MX2007004542A - Liposomas que incluyen un radionucleido y un agente citotoxico para la terapia de combinacion. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se relaciona con agentes citotoxicos que comprenden liposomas en donde los liposomas incluyen una solucion que comprende por lo menos un radionucleido emisor de particulas alfa y por lo menos otro agente terapeutico, particularmente un quimioterapeutico. La invencion tambien proporciona metodos para la formacion de tales agentes citotoxicos, metodos de terapia, especialmente terapia de cancer que emplea agentes y metodos para su uso en la manufactura de medicamentos.

Description

LIPOSOMAS QUE INCLUYEN UN RADIONUCLEIDO Y UN AGENTE CITOXICO PARA LA TERAPIA DE COMBINACIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con formulaciones de liposomas y en particular con liposomas para el uso en terapia de combinación de endo-radionucleido emisor de-partículas alfa. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El tratamiento del hiperplástico o de enfermedades neoplásticas tales como cánceres requiere con frecuencia la administración de agentes citotóxicos para eliminar selectivamente las células y las poblaciones de células que muestran estructuras de crecimiento incontroladas o indeseables. En el caso de neoplasmas localizados, tales como tumores sólidos, la cirugía puede ser utilizada para eliminar la mayoría de la masa de células indeseables, pero ésta se está utilizando cada vez más en combinación con el tratamiento citotóxico local, regional y/o sistémico para reducir al mínimo el riesgo de reaparición y cantidad de tejido resecado. En el caso de enfermedades neoplásticas dispersadas, tales como cánceres metastáticos, la cirugía no se puede utilizar generalmente como el único modo de tratamiento y los agentes citotóxicos regionales o sistémicos serán típicamente una parte importante del régimen terapéutico. Existe por lo tanto una necesidad actual considerable de nuevos y mejorados No. Ref. : 181229 sistemas citotóxicos, particularmente para el tratamiento de la enfermedad neoplástica. Por muchos años, los radionucleidos emisores departículas beta se han utilizado como agentes citotóxicos en los radiofarmacéuticos para la terapia de cáncer. En años recientes, sin embargo, también se han hecho esfuerzos de utilizar emisores de partículas alfa en agentes antitumorales . Los emisores de-partículas alfa tienen varias características que los distinguen de los emisores-de partículas beta y potencialmente proporcionan efectividad creciente en la terapia. Éstos incluyen sus energías más altas y rangos más cortos^ en tejidos. El rango de radiación de los emisores típicos de partículas alfa en ambientes fisiológicos es generalmente menos de 100 micrómetros, el equivalente de solamente algunos diámetros de la célula. Esto hace estas fuentes ideales para el tratamiento de tumores incluyendo micrometástasis debido a que poca de la energía irradiada pasará más allá de las células del objetivo, y de esta forma el daño al tejido sano circundante puede ser reducido al mínimo. En cambio, una partícula beta tiene un intervalo de 1 milímetro o más en agua . La energía de radiación de partículas-alfa también es alta comparada con las partículas beta, rayos gama y rayos-X, típicamente siendo 5-8 MeV, ó 5 a 10 veces que de una partícula beta y 20 o más veces la energía de un rayo gama. Así, esta deposición de una cantidad grande de energía sobre una distancia muy corta da a la radiación alfa una transferencia de energía lineal excepcionalmente alta (LET, por sus siglas en inglés) , cuando es comparada a la radiación beta o gamma. Esto explica la citotoxicidad excepcional de los radionucleidos emisores de partículas alfa y también impone demandas rigurosas en el nivel del control y el estudio de la distribución del radionucleido necesario para evitar efectos secundarios inaceptables. Un factor adicional que da ciertos radionucleidos emisores de-partículas alfa, ambos altamente convenientes como agentes citotóxicos y altamente estimulantes como agentes de direccionamiento preciso en vivo son las propiedades de sus nucleidos hijos. En Particular, muchos radionucleidos emisores de-partículas alfa forman parte de una cadena de desintegración de varias transformaciones alfa y/o beta entre el nucleido inicial y un isótopo hijo estable. En donde cualguier nucleido hijo es también un emisor de-partículas alfa, este nucleido también debe ser dirigido y controlado si este no causa efectos tóxicos indeseables por la acumulación en el tejido sano. Desafortunadamente, los factores físicos y químicos hacen este control muy difícil de llevar a cabo. Cuando un radionucleido se desintegra, el nucleido hijo generado es muchas veces químicamente totalmente diferente del isótopo original. El radio-224, por ejemplo, es un emisor de partículas alfa pero es químicamente un metal alcalino-terreo que adopta el estado de oxidación 2+. El producto inmediato de desintegración-alfa 2 4Ra es, sin embargo, el radón-220, que es un gas noble. Por lo tanto, cualquier coordinación o efecto de quelación pudo haber sido previamente estable al sostener el ion progenitor del radio en un agente dirigido, controlado, es difícil de mantener el control sobre el radón hijo, que puede de esta forma difundirse lejos y desintegrarse en otra parte en el cuerpo. Obviamente, una cadena completa de eventos de desintegración adicional puede seguir sin ningún control sobre en donde en el cuerpo estos eventos ocurren. El efecto físico de una desintegración alfa sobre el nucleido hijo resultante también puede ser bastante dramático. El núcleo de helio de una partícula alfa tiene una masa atómica relativa de 4 y se emite típicamente aproximadamente el 2% de la velocidad de la luz. Evidentemente esto imparte una energía considerable al núcleo hijo resultante el cual, por la conservación simple del movimiento, pudo ser esperada para retroceder a más de 100 Km/s. Evidentemente, la fuerza destructiva combinada de la partícula alfa de muy alta velocidad y el retroceso impartido al núcleo hijo masivo pueden romper enlaces químicos, propulsar el núcleo fuera de la quelación y causar problemas considerables en cualquier intento para controlar el destino de núcleos adicionales abaj o en la cadena de desintegración nuclear . Como resultado , muy pocos métodos se han proporcionado por los cuales los núcleos de desintegración alfa se puedan utilizar en la terapia debido a las dificultades de mantener el control sobre la desintegración subsecuente. Las cadenas de desintegración de algunos isótopos que emiten partículas alfa que pudieron ser útiles en terapia se muestran abaj o Tabla 1 Tabla 2 Como se puede observar de las tablas anteriores, si es utilizado un emisor de partículas alfa relativamente alto en la cadena de desintegración, existe el potencial para que un solo núcleo proporcione 4 ó 5 desintegraciones alfa altamente enérgicas y altamente citotóxicas antes de alcanzar un isótopo estable. Esto podría proporcionar potencialmente alta efectividad dirigida a la destrucción de células. El problema con esto, sin embargo, es que si el destino de estos hijos no es controlado entonces no se controla para cada núcleo progenitor el cual se desintegra en el sitio de acción deseado, 3 o 4 desintegraciones alfa adicionales pueden ocurrir en sitios indeseados. La potencia de tales núcleos es de esta forma muy alta pero requieren controles físicos y químicos minuciosos sobre su distribución. Se han propuesto algunos métodos que involucran la quelación de los núcleos metálicos emisores de-partículas alfa pero éstos generalmente son inadecuados para mantener el control sobre una cadena de desintegración completa que inicia en cualquier radioisótopo que tiene uno o más núcleos hijos que emiten-partículas alfa debido a que la quelación simple no puede mantener control sobre estos núcleos hijos, por las razones consideradas anteriormente. Se han propuesto ciertos métodos en el pasado para ayudar a controlar la distribución de los núcleos hijos siguiendo las desintegraciones alfa y de esta forma permitir establecer el objetivo adecuado y el uso de emisores de partículas alfa en terapia. Estos métodos incluyen la incorporación del emisor de partículas alfa en las superficies del hueso en la necesidad de tratamiento, en donde los hijos pueden permanecer atrapados (por ejemplo, WO 00/40275) y la incorporación de los emisores de partículas alfa en los liposomas de forma que el núcleo hijo de retroceso permanece atrapado dentro de la región del núcleo del liposoma (por ejemplo WO 01/60417) . Aún una dificultad adicional con la administración del radionúcleo emisor de- partículas alfa es el efecto destructivo de la radiación de alfa y el núcleo hijo de retroceso en la composición. La energía muy alta del evento de desintegración puede no sólo romper el radionúcleo fuera de la quelación sino puede tener un efecto considerablemente destructivo sobre la formulación misma. Así, aunque si el radionucleido tiene una vida media de varios días, puede ser necesario preparar una composición farmacéutica directamente antes de la administración puesto que la energía destructiva liberada por la desintegración de incluso una cantidad pequeña del radioisótopo puede interrumpir el resto de la composición.

