MX2008000900A - Combinacion que comprende pirimidil-amino-benzamidas y un inhibidor de flt-3 para el tratamiento de enfermedades proliferativas. - Google Patents

Abstract

La invencion proporciona una combinacion farmaceutica, la cual comprende: a) un compuesto de pirimidil-amino-benzamida; y b) un inhibidor de Flt-3, y un metodo para el tratamiento o la prevencion de una enfermedad proliferativa utilizando esta combinacion.

Description

COMBINACIÓN QUE COMPRENDE PIRIMI DIL-AMINO-BENZ AMI DAS Y UN INHIBIDOR DE FLT-3 PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES PROLIFERATIVAS La presente invención se refiere a una combinación farmacéutica, la cual comprende un compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3, y a los usos de esta combinación, por ejemplo, en enfermedades proliferativas, por ejemplo tumores, mielomas, leucemias, soriasis, restenosis, esclerodermitis, y fibrosis. A pesar de las numerosas opciones de tratamiento para los pacientes con enfermedades proliferativas, queda una necesidad de agentes anti-proliferativos efectivos y seguros, y una necesidad de su uso preferencial en la terapia de combinación.

Breve Descripción de la Invención Ahora se ha encontrado que una combinación que comprende cuando menos un compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3, por ejemplo, como se define más adelante, tiene un efecto benéfico sobre las enfermedades proliferativas, por ejemplo tumores, mielomas, leucemias, soriasis, restenosis, esclerodermitis, y fibrosis.

Descripción Detallada de la Invención La presente invención se refiere al uso de compuestos de pirimidil-amino-benzamida de la Fórmula (I): en donde: R. representa hidrógeno, alquilo inferior, alcoxilo inferior-alquilo inferior, aciloxi-alquilo inferior, carboxi-alquilo inferior, alcoxilo inferior-carbonil-alquilo inferior, o fenil-alquilo inferior; R2 representa hidrógeno, alquilo inferior, opcionalmente sustituido por uno o más radicales R3 idénticos o diferentes, cicloalquilo, bencil-cicloalquilo, heterociclilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo mono- o bi-cíclico que comprende cero, uno, dos, o tres átomos de nitrógeno, y cero o un átomo de oxígeno, y cero o un átomo de oxígeno, cuyos grupos en cada caso están insustituidos o mono- o poli-sustituidos; y R3 representa hidroxilo, alcoxilo inferior, aciloxilo, carboxilo, alcoxilo inferior-carbonilo, carbamoílo, carbamoílo N-mono- o N,N-di-sustituido, amino, amino mono- o di-sustituido, cicloalquilo, heterociclilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo mono- o bi-cíclico que comprende cero, uno, dos o tres átomos de nitrógeno del anillo, y cero o un átomo de oxígeno, y cero o un átomo de azufre, cuyos grupos en cada caso están insustituidos o están mono- o poli-sustituidos, o R. y R2 representan juntos alquileno con cuatro, cinco, o seis átomos de carbono, opcionalmente mono- o di-sustituido por alquilo inferior, cicloalquilo, heterociclilo, fenilo, hidroxilo, alcoxilo inferior, amino, amino mono- o di-sustituido, oxo, piridilo, pirazinilo, o pirimidinilo; benzalquileno con cuatro o cinco átomos de carbono; oxa-alquileno con un átomo de oxígeno y tres o cuatro átomos de carbono; y aza-alquileno con un átomo de nitrógeno y tres o cuatro átomos de carbono, en donde el átomo de nitrógeno está insustituido o sustituido por alquilo inferior, fenil-alquilo inferior, alcoxilo inferior-carbonil-alquilo inferior, carboxi-alquilo inferior, carbamoil-alquilo inferior, carbamoil-alquilo inferior N-mono- o N,N-di-sustituido, cicloalquilo, alcoxilo inferior-carbonilo, carboxilo, fenilo, fenilo sustituido, piridinilo, pirimidinilo, o pirazinilo; y R4 representa hidrógeno, alquilo inferior, o halógeno; y un N-óxido, o una sal farmacéuticamente aceptable de este compuesto, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades dependientes de cinasa. Los términos generales utilizados anteriormente en la presente y más adelante en la presente de preferencia tienen, dentro del contexto de esta divulgación, los siguientes significados, a menos que se indique de otra manera: El prefijo "inferior" denota un radical que tiene hasta e incluyendo un máximo de 7, en especial hasta e incluyendo un máximo de 4 átomos de carbono, siendo los radicales en cuestión lineales o ramificados con ramificación individual o múltiple.

Cuando se utiliza la forma plural para los compuestos, sales, y similares, esto también significa un solo compuesto, sal, o similar. Cualesquiera átomos de carbono asimétricos pueden estar presentes en la configuración (R), (S), o (R,S), de preferencia en la configuración (R) o (S). Por consiguiente, los compuestos pueden estar presentes como mezclas de isómeros o como los isómeros puros, de preferencia como diaestereómeros puros en enantiómeros.

