LT4846B - Junginiai prieš pikornavirusą, jų gavimas ir panaudojimas - Google Patents

Description

Techninė sritis ir pramoninis išradimo pritaikomumas

Šis išradimas yra skirtas panašiems į peptidus ir peptidus imituojantiems junginiams, kurie reikiamai inhibuoja pikornavirusinių 3C proteazių, ypatingai rinovirusinių 3C proteazių (RVP) fermentinį aktyvumą ir kurie stabdo virusų augimą ląstelių kultūroje. Išradimas taip pat yra susijęs su tokių junginių panaudojimu farmacinėse kompozicijose ir rinovirusinių infekcijų terapijai. Be to, išradimas taip pat yra susijęs su tokių junginių sintezės būdais ir šiai sintezei tinkamais junginiais.

Išradimo kilmė riko.’ne virusai yra mažyčių neturinčių apvalkalėlio, turinčių teigiamos grandinės RNR, virusų, kurie infekuoja žmones ir kitus gyvūnus, šeima. Tokiais virusais yra žmogaus rinovirusai, žmogaus poliovirusai, žmogaus Koksaki virusai, žmogaus echovirusai, žmogaus ir jaučio enterovirusai, encefalomiokardito virusai, meningito virusai, kojų ir burnos virusai, hepatito A virusas ir kiti. Žmogaus rinovirusai yra pagrindinė paprasto peršalimo priežastis. Iki šiol prekyboje nėra efektyvių priemonių kurios gydytų paprastąjį peršalimą o tik priemonės, kurios palengvina simptomus.

Pikornavirusinės infekcijos gali būti gydomos inhibuojant proteolitinius 3C fermentus. Šių fermentų reikia natūraliam pikornavirusų subrendimui. Jie yra atsakingi už autokatalitinį genominio didelio poliproteino skaldymą į pagrindinius virusinius baltymus. 3C proteazių šeimos nariai yra cisteino proteazės, kuriose sulfhidrilo grupės dažniausiai skaldo glutamino-glicino amidinįryšį. Manoma, kad 3C proteazių inhibavimas blokuos proteolitinį poliproteino skaldymą kuris savo ruožtu sulėtins virusų subrendimą ir replikaciją trukdydamas virusinių dalelių gaminimuisi. Tokiu būdu, šios cisteino proteazės vykdomo proceso inhibavimas selektyviomis mažomis molekulėmis, kurios yra specifiškai atpažįstamos, turėtų vaidinti vaidmenį svarbioje ir naudingoje strategijoje, nukreiptoje į šios prigimties virusinių infekcijų, ypatingai paprastojo peršalimo, gydymą.

Neseniai buvo atrasta keletas pikornavirusinių 3C proteazių fermentinio aktyvumo inhibitorių - mažų molekulių. Žr. pavyzdžiui, JAV. patentinę paraišką Nr. 08/850398, užregistruotą 1997 m. gegužės 2 d. VVebber ir kt.; JAV patentinę paraišką Nr. 08/991282, užregistruotą 1997 m. gruodžio 16 d. Dragovich ir kt.; ir JAV patentinę paraišką Nr. 08/991739, užregistruotą 1997 m. gruodžio 16 d. VVebber ir kt. Šios JAV patentinės paraiškos, kurių aprašymai duodami kaip literatūros šaltiniai, aprašo tam tikrus junginius prieš pikornavirusus. Tačiau vis tik išlieka pageidavimas atrasti junginius - mažas molekules, kurios būtų ypatingai veiksmingi agentai prieš pikornavirusus.

Išradimo santrauka

Taigi, šio išradimo tikslas yra surasti mažos molekulinės masės junginius, kurie būtų ypatingai veiksmingi agentai prieš pikornavirusus. Kitas išradimo tikslas yra pateikti tarpinius junginius, tinkančius būti tarpiniais junginiais minėtas proteazes inhibuojančių junginių sintezėje, ir tokių junginių sintezės būdus. Dar kitas išradimo tikslas yra gauti farmacines kompozicijas, kurios būtų labai efektyvios gydant ligas, kuriose tarpininkauja pikornavirusinių 3C proteazių inhibavimas, kaip antai paprastą'į peršalimą

Šie tikslai buvo pasiekti atradus šio išradimo junginius, kurie yra pikornavirusinės 3C proteazės inhibitoriai, turintys ypatingai stiprų priešvirusinį aktyvumą Netikėtai buvo rasta, kad peptidiniai ir peptidus imituojantys junginiai, kuriuose yra penkianarė heterociklinė grupė, turi aukštą rinovirusinės proteazės inhibavimo aktyvumą. Taip pat netikėtai buvo rasta, kad peptidinių ir peptidus imituojančių junginių rinovirusinės proteazės inhibavimo aktyvumą galima žymiai padidinti pakeitus į glutaminą panašią liekaną randamą kai kuriuose žinomuose rinovirusinę proteazę inhibuojančiuose junginiuose, šonine grandine, kurioje yra gama- arba deltalaktamas.

Šio išradimo inhibitoriai turi tokią bendrąją formulę (I):

(D, kurioje:

Y yra -N(R_y)-, ’ -C(R_y)(R_y)- arba -0-, kur kiekvienas id R_y nepriklausomai yra -H arba temesnysis alkilas;

Ri yra -H, -F, -alkilas, -OH, -SH arba O-alkilo grupė;

R₂ ir R₃, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H;

V /_c (R₄l)(R₄l)

O • ’ ' J /1-1 \ /1-1 \ , kur n yra sveikas skaičius nuo O iki 5, Ai yra CH arba N, A₂ ir kiekvienas A*, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš C(R₄i)(R4i), N(R₄i), S, S(0), S(0)₂ ir O, o A4 yra NH arba NR₄i, kur kiekvienas R₄i nepriklausomai yra H arba žemesnysis alkilas, su sąlyga, kad ne daugiau nei du heteroatomai atsiduria iš eilės aukščiau pavaizduotame žiede, sudarytame iš Ai, A₂, (Aijn, A4 ir C=0, ir bent vienas iš /•C-^A,^Ai^(A3)n (R₄i)(R₄i)

NH, arba

NH;

aL /(^A3) n ^A1^A2 arba

R₂ ir R₃ yra

R₅ ir R₆, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, F, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė;

R₇ ir Rg, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -OR17, -SR17, NR17R18, -NR19NR17R18 arba -NR₁₇ORie, kur R₁₇, Ris ir R19, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė arba acilo grupė, su sąlyga, kad bent vienas iš R₇ ir Rs yra alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -OR17, -SR17, -NR17R18, -NR19NR17R18 arba -NR17OR18;

R_g yra tinkama organinė liekana; ir

Z ir Zi, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -C(O)R₂i, CO2R21, -CN, -C(O)NR₂iR22, -C(O)NR₂iOR₂₂, -C(S)R_21i -C(S)NR₂₁R_22i -no₂, SOR₂1, -SO₂R₂1, -SO₂NR₂₁R_22i -SO(NR₂1)(OR₂₂), -SONR₂1, -SO3R21, PO(OR₂i)₂, -PO(R₂i)(R₂2), -POįNR^R^KORzs), -PO(NR₂iR₂₂)(NR₂3R₂4), C(O)NR₂iNR₂₂R₂₃ arba -C(S)NR₂iNR₂₂R₂3, kur R21, R22, R23 ir R24, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba kur bet kurie du iš R₂i, R22, R23 ir R24, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterociklinę grupę, su sąlyga, kad Z ir abu kartu nėra H;

arba Z\ ir Ri kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę, kur Z1 ir R1 yra tokie, kaip apibūdinta aukščiau, išskyrus liekanas, kurios negali sudaryti cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupės;

arba Z ir Z1 kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę, kur Z1 ir R1 yra tokie, kaip. apibūdinta aukščiau, išskyrus liekanas, kurios negali sudaryti cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupės.

Išradimas taip pat yra susijass su I formulės junginių provaistais, farmaciškai priimtinomis druskomis, farmaciškai aktyviais metabolitais ir farmaciškai priimtinais solvatais.

Tinkamiausiuose I formulės junginių įgyvendinimo variantuose R₂ ir R3 yra nepriklausomai H, arba

‘C (R₄i)(R₄i) (^R4i)(^R4i) kur n yra sveikas skaičius nuo 0 iki 5, kiekvienas iš R41 nepriklausomai yra H arba žemesnysis alkilas, o žvaigždute pažymėto anglies atomo stereochemija gali būti R arba S; su sąlyga, kad bent vienas iš R₂ ir R3 yra o

^NH2 arba

VA

1* (C(R₄l)(R4l))n

V /c

Ac (R₄₁)(R₄₁) (R₄i)(R₄₁) Geriau, kai R₉ yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomą pasirinktų iš O, N ir S.

Kituose tinkamiausiuose įgyvendinimo variantuose I formulės kintamieji yra tokie. Z ir Zį, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H, F, žemesniojo alkilo, -CO2R21 ir -C(O)NR₂iR22, su sąlyga, kad Z ir Z1 abu kartu nėra H, kur R21 ir R22, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R21 ir R22 kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę. Bent vienas iš R₂ arba R3*yra

O.

H .N.

arba

NHs

Ά ^J , o kitas yra H. R5 ir

Re, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H, F, alkilo grupės, cikloalkilo grupės, heterocikloalkilo grupės, arilo grupės ir heteroarilo grupės; geriau, kai vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas (pvz. neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas). R7 ir Rg, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė, ir visų geriausia, kai vienas iš R7 ir Rg yra

H, o kitas yra alkilas (pvz. 2-propilas, 2-metil-2-propilas arba 2-metil-1propilas) arba arilmetilas (pvz., neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas arba naftilmetilas). Rg yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomą pasirinktų iš O, N ir S, geriau penkianaris heterociklas, turintis bent vieną azoto heteroatomą ir bent vieną deguonies heteroatomą (pvz. neturintis pakaitų arba turintis pakaitų 1,2-oksazolilas (t.y. izoksazolilas), 1,3-oksazolilas (t.y. oksazolilas) arba oksadiazolilas (1,2,3oksadiazolilas, 1,2,4-oksadiazolilas arba 1,2,5-oksadiazolilas). Kai Rg yra oksadiazolilas, tinkamiausias yra neturintis pakaitų ir monometil-pakeistas

I, 2,4-oksadiazolilas. Ypatingai tinkamuose įgyvendinimo variantuose Rg yra 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas, arba neturintys pakaitą arba kaip

. j* pakaitus turintys vieną arba dvi metilo grupes ir/arba halogenus; iš halogeninių pakaitų tinkamiausi yra chloras ir fluoras.

Tinkamiausiame įgyvendinimo variante junginiai, provaistai, farmaciškai priimtinos druskos, farmaciškai aktyvūs metabolitai ir solvatai turi aktyvumą prieš pikornavirusą esant EC50 mažesnei arba lygiai 100 μΜ H1HeLa ląstelių kultūros teste; geriau, kai aktyvumas prieš pikornavirusą turi EC50 mažesnę arba lygią 10 μΜ H1-HeLa ląstelių kultūroje.

Kitu aspektu išradimas yra skirtas tarpiniams II formulės, geriau II’ formulės, junginiams, kurie yra tinkami tam tikrų junginių sintezei:

kuriuose p yra sveikas skaičius nuo 0 iki 5;

An yra CH arba N, A12 ir kiekvienas iš Au yra nepriklausomai pasirinktas iš C(R₆i)(R6i), N(R₆i), S, S(O), S(O)₂ ir O, o A₁₄ yra NH arba NR₆i, kur kiekvienas R₆i yra nepriklausomai H, alkilas, acilas arba arilas, su sąlyga, kad ne daugiau nei du heteroatomai būtų iš eilės aukščiau pavaizduotame žiede II formulėje, sudarytoje iš An, A₁₂, (Ai₃)_n, A₁₄ ir C=O;

kiekvienas iš R₁₄₁ yra nepriklausomai H arba žemesnysis alkilas;

R51 yra H, alkilas, acilas arba arilas;

R52, R53 ir R54 yra nepriklausomai pasirinkti iš H, hidroksilo, alkilo, acilo ir arilo; arba bet kurie du iš R₅₂, R₅₃ ir R₅₄ kartu sudaro =0 arba =C(Rs7)(R58), kur R57 ir Rss yra nepriklausomai pasirinkti iš H, alkilo, CO₂(Ci-C6)alkilo, C(O)N(Ci-C6)alkilo ir CO₂(arilo); ir

R55 ir R56, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H arba tinkama azotą blokuojanti grupė. Išradimas taip pat yra skirtas II ir ΙΓ formulių junginių farmaciškai priimtinoms druskoms.

Šis išradimas taip pat yra susijęs su farmacinėmis kompozicijomis, kuriose yra terapiškai efektyvus kiekis bent vieno I formulės junginio, jo provaisto, jo farmaciškai priimtinos druskos, jo farmaciškai aktyvaus metabolito arba jo solvato. Be to, išradimas yra susijęs su pikornavirusinės 3C proteazės inhibavimo būdais, skiriant terapiškai efektyvų kiekį bent vieno I formulės junginio, arba jo provaisto, jo farmaciškai priimtinos druskos, jo farmaciškai aktyvaus metabolito arba jo solvato.

Smulkus išradimo aprašymas ir tinkamiausi jo įgyvendinimo variantai

Šis išradimas yra susijęs su junginiais, kurių formulė I: O R₇ O R, Z

kurioje Y, Ri, R₂, R3. Rs. Rs, R7, Rs, Rg, Z ir Z1 yra tokie kaip apibūdinta aukščiau, ir jų farmaciškai priimtinomis druskomis, provaistais, aktyviais metabolitais ir solvatais. Pageidautina, kad tokie junginiai, farmaciškai priimtinos druskos, provaistai, aktyvūs metabolitai ir solvatai turėtų aktyvumą prieš pikornavirusą geriau prieš rinovirusą atitinkantį EC50 mažesnei arba lygiai 100 μΜ H1-HeLa ląstelių kultūros teste, geriau, atitinkantį EC₅₀ mažesnę arba lygią 10 μΜ H1-HeLa ląstelių kultūros teste.

Šis išradimas taip pat yra susijęs su tinkamesniais junginiais, kurių formulės I-A, l-B ir l-C:

O R7 R_v O R? Z

(I-A),

kuriose R_y (I-A formulėje) yra H arba žemesnysis alkilas, o Ri, R₂, R3, Rs, Re, R7, Rs, R9, Z ir Z1 yra tokie kaip apibūdinta aukščiau, ir jų farmaciškai priimtinomis druskomis, provaistais, aktyviais metabolitais ir solvatais.

Išradimo I-A formulės junginiai, kurie čia yra vadinami “panašiais į peptidus” junginiais, l-B, kurie čia yra vadinami “ketometileno tipo” junginiais, ir l-C, kurie čia vadinami “depsipeptidiniais” junginiais, skiriasi savo karkasais, kurie gali veikti specifinį biopasiskirstymą arba kitas fizikines savybes; vis tik visi jie pasižymi stipriu rinovirusinės proteazės inhibavimo aktyvumu.

Tinkamiausiuose aukščiau duotų I-A, l-B ir l-C formulių junginių variantuose:

R1 yra H, F arba alkilo grupė;

R_y (I-A formulėje) yra H arba metilas; kiekvienas iš R_3l Rs ir Re yra H;

R₂ yra pasirinktas iš vienos iš tokių liekanų:

R6 yra alkilo grupė, kurioje gali būti kaip tinkamiausias pakaitas arilo grupė;

R₇ yra alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikoalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė;

Ra yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų, pasirinktų iš O, N ir S, geriau, kai bent vienas iš heteroatomų yra azotas, kuris neturi pakaitų arba turi pakaitų kur geriau, kai galimi pakaitai yra halogenas arba žemesnysis alkilas, o dar geriau vienas chloras arba fluoras, arba metilo grupė; ir

Z ir Z1, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, F, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -C(O)R₂i, CO2R21, -CN, -C(O)NR₂iR₂2, -C(O)NR₂₁OR₂₂, -C(S)R_21i -C(S)NR₂₁R_22i -NO_2i SOR₂i, -SO₂R₂i, -SO₂NR₂iR₂₂, -SO(NR₂i)(OR22), -SONR₂i, -SO₃R₂i, PO(OR₂i)₂, -PO(R₂₁)(R₂₂), -PO(NR₂₁R₂₂)(OR₂₃), -PO(NR₂iR₂₂)(NR₂₃R₂4), C(O)NR₂iNR₂₂R₂₃ arba -C(S)NR₂₁NR₂₂R_23i kur Z ir Z1 abu kartu nėra H ir kur R21, R22, R23 ir R₂4, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba kur bet kurie du iš R21, R22, R23 ir R24, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterociklinę grupę, arba Z ir Z1 (abu tokie kaip apibūdinta aukščiau) kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę.

Tinkamiausiame variante šio išradimo junginiai yra tokie, kurių formulės

kuriose:

R_b Z ir Z1 yra tokie kaip apibūdinta aukščiau; n yra 1 arba 2;

R_y (I-A formulėje) yra H arba žemesnysis alkilas;

R6 yra alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas arba heteroarilas;

R7 yra alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas, heteroarilas, -OR17,

-SR17, -NR₁₇Ri8, -NR19NR17R18 arba —NR17OR18. kur R17, R18 ir R^g nepriklausomai vienas nuo kito yra H, alkilas, cikloalkilas, heterocikloalkilas, arilas, heteroarilas arba acilas;

R_g yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų, pasirinktų iš O, N ir S, kuris neturi pakaitų arba turi pakaitų, kur geriau, kai galimi pakaitai yra viena arba dvi žemesniojo alkilo grupės ir/arba halogenai.

Išradimas taip pat yra susijęs su tokių junginių provaistais, farmaciškai priimtinomis druskomis, farmaciškai aktyviais metabolitais ir solvatais.

Tinkamiausiame variante šio išradimo RVP inhibuojantys junginiai yra junginiai bet kurios iš stereospecifinių formulių I-A”, l-B” ir l-C”: ’

kuriose R_y, Ri, r₂, Re, R7 R9, Z ir Z1 yra tokie kaip apibūdinta aukščiau, ir jų farmaciškai priimtinos druskos, provaistai, aktyvūs metabolitai ir solvatai.

Tinkamiausiuose iš I-A”, l-B” arba l-C” junginiuose:

R1 yra H, F arba metilas,

R_y (I-A” formulėje) yra H arba metilas;

R₂ yra pasirinktas iš vienos iš tokių liekanų:

Re yra ariImetilas arba ariltiometilas, kur geriausia, kai arilas yra pakaitų galinti turėti fenilo grupė;

Rz yra alkilo grupė, geriausia pasirinkta iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1-propilo ir arilmetilo, kur geriausia, kai arilas yra fenilas arba naftilas;

Rgyra izoksazoiilas, oksazolilas arba oksadiazolilas, kuriuose pakaitais gali būti viena arba dvi žemesniojo alkilo grupės ir/arba halogenai; ir

Z yra H, o Zi yra -CO2R21, -CN arba -C(O)NR₂iR₂2, kur R₂₁ ir R22 yra tokie kaip apibūdinta aukščiau, arba Z ir Z1 kartu sudaro ciklinį esterį arba amidą.

Dar tinkamesni šio išradimo RVP inhibuojantys agentai yra junginiai,

kuriose n, R_y, R1, R₂o, R6, R7, R9, Z ir Ζϊ yra tokie kaipapibūdinta aukščiau, ir jų farmaciškai priimtinos druskos, provaistai, aktyvūs metabolitai ir solvatai.

Tinkamiausiuose I-A’”, l-B”’ arba l-C”’junginiuose:

Rt yra H, F arba metilas,

R_y (I-A” formulėje) yra H arba metilas;

R20 yra vandenilis;

R₆ yra arilmetilas arba ariltiometilas, kur geriausia, kai arilas yra pakaitų neturintis fenilas arba fenilas, pakaitais turintis halogeną žemesnįjį alkilą ir/arba žemesniąją alkoksigrupę;

R7 yra alkilo grupė, geriausia pasirinkta iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1-propilo ir arilmetilo, kur geriausia, kai arilo grupė yra fenilas arba naftilas;

Rg yra izoksazolilas, oksazolilas arba oksadiazolilas, kuriuose pakaitais gali būti viena arba dvi žemesniojo alkilo grupės ir/arba halogenai; ir

Z yra H, o Z1 yra -CO2R21, -CN arba -C(O)NR₂iR22, kur R₂i ir R₂₂ yra tokie kaip apibūdinta aukščiau, arba Z ir Z1 kartu sudaro ciklinį esterį arba amidą.

Ypatingai tinkamuose šio išradimo I bendrosios formulės (ir iš jos išvestų bendrųjų formulių) junginiuose R1 yra H arba F.

Kitu aspektu šis išradimas yra skirtas tarpiniams junginiams, kurių formulės II ir II':

kuriuose kintamieji (p, An, A₁₂, A₁₃, A₁₄, R51, R52, R53, R54, R55, Rse ir R141) yra tokie kaip apibūdinta aukščiau. Šie junginiai tinka farmaciškai naudingiems I formulės junginiams sintetinti.

Tinkamiausios R55 ir R₅₆ grupės yra H ir tinkamos azotą blokuojančios grupės, pavyzdžiui, BOC (t-butiloksikarbonilas), CBZ (benziloksikarbonilas), FMOC (fluoren-9-metiloksikarbonilas), kiti alkiloksikarbonilai (pvz., metiloksikarbonilas) ir tritilas (trifenilmetilas). Kitas tinkamas azotą blokuojančias grupes nesunkiai parinks specialistas (žr. pvz., Greene and Wutz, Protecting Groups in Chemical Synthesis (2^nd ed.), John VViley & Sons, NY (1991)). Tinkamiausios R₅₂, R53 ir R54 grupės yra H, alkoksigrupė, hidroksilas ir karbonilas.

Tinkamiausi II formulės junginiai yra šie toliau duodami junginiai, kuriuose P_N yra tinkama azotą blokuojanti grupė, o q yra 1 arba 2:

o o

Kiti tinkamiausi tarpiniai junginiai apima šiuos toliau duodamus junginius, kuriuose BOC yra t-butiloksikarbonilas:

Iš šių junginių tinkamiausi stereoizomerai yra:

Ypatingai tinkami tarpiniai junginiai yra šie:

co₂Et o,

NH

HOOC NH₂

i |_^₂^ .2 . .^1 ,

BOC BOC

Pagal įprastą šioje srityje žymėjimą yra naudojamas struktūrinėse formulėse pažymėti jungčiai, t.y. liekanos arba pakaito prijungimo taškui prie šerdinės arba karkasinės struktūros.

Kai cheminėse struktūrose yra chiralinių anglies atomų, jeigu nėra pavaizduota konkreti orientacija, laikoma, kad išradimas apima abi stereoizomerines formas.

Čia naudojamas terminas “alkilo grupė” reiškia tiesiosios arba šakotosios grandinės sočių ir/arba nesočių anglies atomų ir vandenilio atomų vienvalentį radikalą tokį kaip metilas (Me), etilas (Et), propilas, izopropilas, butilas, izobutilas, t-butilas, etenilas, pentenilas, butenilas, propenilas, etinilas, butinilas, propinilas, pentinilas, heksinilas ir panašūs, kurie gali neturėti pakaitų (t.y. turėti tik anglį ir vandenilį), arba gali turėti vieną arba daugiau tinkamų pakaitą kaip apibūdinta žemiau (pvz. vieną arba daugiau halogeną kaip antai F, Cl, Br ir I, iš kurių tinkamiausi yra F ir Ci). Priimama, kad “žemesnioji alkilo grupė” reiškia alkilo grupę, turinčią 1-4 anglies atomus grandinėje.

Laikoma, kad “cikloalkilo grupė” reiškia nearomatinį vienvalentį monociklinį, biciklinį arba triciklinį radikalą turintį 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 arba 14 žiedo anglies atomų, iš kurių kiekvienas gali būti sotus arba nesotus, ir kuriame gali nebūti pakaitų arba būti vienas arba daugiau žemiau apibūdintų pakaitų, ir su juo gali būti kondensuota viena arba daugiau heterocikloalkilo grupių arilo grupių arba heteroarilo grupių kurios pačios gali neturėti pakaitų arba turėti vieną arba daugiau pakaitų. Cikloalkilo grupių iliustraciniais pavyzdžiais yra tokios liekanos:

ir

Laikoma, kad “heterocikloalkilo grupė” reiškia nearomatinį vienvalentį monociklinį, biciklinį arba triciklinį radikalą kuris yra sotus arba nesotus, turintį 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 arba 18 žiedo atomų [kuriuos įeina 1, 2, 3, 4 arba 5 heteroatomai, pasirinkti iš azoto, deguonies ir sieros, kur šiame radikale nėra pakaitų arba yra vienas arba daugiau žemiau apibūdintų tinkamų pakaitų ir su juo gali būti kondensuota viena arba daugiau cikloalkilo grupių, arilo grupių arba heteroarilo grupių, kurios pačios gali neturėti pakaitų arba turėti vieną arba daugiau pakaitų. Heterocikloalkilo grupių iliustraciniais pavyzdžiais yra tokios liekanos:

Laikoma, kad “arilo grupė” reiškia aromatinį vienvalentį monociklinį, biciklinį arba triciklinį radikalą, turintį 6, 10, 14 arba 18 žiedo anglies atomų, kuriame gali nebūti pakaitų arba gali būti vienas arba daugiau žemiau

I apibūdintų tinkamų pakaitų, ir su juo gali būti kondensuota viena arba daugiau cikloalkilo grupių, heterocikloalkilo grupių arba heteroarilo grupių kurios pačios gali neturėti pakaitų arba turėti vieną arba daugiau pakaitų. Arilo grupių iliustraciniais pavyzdžiais yra tokios liekanos:

Laikoma, kad “heteroarilo grupė” reiškia aromatinį vienvalentį monociklinį, biciklinį arba triciklinį radikalą turintį 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 arba 18 žiedo atomų į kuriuos įeina 1, 2, 3, 4 arba 5 heteroatomai, pasirinkti iš azoto, deguonies ir sieros, kur šiame radikale nėra pakaitų arba yra vienas arba daugiau žemiau apibūdintų tinkamų pakaitų ir su juo gali būti kondensuota viena arba daugiau cikloalkilo grupių heterocikloalkilo grupių arba arilo grupių kurios pačios gali neturėti pakaitų arba turėti vieną arba daugiau pakaitų. Heteroarilo grupių iliustraciniais pavyzdžiais yra tokios liekanos:

Laikoma, kad “heterciklas” reiškia heteroarilo arba heterocikloalkilo grupę (kiekvienoje iš ją kaip apibūdinta aukščiau, gali būti pakaitų).

Laikoma, kad “acilo grupė reiškia -C(O)-R radikalą kur R yra pakaitas, toks kaip apibūdinta aukščiau.

Laikoma, kad “tioacilo grupė” reiškia -C(S)-R radikalą kur R yra pakaitas, toks kaip apibūdinta aukščiau.

Laikoma, kad “sulfonilo grupė” reiškia -SO2R radikalą kur R yra pakaitas, toks kaip apibūdinta aukščiau.

Laikoma, kad “hidroksilo grupė” reiškia -OH radikalą

Laikoma, kad “aminogrupę” reiškia -NH2 radikalą.

Laikoma, kad “alkilaminogrupė” reiškia -NHR_a radikalą kur R_a yra alkilo grupė.

Laikoma, kad “dialkilaminogrupė” reiškia -NR_aR_b radikalą kur R_a ir R_b nepriklausomai viena nuo kitos yra alkilo grupė.

Laikoma, kad “alkoksigrupė” reiškia -OR_a radikalą kur R_a yra alkilo grupė. Alkoksigrupių pavyzdžiais yra metoksi-, etoksi-, propoksi- ir panašios grupės.

Laikoma, kad “alkoksikarbonilo grupė” reiškia -C(O)OR_a radikalą kur R_a yra alkilo grupė.

Laikoma, kad “alkilsulfonilo grupė” reiškia -SO2R_a radikalą kur R_a yra alkilo grupė.

Laikoma, kad “alkilaminokarbonilo grupė” reiškia -C(O)NHR_a radikalą kur R_a yra alkilo grupė.

Laikoma, kad “dialkilaminokarbonilo grupė reiškia -C(O)NR_aR_b radikalą kur R_a ir R_b nepriklausomai viena nuo kitos yra alkilo grupė.

Laikoma, kad “merkaptogrupė” reiškia -SH radikalą.

Laikoma, kad “alkiltiogrupė” reiškia -SR_a radikalą kur R_a yra alkilo grupė.

Laikoma, kad “karboksigrupė” reiškia -C(O)OH radikalą

Laikoma, kad “karbamoilo grupė” reiškia -C(O)NH₂ radikalą.

Laikoma, kad “ariloksigrupė” reiškia -OR_C radikalą kur Re yra arilo grupė.

Laikoma, kad “heteroariloksigrupė” reiškia -ORd radikalą kur Rd yra heteroarilo grupė.

Laikoma, kad “ariltiogrupė” reiškia -SRc radikalą kur R_c yra arilo grupė.

Laikoma, kad “heteroariltiogrupė” reiškia -SRd radikalą kur Rd yra heteroarilo grupė.

Laikoma, kad terminas “tinkama organinė liekana reiškia bet kokią organinę liekaną kurią įprasto testavimo būdu specialistai pripažįsta nepalankiai neveikiančia išradimo junginių inhibicinio aktyvumo. Tinkamų organinių liekanų iliustraciniais pavyzdžiais yra (bet jomis neapsiribojama) hidroksilo grupės, alkilo grupės, oksogrupės, cikloalkilo grupės, heterocikloalkilo grupės, arilo grupės, heteroarilo grupės, acilo grupės, sulfonilo grupės, merkaptogrupės, alkiltiogrupės, alkoksigrupės, karboksigrupės, aminogrupės, alkilaminogrupės, dialkilaminogrupės, karbamoilo grupės, ariltiogrupės, heteroariltiogrupės ir panašios.

Laikoma, kad terminas “pakaitas” arba “tinkamas pakaitas” reiškia bet kokį pakaitą kurį įprasto testavimo būdu specialistai gali atpažinti arba pasirinkti. Tinkamų pakaitų iliustraciniais pavyzdžiais yra hidroksilo grupės, halogenai, oksogrupės, alkilo grupės, acilo grupės, sulfonilo grupės, merkaptogrupės, alkiltiogrupės, alkoksigrupės, cikloalkilo grupės, heterocikloalkilo grupės, arilo grupės, heteroarilo grupės, karboksigrupės, aminogrupės, alkilaminogrupės, dialkilaminogrupės, karbamoilo grupės, ariloksigrupės, heteroariloksigrupės, ariltiogrupės, heteroariltiogrupės ir panašios.

Laikoma, kad terminas “gali būti pakeistas” aiškiai rodo, kad nurodytoje grupėje nėra pakaitų arba joje yra vienas arba daugiau tinkamų pakaitą nebent galimi pakaitai yra aiškiai apibūdinti, o šiuo atveju terminas rodo, kad grupėje nėra pakaitą arba yra konkrečią pakaitą Kaip aukščiau minėta, įvairios grupės gali neturėti pakaitą arba turėti pakaitų (t.y. jose gali būti pakaitų), jeigu nenurodyta kitaip (pvz. pažymint, kad konkrečioje grupėje nėra pakaitų).

Laikoma, kad “provaistas” reiškia junginį, kuris fiziologinėse sąlygose, solvolizės būdu arba dėl metabolizmo paverčiamas konkrečiu junginiu, kuris yra farmaciškai aktyvus.

Laikoma,, kad “farmaciškai aktyvus metabolitas” reiškia farmakologiškai aktyvų produktą gaunamą vykstant konkretaus junginio metabolizmui organizme.

Laikoma, kad “solvatas” reiškia konkretaus junginio farmaciškai priimtiną solvato formą kuri išlaiko tokio junginio biologinį efektyvumą. Solvatų pavyzdžiais yra išradimo junginių deriniai su vandeniu, izopropanoliu, etanoliu, metanoliu, DMSO, etilacetatu, acto rūgštimi arba etanolaminu. Laikoma, kad “farmaciškai priimtina druska reiškia druską kuri išlaiko konkrečių junginių laisvų rūgščių ir bazių biologinį efektyvumą ir kuri nėra biologiškai ar kaip nors kitaip nepageidautina. Farmaciškai priimtinų druskų pavyzdžiais yra sulfatai, pirosulfatai, rūgštieji sulfatai, sulfitai, rūgštieji sulfitai, fosfatai, monohidrofosfataį dihidrofosfatai, metafosfatai, pirofosfatai, chloridai, ~~ bromidai, jodidai, acetatai, propionatai, dekanoatai, kaprilatai, akrilatai, -₂ formiatai, izobutiratai, kaproatai, heptanoatai, propiolatai, oksalatai, malonatai, sukcinatai, suberatai, sebacatai, fumaratai, maleatai, butin-1,4-dioatai, heksin1,6-dioatai, benzoatai, chiorbenzoatai, metilbenzoatai, dinitrobenzoatai, hidroksibenzoatai, metoksibenzoatai, ftalatai, sulfonatai, ksilensulfonatai, feniiacetatai, feniipropionatai, fenilbutirataį citratai, laktatai, γ-hidroksibutiratai, glikoliatai, tartratai, metansulfonatai, propansulfonatai, naftaien-1-sulfonatai, naftalen-2-sulfonatai ir mandelatai.

Jeigu išradimo junginys yra bazė, norima druska gali būti pagaminama bet kokiu žinomu būdu, įskaitant laisvos bazės veikimą neorganine rūgštimi, tokia kaip vandenilio chlorido rūgštis, vandenilio bromido rūgštis, sulfato rūgštis, nitrato rūgštis, fosfato rūgštis ir panašios, arba organine rūgštimi, tokia kaip acto rūgštis, maleino rūgštis, gintaro rūgštis, migdolų rūgštis, fumaro rūgštis, malono rūgštis, piruvo rūgštis, oksaio rūgštis, glikolio rūgštis, salicilo rūgštis, piranozidilo rūgštis, tokia kaip giukurono rūgštis arba galakturono rūgštis, alfa-hidroksirūgštis, tokia kaip citrinų rūgštis arba vyno rūgštis, aminorūgštis, tokia kaip asparto rūgštis arba glutamo rūgštis, aromatinė rūgštis, tokia kaip benzenkarboksirūgštis arba cinamono rūgštis, sulfonrūgštis, tokia kaip p-toluensulfonrūgštis arba etansulfonrūgštis, arba panašios.

Jeigu išradimo junginys yra rūgštis, norima druska gali būti pagaminama bet kokiu žinomu būdu, įskaitant laisvos rūgšties veikimą neorganine arba organine baze, kaip antai aminu (pirminiu, antriniu arba · tretiniu), šarminio metalo arba žemės šarminio metalo hidroksidu arba panašiais. Tinkamų druskų iliustraciniais pavyzdžiais yra organinės druskos gautos su aminorūgštimis, tokiomis kaip glicinas ir argininas, amoniaku, pirminiais, antriniais ir tretiniais aminais, ir ciklinais aminais, tokiais kaip piperidinas, morfolinas ir piperazinas, bei neorganinės druskos, kaip antai natrio, kalcio, kalio, magnio, mangano, geležies, vario, cinko, aliuminio ir ličio.

Junginių druskų arba solvatų kurie yra kieti, atveju specialistai supras, kad išradimo junginiai, druskos arba solvatai gali egzistuoti skirtingose kristalinėse formose, ir yra laikoma, kad visas jas apima šis išradimas ir konkrečios formulės.

Išradimo junginiai gali egzistuoti kaip atskiri stereoizomerai, racematai ir/arba enantiomerų ir/arba diasteromerų mišiniai. Laikoma, kad visi tokie atskiri stereoizomerai, racematai ir jų mišiniai patenka į plačiąją išradimo sferą. Tačiau yra pageidautina, kad išradimo junginiai būtų naudojami optiškai grynos formos.

