MX2007012332A - Des-fluoro linezolid aislado, preparacion de el y su uso como marcador y estandar de referencia. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona una impureza de linezolid aislada, desfluoro linezolid, la preparacion de ella y su uso como estandar de referencia.

Description

DES-FLUORO LINEZOLID AISLADO, PREPARACIÓN DE EL Y SU USO COMO MARCADOR Y ESTÁNDAR DE REFERENCIA Campo de la invención La presente invención se relaciona con desfluoro-linezolid, con métodos para la preparación y detección de él, y con métodos para usar desfluoro-linezolid como un marcador de referencia.

Antecedentes de la invención Linezolid [ (S) -N- [ [3- (3-fluoro-4-morfolinil) fenil] 2-oxo-5-oxazolidinil] metil] acetamida] es un agente antimicrobiano. Linezolid es una oxazolidinona, que tiene la fórmula empírica C?6H20FN3O4 y la siguiente estructura: Linezolid Linezolid se describe en The Merck Index (13a edición, Monografía número: 05526, Registro CAS Número 165800-03-3) como cristales blancos, con un punto de fusión de 181, 5°C-182, 5°C. Linezolid, así como un proceso para su preparación, se revela en la Patente Estadounidense N° 5.688.792 (Ejemplo 5), en la Patente Europea N° 717738, en la Patente Israelí N° 110.802, en la Patente Canadiense N° 2.168.560, y en la Publicación de Patente Internacional WO 95/07271.

Linezolid es comercializado en Estados Unidos por Pfizer, Inc., como una inyección, tabletas, y suspensión oral con la marca ZYVOX®. Sus indicaciones principales son la neumonía hospitalaria, las infecciones de la piel y de la estructura de la piel e infecciones por Enterococcus faecium resistentes a la vancomicina.

La patente estadounidense número 5.688.792 reivindica linezolid y su uso para el tratamiento de infecciones microbianas. Esta patente también descrie el siguiente método para la preparación de linezolid: r wm, -Ü^M , -- *' Este método de preparación también se describió en Bricker et al, J. Med. Chem., 39 673-679 (1996), donde se expresó que la vía precedente evita el uso de fosgeno para preparar el precursor de carbamato del anillo de oxazolidinona. Los autores también revelan que se puede evitar el uso de NaN3 utilizando ftalimida de potasio, y luego desbloqueando la ftalimida con metil amina acuosa.

Un análisis de la tableta comercial ZYVOX® muestra la presencia de desfluoro linezolid como una impureza de linezolid. Un cromatograma de HPLC de ZYVOX® se ilustra en la Figura 1. El desfluoro linezolid que tiene un tiempo de retención relativo (RRT) de 0,69 comparado con el tiempo de retención de linezolid.

Se sabe en el arte que, para la administración a humanos, las consideraciones de seguridad requieren que las autoridades regulatorias nacionales e internacionales establezcan muy bajos límites para las impurezas identificadas, pero no caracterizadas toxicológicamente, antes de que se comerciali e el ingrediente farmacéutico (API) . Generalmente, estos límites son inferiores al 0,15 por ciento en peso de cada impureza. Los límites para las impurezas no identificadas y/o no caracterizadas son obviamente menores, generalmente inferiores al 0,1 por ciento en peso. En consecuencia, en la fabricación de API, la pureza de los productos, tales como linezolid, se requiere la pureza de los productos, tales como linezolid, antes de la comercialización, así como la pureza del agente activo en la fabricación de productos farmacéuticos formulados.

También se sabe en el arte que las impurezas de un API pueden surgir de la degradación del propio API, que se relaciona con la estabilidad del API puro durante el almacenamiento, y del proceso de fabricación, que incluye la síntesis química. Las impurezas del proceso incluyen materiales iniciales sin reaccionar, derivados químicos de impurezas contenidas en materiales iniciales, subproductos sintéticos y productos de la degradación.