La invención también se refiere a los posibles tautómeros de los compuestos de la Fórmula (I). Alquilo inferior es de preferencia alquilo con desde e incluyendo 1 hasta e incluyendo 7, de preferencia desde e incluyendo 1 hasta e incluyendo 4 átomos de carbono, y es lineal o ramificado; de preferencia, alquilo inferior es butilo, tal como butilo normal, butilo secundario, isobutilo, butilo terciario, propilo, tal como propilo normal o isopropilo, etilo, o metilo. De una manera preferible, alquilo inferior es metilo, propilo o butilo terciario. Acilo inferior es de preferencia formilo o alquilo inferior-carbonilo, en particular acetilo. Un grupo arilo es un radical aromático que está enlazado con la molécula por medio de un enlace localizado en un átomo de carbono aromático del anillo del radical. En una modalidad preferida, arilo es un radical aromático que tiene de 6 a 14 átomos de carbono, en especial fenilo, naftilo, tetrahidro-naftilo, fluorenilo o fenantrenilo, y está insustituido o sustituido por uno o más, de preferencia hasta tres, en especial uno o dos sustituyentes, especialmente seleccionados a partir de amino, amino mono- o di-sustituido, halógeno, alquilo inferior, alquilo inferior sustituido, alquenilo inferior, alquinilo inferior, fenilo, hidroxilo, hidroxilo eterificado o esterificado, nitro, ciano, carboxilo, carboxilo esterificado, alcanoílo, benzoílo, carbamoílo, carbamoílo N-mono- o N,N-di-sustituido, amidino, guanidino, ureido, mercapto, sulfo, tioalquilo inferior, tiofenilo, fenil-tioalquilo inferior, alquilo inferior-tiofenilo, alquilo inferior-sulf inilo , f enil-sulf tn ilo , fenil-alquilo inferior-sulfinilo, alquilo inferior-fenil-sulfinilo, alquilo inferior-sulfonilo, fenil-sulfonilo, fenil-alquilo inferior-sulfonilo, alquilo inferior-fenil-sulfonilo, halo-alquilo inferior-mercapto, halo-alquilo inferior-sulfonilo, tal como en especial trifluoro-metan-sulfonilo, dihidroxibora (-B(OH)2), heterociclilo, un grupo heteroarilo mono- o bi-cíclico, y un grupo alquilendioxilo inferior en los átomos de carbono adyacentes del anillo, tal como metilendioxilo. Arilo es más preferiblemente fenilo, naftilo, o tetrahidro-naftilo, que en cada caso está insustituido o independientemente sustituido por uno o dos sustituyentes seleccionados a partir del grupo que comprende halógeno, en especial flúor, cloro, o bromo; hidroxilo; hidroxilo eterificado por alquilo inferior, por ejemplo por metilo, por halo-alquilo inferior, por ejemplo trifluoro-metilo, o por fenilo; alquilendioxilo inferior enlazado con dos átomos de carbono adyacentes, por ejemplo metilendioxilo, alquilo inferior, por ejemplo metilo o propilo; halo-alquilo inferior, por ejemplo trifluoro-metilo, hidroxi-alquilo inferior, por ejemplo hidroxi-metilo o 2-hidroxi-2-propilo; alcoxilo inferior-alquilo inferior; por ejemplo metoxi-metilo o 2-metoxi-etilo; alcoxilo inferior-carbonil-alquilo inferior, por ejemplo metoxi-carbonil-metilo; alquinilo inferior, tal como 1 -propinilo; carboxilo esterificado, en especial alcoxilo inferior-carbonilo, por ejemplo metoxi-carbonilo, n-propoxi-carbonilo, o isopropoxi-carbonilo; carbamoílo N-mono-sustituido, en particular carbamoílo mono-sustituido por alquilo inferior, por ejemplo metilo, propilo normal, o isopropilo; amino; alquilo inferior-amino, por ejemplo metil-amino; di-alquilo inferior-amino, por ejemplo dimetilamino o dietil-amino; alquileno inferior-amino, por ejemplo pirrolidino o piperidino; oxa-alquileno inferior-amino, por ejemplo morfolino, aza-alquileno inferior-amino, por ejemplo piperazino, acil-amino, por ejemplo acetil-amino o benzoil-amino; alquilo inferior-sulfonilo, por ejemplo metil-sulfonilo; sulfamoílo; o fenil-sulfonilo. Un grupo cicloalquilo es de preferencia ciclopropilo, ciclopentilo, ciciohexilo o cicioheptilo, y puede estar insustituido o sustituido por uno o más, en especial uno o dos sustituyentes seleccionados a partir del grupo definido anteriormente como sustituyentes para arilo, más preferiblemente por alquilo inferior, tal como metilo, alcoxilo inferior, tal como metoxilo o etoxilo, o hidroxilo, y además por oxo, o está fusionado con un anillo benzo, tal como en benciciclopentilo o benciciclohexilo. Alquilo sustituido es alquilo como se definió al final, en especial alquilo inferior, de preferencia metilo; en donde pueden estar presentes uno o más, en especial hasta tres sustituyentes, primordialmente a partir del grupo seleccionado a partir de halógeno, en especial flúor, amino, N-alquilo inferior-amino, N,N-di-alquilo inferior-amino, N-alcanoílo inferior-amino, hidroxilo, ciano, carboxilo, alcoxilo inferior-carbonilo, y fenil-alcoxilo inferior-carbonilo. Se prefiere en especial trifluoro-metilo. Amino mono- o di-sustituido es en especial amino sustituido por uno o dos radicales seleccionados independientemente uno del otro a partir de alquilo inferior, tal como metilo; hidroxi-alquilo inferior, tal como 2-hidroxi-etilo; alcoxilo inferior-alquilo inferior, tal como metoxi-etilo; fenil-alquilo inferior, tal como bencilo o 2-fenil-etilo; alcanoílo inferior, tal como acetilo; benzoílo; benzoílo sustituido, en donde el radical de fenilo está en especial sustituido por uno o más, de preferencia uno o dos sustituyentes seleccionados a partir de nitro, amino, halógeno, N-alquilo inferior-amino, N,N-di-alquilo inferior-amino, hidroxilo, ciano, carboxilo, alcoxilo inferior-alquilo, alcanoílo inferior, y carbamoílo; y fenil-alcoxilo inferior-carbonilo, en donde el radical de fenilo está insustituido o en especial sustituido por uno o más, de preferencia uno o dos sustituyentes seleccionados a partir de nitro, amino, halógeno, alquil-amino, N,N-di-alquilo inferior-amino, hidroxilo, ciano, carboxilo, alcoxilo inferior-carbonilo, alcanoílo inferior, y carbamoílo; y es de preferencia N-alquilo inferior-amino, tal como N-metil-amino, hidroxi-alquilo inferior-amino, tal como 2-hidroxi-etil-amino, o 2-hidroxi-propilo, alcoxilo inferior-alquilo inferior, tal como metoxi-etilo, fenil-alquilo inferior-amino, tal como bencil-amino, N,N-di-alquilo inferior-amino, N-fenil-alquilo inferior-N-alquilo inferior-amino, N,N-di-alquilo inferior-fenil-amino, alcanoílo inferior-amino, tal como acetil-amino, o un sustituyente seleccionado a partir del grupo que comprende benzoil-amino y fenil-alcoxilo inferior-carbonil-amino, en donde el radical de fenilo en cada caso está insustituido o en especial sustituido por nitro o amino, o también por halógeno, amino, N-alquilo inferior-amino, N,N-di-alquilo inferior-amino, hidroxilo, ciano, carboxilo, alcoxilo inferior-carbonilo, alcanoílo inferior, carbamoílo o amino-carbonil-amino. Amino disustituido también es alquileno inferior-amino, por ejemplo pirrolidino, 2-oxo-pirrolidino, o piperidino; oxa-alquileno inferior-amino, por ejemplo morfolino, o aza-alquileno inferior-amino, por ejemplo piperazino o piperazino N-sustituido, tal como N-metil-piperazino o N-metoxi-carbonil-piperazino. Halógeno es en especial fluoro, cloro, bromo, o yodo, especialmente flúor, cloro, o bromo. Hidroxilo eterificado es en especial alquiloxilo de 8 a 20 átomos de carbono, tal como deciloxilo normal, alcoxilo inferior (preferido), tal como metoxilo, etoxilo, isopropiloxilo, o butiloxilo terciario, fenil-alcoxilo inferior, tal como benciloxilo, feniloxilo, halo-alcoxilo inferior, tal como trifluoro-metoxilo, 2,2,2-trifluoro-etoxilo, ó 1,1,2,2-tetrafluoro-etoxilo, o alcoxilo inferior que está sustituido por heteroarilo mono- o bi-cíclico que comprende uno o dos átomos de nitrógeno, de preferencia alcoxilo inferior que está sustituido por imidazolilo, tal como 1 H-imidazol-1-ilo, pirrolilo, bencimidazolilo, tal como 1 -bencimidazolilo, piridilo, en especial 2-, 3-, ó 4-piridilo, pirimidinilo, en especial 2-pi ri midi nilo , pirazinilo, isoquinolinilo, en especial 3-isoquinolinilo, indolilo, o tiazolilo. Hidroxilo esterificado es en especial alcanoiloxilo inferior, benzoiloxilo, alcoxilo inferior-carboniloxilo, tal como terbutoxi-carboniloxilo, o fenil-alcoxilo inferior-carboniloxilo, tal como benciloxi-carboniloxilo. Carboxilo esterificado es en especial alcoxilo inferior-carbonilo, tal como terbutoxi-carbonilo, isopropoxi-carbonilo, metoxi-carbonilo, o etoxi-carbonilo, fenil-alcoxilo inferior-carbonilo, o feniloxi-carbonilo. Alcanoílo es primordialmente alquil-carbonilo, en especial alcanoílo inferior, por ejemplo acetilo. Carbamoílo N-mono- o N,N-di-sustituido está en especial sustituido por uno o dos sustituyentes independientemente seleccionados a partir de alquilo inferior, fenil-alquilo inferior, e hidroxi-alquilo inferior, o alquileno inferior, oxa-alquileno inferior, o aza-alquileno inferior opcionalmente sustituido en el átomo de nitrógeno terminal. Un grupo heteroarilo mono- o bi-cíclico que comprende cero, uno, dos, o tres átomos de nitrógeno del anillo, y cero o un átomo de oxígeno, y cero o un átomo de azufre, cuyos grupos en cada caso están insustituidos o mono- o poli-sustituidos, se refiere a una fracción heterocíclica que está insaturada en el anillo que enlaza al radical de heteroarilo con el resto de la molécula en la Fórmula (I), y es de preferencia un anillo, en donde, en el anillo de enlace, pero opcionalmente también en cualquier anillo templado, cuando menos un átomo de carbono es reemplazado por un heteroátomo seleccionado a partir del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno, y azufre; en donde el anillo de enlace de preferencia tiene de 5 a 12, más preferiblemente 5 ó 6 átomos del anillo; y el cual puede estar insustituido o sustituido por uno o más, en especial uno o dos sustituyentes seleccionados a partir del grupo definido anteriormente como sustituyentes para arilo, más preferiblemente por alquilo inferior, tal como metilo, alcoxilo inferior, tal como metoxilo o etoxilo, o hidroxilo. De una manera preferible, el grupo heteroarilo mono- o bi-cíclico se selecciona a partir de 2H-pirrolilo, pirrolilo, imidazolilo, bencimidazolilo, pirazolilo, indazolilo, purinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, 4H-quinolizinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalilo, quinazolinilo, quinolinilo, pteridinilo, indolizinilo, 3H-indolilo, indolilo, isoindolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, furazanilo, benzo-[d]-pirazolilo, tienilo y furanilo. De una manera más preferible, el grupo heteroarilo mono- o bi-cíclico se selecciona a partir del grupo que consiste en pirrolilo, imidazolilo, tal como 1 H-imidazol-1-ilo, bencimidazolilo, tal como as 1-bencimidazolilo, indazolilo, en especial 5-indazolilo, piridilo, en especial 2-, 3- ó 4-piridilo, pirimidinilo, en especial 2-pirimidinilo, pirazinilo, isoquinolinilo, en especial 3-isoquinolinilo, quinolinilo, en especial 4- u 8-quinolinilo, indolilo, en especial 3-indolilo, tiazolilo, benzo-[d]-pirazolilo, tienilo, y furanilo. En una modalidad preferida de la invención, el radical de piridilo está sustituido por hidroxilo en la posición orto para el átomo de nitrógeno, y por consiguiente, existe cuando menos parcialmente en la forma del tautómero correspondiente, el cual es pi ridi n-( 1 H)-2-ona. En otra modalidad preferida, el radical de pirimidinilo está sustituido por hidroxilo tanto en la posición 2 como 4, y por consiguiente, existe en varias formas tautoméricas, por ejemplo como la pirimidin-(1 H,3H)-2,4-diona. Heterociclilo es en especial un sistema heterocíclico de cinco, seis, o siete miembros, con uno o dos heteroátomos seleccionados a partir del grupo que comprende nitrógeno, oxígeno, y azufre, el cual puede estar insaturado o total o parcialmente saturado, y está insustituido o sustituido en especial por alquilo inferior, tal como metilo, fenil-alquilo inferior, tal como bencilo, oxo, o heteroarilo, tal como 2-piperazinilo; heterociclilo es especialmente 2- ó 3-pirrolidinilo, 2-oxo-5-pirrol¡dinilo, piperidinilo, N-bencil-4-piperidinilo, N-alquilo inferior-4-piperidinilo, N-alquilo inferior-piperazinilo, morfolinilo, por ejemplo 2- ó 3-morfolinilo, 2-oxo-1 H-azepin-3-ilo, 2-tetrahidro-furanilo, ó 2-metil-1 ,3-dioxolan-2-ilo. Las sales son en especial las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la Fórmula (I). Estas sales se forman, por ejemplo, como las sales de adición de ácido, de preferencia con ácidos orgánicos o inorgánicos, a partir de los compuestos de la Fórmula (I), con un átomo de nitrógeno básico, en especial las sales farmacéuticamente aceptables. Los ácidos inorgánicos adecuados son, por ejemplo, ácidos de halógeno, tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, o ácido fosfórico. Los ácidos orgánicos adecuados son, por ejemplo, los ácidos carboxílicos, fosfónicos, sulfónicos, o sulfámicos, por ejemplo ácido acético, ácido propiónico, ácido octanoico, ácido decanoico, ácido dodecanoico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido adípico, ácido pimélico, ácido subérico, ácido azelaico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, aminoácidos, tales como ácido glutámico y ácido aspártico, ácido maleico, ácido hidroxi-maleico, ácido metil-maleico, ácido ciclohexan-carboxílico, ácido adamantan-carboxílico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido 4-amino-salicílico, ácido ftálico, ácido fenil-acético, ácido mandélico, ácido cinámico, ácido metan- o etan-sulfónico, ácido 2-hidroxi-etan-sulfónico, ácido etan-1 ,2-disulfónico, ácido bencen-sulfónico, ácido 2-naftalen-sulfónico, ácido 1 ,5-naftalen-disulfónico, ácido 2-, 3- ó 4-metil-bencen-sulfónico, ácido metil-sulfúrico, ácido etil-sulf úrico, ácido dodecil-sulfúrico, ácido N-cicIohexil-sulfámico, ácido N-metil-, N-etil-, o N-propil-sulfámico, u otros ácidos protónicos orgánicos, tales como ácido ascórbico. En la presencia de radicales negativamente cargados, tales como carboxilo o sulfo, también se pueden formar sales con bases, por ejemplo sales de metales o de amonio, tales como sales de metales alcalinos o de metales alcalinotérreos, por ejemplo sales de sodio, potasio, magnesio, o calcio, o sales de amonio con amoniaco o con aminas orgánicas adecuadas, tales como monoaminas terciarias, por ejemplo trietil-amina o tri-(2-hidroxi-etil)-amina, o bases heterocíclicas, por ejemplo N-etil-piperidina o N.N-dimetil- piperazina. Cuando están presentes un grupo básico y un grupo ácido en la misma molécula, un compuesto de la Fórmula ( I) también puede formar sales internas. Para propósitos de aislamiento o de purificación , también es posible utilizar sales farmacéuticamente inaceptables, por ejemplo picratos o percloratos. Para uso terapéutico, solamente se emplean las sales farmacéuticamente aceptables o los compuestos libres (donde sea aplicable, en la forma de preparaciones farmacéuticas), y por consiguiente, éstas son las preferidas. En vista de la estrecha relación entre los compuestos novedosos en la forma libre y aquéllos en la forma de sus sales, incluyendo las sales que se pueden utilizar como intermediarios, por ejemplo en la purificación o identificación de los compuestos novedosos, cualquier referencia a los compuestos libres anteriormente en la presente y más adelante en la presente, se debe entender para referirse también a las sales correspondientes, como sea apropiado y conveniente. Los compuestos dentro del alcance de la Fórmula (I) , y el proceso para su fabricación, se dan a conocer en la Publicación Internacional Número WO 04/005281 publicada el 1 5 de enero de 2004, la cual se incorpora a la presente solicitud como referencia. Un compuesto preferido es la 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-ami no] -N -[5- (4-meti 1-1 H-imidazol-1 -il)-3-(trifluoro-metil)-fenil]-benzamida.

