MX2007007721A - Compuestos para el tratamiento de flaviviridae. - Google Patents

Abstract

Se describen ciclosporinas de union a ciclofilina no inmunosupresoras, por ejemplo, de la formula (I), (Ia) o (II) como se define aqui, que tienen propiedades utiles en la prevencion o tratamiento de infecciones por Flaviviridae y trastornos inducidos por Flaviviridae.

Description

COMPUESTOS PARA EL TRATAMIENTO DE FLAVIVI IDAE Campo de la invención La presente invención ser refiere a un nuevo uso para ciclosporinas no inmunosupresoras para el tratamiento de infecciones virales por Flaviviridae y trastornos inducidos.

Antecedentes de la ¡invención Las ciclosporinas comprenden una clase de undecapéptidos poli-N-metilados, cíclicos, estructuralmente distintivos, que comúnmente poseen actividad farmacológica, en particular inmunosupresora, o antiinflamatoria. La primera de las ciclosporinas en ser aislada fue la Ciclosporin o Ciclosporina de metabolito fúngico de existencia natural, también conocida como ciclosporina A. Está bien establecido que la ciclosporina A actúa interfiriendo con el proceso de la activación de célula bloqueando la inicialización de transcripción de I L-2. Se ha mostrado que la Ciclosporina forma un complejo con una proteína citosólica 17kD nombrada como ciclofilina, que ocurre en muchos tipos de célula y se ha mostrado que es idéntica a la cis-trans isomerasa peptídil-proilo, una enzima involucrada en el doblamiento de proteína. Sin embargo, se ha encontrado que la unión a ciclofilina es una actividad necesaria pero no un criterio suficiente para la actividad inmunosupresora El complejo de ciclospopna A/cicl of i lina también puede asociarse con la protema celular llamada calcineupna (CN), la cual pertenece a la superfami a de fosfatasa Esta unión deroga su actividad de fosfatasa, dando como resultado el silencio del factor de trasncppción NF-AT La inhibición de la trayectoria de CN/NF-Ates el mecanismo esencial para la inmunosupresión mediada por ciclospopna A Se han identificado Ciclospopnas que se unen fuertemente a ciclofilma pero no son inmunosupresoras Se considera que una ciclospopna es no-inmunosupresora cuando tiene una actividad en la Reacción de Linfocito Mezclada (MLR) de no más de 5%, preferiblemente no mas de 2%, que la de la ciclospopna A La Reacción de Linfocito Mezclada se describe por T Meo in "Immunological Methods", L Lefkovits and B Peps, Eds , Academic Press, N Y pp 227 - 239 (1979) Células del baso (0 5 x 106) de ratones Balb/c (hembras, 8 - 10 semanas) fueron co- incubadas durante 5 días con 0 5 x 106 células de baso irradiadas (2000 rads) o tratadas con mitomicina C de ratones CBA (hembras, 8 - 10 semanas) Las células halogeneicas irradiadas inducen una respuesta proliferativa en las células del baso de Balb c, la cual puede ser medida a través de precursores marcados o la incorporación en el ADN Ya que las células estimuladoras son irradiadas (o tratadas con mitomicina C) no responden a las células Balb/c con proliferación, sino que retienen su antigenicida. La IC50 encontrada para el compuesto de prueba en la MLR se compara con aquella encontrada para la ciclospopna A en experimento paralelo Además, las ciclospopnas no-inmunosupresoras carecen de la capacidad de inhibir CN y la trayectoria de NF-AT corriente abajo EP 0 484 281 A1 y la Patente de UA No 5,767,069 describe el uso de ciclospopnas no- inmunosupresoras en el tratamiento de SIDA o trastornos relacionados con el SIDA Como se describe en la solicitud EP 2004/009804, las ciclospopnas no-inmunosupresoras que se unen a ciclofilina, también se ha encontrado que tienen un efecto inhibidor sobre el virus de Hepatitis C (HCV) La infección persistente por HCV, la cual ha sido identificada como el agente causante principal de hepatitis que no es A, que no es B, se ha considerado estrechamente relacionada con enfermedades del hígado tales como hepatitis crónica, cirrosis de hígado o carcinoma hepatocelular El desarrollo de estas enfermedades del hígado es un problema de salud publica principal La terapia anti-HCV efectiva esta restringida a terapia con interferon o una combinación de interferón and pbavipna Sin embargo, ya que el virus no es eliminado de aproximadamente la mitad de los pacientes con HCV tratados con estos agentes conocidos, sigue existiendo una fuerte necesidad de agentes anti-HCV alternativos Las infecciones por Hepatitis C o transtornos inducidos por HCV son, por ejemplo, hepatitis crónica, cirrosis de hígado o cáncer de hígado, por ejemplo, carcinoma hepatocelular Las ciclospopnas de unión a ciclofilina no-inmunosupresoras también se pueden utilizar, por ejemplo, como un tratamiento profiláctico de neonatos nacidos de madres con HCV o de trabajadores para el cuidado de la salud que están expuestos al virus, o de receptores de trasplantes, por ejemplo receptores de trasplante de órganos o tejidos, por ejemplo, trasplante de hígado, para eliminar la posible infección de HCV recurrente después del trasplante El HCV es el único mienbro del genero hepaciviruses Existen tres géneros distintos hepaciviruses, flaviviruses y pestiviruses de la familia de virus Flavivindae El genero flavivirus incluye mas de 68 miembros separados en grupos con base en la relación serológica (Calisher et al , J Gen Virol 1993, 70 37-43) Los síntomas clínicos varían e incluyen fiebre, encefalitis y fiebre hemorrágica (Fields Virology, Eds Fields, B N , Knipe, D M , and Howley, P M , Lippincott Raven publishers, Philadelphia, PA, 1996, capítulo 31, 931 -959) Los Flavivirus de preocupación global que están asociados con enfermedades en seres humanos incluyen los virus de fiebre hemorrágica de dengue (DHF), virus de fiebre amarilla, síndrome de choque y virus de encefalitis japonesa (Halstead, S B , Rev Infect Dis , 1984, 6, 251 -264, Halstead, S B , Science, 239 476-481, 1988, Monath, T P , New Eng J Med 1988, 319, 641 -643) El genero pestivirus incluye virus de diarrea viral bovina (BVDV), virus de fiebre porcina clasica (CSFV, también denominada virus de colera en cerdos) y virus de enfermedad fronteriza (BDV) de ovejas (Moennig, V et al , Adv Vir Res 1992, 41, 53-98) Las infecciones por pestivirus de ganado domestico (Ganado, credos y ovejas) ocasionan pedidas económicas importantes en todo el mundo La BVD ocasiona enfermedad de mucos en ganado y es de importancia económica importante para la industria de la ganadería (Meyers, G and Thiel, H -J , Advances in Virus Research, 1996, 47, 53-118, Moening V , t al Adv Vir Res 1992, 41, 53-98) Los pestivirus en humanos no han sido tan extensamente caracterizados como los pestivirus en animales Sin embargo, inspecciones serologicas indican una exposición de pestivirus considereable en seres humanos Los pestivirus y hepacivirus son grupos de virus estrechamente relacionados dentro de la familia de Flavivipdae Otros virus estrechamente relacionados en esta familia incluyen el virus A de GB, agentes de tipo virus A de GB virus-B de GB, y virus -C de GB (también denominado virus de hepatitis G, HGV) El grupo de hepacivirus (virus de hepatitis C, HCV) consiste de un numero de virus estrechamente relacionados pero genotípicamente distinguibles que infectan a seres humanos Existen aproximadamente 6 genotipos de HCV y mas de 50 subtipos Debido a las similitudes entre pestiviruses y hepaciviruses, combinados con la pobre habilidad del hepacivirus para desarrollarse eficientemente en cultivo de célula, por lo general se utiliza un virus de diarrea viral de bovino (BVD) como un sustituto para estudiar el virus de HCV La organización genética de pestiviruses y hepaciviruses es muy similar Estos virus de ARN de estructura de cadena positiva poseen un marco de lectura abierto grande individual (ORF) que codifica todas las proteínas virales necesarias para la replicación del virus Estas poroteínas son expresadas como una viral poliproteína que es co- and post-traslacionalmente procesada tanto por proteínasas celulares como codificadas por virus para producir las proteínas virales maduras Las proteínas virales responsables de la rephcación del ARN de genoma viral están localizadas dentro de aproximadante la terminal carboxi Dos tercios del ORF son denominados como proteínas no estructurales (NS) La organización genética y el proceso de poliproteína de la porción de proteina no estructural del ORF parar pestiviruses y hepaciviruses es muy similar. Tanto para los pestivirus como para hepacivirus, las proteínas no estructurales maduras (NS) en orden secuencial a partir del término amino de la región de codificación de proteína no estructural hacia el termino carboxi del ORF, consisten de p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, y