MX2008013789A - Biomarcadores para proliferacion endometrial. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un método para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial en una muestra. La invención también se refiere a composiciones o equipos y arreglos para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial. Además, la invención se refiere a un método para el diagnóstico de un trastorno que se encuentra asociado con una disfunción de la proliferación endometrial o una predisposición en un paciente.

Description

" BIOM ARCADO RES PARA PROLI FE RACIÓN E N DOM ETRIAL Campo de la invención La presente invención se refiere a un método para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial en una muestra. La invención también se refiere a composiciones o equipos y arreglos para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial. Además, la invención se refiere a un método para el diagnóstico de un trastorno que se encuentra asociado con una disfunción de la proliferación endometrial o, por lo tanto, una predisposición para la misma en un paciente.

Discusión de antecedentes El endometrio es la membrana mucosa de la cavidad que reviste el útero. Bajo la influencia de las hormonas ováricas, en el endometrio tienen lugar cambios anatómicos y funcionales esenciales. Consecuentemente, bajo condiciones fisiológicas, el endometrio se espesa bajo control hormonal y, si no hay embarazo, se derrama en la menstruación y se regenera cada ciclo menstrual durante la vida reproductiva de la mujer. Al quinto d ía del ciclo menstrual, el endometrio muestra la proliferación de su estroma y glándulas, alargándose las últimas. Las células que revisten las glándulas son cúbicas con membranas de límites definidos y las células estromales son delgadas y alargadas, lo que indica la fase proliferativa inicial. Una semana después, en el doceavo día, las glándulas son muy grandes se - encuentran dilatadas, lo que indica la fase proliferativa tard ía. En esta etapa, los vasos sanguíneos también son prominentes y los tubos capilares se encuentran dilatados. Estos cambios proliferativos se deben a la influencia del estrógeno, en particular del 1 7-p-estradiol segregado por el ovario en ese momento. Después de la ovulación, el cuerpo lúteo produce grandes cantidades de progesterona lo cual induce cambios en las glándulas y la dilatación de las células estromales. Hay un marcado suministro sanguíneo y los tubos capilares se vuelven sinuosoidales. Hacia el final del ciclo de veintiocho d ías, el estroma se vuelve incluso más vascular y edematoso, aparecen pequeñas hemorragias y trombos y el endometrio se segmenta en último término debido a la extracción del soporte hormonal. Las capas superficiales del endometrio, junto con la sangre y los leucocitos, se derraman y descargan, lo que indica que tiene lugar la menstruación. En un día o dos, la superficie rugosa cicatriza sobre el epitelio proliferando desde las porciones básales de las glándulas. Sin embargo, la proliferación endometrial desordenada puede estar asociada con diversas enfermedades ginecológicas que incluyen la endometriosis, adenomíosís, hiperplasia endometrial y cáncer ginecológico. Hasta ahora se sabe poco acerca de los mecanismos fisiológicos y patofisiológicos involucrados en la proliferación endometrial. Además, hasta ahora no se ha establecido ninguna terapia y/o prevención eficaz de enfermedades asociadas con la proliferación endometrial.

La comprensión sobre los mecanismos fisiológicos y patofisiológicos sobre la función de los genes y proteínas involucradas en los mismos pudiese proporcionar herramientas para el diagnóstico y pronóstico de la proliferación endometrial y, por lo tanto, de herramientas para la prevención y/o terapia de enfermedades asociadas con la proliferación endometrial.

Breve descripción de la invención La invención proporciona un método para identificar la etapa de proliferación endometrial en un paciente. Este objeto se logra de acuerdo con la invención proporcionando un método para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial en una muestra, que comprende determinar el nivel de expresión y/o actividad de al menos un gen que es modulado por estrógenos y/o Moduladores Selectivos de Receptores de Estrógeno (SERMs -Selective Estrogen Receptor Modulators) en la muestra. Sorprendentemente, se identificaron varios genes a modularse por estrógeno y SERMs, donde la modulación de los genes se correlaciona con el potencial diferente de estrógenos y/o SERMs para inducir la proliferación endometrial.

Descripción detallada de la modalidad preferida Los estrógenos son las hormonas esferoides esenciales para el desarrollo sexual normal y el funcionamiento de los órganos reproductivos femeninos tales como el endometrio. Los estrógenos - también tienen importantes efectos no reproductivos sobre los huesos y el corazón. Los estrógenos comprenden un grupo de sustancias naturales y sintéticas. Los estrógenos naturales incluyen estradiol (es decir, 17/3-estradiol) , estrona y estriol. Particularmente, bajo la influencia de 1 7/3-estradiol, tiene lugar la proliferación del endometrio. El 17/3-estradiol induce la síntesis de sus propios receptores así como también los receptores de progesterona. Por lo tanto, el endometrio prolifera en la primera mitad del ciclo, es decir, en la fase de proliferación, dando como resultado un cierto grosor del endometrio que alcanza un máximo de 8 a 1 0 mm. Además de los estrógenos naturales, algunas veces los estrógenos se presentan terapéuticamente en forma de conjugado, tal como estradiol de etinilo, por ejemplo, estrógenos conjugados o dietilestilbestrol. Los tejidos en el cuerpo que son sensibles a los estrógenos son llamados "sensibles a los estrógenos" o tejidos "sensibles a estrógenos" e incluyen células del tracto urogenital, sistema cardiovascular y sistema esquelético. Las células que comprenden tejidos sensibles a estrógenos contienen receptores de estrógeno (ER -estrogen receptors). Los ER pueden ser de tipo alfa o tipo beta. Los estrógenos ingresan a las células y se unen a los ER en el citopolasma de tales células y se forma un complejo de estrógeno-ER. Una molécula tal como estrógeno que se une a un receptor se denomina "ligante" . Una vez que el ligante de estrógeno se une a los ER, el complejo de estrógeno-ER migra al núcleo de la célula y se une a secuencias específicas de ADN dentro del genoma celular llamado "elementos de respuesta de estrógeno". Tales elementos de respuesta de estrógeno se encuentran ubicados en los activadores de los genes específicos en el núcleo celular. La unión del complejo de estrógeno-ER a los elementos sensibles al estrógeno ocasiona la activación o supresión de la transcripción de los genes específicos. La activación o supresión de la transcripción genética específica es un tipo de respuesta molecular y/o celular que puede ser el resultado de la formación de un complejo ligante-receptor. Cuando ocurre tal respuesta, se dice que se ha "activado" el receptor. Por lo tanto, los complejos de estrógeno-ER actúan como factores de transcripción para regular la expresión de esos genes. Cuando un ligante se une a un receptor y ocurre una respuesta molecular y/o celular (por ejemplo, regulación de transcripción de genes), tales ligantes son denominados "agonistas" y la respuesta producida se denomina "agonismo". Además del papel que desempeñan los estrogenos y los ER en el desarrollo y funcionamiento normal de los tejidos celulares, los estrogenos y los ER desempeña papeles significativos en algunos estados de enfermedades humanas, tales como un aumento en la proliferación endometrial, endometriosis, cánceres ginecológicos tales como cáncer de mama, etc. Las sustancias que se unen al ER y que evitan las respuestas moleculares y/o celulares ocasionadas por los estrogenos reciben el nombre general "moduladores selectivos de receptores de - - estrógenos" o SERMs. Los SERMs también pueden denominarse "anti-estrógenos" . Los SERMs abarcan ligantes de ER que producen diferentes respuestas. Por ejemplo, un SERM particular puede ser un antagonista. Otro SERM particular puede ser un agonista parcial. Aún otro SERM particular puede unirse a los ER y producir una respuesta molecular y/o celular que sea ligeramente menor en magnitud a la respuesta producida por los estrógenos. Tal SERM daría como resultado una respuesta molecular y/o celular de una magnitud mayor que la respuesta producida por un agonista parcial, pero no se referiría a un agonista porque la respuesta molecular y/o celular es menor que la producida por un estrógeno de tipo agonista. Qu ímicamente, los SERMs pueden clasificarse en tres grupos. El primer grupo comprende derivados de trifeniletileno, de los cuales uno es el tamoxifen, un agente anticancerígeno. Otras sustancias que son derivados de trifeniletileno son toremifen, droloxifen, (3-hidroxitamoxifen), idoxifen, TAT-59 (un derivado fosforilado de 4-hidroxitamoxifen) y GW5638 (un derivado de ácido carboxílico de tamoxifen). El segundo grupo de SERMs comprende otros compuestos no esteroidales. Este grupo comprende EM-800, EM652 (benzopiranos) , raloxifen, LY353381 (SERM3) y LY357489. El tercer grupo de SERMs comprende compuestos esteroidales que tienen una mejor capacidad de inhibir la respuesta producida por los estrógenos. El ICE- 82,780 (ICE) es un miembro de este tercer grupo. Los listados de sub-sensores que comprenden cada grupo no están completos y pueden existir otros. De acuerdo con la presente invención, se ha descubierto - - que el nivel de expresión y/o actividad de algunos genes se modula por los estrógenos y/o SERMs que se correlacionan con el potencial diferente de los estrógenos y SERMs a fin de inducir la proliferación celular. Por lo tanto, la medición de los niveles de expresión y/o actividad de algunos genes proporciona un método para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial en una muestra. Preferentemente, el estrógeno es estradiol y los SERMs son tamoxifen y/o raloxifen. En una modalidad preferida, el método de la invención, los genes que se modulan por estrógenos y/o SERMs son genes de mam íferos, preferentemente genes de seres humanos. El método de la presente invención se considera para la aplicación en medicina para seres humanos, veterinaria y/o diagnóstica. Preferentemente, se selecciona al menos un gen que es modulado por estrógenos y/o SERMs a partir del grupo que consiste en los genes gradiente anterior 2 homólogo (Xenopus laevis) (I D de Gen 10551 ); proteoglicano 2 de sulfato de condroitina (versican) (I D de Gen 13003); colágeno, tipo I , alfa 1 (ID de Gen 1 277); colágeno, tipo I , alfa 2 (I D de Gen 1278); colágeno, tipo I I I , alfa 1 , (síndrome de Ehlers-Danlos tipo IV dominante autosómico) (I D de Gen 1281 ) ; colágeno, tipo IV, alfa 1 (ID de Gen 1282); colágeno, tipo VI , alfa 3 (ID de Gen 1293); cinasa de creatina, cerebro (I D de Gen 24264); dineína, polipétido ligero y citoplásmico 1 (I D de Gen 8655); deshidrogenasa de gliceraldehído-3-fosfato (ID de Gen 2597); proteína 1 de 27kDa de choque térmico (ID de - - Gen 3315); probable ortólogo de brote de extremidad de ratón y gen de corazón (ID de Gen 81606); oxidasa de lisilo tipo 1 (ID de Gen 4016); antígeno de melanoma, familia D, 1 (ID de Gen 9500); proteína de interacción con membrana RGS16 (ID de Gen 51573); reforzador de C-endopeptidasa de procolágeno (ID de Gen 5118); sintasa 21kDa de prostaglandina D2 (cerebro) (ID de Gen 5730); proteína 4 relacionada-frisada segregada (ID de Gen 6424), inhibidor de proteinasa de serina (o cisteína), subtipo H (proteína 47 de choque térmico), miembro 1, (proteína de unión de colágeno 1) (ID de Gen 871); tropomiosina 1 (alfa) (ID de Gen 7168) y/o proteína 5 de unión de factor de crecimiento de tipo insulina (ID de Gen 3488) y/o combinaciones de los mismos. Más preferentemente, al menos un gen es colágeno, tipo I, alfa 1 (ID de Gen 1277); colágeno, tipo I, alfa 2 (ID de Gen 1278); colágeno, tipo III, alfa 1, (síndrome de Ehlers-Danlos tipo IV autosómico dominante) (ID de Gen 1281); cinasa de creatina, cerebro (ID de Gen 24264) y/o prostaglandina D2 sintasa 21 kDa (cerebro) (ID de Gen 5730). Muy preferentemente, al menos un gen es prostaglandina D2 sintasa 21 kDa (cerebro9 (ID de Gen 5730). Los números de acceso de los genes anteriormente mencionados se indican para referencia en la base de datos genética pública NCBI Entrez Gene (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/ uery.fcgi?db=qene). En una modalidad preferida de la invención, el nivel de expresión y/o actividad genética de al menos un gen que es modulado por estrógenos y/o SERMs se determina al medir el nivel de transcripción de los genes. Sorprendentemente, se descubrió que el nivel de las transcripciones (ver el Ejemplo 1) se encuentra asociado con una potencia estrogénica diferente de estrógenos y SERMs para inducir la proliferación endometrial. Preferentemente, la determinación de significación puede llevarse a cabo como se describe en el Ejemplo 1. La determinación de significación puede realizarse mediante un análisis de expresión genética de un número suficiente, por ejemplo, de al menos 500, preferentemente, 500 a 700 conjuntos de sonda (genes). El tejido a partir del cual se obtienen las transcripciones es preferentemente tejido pituitario y uterino. Los métodos para medir el nivel de transcripción genética comprenden medir el nivel de ARNm. El ARN puede aislarse a partir de las muestras por métodos bien conocidos por aquellos expertos en la materia, por ejemplo, como se describe en Molecular Cloning, A Laboratory Manual (Clonación Molecular, Un manual de laboratorio), Volumen 1, Capítulo 7, págs. 7.4 a 7.12, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 3a Edición (2001). En una modalidad preferida de la invención, la determinación del nivel de transcripción se realiza utilizando una reacción de hibridación. Normalmente, la reacción de hibridación involucra la hibridación de al menos un oligonucleótido o polinucleótido en un producto de transcripción, un ARNm. Preferentemente, la - ¬ determinación comprende adicionalmente una reacción de alargamiento y/o amplificación. En una modalidad preferida de la invención, la amplificación comprende al menos una técnica seleccionada a partir del grupo que consiste en PCR de transcriptasa inversa y/o PCR de tiempo real. Preferentemente, el oligonucleótido o polinucleótido tienen un largo suficiente para hibridarse específicamente en transcripciones complementarias de los genes anteriores, de acuerdo con la invención. Como se utiliza en la presente, los términos "oligonucleótido" o "polinucleótido" se refieren a un ácido nucléico monocatenario. En términos generales, el oligonucleótido o polinucleótido tendrán un largo de 16 a 20 nucleótidos, aunque en algunos casos serán deseables las sondas más grandes de al menos 20 a 25 nucleótidos. El oligonucleótido o polinucleótido pueden marcarse con uno o más residuos de marcado para permitir la detección de los complejos de polinucleótido de sonda/objetivo hibridados. Los residuos marcados pueden incluir composiciones que pueden ser detectadas por medios espectroscópicos, bioquímicos, fotoquímicos, bioelectrónicos, inmunoquímicos, eléctricos, ópticos o químicos. Los ejemplos de residuos de marcado incluyen, pero no se limitan a, radioisótopos, por ejemplo, 32P, 33P, 35S, compuestos quimioluminiscentes, proteínas de unión marcadas, átomos de metales pesados, marcadores espectroscópicos tales como marcadores y tintes fluorescentes, enzimas enlazadas, etiquetas de espectrometría de masa y marcas magnéticas. De acuerdo con otra modalidad preferida de la invención , el nivel de expresión genética se determina midiendo el nivel de un producto proteínico de al menos un gen que es modulado por estrógenos y/o SERMs. Preferentemente, el producto proteínico se selecciona a partir del grupo que consiste en los productos proteínicos con los números de acceso correspondientes gradiente anterior 2 homólogo (NP_006399), proteoglicano 2 de sulfato de condroitina (versican) (NP_004376), preproproteína de colágeno de tipo I de alfa 1 (NP_000079), colágeno tipo I alfa 2 (NP_000080), colágeno tipo I I I alfa 1 (NP_000081 ), colágeno tipo IV alfa 3 isoforma 1 , precursor (NP_000082) , precursor de colágeno tipo IV alfa 4 (NP_000083), preproproteína de colágeno tipo IV alfa 1 (NP_001 836), precursor de isoforma 1 de colágeno tipo IV alfa 3 (NP_004360), cinasa de creatina cerebral (NP_001 814), polipéptido ligero de dineína citoplasmática (NP_003737), deshidrogenasa de gliceraldehído-3-fosfato (NP_002037), sintetasa de glicil-ARNt (NP_002038), detención del crecimiento-específico 1 (NP_002039), proteína 1 de 27kDa de choque térmico (NP_001 531 ), proteína hipotética DKFZp 566J091 (NP_1 1 21 77), oxidasa de lisilo tipo 1 (N P_005567), antígeno de melanoma de familia D, 1 isoforma b (NP_008917), proteína de interacción de membrana de RGS 16 (NP_057725), reforzador de C-endopeptidasa de procolágeno (NP_002584), sintasa de prostaglandina D2 21 kDa (N P_000945) , proteína 4 relacionada-frisada segregada (N P_003005) , inhibidor de proteínasa de serina (o cisteína) , subtipo H 1 , precursor de miembro 1 (NP_001226), tropomiosina 1 (alfa) (NP_000357) y/o proteína 5 de unión de factor de crecimiento de tipo insulina (NP_000590) .