Los inhibidores de Flt-3 son, por ejemplo, los compuestos que tienen un valor de IC50 en el intervalo de 1 a 10,000 nM, de preferencia en el intervalo de 1 a 100 nM, en los siguientes ensayos: La inhibición de cinasa Flt-3 se determina como sigue: se utiliza el vector donador de baculovirus pFbacGOl (GIBCO) para generar un baculovirus recombinante que exprese la región de los aminoácidos 563-993 del dominio de cinasa citoplásmico de la Flt-3 humana. La secuencia de codificación para el dominio citoplásmico de Flt-3 se amplifica mediante reacción en cadena de la polimerasa a partir de bibliotecas de ADNc humano (Clontech). Los fragmentos de ADN amplificados y el vector pFbacGOl se hacen compatibles para el ligamiento mediante digestión con BamH1 y Hindlll. El ligamiento de estos fragmentos de ADN da como resultado el plásmido donador de baculovirus Flt-3 (1.1). La producción de los virus, la expresión de las proteínas en células Sf9, y la purificación de las proteínas fusionadas con GST, se llevan a cabo como sigue: Producción de virus: El vector de transferencia (pFbacGOl -Flt-3) que contiene el dominio de cinasa Flt-3, se transfecta en la línea celular DHIOBac (GIBCO), y las células transfectadas se aplican a placas de ágar selectivo. Las colonias sin inserción de la secuencia de fusión en el genoma viral (llevado por la bacteria) son azules. Se recogen las colonias blancas individuales, y se aisla el ADN viral (bácmido) a partir de las bacterias mediante procedimientos de purificación de plásmidos convencionales. Luego se transfectan las células Sf9 ó Sf21 (American Type Culture Collection) en matraces con el ADN viral utilizando el reactivo Cellfectin. Determinación de la expresión de proteína a pequeña escala en células Sf9: Se recolecta el medio que contiene virus del cultivo celular transfectado, y se utiliza para la infección con el fin de aumentar su titulación. El medio que contiene virus obtenido después de dos rondas de infección se utiliza para la expresión de proteína a gran escala. Para la expresión de proteína a gran escala, se siembran platos de cultivo de tejido redondos de 100 centímetros cuadrados, con 5x107 células/plato, y se infectan con 1 mililitro de medio que contiene virus (aproximadamente 5 MOIs). Después de 3 días, se raspan las células del plato, y se centrifugan a 500 revoluciones por minuto durante 5 minutos. Los granulos celulares de 10 a 20 platos de 100 centímetros cuadrados se vuelven a suspender en 50 mililitros de regulador de lisis helado (Tris-HCl 25 mM, pH de 7.5, EDTA 2 mM, NP-40 al 1 por ciento, DTT 1 mM, PMSF). Las células se agitan sobre hielo durante 15 minutos, y luego se centrifugan a 5,000 revoluciones por minuto durante 20 minutos. Purificación de proteínas marcadas con GST: El lisado celular centrifugado se carga sobre una columna de 2 mililitros de glutationa-Sepharose (Pharmacia), y se lava tres veces con 10 mililitros de Tris-HCl 25 mM, pH de 7.5, EDTA 2 mM, DTT 1 mM, NaCI 200 mM. Luego se eluye la proteína marcada con GST mediante 10 aplicaciones (de 1 mililitro cada una) de Tris-HCl 25 mM, pH de 7.5, glutationa reducida 10 mM, NaCI 100 mM, DTT1 M, glicerol al 10 por ciento, y se almacena a -70°C.

