LU92908B1

LU92908B1 - Extrait de la vigne en tant qu'ingrédient actif capable de stabiliser les interfaces huile/eau

Info

Publication number: LU92908B1
Application number: LU92908A
Authority: LU
Inventors: Vincent Bourgeteau; Dominique Delarche
Original assignee: Uption Sarl
Priority date: 2015-12-15
Filing date: 2015-12-15
Publication date: 2017-06-19

Abstract

Extrait issu de la vigne capable de stabiliser à l'interface les émulsions et d'inhiber deux enzymes clés de la cascade arachidonique à la fois, la sPLA2-V et la lipoxygénase, mais aussi capable d'inhiber la collagénase de type I, de stimuler la Tyrosinase, et ayant la capacité de réduire les rides en application topique.

Description

Extrait de la vigne en tant qu’ingrédient actif capable de stabiliser les interfaces huile/eau.

La présente invention concerne en tant que produit industriel nouveau et utile, un extrait dérivé de la vigne comme inhibiteur de l'enzyme Phospholipase A2 (PLA2), et notamment la PLA2 de groupe V. L’invention concerne également l'utilisation de cet extrait en tant que principe actif dermo-cosmétique et son emploi dans des compositions pharmaceutiques topiques destinées à un usage en médecine humaine ou vétérinaire ou à un usage de soins cosmétiques. L’invention concerne également l’utilisation de cet extrait en tant que stabilisant des émulsions H/E et E/H et son emploi en composition alimentaire, cosmétique, vétérinaire ou pharmaceutique.

La PLA2 est une enzyme produite par les cellules au niveau membranaire. Il s'agit de la première enzyme de la cascade inflammatoire, aussi appelée « cascade arachidonique ». En effet, en libérant de l'acide arachidonique à partir de phospholipides membranaires, la PLA2 est le facteur clé déclenchant la libération des médiateurs pro-inflammatoires dans les tissus de mammifères, à savoir les écosanoïdes.

Les PLA2 sont une super-famille d'enzymes constituée de 4 familles principales, les PLA2 sécrétées (sPLA2) calcium dépendantes, les PLA2 cytosoliques (cPLA2) calcium dépendantes, les PLA2 cytosoliques calcium indépendantes (ÎPLA2), et les PLA2 facteur d'activation plaquettaire acetyl hydrolase. Les PLA2 sont ensuite classées en 15 groupes selon la composition de leur séquence moléculaire primaire. Dans la grande majorité des cellules liées à l'inflammation telles que les macrophages et les mastocytes, seules les PLA2 appartenant aux deux premières familles citées, les PLA2 sécrétées (sPLA2) calcium dépendantes et les PLA2 cytosoliques (cPLA2) calcium dépendantes, sont impliquées dans la libération des médiateurs éicosanoïdes, et plus particulièrement les groupes IV (cPLA2) et V (sPLA2).

La phospholipase A2 de type V (sPLA2-V) occupe une place déterminante dans le processus pro-inflammatoire car elle est aussi capable d'induire l'expression de la cycloxygénase -2 (COX-2) [1]. Il est également démontré que la sPLA2-V est capable de se lier aux phosphatidylcholines membranaires et d'hydrolyser les substrats de celle-ci d'une manière beaucoup plus efficace que toute autre PLA2. A la lumière de ces résultats, la SPLA2-V est une enzyme dont l'activité est majeure dans le processus inflammatoire, et les inhibiteurs de cette enzyme pourront enrayer plus efficacement le processus inflammatoire et ainsi soulager ou apaiser plus efficacement les tissus concernés.

Il apparaît qu'un vif intérêt existe pour des extraits ou des substances naturelles capables d'inhiber la phospholipase A2 de groupe V, notamment pour des applications topiques cosmétiques, pharmaceutiques ou vétérinaires qui visent à apaiser et/ou réduire l'inflammation du tissu. L'activité anti-inflammatoire est comme évoquée un processus sous le contrôle de « la cascade arachidonique », la PLA2 en est le premier maillon, ensuite une autre enzyme la 5'-Lipoxygénase peut prendre le relais pour produire de nouveaux médiateurs de l'inflammation, La 5'-Lipoxygénase désignée ci-après par « lipoxygénase », est, comme la PLA2 une enzyme membranaire. Elle intervient en aval de la libération d'acide arachidonique par la PLA2, dans la conversion de cet acide en leucotriènes, médiateurs spécifiques de l'inflammation. L'inhibition de la PLA2 n'est pas corrélée à l'inhibition de la lipoxygénase, c'est pourquoi il est très rare de retrouver des substances ou des complexes moléculaires capables de moduler par inhibition ces deux enzymes clé de la cascade inflammatoire.

Des études récentes démontrent l’implication des leucotriènes dans le gonflement de la peau et la fibrose cutanée, notamment par l’intermédiaire des cysteinyl leucotrienes [2], Ces gonflements du tissu cutané et excroissances de la peau sont particulièrement inesthétiques, et d’un point de vue cosmétique l’inhibition des leucotriènes par traitement cutané est une technique de soin cosmétique permettant d’améliorer l’apparence de la peau, et plus particulièrement lorsque celle-ci est en état inflammatoire. A l'égard des applications topiques, sont plus particulièrement recherchées, les substances possédant outre des propriétés d'inhibition de la phospholipase A2 de groupe V, des propriétés susceptibles d'améliorer la peau ou de la traiter de manière avantageuse en lui procurant une protection active contre la production de leucotriènes, la dégradation du collagène cutané, en lui permettant d'augmenter sa capacité à produire de la mélanine sans se mettre au soleil, en lui permettant de limiter les rides. Ces substances peuvent donc être utilisées de manière avantageuse dans la fabrication de principes actifs pour le traitement de la peau, de préparations topiques cosmétiques, dermo-pharmaceutiques ou vétérinaires. L'objet de la présente invention a par conséquent consisté à mettre à disposition des substances présentant la capacité d'inhiber la SPLA2-V, d'inhiber la lipoxygénase, d'inhiber la collagénase de type I, de stimuler la Tyrosinase, et ayant la capacité de réduire les rides.

Les essais systématiques réalisés par la demanderesse ont permis de sélectionner un extrait dérivé de la vigne qui de manière surprenante était capable de répondre au profil d'exigence complexe dépeint.

