MX2008014008A - Uso de compuestos organicos. - Google Patents

Abstract

Uso de un agonista de ERRy o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la prevención, demora de progreso, o tratamiento de diabetes, resistencia a la insulina, enfermedad metabólicaIsindrome metabólico, dislipidemia, obesidad, sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio.

Description

USO DE COMPU ESTOS ORGÁN ICOS La invención se refiere al uso de un agonista del receptor relacionado con nitrógeno gamma (ERRy) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de una enfermedad o condición seleccionada a partir de diabetes, de preferencia diabetes tipo 2 , resistencia a la insulina , enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, obesidad , sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson , enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio, mediante la administración a este animal que necesite el tratamiento, de una dosis efectiva de cuando menos un agonista del receptor relacionado con estrógeno gamma, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los receptores relacionados con estrógeno (ERR) comprenden 3 miembros , ERRa, ERR , y ERRy, que forman una subfamilia de los receptores nucleares huérfanos para los cuales todavía se tienen que identificar ligandos naturales. Los ERRs comparten una homología de aminoácidos significativa con el receptor de estrógeno (ER) dentro de sus dominios de enlace de ADN (DBD) y dentro de sus dominios de enlace de ligando (LBD), pero no responden al estradiol . Aunque los receptores de estrógenos son receptores activados por ligando, los receptores relacionados con estrógenos pueden activar la transcripción genética de una manera constitutiva, y su capacidad de activación puede ser determinada por la presencia de coactivadores de transcripción . Los estudios estructurales confirman este hallazgo mediante la demostración de que el dominio de enlace de ligando de ERRy pueden adoptar u na conformación transcri pcionalmente activa , y pueden interactuar con el coactivador de receptor de esteroide 1 (SRC-1 ) en ausencia de cualquier ligando.

Dentro de su dominio de en lace de ADN , ERRy comparte el 93 por ciento y el 99 por ciento de identidad de aminoácidos con ERRa y ERR , respectivamente. Los receptores relacionados con estrógeno están menos conservados dentro de sus dominios de enlace de ligando (identidad de aminoácidos del 61 por ciento y del 67 por ciento con ERRy contra ERRa y ERRp, respectivamente) . El coactivador, que es el coactivador- a del receptor activado por el proliferador de peroxisoma-? (PGC-1 a) se ha reportado como un ligando de proteína endógeno para ERRa y E RRy (Hentschke M . y colaboradores (2002) - PGC-1 and PERC , coactivators of the estrogen receptor-related receptor y. Biochem. Biophys. Res. Commun. ; 299:872-9). La evidencia indica que ERRa y PGC-1 a funcionan en concierto para regular la expresión de los genes involucrados en la biogénesis mitocondrial y en la fosforilación oxidativa. ERRa, ERRy, y PGC-1 a se coexpresan en los tejidos que utilizan la oxidación del ácido graso mitocondrial como su fuente de energ ía primaria, tal como músculo esquelético, corazón , y riñon ( Hong H , Yang L, Stallcup M R ( 1 999) -Hormone-independent transcriptional activation and coactivator binding by novel orphan nuclear receptor ERR3. J. Biol. Chem. ; 274:2261 8-26), y recientemente se demostró que ERRy es un potente activador para la expresión genética de ERRa , que se mejora mediante PGC-1 a (Liu D, Zhang Z, Teng CT (2005) - Estrogen-related receptor-? and peroxisome proliferator-activated receptor-? coactivator-1 a regúlate estrogen-related receptor-a gene expression via a conserved multi-hormone response element. J. Mol. Endocrinol. ; 34:473-87). Se demostró que las proteínas del dominio de en lace de ligando de ERRy son activas en ausencia de los agonistas, pero se potenció la actividad con la adición de compuestos agonistas conocidos, GSK471 6 (Glaxo-Smith-Kline; NVP-AJQ71 0) y GSK9089 (Glaxo-Smith-Kline; NVP-LCN446) (Zuercher W. J , y colaboradores (2005) Identification and structure-activity relationship of phenolic acyl hydrazones as selective agonists for the estrogen-related orphan nuclear receptors ERR and ERRy. J. Med. Chem. ; 48 :31 07-9). La Solicitud de Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 2005/0096384 especuló sobre el uso potencial de los ligandos que se dirigen a los receptores ERR. Esta solicitud especuló particularmente sobre el uso de los antagonistas del receptor relacionado con estrógeno para el tratamiento de varias indicaciones. Siguiendo la investigación en este campo, la solicitante ha descubierto de una manera sorprendente que, contrariamente a la enseñanza de la Solicitud de Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 2005/0096384, solamente el estímulo de la activación de ERRy media nte el uso de agonistas de ER Ry da como resultado una mejor mitocondriogénesis. La solicitante ha descubierto además que el estímulo de la activación de ERRy con un agonista de ERRy da como resultado efectos buenos inesperados para el tratamiento de una enfermedad seleccionada a partir de diabetes, diabetes tipo 2 , resistencia a la insulina, enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, obesidad/sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas, o para la mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio. Con el objeto de facilitar la perfilación de los agonistas de ERRy , la solicitante ha desarrollado un ensayo de transferencia de energ ía con resonancia de fluorescencia ( FRET) (descrito posteriormente en la presente), que mide los cambios en la interacción entre el dominio de enlace de ligando y en péptido coactivador en respuesta al enlace de ligando. El ensayo (Zuercher, y colaboradores, 2005, "Identification and structure-activity relationship of phenolic acyl hydrazones as selective agonists for the estrogen-related orphan nuclear receptors ERRbeta and ERRgamma"; J. Med. Chem. , 5 de mayo de 2005; 48(9): 31 07-9) ha sido validado utilizando dos agonistas pequeños conocidos de ERRy, es decir, GSK4716 (Glaxo-Smith-Kline; AJQ71 0) y GSK9089 (Glaxo-Smith-Kline; LCN446). Se muestra que las proteínas del dominio de enlace de ligando de ERRy son activas en ausencia de los agonistas, pero se potencia la actividad con la adición de los compuestos agonistas conocidos, GSK471 6 (Glaxo-Smith-Kline) y GSK9089 (Glaxo-Smith-Kline) (Zuercher y colaboradores, 2005). El término "agonista de ERRy" pretende indicar una molécula que exhibe activación de la actividad de ERRy, tal como del 1 al 1 00 por ciento de activación , y conserva especialmente la acción de las moléculas del sustrato. De una manera preferi ble, el agonista de ERRy exh ibe u na EC50 comprendida entre 0.001 y 1 0 micro-Molar (o entre 0.001 y 1 micro-Molar) en un ensayo FRET de ERRy (capacidad del agonista de ERRy para inducir una mayor respuesta en FRET) . De una manera preferible , el agonista de ERRy exhibe una EC50 comprendida entre 0.001 y 1 0 micro-Molar (o entre 0.001 y 1 micro-Molar) en los ensayos descritos más adelante . De preferencia , el "agonista de ERRy" se refiere a una molécula que, cuando se enlaza con la secuencia del dominio de enlace de ligando de ERRy, aumenta la cantidad de, o prolonga la du ración de, o mejora la actividad de, ERRy. Los agonistas pueden incluir polipéptidos, ácidos nucleicos, carbohidratos, l ípidos, o cualesquiera derivados de los mismos, o cualesquiera otras moléculas. El agonista de ERRy se puede aisla r rastreando los compuestos, como es descrito por Zuercher, y colaboradores, 2005 , o por Coward , P. y colaboradores, 2001 , ("4-Hydroxytamoxifen binds to and deactivates the estrogen-related receptor gamma" . Proc. Nati. Acad. Sci. EUA . , 1 7 de julio de 2001 ; 98( 1 5):8880-4. Publicación electrónica 1 0 de julio de 2001 ), y Zhou G. y colaboradores, - 1 998, ("Characterization by Fluorescence Resonance Energy Transfer"; Mol. Endocrin. 1 998, 1 2, 1 594-1 604), cuyos ensayos se incorporan a la presente solicitud como referencia . De preferencia , los agonistas de ERRy se pueden aislar mediante el rastreo de los compuestos, como se describe en el ensayo mostrado más adelante (véase la parte experimental) desarrollado por la solicitante. En el presente contexto, "agonista de ERRy" también pretende comprender los metabolitos activos y los pro-fármacos de los mismos, tales como los metabolitos activos y los pro-fármacos de los agonistas de ERRy. Un "metabolito" es un derivado activo de un agonista de ER Ry producido cuando se metaboliza el agonista de ERRy. U n "pro-fármaco" es un compuesto que se metaboliza hasta un agonista de E RRy, o bien que se metaboliza hasta los mismos metabolitos q ue un agonista de E RRy. Los agonistas de ERRy son conocidos en la técnica. Por ejemplo, los agonistas de ERRy, en cada caso, se dan a conocer de una manera genérica y específica, por ejemplo, en Zuercher y colaboradores, 2005. Los agonistas del ERRy preferidos son GSK471 6 o GSK9089. GSK471 6 se conoce como la 4-hidroxi-N'-(4-isopropil-fenil-metiliden)-benzohidrazida, de la Fórmula: y es descrita por Zuercher, y colaboradores, 2005. GSK9089 (ó DY131) se conoce como la N'-(4-(dietil-amino)-fenil-metiliden)-4-hidroxi-benzohidrazida de la Fórmula: y tiene un número de registro CAS de 095167-41-2. El compuesto GSK9089 y su actividad sobre ERRy, también es descrita por D. D. Yu y colaboradores (Identification of an agonist ligand for estrogen-related receptors ERR /y Bioorg. Med. Chem. Lett. 15 (2005) 1311-1313) y por Zuercher, y colaboradores, 2005. Se prefieren en especial los inhibidores de los agonistas de ERRY oralmente activos. Cualquiera de las sustancias que se dan a conocer en los documentos de patente anteriormente mencionados, incluidos a la presente como referencia, se consideran como potencialmente útiles como agonistas de ERRY, para utilizarse en la realización de la presente invención. Los agonistas de ERRY para utilizarse solos de acuerdo con la presente invención, se pueden utilizar en asociación con un vehículo.