Más preferentemente, el producto proteínico es preproproteína de colágeno tipo I alfa 1 (NP_000079), colágeno tipo I alfa 2 (NP_000080), colágeno de tipo I I I alfa 1 (NP_000081 ) , cinasa de creatina cerebral (N P_001814) y/o sintasa de prostaglandina D2 21 kDa (NP_000945). Muy preferentemente, el producto proteínico es sintasa de prostaglandina D2 21 kDa (NP_000945). Todas las proteínas anteriormente mencionadas se seleccionaron a partir de la base de datos disponible públicamente para la base de datos de secuencias proteínicas NCBI Entrez Protein (http://www. ncbi . nlm . ni h.gov/entry/querv.fcq¡?db=protein). Preferentemente, el nivel del producto proteínico se determina por unión enzimática, métodos inmunológicos y/o físicos, los cuales son adecuados para la determinación proteínica tal como, por ejemplo, inmunoanálisis o espectrometría de masa. La expresión de al menos una proteína o un fragmento de la misma, por ejemplo, dominio catalítico, puede detectarse por una sonda que se marca detectablemente, o que puede marcarse secuencialmente. En términos generales, la sonda puede ser un anticuerpo, un derivado de anticuerpo o un fragmento de anticuerpo que es capaz de reconocer la proteína expresada. Como se utiliza en la presente, el término "anticuerpo" incluye, pero no se limita a, anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales, anticuerpos humanizados o quiméricos y fragmentos de anticuerpos funcionales biológicamente, los cuales son aquellos fragmentos suficientes para la unión del fragmento de - - anticuerpos a la proteína o un fragmento de la misma. Para la producción de anticuerpos en una proteína codificada por uno de los genes descritos o en un fragmento de la proteína, diversos animales huésped pueden inmunizarse por la inyección con el polipéptido o una porción del mismo. Tales animales huésped pueden incluir, pero no se limitan a, conejos, ratones y ratas, etc. Pueden utilizarse diversos aditivos para incrementar la respuesta inmunológica, dependiendo de las especies huésped, incluyendo, pero sin limitarse a, adyuvante de Freund (completo e incompleto), geles minerales tales como hidróxido de aluminio, sustancias activas superficiales tales como lisolecitina, polioles plurónicos, polianiones, péptidos, emulsiones de aceite, hemocianina de lapa californiana, dinitrofenol y aditivos humanos potencialmente útiles tales como BCG (bacilo Calnett-Guerlin) y Corinebacterium parvum. Los anticuerpos policlonales son poblaciones heterógenas de moléculas de anticuerpos derivadas de los sueros de animales inmunizados con un antígeno, tal como un producto objetivo, o un derivado funcional antigénico del mismo. Para la producción de anticuerpos policlonales, los animales huésped, tales como aquellos descritos con anterioridad, pueden inmunizarse por inyección con la proteína codificada, o una porción de la misma, complementada con aditivos como se describe con anterioridad. Los anticuerpos monoclonales (mABs), que son poblaciones homogéneas de anticuerpos en un antígeno particular, pueden obtenerse por cualquier técnica que se proporciona para la producción de moléculas de anticuerpo por líneas celulares continuas en cultivo. Estas incluyen, pero no se limitan a, la técnica de hibridoma de Kohler y Milstein (Nature (Naturaleza), Vol. 256, págs. 495-497 (1975); y la Patente de E.U. No. 4,376,110), la técnica de hibridoma de células B humanas (Kosbor et al., Immunology Today (Inmunología Hoy), Vol. 4, pág. 72 (1983)); Colé et al. Proc. Nati. Acad. Sci. USA, Vol. 80, págs. 2026-2030 (1983), y la técnica de hibridoma de EBV (Colé et al., Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy (Anticuerpos monoclonales y terapia contra el cáncer), Alan R. Liss, Inc. págs. 77-96 (1985)). Tales anticuerpos pueden ser de cualquier clase de inmunoglobulina, incluyendo IgG, IgM, IgE, IgA, IgD y cualquier subclase de los mismos. El hibridoma que produce el mAb de esta invención puede cultivarse in vitro o in vivo. La producción de altas titulaciones de mAbs in vivo hace de este el método de producción actualmente preferido. Además, las técnicas desarrolladas para la producción de "anticuerpos quiméricos" (Morrison et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, Vol. 81, págs. 6851-6855 (1984); Neuberger et al., Nature, Vol. 312, págs. 452-454 (1985) al separar los genes de una molécula de anticuerpo de ratón de especificidad de antígeno apropiado, puede utilizarse junto con los genes derivados de una molécula de anticuerpo humana de actividad biológica apropiada. Un anticuerpo quimérico es una molécula en la cual diferentes porciones se derivan de diferentes especies animales, tales como aquellas que tienen una región variable o hipervariable derivada de un mAB murino y una región constante de inmunoglobulina humana. Alternativamente, las técnicas descritas para la producción de - - anticuerpos monocatenarios (Patente de E. U. No. 4, 946,778; Bird, Science (Ciencia), Vol . 242, págs. 423-426 (1 988); Huston et al. , Proc. Nati. Acad. Sci. USA, Vol. 85, págs. 5879-5883 ( 1 988); y Ward et al. , Nature, Vol. 334, págs. 544-546 ( 1989)) pueden adaptarse para producir anticuerpos monocatenarios de gen expresado diferencialmente. Los anticuerpos monocatenarios se forman al enlazar fragmentos de cadena pesada y ligera de la región Fv mediante un puente de aminoácido, dando como resultado un polipéptido monocatenario. Muy preferentemente, las técnicas útiles para la producción de "anticuerpos humanizados" pueden adaptarse para producir anticuerpos para las proteínas, fragmentos o derivados de los mismos. Tales técnicas se describen en las Patentes de E. U . Nos. 5,932,448; 5,693,762; 5,693,761 ; 5, 585,089; 5, 530, 101 ; 5,569,825; 5,625, 126; 5,633,425; 5,789,650; 5,661 ,016 y 5, 770,429. Los fragmentos de anticuerpos que reconocen epítopes pueden generarse por técnicas conocidas. Por ejemplo, tales fragmentos incluyen, pero no se limitan a, los fragmentos de F(ab')2, los cuales pueden producirse por digestión de pepsina de la molécula de anticuerpos, y los fragmentos de Fab, que pueden generarse al reducir los puentes de bisulfuro de los fragmentos de F(ab')2. Alternativamente, las bibliotecas de expresión de Fab pueden construirse (Huse et al. , Science (Ciencia), Vol. 246, págs. 1 275-1 281 ( 1 989) para permitir una identificación rápida y fácil de fragmentos de Fab monoclonal con la especificidad deseada. El nivel de proteína (fragmento) expresado en una muestra biológica puede determinarse después por métodos de inmunoanálisis los cuales utilizan los anticuerpos, derivados de anticuerpos o fragmentos de anticuerpos descritos con anterioridad. Tales métodos de inmunoanálisis incluyen, pero no se limitan a, Western blotting , Clasificación Celular Activada por Fluorescencia (FACS - fluorescence-activated cell sorting), inmunohistoquímica, pruebas inmunoabsorbentes de enzima enlazada (ELISA - enzyme-linked immunosorbant assays), prueba de inmunopunto de enzima enlazada (ELI SPOT - enzyme linked immuno-spot assay) , transferencia en mancha, análisis de unión proteínica competitivas y no competitivas y otros métodos utilizados comúnmente y descritos detalladamente en la literatura científica y de patentes, y muchos empleados comercialmente . Particularmente preferida, para facilidad de detección, es el ELISA intercalado, del cual existe un cierto número de variaciones, las cuales pretenden ser todas abarcadas por la presente invención. Por ejemplo, en una prueba de avance típica, el anticuerpo no marcado, el derivado de anticuerpo o el fragmento de anticuerpo se inmoviliza sobre un sustrato sólido y la muestra a probarse se pone en contacto con la molécula unida e incubada durante un periodo suficiente para permitir la formación de un complejo binario de anticuerpo-antígeno. En este punto, un segundo anticuerpo, derivado del anticuerpo, o fragmento del anticuerpo marcado con una molécula capaz de inducir una señal detectable, se añade e incuba después, permitiendo tiempo suficiente para la formación de un complejo ternario del anticuerpo marcado con anticuerpo-antígeno. Cualquier material sin reaccionar es enjuagado y la presencia del antígeno se determina por la observación de una señal o puede cuantificarse al compararse con una muestra de control que contiene las cantidades conocidas de antígeno. Las variaciones sobre la prueba en avance incluyen la prueba simultánea en la cual se añaden simultáneamente tanto la muestra como el anticuerpo al anticuerpo unido o una prueba inversa en la cual se combinan primeramente el anticuerpo marcado y la muestra a probarse, se incuban y se añaden al anticuerpo unido superficialmente no marcado. Estas técnicas son bien conocidas por aquellos expertos en la materia y la posibilidad de menores variaciones será fácilmente aparente. Como se utiliza en la presente, la "prueba de intercalado" pretende abarcar todas las variaciones de la técnica básica de dos sitios. Las moléculas relatoras más comúnmente utilizadas para marcar un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o derivado en este tipo de prueba son cualesquier enzimas, moléculas con contenido de fluoróforos o radionúclidos. Sin embargo, como se observa , existe una amplia variedad de diferentes técnicas de ligación las cuales son conocidas por aquellos expertos en la materia. Las enzimas utilizadas comúnmente incluyen peroxidasa de rábano picante, oxidasa de glucosa, beta-galactosidasa y fosfatasa alcalina , entre otros. Los sustratos a utilizarse con las enzimas específicas se seleccionan en términos generales para la producción de un cambio de color detectable después de la hidrólisis por la enzima correspondiente. Por ejemplo, el fosfato de p-nitrofenilo es adecuado para el uso con conjugados de fosfatasa alcalina; para conjugados de peroxidasa, se utilizan comúnmente 1 ,2-fenilenodiamina o toluidino. También es posible emplear sustratos fluorogénicos que proporcionen un producto fluorescente, en lugar de los sustratos cromogénicos descritos con anterioridad. Después, se añade una solución que contiene el sustrato apropiado al complejo terciario. El sustrato reacciona con la enzima enlazada al segundo anticuerpo entregando una señal visual la cual puede cuantificarse adicionalmente, normalmente de manera espectrofotométrica, para entregar una evaluación de la cantidad de proteína o fragmento de la misma. Alternativamente, los compuestos fluorescentes tales como fluoresceína y rodamina pueden acoplarse químicamente a anticuerpos sin alterar su capacidad de unión. Cuando es activado por iluminación con luz de una longitud de onda particular, el anticuerpo marcado con fluorocromo absorbe la energía de la luz, induciendo un estado de excitabilidad en la molécula, seguido por emisión de la luz a una longitud de onda más larga que lo característica. La emisión aparece como un color característico detectable visualmente con un microscopio de luz. Las técnicas de inmunofluorescencia y EIA se encuentran ambas bien establecidas en la materia y son particularmente preferidas para el presente método. Sin embargo, también pueden emplearse otras moléculas relatoras, tales como radioisótopos, moléculas quimioluminiscentes o biolumíniscentes. Será fácilmente aparente para los expertos en la materia cómo varía el procedimiento para adecuarse al uso requerido. Preferentemente, la muestra que se encuentra sujeta al método de acuerdo con la invención es un fluido corporal o una muestra de tejido. Preferentemente, el fluido corporal es sangre, plasma, orina - - y/o suero. Un aspecto adicional de la invención se refiere a una composición o equipo para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial en una muestra, que comprende reactivos para determinar el nivel de expresión y/o actividad genética de al menos un gen que es modulado por estrógenos y/o SERMs. Preferentemente, la expresión y/o actividad genética de al menos un gen que es modulado por estrógenos y/o SERMs se selecciona a partir del grupo que consiste en los genes como se definió con anterioridad. En una modalidad preferida de la invención, la composición o equipo comprende reactivos para determinar el nivel de transcripción de al menos un gen que es modulado por estrógenos y/o SERMs. Preferentemente, los reactivos para determinar el nivel de transcripción comprenden una sonda de hibridación y, opcionalmente, los iniciadores para alargamiento y/o amplificación . Preferentemente, la sonda e iniciadores de hibridación son capaces de unirse a una transcripción de los genes anteriormente mencionados. Otra modalidad preferida de la invención comprende una composición o equipo para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial en una muestra, que comprende reactivos para determinar el nivel de un producto proteínico codificado por al menos un gen como se definió con anterioridad. Preferentemente, la composición o equipo comprende reactivos para la determinación enzimática, de unión , fisiológica e/o inmunológica con objeto de determinar el nivel de un producto proteínico codificado por al menos un gen como se definió con anterioridad. Más preferentemente, la composición o equipo comprende al menos un anticuerpo, derivado de anticuerpo o fragmento de anticuerpo para unirse al menos a un producto proteínico codificado por al menos un gen como se definió con anterioridad. Preferentemente, la composición o equipo comprende un anticuerpo monoclonal como se describe detalladamente con anterioridad. En otra modalidad preferida, se proporciona una composición o equipo, que comprende además un dispositivo para recoger una muestra biológica. Más preferentemente, la composición o equipo de la invención comprende además un dispositivo para recoger una muestra biológica de un paciente y, además puede comprender instrucciones para el uso del equipo y la interpretación del nivel determinado de expresión genética y/o la actividad y/o nivel del producto proteínico. Un aspecto aún adicional de la invención se refiere a un arreglo para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial en una muestra, que comprende un vehículo y una sonda para determinar el nivel de expresión y/o actividad y/o el nivel de transcripción de al menos un gen que es modulado por estrógenos y/o SERMs en la muestra. Un arreglo es un método particularmente útil para detectar el nivel de transcripciones de ARNm en un arreglo ordenado de oligonucleótidos o polinucleótídos. Típicamente, los oligonucleótidos o - polinucleótidos utilizados en este método de hibridación se unen a un soporte sólido. Los ejemplos de soportes sólidos incluyen , pero no se limitan a, membranas, filtros, cortes, papel, nylon, obleas, fibras, lechos magnéticos o no magnéticos, geles, tubería, polímeros, discos de cloruro de polivinilo, etc. Puede utilizarse cualquier superficie sólida a la cual pueden unirse los oligonucleótidos o polinucleótidos, sea directamente o indirectamente, sea covalentemente o no covalentemente. Tales arreglos de sonda para monitorear la expresión pueden prepararse y utilizarse y las técnicas conocidas por aquellos expertos en la materia como se describe en los manuales de la compañía Affymetrix, por ejemplo. Tal método permite medir el nivel de transcripción de una pluralidad de genes simultáneamente para generar perfiles o patrones de expresión genética . Además, un arreglo es un método preferido para determinar la presencia de al menos un polimorfismo en los genes como se define con anterioridad. Tal arreglo comprende preferentemente un veh ículo que tiene inmovilizado en el mismo a al menos una sonda para determinar la presencia de al menos un polimorfismo de un gen que es modulado por estrógenos y/o SERMs. Preferentemente, el vehículo de arreglo, por ejemplo, un vehículo plano o un dispositivo de microcanal, ha inmovilizado al mismo una pluralidad de sondas diferentes ubicadas en diferentes áreas del vehículo las cuales se encuentran diseñadas de manera tal que pueden unir moléculas de ácido nucléico, por ejemplo, moléculas de ARN o moléculas de ADN, productos de amplificación, productos de alargamiento de iniciador, etc. , que contiene la secuencia en la cual se encuentra ubicado el polimorfismo a ser probado. Consecuentemente, puede realizarse una identificación del polimorfismo a analizarse por detección de un caso de unión de sitio específico de la molécula de muestra de ácido nucléico a la sonda inmovilizada en el vehículo. Un aspecto adicional de la invención se refiere a un método para el diagnóstico de un trastorno y/o condición que se encuentra asociada con proliferación endometrial o una predisposición para la misma en el paciente, que comprende determinar el nivel de expresión y/o actividad de al menos un gen como se define con anterioridad en la muestra, donde un nivel de expresión y/o actividad se desvían sustancialmente del valor de referencia para un paciente saludable es indicativo de una disfunción de proliferación endometrial o una predisposición para la misma. El término "trastorno" se define como un estado patológico de un mam ífero, preferentemente un ser humano, y el término "padecimiento" se define como un estado no patológico de un mamífero , preferentemente un ser humano. En el contexto de la invención, una condición que se encuentra asociada con la proliferación endometrial, es, por ejemplo, embarazo u ovulación, mientras que un padecimiento que se encuentra asociado con la proliferación endometrial es, por ejemplo, endometriosis o endometritis. Preferentemente, un método para el diagnóstico de un trastorno de acuerdo con la invención se encuentra asociado con una disfunción de la proliferación endometrial . La presente invención describe por vez primera genes que se expresan diferencialmente en pacientes que tienen una disfunción de la proliferación endometrial o una predisposición para la misma. El perfil de expresión genética derivado de la muestra biológica obtenida del paciente puede compararse con un perfil de expresión genética derivado de la muestra obtenida de un paciente o población de pacientes no afectada por la disfunción o proliferación endometrial o una predisposición para la misma. Por lo tanto, puede determinarse si el paciente es afectado o se encuentra en riesgo de ser afectado por una disfunción o proliferación endometrial. Preferentemente, el paciente es un mam ífero, más preferentemente un ser humano. En una modalidad preferida, el nivel de expresión y/o actividad genética se determina midiendo el nivel de transcripción de al menos un gen y/o el nivel de un producto proteínico. Las proteínas codificadas por los genes anteriormente mencionados pueden utilizarse como biomarcadores para la proliferación endometrial, si es mensurable en fluidos corporales. Preferentemente, el trastorno y/o padecimiento asociados con la proliferación endometrial o una predisposición para la misma se selecciona a partir del grupo que consiste en atrofia endometrial , amenorrea de endometrio no desarrollado, endometritis, proliferación endometrial incrementada, endometriosis, ciclo menstrual