MD894Z - Procedeu de obţinere a biomasei calusului de Rhodiola rosea L. in vitro - Google Patents
Procedeu de obţinere a biomasei calusului de Rhodiola rosea L. in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- MD894Z MD894Z MDS20140133A MDS20140133A MD894Z MD 894 Z MD894 Z MD 894Z MD S20140133 A MDS20140133 A MD S20140133A MD S20140133 A MDS20140133 A MD S20140133A MD 894 Z MD894 Z MD 894Z
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- callus
- rhodiola rosea
- biomass
- nutrient medium
- vitro production
- Prior art date
Links
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 244000042430 Rhodiola rosea Species 0.000 title claims abstract description 15
- 235000003713 Rhodiola rosea Nutrition 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 5
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 6
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 5
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 5
- 229930002868 chlorophyll a Natural products 0.000 description 5
- 229930002869 chlorophyll b Natural products 0.000 description 5
- NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M chlorophyll b Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C=O)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000195628 Chlorophyta Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un procedeu de obţinere a biomasei calusului de Rhodiola rosea L. in vitro.Procedeul, conform invenţiei, include cultivarea calusului din frunze de la plantulele sterile de Rhodiola rosea L. pe mediul nutritiv agarizat Murashige-Skoog, cu un adaos de 5 mg/l 6-benzilaminopurină, 0,5 mg/l acid α-naftilacetic şi 0,1% soluţie apoasă sterilizată de 5% de substanţe uscate obţinute din biomasa algei verzi Spirogira sp. prin extragere cu etanol.
Description
Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un procedeu de obţinere a biomasei calusului de Rhodiola rosea L. in vitro.
Rhodiola rosea L. reprezintă o plantă valoroasă care, datorită metaboliţilor secundari ce se conţin în rădăcini şi rizomi, este folosită pe larg în medicină şi farmaceutică. Tocmai de aceea Rhodiola rosea L. este colectată intensiv din masivele naturale şi în ultimii ani ea a dispărut de pe mai multe creste montane, unde planta creştea spontan. Cultivarea artificială a speciei necesită condiţii specifice, din aceasta cauză întâmpină mai multe dificultăţi. O cale de soluţionare a problemei este obţinerea principiilor active caracteristice pentru Rhodiola rosea L. din biomasa celulelor calusului obţinută pe cale biotehnologică.
Este cunoscută metoda de cultivare a celulelor calusului în vitro [1]. Pentru proliferarea celulelor calusului a fost utilizat mediul nutritiv Murashige-Skoog (MS) (1962), suplinit cu 6-benzilaminopurină (BA) 1,5 mg/l, acid α-naftilacetic (ANA) 0,5 mg/l; valoarea pH-ului fiind ajustată la 5,8 înainte de autoclavare [1]. Din punct de vedere economic acest procedeu necesită îmbunătăţire, deoarece cultivarea calusului pe parcursul unei perioade optimale nu asigură acumularea semnificativă a biomasei. Acest neajuns poate fi înlăturat cu ajutorul procedeului propus.
Problema pe care o rezolvă invenţia constă în sporirea proliferării celulare şi a acumulării biomasei calusului de Rhodiola rosea L.
Procedeul, conform invenţiei, include inocularea frunzelor prelevate de la plantulele sterile de Rhodiola rosea L. pe un mediu nutritiv, obţinut prin adăugarea la mediul nutritiv agarizat Murashige-Skoog a 1,5 mg/l 6-benzilaminopurină şi 0,5 mg/l acid α-naftilacetic, ajustarea pH-ului până la 5,8, autoclavare şi adăugarea unei soluţii apoase sterilizate de 5% de substanţe uscate obţinute din biomasa algei verzi Spirogira sp. prin extragere cu etanol în cantitate de 0,1%, după care se efectuează cultivarea calusului în decurs de 40 zile la temperatura de 26°C şi umiditatea relativă a aerului de 70% cu o fotoperioadă de 16 ore lumină şi 8 ore întuneric.