Un vehículo en el presente compuesto es una herramienta (natural, sintética, peptídica, no peptídica), por ejemplo, una proteína que transporta sustancias específicas a través de la membrana celular en donde se empotra, y hacia dentro de la célula. Se requieren diferentes vehículos (naturales, sintéticos, peptídicos, no peptídicos) para transportar diferentes sustancias , debido a que cada uno está diseñado para reconocer solamente una sustancia, o un grupo de sustancias similares. Se puede utilizar cualquier medio de detección conocido por la persona experta en la materia, para detectar la asociación de los agonistas de ERRy con un vehículo, por ejemplo, marcando el vehículo. Se prefieren más los agonistas de ERRy oralmente activos y las sales farmacéuticas de los mismos. Los ingredientes activos o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos de acuerdo con la presente invención , también se pueden utilizar en la forma de un solvato, tal como un hidrato, o incluyendo a otros solventes utilizados para la cristalización . Ahora se ha encontrado, de una manera sorprendente, que los agonistas de ERRy son útiles para la prevención , demora de progreso, o tratamiento de una enfermedad o condición seleccionada a partir de diabetes, de preferencia diabetes tipo 2 , resistencia a la insulina, enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, obesidad , sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson , enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio. Por consiguiente, la presente invención se refiere al uso de un agonista de ERRy, por ejemplo GSK471 6 ó GSK9089 , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la prevención , demora de progreso, o tratamiento de una enfermedad o condición seleccionada a partir de diabetes, de preferencia diabetes tipo 2, resistencia a la insulina , enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, obesidad , sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson , enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio. La presente invención se refiere además a un método para la prevención , demora de progreso, o tratamiento de una enfermedad o condición seleccionada a partir de diabetes, de preferencia diabetes tipo 2, resistencia a la insulina, enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, obesidad , sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson , enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio, el cual comprende administrar a un animal de sangre caliente, incluyendo al hombre, que lo necesite, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de ERRy, de preferencia GSK4716 ó GSK9089. En una modalidad adicional , la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de ERRy, en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, para el tratamiento de una enfermedad o condición seleccionada a partir de diabetes, de preferencia diabetes tipo 2, resistencia a la insulina , enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia , obesidad , sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson , enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio. De una manera muy preferible, de acuerdo con la presente invención , las enfermedades o daños tratados se seleccionan a partir de diabetes tipo 2, enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson , enfermedad de Alzheimer, enfermedad de H untington , o el agonista de E RRy se utiliza para mejorar la capacidad de resistencia al ejercicio. En la presente descripción , el término "tratamiento" incluye el tratamiento tanto profiláctico como preventivo, así como el tratamiento curativo o supresor de la enfermedad , incluyendo el tratamiento de los pacientes en riesgo de contraer la enfermedad , o de los que se sospeche que han contraído la enfermedad , así como de los pacientes enfermos. Este término incluye además el tratamiento para la demora del progreso de la enfermedad . El término "curativo", como se utiliza en la presente, significa la eficacia en el tratamiento de las enfermedades continuas. El término "prevención" significa la administración profiláctica de la combinación a pacientes sanos, para prevenir la presentación de las condiciones mencionadas en la presente. Más aún , el término "prevención" significa la administración profiláctica de esta combinación a los pacientes que estén en una etapa previa de las condiciones que se vayan a tratar. El término "profiláctico" significa la prevención del establecimiento o recurrencia de las enfermedades o daños. El término "demora de progreso" , como se utiliza en la presente, significa la administración del compuesto activo a los pacientes que estén en una etapa previa o en una primera etapa de la enfermedad que se vaya a tratar, en cuyos pacientes, por ejemplo, se diagnostique una pre-forma de la enfermedad correspondiente, o cuyos pacientes estén en una condición , por ejemplo, durante un tratamiento médico, o en una condición resultante de un accidente, bajo la cual sea probable que se desarrolle una enfermedad correspondiente. El síndrome metabólico es un grupo de factores de riesgo que aumenta mucho el riesgo de presentación de un evento cardiovascular: diabetes o pre-diabetes, obesidad abdominal , cambios en el colesterol , y alta presión sanguínea. Aunque hasta el 80 por ciento de los casi 200 millones de adultos de todo el mundo con diabetes, morirán de enfermedad cardiovascular, las personas con síndrome metabólico también están en mayor riesgo, teniendo el doble de probabilidades de morir de, y tres veces más de probabilidades de tener, un ataque card íaco o una embolia, comparándose con las personas sin el síndrome. Las personas con síndrome metabólico tienen un riesgo cinco veces mayor de desarrollar diabetes tipo 2 (si no está ya presente). Es la naturaleza exacta del grupo lo que parece provocar el riesgo adicional sobre y encima del que se esperaría de cada uno de los componentes (triglicéridos altos cuando se mide colesterol , por ejemplo). Para que se defina una persona por tener el síndrome metabólico, la definición requiere que tengan obesidad central , más dos de los siguientes cuatro factores adicionales: triglicéridos elevados, colesterol H DL reducido, presión sangu ínea elevada, o nivel de glucosa en plasma en ayunas elevado . El género y la etnicidad también son factores que se toman en consideración en la definición del síndrome metabólico. El término "diabetes", como se utiliza en la presente, significa diabetes tipo 2 , diabetes tipo 1 , y diabetes autoinmune latente de la adultez (LADA), de preferencia la diabetes es diabetes tipo 2. La diabetes tipo 2 normalmente se desarrolla en las personas mayores de 40 años, o en las personas que tengan sobrepeso (obesas). En general , el tratamiento de los pacientes con diabetes tipo 2 no involucra la terapia de insulina, sino la modificación de ciertos aspectos del estilo de vida (por ejemplo, ejercicio, pérdida de peso, y dieta estricta), y algunas veces anti-diabéticos orales, son suficientes para controlar los niveles de glucosa en sangre. La diabetes tipo 2 (diabetes mellitus de establecimiento en adultos) generalmente se presenta cuando el cuerpo desarrolla resistencia a la insulina, un resultado de los factores genéticos y de la obesidad , y típicamente se diagnostica en la adultez. La resistencia a la insulina provoca hiperglicemia, y, debido a la demanda prolongada de producción de insulina, el deterioro de las células beta pancreáticas. La combinación de resistencia a la insulina y la función de células beta disminuida , provoca finalmente la diabetes tipo 2. La diabetes tipo 1 es con frecuencia diagnosticada en la infancia , y algunas veces es referida como diabetes juvenil por esa razón . EL diagnóstico temprano es importante para prevenir algunas de las complicaciones más grandes de la diabetes, las cuales incluyen enfermedad card íaca, ceguera, alta presión sangu ínea, daño de nervios, e insuficiencia renal . Sin embargo , aunque la diabetes ti po 1 tiende a presentarse con más frecuencia en los individuos delgados jóvenes, usualmente antes de los 30 años de edad , los pacientes más viejos también presentan esta forma de diabetes. Este tipo de diabetes tipo 1 usualmente es referido como diabetes autoinmune latente de la adultez ( LADA). Como la diabetes tipo 1 juvenil más común , la diabetes autoinmune latente de la adultez es provocada por la destrucción inmuno-mediada de las células beta pancreáticas productoras de insulina . La diabetes autoi nmune latente de la adultez también se como diabetes tipo 1 de establecimiento lento, diabetes autoinmune de estableci miento tard ío de la adultez, y diabetes tipo 1 . La diferencia principal entre la diabetes tipo 1 juvenil y la diabetes autoinmune latente de la adultez, es la edad del diagnóstico - en general de 30 años o más. Los métodos para el diagnóstico de la diabetes autoinmune latente de la adultez se describen, por ejemplo, en la Solicitud de Patente Internacional Número WO200505451 2 A2. Por consiguiente, la diabetes tipo 1 puede estar presente a cualquier edad , y no se conocen los factores que determinan la edad de la manifestación cl ínica. El metabolismo deteriorado de la glucosa (I GM ) se define por los niveles de glucosa en sangre que están arriba del intervalo normal , pero que no son suficientemente altos para satisfacer los criterios de diagnóstico para la diabetes mellitus tipo 2. La incidencia de metabolismo deteriorado de la glucosa varía de país a país, pero usualmente se presenta de dos a tres veces más frecuentemente que la diabetes manifiesta. Hasta recientemente, se sentía que los individuos con metabolismo deteriorado de la glucosa eran pre-diabéticos, pero los datos de varios estudios epidemiológicos argumentan que los sujetos con metabolismo deteriorado de la glucosa son heterogéneos con respecto a su riesgo de diabetes y a su riesgo de patología y mortalidad cardiovascular. Los datos sugieren que los sujetos con metabolismo deteriorado de la glucosa , en particular tolerancia deteriorada a la glucosa, no siempre desarrollan diabetes, pero si son diabéticos o no, no obstante, están en alto riesgo de tener patología y mortalidad cardiovascular. Entre los sujetos con metabolismo deteriorado de la glucosa, aproximadamente el 58 por ciento tienen tolerancia deteriorada a la glucosa ( IGT), otro 29 por ciento tienen glucosa deteriorada en ayunas (IGF), y el 1 3 por ciento tienen ambas anormalidades ( I FG/IGT). La tolerancia deteriorada a la glucosa se caracteriza por hiperglicemia post-prandial (después de los alimentos) elevada , mientras que la glucosa deteriorada en ayunas ha sido definida por la ADA (véase la Tabla que se encuentra más adelante) con base en los valores glicémicos en ayunas. Sobrepeso: Es deseable la pérdida de peso, es decir, el tratamiento, prevención, demora de sobrepeso, en el caso de diabetes, obesidad , e individuos con sobrepeso. La pérdida de peso , es decir, el tratamiento/prevención/demora de sobrepeso, puede ayudar a prevenir muchas de estas consecuencias peligrosas, en particular con respecto a la diabetes y a la enfermedad cardiovascular (CVD). La pérdida de peso también puede reducir la presión sanguínea tanto en los individuos hipertensos con sobrepeso como en los individuos no hipertensos; los niveles de triglicéridos en suero y los aumentos de la forma de lipoproteína de alta densidad (H DL) benéfica del colesterol . La pérdida de peso también reduce en general un poco el colesterol total en suero y los niveles de colesterol de lipoproteína de baja densidad ( LDL). La pérdida de peso también puede reducir los niveles de glucosa en sangre en las personas con sobrepeso y obesas. La pérdida de peso, y las dietas hipocalóricas, también son una meta primaria para el control de los niveles de glucosa en plasma en el tratamiento de diabetes tipo 2. Por consiguiente, el control del apetito y la pérdida de peso son deseables para el tratamiento de diabetes tipo 2. El término "tratamiento de sobrepeso" cubre, por ejemplo, la reducción de la grasa corporal o la pérdida de peso. El término "pérdida de peso" se refiere a la pérdida de una porción del peso corporal total . El término "reducción de grasa corporal" significa la pérdida de una porción de la grasa corporal . La fórmula para el índice de Masa Corporal (BM I ) es [peso en libras + altura en pulgadas + altura en pulgadas] x 703. Los puntos de corte del índice de Masa Corporal para los adultos humanos son un número fijo, independientemente de la edad o el sexo , utilizando los siguientes lineamientos: los individuos adultos humanos con sobrepeso tienen un índice de masa corporal de 25.0 a 29.9. Los adultos humanos obesos tienen un índice de masa corporal de 30.0 o más. Los adultos con sub-peso tienen un índice de masa corporal menor de 1 8.5. Un intervalo de peso corporal normal para un adulto se define como un índice de Masa Corporal de entre 1 8.5 y 25. Los puntos de corte del índice de Masa Corporal para los niños de menos de 1 6 años se definen de acuerdo con los percentiles: el sobrepeso se define como un índice de Masa Corporal para una edad mayor del >85° percentil , y la obesidad se define como un índice de Masa Corporal para una edad del >95° percentil . El sub-peso es un índice de Masa Corporal para una edad del >5° percentil . Un intervalo de peso corporal normal para un niño se define como un índice de Masa Corporal arriba del 5° percentil y debajo del 85° percentil . De preferencia, el trastorno neurodegenerativo se selecciona a partir de las condiciones y enfermedades como demencia (por ejemplo, demencia senil , demencia pre-senil (también conocida como deterioro cognitivo leve), demencia relacionada con Alzheimer (demencia tipo Alzheimer), enfermedad de Huntington , corea de Huntington , trastornos de confusión aguda, y en especial aquéllos en donde tiene una parte la necrocitosis apoptótica, tales como esclerosis lateral amiotrófica, glaucoma , esclerosis múltiple , migraña , embolia, isquemia cerebral , y enfermedad de Parkinson , y en especial enfermedad de Alzheimer. Más preferiblemente, el trastorno neurodegenerativo se selecciona a partir de enfermedad de Alzheimer y demencia , preferiblemente demencia senil , deterioro cognitivo leve, o demencia tipo Alzheimer. De una manera más preferible, el trastorno neurodegenerativo es enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, o enfermedad de Huntington. La invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende, como ingredientes activos, un agonista de ER Ry, en forma libre o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Otro aspecto de la presente invención es el uso de una composición farmacéutica que comprende, como ingredientes activos, un agonista de ERRy, de preferencia GSK471 6 ó GSK9089 , en forma libre o en forma una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de una composición farmacéutica para la prevención , demora de progreso, o tratamiento de diabetes, de preferencia diabetes tipo 2, y resistencia a la insulina , enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, obesidad , sobrepeso , enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio. La invención también se refiere a un método para la prevención, demora de progreso, o tratamiento de diabetes, de preferencia diabetes tipo 2, resistencia a la insulina, enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, obesidad , sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson , enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio, el cual comprende administrar a un animal de sangre caliente , incluyendo el hombre , que lo necesite, cantidades conjuntamente efectivas terapéuticamente de una composición farmacéutica que comprende, como ing redientes activos, un agonista de ER Ry, de preferencia GSK471 6 ó GSK9089, en forma libre o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención se pueden preparar de una manera conocida por sí misma, y son aquéllas adecuadas para administración enteral , tal como oral o rectal , y parenteral a mam íferos (animales de sangre caliente), incluyendo el hombre, comprendiendo una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto farmacológicamente activo, solo o en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, en especial adecuados para aplicación enteral o parenteral . Estas preparaciones farmacéuticas son para administración enteral , tal como oral , y también rectal o parenteral , a homeotermos, comprendiendo las preparaciones el compuesto farmacológico activo ya sea solo o bien junto con sustancias auxiliares farmacéuticas acostumbradas. Por ejemplo, las preparaciones farmacéuticas consisten en de aproximadamente el 0.1 por ciento al 90 por ciento, de preferencia de aproximadamente el 1 por ciento a aproximadamente el 80 por ciento del compuesto activo . Las preparaciones farmacéuticas para administración enteral o parenteral , y también ocular, están , por ejemplo, en formas de dosis unitaria, tales como tabletas recubiertas, tabletas, cápsulas, o supositorios, y también ampolletas. Éstas se preparan de una manera que es conocida por sí misma , por ejemplo empleando procesos convencionales de mezcla, granulación , recubrimiento , solubilización , o liofilización . Por consiguiente, las preparaciones farmacéuticas para uso oral se pueden obtener mediante la combinación del compuesto activo con excipientes sólidos, si se desea se granula una mezcla que se haya obtenido, y si se requiere o es necesario, se procesa la mezcla o el granulado en tabletas o en núcleos de tabletas recubiertos después de haber agregado las sustancias auxiliares adecuadas. La dosificación del compuesto activo puede depender de una variedad de factores, tales como el modo de administración , la especie homeotérmica, la edad , y/o la condición individual . Los pacientes preferidos para los usos o métodos de acuerdo con la presente invención son los pacientes o animales que sufran de diabetes (de preferencia diabetes tipo 2), metabolismo deteriorado de la glucosa (de preferencia tolerancia deteriorada de la glucosa), obesidad o sobrepeso, enfermedad metabólica, dislipidemia, enfermedad neurodegenerativa, o baja capacidad de resistencia al ejercicio. En una modalidad preferida adicional, la presente invención se refiere a las composiciones, usos, o métodos de acuerdo con la presente invención, para la prevención o demora de progreso de diabetes (de preferencia diabetes tipo 2), en un paciente que sufra de metabolismo deteriorado de la glucosa (de preferencia tolerancia deteriorada a la glucosa). Por consiguiente, la invención también se refiere a: Un método para la prevención o demora de progreso de diabetes tipo 2, el cual comprende administrar a un animal de sangre caliente, incluyendo el hombre, que sufra de metabolismo deteriorado de la glucosa, de preferencia tolerancia deteriorada a la glucosa, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de ERRy. Una composición farmacéutica, la cual comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de ERRv, en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, para la prevención o demora de progreso de diabetes tipo 2, en un paciente que sufra de metabolismo deteriorado de la glucosa, de preferencia tolerancia deteriorada a la glucosa. El uso de un agonista de ERRY, O de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la prevención o demora de progreso de diabetes tipo 2 , en un paciente que sufra de metabolismo deteriorado de la glucosa, de preferencia tolerancia deteriorada a la glucosa . La invención también se refiere a cualquiera de las composiciones farmacéuticas, métodos, o usos descritos en la presente, en donde el agonista de ERRv exhibe una EC50 comprendida entre 0.001 y 1 0 micro-Molar, por ejemplo, en un ensayo FRET de ERRy (la capacidad del agonista de ER Ry para inducir una respuesta aumentada en FRET), o en cualquiera de los ensayos descritos en la presente. De una manera preferible, el agonista de ERRv exhibe una EC5o comprendida entre 0.001 y 1 micro-Molar en los ensayos descritos en la presente (por ejemplo, el ensayo FRET del Ejemplo 1 que se encuentra más adelante). Las dosificaciones preferidas para los ingredientes activos de la combinación farmacéutica de acuerdo con la presente invención, que están comercialmente disponibles, son en especial las dosificaciones terapéuticamente efectivas comercialmente disponibles. La dosificación del compuesto activo puede depender de una variedad de factores, tales como el modo de administración , la especie homeotérmica, la edad , y/o la condición individual . El ingrediente activo correspondiente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, también se puede utilizar en la forma de un hidrato, o puede incluir otros solventes utilizados para la cristalización .