Les extraits issus de la vigne sont connus dans l’art antérieur et parmi les principes actifs pour la cosmétique extraits de la vigne, on peut trouver des extraits de sarments de vigne, de feuilles de vigne, de moues et autres sous-produits issus de la vinification (FR2804864) la plupart riches en polyphénols, notamment en Resvératrol, décrits pour leurs propriétés antivieillissement (FR2898493), utilisés en combinaison avec d’autres extraits ou agents actifs (FR2808682 ; FR2985906) ; ou huiles essentielles issues de la lie pour stimuler la repousse des cheveux (EP0001860).

Des extraits spécifiques issus de la vinification décrivent déjà une activité antiinflammatoire combinée à une activité anti-oxydante, détoxifiante, anti-âge, régénérante dans des applications cosmétiques ; la composition de ces extraits est très bien caractérisée, de manière singulière par la présence de 0,1 à 10 % de protéines et 10 à 50% de polyphénols; il est à signaler que leur concentration est particulièrement élevée en matière organique. Cependant, ces extraits ne démontrent pas d'activité d'inhibition de la sPLA2-V, pas d'inhibition de la lipoxygénase, pas d'activité d'inhibition de la collagénase de type I, pas de stimulation de la tyrosinase, et leur activité anti-rides n'est pas démontrée. Comme nous le verrons plus loin, l'extrait décrit par la demanderesse n'a pas les mêmes caractéristiques chimiques et les modes d'actions biochimiques et biologiques sont singuliers et différents. D’autres extraits spécifiques issus de la vigne montrent une capacité à moduler la production d’endothéline à l’origine d’une action vasodilatatrice ou vasoconstrictrice (FR 2955771).

Dans une publication récente, il a été démontré que certaines proanthocyanidines notamment issues du raisin pouvaient avoir une action inhibitrice sur la Phospolipase A2 de groupe III [3]. La forme trimérique ou tétramérique d’une proanthocyanidine de type A est particulièrement active, car elle peut se lier sur le site actif de la PLA2 de groupe III et ainsi le bloquer. A la connaissance de la demanderesse, il n’a jamais été décrit qu’un extrait issu de la vigne pouvant présenter la capacité d'inhiber la sPLA2-V, d'inhiber la lipoxygénase, d'inhiber la collagénase de type I, de stimuler la Tyrosinase, et ayant la capacité de réduire les rides. L’extrait selon l’invention est issu de la vigne, et plus particulièrement du jus de raisin fermenté communément appelé le vin, dans sa totalité n’ayant pas subi d’opération de clarification et/ou de filtration, c’est-à-dire contenant toujours après vinification, ses ferments alcooliques.

Les pieds de décantation des cuves à vin et les lies pourront également être considérés comme matière première de la présente invention.

La présente invention vise spécifiquement l’utilisation d’un extrait qui est avantageusement obtenu par macération de jus de raisin vinifié contenant toujours ses ferments alcooliques et/ou un extrait de pieds de décantation à l’issue de la vinification du jus de raisin et/ou un extrait de lies à l’issue de la vinification du jus de raisin, après une étape de déshydratation. L’un des objets principaux de l’invention est un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin qui s’utilise comme composition active ou comme principe actif dans les compositions pharmaceutiques destinées à un usage en médecine humaine ou vétérinaire, ou bien également dans des compositions cosmétiques, ledit principe actif et/ ou ladite composition étant destinés à agir par inhibition de la SPLA2-V, par inhibition de la lipoxygénase, par inhibition de la collagénase de type I, par stimulation de la Tyrosinase, et de sorte à réduire les rides. L’invention vise également l’utilisation d’un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin, comme composition active ou comme principe actif dans les compositions pharmaceutiques destinées à un usage en médecine humaine ou vétérinaire, ou bien également dans des compositions cosmétiques, permettant d’éviter la stimulation de l’enzyme Lipoxygénase, mais au contraire d’inhiber la Lipoxygénase, enzyme clé de l’inflammation au niveau de la cascade arachidonique, comme composition active anti-inflammatoire, limitant la production de leucotriènes ou apaisante ou comme principe actif antiinflammatoire limitant la production de leucotriènes ou apaisant, dans le but de limiter les désordres esthétiques liés à l’état inflammatoire. L’invention vise également l’utilisation d’un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin, comme composition active ou comme principe actif dans les compositions pharmaceutiques destinées à un usage en médecine humaine ou vétérinaire, ou bien également dans des compositions cosmétiques, permettant d'inhiber la Collagénase de type I (métallopeptidase 1) de sorte à limiter la dégradation du collagène cutané et de sorte à renforcer l'intégrité de la matrice extra-cellulaire de la peau comme composition active permettant de maintenir la fermeté de la peau. L’invention vise également l’utilisation d’un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin, comme composition active ou comme principe actif dans les compositions pharmaceutiques destinées à un usage en médecine humaine ou vétérinaire, ou bien également dans des compositions cosmétiques, permettant de stimuler la tyrosinase, l'enzyme clé de la production de la mélanine au sein des mélanocytes de la couche basale de l'épiderme de sorte à favoriser la production de mélanine cutanée même en absence de soleil, comme composition active favorisant le bronzage sans soleil. L’invention vise également l’utilisation d’un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin, comme composition active ou comme principe actif dans les compositions pharmaceutiques destinées à un usage en médecine humaine ou vétérinaire, ou bien également dans des compositions cosmétiques, permettant de moduler l’activité des Histones désacétylases ( HDACs) et notamment les sirtuines de type I de sorte à les activer même à faible concentration. L’activation des Sirtuines de type I est corrélée à un effet anti-âge au niveau du métabolisme cellulaire.

Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l’invention vise l’utilisation d’un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin, comme composition active ou comme principe actif dans les compositions pharmaceutiques destinées à un usage en médecine humaine ou vétérinaire, ou bien également dans des compositions cosmétiques, permettant de diminuer et/ou de limiter les rides à la surface de la peau, comme composition active antirides.

Selon un mode d’utilisation particulièrement adapté, l’invention vise l’utilisation d’un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin permettant de contribuer à la stabilisation des compositions de types émulsions de type huile dans eau (H/E) et eau dans huile (E/H) par encapsulation/enrobage de tout ou partie de la phase dispersée.

Caractérisation de l’extrait non hydrolysé de la vigne selon l’invention :

Profil spectrométrique : L’invention désigne un principe actif singulier constitué d’un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin répondant à un profil Infra-rouge tel que suit :

Dans le graphe ci-dessous l’extrait selon l’invention est baptisé « LDV ET »

Taux de Matières sèches :

Le taux de matière sèche est obtenu par perte de masse à 100°C pendant une heure minimum jusqu’à obtention d’une masse constante. Selon cette méthode, le taux de matière sèche d’un principe actif selon l’invention est préférentiellement compris entre 1 et 3%, et préférentiellement entre 1,5 et 2,5%. _ρΗΗ

Le pH du principe actif selon l’invention est compris entre 4 et 6,5, et préférentiellement entre 4,5 et 5,5.