Una forma en la cual la efectividad de los tratamientos para la enfermedad neoplástica, especialmente cánceres, se ha elevado estos últimos años es por el concepto de la terapia de combinación. La idea detrás de la terapia de combinación es que dos o más medicamentos o métodos para combatir las poblaciones de células indeseadas sean utilizadas simultáneamente, o en la sucesión relativamente rápida. De esta forma, las células objetivo que se pudieron haber debilitado por un primer método de tratamiento se pueden hacer más susceptibles a destruir por un método subsecuente. Además, los efectos secundarios de dos o más métodos de tratamiento usados en combinación pueden ser aditivos o preferiblemente menos que aditivos mientras que el efecto terapéutico es aditivo o preferiblemente mayor que aditivo. Así, el mayor efecto terapéutico puede ser proporcionado usando un régimen de tratamiento que permanezca tolerable para el paciente. Uno de los métodos más efectivos para proporcionar terapia de combinación es generar un medicamento con más de un modo de actividad. Esto resulta en el tratamiento simultáneo de las células objetivo con más de un agente terapéutico. Esto puede resultar a un aumento mayor de aditivo en la efectividad puesto que, para sobrevivir, la célula debe soportar dos modos del ataque simultáneamente. Igualmente, cualquier subpoblación de células objetivo que pudieron tener cierta resistencia a un modo del tratamiento serán más probablemente destruidas por el otro modo y de esta forma el desarrollo de la resistencia será retardado. En la actualidad, no hay un método efectivo para generar terapias que puedan controlar y liberar la alta citotoxicidad de un radionucleido emisor de partículas alfa de metal pesado y de sus isótopos hijos en combinación con un agente (especialmente citotóxico) terapéutico secundario en el mismo sistema de liberación del tratamiento. Esto es porque al combinar los dos en la misma molécula dependería de un efecto de quelación atrapar al emisor alfa, lo cual sería inadecuado para mantener el control sobre el núcleo hijo. Existe así una necesidad considerable de un medicamento y de un sistema de liberación que puedan proporcionar una terapia de combinación incluyendo la liberación y el control sobre un emisor de partículas alfa de metal pesado en combinación con la liberación simultánea de un agente secundario en el mismo sistema de liberación. Las dificultades que se enfrentan en la preparación de un medicamento de combinación efectivo incluyendo un radionucleido emisor de partículas alfa son enormemente mayores que las que se enfrentan en la preparación de, por ejemplo, combinaciones de emisores de partículas beta y otras terapias. Entre estas dificultades están los problemas con el mantenimiento del control sobre el núcleo precursor e hijo descrito anteriormente, la enorme y destructiva fuerza concentrada de la irradiación-alfa local, y el hecho de que los isótopos de larga duración no se pueden administrar debido al daño a largo plazo que tal irradiación podría causar al sujeto. En el caso de, por ejemplo, un emisor de- partículas beta, el retroceso nuclear es relativamente minúsculo, permitiendo que un emisor de partículas beta sea coordinado con otro agente terapéutico por la quelación simple. De igual manera, la deposición de energía por de unidad volumen de la emisión de- partículas beta es aproximadamente cuatro órdenes de magnitud menos que para la emisión de- partículas alfa y así cualquier estructura química en proximidad cercana a la irradiación-alfa debe ser capaz de sufrir daño mucho mayor, mientras que la operación restante, sea el caso para los emisores beta. El aspecto de la preparación es una dificultad significativa adicional. Particularmente, el control eficiente y robusto de los emisores de partículas alfa se deben proporcionar idealmente por un agente de direccionamiento que puede ser cargado rápidamente y fácilmente, preferiblemente en el "punto de cuidado" o muy poco antes. Los procedimientos sintéticos complejos no se pueden asumir en el período corto disponible antes de la desintegración de un emisor de partículas alfa apropiado. Las combinaciones de emisores de-partículas alfa y otras terapias se han observado de esta forma previamente como cercanamente-imposible de producir puesto que deben tener síntesis fácil, control robusto sobre el radionúcleo y estabilidad de la formulación para la destrucción o pérdida de medicamento secundario bajo bombardeo de alta-energía prolongada . Los presentes inventores ahora, han establecido asombrosamente que los liposomas pueden ser preparados conteniendo ambos, un radionucleido de metal pesado emisor departículas alfa y un agente terapéutico secundario. Más asombrosamente aún, ellos han establecido que tales liposomas pueden ser producidos suficientemente estables para las energías altas de la desintegración alfa y el retroceso nuclear, que ellos pueden permanecer estables al almacenamiento por períodos de varias semanas y pueden mantener estable el emisor de partículas alfa, el agente terapéutico secundario y en algunos casos el núcleo hijo después de la desintegración alfa. Esto es una sorpresa considerable puesto que el liposoma será pinchado muchas veces por las partículas de energía-alta durante este período. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra la captación del tumor de la forma liposómica. La figura 2 muestra los datos para el estudio de opt imi zacion . La figura 3 muestra los datos para el estudio de biodistribución y la claridad de sangre de radioactividad. La figura 4 muestra la absorción más alta por órgano entre los tejidos suaves. La figura 5 muestra los índices de Localización (Ll) en varios tejidos para el radio liposomal vs . Radio catiónico.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En un primer aspecto, la presente invención proporciona así un agente citotóxico que comprende liposomas en donde los liposomas incluyen una solución que comprende por lo menos un radionucleido emisor de partículas alfa y por lo menos otro agente terapéutico. Preferiblemente el radionucleido emisor de partículas alfa es un emisor de- partículas alfa de metal pesado, de acuerdo a lo definido aquí. Los liposomas preferiblemente también incluyen por lo menos un agente quelante o de formación de complejos. Los liposomas también incluyen preferiblemente por lo menos un ionóforo. En un aspecto adicional, la presente invención también proporciona un método para la síntesis de liposomas que incluyen una solución que comprende por lo menos un radionucleido emisor de partículas alfa y por lo menos otro agente terapéutico, el método comprende poner en contacto los liposomas que incluyen una solución que comprende por lo menos un agente terapéutico diferente de un radionucleido emisor de partículas alfa con una solución que comprende por lo menos un ionóforo y por lo menos un radionucelido emisor de partículas alfa. Preferiblemente, el método de la invención es un método para la formación de un agente citotóxico de la invención. En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende por lo menos un agente citotóxico de la presente invención y, opcionalmente y preferiblemente, por lo menos un portador y/o excipiente farmacéuticamente tolerables. En aún un aspecto adicional de la invención proporciona un agente citotóxico de la presente invención para el uso en terapia. Los agentes citotóxicos de la presente invención y las composiciones y las formulaciones farmacéuticas que comprenden tales agentes son altamente apropiadas para el uso en el tratamiento de la enfermedad, particularmente en el tratamiento del hiperplástico o la enfermedad neoplástica. En todavía un aspecto adicional, la presente invención proporciona así un método para el tratamiento de una enfermedad, preferiblemente del hiperplástico o una enfermedad neoplástica, el método comprende administrar a un (humano o no-humano) , preferiblemente mamífero, sujeto a un agente citotóxico de la presente invención. En aún todavía un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un agente citotóxico de la presente invención en la manufactura de un medicamento para el uso en un método de tratamiento del hiperplástico o de la enfermedad neoplástica. El agente citotóxico debe ser administrado preferiblemente en una cantidad efectiva terapéuticamente, profilácticamente y/o mitigante de dolor. Los agentes citotóxicos de la presente invención comprenden liposomas que encapsulan una solución que comprende por lo menos un radionucleido, preferiblemente un radionucleido emisor de- partículas alfa, y por lo menos otro agente terapéutico. Preferiblemente, los radionucleidos de la presente invención serán radionucleidos de metal pesado que tendrán una masa isotópica relativa de por lo menos 150 amu. Preferiblemente, los radionucleidos tendrán una masa isotópica de por lo menos 200, más preferiblemente entre 210 y 230. Los radioisótopos emisores de partículas alfa altamente preferidos de metal pesado incluyen 211At, 212Bi , 223Ra, 224Ra, 225Ac y 227Th. El término el "radionucleido emisor de- partículas alfa" de acuerdo a como se ha utilizado aquí comprende núcleos con un solo modo (alfa) de desintegración radiactiva y también núcleos con modos múltiples de desintegración en donde por lo menos una porción de los núcleos de este isótopo se desintegra por la emisión de- partículas alfa. En donde un núcleo tiene más de un modo de emisión, es preferiblemente que por lo menos el 1% se desintegre por la emisión de- partículas alfa, preferiblemente por lo menos el 10% y más preferiblemente por lo menos el 30% se desintegrará por la emisión de partículas alfa. En una modalidad, substancialmente todos los núcleos se desintegrarán por la emisión de partículas alfa. En donde un emisor de partículas alfa "ramificado" de que tiene dos o más modos de desintegración que produce una proporción relativamente baja de partículas alfa, esto puede sin embargo también ser un emisor de partículas alfa "indirecto", de acuerdo a lo descrito aquí más adelante, puesto que el producto de la desintegración no-alfa puede resultar (directamente o indirectamente) en un emisor de partículas alfa adicional. El término "radionucleido emisor de partículas alfa" de acuerdo a como se ha utilizado aquí también se utiliza para indicar, en donde el contexto permite, un radionucleido emisor de partículas alfa "indirecto". Tales emisores de partículas alfa indirectos pueden ser los radioisótopos que en sí mismos no experimentan desintegración alfa a un grado significativo sino la desintegración por otro modo (por ejemplo, por la emisión de partículas beta) para formar un emisor de partículas alfa. Preferiblemente este emisor de partículas alfa será el producto hijo derivado directo del emisor de partículas alfa "indirecto" pero puede ser el resultado de más de una desintegración no-alfa. Preferiblemente el emisor de partículas alfa formado de la desintegración de un emisor de partículas alfa "indirecto" tendrá una vida-media corta (por ejemplo menos de 24 horas, más típicamente menos de 1 hora y preferiblemente menos de 10 minutos) . Ejemplos de emisores de partículas alfa indirectos incluyen 21Pb, 212Bi y 213Bi (los últimos dos también son emisores de partículas alfa "ramificados" en sí mismos) . La vida-media de los emisores de- partículas alfa apropiados generalmente será suficiente para permitir su preparación, transporte y almacenamiento limitado antes de usarse como un radioterapéutico pero típicamente no será hasta que plantee un riesgo de salud a largo plazo para el sujeto si una cierta cantidad del isótopo se conserva en el cuerpo durante y después del tratamiento. Así, los emisores de partículas alfa apropiados (incluyendo emisores de partículas alfa indirectos) tendrán típicamente vida-media de por lo menos 30 minutos, preferiblemente por lo menos 6 horas, y más preferiblemente por lo menos 1 día. Los emisores de partículas alfa más preferidos tendrían una vida-media por lo menos de 3 días. Para evitar la exposición a largo plazo, la vida media de los emisores