Además de la estabilidad, que es un factor importante en la duración del API, la pureza del API producido en el proceso de fabricación comercial es claramente una condición necesaria para la comercialización. Las impurezas introducidas durante los procesos de fabricación comerciales deben limitarse a muy pequeñas cantidades, y preferentemente están sustancialmente ausentes. Por ejemplo, la guía de ICH Q7A para fabricantes de API requiere que las impurezas del proceso se mantengan por debajo de límites fijos especificando la calidad de las materias primas, controlando los parámetros del proceso, tales como la temperatura, la presión, el tiempo y las relaciones estequiométricas, e incluyendo pasos de purificación, tales como cristalización, destilación, y extracción de líquidos- líquidos, en el proceso de fabricación.

La mezcla de productos de una reacción rara vez es un solo compuesto con pureza suficiente para cumplir con las normas farmacéuticas. Los productos colaterales y subproductos de la reacción y reactivos adicionales usados en la reacción, en la mayor parte de los casos, también están presentes en la mezcla de productos. En ciertas etapas durante el procesamiento de un API, tal como linezolid, se debe analizar la pureza del API, generalmente mediante análisis de HPLC o GC, para determinar si es adecuado para el procesamiento continuo y, finalmente, para su uso en un producto farmacéutico. El API no necesita ser absolutamente puro, ya que la pureza absoluta es un ideal teórico que generalmente es inalcanzable. En cambio, se fijan normas de pureza con la intención de asegurar que un API esté tan libre de impurezas como sea posible, y por lo tanto, que sea tan seguro como sea posible para el uso clínico. Como se discutió anteriormente, las pautas de la Administración de Alimentos y Fármacos de Estados Unidos recomiendan que las cantidades de algunas impurezas se limiten a menos del 0,1 por ciento en peso.

Generalmente, los productos colaterales, subproductos y reactivos adicionales (colectivamente "impurezas") se identifican espectrométricamente y/o con otro método físico, y luego se asocian con una posición pico, como aquella de un cromatograma, o un punto en una placa de TLC. (Strobel p. 953, Strobel, H.A.; Heineman, W.R., Chemical Instrumentation: A Systematic Approach, 3a ed. ( iley & Sons : New York 1989)) . Luego, la impureza se puede identificar, por ejemplo, por su posición relativa en el cromatograma, donde la posición en un cromatograma se mide convencionalmente en minutos entre la inyección de la muestra sobre la columna y la elución del componente particular a través del detector. La posición relativa en el cromatograma se denomina "tiempo de retención" . El tiempo de retención varía diariamente, o aún en el transcurso de un día, basado en la condición de la instrumentación, así como muchos otros factores. Para mitigar los efectos que esas variaciones tienen sobre la identificación precisa de una impureza, los practicantes usan el "tiempo de retención relativo" ("RRT") para identificar impurezas. (Strobel, página 922) . El RRT de una impureza es su tiempo de retención dividido por el tiempo de retención de un marcador de referencia. En la teoría, el propio linezolid mismo se puede usar como el marcador de referencia, pero como una cuestión práctica está presente en una proporción tan grande en la mezcla que puede saturar la columna, lo cual deriva en tiempos de retención irreproducibles, ya que el máximo del pico puede ser vago (Strobel, Figura 24.8 (b), página 879, ilustra un pico asimétrico observado cuando se sobrecarga una columna) . Por lo tanto, puede ser ventajoso seleccionar un compuesto diferente del API que se agrega, o está presente, en la mezcla en una cantidad suficientemente grande para que se pueda detectar y suficientemente bajo para no saturar la columna, y para usar ese compuesto como el marcador de referencia.