Kaip paprastai yra aišku šios srities specialistams, optiškai grynas junginys yra toks, kuris yra enantiomeriškai grynas. Čia naudojamas terminas “optiškai grynas” yra suprantamas kaip reiškiantis junginį bent jau pakankamo aktyvumo. Pageidautina, kad atskiro enantiomero, kuris yra junginyje turinčiame norimą farmakologiškai gryną šio išradimo junginį, optinis kiekis sudarytų bent 90 % atskiro izomero (80 % enantiomerinis perteklius), geriau bent 95 % (90 % e.p.), dar geriau - bent 97,5 % (95 % e.p.) ir visų geriausia bent 99 % (98 % e.p.).

Geriau, kad I formulės (arba bet kurioje iš jos išvestų formulių) junginiuose Ri būtų H arba F.

Pageidautina, kad I formulės junginiuose R₉ būtų neturinti pakaitų arba turinti pakaitų izoksazolilo grupė, kurioje geriausiais galimais pakaitais yra viena arba dvi metilo grupės ir/arba halogenai.

Ypatingai tinkami išradimo įgyvendinimo variantai yra aprašyti žemiau remiantis toliau duodama formule I-A”:

H

O A₆ H R-)

Tinkamiausi šio išradimo junginiai apima peptidinius (panašius į peptidus) aukščiau duotos I-A” formulės junginius (A-1) - (A-8), kuriuose Ri yra H, Z yra H, R_y yra H, o R₂, Re, R7, Z1 ir R_g yra tokie, kaip atitinkamai apibūdinta žemiau:

(A-1) R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, Re yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, Z1 yra CO₂CH₂CH₃, o R₉ yra ^H3^C (A-2) R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, Z1 yra CO₂CH₂CH₃, o R₉ yra (A-3) R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, Re yra

Z1 yra CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C (A-4) R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra

yra CO₂CH₂CH₃, o R₉ yra ^H3^C

T IT (A-5) R₂ yra ^z , Re yra F , R? yra CH(CH₃)₂, Zi yra

-N

CO₂CH₂CH₃₎ o R₉ yra ^H3^C

(A-6)) R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH_2l R₃ yra F _f R₇ yra CH(CH₃)₂

-N.

Zi yra CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C

T (A-7) R₂ yra * , R₆ yra F

s?

R₇ yra C(CH₃)₃, Zi yra

-N 'MCO₂CH₂CH₃, o R₉ yra ^H3^C

A jT'· , R₆ yra F^^ , R₇ yra CH(CH₃)₂, Zi yra (A-8) R₂ yra

-N \\_S_

CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C

Tinkamiausi panašūs į peptidus I-A’” formulės junginiai dar apima žemiau duodamus junginius (A-9) - (A-13), kuriuose Ri yra H, Z yra H, Zi yra CO₂CH₂CH₃, R_y yra CH₃, o R₂, R_s, R₇ ir Rg yra tokie, kaip atitinkamai apibūdinta žemiau:

(A-9) R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra F

, R7 yra 'N

H

o Rg yra ^H3^C (A-10) R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, o

Rg yra ^H3^C

(A-11) R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, Re yra F , R₇ yra

(A-12) R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra F .O· , R7 yra ·

-N.

CH₂CH(CH₃)₂, o R₉ yra ^H3°

H J (A-13) R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra , R₇ yra

'N o Rg yra ^H3^C

Kiti tinkamiausi panašūs į peptidus junginiai apima tokius junginius: o^nh₂

H U ΝχΛ

CO₂CH₂CH₃ (A-14)

o

N

H

NH,

CO₂CH₂CH₃ (A-15)

N

H

O

N

Mh ^h

H °

O

0<sx^NH2

CO₂CH₂CH₃ (A-16)

(A-17) (A-18) (A-19)

co₂ch₂ch₃ (A-20)

(A-21) hn-n

O

(A-22) o^nh₂

CO₂CH₂CH₃ (A-23)

(A-24) (A-25) (A-26)

(A-27)

(A-28)

Tinkamiausi šio išradimo ketometileninio tipo junginiai (B-1) - (B-4) yra aprašyti žemiau nurodant toliau duodamą formulę l-B”:

V N.

\\_5_ yra H, Zi yra CO2CH₂CH3, o Rg yra ^H3^C • o.

/r> _ (B-2) R₂ yra , R₆ yra F'^'-^ _t r₇ yra CH(CH₃)₂, Z yra H,

-N.

\\_5_

Zi yra CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C (B-3) R₂ yra o _{R F}JU , R₆ yra F , R₇ yra CH(CH₃)₂, Z ir Z, ^yi5 kartu yra , kur karbonilo grupė yra cis-padėtyje vandenilio atžvilgiu

-N.

\\_S_ atitinkanti R! I formulėje, o Rg yra ^H3^C (B-4) R₂ yra

H

, Rs yra F -N

, R₇ yra CH(CH₃)₂, Z yra H,

7χ yra CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C

Tinkamiausi šio išradimo depsipeptidinio tipo junginiai (C-1) ir (C-2) yra aprašyti žemiau nurodant toliau duodamą formulę l-C”, kurioje Ri yra H:

o r₇ o r₂ z

RgY N 'γ' ° N

H O Λ R.

(l-C) (C-1) Z yra H, R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra F , R? yra

-N

H,C'

CH(CH₃)_2t Zi yra CO₂CH₂CH₃, o Rg yra 3'

OV-N (C-2) Z yra H, R₂ yra , Re yra , r₇ yra CH(CH₃)₂, ί-Ν.

\\_s_

Zi yra CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C

Gali būti pagaminti papildomi I formulės junginiai, pasirenkant kintamuosius iš tokių pakaitų:

R_y = H arba CH₃; Ri = H arba CH₃;

H arba r₂

X) o

//

'VVV'

R₆ = ¹ arba fenilmetilas (t.y. benzilas), kur arilo grupėje gali būti vienas, du arba trys pakaitai, nepriklausomai vienas nuo kito pasirinkti iš halogenų, metoksigrupės ir metilo;

R7 = 2-metil-1-propilas, 2-propilas, 2-metil-2-propilas, benzilas arba ‘y „ r_q= y°yc °

K '/r-s,

f₃c.

o//

N arba

Šis išradimas taip pat yra skirtas pikornavirusinės 3C proteazės aktyvumo inhibavimo būdui, apimančiam šios proteazės sąlytį su efektyviu kiekiu I formulės junginio, jo farmaciškai priimtinos druskos, provaisto, farmaciškai aktyvaus metabolito arba solvato. Pavyzdžiui, pikornavirusinės 3C proteazės aktyvumas gali būti inhibuojamas žinduolio audiniuose, skiriant jam I formulės junginį, jo farmaciškai priimtiną druską provaistą farmaciškai aktyvų metabolitą arba solvatą. Labiau pageidautina, kad šis būdas būtų skirtas rinovirusinės proteazės aktyvumo inhibavimui.

Laikoma, kad terminai “gydant” arba “gydymas” reiškia žinduolių, kaip antai žmogaus, ligos būklės bent jau sušvelninimą kuri yra palengvinama inhibuojant vienos arba daugiau pikornavirusinių 3C proteazių tokių kaip žmogaus rinoviruso, žmogaus polioviruso, žmogaus Koksaki viruso, encefalomiokardito viruso, meningito viruso, hepatito A viruso, aktyvumą ir apima: (a) profilaktinį žinduolio gydymą kai nustatyta, kad žinduolis yra linkęs į tokią ligą bet dar nėra diagnozuota, kad jis serga šia liga; (b) ligos būklės nuslopinimą ir/arba (c) ligos būklės dalinį arba pilną palengvinimą

Išradimo junginių, kaip pikornavirusinės 3C proteazės aktyvumo inhibitorių, aktyvumas gali būti išmatuotas bet kokiu tinkamu šioje srityje žinomu metodu, įskaitant in vivo ir in vitro testus. Tinkamo testo aktyvumui išmatuoti pavyzdys yra čia aprašytas priešvirusinis H1-HeLa ląstelių kultūros testas.

I formulės junginių ir jų farmaciškai priimtinų provaistų, druskų, aktyvių metabolitų ir solvatų įvedimas gali būti vykdomas bet kokiu priimtu specialistams žinomu vartojimo būdu. Tinkamų vartojimo būdų pavyzdžiais yra peroralinis, nosinis, parenterinis, vietinis, transderminis ir rektalinis. (patingai tinkamas yra intranosinis vartojimo būdas.

I formulės išradimo junginys arba jo farmaciškai priimtina druska, provaistas, aktyvus metabolitas arba solvatas gali būti vartojami farmacinės kompozicijos pavidalu bet kokia farmacine forma, kurią specialistai pripažįsta tinkama. Tinkamomis farmacinėmis formomis yra kietos, pusiau kietos, skystos arba liofilizuotos vaisto formos, kaip antai tabletės, milteliai, kapsulės, žvakutės, suspensijos, liposomos ir aerozoliai. Šio išradimo farmacinėse kompozicijose taip pat gali būti tinkamų pagalbinių medžiagų, skiediklių, tirpiklių ir nešiklių, o taip pat ir kitų farmaciškai aktyvių agentų priklausomai nuo to, kam jas numatoma panaudoti. Tinkamiausiuose įgyvendinimo variantuose šio išradimo farmacinės kompozicijos yra skirtos intranosiniam vartojimui suspensijų forma.

Priimtini tinkamų farmacinių kompozicijų farmacinių formų pagaminimo būdai yar žinomi arba juos gali įprastais būdais nustatyti šios srities specialistas. Pavyzdžiui, farmaciniai preparatai gali būti pagaminami pagal įprastas farmacinės chemijos metodikas, į kurias įeina stadijos, tokios kaip sumaišymas, granuliavimas ir presavimas, jeigu reikia tablečių formos, arba sumaišymas, užpildymas ir ingredientų ištirpinimas, kurių reikia norint gauti norimą produktą skirtą vartoti peroraliniu, parenteriniu, vietiniu, intravaginaliniu, intranosiniu, intrabronchiniu, intraokuliniu, intraausiniu ir/arba rektaliniu būdu.

Šiose farmacinėse kompozicijose gali būti naudojami kieti arba skysti farmaciškai priimtini nešikliai, skiedikliai, tirpikliai arba pagalbinės medžiagos. Iliustraciniais kietais nešikliais yra krakmolas, laktozė, kalcio sulfato dihidratas, terra alba, sacharozė, talkas, želatina, pektinas, gumiarabikas, magnio stearatas ir stearino rūgštis. Iliustraciniais skystais nešikliais yra sirupas, žemės riešutų aliejus, alyvų aliejus, valgomosios druskos tirpalas ir vanduo. Nešikliuose arba skiedikliuose gali būti tinkama prolonguotą išskyrimą duodanti medžiaga, kaip antai glicerilmonostearatas arba glicerildistearatas, vieni arba su vašku. Kai naudojamas skystas nešiklis, preparatai gali būti sirupo, eleksyro, emulsijos, skystos želatininės kapsulės, sterilaus injekcijoms skirto skysčio (pvz. tirpalo) arba nevandeninės arba vandeninės skystos suspensijos formų.

Farmacinės kompozicijos dozė turi veikliojo junginio (t.y. I formulės junginio arba jo farmaciškai priimtinos druskos, provaisto, veikliojo metabolito arba solvato) bent jau terapiškai efektyvų kiekį, ir geriausia, kai jis yra sudarytas iš vieno arba daugiau farmacinių dozuotų vienetų. Pasirinktą dozę pacientas-žinduolis, pavyzdžiui žmogus, reikalingas gydymo, kuriame tarpininkauja pikornavirusinės 3C proteazės aktyvumo inhibavimas, gali suvartoti bet kokiu žinomu arba tinkamu dozės vartojimo būdu, įskaitant vietinį, pavyzdžiui, kaip tepalą arba kremą peroralinį, rektalinį, pavyzdžiui, kaip žvakutę, parenterinį injekcijos būdu arba nepertraukiamą kaip intravaginalinę, intranosinę, intrabronchinę, intraausinę arba intraokulinę infuziją.

Laikoma, kad “terapiškai efektyvus kiekis reiškia kiekį išradimo junginio, kurio, jeigu jis įvedamas šio junginio reikalingam žinduoliui, pakanka gydymui ligos, palengvinamos inhibuojant vienos arba daugiau pikornavirusinių 3C proteazių, tokių kaip žmogaus rinoviruso, žmogaus polioviruso, žmogaus Koksaki viruso, encefalomiokardito viruso, meningito viruso, hepatito A viruso, aktyvumą. Šio išradimo duoto junginio kiekis, kuris bus terapiškai efektyvus, keisis priklausomai nuo faktorių tokių kaip konkretus junginys, liga ir jos sunkumo laipsnis, gydomo žinduolio identitetas, ir šį kiekį paprastai nustato specialistas.

Iliustracijos tikslams šio išradimo junginių nosinio vartojimo vaisto forma rinovirusinių infekcijų gydymui gali būti pagaminama toliau aprašomu būdu, kur visi procentai yra masės/masės procentai, o suspensija gaminama grynintame vandenyje. I formulės junginys yra mikronizuojamas norint sumažinti dalelių dydį taip, kad Dgo < 10 ųm. Suspensija pagaminama taip, kad galutinė koncentracija būtų nuo maždaug 0,01 % iki maždaug 2 % veikliojo junginio, geriau nuo maždaug 0,2 % iki 2 %. Į ją gali būti įdėta apsaugančios medžiagos, pasirinktos iš šioje srityje žinomų medžiagų pavyzdžiui, benzaikonio chlorido/EDTA, kad atitinkama galutinė koncentracija būtų, pvz., maždaug 0,02%/0,01%. Taip pat gali būti įdėta suspenduojančio agento, tokio kaip mikrokristalinės celiuliozės (galutinė koncentracija maždaug 1 % - 1,5 %, geriau apie 1,2 %) ir natrio karboksimetilceliuliozės (galutinė koncentracija maždaug 0,1 % - 0,2 %, geriausia apie 0,13 %) mišinys. Gali būti įdėta paviršinio aktyvumo medžiagos, tokios kaip polisorbatas 80, kurio galutinė koncantracija yra nuo maždaug 0,05 % iki 0,2 %, geriausia apie 0,1 %. Taip pat gali būti įdėta toniškumo modifikatoriaus, tokio kaip dekstrozė, padarant jo galutinę koncentraciją maždaug nuo 4 % iki 6 %, geriausia apie 5 %. Galutinio tirpalo pH sureguliuojamas iki fiziologinio pH intervalo, pvz. 4-6, naudojant netoksišką rūgštį ir/arba bazę, kaip antai HCI ir/arba NaOH.

Pavyzdinė šio išradimo 17 pavyzdžio junginio nosinio vartojimo vaisto forma turi tokią sudėtį, kur visi procentai yra masės/masės procentai, o suspensija yra pagaminta grynintame vandenyje.

Veiklusis junginys	(B-2)	0,2 -2 %
Apsauganti medžiaga	Benzalkonio chloridas/EDTA	0,02 % / 0,01 %
Suspendavimo agentas	Mikrokristalinė celiuliozė/Na- karboksimetilceliuliozė	1,2%/0,13%
Paviršinio aktyvumo medžiaga	Polisorbatas 80 ,	0,1 %
Toniškumo modifikatorius	Dekštrozė	5%
pH sureguliavimo agentas	NaOH/HCI	pH4-6

Bendrieji sintezės būdai

Šio išradimo (I) formulės junginius yra patogu gaminti šio išradimo būdais, įskaitant toliau aprašytus bendruosius sintezės būdus. Kiekviename iš šių bendrųjų būdų R_1f R₂, R3, Rs, Re, R7, Re, Rg, Ry, Z ir Z1 yra tokie, kaip apibūdinta aukščiau, ir yra naudojamas R₄ (kaip sutrumpinimas), kuris reiškia:

kur R7, Rs ir Rg yra tokie kaip apibūdinta aukščiau.

I bendrajame sintezės būde, tinkančiame panašių į peptidus I-A formulės junginių sintezei, aminorūgštis A, kurioje Pi yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, leidžiama į amido sudarymo reakciją su aminoalkoholiu (arba jo druska) B, gaunant amidą C. Po to junginys C yra deblokuojamas gaunant laisvą aminą (arba jo druską) D. Aminas D ir aminorūgštis E, kurioje gali būti arba R₄ grupė, arba azotą blokuojanti grupė (P2) yra leidžiami į ryšio sudarymo reakciją duodančią junginį F. Junginys F yra oksidinamas į tarpinį junginį G, kuris po to transformuojamas į nesotų produktą H. Jeigu aminorūgštyje E arba bet kurioje iš R (Ri-Rg) grupių ir/arba R_y, ir/arba Z, ir/arba Z1 grupių buvo panaudota blokuojanti grupė, produktas H yra deblokuojamas ir/arba toliau modifikuojamas gaunant deblokuotą arba modifikuotą H.

G . deblokuotas arba modifikuotas H

Kitas tarpinio junginio F pagaminimo būdas yra aprašomas taip. Aminorūgštis E ir aminorūgštis (arba jos druska) I, kurioje P₃ yra atitinkama deguonį blokuojanti grupė, yra leidžiamos į ryšio sudarymo reakciją gaunant tarpinį junginį J. J molekulė yra deblokuojama, gaunant laisvą karboksirūgštį K, kuri po to leidžiama į amido sudarymo reakciją su aminoalkoholiu (arba jo druska) B, gaunant tarpinį junginį F.

II bendrajame būde, kuris taip pat yra tinkamas panašiems į peptidus ΙΑ formulės junginiams sintezuoti, aminorūgštis L, kurioje Pi yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, yra paverčiama į karbonilinį darinį M, kur “Lv” yra atskylanti grupė. Junginys M yra leidžiamas į reakciją kurioje Lv yra pakeičiama R_b gaunant darinį N. Po to darinys N yra transformuojamas į nesotų produktą O. Nesotus junginys O yra deblokuojamas ir gaunamas laisvas aminas (arba jo druska) P, arba modifikuojamas Z ir 2ą grupėse, pirmiausia gaunant O’, po to deblokuojant ir gaunant P. Po to tarpinis junginys P yra leidžiamas į amido sudarymo reakciją su karboksirūgštimi K, gaunant galutinį produktą H. Jeigu bet kurioje iš R (R1-R9) grupių ir/arba R_y, ir/arba Z, ir/arba Z1 grupių buvo panaudotos blokuojančios grupės, produktas H yra deblokuojamas ir/arba toliau modifikuojamas gaunant deblokuotą arba modifikuotą H.

R₂

N deblokuotas arba modifikuotas H

Kitas tarpinio junginio N pagaminimo būdas yra toks kaip aprašyta žemiau. Junginys M yra leidžiamas į reakciją kurioje “Lv yra redukuojama, blokuojant aminoalkoholį Q. Po to tarpinis junginys Q oksidinamas iki darinio

N.

M -*► ► N r₂

Q

III bendrajame būde, kuris taip pat yra tinkamas panašiems į peptidus I-A formulės junginiams sintezuoti, aminorūgštis L, kurioje Pi yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, yra paverčiama į karbonilinį darinį M, kur “Lv” yra atskylanti grupė. Junginys M yra deblokuojamas, gaunant laisvą aminą (arba jo druską) R, kuris po to leidžiamas į amido sudarymo reakciją su karboksirūgštimi K, gaunant tarpinį produktą,S. Po to junginys S arba tiesiogiai paverčiamas karboniliniu tarpiniu junginiu G, arba pirmiausia laipsniškai redukuojamas iki alkoholio F, kuris oksiduojamas iki G. Junginys G leidžiamas į reakciją kurioje gaunamas nesotus galutinis produktas H. Jeigu bet kurioje iš R (R1-R9) grupių ir/arba R_y, ir/arba Z, ir/arba Z1 grupių buvo panaudotos blokuojančios grupės, produktas H yra deblokuojamas ir/arba toliau modifikuojamas gaunant deblokuotą arba modifikuotą H.

-► ^H2ⁿ^R_Lv ₊ K -► r₂

R

deblokuotas arba modifikuotas H

IV bendrajame būde, kuris yra tinkamas panašiems į peptidus I-A formulės junginiams sintezuoti, laisvas aminas (arba jo druska) P, pagamintas iš tarpinio junginio O kaip aprašyta II bendrajame būde, yra paverčiamas amidu T, veikiant aminorūgštimi A, kur Pt yra atitinkama azotą blokuojanti grupė. Junginys T yra toliau deblokuojamas iki laisvo amino (arba jo druskos) U, kuris po to paverčiamas į H veikiant aminorūgštimi E. Jeigu bet kurioje iš R (R1-R9) grupių ir/arba R_y, ir/arba Z, ir/arba Ζχ grupių buvo panaudotos blokuojančios grupės, produktas H yra deblokuojamas ir/arba toliau modifikuojamas gaunant deblokuotą arba modifikuotą H.

........ deblokuotas arba modifikuotas H

V bendrajame būde, kuris yra tinkamas ketometileninių l-B formulės junginių sintezei, optiškai aktyvus laktonas AA, kuriame P₄ yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, o R5 ir Rs yra H (kuris gali būti pagamintas pagal žemiau aprašytą metodą ir įvairius literatūroje aprašytus metodus, įskaitant: (a) Herold et ak, J. Org. Chem. 1989, 54, 1178; (b) Bradbury et ak, Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3845; (c) Bradbury et ak, J. Med. Chem. 1990, 33, 2335; (d) Wuts et ak, J. Org. Chem. 1992, 57, 6696; (e) Jonės et ak, J. Org. Chem. 1993, 58, 2286; (f) Pegorier et alk, Tetrahedron Lett. 1995, 36,

2753; ir (g) Dondoni et ak, J. Org. Chem. 1995, 60, 7927), yra transformuojamas pagal dviejų stadijų metodiką (bazinė hidrolizė ir po jos einantis oksidinimas) į karboksirūgštį BB. Ši medžiaga neišskiriama, bet toliau leidžiama į amidinio ryšio sudarymo reakciją su aminu (arba jo druska) P, gaunant galutinį produktą CC. Blokuojanti grupė P₄ kartu su kitomis papildomomis blokuojančiomis grupėmis, kurios buvo panaudotos bet kurioje iš R (Rn R₂, R_3i R6 ir/arba Rz) grupių ir/arba Z, ir/arba Zi grupių yra po to deblokuojama ir/arba toliau modifikuojama gaunant deblokuotą arba modifikuotą CC.

Laktonas AA gali būti pagamintas optiškai aktyvios formos pagal toliau duodamą VI bendrąjį būdą (žr.: Herold et ak, J. Org. Chem. 1989, 54, 1178; Bradbury et ak, Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3845; ir Bradbury et ak, J. Med. Chem. 1990, 33, 2335). γ,δ-Nesoti karboksirūgštis DD, kurioje yra Rz, yra paverčiama atitinkamu chloranhidridu (neparodyta). Šis chloranhidridas yra leidžiamas į amidinį ryšį sudarančią reakciją su chiraliniu aminu arba chiraliniu oksazolidonu, gaunant darinį EE (kuriame Xi yra chiralinis aminas arba chiralinis oksazolidonas). Po to junginys EE yra deprotonuojamas ir susidaręs enoliatas diastereoselektyviai alkilinamas R6 atitinkančiu elektrofilu, gaunant junginį FF, kuriame R₅ yra H. Po to ši medžiaga leidžiama į halogenlaktonizacijos reakciją gaunant halogen-laktoną GG, kuriame R₅ ir Re yra H, o “hal” yra Br arba I. Po to halogen-laktonas GG yra paverčiamas azidu HH, o tada ši medžiaga paverčiama laktonu AA, kuriame P₄ yra atitinkama azotą blokuojanti grupė.

γ,δ-Nesoti karboksirūgštis DD gali būti pagaminta pagal toliau duodamą VII bendrąį būdą (žr.: Herold etai., J. Org. Chem. 1989, 54, 1178). Aldehidas II, kuriame yra R7, yra kopuliuojamas su vinilmagnio bromidu ir gaunamas alkoholis JJ. Po to alkoholis JJ transformuojamas į γ,δ-nesočią karboksi rūgštį DD pagal trijų stadijų metodiką taip: (I) veikiant dietilmalonatu ir katalitiniu kiekiu Ti(OEt)4 160 °C temperatūroje 1 valandą (ii) kaitinant 190 °C temperatūroje 4 valandas ir (iii) hidrolizuojant etanoliniu KOH virinant su grįžtamu šaldytuvu.

II JJ DD

Karboksirūgštis BB gali būti pagaminta pagal VIII bendrąjį būdą (žr. Hoffman et ai., Tetrahedron, 1997, 53, 7119). Aminorūgštis KK, kurioje yra R₇ ir kurioje P₄ yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, yra paverčiama βketoesteriu LL. Junginys LL yra deprotonuojamas ir susidaręs anijonas yra kondensuojamas su triflatu MM, kuriame yra R6. Tokiu būdu gautas kopuliavimo produktas yra veikiamas trifluoracto rūgštimi, gaunant ketoesterį NN, o ši medžiaga po to hidrolizuojamą ir gaunama karboksirūgštis BB. Jeigu bazinė hidrolizė duoda epimerizaciją ketoesteris NN gali būti peresterintas (alilo alkoholis, Ti(O/'-Pr)4) ir po to deblokuotas neutraliomis sąlygomis (Pd(PPh₃)4, morfolinas) ir gaunama karboksirūgštis BB. Triflatas MM savo ruožtu gali būti pagamintas iš atitinkamo alkoholio, veikiant trifluormetansulfonanhidridu ir 2,6-lutidinu.

Laktonas AA taip pat gali būti pagaminamas pagal IX bendrąjį būdą (žr.: Askin et ak, J. Org. Chem. 1992, 57, 2771; ir McVViIliams et ak, J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 11970). Aminorūgštis KK, kurioje yra R₇ ir P₄ yra atitinkama azotą blokuojanti grupė, yra paverčiama epoksidu OO (vienas diastereomeras) pagal Luly et ak J. Org. Chem. 1987, 52, 1487 aprašytą būdą. Epoksidas OO yra kondensuojamas su anijonu, gautu iš junginio PP, kuriame yra R₆ ir kuriame X₂ yra chiralinė pagalbinė grupė (įskaitant (1S.2R)1-aminoindan-2-olio acetonidą), ir gaunamas kopuliavimo produktas QQ. Po to ši medžiaga ciklizuojama rūgštinėse sąlygose, gaunant laktoną AA. Junginys PP gali būti pagaminamas iš atitinkamos karboksirūgšties (neparodyta) pagal Askin et ak, J. Org. Chem. 1992, 57, 2771 aprašytą būdą.

'M

AA QQ

X bendrasis būdas, kuris yra tinkamas depsipeptidiniams l-C formulės junginiams pagaminti, iliustruoja tarpinio junginio TT sintezės būdą. Aminorūgštis E ir alkoholis RR, kuriame P5 yra atitinkama deguonį blokuojanti grupė, yra leidžiami į esterinį ryšį sudarančią reakciją ir gaunamas tarpinis junginys SS. SS molekulė yra deblokuojama, gaunant laisvą karboksirūgštį

R₆

RR

TT, kuri gali būti naudojama vietoj karboksirūgšties K bet kuriame iš aukščiau aprašytų bendrųjų sintezės būdų.

Specifiniai sintezės būdai

Įvairiems šio išradimo junginiams pagaminti taip pat gali būti naudojami toliau duodami specifiniai būdai.

I specifiniame būde aprašomas specifinio tarpinio junginio 01, kuris gali būti naudojamas kaip tarpinis produktas O aukščiau aprašytuose bendruose būduose, pagaminimas. Taigi, hidrolizuojamas esteris A1 (pagamintas pagal Chida et ai., J. chem. Soc. Chem. Commun. 1992, 1064 aprašymą) ir gaunama rūgštis B1, kuri savo ruožtu transformuojama į oksazolidinoną C1. Po to junginys C1 yra deprotonuojamas ir susidaręs enoliatas yra diastereoselektyviai alkilinamas gaunant alilinį tarpinį junginį D1. Ši medžiaga yra oksidinama ozonolizės būdu, ir gautas aldehidas (neparodytas) yra leidžiamas į redukcinio amininimo reakciją gaunant laktamą E1. Po to rūgštimis katalizuojama E1 metanolizė duoda alkoholį F1. Šis tarpinis junginys yra oksidinamas Swern’o metodu (arba kitose tinkamose oksidinimo srlygose) ir gaunamas aldehidas (neparodytas), kuris po to yra leidžiamas įolefino susidarymo reakciją gaunant specifinį tarpinį junginį 01.

II specifiniame būde aprašomas specifinio tarpinio junginio 02, kuris gali būti naudojamas kaip tarpinis produktas O aukščiau aprašytuose bendruose būduose, pagaminimas. Alilinis tarpinis junginys D1 yra leidžiamas Į hidroborinimo/oksidinimo reakcijų seką ir gaunamas pirminis alkoholis (neparodytas). Ši medžiaga yra oksidinama Swerrio metodu (arba kitose tinkamose oksidinimo sąlygose) ir gautas aldehidas (neparodytas) yra leidžiamas į redukcinio amininimo reakciją gaunant laktamąGI. Po to rūgščių katalizuojama G1 metanolizė duoda alkoholį H1. Šis tarpinis junginys yra oksidinamas Svverrio metodu (arba kitose tinkamose oksidinimo sąlygose) ir gaunamas aldehidas (neparodytas), kuris po to yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją ir gaunamas tarpinis junginys 02.

Aukščiau aprašytuose bendruosiuose būduose, norint pakeisti pakaito R₂ padėtį, vietoj tarpinio junginio O gali būti naudojami tarpiniai junginiai P1,

Ρ2 ir P3.

Žemiau yra aprašyta tarpinio junginio P1 sintezė. Tarpinis junginys C1 (aprašytas aukščiau) yra deprotonuojamas ir susidarantis enoliatas gaudomas atitinkamu disulfidu (simetriniu arba mišriu), gaunant sulfidą p1 (P yra tinkama deguonį blokuojanti grupė). Po to atskeliama deguonį blokuojanti grupė ir gaunamas alkoholis p2. Šis tarpinis junginys yra oksiduojamas Svverrio metodu (arba naudojant kitas tinkamas oksidinimo sąlygas) ir gautas aldehidas (neparodytas) yra leidžiamas į redukcinio amininimo reakciją duodančią laktamą p3. Po to rūgščių katalizuojama p3 metanolizė duoda alkoholį p4. Šis tarpinis junginys yra oksiduojamas Svvern’o metodu (arba naudojant kitas tinkamas oksidinimo sflygas) ir gaunamas aldehidas (taip pat neparodytas), kuris po to yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją gaunant tarpinį junginį p5. Šis junginys gali būti naudojamas vietoj tarpinio junginio O aukščiau aprašytuose bendruosiuose sintezės būduose; kitu atveju, gali būti pašalinama laktamo blokavimo grupė ir gaunamas tarpinis junginys P1.

p5 P4 p3

Norint susintezuoti tarpinį junginį P2, tarpinis junginys C1 yra. . deprotonuojamas ir susidarantis enoliatas yra .gaudomas atitinkamu elektrofilinio deguonies šaltiniu (pvz. oksaziridinu), gaunant alkoholį p6. Šis tarpinis junginys yra alkilinamas tinkamą funkcinę grupę turinčiu alkilhalogenidu arba triflatu ir gaunamas eteris p7 (P yra atitinkama azotą blokuojanti grupė). Po to azotą blokuojanti grupė yra atskeliama ir gautas aminas (neparodytas) yra leidžiamas į ciklizaciją gaunant laktamą p8. Po to rūgščių katalizuojama p8 metanolizė duoda alkoholį p9. Šis tarpinis junginys yra oksiduojamas Svvern’o metodu (arba naudojant kitas tinkamas oksidinimo sąlygas) ir gaunamas aldehidas (taip pat neparodytas), kuris po to yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją gaunant tarpinį junginį P2.

P2 Ρθ P⁸

Dabar bus aprašyta specifinio tarpinio junginio P3 sintezė. Tarpinis junginys D1 (aprašytas aukščiau) yra ozonuojamas ir gautas aldehidas (neparodytas) yra redukuojamas į atitinkamą alkoholį (taip pat neparodytas). Po to šis tarpinis junginys yra blokuojamas, gaunant junginį p10 (P! yra atitinkama deguonį blokuojanti grupė). p10 esanti imidinė funkcinė grupė yra hidrolizuojama iki karboksirūgšties p11, ir šis tarpinis junginys yra kopuliuojamas su tinkamai blokuotu hidroksilamino dariniu, gaunant amidą p12 (P₂ yra atitinkama deguonį blokuojanti grupė, kuri yra stabili Pi atskėlimo sąlygose). Po to atskeliama Ρί blokuojanti grupė, ir gautas alkoholis (p13) yra paverčiamas atitinkama atskylančia grupe (halogenidu arba triflatu, neparodyta). Tada atskeliama P₂ blokuojanti grupė, ir gauta hidroksamo rūgštis ciklizuojama gaunant tarpinį junginį p14. Po to rūgščių katalizuojama p14 metanolizė duoda alkoholį p15. Šis tarpinis junginys yra oksiduojamas Swern’o metodu (arba naudojant kitas tinkamas oksidinimo sąlygas) ir gaunamas aldehidas (neparodytas), kuris po to yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją gaunant tarpinį junginį P3.

III specifiniame būde aprašoma tarpinių junginių Q1, Q2 ir Q3, kurie gali būti naudojami aukščiau aprašytuose bendruosiuose būduose, pagaminimas. Žinomas junginys 11 yra transformuojamas į literatūroje aprašytą molekulę J1 pagal modifikuotą publikuotą metodiką (Ikuta et ai., J. Med. Chem. 1987, vol. 30, p. 1995). Nepriklausomai nuo to, yra blokuojamas aminorūgšties esteris K1, gaunant sililo esterį L1. Šis esteris yra redukuojamas DIBAL (arba naudojant kitas tinkamas redukcijos sąlygas), ir gautas aldehidas (neparodytas) yra leidžiamas į olefino susidarymo reakciją su tarpiniu junginiu J1, gaunant M1. Po to M1 sililo debiokavimas duoda alkoholį N1. Šis tarpinis junginys yra leidžiamas į įvairias hidrinimo sąlygas ir gaunami tarpiniai junginiai Q1, Q2 ir Q3. Šie tarpiniai junginiai gali būti paverčiami į tarpinius junginius, analogiškus tarpiniam junginiui 01 (žr. aukščiau aprašytą I specifinį būdą) oksidinant, o po to olefininant.

Br·

NH₂

Ph₃R

J1

Br

Q3

Specialistas turėtų suprasti, kad įvairūs šio išradimo junginiai gali būti pagaminami pagal aukščiau aprašytus bendruosius ir specifinius būdus bei šioje srityje žinomas metodikas, įskaitant čia cituojamus literatūros šaltinius, kurių aprašymai yra pridedami. Be to, specialistas gali pagaminti įvairius šio išradimo junginius pagal toliau aprašomus pavyzdžius arba panaudodamas čia aprašytos sintezės įprastas modifikacijas.

PAVYZDŽIAI

Toliau yra duodami tinkamiausių I formulės junginių pavyzdžiai. Šiuose pavyzdžiuose duodamų junginių struktūros buvo patvirtintos vienu arba daugiau iš šių metodų: protonų magnetinio rezonanso spektroskopija, infraraudonąja spektroskopija, elementine mikroanalize, masių spektrometrija, plonasluoksne chromatografija, lydymo temperatūros nustatymu ir virimo temperatūros nustatymu. Jeigu yra neatitikimų tarp parodyto junginio duotos struktūrinės formulės ir jo pateikto cheminio pavadinimo, reikia taikyti struktūrinę formulę.