de partículas alfa debe ser generalmente menos de un año, preferiblemente menos de 6 meses y más preferiblemente menos de 1 mes . El cuerpo también será potencialmente expuesto a la radiación de cualquier hijo emisor de- partículas alfa generado por la desintegración subsecuente. Así, en donde la cadena de desintegración del emisor de partículas alfa administrado incluye uno o más emisores de- partículas alfa, es preferible que ningún isótopo generado en esa cadena de desintegración, hasta e incluyendo el ultimo isótopo emisor de- partículas alfa antes de la formación de un núcleo estable, tiene una vida media mayor de 1 año. Más preferiblemente éste no debe ser mayor de 6 meses y lo más preferiblemente no mayor de 1 mes. Los agentes citotóxicos de la presente invención comprenden típicamente por lo menos un radionucleido emisor de- partículas alfa y por lo menos un agente terapéutico en cantidades combinadas para alcanzar efectividad terapéutica, profiláctica y/o mitigante de dolor. Esta cantidad dependerá evidentemente del isótopo (s) particular seleccionado para el uso, la naturaleza y el número de los otros agentes terapéuticos, la condición (es) de ser tratado, prevenido y/o mitigado evidentemente, la especie, edad, sexo, peso, salud y pronóstico del sujeto, el modo de administración, efectividad del objetivo, tiempo de residencia, modo de despeje, tipo y severidad de efectos secundarios de la composición farmacéutica y sobre muchos otros factores que son evidentes para una persona experimentada en la técnica. Típicamente, la dosis de radiación total estará en el intervalo de 10 kiloBq a 10 gigaBq por cada administración única, con uno o más intervalos preferidos que son de 1 megaBq a 1 gigaBq por cada administración única. De forma similar el otro agente (s) terapéutico será utilizado en un nivel en el cual la efectividad terapéutica, profiláctica y/o mitigante de dolor en combinación con el emisor de partículas alfa será esperado. Puesto que el otro agente (s) terapéutico generalmente será agente farmacéutico conocido será típicamente utilizado en un nivel entre 10% de su dosis terapéutica mínima normal y 500% de su dosis terapéutica normal máxima. Más preferiblemente este intervalo será el 25% de la dosis mínima normal a 200% de la dosis máxima normal. En una modalidad preferida, el nivel total de la emisión de partículas alfa en los agentes citotóxicos de la invención está debajo de la dosis mínima requerida para la efectividad terapéutica, profiláctica y/o mitigante de dolor cuando se utiliza como terapia sola (por ejemplo 10-99%, preferiblemente 25 a 75% de esa dosis mínima) . Esto permite la reducción de los efectos secundarios causados por la terapia de endo-radionucleidos pero la terapia se hace efectiva porque en combinación con por lo menos otro agente terapéutico, los agentes citotóxicos de la invención son totalmente efectivos. En una modalidad preferida adicional, o cada uno de, otro agente (s) terapéutico se utiliza en un nivel debajo de la dosis terapéutica normal mínima, por ejemplo 10-99% de la dosis terapéutica mínima normal, preferiblemente de 25 a 75% de su dosis terapéutica normal. Esto sirve otra vez para reducir el peligro de efectos secundarios y permite un alto nivel de efectividad total sin exponer al sujeto a efectos secundarios inaceptables . En un aspecto preferido de la presente invención, el radionucleido emisor de- partículas alfa y por lo menos otro agente terapéutico en los agentes citotóxicos de la invención es sinérgico con respecto a sus dosificaciones. Es decir que el efecto proporcionado por el agente citotóxico de la presente invención es mayor que el que sería anticipado de los efectos aditivos de las dosis incorporadas del radionucleido emisor de partículas alfa y por lo menos otra terapia cuando se utilizaba por separado. En una alternativa pero igualmente modalidad preferida, el radionucleido emisor de- partículas alfa y por lo menos otro agente terapéutico en los agentes citotóxicos de la invención es sinérgico con respecto a sus efectos secundarios. Es decir que los efectos-secundarios causados por el agente citotóxico de la presente invención son menos que los que serían anticipados cuando el efecto terapéutico equivalente es proporcionado por cualquier radionucleido emisor de-partículas alfa o por lo menos otro agente terapéutico cuando se utiliza por separado. Una ventaja considerable de una modalidad de la invención es que los agentes citotóxicos pueden asombrosamente mantener el núcleo hijo producido por la desintegración-alfa del radionucleido dentro del liposoma. Esto es particularmente importante en donde el nucleido hijo y/o cualquier otro nucleido generado en la cadena de desintegración radiactiva entre el primer radionucleido y un isótopo estable es también un radionucleido emisor de partículas alfa. Así, en una modalidad, los liposomas preferiblemente encapsulan una solución que comprende el radionucleido emisor de- partículas alfa que generan por lo menos un radionucleido adicional emisor de partículas alfa durante su desintegración. Es preferible que el liposoma sea capaz de mantener estable este radionucleido adicional emisor de- partículas alfa. Es preferible adicionalmente que el liposoma sea capaz de mantener cualquier radionucleido emisor de partículas alfa subsecuente el cual pueda ser generado por la desintegración radiactiva adicional. En modalidades alternativas de la presente invención, en donde el núcleo madre es un emisor de partículas alfa, el núcleo hijo no puede ser retenido a un grado significativo. Esto es, sin embargo, aceptable bajo una cierta circunstancia, particularmente en donde la desintegración del hijo es rápida y de esta forma el isótopo hijo no tiene tiempo para translocar significativamente después de la formación. Tal desintegración rápida pudo ser, por ejemplo, con un tiempo de vida-medio de menos de 1 hora, preferiblemente menos de 20 minutos y más preferiblemente menos de 1 minuto. De forma similar, en donde la vida media del hijo es larga en relación a su índice de claridad del cuerpo entonces poco del hijo se desintegrará antes de que se expulse y de esta forma ningún daño significativo resultará. Esto pudo ser con una vida-media de por lo menos 1 día, preferiblemente por lo menos 3 días y lo más preferiblemente por lo menos 10 días. Un liposoma se puede considerar como capaz de retener firmemente los núcleos hijos generados de la desintegración radiactiva si por lo menos 10% de tales núcleos hijos que resultan de esa desintegración radiactiva son retenidos dentro de la solución entrampada por el liposoma. Preferiblemente por lo menos 25% de los núcleos hijos son retenidos y preferiblemente por lo menos 30% son retenidos dentro de esta solución encapsulada. Esto es una ventaja considerable sobre otras formas de administración del radionucleido-alfa en donde efectivamente 100% de los núcleos hijos estarán perdidos debido al retroceso nuclear en la desintegración. En donde los agentes citotóxicos de la presente invención se formulan para usos no-sistémicos (especialmente local o regional), los liposomas pueden ser más grandes y retendrán una mayor proporción aún de los radionucleidos de desintegración alfa. En estas aplicaciones por lo menos 40% e incluso por lo menos el 50% de los radionucleidos de desintegración alfa pueden ser retenidos preferiblemente. Un aspecto sorpresivo y conveniente de los agentes citóxicos de la presente invención es que tienen la capacidad de retener los contenidos de los liposomas aun bajo el bombardeo de alta energía de desintegración-alfa local. En una modalidad, los agentes citóxicos de esa forma retienen por lo menos el 50% del otro agente terapéutico que es mayor que la vida-media del radionucleido emisor de-partículas alfa. Es preferible que sea mayor de 60% y más preferiblemente por lo menos 75%. Los liposomas utilizados en la presente invención pueden ser formados a partir de cualquier lípido apropiado o mezclas de los mismos y pueden ser uni-laminar, bi-laminar, o multilaminar. Los presentes inventores han establecido sorpresivamente que los liposomas tienen la capacidad de mantener sus estructuras y retener radionucleidos madre e hijo y uno o más agentes terapéuticos adicionales aun bajo condiciones en las cuales se encuentren expuestos al daño causado por un nivel terapéutico de irradiación alfa y por el retroceso nuclear resultante. Sin limitarse por la teoría, los inventores creen que esta habilidad sorpresiva es el resultado de la capacidad de los liposomas para "sanar" cuando son expuestos a un daño. Así, es preferible que el lípido o mezcla de lípidos que forman la estructura laminar del liposoma deben tener una temperatura de transición termotrópica alrededor o por debajo de las temperaturas fisiológica y ambiental. De esta forma, se mejora la fluidez de la membrana liposomal y se maximiza su capacidad de "sanar". En consecuencia, en una modalidad de la invención, los liposomas son formados a partir de un lípido o mezcla de lípidos que tienen una temperatura de transición termotrópica de aproximadamente de 10-50°C, preferiblemente de 18-45°C y más preferiblemente de 20-40°C. En donde se utiliza una mezcla de lípidos, no todos los componentes requieren tener las temperaturas de transición en estos intervalos pero es preferible que por lo menos un componente lípido deba contar con tal temperatura de transición y más preferible que, en total, la mezcla deba contar con una temperatura de transición en este intervalo. En una modalidad preferida, los agentes citóxicos de la presente invención de esa forma son estables con respecto a la pérdida de sus contenidos (especialmente a la pérdida del radionucleido alfa y/o el por lo menos un agente terapéutico) durante un almacenamiento de por lo menos 3 días, preferiblemente por lo menos 1 semana y lo más preferiblemente por lo menos 3 semanas cuando se almacenan a temperatura ambiente. Esta estabilidad es altamente sorpresiva puesto que durante este periodo de almacenamiento los liposomas de los agentes citóxicos serán pinchados repetidamente por un nivel de partículas alfa y el retroceso de núcleos hijos el cual será de por lo menos el equivalente a la dosis terapéutica que tiene la capacidad de destruir células extensivas dentro del sujeto. La estabilidad retenida en este contexto indicada que no más del 20%, preferiblemente no más del 10% y lo más preferiblemente no más del 5% de los contenidos (especialmente el radionecleido alfa y/o el por lo menos el otro agente activo) se perderá del liposoma dentro de la solución circundante durante el periodo de almacenamiento. Una vez más sin limitarse por la teoría, la capacidad de la membrana liposomal de "auto sanarse" después de ser "pinchada" por la irradiación alfa y/o el retroceso, se cree que es lo que permite este grado sorpresivo de retención. De acuerdo a como se utiliza aquí el término "liposoma" se utiliza para indicar una estructura vesicular que comprende por lo menos una bicapa de lípidos que rodea y cubre por lo menos una región de solvente. Más de una bicapa puede estar presente y de esa forma el liposoma puede ser una vesícula uni-laminar o una vesícula multi-laminar (MLV) . De forma similar, más de una región puede ser cubierta por regiones que tienen solvente entre las láminas de un MLV y/o por dos o más lipsomas que son fusionados o unidos para cubrir dos o más regiones de solvente separadas por al menos una bicapa de lípidos. Cualquier región de solvente esencialmente rodeada por una o más bicapas de lípidos es considerada para ser una región cubierta. En donde se cubre más de una región de solvente, estas generalmente comprenderán sustancialmente solventes y componentes de solución similares. La región de solvente cubierta por los liposomas de la presente invención generalmente será una solución acuosa que cuenta con por lo menos un radionucleido emisor de-partículas alfa disuelto o suspendido en la misma de acuerdo a lo aquí descrito y por lo menos otro agente terapéutico. La región de solvente adicionalmente puede comprender otros