Medición de la actividad enzimática: Se llevan a cabo ensayos de cinasa de proteína tirosina con GST-Flt-3 purificado en un volumen final de 30 microlitros conteniendo de 200 a 1,800 nanogramos de proteína enzimática (dependiendo de la actividad específica), Tris-HCl 20 mM, pH de 7.6, MnCI2 3 mM, MgCI2 3 mM, DTT 1 mM, Na3V04 10 µM, 3 microgramos/mililitro de poli-(Glu, Tyr), 4:1, sulfóxido de dimetilo al 1 por ciento, ATP 8.0 µM, y 0.1 µCi de [?33P]ATP). La actividad se ensaya en la presencia o en ausencia de inhibidores, midiendo la incorporación de 33P a partir de [?33P]ATP en el sustrato de poli-(Glu, Tyr). El ensayo (30 microlitros) se lleva a cabo en placas de 96 pozos a temperatura ambiente durante 20 minutos, bajo las condiciones descritas más adelante, y se termina mediante la adición de 20 microlitros de EDTA 125 mM. Subsiguientemente, se transfieren 40 microlitros de la mezcla de reacción a la membrana Immobilon-PVDF (Millipore, Bedford, MA, EUA) previamente remojada durante 5 minutos con metanol, enjuagada con agua, y luego remojada durante 5 minutos con H3PO4 al 0.5 por ciento, y se monta sobre un múltiple de de vacío con la fuente de vacío desconectada. Después de manchar todas las muestras, se conecta el vacío, y cada pozo se enjuaga con 200 microlitros de H3P0 al 0.5 por ciento. Las membranas se remueven y se lavan cuatro veces sobre un agitador con H3PO4 al 1.0 por ciento, y una vez con etanol. Las membranas se cuentan después de secarse a temperatura ambiente, de montarse en un marco de 96 pozos Packard TopCount, y de agregar 10 microlitros/pozo de MicroscintMR (Packard). Los valores IC50 se calculan mediante análisis de regresión lineal del porcentaje de inhibición de cada compuesto por duplicado, en cuatro concentraciones (usualmente 0.01, 0.1, 1, y 10 µM). Una unidad de actividad de cinasa de proteína se designa como 1 nanomol de 33P ATP transferido desde [µ33P]ATP hasta la proteína de sustrato por minuto por miligramo de proteína a 37°C. Los compuestos de la Fórmula (I) de la presente mostraron valores IC50 en el intervalo de entre 0.005 y 20 µM, de preferencia entre 0.01 y 10 µM. Los inhibidores de Flt-3 adecuados incluyen, por ejemplo: A. Los compuestos que se dan a conocer en la Publicación Internacional Número WO 03/037347, por ejemplo los derivados de estaurosporina de la Fórmula (IV) o (V): en donde (V) es el derivado parcialmente hidrogenado del compuesto (IV), o (VIII) en donde: R. y R2 son, independientemente uno del otro, alquilo insustituido o sustituido, hidrógeno, halógeno, hidroxilo, hidroxilo eterificado o esterificado, amino, amino mono- o di-sustituido, ciano, nitro, mercapto, mercapto sustituido, carboxilo, carboxilo esterificado, carbamoílo, carbamoílo N-mono- o N,N-di-sustituido, sulfo, sulfonilo sustituido, amino-sulfonilo, o amino-sulfonilo N-mono-o N,N-di-sustituido; n y m son, independientemente uno del otro, un número desde e incluyendo 0 hasta e incluyendo 4; n' y m' son, independientemente uno del otro, un número desde e incluyendo 0 hasta e incluyendo 4; R3, R4, Rs. y Río son, independientemente unos de otros, hidrógeno, -O"; acilo con hasta 30 átomos de carbono, un radical alifático, carbocíclico, o carbocíclico-alifático con hasta 29 átomos de carbono en cada caso, un radical heterocíclico o heterocíclico-alifático con hasta 20 átomos de carbono en cada caso, y en cada caso hasta 9 heteroátomos, un acilo con hasta 30 átomos de carbono, en donde R4 también puede estar ausente, o si R3 es acilo con hasta 30 átomos de carbono, R4 no es un acilo; p es 0 si R4 está ausente, o es 1 si R3 y R4 están ambos presentes, y en cada caso son uno de los radicales anteriormente mencionados; R5 es hidrógeno, un radical alifático, carbocíclico, o carbocíclico-alifático con hasta 29 átomos de carbono en cada caso, o un radical heterocíclico o heterocíclico-alifático con hasta 20 átomos de carbono en cada caso, y en cada caso hasta 9 heteroátomos, o acilo con hasta 30 átomos de carbono; R7, R8, y R9 son acilo o -(alquilo inferior)-acilo, alquilo insustituido o sustituido, hidrógeno, halógeno, hidroxilo, hidroxilo eterificado o esterificado, amino, amino mono- o di-sustituido, ciano, nitro, mercapto, mercapto sustituido, carboxilo, carbonilo, carbonildioxilo, carboxilo esterificado, carbamoílo, carbamoílo N-mono- o N,N-di-sustituido, sulfo, sulfonilo sustituido, amino-sulfonilo, o amino-sulfonilo N-mono- o N,N-di-sustituido; X representa 2 átomos de hidrógeno; 1 átomo de hidrógeno e hidroxilo; O; o hidrógeno y alcoxilo inferior; Z representa hidrógeno o alquilo inferior; y ya sea que los dos enlaces caracterizados por las líneas onduladas están ausentes en el anillo A y son reemplazadas por cuatro átomos de hidrógeno, y las dos líneas onduladas en el anillo B, junto con el enlace paralelo respectivo, significan cada una, un doble enlace, o bien los dos enlaces caracterizados por las líneas onduladas están ausentes en el anillo B, y son reemplazadas por un total de 4 átomos de hidrógeno, y las dos líneas onduladas en el anillo A, junto con el enlace paralelo respectivo, significan cada una, un doble enlace, o tanto en el anillo A como en el anillo B, todas las cuatro líneas onduladas están ausentes, y son reemplazadas por un total de 8 átomos de hidrógeno; o una sal de los mismos, si está presente cuando menos un grupo formador de sal. De una manera preferible, el inhibidor de Flt-3 es la N-[(9S,10R,11R,13R)-2,3,10,11,12,13-hexahidro-10-metoxi-9-metil-1-oxo-9,13-epoxi-1H-9H-di-indolo-[1,2,3-gh;3',2',1'-lm]-pirrolo-[3,4-[[[1 J]-benzo-diazonin-11-il]-N-metil-benzamida de la Fórmula (X): (X) B. Los compuestos como se dan a conocer en la Publicación Internacional Número WO 03/099771, por ejemplo los derivados de diaril-urea de la Fórmula (XI): en donde: G no está presente, o bien es alquileno inferior o cicloalquileno de 3 a 5 átomos de carbono; y Z es un radical de la Fórmula (Xla): G no está presente; y Z es un radical de la Fórmula (Xlb): A es CH, N ó N?O, y A' es N ó N— >O, con la condición de que no más de uno de A y A' pueden ser N?O; n es 1 ó 2; m es 0, 1 , ó 2; p es O, 2, ó 3; r es de O a 5; X es NR si p es O, en donde R es hidrógeno o una fracción orgánica, o si p es 2 ó 3, X es nitrógeno que, junto con el (CH2)P y los enlaces representados en líneas punteadas (interrumpidas) (incluyendo los átomos con los que están enlazados) forman un anillo, o X es CHK, en donde K es alquilo inferior o hidrógeno, y p es cero, con la condición de que estén ausentes los enlaces representados en líneas punteadas si p es 0; Y. es O, S, ó CH2; Y2 es O, S, ó NH, con la condición de (Y?)n-(Y2)m no incluye grupos O-O, S-S, NH-O, NH-S, ó S-O; cada uno de R., R2, R3, y R5, independientemente unos de otros, es hidrógeno o una fracción inorgánica u orgánica, o cualesquiera dos de ellos forman juntos un puente de alquilendioxilo inferior enlazado por medio de los átomos de oxígeno, y la otra restante de estas fracciones es hidrógeno o una fracción inorgánica u orgánica; y R4 (si está presente, es decir, si r no es cero) es una fracción inorgánica u orgánica; o un tautómero de los mismos; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Los ejemplos de los compuestos de la Fórmula (XI) incluyen: • N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-etil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(3-trifluoro-metil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-(2,2,2-trifluoro-etoxi)-3-trifluoro-metil-fenil)-urea; N-(4-(4-(4-hidroxi-fenil-amino)-pirimidin-6-il)-oxi-fenil)-N'- (3-trifluoro-meti l-fenil) -urea; N-(4-(2-metil-piridin-4-il)-oxi-fenil)-N '-(3-trif luoro-metil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-n-propil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-metil-fenil)-urea; N-metil-N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-etil-fenil)-urea; N-metil-N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(3-trifluoro-metil-fenil)-urea; N-metil-N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-n-propil-fenil)-urea; N-metil-N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-metil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-bromo-3-trifluoro-metil-fenil)-urea; N -(4-pi ridin -4-il-oxi-f enil)- N'-(3-metoxi -5-trif I uoro- meti I-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-metil-fenil)-N'-(4-n-propil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-metil-fenil)-N'-(4-etil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-metil-fenil)-N '-(4-metil-f enil)-u rea; N-(4-piridin-4-il-meti l-f enil)-N '-(3-trif luoro-metil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-acetil-(4-etil-fenil)-amida; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-acetil-(4-metil-fenil)-amida; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-acetil-(4-n-propil-fenil)-amida; 5-(4-piridil-oxi)-N -(3-trif luoro-metil-fenil)-amino-carbonil- 2,3-dihidro-indol; 5-(4-piridil-oxi)-N-(3-trifluoro-metil-fenil)-amino-carbonil- 1 , 2, 3, 4-tet rah id ro-qu i nol i na; N-(4-(4-cloro-pirimidin-6-il)-oxi-fenil)-N'-(3-trifluoro-metil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-fenil-3-trifluoro-metil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-(piperidin-1 -i I) -3-trif luo ro-metil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-(morfolino)-3-trifluoro-metil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(3-metoxi-4-fenil-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(3-metoxi-4,5-(etilen-1 ,2-dioxi)-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(3-metoxi-4-(2,2,2-trifluoro-etoxi)-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(3-metoxi-4-piperidin-1 -il-fenil)-urea; N-(4-piridin-4-il-oxi-fenil)-N'-(4-piperidin-1 -il-f eni l)-urea; N-(4-[2-(4-hidroxi-fenil)-amino-pirimidin-4-il]-oxi-fenil-N'-(3-trifluoro-metil-fenil)-urea; N-(4-[4-(4-sulfamoil-fenil)-amino-pirimidin-6-il]-oxi-fenil-N'- (3-trifluoro-metil-fenil)-urea; • N-(4-[4-(4-carbamoil-fenil)-amino-pirimidin-6-il]-oxi-fenil- N'-( 3-trif I uoro- meti I -fen i I) -urea; • N-(4-[4-(4-(N-2-hidroxi-etil-carbamoil)-fenil)-amino- pirimidin-6-il]-oxifen il-N '-(3-trif I uoro- met i l-f en i I) -urea; • N-(4-[4-(4-hidroxi-fenil)-amino-pirimidin-6-il]-oxi-fenil-N'-(3- trifluoro-metil-4-(2,2,2-trifluoro-etoxi)-fenil)-urea; • N-(4-(N-óxido-piridin-4-il)-oxi-fenil)-N'-(3-trifluoro-metil- fenil)-urea; • N-(4-(2-metoxi-piridin-5-il)-oxi-fenil)-N'-(3-tri fluoro -metil- fenil)-urea; • N-(4-(2-piridin-5-il)-oxi-fenil)-N '-(3-trif luoro-metil-fenil)- urea; • N-[4-{(2-acetil-amino)-piridin-4-il}-oxi]-fenil-N'-(3-trifluoro- metil-fenil)-urea; • N-[4-(piridin-4-il-oxi)-2-cloro-fenil]-N '-(3-trif luoro-metil- fenil)-urea; • N-[4-(piridin-4-il-oxi)-2-meti l-f eni l]-N '-(3-trif luoro-metil- fenil)-urea; y • N-(4-[4-(2-amino-etoxi-fenil)-amino-pirimidin-6-il]-oxi-fenil- N'-(3-tri fluoro -metil- fe nil)-u rea, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Se prefiere más la 1 -[4-(4-etil-piperazinil-1-il-metil)-3-trifluoro-metil-fenil]-3-[4-(6-metil-amino-pirimidin-4-iloxi-fenil]-urea; la 1 -[4-(2-amino-pirimidin-4-iloxi)-fenil]-3-[4-(4-etil-piperazin-1-il-metil)-3-trifluoro-metil-fenil]-urea, y la 1 -[4-(2-amino-pirimidin-4-iloxi)-fenil]-3- [4-(4-metil-piperazin-1-il-metil)-3-trifluoro-metil-fenil]-urea. C. Los compuestos como se dan a conocer en la Publicación Internacional Número WO 04/046120, por ejemplo los compuestos de la Fórmula (XII): o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde: R. es hidrógeno o Y-R', en donde Y es una cadena de alquilideno de 1 a 6 átomos de carbono opcionalmente sustituido, en donde hasta dos unidades de metileno son opcionalmente e independientemente reemplazadas con -O-, -S-, -NR-, -OCO-, -COO-ó -CO-; cada presentación de R es independientemente hidrógeno o un grupo alifático de 1 a 6 átomos de carbono opcionalmente sustituido; y cada presentación de R' es independientemente hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un grupo alifático de 1 a 6 átomos de carbono, un anillo monocíclico de 3 a 8 miembros, saturado, parcialmente insaturado o completamente insaturado, que tiene de 0 a 3 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un sistema de anillos bicíclicos de 8 a 12 miembros, saturado, parcialmente insaturado o completamente insaturado, que tiene de 0 a 5 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; o R y R', dos presentaciones de R, o dos presentaciones de R', se toman junto con los átomos con los que están unidos, para formar un anillo monocíclico o bicíclico de 3 a 12 miembros, saturado, parcialmente insaturado o completamente insaturado, opcionalmente sustituido, que tiene de 0 a 4 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; R2 es -(T)nAr1 ó -(T)nCy1, en donde T es una cadena de alquilideno de 1 a 4 átomos de carbono opcionalmente sustituido, en donde una unidad de metileno de T es opcionalmente reemplazada por -NR-, -S-, -O-, -CS-, -C02-, -OCO-, -CO-, -COCO-, -CONR-, -NRCO-, -NRC02-, -S02NR-, -NRS02-, -CONRNR-, -NRCONR-, -OCONR-, -NRNR-, -NRS02NR-, -SO-, -S02-, -PO-, -P02- ó -POR-; n es 0 ó 1 ; Ar1 es un grupo arilo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo monocíclico de 5 a 6 miembros o bicíclico de 8 a 12 miembros, que tiene de 0 a 5 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; y Cy1 es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros, saturado o parcialmente insaturado, que tiene de 0 a 3 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o un sistema de anillos bicíclicos de 8 a 12 miembros, saturado o parcialmente insaturado, que tiene de 0 a 5 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, o R1 y R2, tomados junto con el átomo de nitrógeno, forman un anillo monocíclico de 5 a 8 miembros o bicíclico de 8 a 12 miembros, saturado, parcialmente ¡nsaturado, o completamente insaturado, que tiene de 0 a 3 heteroátomos adicionales independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, en donde Ar1, Cy1, o cualquier anillo formado por R1 y R2, tomados juntos, están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con x presentaciones independientes de Q-R , en donde x es de 0 a 5, Q es un enlace o es una cadena de alquilideno de 1 a 6 átomos de carbono, en donde hasta dos unidades de metileno de Q son opcionalmente reemplazadas por -NR-, -S-, -O-, -CS-, -C02-, -OCO-, -CO-, -COCO-, -CONR-, -NRCO-, -NRC02-, -S02NR-, -NRS02-, -CONRNR-, -NRCONR-, -OCONR-, -NRNR-, -NRS02NR-, -SO-, -S02-, -PO-, -P02- ó -POR-; y cada presentación de Rx es independientemente R', halógeno, N02, CN, OR', SR', N(R')2, NR'COR', NR'CONR'2, NR'C02R', COR', C02R', OCOR', CON(R')2, OCON(R')2, SOR', S02R', S02N(R')2, NR'S02R', NR'S02N(R')2, COCOR' ó COCH2COR'; R3 se enlaza con el átomo de nitrógeno ya sea en la posición 1 ó 2 del anillo, y es (L)mAr2 ó (L)mCy2, en donde L es una cadena de alquilideno de 1 a 4 átomos de carbono opcionalmente sustituido, en donde una unidad de metileno de L es opcionalmente reemplazada por -NR-, -S-, -O-, -CS-, -C02-, -OCO-, -CO-, -COCO-, -CONR-, -NRCO-, -NRC02-, -S02NR-, -NRS02-, -CONRNR-, -NRCONR-, -OCONR-, -NRNR-, -NRS02NR-, -SO-, -S02-, -PO-, -P02- ó -POR-; m es 0 ó 1 ; Ar2 es un grupo arilo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo monocíclico de 5 a 6 miembros o de un anillo bicíclico de 8 a 12 miembros que tiene de O a 5 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre; y Cy2 es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo monocíclico de 3 a 7 miembros, saturado o parcialmente insaturado, que tiene de 0 a 3 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un sistema de anillos bicíclicos de 8 a 12 miembros, saturado o parcialmente insaturado, que tiene de 0 a 5 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno, o azufre, en donde Ar2 y Cy2 están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con y presentaciones de Z-Ry; en donde y es de 0 a 5, Z es un enlace o es una cadena de alquilideno de 1 a 6 átomos de carbono, en donde hasta dos unidades de metileno de Z son opcionalmente reemplazadas por -NR-, -S-, -O-, -CS-, -C02-, -OCO-, -CO-, -COCO-, -CONR-, -NRCO-, -NRC02-, -S02NR-, -NRSOa-, -CONRNR-, -NRCONR-, -OCONR-, -NRNR-, -NRS02NR-, -SO-, -S02-, -PO-, -P02- ó -POR-; y cada presentación de R? es independientemente R', halógeno, N02, CN, OR', SR', N(R')2, NR'COR', NR'CONR'a, NR'C02R', COR', C02R', OCOR', CON(R')2, OCON(R')2, SOR', S02R', S02N(R')2, NR'S02R', NR'S02N(R')2, COCOR' ó COCH2COR'; R4 es hidrógeno o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, en el entendido de que, cuando R5 es hidrógeno, R4 es también hidrógeno; R5 es hidrógeno, o R3 y R5, tomados juntos, forman un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de un anillo monocíclico de 5 a 7 miembros, saturado, parcialmente insaturado o completamente insaturado, que tiene de 0 a 3 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un sistema de anillos bicíclicos de 8 a 10 miembros, saturado, parcialmente insaturado, o completamente insaturado, que tiene de 0 a 3 heteroátomos independientemente seleccionados a partir de nitrógeno, oxígeno, y azufre; y en donde cualquier anillo formado por R3 y R5 tomados juntos, está opcionalmente sustituido con hasta cinco sustituyentes seleccionados a partir de W-Rw, en donde W es un enlace o es una cadena de alquilideno de 1 a 6 átomos de carbono, en donde hasta dos unidades de metileno de W son opcionalmente e independientemente reemplazadas por -NR-, -S-, -O-, -CS-, -C02-, -OCO-, -CO-, -COCO-, -CONR-, -NRCO-, -NRC02-, -S02NR-, -NRS02-, -CONRNR-, -NRCONR-, -OCONR-, -NRNR-, -NRS02NR-, -SO-, -S02-, -PO-, -P02- ó -POR-; y cada presentación de Rw es independientemente R', halógeno, N02, CN, OR', SR', N(R')2, NR'COR', NR'CONR'a, NR'C02R', COR', C02R', OCOR', CON(R')2, OCON(R')2, SOR', S02R', S02N(R')2, NR'S02R', NR'S02N(R')2, COCOR', ó COCH2COR', en el entendido de que, cuando: a) R3 es fenilo insustituido y R1 es hidrógeno, entonces no es: i) fenilo insustituido; ¡i) piridilo insustituido; iii) bencilo sustituido con o-OMe; iv) -C=S)NH(C=0)-fenilo; v) vi) -(C = S)NH-naftilo ó -(C=0)N-naftilo; o b) R3 es fenilo sustituido o insustituido, entonces R2 no es fenilo sustituido en la posición para con oxazol, tiazol, tiadiazol, oxadiazol, tetrazol, triazol, diazol, o pirrol; c) R3 es fenilo, piridilo, pirimidinadiona, o ciciohexilo, y R1 es hidrógeno, entonces R2 no es fenilo simultáneamente sustituido con una presentación de OMe en la posición meta, y una presentación de oxazol en la presentación para; d) R3 es 4-CI-fenilo o 3,4-CI-fenilo, entonces R2 no es p-CI-fenilo; e) R3 es pirimidinilo insustituido, entonces R2 no es fenilo insustituido, fenilo sustituido por p-OMe, fenilo sustituido por p-OEt, o fenilo sustituido por o-OMe, o cuando R3 es 4-Me-pirimidinilo o 4,6-dimetil-pirimidinilo, entonces R2 no es fenilo insustituido; f) los compuestos de la Fórmula (XII) excluyen: g) R2 es 3-piridinilo y R1 es hidrógeno, entonces R3 no es trimetoxi-benzoílo; h) R3 es fenilo opcionalmente sustituido y R1 es hidrógeno, entonces R2 no es -(C = S)NH(C=0)-fenilo, -(C = O)NH-fenilo, -(C = S)NH-fenilo, ó -(C=0)CH2(C=0)-fenilo; i) R1 es hidrógeno y R2 es bencilo insustituido, entonces R3 no es tiadiazol sustituido con fenilo opcionalmente sustituido; j) R1 es hidrógeno, R2 es piridilo, y R3 es piridilo, entonces R2 no está sustituido con uno o más de CF3, Me, OMe, Br, ó Cl; k) R1 es hidrógeno y R2 es piridilo, entonces R3 no es piridilo insustituido, quinolina insustituida, fenilo insustituido, o isoquinolina insustituida; I) R1 es hidrógeno y R2 es quinolina insustituida, entonces R3 no es piridilo insustituido o quinolina insustituida; m) R1 es hidrógeno y R2 es isoquinolina insustituida o naftilo insustituido, entonces R3 no es piridilo insustituido; n) los compuestos de la Fórmula (XII) excluyen a los compuestos que tienen la estructura general: en donde: R1, R2, y R3 son como se definen anteriormente; M y K son O ó H2, en el entendido de que K y M son diferentes, A y B son cada uno -CH2-, -NH-, -N-alquilo-, -N-aralquilo-, -NCORa, -NCONHR , ó -NCSNHRb, en donde Ra es alquilo inferior o aralquilo; y Rb es alquilo de cadena recta o ramificada, aralquilo, o arilo que puede estar insustituido o sustituido con uno o más sustituyentes de alquilo y/o halo-alquilo; o) los compuestos de la Fórmula (XII) excluyen a los compuestos que tienen la estructura general: en donde: R1 y R2 son como se definen anteriormente; y r y s son cada uno independientemente 0, 1, 2, 3, ó 4, en el entendido de que la suma de s y r es de cuando menos 1; p) los compuestos de la Fórmula (XII) excluyen a cualquiera o más de, o todos los siguientes compuestos: ¡i) iv) v) en donde R2 es NH(CH)(Ph)C = 0(Ph); vi) en donde R2 es fenilo insustituido, o fenilo sustituido con OMe, Cl, o Me; vii) en donde: R2 es fenilo insustituido, o fenilo sustituido con OMe, Cl, Me, u OMe, o R es bencilo insustituido; viii) en donde: R2 es aralquilo opcionalmente sustituido; y Rc y Rd son cada uno independientemente Me, hidrógeno, CH2CI ó Cl; ix) x) xi) en donde Re es ffeenilo opcionalmente sustituido ; xii) en donde R2 es fenilo opcionalmente sustituido con Me, OMe, Br, ó Cl; o q) cuando : R 1 es hidrógeno ; y R2 es fen ilo , o fenilo opcionalmente sustituido ; y m es 1 , entonces L no es -CO-, -COCH2-, ó -COCH=CH-. En cada caso en donde se dan citas de solicitudes de patentes en lo ante rior, el asunto objeto relacionado con los compuestos se incorpora a la presente solicitud como referencia. De la misma manera, están comprendidas las sales farmacéuticam ente aceptables de los mismos, los racematos correspondientes , los diaestereoisómeros, los enantiómeros, los tautómeros, así como las modificaciones de cristal correspondientes de los compuestos anteriormente dados a conocer, cuando estén presentes, por ejemplo solvatos, hidratos, y polimorfos, los cuales se dan a conocer en las mismas. Los compuestos utilizados como ingredientes activos en las combinaciones de la invención se pueden preparar y administrar como se describe en los documentos citados, respectivamente. También, dentro del alcance de esta invención, está la combinación de más de dos ingredientes activos separados como se estipulan anteriormente, es decir, una combinación farmacéutica dentro del alcance de esta invención podría incluir a tres ingredientes activos o más. De acuerdo con los descubrimientos particulares de la presente invención, se proporciona: 1. Una combinación farmacéutica, la cual comprende: a) un compuesto de pirimidil-amino-benzamida de la Fórmula (I); y b) cuando menos un inhibidor de Flt-3. 2. Un método para el tratamiento o la prevención de una enfermedad proliferativa en un sujeto que lo necesite, el cual comprende la co-administración a este sujeto, por ejemplo de una manera concomitante o en secuencia, de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de pirimidil-amino-benzamida de la Fórmula (I), y un inhibidor de Flt-3, por ejemplo como se da a conocer anteriormente. Los ejemplos de las enfermedades proliferativas incluyen, por ejemplo, tumores, leucemias, soriasis, restenosis, esclerodermitis, y fibrosis. 3. Una combinación farmacéutica como se define en 1 ) anterior, por ejemplo para utilizarse en un método como se define en 2) anterior. 4. Una combi nación farmacéutica como se define en 1 ) anterior, para utilizarse en la preparación de un medicamento para utilizarse en un método como se define en 2) anterior. La utilidad de la combinación de la invención en un método como se especifica anteriormente en la presente, se puede demostrar en métodos de prueba con animales, así como en la cl ínica, por ejemplo, de acuerdo con los métodos descritos posteriormente en la presente. De una manera sorprendente, ahora se ha encontrado que la combinación de un compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3, posee propiedades terapéuticas, que la hacen particularmente útil como un tratamiento para enfermedades proliferativas. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para el tratamiento de enfermedades proliferativas, el cual comprende administrar a un mamífero que necesite dicho tratamiento, una cantidad terapéuticamente efectiva de la combinación de un compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3, o sales farmacéuticamente aceptables o pro-fármacos de los mismos.