Protonų magnetinio rezonanso (¹H BMR) spektrai buvo išmatuoti naudojant Varian UNITYp/us 300 spektrometrą dirbantį esant 300 megahercų (MHz) stiprumo laukui. Cheminiai poslinkiai yra duoti milijoninėmis dalimis (m.d., δ) mažėjančio lauko kryptimi nuo vidinio standarto - tetrametilsilano. Kitu atveju, ¹H BMR spektrai standartizuoti pagal likusių protoninių tirpiklių signalus, kaip antai: CHCb = 7,26 m.d.; DMSO = 2,49 m.d.; C6HD5 = 7,15 m.d. Smailių multipletiškumas yra pažymėtas taip: s = singletas, d = dubletas, dd = dvigubas dubletas; t = tripletas; kv = kvartetas; pi = platus rezonansas ir m = multipletas. Sukinio-sukinio sąveikos konstantos yra duotos hercais. Infraraudonieji sugerties (IR) spektrai buvo gauti naudojant Perkin-Elmer 1600 serijos FTIR spektrometrą Elementine analizė buvo atlikta Atlantic Microlab Ine. (Norcross, GA) ir davė rezultatus nurodytiems elementams ±0,4 % ribose nuo teorinių reikšmių. Sparčioji kolonėlių chromatografija buvo vykdoma naudojant silikagelį 60 (Merck Art 9385). Analitinė plonasluoksnė chromatografija (TLC) buvo vykdoma naudojant padengtas Silica 60 F254 (Merck Art 5719) plokšteles. Lydymosi temperatūros (sutrumpinta lyd. temp.) buvo nustatytos Met-Temp prietaisu ir nekoreguotos. Visos reakcijos buvo vykdomos uždarose kolbose naudojant šiek tiek teigiamą argono slėgį, jeigu nenurodyta kitaip. Visi prekybiniai reagentai buvo naudoti tokie, kokie gauti iš atitinkamų jų tiekėjų, išskyrus tai, kad: prieš naudojant tetrahidrofuranas (THF) buvo nudistiliuotas nuo natrio benzofenonketilo; prieš naudojant dichlormetanas (CH₂CI₂) buvo nudistiliuotas nuo kalcio hidrido; bevandenis ličio chloridas buvo pagamintas kaitinant 110 °C temperatūroje vakuume per naktį.

Čia naudojami tokie sutrumpinimai: Et₂O reiškia dietilo eterį; DMF reiškia Ν,Ν-dimetilformamidą DMSO reiškia dimetilsulfoksidą o MTBE reiškia tret-butilo-metilo eterį. Kiti sutrumpinimai yra: CH3OH (metanolis), EtOH (etanolis), EtOAc (etilacetatas), DME (etilenglikolio dimetilo eteris), Ac (acetilas), Me (metilas), Ph (fenilas), Tr (trifenilmetilas), Cbz (benziloksikarbonilas), Boc (tret-butoksikarbonilas), TFA (trifluoracto rūgštis), DIEA (Ν,Ν-diizopropiletilaminas), DBU (1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-enas), HOBt (1-hidroksibenzotriazolo hidratas), PyBOP (benzotriazol-1-il-oksi-trispirolidinofosfonio heksafluorfosfatas), HATU (O-(7-azabenzotriazol-1-il)Ν,Ν,Ν’,Ν’-tetrametiluronio heksafluorfosfatas), EDC (1-(3-dimetilaminopropil)3-etilkarbodiimido hidrochloridas), DCC (dicikloheksilkarbodiimidas), DDQ (2,3-dichlor-5,6-diciano-1,4-benzochinonas), DMAP (4-dimetilaminopiridinas), Gln (glutaminas), Leu - (leucinas), Phe (fenilalaninas), Vai (valinas), His (histidinas), 1-Naphth (1-naftilalaninas), 2-Naphth (2-naftilalaninas), a-t-ButylGly (tret-butilglicinas), (S)-Pyrrol-Ala ((2S,3’S)-2-amino-3-(2’-oksopirolidin-3’i!)propiono rūgštis) ir (S)-Piper-Ala ((2S,3’S)-2-amino-3-(2’-oksopiperidin-3’il)propiono rūgštis). Be to, “L” reiškia gamtines aminorūgštis.

Kai kurių tarpinių junginių ir produktų identifikavimui yra naudojama supaprastinta pavadinimų sistema, panaudojant aminorūgščių sutrumpinimus. Sudarant junginių pavadinimus, kursyvu pažymėtas aminorūgšties sutrumpinimas reiškia modifikacijas liekanos C-gale, kur yra naudojami tokie pažymėjimai: (1) akrilo rūgšties esteriai yra vadinami “E” (trans) propenoatais; (2) pakaitų turintys 3-metilen-dihidrofuran-2-onai yra vadinami “E” (trans) 2-(avinil^y-butirolaktonais); ir (3) 5-vinilizoksazolai yra vadinami Έ” (trans) propenizoksazolais. Be to, terminologija “AAiT[COCH₂}-AA₂ rodo, kad bet kokioje peptidinėje sekoje dvi aminorūgštys (AA1 ir AA₂), kurios paprastai yra sujungtos amidiniu ryšiu, yra pakeistos ketometilenine dipeptidine izosterine liekana. Terminologija “AA1-NCH3-AA2” rodo, kad bet kokioje peptidinėje sekoje amidinis ryšys, kuris paprastai jungia dvi aminorūgštis (AA1 ir AA₂), yra pakeistas N-metil-amidiniu ryšiu. Terminologija “AA1-O-AA2” rodo, kad bet kokioje peptidinėje sekoje amidinis ryšys, kuris paprastai jungia dvi aminorūgštis (AAi ir AA₂), yra pakeistas esteriniu ryšiu.

Toliau yra aprašomi išradimo įgyvendinimo variantų pavyzdžiai.

pavyzdys: Palyginamojo junginio #1 - 5-(3’(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-Epropen)izoksazolo- gavimas

(Palyginamasis junginys #1)

Tarpinio junginio Cbz-L-(Tr-Gln)-OMe gavimas r >

Į acetilchlorido (0,25 ml, 3,52 mmol, 7,0 ekv.) tirpalą CH3OH (5 ml) χ pridedama Cbz-L-(Tr-Gln) (0,26 g, 0,50 mmol, 1 ekv.) ir maišoma 23 °C > | temperatūroje 1 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje, liekana r :« ištirpinama CH₂CI₂ (100 ml) ir plaunama vandeniu (100 ml), sočiu NaHCO3 * (100 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (100 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas

Na₂SO4 ir sukoncentruojamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (20 % EtOAc heksanuose), gaunamas Cbz-L-(TrGln)-0Me (0,23 g, 84 % išeiga), kuris yra balta kieta medžiaga; lyd. temp. =

139-140 °C; IR (cm'¹) 1742, 1207; ¹H BMR (DMSO-cfe) δ 1,16 (t, 1 H, J = 7,0),

1,77 (m, 1H), 1,97 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 4,99 (m, 1H), 5,03 (s, 2H), 7,02-7,55 (m, 20H), 7,69 (d, 1H, J = 7,7), 8,59 (s, 1H); analizė (C₃3H₃₂N₂O₅) C, H, N.

Tarpinio Cbz-L-(Tr-Glutaminolio) gavimas

Į Cbz-L-(Tr-Gln)-OMe (1,50 g, 2,79 mmol, 1 ekv.) tirpalą2:1 THF:EtOH (30 ml) pridedama ličio chlorido (0,24 g, 5,66 mmol, 2,0 ekv.) ir mišinys maišomas 23 °C temperatūroje tol, kol visos kietos medžiagos ištirpsta (10 min.). Pridedama natrio borhidrido (0,21 g, 5,55 mmol, 2,0 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas per naktį 23 °C temperatūroje. Tirpikliai nugarinami sumažintame slėgyje, liekana ištirpinama vandenyje (50 ml) ir parūgštinama % HCI iki pH 2-3. Produktas ekstrahuojamas EtOAc (50 ml) ir prieš džiovinant MgSO₄, organinis sluoksnis plaunamas vandeniu (50 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (50 ml). Organinis sluoksnis sukoncentruojamas, ir liekana gryninama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 20->50 % EtAc benzene) ir gaunamas Cbz-L-(Tr-glutaminolis) (1,02 g, 72 % išeiga), kuris yra balta stiklo pavidalo medžiaga: lyd. temp = 6670 °C; ; IR (cm‘¹) 3318, 1699, 1510, 1240; ¹H BMR (DMSO-cfe) δ 1,40 (m, 1H), 1,72 (m, 1H), 2,26 (m, 2H), 3,17-3,50 (m, 3H), 4,64 (t, 1H, J = 5,0), 5,00 (s, 2H), 7,00-7,40 (m, 20H), 6,96 (d, 1H, J = 8,5), 8,54 (s, 1 H); analizė (C₃₂H₃₂N₂O₄) C, H, N.

Tarpinio L-(Tr-glutaminoIio) gavimas

Cbz-L-(Tr-glutaminolio) (1,93 g, 3,79 mmol) suspensija CH₃OH (25 ml) ir Pd/C (10 %, 0,19 g) maišoma vandenilio atmosferoje (iš baliono) 4 valandas, po to nufiltruojama per celito sluoksnį. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir gaunamas L-(Tr-glutaminolis), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga (1,38 g, 98 % išeiga): lyd. temp.= 191-193 °C; IR (cm'¹) 3255 (pi), 1642, 1527; ¹H BMR (DMSO-d₆) δ 1,29 (m, 1H), 1,53 (m, 1H), 2,29 (m, 2H), 3,08 (m, 1H), 3,18 (m, 2H), 3,38 (s, pi., 2H), 4,43 (s, pi., 1H), 7,14-7,28 (m,15 H), 8,62 (s, 1H).

Tarpinio Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-glutaminolio) gavimas

Į Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,41 g, 1,0 mmol, 0,95 ekv.) tirpalą THF (10 ml) pridedama karbonildiimidazolo (0,17 g, 1,05 mmol, 1,0 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 1 vai. Po to sudedamas L-(Trglutaminolis) (0,39 g, 1,05 mmol, 1 ekv.) ir gautas tirpalas maišomas per naktį. Lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje, o liekana gryninama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 2->4 % CH₃OH CHCI₃) ir gaunamas Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Trglutaminolis) (0,47 g, 62 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: lyd. temp. = 92-95 °C; 70 °C; IR (cm’¹) 3302, 1657, 1520, 1238; ¹H BMR (DMSO-d₆) δ 0,79 (t, 6H, J = 7,0), 1,30 (m, 2H), 1,44 (m, 2H), 1,75 (m, 1H), 2,22 (m, 2H), 2,82 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,63 (m,

H), 3,95 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,65 (t, 1H, J = 5,0), 4,96 (d, 1H, J = 13,0), 5,02 (d, 1H, J= 13,0), 7,07-7,33 (m, 25H), 7,42 (d, 1H, J = 8,0), 7,66 (d, 1H, J - 8,0), 8,52 (s, 1H); analizė 0,5H₂O) C, H, N.

Tarpinio Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H gavimas l Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-glutaminolio) (0,58 g, 0,75 mmol, 1 ekv.) tirpalą DMSO (7,5 > ml) 23 °C temperatūroje pridedama ojodoksibenzenkarboksi-rūgšties (0,63 g, 2,25 mmol, 3,0 ekv.). Pamaišius 2 valandas, numažintame slėgyje nugarinamas DMSO. Liekana, praskiedžiama du kartus CH₂CI₂ ir nugarinamas tirpiklis likusiam DMSO pašalinti. Liekana praskiedžiama EtOAc (30 ml) ir nufiltruojama, o filtratas plaunamas 5 % Na₂S₂O3/5% NaHCO₃ tirpalu (30 ml), vandeniu (30 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (30 ml), po to džiovinamas Na₂SO4- Sumažintame slėgyje nugarinus tirpiklį, gaunamas Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H (0,53 g, 92 % išeiga), kuris yra balta stiklo pavidalo medžiaga; ji buvo naudojamma tuoj pat po pagaminimo be papildomo gryninimo: ¹H BMR (DMSO-de) δ 0,79 (m, 6H), 1,00-1,98 (m, 5H), 2,27 (m, 2H), 2,84 (m, 1H), 3,02 (m, 1H), 3,98 (m, 2H), 4,58 (m, 1H), 4,99 (s, 2H), 7,14-7,32 (m, 25H), 7,39 (d, 1H, J = 8,1), 7,97 (d, 1H, J = 8,5), 8,38 (d, 1 H, J = 8,0), 8,60 (s, 1 H), 9,20 (s, 1 H).

Tarpinio 5-{3’-Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propen}izoksazologavimas į izoksazol-5-iimetiltrifenilfosfonio bromido (0,222 g, 0,525 mmol, 1,1 ekv.) suspensiją THF (20 ml) 0 °C temperatūroje įpilama, KN«CHg)3Si)₂ tirpalo (0,95 ml 0,5 M tirpalo THF, 0,477 mmol, 1,0 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 minučių. Įpilama Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(TrGln)-H (0,366 g, 0,477 mmol, 1 ekv.) tirpalo THF (10 ml) ir tada reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį. Tirpiklis nugarinamas vakuume, liekana praskiedžiama EtOAc (30 ml), plaunama vandeniu (30 ml), po to džiovinama MgSO4. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje, o liekana gryninama sparčiosios chromatografijos per siiikagelį metodu (gradientinis eliuavimas, 0^1% CH3OH CHCI₃), ir gaunamas 5-{3'-Cbz-LLeu-L-Phe-L-(Tr-G//7)-E-propen}izoksazolas (0,307 g, 70 % išeiga), kuris yra amorfinė kieta medžiaga: IR (cm’¹) 3423, 1678, 1568, 1265, 1043, 711; ¹H

BMR (DMSO-d₆) δ 0,77-0,81 (m, 6H), 1,21-1,36 (m, 2H), 1,40-1,55 (m, 1H), 1,60-1,80 (m, 2H), 2,34-2,45 (m, 2H), 2,82-2,87 (m, 1H), 2,91-3,04 (m, 1H), 3,95-4,00 (m, 1H), 4,41-4,50 (m, 1H), 4,53-4,60 (m, 1H), 4,99 (kv, 2H, J = 6,0), 6,19 (d, 1H, J = 15,0), 6,36 (dd, 1H, J = 15,0, 6,0), 6,46 (s, 1H), 7,157,33 (m, 20H), 7,42 (d, 1H, J = 9,0), 7,56-7,63 (m, 5H), 7,96 (d, 1H, J = 9,0), 8,08 (d, 1H, J = 9,0), 8,51 (s, 1H), 8,58 (s, 1H); DSGMS apskaičiuota pagal C51H53N5O6+CS 964,3050 (M+Cs), rasta 964,3018.

Produkto - 5-(3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-E-propen)izoksazoIo - gavimas

Į 5-{3’-Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propen}izoksazolo (0,214 g,

0,257 mmol) tirpalą CH2CI2 (10 ml) pridedama trifluoracto rūgšties (1 ml) ir reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana gryninama sparčiosios chromatografijos per silikagelį metodu (gradientinis eliuavimas, 0-»1% CH3OH CHCI3) ir gaunamas 5-(3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-G//7)-E-propen)izoksazolas (0,054 g, 36 % išeiga), kuris yra balta kieta medžiaga; ¹H BMR (DMSO-de) δ 0,77-0,83 (m, 6H), 1,261,46 (m, 2H), 1,47-1,62 (m, 1H), 1,69-1,79 (m, 2H), 2,04-2,29 (m, 2H), 2,832,88 (m, 1H), 2,97-3,10 (m, 1H), 3,99-4,12 (m, 1H), 4,37-4,43 (m, 1H), 4,484,57 (m,1H), 5,01 (kv, 2H, J = 6,0), 6,20 (d, 1H, J = 15,0), 6,36 (dd, 1H, J = 15,0, 6,0), 6,45 (d, 1H, J = 3,0), 6,75 (s, 1H), 7,14-7,29 (m, 6H), 7,31-7,40 (m, 5H), 7,45 (d, 1 H, J = 9,0), 8,04 (d, 1 H, J = 9,0), 8,07 (d, 1 H, J = 9,0), 8,51 (d, 1H, J = 3,0); analizė (C32H39N5O6) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-1 - etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-LPhe-L-G/n)-E-propenoato - gavimas

Tarpinio Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me gavimas

Į Boc-L-(Tr-Gln)-OH (18,7 g, 36,7 mmol, 1 ekv.) ir 4-metilmorfolino (8,08 ml, 73,5 mmol, 2,0 ekv.) tirpalf CH₂CI₂ (250 ml) O °C temperatūroje pridedama izobutilo chlorformiato (4,77 ml, 36,8 mmol, 1,0 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 20 min. (minučių), po to pridedama Ν,Ο-dimetilhidroksilamino hidrochlorido (3,60 g, 36,7 mmol, 1,0 ekv.). Gautas tirpalas maišomas 0 °C temperatūroje 20 min., ir 23 °C temperatūroje 2 vai. (valandas), po to paskirstomas tarp vandens (150 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksnis džiovinami Na₂SO4 ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 40-»20 % heksanai EtOAc), gautas Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me (16,1 g, 82 % išeiga), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 3411, 3329, 3062, 1701, 1659; ¹H BMR (CDCb) δ 1,42 (s, 9H), 1,63-1,77 (m, 1 H), 2,06-2,17 (m, 1H), 2,29-2,43 (m, 2H), 3,17 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 4,73 (s, pi., 1H), 5,38-5,41 (m, 1 H), 7,20-7,31 (m, 15H); analizė (C₃iH₃₇N₃Qs) C_rH, Nz

Tarpinio Boc-L-(Tr-Gln)-H gavimas

Į Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me (16,1 g, 30,3 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF -78 °C temperatūroje pridedama diizobutilaliuminio hidrido (50,5 ml 1,5 M tirpalo toluene, 75,8 mmol, 2,5 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas -78 °C temperatūroje 4 valandas. Įpilama metanolio (4 ml); o po to 1,0 M HCI (10 ml) ir mišinys sušildomas iki 23 °C temperatūros. Gauta suspensija praskiedžiama Et₂O (150 ml) ir plaunama .1,0 M HCI (3 x 100 ml), pusiau sočiu NaHCO₃ (100 ml) ir vandeniu (100 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas MgSO4, nufiltruojamas ir sukoncentravus gaunamas negrynintas Boc-L-(Tr-Gln)-H (13,8 g, 97 % išeiga), kuris yra balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 114-116 °C; IR (cm'¹) 3313,1697, 1494; ¹H BMR (CDCb) δ 1,44 (s, 9H), 1,65-1,75 (m, 1H), 2,17-2,23 (m, 1H), 2,31-2,54 (m, 2H), 4,11 (s, pi., 1H), 5,38-5,40 (m, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,16-7,36 (m, 15H), 9,45 (s, 1H).

Tarpinio etil-3-(Boc-L-(Tr-G/n))-E-propenoato gavimas

Į trietilfosfonoacetato (5,59 g, 22,9 mmol, 1,0 ekv.) tirpaląTHF (200 ml) -78 °C temperatūroje pridedama natrio bis(trimetilsi1il)amido (22,9 ml 1,0 M tirpalo THF, 22,9 mmol, 1,0 ekv.) ir gautas tirpalas maišomas 20 minučių šioje temperatūroje. Per kanulę pridedama negryninto Boc-L-(Tr-Gln)-H (10,8 g, 22,9 mmol, 1 ekv.) THF (50 ml), ir reakcijos mišinys maišomas 2 valandas -78 °C temperatūroje, sušildomas iki 0 °C ir palaikoma 10 minučių po to paskirstomas tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO4 ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (40 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-(Boc-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas (10,9 g, 88 % išeiga), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 3321,1710; ¹H BMR (CDCb) δ 1,27 (t, 3H, J = 7,2), 1,42 (s, 9H), 1,70-1,78 (m, 1 H), 1,80-1,96 (m, 1H), 2,35 (t, 2H, J = 7,0), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,29 (s, pi., 1 H), 4,82-4,84 (m, 1H), 5,88 (dd, 1H, J = 15,7, 1,6), 6,79 (dd, 1H, J= 15,7, 5,3), 6,92 (s, 1H), 7,19-7,34 (m, 15H); analizė (C₃₃H₃8N₂O5) C, H, N.

Tarpinio etil-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato gavimas

HCI tirpalas 1,4-dioksane (4,0 M, 15 ml) 23 °C temperatūroje supilamas į etil-3-(Boc-L-(Tr-G/n))-E-propenoato (3,26 g, 6,01 mmol, 1 ekv.) tirpalą tame pačiame tirpiklyje (15 ml). Po 2 valandų lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje ir gaunamas etil-3-(H₂N-L-(Tr-G/n)-E-propenoato HCI. Ši medžiaga ištirpinama CH₂CI₂ (60 ml) ir iš eilės dedama Boc-L-Phe-OH (1,59 g, 6,01 mmol, 1,0 ekv.), HOBt (1,22 g, 9,02 mmol, 1,5 ekv.), 4-metilmorfolinas (1,98 ml, 18,03 mmol, 3 ekv.) ir EDC (1,73 g, 9,02 mmol, 1,5 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį, po to paskirstomas tarp vandens (100 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SŪ4, koncentruojami, ir liekaną išgryninus sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (40 % EtOAc heksane), gaunamas etil-3(Boc-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas (3,55 g, 85 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 3306, 1706,1661; ¹H BMR (CDCb) δ 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,38 (s, 9H), 1,65-1,76 (m, 1 H), 1,87-1,99 (m, 1 H), 2,25-2,27 (m, 2H), 2,94-3,01 (m, 2H), 4,14-4,26 (m, 3H), 4,48-4,53 (m, 1H), 4,95 (s, pi., 1H), 5,64 (d, 1 H, J = 15,8), 6,29 (d, 1H, J = 8,1), 6,64 (dd, 1H, J= 15,8, 5,4), 6,80 (s, pi., 1H), 7,14-7,32 (m, 20H); analizė (C42H47N3O6) C, H, N.

Tarpinio etil-3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato gavimas

HCI tirpalas 1,4-dioksane (4,0 M, 15 ml) 23 °C temperatūroje supilamas į etil-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato (6,40 g, 9,28 mmol, 1 ekv.) tirpalą tame pačiame tirpiklyje (15 ml). Po 2 valandų lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH2CI2 (100 ml) ir iš eilės dedama Boc-L-Leu-OH (2,58 g, 11,1 mmol, 1,2 ekv.), HOBt (1,88 g, 13,9 mmol, 1,5 ekv.), 4-metilmorfolinas (3,06 ml, 27,8 mmol, 3 ekv.) ir EDC (2,67 g, 13,92 mmol, 1,5 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį, po to paskirstomas tarp vandens (100 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄, koncentruojami, ir liekaną išgryninus sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (2 % CH3OH CH2CI2), gaunamas etil-3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas ‘(6,46 g, 87 % išeiga), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 3284, 1651,

1515; ¹H BMR (CDCb) δ 0,86 (d, 3H, J = 6,0), 0,89 (d, 3H, J = 6,0), 1,29 (t,

3H, J = 7,2), 1,38-1,60 (m, 3H), 1,62-1,89 (m, 1H), 1,95-1,97 (m, 1 H), 2,282,30 (m, 2H), 3,06-3,08 (m, 2H), 3,92-3,94 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), ,

4,48-4,51 (m, 2H), 4,67 (m, 1H), 5,66 (d, 1H, J = 15,9), 6,51-6,57 (m, 2H),

6,69 (dd, 1H, J = 15,6, 5,1), 7,10-7,33 (m, 21 H); analizė (C48H₅8N4O7-0,33H₂O) C, H, N.

Tarpinio etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G//7))-Epropenoato gavimas

HCi iii paias 1,4-dioksane (4,0 M, 3 ml) 23 °C temperatūroje supilamas į etil-3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato (0,216 g, 0,27 mmol, 1 ekv.) tirpalą tame pačiame tirpiklyje (3 ml). Po 2 valandų lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (15 ml), atšaldoma iki 0 °C ir pridedama trietilamino (0,112 ml, 0,81 mmol, 3 ekv.), o po to 5-metilizoksazoll-3-karbonilchlorido (0,058 g, 0,40 mmol, 1,5 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 min., po to paskirstomas tarp vandens (50 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 50 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄, koncentruojami, ir liekaną išgryninus sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (2 % CH₃OH/CH₂CI₂), gaunamas etil-3((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas (0,199 g, 91 % išeiga), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 3286, 1650, 1541; ¹H BMR (CDCI₃) δ 0,86 (d, 3H, J = 5,4), 0,89 (d, 3H, J = 5,7), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,43-1,59 (m, 2H), 1,67-1,75 (m, 1 H), 1,95-1,99 (m, 2H), 2,28 (t, 2H, J= 7,2), 2,41 (s, 3H), 2,97-3,04 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J =7,2), 4,31-4,33 (m, 1H), 4,48-4,52 (m, 2H), 5,72 (d, 1H, J= 15,9), 6,19 (s, 1H), 6,41 (d, 1H, J = 7,5), 6,59 (d, 1H, J = 8,1), 6,71 (dd, 1K, J = 15,3, 6,0), 6,95 (d, 1H, J = 6,6), 7,09-7,21 (m,'21 H); analizė (C^HssNsOy-HzO) C, H, N.

Produkto - etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-Epropenoato - gavimas

Į etil-3-((5'-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-Epropenoato (0,185 g, 0,21 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH2CI2 (3 ml) 23 °C temperatūroje pridedama iš pradžių triizopropilsilano (0,077 ml, 0,376 mmol, 1,8 ekv.), o po to trifluoracto rūgšties (3 ml); susidaro ryškiai geltonas tirpalas. Reakcijos mišinys maišomas 30 minučių 23 °C temperatūroje; per šį laiką jis pasidaro bespalvis. Lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje, o likusi balta kieta medžiaga trinama su Et₂O (10 ml), nufiltruojama ir išdžiovinus ore gaunamas etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-PheL-G/n)-E-propenoatas (0,87 g, 81 % išeiga), kuris yra balta kieta medtiaga; lyd. temp. = 223-225 °C; IR (cm'¹) 3298, 1662, 1544, 1457, 1278; ¹H BMR (DMSO-de) δ 0,81 (d, 3H, J = 6,0), 0,85 (d, 3H, J = 6,3), 1,23 (t, 3H, J = 6,9), 1,38-1,42 (m, 1H), 1,48-1,77 (m, 4H), 2,04 (t, 2H, J = 7,2), 2,46 (s, 3H), 2,782,86 (m, 1H), 2,93-3,00 (m, 1H), 4,11 (kv, 2H, J = 7,2), 4,36-4,54 (m, 3H), 5,63 (d, 1H, J = 15,6) 6,56 (s, 1H), 6,68 (dd, 1H, J = 15,9, 5,4), 6,76 (s, pi., 1H), 7,19 (m, 6H), 8,09 (d, 1H, J = 8,1), 8,14 (d, 1H, J =7,8), 8,58 (d, 1H, J = 7,5); analizė (C29H39N5O7) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-2 - etil-3-((izoksazol-5’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-LG/n)-E-propenoato - gavimas

(A-2)

Tarpinio etil-3-((izoksazol-5’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)-Epropenoatu gavimas

Šis junginys buvo pagamintas iš etil-(Boc-L-leu-L-Phe-L-(Tr-G/n))-Epropenoąto ir izoksazol-5-karbonilchlorido, naudojant aukščiau aprašytą (2 pavyzdys) metodiką etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n)E-propenoatui gauti. IR (cm'¹) 3282, 1643, 1530; ¹H BMR (CDCb) δ 0,87 (t, 6H, J = 6,6), 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,49-1,64 (m, 3H), 1,69-1,80 (m, 1 H), 1,901,96 (m, 1H), 2,30 (t, 2H, J= 7,2), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,02-3,09 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H-J = 7,2), 4,42-4,46 (m, 3H), 5,69 (d, 1H, J = 15,3), 6,65 (s, pi., 1H), 6,66 (dd, 1H, J = 15,9, 5,4), 6,76-6,79 (m, 2H), 7,00-7,31 (m, 22H), 8,24 (s, 1H); analizė (C47H₅₁NsO70,75H₂O) C, H, N.

Etil-3-((izoksazol-5’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-E-propenoato gavimas

Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-((izoksazol-5’-karbonil)-L-Leu-LPhe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato, naudojant metodiką analogišką aukščiau aprašytai (.? pavyzdys) metodikai etil-3-((5’-metilizpJ$s§zoL3’4<arbonil)-L-LeuL-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propenoatui gauti: lyd. temp. = 217-220 °C; IR (cm'¹) 3302, 1655, 1541; ¹H BMR (DMSO-cfe) δ 0,81 (d, 3H, J = 6,0), 0,86 (d, 3H, J = 7,2), 1,42-1,75 (m, 5H), 2,04 (t, 2H, J = 7,2), 2,78-2,87 (m, 1H), 2,94-3,01 (m, 1H), 4,11 (kv, 2H, J = 7,2), 4,37 (m, 1H), 4,41-4,52 (m, 2H), 5,64 (d, 2H, J = 15,6), 6,68 (dd, 1H, J= 15,9, 5,4), 6,76 (s, pi., 1H), 7,12-7,19 (m, 7H), 8,02 (d, 1H, J = 8,1), 8,20 (d, 1H, J = 8,1), 8,74 (d, 1H, J = 1,8), 8,94 (d, 1H, J = 7,8); analizė (C28H37N5O7) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-3 - etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(tbutil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-G/n)-E-propenoato - gavimas

Tarpinio etii-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoato gavimas

Etil-3-(H2N-L-(Tr-G/n))-E-propionatoHCI (pagamintas kaip aprašyta aukščiau duotame 2 pavyzdyje, 1,37 g, 3,10 mmol) ištirpinamas DMF (10 ml) 23 °C temperatūroje. Pridedama diizopropiletilamino (1,08 ml, 6,20 mmol), o po to Boc-L-(4-Me-Phe)-OH (0,87 g, 3,10 mmol). Reakcijos mišinys atšaldomas iki 0 °C. Pridedama HATU (1,18 g, 3,10 mmol) ir reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros. DMF nugarinamas vakuume. Liekana ištirpinama EtOAc (30 ml) ir organinė fazė plaunama iš eilės 10 % HCI tirpalu (25 ml), sočiu NaHCOą tirpalu (25 ml), Η₂Ο'(25 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (25 ml). Tirpiklis išdžiovinamas (MgSO₄) ir nufiltruojamas, o liekana gryninama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0-»0,75% CH₃OH CHCb) ir gaunamas etil-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (1,48 g, 68 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm‘¹) 1713, 1655, 1491, 1175; ¹H BMR (DMSO-cfe) δ 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,30 (s, 9H), 1,62-1,66 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,32 (m, 2H), 2,72 (m, 1H), 2,84 (m, 1H), 4,07-4,09 (m, 1H), 4,10 (kv, 2H, J= 7,0), 4,38 (m, 1H), 5,64 (d, 1H, J = 15,6), 6,72 (dd, 1H, J = 15,5, 5,5), 6,88 (d, 1H, J= 8,0), 7,04 (d, 2H, J = 7,7), 7,10 (d, 2H, J = 7,7), 7,14-7,28 (m, 15H), 8,02 (d, 1H, J = 8,0), 8,53 (s, 1H); analizė (C43H49N3O6) C, H, N.

Tarpinio etil-3-(Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-Epropenoato gavimas

Etil-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (1,45 g, 2,06 mmol) ištirpinamas 1,4 dioksane (27 ml) ir įpilama HCI tirpalo 1,4-dioksane (4,0 M, 14 ml). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 4 valandas. Tirpiklis nugarinamas, o liekana ištirpinama EtOAc (50 ml). Organinė fazė plaunama sočiu NaHCO₃ tirpalu (50 ml), po to sočiu NaCI tirpalu (50 ml), džiovinama (MgS0₄), ir sumažintame slėgyje nugarinus tirpiklį gaunama 1,23 g nebaltos amorfinės kietos medžiagos. Ši medžiaga kopuiiuojama su Boc-La-(t-butil-Gly)-OH, naudojant aukščiau aprašytą metodiką etil-3-(Boc-L-(4-MePhe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatui sintezuoti, ir gaunamas etil-3-(Boc-L-a-(t-butilGly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (49 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm‘¹) 1655, 1507, 1248, 1171; ¹H BMR (DMSOde) δ 0,81 (s, 9H), 1,21 (t, 3H, J = 7,0), 1,37 (s, 9H), 1,52-1,70 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 2,26-2,28 (m, 2H), 2,73-2,91 (m, 2H), 3,86 (d, 1H, J = 9,6), 4,05-4,14 (m, 2H), 4,31-4,36 (m, 1H), 4,47-4,55 (m, 1 H), 5,54 (d, 1 H, J = 15,4), 6,37 (d, 1 H, J = 9,6), 6,65 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5), 7,01 (d, 2H, J - 8,1), 7,07 (d, 2H, J = 7,7), 7,11-7,32 (m, 15H), 8,03 (d, 2H, J = 8,1), 8,10 (d, 1H, J = 7,7), 8,49 (s, 1H); analizė (C^Heo^Oz-O^HzO) C, H, N.

Tarpinio etil·3-((5’-ιnetilizoksazol-3’-karboRίl)-L·α-(t'butil-Gly)-L·(4-MePhe)-L-(T r-G/n)-E-propenoato gavimas

Etil-3-(Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas buvo deblokuotas naudojant metodiką aprašytą aukščiau minėtam etil-3(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatui deblokuoti, ir gautas aminas (0,22 g, 0,30 mmol) ištirpinamas CH₂Č1₂ (3 ml). Pridedama piridino (0,025 ml, 0,32 mmol) ir reakcijos mišinys atšaldomas iki 0 °C. Pridedama 5metilizoksazol-3-karbonilchlorido (0,040 g, 0,32 mmol). Reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros ir maišoma vieną valandą Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0^1% CH₃OH CH2CI2) ir gaunamas etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (0,19 g, 77 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm’¹) 1651, 1518; ¹H BMR (DMSO-de) δ 0,88 (s, 9H), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,55-1,67 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,18-2,28 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,70-2,77 (m, 1H), 2,86-2,93 (m, 1H), 4,07-4,14 (m, 2H), 4,46 (d, 1H, J = 9,6), 4,50-4,55 (m, 1 H), 5,54 (d, 1 H, J = 15,8), 6,59 (s, 1 H), 6,65 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5, 15,8), 6,95 (d, 2H, J = 8,1), 7,05 (d, 2H, J = 8,1), 7,13-7,28 (m, 15H), 7,60 (d, 1H, J = 9,6), 8,13 (d, 1H, J = 8,1), 8,41 (d, 1H, J = 8,1), 8,51 (s, 1H); analizė (C49H55N5O7) C, H, N.

Produkto - etiI-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L·α-(t-butil·Gly)-L·(4-MePhe)-L-G/n)-E-propenoato - gavimas

Etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L(Tr-G/n)-E-propenoatas (0,17 g, 0,20 mmol) ištirpinamas CH2CI2 (4 ml) 23 °C· temperatūroje. Pridedama trifluoracto rūgšties (0,4 ml) ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje šešias valandas. Tirpikliai nugarinami vakuume, o liekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0->2 % CH3OH CH2CI2) ir gaunamas etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)L-G/n)-E-propenoatas (0,085 g, 73 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm'¹) 1661, 1541, 1206; ¹H BMR (DMSO-cfe) δ 0,88 (s, 9H), 1,21 (t, 3H, J= 7,0), 1,60-1,73 (m, 2H), 2,01-2,06 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,50 (s, 3H), 2,70-2,77 (m, 1H), 2,86-2,93 (m, 1H), 4,07-4,14 (m, 2H), 4,34-4,37 (m, 1H), 4,45 (d, 1H, J= 9,6), 4,50-4,55 (m, 1H), 5,57 (d, 1H, J = 15,8), 6,60 (s, 1H), 6,66 (dd, 1H, J = 15,8, 5,5), 6,75 (s, pi., 1H), 6,96 (d, 2H, J = 8,1), 7,06 (d, 2H, J = 7,7), 7,17 (s, pi., 1H), 7,65 (d, 1H, J = 9,6), 8,14 (d, 1H, J = 8,1), 8,40 (d, 1H, J = 7,7); analizė (C3oH4iN50₇0,5TFA.O,5H₂0) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-4 - etiI-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(tbutil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-G/n)-E-propenoato - gavimas

(A-4)

Tarpinio etil-3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoato gavimas

Boc-L-(4-F-Phe)-OH (1,41 g, 5,0 mmol) ištirpinamas THF (50 ml). Pridedama etil-3-(H2N-L-(Tr-G/n)-E-propenoato-HCI (pagaminto pagal aukščiau aprašytą 2 pavyzdį, 1,0 g, 5,0 mmol), o po to Et₃N (0,70 ml, 5,0 mmol). Pridedama karbonildiimidazolo (0,81 g, 5,0 mmol), ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 20 valandų. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0-»1% CH₃OH CH2CI2) ir gaunamas etil-3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas (1,13 g, 32 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm’¹) 1712, 1666, 1510, 1169; ¹H BMR (DMSO-de) δ 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,29 (s, 9H), 1,61-1,70 (m, 2H), 2,27-2,34 (m, 2H), 2,74-2,78 (m, 1H), 2,86-2,90 (m, 1 H), 4,06-4,13 (m, 3H), 4,36-4,40 (m, 1H), 5,58 (d, 1H, J = 15,6), 6,71 (dd, 1H, J = 15,6, 5,5), 6,98 (d, 1H, J = 8,1), 7,03-7,09 (m, 2H), 7,14-7,28 (m, 17H), 8,06 (d, 1 H, J = 8,1), 8,53 (s, 1 H); MSGMS (M+Na) 730.