componentes farmacéuticamente tolerables, incluyendo especialmente los agentes quelantes y/o de formación de complejos y/o ionóforos, modificadores de pH, modificadores de tonicidad, agentes dirigidos y similares. Los liposomas sin grupos objetivos tienden a ser incorporados pasivamente en tumores sólidos debido a la fenestración vascular asociada-del-tumor . Esto permite una "dirección pasiva" de los agentes citóxicos de actividad dual/múltiple de la presente invención en donde la enfermedad a ser tratada incluye un tumor sólido. El mecanismo responsable de que el tumor absorba liposomas probablemente sea la fuga capilar encontrada frecuentemente en la neovasculatura de tumores que permite a los liposomas difundirse a través de las paredes capilares y dentro de intersticios de tumores pero no tejidos normales. Los liposomas de la presente invención pueden ser modificados con el fin de incrementar sus capacidades de dirigirse al sitio deseado de la fracción del emisor de -partículas alfa y/o el por lo menos otro agente terapéutico y/o puede ser modificado con el fin de controlar el índice de claridad y/o modo de claridad. En particular, el índice de claridad de los liposomas en vivo frecuentemente se puede reducir mediante la modificación superficial del liposoma con una molécula que contiene polialquilenglicol. Tales moléculas generalmente tendrán por lo menos una cadena de polialquilenglicol (por ejemplo, polietileno, polipropileno o mezclas de los mismos) y por lo menos un grupo de membrana-affinica (por ejemplo una cadena de ácido graso o un alcanil de Cs a C2 ó un grupo alquenil) . Los ejemplos incluyen al polietilenglicol injertados de lípidos y/o un polipropilenglicol modificado de moléculas de membrana-soluble. La modificación superficial será familiar para una persona experimentada en la técnica. Los liposomas modificados superficialmente son ligeramente preferidos, particularmente para un uso sistémico, debido a que generalmente tienen una tiempo de residencia más largo en la corriente sanguínea. Como resultado tienen una mayor oportunidad de aprovechar la "fuga" natural de la (neo) vasculatura de tumor y de esa forma proporcionar un mayor efecto de dirección de tumor. Los liposomas pueden ser dirigidos eficazmente a sus sitios deseados de acción mediante la modificación superficial con por lo menos una fracción dirigida. La fracciones dirigidas apropiadas incluyen a los polipéptidos tales como receptores de superficie celular, fragmentos de receptores, moléculas de adhesión celular y fragmentos de los mismos, anticuerpos, construcciones de anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, y anticuerpos de cadena de cadena única, hormonas u análogos de hormonas tal como estrógenos y testosteronas y pegueñas moléculas tales como folatos o análogos de folato. En particular, las fracciones dirigidas pueden ser convenientemente fracciones las cuales se unen a la superficie celular de agentes extracelulares producidos en una alta concentración inusual por células dirigidas. Tales agentes incluyen receptores de hormonas tal como receptores de testosterona y/o receptores de estrógenos. Al conjugar anticuerpos monoclonales u otras moléculas con afinidad para tumores celulares asociados a los liposomas, estos pueden dirigir activamente a células únicas o a la enfermedad micrometastática, así como todavía localizar más eficazmente a los tumores sólidos. En una modalidad, los liposomas no son modificados superficialmente con folato conjugado con un anticuerpo monoclonal o un fragmento FAB del mismo. Los liposomas utilizados en la presente invención típicamente serán apropiados para una terapia sistémica, regional y/o local. Los liposomas para uso local o regional (por ejemplo, intracavitaria) típicamente serán más grandes los previstos para una aplicación sistémica a la corriente sanguínea. Los liposomas para una administración al torrente sanguíneo (por ejemplo, por inyección intravenosa o intraarterial o por infusión) generalmente no serán más grandes de lOµm en sus dimensiones más largas, preferiblemente no más grandes de 1 µm y más preferiblemente no mayores de 200 nm. Puesto que los liposomas muy pequeños no retienen sus contenidos muy eficientemente bajo el efecto considerable destructivo de la irradiación-alfa terapéutica (y el retroceso nuclear resultante) , los liposomas generalmente no deberán ser más grandes de 10 nm en dimensión máxima, preferiblemente no más pequeños de 20 nm y más preferiblemente no más pequeños de 40 nm. En una modalidad preferida, los liposomas usados en los agentes citóxicos de la presente invención son más grandes de 100 nm (por ejemplo, 105 nm o mayores) en su dimensión máxima. Para un tratamiento diferente al de la administración al torrente sanguíneo, la dimensión máxima de los liposomas típicamente ser más grande y puede ser hasta 100 µm y preferiblemente hasta 50 µm y más preferiblemente hasta 30 µm. Con el fin de proporcionar menor claridad en estos métodos de administración, los liposomas pueden ser por lo menos 100 nm en dimensión máxima, preferiblemente por lo menos 2 µm y más preferiblemente por lo menos 5 µm. En los agentes citóxicos de la invención, la muestra de agente como una totalidad incluirá liposomas los cuales contienen ambos un radionucleido emisor de-partículas alfa y por lo menos otro agente terapéutico. Generalmente, el nivel de radionucleido alfa necesario para tener un efecto terapéutico será muy bajo en comparación con el nivel del otro(s) agentes terapéutico debido a la extremadamente alta citotoxicidad de radiación alfa. Como resultado, aun cuando una gran proporción de liposomas contendría el otro agente terapéutico, en absoluto necesita contener radionucleido alfa.

Es deseable que por lo menos 80% en volumen de liposomas contenga por lo menos un agente terapéutico diferente un radionucleido emisor de-partículas alfa. Este preferiblemente será por lo menos 90% y lo más preferiblemente será por lo menos 95% (por ejemplo, sustancialmente 100%) . También es deseable que por lo menos 10% en volumen de los liposomas contenga ambos el radionucleido y el otro agente activo. Esta proporción preferiblemente es por lo menos 20% más preferiblemente por lo menos 30% y lo más preferiblemente por lo menos 45%. En una modalidad alternativa pero menos preferida, dos especies de liposomas pueden estar presentes, una que contiene radionucleido emisor alfa y uno que contiene por lo menos otro agente terapéutico. En una modalidad adicional, los agentes citotóxicos de la invención pueden comprender liposomas que contienen ambos el por lo menos un radionucleido emisor de -partículas alfa y el por lo menos otro agente terapéutico de acuerdo a lo aquí indicado y también contiene un pequeña proporción (30 % o menos en volumen) de liposomas adicionales que contienen solamente el otro agente terapéutico o preferiblemente que contiene solamente el radionucleido. Esto permite que las propiedades del agente citotóxico sean "bien ajustados" para una aplicación particular antes de la administración. Tales liposomas adicionales son preferiblemente mezclados poco antes de la administración. Los liposomas apropiados para utilizarse en la formación de los agentes citotóxicos de la presente invención pueden ser formados por métodos conocidos en el estado previo de la técnica o pueden ser adquiridos comercialmente con composiciones, tamaños apropiadas y opcionalmente modificados superficialmente. En una modalidad preferida, los agentes citotóxicos son formados a partir de liposomas pre-cargados con por lo menos un agente terapéutico no-radioactivo. Las formulaciones liposomales pegiladas de antraciclinas tales como doxorubicina son particularmente preferidas y pueden ser sintetizadas u originadas comercialmente. Un liposoma altamente preferido es una formulación liposomal de doxorubicina, tal como la formulación comercial Caelyx (RTM) .

El "otro agente terapéutico" referido aquí es un agente apropiado para usarse en terapia en combinación con un radionucleido emisor de -partículas alfa de acuerdo a lo aquí descrito. Tal agente terapéutico puede estar presente con el fin de reducir efectos colaterales indeseables de los radioisótopos emisores-alfa pero típicamente serán agentes los cuales son en si mismos capaces de destruir o limitar el crecimiento de por lo menos una porción de células dirigidas. En particular, ya que ambos el radioisótopo emisor de partículas alfa y el otro agente terapéutico son distribuidos con los liposomas, es preferible que ambos sean citotóxicos y altamente preferible que sean citotóxicos por medio de mecanismos diferentes. Esto permite la más grande oportunidad de obtener una ventaja de una terapia combinada ya que las células las cuales son resistentes a un mecanismo pueden ser susceptibles a otro y el esfuerzo provocado a la célula dirigida puede dejarlo debilitado con respecto al otro agente. Los otros agentes terapéuticos apropiados incluyen a los radioisótopos que emiten otras formas de radiación, tal como partículas beta, rayos gama, rayos-X, electrones de conversión, electrones Auger o combinaciones de los mismos, los agentes de quimioterapia tales como análogos de folato, análogos de nucleosida, toximas, inhibidores de angeogénesis, etc.; los terapéuticos basados en ácido nucleico tales como genes enlazados a promotores, ADNs y ARNs antisentido y ADNs y ARNs de poca interferencia, virus, cualquiera activo o inactivo, tal como, o como portadores para terapéuticos de ácido nucleico; los inmunoterapéuticos incluyendo los anticuerpos monoclonales opcionalmente funcionarizados, construcciones o fragmentos de los mismos, y agentes para mejorar otras terapias tal como boro para usarse en terapia de captura de boro . Otros terapéuticos también incluyen agentes de producción de imágenes y intensificadores de imagen con el fin de facilitar la visualización del sitio objetivo y/o la distribución del agente citotóxico. Tales agentes de producción de imágenes incluyen a los isótopos emisores de rayos-gama y/o -X, agentes de contraste de resonancia magnética (por ejemplo, complejos de gadolinio) , agentes de contraste de ultrasonido y/o agentes intensificadores de contraste de rayos-X (por ejemplo, compuestos que contienen metales pesados o iodina) . Preferiblemente, en donde el otro agente terapéutico es un agente de producción de imágenes, este agente terapéutico también tiene un efecto citotóxico (tal como un emisor de -partículas beta citotóxico con una emisión-gama medible) o se utilizará como un tercer o un agente terapéutico adicional en combinación con el emisor de partículas alfa y con por lo menos el "otro" agente terapéutico citotóxico. Es preferible que el otro agente terapéutico no sea un emisor alfa. En donde el otro agente terapéutico es un radionucleido con más de un modo desintegración es preferible de menos del 1%, preferiblemente menos del 0.5% de degradación por emisión de -partículas alfa. Un agente terapéutico no-radioactivo altamente preferido para utilizarse en la presente invención es doxorubicina. Los agentes citotóxicos de la presente invención preferiblemente encapsulan una solución que comprende por lo menos una agente de formación de complej os/quelante . Al proporcionar una concentración apropiada de por lo menos un agente de formación de complejos/quelante apropiado, los liposomas pueden retener los radionucleidos madre e hijo a una extensión mayor y de esa forma ejercer un control más eficaz sobre la distribución en vivo del efecto citotóxico. La solución dentro de los liposomas también puede contener otros agentes para reducir la posibilidad de que el retroceso nuclear propulse los núcleos hijos fuera del liposoma o que la degradación radioactiva provoque que el radionucleido y/o cualquier otro agente terapéutico escape a través de cualquiera de los orificios transitorios en la membrana de lípido. Otros agente internos apropiados incluyen a los polímeros solubles en agua u otros agentes modificadores de viscosidad (para desacelerar la difusión de los agentes activos fuera del liposoma en el caso de que