alterado, embarazo, ovulación, infertilidad, hiperplasia endometrial , pólipos endometriales y/o tumores ginecológicos. La atrofia endometrial es un trastorno en el que el endometrio resiste un desarrollo apropiado. Una causa típica para atrofia endometrial es el tratamiento a largo plazo con gestágenos, ocasionando un agotamiento acelerado del estrógeno en el organismo. El endometrio puede subdesarrollarse como consecuencia de una falla del desarrollo uterino. Además, las anormalidades menstruales tales como amenorrea se encuentran asociadas con una disfunción de proliferación endometrial. La amenorrea se define como la ausencia de menstruación bajo una amplia variedad de circunstancias. Bajo padecimientos fisiológicos, ocurre amenorrea en cuatro fases distintas de la vida: la etapa inicial de la menarquia, durante el embarazo, la lactancia y después del embarazo. Bajo padecimientos fisiológicos, la amenorrea ocurre como una causa de atrofia endometrial o un endometrio subdesarrollado, por ejemplo. Después, los padecimientos relacionados con el ciclo menstrual tales como embarazo y ovulación se encuentran asociados con proliferación endometrial. Un trastorno adicional asociado con una disfunción de la proliferación endometrial es la infertilidad, por ejemplo, como resultado de la endometriosis o endometritis, las cuales se explican a continuación. Otra enfermedad importante asociada con una disfunción de la proliferación endometrial de acuerdo con la invención es la endometriosis. La endometriosis es la segunda enfermedad más común en mujeres y se define como la presencia de células endometriales fuera - - del útero. La endometriosis afecta a aproximadamente 1 de cada 5 mujeres en edad reproductiva y tantas como 1 de 2 mujeres con problemas de fertilidad. Bajo circunstancias normales, el endometrio se encuentra solamente en el útero. En la endometriosis, el tejido con apariencia histológica que se asemeja al endometrio se encuentra fuera del útero, por ejemplo, externamente al útero, en el intestino o incluso en el páncreas o en el pulmón . Aunque estos lugares endometrióticos se encuentran ubicados fuera del útero, también sangran durante la menstruación, por lo que son influidos por las hormonas del ciclo femenino. Dado que los lugares endometrióticos como el endometrio, experimentan cambios de volumen durante el ciclo, estos cambios pueden ocasionar dolor dependiendo de la ubicación. Además, el cuerpo reacciona a las células endometrióticas y la respuesta inflamatoria que ocasiona nuevamente dolor. Además, la inflamación genera adhesiones en el área de los ovarios y las trompas de Falopio y, como resultado, es responsable de la llamada esterilidad mecánica de las mujeres afectadas. Sin embargo, aparentemente, en la endometriosis, también se liberan los mensajeros (por ejemplo, citocinas, prostaglandinas) las cuales pueden reducir la fertilidad de las mujeres afectadas incluso en ausencia de adhesiones. En vista de sus propiedades patobiológicas, las células endometriales podrían clasificarse entre células normales y células rumorosas: por una parte, presentan un comportamiento no neoplásico; sin embargo, por otra parte, al igual que las células tumorosas en - - metástasis, son capaces de moverse a través de l ímites orgánicos en el organismo y de desarrollarse dentro de otros órganos , es decir, presentar un comportamiento invasivo. Por esta razón, las células endometrióticas se definen como "células tumorosas benignas" en la literatura, aunque hasta ahora no se ha encontrado ninguna mutación de tumor específico en los proto-oncogenes en células de este tipo. Un trastorno adicional asociado con una dísfunción de la proliferación endometrial o una predisposición para la misma es la endometritis. Este trastorno se define como la inflamación aguda del endometrio, la cual puede desarrollarse en respuesta a la infección después del nacimiento o aborto o en respuesta a la inserción de un dispositivo anticonceptivo o como parte de una infección gonorréica. Un trastorno adicional asociado de acuerdo con la invención es la hiperplasia endometrial la cual se define como una proliferación endometrial incrementada, particularmente del epitelio glandular. El trastorno se subdivide en grados I a I I I (hiperplasia atípica). En primer lugar, el grado I I I es un trastorno precanceroso del carcinoma endometrial. La hiperplasia endometrial se desarrolla bajo la influencia prolongada de los estrogenos en ausencia de gestágenos ("estrogenos no opuestos"), mayoritariamente en el climaterio y la post-menopausa. Además, pueden ocurrir pólipos endometriales principalmente en el climaterio en 1 0% de todas las mujeres. La mayoría de los pólipos crece en una hiperplasia circunscrita en las básales del endometrio. En pacientes con pólipos endometriales, la incidencia del mioma es mayor que la de la población normal. Esto es - - una indicación de actividad proliferativa general en el útero. Solamente menos del 1 % de casos es un carcinoma descubierto en un pólipo endometrial. En los pólipos endometriales puede ocurrir sangrado irregular o en curso proveniente del útero. Además, varios tumores ginecológicos se encuentran asociados con una disfunción de la proliferación endometrial seleccionada a partir del grupo que consiste en cáncer endometrial, cáncer de mama, cáncer de ovarios, cáncer de vulva y/o cáncer vaginal. El cáncer endometrial es uno de los cánceres ginecológicos más comunes. Generalmente se encuentra en mujeres post-menopáusicas (75%), muy frecuentemente entre las edades de 55 y 65 años y la mayoría, 60%, en la última parte de ese rango. La mayoría de tumores (60%) son adenocarcinomas puros. Pueden dividirse en tres grupos de acuerdo con el grado de diferenciación glandular. En general, este cáncer es de dispersión lenta desde la cavidad uterina, probablemente porque el endometrio carece de linfáticos. En casos avanzados ocurre metástasis distante. Los depósitos pulmonares son los más comunes. La causa actual de este cáncer es desconocida. El argumento se ha centrado alrededor de la asociación incontrovertible entre este tumor y el estrógeno. Se han reportado un mayor número de incidencias en mujeres a quienes se les administró estrógeno solamente como terapia de reemplazo hormonal post-menopáusica y en pacientes que desarrollan tumores de secreción de estrógenos del ovario. La posición central del estrógeno en la etiología del cáncer endometrial se refuerza por el hecho de que la adición de progestágeno al estrógeno en - - la terapia de reemplazo hormonal parece abolir una mayor incidencia del cáncer endometria l . Un aspecto adicional de la i nvención se refiere a un método para examinar un modulador para un trastorno que se encuentra asociado con una disfunción de prol iferación endometria l o una predisposición para la misma, que comprende determinar el nivel de expresión y/o actividad de al menos un gen como se define con anterioridad en una muestra de células en presencia de un agente candidato , cuyo efecto de prol iferación endometrial va a exa minarse , en comparación con el nivel de expresión y/o actividad en ausencia del agente candidato . Tales métodos incluyen pruebas in vivo o basadas en células y/o sin células a fin de identificar compuestos que sean capaces de i nterferir con la expresión y/o actividad de al menos un gen como se define con anterioridad el cual es mod ulado por estrógenos y/o SERMs . La invención se refiere tam bién al uso de a l menos un gen y/o producto proteínico como se define con anterioridad como objetivo para el desarrol lo de un fármaco q ue es activo contra un trastorno y/o padecimiento que se encuentra asociado con proliferación endometrial . La selección como objetivo del fármaco es una estrategia que intenta conseguir el suministro de un com puesto en un tej ido particu lar del cuerpo. La capacidad del fármaco de un objetivo determ inado se define sea por qué tan bien un compuesto, tal como fármacos o anticuerpos de molécula pequeña , pueden exceder el objetivo, o por la eficiencia con la q ue un compuesto puede alcanzar el objetivo. Una larga lista de parámetros influye la capacidad del fármaco de un objetivo determ inado; estas incluyen la ubicación celular, el desarrollo de la resistencia, mecanismos de transporte tales como bombas de exportación, efectos secundarios, toxicidad y otros. Como con los objetivos para la invención terapéutica, van a considerarse receptores, proteínas, enzimas, ADN , ARN y objetivos ribosómicos. De acuerdo con la presente invención, los genes que son modulados por estrógenos y/o moduladores selectivos de receptores de estrógeno (SERMs) , las transcripciones de los genes así como también los productos proteínicos de los mismos son particularmente útiles como objetivos. Al utilizar los genes, las transcripciones y/o productos proteínicos como marcadores como objetivos de tipo fármaco, es posible descubrir nuevas y mejores terapias para trastornos y/o padecimientos asociadas con la proliferación endometrial. De acuerdo con la invención, una composición farmacéutica contiene preferentemente el ingrediente activo en combinación con uno o más veh ículos farmacéuticamente aceptables, excipientes y/o aditivos. Tal composición puede administrarse sola o en combinación con al menos otro agente, tal como un compuesto de estabilización , el cual puede administrarse en cualquier vehículo farmacéutico biocompatible, que incluye sin limitarse a salmuera, salmuera regulada, dextrosa y agua. La composición puede administrarse sola o en combinación con otros agentes, fármacos u hormonas a un paciente, donde el nivel de al menos un gen y/o el nivel de al menos un producto proteínico se desvía sustancialmente de la referencia para un paciente saludable el cual es indicativo para una disfunción de proliferación endometrial o una predisposición para la misma. Las composiciones farmacéuticas pueden adm inistrarse por cualquier número de rutas. Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse por cualquier número de rutas, que incluyen, sin limitarse a medios oral, sublingual, intravenoso, intramuscular, intraarticular, intraarterial, intrademular, intratecal, intraventricular, intraocular, intratecal, intracerebral, intracraneal , respiratorio, intratraqueal, nasofaríngeo, transdérmico, intradérmico, subcutáneo, intraperitoneal, intranasal, enteral, tópico o rectal, infusión o implante. Preferentemente, la ruta de administración es oral. Cuando se administra, la composición farmacéutica de la presente invención es administrada en preparaciones farmacéuticamente aceptables. El término "vehículo farmacéuticamente aceptable" como se utiliza en la presente se refiere a uno o más materiales de relleno sólidos o l íquidos compatibles, diluyentes o sustancias de encapsulación que son adecuadas para la administración en mam íferos, incluyendo seres humanos. El término "vehículo" denota un ingrediente orgánico o inorgánico, natural o sintético, con el cual se combina el ingrediente activo para facilitar la aplicación. El término "farmacéuticamente aceptable" se refiere a un material no tóxico que no interfiere con la efectividad de la actividad biológica de los ingredientes activos. Tales preparaciones pueden contener rutinariamente concentraciones farmacéuticamente aceptables de sales, agentes reguladores, conservadores, vehículos compatibles, agentes potencializadores inmunes complementarios tales como aditivos y citocinas y opcionalmente otros agentes terapéuticos, tales como agentes quimioterapéuticos. Cuando son utilizadas en medicina, las sales deben ser farmacéuticamente aceptables, pero pueden utilizarse convenientemente sales no farmacéuticamente aceptables para preparar sales farmacéuticamente aceptables de las mismas y no quedar excluidas del alcance de la invención. Las composiciones farmacéuticas pueden contener agentes reguladores adecuados, incluyendo ácido acético en una sal, ácido cítrico en una sal; ácido bórico en una sal; y ácido fosfórico en una sal. Las composiciones farmacéuticas también pueden contener, opcionalmente, conservadores adecuados, tales como cloruro de benzalconio; clorobutanol; parabenos y tiomersal. Las composiciones farmacéuticas pueden presentarse convenientemente en forma de dosis unitaria y pueden prepararse por cualquiera de los métodos conocidos en las técnicas de farmacia. Todos los métodos incluyen el paso para llevar al agente activo en asociación con un vehículo que constituya uno o más ingredientes accesorios. En general, las composiciones se preparan al llevar uniforme e íntimamente el compuesto activo en asociación con un vehículo líquido, un veh ículo sólido finamente dividido, o ambos, y después, si es necesario conformar el producto. Las composiciones adecuadas para la administración oral pueden presentarse como unidades discretas, tales como cápsulas, tabletas, grageas, conteniendo cada una de ellas una cantidad - - predeterminada del compuesto activo. Otras composiciones incluyen suspensiones en líquidos acuosos o líquidos no acuosos tales como un jarabe, elixir o una emulsión. Las composiciones adecuadas para la administración parenteral comprender convenientemente una preparación estéril acuosa o no acuosa de un polipéptido o ácido nítrico que codificare polipéptido, la cual es preferentemente isotónica con la sangre del recipiente. Esta preparación puede formularse de acuerdo con métodos conocidos utilizando agentes adecuados de dispersión o humectación y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1 , 3-butano diol. Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse se encuentran el agua, solución de Ringer, y la solución de cloruro de sodio isotónico. Además, se emplean convencionalmente aceites fijos y estériles como solvente o medio de suspensión. Para este propósito, puede emplearse cualquier aceite fijo blando incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, pueden utilizarse ácidos grasos tales como ácido fólico en la preparación de los inyectables. La formulación de vehículo adecuada para administraciones oral , subcutánea, intravenosa, intramuscular, etc. , puede encontrarse en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing con . , Easton, PA. Un aspecto adicional de la invención abarca el uso de un modulador de al menos un gen como se define con anterioridad para la elaboración de un medicamento o para la prevención y/o tratamiento o de un trastorno y/o padecimiento que se encuentra asociado con la proliferación endometrial. Preferentemente, el modulador de la composición farmacéutica es un estrógeno y/o un Modulador Selectivo de Receptor de Estrógeno (SERM), un antagonista y/o agonista del mismo tal como un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo , un siRNA (small interfering RNA - ARN de poca interferencia), un miARN (miRNA - microRNA) , una molécula no codificante y/o un ribozima. Los agonistas de proteínas u hormonas, por ejemplo, estrógeno o SERM , son sustancias tales como enzimas, coenzimas, receptores de membrana, etc. , los cuales incrementan la actividad de la proteína u hormona respectiva. En un aspecto, los anticuerpos, que son específicos para los productos proteínicos de la invención y productos proteínicos homólogos pueden utilizarse directamente como modulador, por ejemplo, un antagonista o un agonista o indirectamente como un mecanismo de selección de objetivo o de suministro para aportar un agente farmacéutico a las células o tejidos que expresan la proteína. Los anticuerpos pueden generarse utilizando métodos bien conocidos en la materia. Tales anticuerpos pueden incluir, pero sin limitarse a, fragmentos policlonales, monoclonales, monocatenarios quiméricos, fragmentos de Fab y fragmentos producidos por una biblioteca de expresión de Fab. Los anticuerpos de neutralización (es decir, aquellos que inhiben la formación de dímeros) son especialmente preferidos para - - su uso terapéutico. Para la producción de anticuerpos, pueden inmunizarse diversos huésped es que incluyen cabras, conejos, ratas, ratones, seres humanos, y otros, por la inyección con la proteína o algún fragmento u oligopéptido del mismo que tenga propiedades inmunogénicas. Dependiendo de las especies de huésped, pueden utilizarse diversos aditivos a fin de incrementar la respuesta inmunológica. Se prefiere que los partidos, fragmentos u oligopéptidos utilizados para inducir anticuerpos los productos proteínicos tengan una secuencia de aminoácidos que consiste en al menos cinco aminoácidos, y más preferentemente al menos 10 aminoácidos. Los anticuerpos monoclonales a los productos proteínicos pueden prepararse utilizando cualquier técnica que se proporcione para la producción de las moléculas de anticuerpos por líneas celulares continuas en cultivo. Estas incluyen, pero no se limitan a, la técnica del hibridoma, la técnica del hibridoma de células B humanas, y la técnica del hibridoma de EBV (Kóhler, G. et al. (1975) Nature 256: 495-497; Kozbot, D. et al. (1985) J. Immunol. Methods 81:31-42; Cote, R. J. et al. Proc. Nati. Acad. Sci. 80:2026-2030; Colé, S. P. et al. (1984) Mol. Cell Biol.62:109-120). Además, pueden utilizarse las técnicas desarrolladas para la producción de "anticuerpos quiméricos", la división de los genes de anticuerpos de ratón en genes de anticuerpos humanos para obtener una molécula con especificidad antigénica y actividad biológica apropiadas (Morrison, S. L. et al. (1984) Proc. Nati. Acad. Sci. 81:6851- 6855; Neuberger, M. S. et al. ( 1 984) natura 31 2:604-608; Takeda, S. et al. (1 985) Nature 314:452-454). Alternativamente, las técnicas descritas para la producción de anticuerpos monocatenarios pueden adaptarse, utilizando los métodos conocidos en la materia, para producir anticuerpos monocatenarios específicos para los productos proteínicos de la invención y productos proteínicos homólogos. Los anticuerpos con especificidad relacionada, pero de distinta composición idiotípica, pueden generarse al barajar las cadenas a partir de bibliotecas de inmunoglobulina combinacional aleatoria (Burton, D. R. ( 1 991 ) Proc. Nati. Acad. Sci . 88: 1 1 20-1 1 1 23). Los anticuerpos también pueden producirse induciendo la producción in vivo en la población linfocítica o examinando las bibliotecas de inmunoglobulina recombinante o paneles de reactivos de unión altamente específicos humo se describen la literatura (Orlandi , R. et. al. (1989) Proc. Nati . Acad. Sci. 86: 3833-3837 ; Winter, G. et al. (1991 ) Nature 349:293-299). También pueden generarse fragmentos de anticuerpo que contienen sitios de unión específica para los productos proteínicos. Por ejemplo, tales fragmentos incluyen, pero no se limitan a, los fragmentos de F(ab')2 que pueden producirse por la digestión de pepsina de la molécula de anticuerpo y los fragmentos de Fab que puede generarse al reducir los puentes de disulfuro de fragmentos de F(ab')2. Alternativamente, pueden construirse bibliotecas de expresión para permitir una rápida y fácil identificación de los fragmentos de Fab monoclonal con la especificidad deseada (Huse, W. D. et al. ( 1989) Science 254: 1 275-1 281 ).