Para estas indicaciones, la dosificación exacta, desde luego , variará dependiendo del compuesto empleado, del modo de administración , y del tratamiento deseado . El compuesto se puede administrar por cualquier vía convencional , de una manera no oral , o de preferencia oralmente. Se obtienen los resultados terapéuticos esperados cuando se administra en una dosificación diaria de aproximadamente 0.01 a 1 00 miligramos/kilogramo, estando las dosis más preferidas en el intervalo de 0.1 a 50 miligramos/kilogramo. Para los mamíferos superiores, una dosificación diaria total indicada está en el intervalo de aproximadamente 0.01 a 1 00 miligramos/kilogramo del compuesto, convenientemente administrados en dosis divididas de 2 a 4 veces al d ía , en una forma de dosificación unitaria conteniendo, por ejemplo , de aproximadamente 1 0 a aproximadamente 1 00 miligramos del compuesto en una forma de liberación sostenida . Otra dosificación oral diaria preferida en seres humanos es entre 1 miligramo y 1 gramo, de preferencia entre 1 0 miligramos y 500 miligramos, por ejemplo 1 0 miligramos, o entre 1 0 miligramos y 200 miligramos. Las dosis unitarias apropiadas para administración oral contienen , por ejemplo, de aproximadamente 10 a aproximadamente 500 miligramos del ingrediente activo, es decir, el agonista de ERRy. Las dosis apropiadas para administración parenterai contienen , por ejemplo, de aproximadamente 1 0 a aproximadamente 500 miligramos, o de 1 0 a aproximadamente 200 miligramos del compuesto. Los compuestos se pueden administrar de una manera simi lar a los estándares conocidos para los usos en estas utilidades. La dosificación diaria adecuada para un compuesto particular dependerá de un número de factores, tales como su potencia de actividad relativa. Una persona experta en la técnica pertinente está absolutamente capacitada para determinar la dosificación terapéuticamente efectiva. El compuesto de la invención se puede administrar en forma de base libre, o como una sal de adición de ácido o de amonio cuaternario farmacéuticamente aceptable. Estas sales se pueden preparar de una manera convencional , y exhiben el mismo orden de actividad que las formas libres. Si estos compuestos tienen , por ejemplo, cuando menos un centro básico, pueden formar sales de adición de ácido. También se pueden formar las sales de adición de ácido correspondientes teniendo, si se desea, un centro básico adicionalmente presente. Los compuestos que tengan un grupo ácido (por ejemplo, COOH ), también pueden formar sales con bases. Por ejemplo, los compuestos que se vayan a combinar pueden estar presentes como una sal sódica , como un maleato, o como un diclorhidrato. El ingrediente activo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo también se puede utilizar en la forma de un hidrato, o puede incluir otros solventes utilizados para la cristalización.