NS5B La organización genética del HCV se ilustra en la Figura 1 Las proteínas NS de pestiviruses y hepaciviruses comparten dominio de secuencia que son característicos de funciones específicas de proteina Por ejemplo, las proteínas NS3 de virus en ambos grupos poseen motivos de secuencia de aminoácido característicos de proteínasas de sepna y de helicasas (Gorbalenya et al (1988) Nature 333 22, Bazan and Flettepck (1989) Virology 171 -637-639, Gorbalenya et al (1989) Nucleic Acid Res. 17-3889-3897). Similarmente, las proteínas NS5B proteínas de pestiviruse y hepaciviruse tienen los motivos característicos de pohmerasas de ARN dirigidas por ARN (Koonin, E V and Dolja, V V (1993) Cpt Rev Biochem Molec Biol 28 375-430) Los papeles y funciones actuales de las proteínas NS de pestivirus y hepacivirus en el ciclo de vida de los virus son directamente análogas En ambos casos, la proteinaaza de sepna de NS3 es responsable de todo el procesamiento proteolítico de los prescursores de poliproteinaa corriente a bajo de suposición en el ORF (Wiskerchen and Collett (1991) Virology 184 341-350, Bartenschlager et al (1993) J Virol 67 3835-3844, Eckart et al (1993) Biochem Biophys Res Comm 192 399-4067, Grakoui et al (1993) J Virol 67 2832-2843, Grakoui et al (1993) Proc Nati Acad ScL USA 90 10583-10587, Hijikata et al (1993) J Virol 674665-4675, Tome et al (1993) J Virol 71 5312-5322) Las proteínas NS3 de ambos virus también funcionan como una helicasa (Kim et al (1995) Biochem Biophys Res Comm 215 160-166, Jin and Peterson (1995) Arch Biochem Biophys 323 47-53, Warrener and Collett (1995) J Virol 69 1720-1726) Finalmente, las proteínas NS5B de pestivirus y hepacivirus tienen la actividad de polimerasa de ARN dirigida a ARN pronosticada (Behrens et al (1996) EMSO J 15 12-22, Lechmann et al (1977) J Virol 71 8416-8428, Yuan et al (1997) Biochem Biophys Res Comm 232 231 - 235, Hagedorn, PCT WO 97/12033, Zhong et al (1998) J Virol 72 9365-9369) La presente invención proporciona el uso de ciclospopnas de unión a c i cl of 111 na no-in unosupresoras para la prevención o tratamiento de infecciones causadas por el virus Flavivipdae y trastornos inducidos Descripción detallada de la invención De acuedo con la presente invención, se proporcionan composiciones farmacéuticas y combinaciones que comprenden una ciclospopna no-immunosupresora y métodos para tratar infecciones virales por Flavivipdae y trastornos inducidos utilizando las mismas Los Flavivirus incluidos dentro del alcance de esta invención se discuten generalmente en Fields Virology, Editors: Fields, N , Knipe, D M and Howley, P M , Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA, Chapter 31 (1996) Los flavivirus específicos incluyen, sin limitación Absettarov, Alfuy, Apoi, Aroa, Bagaza, Banzi, Bououi; Bussuquara, Cacipacore, Carey Island, Dakar bat, Dengue viruses 1 , 2, 3 and 4, Edge Hill, Entebbe bat, Gadgets Gully, Hanzalova, Hypr; llheus, meningoencefahtis de pavo de Israel, encefalitis Japenesa; Jugra, Jutiapa, Kadam, Karshi, Kedougou, Kokoera; Koutango, Kumhnge, Kunjm, enfermedad de Kyasanur Forest, Langat, Louping ill, Meaban, Modoc, miotis leucoencefalitis Montano, encefalitis de Murray valley, Naranjal, Negishi, Ntaya, fiebre hemorrágica de Omsk; Phnom-penh bat, Powassan, Rio Bravo, Rocío, Royal Farm, encefalitis de primavera-verano Rusa, Saboya, encefalitis de St Louis, Sal Vieja, San Per ta, Saumarex Reef; Sepik, Sokuluk; Spondweni, Stratford, Temusu, Tyuleniy, Uganda S, Usutu, Wesselsbron, West Nile, Yaounde, fibre amarilla, y Zika Los Pestivirus incuidos dentro del alcance de esta invención también son discutidos generlamente en Fields Virology (kj ) Los pestivirus específicos incluyen, sin limitación virus de diarrea viral de bovino ("BVDV"), virus de fiebre porcina clásico ("CSFV") también conocido como cólera en puercos), y virus de enfermedad fronteriza ("BDV") Otros miembros de la familia de Flavivipdae dentro del alcance de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, virus A de GB, agentes de tipo virus A de GB, virus B de GB y virus C de GB(tamb?en denominado virus de hepatitis G, HGV) Además, el grupo hepacivirus (virus de hepatitis C, HCV), incluyendo los aproximadamente 6 genotipos de HCV y más de 50 subtipos tembién están dentro del alcance de la presente invención Se considera que una ciclospopna se une a ciclof i lina si ésta se une a ciclof i lina recombinante humana por lo menos una quinta vez así como lo hace la ciclospopna A en la prueba de ELISA competitiva descrita por Quesniaux in Eur J Immunol 1987 17 1359 - 1365 En esta prueba, la ciclospopna que será probada es agregada durante la incubación de ciclof i lina con ciclospopna A cubierta con BSA y se calculo la concentración requerida para dar una inhibición del 50% de la reacción de control sin el competidor (IC50) Los resultados se expresan como Relación de Unión (BR según sus siglas en inglés), la cual es el registro para la base 10 de la relaciónde la IC 0 del compuesto de prueba y la IC50 en la prueba simultánea de ciclospopna A por si misma De esta manera, una relación de unión de 1.0 indica que el compuesto de prueba se une a ciclofilina humana un factor de diez menos que lo hace la ciclosporina A, y un valor negativo indica una unión más fuerte que aquella de la ciclosporina A. Las ciclosporinas activas contra HCV tienen una relación de unión menos que 0.7, preferiblemente igual a o menor que cero. Ejemplos de ciclosporinas de unión a ciclofilina no ¡nmunosupresora incluyen, por ejemplo, los compuestos de la Fórmula I - -x- •R- Y- Z- Q Ala T, T2 T3-M?Val — , 1 2 3 4 5 ß 7 8 9 10 11 en donde W es MeBmt, dihidro-MeBmt, 8'-hidroxi-MeBmt o O-acetil-MeBmt1 ; X es aAbu, Val, Thr, Nva o 0-metil treonina (MeOThr); R es Pro, Sar, (D)-MeSer, (D)-MeAla, o (D)-MeSer(Oacetilo); Y es MeLeu, thioMeLeu, ?-hidroxi-MeLeu, Melle, MeVal, MeThr, MeAla, Mealle o MeaThr; N-etilVal, N-eti llle, N-etilThr, N-etilPhe, N-etilTyr o N-etilThr(Oacetilo) Z es Val, Leu, MeVal o MeLeu, Q es MeLeu, ?-hidroxi-MeLeu, MeAla o Pro, TT es (D)Ala o Lys, T2 es MeLeu o ?-hidroxi-MeLeu, y T3 es MeLeu o MeAla. Los compuestos preferidos de la fórmula I son, por ejemplo compuestos de la fórmula la W — fV— Y' Z Q' A1a-(D)Ala-W)eLeu-W!eLeiJ-MeVal — | 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 la en donde W es MeBmt, dihidro-MeBmt o 8'-h?drox?-MeBmt, X es aAbu, Val, Thr, Nva o 0-met?l treonina (MeOT hr), R' es Sar, (D)-MeSer, (D)-MeAla, o (D)-MeSer(Oacet?lo), Y' es MeLeu, ?-hidroxi-MeLeu, Melle, MeVal, MeThr, MeAla, Mealle o MeaThr, N-etill Val, N-etillle, N-etilThr, N-etilPhe, N-etilTyr o N-et?lThr(Oacet?lo) Z es Val, Leu, MeVal o MeLeu, y Q' es MeLeu, ?-hidroxi-MeLeu o MeAla Los grupos W, X, Y', Z, Q' y R' tienen, independientemente, los siguientes significados preferidos W es preferiblemente W" en donde W" es MeBmt or dihydro-MeBmt; X es preferiblemente X' en donde X' es aAbu or Nva, muy preferiblemente X" en donde X" es aAbu, R' es preferiblemente R" en donde R" es Sar; Y' es preferiblemente Y" en donde Y" es ?-h?drox?-MeLeu, MeVal, MeThr, Melle, N-ethyllle or N-ethylVal, Z es preferiblemente Z' en donde Z' es Val or MeVal, y Q' es preferiblemente Q" en donde Q" is MeLeu, Un grupo preferido de compuestos de la fórmula la son aquellos en donde W es W", X es X', Y' es Y", Z es Z', Q' es Q" yR' es R" Ejemplos de compuestos preferidos de la Fórmula la son, por ejemplo a) [d?hydro-MeBmt]1-[?-h?drox?-MeLeu]4-C?clospor?na; BR* = 0 1; IR<1% b) [MeVal]4-C?clospor?na, BR = 0 1 , IR<1 % c) [Melle]4-C?clospor?na; BR = -02, IR <1 % d) [MeThr] -Ciclospor?na, e) [?-h?drox?-MeLeu]4-C?clospor?na, BR = 0.4, I R < 1 % f) [Et?l-lle]4-C?clospor?na, BR = 0.1 ; IR <2% g) [Et?l-Val]4-Ciclospor?na, BR = 0, IR <2% h) [Nva]2-[?-h?drox?-MeLeu]4-C?clospor?na, i) [?-h?drox?-MeLeu]4-[?-h?drox?-MeLeu]6-C?clospor?na, j) [MeVal]5-C?clospor?na; BR = 04; IR = 5 3% k) k) [MeOThr]2-[(D)MeAla]3-[MeVal]5-C?closporina, I) [8'-h?drox?-MeBmtf-C?clospor?na, BR = 0 35; IR= 1 8% k) [MeAlaf-Ciclospopna; BR = -0 4; IR = 3 2 I) [?-h?drox?