Pueden utilizarse diversas inmunoanálisis para examinar e identificar los anticuerpos que tengan la especificidad deseada. Son conocidos en la materia a diversos protocolos para la unión competitiva y pruebas inmunoradiométricas que utilizan ya sea anticuerpos policlonales o monoclonales con especificidades establecidas. Típicamente, tales inmunoanálisis involucran la medición de formación compleja entre la proteína y su anticuerpo específico. Es preferido un inmunoanálisis monoclonal y de doble sitio que utiliza anticuerpos monoclonales reactivos a dos epítopes proteínicos sin interferencia, pero también puede emplearse un análisis de unión competitiva (Maddox, supra). En otra modalidad de la invención, pueden utilizarse polinucleótidos o fragmentos de los mismos o moléculas moduladoras de ácidos nucléicos tales como moléculas no codificantes, aptámeros, moléculas de siARN o ribozimas para propósitos terapéuticos. En un aspecto, los aptámeros, es decir, moléculas de ácido nucléico, que son capaces de unirse a un producto proteínico de la invención y modular su actividad, pueden generarse por un procedimiento de examinación y selección que involucra el uso de bibliotecas de ácido nucléico combinacional. En un aspecto adicional pueden utilizarse moléculas no codificantes en situaciones en las cuales sería deseable bloquear la transcripción del ARNm. En particular, las células pueden transformarse con secuencias complementarias a los polinucleótidos que codifican los productos proteínicos como se define con anterioridad y los productos proteínicos homólogos. Consecuentemente, las moléculas no codificantes pueden utilizarse para modular la actividad del producto proteínico o para lograr la regulación de la función genética. Tal tecnología es ahora bien conocida en la materia, los oligómeros codificantes o no codificantes o fragmentos más grandes, pueden diseñarse a partir de diversas ubicaciones a lo largo de las regiones de codificación o de control de las secuencias que codifican los productos proteínicos. Los vectores de expresión derivados de retrovirus, adenovirus, herpes o virus de vacunas, o de diversos plásmidos bacteriales pueden utilizarse para el envío de secuencias nucleótidas al órgano, tejido o población celular seleccionado(a) como objetivo. Pueden utilizarse métodos, que sean conocidos por aquellos expertos en la materia, para construir vectores recombinantes, que expresen las moléculas no codificantes complementarias a los polinucleótidos de los genes que codifican las proteínas de la invención y productos proteínicos homólogos. Estas técnicas se describen tanto en Sambrook et al. (supra) como en Ausubel et al. (supra). Los genes que codifican los productos proteínicos de la invención pueden apagarse al transformar una célula o tejido con los vectores de expresión , los cuales expresan altos niveles de polinucleótidos que codifican los productos proteínicos de la invención y productos proteínicos homólogos de los mismos. Tales construcciones pueden utilizarse para introducir secuencias codificantes o no codificantes no traducibles en una célula. I ncluso ante la ausencia de integración en el ADN , tales vectores pueden continuar escribiendo moléculas de ARN hasta que son deshabilitados por nucleasas endógenas. La expresión transitoria puede durar un mes o más con un vector sin réplica o incluso más si los elementos de réplica apropiados son parte del sistema vectorial. Como se mencionó con anterioridad, las modificaciones de la expresión genética pueden obtenerse al diseñar moléculas no codificantes, por ejemplo, ADN, ARN o análogos de ácidos nucléicos tales como APN (PNA - pentose nucleic acid), a las regiones de control de los genes que codifican los productos proteínicos definidos con anterioridad y productos proteínicos homólogos, es decir, los activadores, reforzadores e ¡ntrones. Son preferidos los oligonucleótidos derivados del sitio de inicio de trascripción, por ejemplo, entre las posiciones -10 y +10 a partir del sitio de inicio. De manera similar, la inhibición puede alcanzarse utilizando metodología de emparejamiento basada en "triple helicoidal". El emparejamiento de triple helicoidal es útil porque ocasiona la inhibición de la capacidad de la doble helicoidal para abrirse suficientemente para la unión de polimerasas, factores de transcripción o moléculas reguladoras. Los recientes avances terapéuticos que utilizan ADN de tripletes han sido descritos en la literatura (Gee, J . E. et al. ( 1 994) In, Huber, B. E. y B. I . Carr, Molecular and Immunologic Approaches (Planteamientos moleculares e inmunológicos), Futura Publishing Co. , Mt. Kisco, N.Y. ). Las moléculas no codificantes también pueden diseñarse para bloquear la traducción del ARNm al evitar la transcripción de la unión en ribosomas. También pueden utilizarse ribozimas, moléculas de ARN enzimático para catalizar la segmentación específica de ARN. El mecanismo de la acción de ribozima involucra la hibridación de secuencia específica de la molécula de ribozima para seleccionar como objetivo de manera complementaria el ARN, seguido por segmentación endonucleolítica. Los ejemplos, que pueden utilizarse, incluyen moléculas de ribozima que pueden catalizar específica y eficientemente la segmentación endonucleolítica de secuencias que codifican los productos proteínicos de la invención y productos proteínicos homólogos. Los sitios de segmentación de ribozima específicos dentro de cualquier objetivo de ARN potencial se identifican inicialmente al explorar la molécula objetivo para los sitios de segmentación de ribozima que incluyen las siguientes secuencias: GUA, GUU y GUC. Una vez identificadas, pueden evaluarse secuencias cortas de ARN de entre 1 5 y 20 ribonucleótidos correspondientes a la región del eje en objetivo que contiene el sitio de segmentación para características estructurales secundarias que pueden volver en operable al oligonucleótido. La conveniencia de los objetivos a candidatos también puede evaluarse al probar la capacidad de acceso a la hibridación con oligonucleótidos complementarios utilizando análisis de protección de ribonucleasa. Las moléculas moduladoras de ácido nucléico, por ejemplo, moléculas no codificantes y ribozimas pueden prepararse por cualquier método conocido en la materia para la síntesis de moléculas de ácido nucléico. Estas incluyen técnicas para sintetizar qu ímicamente oligonucleótido tales como síntesis qu ímica de fosforoamidita de fase - sólida. Alternativamente, pueden generarse moléculas de ARN por transcripción in vitro e in vivo de secuencias de ADN. Tales secuencias de ADN pueden incorporarse a una variedad de vectores con activadores de polimerasa de ARN adecuado tales como T7 o SP6. Alternativamente, estas construcciones de ADNc que sintetizan el ARN no codificantes constitutiva o induciblemente pueden introducirse en líneas celulares, células o tejidos. Las moléculas de ARN pueden modificarse para incrementar la estabilidad intracelular y su vida media. Las posibles modificaciones incluyen , pero no se limitan a, la adición de secuencias distintivas en los extremos 5' y/o 3' de la molécula o modificaciones en la nucleobase, azúcar y/o residuos de fosfato , por ejemplo, el uso de fosforotioato o 2' O-metil en lugar de los enlaces de fosfodiestera dentro de la estructura principal de la molécula. Este concepto es inherente a la producción de PNAs y puede extenderse en todas estas moléculas por la inclusión de bases no tradicionales tales como inosina, queosina y wibutosina, así como también acetil-, metil-, tio-, y formas modificadas similarmente de adenina, citidina, guanina, timina y uridina las cuales no son fácilmente reconocidas por las endonucleasas endógenas. Muchos métodos para introducir vectores en células o tejidos se encuentran disponibles y son igualmente adecuados para su uso invivo, in vitro y ex vivo. Para la terapia ex vivo, los vectores pueden introducirse en células germinales tomadas del paciente y propagarse clonalmente para el transplante autólogo en ese mismo paciente. El envío por transacción y por inyecciones de liposomas puede lograrse utilizando métodos bien conocidos en la materia. Cualquiera de los métodos terapéuticos descritos con anterioridad puede aplicarse a cualquier paciente adecuado incluyendo, por ejemplo, mamíferos tales como perros, gatos, vacas, caballos, conejos, monos y muy preferentemente, seres humanos.