Soluţia apoasă obţinută din biomasa algei verzi Spirogira sp. (în continuare preparatul Reglalg, Autorizaţie AA nr. 0448 eliberată din 21.02.2003 de Centrul de Stat pentru Atestarea Produselor Chimice şi Biologice de Protecţie şi Stimulare a Plantelor. Grupa a 4-a de toxicitate) prezintă un complex de substanţe biologic active, obţinute din biomasa algei filamentoase verzi Spirogira sp. crescută în mediul organic timp de 10…12 zile, uscată până la umiditatea de 5…7% şi fărâmiţată până la starea de praf, totodată înainte de extragere biomasa se tratează cu cloroform, apoi cu apă, iar extragerea finală se realizează cu alcool etilic în raport de 1:(4…6) cu diluţia ulterioară cu apă. Soluţia finală conţine 5% de substanţă uscată.
Avantajele procedeului propus constau în simplicitatea lui, sporirea substanţială a biomasei acumulate, conţinutului pigmenţilor asimilatori şi costul redus al preparatului.
Rezultatul constă în sporirea proliferării celulare şi a acumulării biomasei calusului de Rhodiola rosea L. cu 38%, a concentraţiei clorofilei a, b şi a carotenoidelor în celulele calusului cu 92%, 49% şi, respectiv, 53% faţă de procedeul cunoscut.
Exemplu de realizare a invenţiei
Pentru inducerea calusului au fost prelevate frunze de la plantulele sterile de Rhodiola rosea L., obţinute din seminţe prealabil sterilizate. Segmente foliare cu dimensiunea de 0,3…0,5 cm au fost inoculate pe mediul MS suplimentat cu 1,5 mg/l BA şi 0,5 mg/l ANA, agar 0,6% [1]. Valoarea pH-lui a fost ajustată până la 5,8, înainte de autoclavare. Pentru menţinerea calusului, la fiecare 40 de zile de cultivare, fragmente de calus cu masa de aproximativ 2 g erau transferate pe mediul MS proaspăt preparat [1].
O parte din explanţi a fost cultivată pe mediul nutritiv MS [1] (cea mai apropiată soluţie), alta - pe acelaşi mediu suplimentat după autoclavare cu soluţie apoasă sterilizată de Reglalg în concentraţie finală de 0,001% (invenţia propusă). În aşa fel, mediile de cultivare se deosebeau numai prin prezenţa Reglalgului. Explanţii celor două variante au fost cultivaţi la temperatura de 26°C, cu fotoperioada de 16 ore lumină (2000 lux) şi 8 ore întuneric. Umiditatea relativă a aerului în camera de cultivare a fost egală cu 70%.
Pentru analiză de la fiecare variantă au fost luate câte 3 vase, au fost prelevate celulele calusului, masa proaspătă a lor fiind determinată prin cântărire. Ulterior din masa calusului au fost extraşi componenţii clorofilieni, conţinutul clorofilei a, b şi al carotenoidelor fiind determinat prin metoda spectrofotometrică.
Conform datelor prezentate în tabel, calusurile cultivate conform celei mai apropiate soluţii şi conform invenţiei se deosebeau prin sporirea biomasei cu 38% şi a conţinutului clorofilei a, b şi al carotenoidelor cu 92%, 49% şi, respectiv, 53%. Prin urmare, suplimentarea mediului de cultivare cu un volum de soluţie apoasă sterilizată de Reglalg a asigurat sporirea acumulării biomasei şi a conţinutului clorofilei a, b şi al carotenoidelor în celulele calusului de Rhodiola rosea L. (vezi tabelul).