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención se pueden preparar de una manera conocida por sí misma , y con aquéllas adecuadas para administración enteral , tal como oral o rectal , y parenteral a mam íferos (animales de sangre caliente), incluyendo el hombre, comprendiendo una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto farmacológicamente activo , solo o en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, en especial adecuados para aplicación enteral o parenteral . La estructura de los agentes activos identificados por números de código, nombres genéricos o comerciales, se puede tomar de la edición actual del compendio estándar "The Merck Index" o de las bases de datos, Patents International (por ejemplo, I MS World Publications). El contenido correspondiente de las mismas se incorpora a la presente como referencia. Cualquier persona experta en la materia está absolutamente capacitada para identificar los agentes activos, y, basándose en estas referencias, de la misma manera está capacitada para fabricar y probar las indicaciones y propiedades farmacéuticas en modelos de prueba convencionales, tanto in vitro como in vivo. La actividad farmacológica, por ejemplo, se puede demostrar en un estudio cl ínico, o en el procedimiento de prueba esencialmente como se describe posteriormente en la presente, de una manera conocida por la persona experta. El agonista de ERRy preferido para los usos y métodos de la presente invención es GSK4716 ó GSK9089, y opcionalmente, en cualquier caso, las sales farmacéuticas de los mismos. PARTE EXPERIMENTAL Los siguientes Ejemplos se llevan a cabo con los agonistas de ERRy para mostrar su actividad reivindicada . EJEMPLOS Los siguientes Ejemplos son no limitantes, y son meramente representativos de diferentes aspectos y características de la presente invención . Ejemplo 1 -Ensayo de Rastreo para Aislar los Agonistas de ERRy. Ensayo FRET para detectar el enlace y los compuestos útiles para llevar a cabo la presente invención (véase la Figura 1 .1 ) El ensayo FRET está diseñado para detectar la activación ind ucida por el agonista de ERRy en la presencia del péptido coactivador PGC-1 a. Se agregaron los siguientes componentes en un volumen final de 50 microlitros: (His)6-h ERRy LB D ó GST-hERRy LBD, anticuerpo anti-(His)6 marcado con europio, o anticuerpo anti-GST marcado con europio, y péptido PGC-1 a marcado con Cy5 (Cy5-RPCSELLKYLTT (SEQ I D NO:4) con el ácido C-terminal , hecho a la medida y marcado en AnaSpec). La mezcla 1 contuvo el anticuerpo, hERRy LB D en regulador en un volumen de 1 9 microlitros, y se agregó a 30 microlitros de la mezcla 2 que conten ía el péptido Cy5 en regulador ( 1 . 6xHis-ERRy-LB D, 3.6 miligramos/mililitro, peso molecular de 27KDa; 2. Péptido Cy5-PGC-1 de AnaSpec; 3. Otros componentes reguladores de Sigma; 4. Anticuerpo EUA-anti-His6 de Perkin Elmer; y 5. Compuestos de prueba). Los ensayos se llevaron a cabo en placas negras de 384 pozos, y se incubaron a temperatura ambiente durante 3 horas antes de que se midieran las señales de FRET utilizando un lector de placas Wallac Víctor 2 (Perkin Elmer). Se utilizó la proporción de las señales de emisión (665 nanómetros/61 5 nanómetros), para determinar la respuesta del ensayo FRET . En algunos casos, se utilizó la proporción de la señal al fondo de FRET, y ésta simplemente se define como la proporción FRET en la presencia de proteína, o la proporción FRET en ausencia de proteína. Los compuestos de prueba se disolvieron en sulfóxido de dimetilo a 10 mM , y se utilizaron como se indica.