EJEMPLO ANÁLISIS DE EXPRESIÓN GENÉTICA Materiales v métodos Animales El mono cynomolgus OVX (Macaca fascicularis), que ha sido validado como un modelo predictivo útil de resultados en pruebas clínicas humanas de estrógeno y SERMs, se utilizó como modelo de deficiencia de estrógenos. El estudio se realizó de conformidad con la regulación de Salud Animal, Directiva de Consejo No. 86/609/EEC relativa a las leyes, regulaciones o a estipulaciones administrativas referentes a la protección de animales utilizados para a propósitos experimentales o de tipo científico. Los animales se aclimataron a las instalaciones de tratamiento durante al menos 14 días antes del inicio del tratamiento. Los animales recibieron agua ad libitum y aproximadamente 180 g de dieta comprimida de OWM (Dietex Francia, SDS, Saint Gratien, Francia) diariamente al menos 1 hora después de la dosificación, excepto el último día del tratamiento el que los animales fueron sometidos a ayuno. Además, cada animal recibió 2 a frutas o vegetales al día. Los monos cynomolgus hembras sexualmente maduros (Macaca fascicularis obtenidos por R.C. Hartelust BV, Tilburg, Holanda) que tenían aproximadamente 48 meses de edad fueron sometidos a cirugía (OVX o falsa) 10 semanas antes de los tratamientos con el fármaco.

