LT4877B - Prv-1 genas ir jo panaudojimas - Google Patents
Prv-1 genas ir jo panaudojimas Download PDFInfo
- Publication number
- LT4877B LT4877B LT2001055A LT2001055A LT4877B LT 4877 B LT4877 B LT 4877B LT 2001055 A LT2001055 A LT 2001055A LT 2001055 A LT2001055 A LT 2001055A LT 4877 B LT4877 B LT 4877B
- Authority
- LT
- Lithuania
- Prior art keywords
- prv
- sequence
- polypeptide
- amino acids
- nucleotides
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title abstract description 59
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 54
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 54
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 52
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 31
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 101000980845 Homo sapiens CD177 antigen Proteins 0.000 claims abstract 5
- 208000037244 polycythemia vera Diseases 0.000 claims description 78
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 23
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 21
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 21
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 21
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 21
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 12
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 10
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 7
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 206010033661 Pancytopenia Diseases 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 claims description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 8
- 102100024209 CD177 antigen Human genes 0.000 claims 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 claims 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 1
- 208000017733 acquired polycythemia vera Diseases 0.000 description 72
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 58
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 240000006711 Pistacia vera Species 0.000 description 18
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 18
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 16
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 14
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 14
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 11
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 7
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 6
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 3
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 3
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 3
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 3
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 3
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 208000032027 Essential Thrombocythemia Diseases 0.000 description 2
- HVQCEQTUSWWFOS-WDSKDSINSA-N Gln-Gly-Cys Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N HVQCEQTUSWWFOS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N Gly-Thr-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 2
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000014767 Myeloproliferative disease Diseases 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HPXVFFIIGOAQRV-DCAQKATOSA-N Pro-Arg-Gln Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O HPXVFFIIGOAQRV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- BGOWRLSWJCVYAQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGOWRLSWJCVYAQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N Ser-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 2
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 2
- ZZDFLJFVSNQINX-HWHUXHBOSA-N Trp-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N)O ZZDFLJFVSNQINX-HWHUXHBOSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- JUEUYDRZJNQZGR-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[2-[(2-amino-4-methylpentanoyl)amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JUEUYDRZJNQZGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- PAIHPOGPJVUFJY-WDSKDSINSA-N Ala-Glu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O PAIHPOGPJVUFJY-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YYAVDNKUWLAFCV-ACZMJKKPSA-N Ala-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YYAVDNKUWLAFCV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- YWENWUYXQUWRHQ-LPEHRKFASA-N Arg-Cys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O YWENWUYXQUWRHQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N Arg-Gln Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N Arg-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- VVJTWSRNMJNDPN-IUCAKERBSA-N Arg-Met-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(O)=O VVJTWSRNMJNDPN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- DQTIWTULBGLJBL-DCAQKATOSA-N Asn-Arg-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DQTIWTULBGLJBL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- RAQMSGVCGSJKCL-FOHZUACHSA-N Asn-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O RAQMSGVCGSJKCL-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZUFPUBYQYWCMDB-NUMRIWBASA-N Asn-Thr-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZUFPUBYQYWCMDB-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- RYKWOUUZJFSJOH-FXQIFTODSA-N Asp-Gln-Glu Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N RYKWOUUZJFSJOH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PGUYEUCYVNZGGV-QWRGUYRKSA-N Asp-Gly-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PGUYEUCYVNZGGV-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Asp-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- YZFCGHIBLBDZDA-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YZFCGHIBLBDZDA-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- MGAWEOHYNIMOQJ-ACZMJKKPSA-N Cys-Gln-Asp Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N MGAWEOHYNIMOQJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MBILEVLLOHJZMG-FXQIFTODSA-N Cys-Gln-Glu Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N MBILEVLLOHJZMG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- XLLSMEFANRROJE-GUBZILKMSA-N Cys-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N XLLSMEFANRROJE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SRIRHERUAMYIOQ-CIUDSAMLSA-N Cys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SRIRHERUAMYIOQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N Cys-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SWJYSDXMTPMBHO-FXQIFTODSA-N Cys-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SWJYSDXMTPMBHO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- QFTRCUPCARNIPZ-XHNCKOQMSA-N Gln-Cys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)C(=O)O QFTRCUPCARNIPZ-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- CGVWDTRDPLOMHZ-FXQIFTODSA-N Gln-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CGVWDTRDPLOMHZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VOLVNCMGXWDDQY-LPEHRKFASA-N Gln-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)C(=O)O VOLVNCMGXWDDQY-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- JZOYFBPIEHCDFV-YUMQZZPRSA-N Gln-His Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 JZOYFBPIEHCDFV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GLEGHWQNGPMKHO-DCAQKATOSA-N Gln-His-Glu Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N GLEGHWQNGPMKHO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QBEWLBKBGXVVPD-RYUDHWBXSA-N Gln-Phe-Gly Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N QBEWLBKBGXVVPD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- NJMYZEJORPYOTO-BQBZGAKWSA-N Gln-Pro Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O NJMYZEJORPYOTO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XQDGOJPVMSWZSO-SRVKXCTJSA-N Gln-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCC(=O)N)N XQDGOJPVMSWZSO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WLRYGVYQFXRJDA-DCAQKATOSA-N Gln-Pro-Pro Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 WLRYGVYQFXRJDA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VNTGPISAOMAXRK-CIUDSAMLSA-N Gln-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VNTGPISAOMAXRK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JJKKWYQVHRUSDG-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O JJKKWYQVHRUSDG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NKSGKPWXSWBRRX-ACZMJKKPSA-N Glu-Asn-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N NKSGKPWXSWBRRX-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N Glu-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N Glu-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- GZUKEVBTYNNUQF-WDSKDSINSA-N Gly-Ala-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GZUKEVBTYNNUQF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JVWPPCWUDRJGAE-YUMQZZPRSA-N Gly-Asn-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JVWPPCWUDRJGAE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N Gly-Asp-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QCTLGOYODITHPQ-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QCTLGOYODITHPQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- VNBNZUAPOYGRDB-ZDLURKLDSA-N Gly-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)CN)O VNBNZUAPOYGRDB-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N Gly-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- LHYJCVCQPWRMKZ-WEDXCCLWSA-N Gly-Leu-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LHYJCVCQPWRMKZ-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- UWQDKRIZSROAKS-FJXKBIBVSA-N Gly-Met-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UWQDKRIZSROAKS-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- HJARVELKOSZUEW-YUMQZZPRSA-N Gly-Pro-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O HJARVELKOSZUEW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ZKJZBRHRWKLVSJ-ZDLURKLDSA-N Gly-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)O ZKJZBRHRWKLVSJ-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 206010018690 Granulocytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010066476 Haematological malignancy Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N His-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- WOAMZMXCLBBQKW-KKUMJFAQSA-N His-Cys-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O WOAMZMXCLBBQKW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LVXFNTIIGOQBMD-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LVXFNTIIGOQBMD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WPUAVVXYEJAWIV-KKUMJFAQSA-N His-Phe-Cys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N WPUAVVXYEJAWIV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- KAXZXLSXFWSNNZ-XVYDVKMFSA-N His-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KAXZXLSXFWSNNZ-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- VIWUBXKCYJGNCL-SRVKXCTJSA-N Leu-Asn-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 VIWUBXKCYJGNCL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DKEZVKFLETVJFY-CIUDSAMLSA-N Leu-Cys-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N DKEZVKFLETVJFY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KWLWZYMNUZJKMZ-IHRRRGAJSA-N Leu-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KWLWZYMNUZJKMZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N Leu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- WPIKRJDRQVFRHP-TUSQITKMSA-N Leu-Trp-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O WPIKRJDRQVFRHP-TUSQITKMSA-N 0.000 description 1
- QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N Lys-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- JYVCOTWSRGFABJ-DCAQKATOSA-N Lys-Met-Ser Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N JYVCOTWSRGFABJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CNUPMMXDISGXMU-CIUDSAMLSA-N Met-Cys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CNUPMMXDISGXMU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N Met-Glu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- QEDGNYFHLXXIDC-DCAQKATOSA-N Met-Pro-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QEDGNYFHLXXIDC-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N Met-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KZKVVWBOGDKHKE-QTKMDUPCSA-N Met-Thr-His Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 KZKVVWBOGDKHKE-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 1
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 1
- PDUVELWDJZOUEI-IHRRRGAJSA-N Phe-Cys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PDUVELWDJZOUEI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- OMHMIXFFRPMYHB-SRVKXCTJSA-N Phe-Cys-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N OMHMIXFFRPMYHB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N Phe-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- YMIZSYUAZJSOFL-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YMIZSYUAZJSOFL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- XQLBWXHVZVBNJM-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XQLBWXHVZVBNJM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- XZGWNSIRZIUHHP-SRVKXCTJSA-N Pro-Arg-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XZGWNSIRZIUHHP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SKICPQLTOXGWGO-GARJFASQSA-N Pro-Gln-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O SKICPQLTOXGWGO-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- QNZLIVROMORQFH-BQBZGAKWSA-N Pro-Gly-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O QNZLIVROMORQFH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FKLSMYYLJHYPHH-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FKLSMYYLJHYPHH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- SRBFGSGDNNQABI-FHWLQOOXSA-N Pro-Leu-Trp Chemical compound N([C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1 SRBFGSGDNNQABI-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N Pro-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 108010003201 RGH 0205 Proteins 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YQHZVYJAGWMHES-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YQHZVYJAGWMHES-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- VMVNCJDKFOQOHM-GUBZILKMSA-N Ser-Gln-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CO)N VMVNCJDKFOQOHM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N Ser-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N Ser-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N Ser-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 1
- VUKVQVNKIIZBPO-HOUAVDHOSA-N Thr-Asp-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N)O VUKVQVNKIIZBPO-HOUAVDHOSA-N 0.000 description 1
- KWQBJOUOSNJDRR-XAVMHZPKSA-N Thr-Cys-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O KWQBJOUOSNJDRR-XAVMHZPKSA-N 0.000 description 1
- WDFPMSHYMRBLKM-NKIYYHGXSA-N Thr-Glu-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N)O WDFPMSHYMRBLKM-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 1
- HEJJDUDEHLPDAW-CUJWVEQBSA-N Thr-His-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O HEJJDUDEHLPDAW-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N Thr-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N Thr-Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- XEVHXNLPUBVQEX-DVJZZOLTSA-N Thr-Trp-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)NCC(=O)O)N)O XEVHXNLPUBVQEX-DVJZZOLTSA-N 0.000 description 1
- 208000005485 Thrombocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N glyclproline Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000014617 hemorrhoid Diseases 0.000 description 1
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 108700042769 prolyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010093296 prolyl-prolyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- -1 secondary antibodies Substances 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 102000009816 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040001269 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Oncology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Išradimas susijęs su nukleotidų seka, koduojančia PRV-1 geną, su rekombinantinę DNR, turinčia šią seką, su vektoriais, turinčiais rekombinantinę DNR ir su ląstelėmis, transformuotomis šiais vektoriais, taip pat su PRV-1 polipeptidu, su šio polipeptido antikūnais, su PRV-1 polipeptido nustatymo būdu ir su vaistais, turinčiais PRV-1 polipeptido arba antikūnų, nukreiptų prieš PRV-1 polipeptidą.
Polycythaemia rubra vera (eritremija), dar vadinama polycythaemia vera arba p. vera yra piktybinis hematologinis susirgimas, kuriam esant stebimas padidėjęs eritrocitinių, granulocitinių ir megakariocitinių ląstelių susidarymas. Liga yra kloninės kilmės ir kyla kraųjodaros prekursoriaus mutacijos pasėkoje. Vokietijoje p. vera nustatoma 4-6 asmenims iš milijono gyventojų. Negydant, liga priveda prie mirties per 18 mėnesių. Gydymas kraujolaidos priemonėmis arba chemoterapija pratęsia vidutinę išgyvenimo trukmę iki daugiau nei 13 metų.
P. vera nustatoma pagal klinikinius požymius. Klinikinis vaizdas apima galvos skausmus, niežėjimą, splenomegaliją dviem trečdaliams pacientų, kraujavimą arba trombozes, hipertenziją trečdaliui pacientų, podagrą, kuri pasireiškia padidėjusiu šlapimo rūgšties kiekiu, ir kai kuriais atvejais sepsines opas. Svarbiausias laboratorinis kriterijus yra padidėję hemoglobino, hematokrito, eritrocitų kiekiai ir bendras eritrocitų kiekis, taip pat daugeliu atvejų neutrofilinė granulocitozė arba trombocitozė. Kadangi, iš vienos pusės, dauguma kriterijų yra gana neapibrėžti, ir, iš kitos pusės, ne visi pacientai atitinka šiuos kriterijus, dažnai būna sunku atskirti p. vera nuo kitų mieloproliferacinių susirgimų, tokių kaip chroninė granulocitinė leukemija arba esminė trombocitozė, ir patvirtinti diagnozę. Iki šiol visiškai nežinomos molekulinės p. vera priežastys. Kadangi p. vera eiga negydant būna labai sunki, svarbu tiksliai ją diagnozuoti.
Todėl išradimo tikslas yra surasti molekulines polycythaemia rubra vera priežastis ir sukurti diagnozės galimybes.
Šis tikslas pasiekiamas išskiriant geną kuris ekspresuojamas specifiškai esant p. vera, bet ne sveikuose kontroliniuose individuose. Genas apibūdinamas kaip PRV-1 (polycythaemia rubra vera) genas.
Panaši nukleotidų seka atskleista tarptautinėje paraiškoje WO 98/50552.
Tokiu būdu, vienu aspektu išradimas susijęs su polinukleotidu, kuris koduoja PRV-1 geną ir iš esmės susideda iš sekos ID Nr. 1. Šio išradimo polinukleotidai gali būti viengrandės arba dvigrandės DNR arba RNR. Jei tai yra RNR, šios srities specialistui bus aišku, kad vietoj T nukleotidų yra U nukleotidai. Polinukleotidas suprantamas kaip nukleino rūgštis, turinti 15 arba daugiau nukleotidų.
Šio išradimo nukleotidų seka pavaizduota Fig. 1. Taigi, išradimas susijęs su polinukleotidu, kuris atitinka seką, parodytą Fig. 1, ir taip pat su polinukleotidu, kurio nukleotidų seka turi mažų skirtumų. Šioje paraiškoje maži skirtumai suprantami kaip reiškiantys sekas, kuriose keletas, geriausia ne daugiau kaip 50, ypač gerai ne daugiau kaip 25 nukleotidai gali būti pakeisti, tačiau geno, koduojamo nukleotidų sekos, funkcijai liekant nepakitusiai. Šios srities specialistui žinomas faktas, kad bazių tripletas, kuris koduoja aminorūgštį, gali būti pakeistas kitu tripletu, kuris koduoja tą pačią aminorūgštį. Be to, sritys, kurios yra mažiau svarbios, gali būti ištrintos ir/arba mutuotos mažu laipsniu. Konkretaus įgyvendinimo atveju polinukleotidas susideda iš sekos Nr. 1 nukleotidų nuo 36 iki 1346, kas yra PRV-1 geną koduojanti sritis. Kitas įgyvendinimas apima sekos Nr. 1 nukleotidus nuo 36 iki 1262. Ši sritis, galimas daiktas, koduoja PRV-1 polipeptido aktyvią sritį. Galiausiai, šio išradimo polinukleotidas taip pat gali apimti sekos Nr. 1 nukleotidus nuo 39 iki 1346 arba nuo 39 iki 1262 tokiu būdu, kad neliktų kodono, kuris koduoja pradinį metioniną. Geriausias įgyvendinimas yra polinukleotidas, kuris susideda iš sekos Nr. 1 nukleotidų 99-1346 arba 99-1262. Tai duoda, kad 5' gale nelieka kodono, kuris koduoja PRV-1 polipeptido signalinį peptidą.
Šio išradimo polipeptidas taip pat gali būti PRV-1 geno fragmentas. Kaip taisyklė, fragmentas turi daugiau nei 100 nukleotidų, tačiau geriau, jei daugiau nei 300 nukleotidų. Fragmentai taip pat gali būti naudojami kaip praimeriai arba kaip zondai, konkrečiai, PCR; šiuo atveju fragmentai gali būti sutrumpinti, kad geriau tiktų šiam tikslui. Paprastai praimeriai yra 10-30 nukleotidų ilgio, o zondai - 15-50 nukleotidų ilgio.