Tabla 1 · Lista de Reactivos Nú mero de Reactivo Vendedor Catálogo Anticuerpo anti-(His)6 marcado con Perkin Elmer AD0 1 0 europio Anticuerpo anti-GST marcado con Perkin Elmer AD0254 europio Péptido PGC-1 a marcado con Cy5 AnaSpec Orden a la (Cy5-RPCSELLKYLTT (SEQ I D medida NO:4); ácido C-terminal de PGC-1 a) Número de Reactivo Vendedor Catálogo Ditioeritritol Sigma D-0632 Tris Sigma T-21 94 Placas de 384 pozos Corning 3654 Se evaluó la capacidad de los compuestos agonistas para inducir una mayor respuesta de FRET entre el anticuerpo anti-( His)6 marcado con europio/complejo de (His)6-dominio de enlace de ligando h ERRy, y Cy5-RPCSELLKYLTT (SEQ I D NO:4), utilizando dos compuestos descritos en la literatura como agonistas de ERRy , GSK471 6 (Glaxo-Smith-Kline; AJQ71 0) y GSK9089 (Glaxo-Smith-Kline; LCN446. Véase Zuercher W. J . , Gaillard S. , Miller-Orband L. A. , y colaboradores (2005), "Identification and structure-activity relationship of phenolic acyl hydrazones as selective agonists for the estrogen-related orphan nuclear receptors ERRß and ERRy" , J. Med. Chem. ; 48:31 07-9). Los compuestos se solubilizaron en sulfóxido de dimetilo 1 0 mM , y el intervalo de concentración de la titulación fue desde 100 µ ? bajando hasta 2 n M . La concentración final de sulfóxido de dimetilo fue del 2 por ciento. También se preparó un control de sulfóxido de dimetilo (sin compuesto) al 2 por ciento. Todas las muestras se hicieron por duplicado. Como se muestra en la Figura 1 .2, AJQ71 0 fue capaz de inducir hasta un incremento del 60 por ciento en la señal de FRET en la concentración más alta probada. La respuesta de FRET depende de la dosis, y se derivó una EC50 de 2.1 µ? a partir de los datos. De u na manera similar, LC N446 también indujo una respuesta de FRET dependiente de la dosis, con una respuesta máxima del 70 por ciento en concentraciones de saturación del compuesto, con una EC50 de 0.54 µ ? . Ambas EC50s fueron similares a los valores reportados de 1 .3 µ? y 0.1 3 µ? para los equivalentes de AJQ71 0 y LCN446, respectivamente. Ejemplo 2 Caracterización de AJQ71 0 sobre la función mitocond rial en miotubos de ratón primarios Se aislaron mioblastos de ratón primarios a partir de ratones FVB , y se mantuvieron como se describe en Bare y colaboradores. Para la experimentación , se cultivaron mioblastos de ratón hasta una confluencia del 80 por ciento en un medio de F-1 0/Ham conteniendo suero bovino fetal al 20 por ciento, penicilina/estreptomici na al 1 por ciento, y 2.5 nanogramos/mililitro de bFG F (recombinante humano). Las células se aplicaron entonces a 700,000 células por pozo en placas de 6 pozos, y se les permitió diferenciarse en miotubos durante 36 a 48 horas en DM EM conteniendo suero equino al 5 por ciento y penicilina/estreptomicina. Las células se trataron con el agonista de ERRy/ß AJQ710 durante 24 horas. Los ensayos llevados a cabo incluyeron el análisis de la expresión genética mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (RT-PCR), ELISA del citocromo C, ensayo de sintasa de citrato, ensayo de oxidación de ácido graso, y un ensayo de respiración. Para la RT-PCR, el ELISA del citocromo C, y el ensayo de sintasa de citrato, los miotubos se trataron con AJQ710 en las siguientes concentraciones: 1 µ?, 3 µ?, 10 µ?, y 30 µ?. Para el ensayo de oxidación de ácido graso, los miotubos se trataron con AJQ710 en las siguientes concentraciones: 10 µ? y 30 µ?. Para el ensayo de respiración, los miotubos se trataron con AJQ710 en una concentración de 30 µ?. Cada dosis se probó por triplicado, y se incluyó un conjunto de pozos tratados con un volumen equivalente de sulfóxido de dimetilo en cada lectura experimental para propósitos de control. Para el propósito de evaluar la expresión genética mediante RT-PCR, se aisló el ARN de los lisados celulares, y subsiguientemente se sintetizó el ADNc a partir de este ARN. Para el aislamiento del ARN, las células se homogeneizaron en TRizol (Invitrogen, Número de Catálogo 15596-026, Carisbad, CA), y se aisló el ARN total siguiendo las instrucciones del fabricante. El ARN se cuantificó utilizando el espectrofotómetro. Se llevó a cabo la transcripción inversa utilizando el kit BD SprintMR PowerScriptMR de BD Biosciences (Número de Catálogo 639562). Se llevó a cabo reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real para los siguientes genes, utilizando las sondas de cebadores de Ensayo Sobre Demanda de Applied Biosystems (véase el texto posterior a Tabla 8-1 para los números de catálogo): B2M, ERRy, ERR , ERRa, PGC-1a, PGC-?ß, PPARa, PPARy, PPARÓ, COX-4, citocromo c, UQCRB, CPT-1b, LCAD, MCAD, I DH3a , ATP-5b, UCP-2, y UCP-3. La reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real Taqman se llevó a cabo, y se hizo el análisis siguiendo las instrucciones del fabricante (Applied Biosystems). De una manera específica , la amplificación se llevó a cabo por triplicado, en una mezcla de reacción de 1 0 microlitros. La mezcla de reacción incluyó: 1 X TaqMan® Universal PCR Master M ix (Applied Biosystems, Número de Catálogo 4304437), la sonda de cebador de Ensayo Sobre Demanda 1 X, y 2 microlitros de muestra de ADNc. La expresión genética se calculó normalizando hasta el ADNc total , medido mediante el control endógeno B2M (Applied Biosystems, Número de Catálogo Mm00437762_m 1 ). Las muestras inicialmente se incubaron durante 2 minutos a 50°C para la actividad óptima de uracil-N-glicosilasa. El programa de reacción en cadena de la polimerasa empezó con una desnaturalización a 95°C durante 10 minutos, seguida por 40 ciclos de 95°C/1 5 segundos y 60°C/1 mi nuto en un ciclador térmico de 384 pozos (Perkin-Elmer Applied Biosystems). Cada amplificación ejecutada conten ía controles "Sin Plantilla" (regulador y cebadores solamente). Los datos de la amplificación se recopilaron mediante el Detector de Secuencias 7700 , y se analizó utilizando el software Sequence Detection System desarrollado por Perkin Elmer (Applied Biosystems). El número de ciclo fraccionario que refleja un resultado positivo en la reacción en cadena de la polimerasa se denomina como el umbral del ciclo (Ct). Se calcularon los valores de expresión genética promedio para cada grupo en relación con B2M , utilizando 2"AACt (como es descrito por Applied Biosystems, Foster City, CA) con la expresión en las células tratadas con veh ículo (0 µ?) normalizada hasta u n valor de 1 . Los datos se expresan como el promedio + SEM (n = 3 pozos replicados). El significado estad ístico se midió utilizando la prueba de t de Student. El ensayo inmunosorbente enlazado con enzimas ( ELISA) del citocromo C se llevó a cabo utilizando el kit de inmunoensayo de citocromo C de rata/ratón de R&D Systems (número de catálogo MCTCO , R&D Systems, Minneapolis, M N), siguiendo las instrucciones del fabricante. El ensayo de sintasa de citrato se llevó a cabo siguiendo el procedimiento descrito anteriormente en esta solicitud . La respiración se midió en miotubos incubados con AJQ71 0 durante 24 horas de acuerdo con el método publicado con modificaciones (St-Pierre y colaboradores, JBC, 278(29): 26597-603 (2003)). Las células se lavaron una vez con suero regulado con fosfato (PBS), y se trataron durante 5 minutos a 37°C con 2 mililitros de tripsina (Mediatech , Número de Catálogo 25-052-CI ). Sin remover la tripsina, se agregaron 1 0 mililitros de DM EM más suero bovino fetal al 1 0 por ciento en cada pozo. Las células se transfirieron a un tubo de 1 5 mililitros, y se centrifugaron durante 5 minutos a 1 ,000 revoluciones por minuto. Las células se lavaron una vez con el medio, y se granularon antes de volverse a suspender en el regulador de ensayo conteniendo glucosa 25 mM (Sigma , Número de Catálogo G-5400), piruvato 1 mM (Invitrogen, Número de Catálogo 11360-070), y albúmina de suero bovino (BSA) al 2 por ciento (MP Biomedicals, Número de Catálogo 103703) en D-PBS (Invitrogen, Número de Catálogo 14040-133). La suspensión celular se diluyó hasta 1x106 células por mililitro en el regulador de ensayo, y se mantuvo a 37°C hasta utilizarse. El consumo de oxígeno se midió con un electrodo Clark de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por Hansatech (Norfolk, Reino Unido). Para cada medición, se utilizó la mitad de la suspensión celular. Las concentraciones de oligomicina (MP Biomedicals, Número de Catálogo 151786) y FCCP fenil-hidrazona de cianuro de (4-trifluoro-metoxi)-carbonilo) (Sigma, Número de Catálogo C2920) fueron de 2 microgramos/mililitro y de 2 a 5 µ?, respectivamente. Los experimentos se llevaron a cabo por triplicado. El índice de respiración se midió calculando la inclinación del flujo de consumo de oxígeno utilizando el software proporcionado por el fabricante. Las manipulaciones de datos y la generación de gráficas se llevaron a cabo utilizando el software Microsoft Excel y GraphPad 4. Los datos se presentan como el promedio + SEM. En todos los experimentos, cada dosis se probó por triplicado. La única excepción a esto fueron las mediciones de respiración, en donde el experimento se repitió tres veces. El análisis estadístico se llevó a cabo utilizando una prueba t de Student de dos colas. Resultados Examinamos la expresión de diferentes marcadores de la expresión genética mitocondrial en diferentes miotubos de ratón diferenciados tratados con AJK710 en las siguientes concentraciones: 30 µ? , 1 0 µ? , 3 µ ? , y 1 µ ? . Se prepararon soluciones de suministro, de tal manera que se agregó un volumen constante de solución de fármaco a cada pozo de células. Todos los efectos se compararon con el del vehículo solo (sulfóxido de dimetilo). Las sendas/genes mitocondriales examinados incluyeron la fosforilación oxidativa, la oxidación de ácido graso, el ciclo de Krebs, la sintasa de ATP, y las proteínas de desacoplamiento. Adicionalmente, se examinó la expresión de los reguladores de transcripción funcionalmente relacionados con ERRy. Para casi todos los genes examinados, encontramos un incremento dependiente de la dosis en la expresión genética en seguida del tratamiento con AJQ710. Todos los resultados de expresión genética son a parti r del tratamiento con AJQ71 0 de 24 horas. Los genes de la fosforilación oxidativa demostraron una expresión elevada con concentraciones crecientes de AJQ71 0. La expresión de COX-4 aumentó por dos veces, el citocromo C por 3.7 veces (es decir, desde 1 .0 gen/B2M sin tratamiento con AJQ71 0 hasta 3.7 gen/B2M cuando se trató con AJQ71 0 a una concentración de 30 µ ?) , y UQC RB por dos veces cuando se trató con AJQ71 0 a una concentración de 30 µ? . De una manera similar, se demostró que tres genes examinados que están asociados con la oxidación de ácido graso se sobre-regulan de una manera dependiente de la dosis en seguida del tratamiento de 24 horas con AJQ710. La expresión de CPT-1b aumentó por más de tres veces (es decir, desde 1.0 gen/B2M sin tratamiento hasta 3.0 gen/B2M cuando se trató con AJQ710 a una concentración de 30 µ?), LCAD por 2.8 veces, y MCAD por 1.6 veces en seguida del tratamiento con AJQ71030 µ?. Otros dos genes mitocondriales examinados, IDH3a, un componente del ciclo de Krebs, y ATP-5b, una enzima que sintetiza ATP, demostraron una inducción dependiente de la dosis en la expresión con dosis crecientes de AJQ710. La expresión de IDH3a aumentó por más de dos veces (es decir, desdel.O gen/B2M sin tratamiento con AJQ710 hasta 2.0 gen/B2M cuando se trató con AJK710 a una concentración de 30 µ?), y el ATP-5b aumentó por 1.6 veces después del tratamiento durante 24 horas con AJQ71030 µ?. Medimos la expresión del ARNm para las proteínas de desacoplamiento UCP-2 y UCP-3. UCP-2 mostró una sobre-regulación marginal en la expresión con todas las dosis de AJQ710, con su más alta expresión, de 1.5 veces, en seguida del tratamiento con 10 µ?. UCP-3 mostró un aumento dependiente de la dosis en la expresión, con un aumento de más de tres veces, es decir, desde 1.0 gen/B2M sin tratamiento con AJQ710 hasta 3.0 gen/B2M en seguida del tratamiento con AJQ71030 µ?. Medimos la expresión de la familia de receptores relacionados con estrógeno en respuesta al tratamiento de los miotubos con el agonista. AJQ710 pretendidamente activa tanto ERRy como ERRp, pero no activa ERRa y los receptores de estrógeno (Zuercher y colaboradores, J. Med. Chem. 48(9):31 07-9 (2005)). La expresión de ERRa aumentó hasta un mayor grado que ERR ó ERRy en seg uida del tratamiento con AJQ71 0. ERRy se elevó hasta una expresión de 1 .4 veces, E RRp mostró un aumento de 1 .5 veces en la expresión , y ERRa mostró un aumento de 3.7 veces en la expresión, con el tratamiento con AJQ71 0 30 µ? . También se examinaron los co-activadores PGC-1 a y PGC- ß para determinar la expresión genética . La expresión de estas transcripciones mostró un aumento dependiente de la dosis similar en la expresión , con PGC-1 a elevado hasta u na expresión de 1 .9 veces (es decir, desdel .O gen/B2M sin tratamiento con AJQ71 0 hasta 1 .9 gen/B2M cuando se trató con AJQ710 a una concentración de 30 µ?) , y PGC- ß se elevó hasta 1 .8 veces. Adicionalmente examinados la expresión genética para PPARs, una familia de receptores nucleares que tienen un papel importante en el metabolismo de lípidos. PPARa y PPAR5 no mostraron cambio alguno en la expresión en seguida del tratamiento con AJQ71 0. PPARy mostró un aumento dependiente de la dosis en la expresión , con una máxima expresión de 2.2 veces (es decir, desde 1 .0 gen/B2M sin tratamiento con AJQ71 0 hasta 2.2 ven/B2M en seguida del tratamiento con AJQ71 0 30 µ? . Con el objeto de evaluar la actividad mitocondrial al nivel de la proteína, se llevó a cabo un ELISA del citocromo C. El citocromo C es un elemento crítico de la cadena de transporte de electrones, y las cantidades de la proteína sirven como un biomarcador para el número mitocondrial y la actividad de fosforilación oxidativa . Observamos un aumento dependiente de la dosis del citocromo C sin el tratamiento con el compuesto, con un aumento del 88 por ciento cuando los miotubos se trataron con AJQ71 0 30 µ? du rante 24 horas (Figura 2.1 ). Con el fin de medir la actividad mitocondrial , se determi nó la actividad de sintasa de citrato. Esta enzima se utiliza con frecuencia como un indicador del contenido o actividad mitocondrial en el músculo humano (Kelley y colaboradores, Diabetes, 51 ( 1 0):2944-50 (2002)). La sintasa de citrato cataliza el paso inicial del ciclo de Krebs, que suministra el sustrato para la fosforilación oxidativa . Los miotu bos tratados con AJQ71 0 30 µ ? durante 24 horas mostraron u n aumento del 28 por ciento en la actividad de sintasa de citrato , mientras que el tratamiento con 1 0 µ ? y 3 µ ? mostró un aumento del 8 por ciento y del 9 por ciento, respectivamente ( Figura 2.2). Además investigamos si la inducción de la expresión del gen mitocondrial tiene un impacto sobre la fosforilación oxidativa . Se midió la respiración celular en miotubos primarios de ratón tratados con AJQ71 0 durante 24 horas. De una manera consistente con la inducción de la expresión de los componentes de la cadena respiratoria , la respiración basal aumentó por el 37 por ciento en las células musculares tratadas con AJQ71 0, comparándose con los controles tratados con vehículo ( Figura 2.3). La respiración insensible a oligomicina, la fuga de protones, aumentó por el 36 por ciento, aunque este aumento no fue estad ísticamente significativo.

