MD83Y - Biomasa de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot, obtinuta in vitro, pentru utilizare in calitate de produs cu proprietati antimicrobiene - Google Patents

Abstract

Inventia se refera la o sursa de materie prima vegetala cu proprietati antimicrobiene, care poate fi utilizata in medicina. Esenta inventiei consta in aceea ca biomasa de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot, obtinuta in vitro, se propune pentru utilizare in calitate de produs cu proprietati antimicrobiene. Rezultatul inventiei consta in aceea ca biomasa de fructe de aronia poseda un spectru bacteriostatic si bactericid mai larg fata de fructele de aronia.

Description

[0001] Invenţia se referă la o sursă de materie primă vegetală cu proprietăţi antimicrobiene, care poate fi utilizată în medicină.

[0002] În ultimul timp tot mai frecvent se întâlnesc tulpini ale microorganismelor cu rezistenţă sporită la acţiunea antibioticelor. Elaborarea noilor remedii antimicrobiene de origine vegetală, bogate în conţinut fenolic, cunoscute ca substanţe naturale cu diferite efecte terapeutice, inclusiv antibacteriene şi bacteriostatice, reprezintă una din direcţiile prioritare în cercetare. În acest context, un interes deosebit reprezintă fructele de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot, extractul cărora se caracterizează prin diferite clase de compuşi fenolici şi manifestă sensibilitate faţă de microorganismele Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Escherichia coli [1], dar nu şi faţă de alte microorganisme virulente. Fructele de aronie manifestă o acţiune antimicrobiană la un spectru redus de microorganisme, iar obţinerea fructelor in vivo este dependentă de condiţiile pedo-climaterice, cataclismele naturale, rotaţia sezonieră, consecinţele crizei ecologice - acestea reprezentând dezavantaje esenţiale.

[0003] Problema pe care o rezolvă invenţia constă în extinderea asortimentului de materie primă cu proprietăţi antimicrobiene, obţinută în condiţii in vitro.

[0004] Esenţa invenţiei constă în aceea că biomasa de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot, obţinută in vitro, se propune pentru utilizare în calitate de produs cu proprietăţi antimicrobiene.

[0005] Rezultatul invenţiei constă în aceea că biomasa de fructe de aronia posedă un spectru bacteriostatic şi bactericid mai larg faţă de fructele de aronia.

[0006] Exemplu de realizare a invenţiei

[0007] Biomasa de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot a fost obţinută din explante in vitro, prelevate de la fructele de aronie, ulterior sterilizate cu agent chimic Diacid timp de 7 min şi spălate de 3 ori cu apă bidistilată sterilă. Explantele au fost inoculate pe mediu nutritiv Murashige-Skoog suplimentat cu reglatori de creştere: acid naftilacetic 3,0…3,5 mg/L; kinetină 0,5 mg/L; zaharoză 60 g/L, având pH 5,7; cultivată la temperatura de 18…22°C, cu fotoperioada zi-noapte respectiv de 16 şi 8 ore şi în condiţii aseptice.

[0008] Pentru determinarea activităţii antimicrobiene au fost pregătite extractele etanolice din fructele de aronie şi biomasa de fructe obţinute in vitro de A. melanocarpa. Probele de analizat (fructe de aronie şi respectiv biomasa de fructe in vitro) în cantitate de 20 mg, mărunţite în mojar şi 80 mg de alcool etilic de 20% (raportul 1:5) au fost lăsate pentru extracţie timp de 10 zile, la temperatura de 4°C, la întuneric. Extractele etanolice de 20% din fructe şi din biomasă de fructe obţinute in vitro au servit pentru studiul activităţii antimicrobiene.

[0009] Acţiunea antimicrobiană a conţinutului fenolic din extractele etanolice de 20% ale biomasei de fructe obţinute in vitro şi a fructelor de aronie a fost determinată prin activitatea bacteriostatică (concentraţia minimă de inhibiţie - CMI), stabilită în cazul lipsei creşterii microorganismelor în mediul nutritiv lichid şi cea bactericidă (concentraţia minimă bactericidă - CMB) în baza lipsei creşterii microorganismelor după însămânţarea repetată pe geloză peptonată cu termostatarea ulterioară timp de 24 ore. În calitate de culturi de referinţă au servit: Staphylococcus aureus (tulpina 209-P), Enterococcus faecalis, Escherichia coli (tulpina ATCC 25822), Pseudomonas aeruginosa (tulpina ATCC 27853), Proteus vulgaris (tulpina MX 19222).