Tabel
Procedeu de cultivare Biomasa calusului, g Clorofila a, mg/g Clorofila b, mg/g Carotenoide, mg/g Conform celei mai apropiate soluţii 12 ± 0,16 1,27 ± 0,01 0,75 ± 0,04 1,14 ± 0,01 Conform invenţiei 16,6 ± 0,15 2,44 ± 0,03 1,12 ± 0,01 1,74 ± 0,03
1. Călugăru-Spataru T. Optimizarea mediului de cultivare a calusului de Rhodiola Rosea L. şi marcarea proteică a etapei de dezvoltare a lui. Materialele simpozionului ştiinţific internaţional consacrat aniversării a 60-a de la fondarea Grădinii Botanice (Institut) al AŞM, Chişinău, 7-9 noiembrie 2010, p. 50-55
Claims (1)
- Procedeu de obţinere a biomasei calusului de Rhodiola rosea L. in vitro, care include inocularea frunzelor prelevate de la plantulele sterile de Rhodiola rosea L. pe un mediu nutritiv, obţinut prin adăugarea la mediul nutritiv agarizat Murashige-Skoog a 1,5 mg/l 6-benzilaminopurină şi 0,5 mg/l acid α-naftilacetic, ajustarea pH-ului până la 5,8, autoclavare şi adăugarea unei soluţii apoase sterilizate de 5% de substanţe uscate obţinute din biomasa algei verzi Spirogira sp. prin extragere cu etanol în cantitate de 0,1%, după care se efectuează cultivarea calusului în decurs de 40 zile la temperatura de 26°C şi umiditatea relativă a aerului de 70% cu o fotoperioadă de 16 ore lumină şi 8 ore întuneric.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20140133A MD894Z (ro) | 2014-10-20 | 2014-10-20 | Procedeu de obţinere a biomasei calusului de Rhodiola rosea L. in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20140133A MD894Z (ro) | 2014-10-20 | 2014-10-20 | Procedeu de obţinere a biomasei calusului de Rhodiola rosea L. in vitro |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD894Y MD894Y (ro) | 2015-04-30 |
| MD894Z true MD894Z (ro) | 2015-11-30 |
Family
ID=53002928
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDS20140133A MD894Z (ro) | 2014-10-20 | 2014-10-20 | Procedeu de obţinere a biomasei calusului de Rhodiola rosea L. in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD894Z (ro) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109452174A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-03-12 | 西藏诺迪康药业股份有限公司 | 大花红景天的快速繁殖培养基及繁殖方法 |
| RU2818083C1 (ru) * | 2023-11-17 | 2024-04-24 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Томский государственный университет" | Способ увеличения сырьевой продуктивности rhodiola rosea l. |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD634G2 (ro) * | 1996-04-26 | 1997-07-31 | Институт Физиологии Растений Академии Наук Республики Молдова | Procedeu de obţinere a substanţelor biologic active |
| MD1659G2 (ro) * | 1999-08-05 | 2001-11-30 | Институт Физиологии Растений Академии Наук Республики Молдова | Procedeu de tratare a seminţelor de grâu de toamnă înainte de semănat |
| MD3375G2 (ro) * | 2007-03-23 | 2008-03-31 | Институт Генетики, Физиологии И Защиты Растений Академии Наук Молдовы | Procedeu de micropropagare a plantelor de Rhodiola rosea L. in vitro |
| MD497Z (ro) * | 2011-11-14 | 2012-11-30 | Институт Генетики, Физиологии И Защиты Растений Академии Наук Молдовы | Procedeu de cultivare a tomatelor |
-
2014
- 2014-10-20 MD MDS20140133A patent/MD894Z/ro not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD634G2 (ro) * | 1996-04-26 | 1997-07-31 | Институт Физиологии Растений Академии Наук Республики Молдова | Procedeu de obţinere a substanţelor biologic active |
| MD1659G2 (ro) * | 1999-08-05 | 2001-11-30 | Институт Физиологии Растений Академии Наук Республики Молдова | Procedeu de tratare a seminţelor de grâu de toamnă înainte de semănat |
| MD3375G2 (ro) * | 2007-03-23 | 2008-03-31 | Институт Генетики, Физиологии И Защиты Растений Академии Наук Молдовы | Procedeu de micropropagare a plantelor de Rhodiola rosea L. in vitro |