En la presencia de FCCP, el índice de respiración aumentó por el 32 por ciento con AJQ71 0, comparándose con las células de control tratadas con vehículo (Figura 2.3). Estos resultados indican que un agonista de ERRv puede aumentar la capacidad oxidativa mitocondrial a través de la respiración acoplada. La mejora en la función mitocondrial que se puede observar a partir de los ensayos anteriores indicaría los beneficios terapéuticos en las indicaciones reivindicadas en la presente. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 .1 muestra un diagrama de la configuración del ensayo FRET. La Figura 1 .2 muestra la respuesta de FRET i nducida por el agonista . La Figura 2.1 muestra los niveles de expresión de proteína del citocromo C en miotubos de ratón tratados con NVP-AJQ71 0-NX-2. La Figura 2.2 muestra la actividad de sintasa de citrato en miotubos de ratón tratados con NVP-AJQ7 0-NX-2. La Figura 2.3 muestra la medición de la respiración celular en miotubos de ratón primarios tratados con NVP-AJQ71 0-NX-2. Ejem plo 3 - Peso Corporal/Obesidad Se utilizan ratones obesos inducidos por la dieta para el estudio a las 21 -23 semanas de edad . En el primer d ía del estudio, los animales se ponen en ayunas a las 7:30 a.m.. La medición del peso corporal y la recolección de las muestras de sangre basal se conducen a las 1 0: 30 a.m .. Los animales se asignan en dos grupos (n = 1 O/grupo), con los valores de glucosa en plasma y los pesos corporales emparejados entre los dos grupos. Los animales se dosifican oralmente con veh ículo (agua) o con el compuesto a 30 miligramos/kilogramo, en un volumen de dosis de 5 mililitros/kilogramo. La dosis diaria de veh ículo o del compuesto se administra a la misma hora cada d ía durante un total de 28 d ías. Se toman mediciones diarias del peso corporal y de la ingestión de alimento durante el estudio . Los compuestos disminuyen el peso corporal en los animales tratados, pero no afectan a la i ngestión de alimento. Se llevan a cabo análisis de grasa y masa magra a intervalos semanas durante el período de 28 d ías, utilizando el Analizador de Composición Corporal Total EchoMRI . Las exploraciones se llevan a cabo utilizando los sujetadores del tamaño apropiado proporcionados por el fabricante. Los animales a los que se administra el fármaco muestran una disminución en la masa de grasa y un aumento concomitante en la masa magra. En el día 24 del estudio, los animales se colocan en el sistema CLAMS (Columbus I nstruments, Columbus, OH ), el cual mide el volumen de oxígeno consumido (VO2), y el volumen de dióxido de carbono producido (VC02), a través del muestreo de aire en las cámaras selladas. El V02 es la medida de la capacidad oxidativa global de los animales. El cociente respiratorio (RQ) se calcula como la proporción del volumen de C02 producido dividido entre el volumen de 02 consumido, y es una medida de la utilización del sustrato. Si los animales utilizan grasa como la principal fuente de combustible, la proporción está más cerca de 0.7, mientras que, si la fuente de combustible es de carbohidratos, el cociente respiratorio está más cerca de 0.7. Los animales tratados con fármaco muestran una capacidad oxidativa mayor, comparándose con los animales de control . Debido a la mayor capacidad para quemar grasa , los animales tratados exhiben niveles del cociente respiratorio más bajos. El último d ía del estudio (d ía 28), los animales se dosifican con vehículo o con el compuesto a las 10:30 a .m .. Se toman muestras de sangre de la cola a las 1 2:30 p. m .. Luego se sacrifican los animales con dióxido de carbono. Las muestras de sangre terminales se recolectan mediante punción card íaca para el análisis de química sangu ínea. Ejemplo 4 - Diabetes Tipo 2/Enfermedad Metabólica Se utilizan ratones obesos inducidos por la dieta para el estudio a las 21 -23 semanas de edad . El primer d ía del estudio, los animales se ponen en ayunas a las 7 :30 a .m .. La medición del peso corporal y la recolección de las muestras de sangre basal se conducen a las 1 0:30 a .m .. Luego se determinan los valores de glucosa en plasma. Los animales se asignan en dos grupos (n = 1 0/grupo), con los valores de glucosa en plasma y los pesos corporales emparejados entre los dos grupos. A las 1 2 :00 p .m . , los animales se dosifican oralmente con vehículo (agua) o con el compuesto a 30 miligramos/kilogramo, en un volumen de dosis de 5 mililitros/kilogramo. A la 1 :00 p.m. , se toma una muestra de sangre (a los 0 minutos), seguida por una prueba de tolerancia a la glucosa oral (OGTT) a 1 gramo/kilogramo (glucosa al 20 por ciento en agua), a un volumen de dosis de 5 mililitros/kilogramo. Se recolectan muestras de sangre a los 30, 60, y 1 20 minutos en seguida de la administración de glucosa . Los animales se vuelven a alimentar después de la prueba de tolerancia a la glucosa oral . A los animales se les administra una dosis diaria de vehículo o del compuesto a las 1 2:00 p.m . cada d ía durante un total de 1 5 d ías. Se llevan a cabo mediciones diarias del peso corporal y de la ingestión de alimento durante el estudio. Se llevan a cabo dos pruebas de tolerancia a la glucosa oral adicionales durante el estudio en los d ías 7 y 1 4, siguiendo el protocolo descrito anteriormente para la prueba de tolerancia a la glucosa oral en el d ía. Los animales tratados con fármaco muestran una mejora en la tolerancia a la glucosa , comparándose con los animales de control , como se mide por el área debajo de la curva durante una prueba de tolerancia a la glucosa oral . La magnitud de mejora en la prueba de tolerancia a la glucosa oral aumenta de una manera dependiente del tiempo desde el d ía 7 hasta el día 14. El último día del estudio (día 1 5), los ratones se ponen en ayunas a las 7:30 a. m . , y se dosifican con veh ículo o con el compuesto a las 1 0: 30 a. m .. Se toman muestras de sangre de la cola a las 1 2:30 p.m .. Luego se sacrifican los animales con dióxido de carbono. Se recolectan muestras de sangre terminales por medio de punción cardíaca para el análisis de la química sanguínea . Recolección de Sangre y Análisis Se toman muestras de sangre durante el estudio por medio de sangrado de la cola. Se determinan las concentraciones de glucosa en plasma utilizando un medidor de glucosa (Ascensia Elite, Bayer Corp. , Mishawaka, IN ). Se recolectan muestras de sangre en tubos (Microvette CB300, Aktiengesellschaft & Co. , Numbrecht, Alemania), los cuales contienen heparina de litio, para prevenir la coagulación sangu ínea. Antes de la recolección de cada muestra de sangre, se agrega 1 microlitro de cóctel inhibidor de proteasa diluido a 1 : 1 0 (Sigma, St. Louis, MO) a los tubos de muestras. Después de la recolección de las muestras de sangre, los tubos se mantienen sobre hielo antes de centrifugarse. La porción de plasma de las muestras de sangre se obtiene mediante centrifugación a 1 0,000 x g durante 1 0 minutos a 4°C, y luego se almacena a -80°C. Se determinan los niveles de insulina y de glucagon en plasma mediante los ensayos Luminex utilizando el kit Lincoplex Endocrino de Ratón (Lineo Research , I nc. , St. Charles, MO). Los animales tratados con fármaco, es decir, con los agonistas de ER Ry, muestran u na d ismin ución en los niveles de insulina en plasma, comparándose con los animales de control . Los niveles de triglicéridos, ácidos grasos, y colesterol total en plasma se determinan utilizando un ensayo fluorescente basado en el kit Amplex Red (Molecular Probes, Eugene, OR). El análisis de química sangu ínea se lleva a cabo util izando un sistema de química seco automatizado (SPOTCHEM EZ Analyzer, Heska, Fort Collins , CO). Los animales tratados con los agonistas de ERRy muestran un peso corporal reducido o un mejor perfil de l ípidos.