Procedimientos quirúrgicos La ovariectomía se realizó por los protocolos quirúrgicos convencionales en CIT (Evreux, Francia) 10 semanas antes del primer día de tratamiento. Los ovarios se eliminaron después de la anestesia con una inyección intramuscular combinada de xilazina (Rompun®: 0.4 mL/animal, Bayer Pharma División Santé Anímale, Puteaux, Francia) de hidroclórico de cetamina (Imalgéne®: 0.6 mL/kg, Mérial, Lyon, Francia). Los animales operados falsamente fueron sometidos al mismo procedimiento quirúrgico, excepto para la extracción de ovarios.

Análisis de estradiol Los niveles de suero de estradiol se determinaron en cada animal aproximadamente 2 semanas después de la cirugía a fin de verificar el efecto de la ovariectomía. Se recogieron muestras de sangre venosa (aproximadamente 1.5 mL) de animales sin ayuno en tubos sin anticoagulante y fueron analizadas utilizando un radio inmunoanálisis (Sorin, Ecole Nationale Vétérinarie de Lyon, Francia). Además, se realizó el análisis de estradiol aproximadamente 2 y 4 semanas después del inicio de los tratamientos del fármaco para determinar si alguno de - - los animales había desarrollado crecimiento de tejido ovárico ectópico; dichos animales fueron eliminados del estudio y de análisis subsecuentes.