se produzca un orificio transitorio) e iones de gran sección-transversal, tal como iones de metales pesados (radioactivos o preferiblemente no-radioactivos) para reducir la distancia de un retroceso de núcleo hijo se desplazará antes de una colisión. El agente (s) de formación de comple os/quelante en la solución incluida por los liposomas típicamente será por lo menos un agente quelante macrocíclico poli-dentado tal como poli-éters cíclicos y/o poliaminas cíclicas substituidas o no-substituidas, politioéters cíclicos, o que tienen compuestos cíclicos y mezclas de heteroátomos. Los tamaños de anillo apropiados para los quelantes, los cuales pueden ser mono-cíclicos o policíclicos preferiblemente son alrededor de 8 a alrededor de 20 átomos, preferiblemente alrededor de 10 a alrededor de 18, con entre 2 y 10, preferiblemente entre 3 y 7 heteroátomos en el anillo. El quelante (s) cíclico puede también ser sustituido en cualquier carbono o heteroátomo apropiado (el nitrógeno) con substituyentes opcionales. Estos substituyentes opcionales pueden incluir uno o más grupos de formación de complejos adicionales tal como los grupos ácido carboxílico, ácido fosfónico, amida, amina (primaria, secundaria, terciaria o cuaternaria) , éster o éter y/o pueden funcionar para otros propósitos tal como enlazar los quelantes en, o sobre una estructura principal de polímero para incrementar la concentración local o fracciones quelantes. Algunos ejemplos de agentes quelantes apropiados incluyen: ácido 1,4,7,10 tetraazaciclododecano-1 , 4 , 7 , 10 N,N' ,N' ' ,N' ' '-tetraacético (DOTA) ; ácido 1,4,7,10 tetraazaciclotridecano-1, 4 , 7 , 10 N,N' ,N' ' ,N' ' '-tetraacético (TRITA) ; ácido 1,4,7,10 tetraazaciclotetradecano-1, 4 , 7 , 10 N,N' ,N' ' ,N' ' '-tetraacético (TETA) ; ácido 1,4,7,10 tetraazaciclododecano-1 , 4 , 7 , 10 N,N' ,N' ' ,N' ' '-tetra (metileno) fosfónico (DOTMP) ; ácido 1,4,7,10 tetraazaciclotridecano-1, 4 , 7 , 10 N,N',N' ' ,N' ' '-tetra (metileno) fosfónico; ácido 1,4,7,10 tetraazaciclotetradecano-1, 4, 7 , 10 N,N' ,N' ' ,N' ' ' -tetra (metileno) fosfónico; ácido triamina de dietileno N,N','' pentaacético y derivados isoméricos del mismo; criptato [2 , 2 , 2] , criptato [3 , 2 , 2 ] , criptato [2 , 2 , 1] y derivados de mono y di-benzo del mismo; grupos ricos en electrones que contienen enlace de calix [4] arenas seleccionados del hidroxilo, carboxilo, éster, amida, y amina; ácido 1,10 diaza-4 , 7 , 13 , 16-tetraoxaciclooctadecano 1,10 N, N' bis-acético; y 1,10 diaza-4, 7, 13, 16-tetraoxaciclooctadecano 1,10 N,N', bis-malonato. Los quelantes preferiblemente serán seleccionados para corresponder a las cubiertas y estados de oxidación comunes del radionucleido (s) de metal pesado y, si es apropiado, de cualquiera de los radionucleidos hijos los cuales son retenidos en forma deseable dentro del liposoma. Por ejemplo, si el radionucleido emisor de -partículas alfa inicial comprende al 227Th, entonces es un metal de transición más estable en el estado de oxidación 4+ pero, en la degradación alfa, genera el 223Ra el cual es un metal terreo alcalino que adopta un estado de oxidación 2+. Ya que el 223Ra también es un radionucleido emisor alfa, es importante retener una proporción de ambos isótopos madre e hijo tan grande como sea posible. Los liposomas por lo tanto pueden contener agentes de quelación para retener ambos los metales de transición 4+ y los metales alcalinos térreos 2+, así como opcionalmente quelantes apropiados para retener los iones de otros radionucleidos en la cadena de degradación (los quelantes pueden, por supuesto ser los mimos igual que los considerados previamente para los primeros dos iones) . Evidentemente, en donde la vida-media de un isótopo es muy corta, sin embargo, será menos importante que esté presente la quelación correspondiente. En una modalidad, los agentes citotóxicos de la invención así, comprenden los liposomas los cuales encapsulan una solución que comprende por lo menos un radionucleido emisor alfa y quelantes apropiados para la quelación de uno o más iones comunes de cada radionucleido en la cadena de degradación que inicia con el radionucleido emisor de partículas alfa y que termina con el último radionucleido emisor de partículas alfa antes de que se alcance un isótopo estable. La quelación no necesita ser suministrada, sin embargo, para un núcleo de vida muy corta pueden encontrase estos quelantes con la excepción de la quelación para cualquier isótopo que tenga una vida-media menor de 10 segundos, preferiblemente menor de 5 segundos y lo más preferiblemente menor de 1 segundo. También la quelación puede no ser proporcionada en donde un radionucleido es un elemento no-reactivo, tal como un gas noble, aun cuando en tales casos los efectos de viscosidad pueden ser preferiblenmente usados para reducir el índice de difusión, al igual que las concentraciones elevadas de los iones de metal pesado. Ya que los inóforos, de acuerdo a lo aquí descrito, también funcionan para quelar los iones de átomos pesados utilizados en la presente invención ( de acuerdo a lo descrito más adelante) , los "quelantes" de acuerdo a lo aquí descrito pueden, en una modalidad de la invención ser ionóforos. En donde sea el caso, los componentes ionóferos y quelantes de los agentes citotóxicos de la invención pueden ser el mismo compuesto y estarán presentes en un nivel suficiente para ser eficaces en ambos roles. En una modalidad alternativa, el quelante puede estar presente además del cualquier efecto quelante proporcioando por el ionóforo. En tal modalidad, el quelante referido aquí no será el componente ionóforo. Adicionalmente, puesto que ciertos agentes bioactivos pueden funcionar para formar en complejos los radionucleidos emisores-alfa y/o los radionucleidos hijos de la presente invención, el agente formador de complejos también puede ser "otro agente terapéutico" de acuerdo a lo aquí descrito. Un ejemplo preferido de un agente terapéutico quelante es la doxorubicina . Los agentes citotóxicos de la presente invención preferiblemente también encapsulan una solución que comprende por lo menos un ionóforo. Los ionóforos permiten el transporte del radionucleido emisor de- partículas alfa a través de la bicapa de membrana (por lo menos una) del liposoma. Los ionóferos apropiados incluyen a cualquier molécula con la capacidad de transportar un ion de metal pesado a través de una bicapa de membrana. Algunos ionóforos (tal como el ionóforo de calcio A 23187) existen de manera natural y pueden ser utilizados en la forma de un extracto ampliamente o altamente purificado y otros pueden ser formados sintéticamente. Los ionóforos sintéticos preferiblemente incluyen dos o tres grupos amida substituidos para la quelación del ion metálico y varios substituyentes hidrofóbicos (especialmente dos por grupo amida) para proporcionar suficiente solubilidad de lípidos. Los grupos apropiados son, por ejemplo, substituyentes alquilo de Ci a Cíe, especialmente de C3 a Cío- Los ionóforos de calcio y magnesio tales como el A 23187; N,N,N' ,N' -tetrabutil-3 , 6-dioxaoctanedi [tioamida] ) ; ; N,N,N' ,N' -tetraciclohexil-3-oxapentanodiamida; N,N, -diciclohexil-N' , N'-dioctadecil-diglicolicdiamida; N,N' -diheptil-N, N' -dimeti1-1, -butanodiamida; N,N' ' -octametileno-bis [N' -heptil-N' -metiIma1onamida] , y otros suficientemente conocidos en el estado previo de la técnica pueden ser particularmente apropiados para los iones metálicos que tienen un estado de oxidación estable 2+, especialmente Ra2+ tal como 223Ra y/o 22Ra. De forma similar, los ionóforos de Pb conocidos tales como N,N-dioctadecil-N' , N' -dipropil-3 , 6-dioxaoctanodiamida pueden ser particularmente convenientes para los iones de metal pesado en el estado de la oxidación 4+ tal como Th4+ (por ejemplo 227Th) . Los agentes citotóxicos de la presente invención son altamente apropiados para destruir células específicas y de esa forma son eficaces para usarse en el tratamiento de enfermedades hiperplásticas y/o neoplásticas y para la manufactura de medicamentos para tales tratamientos. Los agentes citotóxicos de la invención son particularmente apropiados para usarse en la eliminación de células enfermas en cánceres benignos, malignos y/o metastáticos y/o leucemias. Ejemplos específicos de enfermedades apropiadas para el tratamiento por los agentes de la presente invención incluyen el cáncer de pulmón de células pegueñas y de células no-pequeñas, melanoma maligno, cáncer de ovarios, cáncer de seno, cáncer en hueso, cáncer de colón, cáncer de vejiga, cáncer cervical, sarcomas, linfomas, leucemias y tumores de la próstata. Otras enfermedades particularmente aplicables para la aplicación de la invención incluyen las enfermedades no cancerígenas, especialmente hiperplásticas y para la disminución de dolor en enfermedades (especialmente enfermedades de los huesos) que incluyen la artritis. Adicionalmente, los agentes citotóxicos de la invención pueden ser utilizados para establecer como objetivo al sistema reticuloendotelial (RES) y de esa forma pueden ser utilizados para inmunomodulación. Las enfermedades preferidas para tal tratamiento incluyen las enfermedades auto inmunes y de rechazo de tejido y en particular los agentes de la invención pueden ser utilizados para ayudar a prevenir el rechazo de injertos en cirugías de transplante. Así, una modalidad de estos aspectos se relaciona con un método para el tratamiento de una enfermedad especialmente un tumor localmente. Tal tratamiento preferiblemente puede ser aplicado a través de un inyección intra-tumoral o por infusión a un sujeto (generalmente un paciente humano) que requiere de tal tratamiento, de una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente citotóxico de conformidad con la invención. Tal método proporciona irradiación local del tejido con tumor y/o neovasculatura con tumor y también impartir por lo menos otro agente terapéutico en combinación con el mismo. Los radionucleidos emisores-alfa son altamente eficaces en esta modalidad porque su intervalo es corto y el daño a tejido sano circundante es minimizado. Ejemplos de enfermedades las cuales pueden ser particularmente beneficiadas por la presente invención son las que causan tumores sólidos, tal como el cáncer de pulmón de células no-pequeñas, melanoma maligno, cáncer de ovario, cáncer de colón, sarcomas, y tumores de la próstata . Una modalidad adicional de la invención se relaciona con método para el tratamiento de cánceres diseminados localmente, tal como por ejemplo tumores del hígado, o enfermedades confinadas peritonealmente o intracranealmente . Este tratamiento especialmente preferiblemente puede ser aplicado a través de inyecciones o infusiones loco-regionales, a un sujeto que requiere tal tratamiento, de una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente citotóxico o de una composición de conformidad con la invención. Aun otra modalidad de la invención es un método para el tratamiento de cánceres diseminados localmente tal como tumores de hígado, a través de la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un líquido de preparación que comprende un agente citotóxico de la invención a un sujeto con la necesidad de tal tratamiento, especialmente al suministro de sangre del sujeto al órgano o área afectada, por ejemplo al suministro de sangre al hígado en el caso de un tumos de hígado. Esto puede promover el transporte del agente/composición dentro del tumor. Una modalidad adicional de la invención se relaciona con un método para el tratamiento de cáncer diseminado sistémicamente por inyección intravenosa o infusión, u otra administración sistémica, a un sujeto en la necesidad de tal tratamiento, de una cantidad terapéuticamente efectiva de una preparación farmacéutica que comprende un agente citotóxico de conformidad con la invención. Una modalidad adicional de la invención se relaciona con un método para el tratamiento de tumores intracavitarios, en donde una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente citotóxico de la presente invención es administrada a un sujeto en la necesidad de tal