Tarpinio etil-3-(Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoato gavimas . - ^:

Etil-3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/fl)-E-propenoatas buvo deblokuotas, ir kopuliuotas su Boc-L-a-(t-butil-Gly)-OH, naudojant aukščiau aprašytą metodiką etil-3-(Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoatui gauti, ir gautas etil-3-(Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n))-Epropenoatas (54 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cnf¹) 1720, 1651, 150S, 1163; ¹H BMR (DMSO-de) δ 0,80 (s,-9H)H;20 ,(L3H, J = 7,0), 1,36 (s, 9H), 1,53-1,67 (m, 2H), 2,23-2,28 (m, 2H), 2,79-2,94 (m, 2H), 3,85 (d, 1H, J = 9,9), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,31-4,35 (m, 1H), 4,53-4,55 (m, 1 H), 5,46 (d, 1 H, J = 15,8), 6,36 (d, 1 H, J = 9,2), 6,64 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5), 6,97-7,03 (m, 2H), 7,13-7,28 (m, 17H), 8,08 (d, 1H, J = 8,1), 8,14 (d, 1H, J = 8,1), 8,49 (s, 1 H); analizė (C48H57N4O7F) C, H, N.

Tarpinio etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-FPhe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoato gavimas

Etil-3-(Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoatas deblokuojamas ir kopuliuojamas su 5-metilizoksazol-3-karbonilchloridu, naudojant aukščiau aprašytas metodikas etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G//7))-E-propenoatui gauti, ir gaunamas

ΘΐίΙ-3-((5’-ΠθΙΐΓιζοΚ53ζοΙ-3’-Κ3Γ0οηίΙ)-1-α-(ΚϋυίϊΙ-ΟΙν)-1-(4-Ρ-Ρήθ)-ί-(ΤΓ-6/η))E-propenoatas (74 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm' ¹) 1659, 1535, 1510; ¹H BMR (DMSO-cfe) δ 0,88 (s, 9H), 1,20 (t, 3H, J = 7,4), 1,52-1,67 (m, 2H), 2,23-2,28 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,75-2,82 (m, 2H), 2,892,96 (m, 1H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,32-4,36 (m, 1H), 4,45 (d, 1H, J = 9,6), 4,50-4,55 (m, 1H), 5,44 (d, 1 H, J = 15,6), 6,58 (s, 1H), 6,63 (dd, 1 H, J = 15,6, 5,5, 15,6), 6,93-6,99 (m, 2H), 7,13-7,28 (m, 17H), 7,64 (d, 1 H, J = 9,6), 8,16 (d, 1H, J = 8,5), 8,46 (d, 1H, J = 8,1), 8,51 (s, 1 H); analizė (C48H₅₂N₂O₇F) C, H, N.

Etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-G/n)E-propenoato gavimas

Etil-S-įįS’-metilizoksazol-S’-karbonilj-L-a-įt-butil-Glyj-L^-F-Phej-L-įTrG/n)]-E-propenoatas buvo deblokuotas, naudojant metodiką analogišką aukščiau aprašytai etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4Me-Phe)-L-G/n)-E-propenoatui gauti, ir gautas etil-3-((5’-metilizoksazol-3’karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-G/n)-E-propenoatas (80 % išeiga), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: IR (cm¹) 1653, 1543, 1223; ¹H BMR (DMSO-cfe) δ 0,88 (s, 9H), 1,21 (t, 3H, J = 7,4), 1,59-1,75 (m, 2H), 2,01-2,06 (m, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,75-2,82 (m, 2H), 2,89-2,96 (m, 1H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,33-4,36 (m, 1H), 4,44 (d, 1H, J= 9,6), 4,50-4,58 (m, 1 H), 5,47 (d, 1H. J = 15,8), 6,59 (s, 1H), 6,64 (dd, 1H, 15,8, 5,5), 6,75 (s, pi., 1H), 6,94-7,00 (m, 2H), 7,16 (s, pi., 1H), 7,18-7,23 (m, 2H), 7,69 (d, 1H, J = 9,6), 8,16 (d, 1H, J = 8,1), 8,44 (d, 1H, J=8,1); analizė (C₂₉H₃₈N₅O₇F) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-5 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L(4-F-Phe)-L-((S)-p/ro/-A/ą)}-E-propenoato - gavimas

O 'CO₂CH₂CH₃ (A-5)

Tarpinio (4S)-4-(2’-karboksietil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio gavimas

Į (4S)-4-(2-metoksikarboniletil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (pagaminto pagal Chida et al., J. Chem. Soc.

Chem. Commun. 1992, 1064 aprašymą) (10,5 g, 36,5 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH₃OH (150 ml) pridedama natrio hidroksido (27 ml 4,0 M tirpalo H₂0, 108 mmol, 3,0 ekv.), ir gautas su “debesėliais” reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 3,5 vai. Mišinys sukoncentruojamas sumažintame slėgyje iki ~30 ml tūrio, po to paskirstomas tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami MgSO₄ ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir išdžiovinus liekaną vakuume, gaunamas (4S)-4-(2'-karboksietil)-2,2-dimetiloksazolidin-3karboksirūgšties fref-butilo esteris (10,0 g, 100 % negrynintos medžiagos * išeiga). Ši medžiaga buvo naudojama negryninta. ¹H BMR (CDCb, rotamerų ~ j mišinys) δ 1,49 (s), 1,57 (s), 1,60 (s), 1,84-2,05 (m), 2,39-2,41 (m), 3,71-3,74 ί (m), 3,91-4,05 (m). ^;

Tarpinio (4S,4”S)-4-{3’-(4”-benzil-2”-okso-oksazolidin-3”-il)-3’- 1 oksopropil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio gavimas

Į (4S)-4-(2’-karboksietil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties frefbutilo esterio (5,80 g, 21,2 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF (450 ml) Q,°C temperatūroje pridedama trietilamino (8,87 ml, 63,6 mmol, 3,0 ekv.) ir po to pivaloilo chlorido (2,61 ml, 21,2 mmol, 1,0 ekv.). Šiek tiek neskaidrus reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 3,5 vai., tada pridedama ličio chlorido (0,988 g, 23,3 mmol, 1,1 ekv.) ir po to (S)-(-)-4-benzil-2-oksazolidinono (3,57 g, 20,1 mmol, 0,95 ekv.). Sušildžius iki 23 °C ir pamaišius 19 vai., reakcijos mišinys paskirstomas tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 ml).

Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami pusiau sočiu Na₂CO₃ (150 ml), džiovinami MgSO₄ ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (30 % EtOAc heksanuose) gaunamas (4S,4”S)-4-{3^,-(4”-benzil-2”-okso-oksazolidin-3”-il)-3’-oksopropil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (7,17 g, 83 %), kuris yra bespalvė alyva; IR (cm‘¹) 2978, 1783, 1694; ¹H BMR (CDCb, rotamerų mišinys) δ 1,49 (s), 1,59 (s), 1,63 (s), 2,01-2,10 (m), 2,76 (dd, J = 13,5, 9,8), 2,82-3,13 (m), 3,30-3,41 (m), 3,76-3,82 (m), 3,90 (s, pi.), 3,97 (dd, J = 9,0, 5,6), 4,10-4,19 (m), 4,63-4,71 (m), 7,22-7,36 (m); analizė (C23H32N2O6) C, H, N. , ·

Tarpinio (2’S,4S,4”S)-4-{2^,-(4”-benzil-2”-okso-oksazolidin-3”-karbonil)pent-4’-enii}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio gavimas

Į natrio bis(trimetilsiiil)amido (16,6 ml 1,0 M tirpalo THF, 16,6 mmol, ‘1,0 ekv.) tirpalą THF -78 °C temperatūroje (150 ml) supilamas (4S,4S)-4-{3’-(4’'benzil-2”-okso-oksazolidin-3-il)-3’-oksopropil}-2,2-dimetiloksazolidin-3karboksirūgšties fref-butilo esterio (7,17 g, 16,6 mmol, 1 ekv.) tirpalas tame pačiame tirpiklyje (50 ml). Reakcijos mišinys maišomas 20 min. -78 °C temperatūroje, po to pridedama aūlo jodido (4,55 ml, 49,8 mmol, 3,0 ekv.). Pamaišius dar 3 vai. -78 °C temperatūroje, reakcijos mišinys palaikomas -45 °C temperatūroje 2 vai., po to paskirstomas tarp 2:1 pusiau sotaus NH4CI ir 5 % Na₂S2C>3 mišinio (300 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 200 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami H₂O (200 ml), džiovinami MgSŪ4 ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir liekaną išgryninus sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (15 % EtOAc heksanuose), gaunamas (2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-benzii-2 -oksooksazolidin-3”-karbonil)-pent-4’-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (4,29 g, 55 %), kuris yra bespalvė alyva: IR (cm'¹) 2978, 1780, 1695; ¹H BMR (CDCI₃, rotamerų mišinys) δ 1,45 (s), 1,49 (s), 1,68-1,80 (m), 2,13-2,47 (m), 2,49-2,67 (m), 3,32 (dd, J = 13,4, 3,1), 3,69-3,97 (m), 4,11-4,21 (m), 4,66-4,74 (m), 5,06-5,13 (m), 5,74-5,88 (m), 7,20-7,36 (m); analizė (C₂₆H₃6N₂O₆) C, H, N.

Tarpinio (1S,3S)-{3-(r-(2”,4”-dimetoksibenzil)-2’-okso-piroHdin-3’-il)-1hidroksimetilpropilj-karbamo rūgšties fref-butilo esterio gavimas

Per (2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-benzil-2”-okso-oksazolidin-3’’-karbonil)-pent4'-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (4,29 g,

9,08 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH2CI2 (200 ml) ir CH3OH (0,735 ml, 18,1 mmol,

2,0 ekv.) -78 °C temperatūroje burbuliukais leidžiamas ozonas tol, kol laikosi mėlyna spalva. Po to reakcijos mišinys valomas argonu, kol jis tampa bespalvis. Pridedama metilsulfido (6,67 ml, 90,8 mmol, 10 ekv.), mišinys maišomas -78 °C temperatūroje 3,5 vai., po to palaikomas 0 °C temperatūroje dar 1 vai. Paskirsčius reakcijos mišinį tarp H₂O (200 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 200 ml), sumaišyti organiniai sluoksniai-džiovinami MgSO₄ ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir negryninta liekana tuoj pat naudojama.

Ši liekana ištirpinama 2:1 TFH ir EtOH mišinyje (240 ml) 23 °C temperatūroje ir pridedama iš eilės 2,4-dimetoksibenzilamino hidrochlorido (7,40 g, 36,3 mmol, 4,0 ekv.), natrio acetato (2,98 g, 36,2 mmol, 4,0 ekv.) ir natrio cianborhidrido (1,14 g, 18,1 mmol, 2,0 ekv.). Gauta suspensija maišoma 18 vai. 23 °C temperatūroje, po to paskirstoma tarp 0,5 M HCI (400 ml) ir EtOAc (2 x 200 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami pusiau * sočiu NaHCO3 (300 ml), džiovinami Na₂SO₄ ir sukoncentruojami sumažintame slėgyje. Liekana perleidžiama per trumpą silikagelio kolonėlę (eliuuojant 50 % EtOAc heksanuose) ir gaunamas (3’S,4S)-4-{1’-(2”,4”dimetoksibenzil)-2’-okso-pirolidin-3’-ilmetil}-2,2-dimetiloksazolidin-3karboksirūgšties fref-butilo esteris, turintis (S)-(-)-4-benzil-2-oksazolidinono priemaišų.

Ši medžiaga ištirpinama CH₃OH (100 ml) ir pridedama TsOH H₂O (0,345 g, 1,81 mmol, 0,20 ekv.). Reakcijos mišinys pašildomas iki 50 °C ir šioje temperatūroje palaikomas 2,5 vai. Atšaldžius iki 23 °C, reakcijos mišinys sukoncentruojamas sumažintame slėgyje iki ~20 ml tūrio ir paskirstomas tarp pusiau sotaus NaHCO₃ (150 ml) ir 9:1 CH₂CI₂ ir CH₃OH mišinio (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄ ir sukoncentruojami sumažintame slėgyje. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (3 % CH₃OH CH₂CI₂), gaunamas (1 S,3'S)-{2-(1 ’(2”,4”-dimetoksibenzil)-2’-okso-pirolidin-3’-il)-1-hidroksimetiletil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteris (1,62 g, 44 %), kuris yra putų pavidalo medžiaga: IR (cm‘¹) 3328, 1669; ¹H BMR (CDCI₃) δ 1,44 (s, 9H), 1,50-1,75 (m, 2H), 1,902,00 (m, 1H), 2,17-2,27 (m, 1H), 2,52-2,62 (m, 1H), 3,14-3,24 (m, 2H), 3,513,65 (m, 3H), 3,70-3,78 (m, 1H), 3,80 (s, 6H), 4,35 (d, 1H, J = 14,3), 4,48 (d, 1H, J = 14,3), 5,51-5,54 (m, 1H), 6,42-6,46 (m, 2H), 7,09-7,12 (m, 1H); analizė (Ο₂ιΗ₃₂Ν₂Οθ) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{Boc-L-({/V-2,4-dimetoksibenziI)-(S)-p/ro/-A/a})-Epropenoato gavimas

Į-78 °C temperatūros oksalilo chlorido ( 0,166 ml, 1,90 mmol, 1,5 ekv.) tirpalą CH2CI₂ (14 ml) įlašinama DMSO (0,270 ml, 3,80 mmol, 3 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 20 min., po to per kanulę, esančią prie reakcijos indo sienelės, supilamas (1S,3’S)-{2-(r-(2”,4”-dimetoksibenzil)-2’-oksopirolidin-3’-il)-1-hidroksimetiletiI}-karbamo rūgšties fref-butilo esterio (0,518 g, 1,27 mmol, 1 ekv.) tirpalas CH₂CI₂ (13 ml). Pamaišius 20 min., sulašinamas trietilaminas (1,06 ml, 7,60 mmol, 6 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas 1,5 vai. Pridedama acto rūgšties (0,479 ml, 8,37 mmol, 6,6 ekv.), reakcijos mišinys sušildomas iki 0 °C ir palaikomas 5 min., po to praskiedžiamas MTBE (200 ml) ir plaunamas vandeniu, sočiu NaHCO₃ ir sočiu NaCi tirpalu (po 25 ml). Organinė fazė džiovinama Na₂SC>4 ir sukoncentravus gaunamas negrynintas aldehidas, kuris yra putų pavidalo medžiaga (0,516 g, kiekybinė išeiga); jis naudojamas negrynintas.

Į trietilfosfonacetato (0,244 ml, 1,23 mmol, 1 ekv.) tirpaląTHF (15 ml) 78 °C temperatūroje pridedama natrio bis(trimetilsilil)amido (1,23 ml 1,0 M tirpalo THF, 1,23 mmol, 1 ekv.), ir gautas tirpalas maišomas 20 min. šioje temperatūroje. Per kanulę, esančią prie reakcijos indo sienelės, supilamas negrynintas aldehidas (pagamintas kaip aprašyta aukščiau, 0,500 g, 1,23 mmol, 1 ekv.) THF (13 ml), ir reakcijos mišinys maišomas 45 min. -78 °C temperatūroje, sušildomas iki 0 °C, palaikomas 7 min. ir paskirstomas tarp 0,5 M HCI (20 ml) ir MTBE (2 x 50 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami MgSO4 ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (60 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Boc-L((/V-2,4-dimetoksibenzil)-(SJ-p/ro//7-A/a})-E-propenoatas (0,356 g, 61 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: R_f = 0,43 (60 % EtOAc heksanuose); IR (cm'¹) 3307, 1708, 1678; ¹H BMR (CDCb) δ 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,43 (s, 9H), 1,52-1,70 (m, 2H), 1,98-2,09 (m, 1H), 2,21-2,34 (m, 1H), 2,48-2,59 (m, 1H), 3,16-3,24 (m, 2H), 3,80 (s, 6H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,27-4,40 (m, 1H), 4,41 (s, 2H), 5,40 (d, 1 H, J = 8,1), 5,95 (dd, 1 H, J = 15,6, 1,6), 6,41 -6,48 (m, 2H),

6,86 (dd, 1 H, J = 15,6, 5,3), 7,08-7,13 (m, 1H); analizė (C₂₅H₃6N₂O₇0,25 H₂O)

C, H, N.

Tarpinio etil-3-{Boc-L-(4-F-Phe)-L-(/V-2,4-dimetoksibenzil)-fS;-p/roM/a})E-propenoato gavimas

Ši medžiaga buvo pagaminta iš etil-3-{Boc-L-((/\/-2,4-dimetoksibenzil)(Sj-p/ro/-A/a})-E-propęnoato ir Boc-L-(4-F-Phe)-OH naudojant metodiką panašią į aukščiau aprašytą metodiką etil-3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)-Epropenoatui gauti (4 pavyzdys): R_f = 0,34 (60 % EtOAc heksanuose); IR (cm' ¹) 3258, 1705, 1666; ¹H BMR (CDCb) δ 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,45 (s, 9H), 1,51-1,55 (m, 2H), 1,78-1,90 (m, 1H), 2,06-2,23 (m, 2H), 2,99 (dd, 1H, J = ^&

13,7, 6,2), 3,11 (dd, 1H, J = 13,7, 5,3), 3,17-3,23 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,81 ^S (s, 3H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,35 (s, 2H), 4,38-4,51 (m, 2H), 5,29-5,37 (m,

1H), 5,76 (d, 1H, J = 15,8), 6,43-6,47 (m, 2H), 6,72 (dd, 1H, J = 15,8, 5,3), 6,83-6,91 (m, 2H), 7,09-7,17 (m, 3H), 7,92 (pi., 1H); analizė (C34H44N3FO8) C, ^C

H, N.

Tarpinio etil·3-{Boc-L·Val-L-(4-F-Phe)-L·(Λ^2,4-dimetoksibenzil)>(SJ-p/ro/A/a})-E-propenoato gavimas

Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{Boc-L-(4-F-Phe)-L-((/V-2,4dimetoksibenzil)-(S)-p/ra/-A/a})-E-propenoato ir Boc-L-Val-OH naudojant metodiką panašią į aukščiau aprašytą metodiką etil-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-G/n)E-propenoatui gauti (2 pavyzdys): Rf = 0,24 (60 % EtOAc heksanuose); IR (cm'¹) 3284, 1713, 1678 pi., 1643; ¹H BMR (CDCb) δ 0,91 (d, 3H, J = 6,8),

0,97 (d, 3H, J = 6,8), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,45 (s, 9H), 1,50-1,62 (m, 2H),

I, 66-1,82 (m, 1H), 1,90-2,02 (m, 1H), 2,08-2,21 (m, 2H), 2,94 (dd, 1H, J =

13,5, 5,8), 3,17-3,27 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 3,97-4,05 (m, 1H),

4,17 (kv, 2H, J =7,2), 4,27 (d, 1H, J = 14,3), 4,29-4,38 (m, 1H), 4,40 (d, 1H, J = 14,3), 4,86-4,93 (m, 1H), 5,10 (d, 1H, J= 8,7), 5,76 (dd, 1H, J = 15,6, 1,2),

6,45-6,52 (m, 2H), 6,70 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 6,79-6,88 (m, 3H), 7,12-7,22 (m, 3H), 8,30 (d, 1H, J = 5,9); analizė (C₃₉H₅₃ FN₄O₉) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-(A/-2,4dimetoksibenzil)-fS)-p/ro/-A/a})-E-propenoato gavimas

Šis junginys buvo pagamintas iš βίϋ-3-{Βοο-1_-νθΙ-Ι_-(4-Ρ-ΡΐΊθ)-Ι_-(Λ/-2,4dimetoksibenzil)-(S)-p/?o/-A/a})-E-propenoato ir izoksazol-5-karbonilchlorido naudojant aukščiau aprašytą metodiką (2 pavyzdys) etil-3-((5'-metilizoksazol3’-karbonil)-L-leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)-E propenoatųi gauti; Rf = 0,36 (5 % CH₃OH CH2CI2); IR (cm’¹) 3284, 1717, 1650; ¹H BMR (CDCi₃) ό 0,97 (d, 3H, J = 6,8), 1,01 (d, 3H, J = 6,8), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,51 -1,64 (m, 2H), 1,72-1,84 (m, 1H), 1,95-2,05 (m, 1H), 2,11-2,33 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,98 (dd, 1H, J = 13,7, 5,6), 3,16-3,24 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,23 (d, 1 H, J = 14,3), 4,31-4,42 (m, 1H), 4,40 (d, 1H, J = 14,3), 4,44-4,50 (m, 1H), 4,88-4,96 (m, 1H), 5,79 (dd, 1H, J = 15,6, 1,4), 6,43-6,49 (m, 3H), 6,71 (dd, 1 H, J = 15,6, 5,3), 6,80-6,88 (m, 2H), 6,94 (d, 1H, J= 9,3), 7,11-7,17 (m, 3H), 7,29 (d, 1H, J = 8,7), 8,33 (d, 1H, J = 6,2); analizė (CagH^FNsOg-O.S^O) C, H, N.

Produkto - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S_j)p/ro/-A/ą)}-E-propenoato - gavimas

Etil-3-{(5^,-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-(A/-2,4dimetoksibenzil)-(Sy)-p/ro/-A/a})-E-propenoato (0,263 g, 0,351 mmol, 1 ekv.), vandens (2 lašai) ir DDQ (0,104 g, 0,458 mmol, 1,3 ekv.) suspensija virinama su grįžtamu šaldytuvu 9 vai., po to leidžiama atšalti iki kambario temperatūros per 8 vai. Reakcijos mišinys praskiedžiamas CH2CI2 (200 ml) ir plaunamas 2:1 sotaus NaHCO3 ir 1 N NaOH mišiniu (20 ml). Organinė fazė džiovinama MgSO4 ir nugarinama. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 2->3 % CH3OH CH2CI2), gaunamas etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-p/ro/A/a)}-E-propenoatas (0,117 g, 56 %), kuris yra balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 219-220 °C; Rf = 0,23 (5 % CH3OH CH2CI2); IR (cm'¹) 3401 pi., 3295, 1655 pi.; ¹H BMR (CDCI3) δ 0,94 (d, 3H, J = 6,8), 0,97 (d, 3H, J = 6,5), 1,29 (t,

3H, J = 7,2), 1,54-1,65 (m, 1H), 1,72-1,91 (m, 2H), 2,07-2,26 (m, 2H), 2,282,39 (m, 1 H), 2,49 (d, 3H, J = 0,9), 3,01 (dd, 1 H, J = 13,8, 6,1), 3,12 (dd, 1 H, J = 13,8, 6,4), 3,26-3,38 (m, 2H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,34 (dd, 1H, J = 8,7, 7,2), 4,43-4,54 (m, 1H), 4,90 (dt, 1H, J = 9,0, 6,2), 5,76 ((dd, 1H, J = 15,6, 1,6), 6,00 (s, 1H), 6,42 (kv, 1H, J = 0,9), 6,72 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 6,866,94 (m, 2H), 7,01 (d, 1H, J = 9,0), 7,11-7,18 (m, 2H), 7,21 (d, 1H, J = 8,7), 7,76 (d, 1 H, J = 7,2); analizė (C30H38FN5O7) C, -H, N.

pavyzdys: Junginio A-6 - βίϋ-3-[(5’-ιτιβ1ίΗζοΚ83ζρΙ-3’·4<3ΐ1ϊοηίΙ)-Ι_-ν3ΐ-1(4-F-Phe)-L-G/n]-E-propenoato - gavimas

(A-6) ,S-..

Tarpinio etil-3-{Boc-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propenoato gavimas

Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-(Boc-L-(Tr-G/n)-E-propenoato ir Boc-L-(4-F)-Phe-OH naudojant metodiką panašią į aukščiau aprašytą (2 pavyzdys) metodiką etil-3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propenoatui gauti: IR (cm' ¹) 3328, 1707, 1506, 1168; ¹H BMR (CDCI₃) δ 1,29 (t, 3H,. J = J,-2)/1,37 (s, 9H), 1,66-1,78 (m, 1H), 1,88-1,98 (m, 1H), 2,32 (t, 2H, J = 6,6), 2,85-2,92 (m, 1 H), 2,97-3,04 (m, 1 H), 4,15 (kv, 2H, J = 7,2), 4,52 (m, 1 H), 4,96 (m, 1 H), 5,60 (d, 1 H, J = 15,6), 6,56 (d, 1H, J= 8,1), 6,66 (dd, 2H, J= 15,6, 5,1), 6,80 (s, pi., 1H), 6,92-6,98 (m, 2H), 7,08-7,12 (m, 2H), 7,17-7,23 (m, 6H), 7,24-7,33 (m, 10H); analizė (C42H46FN3O6) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{Boc-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propenoato gavimas

Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{Boc-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-G//7)-Epropenoato ir Boc-L-Val-OH aukščiau aprašytu (2 pavyzdys) būdu etil-3-{BocL-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propenoatui gauti: IR (cm'¹) 3319, 1657, 1511, 1172; ¹H BMR (CDCb) δ 0,78 (d, 3H, J = 6,9), 0,87 (d, 3H, J = 6,9), 1,29 (t,

3H, J = 7,2), 1,37 (s, 9H), 1,69-1,79 (m, 1 H), 1,93-2,06 (m, 2H), 2,33 (t, 2H, J = 7,2), 2,97-3,04 (m, 1H), 3,73-3,77 (m, 1H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,42-4,54 (m, 2H), 4,80 (d, 1H, J = 6,9), 5,61 (dd, 1H, J = 15,6, 1,5), 6,44 (d, 1H, J = 7,8), 6,69 (dd, 2H, J = 15,9, 5,4), 6,71 (s, pi., 1H), 6,92-6,98 (m, 2H), 7,077,13 (m, 2H), 7,18-7,31 (m, 16H), 8,02 (s, 1H); analizė (C47H55FN4O7) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(TrG/n)-E-propenoato gavimas

Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{Boc-L-Vai-L-(4-F)-Phe-L-(TrG/n)-E-propenoato ir 5-metilizoksazol-3-karbonilchiorido aukščiau aprašytu (2 pavyzdys) būdu etil-3-{(5'-metiiizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)E-propenoatui gauti: IR (cm'¹) 3319, 1657, 1511, 1172; ¹H BMR (CDCb) δ 0,84 (d, 3H, J = 6,9), 0,89 (d, 3H, J = 6,9), 1,30 (t, 3H, J = 7,2), 1,68-1,80 (m, 1H), 1,95-2,06 (m, 1H), 2,07-2,17 (m, 1H), 2,34 (t, 2H, J = 7,2), 2,44 (s, 3H), 2,87-2,94 (m, 1H), 3,01-3,08 (m, 1H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,48-4,56 (m, 2H), 5,68 (dd, 1H, J = 15,6, 1,8), 6,23 (s, 1H), 6,39 (d, 1H, J = 7,8), 6,70 (dd, 1H, J = 15,9, 5,4), 6,84-6,90 (m, 3H), 7,04-7,08 (m, 4H), 7,17-7,30 (m, 16H); analizė (C47H50N5O7) C, H, N.

Produkto - etil-3-[(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-G/n]E-propenoato - gavimas

Etil-3-{(5’-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-VaI-L-(4-F)-Ph2-L-(Tr-G//?)-Epropenoatas buvo deblokuotas naudojant aukščiau aprašytą (2 pavyzdys) metodiką etil-3-((5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n}-Epropenoatui gauti: IR (cm'¹) 3284, 1652, 1542; ¹H BMR (DMSO-ofe) δ 0,76 (d, 3H, J = 6,9), 0,79 (d, 3H, J = 6,9), 1,20 (t, 3H, J = 7,2), 1,57-1,76 (m, 2H), 1,96-2,06 (3H), 2,46 (s, 3H), 2,75-2,83 (m, 1H), 2,89-2,96 (m, 1H), 4,09 (kv, 2H, J= 7,2), 4,13-4,25 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,49-4,56 (m, 1H), 5,53 (d, 1H, J = 15,6), 6,57 (s, 1H), 6,66 (dd, 1H, J= 15,6, 5,4), 6,75 (s, pi., 1H), 6,97-7,03 (m, 2H), 7,17-7,24 (m, 3H), 8,15 (d, 1H, J = 7,8), 8,24 (d, 1H, J = 8,1), 8,32 (d, 1H, J = 8,1); analizė (C28H36N5O7) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-7 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(tbutil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-p/ro/-A/a}-E-propenoato - gavimas

(A-7)

Tarpinio Boc-L-(4-F-Phe)-OBn gavimas

Į Boc-L-(4-F-Phe)-OH (1,0 g, 3,53 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH₂CI₂ (15 ml) pridedama iš eilės DCC (0,765 g, 3,71 mmol, 1,05 ekv.), benzilo alkoholio (0,347 ml, 3,35 mmol, 0,95 ekv.) ir DMAP (0,022 g, 0,18 mmol, 0,05 ekv.). Pamaišius 18 valandų, nuosėdos nufiltruojamos, o filtratas praskiedžiamas MTBE (75 ml), plaunamas 10 % KHSO4 ir sočiu NaCI tirpalu (po 10 ml), džiovinamas Na₂SO4 ir nugarinamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (12 % EtOAc heksanuose), gaunamas Boc-L-(4-FPhe)-OBn (0,992 g, 79 %), kuris yra balta kieta medžiaga. ¹H BMR spektrų duomenys sutampa su literatūriniais (žr. Jackson et ai., J. Org. Chem. 1992, vol. 57, 3397).

Tarpinio Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-OBn gavimas

Boc-L-(4-F-Phe)-OBn (2,0 g, 5,36 mmol, 1 ekv.) maišomas 1 vai. CH₂CI₂ (20 ml) ir TFA (10 ml) mišinyje, po to pridedama daugiau TFA (10 ml) ir reakcijos tirpalas maišomas dar vieną valandą. Lakios medžiagos nugarinamos, o liekana ištirpinama DMF (30 ml). Pridedama Boc-L-a-(t-butilGly)-OH (1,24 g, 5,36 mmol, 1 ekv.) ir tirpalas atšaldomas iki 0 °C. Pridedama N,N-diizopropiletilamino (2,80 ml, 15,1 mmol, 3 ekv.), o po to HATU (2,04 g, 5,37 mmol, 1 ekv.). Pamaišius 20 min., reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros per 1 valandą po to praskiedžiama MTBE (500 ml) ir plaunama 5 % KHSO₄ (100 ml), sočiu NaHCCh (50 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (50 ml). Organinė fazė išdžiovinama ir nugarinama. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (20 % EtOAc heksanuose), gaunamas Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-OBn (2,04 g, 78 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: R_f = 0,49 (25 % EtOAc heksanuose); IR (cm'¹) 3307, 1737, 1655 pi.; ¹H BMR (CDCb) δ 0,94 (s, 9H), 1,45 (s, 9H), 3,04 (dd, 1 H, J = 14,2, 5,8), 3,11 (dd, 1H, J = 14,2, 6,1), 3,79 (d, 1H, J = 9,3), 4,88 (dt, 1H, J = 7,8, 5,8), 5,08 (d, 1H, J = 12,0), 5,16-5,23 (m, 1 H), 5,19 (d, 1 H, J = 12,0), 6,08 (d, 1H, J = 7,8), 6,83-6,97 (m, 4H), 7,28-7,40 (m, 5H); analizė (C₂7H3₅FN₂O₅) C, H, N. ’

Tarpinio etil-3-{Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((/V-2_J4-dimetoksibenzil)-(S)-p/ro/-A/a)}-E-propenoato gavimas

Į ·. etil-3-{Boc-L-((A/-2,4-dimetoksi-benzil)-(Sj-p/ro/-A/a)}-E-propenoato (0,309 g, 0,648 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (8 ml) pridedama HCI tirpalo 1,4-dioksane (4,0 M, 8 ml). Pamaišius 1,5 vai., lakios medžiagos nugarinamos ir gaunama putų pavidalo negryninta amino druska.

Į Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-OBn (2,04 g, 4,19 mmol) tirpalą EtOAc (200 ml) pridedama paladžio ant anglies (10 %, 200 mg). Atmosfera pakeičiama vandeniliu iš baliono. Pamaišius 3 vai., atmosfera pakeičiama argonu, ir reakcijos mišinys nufiltruojamas per #3 ir #5 VVhatman’o filtro popierių Nugarinus filtratą gaunama balta putų pavidalo medžiaga.

Šios putos sumaišomos su negryninta amino druska (pagaminta aukščiau aprašytu būdu) DMF (5 ml) ir atšaldoma iki 0 °C. Pridedama N,Ndiizopropiletilamino (0,339 ml, 1,95 mmol, 3 ekv.), o po to HATU (0,247 g, 0,650 mmol, 1 ekv.). Pamaišius 20 min., reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros ir palaikoma 1 vai., po to praskiedžiama MTBE (100 ml) ir plaunama 5 % KHSO4, sočiu NaHCO3 ir sočiu NaCi tirpalu (po 15 ml). Organinė fazė išdžiovinama ir nugarinama. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (60 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil3-{Boc-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((A/-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/'ro/-A/a)}E-propenoatas (0,364 g, 74 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: R_f = 0,34 (60 % EtOAc heksanuose); IR (cm'¹) 3284, 1713, 1655; ¹H BMR (CDCb) δ 1,01 (s, 9H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,46 (s, 9H), 1,50-1,63 (m, 2H), 1,68-1,81 (m, 1H), 1,85-1,99 (m, 1H), 2,09-2,20 (m, 1H), 2,94 (dd, 1H, J = 13,5, 5,4), 3,15-3,26 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 3,97 (d, 1H, J = 9,3), 4,17 (kv,

2H, J = 7,2), 4,27-4,38 (m, 1H), 4,29 (d, 1H, J = 14,3), 4,42 (d, 1 H, J = 14,3),

4,84-4,92 (m, 1 H), 5,22 (d, 1 H, J = 9,6), 5,74 (dd, 1 H, J = 15,6, 1,6), 6,45-6,53 (m, 2H), 6,69 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 6,76-6,87 (m, 3H), 7,10-7,28 (m, 3H),

8,26 (d, 1H, J = 5,9); analizė (C40H5SFN4O9) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-FPhe)-L-((/V-2,4-dimetoksibenzil)-(SJ-p/ro/-A/a)}-E-propenoato gavimas

Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{Boc-L-cc-(t-butil-Gly)-L-(4-FPhe)-L-((/V-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/ro/-A/a)}-E-propenoato ir izoksazol5-karbonilchlorido, naudojant aukščiau aprašytą (2 pavyzdys) metodiką etil-3- - · {(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L(Tr-G/rt)-E-propenoatui gauti: Rf = 0,60 (10 % CH3OH CHCb); IR (cm'¹) 3295, 1713, 1666; ¹H BMR (CDCI₃) δ 1,07 (s, 9H), 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,51-1,64 (m, 2H), 1,71-1,83 (m, 1H), 1,962,07 (m, 1H), 2,11-2,21 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,99 (dd, 1H, J = 13,7, 5,9),

3,13-3,26 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,23-4,48 (m, 4H), 4,85-4,93 (m, 1H), 5,76 (dd, 1H, J = 15,6, 1,4), 6,40-6,52 (m, 3H), H

6,71 (dd, 1 H, J = 15,6, 5,3), 6,79-6,88 (m, 2H), 6,92 (d, 1 H, J = 9,0), 7,09-7,22 ^? | (m, 3H), 7,37 (d, 1H, J = 9,0), 8,27 (d, 1H, J = 6,2); analizė ^Λ * (C4oH₅₀FN₅0₉0,25H₂0) C, H, N.