Los expertos en el arte de la fabricación, investigación y desarrollo de fármacos entienden que un compuesto en un estado relativamente puro se puede usar como un "estándar de referencia" . Un estándar de referencia es similar a un marcador de referencia, que se usa solamente para análisis de calidad, pero también se usa para cuantificar la cantidad del compuesto del estándar de referencia en una mezcla desconocida. Un estándar de referencia es un "estándar externo" cuando una solución de una concentración conocida del estándar de referencia y una mezcla desconocida se analizan usando la misma técnica. (Strobel, página 924, Snyder página 549, Snyder, L.R.; Kirkland, J.J. Introduction to Modern Lipid Chromatography, 2a ed. (John Wiley & Sons : New York 1979) ) . La cantidad del compuesto en la mezcla se puede determinar comparando la magnitud de la respuesta del detector con el estándar de referencia y con el compuesto de la mezcla. Véase también la Patente Estadounidense N° 6.333.198, incorporada en la presente como referencia.

El estándar de referencia también se puede usar para cuantificar la cantidad de otro compuesto de la mezcla si se ha predeterminado un "factor de respuesta", que compensa las diferencias en la sensibilidad del detector a los dos compuestos. (Strobel, página 894) . Con este propósito, el estándar de referencia se agrega directamente a la mezcla, y se lo denomina "estándar interno". (Strobel página 925, Snyder página 552).

El estándar de referencia se puede usar aún como un estándar interno cuando, sin agregar el estándar de referencia, una mezcla desconocida contiene una cantidad detectable del compuesto estándar de referencia usando una técnica denominada "agregado de estándar" . En un "agregado de estándar" , se preparan por lo menos dos muestras agregando cantidades conocidas y diferentes del estándar interno. (Strobel páginas 391-393, Snyder páginas 571, 572) . La proporción de la respuesta del detector debido al estándar de referencia presente en la mezcla sin el agregado se puede determinar graficando la respuesta del detector contra la cantidad del estándar de referencia agregado a cada una de las muestras, y extrapolando el gráfico a cero. (Véase, por ejemplo, Strobel, Figura 11.4 página 392).

Existe una necesidad de aislar la impureza desfluoro linezolid. Esta impureza también se puede usar como un marcador y/o estándar de referencia.

Extracto de la invención En una realización, la invención se refiere a desfluoro linezolid aislado, de la siguiente estructura: Desfluoro linezolid así como a su preparación.

En aún otra realización, la invención se refiere a un método para usar desfluoro linezolid como marcador de referencia para analizar la pureza de linezolid.

En aún otra realización, la invención se refiere a un método para usar desfluoro linezolid como estándar de referencia apra cuantificar la cantidad de una impureza desfluoro linezolid en una muestra de linezolid.

En otra realización, la invención se refiere a métodos analíticos para ensayar y determinar el perfil de impurezas de linezolid. Estos métodos también son adecuados para analizar y ensayar linezolid y desfluoro linezolid.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 muestra el análisis de HPLC de la tableta comercial ZYVOX® .

La Figura 2 muestra los espectros de 1H-NMR de desfluoro linezolid.

La Figura 3 muestra los espectros de 13C-NMR de desfluoro linezolid.

La Figura 4 muestra los espectros de radiación infrarroja de desfluoro linezolid.

La Figura 5 muestra los espectros de masa de desfluoro linezolid.

La Figura 6 muestra el análisis de HPLC de linezolid.

Descripción Detallada de la invención Como se utiliza en la presente, el término "estándar de referencia" se refiere a un compuesto que se puede usar para análisis tanto cuantitativos como cualitativos de un ingrediente farmacéutico. Por ejemplo, el tiempo de retención de HPLC del compuesto estándar de referencia permite que se determine un tiempo de retención relativo con respecto al ingrediente farmacéutico activo, haciendo posible entonces el análisis cualitativo. Además, la concentración del compuesto en solución antes de la inyección en la columna de HPLC permite que se comparen las áreas debajo de los picos de HPLC, haciendo posible entonces el análisis cuantitativo.

Un "marcador de referencia" se usa en el análisis cualitativo para identificar los componentes de una mezcla basada en su posición, por ejemplo en un cromatograma o en una placa de Cromatografía de Película Delgada (TLC) (Strobel páginas 921, 922, 953). Con este propósito, el compuesto no necesariamente se debe agregar a la mezcla si está presente en la mezcla. Un "marcador de referencia" se usa solamente para el análisis cualitativo, mientras que un estándar de referencia se puede usar para análisis cuantitativo o cualitativo, o ambos. Por lo tanto, un marcador de referencia es un subgrupo de un estándar de referencia, y está incluido dentro de la definición de un estándar de referencia.