De una manera preferible, la presente invención proporciona un método para el tratamiento de mamíferos, en especial seres humanos, que sufran de enfermedades proliferativas, el cual comprende administrar a un mamífero que necesite dicho tratamiento, una cantidad inhibidora de la combinación de un compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En la presente descripción, el término "tratamiento" incluye el tratamiento tanto profiláctico como preventivo, así como el tratamiento curativo o supresor de la enfermedad, incluyendo el tratamiento de pacientes que estén en riesgo de contraer la enfermedad, o de los que se sospeche que han contraído la enfermedad, así como en los pacientes enfermos. Este término incluye además el tratamiento para la demora de progreso de la enfermedad. El término "curativo", como se utiliza en la presente, significa la eficacia en el tratamiento de episodios continuos que involucren enfermedades proliferativas. El término "profiláctico" significa la prevención del establecimiento o recurrencia de enfermedades que involucren enfermedades proliferativas. El término "demora de progreso", como se utiliza en la presente, significa la administración del compuesto activo a pacientes que estén en una etapa previa o en una fase temprana de la enfermedad que se vaya a tratar, en cuyos pacientes, por ejemplo, se diagnostique una pre-forma de la enfermedad correspondiente, o cuyos pacientes estén en una condición, por ejemplo durante un tratamiento médico, o una condición que resulte de un accidente, bajo la cual sea probable que se desarrolle una enfermedad correspondiente. Este intervalo imprevisible de propiedades significa que el uso de la combinación de un compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3 es de un interés particular para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades proliferativas. Para demostrar que la combinación de un compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3 es particularmente adecuada para el tratamiento de enfermedades proliferativas con un buen margen terapéutico y otras ventajas, se pueden llevar a cabo estudios clínicos de una manera conocida por una persona experta. A. Tratamiento Combinado Los estudios cl ínicos adecuados son, por ejemplo, estudios de escala de dosis, de etiqueta abierta, en pacientes con enfermedades proliferativas. Estos estudios prueban en particular el sinergismo de los ingredientes activos de la combinación de la invención . Los efectos benéficos se pueden determinar directamente a través de los resultados de estos estudios, los cuales son conocidos por una persona experta en la materia. Estos estudios son en particular adecuados para comparar los efectos de una monoterapia utilizando los ingredientes activos, y una combinación de la invención. De preferencia, la dosis del agente (a) se escala hasta que se alcance la Máxima Dosificación Tolerada, y el agente (b) se administra con una dosis fija. De una manera alternativa, el agente (a) se administra en una dosis fija, y se escala la dosis del agente (b). Cada paciente recibe dosis del agente (a) ya sea diariamente o de una manera intermitente. La eficacia del tratamiento se puede determinar en estos estudios, por ejemplo, después de 12, 18, ó 24 semanas, mediante la evaluación de los puntajes de síntomas cada seis semanas. La administración de una combinación farmacéutica de la invención da como resultado no solamente un efecto benéfico, por ejemplo, un efecto terapéutico sinérgico, por ejemplo con respecto a aliviar, demorar el progreso de, o inhibir los síntomas, sino también efectos benéficos sorprendentes adicionales, por ejemplo menos efectos secundarios, una mejor calidad de vida, o una patología reducida, comparándose con una monoterapia aplicando solamente uno de los ingredientes farmacéuticamente activos utilizados en la combinación de la invención. Un beneficio adicional es que se pueden utilizar dosis más bajas de los ingredientes activos de la combinación de la invención, por ejemplo, que las dosificaciones no necesitan ser con frecuencia más pequeñas, sino que también se aplican con menos frecuencia, lo cual puede disminuir la incidencia o la severidad de los efectos secundarios. Esto está de acuerdo con los deseos y requerimientos de los pacientes que se van a tratar. El término "co-administración" o "administración combinada" o similar, como se utiliza en la presente, significa que abarca la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un solo paciente, y pretende incluir regímenes de tratamiento en donde los agentes no necesariamente se administran por la misma vía de administración o al mismo tiempo. Es un objetivo de esta invención proporcionar una composición farmacéutica, la cual comprende una cantidad, que es conjuntamente efectiva terapéuticamente para dirigir o prevenir las enfermedades proliferativas con una combinación de la invención. En esta composición, el agente (a) y el agente (b) se pueden administrar juntos, uno después del otro, o por separado en una forma de dosificación unitaria combinada, o en dos formas de dosificación unitaria separadas. La forma de dosificación unitaria también puede ser una combinación fija. Las composiciones farmacéuticas para la administración separada del agente (a) y el agente (b) , o para la administración en una combinación fija, es deci r, una sola composición galénica que comprenda cuando menos dos componentes de combi nación (a) y (b) , de acuerdo con la invención, se puede preparar de una manera conocida por sí misma, y son aquéllas adecuadas para administración enteral, tal como oral o rectal, y parenteral a mam íferos (animales de sangre caliente) , incluyendo seres humanos, comprendiendo una cantidad terapéuticamente efectiva de cuando menos un componente de combinación farmacológicamente activo solo, por ejemplo como se indica anteriormente, o en combinación con uno o más veh ículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables, en especial adecuados para aplicación enteral o parenteral. Las composiciones farmacéuticas adecuadas contienen , por ejemplo, de aproximadamente el 0.1 por ciento a aproximadamente el 99.9 por ciento, de preferencia de aproximadamente el 1 por ciento a aproximadamente el 60 por ciento de los ingredientes activos. Las preparaciones farmacéuticas para la terapia de combinación para administración enteral o parenteral son, por ejemplo, aquéllas que están en formas de dosificación unitaria, tales como tabletas recubiertas con azúcar, tabletas, cápsulas o supositorios o ampolletas. Si no se indica de otra manera, éstas se preparan de una manera conocida por sí misma, por ejemplo por medio de procesos convencionales de mezcla, granulación, recubrimiento con azúcar, disolución, o liofilización. Se apreciará que el contenido unitario de un componente de combinación contenido en una dosis individual de cada forma de dosificación no necesita por sí mismo constituir una cantidad efectiva, debido a que se puede alcanzar la cantidad efectiva necesaria mediante la administración de una pluralidad de unidades de dosificación. En particular, se puede administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de cada uno de los componentes de la combinación de la invención de una manera simultánea o en secuencia, y en cualquier orden, y los componentes se pueden administrar por separado o como una combinación fija.