tratamiento por, por ejemplo, inyección o infusión dentro de la cavidad afectada del tumor y retenida allí por un período suficiente para obtener un efecto terapéutico sobre las superficies de la cavidad. Tales cavidades incluyen la cavidad craneal, cavidad peritoneal y las cavidades creadas por la efusión pericardial y mesotelioma y la administración es apropiada para cánceres tales como cánceres intracraneales, cánceres intraperitoneales o cánceres situados en las cavidades creadas por la efusión pericardial y el mesotelioma. En una modalidad adicional, la presente invención proporciona el uso de un agente citotóxico de la invención como un tratamiento de continuación local, regional y/o sistémico siguiendo otros métodos de terapia, particularmente la irradiación de rayo externo y particularmente cirugía. En esta modalidad el agente citotóxico puede ser administrado con el fin de ayudar a eliminar cualquier células enfermas restantes que no fueron eliminadas por otros métodos o no fueron removidas por cirugía. En Particular, en donde un tumor sólido es resecado de una cavidad del cuerpo, el sitio de enlace del tumor y/o la superficie (s) de la cavidad puede ser tratado para reducir el riesgo de células enfermas restantes. Esto sería una modalidad de tratamiento local, en donde el agente citotóxico fue formulado como un líquido, gel, crema, ungüento, pintura, aerosol o similares para la aplicación directa durante el procedimiento quirúrgico. Un gel, crema, ungüento o una pintura, especialmente un gel es altamente preferido en esta modalidad. Alternativamente (o adicionalmente) , los agentes citotóxicos pueden ser administrados a la cavidad después de la cirugía, por ejemplo por inyección o infusión de la intra-cavidad para alcanzar un efecto similar, de esterilización post-cirugía . En el caso de la enfermedad metastásica conocida, sospechada o de otra manera indicada, los agentes de la presente invención se pueden aplicar sistémicamente en combinación con la resección quirúrgica u otro tratamiento del tumor primario. En tales casos los agentes de la invención serán formulados generalmente como líquidos inyectables e infusibles apropiados para la administración a la corriente sanguínea . De acuerdo a lo indicado anteriormente, en aplicaciones apropiadas los agentes de la presente invención pueden ser formulados como composiciones farmacéuticas bajo la forma de líquidos inyectables y/o infusibles (opcionalmente para dilusión antes de la administración), como cremas, geles, parches solubles o insolubles, pastas, pinturas, ungüentos, aerosoles, gasas aborbentes o no-absorbentes impregnadas y otras formulaciones apropiadas conocidas por una persona experimentada en la técnica. Tales composiciones comprenderán deseablemente por lo menos un portador o excipiente farmacéuticamente tolerable tal como agua para inyección, salina estéril, amortiguadores, espesantes, colorantes, estabilizadores, ajustadores de pH, modificadores de viscosidad, modificantes de tonicidad, sales, azúcares, soportes físicos y otros agentes bien conocidos para la persona experimentada en la técnica. Las composiciones pueden ser administradas por cualquier método apropiado, tal como infusión por medio de un catéter, inyección por medio de una aguja estándar y un arreglo de jeringa o una jeringa sin aguja, o aplicación directa de una formulación local, tal como por rocío, pintura, etc. En una modalidad preferida de la invención, los agentes citotóxicos descritos aquí se administran como parte de un régimen de tratamiento que comprende por lo menos tres-etapas: a) Administración de liposomas que comprenden por lo menos un agente que aumenta la producción de imagen o la imagen a través de la cual determina la distribución del liposoma del tumor de la distribución y del tumor potencial dirigido; b) Pre-tratamiento con por lo menos una dosis de liposomas no-radiactivos por el cual reduce la acumulación en el sistema reticuloendotelial/del hígado (RES, por sus siglas en inglés) . c) Por lo menos una administración de un agente citotóxico de la presente invención. Generalmente, los pasos a) , b) y c) serán realizados en ese orden, aunque los liposomas del paso a) pueden también servir como pre-tratamiento del paso b) , en este caso estos pasos se logran simultáneamente y el pre-tratamiento del paso b) puede ser conducido antes de la proyección de imagen del paso a)... Un período de 12 horas a 10 días, preferiblemente 24 horas a 7 días, más preferiblemente 2 a 6 días es permitido preferiblemente entre el paso de pre-tratamiento b) y la administración del paso c) . Los liposomas de los pasos a) , y c) comprenderán de preferencia esencialmente el mismo lípido o mezcla de lípidos en esencialmente las mismas proporciones y tendrán esencialmente el mismo tamaño promedio y distribución de tamaño de forma que la distribución de los liposomas en el paso a) refleje exactamente la distribución terapéutica en el paso c) . En una modalidad altamente preferida los liposomas del paso b) llevarán por lo menos un agente terapéutico diferente de un radionucleido emisor de partículas alfa. Particularmente en esta modalidad, es preferible que los liposomas del paso b) también tengan características similares a las de los pasos a) y e), como se discutió anteriormente. El método anterior puede ser mejorado por una o más repeticiones del método completo y/o los pasos de b) y e). En una alternativa al método anterior, por ejemplo en donde la visualización por el uso de liposomas no se requiere, los pasos b) y e) del método anterior puede ser utilizado sin o independientemente del paso a) . Los pasos b) y c) proporcionan un método de administración altamente preferido para los agentes citotóxicos de la presente invención puesto que la absorción a ciertos tejidos no-objetivo tal como el hígado puede ser controlado de esta forma. Un método preferido es para administrar los liposomas que contienen el "otro" agente terapéutico pero ningún emisor de - partículas alfa en el paso b) y después administrar el agente citotóxico correspondiente en el paso c) en el periodo de tiempo después de como se describió anteriormente. La presente invención proporciona un método para la síntesis de liposomas que incluyen una solución que comprende por lo menos un radionucleido emisor de partículas alfa y por lo menos otro agente terapéutico. Este método comprende poner en contacto liposomas que incluyen una solución que comprende por lo menos un agente terapéutico diferente de un radionucleido emisor de partículas alfa con una solución que comprende por lo menos un ionóforo y por lo menos un radionucleido emisor de partículas alfa. Preferiblemente, el método de la invención es un método para la formación de un agente citotóxico de la invención de acuerdo a lo descrito aquí . Los liposomas son preferiblemente de acuerdo a lo descrito aquí anteriormente y contendrán preferiblemente por lo menos a un agente quelante en adición a por lo menos un agente terapéutico. En un método alternativo de la invención, el otro agente terapéutico puede estar cargado dentro del liposoma después y/o simultáneamente con la carga de los liposomas con el radionucleido. En donde la carga es simultánea, esto puede ser durante la formación/reformación del liposoma o puede ser después de que los liposomas se hayan generado. El método de la presente invención puede comprender poner en contacto los liposomas que incluyen una solución que comprende por lo menos un agente terapéutico diferente de un radionucleido emisor de partículas alfa y por lo menos un quelante (el cual puede ser un ionóforo como se describió anteriormente) con una "solución de carga" que comprende por lo menos un ionóforo y por lo menos un radionucleido que emite partículas alfa. Alternativamente, la concentración total del quelante puede ser proporcionada por el transporte a través de la membrana del liposoma de la solución de carga. El contacto de liposomas con la solución de carga se realiza preferiblemente a una temperatura por arriba de la temperatura fisiológica. Esta temperatura es de esta forma preferiblemente aproximadamente de 45-90°C, más preferiblemente aproximadamente de 50-80°C y lo más preferiblemente aproximadamente de 60-75°C. Además, el ionóforo puede ser preferiblemente seleccionado de forma que sea capaz de transportar el radionucleido de metal pesado a través de la membrana del liposoma a la temperatura elevada (como se describió) pero no a una temperatura fisiológica y/o ambiente y/o de almacenamiento refrigerada. La selección de un ionóforo apropiado para este aspecto dependerá del lípido (s) usados en los liposomas y puede ser alcanzado por la prueba rutinaria de la efectividad de carga en el método de la invención y la estabilidad de carga a temperaturas fisiológicas/ambiente/ de almacenaje refrigeradas. Esto será logrado fácilmente por una persona experimentada en la técnica, que apreciará que el número y la naturaleza de los grupos hidrofóbicos en el ionóforo se relacionarán con la facilidad con la cual la molécula puede cruzar la membrana del lípido . El método de la presente invención puede comprender adicionalmente el paso de formar liposomas que contienen por lo menos un agente terapéutico diferente de un radioisótopo emisor de partículas alfa antes de entrar en contacto con la solución de carga. Tales métodos son bien conocidos en el estado previo de la técnica y se pueden ser utilizados para proporcionar cualquier combinación deseada de agentes activos y/o quelantes y/o otros agentes de acuerdo a lo indicado aquí . Alternativamente, los liposomas que contienen ciertos agentes terapéuticos están disponibles en el comercio en pureza farmacéutica y se pueden utilizar como material de inicio a este respecto.

Durante o después de la formación de los liposomas y/o después de su contacto con la solución de carga, los liposomas pueden ser superficies funcionalizadas y/o superficies modificadas para proporcionar la permanencia deseada y/o las características dirigidas como se describió aquí. Se prefiere que todos los pasos de formación y funcionalización para los liposomas sean realizados antes de su carga con el radionucleido emisor de-partículas alfa. En esta forma, los liposomas pueden ser producidos eficientemente en una escala relativamente grande y almacenados, si es necesario por períodos mayores que las vidas-medias del radionucleido emisor de - partículas alfa. Estos liposomas pre-preparados (que forman un elemento preferido de un kit de la invención como se describió aquí) pueden entonces ser cargadas con el radionucleido relativamente poco antes de la administración. De esta manera, un laboratorio puede mantener una reserva del componente del liposoma y de la fuente del radionucleido como es requerido para la carga simple por el método de la invención. Esto proporciona una ventaja considerable en permitir el uso rutinario de radionucleidos-alfa relativamente de breve duración en la combinación de terapia sin la dificultad y pasos extensos de la preparación cada vez que un lote sea requerido. En esta modalidad del método de la invención, un ionóforo se pone en contacto con una muestra fresca de un radionucleido emisor de-partículas alfa apropiado (como se describió aquí) para lo cual formar una solución del ionóforo y el radionucleido alfa. Esta solución entonces se pone en contacto con los liposomas apropiados de acuerdo con el método de la invención como se describió aquí. En aún otro aspecto adicional, la presente invención proporciona un kit para la formación de un agente citotóxico que comprende liposomas en donde los liposomas incluyen una solución que comprende por lo menos un radionucleido emisor de partículas alfa y por lo menos otro agente terapéutico, el kit comprende; liposomas que encapsulan una solución que comprende por lo menos otro agente terapéutico y preferiblemente por lo menos un agente quelante, los liposomas preferiblemente que están en la forma de suspensión acuosa; por lo menos un radionucleido emisor de-partículas alfa; un ionóforo, preferiblemente en la forma de una solución.