PRV-1 genas yra endogeninis genas, kurio ekspresija sveikuose individuose apsiriboja keliais organais. Normaliu atveju jis ekspresuojamas pagrindiniuose kraujodaros organuose, t.y., kaulų čiulpuose ir vaisiaus kepenyse, ir silpnai ekspresuojamas blužnyje, bet visai neekspresuojamas širdyje, raumenyse, kasoje ar inkstuose. Pacientuose, sergančiuose p. vera, šis genas labai stipriai ekspresuojamas kraujodaros ląstelėse.
PRV-1 genas koduoja baltymą kuris turi seką parodytą Fig. 2. Signalinis peptidas, kuris būna visų paviršinių molekulių baltymų sekose ir normaliu atveju pašalinamas, kai baltymas apdorojamas, yra atskirtas brūkšneliu. Baltymas turi seką ID Nr. 2. Kitas išradimo aspektas todėl yra iš esmės grynas polipeptidas, turintis seką Nr. 2, arba polipeptidas, turintis seką Nr. 2, bet neturintis signalinio peptido (t.y., sekos Nr.2 22-437 aninorūgščių). Kiti įgyvendinimai apima sekos Nr.2 aminorūgštis 1-409 arba 22-409, kas tikriausiai yra baltymo aktyvi sritis.
Biologinio aktyvumo požiūriu geriau, kai šio išradimo polipeptidas yra glikozilintas; geriausia, kai jis yra N-glikozilintas. Jis gali būti glikozilintas mažiausiai prie vienos iš PRV-1 polipeptido aminorūgščių Asn-46, Asn-189 ir Asn-382 (aminorūgščių numeriai pagal seką Nr.2). Išradimas taip pat apima šio išradimo polipeptidų fragmentus, kurie yra N-glikozilinti. Fragmentai yra mažiausiai 50 aminorūgščių ilgio, geriau, mažiausiai 100 aminorūgščių ilgio ir geriausia, mažiausiai 150 aminorūgščių ilgio. Kitame įgyvendinime, polipeptidas gali būti O-glikozilintas.
Šios srities specialistui aišku, kad konkrečios aminorūgštys gali būti pakeistos kitomis aminorūgštimis, nepažeidžiant baltymo biologinio aktyvumo. Tokios šio išradimo polipeptidų modifikuotos formos taip pat yra išradimo dalis. Aminorūgščių pakeitimai yra tokie, kurie neturi neigiamos įtakos baltymo biologiniam aktyvumui. Šios srities specialistas, parinkdamas pakeitimus, gali naudotis gerai žinomomis taisyklėmis.
Priklausomai nuo gavimo būdo PRV-1 polipeptidas gali turėti, pavyzdžiui, glikozilfosfatidilinozitolio surišančią grupę. Pastaroji rišasi su aminorūgštimis, atitinkančiomis sekos ID Nr.2 407-409 aminorūgštis. Surišanti GPI grupė naudojama surišti baltymą per lipidus su išorine ląstelės membrana.Tačiau dėl priežasčių, kurios ligi šiol nėra galutinai aiškios, dažnai stebima, kad GPI grupe surišti baltymai taip pat išskiriami į terpę. Tai vadinama nusimetimu”. Iki šiol nėra išaiškinta, ar tai yra specifinis procesas, t.y., ar tokie baltymai atskeliami nuo membranos fermentų pagalba valdomame procese, ar tai yra nespecifinis surišančios grupės praradimas. Vadinasi, tikėtina, kad PRV-1 bus aptinkamas tiek ląstelės membranoje, tiek už ląstelės ribų.
Išskirta forma, kuri nesurišta su membrana, tikriausiai yra svarbesnė polipeptido kaip augimo faktoriaus veikimui, kadangi ši forma gali difunduoti ir pasiekti kitas ląsteles.
Šios srities specialistui aišku, kad įmanoma įtakoti baltymo prisirišimą prie membranos, manipuliuojant šiomis aminorūgštimis. Konkrečiai, tai susiję su apibrėžtos struktūros DNR pagaminimu, kurios numatytos PRV-1 polipeptido arba jo fragmentų ekspresijai. Kodonai, koduojantys šias aminorūgštis, gali būti mutuoti arba ištrinti.
Genas koduoja uPAR/Ly6 šeimos paviršiaus receptorių. Šio receptoriaus šeima gali perduoti mitogeninius signalus, t.y., signalus, stimuliuojančius ląstelės dalijimąsi. Todėl manoma, kad perteklinė PRV-1 geno ekspresija, tame tarpe sergančių p. vera granulocituose, prisideda prie šių ląstelių hiperproliferacijos.
Nustatyta, kad PRV-1 neekspresuojamas sveikų individų arba sergančių kitomis mieloproliferacinėmis ligomis, pavyzdžiui, chronine granulocitine leukoze, ūmia granulocitine leukoze arba esmine trombocitoze, individų granulocituose.
Siekiant panaudoti PRV-1 geno koduojamą polipeptidą analizės ir nustatymo metoduose, jis tikslingai generuojamas rekombinantinės DNR pagalba, kai rekombinantinė DNR geriau turi nukleotidų seką ID Nr.l, arba bent PRV-1 geno koduojančią sritį, tai yra sekos ID Nr.l nukleotidai 36-1346, bent jau nukleotidai 391262, operaciniai sujungti su promotoriumi. Tačiau rekombinantinė DNR taip pat gali turėti tik sekos Nr.l fragmentą.
Išradimas dar susijęs su vektoriumi, turinčiu rekombinantinę DNR PRV-1 polipeptidui arba jos fragmentą, ir su ląstele-šeimininke, transfekuota arba transformuota šiuo vektoriumi. Ląstelė-šeimininkč gali būti prokariotinė, pavyzdžiui, bakterija, tokia kaip E.coli. Tačiau polipeptidai, kurie ekspresuojami, būna neglikozilinti. Todėl pirmenybė teikiama eukariotinėms ląstelėms-šeimininkėms, kurios gali glikozilinti ekspresuojamą baltymą po transliacijos ir modifikuoti jį kitais būdais. Eukariotinių ląstelių-šeimininkių pavyzdžiai yra vabzdžių ląstelės, tokios kaip Sf9, skirtos ekspresijai infekavus rekombinantiniais bakulovirusais, ir žinduolių ląstelės, tokios kaip COS, CHO ir HeLa ląstelės. Šie pavyzdžiai nėra išsamūs. Šios srities specialistui aišku, kad glikozilinimo pobūdis gali skirtis, priklausomai nuo ląstelėsšeimininkės. Ekspresijos produktų biologinis aktyvumas taip pat gali skirtis. Ypatingai pirmenybė teikiama ląstelėms-šeimininkėms, kurios produktą glikozilina ir ekspresuoja tokiu būdu, kad išliktų baltymo biologinis aktyvumas.
PRV-1 polipeptidas, kuris išskiriamas iš granulocitų arba gaunamas rekombinantinių būdu, gali būti naudojamas tiek polycythaemici vera diagnostikai, tiek jos gydymui.
Viena terapinė galimybė yra antiprasmė terapija. Šis metodas naudoja antiprasmę RNR molekulę, tai yra RNR, kuri yra komplementari PRV RNR. Kadangi PRV-1 RNR savo pradžioje turi seką 5'-AAAAGCAGAAAGAGATTACCAGCC-3' (SEKA ID Nr.3), priešprasmė RNR, nukreipta prieš šią seką, turėtų tokią nukleotidų seką: 5'-GGCTGGTAATCTCTTTCTGCTTTT-3' (seka ID Nr.4). Ši antiprasmė RNR įtraukiama į vektorių ir įvedama į p. vera ląsteles. Ši RNR įvedama, pavyzdžiui, transfekavimo būdu, kai transfekavimui naudojamas vektorius yra taip konfigūruotas, kad ji įvedama specifiškai į p. vera ląsteles. Priešprasmės RNR ekspesija sąlygoja, kad tampa neįmanoma transliacija nuo iRNR. Ląstelės, paveiktos tokiu būdu, toliau negamina PRV-1 baltymo.
Todėl išradimas taip pat yra susijęs su p. vera nustatymo būdu, kuris charakterizuojamas tuo, kad nustatomas PRV-1 polipeptidas arba jo epitopas ir įvertinamas ekspresijos mastas.