Ejemplo 5 - Dislipidemia Se utilizan ratones obesos inducidos por la dieta para el estudio a las 21 -23 semanas de edad . En el primer d ía del estudio , los animales se ponen en ayunas a las 7:30 a. m .. La medición del peso corporal y la recolección de las muestras de sangre basal se conducen a las 1 0:30 a.m .. Los animales se asignan en dos grupos (n = 1 0/grupo) con los valores de glucosa en plasma y los pesos corporales emparejados entre los dos grupos. Los animales se dosifican oralmente con veh ículo (agua) o con el compuesto a 30 miligramos/kilogramo, a un volumen de dosis de 5 mililitros/kilogramo. La dosis diaria de vehículo o del compuesto se administra a la misma hora cada día durante un total de 1 5 días. Se toman mediciones diarias del peso corporal y de la ingestión de alimento durante el estudio. Los análisis de grasa y masa magra se llevan a cabo dos veces durante el período de 1 5 d ías, utilizando el Analizador de Composición Corporal Total EchoM RI . Las exploraciones se llevan a cabo utilizando los sujetadores del tamaño apropiado proporcionados por el fabricante. El último d ía del estudio (d ía 1 5), los ratones se ponen en ayunas a las 7:30 a. m . , y se dosifican con veh ículo o con el compuesto a las 1 0:30 a.m .. Se toman muestras de sangre de la cola a las 1 2:30 p.m .. Luego se sacrifican los animales con dióxido de carbono. Se recolectan muestras de sangre terminales mediante punción card íaca para el análisis de la qu ímica sanguínea .

Recolección de Sangre y Análisis Se toman muestras de sangre durante el estudio por medio de sangrado de la cola. Se determinan las concentraciones de glucosa en plasma utilizando un medidor de glucosa (Ascensia Elite, Bayer Corp. , Mishawaka, I N ). Se recolectan muestras de sangre en tubos (Microvette CB300, Aktiengesellschaft & Co. , Numbrecht, Alemania), los cuales contienen heparina de litio para prevenir la coagulación sanguínea. Antes de la recolección de cada muestra de sangre, se agrega 1 microlitro de cóctel inhibidor de proteasa diluido a 1 : 1 0 (Sigma, St. Louis, MO) a los tubos de muestras. Después de la recolección de las muestras de sangre, los tubos se mantienen sobre hielo antes de centrifugarse. La porción de plasma de las muestras de sangre se obtiene mediante centrifugación a 10,000 x g durante 1 0 minutos a 4°C, y luego se almacena a 80°C. Los niveles de insulina en plasma se determinan mediante los ensayos Luminex utilizando el kit Lincoplex Endocrino de Ratón (Lineo Research , I nc. , St. Charles, MO). Se determinan los niveles de triglicéridos, ácidos grasos, y colesterol total en plasma utilizando un ensayo fluorescente basado en el kit Amplex Red (Molecular Probes, Eugene, OR). Los animales tratados con fármaco, es decir, con los agonistas de ERRy, muestran una disminución en los niveles de triglicéridos, ácidos grasos libres, y colesterol en plasma, comparándose con los animales de control . El análisis de qu ímica sangu ínea se lleva a cabo utilizando un sistema de qu ímica seca automatizado (SPOTCHEM EZ Analyzer, Heska, Fort Collins, CO).

Ejemplo 6 - Capacidad de Resistencia al Ejercicio Con el objeto de medir la capacidad de resistencia al ejercicio, los ratones C57B I6 emparejados por edad y peso se hacen correr sobre una banda motorizada con un incentivo de placa de choque (Exer-6, Columbus Instruments, Columbus, OH ). Los ratones se aclimatan a la banda en un d ía antes del inicio del experimento . En el d ia 1 , los ratones se ponen a hacer ejercicio empezando a las 9:00 a. m . durante 2 horas. La velocidad de la banda es constante durante la primera hora, y se aumenta por 2 metros/minuto cada 1 5 minutos durante la segunda hora. La inclinación de la banda se mantiene constante durante el experi mento. Se evalúa la capacidad de los ratones para correr midiendo el tiempo y la velocidad de la banda hasta que cada ratón queda exhausto y es incapaz de quedarse sobre la banda. La distancia total corrida y el trabajo realizado se calculan como las medidas de la capacidad de ejercicio. El consumo de oxígeno durante el ejercicio, referido como la capacidad oxidativa máxima, también se mide para determinar la tolerancia de los animales al ejercicio. Luego se dividen los animales en dos conjuntos (n=10 cada uno), con la capacidad de ejercicio emparejada entre los dos grupos. A las 1 2:00 p. m . , los animales se dosifican oralmente con vehículo (agua) o con el compuesto, es decir, con los agonistas de ERRy, a 30 milig ramos/kilog ramo, en un volumen de dosis de 5 mililitros/kilogramo. La dosis diaria de vehículo o del compuesto se administra a las 1 2:00 p .m. durante un total de 28 d ías. Se toman mediciones diarias del peso corporal y de la ingestión de alimento durante el estudio. En los d ías 1 4 y 27 del estudio, los animales se evalúan para determinar su capacidad de ejercicio, como se describe anteriormente. Los animales tratados con fármaco son capaces de correr durante un tiempo y una distancia más largos, comparándose con los animales de control . Estos animales también demuestran un aumento en la capacidad oxidativa máxima con respecto a los sujetos de control . La magnitud de la diferencia en estos parámetros de capacidad de ejercicio entre los animales tratados y de control , aumenta desde el d ía 1 4 hasta el d ía 27 del estudio. En el d ía 28, los animales se dosifican con el vehículo o con el compuesto a las 1 2:00 p.m . , y se toman muestras de sangre de la cola a las 1 2:30 p.m .. Luego se sacrifican los animales con dióxido de carbono, y se recolectan los tejidos para el análisis de los metabolitos y de la expresión genética. Se recolectan muestras de sangre terminales por medio de punción card íaca para el análisis de qu ímica sangu ínea . Las muestras de sangre se recolectan en tubos (Microvette CB300, Aktiengesellschaft & Co. , Numbrecht, Alemania), los cuales contienen heparina de litio para prevenir la coagulación sanguínea . Antes de la recolección de cada muestra de sangre, se agrega 1 microlitro de cóctel inhibidor de proteasa diluido a 1 : 1 0 (Sigma , St. Louis, MO) a los tubos de muestras. Después de la recolección de muestras de sangre, los tubos se mantienen sobre hielo antes de centrifugarse. La porción de plasma de las muestras de sangre se obtiene mediante centrifugación a 1 0,000 x g durante 1 0 minutos a 4°C, y luego se almacena a -80°C. Se determinan los niveles de triglicéridos, ácidos grasos, y colesterol total en plasma utilizando un ensayo fluorescente basado en el kit Amplex Red (Molecular Probes, Eugene, OR). El análisis de qu ímica sangu ínea se lleva a cabo utilizando un sistema de química seca automatizado (SPOTCHEM EZ Analyzer, Heska, Fort Collins, CO). Los animales tratados con fármaco, es decir, con los agonistas de ERRy, muestran u na disminución en los niveles de triglicéridos, ácidos grasos, y colesterol en plasma, comparándose con los animales de control . Ejemplo 7 - Enfermedades Neurodegenerativas Se evalúa el efecto positivo sobre las enfermedades neurodegenerativas mediante los siguientes experimentos: Animales Los ratones B6CBAF1 /J hembras se trasplantan con los ovarios de los ratones B6CBATg(HDexon 1 )62Gpb/1 J hembras (R6/2, Mangiarini y colaboradores, 1 996), y se obtienen en Jackson Laboratories (Bar Harbor, Maine), y se reproducen con los ratones machos B6CBAF 1 /J (The Jackson Laboratory, Maine) en casa. En una muestra de 45 ratones (machos y hembras) de nuestra colonia, se prueban los ratones con medidas de longitud de repetición de 1 19-1 30 cm (R6/2 transgénicos (TG), n=27 , machos = 14, hembras = 1 3), derivados de siete carnadas, desde los 21 d ías hasta los 70 d ías de edad , y se sacrifican a los 84 d ías (véase la Figura 1 para los detalles de los puntos del tiempo de prueba). Los ratones se alojan en una habitación con control de temperatura (21 -23°C) y de humedad (del 30 al 70 por ciento), con alimento y agua disponibles al gusto, utilizando un ciclo de luz-oscuridad inverso (1 0:00 a .m . se apagan las luces, 1 0:00 p.m . se encienden las luces). Se determinan los genotipos a partir del ADN de los aprietes de la cola tomados a las 3 semanas de edad . El ADN se aisla utilizando un kit de Qiagen (Valencia, CA). Se dimensionan las repeticiones de CAG mediante reacción en cadena de la polimerasa utilizando los cebadores marcados con FAM : (5'-ATGAAGGCCTTCGAGTCCCTCAAGTCCTTC-3' ) y (5'-GGCGGCTGAGGAAGCTGAGGA-3' ) en regulador AM (Tris-HCI 67 mM [pH de 8.8], NH4S04 1 6.6 mM , MgCI2 2.0 mM , 0.17 miligramos/mililitro de albúmina de suero bovino , 2-mercapto-etanol 1 0 mM ), sulfóxido de dimetilo al 1 0 por ciento, dNTPs 200 mM , 8 nanogramos/microlitro de cebadores con 0.5 Unidades/mililitro de polimerasa Taq . Las condiciones de ciclado fueron de 90 segundos a aproximadamente 94°C, 25 X (30 segundos a aproximadamente 94°C, 30 segundos a aproximadamente 65°C, 90 segundos a aproximadamente 72°C), 1 0 minutos a aproximadamente 72°C. Los productos de la reacción en cadena de la polimerasa se dimensionan utilizando un secuenciador AB I , y los paquetes de software Genescan y Genotyper. El tamaño de la repetición de CGA es de 85 pares de bases menos que el tamaño del producto de la reacción en cadena de la polimerasa. Todos los experimentos se llevan a cabo de acuerdo con , y son aprobados por, el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales en el NI BRI .

