida de exposición a la luz, (iii) atRAL elevada y atROL reducido en segmentos externos de fotoreceptor siguiendo un fotoblanqueo, (iv) fosfatidiletanolamina constitutivamente elevada (PE) en segmentos externos y (v) acumulación de lipofuscina en células RPE. Véase Weng et al., Cell, 98:13-23 (1999). Las velocidades de degeneración de fotoreceptor pueden ser monitoreadas en ratones tipo silvestre y abca4~/~ tratados y sin tratar mediante dos técnicas. Una es el estudio de ratones a diferentes tiempos mediante análisis de ERG y es adoptado de un procedimiento de diagnóstico clínico. Véase Weng et al., Cell, 98:13-23 (1999). Un electrodo es colocado sobre la superficie corneal de un ratón anestesiado y la respuesta eléctrica a un destello de luz es registrada de la retina. La amplitud de la onda a, que resulta de la hiperpolarización inducida por la luz de fotoreceptores , es un indicador sensible de degeneración del fotoreceptor. Véase Kedzierski et al., Invest. Ophthal ol. Vis. Sci . , 38:498-509 (1997). Las ERG se hacen en animales vivos. Por consiguiente el mismo ratón puede ser analizado repetidamente durante un estudio de curso de tiempo. La técnica definitiva para cuantificar degeneración de fotoreceptor es análisis histológico de secciones retínales. El número de fotoreceptores que permanecen en la retina en cada punto en el tiempo será determinado al contar las hileras de núcleos de fotoreceptor en la capa nuclear externa. Extracción de tejido. Muestras de ojo fueron desheladas sobre hielo en 1 mi de PBS, pH 7.2 y homogeneizada por la mano utilizando un homogenizador de vidrio-vidrio Duall. La muestra fue homogenizada adicionalmente enseguida de la adición de 1 mi de cloroformo/metanol (2:1, v/v) . La muestra fue transferida a un tubo de borosilicato y los lípidos fueron extraídos a 4 mi de cloroformo. El extracto orgánico fue lavado con 3 mi de PBS, pH 7.2 y luego las muestras fueron centrifugadas a 3,000 x g, 10 minutos. La fase de cloroformo fue decantada y la fase acuosa fue re-extraída con otros 4 mi de cloroformo. Enseguida de la centrifugación, las fases de cloroformo fueron combinadas y las muestras fueron llevadas a sequedad bajo gas nitrógeno. Los residuos de muestras fueron resuspendidos en 100 µ? de hexano y analizados mediante HPLC como se describe posteriormente en la presente. Análisis de HPLC. Se obtuvieron separaciones cromatográficas en una columna Agilent Zorbax Rx-Sil (5 µ??, 4.6 X 250 mm) utilizando un cromatógrafo líquido serie Agilent 1100 equipado con detectores de fluorescencia y detectores de arreglo de diodo. La fase móvil (hexano/2 -propanol/etanol/ KH2P04 25 mM, H 7. O/ácido acético; 485/376/100/50/0.275, v/v) fue alimentada a 1 ml/min. La identificación de pico de muestra se realizó en comparación con el tiempo de retención y espectro de absorbancia de estándares auténticos. Los datos son reportados como fluorescencia pico (L.U.) obtenidas del detector de fluorescencia. Los siguientes ejemplos proporcionan métodos ilustrativos para probar la efectividad y sugerido de los agentes moduladores de megalina. Estos ejemplos son provistos por propósitos ilustrativos solamente y no para limitar el alcance de las reivindicaciones provistas en la presente.

Ejemplo 1: Efecto de un agente modulador de megalina sobre la acumulación de A2E La administración de un agente modulador de megalina a un grupo experimental de ratones y la administración de DMSO solo a un grupo de control de ratones se lleva a cabo y se analiza en cuanto a la acumulación de A2E. Se administra al grupo experimental 2.5 a 20 mg/Kg del agente modulador de megalina por día en 10 a 25 µ? de DMSO. Dosificaciones más altas son probadas si no se ve ningún efecto con la dosis más alta de 50 mg/Kg. Se administra al grupo de control inyecciones de 10 a 25 µ? de DMSO solo. Los ratones son administrados ya sea con sustancias experimentales o sustancias de control mediante inyección intraperitoneal (i.p.) por varios períodos de tiempo experimentales que no exceden de un mes. Para analizar la acumulación de A2E en RPE de ratones abca4~/~, 2.5 a 20 mg/Kg de un agente modulador de megalina se proporciona mediante inyección i.p. por día a ratones abca4~/~ de 2 meses de edad. Después de 1 mes, tanto los ratones experimentales como de control son exterminados y los niveles de A2E en las RPE son determinados mediante HPLC. Además, la autofluorescencia o espectros de absorción de N-retiniliden-fosfatidiletanolamina, dihidro-N-retiñíliden-N-retinil-fosfatidiletanolamina, N-retiniliden-N-retiñí1 -fosfatidiletanolamina, dihidro-N-retiniliden-N-retiñí1-etanolamina, y/o N-retiniliden-fosfatidiletanolamina pueden ser monitoreados utilizando un espectrómetro UV/Vis.