Šio receptoriaus perteklinė ekspresija subrendusiose ląstelėse, esančiose ne kaulų čiulpuose, pavyzdžiui, granulocituose, yra svarbi p. vera ligos indikacija. Ši perteklinė ekspresija tikslingai nustatoma imuninės analizės būdu, naudojant antikūnus, kurie nukreipti prieš PRV-1 receptorių. Tinkami tyrimo metodai yra žinomi imuninės analizės variantai, kuriuose naudojami PRV-1 polipeptidui specifiniai antikūnai kartu su kitais žymėtais antikūnais, kurie gali būti imobilizuoti arba egzistuoti tirpale. Žymėjimas gali būti atliktas per se žinomais būdais, pavyzdžiui, naudojant radioaktyvius izotopus, fluorescencijos arba liuminescencijos priemonėmis, naudojant fermentus, spalvą t
duodančias reakcijas arba naudojant kitas nustatymui tinkančias grupes. Šie variantai yra žinomi šios srities specialistui ir čia nereikalauja detalesnių paaiškinimų. Pagal šį išradimą ypač teikiama pirmenybė ELISA metodikai.
Antikūnai, reikalingi specifiniam PRV-1 receptoriaus nustatymui, panašiai gali būti gaunami per se žinomais būdais. Tinka tiek monokloniniai, tiek polikloniniai antikūnai, teikiant pirmenybę monokloniniams antikūnams.
Antikūnų gamybai taip pat gali būti panaudoti peptidai, kilę iš baltymo. Šio išradimo kontekste sėkmingai buvo panaudoti peptidai, turintys sekas:
a) KVSDLPRQWTPKN (aminorūgštys 34-46) [seka ID Nr.5], ir
b) SAREKRDVQPPASQH (aminorūgštys 391-405) [seka ID Nr. 6],
Polikloniniai antikūnai paprastai gaminami imunizuojant PRV-1 polipeptidu tinkamą šeimininką (triuši), jei reikia, surišant su imunologiniu nešikliu (adjuvantu), ir įvertinamas imuninis atsakas. Monokloniniai antikūnai gali būti gaminami per se žinomu būdu, naudojant hibridomų metodiką. Antikūnai gali būti išgryninami afininiu būdu. Antikūnų gamyba ir išgryninimas aprašyti, pavyzdžiui, Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane, Cold Spring Harbor laboratory Press.
Be to, tokie prieš PRV-1 nukreipti polikloniniai arba monokloniniai antikūnai gali būti naudojami ligos gydymui.
Kitame išradimo įgyvendinime PRV-1 receptorius gali būti nustatomas naudojant atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandinės sintezės (RT-PCR) metodiką. Tam pirmiausia iš PRV-1 perteklingai ekspresuojančios ląstelės, kuri kaip taisyklė yra granulocitas, išskiriama RNR. Tada per se žinomu būdu įvykdoma atvirkštinė transkripcija (RT), naudojant RT praimerį. RT praimeris, geriausia, yra toks, kuris turi tokią nukleotidų seką (seka ID Nr. 7):
ATTAGGTTATGAGGTCAGAGGGAGGTT.
Šiuo būdu specifinė PRV-1 RNR transformuojama į DNR. Po to ši DNR pagausinama PCR reakcijos metu per se žinomu būdu. Amplifikacijos cikluose geriausia naudojami šie du praimeriai:
Kaip prasminis praimeris (seka ID Nr. 8):
GCAGAAAGAGATTACCAGCCACAGACGG.
Kaip antiprasmis praimeris (seka ID Nr. 9):
GAATCGTGGGGGTAATAGAGTTAGCAGG.
Šios srities specialistas lengvai sugebės panaudoti atskleistas sekas kitų tinkamų praimerių suradimui.
Kadangi šioje metodikoje pradine medžiaga panaudota RNR, PCR signalas yra vien teigiamas, kai taip pat ekspresuojanras PRV-1. Kaip paaiškinta aukščiau, taip būna tik tais atvejais, kai pacientas serga p. vera. Sveikų pacientų granulocituose PRV neekspresuojamas. Reiškia, RT-PCR signalo nebuvimas reiškia, kad p. vera nėra.
Kitu alternatyviu atveju p. vera diagnozei taip pat galima naudoti blotingo metodą, geriausia Nothem Blot. Šioje metodikoje RNR išskiriama iš granulocitų ir po to tiriama PRV-1 ekspresijos požiūriu, naudojant blotingo metodiką, pavyzdžiui, Nothem Blot. Sekos ID Nr. 1 kDNR, arba sekos fragmentas, gali būti vartojamas zondu. Hibridizacija įvyksta tik tuo atveju, jei granulocitai būna paimti iš sergančio p. vera paciento, kadangi tik tada vyksta ekspresija granulocituose. Hibridizacijos nebuvimas rodo, kad individas, kurio granulocitai tiriami, neturi p. vera.
Nothem blot hibridizacijai taip pat galima naudoti geno fragmentą. Toks fragmentas paprastai būna daugiau nei 100 bazių ilgumo, geriau, daugiau nei 300 bazių ilgumo. Alternatyviai, įvairūs skirtingi geno fragmentai, kurie gali būti naudojami zondais Nothem blot'e, gali būti gaunami skaldant geną endonukleazėmis. Jei fragmentai yra kilę iš kDNR, tada jų molekulės yra dvigrandės, kurias hibridizacijai reikia išskirstyti į pavienes grandines. Tinkami pavyzdžiai yra Bam HI-PstI fragmentas nuo 420 bazių poros iki 831 bazių poros, arba Pstl-PstI fragmentas nuo 831 bazių poros iki 1900 bazių poros.
PRV-1 iRNR, ir tuo pačiu PRV-1 ekspresija taip pat gali būti nustatyta pirmiausia atvirkščiai transkribuojant iRNR RT-PCR reakcijoje ir po to pagausinant kDNR; pagausinta DNR po to nustatoma hibridizuojant su zondu.
Teigiamos diagnozės atveju ligą reikia gydyti, kadangi kitu atveju ji priveda prie mirties per gana trumpą laiką. Šiam gydymui galima naudoti specifinius antikūnus, nukreiptus prieš PRV-1, ir su kuriais gali susirišti citotoksiniai komponentai.
Todėl išradimas dar susijęs su vaistu, kuris susideda iš antikūnų, nukreiptų prieš PRV-1 receptorių, kartu su įprastiniais priedais.
Kadangi p. vera atveju PRV-1 receptorius ekspresuojamas perteklingai, dauguma antikūnų yra surišti su paveiktų granulocitų paviršiumi, kai jie kontaktuoja su anti-PRV1 antikūnais. Daugumos antikūnų susirišimas su šiomis ląstelėmis stimuliuoja imunologines ląsteles suardyti šiuos granulocitus. Tokiu būdu, įmanoma specifiškai eliminuoti p. vera ląsteles.
Stebėtina, tačiau nustatyta, kad PRV-1 polipeptidas rodo hematopoetinį aktyvumą. PRV-1 polipeptidas gali stimuliuoti kai kurias hematopoetinio prekursoriaus ląsteles, kad susidarytų eritroidų kolonijos. Šią funkciją ypač rodo N-glikozilinti PRV-1 polipeptidai. Tokiu būdu, šio išradimo polipeptidai, kuriems teikiama pirmenybė, yra Nglikozilinti PRV-1 polipeptidai ir jų fragmentai, kurie demonstruoja augimo faktoriaus aktyvumą.
Todėl dar vienas išradimo aspektas yra vaistas, kuris, be farmaciškai toleruojamo užpildo, susideda iš PRV-1 polipeptido arba jo biologiškai aktyvaus fragmento. Geriau, kai PRV-1 polipeptidas yra glikozilintas PRV-1 polipeptidas, dar geriau, N-glikozilintas PRV-1 polipeptidas arba jo biologiškai aktyvus fragmentas. Išradimas taip pat susijęs su vaistais, kurie susideda iš bent vieno polinukleotido pagal šį išradimą.