Protocolo de tratamiento Los animales falsamente operados y sometidos a la ovariectomía se dividieron en grupos de 4. Los falsamente operados y un grupo de animales OVX recibieron únicamente el vehículo, mientras que los grupos restantes de monos OVX recibieron estradiol (Sigma No. E8875), o tamoxifen (Tamofene®, Aventis Pharma), o raloxifen (Evista®, Lilly France SA). Los elementos de prueba se prepararon como suspensiones en vehículo y se administrará diariamente por sonda oral. El último día del tratamiento, los animales fueron sacrificados y se sometieron a una profunda anestesia inducida por hidrocloruro sódico de cetamina intramuscular y pentotal sódico intravenoso seguido por desangramiento.

Expresión genética pituitaria y uterina Preparación del tejido La expresión genética se determinó en la pituitaria y el útero al final de la terapia de fármaco. Los tejidos a analizarse (glándula pituitaria y útero) fueron extirpados, congelados inmediatamente en nitrógeno líquido y almacenados a -80 °C hasta que se llevó a cabo la extracción del ARN.

Análisis de microarreglos de ADN El ARN total se obtuvo por extracción de isotiocianato-fenol-cloroformo de guanidinio ácido (Trizol; Invitrogen Life Technologies, San Diego, CA, EUA) y se purificó en una columna de resina de afinidad (RNeasy; Quiagen, Hilden, Alemania) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los experimentos de microarreglos de ADN se realizaron como recomienda el fabricante del sistema GeneChip (Affymetrix, Inc. 2002). Estudios anteriores de microarreglos han comprobado la validez del análisis de chip de ADN de especies cruzadas, por lo que se utilizaron los arreglos de sonda de expresión genética humana HGU133A (Affymetrix Inc., Santa Clara, CA, EUA) con contenido de 22,283 conjuntos de sonda que interrogan básicamente genes humanos anotados. Se utilizó un GeneChip por tejido, por animal. Los archivos de imágenes resultantes (archivos .dat) se procesan utilizando el software Microarray Analysis Suite 5 (MAS 5) (Affymetrix, Inc.). Los archivos de limitados por lengüeta se obtuvieron con contenido de datos referentes a la intensidad de la señal (Signal) y la medición de nivel de expresión categórica (Absolute Cali). Las transcripciones que se encontraron expresadas diferencialmente se indican por referencia por los IDs del Conjunto de Sonda Affymetrix 209173_at, 221731_x_at, 202310_s_at, 202403_s_at, 201852_x_at, 215076_s_at, 211161_s_at, 211980_at, 201438_at, 200884_at, 200703_at, 217398_x_at, 213453_x_at, 212581_x_at, 201841_s_at, 221011_s_at, 203570_at, 209014_at, 202593_s_at, - 202465_at, 211663_x_at, 204051_s_at, 207714_s_at, 206116_s_at y/o 211959_at.

Cuantificación de potencia estrogénica Eje de puntuación estrogénica Para definir un eje de referencia a fin de representar la potencia estrogénica de los tratamientos de fármaco, se seleccionaron dos condiciones para representar los extremos - los animales sometidos a la ovariectomía (grupo OVX; deficiente de estrógenos) y el grupo OVX tratado con estradiol (OVX-EE) (estrógeno máximo). Estos dos grupos se utilizaron para escalar cuantitativamente el eje al establecer las puntuaciones de potencia estrogénica relativa en 0% y 100%, respectivamente. Después se tabuló la expresión genética de los animales falsamente operados y de los animales tratados con tamoxifen o raloxifen sobre el eje a fin de clasificar su potencia estrogénica. La selección de los genes (conjuntos de sonda) utilizada para este análisis se eligió sobre la base de criterios matemáticos y estadísticos a fin de cumplir con una definición operacional para la regulación por estrógeno; además, los genes fueron categorizados en grupos con base en un conocimiento a priori de la función biológica. El conjunto de sonda A (n = 544) se definió al aplicar los siguientes criterios de filtración a los datos de expresión genética; (1) la intensidad de señal promedio para una sonda determinada debe ser mayor que 50 en al menos una de las condiciones de prueba, (2) debe haber un cambio 1.5 veces o mayor (ascendente o descendentemente) en el nivel - - de expresión al comparar la condición de OVX a simular y (3) el patrón de expresión alterada identificado como un subconjunto del conjunto A con base en la utilización del conocimiento a priori de las funciones genéticas y de grupos genéticos en categorías (transducción de señal, transporte, matriz extracelular y factores de crecimiento). El conjunto de sondas C (n = 225) se definió utilizando parámetros matemáticos y estadísticos no sesgados y severos para filtrar los datos, incluyendo únicamente aquellas sondas que (1) tuviesen una intensidad de señal media mayor que 50 en cualquiera o ambas condiciones de OVX y OVX-EE; (2) presentasen un cambio 1.5 veces o mayor en la expresión entre estas condiciones, y (3) presentase un P .05 (utilizando una prueba f para la significación estadística en los valores de intensidad transformada con logi0). La matriz de covarianza de los datos de expresión genética (GEP - gene expression) transformada con log 10 de los animales OVX y OVX-EE se sometió a un análisis de componentes principales (PCA -principal component analysis), un método de reducción dimensión al estadístico que ha sido utilizado con anterioridad para describir los datos de expresión genética de microarreglos. El algoritmo de PCA calcula las llamadas "cargas" y "puntuaciones". Las cargas son los pesos en las combinaciones lineales de las variables (genes), que definen los ejes (Componentes Principales, PCs - Personal Components) del sistema de coordenadas. Las puntuaciones representan las coordenadas de los animales individuales con base en sus datos de GEP en el mismo sistema de coordenadas.

Después, los demás datos de GEP transformados con logaritmos se utilizaron como entrada de este modelo de PCA y se calcularon sus puntuaciones. Únicamente se calculó un PC en las puntuaciones de todas las muestras sobre este PC utilizado en los cálculos subsecuentes. La media de las puntuaciones de las muestras de OVX se restó de todas las puntuaciones. Después, se escalaron todas las puntuaciones al dividirlas por la media de las puntuaciones de los animales OVX-EE y se multiplicaron por 100. Los cálculos descritos en esta sección se realizaron utilizando el software SI MCA para análisis multivariados (Versión 10, Umetrics, Umea, Suecia) y Excel 2002 (Microsoft Corp. , Redmond WA, EUA). Este estudio de les de expresión confirmar la influenza particular de los genes correspondientes de las transcripciones analizadas, las cuales son moduladas por estrógenos y/o SERMs como reguladores de la proliferación endometrial. Consecuentemente, las proteínas codificadas por estos genes pueden utilizarse como biomarcadores de proliferación endometrial. La selección de los candidatos incluidos en la Tabla 1 mostrada continuación se basó en criterios científicos y un buen nivel de expresión del gen (al menos 180 para el control pero medio) y una regulación de al menos un promedio de 2 veces por estradiol de etinilo de estrógeno. Los valores en la Tabla 1 denotan unidades arbitrarias que reflejan el nivel de expresión promedio de un gen del nivel de expresión genética virtual medido implicado en la Tabla 2, es decir, el número promedio calculado de trascripciones presentes. El número de - - ¡ncremento determinado en el título de las columnas en gris de la Tabla 1 se indica los cambios en la expresión genética de los genes respectivos de las transcripciones analizadas que son moduladas debido a la influencia del estradiol de etinilo y los SERMs Tamoxifen y Raloxifen.

Tabla 1 Valores promedio seleccionados ID dj dtoee conun Afriftnascs zoyme SERMs de útero de biomarcadores seleccionados (candidatos) Nb domree Affritymecs 209173_at Gradiente anterior 2 Ció 1liltacnonro smu',,835 1.88 976 3790 3.89 3?93 3.17 ?21 1.05 homólogo (Xenepus /k/dí 0 mgga laevis) 221731_x_at Proteoglican 2 de 340 V d itemenoecesencr 1.37 248 891 3.59 716 2.89 352 1.42 sulfato de iiólt smcspecouan re condroitina llt a conro (versican) 202310_s_at Colágeno, tipo I, alfa 8'502 2.78 í Ck/dtl 0/aonro mgg, 3?56 20? 14 6.58 10714 3.51 5'576 1.82 1 202403 _at Colágeno, tipo I, alfa 7758 2.81 2757 14'414 5.13 10? 80 3.69 6?24 2.22 2 i Eil diltdtnsraoe eo, í 04/k/d mgga. 201852_x_at Colágeno, tipo III, 2'992 2.76 1 ?84 7 358 6.78 3706 3.42 2 024 1.87 alfa 1 (síndrome de Ehlers-Danlos tipo IV, autosómico V d itemenoecesencr dominante) idil diltto esrao en llttnro respeco a co 215076_s_at Colágeno, tipo III, 7'354 2.13 3'445 14? 50 4.1 1 9'970 2.89 6'991 2.03 Tif 10amoxen, alfa 1 (síndrome de Ehlers-Danlos tipo í/k/d mgga IV, autosómico dominante) V i dtecesencemenor 211980_at Colágeno, tipo IV, 1 ?43 1.66 690 2'565 3.72 1 '864 2 Tiftpecoamoxen res.70 851 1.23 alfa 1 llt a conro 201438_at Colágeno, tipo VI, 6?08 1.75 3'428 12'61 3.68 6.770 1.97 4?91 1.22 alfa 3 10 200884_at Cinasa de creatina, 487 1.13 430 2'302 5 36 831 1.94 381 0.89 cerebro V d itecesencemenor 200703_at Dineína, dtoplásmica, 1 ,396 1.51 927 2735 2.95 1 '615 1.74 1 ?32 1.22 Rlifltaoeexn resco ap polipéptido 1 ligero lt conro 217398_x_at Deshidrogenase de 1 668 0.88 1 '899 4 533 2.39 3?55 1.61 V561 0.82 gliceraldehído-3- fosfato 213453_x_at Deshidrogenasa de 3?24 1.05 2'984 7 248 2.43 4?77 1.40 2'934 0.98 gliceraldehído-3- fosfato 212581_x_at Deshidrogenasa de 2733 0.94 2'913 6'646 2.28 3'857 1.32 2'575 0.88 gliceraldehído-3- fosfato 201841 _at Choque térmico 6?17 1.03 5'831 12?73 2.09 6 882 1.18 3'919 0.67 27kDa proteína 1 2210 1_s_at probable ortólogo de 842 1.10 763 2'272 2.98 1 ?13 1.33 688 0.90 brote de extremidad de ratón y gen de corazón 203570_at Oxidasa de lisilo tipo 293 1.60 183 451 2.46 329 1.80 226 1.23 1 209014_at Antígeno de 879 1.14 771 1737 2.25 1 '310 1.70 724 0.94 melanoma, familia D, 1 TABLA 2 Valores individuales medidos SE RMs de útero de biomarcadores seleccionados (cand idatos) TABLA 2 Valores individuales med idos SERMs de útero de biomarcadores seleccionados (candidatos) TABLA 2 Valores individuales medidos SERMs de útero de biomarcadores seleccionados (candidatos) ID dj dte conunoe Affrit zonasymecs 221011_s_at p Nb domreerobable 628 725 711 686 43 ortó Affritmsyeclogo de brote de extremidad de ratón y gen de corazón 203570_at Oxidasa de lisilo 192 304 229 179 56 tipo 1 20901 _at Antígeno de B6567 Rlif1aoxen 660 899 768 570 142 melanoma, í 10/k/dg mga familia D, 1 202593_s_at Proteína de 250 B568 Rlif61aoxen 497 290 353 108 interacción de 0/k/dí 1 mgga membrana de RGS16 211161_S_at PR03121 [Homo 504 B61569 Rlifaoxen 1 682 498 549 583 sapiens], í 10/k/d mgga secuencia de ARNm B6570 Rlif1aoxen 202465_s_at Reforzador de C- 126 716 362 í 10/k/d 2gg ma94 248 endopeptidasa de colágeno SóD (Diiecsvan 211663_x_at Sintasa de 132 403 432 172 155 prostaglandina ádt esnar D2 21kDa (cerebro) 204051_s_at Proteína 4 718 927 799 722 98 relacionada- frisada segregada 207714_S_at Inhibidor de 522 1 ?53 813 349 311 proteinasa de serina (o cisterna), subtipo H (choque térmico proteína 47), miembro 1 , (proteina 1 de unión de colágeno) 206116_s_at Tropomiosina 1 1'477 2'620 20 3 V567 522 (alfa) 211959_at Desconocida 891 1 ? 12 1'569 807 341 (proteína para IMAGEN: 4183312) [Homo sapiens], secuencia de ARNm