Teneur en sucres totaux :

Le dosage de la teneur en sucres totaux peut être réalisé par la méthode de DUBOIS (Dubois M. et Al., 1956), Analytical chemistry, 28, n°3 p. 350-356. En présence d’acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d’une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d’un échantillon. Selon cette méthode, la teneur en sucres totaux d’un principe actif selon l’invention peut être comprise entre 0,01 et 0,5%, préférentiellement entre 0,1% et 0,2% (masse/masse), soit entre 5 et 10% de la matière sèche de notre extrait selon l’invention.

Teneur en Protéines :

La teneur en azote totale est déterminée par la méthode de Bradford (Bradford, Μ. Μ. (1976) A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding. Anal. Biochem. 72:248-254). Cette méthode détermine la teneur en protéines selon une approche colorimétrique basée sur le changement d’absorbance autour de 595 nm. Le changement de couleur est engendré par le bleu de Coomassie qui se complexifie avec les acides aminés basiques et les résidus hydrophobes des acides aminés constituants les protéines. Selon cette méthode, la teneur en protéines d’un principe actif selon l’invention est préférentiellement comprise entre 0,10 mg/ml et 1,00 mg/ml, et préférentiellement entre 0,15 et 0,40 mg/ml, soit entre 7,5 mg/g et 20 mg/g de la matière sèche de notre extrait selon l’invention.

Teneur en Composés phénoliques :

Le dosage des polyphénols totaux par la méthode colorimétrique utilisant le réactif de Folin-Ciocalteu a été décrit en 1965 par Singleton et Rossi. Le réactif de Folin Ciocalteau est un acide de couleur jaune constitué par un mélange d’acide phosphotungstique (H3PW12O40) et d’acide phosphomolybdique (H3PM012O40). Il est réduit, lors de l’oxydation des phénols, en un mélange d’oxydes bleus de tungstène et de molybdène (Ribereau, 1968). La coloration produite, dont l’absorption maximale se situe à 760nm, est proportionnelle à la quantité de polyphénols présents dans les extraits végétaux (Ghazi et Sahraoui, 2005). Une courbe étalon est réalisée dans cette expérience à partir de la catéchine. Selon cette méthode, la teneur en polyphénols (catéchine équivalents) d’un principe actif selon l’invention est préférentiellement comprise entre 0,01 et 0,5%, préférentiellement entre 0,1% et 0,2% (masse/masse), soit entre 5 et 10% de la matière sèche de notre extrait selon l’invention. Il est à préciser que par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC/MS ) sur un extrait selon l’invention préparé avec le solvant éthanol 96°, il est également mis en avant que la matière sèche selon l’invention contenait 0.17% de phényl acétaldéhyde et 0.24% d’alcool phényléthylique.

Teneur en corps gras : L’invention se caractérise par un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin comprenant notamment de 0,1 à 1 mg/ml de peptides et oligopeptides, de 0,01 à 0,05% de polyphénols , de 0,01 à 0,5% de sucres et par une composition en corps gras polaires spécifiques détectée par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse ( GC/MS ) sur un extrait selon l’invention préparé avec le solvant éthanol 96°, il a ainsi été démontré que la matière sèche selon l’invention contenait différents lipides polaires pour environ 40 à 50% de sa masse sèche. Les lipides polaires sont majoritairement des esters de corps gras, ces derniers représentent environ 30 à 35% de la masse sèche de l’extrait selon l’invention, puis entre 5 et 7% d’acides gras libres, ces derniers sont principalement représentés par l’acide palmitique et l’acide décanoïque. Ci-dessous un tableau présente un profil type des corps gras polaires contenus dans la masse sèche de l’extrait selon l’invention obtenu par extraction sur solvant éthanol 96° :

Esters d’acides gras :

Ethyl décanoate 11.22%

Ethyl Dodecanoate 11,15%

Ethyl caprylate 3.25%

Ethyl stearate 3.02%

Ethyl9-hexadecanoate 2.4%

Ethyl myristate 1.27%

Ethyl olétae 0.8%

Methyl Butyl decanoate 0.39%

Methyl linoléate 0.25%

Acides gras :

Acide palmitique 3.84%

Acide décanoïque 2.1%

Teneur en composés organiques polaires stricts : L’invention se caractérise par un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin comprenant notamment de 0,1 à 1 mg/ml de peptides et oligopeptides, de 0,01 à 0,05% de polyphénols , de 0,01 à 0,5% de sucres et 0.8 à 1% (40 à 50% de sa masse sèche) de lipides polaires et par la présence de composés polaires stricts détectés par GC/MS sur l’extrait éthanolique (EtOH 96°) selon l’invention, à hauteur de 0.8 à 1%, soit 40 à 50% de la matière sèche selon l’invention et compte notamment majoritairement de l’acide acétique environ 25 à 28% % de la masse sèche de l’extrait selon l’invention, puis entre 15 et 17% de glycérol et enfin 3 à 4% de Butanediol.

Ci-dessous un tableau présente un profil type des composés polaires stricts contenus dans la masse sèche de l’extrait selon l’invention obtenu par extraction sur solvant éthanol 96° :

Acide acétique 27.16%

Glycérol 15,81%

Butanediol 3.6%

Diester butanediol 1.42% L’invention porte également sur un mode de réalisation particulièrement adapté tel que décrit suivant.

Procédé d’obtention : A partir de vin non clarifié, non décanté et/ ou à partir de pied de sédimentation de vin et/ ou à partir de lie de vin, le produit de départ est concentré par décantation et/ou centrifugation, puis par évaporation de l’alcool puis de l’eau jusqu’à l’obtention d’une pâte concentrée contenant un taux de matière sèche compris entre 80 et 99 ,9%, et préférentiellement entre 90 et 98%. L'extrait selon l'invention s'obtient donc à partir de matière première qui peut être du vin non clarifié, non décanté et/ou des pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou des lies de vin. Cette matière première une fois concentrée est alors séchée par déshydratation dans un four ou une étuve ventilée en conservant une température inférieure à 60°c, ou bien dans un évaporateur sous vide éventuellement à température ambiante, ou par lyophilisation sous vide après congélation de la matière première, ou par tout autre procédé de séchage non dénaturant et respectant une température inférieure à 60°C.