La presente invención proporciona desfluoro linezolid aislado de la siguiente estructura: Desfluoro linezolid Como se ilustra en la Figura 1, esta impureza es ideal para su uso como estándar de referencia ya que se puede detectar mediante HPLC, y aún está presente en cantidades mucho menores que linezolid, que tiene un RRT de 0,69 comparado con el tiempo de retención de linezolid.

El desfluoro linezolid aislado es puro. Preferentemente tiene una pureza del 95% en peso con respecto a otros compuestos, que incluyen linezolid. Preferentemente, el desfluoro linezolid se aisla con un 99,3% en peso de pureza. Por lo tanto, desfluoro linezolid asilado contiene menos del 5%, preferentemente menos del 2%, y aún más preferentemente menos del 1% en peso, de linezolid.

El desfluoro linezolid aislado de la presente invención se puede caracterizar por datos seleccionados de: 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) d (ppm): 1,83 (S), 3,04 (brt) , 3,40 (t) , 3,68 (m) , 3,72 (brt) , 4,04 (t) , 4,67 (m) , 6,95 (d) , 6,95 (d) , 7,37 (d) , 7,37 (d) y 8,23 (t) / 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) d (ppm): 22,8, 41,9, 48,0, 49,2, 66,5, 71,7, 115,9, 115,9, 119,9, 130,9, 148,0, 154,7, 170,0; El+m/z (MH+) : 319; y espectros de radiación infrarroja en KBr a 1523, 1555, 1656, 1731, 2830, 2926, 2968 y 3311 cm"1.

El desfluoro linezolid aislado de la presente invención se puede caracterizar por un 1H NMR, sustancialmente como se ilustra en la Figura 2. El desfluoro linezolid aislado de la presente invención se puede caracterizar por 13C NMR, sustancialmente como se ilustra en la Figura 3. El desfluoro linezolid de la presente invención se puede caracterizar por un espectro de radiación infrarroja sustancialmente como se ilustra en la Figura 4. El desfluoro linezolid aislado de la presente invención se puede caracterizar por un espectro de masa sustancialmente como se ilustra en la Figura 5.

El desfluoro linezolid aislado de la presente invención se puede preparar realizando el proceso descrito en la Patente Estadounidense N° 5.688.792, con l-fluoro-4-nitrobenceno en lugar de 3 , 4-difluoronitrobenceno, de acuerdo con el siguiente esquema: El desfluoro linezolid de la presente invención se aisla mediante un proceso que comprende los siguientes pasos: a) combinar (5R) - [ [3- [4- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metil] azida con un solvente orgánico, preferentemente un éster de alquilo de Ci- C o un hidrocarburo aromático de Ce a C?2, más preferentemente tolueno o acetato de etilo, más preferentemente tolueno, y gas hidrógeno en la presencia de un catalizador para obtener una mezcla de la reacción que contiene (5S) - [ [3- [4- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metilamina; b) filtrar la mezcla de la reacción para obtener una solución que contiene (5S) - [ [3- [4- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5- oxazolidinil] metil] amina,- c) agregar anhídrido acético a la solución para obtener un precipitado; y d) recuperar y secar el precipitado para obtener desfluoro linezolid aislado. Preferentemente, la recuperación del precipitado del paso d) se realiza filtrando o decantando. Preferentemente, el catalizador del paso a) se selecciona del grupo formado por Pd/C, Níquel de Raney, y catalizadores de metales nobles, más preferentemente el catalizador de Pd/C.

El desfluoro linezolid aislado de la presente invención es útil como un marcador de referencia para linezolid. Como tal, se puede usar para detectar la impureza desfluoro linezolid en una muestra de linezolid.