Por ejemplo, el método para prevenir o tratar enfermedades proliferativas de acuerdo con la invención puede comprender: (i) la administración del primer agente (a) en forma libre o de sal farmacéuticamente aceptable; y (ii) la administración de un agente (b) en forma libre o de sal farmacéuticamente aceptable, de una manera simultánea o en secuencia en cualquier orden, en cantidades conjuntamente efectivas terapéuticamente, de preferencia en cantidades sinérgicamente efectivas, por ejemplo en dosificaciones diarias o i ntermitentes correspondientes a las cantidades descritas en la presente. Los componentes de combinación individuales de la combinación de la invención se pueden administrar por separado en diferentes tiempos durante el transcurso de la terapia, o bien de una manera concurrente en formas de combinación divididas o individuales. Adicionalmente, el término "administrar" también abarca el uso de un pro-fármaco de un componente de combinación que se convierta in vivo hasta el componente de combinación como tal. Por consiguiente, se debe entender que la presente invención abarca todos los regímenes de tratamiento simultáneo o alternado, y el término "administración" se debe interpretar de conformidad con lo mismo. La dosificación efectiva de cada uno de los componentes de combinación empleados en la combinación de la invención puede variar dependiendo del compuesto o composición farmacéutica particular empleada, del modo de administración, de la condición que se esté tratando, de la severidad de la condición que se esté tratando. Por consiguiente, el régimen de dosificación de la combinación de la invención se selecciona de acuerdo con una variedad de factores, incluyendo la vía de administración, y la función renal y hepática del paciente. Un clínico o un médico de una experiencia ordinaria, puede determinar fácilmente y prescribir la cantidad efectiva de los ingredientes activos individuales requeridos para aliviar, contrarrestar, o detener el progreso de la condición. La precisión óptima para alcanzar la concentración de los ingredientes activos dentro del intervalo que produzca eficacia sin toxicidad, requiere de un régimen basado en la cinética de la disponibilidad de los ingredientes activos para los sitios objetivo. Las dosificaciones diarias para el agente (a) o (b) desde luego, variarán dependiendo de una variedad de factores, por ejemplo del compuesto seleccionado, de la condición particular que se vaya a tratar, y del efecto deseado. Sin embargo, en general, se logran resultados satisfactorios con la administración del agente (a) en índices de dosificación diarios del orden de aproxi madamente 0.03 a 5 miligramos/kilogramo al día, en particular de 0.1 a 5 miligramos/kilogramo al día, por ejemplo de 0.1 a 2.5 miligramos/kilogramo al día, como una sola dosis o en dosis divididas. El agente (a) y el agente (b) se pueden administrar por cualquier vía convencional, en particular enteralmente, por ejemplo oralmente, por ejemplo en la forma de tabletas, cápsulas, soluciones para beber, o parenteralmente, por ejemplo en la forma de soluciones o suspensiones inyectables. Las formas de dosificación unitaria adecuadas para administración oral comprenden de aproximadamente 0.02 a 50 miligramos de ingrediente activo, usualmente de 0.1 a 30 miligramos, por ejemplo del agente (a) o (b), junto con uno o más diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables para el mismo. El agente (b) se puede administrar a un ser humano en un intervalo de dosificación diaria de 0.5 a1 ,000 miligramos. Las formas de dosificación unitaria adecuadas para administración oral comprenden de aproximadamente 0.1 a 500 miligramos de ingrediente activo, junto con uno o más diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables para el mismo. La administración de una combinación farmacéutica de la invención da como resultado no solamente un efecto benéfico, un efecto terapéutico sinérgico, por ejemplo con respecto a la inhibición de la proliferación no regulada de las células totipotentes hematológicas, o para hacer más lento el progreso de las leucemias, tales como CML (leucemia mieloide crónica) o AML (leucemia mieloide aguda) , o el crecimiento de tumores, sino también da como resultado efectos benéficos sorprendentes adicionales , por ejemplo menos efectos secundarios, una mejor calidad de vida, o una patología reducida, comparándose con una monoterapia aplicando solamente uno de los ingredientes farmacéuticamente activos utilizados en la combinación de la invención. Un beneficio adicional es que se pueden utilizar dosis más bajas de los ingredientes activos de la combinación de la invención, por ejemplo, que las dosificaciones no necesitan ser con frecuencia más pequeñas, sino que también se aplican con menos frecuencia, o se pueden utilizar con el objeto de disminuir la incidencia de efectos secundarios. Esto está de acuerdo con los deseos y requerimientos de los pacientes que se van a tratar. Las combinaciones de un compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3 se pueden combinar, independientemente o j untos, con uno o más veh ículos farmacéuticamente aceptables, y opcionalmente, uno o más adyuvantes farmacéuticos convencionales, y se administran enteralmente, por ejemplo oralmente, en la forma de tabletas, cápsulas, caplets, etc. , o parenteralmente, por ejemplo intraperitonealmente o intravenosamente, en la forma de soluciones o suspensiones inyectables. Las composiciones entérales y parenterales se pueden preparar por medios convencionales. La combinación del compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3 se puede utilizar sola o combinada con cuando menos un compuesto farmacéuticamente activo diferente para utilizarse en estas patologías. Estos compuestos activos se pueden combinar en la misma preparación farmacéutica, o en la forma de preparaciones combinadas como "kit de partes", en el sentido de que los componentes de la combinación se pueden dosificar independientemente, o mediante el uso de diferentes combinaciones fijas con cantidades distinguidas de los componentes de combinación, es decir, simultáneamente o en diferentes puntos del tiempo. Las partes del kit de partes, por ejemplo, se pueden administrar entonces de una manera simultánea o cronológicamente escalonada, es decir, en diferentes puntos del tiempo, y con intervalos de tiempo iguales o diferentes, para cualquier parte del kit de partes. Los ejemplos no limitantes de los compuestos que se pueden citar para utilizarse en combinación con la combinación de un compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3, son fármacos de quimioterapia citotóxicos, tales como citosina-arabinosida, daunorrubicina, doxorrubicina, ciclofosfamida, VP-16, o imatinib, etc. Además, la combinación de un compuesto de pirimidil-amino-benzamida y un inhibidor de Flt-3 se podría combinar con otros inhibidores de transducción de señales u otros fármacos dirigidos a oncogenes, con la expectativa de que resulte un sinergismo significativo. B. Enfermedades que Serán Tratadas. El término "enfermedad proliferativa" incluye, pero no se restringe a, tumores, soriasis, restenosis, esclerodermitis, y fibrosis.