Cette matière première déshydratée, sèche est alors avantageusement mise en macération dans un solvant de polarité moyenne ou faible, suivie d'une filtration du mélange. Le solvant de la solution obtenue peut-être au besoin évaporé pour obtenir un extrait sec.

Par solvant de polarité moyenne ou faible, il est considéré un solvant présentant un paramètre de polarité inférieur ou égal à 6, un tel indice étant défini selon la référence bibliographique suivante : High Performance Liquid chromatography, V.R. Meyer, 1988 p°120-121.

De préférence l'évaporation est conduite sous pression réduite. A titre de solvants avantageusement utilisés, on compte notamment : - Les hydrocarbures aliphatique à chaîne carbonée en C12, tels que l'hexane et l'heptane, des solvants chlorés tel que le dichlorométhane ; - Les éthers, tels que l'éther éthylique ou diisopropylique ; - L'acétone ; - Les esters tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle ; - des alcools tels que le méthanol, l'éthanol et l'isopropanol. L'extrait selon i'invention peut également être obtenu de manière avantageuse par extraction au dioxide de carbone en état supercritique à partir de la matière première déshydratée. L’évaporation de l’alcool est préférentiellement réalisée sous vide avec un dispositif condenseur, puis l’évaporation de l’eau est réalisée de manière préférentielle en étuve ventilée ou en réacteur sous vide à une température modérée n’excédant pas 60°C et préférentiellement autour de 45°C. Le taux de matière sèche est déterminé par la prise de masse avant et après, lors d’un passage à l’étuve ventilée à 100°C pendant 1 heure d’un échantillon représentatif.

Le principe actif selon l’invention tel que décrit précédemment est obtenu par un procédé comprenant une étape de macération dans un solvant ayant une polarité moyenne ou faible. La macération se fait par ajout de la matière sèche obtenue entre 2% et 25% et préférentiellement entre 5 et 15% (masse/volume) dans le solvant choisi. La macération est préférentiellement conduite sous agitation modérée dans une cuve fermée à l'abri de la lumière et éventuellement sous vide. La macération dure entre 2 heures et 24 heures selon le solvant choisi, l'extrait est alors filtré mécaniquement, préférentiellement sous vide et titré à 2 % de matière sèche (masse/masse) par dilution avec le solvant ou par évaporation de ce dernier, préférentiellement sous vide. Une dernière étape consiste à transférer la matière sèche sur un autre support cosmétiquement acceptable organique ou inorganique par évaporation, préférentiellement sous vide, du solvant ; en ce cas la masse de support organique ou inorganique est égale à celle du solvant. Ainsi le principe actif selon l'invention se caractérise bien par 2 % de matière sèche issue d’un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou un extrait non hydrolysé de lie de vin permettant de diminuer et/ou de limiter les rides à la surface de la peau, comme composition active anti-rides, luttant contre les rides.

Exemple 1 de composition de l’extrait selon l’invention sous forme liquide:

Exemple 2 de composition de l’extrait selon l’invention sous forme liquide:

Exemple 3 de composition de l’extrait selon l’invention sous forme liquide:

Exemple 4 de composition de l’extrait selon l’invention sous forme solide:

Exemple 5 de composition de l’extrait selon l’invention sous forme solide:

Exemple 6 de composition de l’extrait selon l’invention sous forme solide:

Description du potentiel d’activité biologique et/ou biochimique : L’extrait selon l’invention présente une action anti-oxydante selon le test In Tubo au DPPH (1,1-diphenyl 2-picrylhydrazyl). Ce composé 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) est un radical stable qui présente une couleur caractéristique (violet). Il est sous forme oxydée. La réduction du radical par un donneur d’atome H (anti-oxydant - exemple : acide ascorbique) conduit au composé 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazine incolore. Cette décoloration est mesurable par spectrophotométrie et estimée par absorbance à 490 nm et exprimée en Densité Optique (DO). Les points de mesure-sont réalisés en triplicata et les résultats expriment la moyenne de ce triplicata, la significativité statistique des moyennes est évaluée par mesure des écart-types autour de la moyenne pour chaque triplicate, puis validée avec un seuil de tolérance pour la valeur de l’écart type inférieur à 10% de la valeur moyenne de DO (Valeur de Densité Optique) retenue. La DO retenue est calculée selon le principe suivant : La DO des hydrolats seuls sans DPPH est déduite de la DO observée en présence de DPPH de sorte à gommer l’impact de la couleur basale du produit à tester sur la DO. Ci-dessous, Tableau des absorbances obtenues à 405 nm :

Dosé à 1%, l’extrait LDV ET selon l’invention inhibe l’activité radicalaire de plus de 91% ; Dosé à 10%, l’hydrolysat selon l’invention inhibe l’activité radicalaire de plus de 100%, son activité anti-radicalaire est donc supérieure à celle du témoin acide ascorbique dosé à 0.33 mg/g. Cette activité apparaît dose-reliée , ce qui est en la faveur d’une interprétation d’activité spécifique sur ce paramètre. L’extrait selon l’invention présente In Tubo une action inhibitrice sur la Phospholipase A2 de type V (sPLA2-V). Cette enzyme agit à la tête de la cascade arachidonique, c’est l’une des premières enzymes clés du processus I inflammatoire. Le but de cette étude est d’évaluer la modulation par l’extrait selon l’invention de l’activité sur l’enzyme Phospholipase A2 de type V (sPLA2-V) dans un modèle In Vitro acellulaire.

Système d’essai

Une solution tamponnée de Phospholipase A2 réagit avec un substrat spécifique (diheptanoyl thio-PC) pendant 15 minutes à environ 25°C et le transforme pour former un composé qui se lie à un chromogène le DTNB sous simple agitation à température ambiante. L’activité de la phospholipase A2 peut ainsi être évaluée par mesure de l’absorbance à 405 nm.

Le produit « LDV ET » ou le produit de référence inhibiteur « Thioetheramide-PC » sont mis en contact avec la solution de Phospholipase A2 en même temps que le substrat de l’enzyme pendant 15 minutes à 25°C, le substrat transformé par l’enzyme est coloré à l’aide d’un chromogène par agitation simple à température ambiante. L’activité

de la Phospholipase A2 en présence/absence de l’actif, ou du produit de référence est alors évaluée par mesure de l’absorbance à 405 nm.