Ejemplo 2: Efecto de agente modulador de megalina sobre la acumulación de Lipofuscina La administración de un agente modulador de megalina a un grupo experimental de ratones y la administración de DMSO solo a un grupo de control de ratones se lleva a cabo y analizado en cuanto a la acumulación de lipofuscina. Se administra al grupo experimental 2.5 a 20 mg/ Kg del agente modulador de megalina por día en 10 a 25 µ? de DMSO. Dosificaciones más altas son probadas si no se ve ningún efecto con la dosis más alta 50 mg/Kg. Se administra al grupo de control inyecciones de 10 a 25 µ? de DMSO solo. Los ratones son administrados ya sea con sustancias experimentales o sustancias de control mediante inyección i.p. por varios períodos de tiempo experimentales que no exceden de un mes. Alternativamente, los ratones pueden ser implantados con una bomba que alimenta ya sea sustancias experimentales o sustancias de control a una velocidad de 0.25 µ?/h por varios períodos de tiempo experimentales que no exceden de un mes. Para analizar los efectos del agente modulador de megalina sobre la formación de lipofuscina en ratones abca4~/~ tratados y sin tratar, los ojos pueden ser examinados mediante microscopía electrónica o microscopía de fluorescencia.

Ejemplo 3: Efecto de un agente modulador de megalina sobre a muerte de células de bastón o deterioro funcional de bastón La administración de un agente modulador de megalina a un grupo experimental de ratones y la administración de DMSO solo a un grupo de control de ratones se lleva a cabo y se analiza en cuanto a los efectos del agente modulador de megalina sobre la muerte de células de bastón o deterioro funcional de bastón. Se administra al grupo experimental 2.5 a 20 mg/Kg del agente modulador de megalina por día en 10 a 25 µ? de DMSO. Dosificaciones más altas son probadas si no se observa ningún efecto con la dosis más alta de 50 mg/Kg. Se administra al grupo de control inyecciones de 10 a 25 µ? de DMSO solo. Los ratones son administrados ya sea con sustancias experimentales o sustancias de control mediante inyección i.p. por varios períodos de tiempo experimentales que no exceden de un mes. Alternativamente, los ratones puede ser implantados con una bomba que administra ya sea sustancias experimentales o sustancias de control a una velocidad de 0.25 µ?/h por varios períodos de tiempo experimentales que no exceden de un mes. Los ratones que son tratados con 2.5 a 20 mg/Kg de un agente modulador de megalina por día por aproximadamente 8 semanas pueden ser analizados en cuanto a los efectos del agente modulador de megalina sobre la muerte de célula de bastón o deterioro funcional del bastón al monitorear registros de ERG y al llevar a cabo histología retinal.