Por ejemplo, la cromatografía se puede realizar en una muestra de referencia y una muestra de linezolid. Los picos resultantes se pueden comparar para determinar la presencia de desfluoro linezolid. Si el desfluoro linezolid está presente en la muestra de linezolid, su ubicación en relación con linezolid permite determinar el RRT para la impureza así como otras impurezas en la muestra de linezolid.

En una realización, la presente invención proporciona un método para detectar la impureza desfluoro linezolid en una muestra de linezolid que comprende: a) proporcionar una muestra de referencia que comprende desfluoro linezolid y linezolid; b) realizar la cromatografía, preferentemente mediante HPLC, en la muestra de referencia para determinar el tiempo de referencia relativo de desfluoro linezolid comparado con linezolid; c) realizar la cromatografía, preferentemente mediante HPLC, en la muestra de linezolid para determinar el tiempo de retención relativo de una impureza comparado con linezolid; d) comparar los tiempos de referencia relativos determinados en los pasos b) y c) ; en donde, si los tiempos de retención relativos determinados en los pasos b) y c) son sustancialmente los mismos, la impureza se identifica como desfluoro linezolid, es la misma que la muestra de referencia.

El desfluoro linezolid aislado de la presente invención es útil como estándar de referencia para linezolid, para cuantificar impurezas en una muestra de linezolid. La presente invención proporciona un método para determinar la cantidad de la impureza desfluoro linezolid en una muestra de linezolid con cromatografía, preferentemente HPLC, puede comprender los siguientes pasos: a) medir la cromatografía, preferentemente HPLC, el área debajo del pico en un cromatograma que corresponde a desfluoro linezolid en una muestra que contiene una cantidad conocida de desfluoro linezolid; b) medir mediante cromatografía, preferentemente HPLC, el área debajo de un pico en un cromatograma que corresponde a desfluoro linezolid en una muestra de linezolid que contiene desfluoro linezolid; y c) determinar la cantidad de desfluoro linezolid en la muestra de linezolid comparando el área del paso a) con el área del paso b) . la presente invención proporciona un método de HPLC para analizar una muestra que contiene por lo menos uno de linezolid y desfluoro linezolid que comprende: a) combinar la muestra con H20:ACN (3:1), preferentemente a una relación de 1:2,5 mg/ml, para obtener una solución; b) inyectar la solución del paso (a) sobre una columna de silicio; y c) eluir la muestra desde la columna durante un período de tiempo en la gama de 3 veces a 5 veces el tiempo de elución de linezolid usando una mezcla A de ?2HP04 0,0lM:MeOH (80:20 y una mezcla B de K2HP04 0,01M:MeOH (50:50) como eluyente; y d) detectar por lo menos uno de linezolid y desfluoro linezolid en la muestra relevante con un detector de radiación ultravioleta.

La detección se puede realizar a una longitud de onda de 154 nm. La detección puede incluir medir el contenido de por lo menos uno de linezolid y desfluoro linezolid. El tiempo de elución puede ser de 30 minutos a 45 minutos, más preferentemente de 35 minutos. Preferentemente, la elución de la muestra en el paso c) es mediante un gradiente que a la hora t=0 es el 100% de la mezcla A, a la hora t=15 minutos es una mezcla del 57% de la mezcla A y el 43% de la mezcla B, y a la hora t=25 minutos es una mezcla del 35% de la mezcla A y el 65% de la mezcla B. Este método de HPLC se puede usar como la cromatografía de HPLC en cualquiera de los métodos de la presente invención para detectar o determinar la cantidad de la impureza desfluoro linezolid en una muestra de linezolid.

Habiendo descrito la invención con referencia a ciertas realizaciones preferidas, otras realizaciones se harán evidentes para un experto en el arte a partir del análisis de la memoria descriptiva. La invención también se define haciendo referencia a los siguientes ejemplos que describen detalladamente la preparación de la composición y los métodos de uso de la invención. Será evidente para los expertos en el arte que se pueden hacer muchas modificaciones, tanto de los materiales como de los métodos, sin apartarse del alcance de la invención.