Produkto - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-a-(t-butil-Gly)-L-(4-FPhe)-L-((SJ-p/ro/-A/a}-E-propenoato - gavimas

Šis junginys buvo pagamintas iš etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-La-(t-butil-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((/V-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/ro/-A/a)}-Epropenoato, naudojant aukščiau aprašytą (2 pavyzdys) metodiką etil-3-{(5’metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-p/roM/a)}-E-propenoatui gauti: R_f = 0,30 (5 % CH3OH CHCI₃); IR (cm'¹) 3307 pi., 1684, 1660; ¹H BMR (CDCb) δ 1,02 (s, 9H), 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,51-1,61 (m, 1H), 1,75-1,97 (m, 2H), 2,14-2,25 (m, 1H), 2,28-2,40 (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 3,03 (d, 2H, J = 6,5),

3.27- 3,42 (m, 2H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,36 (d, 1H, J = 9,8), 4,52-4,63 (m, 1H), 4,86-4,95 (m, 1H), 5,71 (dd, 1H, J = 15,6, 1,4), 6,44 (s, 1H), 6,57-6,64 (m, 1H), 6,73 (dd, 1H, J = 15,6, 5,3), 6,83-6,91 (m, 2H), 7,09-7,15 (m, 2H),

7.28- 7,36 (m, 2H), 7,59 (d, 1H, J = 8,1); analizė (C3iH₄oFN₅0₇) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-8 - etil-S-flS’-metilizoksazoI-S’-karbonilJ-L-Val-L· (4-F-Phe)-L-(fS)-p/per-A/a}-E-propenoato - gavimas

(A-8)

Tarpinio (2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-benzil-2”-okso-oksazolidin-3”-karbonil)5’-hidroksipentil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio gavimas

Į 0 °C temperatūros (2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-benzil-2”-okso-oksazolidin3”-karbonil)-pent-4’-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (pagamintas pagal 6 pavyzdyje aprašytą metodiką 0,455 g, 0,963 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF (3 ml) pridedama borano-tetrahidrofurano komplekso (0,96 ml 1,0 M tirpalo THF, 0,96 mmol, 1 ekv.). Pamaišius 30 min. pridedama vandens (3 ml), ir natrio perborato tetrahidrato (0,148 g, 0,962 mmol, 1 ekv.), ir ledo vonia nuimama. Palaikius dar valandą reakcijos mišinys praskiedžiamas MTBE (125 ml), plaunamas vandeniu (15 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (2 x 15 ml), džiovinamas Na₂SO4 ir sukoncentruojamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (50 % EtOAc heksanuose), gaunamas (2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-benzil-2”-okso-oksazolidin-3”karbonil)-5’-hidroksipentil}-2,2-dimetil-oksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (0,339 g, 72 %), kuris yra bespalvė stiklo pavidalo medžiaga; Rf = 0,41 (50 % EtOAc heksanuose); IR (cm’¹) 3486, 1780, 1693; ¹H BMR (CDCI₃) δ 1,42-1,85 (m, 21 H), 2,13-2,24 (m, 1H), 2,70 (dd, 1 H, J = 13,1,10,0), 3,29-3,38 (m, 1H), 3,61-4,22 (m, 8H), 4,63-4,76 (m, 1H), 7,19-7,38 (m, 5H); analizė (C₂₆H₃₈N₂O7 0,5H₂O) C, H, N.

Tarpinio (1S,3’S)-{2-(r-(2”,4”-dimetoksibenzil)-2’-okso-piperidin-3’-il)-1hidroksimetiletilj-karbamo rūgšties fref-butilo esterio gavimas (2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-benzil-2’^,-okso-oksazolidin-3-karbonil)-5’hidroksipentil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (3,88 g, 7,92 mmol, 1 ekv.) ištirpinamas Et₃N (3,97 ml, 28,51 mmol, 3,6 ekv.). Mišinys atšaldomas iki -12 °C ir dedamas sieros trioksido-piridino kompleksas (5,04 g, 31,67 mmol, 4 ekv.) DMSO (150 ml) tokiu greičiu, kad temperatūra būtų tarp 8-17 °C. Tirpalas maišomas 23 °C temperatūroje 3 vai. Reakcijos mišinys'atšaldomas ledinio vandens vonioje ir skaldomas pridedant H₂O (150 » ml). Gautas tirpalas ekstrahuojamas EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami 5 % citrinos rūgštimi (100 ml), sočiu NaCI tirpalu (100 ml), džiovinami Na₂SO₄ ir nufiltruojami. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir vakuume išdžiovinus liekaną gaunama balta putų pavidalo medžiaga (3,53 9)·

Į Šios medžiagos (3,53 g, 7,22 mmol, 1 ekv.) tirpalą 2:1 THF ir EtOH mišinyje (120 ml) pridedama 2,4-dimetoksibenzilamino hidrochlorido (5,88 g, 28,89 mmol, 4 ekv.), NaOAc (2,37 g, 28,89 mmol, 4 ekv.) ir NaBH₃CN (0,908 g, 14,45 mmol, 2 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas per naktį (20 vai.), po to praskiedžiamas MTBE (200 ml). Organinis sluoksnis plaunamas 10 % KHSO₄ (100 ml), sočiu NaHCO₃ (100 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (100 ml), džiovinamas Na₂SO₄ ir sukoncentravus gaunama gelsva putų pavidalo medžiaga.

Į šios putų pavidalo medžiagos (3,34 g, 7,22 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH₃OH (50 ml) pridedama p-toluensulfonrūgšties (0,275 g, 1,44 mmol, 0,2 · ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 50 °C temperatūroje 2,5 vai. ir po to praskiedžiamas CH₂CI₂ (100 ml). Organinis sluoksnis, plaunamas sočiu NaHCO₃ (100 ml), džiovinamas Na₂SO₄ ir sukoncentruojamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (3 % CH₃OH CH₂CI₂), gaunamas (1 S,3’S)-{2-(1 ^,-(2”,4”-dimetoksibenzil)-2’-okso-piperidin-3’-il)-1 hidroksimetiletilj-karbamo rūgšties fref-butilo esteris, kuris yra balta putų pavidalo medžiaga (1,33 g, 44 % per tris stadijas): ¹H BMR (CDCI₃) δ 1,44 (s, 9H), 1,71-1,85 (m, 2H), 1,92-1,98 (m, 2H), 2,40-2,48 (m, 1H), 2,71-2,78 (m, 1H), 3,19-3,32 (m, 2H), 3,45-3,69 (m, 4H), 4,11-4,20 (m, 2H), 4,68 (m, 1H), 5,47 (m, 1H), 6,44 (s, 1H), 7,20-7,33 (m, 2H).

Produkto - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((SJp/per-A/a}-E-propenoato - gavimas (1S,3’S)-{2-(T-(2”,4”-dimetoksibenzil)-2’-okso-piperidin-3’-il)-1hidroksimetiletilj-karbamo rūgšties fref-butilo esteris paverčiamas į produktą etil-3-{(5'-metHizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((SJ-p/per-/l/a}-Epropenoatą - analogišku būdu kaip ir aprašytas aukščiau duotame 6 pavyzdyje (1 S,3’S)-{2-(1’-(2’’_l4”-dimetoksibenzil)-2’-okso-piperidin-3’-il)-1hidroksimetiletil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteris paverčiamas į produktą etil-3-{(5’-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-p/roM/a}-Epropenoatą Rf = 0,24 (5 % CH3OH CH2CI2); IR (cm'¹) 3284 pi., 1713, 1655, 1637 pi.; ¹H BMR.(CDCI₃) δ 0,94 (d, 3H, J = 6,8), 0,98 (d, 3H, J = 6,8), 1,29 (t 3H, J = 7,2), 1,43-1,56 (m, 2H), 1,66-1,78 (m, 1H\ *,83-2,05 (m, 4H), 2,162.28 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H, J= 13,7, 6,2), 3,13 (dd, 1H, J= 13,7, 5,9), 3,21-3,37 (m, 2H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,36-4,45 (m, 2H), 4,80-4,88 (m, 1 H), 5,76 (dd, 1 H, J = 15,6, 1,6), 5,96 (s, 1 H), 6,43 (s, 1 H), 6,70 (dd, 1 H, J = 15,6, 5,3), 6,81 (d, 1H, J = 8,7), 6,86-6,98 (m, 2H), 7,09-7,19 (m, 2H), 7,227.29 (m, 1 H), 8,07 (d, 1 H, J = 6,5).

pavyzdys: Junginio B-1 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-LValT(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-G/n}-E-propenoato - gavimas

Tarpinės trans-6-metilhept-4-eno rūgšties gavimas

Į vinilmagnio bromido (133 ml 1,0 M tirpalo THF, 133 mmol, 1,0 ekv.) tirpalą THF (300 ml) 0 °C temperatūroje per lašinimo piltuvėlį sulašinamas izobutiraldehido (9,59 g, 133 mmol, 1 ekv.) tirpalas THF (50 ml). Pabaigus lašinti, reakcijos mišinys maišomas 30 min. 0 °C temperatūroje, po to pridedama etilmalonilchlorido (17,0 ml, 133 mmol, 1,0 ekv.) Pamaišius 1 vai.

O °C temperatūroje, reakcijos mišinys paskirstomas tarp sotaus NH4CI (150 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 200 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄ ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną nufiltruojant per silikagelį (eliuuojama 5 % EtOAc heksanuose), gaunamas tarpinis malono rūgšties esteris (11,5 g, 40 % išeiga). Ši medžiaga charakterizuota nebuvo, bet buvo sumaišyta (gryna) su Ti(0Et)4 (1,13 ml, 5,3& mmol, 0,10 ekv.) ir kaitinama 190 °C temperatūroje 4 vai., po to atšaldoma iki 60 °C. Pridedama EtOH (50 ml), po to 6,0 M KOH (50 ml) ir rudas reakcijos mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 4 vai. Atšaldžius iki 23 °C, reakcijos mišinys nufiltruojamas per vidutinio tankumo sukepinto stiklo filtrą ir filtratas paskirstomas tarp vandens (150 ml) ir Et₂O (2 x 150 ml). Po to vandeninis sluoksnis parūgštinamas iki pH = 2 (pagal pH popierėlį) koncentruota HCI ir ekstrahuojama 1:1 EtOAc ir heksanų mišiniu (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO4, koncentruojami ir liekaną nudistiliavus sumažintame slėgyje, gaunama trans-6-metilhept-4-eno rūgštis (3,58 g, 47 %), kuri yra bespalvis skystis: vir. temp. 107-112 °C (1 toras); IR (cm'¹) 2960, 1711; ¹H BMR (CDCI₃) δ 0,96 (d, 6H, J = 6,5), 2,18-2,45 (m, 5H), 5,31-5,50 (m, 2H); analizė (C₈Hi₄O₂) C, H.

Tarpinio trans-6-metilhept-4-eno rūgšties (2R-hidroksi-1/?-metil-2feniletiljmetilamido gavimas

Į trans-6-metilhept-4-eno rūgšties (3,50 g, 24,6 mmol, 1 ekv.) ir N,Ndimetilformamido (0,03 ml, 0,39 mmol, 0,016 ekv.) tirpalą benzene (60 ml) 23 °C temperatūroje pridedama oksalilo chlorido (2,25 ml, 25,8 mmol, 1,05 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 2 vai., po to sukoncentruojamas sumažintame slėgyje. Gauta alyva ištirpinama THF (20 ml) ir 0 °C temperatūroje supilama per kanulę į (1R,2R)-(-)pseudoefedrino (3,87 g, 23,4 mmol, 1 ekv.) ir trietilamino (3,92 ml, 28,1 mmol, 1,2 ekv.) tirpalą THF (150 ml). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 min., po to paskirstomas tarp pusiau sotaus NH₄CI (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO4, sukoncentruojama ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 40->50 % EtOAc heksanuose), gaunamas trans-6-metilhept-4-eno rūgšties (2F?-hidroksi-1F?-metil-2-feniletil)metilamidas (6,31 g, 93 %), kuris yra klampi alyva: Rf = 0,35 (50 % EtOAc heksanuose); IR (cm'¹) 3382, 1622; ¹H BMR (CDCb, rotamerų mišinys) δ 0,96 (d, J = 6,8), 0,97 (d, J - 6,5), 1,11 (d, J = 6,9), 2,18-2,59 (m), 2,82 (s), 2,92 (s), 3,99-4,04 (m), 4,32-4,42 (m), 4,444,49 (m), 4,55-4,62 (m), 5,32-5,49 (m), 7,24-7,42 (m); analizė (C18H27NO2) C, H.

>

Tarpinio trans-6-metil-2S-(4-fluorbenzil)-hept-4-eno rūgšties (2Rhidroksi-1 R-metil-2-feniletil)metilamido gavimas

Į bevandenio ličio chlorido (7,18 g, 169 mmol, 10 ekv.) ir diizopropilamino (7,80 ml, 55,7 mmol, 3,3 ekv.) suspensiją THF (250 ml) -78 °C temperatūroje pridedama n-butilličio (32,5 ml 1,6 M tirpalo heksanuose, 52,0 mmol, 3,1 ekv.).Reakcijos mišinys maišomas -78 °C temperatūroje 30 min., palaikomas 5 min. 0 °C temperatūroje ir po to vėl atšaldomas iki -78 °C temperatūros. Per kanulę pridedama trans-6-metilhept-4-eno rūgšties (2Rhidroksi-1/?-metil-2-feniletil)metilamido (4,91 g, 17,0 mmol, 1 ekv.) THF (50 ml) ir gautas tirpalas maišomas -78 °C temperatūroje 1,75 vai., palaikomas 0 °C temperatūroje 20 min., maišomas 23 °C temperatūroje 5 min., po to vėl atšaldomas iki 0 °C temperatūros. Supilamas 4-fluorbenzilbromido (6,34 ml, 50,9 mmol, 3 ekv.) tirpalas THF (15 ml) ir reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 30 min., po to paskirstomas tarp pusiau sotaus NH4CI (230 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (200 ml, 2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO4 ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 20-»40 % EtOAc heksanuose), gaunamas trans-6-metil-2S-(4-fluorbenzil·)hept-4-eno rūgšties (2F?-hidroksi-1R-metil-2-feniletil)metilamidas (6,33 g, 94 %), kuris yra klampi alyva: Rf = 0,38 (40 % EtOAc heksanuose); IR (cm‘¹) 3378, 1614; ¹H BMR (CDCI3, rotamerų mišinys) δ 0,85-0,95 (m), 0,96 (d, J =

6,8), 2,10-2,32 (m), 2,34-2,46 (m), 2,58 (s), 2,67-2,79 (m), 2,82-2,94 (m), 3,00-3,18 (m), 3,94 (pi.), 4,37-4,52 (m), 5,24-5,42 (m), 5,44-5,56 (m), 6,897,01 (m), 7,08-7,14 (m), 7,19-7,38 (m); analizė (C25H32FNO2) C, H, N.

Tarpinio 5S-(1R-brom-2-metilpropil)-3R-(4-fluorbenzil)dihidrofuran-2-ono gavimas

Į trans-6-metil-2S-(4-f!uorbenzil)-hept-4-eno rūgšties (2R-hidroksi-1 Rmetil-2-feniletil)metilamido (6,24 g, 15,7 mmol, 1 ekv.) ir ledinės acto rūgšties (4,49 ml, 78,4 mmol, 5 ekv.) tirpalą 4:1 THF ir H₂O mišinyje (165 ml) 0 °C temperatūroje per 10 minučių mažomis dalimis pridedama N-bromsukcinimido (2,93 g, 16,5 mmol, 1,05 ekv.). Gautas geltonas tirpalas įpaišomas 15 min. 0 °C temperatūroje, po to sušildomas iki 23 °C, o po to virinamas su grįžtamu šaldytuvu 45 min. Atvėsinus iki 23 °C, reakcijos mišinys paskirstomas tarp pusiau sotaus NaHCO₃ (200 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 200 ml,

100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄ ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 4-»10% EtOAc heksanuose), gaunamas 5S-(1Rbrom-2-metilpropil)-3R-(4-fluorbenzil)dihidrofuran-2-onas (4,14 g, 80%), kuris yra gelsva alyva (pagal ¹H BMR turinti maždaug 5-10 % neidentifikuotų priemaišų): Rf = 0,56 (25 % EtOAc heksanuose); IR (cm'¹) 1772; ¹H BMR (CDCI₃, pagrindinis izomeras) δ 0,94 (d, 3H, J = 6,5), 1,00 (d, 3H, J = 6,8), 2,05-2,35 (m, 3H), 2,83 (dd, 1H, J = 13,6, 8,4), 2,92-3,03 (m, 1H), 3,11 (dd,

H, J = 13,6, 4,7), 3,90 (dd, 1 H, J = 9,0, 3,7), 4,33-4,40 (m, 1 H), 6,98-7,06 (m,

2H), 7,14-7,20 (m, 2H); analizė (Ci₅H,₈BrFO₂) C, H.

Tarpinio 5S-(1S-azido-2-metilpropil)-3R-(4-fluorbenzil)dihidrofuran-2-ono gavimas

Natrio azido 1,90 g, 29,2 mmol, 2,5 ekv.) ir 5S-(1 R-brom-2-metilpropil)3R-(4-fIuorbenzil)dihidrofuran-2-ono (3,85 g, 11,7 mmol, 1 ekv.) suspensija Ν,Ν-dimetilformamide (40 ml) šildoma 50 °C temperatūroje 67 valandas. Reakcijos mišinys atvėsinamas iki 23 °C ir paskirstomas tarp pusiau sotaus NaCi (200 ml) ir 1:1:1 EtOAc, heksanų ir acetono mišinio (2 x 200 ml, 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄₎ sukoncentruojami, ir išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 9—>17% EtOAc heksanuose), gaunamas 5S-(1S-azido-2metilpropil)-3R-(4-fluorbenzil)-dihidrofuran-2-onas (2,10 g, 62%), kuris yra balta kieta medžiaga (pagal ¹H BMR turinti maždaug 5-10 % neidentifikuotų priemaišų): lyd. temp. 91-96 °C; R_f = 0,44 (25 % EtOAc heksanuose); IR (cm' ¹) 2097, 1772; ¹H BMR (CDCI₃, pagrindinis izomeras) δ 0,99 (d, 3H, J = 6,5), 1,02 (d, 3H, J = 6,8), 1,95-2,20 (m, 3H), 2,78-2,88 (m, 1 H), 2,94 (dd, 1H, J = 7,0, 4,2), 3,03-3,17 (m, 2H), 4,37-4,43 (m, 1H), 6,97-7,09 (m, 2H), 7,14-7,21 (m, 2H).

Tarpinio {2-metil-1S-(4R-(4-fIuorbenzil)-5-oksotetrahidrofuran-2Sil)propil}-karbamo rūgšties fref-butilo esterio gavimas

5S-(1S-azido-2-metilpropil)-3R-(4-fluorbenzil)dihidrofuran-2-ono (2,02 g, 6,93 mmol, 1 ekv.), di-fref-butildikarbonato (2,12 g, 9,71 mmol, 1,4 ekv.) ir Pd/C (10 %, 0,20 g) suspensja CH₃OH (100 ml) maišoma vandenilio atmosferoje (iš baliono) 16 valandų. Reakcijos mišinys nufiltruojamas su vakuumu per VVhatman’o #3 popierių ir sukoncentruojamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (15 % EtOAc heksanuose), gaunamas {2-metil-1 S-(4R-(4-fluorbenzil)-5-oksotetrahidrofuran-2S-il)propil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteris (1,58 g, 62 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: R_f = 0,80 (5 % MeOH CH₂CI₂); IR (cm'¹) 3331, 1766, 1702; ¹H BMR (CDCI₃) δ 0,93 (d, 3H, J = 6,8), 0,95 (d, 3H, J = 6,5), 1,41 (s, 9H), 1,71-1,83 (m, 1H), 1,95-2,06 (m, 1H), 2,16-2,27 (m, 1H), 2,80 (dd, 1H, J = 13,5, 8,6), 2,88-2,99 (m, 1H), 3,09 (dd, 1H, J = 13,5, 4,4), 3,323,40 (m, 1H), 4,42-4,48 (m, 2H), 6,95-7,03 (m, 2H), 7,11-7,18 (m, 2H); analizė (C20H28FNO4) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{Boc-L-ValT(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato gavimas

Į {2-metil-1S-(4R-(4-fluorbenzil)-5-oksotetrahidrofuran-2S-il)propil}karbamo rūgšties fref-butilo esterio (0,703 g, 1,92 mmol, 1 ekv.) tirpalą DME (25 ml) 23 °C temperatūroje pridedama ličio hidroksido (9,62 ml 1M vandeninio tirpalo, 9,62 mmol, 5 ekv.). Gauta suspensija maišoma 23 °C temperatūroje 30 min., po to paskirstoma tarp 10 % KHSO4 (50 ml) ir CH₂CI₂ (3 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO4, sukoncentruojami ir liekana ištirpinama CH2CI2 (30 ml). Pridedama iš eilės miltelių pavidalo 4A molekulinių tinklelių (0,70 g), 4-metilmorfolino N-oksido (0,451 g, 3,85 mmol, 2 ekv.) ir tetrapropilamonio perrutenato (0,068 g, 0,19 mmol, 0,10 ekv.). Gautas tamsus reakcijos mišinys maišomas 1,33 vai. 23 °C temperatūroje, po to nufiltruojamas su vakuumu per Whatman’o #3 popierių, o po to per VVhatman'o #5 popierių. Sukoncentravus filtratą sumažintame slėgyje, gaunama tamsi liekana, kuri ištirpinama CH2CI2 (30 ml). Pridedama iš eilės negryninto etil-3-(H₂N-L-(Tr-G//7)-E-propenoatoHCI (2,30 mmol, 1,2 ekv., pagaminto pagal 2 pavyzdyje aprašytą metodiką ėtil-3-{(5’-metilizoksazol-3’karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n}-E-propenoatui gauti), 4-metilmorfolino (0,846 ml, 7,69 mmol, 4 ekv.), HOBt (0,390 g, 2,89 mmol, 1,5 ekv.) ir EDC (0,553 g, 2,88 mmol, 1,5 ekv.), ir reakcijos mišinys maišomas 19 valandų 23 °C temperatūroje, po to paskirstomas tarp sotaus NaCi tirpalo (100 ml) ir CH2CI2 (3 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO4 ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 35->40 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Boc-L-ValT(COCH₂)-L-(4-Phe)-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatas (0,820 g, 53 %), kuris yra gelsvai ruda putų pavidalo medžiaga: R_f = 0,50 (50 % EtOAc heksanuose); IR (cm’¹) 3307, 1708, 1666; ¹H BMR (CDCI3) δ 0,67 (d, 3H, J =

6,8), 0,92 (d, 3H, J = 6,8), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,40 (s, 9H), 1,53-1,67 (m, 1H), 1,91-2,04 (m, 2H), 2,32-2,41 (m, 2H), 2',46-2,55 (πΐ, ΊΗ), 2,63 (dd, 1H, J = 12,1, 5,9), 2,69-2,80 (m, 1H), 2,83 (dd, 1H, J= 12,1, 8,2), 3,03 (dd, 1H, J =

17.7, 10,0), 4,05-4,11 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,40-4,50 (m, 1H), 4,84 (d, 1 H, J = 8,4), 5,38 (d, 1 H, J = 15,7), 6,01 (d, 1 H, J = 8,4), 6,60 (dd, 1 H, J =

15.7, 5,0), 6,92-6,99 (m, 2H), 7,03-7,12 (m, 3H), 7,17-7,30 (m, 15H); analizė (C48H₅₆FN₃O₇) C, H, N.

Produkto - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil,-L-ValT(COCH₂)-L-(4-FPhe)-L-G/n}-E-propenoato - gavimas

Etil-3-{Boc-L-ValT(COCH₂)-L-(4-Phe)-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatas paverčiamas į produktą - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-LValT(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-G/z7}-E-propenoatą analogišku aprašytam 2 pavyzdyje būdu etil-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatui paversti į produktą - etil-S-ftS’-metilizoksazol-S’-karboniO-L-Leu-L-Phe-L-G/nJ-Epropenoatą lyd. temp. = 220 °C (skyla); R_f = 0,35 (10 % CH₃OH CH₂CI₂); IR (cm'¹) 3277, 1715, 1643; ¹H BMR (DMSO-ofe) δ 0,81 (d, 3H, J = 6,2), 0,87 (d, 3H, J = 6,9), 1,21 (t, 3H, J = 6,5), 1,59-1,67 (m, 2H), 2,03 (s, pi., 2H), 2,212,24 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,57-2,68 (m, 3H), 2,80-2,95 (m, 2H), 4,09 (kv, 2H, J = 6,5), 4,30-4,34 (m, 2H), 5,41 (d, 1 H, J = 15,5), 6,55 (s, 1H), 6,61 (dd, 1H, J - 15,5, 5,5), 6,61 (dd, 1H, J = 15,5, 5,5), 6,73 (s, 1H), 6,99-7,16 (m, 5H), 8,01 (d, 1H, J = 7,8), 8,69 (d, 1H, J- 8,7); analizė (C29H37FN4O7) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-10 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-LLeu-NCH₃-L-Phe-L-G/n}-E-propenoato - gavimas

Tarpinio Boc-L-Leu-NCH₃-L-Phe-OCH₃ gavimas

NCH3-L-Phe-OCH₃HCI (1,4 g) ištirpinamas CH₂CI₂(50 ml) ir supilamas į vandeninio (vand.) 1N NaOH (7 ml) ir sotaus vandeninio NaHCŪ3 (25 ml) mišinį. Sumaišius, organinė fazė atskiriama, o vandeninė fazė plaunama CH₂CI₂ (3 x 50 ml). Sumaišytos organinės fazės džiovinamos Na₂SO₄ ir nugarinus gaunamas laisvas aminas, kuris yra skaidri bespalvė alyva (1,14 g,

5,90 mmol). Šio amino ir (iPr)₂NEt (1,13 ml, 6,49 mmol) tirpalas DMF (10 ml) sulašinamas į 0 °C temperatūros Boc-L-Leu-OH (1,50 g, 6,49 mmol) ir HOBt (0,877 g, 6,49 mmol) tirpalą DMF (10 ml). Pridedama DCC (1,47 g, 7,12 mmol). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 1 vai., po to 23 °C temperatūroje - 48 vai. Mišinys nufiltruojamas nuosėdoms pašalinti, o filtratas nugarinamas. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (200 ml), plaunama sočiu vandeniniu NaHCO3 (40 ml), džiovinama Na₂SO₄ ir nugarinama. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (25 % EtOAc heksanuose), gaunamas Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3, kuris yra balta kieta medžiaga (2,04 g, 85 %): lyd. temp. = 126-127 °C; IR (cm'¹) 3401, 3319, 1743, 1708, 1649; ¹H BMR (CDCI3, pagrindinis izomeras) δ 0,92 (d, 3H J =

6,8), 0,95 (d, 3H, J = 6,5), 1,32-1,48 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,61-1,77 (m, 1H),

2,90 (s, 3H), 3,04 (dd, 1H, J = 14,5, 10,5), 3,37 (dd, 1H, J = 14,5, 5,5), 3,72 (s, 3H), 4,48-4,57 (m, 1H), 4,98-5,04 (m, 1H), 5,20 (dd, 1H, J = 10,5, 5,5), 7,16-7,32 (m, 5H); analizė (C22H34N2O5) C, H, N.

Tarpinio Boc-L-Leu-NCH₃-L-Phe-OH gavimas

Boc-L-Leu-NCH₃-L-Phe-OCH₃ (0,625 g, . 1,54 mmol) ištirpinamas CH3OH (20 ml) ir atšaldomas iki 0 °C. Įlašinama vandeninio NaOH (6,15 ml 2N tirpalo, 12,3 mmol). Reakcijos mišinys maišomas 3 vai. 23 °C temperatūroje, po to supilamas į 10 % vandeninį KHSO4 (150 ml). Šis mišinys ekstrahuojamas CH₂CI₂ (3 x 100 ml), sumaišytos organinęs fazės džiovinamos. Na₂SO₄ ir nugarinus gaunamas Boc-L-Leu-NCHrL-Phe-OH, kuris yra balta putų pavidalo medžiaga (0,617 g, kiekybinė išeiga), kuris naudojamas negrynintas.

Tarpinio etil-3-{Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propenoato gavimas

Šis tarpinis junginys buvo pagamintas iš Boc-L-Leu-NCH₃-L-Phe-OH ir etil-3-(H₂N-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatoHCI (pagamintas kaip aprašyta 2 pavyzdyje) pagal analogišką metodiką kaip ir aukščiau esančiame 2 pavyzdyje aprašytas etil-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas: IR (cm’¹) 3295, 1713, 1672, 1649; ¹H BMR (CDCI₃, izomerų mišinys) δ 0,65 (d, J = 6,2), 0,66 (d, J = 6,5), 0,84 (d, J = 6,5), 0,88 (d, J = 6,5), 1,02-1,22 (m), 1,23-1,38 (m), 1,33 (s), 1,41 (s), 1,55-1,82 (m), 1,89-2,07 (m), 2,23-2,30 (m),

2,90 (s), 2,94 (s), 3,01 (dd, J = 14,6, 10,9), 3,03-3,13 (m), 3,26-3,37 (m), 3,27 (dd, J = 14,6, 3,4), 3,42-3,54 (m), 4,00-4,22 (m), 4,37-4,73 (m), 4,82-4,89 (m), 5,63-5,70 (m), 5,95 (dd, J = 15,9, 1,2), 6,23-6,28 (m), 6,66-6,75 (m), 6,79-6,89 (m), 7,09-7,34 (m), 8,14 (d, J = 8,7); analizė (C4gH₆oN40₇) C, H, N

Produkto - etil-3-{(5’-metilizoksazoI-3’-karbonil)-L-Leu-NCH3-L-Phe-LG/n}-E-propenoato - gavimas

Etil-3-{Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe)-L-(Tr-G//?)}-E-propenoatas paverčiamas į produktą - etil-S-ĮĮS’-metilizoksazol-S’-karbonilj-L-Leu-NCHs-LPhe)-L-G/n}-E-propenoatą analogišku aprašytam 2 pavyzdyje būdu etil-382 {Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatui paversti į produktą - etil-3-{(5’meti*lizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/z7}-E-propenoatą Rf = 0,23 (5 % CH₃0H CH2CI2); IR (cm'¹) 3295, 1713, 1666, 1637; ¹H BMR (CDCI3) (izomerų mišinys) 0,65 (d, J = 6,2), 0,71 (d, J = 6,5), 0,93 (d, J = 6,5), 0,94 (d, J = 6,5), 1,30 (t, J =7,2), 1,24-1,73 (m), 1,81-2,22 (m), 2,45 (s), 2,48 (s), 2,86-2,93 (m), 2,96 (s), 2,97 (s), 3,03-3,14 (m), 3,21-3,31 (m), 3,48 (dd, J = 14,0, 5,9), 4,19 (kv, J = 7,2), 4,38-4,45 (m), 4,52-4,70 (m), 4,74-4,81 (m), 5,62-5,67'(m), 5,735,79 (m), 5,81 (dd, J = 15,6, 1,6), 5,99 (dd, J = 15,6, 1,6), 6,03-6,09 (m), 6,35 (s), 6,40-6,45 (m), 6,77-6,94 (m), 7,42 (d, J = 7,2), 8,13 (d, J = 7,8).

12.pavyzdys: Junginio C-1 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val0-L-(4-F-Phe)-L-G/n}-E-propenoato - gavimas

Tarpinio alilo (S)-1-hidroksi-3-(4-fiuorfenii)propionato gavimas

Kolboje su termometru ir grįžtamu šaldytuvu ištirpinamas metilo (S)-1hidroksi-3-(4-fluorfenil)propionatas (pagamintas iš L-H₂N-(4-F-Phe)-OCH3 pagal Hoffman et ai., Tetrahedron 1992, vol. 48, 3007 aprašytą metodą) (0,99 g, 5,0 mmol) alilo alkoholyje (50 ml). Pridedama titano tetraizopropoksido (1,53 ml, 5,0 mmol) ir reakcijos mišinys šildomas 90 °C temperatūroje 3,5 vai. Reakcijos mišinys atvėsinamas iki kambario temperatūros ir supilamas į 250 ml 1:1 EtOAc/sotaus NH4CI tirpalo. Organinė fazė atskiriama ir plaunama vandeniu (100 ml), sočiu NaCI tirpalu (100 ml), džiovinama (MgSŪ4) ir nugarinamas tirpiklis. Liekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu, eliuuojant 5-10 % EtOAc/heksanų gradientu ir gaunama 0,77 g (68 %) alilo (S)-1-hidroksi-3-(4-fluorfenil)propionato, kuris yra skaidrus skystis: Rf = 0,21 (15 % EtOAc/heksanuose); IR (gryna medžiaga) 3470 (pi.), 1734, 1510, 1221 cm'¹; ¹H BMR (DMSO-de) δ 1,24-1,27 (m, 1H),

2,92-2,99 (m, 1H), 3,09-3,15 (m, 1H), 4,43-4,47 (m, 1H), 4,65 (d, 2H, J = 5,9), 5,28-5,37 (m, 2H), 5,86-8,95 (m, 1H), 6,95-7,01 (m, 2H), 7,16-7,21 (m, 2H).