La modulation de cette activité est exprimée en pourcentage d’inhibition ou d’activation de l’activité de la Phospholipase A2 en absence d’actif, c’est-à-dire uniquement en présence du substrat de l’enzyme (diheptanoyl thio-PC).

Une solution d’enzyme Phospholipase A2 est incubée dans son substrat, diheptanoyl thio-PC, pendant 15 minutes à 25°C, en absence (contrôle) ou présence du produit de référence, ou de concentrations croissantes des produits à l’essai :

Préparation extrait « LDV ET »; 1/100 ; 1/1000 ; 1/10000 (M/M)

Evaluation des effets inhibiteurs ou activateurs A la fin de la période d’incubation, l’activité de l’enzyme Phospholipase A2 avec et sans produit à l’essai ou de référence a été évaluée par mesure de l’absorbance des milieux réactionnels à 405 nm.

Pour chaque concentration testée, la modulation de l’activité de l’enzyme Phospholipase A2 par le produit à l’essai est calculée selon la formule suivante :

Pourcentage de modulation de l’activité de l’enzyme Phospholipase A2 = 100 x[(DO405 produit testé ou de référence) - (DO405 PLA2 seule)] DO405 PLA2 seule

Si le résultat est négatif, le pourcentage est exprimé en inhibition de l’enzyme ; si le résultat est positif, le pourcentage est exprimé en activation de l’enzyme.

Les résultats sont donnés sous la forme de pourcentage d’inhibition de la réaction.

La significativité statistique des différences observées entre les conditions »contrôle » et « produit de référence » est évaluée par un test de Student (Student T test***, p<0.001) et par une analyse de la variance à un facteur (One Way ANOVA), suivie d’un test de Holm-Sidak (*, p<0.05).

Produit de référence

En contrôle témoin (-) un Inhibiteur de référence est employé, il s’agit de Thioetheramide-PC 0,14 mM

Un extrait éthanolique selon l’invention est mis à l’essai à différentes concentrations en présence d‘un témoin positif (= activité basale de l’enzyme) et d’un témoin négatif (Thioetheramide-PC 0,14 mM)

Tableau des absorbances obtenues à 405 nm

Dans ce modèle acellulaire In Tubo, dès la dose de 2% l’extrait selon l’invention inhibe significativement l’activité de la Phospholipase A2 de type V (sPLA2-V) de 54,4% ; l’activité inhibitrice est très puissante puisque l’effet de l’inhibiteur de référence est dépassé lorsque l’extrait selon l’invention est concentré à 8%. L’extrait selon l’invention présente In Tubo une action inhibitrice sur la Lipoxygénase. Cette enzyme agit au cœur de la cascade arachidonique, c’est une enzyme clé du processus inflammatoire.

Le but de cette étude est d’évaluer la modulation par l’extrait selon l’invention de l’activité sur l’enzyme Lipoxygénase, dans un modèle In Vitro acellulaire. La Lipoxygénase est une enzyme clé du processus inflammatoire qui intervient en aval de la Phospholipase A2 en transformant l’acide arachidonique en Leucotriènes.

Système d’essai

Une solution tamponnée de Lipoxygénase réagit avec un substrat spécifique (acide arachidonique) pendant 5 minutes sous agitation orbitale à environ 22°C et le transforme pour former un composé qui se lie à un chromogène sous agitation orbitale et à température ambiante pendant 5 minutes à nouveau. L’activité de la Lipoxygénase peut ainsi être évaluée par mesure de l’absorbance à 490 nm. L’extrait LDV ET selon l’invention ou le produit de référence inhibiteur « Nordihydroguaiaretic acid» (NDGA à 0.16 mM) sont mis en contact avec la solution de Lipoxygénase en même temps que le substrat de l’enzyme pendant 5 minutes à 22°C sous agitation orbitale, le substrat transformé par l’enzyme est coloré à l’aide d’un chromogène par agitation orbitale durant 5 minutes à température ambiante. L’activité de la Lipoxygénase en présence/absence de l’actif, ou du produit de référence est alors évaluée par mesure de l’absorbance à 490 nm.

La modulation de cette activité est exprimée en pourcentage d’inhibition ou d’activation de l’activité de la Lipoxygénase en absence d’actif, c’est-à-dire uniquement en présence du substrat de l’enzyme (acide arachidonique).

Produit de référence

Dans ce test, le produit de référence est un Inhibiteur à savoir un EXTRAIT DE CURCUMA-EC (EPHYLA) 0.1%

Evaluation des effets inhibiteurs ou activateurs A la fin de la période d’incubation, l’activité de l’enzyme Lipoxygénase avec et sans produit à l’essai ou de référence a été évaluée par mesure de l’absorbance (DO) des milieux réactionnels à 490 nm.

Pour chaque concentration testée, la modulation de l’activité de l’enzyme Lipoxygénase par le produit à l’essai est calculée selon la formule suivante :

Modulation de l’activité de l’enzyme Lipoxygénase = 100 x[(DO produit testé ou de référence) - (DO lipoxygénase seule)] DO lipoxygénase seule L’absorbance (DO) est mesurée à 490 nm dans ce test.

Les résultats sont donnés sous la forme de pourcentages d’activation ou d’inhibition de la Lipoxygénase. A partir des données en triplicata, la significativité statistique des différences observées entre les conditions « contrôle », c’est-à-dire les témoins et « produit de référence » est évaluée par un test de Student (Student T test, p<0.05).

Tableau des absorbances obtenues à 405 nm [T+ ] Lipoxygénase seule avec son substrat (activité basale) [T’ ]Lipoxygénase en présence d’extrait de CURCUMA- EC (Inhibition de référence) L’extrait éthanolique selon l’invention présente une action inhibitrice sur l’enzyme Lipoxygénase détectable et significative dès la dose de 1%. L’extrait selon l’invention présente In Tubo une action inhibitrice sur l’activité collagénase de type I. Cette conclusion résulte d’une étude dont le but est d’évaluer l’activité anti-collagénase du produit « LDV ET » dans un modèle colorimétrique In Vitro acellulaire faisant appel à une Collagénase de type I (Sigma Aldrich réf. C0130), un substrat « Collagénase Substrate Kit » (Sigma Aldrich réf. 27670 1EA) et un chromophore, Ninhydrin (Sigma Aldrich réf. 72491).

Système d’essai

Utilisation d’une solution tamponnée de collagénase de type I qui réagit avec un substrat spécifique pendant 5 minutes à 37°C et le dégrade pour former un composé capable d’activer un chromophore par incubation à 80°C durant 15 minutes. L’activité maximum de la collagénase peut ainsi être évaluée par mesure de l’absorbance à 565 nm.