EJEMPLOS El Análisis de NMR se hizo en un Bruker DPX (400 MHz para X NMR, 100 MHz para 13C-NMR) , solvente: DMSO-d6. El análisis de radiación infrarroja se hizo sobre KBr La espectrometría se hizo sobre Micromass Q-TDS mediante el método EI+ Método de HPLC Preparación de la muestra: H20:ACN (3:1) a una relación de 1:2,5 mg/ml, comparado con linezolid Columna: Hypersil Gold 150x4,6, 5 µ Eluyentes: K2HP04 0,01M:MeOH A: 80:20 B: 505:50 Límite de detección: 0,1% Detección a: 254 nm.

Tabla 1 : Gradiente de Elución Paso 1. Preparación de N- (4-nitrofenil) morfolina Una solución de l-fluoro-4-nitrobenceno (32 ml, 0,3 mol, Aldrich) en 50 ml de acetonitrilo se agregó gota a gota a una solución de morfolina (26 ml, 0,3 mol, Aldrich) y di-isopropiletilamina (51 ml, 0,33 mol, Merck) en 130 ml de acetonitrilo con agitación. La mezcla de la reacción se calentó a reflujo agitando durante 5 horas. La mezcla se enfrió a temperatura y se mantuvo toda la noche. El sólido se filtró, se lavó con acetonitrilo y dio N-(4- nitrofenil) morfolina, después de secar (40 °C, vacío, 10 mm, 2 horas) .

Paso 2: Preparación de 4- (4-morfolinil) anilina N- (4 -nitrofenil) morfolina (18,7 g) y (400 ml) formato de amonio (23,5 g) se suspendieron en una mezcla de tetrahidrofurano- metanol : 1 volumen-4 volúmenes (400 ml) y se agregó 10% de Pd/C (0,5 g) a la suspensión agitada en porciones durante 5 minutos. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Luego se agregó una mezcla de tetrahidrofurano-metanol : 1 volumen-4 volúmenes (100 ml) y formato de amonio (12 g) a la mezcla de la reacción de una vez, agregando en porciones de 10% de Pd/C (0,5 g) con agitación. La mezcla de la reacción se agitó durante otras 4 horas. El sólido se filtró y el solvente del líquido madre se evaporaron bajo vacío. El resto se trituró en una mezcla de acetato de etilo-agua (80 ml-100 ml) . El sólido se filtró, se secó (30°C, vacío, 10 ml, 8 horas) y dio 4- (4-morfolinil) anilina (11,5 g) .

Paso 3: Preparación de 4- (4-morfolinil) -N-benciloxicarbonilanilina Una solución de clorformato de bencilo (9,2 ml, 65 mmol, Aldrich) en 10 ml de acetona se gota a gota a una suspensión agitada de 4- (4 -morfolinil) -N-benciloxicarbonilanilina (11,4 g, 65 mmol) y bicarbonato de sodio (11 g, 130 mmol) en una mezcla de acetona y agua (300 ml-150 ml) a 0°C-5°C durante media hora. Luego, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. El sólido se filtró, y los solventes del líquido madre se evaporaron bajo vacío. El resto se disolvió en diclorometano-agua (300 ml-100 ml) . Después de la separación de fases el diclorometano se evaporó bajo vacío y dio 4- (4-morfolinil) -N-benciloxicarbonilanilina (17 g) .