Opcionalmente, los kits de la presente invención también comprenden otros portadores o excipientes y/o medios farmacéuticamente aceptables para la administración del agente citotóxico y/o las instrucciones para la formación de agentes citotóxicos de la presente invención. Puesto que los agentes citotóxicos de la invención se pueden generar simplemente de los liposomas pre-preparados apropiados por el método de la invención, en un aspecto adicional la invención proporciona un kit que comprende liposomas, opcionalmente y preferiblemente pre-cargados con una solución que comprende por lo menos un agente terapéutico diferente de un radionucleido emisor de partículas alfa y preferiblemente por lo menos un agente quelante, los liposomas preferiblemente están en la forma de una suspensión acuosa; un ionóforo, preferiblemente en la forma de una solución; y opcionalmente y preferiblemente las instrucciones para cargar los liposomas por medio de lo cual se genera un agente citotóxico de la presente invención, más preferiblemente las instrucciones indican que el ionóforo debe entrar en contacto con una muestra fresca del radionucleido por lo que para formar una solución del ionóforo y el radionucleido alfa subsecuentemente o simultáneamente la solución así generada entrara en contacto con los liposomas. La invención ahora será ilustrada por medio de los siguientes ejemplos no-limitantes. Todos los documentos referidos aquí, los dos anteriores y en los siguientes ejemplos son incorporados aquí como referencia. Ejemplos MATERIALES Y MÉTODOS Preparación del radionucleido El Radio-223 fue producido de 27Ac (tl/2 = 21 y) y de 227Th (tl/2 = 18.7 d) de acuerdo al método presentado previamente de Henriksen (Henriksen et al. Radiochim Acta 89, 661-666 de (2001)). Brevemente, 223Ra fue separado de las actinidas 227Ac y 227Th por el uso de resina-AC seguido por cromatografía de intercambio catiónico y la filtración a través de un filtro estéril (Millex GV 0.22 mm, Millipore Carrigtwohill Co, Irlanda) . Ejemplo 1 - Carga de 223Ra dentro de liposomas 1.1 doxorubicin liposómico (Caelyx®, Schering Plough AS, Eiksmarka, Noruega) correspondiente a 2 mg de doxorubicin por ml fue sujeto a un intercambio de amortiguador con un amortiguador que contiene 20 mM HEPES y 300 mM de sucrosa ajustada con NaOH a un pH 7-8, y concentrado 3 veces por un cartucho de concentración centrifuga (UFV2BTK10 Millipore, membrana de 30 KNMWL, 15 ml de volumen máximo, Millipore, Bedford, IL, USA) insertado en una centrifuga Eppendorf 5810R (Eppendorf, Alemania) operada a 20°C y 1400 rcf. El ionóforo de calcio (Ca-ionóforo, Calcimycin, sigma, St. Louis, MI, USA) fue disuelto a una concentración de 1 mg por ml en cloroformo. Aproximadamente 15 ml fueron agregados al frasco de 2 ml y el cloroformo evaporado adentro de una corriente de argón para generar una película fina de Ca-ionóforo en la superficie interna del frasco. La solución 23Ra fue diluida en una solución de sucrosa (300 mM) y HEPES (20 mM) . El frasco fue precalentado a 60°C y 200 ml de Caelyx concentrado fueron agregados. La mezcla de carga fue agitada por 45 minutos en un termomezclador (Eppendorf, Alemania) seguido por la adición de 200 ml de solución de 10 mM de EDTA. Después de 5-10 minutos adicionales agitando, la mezcla fue transferida a una columna de Sephadex G-25 PD-10 y enjuagada con una solución de NaCl al 0.9%. La fracción que contenía el liposoma tenía un color rojo visible y fue recogida y agregado 10% del 10' medio Eagle modificado por Dulbecco (sigma, MI, USA) . Posteriormente, dentro de una campana estéril, los liposomas fueron filtrados estériles a través de un filtro estéril de 0.22 µm (Millex GV 0.22 µm, Millipore Carrigtwohi 11 Co, Irlanda) en un frasco de 10 ml que fue cubierto posteriormente con un tapón de metal /caucho . El frasco fue almacenado por lo menos tres horas para alcanzar equilibrio entre 223Ra y los nucleidos hijos antes de que la cuantificación de la radiactividad fuera realizada usando un calibrador de dosis Capintec, que fue calibrado para la serie 223Ra en equilibrio con los nucleidos hijos. 1 . 2 Producci ón de carga La cantidad de 223Ra cargada en los liposomas Caelyx® estaba en el orden de 51 a 67% para tres experimentos individuales. Un experimento de control usando 223Ra y los liposomas bajo condiciones idénticas, excepto por la ausencia de ionóforo, mostró menos de 1% de 223Ra en la fracción de liposoma enjuagada de la columna Sephadex G-25. Ejemplo 2 - Estudio Animal 10 ratones sin pelaje fueron preparados con xenografts osteosarcoma de OHS. Cada ratón fue tratado subcutáneamente con una dosis de 375 kBq/kg de 223Ra encapsulada en liposomas Caelyx como fueron preparados en el ejemplo 1. Después de 1 hora, un día y cuatro días, tres, tres y cuatro animales fueron sacrificados respectivamente y la distribución del tejido del material radiactivo fue medida. La distribución del radionucleido también fue comparada con un control en el cual el radio fue administrado como una sal en una solución de liposomas pero no encapsulado así .

Resultados : Los datos indican que la claridad de la sangre de la radiactividad es consistente con el que era el claridad esperado para este tipo de liposomas. La captación en hígado parecía ser relativamente baja para el período completo estudiado mientras que había una captación significativa en el bazo. La captación en el esqueleto, según lo reflejado por la actividad en fémur y cráneo, aumentaba con tiempo, probablemente debido a un catabolismo lento de los liposomas que causaban la liberación de 223Ra . Había una diferencia distinta entre en un cierto tiempo de la distribución para las dos formas 223Ra . Esta diferencia era particularmente alta en la sangre, en parte debido a la claridad lenta de los liposomas de la sangre y en parte debido a la claridad rápida de 223Ra libre. Para la mayoría de los tejidos finos suaves, la retención de la forma liposómica fue elevada significativamente. La captación del tumor de la forma liposómica era inicialmente modesta debido a la vascularización bajo en este modelo de tumor, pero incrementado con el tiempo. La retención en el tumor era más alta que en la mayor parte de los otros tejidos (Tabla 3 y Figura 1) • Conclusión: 2 3Ra administrado como una terapia de combinación de liposoma con doxirubicina tuvo una biodistribución relevante en los ratones sin pelaje.

Tabla 3 Ejemplo 3 Biodistribución y claridad con Pretratamiento Para los ejemplos 3 y 4, fueron utilizados ratones Balb/C normales de ambos sexos (de alrededor de 12 semanas y con un peso de 18-25g) , conforme fueron cargados los liposomas producidos de conformidad con el Ejemplo 1. El protocolo de investigación se realizó de conformidad con la Convención Europea para la Protección de Animales Vertebrados utilizados para Propósitos Experimentales y otros de tipo Científico (ETS 123) emitido por el Congreso de Europa y aprobado por la Autoridad Noruega de Investigación Animal. Los ratones fueron alojados bajo condiciones estándares y tuvieron acceso a comida y agua ad libitum. Optimización del pretratamiento Antes de la inyección del 223Ra liposomal, los ratones fueron pre-tratados con liposomas de doxorubicina (Caelyx®) para reducir la absorción del sistema-retículo-endotelial (RES, por sus siglas en inglés) del producto. Se condujo un estudio de optimización adelantándose a la experimentación principal de claridad y biodistribución de sangre para determinar un intervalo de tiempo favorable entre el pretratamiento y el tratamiento principal . En el estudio de optimización los ratones fueron divididos en 4 grupos diferentes con un ratón macho y una hembra en cada grupo. Los grupos 1 y 2 que recibieron el pre-tratamiento con liposomas de doxorubicina (8.1 mg/kg) por inyección I.V. por cuatro días y un día respectivamente, antes del tratamiento principal con 23Ra liposomal (500kBq/kg de 223Ra y de liposomas de doxorubicina 0.9 mg/kg) . El grupo 3 recibió el pre-tratamiento y el tratamiento simultáneamente y el grupo 4 no tuvo pre-tratamiento. Cuatro horas después del tratamiento, se extrajo sangre por punción cardiaca bajo anestesia (halotanato) , antes de la eutanasia. Se midió la radioactividad en la sangre, orina, heces y diferentes tejidos en un medidor Cristal II Multidetector (Packard Inst. Co . Inc, Downers Grove, IL) , y se hizo una comparación con las mediciones de los estándares de inyección del producto de prueba. Los datos para el estudio de optimización son presentados en la Figura 2. Se alcanzó una proporción mejorada de sangre-a-hígado de 223Ra liposomal en animales pre-tratados anticipadamente por cuatro días con 8.1 mg por kg de Caelyx® vs . los animales que recibieron el pre-tratamiento por un día anticipadamente, co-inyección o sin pre-tratamiento con Caelyx®. Con base en estos resultados se adopto un programa de pre-tratamiento de cuatro días para el estudio principal. Ejemplo 4 Estudio adicional de biodistribución con Pretratamiento Posteriormente al Ejemplo 3, se desarrolló un estudio de biodistribución más extensivo con el uso de un intervalo de pre-tratamiento/tratamiento de cuatro días, facilitando la proporción más alta de sangre/hígado del 223Ra liposomal.