Šis išradimas dar susijęs su PRV-1 polipeptido arba jo biologiškai aktyvaus fragmento panaudojimu augimo faktoriumi in vivo ir ex vivo. PRV-1 polipeptidas arba jo biologiškai aktyvus fragmentas gali būti naudojamas kaulų čiulpų ir apytakos visų pancitopenijų ir pancitopatijų gydymui (periferinio kraujo ir kaulų čiulpų ląstelių sudedamųjų dalių keitimas). Šio išradimo polipeptidai gali, pavyzdžiui, būti naudojami gydant anemiją, esant inkstų nepakankamumui, chemoterapijai arba švitinant visą kūną, gydant neutropenijąir trombocitopeniją, esant chemoterapijai arba viso kūno švitinimui, gali būti naudojami periferinių arba kaulų čiulpų kamieninių ląstelių ex-vivo apdorojimui, siekiant pagausinti ir perpilti pacientui, sepsio, sisteminio uždegiminio atsako sindromo (SIRS) arba regioninių uždegiminių reakcijų gydymui. Šio išradimo polipeptidai arba juos turintys vaistai gali būti įvedami daugybe būdų. Įvedimo formos apima intraveninį, subkutaninį, intraperitoninį, peroralinį, transderminį įvedimą, įvedimą į raumenis ir per gleivinę.
Šio išradimo polinukleotidai taip pat gali būti naudojami pancitopenijų ir pancitopatijų gydymui. Šiuo atveju tikslas yra ekspresuoti PRV-1 polipeptidą arba jo funkcionalų fragmentą pažeisto paciento ląstelėse. Ryšium su tuo genų terapijos metodų naudojimas yra pirmiausias ir svarbiausias. Ląstelės gali būti išskirtos iš paciento ir transfekuotos šio išradimo polinukleotidu (ex-vivo manipuliacija), o po to jos grąžinamos į paciento organizmą. Įmanoma taip pat įsivaizduoti metodiką, pagal kurią šio išradimo polinukleotidai patektų į tikslines ląsteles virusinio pernešimo būdu. Įterptų nukleino rūgščių ekspresija duotų hematopoetinį aktyvumą.
Išradimas taip pat susijęs su rinkiniais arba polycythaemia vera arba hematopoetinės sistemos sutrikimų nustatymui. Šie rinkiniai susideda iš šio išradimo polinukleotido ir/arba šio išradimo polipeptido ir/arba vieno ar daugiau šio išradimo antikūnų. Be to, į rinkinių sudėtį gali įeiti konteineris arba kompozicijos, tinkamos nustatymo reakcijų įgyvendinimui. Tokių kompozicijų pavyzdžiai yra buferiniai tirpalai, blokuojančių membranų reagentai, hibridizacijos tirpalai, antriniai antikūnai, nustatymo reakcijų substrato tirpalai, ir t.t. geriausia, kai rinkinys naudojamas PCR reakcijų, Nothem bloto, Southern bloto, Westem bloto, ELISA, RIA ar panašių metodikų realizavimui.
Toliau pateikiami pavyzdžiai, paaiškinantys išradimą.
pavyzdys
PRV geno charakterizavimas
Siekiant charakterizuoti geną, atlikti tokie eksperimentai:
- granulocitų išskyrimui iš saugomo kraujo arba kraujo, surinkto kraujuojant p. vera pacientams, naudojamas toks protokolas:
- prie kraujo pridedamas toks pat tūris 3 % dekstrano tirpalo 0,9 % NaCI, ir mišinys paliekamas 20 minučių kambario temperatūroje (RT).
- Mišinys išsiskirsto į dvi fazes. Viršutinė šviesesnė fazė atskiriama ir 10 minučių centrifuguojama esant 1800 g ir RT.
- Supematantas atskiriamas ir ląstelės resuspenduojamos tokiame pat tūryje 0,9 % NaCI.
- Kiekvienu atveju 35 ml ląstelių NaCI užpilamos ant 15 ml Ficoll-Hipaąue.
- Ląstelės ant Ficoll-Hipaąue centrifuguojamos 60 minučių esant 1800 g ir RT , nenaudojant pertraukų.
- Susidaro ląstelių nuosėdos ir du sluoksniai su tarpine faze.
- Sluoksniai ir tarpinė fazė nusiurbiami ir ląstelių nuosėdos resuspenduojamos 30 sekundžių 10 ml ledinio 0,2 % NaCI, ir 10 ml lediniol,6 % NaCI pridedama iškart po 30 sekundžių.
- Ląstelės centrifuguojamos 10 minučių esant 1800 g ir RT.
- Po to jos perplaunamos vieną kartą 10 ml PBS ir nucentrifuguojamos.
- Ląstelių nuosėdos susideda iš 95-99 % grynumo granulocitų.
- Iš šių ląstelių pagal standartines metodikas išskiriama RNR.
- Šios RNR 10 mg tiriama PRV-1 ekspresijos požiūriu Nothem blot metodu. Zondu naudojama visa kDNR seka, pavaizduota sekoje ID Nr. 1.
Šis eksperimentas atliktas su 19 p. vera pacientų ir su 21 kontroliniu saugomo kraujo pavyzdžiu. Nustatyta, kad PRV-1 zondas ryškiai hibridizuojasi p. vera pacientų atveju. Sveikų individų kontroliniuose pavyzdžiuose hibridizacija nestebima.
pavyzdys
PRV-1 turi augimo faktoriaus aktyvumą.
Vaikingoms pelėms po 13,5 dienų nuo apvaisinimo pašalinti embrionai. Išimtos vaisiaus kepenys. Jų ląstelės pažymėtos naudojant antikūnus ir kolonėlių chromatografijos pagalba pratutintos vieno tipo ląstelėmis bei atskirtos nuo kito tipo ląstelių. Tai duoda ląstelių mišinį, praturtintą tam tikromis hematopoezės prekursoriaus ląstelėmis (kolonijas sudarantys vienetai - eritroidai, CFU-E). Taigi, jei vaisiaus kepenų ląstelėse maždaug 2 % sudaro CFU-E, praturtintose ląstelėse CFU-E sudaro 30-40 %.
Šios CFU-E transfekuojamos naudojant retrovirusą. Šiam tikslui ląstelių linija, žymima 393-T, transfekuojama prieš 48 vai. 293-T yra nustatyta žmogaus embriono inkstų ląstelių linija. 393-T ląstelės transfekuotos keletu retroviruso genų. Jei dabar šios 293-T ląstelės transfekuojamos dviem plazmidėmis, vadinamomis pOS ir pKAT, tada jos gamina retrovirusą, kuris gali infekuoti pelių vaisiaus kepenų ląsteles. Jei 293-T ląstelės transfekuotos tuščiu pOS vektoriumi ir pKAT, gaminasi laukinio tipo retrovirusas, kuris tik ekspresuoja retroviruso baltymus. Iš kitos pusės, žmogaus geno, t.y. PRV-1 klonavimas į pOS vektorių duoda produkciją retroviruso, kuris ekspresuoja šį baltymą, užkrėtus juo ląsteles. 293-T ląstelės išskiria retrovirusą į ląstelių kultivavimo terpę.
Po dviejų dienų ląstelių kultivavimo terpė nuo transfekuotų 293-T ląstelių, turinti retroviruso, surenkama ir nufiltruojama per 0,45 pm filtrą. Siekiant transfekuoti vaisiaus kepenų ląsteles, pastarosios sumaišomos su nufiltruota ląstelių kultivavimo terpe, turinčia retroviruso, ir 2 vai. centrifuguojama esant 1800 aps/min ir 20 °C, pridėjus
Polybren. Po to transfekuotos vaisaus kepenų ląstelės auginamos terpėje (Methocult, iš Cell Systems), be įprastinių druskų ir aminorūgščių turinčioje fetalinio veršelio serumo, 0,0001-0,4 IU eritropoetino (EPO)/ml ir 0,8 % metilceliuliozės. CFU-E ląstelėms reikia EPO, siekiant sudaryti hepatopoetines kolonijas. Metilceliuliozė sutirština terpę iki žele pavidalo, fiksuodama atskiras ląsteles taip, kad jos, skirtingai negu skystoje terpėje, negalėtų judėti. Tokiu būdu įmanoma stebėti, ar iš pavienės ląstelės susidarė hematopoetinė kolonija, ar ne. CFU-E sudaro eritroidų kolonijas, tai yra kolonijas, turinčias raudonųjų kraujo kūnelių ir jų prekursorių.