[0010] O parte din culturile de referinţă S. aureus (tulpina 209-P), E. faecalis, E. coli (tulpina ATCC 25822), P. aeruginosa (tulpina ATCC 27853), P. vulgaris (tulpina MX 19222), crescute pe geloză timp de 18 ore, spălate cu soluţie izotonică de clorură de sodiu a fost însămânţată în doză de 500 mii de corpi microbieni la 1 ml de mediu nutritiv (după standardul optic de turbiditate) cu adaos de extract etanolic de 20% din biomasă de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot, obţinută in vitro.

[0011] Altă parte din aceleaşi culturi de referinţă a fost însămânţată în doză de 500 mii de corpi microbieni la 1 ml de mediu nutritiv (după standardul optic de turbiditate) cu adaos de extract etanolic de 20% din biomasă de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot. În calitate de test-control au servit mediile nutritive cu aceleaşi tulpini de bacterii de referinţă fără conţinutul extractelor analizate.

[0012] Toate experienţele au fost efectuate în trei repetări paralele.

[0013] S-a studiat conţinutul fenolic al principalelor grupe de compuşi fenolici, care şi determină activitatea antimicrobiană, iar rezultatele sunt prezentate în tab. 1.

[0014] Tabelul 1

[0015] Conţinutul compuşilor fenolici în fructe şi biomasele de fructe obţinute in vitro şi de la fructele de aronie in vivo

Lotul analizat

Conţinutul totalului polifenolic (mg/kg-1)

Flavonoide (g % în rutozidă)

Antociani (mg/100g fructe)

Compuşi fenilpropanici de tip C6-C3 (mg/ml)

Fructele de aronie

58 370

0,478

821

0,178

Biomasa de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot obţinută in vitro

65 570

0,483

680

0,375

[0017] În urma studierii activităţii antimicrobiene a extractelor etanolice de 20% a loturilor analizate s-a determinat că biomasele de fructe obţinute in vitro de aronie posedă acţiune bacteriostatică şi bactericidă faţă de microorganismele S. aureus (tulpina 209-P), E. faecalis, E. coli (tulpina ATCC 25822), P. aeruginosa (tulpina ATCC 27853), P. vulgaris (tulpina MX 19222), pe când fructele de aronie doar faţă de S. aureus (tulpina 209-P), E. faecalis, E. coli (tulpina ATCC 25822). Intensitatea activităţii antimicrobiene a extractelor analizate corelează cu conţinutul fenolic (tabelul 1).

[0018] Biomasa de fructe obţinute in vitro se caracterizează printr-un conţinut mai mare de polifenoli, flavonoide şi compuşi fenilpropanici decât fructele de aronie şi posedă o activitate antimicrobiană mai mare cu un spectru mai larg bacteriostatic şi bactericid (tab. 2).

[0019] Tabelul 2

[0020] Activitatea bacteriostatică şi bactericidă a extractelor etanolice din

[0021] biomasele de fructe obţinute in vitro şi fructele de aronie obţinute in vivo

Extract alcoolic de 20% analizat

Culturile de referinţă

S. aureus (t. 209-P)

E. faecalis

E.coli (t. ATCC 25822)

P. aeruginosa (t. ATCC 27853)

P. vulgaris (t. MX 19222)

CMI

CMB

CMI

CMB

CMI

CMB

CMI

CMB

CMI

CMB

Fructe de aronie obţinute in vivo

1:2

1:2

1:2

1:1

1:2

1:1

-

-

-

-

Biomasa de fructe obţinute in vitro

1:4

1:4

1:2

1:2

1:2

1:2

14

1:4

1:2

1:2

Alcool etilic de 20%, control

1:1

1:1

1:1

1:1

1:2

1:1

1:4

1:1

1:1

1:1

[0023] Legendă: CMI - concentraţia minimă de inhibiţie; CMB - concentraţia minimă bactericidă.

[0024] 1. Valcheva-Kuzmanova S., Russev V., Bojkova K., Belcheva A. Study of natural Aronia Melanocarpa fruit juice for antibacterial and antiviral activity. Scr. Sci. Med. 2003, vol. 35, p. 21-23

Claims (1)

1. Biomasă de fructe de Aronia melanocarpa (Michx.) Elliot, obţinută in vitro, pentru utilizare în calitate de produs cu proprietăţi antimicrobiene