Dosificación de compuestos (por ejemplo, los agon istas de ERRy GSK471 6 ó GSK9089 descritos en la presente) Los ratones se pesan semanalmente desde los 21 d ías hasta los 84 d ías de edad . A los 21 d ías de edad , los animales se dividen en dos grupos, y se dosifican oralmente ya sea con el vehículo (agua) o bien con el compuesto a 30 miligramos/kilogramo, en un volumen de dosis de 5 mililitros/kilogramo . La dosis diaria del vehículo o del compuesto se administra a la misma hora cada d ía durante un total de 63 d ías. La prueba para el fenotipo de comportamiento se lleva a cabo del final del período de tratamiento. Se registra la edad de la muerte para cada ratón . Los animales tratados con el fármaco, es decir, con los agonistas de ERRy, muestran una sobrevivencia prolongada , comparándose con los animales no tratados. Pruebas de Comportam iento Rueda para Correr Los ratones se colocan individualmente en jaulas equipadas con una rueda para correr (23 centímetros de diámetro, Mini Mitter Company, I nc. , Bend OR). Se detecta cada rotación de la rueda mediante un imán , y se registra mediante el software VitalView Data Acquisition versión 4.0 (Mini Mitter Company, I nc. , como anteriormente), en etapas de 3 minutos. Las jaulas con ruedas para correr se alojan en gabinetes (8 jaulas/gabi nete) para minimizar la alteración por luz y sonido (luces apagadas a las 1 0:00 a .m . , luces encendidas a las 1 0:00 p.m. ). La actividad de correr se registra continuamente durante 6 a 8 d ías (la mayoría alojados durante 7 a 8 d ías WT, n= 1 2, R6/2 n=21 ). La actividad de correr en la rueda durante las fases de luz y oscuridad se calcula utilizando el ActiView versión 1 .2 (Mini Mitter Company, I nc. , como anteriormente). Las mediciones se calculan a partir de las actividades de correr diarias, o a partir de la sección media de cada exposición a las ruedas para correr (tercero, cuarto, y quinto d ías completos en las ruedas para correr a las 4.5-5.5 semanas, o a las 8.5-9.5 semanas). Las mediciones incluyen: ( 1 ) el máximo número de rotaciones por etapa de tiempo (3 minutos) durante el tercero, cuarto , y quinto d ía, (2) la actividad promedio por etapa de tiempo durante las fases de luz y de oscuridad , derivada a partir de cada d ía sucesivo en las ruedas para correr, (3) la actividad con luz promedio y con oscuridad promedio por etapa de tiempo, derivada a partir de las actividades promediadas durante el tercero, cuarto, y quinto d ías en las ruedas para correr, (4) el número de descansos tomados durante las fases nocturnas de la tercera , cuarta, y quinta noches, (5) el número total de rotaciones corriendo durante el tercero, cuarto, y quinto d ías completos en las ruedas para correr. La actividad (por ejemplo , el número de rotaciones y/o la actividad promedio) mejora cuando se administran los compuestos agonistas de ERRy. Varilla Giratoria (Rotarod) Se utiliza el aparato Rotarod (Ugo Basile, Várese, Italia) para medir la coordinación motriz y el equilibrio. El eje se cubre con hule suave para impedir que los ratones se trepen al eje. La prueba se lleva a cabo aproximadamente a la mitad de la fase de oscuridad , utilizando una luz roja (25 W) para la iluminación. En seguida de 1 5 a 20 minutos de habituación a la sala de prueba, se dan a los ratones tres ensayos (cuando menos 3 minutos entre ensayos) en un protocolo acelerador (de 4 a 40 revoluciones por mi nuto en 1 0 minutos) similar a otros protocolos publicados. Se mide la latencia hasta la caída. Si un ratón cae de la varilla giratoria en menos de 20 segundos, se regresa inmediatamente (hasta tres veces). Los ratones se prueban durante 4 d ías en la l ínea base (4 semanas de edad ) y durante 3 d ías a las 8 semanas de edad . Se calcula la latencia media hasta la caída por ratón en la línea base y a las 8 semanas de edad , y se utiliza para generar medias por grupo. El tiempo en que el tiempo está sobre la varilla giratoria es incrementado por los compuestos agonistas de ERRy. Fuerza de Sujeción Una escala de peso de resorte (Fisher Scientific, Tustin , CA) con un trapecio unido se cuelga desde un montaje de la pared . A los ratones se les permite sujetarse al trapecio con sus patas delanteras, mientras que el observador jala suavemente la cola del ratón . Se utiliza el peso jalado menos el peso corporal para el análisis. Se dan a los ratones cinco ensayos, a partir de los cuales se utilizan los tres mejores puntajes para el análisis. Los compuestos agonistas de ERRy mejoran la fuerza de sujeción . La invención se ha descrito anteriormente por referencia a las modalidades preferidas, pero, como lo apreciarán los expertos en la materia, son posibles muchas adiciones, omisiones, y modificaciones, todas dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones. Todas las patentes y referencias de literatura citadas en esta memoria descriptiva se incorporan a la presente como referencia en su totalidad . En el caso de inconsistencias, prevalecerá la presente descripción , incluyendo las definiciones e interpretaciones. Otras modalidades serán evidentes para los expertos en la técnica. Se debe entender que la descripción detallada anterior se proporciona solamente para claridad , y es meramente de ejemplo. El espíritu y alcance de la presente invención no están limitados a los Ejemplos anteriores, sino que son abarcados por las siguientes reivindicaciones.

Claims (9)

REIVINDICACION ES

1 . Un método para la prevención , demora de progreso, o tratamiento de una enfermedad o condición seleccionada a partir de diabetes, resistencia a la insulina, enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, obesidad , sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson , enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio, el cual comprende administrar a un animal de sangre caliente, incluyendo el hombre, que lo necesite, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de ERRy.

2. Una composición farmacéutica , la cual comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de ERRv, en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, para la prevención, demora de progreso, o tratamiento de una enfermedad o condición seleccionada a partir de diabetes, resistencia a la insulina, dislipidemia, capacidad de resistencia al ejercicio, obesidad , sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson , enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio.

3. El uso un agonista de ERRv, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la prevención , demora de progreso, o tratamiento de una enfermedad o condición seleccionada a partir de diabetes, resistencia a la insulina, enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia , obesidad , sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio.

4. El uso de acuerdo con la reivindicación 3 , el método de acuerdo con la reivindicación 1 , o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2, en donde la enfermedad tratada se selecciona a partir de diabetes tipo 2 , enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, o enfermedad de Huntington.

5. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, el método de acuerdo con la reivindicación 1 , o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2, para la mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio.

6. Un método para la prevención o demora de progreso de diabetes tipo 2, el cual comprende administrar a un animal de sangre caliente, incluyendo el hombre, que sufra de metabolismo deteriorado de la glucosa , una cantidad terapéuticamente efectiva de u n agonista de ERRv.

7. Una composición farmacéutica, la cual comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de ERRy, en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, para la prevención o demora de progreso de diabetes tipo 2, en un paciente que sufra de metabolismo deteriorado de la glucosa.

8. El uso de un agonista de ERRy, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la prevención o demora de progreso de diabetes tipo 2 , en un paciente que sufra de metabolismo deteriorado de la glucosa.

9. El uso, el método de tratamiento, o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el agonista de ERRy se selecciona a partir de GSK471 6 ó GSK9089, o en cada caso, una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. 1 0. El uso, el método de tratamiento , o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores , en donde la dosificación oral diaria del agonista de ERRy es de entre 1 0 y 500 miligramos, o de entre 1 0 y 200 miligramos. 1 1 . El uso, el método de tratamiento, o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores , en donde el agonista de ERRy exhibe una EC50 comprendida entre 0.001 y 1 0 micro-Molar, o entre 0.001 y 1 micro-Molar. 1 2. El uso, el método de tratamiento, o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el agon ista de ERRy exhibe una EC50 comprendida entre 0.001 y 1 0 micro-Molar, o entre 0.001 y 1 micro- Molar, en un ensayo FRET de ERRy, por ejemplo el ensayo del Ejemplo 1 , o cualquier otro ensayo descrito en la presente. RESU ME N Uso de un agonista de ERRy o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la prevención, demora de progreso, o tratamiento de diabetes, resistencia a la insulina, enfermedad metabólica/síndrome metabólico, dislipidemia, obesidad , sobrepeso, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington , o mejora de la capacidad de resistencia al ejercicio.