El término "malignidad hematológica" se refiere en particular a leucemias, en especial aquéllas que expresan Bcr-Abl, c-Kit, o Flt-3, e incluye, pero no se limita a, leucemia mieloide crónica y leucemia linfocítica aguda (ALL), en especial la leucemia linfocítica aguda positiva para el cromosoma Filadelfia (Ph+ALL), así como leucemia resistente a STI571. Se prefiere en especial el uso de las combinaciones de la presente invención para leucemias, tales como leucemia mieloide crónica o leucemia mieloide aguda.

El término "una enfermedad de tumor sólido" significa en especial cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer del colon y en general del tracto gastrointestinal, cáncer de cérvix, cáncer de pulmón, por ejemplo cáncer pulmonar de células pequeñas y cáncer pulmonar no de células pequeñas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de vejiga, cáncer de la próstata, o sarcoma de Kaposi . Las combinaciones de acuerdo con la invención, que inhiben las actividades de cinasa de proteína mencionadas, en especial las cinasas de proteína tirosina mencionadas anteriormente y más adelante, por consiguiente, se pueden utilizar en el tratamiento de enfermedades dependientes de cinasa de proteína. Las enfermedades dependientes de cinasa de proteína son en especial las enfermedades proliferativas, de preferencia benignas o en especial tumores malignos (por ejemplo, carcinoma de los riñones, h ígado, glándulas adrenales, vejiga, mama, estómago, ovarios, colon, recto, próstata, páncreas, pulmones, vagina, o tiroides, sarcoma, glioblastomas, y numerosos tumores de cuello y cabeza, así como leucemias) . También son capaces de provocar la regresión de los tumores y de prevenir la formación de metástasis tumorales, y el crecimiento de (también micro)-metástasis. En adición , se pueden utilizar en la hiperproliferación epidérmica (por ejemplo, soriasis), en la hiperplasia de próstata, y en el tratamiento de neoplasias, en especial de carácter epitelial, por ejemplo carcinoma mamario. También es posible utilizar las combinaciones de la presente invención en el tratamiento de enfermedades del sistema inmune hasta donde estén involucradas varias, o en especial las cinasas de proteína tirosina individuales; adicionalmente, las combinaciones de la presente invención se pueden utilizar también en el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central o periférico, en donde esté involucrada la transmisión de señales por cuando menos una cinasa de proteína tirosina, en especial seleccionada a partir de aquéllas mencionadas de una manera específica. En la leucemia mieloide crónica, una translocalización cromosómica recíprocamente equilibrada en las células totipotentes hematopoiéticas (HSCs) produce el gen híbrido BCR-ABL. Éste último codifica la proteína de fusión oncogénica BCR-ABL. Aunque ABL codifica una cinasa de proteína tirosina estrechamente regulada, que tiene un papel fundamental en la regulación de la proliferación, adherencia y apoptosis celular, el gen de fusión BCR-ABL codifica una cinasa constitutivamente activada, que transforma las células totipotentes hematopoiéticas para producir un fenotipo que exhibe una proliferación clonal mal regulada, una capacidad reducida para adherirse al estroma de médula ósea, y una reducción de la respuesta apoptótica a los estímulos mutagénicos, que le hacen posible acumular progresivamente más transformaciones malignas. Los granulocitos resultantes fracasan para desarrollarse hasta linfocitos maduros, y se liberan hacia la circulación, conduciendo a una deficiencia en las células maduras y a una mayor susceptibilidad a la infección. Se han descrito inhibidores competitivos por ATP de BCR-ABL que impiden que la cinasa active las sendas mitogénicas y anti-apoptóticas (por ejemplo, cinasa P-3 y STAT5), conduciendo a la muerte de las células con el fenotipo BCR-ABL, y proporcionando de esta manera una terapia efectiva contra la leucemia mieloide crónica. Las combinaciones de la presente invención , por lo tanto, son especialmente apropiadas para la terapia de las enfermedades relacionadas con su sobre-expresión, en especial leucemias, tales como leucemias, por ejemplo leucemia mieloide crónica o leucemia linfocítica aguda. Las combinaciones de acuerdo con la invención, que inhiben las actividades de cinasa de proteína mencionadas, en especial las cinasas de proteína ti rosina mencionadas anteriormente y más adelante, por consiguiente, se pueden utilizar en el tratamiento de enfermedades dependientes de cinasa de proteína. Las enfermedades dependientes de cinasa de proteína son en especial las enfermedades proliferativas, de preferencia benignas o en especial tumores malignos (por ejemplo, carcinoma de los riñones, hígado, glándulas adrenales, vejiga, mama, estómago, ovarios, colon, recto, próstata, páncreas, pulmones, vagina o tiroides, sarcoma, glioblastomas, y numerosos tumores de cuello y cabeza, así como leucemias) . Son capaces de provocar la regresión de los tumores y de prevenir la formación de metástasis tumorales y el crecimiento de (también micro)-metástasis. En adición , se pueden utilizar en la hiperproliferación epidérmica (por ejemplo, psoriasis) , en hiperplasia de próstata, y en el tratamiento de neoplasias, en especial de carácter epitelial , por ejemplo carcinoma mamario.