Paso 4: Preparación de (5R) -3- [ [ (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metanol Una solución de BuLi en hexano (1,65M, 43, ml, 68 mmol) se agregó gota a gota a una solución de 4-84-morfolinil) -N-benciloxicarbonilanilina (16 g, 51 mmol) en 300 ml de tetrahidrofurano a -70 °C durante una hora en una atmósfera de nitrógeno. Luego se agregó una solución de butirato de R-glicidilo (8 g, 5 mmol, Aldrich) en 20 ml de tetrahidrofurano se agregó a la mezcla de la reacción agitada a la misma temperatura durante media hora. La mezcla de la reacción se agitó a -60 °C a -70 °C durante otras 6 horas. La mezcla de la reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante 3 días. Posteriormente, se agregaron cloruro de amonio acuoso saturado (10 ml) y luego agua (200 ml) a la mezcla y se agitaron durante 2 horas. La fase orgánica se separó; y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2x 90 ml) . La fase orgánica combinada se lavó con solución salina, los solventes se evaporaron bajo vacío, el resto se cristalizó desde metanol y dio (5R) - [ [3- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metanol (8 g) .

Paso 5: preparación de (5R) -[ [3- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metanosulfonato (5R) - [ [3- (4-Morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metanol (8,4 g) se suspendió en 70 ml de diclorometano, que contenía trietilamina (9,5 ml) . Se agregó cloruro de metanosulfonilo (5,2 ml) a la suspensión agitada enfriada durante 20 minutos a 0°C. Luego la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de la reacción se vertió en una mezcla agitada de agua y acetato de etilo (70 ml-15 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante otros 30 minutos. El precipitado se filtró, se lavó con agua y diclorometano y dio después de secar bajo vacío, (5R) - [ [3- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metanosulfonato (8,5 g) .

Paso 6: Preparación de (5R) - [ [3- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metil] azida (5R) - [ [3- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil]metsulfonato (8,4 g) se suspendió en 50 ml de dimetilformamida. Se agregó azida de sodio (2,3 g) a la suspensión y la mezcla se calentó a 80 °C agitando durante 1,5 horas, y luego a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla de la reacción se vertió en 200 ml de agua y se agitó durante 2,5 horas. Después de la filtración, el lavado y el secado (30°C, vacío 100 mm, toda la noche) se obtuvo (5R) - [ [3- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metil] azida (6,5 g) .

Paso 7: preparación de N- [ [ (5S) -3- [4- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metil] acetamida (des-fluoro-linezolid) En un reactor de 1 L, 6 g de (5R) - [ [3- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metil] azida se cargó con 0,7 L de tolueno y luego con 0,6 g de Pd/C (10% de Pd/C que contiene 52% de agua). El sistema se hizo burbujear con amoníaco (gas) durante 2 horas y luego se inundó tres veces con nitrógeno y 3 veces con hidrógeno. La presión del hidrógeno se fijó a 1,5 atmósferas. La mezcla de la reacción se filtró y la solución se trató con 60 ml de anhídrido acético a temperatura ambiente. El precipitado se filtró y se secó y se obtuvieron 3,3 g de desfluoro linezolid (pureza: 99, 3%) .

Identificación de Desfluoro linezolid mediante XH-NMR y 13C-NMR

Claims (20)

REIVINDICACIONES

1. Desfluoro linezolid aislado.

2. El desfluoro linezolid aislado de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por datos seleccionados de: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d (ppm): 1,83 (s), 3,04 (brt), 3,40 (t), 3,68 (m) , 3,72 (brt), 4,04 (t) , 4,67 (m) , 6,95 (d) , 6,95 (d) , 7,37 (d) , 7,37 (d) y 8,23 (t) ; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) d (ppm): 22,8, 41,9, 48,0, 49,2, 66,5, 71,7, 115,9, 115,9, 119,9, 130,9, 148,0, 154,7, 170,0; El+m/z (MH+) : 319; y espectros de radiación infrarroja en KBr a 1523, 1555, 1656, 1731, 2830, 2926, 2968 y 3311 cm"1.

3. El desfluoro linezolid de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, que contiene menos del 5% en peso de linezolid.