Po trijų dienų suskaičiuojamos susidariusios hematopoetinės kolonijos. Palyginti įvairūs mišiniai. Ne visi mišiniai tirti kiekviename eksperimente; mišiniai 1-3 yra labai artimi kontroliniai mišiniai ir kiekvienas jų gali būti lyginamas su mišiniu 4.
mišinys: Ląstelės, kurios nebuvo transfekuotos retrovirusu;
mišinys: Ląstelės, kurios buvo transfekuotos tuščiu pOS vektoriumi;
mišinys: Ląstelės, kurios buvo transfekuotos žalios fluorescencijos baltymu (GFP), baltymu, kuris nėra aktyvus hematopoetiniu požiūriu;
mišinys: Ląstelės, kurios buvo transfekuotos pOS-PRV-1 (vektorius + genas pagal šį išradimą).
lentelė: lentelėje pateikti rezultatai, gauti iš aukščiau aprašytų eksperimentų. Skaičiai kiekvienu atveju reiškia kolonijų kiekį.
| 1 mišinys | 2 mišinys | 3 mišinys | 4 mišinys | |
| netransfekuota | tuščias vektorius (pOS) | GFP (pOS-GFP) | PRV-1 (pOS-PRV-1) | |
| 1 bandymas | 116 | 156 | 80 | 326 |
| 2 bandymas | 271 | 273 | 410 | |
| 3 bandymas | 120 | 131 | 291 |
Eksperimentai rodo, kad CFU-E, transfekuotos PRV-1, sudaro daug daugiau kolonijų (iki trijų kartų daugiau), negu įvairios kontrolinės CFU-E. Šie rezultatai rodo, kad PRV-1 yra CFU-E augimo faktorius.
pavyzdys.
PRV-1 augimo faktoriaus tirpumas.
Sekantis eksperimentas atliktas siekiant ištirti, ar PRV-1 yra tirpus augimo faktorius, ar reikalingas ląstelės-ląstelės kontaktas. Ląstelių linija 293-T po transfekavimo pOS ir pKAT vektoriais produkuoja ne vien tik retrovirusą. Papildomai 293-T ląstelės taip pat sintetina baltymą, koduojamą geno, klonuoto pOS, t.y., šiuo atveju PRV-1. Jei geno produktas yra tirpus baltymas, jis išskiriamas į terpę, supančią ląstelių liniją 293-T. Jei 293-T ląstelės transfekuojamos tik pOS vektoriumi, be pKAT, retrovirusų nesusidaro. Ląstelių kultivavimo terpėje tada yra tik ląstelių gaminamas tirpus baltymas. POS-PRV-l-transfekuotų ląstelių terpė, ir kuri neturi retrovirusų, sumaišoma su CFU-E ir viskas paskleidžiama metilceliuliozės terpėje; po suskaičiuojamos susidariusios kolonijos
Gauti tokie rezultatai:
lentelė: PRV-1 tirpumas. Skaičiai kiekvienu atveju reiškia kolonijų kiekį.
| 1 mišinys | 2 mišinys | 3 mišinys | 4 mišinys | |
| netransfekuota | tuščias vektorius (pOS) | GFP (pOS-GFP) | PRV-1 (pOS-PRV-1) | |
| 4 bandymas | 116 | 137 | 187 | 557 |
Šiame bandyme taip pat CFU-E ląstelės, kurios buvo paveiktos PRV-1 turinčia terpe, sudarė daug daugiau kolonijų, negu kontrolinės ląstelės. Iš šio rezultato galime daryti išvadų kad PRV-1 yra tirpus augimo faktorius.
pavyzdys.
Augimo faktorius PRV-1 yra glikozilintas.
Iš pacientų, sergančių;?, vera, išskirti granulocitai ir, pagal standartinę metodiką iš šių ląstelių pagaminti baltymo ekstraktai. Šie baltymo ekstraktai apdorojami pagal Boehringer Manheim N-glikozidazės F deglikozilinimo rinkinio metodiką. Smulkiau, tai reiškia, kad į baltymo ekstraktą pridedama denatūracijos buferio, mišinys kaitinamas 3 min. 95 °C temperatūroje, po to veikiamas arba reakcijos buferiu, arba reakcijos buferiu plius N-glikozidazė. Kiekvienas mišinys inkubuojamas 37 °C temperatūroje per naktį, ir baltymai analizuojami PAGE gel-elektroforezės pagalba, po to Westem blot būdu. PRV-1 baltymas nustatomas pagalba antikūno, nukreipto prieš baltymą turintį aminorūgščių seką ID Nr.5. Rezultatai rodo, kad tuo tarpu kai PRV-1 baltymas išgrynintas iš granulocitų, yra 60-65 kDa dydžio, suskaidžius N-glikozidaze, jis yra tik 40 kDa dydžio. Tai aiškiai įrodo, kad PRV-1 yra glikozilintas prie asparagino liekanų.
SEKOS <110> Universitatsklinikum Freiburg <120> PRV-1 genas ir jo panaudojimas <130>E980930 <140> PCT/EP99/07238 <141> 1999-09-30 <150> 198 49 044.5 <151> 1998-10-23 <160> 9 <170> PADAT Seųuenzmodul, Version 1.0 <210> 1 <211> 1600 <212>DNR <213> homo sapiens <220>
<223>
<400> 1 aaaagcagaa agagattacc agccacagac gggtcatgag cgcggtatta ctgctggccc 60 tcctggggtt catcctccca ctgccaggag tgcaggcgct gctctgccag tttgggacag 120 ttcagcatgt gtggaaggtg tccgacctgc cccggcaatg gacccctaag aacaccagct 180 gcgacagcgg cttggggtgc caggacacgt tgatgctcat tgagagcgga ccccaagtga 240 gcctggtgct ctccaagggc tgcacggagg ccaaggacca ggagccccgc gtcactgagc 300 accggatggg ccccggcctc tccctgatct cctacacctt cgtgtgccgc caggaggact 360 tctgcaacaa cctcgttaac tccctcccgc tttgggcccc acagccccca gcagacccag 420 gatccttgag gtgcccagtc tgcttgtcta tggaaggctg tctggagggg acaacagaag 480 agatctgccc caaggggacc acacactgtt atgatggcct cctcaggctc aggggaggag 540 gcatcttctc caatctgaga gtccagggat gcatgcccca gccaggttgc aacctgctca 600 atgggacaca ggaaattggg cccgtgggta tgactgagaa ctgcaatagg aaagattttc 660 tgacctgtca tcgggggacc accattatga cacacggaaa cttggctcaa gaacccactg 720 attggaccac atcgaatacc gagatgtgcg aggtggggca ggtgtgtcag gagacgctgc 780 tgctcataga tgtaggactc acatcaaccc tggtggggac aaaaggctgc agcactgttg 840 gggctcaaaa ttcccagaag accaccatcc actcagcccc tcctggggtg cttgtggcct 900 cctataccca cttctgctcc tcggacctgt gcaatagtgc cagcagcagc agcgttctgc 960 tgaactccct ccctcctcaa gctgcccctg tcccaggaga ccggcagtgt cctacctgtg 1020 tgcagcccct tggaacctgt tcaagtggct ccccccgaat gacctgcccc aggggcgcca 1080 ctcattgtta tgatgggtac attcatctct caggaggtgg gctgtccacc aaaatgagca 1140 ttcagggctg cgtggcccaa ccttccagct tcttgttgaa ccacaccaga caaatcggga 1200 tcttctctgc gcgtgagaag cgtgatgtgc agcctcctgc ctctcagcat gagggaggtg 1260 gggctgaggg cctggagtct ctcacttggg gggtggggct ggcactggcc ccagcgctgt 1320 ggtggggagt ggtttgccct tcctgctaac tctattaccc ccacgattct tcaccgctgc 1380 tgaccaccca cactcaacct ccctctgacc tcataaccta atggccttgg acaccagatt 1440 ctttcccatt ctgtccatga atcatcttcc ccacacacaa tcattcatat ctactcacct 1500 aacagcaaca ctggggagag cctggagcat ccggacttgc cctatgggag aggggacgct 1560 ggaggagtgg ctgcatgtat ctgataatac agaccctgtc