-MeLeuf-C?clospor?na, BR = 0.15; IR = 2 9 IR = Relación Inmunosupresora, expresada como un porcentaje de la actividad relativa a Ciclospopna A Otros ejemplos de ciclospopnas no-inmunosupresoras son los compuestos descritos en WO 98/28330, WO 98/28329 and WO 98/28328, los contenidos de los cuales se incorpora aquí por referencia, por ejemplo, los compuestos de la fórmula II Xa a Y — Za Qa- Ala-(D)Ala-NleLßu-Wl?Lßu-WieVal- 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 en donde Wa es en donde Ra es un residuo de la formula le o Id -CH, -CH: =CH CH2 R4 le -CH2 SH— R'4 Id en la que R4 es alquiltio de 1 a 4 átomos de carbono, aminoalquiltio de 1 a 4 átomos de carbono, alquilamino de 1 a 4 átomos de carbono-alquiltio de 1 a 4 átomos de carbono, dialquilamino de 1 a 4 átomos de carbono-alquiltio de 1 a 4 átomos de carbono, pipmidiniltio, ti azol 11 tío , N-alquilimidazohltio de 1 a 4 átomos de carbono, hidroxialquilfeniltio de 1 a 4 átomos de carbono, hidroxialquilfenoxi de 1 a 4 átomos de carbono, nitrofenilamino o 2-oxop?r?m?d?n-1 -il, y R'4 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, Xa es Abu, Ra es -NMe-CH(Rb)-CO- en donde Rb es H o -S-Alq-R0 en donde Alq-R0 es metilo, o Alq es alquileno de 2 a 6 átomos de carbono o cicloalquileno de 2 a 6 átomos de carbono recto o ramificado, y R0 es H, OH, COOH, alcoxicarbonilo de 2 a 5 átomos de carbono; NRtR2 en donde cada uno de Ri y R2, independientemente, se selecciona de H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono y fenilo cada uno opcionalmente sustituido por halógeno, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxicarbonilo de 2 a 5 átomos de carbono, amino, alquilamino de 1 a 4 átomos de carbono y/o dialquilamino de 1 a 4 átomos de carbono, y bencilo y un radical heterocíclico, dichos radicales bencilo y heterocíchcos estando saturados o insaturados y conteniendo 5 ó 6 miembros en el anillo y de 1 a 3 átomos heterogéneos, o Ri y R2 forman, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, un heterociclo de 4 a 6 miembros, el cual puede contener otro átomo heterogéneo seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre, y el cual está opcionalmente sustituido por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, fenilo o bencilo, o cada uno de Ri y R2, independientemente es un radical de la fórmula Ib <lbj — (<.?I_\,— \ \ Rx en donde R, y R2 son como se definieron anteriormente, R3 es H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y n es un entero que varía de 2 a 4, Y3 es MeLeu o ?-hidroxi-MeLeu; Za es Val; y Qa es MeLeu, siempre que Rb no sea H cuando Y3 es MeLeu, o una sal farmeceúticamente aceptable del mismo. En la fórmula II, cuando R-¡ and/or R2 es un residuo heterocíchco, éste puede ser pipdilo, tetrahidropiridilo, piperidilo, imidazoli lo, oxazo lo o ti azol 11 o Cuando Ri y R2 forman un residuo heterocíclico con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, pr ejemplo, el residuo heterocíchco puede ser seleccionado de azetidinilo, pi perid i lo , piperazinilo, N-metil-piperazinilo, N-feni Ipi perazip i ¡o , N-bencilpiperazinlo, pipdilo, imidazohlo, morfohno, tiomorfohno, tetrahidropipdilo, metiltetrahidropipdilo (por ejemplo, 4-metil-tetrahidropipdilo) o feniltetrahidropipdilo (por ejemplo, 4-feniltetrahidropipdilo) Los compuestos de la fórmula I, la o II pueden ser obtenidos en una variedad de formas, las cuales se clasifican como 1 ) Fermentación 2) Biotransformacion 3) Depvatisacion 4) Síntesis Parcial 5) Síntesis Total como se describe en EP 0 484 281 A1, WO 00/01715, WO 98/28330, WO 98/28329 or WO 98/28328 los contenidos de las cuales se incorporan aquí por referencia En una serie de modalidades específicas adicionales o alternativas, la presente invención también proporciona. 1 1 Un método para prevenir o tratar infecciones por Flavivipdae o trastornos inducidos por Fia vi vipdae en un sujeto con la necesidad del mismo, que comprende administrar a dicho sujeto una cantida terapéuticamente efectiva de una ciclospopna de unión a ciclofihna no-mmunosupresora, por ejemplo, un compuesto de la formula I, la or II De acuerdo con la invención, la ciclospopna de unión a ci cl of i i i na no inmunosupresora puede ser administrada en una cantidad efectiva para aliviar o eliminar uno o más de los signos o síntomas de la infección o trastorno inducido por Flavivipdae, por ejemplo, efectivo para reducir el virus de Flavivipdae medido en una muestra de suero de un sujeto 1 2 Un método para inhibir la replicación de Flavivipdae en un medio, que comprende aplicar a este medio una cantidad efectiva de una ciclospopna de unión a ciclofilina no- inmunosupresora, por ejemplo, un compuesto de la fórmula I, la o II 1 3 Un método para inhibir rephcacion de Flavivipdae en un sujeto con la necesidad del mismo, que comprende administrar a este sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una ciclospopna de unión a ci c I of i lina no-inmunosupresora, por ejemplo, un compuesto de la fórmula I, la o II 1 4 Un método para prevenir la recurrencia de infección por HCV en un receptor de transplante con la necesidad del mismo, que comprende administrar a dicho receptor una cantidad terapéuticamente efectiva de una ciclospopna de unión a cid of i lina no-inmunosupresora, por ejemplo, un compuesto de la fórmula I, la o II 2 El uso de una ciclospopna de unión a ciclof i lina no-inmunosupresora, por ejemplo un compuesto de la fórmula I, la o II, en la preparación de una composición farmacéutica para utilizarse en cualquier método como se define anteriormente 3 Una composición farmacéutica para utilizarse en cualquier método definido anteriormente, que comprende una ciclospopna de unión a ciclofihna no-inmunosupresora, por ejemplo un compuesto de la formula I, la o II, junto con uno o mas diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables del mismo La utilidad de las ciclospopnas de unión a ciclof i lina no-inmunosupresoras (de aquí en adelante "ciclospopnas de la invención" o "ciclospopna no-inmunosupresora de la invención") para tratar enfermedades y condiciones como se especificó anteriormente, puede ser demostrada en pruebas estándares en animales o clínicas, por ejemplo de acuerdo con los métodos descritos mas adelante A In vitro Cultivo de célula se cultivaron células Huh-7 and MH-14 cells, células de replicón de HCV, en un medio Eagle modificado con Dulbecco (DMEM) con 10% de suero de bovino fetal (FBS) Se cultivaron células PH5CH8 en una mezcla de 1 1 de DMEM y el medio F12 suplementado con 100 ng/ml de factor de crecimiento epidérmico, 10 µ/ml de insulina, 0 36 µg/ml de hidrocortisona, 5 µg/ml de transferpna, 5 µg/ml de ácido linóleico, 20 ng/ml de selenio, 4 µg/ml de glucagon, 10 ng/ml de prolactina, 10 µg/ml de gentamicina, 200 µg/ml de canamicina, y 2 % FBS Análisis de inmunotincion el análisis de inmunotincion se realizo como se describe por K Watashi et al , Virology 2001, 286, 391 - 402 Los anticuerpos primarios utilizados en este experimento son anticuerpos NS5A, ant?-NS5B, y anti-ß-actina (Sigma) Análisis de inmunfluorescencia indirecta el análisis de inmunfluorescencia indirecta se realizó como se describe por K Watashi, supra Los anticuerpos primarios utilizados son ant?cuerposNS5A y anti-PDI (StressGen) Análisis de reacción de cadena de transcripción inversa (RT)-pohmerasa (PCR) El total de ARN de células cultivadas se aislo con Sepasol-RNA I Super (nacalai tesque) según recomendado por el fabricante El análisis de RT-PCR se realizó utilizando un equipo de PCR de ARN de un solo paso (Takara) de acuerdo con las instrucciones del fabricante Los iniciadores utilizados para la eliminación de ARNms para 2', 5'-ol?goaden?lato- sintetasa y sinasa de proteina dependiente de ARN la estructura de cadena doble son. 5'-CCGTGAAGTTTGAGGTCCAG-3', 5'-GACTAATTCCAAGACCGTCCG-3' y 5'-TGGCCGCTAAACTTGCATATC-S', 5'-GCGAGTGTGCTGGTCACTAAAG-3', respectivamente Análisis de tinción Northern el análisis de tinción Nothern se realizó como se describe por H Kishine et al , Biochem Biophys Res Commun , 2002, 47, 119 - 125 La sonda complementaria a la secuencia NS5B utilizada en este experimento se describe por H Kishine, supra.

Análisis de RT-PCR en tiempo real: El 5'-UTR del ARN del genoma de HCV se cuantificó utilizando el detector de secuencia (AppliedBiosystems) como se describe por T. Takeuchi et al, Gastroenterology, 1999, Hj3, 636 - 642. Los iniciadores anterior e inverso en este experimento son 5'-CGGGAGAGCCATAGTGG-3' y 5'-AGTACCACAAGGCCTTTCG-3', respectivamente. La sonda fluorogénica es d'-CTGCGGAACCGGTGAGTACAC-S'. Como un control interno, también se cuantificó el ARN ribosómico utilizando reactivos de control de ARN ribosómico TaqMan (Applied Biosystems).

Experimento de infección por HCV In vitro: El experimento de infección por HCV in vitrio se realizó esencialmente como se describe por N. Kato et al., Jpn. J. Cáncer Res. 1996, 87, 787 - 792 and M. Ikada et al., Virus Res., 1998, 56, 157 - 167. Se infectaron células PH5CH8 (1 X 105) con el plasma 1 B-2 (equivalente a 104 a 105 copias de ARN de), que se preparó a partir de un donador de sangre positivo a HCV. A las 24 horas después de la inoculación, las células se lavaron tres veces con salina regulada en su pH con fosfato (PBS) y se mantuvieron en un medio fresco.