Ejemplo 4: Pruebas en cuanto a protección de daños a la luz El siguiente estudio está adaptado de Sieving, P.A., et al., Proc. Nati. Acad. Sci., 98:1835-40 (2001). Para estudios de exposición a la luz crónica, ratas albinas de 7 semanas de edad macho Sprague-Dawley son alojadas en un ciclo de 12:12 horas de luz/oscuridad de luz blanca fluorescente de 5 lux. Inyecciones de 20-50 mg/Kg un agente modulador de megalina mediante inyección i.p. en 0.18 mi de DMSO son dadas tres veces a día a ratas crónicas por 8 semanas. Los controles reciben 0.18 mi de DMSO mediante inyección i.p. Las ratas son sacrificadas 2 días después de las inyecciones finales. Se prueban dosificaciones más altas si no se observa ningún efecto con la dosis más alta de 50 mg/Kg. Para estudios de exposición a la luz aguda, las ratas son adaptadas a la oscuridad durante toda la noche y se les administra una sola inyección i.p. del agente modulador de megalina 20-50 mg/Kg en 0.18 mi de DMSO bajo luz roja tenue y mantenida en la oscuridad por 1 hora antes de ser expuesta a la luz de blanqueo antes de las mediciones de ERG. Las ratas expuestas a 2,000 lux fluorescente blanca por 48 horas. Las ERG son registradas 7 das más tarde y la histología es efectuada inmediatamente. Las ratas son sometidas a eutanasia y los ojos son removidos. Los conteos de célula de columna de espesor de capa nuclear externa y longitud de segmento externo de bastón (ROS) son medidos cada 200 µt? a través de ambos hemisferios y los números son promediados para obtener una medida de cambios celulares a través de toda la retina. Las ERG son registradas de ratas crónicas a 4 y 8 semanas de tratamiento. En roedores agudos, la recuperación del bastón de blanqueo de luz es seguida por ERG adaptada a la oscuridad al utilizar estímulos que no producen ninguna contribución de cono. La recuperación de cono es seguida con ERG fotótica. Antes de la ERG, los animales son preparados en luz roja tenue y anestesiados. Las pupilas son dilatadas y los ERG son registrados de ambos ojo simultáneamente al utilizar bucles corneales de alambre de oro.

Ejemplo 5: Terapia de combinación que involucra un agente modulador de megalina y fenretinuro Ratones y/o ratas son probados a la manera descrita en los Ejemplos 1-4, pero con dos brazos adicionales. En uno de los brazos adicionales, los grupos de ratones y/o ratas son tratados con dosis incrementadas de fenretinuro, de 5 mg/Kg por día a 50 mg/Kg por día. En el segundo brazo adicional, grupos de ratones y/o ratas son tratados con una combinación de 20 mg/Kg por día de un agente modulador de megalina y dosis incrementada de fenretinuro, de 5 mg/Kg por día a 50 mg/Kg por día. Los beneficios de la terapia de combinación son analizados como se describe en los Ejemplos 1-4.

Ejemplo 6: Efecto de un agente modulador de megalina sobre los niveles de retinol y RBP en células RPE Ratones y/o ratas son probadas a la manera descrita en los Ejemplos 1-4, sin embargo los niveles de retinol (o retinil esteres) y RBP en las células RPE son determinados mediante análisis de HPLC. Este experimento determina la cantidad de actividad moduladora que es atribuida al agente en cuestión. La comparación directa de los niveles de retinol y RBP niveles en las células RPE entre el grupo experimental y el grupo de control proporciona una correlación directa con los agentes que son responsables por inhibir el enlace y absorción de retinol, retinol-RBP o retinol -RBP-TTR a miembros de la familia genética del receptor de LDL que son expresados en las células de RPE. Todos los métodos revelados y reivindicados en la presente pueden ser realizados y ejecutados sin experimentación indebida a la luz de la presente revelación. Será evidente para aquellos de habilidad en el arte que se pueden aplicar variaciones a los métodos y en las etapas o en la secuencia de etapas del método descrito en la presente sin desviarse el concepto, espíritu y alcance de la invención. Más específicamente, se hará evidente que ciertos agentes que son tanto química como fisiológicamente relacionados pueden ser sustituidos por los agentes descritos en la presente en tanto que se obtendrían los mismos resultados o resultados similares. Todos de tales sustitutos y modificaciones similares evidente para aquellos experimentados en el arte se considera estar dentro del espíritu, alcance y concepto de la invención como se define por las reivindicaciones adjuntas.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para el tratamiento de una condición oftálmica en un ojo de un mamífero, caracterizado porque comprende , administrar al mamífero una cantidad efectiva de un agente que modula la actividad de un miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmentado retinal en el ojo del mamífero.
2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el miembro de la familia genética del receptor de LDL es megalina o una proteína megalina-relacionada .
3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el miembro de la familia genética del receptor de LDL es un receptor de la proteína de enlace de retinoide .
4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a un segundo agente seleccionado del grupo que consiste de: proteínas de enlace de vitamina, lipoproteínas, proteínas inmune- y estrés-relacionadas, proteínas de enlace de hormona esteroides, hormonas y precursores, péptidos, enzima e inhibidores de enzimas, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina; fármacos polibásicos y toxinas, RAP, calcio (Ca 2+) y citocromo c.