Le produit « LDV ET » est mis en contact avec la solution de collagénase en même temps que le substrat de l’enzyme pendant 5 minutes à 37°C, le substrat dégradé par l’enzyme est capable d’activer le chromophore par incubation à 80°C durant 15 minutes. L’activité de la collagénase en présence de l’actif est alors évaluée par mesure de l’absorbance à 565 nm.

La modulation de cette activité est exprimée en pourcentage d’inhibition ou d’activation de l’activité maximum de la collagénase en absence d’actif, c’est-à-dire uniquement en présence du substrat de l’enzyme.

Pour ce faire, une solution d’enzyme collagénase est incubée dans son substrat pendant 15 minutes en absence (contrôle) ou présence du produit de référence, ou de concentrations croissantes des produits à l’essai :

Le produit « LDV ET » est testé aux concentrations suivantes : 1% ; 0,1% ; 0,01% (V/V)

Ensuite les solutions sont mises en contact avec le chromophore spécifique du substrat dégradé par l’enzyme collagénase pendant 15 minutes à 50°C. A la fin de la période de mise en contact avec le chromophore, l’activité de l’enzyme collagénase de type I avec et sans produit à l’essai a été évaluée par mesure de l’absorbance des milieux réactionnels à 565 nm.

Pour chaque concentration testée, la modulation de l’activité de l’enzyme collagénase de type I par le produit à l’essai est calculée en pourcentage selon la formule suivante :

Pourcentage de modulation de l’activité de l’enzyme collagénase = 100 X [(DO565 produit testé ou de référence) - (DO565 Collagénase seule)] DO565 Collagénase seule

Les résultats sont donnés sous la forme de pourcentages d’inhibition de la réaction radicalaire.

La significativité statistique des différences observées entre les conditions »contrôle » et « produit de référence » est évaluée par un test de Student (Student T test, p<0.001) et par une analyse de la variance à un facteur (One Way ANOVA), suivie d’un test de Holm-Sidak (p<0.05).

Tableau récapitulatif des résultats obtenus après lecture des DO565_

L’extrait éthanolique selon l’invention montre une activité inhibitrice significative dès la dose de 0,01% avec le score de 85,9% d’inhibition de l’activité basale de l’enzyme. A 0,1% LDV ET inhibe de plus de 100% l’activité de la collagénase. Le produit montre un effet dose-dépendance. L’extrait selon l’invention présente In Tubo une action stimulatrice sur l’activité tyrosinase. Le but de cette étude est d’évaluer l’activité sur l’enzyme Tyrosinase du produit « LDV ET », dans un modèle In Vitro acellulaire faisant appel à une enzyme tyrosinase d’origine fungique (Sigma Aldrich réf. T3824), à son substrat

L-Tyrosine (Sigma Aldrich réf. T3754) et une inhibiteur de référence l’hydroquinone (Sigma Aldrich réf.H17902).

Le produit « LDV ET » correspondant à l’extrait éthanolique selon l’invention est mis à l’étude.

Système d’essai

Une solution tamponnée de Tyrosinase réagit avec un substrat L Tyrosine 2,5 mM pendant 60 minutes à 23°C et le transforme pour former un composé Coloré. L’activité maximum de la Tyrosinase peut ainsi être évaluée par mesure de l’absorbance à 475 nm.

Le produit « LDV ET » ou le produit de référence « Hydroquinone » sont mis en contact avec la solution de Tyrosinase en même temps que le substrat de l’enzyme pendant 60 minutes à 23°C, le substrat transformé par l’enzyme est naturellement coloré. L’activité de la Tyrosinase en présence de l’actif est alors évaluée par mesure de l’absorbance à 475 nm.

La modulation de cette activité est exprimée en pourcentage d’inhibition ou d’activation de l’activité maximum de la Tyrosinase en absence d’actif, c’est-à-dire uniquement en présence du substrat de l’enzyme (L Tyrosine).

Produit de référence

Inhibiteur = Hydroquinone 2,5 mM

Protocole d’incubation

Une solution d’enzyme Tyrosinase est incubée dans son substrat L Tyrosine pendant 60 minutes en absence (contrôle) ou présence du produit de référence, ou de concentrations croissantes du produit à l’essai :

Extrait LDV ET ; 1/100 ; 1/1000 ; 1/10000 (V/V)

Evaluation des effets A la fin de la période d’incubation, l’activité de l’enzyme Tyrosinase avec et sans produit à l’essai ou de référence a été évaluée par mesure de l’absorbance des milieux réactionnels à 475 nm.

Pour chaque concentration testée, la modulation de l’activité de l’enzyme Tyrosinase par le produit à l’essai est calculée selon la formule suivante : Pourcentage de modulation de l’activité de l’enzyme Tyrosinase = 100 X [(DO475 produit testé ou de référence) - (DO475 Tyrosinase seule)] I DO475 Tyrosinase seule

Statistiques

Les résultats sont donnés sous la forme de pourcentages d’inhibition de la réaction radicalaire. La significativité statistique des différences observées entre les conditions »contrôle » et « produit de référence » est évaluée par un test de Student (Student T test,***, p<0.001) et par une analyse de la variance à un facteur (One Way ANOVA), suivie d’un test de Holm-Sidak (*, p<0.05).

Tableau des résultats (en moyenne) sur les produits testés, le témoin (T+) et le produit de référence (T-) par mesure de l’absorbance à 475 nm

T+ = Tyrosinase seule avec son substrat (activité max) T' = Tyrosinase en présence d’Hydroquinone 2,5 mM (Inhibition max de référence)

Les résultats obtenus sur l’extrait éthanolique LDV selon l’invention montrent un effet en courbe de Gausse sur le paramètre étudié, ce qui est faveur d’une activité spécifique de cet extrait sur l’activation de la Tyrosinase. Le pic d’activation maximum est à 0,1% de LDV ET.

L’extrait selon l’invention présente In Tubo une action stimulatrice vis-à-vis de l’activité désacétylase des Histones désacétylases (HDACs) et notamment des Sirtuines de type I. L’activité désacétylase des Sirtuines de type I (HDACs) est impliquée dans les mécanismes cellulaires « anti-vieillissement » ; en corollaire, i l’hydrolysat selon l’invention revêt une activité anti-âge In Tubo dès la dose de 0,1%. Le but de cette étude est d’évaluer la modulation de l’activité désacétylante des HDACs et notamment des sirtuines de type I par des concentrations croissantes de l’hydrolysat selon l’invention, dans un modèle colorimétrique In Vitro acellulaire faisant appel à un extrait nucléaire de cellules ) « HeLa » riche en HDACS, et notamment en Sirtuines de type I.