Ensayo de transfección y de reporte: La transfección en células MH-14 y H9 cells se realizó utilizando FuGENE 6 (Roche) y el reactivo de transfección Lipofectamine 2000 (Invitrogen), respectivamente, de acuerdo con el protocolo del fabricante. El ensayo de reporte se realizó como se describe por K. Watashi, supra. Los plásmidos de reporte utilizados en este estudio son pNFAT-Luc, pAP1-Luc, pNFKB-Luc (PathDetect Repórter System; Stratagene), y pRL-TK (Dual-luciferase repórter assay system; Promega). El efecto de varias ciclosporinas de la invención sobre la replicación del genoma HCV utilizando células MH-14, en donde el replicón subgenómico de HCV como se muestra en la Fig. 1A es autónomamente replicado. El tratamiento con una ciclosporina de la invención, por ejemplo, [Melle]4- ciclosporina, por ejemplo, a 1 µg/ml, así como 100 U/ml de IFNa que se utilizó como un control positivo durante 7 días, redujo la cantidad de proteínas de NS5A y NS5B de HCV a niveles indetectables a través del análisis de inmunotinción. Los análisis inmunofluorescencia indirecta mostraron que la producción de proteína NS5A se redujo en todas las células tratadas con 1 µg/ml de ciclosporina de la invención, mientras que el nivel de isomerasa de disulfuro de proteína (PDI), el cual es un marcador de retículo endoplásmico, como un control interno, no se alteró bajo esta condición. Las ciclosporinas de la invención redujeron en este ensayo la expresión de proteína de HCV en células de replicón de HCV. Se analizó el ARN de replicón en células MH-14 cells tratadas con o sin una ciclosporina de la invención o IFNa durante 7 días a tarvés de análisis de tinción northern El tratamiento con, por ejemplo, 1 µg/ ml de ciclospopna de la invención, por ejemplo [Melle]4-c?clospor?na, disminuyo la cantidad de ARN de replicón a un nivel indetectable El tratamiento con 100U/ml de IFNa produce un efecto similar Además la titulación gradualmente se redujo y el nivel de ARN de HCV se redujo a aproximadamente 1/400 del original en el séptimo día En el caso de un co-tratamiento con IFNa, una reducción adicional en cualquier momento examinado (tercer, quinto y séptimo días) se comparo con el tratamiento individual ya sea con ciclospopna o IFNa el nivel de ARN de replicón en células MH-14 tratadas tanto con ciclospopna como con IFNa durante 7 días se redujo significativamente sobre aquel de las células tratadas solo con I FNa Además, se trataron células PH5CH8 (línea de célula de hepatocito no- neoplásticas) se trataron con plasma positivo a HCV y subsecuentemente se cuantificó la titulación del genoma de ARN de HCV en varios puntos de tiempo después de la inoculación a través de análisis de RT-PCR de tiempo real Mientras la titulación del genoma de ARN de HCV en el quinto día después de la inoculación en las células se incrementó aproximadamente 10 veces comparado a aquella del primer día, no se observó un incremento importante de la titulación del genoma de ARN HCV en esos puntos de tiempo en las células tratadas continuamente con una ciclospopna de la invención, por ejemplo [Melle]4-c?clospor?na, o IFNa Las ciclospopnas de la invención inhiben la rephcacion de hepatocitos cultivados infectados con HCV Los resultados se muestran en las Fig 2E, 2F y 2G análisis de inmunitinción (2E), análisis de inmunofluorescencia indirecta (2F) y análisis RT-PCR en tiempo real (2G) se realizaron utilizando células MH-14 tratadas con [Melle]4-C?clospor?na (a) o una ciclospopna de unión sin ciclof i l?na(° ) , por ejemplo, ácido 6-[[R-(E)]-6,7-D?deh?dro-N,4-d?met?l-3-oxo-L-2-am?nooctano?co]-7-L-val?na-c?clospor?na A El control en 2E y 2F (1a fila), sin tratamiento, CysA in 2E, 1 µg/ml, [Melle]4- Ciclospopna en 2E (o) y 2F (a), 1 µg/ml; la ciclospopna de unión sin c i cl of i lina en 2E (o) y 2F (o), 1 µg/ml.

Otros sistemas de cultivo de célula para determinar actividades antivirales Los métodos descritos anteriormente y algunos de los métodos descritos a continuación utilizan HCV Sin embargo, los métodos descritos pueden ser adaptados a otros miembros de la familia de Flavivipdae simplemente cambiando el sistema de célula y el patógeno viral Un ensayo base de célula útil para detectar HCV y su inhibición evalúa los niveles del ARN replicón a partir de células Huh7 que alojan el replicón HCV Estas células pueden ser cultivadas en un medio estándar, por ejemplo el medio DMEM (alto contenido de glucosa, sin piruvato), suplemementado con 10% de suero de bovino fetal, 1x aminoácidos no esenciales, Pen-Strep-Glu (100 unidades/litro, 100 microgramos/htro, y 2 92 mg/litro, respectivamente), y G418 (de 500 a 1000 microgramos/milli tros) Se pueden realizar ensayos de clasificación anti viral en el mismo medio sin G418 Para mantener las células en la fase de crecimiento logarítmica, las células se sembraron en placas de 96 cavidades a baja densidad, como por ejemplo, 1000 células por cavidad El compuesto de prueba, es decir, una ciclospopna no-inmunosupresora de la invención, después se agregó inmediatamente después de agregar las células y se incubaron durante 3 a 7 días a 37°C en un incubador El medio después se removió, y las células se prepararon para la extracción total del ARN (ARN de repl?cón+ ARN huésped) Después el ARN de replicón pudo ser amplificado en un protocolo de RT-PCR de tiempo real (Q-RT-PCR) protocol, y se cuantificó Las diferencias observadas en la cuantificación del ARN de replicón son una forma de expresar la potencia a nt i vi ra I del compuesto de prueba, es decir, una ciclospopna no-inmunosupresora de la invención En un experimento típico, se produjo una cantidad comparable de repicon en el control re-negativo y con compuestos no activos Esto pudo ser concluido si el ciclo de umbral medido para la RT-PCR de flavivirus o pestivirus en ambas determinaciones es aproximadamente el mismo En tales experimentos, una forma de expresar la efectividad a n ti vi ra I de un compuesto es substraer el ciclo de RT-PCR de umbral promedio del control negativo (Ctnegat?vo) a partir del ciclo de RT-PCR de umbral del compuesto de prueba (Ctcompuestoprubea) Este valor es denominado &Ct ( &Ct = Ct = compUestorpueba-Ctnegat?vo)- Un valor ACÍ de 3 3 representa una reducción de 1 - log en la producción de replicón Como un control positivo se puede utilizar interferon alfa-2a recombinante (por ejemplo, Roferon-A, Hoffmann-Roche, NJ, USA) junto con el compuesto de prueba, es decir, una ciclospopna no-inmunosupresora Además, los compuestos pueden ser probados en series de dilución (típicamente a 100, 33, 10 3 y 1-M) Los valores de &Ct para cada concentración permiten el cálculo del 50% de concentración efectiva (EC50) Como se discutió antes, los ensayos descritos anteriormente pueden ser adaptados a los otros miembros de Flavivipdae cambiando el sistema de célula y el patógeno viral Las metodologías para determinar la eficacia de una ciclospopna no-inmunosupresora de la invención incluyen modificaciones de las técnicas estándares como se describe por Holbrook MR et al Virus Res 2000, 69, 31; Markiand W et al Antimicrob Agents Chemother 2000, 44, 859, Diamond MS et al , J Virol 2000, 74, 7814, Jordán I et al J Infect Dis 2000, 182, 1214 Sreenivasan V et al J Virol Methods 1993, 45 (1), 1 , or Bagmski SG et al Proc Nati Acad Sci USA 2000, 97 (14) 7981 o la tecnología de RT-PCR en tiempo real Como un ejemplo, se puede utilizar un sistema de replicón HCV (Lohmann V et al Science, 1999, 285 (5424, 110) en células HuH7 o sus modificaciones (Bhght et al 2000) Ensayo de protección de célula Se puede realizar un ensayo esencialmente como se describe por Baginski, S G , et al "Mechanism of action of a pestivirus compuesto" PNAS USA 2000, 97(14), 7981 -7986 Se sembraron células MDBK (ATCC) en placas de cultivo de 96 cavidades (4,000 células por cavidad) 24 horas antes de uso Después de la infección con BVDV (sepa NADL, ATCC) a una m i Itip li cidad de infección (MOI) de 0 02 unidades formadoras de placa (PFU) por célula, se agregaron diluciones en serie de una ciclospopna no-inmunosupresora de la invención tantoa células infectadas como no infectada a una concentración final de 0 5% de DMSO en el medio de crecimiento Cada dilución pudo ser probada por duplicado, triplicado o cuatro veces Las densidades de célula y los inóculos debidos pueden ser ajustados para asegurar un crecimiento de célula continua a través del experimento y para obtener más del 90% de destrucción de célula inducida por el virus en los controles no tratados después de cuatro días después de la infección Después de cuatro días las placas se fijaron con 50% de TCA y se tiñeron con sulforodamina B La densidas óptica de las cavidades se pudo leer en un lector de microplata 550 nm Los valores de 50% de concentración efectiva (EC50) se definieron como la concentración de una ciclospopna no-inmunosupresora de la invención que obtuvo un 50% de reducción del efecto citopatico del virus.