En el estudio principal, los ratones fueron divididos en cuatro grupos diferentes. Cada grupo consistió de 6-7 animales de ambos sexos. Seis ratones en cada grupo recibieron un pretratamiento por I.V. con liposomas de doxorubicina (8.1 mg/kg) cuatro días antes del tratamiento principal con 375kBq/kg de 223Ra y liposomas de doxorubicina 0.9mg/kg por i.v. Un ratón en cada uno de los grupos dos, tres y cuatro, se dejaron sin tratar y fueron utilizados para medir una posible absorción del producto de heces o el asentamiento. Se extrajo sangre, a los ratones se les provocó eutanasia y se desarrollaron mediciones de radiactividad de la misma forma que en el Ejemplo 3, 1 hora, 24 horas, 6 días y 14 días posteriores a las inyecciones para los grupos respectivos de ratones. Para estudiar las diferencias entre el 223Ra libre y el encapsulado liposómicamente, un grupo de ratones fue inyectado intravenosamente con 223RaCl disuelto. Cinco animales fueron sacrificados en cada uno de los puntos de tiempo 1 hora, 24 horas y 14 días posteriores a la inyección, y muestras de tejido fueron retiradas y se determinó una radioactividad por unidad de peso de acuerdo a lo descrito para el estudio sobre el 223Ra liposomal. Los índices de Localización (Ll, pos sus siglas en inglés) fueron calculados para el 223Ra liposomal vs . el libre mediante la siguiente ecuación LI=[% ID/g para 223Ra liposomal] / [% ID/g para 223Ra libre] para un tejido. Los datos para el estudio de biodistribución principal están representados en la Tabla 4 y en las Figuras 3 y 4. La claridad de sangre de radioactividad (Figura 3) es consistente con la claridad esperada para este tipo de liposomas que indican que los liposomas no son destruidos por el bombardeo de la irradiación alfa. Tabla 4. Porcentaje de dosis inyectada por gramo de tejido9 de 223Ra liposomal en ratones Balb/C (estudio principal) en cuatro puntos de tiempo diferentes. asignifica ± SD, n=5-6 animales ^NO = no determinado (debido al conteo de baja actividad vs . conteos anteriores) Entre los tejidos suaves la absorción más alta por órgano se observó en el hígado (Figura 4) . El peso ajustado de absorción de hígado, por otro lado, pareció ser relativamente bajo para el periodo completo estudiado mientras que existió una absorción significativa en el bazo cuando los datos son representados como % de dosis inyectada por gramo (Tabla 4) . La absorción en el esqueleto, de acuerdo a lo reflejado por la actividad en el fémur y cráneo, se incrementó con el tiempo, probablemente debido a lento catabolismo de liposomas que causa la liberación de 223Ra . Aun cuando se podría esperar que los liposomas tuvieran algo de absorción en la médula ósea, la cual se encuentra presente en el fémur, la absorción en el cráneo, el cual no contiene una cantidad significativa de médula ósea, indica que la mayor parte de la absorción de huesos se encuentra libre de radio. Se deberá observar que las diferencias en absorción en el fémur vs . cráneo también se observaron con el radio catiónico y no necesariamente reflejan una acumulación en la médula ósea. En la Figura 5 se presentan los índices de Localización (Ll) en varios tejidos para el radio liposomal vs . radio catiónico en 1 hora, 24 horas y 14 días después de la inyección. Se observaron distintas diferencias entre las dos formas de 2 3Ra. El Ll es particularmente alto para la sangre, parcialmente debido a lenta claridad del radio liposomal de la sangre y parcialmente debido a la rápida claridad del 223Ra libre. También para la mayoría de los tejidos suaves, los Ll' se encuentran significativamente elevados. Los Ll ' s de las muestras de hueso fueron menores de 1 lo que indica un control significativo de la biodistribución por la formulación liposomal, suprimiendo el comportamiento natural del radio como un análogo de calcio y un buscador-de-hueso. La vida-media (T?/2) para la formulación liposomal que circula en la sangre fue mayor de 24 horas mientras que la vida-media de sangre del 223Ra catiónico simple fue mucho menor de 1 hora . Ejemplo 5 estudio adicional de dirección de tumor Estudio adicional de liposomas cargados-dual pegilatados para establecer como objetivo a tumores sólidos al explotar las propiedades de fuga capilar de la neovasculatura de tumor. El objetivo del estudio fue investigar las propiedades de distribución y establecer como objetivo tumores, del 2 3Ra emisor de partículas alfa, encapsulado en liposomas-que contienen-doxorubicina (Caelyx®/Doxil®) . El Caelyx® fue impartido antes de la inyección del 223Ra liposomal para reducir la absorción del sistema-retículo-endotelial, de acuerdo a lo optimizado en el Ejemplo 3. Se evaluó la distribución y absorción de tumor en un modelo de ratón con xenotransplante de osteosarcoma humano y en un perro con osteosarcoma espontáneo. La claridad de sangre de la combinación de terapia fue relativamente lenta, en ratones ti 2 fue -28 h (ratones Balb/C) y en el perro t?/2 fue ~39h. En los ratones la absorción de hígado pareció ser relativamente baja en contraste con el bazo, en donde existió una absorción significativa. En el perro la absorción en ambos el hígado y el bazo fue moderada.

En el modelo de xenotransplante hubo en general una retención más alta de actividad en el tumor vs . tejido suave. En el perro la absorción de 24 h fue considerablemente más alta en ambos tumores metastásicos calcificados y no-calcificados de órganos diferentes, que en el tejido normal. La combinación de terapia de 223Ra liposomal tuvo una biodistribución y claridad de sangre relevante para el tumor dirigido y en particular mostró una proporción favorable de tumor/tej ido-normal en un perro con osteosarcoma espontáneo. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por el solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (21)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Un agente citotóxico que comprende liposomas caracterizado porque los liposomas incluyen una solución que comprende por lo menos un radionucleido emisor de-partículas alfa y por lo menos otro agente terapéutico.
2. 2. Un agente citotóxico de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado porque el radionucleido emisor de- partículas alfa es un emisor de partículas alfa de metal pesado .
3. 3. Un agente citotóxico de conformidad con la reivindicación 1 ó la reivindicación 2 caracterizado porque los liposomas también incluyen por lo menos un ionóforo.
4. 4. Un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 caracterizado porque los liposomas también incluyen por lo menos un agente quelante o de formación de complejos.
5. 5. Un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 caracterizado porque el radionucleido que emite partículas alfa es por lo menos uno de 211At, 212Bi, 21 Pb, 213Bi, 223Ra, 224Ra, 225Ac ó 227Th.
6. 6. Un agente citotóxico de conformidad con cualguiera de las reivindicaciones 1 a 4 caracterizado porque el otro agente terapéutico es por lo menos uno seleccionado de, radioisótopos que emiten partículas beta, rayos gama, rayos-X, electrones de conversión, electrones Auger o combinaciones de los mismos, análogos de folato, análogos de nucleosida, toxinas, inhibidores de angeogénesis, secuencias de genes de ácido nucleico tales como genes enlazados a promotores, ADNs y ARNs antisentido y AD?s y/o ARNs de poca interferencia, virus, activo o inactivo, anticuerpos monoclonales opcionalmente funcionarizados, construcciones o fragmentos de los mismos, y boro para usarse en terapia de captura de boro.
7. 7. Un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 caracterizado porque el radionucleido emisor de partículas alfa y/o cada uno de los agentes terapéuticos está presente por debajo de la dosis mínima requerida normalmente para la efectividad terapéutica, profiláctica y/o paliativa cuando es utilizada como terapia sola.
8. 8. Un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 caracterizado porque el radionucleido emisor de partículas alfa y por lo menos el otro agente (s) terapéutico presente son sinérgicos con respecto a su dosis y/o efectos secundarios.
9. 9. Un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 caracterizado porque los liposomas comprenden por lo menos un lípido que tiene una temperatura de transición termotrópica de 10-50°C.
10. 10. Un método para la síntesis de liposomas que incluyen una solución que comprende por lo menos un radionucleido emisor de partículas alfa y por lo menos otro agente terapéutico, caracterizado por poner en contacto liposomas que incluyen una solución que comprende por lo menos un agente terapéutico diferente de un radionucleido emisor de partículas alfa con una solución de carga que comprende por lo menos un ionóforo y por lo menos un radionucleido emisor de partículas alfa.
11. 11. El método de conformidad con la reivindicación 10 caracterizado porque los liposomas que incluyen una solución que comprende por lo menos un radionucleido emisor de partículas alfa y por lo menos otro agente terapéutico son un agente citotóxico de conformidad con las reivindicaciones 1 a 9.
12. 12. Un método de conformidad con la reivindicación 10 o la reivindicación 11 caracterizado porque el contacto se lleva a cabo a la temperatura fisiológica anterior.
13. 13. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende por lo menos un agente citotóxico como el reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 y por lo menos un portador y/o excipiente tolerable farmacéuticamente .
14. 14. Un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 caracterizado porque es para uso en terapia.
15. 15. Un método para el tratamiento del hiperplástico o una enfermedad neoplásica, caracterizado porque comprende administrar a un mamífero, sujeto a un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 0.
16. 16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la administración es por inyección intratumoral sistémica o por infusión.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la administración es por aplicación directa a por lo menos una parte de la cavidad del cuerpo siguiendo la resección de por lo menos una parte de un tumor sólido .
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 15 ó 16, caracterizado porgue comprende la pre-administración de por lo menos una dosis de liposomas no-reactivos, preferiblemente 12 horas a 10 días antes de la administración del agente citotóxico.
19. 19. El uso de un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la manufactura de un medicamento para el uso en un método de tratamiento del hiperplástico o de la enfermedad neoplásica.
20. 20. Un kit para la formación de un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque comprende: liposomas que encapsulan una solución que comprende por lo menos otro agente terapéutico y preferiblemente por lo menos un agente quelante, los liposomas preferiblemente están en la forma de suspensión acuosa; opcionalmente por lo menos un radionucleido emisor de partículas alfa; y un ionofóro, preferiblemente en la forma de una solución; y opcionalmente, por lo menos otros portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables y/o medios para la administración del agente citotóxico y/o instrucciones para la formación de agentes citotóxicos de la presente invención.
21. 21. Un kit de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque comprende; liposomas preferiblemente que encapsulan una solución que comprende por lo menos un agente terapéutico diferente de un radionucleido emisor de partículas alfa y preferiblemente por lo menos un agente quelante, los liposomas preferiblemente están en la forma de una suspensión acuosa. Un ionóforo, preferiblemente en la forma de una solución; y Opcionalmente y preferiblemente instrucciones para cargar los liposomas por lo cual para generar un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, las instrucciones más preferiblemente indican que el ionóforo debe ser puesto en contacto con una muestra fresca de un radionucleido alfa por lo cual para formar una solución del ionófero y el radionucleido alfa y simultáneamente o subsecuentemente la solución así generada puesta en contacto con los liposomas.