También es posible utilizar las combinaciones de la invención en el tratamiento de enfermedades del sistema inmune, hasta donde estén involucradas varias, o en especial las cinasas de proteína tirosina individuales; adicionalmente, las combinaciones de la presente invención se pueden utilizar también en el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central o periférico, en donde esté involucrada la transmisión de señales por cuando menos una cinasa de proteína tirosina, en especial seleccionada a partir de las mencionadas de una manera específica. La Flt-3 (cinasa de tirosina tipo FMD) se expresa especialmente en las células progenitoras hematopoiéticas y en los progenitores de la serie linfoide y mieloide. Se ha documentado la expresión aberrante del gen Flt-3 en leucemias tanto de adultos como de niños, incluyendo leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide aguda con mielodisplasia de tri-linaje (AML/TMDS), leucemia linfocítica aguda, leucemia mieloide crónica y síndrome mielodisplásico (MDS), las cuales, por consiguiente, son las enfermedades preferidas que se van a tratar con los compuestos de la Fórmula (I). Se han encontrado mutaciones activadoras en Flt-3 en aproximadamente el 25 al 30 por ciento de los pacientes con leucemia mieloide aguda. Por consiguiente, existe evidencia acumulada para el papel de la Flt-3 en las leucemias humanas, y las combinaciones de la presente invención, como inhibidores de Flt-3, son especial útiles en la terapia de este tipo de enfermedades (véase Tse y colaboradores, Leukemia 15(7), 1001-1010 (2001); Tomoki y colaboradores, Cáncer Chemother. Pharmacol. 48 (Suplemento 1 ) , S27-S30 (2001 ); Birkenkamp y colaboradores, Leukemia 1 5(12), 1 923- 1 921 (2001 ); Kelly y colaboradores, Neoplasia 99( 1 ) , 310-31 8 (2002)). En la leucemia mieloide crónica, una translocalización cromosómica recíprocamente equilibrada en las células totipotentes hematopoiéticas produce el gen híbrido BC R-ABL. Este último codifica la proteína de fusión oncogénica BCR-ABL. Aunque ABL codifica una cinasa de proteína tirosina estrechamente regulada, que tiene un papel fundamental en la regulación de la proliferación, adherencia y apoptosis celular, el gen de fusión BCR-ABL codifica una cinasa constitutivamente activada, que transforma las células totipotentes hematopoiéticas para producir un fenotipo que exhibe una proliferación clonal mal regulada, una capacidad reducida para adherirse al estroma de médula ósea, y una reducción de la respuesta apoptótica a los estímulos mutagénicos, que le hacen acumular progresivamente más transformaciones malignas. Los granulocitos resultantes fracasan para desarrollarse hasta linfocitos maduros, y se liberan hacia la circulación, conduciendo a una deficiencia en las células maduras, y a una mayor susceptibilidad a la infección. Se han descrito inhibidores competitivos por ATP de BCR-ABL que impiden que la cinasa active las sendas mitogénicas y anti-apoptóticas (por ejemplo, cinasa P-3 y STAT5) , conduciendo a la muerte de las células con el fenotipo de BCR-ABL, y proporcionando de esta manera una terapia efectiva contra la leucemia mieloide crónica. Las combinaciones de la presente invención útiles como inhibidores de BCR-ABL, por lo tanto, son especialmente apropiadas para la terapia de las enfermedades relacionadas con su sobre-expresión, en especial leucemias, tales como leucemias, por ejemplo leucemia mieloide crónica o leucemia li nfocítica aguda. Las combinaciones de la presente invención inhiben primordialmente el crecimiento de los vasos sanguíneos, y por lo tanto, por ejemplo, son efectivas contra un número de enfermedades asociadas con una angiogénesis mal regulada, en especial las enfermedades causadas por neovascularización ocular, en especial retinopatías, tales como retinopatía diabética o degeneración macular relacionada con la edad, soriasis, hemangioblastoma, tal como hemangioma, trastornos proliferativos de las células mesangiales, tales como enfermedades renales crónicas o agudas, por ejemplo nefropatía diabética, nefroesclerosis maligna, síndromes de microangiopatía trombótica, o rechazo de trasplante, o en especial enfermedad renal inflamatoria, tal como glomerulonefritis, especialmente glomerulonefritis mesangioproliferativa, síndrome hemolítico-urémico, nefropatía diabética, nefroesclerosis hipertensiva, ateroma, restenosis arterial , enfermedades autoinmunes, diabetes, endometriosis, asma crónico, y especialmente enfermedades neoplásicas (tumores sólidos, pero también leucemias y otras malignidades hematológicas) , tales como en especial cáncer de mama, cáncer de colon , cáncer de pulmón (especialmente cáncer pulmonar de células pequeñas) , cáncer de la próstata, o sarcoma de Kaposi . Las combinaciones de la presente invención inhiben el crecimiento de tumores, y son especialmente adecuadas para prevenir la extensión metastásica de tumores y el crecimiento de micrometástasis.

Claims (12)

REIVINDICACIONES

1. Una combinación farmacéutica, la cual comprende: a) un compuesto de pirimidil-amino-benzamida de la Fórmula (I); y b) cuando menos un inhibidor de Flt-3.

2. Una combinación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el agente a) se selecciona a partir de la 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-amino]-N-[5-(4-metil-1H-imidazol-1 -il)-3-(trifluoro-metil)-fenil]-benzamida, o sales de la misma.

3. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el inhibidor de Flt-3 se selecciona a partir de N-[(9S, 10R.11R.13R)-2,3, 10,11,12,13-hexahidro-10-metoxi-9-metil-1-oxo-9,13-epoxi-1H,9H-di-indolo-[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]-pirrolo-[3,4-j][1 J]-benzodiazonin-11 -il]-N-metil-benzamida; 1 -[4-(4-etil-piperazinil-1-il-metil)-3-trifluoro-metil-fenil]-3-[4-(6-metil-amino-pirimidin-4-iloxi-fenil]-urea; 1-[4-(2-amino-pirimidin-4-iloxi)-fenil]-3-[4-(4-etil-piperazin-1-il-metil)-3-trifluoro-metil-fenil]-urea; y 1-[4-(2-amino-pirimidin-4-iloxi)-fenil]-3-[4-(4-metil-piperazin-1 -i I- meti I) -3-trifluoro-metil-fenil]-urea.

4. Un método para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa, que comprende una combinación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1.

5. Un método de acuerdo con la reivindicación 4, en donde la enfermedad proliferativa es una leucemia.

6. Un método de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el agente a) se selecciona a partir de 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-am¡no]-N-[5-( 4-met il-1H-¡midazol-1-il)-3-(trifluoro-metil)-fenilj-benzamida.

7. Un método de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el inhibidor de Flt-3 se selecciona a partir de N-[(9S,10R,11 R,13R)-2,3,10,11 , ^.IS-hexahidro-IO-metoxi-?-metil-l-oxo-T.IS-epoxi-IH.TH-di-indolotl^.S-gl-KS'^'.l'-lmj-pirrolo-I ^-jpiJjbenzodiazonin-11-il]-N-metil-benzamida; 1-[4-(4-etil-piperazinil-1-il-metil)-3-trifluoro-metil-fenil]-3-[4-(6-metil-amino-pirimidin-4-iloxi-fenil]-urea; 1-[4-(2-amino-piri midi n-4-iloxi)-fenil]-3-[4-(4-etil-piperazin-1 -il-metil) -3-trifluoro-metil-fenil]-urea; y 1-[4-(2-amino-pirimidin-4-iloxi)-fenil]-3-[4-(4-metil-piperazin-1-il-metil)-3-trifluoro-metil-fenil]-urea.

8. Un método para el tratamiento o la prevención de una enfermedad proliferativa en un sujeto que lo necesite, el cual comprende la co-administración a este sujeto, por ejemplo de una manera concomitante o en secuencia, de una cantidad terapéuticamente efectiva de cuando menos un inhibidor de Flt-3 y un compuesto de pirimidil-amino-benzamida de la Fórmula (I).

9. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en donde la enfermedad proliferativa es una leucemia.

10. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el compuesto de pirimidil-amino-benzamida de la Fórmula (I), se selecciona a partir de 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-amino]-N-[5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-3-(trifluoro-metil)-fenil]-benzamida y sales de la misma.

11. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el inhibidor de Flt-3 se selecciona a partir de N-[(9S,10R,11 R.13R)-2,3,10,11 ,12,13-hexahidro-10-metoxi-9-metil-1-oxo-9,13-epoxi- 1 H,9H-di-indolo[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]-pirrolo-[3,4-j][1J]benzodiazonin-11-il]-N-metil-benzamida; 1-[4-(4-etil-piperazinil-1-il-metil)-3-trifluoro-metil-fenil]-3-[4-(6-metil-amino-pirimidin-4-iloxi-fenil]-urea; 1 -[4-(2-amino-pirimidin-4-iloxi)-fenil]-3-[4-(4-etil-piperazin-1-il-metil)-3-trifluoro-metil-fenil]-urea; y 1-[4-(2-amino-pirimidin-4-iloxi)-fenil]-3-[4-(4-metil-piperazin-1 -il-metil)-3-trifluoro-metil-fenil]-urea.

12. Un método para el tratamiento de leucemia, el cual comprende administrar una combinación de: a) 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-amino]-N-[5-(4-metil-1 H-imidazol-1 -il)-3-(trifluoro-metil)-fenil]-benzamida y sales de la misma; y b) un inhibidor de Flt-3.