Ensayo De Reducción De Placa Se determinaron concentraciones efectivas para una ciclospopna no-inmunosupresora de la invención por duplicado en placas 24 cavidades a través de análisis de reducción de placa Se infectaron monocapas de célula con 100 PFU/cavidad de virus Después, se agregaron a las monocapas, diluciones en serie de una ciclospopna no-inmunosupresora de la invención en MEM suplementado con 2% de suero mactivado y 0 75% de metilcelulosa Los cultivos se incubaron adicionalmente 37°C durante 3 días, depues se fijaron con 50% de etanol y 0 8% de violeta cristal, se lavaron y se secaron con aire Las placas se contaron para determinar la concentración para obtener 90% de supresión del virus Ensayo de Reducción de Producción Para cada ciclospopna no-inmunosupresora de la invención, la concentración para obtener una reducción de 6-iog en la carga viral pudo ser determinada por duplicado en placas de 24 cavidades a través de ensayos de reducción de producción El ensayo se puede realizar como se describe por Baginski, S G , et al "Mechanism of action of a pestivirus compuesto" PNAS USA 2000, 97(14), 7981 -7986, con modificaciones menores Se sembraron células MDBK en placas de 24 cavidades (2 x 1 O5 células por cavidad) 24 horas antes de la infección con BVDV (cepa NADL) a una multiplicidad de infección (MOI) de 0 1 PFU por célula Se agregaron diluciones en serie de ciclospopna no-inmunosupresoras en una concentración final de 0 5% DMSO en el medio de crecimiento Cada dilución pudo ser probada por duplicado, triplicado, o cuatro veces Después de tres días, los cultivos de célula (monocapas de célula y sobrenadantes) se hsaron a través de múltiples ciclos de congelación- descongelación, y la producción de virus se cuantificó a través del ensayo de placa Brevemente, se sembraron células MDBK en placas de 6-cav?dades (5x105 células por cavidad) 24 horas antes de uso Las células se inocularon con 02 ml de hsatos de prueba durante una hora, se lavaron y se tendieron con 0 5% de agarosa en un medio de crecimiento Después de 3 días, las monocapas de célula se fijaron con 3 5% de formaldehído y se tiñeron con 1% de violeta cristal (p/v en 50% de etanol) para visualizar las placas Las placas después se contaron para determinar la concentración para obtener una reducción de 6-log en la carga viral Ensayos a base de no-célula adaptados para detectar virus Flavivipdae La tecnología de amplificación de ácido Nucleico ahora es el método de elección para la identificación de un gran número y aun creciente de microorganismos tales como Mycobacterium tuberculosis, virus de immunodeficiencia humana (VIH), y virus de hepatitis C (HCV) en muestras biológicas Las técnicas de amplificación de ácido Nucleico incluyen la reacción de cadena de pohmerasa (PCR), reacción de cadena de hgasa (LCR), amplificación a base de ácido nucleico (NASBA), amplificación de desplazamiento de estructura de cadena (SDA), y amplificación mediada por transcripción (TMA) La secuencia de nucleótido para al menos una porción del genoma del virus Fia vivipdae es requerida para técnicas de amplificación de acido nucleico Dichas secuencias fácilmente están disponibles en la literatura publicada y en bases de datos genéticos Esquemas de Detección de Producto Amplificado Los esquemas de detección de producto amplificado son de dos tipos básicos heterogéneos y homogéneos La detección heterogénea se caracteriza por un paso distinto, tal como el lavado, diseñado para remover sondas no hibpdizadas de sondas hibpdizadas, mientras que en la detección homogénea, no existe ningún paso de separación física para remover sondas libres de sondas unidas Existen múltiples métodos de detección heterogénea y homogénea Detección Heterogénea La tinción, Southern, por ejemplo, es una técnica de detección heterogénea En la tinción Southern, se utiliza la electroforesis para separar productos de amplificación por tamaño y carga Los productos fraccionados por tamaño son transferidos a una membrana o filtro a través de difusión, vacio o electrotinción Después, las sondas de detección marcadas son hibpdizadas a los objetivos unidos a membrana en solución, los filtros se lavan para remover cualquier sonda no hibpdizada, y la sonda hibpdizada en la membrana es detectada a través de cualquiera de una variedad de métodos Otros tipos de detección heterogénea se basan en la captura específica de los productos de amplificación a través de ensayos inmunoabsorbentes enlazados a enzimaa (ELISAs) Un método utilizado con la PCR involucra marcar un iniciador con un hapten o un ligando, tal como biotina, y, después de la amplificación, capturarlo con una microplaca cubierta con anticuerpo o estreptavidina El otro iniciador se marca con un agente de reporte tal como fluoresceina, y la detección se logra agregando un anticuerpo anti-fluoresceina, conjugado de peroxidasa de rábano (HRP) Este tipo de método no es tan específico como utilizar sondas de detección que hibpdizan a productos de amplificación definidos de interés Detección Homogénea Ya que las sondas de detección hibpdizadas y no hibpdizadas físicamente no se separan en sistemas de detección homogénea, estos métodos requieren de menos pasos que los métodos heterogéneos y de esta manera son menos propensos a contaminación Entre los equipos comercialmente disponibles que utilizan la detección homogénea de marcas fluorescentes y quimioluminiscentes están el sistema (Applied Biosystems, Foster City, CA), BDProbeTecET system (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), QPCR System 5000 (Perkin-Elmer Corp , Norwalk, CT) and Hybpdization Protection Assay (Gen Probé Ine , San Diego) El Sistema TaqMan detecta el amplicon en tiempo real La sonda de detección, la cual hibpdiza a una región dentro del amphcon, contiene un fluoroforo donador tal como fluoresceína, en su extremo 5' y una porción de extinción, por ejemplo, rodamina, en su extremo 3' Cuando tanto la porción de extinción como el fluoroforo están en el mismo oligonucleotido, se inhibe la fluorescencia del donador Durante la amplificación, la sonda se une al objetivo La pohmerasa Taq se desplaza y divide la sonda de detección a medida que sintetiza la estructura de base de remplazo La escisión de la sonda de detección dá como resultado la separación del fluoróforo de la porción de extinción, conduciendo a un incrementento en la señal de fluorescencia del donador Durante cada ciclo de amplificación, el procedimiento es repetido La cantidad de señal fluorescente se incrementa a medida que la cantidad de amphcon aumenta Los faros moleculares utilizan extinguidores y fluoróforos también Los faros son sondas que son complementarios al amphcon objetivo, pero contienen estiramientos cortos (aproximadamente 5 nucleotidos) de oligonucleótidos de complementapdad en cada extremo Los extremos 5' y 3' de los faros están marcados con una fluoróforo y una porción de extinción, respectivamente Una estructura de horquilla se forma cuando el faro no es hibpdizado a un objetivo, poniendo en contacto el fluoroforo y la porción de extinción y dando como resultado una extinción fluorescente La región de espira contiene la región complementaria al amp con Después de la hibridación a un objetivo, la estructura de horquilla de abre y la porción extinción y el fluoróforo se separan. Permitiendo el desarrollo de una señal fluorescente. Un fluorómetro mide la señal en tiempo real. El sistema BDProbeTecET utiliza un método de detección en tiempo real y combina aspectos de TaqMan y faros moleculares. La sonda tiene una estructura de espira de horquilla y contiene marcas de fluoresceína y rodamina. Sin embargo, en este sistema, la región complementaria en la molécula objetivo no está dentro de la espira sino también en la región 3' para la marca de rodamina. En lugar de contener la secuencia complementaria para el objetivo, la espira de estructura de cadena individual contiene un sitio de restricción para la enzima de restricción BsoBI. La secuencia de estructura de cadena individual no es un sustrato para la enzima. Las marcas de fluoresceína y rodamina están cerca una de la otra antes de la amplificación, lo cual extingue la fluorescencia de la fluoresceína. La amplificación de desplazamiento de estructura de cadena convierte la sonsa a una molécula de estructura de cadena doble. La enzima de restricción BsoBI después puede dividir la molécula, dando como resultado la separación de las marcas y un incremento en la señal fluorescente. El sistema QPCR 5000 emplea electroquimioluminiscencia con marcas de rutenio. Se utiliza un iniciador biotinilado. Después de la amplificación, los productos de biotina son capturados en perlas paramagnéticas cubiertas con estreptavídina. Las perlas son transferidas a una célula de flujo electroquímico a través de aspiración y magnéticamente se mantiene en la superficie del electrodo Después de estimulación eléctrica, la sonda marcada con rutenio emite luz El diseño de sonda de detección es crítico en todas las metodologías que utilizan sondas para detectar productos de amplificación Las buenas sondas de detección hibpdizan solamente a un producto de amplificación especificado y no hibpdizan a productos no especificados Otras emisiones clave para optimizar las metodologías de detección involucran la marcación de sondas y el aumento al máximo de la producción de muestra.