Tarpinio Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe,-O-CH2CH=CH2 gavimas

Alilo (S)-1-hidroksi-3-(4-fluorfenil)propionatas (0,070 g, 0,31 mmol) ištirpinamas CH2CI2 (20 ml). Pridedama Boc-L-Val-OH (0,068 g, 0,31 mmol), o po to DMAP (0,004 g, 0,03 mmol) ir DCC (0,067 g, 0,33 mmol). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį ir tirpiklis nugarinamas vakuume. Liekana chromatografuojama- - sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu, eliuuojant 3-5 % EtOAc/heksanų gradientu. Boc-LVal-O-L-(4-F-Phe)-O-CH₂CH=CH₂ gaunamas kaip. 0,12 g (90 %) skaidrios alyvos: R_f = 0,18 (10 % EtOAc/heksanuose); IR (gryna medžiaga) 1752, 1717, 1510 cm’¹; ¹H BMR (DMSO-ds) δ 0,80-0,85 (m, 6H), 1,36 (s, 9H), 1,972,04 (m, 1H), 3,07-3,15 (m, 2H), 3,89-3,94 (m, 1H), 4,51-4,55 (m, 1H), 5,175,30 (m, 3H), 5,75-5,84 (m, 1H), 7,06-7,17 (m, 3H), 7,27-7,32 (m, 2H); analizė (C22H30NO6F) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato gavimas

Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-O-CH₂CH=CH2 (0,65 g, 1,52 mmol) ištirpinamas THF (15 ml). Pridedama tetrakis(trifenilfosfin)paladžio(0) (0,035 g, 0,03 mmol) ir reakcijos mišinys maišomas 5 min. 23 °C temperatūroje, įlašinama moriuiino (0,16 ml, 1,83 mmol) ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 2 vai. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana ištirpinama 50 ml 4:1 heksanų/Et₂O. Produktas išekstrahuojamas į sotų NaHCO₃ tirpalą (50 ml), o organinė fazė išpilama. Vandeninė fazė parūgštinama iki pH = 1-2 kietu KHSO4 ir produktas išekstrahuojamas į EtOAc (50 ml). Organinė fazė plaunama sočiu NaCI tirpalu (50 ml), džiovinama (MgSO₄) ir sukoncentravus gaunama 0,50 g (86 %) laisvos rūgšties, kuri yra skaidri alyva. Ši medžiaga ištirpinama DMF (6 ml). Pridedama diizopropiletilamino (0,43 ml, 2,50 mmol), o po to etil-S-f^N-L-fTr-G/nJJ-Epropenoato-HCI (pagaminto kaip aprašyta aukščiau duotame 2 pavyzdyje, 0,55 g, 1,25 mmol). Reakcijos mišinys atšaldomas iki 0 °C. Pridedama HATU (0,48 g, 1,25 mmol), ir reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros. Vakuume nugarinamas DMF. Liekana ištirpinama EtOAc (30 ml), organinė fazė plaunama iš eilės 10 % HCI tirpalu (25 ml), sočiu NaHCO3 tirpalu (25 ml), H₂O (25 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (25 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas (MgSO^, nufiltruojamas, sukoncentruojamas ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (0-»1,0 MeOH/CH₂CI₂) gaunama 0,40 g (39 %) etil-3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/r?)}-Epropenoato, kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: Rf = 0,25 (3% MeOH/CHCIs); IR (KBr) 1691, 1512, 1159 cm·¹; ¹H BMR (DMSO-d_s) δ 0,780,83 (m, 6H), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,35 (s, 9H), 1.58-1,63 (m, 2H), 1,96-2,02 (m, 1H), 2,19-2,33 (m, 2H), 2,93-3,02 (m, 2H), 3,82-3,87 (m, 1H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,33-4,37 (m, 1 H), 5,03-5,08 (m, 1 H), 5,60 (d, 1 H, J = .15,8), 6,67 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5), 7,02-7,08 (m, 2H), 7,14-7,28 (m, 18H), 8,12 (d, 1H, J =

8,1), 8,59 (s, 1H); analizė (C47H54N3O8F) C, H, N.

Produkto - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-LG/n}-E-propenoato - gavimas

Etil-3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G//?)}-E-propenoatas paverčiamas etiI-3-{(5'-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-L-G/n}E-propenoatu būdu, kuris yra analogiškas aukščiau duotame 2 pavyzdyje aprašytam būdui etii-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatui paversti į etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-L-Phe-L-G/n}-E-propenoatą: Rf = 0,05 (3% MeOH/CHCb); IR (KBr) 1746, 1719, 1661, 1549 cm’¹; ¹H BMR (DMSO-cfe) δ 0,87 (d, 3H, J = 6,6), 0,92 (d, 3H, J = 6,6), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,61-1,74 (m, 2H), 1,96-2,01 (m, 1H), 2,15-2,22 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 3,003,03 (m, 2H), 4,10 (kv, 2H, J = 7,0), 4,27-4,32 (m, 1H), 4,33-4,38 (m, 1H), 5,06-5,11 (m, 1H), 5,63 (d, 1H, J= 15,6), 6,54 (s, 1H), 6,68 (dd, 1H, J= 15,6, 5,5), 6,78 (s, pi., 1 H), 6,95-7,00 (m, 2H), 7,20-7,24 (m, 3H), 8,06 (d, 1H, J =

8,1), 8,87 (d, 1H, J= 7,7); analizė (C₂₈H₃₅N₄O8F) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-11 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-(2Naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-G/n}-E-propenoato - gavimas

Tarpinio etil-3-{Boc-NCH3-L-{4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoato gavimas

Boc-(4-F-Phe)-OH (4,46 g, 15,75 mmol, 1 ekv.) ir CH₃I (7,84 ml, 126 mmol, 8 ekv.) ištirpinami sausame THF (100 ml) ir atšaldoma iki 0°C. Į sį tirpalą intensyviai maišant, pridedama NaH (1,89 g, 47,25 mmol, 3 ekv.). Pamaišius 23 °C temperatūroje 24 vai., į mišinį atsargiai pridedama EtOAc (3 ml) ir H₂O (3 ml), ir gauta suspensija nugarinama iki sausos liekanos. Ištirpinus H₂O (100 ml), reakcijos mišinys plaunamas Et₂O (2 x 100 ml). Vandeninis sluoksnis parūgštinamas iki pH = 3 10 % citrinų rūgšties tirpalu, ir po to ekstrahuojamas EtOAc (2 x 100 ml). Sumaišyti EtOAc ekstraktai plaunami iš eilės pusiau sočiu NaHCO₃ (150 ml), 5 % Na₂S₂O₃ (150 ml) ir H₂O (150 ml), džiovinami Na₂SO4 ir sukoncentravus gaunamas Boc-NCH₃-(4F-Phe)-OH, kuri yra gelsva putų pavidalo medžiaga (4,37 g, 80 %), ir ji naudojama negryninta. ¹H BMR (CDCI₃, izomerų mišinys) δ 1,35 (s), 1,40 (s), 2,69 (s), 2,75 (s), 2,96-3,13 (m), 3,23-3,33 (m), 4,54-4,58 (m), 4,76-4,81 (m), 6,96-7,01 (m), 7,15-7,17 (m).

HCI tirpalas 1,4-dioksne (4,0 M, 15 ml) supilamas į etil-3-(Boc-L-(TrG/n))-E-propenoato (pagaminto pagal aukščiau duotame 2 pavyzdyje aprašytą metodiką 3,57 g, 6,73 mmol, 1 ekv.) tirpalą tame pačiame tirpiklyje (15 ml) 23 °C temperatūroje. Po 2 vai. lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (50 ml) ir iš eilės pridedama Boc-NCH₃-(4-F-Phe)-OH (pagamintos pagal prieš tai esančiame paragrafe aprašytą metodiką 2,0 g, 6,73 mmol, 1,0 ekv.), HOBt (1,23 g, 9,09 mmol, 1,5 ekv.), 4-metilmorfolino (2,0 ml, 18,19 mmol, 3 ekv.) ir EDC (1,74 g, 9,09 mmol, 1,5 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį, po to paskirstomas tarp vandens (100 ml) ir CH₂CI₂ (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄, koncentruojami, ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (30 % EtOAc heksane), gaunamas etil-3-{Boc-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G//?)-E-propenoatas (4,07 g, 84 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 1666, 1510, 1167; ¹H BMR (CDCI₃, izomerų mišinys) δ 1,29 (t, J = 7,2), 1,37 (s), 1,65-1,75 (m), 1,95-2,06 (m), 2,29-2,33 (m), 2,66 (s), 2,91-2,99 (m), 3,22-3,29 (m), 4,18 (kv, J = 7,2), 4,52-4,58 (m), 5,68 (d, J = 15,9), 6,45 (d, J = 8,4), 6,74 (dd, J = 15,6, 5,4), 6,91-6,99 (m), 7,11-7,33 (m); analizė (C^H^FNaOs) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{Boc-L-(2-Naft)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)’E-prOpenoato gavimas

HCI tirpalas 1,4-dioksnė (4,0 M, 3 m!) supilamas į etil-3-(Boc-NCH₃-L(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n))-E-propenoato (0,388 g, 0,54 mmol, 1 ekv.) tirpalą tame pačiame tirpiklyje (3 ml) 23 °C temperatūroje. Po 2 vai. lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama DMF (10 ml), atšaldoma iki 0 °C ir iš eilės pridedama DIEA (0,188 ml, 1,08 mmol, 2 ekv.), Boc-L-(2-Naft)-OH (0,170 g, 0,54 mmol, 1,0 ekv.) ir HATU (0,205, 0,54 mmol, 1 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 1 vai. Lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje, o liekana ištirpinama EtOAc (50 m) ir plaunama 0,5 N HCI (50 ml), sočiu NaHCO₃ (50 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (50 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas Na₂SO₄, koncentruojamas ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (40 % EtOAc heksane), gaunamas etil-3-{Boc-L-(2-Naft)-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(TrG//7)-E-propenoatas (0,437 g, 88 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 1656, 1509, 1162; ¹H BMR (CDCI₃, izomerų mišinys) δ 0,88 (t, J =

7,2), 1,27 (s), 1,30 (s), 1,48-1,58 (m), 1,64-1,67 (m), 1,97-2,11 (m), 2,23-2,28 (m), 2,42-2,50 (m), 2,62-2,69 (m), 2,80 (s), 2,90 (s), 3,00-3,07 (m), 3,15-3,20 (m), 3,25-3,32 (m), 4,18 (kv, J = 7,2), 4,42-4,46 (m), 4,53-4,56 (m), 4,61-4,66 (m), 4,72-4,82 (m), 5,94-5,00 (m) 5,63 (d, J = 15,6), 6,12 (d, J = 15,6), 6,60 (dd, J= 15,6, 5,4), 6,75-6,89 (m), 6,70-7,08 (m), 7,19-7,30 (m), 7,41-7,50 (m), 7,70-7,82 (m), 8,80 (d, J = 8,4); analizė (C56H₅₉FN₄O₇) C, H, N.

Produkto - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-(2-Naft)-NCH3-L-(4-FPhe)-L-G/n}-E-propenoato - gavimas

Etil-3-{Boc-L-(2-Naft)-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/rt)-E-propenoatas paverčiamas į produktą - etil-S-fiS’-metilizoksazol-S’-karboniO-L-^-Naft)NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-G/n}-E-propenoatą analogišku būdu, kaip aprašytas aukščiau duotame 2 pavyzdyje etil-3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)-Epropenoatui paversti į produktą - etil-S-^S’-metilizoksazol-S’-karbonilJ-L-Leu-L- ‘ Phe)-L-G/n}-E-propenoatą: IR (cm’¹) 3296, 1654, 1510; ¹H BMR (DMSO-d₃, izomerų mišinys) δ 1,17-1,24 (m), 1,62-1,78 (m), 2,04-2,15 (m), 2,38 (s), 2,42 (s), 2,71-2,79 (m), 2,84 (s), 2,87-2,92 (m), 3,03 (s), 3,15 (d, J = 7,5), 3,98-4,06 (m), 4,08-4,12 .(m), 4,38-4,42 (m), 4,94 (m), 5,03-5,07 (m), 5,09-5,18 (m), 5,66-5,82 (m), 6,42 (s), 6,43 (s), 6,66-6,81 (m), 6,88-6,94 (m), 7,01-7,06 (m), 7,13-7,17 (m), 7,24-7,34 (m), 7,43-7,46 (m), 7,56 (s), 7,76-7,84 (m), 8,08 (d, J = 7,8), 8,60 (d, J = 8,4), 9,01 (d, J = 7,2); analizė (C₃7H4oFN₅0₇-0,75H₂0) C,

H, N.

pavyzdys: Junginio A-9 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-HisNCH₃-L-(4-F-Phe)-L-G/n}-E-propenoato - gavimas

Etil-3-{Boc-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje) paverčiamas į produktą - etil-3-{(5’metilizoksazol-3'-karbonil)-L-His-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatą analogišku būdu, kaip ir etil-3-{(5’-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-(2-Naft)-NCH₃L-Phe)-L-G/n}-E-propenoatas, aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje (naudojant Boc-L-(Tr-His)-OH vietoj Boc-L-(2-Naft)-OH: IR (cm'¹) 3302, 1655, 1202; ¹H BMR (DMSO-d₃, izomerų mišinys) δ 1,21 (t, J = 7,2), 1,70-1,78 (m),

2,05-2,09 (m), 2,41 (s), 2,44 (s), 2,69-3,26 (m), 4,11 (kv, J =7,2), 4,38-4,53 (m), 5,07-5,19 (m), 5,51-5,84 (m), 6,44 (s), 6,48 (s), 6,63-6,86 (m), 6,89-7,01 (m), 7,09-7,19 (m), 7,23-7,42 (m), 8,02 (d, J = 8,7), 8,15 (d, J = 8,1), 8,59 (d, J = 8,7); 8,94 (s), 9,04 (s), 9,14 (d, J = 6,9); analizė (CaobheFNyOy TFA HbO) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-12 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L· Leu-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-G/n}-E-propenoato - gavimas

Etil-3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(T r-G/n)-E-propenoatas (aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje) paverčiamas į produktą - etil-3-{(5’metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Leu-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatą analogišku būdu, kaip ir etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-(2-Naft)-NCH3L-Phe)-L-G/n}-E-propenoatas, aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje (naudojant Boc-L-Leu-OH vietoj Boc-L-(2-Naft)-OH): IR (cm'’) 3325, 1663, 1171; ¹H BMR (DMSO-cfo, izomerų mišinys) δ 0,64-0,67 (m), 0,86-0,88 (m), 1,17-1,23 (m), 1,32-1,40 (m), 1,59-1,75 (m), 1,98-2,07 (m), 2,42 (s), 2,45 (s), 2,08 (s), 2,86-2,93 (m), 2,99 (s), 3,12-3,20 (m), 4,05-4,15 (m), 4,41-4,50 (m), 4,82-5,07 (m), 5,62 (d, J = 15,9), 5,86 (d, J = 15,9), 6,51 (s), 6,53 (s), 6,686,73 (m), 6,93-6,99 (m), 7,09-7,21 (m), 7,26-7,31 (m), 8,03 (d, J = 7,8), 8,08 (d, J = 7,8), 8,41 (d, J = 8,1); 8,94 (d, J = 7,2); analizė (CsoH^FNsOyl ,25 CH₂CI₂) C, H, N.

pavyzdys: Junginio A-13 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-(1Naft)-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-G/n}-E-propenoato - gavimas

Etil-3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G/n)-E-propenoatas (aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje) paverčiamas į produktą - etil-3-{(5’. .metilizoksazol-3’-karbonil)-L-(1-Naft)-NCH₃-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-G//?)-E-propenoatą analogišku būdu, kaip ir etil-3-{(5’-metilizoksazol-3'-karbonil)-L-(2-Naft)NCH₃-L-Phe)-L-G/n}-E-propenoatas, aprašytas aukščiau duotame 13 pavyzdyje (naudojant Boc-L-(1-Naft)-OH vietoj Boc-L-(2-Naft)-OH: IR (cm'¹) 3308, 1659, 1169; ¹H BMR (DMSO-cfe, izomerų mišinys) δ 1,16-1,23 (m), 1,61-1,78 (m), 1,98-2,02 (m), 2,07-2,12 (m), 2,41 (s), 2,43 (s), 2,77 (s), 2,78 (s), 2,84-2,87 (m), 2,93-3,03 (m), 3,08-3,14 (m), 3,31-3,38 (m), 4,00-4,15 (m), 4,27-4,32 (m), 4,40-4,46 (m), 4,58-4,64 (m), 5,07-5,17 (m), 5,57-5,73 (m), 6,45 (s), 6,57-6,61 (m), 6,71-6,88 (m), 6,89-6,91 (m), 7,11-7,19 (m), 7,31-7,38 (m), 7,50-7,58 (m), 7,73-7,78 (m), 7,83-7,94 (m), 8,08 (d, J = 8,1), 8,13 (d, J = 8,7), 8,62 (d, J= 8,1), 9,14 (d, J = 8,1);' analizė (C^H^FNsOy) C, H, N.

pavyzdys: Junginio B-2 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-Lν3ΐΨ(ΟΟΟΗ₂)-Ι_-(4-Ρ-ΡΚθ)-Ι_-((5)-ρ//ΌΜ/3)}-Ε-ρΓορβηοβΙο - gavimas

Tarpinio etil-3-{Boc-L-ValT(COCH₂)-L-{4-F-Phe)-L-{(/V-2,4-dimetoksibenzil)-(SJ-p/ro/-A/a)-E-propenoato gavimas

Šis tarpinis junginys buvo pagamintas iš {2-metil-1 S-(4R-(4fluorbenzil)-5-oksotetrahidrofuran-2S-il)propil}-karbamo rūgšties fref-butilo esterio (aprašyto 10 pavyzdyje) ir etil-S-iBoc-L-įi/V^^-dimetoksibenzilj-fSJpirol-Ala)}-E-propenoato (aprašytas 6 pavyzdyje) analogišku būdu kaip ir aukščiau aprašytas etil-3-{Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatas (4 pavyzdys): Rf = 0,24 (60 % EtOAc heksanuose); IR (cm*¹) 3293, 1717, 1668; ’H BMR (CDCb) δ 0,82 (d, 3H, J = 6,8), 1,01 (d, 3H, J = 6,8), 1,30 (t, 3H, J =

7,2), 1,51-1,65 (m, 2H), 1,84-1,96 (m, 1H), 2,16-2,37 (m, 2H), 2,47 (s, 3H), 2,49-2,55 (m, 3H), 2,85-3,01 (m, 2H), 3,12-3,25 (m, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,18 (kv, 2H, J =7,2), 4,31-4,49 (m, 3H), 4,65-4,70 (m i H), 5 43 (dd, 1 H, j = 15,7, 1,4), 6,39-6,44 (m, 3H), 6.63 (dd, 1 H, J = 15,7, 5,4), 6,93-7,01 (m, 2H), 7,05-7,10 (m, 1H), 7,12-7,18 (m, 2H), 7,24 (d, 1H, J = 8,7), 7,47 (d, 1H, J = 6,5); analizė (C4oH49FN₄0₉O,5H₂0) C, H, N.

Produkto - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-ValT(COCH₂)-L-(4-FPhe)-L-((S)-p/roM/a)}-E-propenoato - gavimas

Etil-34Boc-L-ValT(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-{(A/-2,4-dimetoksibenzil)-(S)p/ra/-A/a)-E-propenoatas paverčiamas į produktą - etil-S-fįS’-metilizoksazol-S’karbonil)-L-Val^vF(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-((S_>)-p/7O/-A/a)}-E-propenoatą analogišku būdu kaip ir etil-3-{Boc-L-\/al-L-(4-F-Phe)-L-{(/V-2,4dimetoksibenzii)-(S_>)-p/ro/-A/a)-E-propenoatas paverčiamas į aukščiau duotame 6 pavyzdyje aprašytą etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L(4-F-Phe)-L-((S)-p/ro/-A/a)}-E- propenoatą; lyd. temp. = 178-181 °C; Rf = 0,49 (10 % CH₃OH CHCI3); IR (cm'¹) 3295, 1678 pi.; ¹H BMR (CDCI3) δ 0,85 (d, 3H, J = 6,8), 1,03 (d, 3H, J = 6,5), 1,30 (t, 3H, J = 7,2), 1,51-1,62 (m, 1H), 1,71-1,93 (m, 2H), 2,27-2,40 (m, 2H), 2,47 (s, 3H), 2,51-2,75 (m, 3H), 2,822,98 (m, 2H), 3,11-3,24 (m, 1H), 3,26-3,42 (m, 2H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,41-4,53 (m, 1 H), 4,63-4,72 (m, 1H), 5,50 (d, 1 H, J = 15,4), 5,88 (s, 1H), 6,39 (s, 1H), 6,63 (dd, 1H, J = 15,4, 5,3), 6,92-7,03 (m, 2H), 7,08-7,31 (m, 4H); analizė (C31H39FN4O7) C, H, N.

pavyzdys: Junginio C-2 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-ValO-L-(4-F-Phe)-L-(fS)-p/roM/a)}-E-propenoato - gavimas

(C-2)

Tarpinio (5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-O-L.-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH₂ gavimas

Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH₂ (pagamintas pagal 12 pavyzdyje duotą aprašymą 0,91 g, 2,15 mmol) ištirpinamas 1,4-dioksane (28 ml) ir pridedama HCI tirpalo 1,4-dioksane (4,0 M, 14 ml). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 14 vai. Tirpiklis nugarinamas, ir liekana ištirpinama EtOAc (50 ml). Organinė fazė plaunama sočiu NaHCO3 tirpalu (50 ml), po to sočiu NaCI tirpalu (50 ml), džiovinama (MgSO4) ir nugarinus tirpiklį gaunama 0,66 g (kiekybinė išeiga) skaidrios alyvos.

Ši medžiaga ištirpinama CH₂CI₂ (20 ml). Pridedama piridino (0,17 ml, 2,08 mmol), ir reakcijos mišinys atšaldomas iki 0 °C temperatūros. Pridedama 5-metilizoksazol-3-karbonilchlorido (0,33 g, 2,27 mmol), ištirpinto 2 ml CH₂CI₂, reakcijos mišinys sušildomas iki kambario temperatūros ir laikoma 1 vai. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana gryninama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu, eliuuojant 5->10 % EtOAc/heksanų gradientu. Produktas - (5'-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH₂CH=CH₂ - yra 0,70 g (82 %) baltos kristalinės kietos medžiagos: R_f = 0,20 (30 % EtOAc/heksanuose); IR (cm’¹) 1745, 1661, 1553, 1186; ¹H BMR (DMSO-cfe) δ 0,85-0,92 (m, 6H), 2,14-2,21 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 3,05-3,19 (m, 2H), 4,324,37 (m, 1H), 4,53-4,60 (m, 2H), 5,16-5,28 (m, 3H), 5,74-5,85 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 7,01-7,07 (m, 2H), 7,26-7,29 (m, 2H), 8,76 (d, 1H, J = 8,1); analizė (C₂₂H₂₅FN₂O₆) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{(5’-metiiizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((/V2,4-dimetoksibenzil)-(S_J)-p//OM/a)}-E-propenoato - gavimas (5’-Metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH₂CH=CH₂ (0,67 g, 1,55 mmol) ištirpinamas THF (15 ml). įlašinama tetrakis(trifenilfosfin)paladžio(O) (0,036 g, 0,03 mmol), ir reakcijos mišinys maišomas 5 minutes. Įlašinama morfolino (0,16 ml, 1,86 mmol), ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 6 vai. Tirpiklis nugarinamas vakuume, o liekana ištirpinama 50 ml Et₂O. Produktas ekstrahuojamas du kartus sočiu NaHCO₃ tirpalu (50 ml), ir organinė fazė išpilama. Vandeninė fazė parūgštinama iki pH = 1-2 10 % HCI, ir produktas ekstrahuojamas du kartus EtOAc (40 ml). Organinė fazė plaunama sočiu NaCi tirpalu (50 ml), džiovinama (MgSO₄) ir sukoncentravus gaunama 0,57 g (95 %) alyvos, kuri išsikristalina stovėdama.

Dalis šios medžiagos (0,19 g, 0,50 mmol) ištirpinama DMF (3 ml). Pridedama diizopropiletilamino (0,34 ml, 1,0 mmol), o po to etil-3-{H₂N-L-((A/2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/'ro/-A/a)}-E-propenoato-HCI (pagaminto kaip aprašyta aukščiau duotuose 4 ir 6 pavyzdžiuose, 0,19 g, 0,50 mmol). Reakcijos mišinys atšaldomas iki 0 °C temperatūros, pridedama HATU (0,19 g, 0,50 mmol), ir reakcijos mišiniui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros. DMF nugarinamas vakuume. Liekana ištirpinama EtOAc (30 ml) ir organinė fazė plaunama iš eilės 10 % HCI tirpalu (25 ml), sočiu NaHCO₃ tirpalu (25 ml), H₂O (25 ml) ir sočiu NaCi tirpalu (25 ml). Tirpiklis džiovinamas (MgSO₄), nufiltruojamas ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (0—>1,0 % MeOH/CH₂CI₂), gaunamas etil-3-{(5'-metihzoksazol-3'karbonil)-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-L-((/V-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/ro/-A/a)}-Epropenoatas (0,27 g, 72 %), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: Rf = 0,18 (3 % MeOH/CHCI₃); IR (KBr) 1671, 1547, 1510, 1209 cm’¹; ¹H BMR (DMSO-d₆) δ 0,88 (d, 3H, J = 7,0), 0,93 (3H, J = 7,0), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,41-1,58 (m, 2H), 1,79-1,98 (m, 2H), 2,07-2,24 (m, 2H), 2,44 (s, 3H), 3,013,13 (m, 4H), 3,73 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,24 (s, 2H), 4,30 (t, 1H, 7=7,4), 4,45-4,48 (m, 1H), 5,12 (t, 1H, 7 = 6,3), 5,59 (d, 1H, J =

15.8) , 6,45 (dd, 1H, J = 8,5, 2,2), 6,54-6,56 (m, 2H), 6,73 (dd, 1H, J = 15,5,

4.8) , 6,89-6,95 (m, 3H), 7,20 (d, 1 H, J = 8,5), 7,22 (d, 1H, J = 8,5), 8,08 (d,

H, 7=8,8), 8,89 (d, 1 H, 7 = 7,4).

Produkto - βΙϊΙ-3-{(5’-ηβΙϋϊζοΚ83ζοΙ-3’-Κ3ΛοηϊΙ)-Ε-ν3ΐ-0-ί-(4-Ρ-ΡΚβ)-Ε(fS)-p/ro/-A/a)}-E-propenoato - gavimas

Etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((/\/-2,4dimetoksibenzil)-fS)-p/roM/a)}-E-propenoatas (0,25 g, 0,33 mmol) ištirpinamas CHCb (6 ml). Pridedami du lašai vandens, o po to DDQ (0,10 g, 0,43 mmol). Reakcijos mišinys šildomas 50-55 °C temperatūroje 8 vai. Atšaldžius, reakcijos mišinys supilamas į EtOAc (30 ml). Organinė fazė plaunama 30 ml 2:1 NaHCO3/1N NaOH tirpalu, po to sočiu NaCi tirpalu (30 ml), džiovinama (MgSO4) ir koncentruojama. Liekana chromatografuojama sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu, eliuuojant 0->2 %

MeOH/CH₂CI₂. Etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Vaj-0-L-(4-F-Phe)-L((S)-p/'ro/-A/a)}-E-propenoatas (0,18 g, 90 %) gaunamas baltos amorfinės kietos medžiagos pavidalu: Rf = 0,09 (3 % MeOH/CHCb); IR (KBr) 1680, 1549 cm'¹; ¹H BMR (DMSO-de) δ 0,91 (d, 3H, J = 6,6), 0,95 (3H, J = 6,6), 1,20 (t, 3H, J = 7,0), 1,36-1,44 (m, 1H), 1,56-1,61 (m, 1H), 1,74-1,82 (m, 1 H), 1,941,99 (m, 2H), 2,18-2,25 (m, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,98-3,18 (m, 4H), 4,09 (kv, 2H, J = 7,0), 4,28-4,32 (m, 1H), 4,43-4,46 (m, 1H), 5,12 (m, 1H), 5,58 (d, 1H, J =

15,8), 6,56 (s, 1H), 6,72 (dd, 1H, J = 15,8, 4,8), 6,91-6,97 (m, 2H), 7,21 (d, 1 H, J = 5,9), 7,23 (d, 1 H, J = 5,9), 7,59 (s, 1 H), 8,06 (d, 1 H, J = 8,8), 8,92 (d, 1H, J = 7,4); analizė (C30H37N4O8F) C, H, N.

pavyzdys: Junginio B-3 - 2-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-LValT(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-(fS)-p/roMZa)}-E-(a-vinil-y-butirolaktono)-

(B-3)

Tarpinio (Boc-L-{(/V-2,4-dimetoksibenzil)-(SJ-p/roZ-A/a}-E-(cx-vinil-Ybutirolaktono) gavimas (1S,3’S)-{2-(1’-(2”,4”-dimetoksibenzil)-2’-okso-pirolidin-3’-il)1-hidroksimetiletiljkarbamo rūgšties fref-butilo esteris (0,360 g, 0,881 mmol, 1 ekv.) buvo suoksidintas iki atitinkamo aldehido tokiu pačiu būdu kaip ir gaminant etil-3-{Boc-L-((/\/-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/ro/-A/a)}-E-propenoatą (6 pavyzdys). Šis aldehidas sumaišomas su 3-(trifenil-X^s-fosfaniliden)dihidrofuran-2-onu (pagamintu tokiu pačiu būdu kaip aprašyta Baldvvin et ai., J. Org. Chem. 1971, vol. 36, 1441) (0,320 g, 0,924 mmol, 1,05 ekv.) etilenglikolio dimetilo eterio (10 ml) ir DMF (2 ml) mišinyje. Reakcijos mišinys šildomas 100 °C alyvos vonioje 1,5 vai., paliekamas atšalti iki 23 °C per naktį, po to praskiedžiamas MTBE (200 ml), plaunamas vandeniu (20 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (20 ml), džiovinamas Na₂SO4 ir nugarinamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (2,5 % CH3OH CH₂CI₂, po to 67 % EtOAc CH₂CI₂), gaunamas (Boc-L-{(/V-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/ro/A/a}-E-(a-vinil-7-butirolaktonas), kuris yra alyva (0,250 g, 60 %); Rf = 0,50 (67 % EtOAc CH2CI2); IR (cm'¹) 3307, 1754, 1678; ¹H BMR (CDCI3) δ 1,42 (s, 9H), 1,46-1,68 (m, 2H), 2,02-2,13 (m, 1H), 2,18-2,30 (m, 1H), 2,44-2,56 (m, 1H), 2,91-3,04 (m, 1H), 3,15-3,27 (m, 3H), 3,80 (s, 6H), 4,34-4,43 (m, 5H), 5,63-5,69 (m, 1H), 6,42-6,47 (m, 2H), 6,48-6,53 (m, 1H), 7,09-7,13 (m, 1H).

Produkto - 2-{(5’-metilizoksazol·3’-karbonil)-L·ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)L-((S7-p/'ro/-A/a)}-E-(a-vinil-y-butirolaktono) - gavimas (Boc-L-{(/V-2,4-dimetoksibenzil)-(S_>)-p/ro/-A/a}-E-(a-vinil-y-butirolaktonas) paverčiamas į produktą - 2-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-LValT(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-((S;-p/ro/-A/a)FE-(a-vinil-Y-butirolaktoną) analogišku būdu kaip aukščiau aprašytas būdas etil-S-^S’-metilizoksazol-S’karbonil)-L-ValT(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-p/ro/-A/a)}-E-propenoatui gauti (17 pavyzdys): R_f = 0,28 (5 % MeOH/CH₂CI₂); IR (cm'¹) 3378 pi., 1749, 1678; ¹H BMR (CDCI3) δ 0,84 (d, 3H, J = 6,8), 0,84 (d, 3H, J = 6,8), 1,03 (d, 3H, J =

6,8), 1,45-1,55 (m, 1H), 1,75-2,00 (m, 2H), 2,25-2,43 (m, 2H), 2,46-2,59 (m, 2H),2,48 (s, 3H), 2,63-2,72 (m, 1H), 2,77-2,90 (m, 3H), 3,06-3,26 (m, 2H), 3,29-3,44 (m, 2H), 4,32-4,46 (m, 3H), 4,65-4,71 (m, 1H), 5,72 (s, 1H), 6,1495

6,20 (m, 1H), 6,40 (s, 1H), 6,94-7,02 (m, 2H), 7,03-7,11 (m, 2H), 7,24 (d, 1H,

J = 9,0), 7,60 (d, 1H, J = 6,2); analizė (C₃iH37N₄O₇F) C, H, N.

pavyzdys: Junginio B-4 - etil-3-{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-LVa^(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-(fS)-p/per-A/a)}-E-propenoato-gavimas

(B-4)

Šis produktas buvo pagamintas taip pat kaip ir aukščiau aprašyti etiI-3{(5’-metilizoksazol-3’-karbonil)-L-Val-L·(4-F-Phe)-L-((S)-p/per-A/a)}-Epropenoatas (9 pavyzdys) ir etil-3-{(5'-metilizoksazol-3’-karbonil)-LValT(COCH₂)-L-(4-F-Phe)-L-G/n}-E-propenoatas (10 pavyzdys): lyd. temp. = 161-162 °C; ): R_f = 0,30 (5 % CH₃OH/CH₂CI₂); IR (cm'¹) 3295, 1713, 1649; ¹H BMR (CDCI₃) δ 0,84 (d, 3H, J = 6,8), 1,03 (d, 3H, J = 6,8), 1,30 (t, 3H, J 7,2), 1,43-1,55 (m, 2H), 1,77-1,90 (m, 2H), 1,95-2,12 (m, 2H), 2,27-2,38 (m,

1H), 2,44-2,58 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,66-2,76 (m, 1H), 2,80-2,93 (m, 2H),

3,12-3,42 (m, 3H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,39-4,49 (m, 1H), 4,65-4,72 (m,

H), 5,50 (dd, 1 H, J = 15,9, 1,6), 5,80 (s, 1 H), 6,38-6,41 (m, 1 H), 6,62 (dd, 1 H, J = 15,9, 5,3), 6,94-7,02 (m, 2H), 7,08-7,28 (m, 4H).

- 30 pavyzdžiai

Naudojant sintezės būdus, analogiškus aukščiau aprašytiems I-A formulės junginiams gauti, buvo pagaminti 21 - 30 pavyzdžių junginiai atitinkamai nuo (A-14) iki (A-23):

(A-14)

(A-15)

(A-16)

(A-17)

(A-18)

(A-19)

°<s^NH₂

• CF3COOH

CO₂CH₂CH₃

N

H

(A-21)

(A-22)

pavyzdys: Palyginamojo junginio #2 — etil-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-

Palyginamasis junginys #2

Tarpinio {Boc-L-(Tr-Gln)}-N(OMe)Me gavimas

Į N-a-Boc-y-tritil-L-glutamino (18,7 g, 36,7 mmol, 1,0 ekv.) ir 4metilmorfolino (8,08 ml, 73,5 mmol. 2,0 ekv.) tirpalą CH2CI2 (250 ml) 0 °C temperatūroje pridedama izobutichlorformiatc (4,77 m', 36.8 mmol, 1,0 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 20 min., po to pridedama Λ/,Ο-dimetilhidroksilamino hidrochlorido (3,60 g, 36,7 mmol, 1,0 ekv.). Gautas tirpalas maišomas 0 °C temperatūroje 20 min. ir 23 °C temperatūroje 2 vai., po to paskirstomas tarp vandens (150 ml) ir CH2CI2 (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄ ir koncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 40-»20 % heksanai EtOAc), gaunamas {Boc-L-(Tr-Gln)}-N(OMe)Me (16,1 g, 82 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 3411, 3329, 3062, 1701, 1659; ¹H BMR (CDCb) δ 1,42 (s, 9H), 1,63-1,77 (m, 1H), 2,06-2,17 (m, 1H), 2,29-2,43 (m, 2H), 3,17 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 4,73 (s, pi., 1H), 5,38-5,41 (m, 1H), 7,20-7,31 (m, 15H); analizė (C31H37N3O5) C, H, N.

Tarpinio {Boc-L-(Tr-Gln)}-H gavimas į{Boc-L-(Tr-Gln)}-N(OMe)Me (16,1 g, 30,3 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF 78 °C temperatūroje pridedama diizobutilaliuminio hidrido (50,5 ml 1,5 M tirpalo toluene, 75,8 mmol, 2,5 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas -78 °C temperatūroje 4 vai. Pridedama metanolio (4 ml), o po to 1,0 M HCI (10 ml) ir mišinys sušildomas iki 23 °C. Gauta suspensija praskiedžiama Et₂O (150 ml) ir plaunama 1,0 M HCI (3 x 100 ml), pusiau sočiu NaHCO₃ (100 ml) ir vandeniu (100 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas MgSO4, nufiltruojamas ir sukoncentravus gaunamas negrynas {Boc-L-(Tr-Gln)}-H (13,8 g, 97 %), kuris yra balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 114-116 °C; IR (cm’¹) 3313, 1697, 1494; ¹.H BMR (CDCI₃) δ 1,44 (s, 9H), 1,65-1,75 (m, 1H), 2,17-2,23 (m, 1H), 2,31-2,54 (m, 2H), 4,11 (s, pi., 1H), 5,38-5,40 (m, 1H), 7,11 (s, 1 H), 7,16-7,36 (m, 15H), 9,45 (s, 1H).