Système d’essai

Une solution tamponnée de HDACs, contenant notamment des Sirtuines de Type I (extrait nucléaire de cellules « HeLa ») réagit avec un substrat pendant 20 minutes à 37°C et le transforme en un composé qui se i colore en présence d’un développeur après incubation à 37°C pendant 10 minutes. L’activité maximum de déacétylation des Sirtuines de type I peut ainsi être évaluée par mesure de l’absorbance à 405 nm.

Les différentes concentrations de l’extrait éthanolique (produits à l’essai) selon l’invention ou le produit de référence « Inhibiteur » sont mis I en contact avec la solution de HDACs, contenant notamment des

Sirtuines de Type I en même temps que le substrat de l’enzyme pendant 20 minutes à 37°C, le substrat transformé par l’enzyme est coloré par l’ajout d’un développeur. L’activité désacétylante des HDACSs et notamment des Sirtuines de type I en présence du principe actif selon l’invention est alors évaluée par mesure de l’absorbance à 405 nm.

La modulation de cette activité est exprimée en pourcentage d’inhibition ou d’activation de l’activité basale des HDACs, contenant notamment des Sirtuines de Type I en absence d’actif, c’est-à-dire uniquement en présence du substrat des enzymes Sirtuines HDACs, contenant notamment des Sirtuines de Type I.

Produit de référence

Dans ce test, le produit de référence est un Inhibiteur à savoir le Trichostatin A (TSA) 1 μΜ

Evaluation des effets inhibiteurs ou activateurs A la fin de la période d’incubation, l’activité des enzymes HDACS et notamment des Sirtuines de type I avec et sans produit à l’essai ou de référence est révélée par coloration à l’aide d’une solution de développeur (10 minutes à 37°C) et évaluée par mesure de l’absorbance des milieux réactionnels à 405 nm (DO 405).

Pour chaque concentration testée, la modulation de l’activité désacétylante des enzymes HDACs et notamment des Sirtuines de type I par le produit à l’essai est calculée selon la formule suivante :

Pourcentage de modulation de l’activité des enzymes HDACs = 100 X [(DO405 produit à l’essai ou de référence) - (DO405 HDACs)] DO405 HDACs

Si le résultat est négatif, le pourcentage est exprimé en inhibition de la réaction enzymatique ; si le résultat est positif, le pourcentage est exprimé en activation de la réaction enzymatique.

Les résultats sont donnés sous la forme de pourcentages d’activation ou d’inhibition des HDACs, notamment des Sirtuines de type I. A partir des données en triplicata, la significativité statistique des différences observées entre les conditions « contrôle », c’est-à-dire les témoins et « produit de référence » est évaluée par un test de Student (Student T test, p<0.05).

L’extrait selon l’invention est dans cet essai issu d’une extraction par solvant éthanolique à 96°, et porte le nom de LDV ET

Tableau récapitulatif des résultats obtenus après lecture des DO405 T- = [T-] TSA1 μΜ (inhibiteur de référence) et [T] Activité basale de l’enzyme

Dans ce modèle acellulaire In Tubo, dès la dose de 0.01% l’extrait selon l’invention augmente significativement l’activité désacétylase des HDACs et notamment des Sirtuines de type I de 63,54%.

Selon un aspect physico-chimique, de manière inattendue au-delà de ses activités biologiques, l’extrait selon l’invention permet de jouer un rôle d’interface dans les mixtures huile / eau. En effet, cet extrait permet de stabiliser en tant qu’agent d’interface une phase dispersée dans une phase mobile.

Préparation 1 : A partir de 1% Matière sèche LDV ET, on ajoute 9% huile de tournesol dans un tube à essai de laboratoire, le tout est mélangé au vortex à température ambiante durant 10 minutes et constitue la phase A.

La phase A est ajoutée dans un bêcher à 90% d’eau pH 5 contenant 0,4% de benzoate de sodium et 0.2% de sorbate de potassium.

Une force de cisaillement est employée ; un homogénéiseur de type Silverson tournant à la vitesse de 5880 RPM est utilisé durant 10 minutes à température ambiante. L’émulsion 1 obtenue est alors observée au microscope optique.

Observation préparation 1 ;

Cliché a

Cette photographie a été obtenue par dilution au 1/6 de l’émulsion 1, durant l’observation au microscope optique haute résolution. Au microscope optique,

nous observons une dispersion de vésicules huileuses, et ces dernières sont parfaitement distinctes, aucun phénomène de coalescence ne se manifeste entre lame et lamelle durant les observations au microscope qui se prolongent durant 15 minutes. Cette observation met en avant la bonne stabilité, et la résistance à la pression exercée par la contrainte de l’écrasement entre lame et lamelle. Les vésicules formées sont de nature à accompagner la stabilité des émulsions huile dans eau.

Cliché b

Dans un système dispersé d’huile dans eau la matière sèche de l’extrait selon l’invention permet de donner naissance à des vésicules d’huile végétale par pelliculage et/ou enrobage de la phase huileuse à l’interface huile / eau, les clichés obtenus au microscope optique haute résolution permettent de visualiser ces vésicules dont le diamètre est de l’ordre de 5 microns. La matière sèche selon l’invention enveloppe les micro-gouttelettes d’huile végétale, la matière sèche est un agent d’interface capable de stabiliser une phase dispersée dans une phase continue à la manière d’un système d’encapsulation. Cette propriété d’interface huile/eau est reproductible lorsque le ratio matière sèche/ huile est de 1 : 9. L’extrait selon l’invention permet donc de pelliculer une

quantité d’huile végétale au moins neuf fois supérieure à sa masse de matière sèche. Cette particularité permet à l’extrait selon l’invention d’être utile pour renforcer les phases mobiles dans les émulsions et d’être également utile pour véhiculer des substances actives sensibles en milieu aqueux, telles que les j vitamines lipophiles, leurs dérivés, les composés insaponifiables des huiles, notamment végétales, les composés volatils lipophiles tels que les parfums, les huiles essentielles ou les arômes, mais aussi la DHA (dihydroxyacétone), ou pour faciliter la solubilité des tannins, anthocyanes, des quinones , des alcaloïdes, des oligopeptides ou des acides aminés, des oses ou des ) polysaccharides.