Métodos de Marcación y Moléculas de Reporte Las sondas de detección pueden ser marcadas en varias diferentes formas La incorporación enzimática de 32P o 35S en las sondas es el método más común para la marcación isotópica Después de la hibridación y del lavado, la señal es detectada en una película autoradiografica Para realizar la detección no radioactiva, las sondas pueden ser marcadas enzimáticamente con una variedad de molécula La biotina puede ser incorporara enzimáticamente y después detectarse con fosfatasa alcalina conjugada con estreptavidina, utilizando sustratos AP como fosfato de 5-bromo-4-cloro-3-?ndol?lo (BCIP) y tetrazolio nitroazul (NBT) También se pueden utilizar sustratos quimioluminiscentes tales como Lumi-Phos 530 o Lumi-Phos Plus (Lumigen, Southfield, Ml) con AP. Además, se puede incorporar d igoxig enina- 11 -dUTP enzimáticamente al ADN o al ARN, y se pueden utilizar conjugados de antidigoxigenina AP con detección colopmétpca o quimioluminiscente Existen numerosos otros tipos de moléculas de reporte, incluyendo porciones quimioluminiscentes tales como esteres de acpdmio Muchas porciones fluorescentes están disponibles también. También se pueden utilizar compuestos electroquimioluminiscentes tales como tr?s(2,2'-b?p?r?d?na) rutenio (II). Otras discusiones de estas y otras técnicas similares se pueden encontrar en Schiff ER, de Medina M, Kahn RS Semin Liver Dis 1999; 19 (Suppl 1 :3-15). Cualquiera de estos ensayos heterogéneos u homogéneos puede ser utilizado para valorar la efectividad de la ciclospopna de la invención contra un virus de la familia Flavivipdae B Ensayo Clínico Se enrolaron un total de 15 pacientes con efección de Hepatitis C crónica u otra infección del virus Flaviviridae, en un estudio de dos semanas Cada paciente recibió una ciclospopna de la invención, por ejemplo, [Melle]4-c?clospor?na, a una dosis de 7 a 15 mg/kg p.o Se determinaron los niveles de antígenes de Hepatitis C en el suero (u otros antígenos del virus Flavivipdae) en el día 0 y el día 14 en cada paciente Una persona que padece de infección por hepatitis C puede exhibir uno o más de los siguientes signos o síntomas (a) ALT elevada, (b) prueba positiva para anticuerpos anti-HCV, (c) presencia de HCV desmostrado a través de una prueba positiva para ARN de HCV, (d) estigmas clínicos de enfermedad de hígado crónica, (e) daño hepatocelular Dichos criterios no solo pueden ser utilizados para diagnosticar Hepatitis C, sino que también pueden ser utilizados para evaluar la respuesta a un paciente al tratamiento con fármacos. Se sabe que la alanina-amino transferasa (ALT) y aspartato-aminotransferasa (AST) elevadas en el suero ocurren en Hepatit is C no controlada, y una respuesta completa al tratamiento generalmente se define como la normalización de estas enzimas en el suero, particularmente ALT (Davis et al , 1989, New Eng. J. Med. 321:1501-1506). La ALT es una enzima liberada cuando la células del hígado son destruidas y es sintomática de infección de HCV. Con el fin de seguir el curso de repilación del HCV u otra replicación del virus Flaviviridae en sujetos en respuesta al tratamiento con fármaco, el ARN del virus puede ser medido en muestras de suero, por ejemplo a través de un ensayo de reacción de cadena de polimerasa anidada que utiliza dos grupos de iniciadores derivados de las regiones de gen no estructurales N53 y N54 del genoma de HCV (Farcí et al., 1991, New Eng. J. Med 325:98-104. Ulrich et al , 1990, J Clin Invest, 86:1609-1614) o región similar de otro virus Flavivipdae. Se puede utilizar un examen histológico de muestras de biopsia del hígado como un segundo criterio para la evaluación de replicación del HCV Ver, por ejemplo, Knodell et al., 1981, Hepatology 1:431-435, cuyo índice de Actividad Histológica (imflamacion portal, necrosis en fragmentos puntales, daño lobular y fibrosis) proporciona un método de clasificación para la actividad de la enfermedad Las dosis diarias requeridas para practicar el método de la presente invención variaran dependiendo de, por ejemplo, la ciclospopna de unión a c i cl of i h na no inmunosupresora empleada, el huésped, el modo de administración, la severidad de la condición que sera tratada Una escala de dosis diaria preferida es de de aproximadamente 1 a 50 mg/kg por día como una sola dosis o en dosis divididas Las dosis diarias adecuadas para pacientes son del orden de, por ejemplo, 1 a 20 mg/kg p o o i v Las formas de dosis unitaria adecuadas para administración oral comprenden de aproximadamente 0 25 a 10 mg/kg del ingrediente activo, por ejemplo, [Melle]4-c?clospor?na, junto con uno o más diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables para el mismo Las ciclospopnas de la invención pueden ser administradas a través de cualquier ruta convencional, en particular enteralmente, por ejemplo, en forma oral por ejemplo en la forma de soluciones para beber, tabletas o capsulas, o parenteralmente, por ejemplo, en la forma de soluciones o suspensiones inyectables Las composiciones farmacéuticas preferidas, por ejemplo, pueden ser aquellas basadas en microemulsiones como se describe en UK 2,222,770 A Las ciclospopnas de la invención pueden ser administradas como el único ingrediente o junto con otros fármacos, por ejemplo, un fármaco que tenga actividades anti-Flavivipdae, por ejemplo, un interferon, por ejemplo, ?nterferon-a-2a o ?nterferon-a-2b, por ejemplo lntronR A, RoferonR, AvonexR, Reb?fR o BetaferonR, o un interferon conjugado a un polímero soluble en agua o albúmina humana, por ejemplo albuferon, un agente anti-viral, por ejemplo pbavipna, lamivudina, NV08 o NM283, un inhibidor del HCV u otros factores codificados por el virus Flavivipdae como la proteasa NS3/4A, hehcasa o polimerasa de ARN o un profármaco de dicho inhibidor, un agente anti-f i rotico, por ejemplo un derivado de N-fen?l-2-p?r?m?d?n-am?na, por ejemplo, imatinib, un agente immuno-modulador, por ejemplo ácido micofenóhco, una sal o un profármaco del mismo, por ejemplo, micofenolato de sodio o micofenolato mofetil, o un agonista del receptor S1 P, por ejemplo FTY720 o un análogo del mismo opcionalmente fosfoplado, por ejemplo como se describe en EP627406A1, EP778263A1, EP1002792A1, WO02/18395, WO02/76995, WO02/06268, JP2002316985, WO03/29184, WO03/29205, WO 03/62252 y WO03/62248 Los conjugados de interferón a un polímero soluble en agua representan que incluyen especialmente conjugados a homopolímeros de óxido de pohalquileno tales como glicolpohetiolénico (PEG) o ghcoles pohpropilénicos, poholes polioxietilinados, copolimeros de los mismos y copolímeros de bloque de los mismos Como una alternativa a polímeros a base de óxido de po alquileno, materiales efectivamente no antigenicos tales como dextrana, pohvinil pirrolidonas, pohacplamidas, alcoholes poliviníhcos, polímeros a base de carbohidrato, y similares, se pueden utilizar Dichos conjugados de interferon-polímero se describen en las patentes de E U A Nos 4,766,106, 4,917,888, Solicitud de Patente Europea No 0 236 987, Solicitud de Patente Europea No 0 510 356 y Publicación de Solicitud Internacional No WO 95/13090 Ya que la modficación polimépca suficientemente reduce respuestas antigenicas, el interferon extraño no necesita ser completamente autólogo El interferon utilizado para preparar conjugados de polímero puede ser preparada a partir de un extracto de mamífero, tal como interferon humano, de rumiante o bovino, o recombinantemente producido Los conjugados preferidos son de interferon a glicol polietilénico, también conocidos como interferones pegilados Los conjugados de interferón especialmente preferidos son alfa-interferones pegilados, por ejemplo, ?nterferon-a-2a pegilado, ?nterferón-a-2b pegilado, interferón de consenso pegilado o un producto de mterferon-a purificado pegilado. El ?nterferon-a-2a pegilado se describe en, por ejemplo en Patente Europea 593,868 y está comercialmente disponible, por ejemplo, bajo el nombre comercial de PEGASYS® (Hoffmann-La Roche) El ?nterferón-a-2b pegilado se describe, por ejemplo en Patente Europea 975,369 y está comercialmente disponible, por ejemplo bajo el nombre comercial de PEG-INTRON A® (Schering Plough) El interferón de consenso pegilado se describe en WO 96/11953. Los a-interferones pegilados preferidos son ?nterferón-a-2a pegilado e interferón-a- 2b pegilado.

También se prefiere el interferon de consenso pegilado La pbavipna (1-ß-D-r?bofuranos?l-1-1,2,4-tr?azol-3-caroxam?da) es un análogo de nucleosido anti viral de amplio espectro, sintético, de inducción sin interferon, vendido bajo el nombre comercial de Virazole (The Merk Index 11lh edition, Editor Budavar, S, Merck & Co , Ine , Rahway, NJ, p1304, 1989) Patente de E U A No 3,798,209 y RE29 835 describen y reclaman pbavipna La pbavipna es estructuralmente similar a la guanosina, y tiene actividad in vitro contra vanos virus de ADN y ARN incluyendo Flavivipdae (Gary L Davis, Gastroenterology 118 S104-S114, 2000) La pbavipna reduce los niveles de aminotrasferasa en el suero a un aspecto normal en 40% de los pacientes, pero no reduce los niveles de ARN de HCV en el suero (Gary L Davis, Gastroenterology 118 S104-S114, 2000) De esta manera, la pbavipna sola no es efectiva para reducir los niveles de ARN virales Además, la pbavipna tiene una toxicidad importante y se sabe que induce anemia La pbavipna no esta aprobada para monoterapia contra HCV, se aprobó en combinación con interferon alfa-2a o interferon alfa-2b para el tratamiento de HCV Las dosis diarias con respecto al co-agente utilizado variaran dependiendo de, por ejemplo, el compuesto empleado, el huésped, el modo de administración y la severidad de la condición que sera tratada Por ejemplo, se puede administrar lamivudine a una dosis diana de 100mg El interferon pegilado puede ser administrado parenteralmente de una a tres veces por semana de preferencia una vez a la semana, a una dosis semanal total que vana de 2 a 10 millones IU, preferiblemente de 5 a 10 millones IU, y muy preferiblemente de 8 a 10 millones IU De acuerdo con lo anterior, la presente invención proporciona en otro aspecto más 4 Una combinación farmacéutica que comprende, a) un primer agente el cual es una ciclospopna de unión a ciclof i lina no inmunosupresora, por ejemplo, un compuesto de la fórmula I, la o II, y b) un co-agente, por ejemplo un segundo agente de fármaco de cómo se define anteriormente, por ejemplo, para utilizarse en cualquier método definido anteriormente 5 Un método como se definió anteriormente que comprende la co- administracion, por ejemplo, concomitantemente o en secuencia, de una cantidad terapéutica efectiva de una ciclospopna de unión a ciclofilina no inmunosupresora, por ejemplo un compuesto de la fórmula I, la o II, y un co-agente, por ejemplo, un segundo agente de fármaco como se define anteriormente Los términos "co-administración" o "administración combinadas", o similares, como se utiliza aquí, abarcan la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un solo paciente, y pretenden incluir regímenes de tratamiento en donde los agentes no son necesariamente administrados a través de la misma ruta de administración o al mismo tiempo La administración de una combinación farmacéutica de la invención da como resultado un efecto benéfico, por ejemplo un efecto terapéutico sinergístico, comparado con una monoterapia que aplica solamente uno de sus ingredientes farmacéuticamente activos Una combinación sinergística preferida es una combinación de una ciclospopna de unión a ciclofilina no inmunosupresora con un interferon, opcionalmente conjugada a un polímero Una combinación preferida adicional es una combinación de una ciclospopna de unión a ciclofilma no inmunosupresora con ácido micofenohco, una sal o un profarmaco del mismo o con un agonista de receptor S1 P, por ejemplo FTY720 Terapaia de Combinación o de Alternación Los compuestos