1600 <210> 2 <211>437 <212>PRT <213> homo sapiens <400>2
Met Ser Ala Vai Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Phe lle Leu Pro Leu 15 10 15
Pro Gly Vai Gln Ala Leu Leu Cys Gln Phe Gly Thr Vai Gln His Vai 20 25 30
Trp Lys Vai Ser Asp Leu Pro Arg Gln Trp Thr Pro Lys Asn Thr Ser 35' 40 45
Cys Asp Ser Gly Leu Gly Cys Gln Asp Thr Leu Met Leu lle Glu Ser 50 55 60
Gly Pro Gln Vai Ser Leu Vai Leu Ser Lys Gly Cys Thr Glu Ala Lys 65 70 75 80
Asp Gln Glu Pro Arg Vai Thr Glu His Arg Met Gly Pro Gly Leu Ser
90 95
Leu lle Ser Tyr Thr Phe Vai Cys Arg Gln Glu Asp Phe Cys Asn Asn
100 105 110
Leu Vai Asn Ser Leu Pro Leu Trp Ala Pro Gln Pro Pro Ala Asp Pro
115 120 125
Gly Ser Leu Arg Cys Pro Vai Cys Leu Ser Met Glu Gly Cys Leu Glu
130 135 140
Gly Thr Thr Glu Glu lle Cys Pro Lys Gly Thr Thr His Cys Tyr Asp 145 150 155 160
Gly Leu Leu Arg Leu Arg Gly Gly Gly lle Phe Ser Asn Leu Arg Vai
165 170 175
Gln Gly Cys Met Pro Gln Pro Gly Cys Asn Leu Leu Asn Gly Thr Gln
180 185 190
Glu lle Gly Pro Vai Gly Met Thr Glu Asn Cys Asn Arg Lys Asp Phe
195 200 205
Leu Thr Cys His Arg Gly Thr Thr lle Met Thr His Gly Asn Leu Ala
210 215 220
Gln Glu Pro Thr Asp Trp Thr Thr Ser Asn Thr Glu Met Cys Glu Vai 225 230 235 240
Gly Gln Vai Cys Gln Glu Thr Leu Leu Leu lle Asp Vai Gly Leu Thr
245 250 255
Ser Thr Leu Vai Gly Thr Lys Gly Cys Ser Thr Vai Gly Ala Gln Asn
260 265 270
Ser Gln Lys Thr Thr lle His Ser Ala Pro Pro Gly Vai Leu Vai Ala
275 280 285
Ser Tyr Thr His Phe Cys Ser Ser Asp Leu Cys Asn Ser Ala Ser Ser
290 295 300
Ser Ser Vai Leu Leu Asn Ser Leu Pro Pro Gln Ala Ala Pro Vai Pro 305 310 315 320
Gly Asp Arg Gln Cys Pro Thr Cys Vai Gln Pro Leu Gly Thr Cys Ser
325 330 335
Ser Gly Ser Pro Arg Met Thr Cys Pro Arg Gly Ala Thr His Cys Tyr
340 345 350
Asp Gly Tyr lle His Leu Ser Gly Gly Gly Leu Ser Thr Lys Met Ser
355 360 365 lle Gln Gly Cys Vai Ala Gln Pro Ser Ser Phe Leu Leu Asn His Thr
370 375 380
Arg Gln lle Gly lle Phe Ser Ala Arg Glu Lys Arg Asp Vai Gln Pro 385 390 395 400
Pro Ala Ser Gln His Glu Gly Gly Gly Ala Glu Gly Leu Glu Ser Leu
405 410 415
Thr Trp Gly Vai Gly Leu Ala Leu Ala Pro Ala Leu Trp Trp Gly Vai
420 425 430
Vai Cys Pro Ser Cys
435 <210> 3 <211> 24 <212>RNR <213> homo sapiens <220>
<223>
<400> 3 aaaagcagaa agagattacc agcc <210>4 <211> 24 <212>RNR <213> homo sapiens <220>
<223>
<400>4 ggctggtaat ctctttctgc tttt 24 <210>5 <211> 13 <212>PRT <213> homo sapiens <400>5
Lys Vai Ser Asp Leu Pro Arg Gln Trp Thr Pro Lys Asn 1 5 10 <210> 6 <211> 15 <212>PRT <213> homo sapiens <400> 6
Ser Ala Arg Glu Lys Arg Asp Vai Gln Pro Pro Ala Ser Gln His 15 10 15 <210> 7 <211> 27 <212>DNR <213> homo sapiens <220>
<223>
<400 7 attaggttat gaggtcagag ggaggtt 27 <210> 8 <211> 28 <212>DNR <213> homo sapiens <220>
<223>
<400> 8 gcagaaagag attaccagcc acagacgg <210> 9 <211> 28 <212>DNR <213> homo sapiens <220>
<223>
<400> 9 gaatcgtggg ggtaatagag ttagcagg
Claims (23)
- IŠRADIMO APIBRĖŽTIS1. N-glikozilintas polipeptidas, iš esmės susidedantis iš vienos iš toliau pateiktų aminorūgščių sekų:sekos Nr. 2 aminorūgštys 1-437; sekos Nr. 2 aminorūgštys 1-409; sekos Nr. 2 aminorūgštys 22-437; sekos Nr. 2 aminorūgštys 22-409;arba jo fragmentas, susidedantis iš mažiausiai 50 aminorūgščių.
- 2. Polipeptidas, susidedantis iš vienos iš toliau pateiktų aminorūgščių sekų: sekos Nr. 2 aminorūgštys 1-437;sekos Nr. 2 aminorūgštys 1-409; sekos Nr. 2 aminorūgštys 22-437; sekos Nr. 2 aminorūgštys 22-409^.
- 3. Iš esmės grynas polipeptidas, turintis sekąlD Nr. 2.
- 4. Polinukleotidas, susidedantis iš vienos iš toliau pateiktų nukleotidų sekų: sekos Nr. 1 nukleotidai 1-1600;sekos Nr.l nukleotidai 36-1346; sekos Nr.l nukleotidai 36-1262; sekos Nr. 1 nukleotidai 39-1346; sekos Nr. 1 nukleotidai 39-1262; sekos Nr. I nukleotidai 99-1346; sekos Nr. 1 nukleotidai 99-1262.
- 5. Rekombinantinė DNR, susidedanti iš polinukleotido pagal 4 punktą.
- 6. Rekombinantinė DNR pagal 5 punktą, besiskirianti tuo, kad nukleotidų seka funkcionaliai surišta su promotoriumi.
- 7. Ekspresijos vektorius, turintis rekombinantinę DNR pagal 5 arba 6 punktą.
- 8. Transformuota arba transfekuota ląstelė-šeimininkė, turinti polinukleotidą pagal 4 punktą.
- 9. Antikūnas prieš PRV-1 polipeptidą pagal vieną iš 1-3 punktų arba jo epitopas.
- 10. Antikūnas pagal 9 punktą, besiskiriantis tuo, kad jis yra monokloninis antikūnas.
- 11. Polycythaemia vera nustatymo būdas, besiskiriantis tuo, kad imuninės analizės metu PRV-1 polipeptidas pagal vieną iš 1-3 punktų reaguoja su vienu ar daugiau antikūnų pagal 9 arba 10 punktą.
- 12. Būdas pagal 11 punktą, besiskiriantis tuo, kad naudojamas antikūnas yra polikloninis arba monokloninis antikūnas pagal 9 punktą.
- 13. Polycythaemia vera nustatymo būdas, besiskiriantis tuo, kad PRV-1 polinukleotidas pagal 4 punktą nustatomas naudojant atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandinės sintezės (RT-PCR) metodiką arba blotingo metodiką.
- 14. Vaistas polycythaemia vera gydymui, besiskiriantis tuo, kad, be įprastinių užpildų, jis susideda iš polikloninių arba monokloninių antikūnų pagal 9 arba 10 punktą.
- 15. Vaistas, besiskiriantis tuo, kad susideda iš polipeptido pagal vieną iš 1-3 punktų ir bent vieno farmaciškai toleruotino užpildo.
- 16. Vaistas, besiskiriantis tuo, kad susideda iš polinukleotido pagal 4 punktą ir bent vieno farmaciškai toleruotino užpildo.
- 17. Polipeptido pagal vieną iš 1-3 punktų panaudojimas augimo faktoriumi.