Selon un autre aspect, la présente invention couvre également les compositions, notamment les compositions cosmétiques et dermo-cosmétiques contenant un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté et/ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, et/ou ; un extrait non hydrolysé de lie de vin comprenant notamment de 0,1 à 1 mg/ml de peptides et oligopeptides, de 0,01 à 0,05% de polyphénols , de 0,01 à 0,5% de sucres et 0.8 à 1% (40 à 50% de sa masse sèche) de lipides polaires et des composés polaires stricts à hauteur de 0.8 à 1%, soit 40 à 50% de la matière sèche selon l’invention. Dans une quelconque composition cosmétique, dermo- ) cosmétique ou vétérinaire, on peut utiliser l'extrait selon l’invention à l'état pur de 0,001% à 100% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,1% à 10% du poids total de la composition.

La préparation d'une composition incluant l'invention peut être sous toutes formes galéniques, adaptées aussi bien à une application topique sur la peau i et/ou les muqueuses et/ou les cheveux.

La composition incluant l’invention est une composition cosmétique, dermo-cosmétique ou vétérinaire car elle est destinée à améliorer l'aspect cutané général de l'individu ou de l’animal qui en fait usage.

Pour une application topique sur la peau, les poils, les cheveux et/ou les i muqueuses, l’extrait selon l’invention ou la composition incluant l'invention comprend un support cosmétiquement acceptable, compatible avec la peau, les muqueuses, les ongles, les poils, les cheveux et peut se présenter sous toutes les formes galéniques, notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile dans eau, d'une émulsion eau dans huile, d'un gel aqueux ou huileux, d’un produit anhydre liquide, pâteux ou solide. Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide, par exemple sous forme de stick.

Des exemples de formulations, ci-dessous, permettent d'illustrer les compositions incluant l'invention sans toutefois en limiter la portée.

Exemple 1 : Formule cosmétique BB cream

*LDV ET = Extrait selon l’invention en solution éthanolique

Exemple 2 : Shampooing &Gel Douche traitant 2 en 1

100

Exemple 3 : Huile Précieuse corps et visage

100 *LDV MS = matière sèche de l’extrait selon l’invention

Exemple 4 : Formule cosmétique - Crème APAISANTE pour le VISAGE

Exemple 5 : Formule cosmétique - Eau démaquillante

Exemple 6 : Formule cosmétique - Sérum anti-âge

Exemple 7 : Formule cosmétique - Gommage visage

LDV BE = extrait selon l'invention sur support bentonite

Exemple 8 : Emulsion inverse aux huiles précieuses

LDV BE = extrait selon l'invention sur support bentonite

Exemple 9 : Crème dessert à la Vanille et aux Omégas 3

LDV MS = Matière sèche de l'extrait selon l'invention

Exemple 10 : Boisson énergétique au Guarana

LDV MS = Matière sèche de l'extrait selon l'invention

références Bibliographiques [1] Ruiperez et al., J. immunol. 2007 ; 179 : 631-638 [2] Oyoshi et al., PNAS, 2012, vol. 109 ; n°13 ; 4992-4997 [3] Joshua et al., J. Agric. Food Chem., 2012, 60(30) : 7417-7420

Claims

1) Utilisation d’un extrait cosmétique dérivé de la vigne comme activateur de Tyrosinase capable d’inhiber l'enzyme Phospholipase A2 (PLA2), notamment la PLA2 de groupe V, et l’enzyme Lipoxygénase.

2) Utilisation selon la revendications 1 d’un extrait dérivé de la vigne en tant que principe actif dermo-cosmétique et son emploi topique dans des compositions cosmétiques, pharmaceutiques ou vétérinaires qui visent à stimuler la tyrosinase en apaisant sur le tissu cutané.

3) Utilisation selon les revendications 1 et 2 d’un extrait dérivé de la vigne permettant d'améliorer l’apparence de la peau par stimulation de la tyrosinase en évitant la production de leucotriènes.

4) Utilisation d’un extrait selon les revendications 1et 2, caractérisé en ce qu’il s’agit d’un extrait non hydrolysé de vin non clarifié, non décanté ou un extrait non hydrolysé de pieds de décantation à l’issue de la vinification, ou d’un extrait non hydrolysé de lie de vin qui s’utilise comme composition active ou comme principe actif dans les compositions pharmaceutiques destinées à un usage en médecine humaine ou vétérinaire, ou bien également dans des compositions cosmétiques.

5) Principe actif selon la revendication 4 caractérisé par sa capacité à jouer un rôle d’interface dans les mixtures huile / eau stabilisant les émulsions H/E et E/H et son emploi en composition alimentaire, cosmétique, vétérinaire ou pharmaceutique

6) Principe actif selon la revendication 4 caractérisé par sa capacité à agir par inhibition de la sPLA2-V, par inhibition de la lipoxygénase, par inhibition de la collagénase de type I, par stimulation de la Tyrosinase, et par sa capacité à réduire les rides.

7) Utilisation selon la revendication 4 d’un principe actif dans les compositions topiques cosmétiques, pharmaceutiques ou vétérinaires.

8) Utilisation d’un extrait selon les revendications 1,2,5, 6 et 7, caractérisé en ce qu’il est composé notamment d’un taux de matière sèche compris entre 1 et 3%, et préférentiellement entre 1,5 et 2,5%.

9) Principe actif selon la revendication 7, caractérisé en ce que sa matière sèche se caractérise par une teneur en sucres totaux comprise entre 5 et 10%, par une teneur en protéines comprise entre 7,5 mg/g et 20 mg/g, par une teneur en composés phénoliques comprise entre 5 et 10% de la matière sèche de notre extrait selon l’invention, par une teneur en lipides polaires comprise entre 30 et 35% et par une teneur en composés organiques polaires comprise entre 40 et 50%.

10) Principe actif selon la revendication 8 caractérisé en ce que les lipides polaires de sa matière sèche sont majoritairement des esters de corps gras, ces derniers représentent environ 30 à 35% de la masse sèche de l’extrait selon l’invention, puis entre 5 et 7% d’acides gras libres, ces derniers sont principalement représentés par l’acide palmitique et l’acide décanoïque.

11) Principe actif selon les revendications 1,2,5 à 10, caractérisé en ce qu’il s’utilise dans des compositions topiques cosmétiques, pharmaceutiques ou vétérinaires entre 0,001% à 100% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,1% à 10% du poids total de la composition.