activos de la presente invención pueden ser administrados en combinación o alternación con otro agente anti-Flavivipdae En terapia de combinación, las dosis efectivas de dos o más agentes se administran conjuntamente, mientras que en terapia de alternación o de pasos secuenciales, una dosis efectiva de cada agente se administra en sene o secuencialmente Las dosis dadas dependerán de las velocidades de absorción, inactivación y excreción del fármaco, así como de otros factores conocidos por aquellos expertos en la técnica Se debe observar que los valores de la dosis también variaran con la severidad de la condición que va a ser aliviada Además se debe entender que para cualquier sujeto particular, los regímenes de dosis y los programas específicos deben ser ajustados con el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el JUICIO profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones En modalidades preferidas, es deseable un compuesto anti-Flavivipdae que exhiba una EC50 de 10-15 M, o preferiblemente menor que 1-5 M Se ha reconocido que las vanantes resistentes a fármacos de los virus Flavivipdae pueden emerger después de un tratamiento prolongado con un agente anti viral La resistencia a fármaco más típicamente ocurre a través de la mutación de un gen que codifica para una enzima utilizada en replicación viral La eficacia de un fármaco contra la infección viral puede ser prolongada, aumentad o restaurada administrando el compuesto en combinación o alternación con un segundo, y tal vez un tercer compuesto antiviral que induzca una mutación diferente de aquella causada por el fármaco principal Alternativamente, la farmacocinetica, biodistpbución u otros parámetros del fármaco pueden ser alterados a través de dicha terapia de combinación o alternación En general, típicamente se prefiere la terapia de combinación sobre la terapia de alternación, ya que induce múltiples tensiones simultáneas en el virus Como se describió anteriormente, se puede utilizar un número de tratamientos virales, por ejemplo, interferones y pbavipna, en combinación o alternación con las ciclospopnas no inmunosupresoras descritas en esta especificación Otros ejemplos no limitantes incluyen (1) Inhibidores de Proteasa Los ejemplos incluyen inhibidores de proteasa NS3 a base de sustrato (Attwood et al Antiviral peptide depvatives, PCT WO 98/22496, 1998, Attwood et al , Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1999, 10, 259-273, Attwood et al, Preparation and use of amino acid depvatives as anti-viral agents, Germán Patent Pub DE 19914474 Tung et al Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis C virus NS3 protease, PCT WO 98/17679), incluyendo alaacetoamidas e hidrazmoureas, e inhibitores que terminan en un electrofilo tal como un acido boronico o fosfonato, (L nas-Brunet et al Hepatitis C inhibitor peptide analogues, PCT WO 99/07734) están siendo investigados También se están investigando inhibidores de proteasa NS3 a base de no sustrato tales como derivados de 2,4,6-tph?drox?-3-n?tro-benzamida (Sudo K et al , Biochemiscal and Biophysical Research Communications 1997, 238 643-647, Sudo K et al Antiviral Chemistry and Chemotherapy, 1998, 9, 186), incluyendo RD3-4082 y RD3-4078, el primero sustituido en la amida con una cadena de 14 carbonos y el ultimo procesando un grupo para-fenoxifenilo Sch 68631, una fenantrenquinona, es un inhibidor de proteasa de HCV (Chu M et al , Tetrahedron Letters 37 7229-7232, 1996) En otro ejemplo por los mismos autores, Sch 351633, aislado del hongo Penicillium gpeofulvum, se identificó como un inhibidor de proteasa (Chu M et al , Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9 1949-1952) La potencia Nanomolar contra la enzima de proteasa NS3 de HCV ha sido logrado a través del diseño de inhibidores selectivos a base de la macro molécula eghn c La Eglin c, aislada de la sanguijuela, es un potente inhibidor de vanas proteasas de cerina tales como proteasas A y B, V-quimiomotppsina, quimasa y subtilisina Qasim M A et al Biochemistry 36 1598-1607, 1997 Las Patente de E U A que describen inhibidores de proteasa para el tratamiento de HCV incluyen, por ejemplo la Patente de E U A No 6,004,933 de Spruce et al La cual describe una clase de inhibidores de cisteina-proteasa para o nh i b ir endopeptidasa 2 de HCV Patente de E U A No 5,990,276 de Zhang et al La cual describe inhibidores sintéticos de proteasa NS3 del virus de hepatitis C, Patente de E U A No 5,538,865 de Reyes et al Los peptidos como inhibidores de sepna-proteasa NS3 de HCV se describen en WO 02/008251 de Corvas International, Ine , y WO 02/08187 y WO 02/008256 de Schering Corporation Los tppeptidos inhibidores de HCV se describen en las Patentes de E U A Nos 6,534,523, 6,410,531 y 6,420,380 de Boehpnger Ingelheim y WO 02/060926 de Bpstol Myers Squibb Los péptidos de diaplo como inhibidores de sepna-proteasa NS3 de HCV se describen en WO 02/48172 de Schering Corporation Las imidazohdinonas como inhibidores de sepna-proteasa NS3 de HCV se describen en WO 02/18198 de Schering Corporation y WO 02/48157 de Bpstol Myers Squibb WO 98/17679 de Vértex Far aceuticass y WO 02/48116 de Bpstol Myers Squibb también describen inhibidores de proteasa de HCV (2) Los derivados tía zo lid i na , los cuales muestran inhibición relevante en un ensayo de HPL de fase inversa con una proteína de fusión NS3/4A y sustrato NS5A/5B (Sudo K. et al., Antiviral Research, 1996, 32, 9-18), especialmente el compuesto RD-1-6250, que poseen una porción cinamoilo fusionada sustituida con una cadena alquilo larga, RD4 6205 y RD46193, (3) Tiazolidinas y benzanilidas identificadas por Kakiuchi N et al. J. FEBS Letters 421, 217-220, Takeshita N. et al Analytical Biochemistry, 1997, 247, 242-246; (4) Una fenan-trenqumona que posee actividad contra proteasa en un ensayo de SDS-PAGE y autoradiografía, aislada del caldo de cultivo de fermentación de Streptomyces sp., Sch 68631 (Chu M. et al., Tetrahedron Letters, 1996, 37, 7229-7232), y Sch 351633, aislado del hongo Penicillium gpseofulvum, el cual demustra actividad en un ensayo de proximidad de scintílación (Chu M. et al, Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9, 1949-1952); (5) Inhibidores de hehcasa (Diana G D. et al., Compuestos, compositions and methods for treatment of hepatitis C, Patente de E.U.A. No. 5,633,388, Diana G. D. et al., Piperidme depvatives, pharmaceutical compositions thereof and their use in the treatment of hepatitis C, PCT WO 97/36554); (6) Inhibidores de polimerasa de nucleótido y gliotoxina (Ferrari R et al Journal of Virology, 1999, 73, 1649-1654), y el producto natural, cerulenma (Lohmann V et al Virology, 1998, 249, 108-118); (7) Oligodesoxinucleótidos de fosforotioato antisentido (S-ODN) complementarias a estiramientos de secuencia en la región de no codificación 5 (NCR) del virus (Alt M et al , Hepatology, 1995, 22, 707-717) o nucleotidos 326-348 que comprenden el extremo 3' de la NCR y los nucleotidos 371-388 localizados en región de codificación de núcleo del ARN de HCV (Alt M et al , Archives of Virology, 1997, 142, 589-599, Galdepsi U et al Journal of Cellular Physiology, 199, 181, 251 -257), o una secuencia antisentido complementaria a cualquier parte del genoma de HCV que incrementa la efectividad de la terapia (8) Inhibidores de la traducción dependiente de IRES (Ikeda N et al , Agent for the prevention and treatment of hepatitis C, Japanese Patent Pub JP-08268890, Kai Y et al Prevention and treatment of viral diseases Pub de Patente Japanesa JP-10101591 ), (9) Ribozímas, tales como pbozímas resistentes a nucleasas (Macejak D J et al Hepatology 1999, 30, abstract 995) y aquellas descritas en la Patente de E U A No 6,043,077 de Barber et al , y Patentes de E U A Nos 5869,253 y 5,610,054 de Draper et al , y (10) También se han desarrollado análogos de nucleosido para el tratamiento de infecciones por Flavivipdae Ver, por ejemplo, solicitud de patente WO 2004/002422 A2 intitulada "2'-C-Met?l-3'-0-L-Valina Ester Ribofuranosil Citidina Para el Tratamiento de Infecciones por Flavivipdae", y patente de E U A no 6,812,219 Idenix Pharmaceuticals describe el uso de nucleósidos ramificados en el tratamiento de flavivirus (incluyendo HCV) y pestivirus en las Publicaciones Internacionales Nos WO 01/90121 y WO 01/92282 Específicamente, un método para el tratamiento de infección de hepatitis C (y flavivirus y pestivirus) en seres humanos y otros animales huésped se describe en las publicaciones Idenix, que incluye administrar una cantidad efectiva de nucleosidos B-D o B-L 1', 2', 3' o 4'-ramificados biológicamente activos o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, administrados ya sea solos en un combinación con otro agente antiviral, opcionalmente en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Otras publicaciones de patente que describen el uso de ciertos análogos de nucleósido para tratar virus de hepatitis C incluyen: PCTCA00/01316 (WO 01/32153; presentada el 3 de Noviembre de 2000) y PCT/CA01/00197 (WO 01/60315; presentada el 19 Febrero de 2001) presentada por BioChem Pharma, Inc., (ahora Shire Biochem, Inc.); PCT/US02/01531 (WO 02/057425; presentada el 18 de Enero de 2002) y PCT/US02/03086 (WO 02/057287; presentada el 18 de Enero de 2002) presentada por Merck & Co., Inc., PCT/EP01/09633 (WO 02/18404; publicada el 21 de Agosto de 2001) presentada por Roche, y Publicaciones PCT Nos. WO 01/79246 (presentada el 13 de Abril de 2001), WO 02/32920 (presentada el 18 de Octubre de 2001) y WO 02/48165 por Phar asset, Ltd. La Publicación de PCT No. WO 99/43691 de Emory University, intitulada "2'-Fluoronucleósidos" describe el uso de ciertos 2'-fluoronucleósidos para tratar HCV. Eldrup et al. (Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16th International Conference on Antiviral Research (27 de Abril de 2003, Savannah, GA)) describieron la relación de actividad-estructura de nucleosidos 2'-mod?f?cados para la inhibición de HCV Bhat et al (Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flavivipdae, 2003 (Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flavivipdae, 16ava Conferencia Internacional en Búsqueda Anti viral (27 de Abrí de 2003, Savannah, Ga) p A75) describen la síntesis y propiedades farmacocineticas de análogos de nucleosido como posibles inhibidores de replicacion de ARN de HCV Los autores reportan que los nucleotidos 2'-mod?f?cados demuestran una potente actividad inhibidora en ensayos de replicón a base de célula Olsen et al (Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flavivipdae, 16ava Conferencia Internacional en Búsqueda Anti viral (27 de Abril de 2003 Savannah, Ga)p A76) también describieron los efectos de los nucleosidos 2'-mod?f?cados sobre la replicación de ARN de HCV 11 Otros vanos compuestos que incluyen 1-am?no-alquilciclohexanos (Patente de E U A No 6,034,134 de Gold et al ), alquil 11 pidos (Patente de E U A No 5,922,757 de Chojkier et al ), vitamina E y otros antioxidantes (Patentes de E.U.A No 5,922,757 de Chojkier et al ), escualeno, amantadina, ácidos biliares (Patente de E U A No 5,846,99964 de Ozeki et al ), ácido N-(fosfonoacetl)-L-aspártico) Patente de E U A No 5,830,905 de Diana et al.), bencendicarboxamidas (Patente de E U A No 5,633,388 de Diane et al ), derivados de acido pol taden íl ico (Patente de E U A No 5,496,546 de Wang et al ) 2'3'-d?desox??nos?na (Patente de E U A No 5,026,687 de Yarchoan et al ), bencimidazoles (Patente de E U A No 5,891 ,874 de Colacino et al ), extractos de planta (Patente de E U A No 5,837,257 de Tsai et al , Patente de E.U A No 5,725,859 de Omer et al , y Patente de E U A No 6,056,961) y pipepdinas (Patente de E U A No 5,830,905 de Diana et al ) 12 Agonistas de receptor tales como isatopbina (ANA975 y ANA245) un análogo de nucleósido que es un agosta de receptor de tipo TOLL (U S 5,041,426 y 4,880,784) 13 Derivados de tioapl urea sustituidos tales como 1-(4-pent?lox?