- 18. Polipeptido pagal vieną iš 1-3 punktų panaudojimas vaisto, skirto kaulų čiulpų ir kraujotakos pancitopenijų ir pancitopatijų gydymui, gamyboje.
- 19. Polinukleotido pagal 4 punktą panaudojimas vaisto, skirto kaulų čiulpų ir kraujotakos pancitopenijų ir pancitopatijų gydymui, gamyboje.
- 20. Polipeptido pagal vieną iš 1-3 punktų panaudojimas endogeninių ląstelių ir/arba nustatytų ląstelių linijų apdorojimui ir/arba dauginimui ex vivo arba in vitro.
- 21. Polycythaemia vera nustatymo rinkinys, besiskiriantis tuo, kad susideda iš:bent vieno polinukleotido pagal 4 punktą arba jo fragmento; ir/arba bent vieno polipeptido pagal vieną iš 1-3 punktų, ir/arba bent vieno antikūno pagal 9 ar 10 punktą.
- 22. Rinkinys hematopoetinės sistemos sutrikimų nustatymui, besiskiriant i s tuo, kad susideda iš:bent vieno polinukleotido pagal 4 punktą arba jo fragmento; ir/arba bent vieno polipeptido pagal vieną iš 1-3 punktų, ir/arba bent vieno antikūno pagal 9 ar 10 punktą.
- 23. Rinkinys PRV-1 baltymo nustatymui pagal 21 arba 22 punktą, besiskiriantis tuo, kad tai yra ELISA analizės rinkinys.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19849044A DE19849044A1 (de) | 1998-10-23 | 1998-10-23 | Das Gen PRV-1 und dessen Verwendung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LT2001055A LT2001055A (lt) | 2001-10-25 |
| LT4877B true LT4877B (lt) | 2002-01-25 |
Family
ID=7885492
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LT2001055A LT4877B (lt) | 1998-10-23 | 2001-05-22 | Prv-1 genas ir jo panaudojimas |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6686153B1 (lt) |
| EP (1) | EP1123392B1 (lt) |
| JP (1) | JP2002528077A (lt) |
| KR (1) | KR20010080883A (lt) |
| CN (1) | CN1190491C (lt) |
| AT (1) | ATE348109T1 (lt) |
| AU (1) | AU771772B2 (lt) |
| BG (1) | BG105460A (lt) |
| BR (1) | BR9915537A (lt) |
| CA (1) | CA2349211A1 (lt) |
| CZ (1) | CZ20011430A3 (lt) |
| DE (2) | DE19849044A1 (lt) |
| EA (1) | EA200100440A1 (lt) |
| EE (1) | EE200100234A (lt) |
| HR (1) | HRP20010294A2 (lt) |
| HU (1) | HUP0104954A3 (lt) |
| IL (1) | IL142664A0 (lt) |
| LT (1) | LT4877B (lt) |
| LV (1) | LV12722B (lt) |
| MX (1) | MXPA01004035A (lt) |
| NO (1) | NO20011961L (lt) |
| NZ (1) | NZ510970A (lt) |
| PL (1) | PL347413A1 (lt) |
| SI (1) | SI20585A (lt) |
| SK (1) | SK5402001A3 (lt) |
| WO (1) | WO2000024886A1 (lt) |
| YU (1) | YU29801A (lt) |
| ZA (1) | ZA200103210B (lt) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2348757A1 (en) * | 1998-12-16 | 2000-06-22 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| DE19947010A1 (de) * | 1999-09-30 | 2001-04-05 | Universitaetsklinikum Freiburg | Das Gen PRV-1 und dessen Verwendung |
| WO2009045370A2 (en) * | 2007-09-28 | 2009-04-09 | Intrexon Corporation | Therapeutic gene-switch constructs and bioreactors for the expression of biotherapeutic molecules, and uses thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998050552A1 (en) | 1997-05-06 | 1998-11-12 | Zymogenetics, Inc. | Novel tumor antigens |
-
1998
- 1998-10-23 DE DE19849044A patent/DE19849044A1/de not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-09-30 YU YU29801A patent/YU29801A/sh unknown
- 1999-09-30 SK SK540-2001A patent/SK5402001A3/sk unknown
- 1999-09-30 US US09/830,189 patent/US6686153B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-30 AU AU60883/99A patent/AU771772B2/en not_active Ceased
- 1999-09-30 WO PCT/EP1999/007238 patent/WO2000024886A1/de not_active Ceased
- 1999-09-30 CN CNB998124834A patent/CN1190491C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-30 JP JP2000578440A patent/JP2002528077A/ja active Pending
- 1999-09-30 EA EA200100440A patent/EA200100440A1/ru unknown
- 1999-09-30 CZ CZ20011430A patent/CZ20011430A3/cs unknown
- 1999-09-30 CA CA002349211A patent/CA2349211A1/en not_active Abandoned
- 1999-09-30 SI SI9920078A patent/SI20585A/sl not_active IP Right Cessation
- 1999-09-30 BR BR9915537-0A patent/BR9915537A/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-09-30 IL IL14266499A patent/IL142664A0/xx unknown
- 1999-09-30 KR KR1020017005025A patent/KR20010080883A/ko not_active Withdrawn
- 1999-09-30 EE EEP200100234A patent/EE200100234A/xx unknown
- 1999-09-30 PL PL99347413A patent/PL347413A1/xx not_active Application Discontinuation
- 1999-09-30 NZ NZ510970A patent/NZ510970A/xx unknown
- 1999-09-30 HU HU0104954A patent/HUP0104954A3/hu unknown
- 1999-09-30 DE DE59914061T patent/DE59914061D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-30 HR HR20010294A patent/HRP20010294A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1999-09-30 MX MXPA01004035A patent/MXPA01004035A/es unknown
- 1999-09-30 EP EP99947439A patent/EP1123392B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-30 AT AT99947439T patent/ATE348109T1/de not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-04-19 ZA ZA200103210A patent/ZA200103210B/xx unknown
- 2001-04-20 NO NO20011961A patent/NO20011961L/no not_active Application Discontinuation
- 2001-04-20 BG BG105460A patent/BG105460A/xx unknown
- 2001-05-22 LT LT2001055A patent/LT4877B/lt not_active IP Right Cessation
- 2001-05-22 LV LVP-01-61A patent/LV12722B/en unknown
-
2003
- 2003-12-05 US US10/727,619 patent/US20040259110A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998050552A1 (en) | 1997-05-06 | 1998-11-12 | Zymogenetics, Inc. | Novel tumor antigens |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2001524814A (ja) | ２８種類のヒト分泌タンパク質 | |
| JP2002516103A (ja) | インターロイキン２１およびインターロイキン２２ | |
| JP2002513295A (ja) | １２３種類のヒト分泌タンパク質 | |
| JP2005218453A (ja) | ８７個のヒト分泌タンパク質 | |
| US5858701A (en) | DNA encoding an insulin receptor substrate | |
| JP2006325596A (ja) | シアロアドヘシンファミリーメンバー−２（ｓａｆ−２） | |
| WO2011091716A9 (zh) | 表皮生长因子受体变异体 | |
| WO1998017800A1 (fr) | Larc, nouvelle chimiokine cc humaine | |
| LT4877B (lt) | Prv-1 genas ir jo panaudojimas | |
| JP2000125888A (ja) | シアロアドヘシンファミリ―メンバ――３ | |
| CA2387702A1 (en) | The prv-1 gene and use thereof | |
| JP2002509693A (ja) | カドヘリン由来成長因子及びその使用 | |
| JP2004041175A (ja) | ヒトｌｉｇ−１相同体（ｈｌｉｇ−１） | |
| JP2004041214A (ja) | シアロアドヘシンファミリー４（ＳＡＦ−４）ｃＤＮＡ | |
| JPH11164693A (ja) | 慢性腎不全、アテローム性動脈硬化および繊維症の標的 としての新規なｓＭＡＤ３スプライス変異体 | |
| JPH11103867A (ja) | Ｅｐｏ一次応答遺伝子１、ｅｐｒｇ１ | |
| JP2003519162A (ja) | Ｐｐ１４融合蛋白質並びに該蛋白質の製造及び使用方法 | |
| JP2002510192A (ja) | １８６個のヒトの分泌タンパク質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM9A | Lapsed patents |
Effective date: 20040930 |