4. El desfluoro linezolid aislado de acuerdo con la reivindicación 3, que contiene menos del 2% en peso de linzolid.

5. El desfluoro linezolid de acuerdo con la reivindicación 4, que contiene menos del 1% en peso de linezolid.

6. Un método para preparar el desfluoro linezolid aislado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende : a) combinar (5R) - [ [3- [4- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metil] azida con un solvente orgánico y gas hidrógeno en la presencia de un catalizador para obtener una mezcla de la reacción que contiene (5S) - [ [3- [4- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidinil] metil] amina; b) filtrar la mezcla de la reacción para obtener una solución que contiene (5S) - [ [3- [4- (4-morfolinil) fenil] -2-oxo-5-oxazolidini1] metil] amina; c) agregar anhídrido acético a la solución para obtener un precipitado; y d) recuperar y secar el precipitado para obtener el desfluoro linezolid aislado.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el solvente orgánico es éster de alquilo de C?-C4 o un hidrocarburo aromático de C6-C?2.

8. El método de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el solvente orgánico es tolueno.

9. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en donde el catalizador en el paso a) es Pd/C.

10. Un método para detectar una impureza desfluoro linezolid en una muestra de linezolid que comprende: a) proporcionar una muestra de referencia que comprende desfluoro linezolid y linezolid; b) realizar la cromatografía HPLC sobre la muestra de referencia para determinar el tiempo de retención relativo del compuesto desfluoro linezolid comparado con linezolid; c) realizar la cromatografía HPLC sobre la muestra de linezolid para determinar el tiempo de retención relativo de una impureza comparado con linezolid; d) comparar los tiempos de retención relativos en los pasos b) y O; en donde, si los tiempos de retención relativos determinados en los pasos b) y c) son sustancialmente los mismos, la impureza se identifica como desfluoro linezolid.

11. Un método para determinar la cantidad de una impureza desfluoro linezolid en una muestra de linezolid que comprende: a) medir mediante cromatografía de HPLC el área debajo del pico en un cromatograma que corresponde a desfluoro linezolid en una muestra que comprende una cantidad conocida de desfluoro linezolid; b) medir mediante cromatografía HPLC el área debajo del pico en un cromatograma de HPLC que corresponde desfluoro linezolid en una muestra de linezolid que contiene desfluoro linezolid; y c) determinar la cantidad de desfluoro linezolid en la muestra de linezolid comparando el área del paso a) con el área del paso b) .

12. El método de acuerdo con la reivindicación 11, en donde la muestra en el paso a) es un estándar de referencia.

13. Un método de HPLC para analizar una muestra que comprende por lo menos uno de linezolid y desfluoro linezolid que comprende: a) combinar la muestra con H20:ACN (3:1) para obtener una solución; b) inyectar la solución del paso (a) en una columna de sílice; y c) eluir la muestra desde la columna durante un período de tiempo en la gama de 3 veces a 5 veces el tiempo de elución de linezolid usando una mezcla A de K2HP04 0,01M:MeOH (80:20) y una mezcla B de K2HP04 0,01M:MeOH (50:50) como eluyente; y d) detectar por lo menos uno de linezolid y desfluoro linezolid en la muestra relevante con un detector de radiación ultravioleta.

14. El método de acuerdo con la reivindicación 13, en donde la combinación de la muestra con H20:ACN (3:1) está en una relación de 1:2,5 mg/ml .

15. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 13 y 14, en donde la detección de por lo menos uno de linezolid y desfluoro linezolid en el paso d) comprende medir por lo menos uno del contenido de linezolid y el contenido de desfluoro linezolid.

16. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, en donde el período de tiempo en el paso c) es de 30 a minutos a 45 minutos.

17. El método de acuerdo con la reivindicación 16, en donde el período de tiempo del paso c) es de 35 minutos.

18. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13 a 17, en donde la elución de la muestra en el paso c) es mediante un gradiente que en el tiempo t=0 es 100% de la muestra A, en el tiempo t=15 minutos es una mezcla de 57% de la mezcla A y 43% de la mezcla B, y en el tiempo t=25 minutos es una mezcla del 35% de la mezcla A y el 65% de la mezcla B.

19. El uso del desfluoro linezolid de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 como estándar de referencia.

20. El uso del desfluoro linezolid de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 como marcador de referencia.