-3-tr?fluoromet?lfen?l)-3-(p?pd?n-3-carbon?l)t?ourea, Publicación de Patente de E U A 2004/0138205, Patente de E U A Sene No 10/716, 175) 14 Los compuestos que incrementan la efectividad de terapia de combinación incluyendo un antifolato, una 5-fluorop?pm?d?na (incluyendo 5-fluorourac?lo), un análogo de h is tid i na tal como ß-L-1 , 3-d loxola ni I citidina o ß-L-1 ,3-d?oxolan?l5-fluoroc?t?d?na, antimetabohtos (incluyendo antimetabolitos de pupna, citarabina, fudarabina, floxupdina, 6-mercaptopupna, metotrexato, y 6-tioguanina), hidroxiurea, inhibidores mitóticos (incluyendo CPT-11 , Etoposida (VP-21), taxol, y vinca alcaloides tales como vincpstina y vinblastma, un agente de alquilación (incluyendo, pero no limitándose a busulfan, clorambucil, ciclofosfamida, ifofamida, meclortamina, melfalan, y tiotepa), agentes de alquilación no clásicos, compuestos que contienen platino, bleomicina, un antibiótico antitumoral, una antracichna tal como doxorubicina y danomicina, una antracenodiona, inhibidores de topoisomerasa II, agentes hormonales (incluyendo, pero no limitándose a corticoides (dexametasona, prednisona, y metilprednisona), andrógenos tales como fluoximesterona y metiltestosterona, estrógenos tales como dietilestilbesterol, antiestrógenos tales como tamoxifen, análogos de LHRH tales como leuprohda, antiandrógenos tales como flutamida, aminoglutetimida, acetato de megestrol, y medroxiprogesterona), asparagmasa, carmustina, lomustina, hexametil-melamina, dacarbazina, mitotana, estreptozocina, cisplatina, carboplatina, levamasola, y leucovopna Los compuestos de la presente invención también pueden ser utilizados en combinación con agentes de terapia de enzima y moduladores de sistema inmunológico tales como un interferón, interleucina, factor de necrosis tumoral, factor de estimulación de colonia de macrófago y factor de estimulación de colonia

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1 El uso de una ciclospopna en la preparación de una composición farmacéutica para prevenir o tratar infecciones por Flavivipdae o trastornos inducidos por Flavivipdae en donde la ciclospopna (i) se une a ciclofilma recombinante humana con una relación de unión (BR) menor que 0 7, la relación de unión siendo el registro log para la base 10 de la relación de la ICb0 de la ciclospopna a la IC50 en una prueba simultánea de ciclospopna A según medido en una prueba competitiva de ELISA, y (n) tiene una actividad en Reacción de Linfocito Mezclada de no más de 5% de aquella de ciclospopna A 2 El uso de una ciclospopna de acuerdo con la reivindicación 1 en la preparación de una composición farmacéutica para inhibir replicación del virus Flavivipdae 3 El uso de una ciclospopna de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el virus Flavivipdae es un flavivirus, pestivirus, o hepacivirus 4 El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, en donde la ciclospopna es un compuesto de la Fórmula I w- -x- •R- •Y- -z- Q Ala T,- -T; -Tj-MeVa! 1 2 3 4 5 6 7 8 S 10 11 en donde W es MeBmt, dihidro-MeBmt, 8'-h?drox?-MeBmt o 0-acet?l-MeBmt1 X es aAbu, Val, Thr, Nva o 0-met?l treonina (MeOThr), R es Pro, Sar, (D)-MeSer, (D)-MeAla, o (D)-MeSer(Oacet?lo), Y es MeLeu, thioMeLeu, ?-h?drox?-MeLeu, Melle, MeVal, MeThr, MeAla, Mealle o MeaThr, N-etilVal, N-etillle, N-etilThr, N-etilPhe, N-etilTyr o N-et?lThr(Oacet?lo) Z es Val, Leu, MeVal o MeLeu, Q es MeLeu, ?-hidroxi-MeLeu, MeAla o Pro, T es (D)Ala o Lys, T2 es MeLeu o ?-hidroxi-MeLeu, y T3 es MeLeu o MeAla, a compuesto de la Fórmula la w- -x- R- YL -z- Q'- Ala-(D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal - 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 la en donde W es MeBmt, dihidro-MeBmt o 8'-h?drox?-MeBmt, X es aAbu, Val, Thr, Nva o 0-met?l treonina (MeOT hr), R' es Sar, (D)-MeSer, (D)-MeAla, o (D)-MeSer(Oacet?lo), Y' es MeLeu, ?-hidroxi-MeLeu, Melle, MeVal, MeThr, MeAla, Mealle o MeaThr, N-etillVal, N-etillle, N-etilThr, N-etilPhe, N-etilTyr o N-ethylThr(Oacet?lo) Z es Val, Leu, MeVal o MeLeu, y Q' es MeLeu, ?-hidroxi-MeLeu o MeAla, o un compuesto de la formula II . X,— Rí -Y, — Za Q„ Ala-(D)Ala-MeLß?-MßL?u-SVIßVal — | 4 5 6 7 8 9 10 11 en donde Wa es en donde Ra es un residuo de la fórmula le o Id -CH, CH: -CH — CH, -R4 le o -CH, SH—R.' en la que R4 es alquiltio de 1 a 4 átomos de carbono, aminoalquiltio de 1 a 4 átomos de carbono, alquilamino de 1 a 4 átomos de carbono-alquiltio de 1 a 4 átomos de carbono, dialquilamino de 1 a 4 átomos de carbono-alquiltio de 1 a 4 átomos de carbono, pirimidiniltio, tiazoliltio, N-alquilimidazoliltio de 1 a 4 átomos de carbono, hidroxialquilfeniltio de 1 a 4 átomos de carbono, hidroxialquilfenoxi de 1 a 4 átomos de carbono, nitrofenilamino o 2-oxopirimidin-1 -ilo, y R'4 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, Xa es Abu; Ra es -NMe-CH(Rb)-CO- en donde R es H o -S-Alq-R0 en donde Alq-R0 es metilo; o Alq es alquileno de 2 a 6 átomos de carbono o cicloalquileno de 2 a 6 átomos de carbono recto o ramificado, y R0 es H; OH; COOH; alcoxicarbonilo de 2 a 5 átomos de carbono; NR,R2 en donde cada uno de R< y R2, independientemente, se selecciona de H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono y fenilo cada uno opcionalmente sustituido por halógeno, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxicarbonilo de 2 a 5 átomos de carbono, amino, alquilamino de 1 a 4 átomos de carbono y/o dialquilamino de 1 a 4 átomos de carbono, y bencilo y un radical heterocíclico, dichos radicales bencilo y heterocíclicos estando saturados o insaturados y conteniendo 5 ó 6 miembros en el anillo y de 1 a 3 átomos heterogéneos, o R] y 2 forman, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, un heterociclo de 4 a 6 miembros, el cual puede contener otro átomo heterogéneo seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre, y el cual está opcionalmente sustituido por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, fenilo o bencilo, o cada uno de Ri y R2, independientemente es un radical de la fórmula Ib en donde Ri y R2 son como se definieron anteriormente, R3 es H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y n es un entero que varía de 2 a 4, Y3 es MeLeu o ?-hidroxi-MeLeu, Za es Val, y Qa es MeLeu, siempre que Rb no sea H cuando Y3 es MeLeu, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 5 Una composición farmacéutica para prevenir o tratar infecciones por Flavivipdae o trastornos inducidos por Flavivipdae, que comprende una ciclospopna de acuerdo con la reivindicación 1 junto con uno o mas diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables para la misma 6 Una combinación farmacéutica que comprende a) un primer agente, el cual es una ciclospopna de acuerdo con la reivindicación 1 y b) un co-agente que tiene propiedades anti-Flavivipdae 7 Una combinación farmacéutica para utilizarse en la prevención o tratamiento de infecciones por Flavivipdae o trastornos inducidos por Flavivipdae, que comprende a) un primer agente, el cual es una ciclospopna de acuerdo con la reivindicación 1, y b) un co-agente seleccionado de un agente que tiene propiedades anti-Flavivipdae, un agente anti-f ibrotico , un agente immuno-modulador o un agonista de receptor S1 P 8 La combinación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el co-agente que tiene propiedades virales anti-Flavivipdae se selecciona del grupo que consiste de un interferon, pbavipna interleucina, inhibidor de proteasa NS3, inhibidor de cisteina-proteasa, fenantrenquinona, derivado de tiazolidina, tiazolidina, benzanihda, un inhibidor de helicasa, un inhibidor de pohmerasa, un análogo de nucleósido, ghotoxina, cerulenina, ohgodesoxinucleotidos de fosforotioato antisentido, inhibidores de traducción de pendiente de IRES, y una pbocima 9 Un método para prevenir o tratar infecciones por Flavivipdae o trastornos inducidos por Flavivipdae en un sujeto con la necesidad del mismo, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una ciclospopna de acuerdo con la reivindicación 1 10 Un método para inhibir rephcación del virus Flavivipdae en un medio, que comprende aplicar al medio una cantidad efectiva de una ciclospopna de acuerdo con la reivindicación 1 11 Un método para inhibir rephcación del virus Flavivipdae en un sujeto con la necesidad de esto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una ciclospopna de acuerdo con la reivindicación 1 12 Un método de acuerdo con la reivindicación 9 ó 10, que comprende la co-administración concomitantemente o en secuencia de una cantidad terapéuticamente efectiva de una ciclospopna como se define en la reivindicación 1, y un co-agente seleccionado de un agente seleccionado de un agente que tiene propiedades anti-Flavivipdae, un agente anti-f ibrótico, un agente inmuno-modulador o un agonista del receptor S1 P 13 El método de acuerdo con la reivindicación 12, en donde el co-agente que tiene propiedades anti-Flavivipdae se selecciona del grupo que consiste de un interferon, pbavipna, interleucina, inhibidor de proteasa NS3, inhibidor de cisteina-proteasa, fenantrenquinona, derivado de tiazohdina, tía zol id i n a , benzani da, un inhibidor de helicasa, un inhibidor de polimerasa, un análogo de nucleósido, ghotoxina, cerulenina, oligodesoxinucleótidos de fosforotioato antisentido, inhibidores de traducción dependiente de IRES y una ribosima