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Un método para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial en una muestra, que comprende determinar el nivel de expresión y/o actividad de al menos un gen que es modulado por estrógenos y/o Moduladores Selectivos de Receptores de Estrógeno (SERMs) en la muestra, donde al menos un gen se selecciona a partir del grupo que consiste en los genes gradiente anterior 2 homólogo (Xenopus laevis) (ID de Gen 10551); caderina 11, tipo 2; proteoglicano 2 de sulfato de condroitina (versican) (ID de Gen 13003); colágeno, tipo I, alfa 1 (ID de Gen 1277); colágeno, tipo I, alfa 2 (ID de Gen 1278); colágeno, tipo III, alfa 1, (síndrome de Ehlers-Danlos tipo IV dominante autosómico) (ID de Gen 1281); colágeno, tipo IV, alfa 1 (ID de Gen 1282); colágeno, tipo VI, alfa 3 (ID de Gen 1293); cinasa de creatina, cerebro (ID de Gen 24264); dineína, polipétido ligero y citoplásmico 1 (ID de Gen 8655); deshidrogenasa de gliceraldehído-3-fosfato (ID de Gen 2597); proteína 1 de 27kDa de choque térmico (ID de Gen 3315); probable ortólogo de brote de extremidad de ratón y gen de corazón (ID de Gen 81606); oxidasa de lisilo tipo 1 (ID de Gen 4016); antígeno de melanoma, familia D, 1 (ID de Gen 9500); proteina de interacción con membrana RGS16 (ID de Gen 51573); reforzador de C-endopeptidasa de procolágeno (ID de Gen 5118); sintasa 21kDa de prostaglandina D2 (cerebro) (ID de Gen 5730); proteína 4 relacionada-frisada segregada (ID de Gen 6424), inhibidor de proteinasa de serina (o cisteína), subtipo H (proteína 47 de choque térmico) , miembro 1 , (proteína de unión de colágeno 1 ) (ID de Gen 871 ); tropomiosina 1 (alfa) (I D de Gen 7168) y/o proteína 5 de unión de factor de crecimiento de tipo insulina (I D de Gen 3488) y/o combinaciones de los mismos.

2. El método según la reivindicación 1 , donde el gen es colágeno, tipo I , alfa 1 (ID de Gen 1 277); colágeno, tipo I , alfa 2 (ID de Gen 1278); colágeno, tipo I I I , alfa 1 , (síndrome de Ehlers-Danlos tipo IV dominante autosómico) y/o sintasa de prostaglandina D2 21 kDa (cerebro) (ID de Gen 5730).

3. El método según la reivindicación 2, donde el gen es sintasa de prostaglandina D2 de 21 kDa (cerebro) (I D de Gen 5730).

4. El método según las reivindicaciones 1 a 3, donde el nivel de expresión y/o actividad genética se determina al medir el nivel de transcripción .

5. El método según las reivindicaciones 1 a 4, donde la determinación comprende una reacción de hibridación.

6. El método según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 5, donde la determinación comprende además una reacción de amplificación y/o alargamiento.

7. El método según la reivindicación 6, donde la amplificación comprende al menos una técnica seleccionada a partir del grupo que consiste en PCR de transcriptasa inversa y/o PCR en tiempo real.

8. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde el nivel de expresión genética se determina al medir el nivel de un producto proteínico seleccionado a partir del grupo que consiste en los productos proteínicos de gradiente anterior 2 homólogo (NP_006399) , proteoglicano 2 de sulfato de condroitina (versican) (NP_004376), preproproteína de colágeno de tipo I de alfa 1 (NP_000079), colágeno tipo I alfa 2 (NP_000080), colágeno tipo I I I alfa 1 (NP_000081 ), colágeno tipo IV alfa 3 isoforma 1 , precursor (NP_000082), precursor de colágeno tipo IV alfa 4 (NP_000083), preproproteína de colágeno tipo IV alfa 1 (NP_001 836), precursor de isoforma 1 de colágeno tipo IV alfa 3 (NP_004360), cinasa de creatina cerebral (NP_001 814), polipéptido ligero de dineína citoplasmática (NP_003737), deshidrogenasa de gliceraldehído-3-fosfato (NP_002037), sintetasa de glicil-ARNt (NP_002038), detención del crecimiento-específico 1 (NP_002039), proteína 1 de 27kDa de choque térmico (NP_001 531 ) , proteína hipotética DKFZp 566J091 (NP_1 121 77), oxidasa de lisilo tipo 1 (NP_005567), antígeno de melanoma de familia D, 1 isoforma b (N P_00891 7) , proteína de interacción de membrana de RGS 16 (NP_057725), reforzador de C-endopeptidasa de procolágeno (NP_002584), sintasa de prostaglandina D2 21 kDa (N P_000945), proteína 4 relacionada-frisada segregada (N P_003005), inhibidor de proteinasa de serina (o cisteína) , subtipo H 1 , precursor de miembro 1 (NP_001226), tropomiosina 1 (alfa) (NP_000357) y/o proteína 5 de unión de factor de crecimiento de tipo insulina (NP_000590) .

9. El método según la reivindicación 8, donde el producto proteínico es preproteína de colágeno de tipo I alfa 1 (NP_000079), colágeno de tipo I alfa 2 (NP_000080), colágeno de tipo I I I alfa 1 (NP_000081 ), cinasa de creatina de cerebro (NP_001 814) y/o sintasa de prostaglandina D2 21 kDA (NP_000945) .

10. El método según la reivindicación 9, donde el producto proteínico es sintasa de prostaglandina D2 21 kDa (NP_000945). 1 1 . El método según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 1 0, donde el nivel del producto proteínico se determina por métodos enzimáticos, de unión, físicos e/o inmunológicos. 12. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 , donde la muestra es un fluido corporal o muestra de tejido. 1 3. El método según la reivindicación 1 2, donde el fluido corporal es sangre, plasma orina y/o suero. 14. Un arreglo para determinar cualitativamente y/o cuantitativamente la proliferación endometrial en una muestra, que comprende un vehículo y una sonda para determinar el nivel de expresión y/o actividad y/o el nivel de transcripción de al menos un gen que es modulado por estrógenos y/o SERMs en la muestra, donde al menos un gen se selecciona a partir del grupo que consiste en los genes como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3. 1 5. Un método para el diagnóstico de un trastorno y/o condición que se encuentra asociada con proliferación endometrial o una predisposición para la misma en un paciente, que comprende determinar el nivel de expresión y/o actividad de al menos un gen como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la muestra, donde un nivel de expresión y/o actividad se desvía sustancialmente del valor de referencia para un paciente saludable es indicativo de una disfunción de proliferación endometrial o una predisposición para la misma. 16. El método según la reivindicación 1 5, donde el paciente es un mamífero. 1 7. El método según la reivindicación 16, donde el paciente es un ser humano. 1 8. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1 5 a 17, donde el nivel de expresión y/o actividad genética se determina al medir el nivel de transcripción de al menos un gen y/o el nivel de un producto proteínico. 19. El método según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18, donde el trastorno y/o padecimiento se seleccionan a partir del grupo que consiste en atrofia endometrial, endometrio subdesarrollado, amenorrea, endometritis, proliferación endometrial incrementada, endometriosis, ciclo menstrual alterado, embarazo, infertilidad, hiperplasia endometrial, pólipos endometriales, y/o tumores ginecológicos. 20. El método según la reivindicación 1 9 , donde los tumores ginecológicos se seleccionan a partir del grupo que consiste en cáncer endometrial, cáncer de mama, cáncer de ovarios, cáncer de vulva y/o cáncer vaginal. 21 . Un método para examinar un modulador de un trastorno y/o padecimiento que se encuentra asociado con la proliferación endometrial o una predisposición para la misma, que comprende determinar el nivel de expresión y/o actividad de al menos un gen como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en una muestra de células en presencia de un agente candidato, cuyo efecto sobre la proliferación endometrial va a examinarse, en comparación con el nivel de expresión y/o actividad en ausencia del agente candidato. 22. Uso de al menos un gen según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y/o al menos un producto proteinico según se define en cualquiera de las reivindicaciones 8 a 1 0 como objetivo y/o modulador de la proliferación endometrial. 23. El uso según la reivindicación 22 para la elaboración de un agente que es activo contra un trastorno y/o padecimiento que se encuentra asociado con proliferación endometrial . 24. Uso de un modulador de al menos un gen definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de un trastorno y/o padecimiento que se encuentras asociado con la proliferación endometrial.