Tarpinio etil-3-{Boc-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato gavimas

Į trietilfosfonacetato (5,59 g, 22,9 mmol, 1,0 ekv.) tirpalą THF (200 ml) -78 °C temperatūroje pridedama natrio bis(trimetilsilil)amido (22,9 ml 1,0 M tirpalo THF, 22,9 mmol, 1,0 ekv.) ir gautas tirpalas maišomas 20 min. Šioje temperatūroje. Per kanulę pridedama negryninto {Boc-L-(Tr-Gln)}-H (10,8 g, 22,9 mmol, 1 ekv.) THF (50 ml) ir reakcijos mišinys maišomas 2 vai. -78 °C temperatūroje, sušildomas iki 0 °C ir palaikomas 10 min. ir paskirstomas tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų midinio (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄ ir sukoncentruojami. -Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (40 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Boc-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatas (10,9 g, 88 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm’¹) 3321, 1710; ¹H BMR (CDCl₃) δ 1,27 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,42 (s, 9H), 1,70-1,78 (m, 1 H), 1,80-1,96 (m,

H), 2,35 (t, 2H, J = 7,0), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,29 (s, pi., 1 H), 4,82-4,84 (m, 1H), 5,88 (dd, 1H, J = 15,7, 1,6), 6,79 (dd, 1H, J = 15,7, 5,3), 6,92 (s, 1H), 7,19-7,34 (m, 15H); analizė (C₃₃H₃₈N₂O₅) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato gavimas

100

Į etil-3-(Boc-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato (1,00 g, 1,84 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4 dioksane (20 ml) 23 °C temperatūroje supilamas HCI tirpalas tame pačiame tirpiklyje (4,0 M, 20 ml). Po 3 vai. lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH2CI2 (50 ml) ir pridedama iš eilės Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,759 g, 1,84 mmoi, 1,0 ekv.), HOBt (0,373 g, 2,76 mmol, 1,5 ekv.), 4-metilmorfolino (0,809 ml, 7,36 mmol, 4,0 ekv.) ir EDC (0,529 g, 2,76 mmol, 1,5 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 18 vai., po to paskirstomas tarp vandens (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 mi). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO4 ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (5 % CH3OH CH2CI2), gaunamas etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-Epropenoatas (1,25 g, 83 %), kuris yra balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 192194 °C; IR (cm'¹) 3295, 1696, 1678, 1655, 1519; ¹H BMR (CDCI₃) δ 0,84 (d,

3H, J = 6,5), 0,86 (d, 3H, J = 6,5), 1,24-1,32 (m, 1H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 ),

1,43-1,75 (m, 3H), 1,91-2,06 (m, 1H), 2,20-2,38 (m, 1H), 2,93-3,02 (m, 1H), 3,07-3,18 (m, 1H), 3,95-4,02 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,43-4,55 (m, 2H), 5,69 (d, 1H, J = 15,7), 6,46 (d, 1H, J = 7,5), 6,60 (d, 1 H, J = 8,1), 6,69 (dd, 1H, J = 15,7, 5,1), 7,09-7,38 (m, 27H); analizė (C₅iH₅₆N4O₇) C, H, N.

Produkto - eti!-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-E-propenoato gavimas

Į etil-3-{Cbz-l_-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/rt)}-E-propenoato (1,25 g, 1,49 mmol, 1 ekv.) ir triizopropilsilano (1,53 ml, 7,47 mmol, 5,0 ekv.) tirpaląCH₂CI₂ (20 ml) 23 °C temperatūroje pridedama trifluoracto rūgšties (20 ml); susidaro ryškiai geltonas tirpalas. Reakcijos mišinys maišomas 20 min. 23 °C temperatūroje ir per šį laiką jis pasidaro bespalvis. Pridedama anglies tetrachlorido (20 ml) ir lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana trinama su Et₂O (20 ml), gauta kieta medžiaga nufiltruojama su vakuumu, plaunama Et₂O (3 x 50 ml) ir išdžiovinus ore, gaunamas etil-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-G/n)-Epropenoatas (0,717 g, 81 %): lyd. temp. = 219-221 °C; IR (cm'¹) 3300, 1672, 1535; ¹H BMR (DMSO-cfe) δ 0,78 (d, 3H, J = 6,8), 0,82 (d, 3H, J = 6,5), 1,21 (t, 3H, J = 7,0 ), 1,25-1,37 (m, 2H), 1,42-1,54 (m, 1H), 1,58-1,80 (m, 2H), 2,022,09 (m, 2H), 2,84 (dd, 1H, J = 13,2, 8,9), 2,97 (dd, 1H, J = 13,2, 5,8), 3,934,01 (m, 1 H), 4,11 (kv, 2H, J = 7,0), 4,33-4,52 (m, 2H), 4,97 (d, 1 H, J = 12,3),

101

5,04 (d, 1H, J = 12,3), 5,64 (d, 1H, J = 15,9), 6,69 (dd, 1H, J = 15,9, 5,4), 6,76 (s, 1H), 7,13-7,37 (m, 11H), 7,43 (d, 1H, J = 7,8), 7,99 (d, 1H, J= 8,1), 8,04 (d, 1 H, J = 8,1); analizė (C32H42N4O7) C, H, N.

pavyzdys: Palyginamojo junginio #3 - etil-3-(Cbz-L-Val-L-Phe-L-G/n)E-propenoato - gavimas

Palyginamasis junginys #3

Tarpinio etil-3-{Boc-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato gavimas

Į etil-3-{Boc-L-(Tr-G/n)}-E-propenoato (pagaminto kaip aprašyta 31 pavyzdyje, 3,05 g, 5,62 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (20 ml) 23 °C temperatūroje supilamas HCI tirpalas tame pačiame tirpiklyje (4,0 M, 10 ml). Po 3 vai. lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH₂CI₂ (50 ml) ir pridedama iš eilės Boc-L-Phe-OH (1,49 g, 5,62 mmol, 1,0 ekv.), HOBt (0,911 g, 6,74 mmol, 1,2 ekv.), 4-metilmorfolino (1,85 ml, 16,8 mmol, 3,0 ekv.) ir EDC (1,29 g, 6,73 mmol, 1,2 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 18 vai., po to paskirstomas tarp vandens (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄ ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas 40-»50 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Boc-L-Phe~L-(Tr-G//?)}-E-propenoatas (2,77 g, 71 %), kuris yra balta putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 3306, 1706, 1661; ¹H BMR (CDCI3) δ 1,29 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,38 (s, 9H), 1,65-1,76 (m, 1H), 1,871,99 (m, 1H), 2,25-2,27 (m, 2H), 2,94-3,01 (m, 2H), 4,14-4,26 (m, 3H), 4,484,53 (m, 1H), 4,95 (s, pi, 1H), 5,64 (d, 1 H, J =15,8), 6,29 (d, 1H, J = 8,1), 6,64 (dd, 1H, J = 15,8, 5,4), 6,80 (s, pi., 1H), 7,14-7,32 (m, 20 H); analizė (C42H₄7N₃O₆) C, H, N.

102

Tarpinio etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-G/n))-E-propenoato gavimas

Į etil-3-{Boc-L-Phe-L-(Tr-G//7)}-E-propenoato (0,296 g, 0,429 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (10 ml) 23 °C temperatūroje supilamas HCI tirpalas tame pačiame tirpiklyje (4,0 M, 8 ml). Po 3 vai. lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama CH2CI2 (10 ml) ir pridedama iš eilės Cbz-L-Val-OH (0,108 g, 0,430 mmol, 1,0 ekv.), HOBt (0,070 g, 0,518 mmol, 1,2 ekv.), 4-metilmorfolino (0,142 ml, 1,29 mmol, 3,0 ekv.) ir EDC (0,099 g, 0,516 mmol, 1,2 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 4 vai., po to paskirstomas tarp vandens (100 ml) ir EtOAc (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na2SO4 ir sukoncentruojami. Išgryninus liekaną sparčiosios chromatografijos metodu (3 % CH3OH CH-CI?). gaunamas etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-G')}-E-propenoatas (0,220 g, 62 %), kuris yra balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 195-198 °C; IR (cm‘¹) 3284, 1689, 1646; ¹H BMR (CDCI3) δ 0,69 (d, 3H, J = 6,9), 0,82 (d, 3H, J = 6,5), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,63-1,74 (m, 1H), 1,96-2,02 (m, 2H), 2,22-2,35 (m, 2H), 2,93 (dd, 1H, J = 14,0, 7,6), 3,10 (dd, 1H, J = 14,0, 6,7), 3,81-3,85 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,48-4,58 (m, 2H), 4,87 (d, 1H, J = 12,0), 5,06 (d, 1H, J = 6,9), 5,67 (d, 1H, J = 15,6), 6,43 (d, 1H, J = 7,5), 6,63-6,72 (m, 2H), 7,10-7,40 (m, 26H); analizė (C₅₀H₅4N4O₇) C, H, N.

Produkto - etil-3-(Cbz-L-Val-L-Phe-L-G/n)-E-propenoato gavimas l etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-G//7)}-E-propenoato (0,188 g, 0,229 mmol, 1 ekv.) ir triizopropilsilano (0,300 ml, 1,46 mmol, 6,4 ekv.) tirpalą CH2CI2 (10 ml) 23 °C temperatūroje pridedama trifiuoracto rūgšties (5 ml)· susidaro ryškiai geltonas tirpalas. Reakcijos mišinys maišomas 20 min. 23 °C temperatūroje ir per šį laiką jis pasidaro bespalvis. Pridedama anglies tetrachlorido (10 ml) ir lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana trinama su Et₂O (20 ml), gauta kieta medžiaga nufiltruojama su vakuumu, plaunama Et20 (3 x 50 ml) ir išdžiovinus ore, gaunamas etil-3-(CbzL-VaI-L-Phe-L-G/n)-E-propenoatas (0,094 g, 71 %): lyd. temp. = 240 °C (skyla); IR (cm'¹) 3263, 1686, 1640; ¹H BMR (DMSO-d₆) δ 0,73 (d, 6H, J = 6,9), 1,21 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,60-1,75 (m, 2H), 1,83-1,90 (m, 1 H), 2,03-2,08 (m, 2H), 2,83 (dd, 1H, J = 13,6, 8,6), 2,96 (dd, 1H, J = 13,6, 6,2), 3,79-3,84 (m,

103

H), 4,10 (kv, 2H, J = 7,2), 4,37-4,49 (m, 1 H), 4,51-4,56 (m, 1H), 4,99 (d, 1H, 12,5), 5,06 (d, 1H, J = 12,5), 5,61 (d, 1H, J = 15,5), 6,67 (dd, 1H, J = 15,5,

5,5), 6,76 (s, 1H), 7,13-7,36 (m, 12H), 8,06 (d, 2H, J = 8,1); analizė (C31H40N4O7) C, H, N.

pavyzdys: Junginio (A-24) - etil-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(fSJ-p/ro/-A/a)}E-propenoato - gavimas

(A-24)

Tarpinio etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/7O/A/a)}-E-propenoato gavimas į etil-3-{Boc-L-((7\/-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/ro/-A/a)}-E-propenoato (pagaminto kaip aprašyta 6 pavyzdyje) (0,139 g, 0,292 mmol, 1 ekv.) tirpalą

1,4-dioksane (4 ml) supilamas HCI tirpalas 1,4-dioksane (4,0 M, 4 ml). Pamaišius 1,5 vai., lakios medžiagos nugarinamos, ir gaunama negryna amino druska, kuri naudojama negryninta.

Ši amino druska ištirpinama CH2CI2 (7 ml) ir tada pridedama iš eilės Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,156 g, 0,378 mmol, 1,3 ekv.), 4-metilmorfolino (0,128 ml, 1,16 mmol, 4 ekv.), HOBt (0,067 g, 0,50 mmol, 1,7 ekv.) ir EDC (0,095 g, 0,50 mmol, 1,7 ekv.). Pamaišius 20 vai., reakcijos mišinys supilamas į sotų NaCI tirpalą (15 ml) ir ekstrahuojamas 10 % CH3OH/CH2CI2 (3 x 25 ml). Sumaišytos organinės fazės džiovinamos Na₂SO4 ir nugarinamos. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (60 % EtOAc heksanuose), gaunamas putų pavidalo etil-S-iCbz-L-Leu-L-Phe-L-if/V-ž^dimetoksibenzil)-(S_>)-p/'ro/-A/a)}-E-propenoatas (0,158 g, 70 %): ¹H BMR (CDCb) δ 0,87-0,92 (m, 6H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,46-1,68 (m, 5H), 1,741,86 (m, 1H), 1,97-2,19 (m, 2H), 3,02 (dd, 1H, J = 13,7, 5,6), 3,11-3,24 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,20-4,30 (m, 2H), 4,35104

4,45 (m, 2H), 4,82-4,90 (m, 1H), 5,07 (d, 1 H, J = 12,3), 5,13 (d, 1H, J= 12,3), 5,36 (d, 1H, J = 7,8), 5,82 (dd, 1 H, J = 15,6, 1,2), 6,42-6,46 (m, 2H), 6,72 (dd, 1H, J = 15,6, 5,3), 6,88 (d, 1H, J = 8,7), 7,09 (d, 1H, J = 9,0), 7,13-7,20 (m, 5H), 7,29-7,37 (m, 5H), 8,09 (d, 1 H, J = 6,5).

Produkto - etil-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((SJ-p/ro/-A/a)}-E-propenoato gavimas

Etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((/V-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/7O/-A/a)}-Epropenoatas (0,156 g, 0,202 mmol, 1 ekv.) ir amonio cerio(IV) nitratas (0,277 g, 0,505 mmol, 2,5 ekv.) sumaišomi THF/vandens 2:1 mišinyje (3 ml) ir maišoma 2 vai. Reakcijos mišinys supilamas į sotų NaCI tirpalą (15 ml) ir ekstrahuojamas 10 % CH₃OH/CH₂CI₂ (3 x 25 ml). Sumaišytos organinės fazės džiovinamos Na₂SC>4 ir nugarinamos. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 2->5 % CH3OH CH₂CI₂), gaunamas etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-p/ro/-A/a)}-E-propenoatas (0,059 g, 47 %), kuris yra nelabai balta kieta medžiaga: ¹H BMR (CDCI3) δ 0,85-0,92 (m, 6H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,39-1,65 (m, 4H), 1,68-1,93 (m, 2H), 2,08-2,20 (m, 1H), 2,27-2,38 (m, 1 H), 3,02-3,13 (m, 2H), 3,24-3,32 (m, 2H), 4,11-4,20 (m, 1H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,47-4,58 (m, 1H), 4,81-4,89 (m, 1H), 5,05 (d, 1H, J = 12,1), 5,12 (d, 1H, J = 12,1), 5,26 (d, 1H, J = 8,1), 5,78 (dd, 1H, J =15,7, 1,2), 6,23 (s, 1H), 6,72 (dd, 1H, J= 15,7, 5,3), 7,13-7,25 (m, 6H), 7,30-7,37 (m, 5H), 7,54 (d, 1 H, J = 7,2).

pavyzdys: Junginio (A-25) - etil-3-(Cbz-L-Val-L-Phe-L-((SJ-pzro/-A/a)}E-propenoato - gavimas

(A-25)

105

Tarpinio etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(fN-2,4-dimetoksibenzil)-fS)-p/ro/A/a)}-E-propenoato gavimas

Etil-3-{Boc-L-((A/-2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/ro/-A/a)}-E-propenoatas (pagamintas kaip aprašyta 33 pavyzdyje) buvo kopuliuotas su Cbz-L-Val-LPhe-OH analogišku būdu kaip etil-3-{Boc-L-(Tr-G/n)}-E-propenoatas buvo paverstas į 31 pavyzdyje aprašytą 3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-G/n)}-Epropenoatą ir gautas etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((A/-2,4-dimetoksibenzil)-(S)p/'ro/-A/a)}-E-propenoatas: IR (cm‘¹) 3288, 1699, 1652; ¹H BMR (CDCb) δ 0,87 (d, 3H, J = 6,8), 0,95 (d, 3H, J = 6,5), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,48-1,60 (m, 2H), 1,70-1,84 (m, 1H), 1,95-2,20 (m, 3H), 3,01 (dd, 1H, J = 13,4, 5,6), 3,09-3,25 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 4,03-4,10 (m, 1 H), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,24 (d, 1 H, J = 14,2), 4,33-4,44 (m, 1H), 4,38 (d, 1 H, J = 14,2), 4,85-4,94 (m, 1H), 5,08 (d, 1H, J = 12,1), 5,14 (d, 1H, J = 12,1), 5,39 (d, 1H, J = 8,1), 5,80 (dd, 1 H, J = 15,6, 1,2), 6,42-6,47 (m, 2H), 6,70 (dd, 1 H, J = 15,6, 5,3), 6,81 (d, 1H, J = 9,0), 7,11-7,20 (m, 6H), 7,31-7,39 (m, 5H), 8,11 (d, 1H, J = 6,2); analizė (C42H52N4O9) C, H, N.

Produkto - etil-3-(Cbz-L-Val-L-Phe-L-(fSj-p/ro/-A/a)}-E-propenoato gavimas

Etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((^2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/ro/-A/a)}-Epropenoato (0,215 g, 0,284 mmol, 1 ekv.), DDQ (0,071 g, 0,31 mmol, 1,1 ekv.) ir vandens (3 lašai) suspensija CHCI3 (4 ml) maišoma 1 vai. 23 °C temperatūroje ir po to virinama su grįžtamu šaldytuvu 6 vai. Atšaldžius per naktį, pridedama daugiau DDQ (0,019 g, 0,084 mmol, 0,3 ekv.), mišinys sušildomas iki 67 °C ir laikomas 1 vai., po to nugarinamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 2->5 % CH3OH CH2CI2), gaunama šiek tiek priemaišų turinti medžiaga, kuri ištirpinama CH₂CI₂ (70 ml) ir plaunama sočiu NaHCO₃ (2 x 30 ml) ir sočiu NaCI tirpalu (30 ml), po to džiovinama Na₂SO₄ ir nugarinama. Liekana maišoma Et₂O (10 ml) 20 min., kieta medžiaga nufiltruojama ir išdžiovinus vakuume gaunamas etil-3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((S)-p/ro/-A/a)}-E-propenoatas (0,060 g, 35 %), kuris yra nelabai balta kieta medžiaga: lyd. temp. = 215-217

H?

106 °C; IR (cm'¹) 3413, 3295, 1696, 1649; ’H BMR (CDCI₃) δ 0,83 (d, 3H, J = 6,5), 0,91 (d, 3H, J = 6,8), 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,50-1,59 (m, 1 H), 1,70-1,91 (m, 2H), 2,03-2,17 (m, 2H), 2,26-2,38 (m, 1H), 3,03 (dd, 1H, J = 13,5, 6,4), 3,12 (dd, 1H, J = 13,5, 6,4), 3,21-3,34 (m, 2H), 3,96 (dd, 1H, J = 8,3, 6,4), 4,17 (kv, 2H, J = 7,2), 4,45-4,56 (m, 1H), 4,83-4,92 (m, 1H), 5,07 (d, 1H, J = 12,1), 5,13 (d, 1H, J = 12,1), 5,29 (d, 1H, J = 8,3), 5,77 (dd, 1 H, J = 15,8, 1,2), 5,94 (s, 1H), 6,71 (dd’ 1H, J = 15,8, 5,3), 6,95 (d, 1H, J = 9,0), 7,14-7,27 (m, 5H), 7,31-7,38 (m, 5H), 7,57 (d, 1 H, J = 7,2); analizė (C33H42N4O7) C, H, N.

pavyzdys: Junginio (A-26) - etii-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-p/perA/a)}-E-propenoato - gavimas

co₂ch₂ch₃

Produkto - etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((SJ-p/per-A/a)}-E-propenoato gavimas (1S,3’S)-{2-(1’-(2,4”-Dimetoksibenzil)-2’-okso-piperidin3’-il)-1hidroksimetiletilj-karbamo rūgšties iref-butilo esteris (pagamintas kaip aprašyta 8 pavyzdyje) paverčiamas į produktą - etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L((S/-p/per-A/a)}-E-propenoatą- analogišku būdu, kaip aprašytas 34 pavyzdyje (1S,3’S)-{2-(1’-(2”,4”-dimetoksibenzil)-2’-okso-pirolidin3’-il)-1-hidroksimetiletilj-karbamo rūgšties iref-butilo esteriui paversti į etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L((S;-p/'ro/-A/a)}-E-propenoatą: IR (cm'¹) 3422, 3307, 1713, 1649; ¹H BMR (CDCb) δ 0,86-0,92 (m, 6H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2, 1-38-1,75 (m, 6H), 1,77-1,89 (m, 1H), 1,96-2,11 (m, 2H), 3,07 (d, 2H, J = 6,2), 3,20-3,27 (m, 2H), 4,13-4,24 (m, 1H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,41-4,53 (m, 1H), 4,76-4,85 (m, 1H), 5,06 (d, 1H, J = 12,1), 5,12 (d, 1H, J = 12,1), 5,34 (d, 1H, J = 7,8), 5,78 (dd, 1H, J =

15,6, 5,4), 6,17 (s, 1H), 6,70 (dd, 1H, J = 15,6, 5,4), 7,00 (d, 1H, J = 8,4),

107

7,13-7,27 (m, 6H), 7,30-7,37 (m, 5H), 7,83 (d, 1H, J = 6,8); analizė (C₃₅H₄₆N₄O₇0,5H₂O) C, H, N.

pavyzdys: Junginio (A-27) - ΘίΝ-3-{Ο6ζ-Ι_-1-βυ-1_-Ρήθ-1_-((/?)-ρ/7Ό/-Α/3)}E-propenoato - gavimas

Tarpinio (4S,4”R)-4-{3’-(4”-benzil-2”-okso-oksazolidin-3”-il)-3’oksopropil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio gavimas

Į (4S)-4-(2’-karboksietil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties frefbutilo esterio (4,20 g, 15,3 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF (300 ml) 0 °C temperatūroje pridedama trietilamino (6,43 ml, 46,1 mmol,,.3,0 ekv.) ir po to pivaloilo chlorido (1,89 ml, 15,3 mmol, 1,0 ekv.). Šiek tiek drumstas reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 3,5 vai., tada pridedama ličio chlorido (0,716 g, 16,9 mmol, 1,1 ekv.) ir po to (R)-(+)-4-benzil-2-oksązolidinono (2,59 g, 14,6 mmol, 0,95 ekv.). Sušildžius iki 23 °C ir pamaišius 19 vai., reakcijos mišinys paskirstomas tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir EtOAc (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami pusiau sočiu Na₂CO₃ (150 ml), džiovinami MgSO₄ ir nufiltruojama veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje, ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (30 % EtOAc heksanuose), gaunamas (4S,4”R)-4-{3’-benzil-2”-okso-oksazolidin-3-il)-3’-oksopropil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (6,15 g, 97 %), kuris yra bespalvė alyva: IR (cm'¹) 2978, 1784, 1694; ¹H BMR (CDCI₃, izomerų mišinys) δ 1,14 (s), 1,58 (s), 1,63 (s), 2,01-2,05 (m), 2,72-3,13 (m), 3,29-3,33 (m), 3,74-3,79 (m), 3,82-4,09 (m), 4,11-4,25 (m), 4,67-4,70 (m), 7,20-7,37 (m); analizė (C₂₃H₃₂N₂O₆) C, H, N.

108

Tarpinio (2’R,4S,4”R)-4-{2’-(4”-benzil-2”-okso-oksazolidin-3”-karbonil)pent-4’-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio gavimas (4S,4”R)-4-{3’-benzil-2”-okso-oksazolidin-3”-il)-3’-oksopropil}-2,2dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (6,15 g, 14,2 mmol, 1 ekv.) tirpalas THF (25 ml) -78 °C temperatūroje supilamas į natrio bis(trimetilsilil)amidą (14,2 ml 1,0 M tirpalo THF, 14,2 mmol, 1,0 ekv.) tame pačiame tirpiklyje (50 ml). Reakcijos mišinys maišomas 15 min. -78 °C temperatūroje, po to pridedama alilo jodido (3,90 ml, 42,6 mmol, 3,0 ekv.). Pamaišius dar 2 vai. -78 °C temperatūroje, reakcijos mišinys palaikomas -45 °C temperatūroje 2 vai., po to paskirstomas tarp 2:1 pusiau sotaus NH4CI ir 5 % Na₂S₂O3 (200 ml) mišinio ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami H₂O (100 ml), džiovinami MgSO4 ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje, ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (15 % EtOAc heksanuose), gaunamas (2’R,4S,4”R)-4-{2’-(4”-benzil-2”-oksooksazolidin-3”-karbonil)-pent-4’-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esteris (3,12 g, 46 %), kuris yra klampi putų pavidalo medžiaga: IR (cm*¹) 2978, 1782, 1685; ¹H BMR (CDCI₃, izomerų mišinys) δ 1,42 (s), 1,49 (s), 1,52 (s), 1,62-1,78 (m), 1,80-2,01 (m), 2,23-2,49 (m), 2,51-2,56 (m), 2,76 (dd, J = 13,3, 9,7), 3,26 (dd, J = 13,3, 3,6), 3,58-3,64 (m), 3,67 (d, J = 8,7), 3,90-3,98 (m), 4,02-4,15 (m), 4,16-4,30 (m), 4,75-4,82 (m), 5,06-5,11 (m), 5,74-5,88 (m), 7,22-7,36 (m); analizė (C₂₆H₃6N₂O₆) C, H, N.

Tarpinio (1S,3’R)-{2’-(1’-(2”,4”-dimetoksibenzil)-2”-okso-pirolidin-3’-il)-1hidroksimetiletilj-karbamo rūgšties fref-butilo esterio gavimas

Per (2’R,4S,4”R)-4-{2’-(4”-benzil-2”-okso-oksazolidin-3”-karbonil)pent-4’-enil}-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksirūgšties fref-butilo esterio (3,12 g, 6,60 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH₂CI₂ (200 ml) ir CH₃OH (0,535 ml, 13,2 mmol, 2,0 ekv.) -78 °C temperatūroje burbuliukais leidžiamas ozonas, kol laikosi mėlyna spalva. Po to reakcijos mišinys valomas argonu, kol jis tampa bespalvis. Pridedama metisulfido (4,85 ml, 66,0 mmol, 10 ekv.) ir mišinys

109 maišomas -78 °C temperatūroje 3,5 vai., po to laikomas 0 °C temperatūroje dar 1 vai. Paskirsčius reakcijos mišinį tarp H₂O (150 ml) ir 1:1 EtOAc ir heksanų mišinio (2 x 150 ml), sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami MgS0₄ ir nufiltruojami veikiant traukos jėgai. Filtratas sukoncentruojamas sumažintame slėgyje ir liekana tuoj pat naudojama negryninta.

Ši liekana ištirpinama 2:1 THF ir EtOH (180 ml) mišinyje ir po to 23 °C temperatūroje pridedama iš eilės 2,4-dimetoksibenzilamino hidrochlorido (5,38 g, 26,4 mmol, 4,0 ekv.), natrio acetato (2,17 g, 26,4 mmol, 4,0 ekv.) ir natrio cianoborhidrido (0,829 g, 13,2 mmol, 2,0 ekv.). Gauta suspensija maišoma 19 vai. 23 °C temperatūroje ir po to paskirstoma tarp 0,5 M HCI (150 ml) ir EtOAc (2 x 100 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai plaunami pusiau sočiu NaHCO₃ (100 ml), džiovinami Na₂SO₄ ir sukoncentruojami sumažintame slėgyje. Liekana perleidžiama per trumpą silikagelio kolonėlę (eliuuojama 50 % EtOAc heksanuose) ir gaunamas (3’R,4S)-4-{r-(2”,4”dimetoksibenzil)-2”-okso-pirolidin-3’-ilmetil}-2,2-dimetil-oksazolidin-3-karboksi- ® rūgšties fref-butilo esteris, turintis (R)-(+)-4-benzil-2-oksazolidinono priemaišų.

Ši medžiaga ištirpinama CH3OH (80 ml) ir pridedama TsOH H₂O (0,251 g, 1,32 mmol, 0,20 ekv.). Reakcijos mišinys pašildomas iki 50 °C ir išlaikomas šioje temperatūroje 4 vai. Atšaldžius iki 23 °C, reakcijos mišinys sukoncentruojamas sumažintame slėgyje iki ~20 ml tūrio ir paskirstomas tarp ^; pusiau sotaus NaHCO3 (150 ml) ir 9:1 CH₂CI₂ ir CH3OH mišinio (2 x 150 ml). Sumaišyti organiniai sluoksniai džiovinami Na₂SO₄ ir sukoncentruojami sumažintame slėgyje. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (3 % CH₃OH/CH₂CI₂), gaunamas (1 S,3’R)-{2’-(1’(2”,4”-dimetoksibenzil)-2-okso-pirolidin-3’-il)-1-hidroksimetiletil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteris (0,92 g, 34 %), kuris yra putų pavidalo medžiaga: IR (cm'¹) 3347 (pi), 2937, 1669; ¹H BMR (CDCI3) δ 1,44 (s,9H), 1,62-1,77 (m,

2H), 1,94-2,04 (m, 1H), 2,15-2,26 (m, 1H), 2,40-2,50 (m, 1H), 3,13-3,24 (m,

2H), 3,56-3,77 (m, 3H), 3,80 (s, 6H), 3,82-4,16 (m, 1H), 4,37 (d, 1 H, J = 14,3),

4,45 (d, 1H, J = 14,3), 5,49 (d, 1H, J = 7,8), 6,42-6,45 (m, 2H), 7,08-7,11 (m,

1H); analizė (C₂₁H₃₂N₂O₆ 0,25H₂O) C, H, N.

110

Tarpinio etil-3-{Boc-L-((Af-2,4-dimetoksibenzil)-(RJ-p/ro/-A/a))-Epropenoato gavimas

Tokiu pačiu būdu, kaip ir (1S,3’S)-{2'-(1’-(2,4”-dimetoksibenzil)-2”okso-pirolidin-3’-il)-1 -hidroksimetiletilj-karbamo rūgšties fref-butilo esteris buvo paverstas į 33 pavyzdyje aprašytą etil-3-{Boc-L-((A/-2,4-dimetoksibenzil)(S)-p/'ro/-A/a)}-E-propenoatą (1 S,3’R)-{2’-(1 ’-(2,4-dimetoksibenzil)-2”-oksopirolidin-3’-il)-1-hidroksimetiletil}-karbamo rūgšties fref-butilo esteris buvo paverstas į etil-3-{Boc-L-((/V-2,4-dimetoksibenzil)-(R_>)-p/roM/a)}-E-propenoatą: IR (cm’¹) 3307, 1713, 1674; ¹H BMR (CDCI₃) δ 1,28 (t, 3H, J = 7,2), 1,45 (s, 9H), 1,57-1,82 (m, 2H), 2,02-2,19 (m, 2H), 2,42-2,55 (m, 1H), 3,11-3,25 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 4,19 (kv, 2H, J = 7,2), 4,32-4,50 (m, 3H), 5,97 (dd, 1H, J = 15,7, 1,4), 6,38 (d, 1H, J = 7,8), 6,42-6,47 (m, 2H), 6,86 (dd, 1H, J = 15,7, 5,1), 7,08-7,13 (m, 1H); analizė (C₂5H₃₆N₂O₇) C, H, N.

Tarpinio etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((fV-2,4-dimetoksibenzil)-(/?j-p/ro/A/a)}-E-propenoato gavimas

Į etil-3-{Boc-L-(('/V-2,4-dimetoksibenzil)-(/^:?)-p/ro/-A/a)}-E-propenoato (0,233 g, 0,489 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (6 ml) supilamas HCI tirpalas 1,4-dioksane (4,0 M, 6 ml). Pamaišius 1,5 vai.,'lakios medžiagos nugarinamos, ir gaunama negryna amino druska, kuri naudojama negryninta.

Ši amino druska ištirpinama DMF (4 ml) ir atšaldoma iki 0 °C. Pridedama iš eilės Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0,202 g, 0,490 mmol, 1 ekv.), DIEA (0,255 ml, 1,46 mmol, 3 ekv.) ir HATU (0,186 g, 0,489 mmol, 1 ekv.). Pamaišius 1,5 vai., reakcijos mišinys praskiedžiamas MTBE (100 ml), plaunamas 5 % KHSO4, sočiu NaHCO₃ ir sočiu NaCI tirpalu (10 ml), džiovinamas MgSCU ir nugarinamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 60-»75 % EtOAc heksanuose), gaunamas etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((7V-2,4-dimetoksibenzil)(H)-p/ra/-A/a)}-E-propenoatas (0,208 g, 55 %), kuris yra balta kieta medžiaga (po nugarinimo id Et₂O): lyd. temp. = 174-176 °C; IR (cm'¹) 3287, 1713, 1649; ¹H BMR (CDCI3) δ 0,84-0,91 (m, 6H), 1,29 (t, 3H, J = 7,2 ), 1,42-1,66 (m, 4H), 1,67-1,77 (m, 1H), 1,84-1,95 (m, 1H), 2,20-2,12 (m, 1H), 2,33-2,45 (m, 1H), 3,04-3,23 (m, 4H), 3,78 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,15-4,29 (m, 1H), 4,17 (kv, 2H,

111

J = 7,2), 4,31 (d, 1H, J = 14,5), 4,40 (d, 1H, J =14,5), 4,67-4,84 (m, 2H), 5,05 (d, 1H, J= 12,1), 5,11 (d, 1H, J= 12,1), 5,35 (d, 1H, J = 8,1), 5,76 (dd, 1H, J =

15,6, 1,6), 6,42-6,46 (m, 2H), 6,74-6,81 (m, 1H), 6,75 (dd, 1H, J = 15,6, 5,0), 7,06-7,10 (m, 1H), 7,15-7,24 (m, 5H), 7,29-7,36 (m, 5H), 8,79 (d, 1H, J = 5,9); analizė (C43H54N4O9) C, H, N.

Produkto - etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((/?J-p/ro/-A/a)}-E-propenoato gavimas

Etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((7V-2,4-dimetoksibenzil)-(ft)-p/ro/-A/a)}-Epropenoatas paverčiamas į produktą - etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((R)-p/'ro/A/a)}-E-propenoatą tokiu pačiu .būdu, kaip jr etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((7\/2,4-dimetoksibenzil)-(S)-p/ra/-A/a)}-E-propenoatas paverčiamas į 34 pavyzdyje aprašytą etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-p/ro/-A/a)}-E-propenoatą:

IR (cm'¹) 3290, 1702, 1642; ¹H BMR (CDCb) δ 0,85-0,92 (m, 6H), 1,30 (t, 3H,

J = 7,2), 1,35-1,49 (m, 1H), 1,52-1,71 (m, 3H), 1,73-1,94 (m, 2H), 2,15-2,26 ³ (m, 1H), 2,15-2,26 (m, 1H), 2,32-2,43 (m, 1H), 3,02-3,18 (m, 2H), 3,19-3,29 ‘ (m, 2H), 4,15-4,27 (m, 1H), 4,18 (kv, 2H, J = 7,2), 4,65-4,74 (m, 1H), 4,76- *

4,85 (m, 1H), 5,07 (d, 1H, J= 12,3), 5,12 (d, 1H, J= 12,3), 5,18-5,25 (m, 1H), '

5,76-5,84 (m, 2H), 6,64-6,78 (m, 2H), 7,15-7,40 (m, 10H), 7,91-7,98 (m, 1H); ⁴ analizė (C34H44N4O7) C, H, N.

pavyzdys: Junginio (A-28) - etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-1-f2imidazolidon)Ala}-E-propenoato - gavimas

Tarpinio etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-6oc-a/nznoA/a}-E-propenoato gavimas

112

Į Cbz-L-Leu-L-Phe-L-/V-Boc-aminoalaninalio (pagaminto pagal VVebber et ai., J. Med. Chem. 1998, vol.41, 2786 aprašytą metodiką) (1,60 g, 2,73 mmol, 1 ekv.) tirpalą THF (55 ml) pridedama (karbetoksimetilen)trifenilfosforano (1,20 g, 3,28 mmol, 1,2 ekv.) ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį. Lakios medžiagos nugarinamos vakuume, ir liekaną išgryninus sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0—>1,5 % CH3OH/CH2CI2), gaunamas etil-3-{Cbz-LLeu-L-Phe-L-6oc-am/noA/a}-E-propenoatas (0,968 g, turintis trifenilfosfino oksido priemaišų). Ši medžiaga naudojama daugiau nebegryninta.