5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a un segundo agente seleccionado del grupo que consiste de: retinol, un complejo de retinol-RBP, un complejo de retinol-RBP-TTR, una proteína de enlace de retinoide de interfotoreceptor (IRBP) , un complejo de retinol -IRBP, transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de vitamina D, apolipoproteína B, apolipoproteína E, apolipoproteína J/clusterina, apolipoproteína H; cadenas ligeras de inmunoglobulina, PAP-1, S2-microglobulina; proteína-estrógenos de enlace de hormona sexual, proteína-andrógenos de enlace de andrógeno; hormona paratiroides , insulina, factor de crecimiento epidérmico, prolactina, tiroglobulina; inhibidor-1 de activador de plasminogeno (PAI-1) , urocinasa-PAI-1, tPA-PAI-1, pro-urocinasa, lipoproteína lipasa, plasminogeno, S-amilasa, Sl-microglobulina, lisozima,- albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina; aminoglicósidos, polimixina B, aprotinina, tricosanina, gentamicina ; RAP, Ca 2+ y citocromo c.
6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a retinol, un complejo de retinol-RBP o un complejo de retinol -RBP-TTR .
7. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es el enlace del miembro de la familia genética del receptor de LDL a proteínas de enlace de retinoide .
8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la trancitosis de un segundo agente seleccionado del grupo que consiste de: proteínas de enlace de vitaminas, lipoproteínas , proteínas inmune- y estrés relacionadas, proteínas de enlace de hormona de esteroides, hormonas y precursores, péptidos, enzima e inhibidores de enzimas, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina; fármacos polibásicos y toxinas, RAP, calcio (Ca 2+) y citocromo c.
9. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la actividad del miembro de la familia genética del receptor de LDL es la transcitosis de un segundo agente seleccionado del grupo que consiste de: retinol, un complejo de retinol-RBP, un complejo de retinol -RBP-TTR, una proteína de enlace de retinoide de interfotoreceptor (IRBP) , un complejo de retinol-IRBP, transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de vitamina D, apolipoproteína B, apolipoproteína E, apolipoproteína J/clusterina, apolipoproteína H; cadenas ligeras de inmunoglobulina, PAP-1, S2-microglobulina ; proteína-estrógeno de enlace de hormona sexual, proteína-andrógeno de enlace de andrógeno; hormona paratiroides , insulina, factor de crecimiento epidérmico, prolactina, tiroglobulina ; inhibidor-1 activador de plasminógeno (PAI-1) , urocinasa-PAI-1, tPA-PAI-1, pro-urocinasa, lipoproteína lipasa, plasminógeno, ß-amilasa, Sl-microglobulina, lisozima; albúmina, lactoferrina , hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina; aminoglicósidos , polimixina B, aprotinina, tricosanina, gentamicina; RAP, Ca 2+ y citocromo c.
10. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente se enlaza a la proteína de enlace de retinol .
11. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente se enlaza a transtiretina.
12. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente se enlaza a la proteína de enlace de retinoide de interfotoreceptor (IRBP) .
13. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente modula la expresión del miembro de la familia genética del receptor de LDL en la retina y/o células de epitelio de pigmento retinal.
14. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de un anticuerpo, un polipéptido, un ácido nucleico, un ácido polinucleico, un polímero, una proteína asociada con el receptor (RAP) o fragmentos de los mismos, un compuesto orgánico de bajo peso molecular, proteínas de enlace de vitamina, lipoproteínas , proteínas inmune- y estrés relacionadas, proteínas de enlace de hormona esteroides, hormonas y precursores, péptidos, enzima e inhibidores de enzimas, albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina; fármacos polibásicos y toxinas, RAP, calcio (Ca 2+) , depuradores de calcio, agentes reductores y citocromo c.
15. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de un anticuerpo, un polipéptido, un ácido nucleico, un ácido polinucleico, un polímero, una proteína asociada con el receptor (RAP) o fragmentos de los mismos, un compuesto orgánico de bajo peso molecular, retinol, un complejo de retinol-RBP, un complejo de retinol -RBP-TTR, una proteína de enlace de retinoide del interfotoreceptor (IRBP) , un complejo de retinol-IRBP, transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de transcobalamina-vitamina B12, proteína de enlace de vitamina D, apolipoproteína B, apolipoproteína E, apolipoproteína J/clusterina, apolipoproteína H; cadenas ligeras de inmunoglobulina, PAP-1, S2-microglobulina; proteína-estrógenos de enlace de hormona sexual, proteína-andrógenos de enlace de andrógeno; hormona paratiroides , insulina, factor de crecimiento epidérmico, prolactina, tiroglobulina; inhibidor-1 activador de plasminógeno (PAI-1) , urocinasa-PAI-1, tPA-PAI-1, pro-urocinasa , lipoproteína lipasa, plasminógeno, ß-amilasa, Sl-microglobulina, lisozima; albúmina, lactoferrina, hemoglobina, proteína de enlace de odorante, transtiretina; aminoglicósidos , polimixina B, aprotinina, tricosanina, gentamicina ; RAP, fragmentos de RAP, Ca 2+, depuradores de calcio, agentes reductores y citocromo c.
16. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además repetir las administraciones de la cantidad efectiva del agente.
17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque por lo menos una vez entre las administraciones es de por lo menos una semana.
18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque por lo menos uno tiempo entre las administraciones es de por lo menos un día.
19. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además administrar por lo menos un agente adicional seleccionado del grupo que consiste de un inductor de producción de óxido nítrico, un agente anti-inflamatorio, un antioxidante aceptable fisiológicamente, un mineral aceptable fisiológicamente, un fosfolípido cargado negativamente, un carotenoide, una estatina, un fármaco anti-angiogénico, un inhibidor de metaloproteinasa de matriz, ácido 13-cis-retinoico o un compuesto que tiene la estructura de fórmula (A) : Fórmula (A) en donde Xi es seleccionado del grupo que consiste de NR2, O, S , CHR2 ; R1 es (CHR^x-I^-R3, en donde x es 0, 1, 2 ó 3; L1 es un solo enlace o -C(0)-; R2 es una porción seleccionada del grupo que consiste de H, alquilo (Ci-C4) , F, fluoroalquilo (C3.-C4) , alcoxi (C1-C4) , -C(0)OH, -C(0)-NH2, -alquilamina (C1-C4) , -C (0) -alquilo (C1-C4) , -C (O) -fluoroalquilo (C1-C4) , -C (0) -alquilamina (C1-C4) y -C(0)-alcoxi (C1-C4) ; y R3 es H o una porción, opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente, seleccionado del grupo que consiste de alquenilo (C2-C7) , alquinilo (C2-C7) , arilo, cicloalquilo (C3-C7) , cicloalquenilo (C5- C7) y un heterociclo.
20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el compuesto tiene la estructura de fórmula (A) o un metabolito activo o un profármaco o solvato aceptable farmacéuticamente del mismo.
21. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el compuesto es 4-hidroxifenilretinamida; 4-metoxifenilretinamida; o un metabolito o un profármaco o solvato aceptable farmacéuticamente de los mismos.
22. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además administrar al mamífero una terapia seleccionada del grupo que consiste de reoferesis extracorporea, translocación retinal limitada, terapia fotodinámica, aplicación de láser de drusen, cirugía de agujero macular, cirugía de translocación macular, Phi-Motion, terapia de haz de protones, desprendimiento retinal y cirugía vitrea, Scleral Buckle, cirugía submacular, termoterapia transpupilar, terapia de fotosistema I, estimulación de microcorriente , interferencia AR , administración de medicaciones para los ojos tales como yoduro de fosfolina o ecotiopato o inhibidores de anhidrasa carbónicos, implante de microchips, terapia de célula de tallo, terapia de reemplazo genético, terapia genética de ribozima, trasplante de fotoreceptor/células retínales, fotocoagulación por láser y acupuntura.
23. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además un tratamiento adicional para la degeneración retinal.
24. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el mamífero es un humano.
25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el humano tiene una condición o rasgo oftálmica seleccionada del grupo que consiste de enfermedad de Stargardt, retinitis pigmentosa recesiva, distrofia de cono-bastón recesiva, degeneración macular relacionada con la edad en forma seca, degeneración macular relacionada con la edad exudante, distrofia de cono-bastón, retinitis pigmentosa, una degeneración retinal a base lipofuscina, degeneración de fotoreceptor y atrofia geográfica.