| MD497Z (ro) * | 2011-11-14 | 2012-11-30 | Институт Генетики, Физиологии И Защиты Растений Академии Наук Молдовы | Procedeu de cultivare a tomatelor |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Călugăru-Spataru T. Optimizarea mediului de cultivare a calusului de Rhodiola Rosea L. şi marcarea proteică a etapei de dezvoltare a lui. Materialele simpozionului ştiinţific internaţional consacrat aniversării a 60-a de la fondarea Grădinii Botanice (Institut) al AŞM, Chişinău, 7-9 noiembrie 2010, p. 50-55 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109452174A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-03-12 | 西藏诺迪康药业股份有限公司 | 大花红景天的快速繁殖培养基及繁殖方法 |
| RU2818083C1 (ru) * | 2023-11-17 | 2024-04-24 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Томский государственный университет" | Способ увеличения сырьевой продуктивности rhodiola rosea l. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD894Y (ro) | 2015-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sen et al. | In vitro callus induction and plantlet regeneration of Achyranthes aspera L., a high value medicinal plant | |
| Rehman et al. | In vitro propagation of Caralluma tuberculata and evaluation of antioxidant potential | |
| Kumar et al. | Influence of photoperiod on growth, bioactive compounds and antioxidant activity in callus cultures of Basella rubra L. | |
| de Matos Nunes et al. | Stress induction of valuable secondary metabolites in Hypericum polyanthemum acclimatized plants | |
| Idrees et al. | Spectral lights trigger biomass accumulation and production of antioxidant secondary metabolites in adventitious root cultures of Stevia rebaudiana (Bert.) | |
| Ramar et al. | In vitro shoot multiplication and plant regeneration of Physalis peruviana L. an important medicinal plant | |
| Mamedov et al. | Cornelian cherry: a prospective source for phytomedicine | |
| Kunakhonnuruk et al. | Improving large-scale biomass and plumbagin production of Drosera communis A. St.-Hil. by temporary immersion system | |
| Sharifi et al. | Effect of salicylic acid on phenols and flavonoids content in callus culture of Iranian sodab (Ruta graveolens): A threatened medicinal plant of north of Iran | |
| Revutska et al. | Plant secondary metabolites as bioactive substances for innovative biotechnologies | |
| CN104885937A (zh) | 一种诱导金铁锁愈伤组织产生花青素的方法 | |
| Ebrahimi et al. | Hairy root induction and secondary metabolite production in Perovskia abrotanoides Karel | |
| Kahrizi et al. | Effect of 6-Benzylaminopurine on micropropagation of Nuphar lutea as an endangered species | |
| RU2360964C1 (ru) | КУЛЬТУРА КОРНЯ Hed.th. (Hedysarum theinum Krasnob.) - ПРОДУЦЕНТ ИЗОФЛАВОНОВ | |
| MD894Z (ro) | Procedeu de obţinere a biomasei calusului de Rhodiola rosea L. in vitro | |
| Yogananth et al. | Comparative Analysis of Solasodine from in vitro and in vivo Cultures of Solanum nigrum Linn. | |
| Torabzadeh et al. | Nanoparticles induced antioxidative compounds in Matricaria chamomilla | |
| Miclea et al. | Propagation of Drosera rotundifolia and Drosera capensis in an in vitro culture system. | |
| Tikhomirova et al. | An effective way to carry out mass in vitro propagation of Potentilla alba L | |
| RU2605912C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРЫ ИЗОЛИРОВАННЫХ КОРНЕЙ Silene linicola К1601 - ПРОДУЦЕНТА ЭКДИСТЕРОИДОВ | |
| Borah et al. | In vitro propagation of Coccinia indica (L.) Voigt. from internodal segments | |
| Nadir et al. | Effect of abiotic elicitor methyl jasmonate on production of rutin in callus cultures of Abutilon hirtum L. | |
| Siatka | Production of anthocyanins in callus cultures of Angelica archangelica | |
| KR20240108013A (ko) | 카테킨 고함유 상동나무 캘러스 또는 세포주의 대량생산 방법 | |
| EA020503B1 (ru) | Штамм культуры корня шлемника андрахновидного (scutellaria andrachnoides vved.) scut. andr. (hrc) - продуцент вогонозида и актеозида |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG9Y | Short term patent issued | ||
| MK4Y | Short term patent expired |