Tarpinio etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-Boc-a/n//7oef/7>A/a}-E-propenoato gavimas

Į etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-6oc-am/noA/a}-E-propenoato (0,95 g, 1,46 mmol, 1 ekv.) tirpalą 1,4-dioksane (20 ml) 23 °C temperatūroje įpilama HCI tirpalo tame pačiame tirpiklyje (4,0 M, 10 ml). Reakcijos mišinys maišomas šioje temperatūroje 1,5 vai., po to dar pridedama HCI tirpalo 1,4-dioksane (4,0 M, 10 ml). Pamaišius per naktį, lakios medžiagos nugarinamos vakuume, ir liekana trinama su Et₂O (20 ml). Gautos kietos medžiagos nufiltruojamos ir plaunamos Et₂O (3x10 ml); gaunama negryninta amino druska (0,63 g, 73 %, 1,05 mmol), kuri yra balta kieta medžiaga.

Ši medžiaga ištirpinama CH3OH (10 ml), pridedama N-Boc-2aminoetanalio (pagaminto pagal Bischofberger et ak, J. Org. Chem. 1988, vok 53, 3457 aprašytą metodiką) (0,19 g, 1,16 mmol, 1,1 ekv.) ir po to NaBH₃CN (0,069 g, 1,05 mmol, 1,0 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje per naktį, po to lakios medžiagos nugarinamos sumažintame slėgyje. Liekana ištirpinama EtOAc (25 ml) ir organinis sluoksnis plaunamas vandeniu (25 ml) ir sočiu NaCi tirpalu (25 ml), džiovinamas MgSO4 ir sukoncentruojamas. Išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu (gradientinis eliuavimas, 0->3 % CH₃OH/CH₂CI₂), gaunamas etil-3{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-6oc-a/77/7?oeM)A/a}-E-propenoatas (0,32 g, 44 %), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: R_f = 0,20 (5 % CH3OH/CHCI3); IR (cm'¹) 1712, 1649, 1537, 1252, 1175; ¹H BMR (DMSO-d₃) δ 0,79 (d, 3H, J = 6,6), 0,82 (d, 3H, J = 6,6), 1,21 (t, 3H, J = 7,2), 1,26-1,37 (m, 13H), 1,46-1,54

113 (m, 1 H), 2,56-2,60 (m, 2H), 2,82-2,97 (m, 4H), 3,98-4,04 (m, 1H), 4,10 (kv, 2H, J = 7,0), 4,42-4,49 (m, 2H), 4,98 (d, 1H, J = 12,5), 5,04 (d, 1H, J = 12,9), 5,59 (d, 1H, J = 15,8), 6,73-6,75 (m, 1H), 6,77 (dd, 1H, J = 15,8, 4,8), 7,207,34 (m, 10H), 7,41 (d, 1H, J = 8,1), 7,97 (d, 1H, J = 7,0), 8,07 (d, 1 H, J = 7,0); analizė (CszHssNsOe-O.SO^O) C, H, N.

Produkto - etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-1-(2-//n/dazo//don_i)A/a}-Epropenoato - gavimas l etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-Soc-am//?oef//)A/a}-E-propenoato (0,29 g, 0,42 mmol, 1 ekv.) tirpalą CH2CI2 (8 ml) pridedama TFA (0,8 ml), ir reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 2 vai. Lakios medžiagos nugarinamos vakuume, liekana ištirpinama EtOAc (25 ml) ir plaunama sočiu NaHCO3 tirpalu (25 ml), vandeniu (25 ml) ir sočiu NaCi tirpalu (25 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas MgSO₄ ir sukoncentravus gaunamas negrynintas diaminas (0,23 g, 92 %, 0,39 mmol), kuris yra gelsvai ruda amorfinė kieta medžiaga.

Ši medžiaga ištirpinama THF (4 ml), pridedama karbonildiimidazolo (0,06 g, 0,36 mmol, 0,92 ekv.), ir reakcijos mišinys maišomas 23 °C temperatūroje 3,5 vai. Tirpiklis nugarinamas vakuume ir išgryninus liekaną sparčiosios kolonėlių chromatografijos metodu metodu (gradientinis eliuavimas, 0-»2 % CH3OH/CH2CI2), gaunamas etil-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2/m/dazo//don)>4/a}-E-propenoatas (0,12 g, 54 %), kuris yra balta amorfinė kieta medžiaga: lyd. temp. = 161-164 °C; Rf = 0,21 (5 % CH3/CHCI3); IR (cm'¹) 1701, 1647, 1535, 1277; ¹H BMR (DMSO-ds) δ 0,79 (d, 3H, J = 6,6), 0,82 (d, 3H, J = 6,6), 1,21 (t, 3H, J = 7,0), 1,27-1,35 (m, 2H), 1,48-1,52 (m, 1 H), 2,792,86 (m, 1H), 2,92-3,05 (m, 3H), 3,14-3,19 (m, 2H), 3,25-3,30 (m, 2H), 3,984,03 (m, 1H), 4,10 (kv, 2H, J = 7,0), 4,47-4,49 (m, 1H), 4,59-4,63 (m, 1H), 4,97-5,02 (m, 2H), 5,72 (d, 1 H, J = 15,8), 6,37 (s, 1H), 6,71 (dd, 1 H, J = 15,8, 5,5), 7,15-7,39 (m, 10H), 7,42 (d, 1H, J = 8,1), 8,00 (d, 1H, J = 8,1), 8,18 (d, 1H, J = 8,1); analizė (CaaH^NsOz) C, H, N.

pavyzdys: Tarpinių junginių Q1, Q2 irQ3 sintezė

114

Tarpinio 1 -acetil-3-(trifenilfosfanilidin)pirolidin-2-ono gavimas

2,4-Dibrombutiridas (pagamintas pagal Ikuta et ak, J. Med. Chem., 1987, vol.30, 1995 aprašytą metodiką) (46,1 g, 188,2 mmol) THF (1 I) atšaldomas iki 0 °C ir veikiamas ličio bis(trimetilsililamido) (40,9 g, 244,6 mmol) tirpalu THF (200 ml). Tirpalas laikomas 0 °C temperatūroje 2,5 vai., po to supilamas į sotų NaCI tirpalą (800 ml), ekstrahuojamas etilacetatu (2 I) ir džiovinamas (MgSOA Nugarinus gaunama 25,5 g 3-brompirolidin-2-ono, kuris yra ruda alyva. Ši medžiaga veikiama Ac₂O (76 ml) ir virinama su grįžtamu šaldytuvu 5 vai. Nugarinus ir po to išgryninus (filtruojama per silikagelį, eliuentas - EtOAc), gaunama 28 g 1-acetil-3-brompirolidin-2-ono, kuris yra tamsi alyva. Pridedama THF (272 ml) ir trifenilfosfino (42,8 g, 163,3 mmol), ir gautas tirpalas virinamas su grįžtamu šaldytuvu 8 vai. Atšaldžius iki 23 °C, susidaro 1-acetil-3-(trifenilfosfanil)-pirolidin-2-ono bromido nuosėdos, kurios nufiltruojamos (27,1 g). Sukoncentravus pokristalizacinį tirpalą, po to atšaldžius iki 0 °C, gaunama dar 6,6 g. Abi medžiagos frakcijos CH2CI2 (1 I) plaunamos 1N NaOH (100 ml). o po to sočiu NaCI tirpalu (2 x 100 ml). Nugarinus organinį sluoksnį, gaunama 26,9 g (37 %, bendras kiekis) 1-acetii3-(trifenilfosfanilidin)pirolidin-2-ono, kuris yra gelsvai ruda alyva. ¹H BMR (CDCb) δ 7,76-7,32 (15H, m), 3,90-3,85 (2H, m), 2,50 (3H, s), 2,56-2,30 (2H, m).

Tarpinio 2-t-butoksikarbonil-3-(t-butildimetilsilanoksi)propiono rūgšties metilo esterio gavimas

Boc-D-serino metilo esteris (20,0 g, 91,2 mmol) DMF (300 ml) veikiamas imidazolu (18,6 g, 273,7 mmol), o po to TBSCI (13,0 g, 86,7 mmol). Tirpalas laikomas kambario temperatūroje 8 vai., po to plaunamas sočiu vandeniniu amonio chloridu (300 ml) ir ekstrahuojamas etilacetatu (800 ml).

115

Organinis sluoksnis plaunamas sočiu NaCI tirpalu (300 ml), po to džiovinamas (MgSO₄) ir gaunama 30,2 g (100 %) 2-t-butoksikarbonil-3-(tbutildimetilsilanoksi)propiono rūgšties metilo esterio, kuris yra bespalvė alyva. ¹H BMR (CDCb) δ 5,32 (1H, d, 7= 8,3), 4,33 (1H, dt, 7= 10,1, 2,6), 3,80 (1H, dd, 7 = 9,8, 3,1), 3,72 (3H, s), 1,43 (9H, s), 0,85 (9H, s), 0,0 (6H, s).

Tarpinio {1 -(1 -acetil-2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)-2-(t-butildimetilsilanoksi)-etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio gavimas

2-t-Butoksikarbonil-3-(t-butildimetilsilanoksi)propiono rūgšties metilo esteris (12,7 g, 38,0 mmol) toluene (190 ml) atšaldomas iki -78 °C ir veikiamas diizobutilaliuminio hidrido (15,6 ml, 87,4 mmol) tirpalu-toluene (175 ml). Vidinė temperatūra laikoma žemiau -70°C. Tirpalas palaikomas -78 °C temperatūroje dar 90 min., ir po to pridedama metanolio (7,7 ml, 190 mmol). Pridedama 1 -acetil-3-(trifenilfosfanilidin)pirolidin-2-ono (11,1 g, 28,6 mmol) CH2CI2 (50 ml) -78 °C temperatūroje, gautam tirpalui leidžiama sušilti iki kambario temperatūros ir laikoma 30 min. Pridedama natrio kalio tartrato (150 g) tirpalo vandenyje (600 ml) ir intensyviai maišoma 30 min. Mišinys ekstrahuojamas etilacetatu (4 x 250 ml), džiovinamas (MgSO₄) ir nugarinamas. Išgryninus chromatografuojant per silikagelj, gaunama 7,04 g (60 %) {1-(1 -acetil-2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)-2-(t-butiIdimetilsilanoksi)-etil}karbamo rūgšties t-butilo esterio, kuris yra bespalvė alyva. *H BMR (CDCb) δ 6,59 (1H, dt, 7 = 8,7, 2,9), 4,98 (1H, d, 7 = 8,7, 2,9), 4,98 (1H, d, 7 = 6,8), 4,37-4,25 (1H, m), 3,77 (2H, t, 7 = 7,3), 3,70-3,58 (2H, m), 2,90-2,80 (1H, m), 2,75-2,60 (1 H, m), 5,53 (3H, s), 1,41 (9H, s), 0,87 (9H, s), 0,04 (6H, s).

Tarpinio {2-hidroksi-1-(2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio gavimas {1 -(1 -Acetil-2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)-2-(t-butildimetilsilanoksi)-etil}karbamo rūgšties t-butilo esteris (9,18 g, 22,2 mmol) THF (150 ml) 0 °C temperatūroje veikiamas TBAF (22,2 ml 1M tirpalo THF, 22,2 mmol) ir laikomas 1 vai. Pridedama sotaus vandeninio amonio chlorido tirpalo ir maišoma 10 min., po to tirpalas ekstrahuojamas etilacetatu (2 x 200 ml). Organinis sluoksnis džiovinamas (MgSO₄), o po to nugarinamas. Išgryninus

116 chromatografuojant per silikagelj, gaunama 4,82 g (73 %) bespalvės alyvos. Ši medžiaga ištirpinama metnolyje (160 ml), veikiama kalio karbonatu (223 mg, 1,62 mmol) ir laikoma kambario temperatūroje 1 vai. Po to šis mišinys veikiamas kieta citrinų rūgštimi (311 mg, 1,62 mmol) ir pridedama etilacetato (800 ml). Tirpalas nufiltruojamas per silikagelj. Nugarinus gaunama 4,30 g (73 %, bendras kiekis) {2-hidroksi-1-(2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio, kuris yra bespalvė alyva. ¹H BMR (CDCb) δ 7,03 (1H, pi. s), 6,35 (1H, dt, J = 8,6, 2,6), 5,37 (1H, d, J = 6,5), 4,40-4,20 (1H, m), 3,66 (pl.s, 3H), 3,4 (2H, t, J = 6,7), 3,10-2,80 (1H, m), 2,80-2,70 (1H, m), 1,41 (9H, s)·

Tarpinio {2-hidroksi-1-(2-oksopiroIidin-3-ilmetil)etil}-karbamo rūgšties tbutilo esterio (diastereomerų mišinio) (Q1) gavimas {2-Hidroksi-1 -(2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)etil}-karbamo rūgšties tbutilo esteris (4,30 g, 16,8 mmol) etilacetate (168 ml) veikiamas 5 % paladžiu ant anglies (1,78 g) ir hidrinamas atmosferos slėgyje 1 vai. Šis mišinys nufiltruojamas ir nugarinus gaunama 3,92 g (91 %) {2-hidroksi-1-(2-oksipirolidin-3-ilmetil)eti!}-karbamo rūgšties t-butilo esterio, kuris yra bespalvė alyva (1,5:1 diastereomerų mišinys): ¹H BMR (CDCb) δ 6,99 (1H, s), 5,49 (1H, d, J = 8,4), 3,70-3,50 (3H, m), 3,38-3,20 (2H, m), 2,60-2,20 (2H, m), 2,00-1,70 (2H, m), 1,65-1,45 (1 H, m), 1,37 (9H, s).

Tarpinio {2-hidroksi-1 -(/?-2-oksi-pirolidin-3-ilmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio (Q2) gavimas {2-Hidroksi-1 -(2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)etil}-karbamo rūgšties tbutilo esteris (98 mg, 0,39 mmol) metanolyje (5 ml) veikiamas (R)-BINAPRuCI (19 mg, 0,02 mmol), o po to įdedamas į vandenilio atmosferą (8274 kPa) 50 °C temperatūroje 48 vai. Tirpalas nugarinamas, po to nufiltruojamas per silikagelj (eliuentas -10 % MeOH-EtOAc). Nugarinus gaunama 75 mg (75 %) {2-hidroksi-1-(R-2-oksipirolidin-3-ilmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio, kuris yra bespalvė alyva (9:1 diastereomerų mišinys): ¹H BMR (CDCI3) δ 6,32 (1H, pl.s), 5,40 (1H, d, J = 7,5), 3,82 (1H, pl.s), 3,71-3,63 (2H, m), 3,34-3,31 (2H, m), 2,45-2,30 (2H, m), 2,09-1,86 (2H, m), 1,70-1,63 (1 H, m), 1,42 (9H, s).

117

Tarpinio {2-hidroksi-1 -(S-2-oksi-pirolidin-3-ilmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio (Q3) gavimas {2-Hi droksi-1 -(2-oksopirolidin-3-ilidenmetil)etil}-karbamo rūgšties tbutilo esteris (0,1 g, 0,39 mmol) metanolyje (5 ml) veikiamas (S)-BINAP-RuCI (19 mg, 0,02 mmol), o po to įdedamas į vandenilio atmosferą (8274 kPa) 50 °C temperatūroje 48 vai. Tirpalas nugarinamas, po to nufiltruojamas per silikagelį (eliuentas -10 % MeOH-EtOAc). Nugarinus gaunama 74 mg (74 %) {2-hidroksi-1-(S-2-oksi-pirolidin-3-ilmetil)etil}-karbamo rūgšties t-butilo esterio, kuris yra bespalvė alyva (9:1 diastereomerų mišinys): ¹H BMR (CDCh) δ 6,66 (1H, pl.s), 5,51 (1H, d, J = 8,2), 3,72-3,57 (3H, jn), 3,34-3,31 (2H, m), 2,522,33 (2H, m), 2,20-1,86 (1H, m), 1,86-1,70 (1H, m), 1,62-1,50 (1H, m), 1,40 (9H, s).

Toliau aprašomi biocheminių ir biologinių bandymų, atliktų su įvairiais šio išradimo junginiais, rezultatai

BIOCHEMINIS IR BIOLOGINIS JUNGINIŲ ĮVERTINIMAS

Rinovirusinės 3C proteazės inhibavimas

Buvo pagaminti įvairių junginių pradiniai tirpalai (50 mM, DMS) ir įvairaus praskiedimo tirpalai tame pačiame tirpiklyje. Iš serotipų 14, 16 ir 2 buvo pagamintos rekombinantinės rinovirusinės 3C proteazės (žr. Birch et alk, “Purification of recombinant human rhinovirus 14 3C proteaze expressed in Escherichia coli”, Protein Expr. Pur. 1995, 6(5), 609-618) pagal tokias standartines chromatografijos metodikas: (1) jonų mainų chromatografiją naudojant Q Sepharose Fast Flow iš Pharmacia; (2) giminingumo chromatografiją naudojant Affi-Gel Blue iš Biorad; ir (3) chromatografiją pagal dydį, naudojant Sephadex G-100 iš Pharmacia. Kiekviename testo mėginyje buvo 2 % DMSO, 50 mM tris pH 7,6, 1 mM EDTA ir nurodytos koncentracijos tiriamojo junginio, maždaug 1 μΜ substrato ir 50-100 nM proteazės. Iš reakcijos, kuri inicijuojama pridedant fermento, o ne substrato, buvo

118 gaunamos k_steb./l reikšmės. RVP aktyvumas buvo išmatuotas fluorescencijos energijos perdavimo testu. Substratas buvo (N-galinis) DABCYL-(Gly-Arg-AlaVal-Phe-Gln-Gly-Pro-Val-Gly)-EDANS. Nesuskaldytame substrate EDANS fluorescenciją slopino gretima DABCYL liekana. Kai peptidas suskaldomas, slopinimas išnyksta, ir aktyvumas išmatuojamas iš padidėjusio fluorescencijos signalo. Duomenys buvo analizuojami, naudojant netiesinio aproksimavimo programas (Enzfit) ir yra pateikiami toliau duodamose 1 ir 2 lentelėse. 1 lentelėje visi duomenys yra gauti su HRV serotipo-14 (gauto iš infekcinio cDNR klono, sukonstruoto Dr. Robert Rueckert, Institute for Molecular Virology, University of VVisconsin, Madison, VViskonsin) rinovirusine 3C proteaze. .2 lentelėje parodytas junginių proteazinio inhibavimo aktyvumas prieš proteazes iš kelių serotipo, kitokio nei RVP serotipas-14, rinovirusų. Kolonėlės, pažymėtos k_st_eb./l, duomenys buvo išmatuoti iš kreivių progresijos, gautos iniciavimo fermentu eksperimentuose.

Priešrinovirusinis H1-HeLa ląstelių kultūros testas

Šiame ląstelių apsaugojimo teste junginio geba apsaugoti ląsteles nuo HRV infekcijos buvo matuojama, panaudojant ΧΤΤ dažo redukcijos metodą kuris yra aprašytas Weislow et ak, J. Natl. Cancer Inst. 1989, vol. 81, 577586.

H1-HeLa ląstelės buvo infekuotos HRV-14, imant 0,13 infekcijos gausą (m.o.i.) (virusinės dalelės/ląstelei), arba atliekant fiktyvią infekciją tik terpe. Infekuotos arba fiktyviai infekuotos ląstelės buvo vėl suspenduotos, imant 8 x 10⁵ ląstelių/ ml, ir inkubuotos su įvairiomis tiriamojo junginio koncentracijomis. Po dviejų dienų į testavimo plokšteles pridedama ΧΤΤ/PMS ir atsiradusio formazino kiekis nustatomas spektrofotometriškai, esant 450/650 nm bangos ilgiams. EC50 reikšmė buvo apskaičiuojama kaip junginio koncentracija, kuri padidino formazino atsiradimo kiekį junginio paveiktose virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose fiktyviai infekuotose ląstelėse. 50 % citotoksinė dozė (CC50) buvo apskaičiuota kaip junginio koncentracija, kuri sumažino formazino atsiradimo kiekį junginio paveiktose virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose fiktyviai

119 infekuotose ląstelėse. Terapinis indeksas (Tl) buvo apskaičiuotas padalinant CC50 reikšmę iš EC50 reikšmės.

Visi panaudoti žmogaus rinovirusų (HRV) kamienai buvo gauti iš Amerikos tipinių kultūrų kolekcijos (ATCC), išskyrus HRV serotipą-14 (pagaminto iš infekuoto cDNR klono, sukonstruoto Dr. Robert Rueckert, Institute for Molecular Virology, University of VVisconsin, Madison, VViskonsin). HRV pradiniai kiekiai buvo dauginami ir virusiniai testai buvo atliekami H1HeLa ląstelėse (ATCC). Ląstelės buvo auginamos minimalioje pagrindinėje terpėje su 10 % fetalinio veršiuko serumo, gaunamo iš Life Technologies (Gaithersburg, MD).

Junginiai buvo tiriami, lyginant su kontroliniais junginiais WIN 51711, Win 52084 ir WIN 54954 (gautais iš Sterling-VVinthrop Pharmaceuticals), pirodaviru (gautu iš Janssen Pharmaceuticals) ir plekonarilu (pagamintu pagal Diana et ai., J. Med. Chem. 1995, vol. 38, 1355 aprašytą metodą). Tiriamųjų junginių priešvirusiniai duomenys yra parodyti 1 ir 3 lentelėse, kuriose visi duomenys yra gauti su HRV serotipu-14, jeigu skliausteliuose nenurodyta kitaip. Pažymėjimas “NN” reiškia, kad šiam junginiui reikšmė nebuvo nustatyta.

120

1 lentelė. Aktyvumas prieš HRV serotipą-14
Junginys	Proteazės inhibavi-mas ksteb/[l] (M'1sek'1)	Ląstelių apsauga ECS0 (μΜ)
31 pavyzdys (palyginamasis junginys #2)	25000	0,610
35 pavyzdys(A-26)	239000	0,030
33 pavyzdys(A-24)	257000	0,100
36 pavyzdys(A-27)	18000	1,600
32 pavyzdys (palyginamasis junginys #3)	62500	0,380
34 pavyzdys(A-25)	500000	0,030
5 pavyzdys (A-4)	270000	0,100
8 pavyzdys (A-7)	980000	0,004
7 pavyzdys (A-6)	248000	0,420
9 pavyzdys (A-8)	900000	NN
6 pavyzdys (A-5)	1500000	0,005
12 pavyzdys (C-1)	68400	0,100
18 pavyzdys(C-2)	270000	0,002
10 pavyzdys (B-1)	240000	0,100
20 pavyzdys(B-4)	500000	<0,030
17 pavyzdys(B-2)	1090000	0,005
1 pavyzdys (palyginamasis junginys #1)	573	>320000
2 pavyzdys (A-1)	260000	0,250
3 pavyzdys (A-2)	46900	1,600
4 pavyzdys (A-3)	310000	0.050
11 pavyzdys(A-10)	108000	0,14
13 pavyzdys (A-11)	108000	0,03
14 pavyzdys (A-9)	66000	1,80
15 pavyzdys (A-12)	59300	0,40
16 pavyzdys (A-13)	95800	0,20
19 pavyzdys (B-3)	465000	0,18
21 pavyzdys(A-14)	54500	0,48
22 pavyzdys(A-15)	237100	0,22
23 pavyzdys (A-16)	172800	0,45
24 pavyzdys(A-17)	167000	0,06
25 pavyzdys(A-18)	292000	1,50
26 pavyzdys(A-19)	27750	25,10
27 pavyzdys(A-20)	1020	12,60
28 pavyzdys (A-21)	17800	2,50
29 pavyzdys(A-22)	2400	NN
30 pavyzdys(A-23)	26000	NN

121

2 lentelė. Aktyvumas prieš kitus HRV serotipus
Junginys	Rinoviruso serotipas	ksteb/l (R/Psek1)
Palyginamasis junginys #2	(16)	6500
u	(89)	3400
u	(2)	2000
Palyginamasis junginys #3	(2)	8000
u	(16)	16900
<A-24)	(2)	31000

lentelė. Priešrinovirusinis aktyvumas

Numeris	HRV	ECso (μΜ)	CCso (μΜ)	Tl
Palyginamasis junginys #1		>320000	>320
(A-1 j		0,250	>100	>400
u	(2)	0,410	NN	>243
u	(1A)	1000 ·	NN	>100
K	(89)	0,220	NN	>450
(A-2)		1600	>100	>63
(A-3)		0,050	>10	>200
(A-4)		0,100	>100	>1000
(A-5)		0,005	>10	>2000
M	(2)	0,010	NN	>1000
tl	(16)	0,020	NN	>500
U	(39)	0,020	NN	>500
U	(89)	0,020	NN	>500
U	(10)	0,050	NN	>200
K	(1A)	0,030	NN	>333
((	(3)	0,050	NN	>200
U	(9)	0,040	NN	>250
U	(12)	0,060	NN	>166
u	(13)	0,020	NN	>500
u	(17)	0,020	NN	>500
u	(25)	0,180	NN	>55
u	(30)	0,060	NN	>166
u	(38)	0,130	NN	>76
u	(87)	0,210	NN	>47
(A-6)		0,420	>100	>237
(A-7)		0,004	>10	>2500
K	(2)	0,020	NN	>500
((	(16)	0,040	NN	>250
((	(39)	0,020	NN	>500

122

3 lentelė. Priešrinovirusinis aktyvumas
Numeris	HRV	ECso (μΜ)	CCso (μΜ)	Tl
u	(89)	0,020	NN	>500
u	(10)	0,060	NN	>166
u	(1A)	0,030	NN	>333
u	(3)	0,020	NN	>500
u	(9)	0,040	NN	>250
u	(12)	0,070	NN	>143
((	(13)	0,030	NN	>333
u	(17)	0,020	NN	>500
u	(25)	0,200	NN	>50
u	(30)	0,090	NN	>111
u	(38)	0,170	NN	>58
u	(87)	0,590	NN	>16
(A-8)		NN	NN	NN
(B-1)		0,100	>100	>1000
u	(1A)	0,300	NN	>333
u	(10)	0,400	NN	>250
(A-10)		0,140	>100	>714
(C-1)		0,100	>10	>100
(A-11)		0,030	50	1667
(A-9)		1,800	>100	>55
(A-12)		0,400	>100	>250
(A-13)		0,200	>10	>50
(B-2)		0,005	>100	>20000
u	(2)	0,020	NN	>5000
{(	(16)	0,010	NN	>10000
K	(39)	0,050	NN	>2000
((	(89)	0,009	NN	>11111
((	(10)	0,020	NN	>5000
((	(1A)	0,020	NN	>5000
u	(3)	0,020	NN	>5000
((	(9)	0,006	NN	>16666
u	(12)	0,050	NN	>2000
u	(13)	0,010	NN	>10000
u	(17)	0,010	NN	>10000
u	(25)	0,030	NN	>3333
u	(30)	0,040	NN	>2500
u	(38)	0,070	NN	>1428
u	(87)	0,060	NN	>1666
(C-2)		0,002	>10	>5000
((	(2)	0,004	NN	>2500
u	(16)	0,010	NN	>1000

123

3 lentelė. Priešrinovirusinis aktyvumas
Numeris	HRV	EC50 (μΜ)	CC50 (μΜ)	Tl
u	(39)	0,010	NN	>1000
u	(89)	0,004	NN	>2500
u	(10)	0,020	NN	>500
u	(1A)	0,010	NN	>1000
lt	(3)	0,020	NN	>500
u	(9)	0,010	NN	>1000
((	(12)	0,040	NN	>250
u	(13)	0,007	NN	>1428
u	(17)	0,007	NN	>1428
u	(25)	0,070	NN	>142
(f	(30)	0,030	NN	>333
ii	(38)	0,050	NN	>200 .
u	(87)	0,020	NN	>500
(B-3)		0,180	>100	>543
(B-4)		<0,030	>100	>3333
(A-14)		0,480	->100	>208
(A-15)		0,220	>100	>454
K	(1A)	7,100	NN	>14
((	(10)	2,700	NN	>37
(A-16)		0,45	>100	>222
u	(1A)	4,80	NN	>21
u	(10)	4,50	NN	>22
(A-17)		0,06	>100	>1786
u	(1A)	1,80	NN	>56
u	(10)	3,30	NN	>30
(A-18)		1,50	>100	>67
(A-19)		25,10	>100	>4
(A-20)		12,60	>100	>8
(A-21)		2,50	>100	>40
(A-22)		NN	NN	NN
(A-23)		NN	NN	NN
Palyginamasis junginys #2		0,61	>320	>524
(l	(16)	2,30	>320	>139
ll	(89)	6,30	>320	>50
u	(10)	0,60	>320	>533
Palyginamasis junqinys #3		0,38	>320	>842
(A-24)		0,10	>100	>1000
(A-25)		0,03	>100	>3333

124 lentelė. Priešrinovirusinis aktyvumas

Numeris	HRV	EC50 (μΜ)	CC50 (μΜ)	Tl
(A-26)		0,03	>100	>3333
(A-27)		1,60	>100	>62
WIN 51711		0,78	>60	>77
WIN 52084		0,07	>10	>143
WIN 54954		2,13	>63	>30
Pirodaviras		0,03	>10 ‘	>300
Plekonarilas		0,01	>10	>1000

Testas prieš Koksaki virusą bandyme su ląstelių kultūromis

A-21 (CAV-21) ir B-3 (CVB-3) tipų Koksaki virusai buvo gauti iš Amerikos tipinių kultūrų kolekcijos (ATCC, Rockville, MD). Virusų pradiniai kiekiai buvo dauginami ir priešvirusiniai testai buvo atliekami H1-HeLa ląstelėse (ATCC). Ląstelės buvo auginamos minimalioje pagrindinėje terpėje su 10 % fetalinio veršiuko serumo (Life Technologies, Gaithersburg, MD).

Junginių geba apsaugoti ląsteles arba nuo CAV-21, arba nuo CVB-3 infekcijos buvo matuojama, panaudojant ΧΤΤ dažo redukcijos metodą. Šis metodas yra aprašytas Weislow et ai., J. Natl. Cancer Inst. 1989, vol. 81, 577586. H1-HeLa ląstelės buvo infekuotos CAV-21 arba CVB-3, imant atitinkamai 0,025 arba 0,075 infekcijos gausą (m.o.i), arba atliekant fiktyvią infekciją tik terpe. H1-HeLa ląstelėmis buvo padengtos plokštelės, imant 4 χ 10⁴ ląstelių/duobutei, ir inkubuotos su atitinkamomis tiriamojo junginio koncentracijomis. Po vienos (CVB-3) arba po dviejų dienų (CAV-21) į testavimo plokšteles pridedama ΧΤΤ/PMS ir atsiradusio formazino kiekis nustatomas spektrofotometriškai, esant 450/650 nm bangos ilgiams. EC50 reikšmė buvo apskaičiuojama kaip junginio koncentracija, kuri padidino atsiradusio formazino kiekį junginio paveiktose, virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose, fiktyviai infekuotose ląstelėse. 50 % citotoksinė dozė (CC50) buvo apskaičiuota kaip junginio koncentracija, kuri sumažino atsiradusio formazino kiekį junginio paveiktose virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino,

125 kuris atsirado junginio nepaveiktose fiktyviai infekuotose ląstelėse. Terapinis indeksas (Tl) buvo apskaičiuotas padalinant CC50 reikšmę iš EC50 reikšmės.

Junginiai buvo tiriami, lyginant su kontroliniais junginiais WIN 54954 (gautas iš Sterling-VVinthrop Pharmaceuticals), pirodaviru (gautu iš Janssen Pharmaceuticals) ir plekonarilu (pagamintu pagal Diana et ai., J. Med. Chem. 1995, vol. 38, 1355 aprašytą metodą). Tiriamųjų junginių priešvirusiniai duomenys prieš CAV-21 ir CVB-3 yra parodyti 4 lentelėje.

lentelė. Prieškoksakivirusinis aktyvumas

Junginys	Kamienas	EC50 (μΜ)	CC50 (μΜ)	Tl
(A-5)	CAV-21	0,23	>10	>43 .
u	CVB-3	1,00	NN	>10
(B-2)	CAV-21	0,16	>100	>625
K	CVB-3	0,18	NN	>555
WIN 54954	CAV-21	>100,00	>100	NN
u	CVB-3	>100,00	NN	NN
Pirodaviras	CAV-21	>100,00	>100	NN
u	CVB-3	>100,00	NN	NN
Plekonarilas	CAV-21	0,09	>10	>107
(C	CVB-3	>10,00	NN	NN

Priešechovirusinis ir priešenterovirusinis testas bandyme su ląstelių kultūromis

Echovirusas 11 tipo (EV 11) ir enterovirusas 70 tipo (EV 70) buvo gauti iš Amerikos tipinių kultūrų kolekcijos (ATCC, Rockville, MD). Virusų pradiniai kiekiai buvo dauginami ir priešvirusiniai testai buvo atliekami MRC-5 ląstelėse (ATCC). Ląstelės buvo auginamos minimalioje pagrindinėje terpėje su 10 % fetalinio veršiuko serumo (Life Technologies, Gaithersburg, MD).

Junginių geba apsaugoti ląsteles arba nuo EV 11, arba nuo EV 70 infekcijos buvo matuojama, panaudojant ΧΤΤ dažo redukcijos metodą (VVeislovv et ai., J. Natl. Cancer Inst. 1989, vol. 81, 577-586). MRC-5 ląstelės buvo infekuotos EV 11 arba EV 70, imant atitinkamai 0,003 arba 0,004 m.o.i., arba atliekant fiktyvią infekciją tik terpe. Infekuotos ir neinfekuotos ląstelės buvo sudedamos į plokštelių duobutes, imant 1 χ 10⁴ ląstelių/duobutei, ir

126 inkubuojamos su atitinkamomis tiriamojo junginio koncentracijomis. Po keturių dienų į testavimo plokšteles pridedama ΧΤΤ/PMS, ir atsiradusio formazino kiekis nustatomas spektrofotometriškai, esant 450/650 nm bangos ilgiams. EC50 reikšmė buvo apskaičiuojama kaip junginio koncentracija, kuri padidino atsiradusio formazino kiekį junginio paveiktose, virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose, fiktyviai infekuotose ląstelėse. 50 % citotoksinė dozė (CC50) buvo apskaičiuota kaip junginio koncentracija, kuri sumažino atsiradusio formazino kiekį junginio paveiktose virusu infekuotose ląstelėse 50 %, lyginant su kiekiu formazino, kuris atsirado junginio nepaveiktose fiktyviai infekuotose ląstelėse. Terapinis indeksas (Tl) buvo apskaičiuotas padalinant CC50 reikšmę iš EC50 reikšmės.

Junginiai buvo tiriami, lyginant su kontroliniais junginiais pircdaviru (gautu iš Janssen Pharmaceuticals) ir plekonarilu (pagamintu pagal Diana et ai., J. Med. Chem. 1995, vol. 38, 1355 aprašytą metodą). Tiriamųjų junginių priešvirusiniai duomenys prieš EV 11 ir EV 70 yra parodyti toliau duotoje 5 lentelėje.

5 lentelė. Priešechovirusinis ir priešenterovirusinis aktyvumas
Junginys	Kamienas	ECS0 (μΜ)	CC50 (μΜ)	Tl
(A-5)	EV-11	0,080	>10	>125
u	EV-70	0,040	NN	>250
(B-2)	EV-11	0,010	>100	>10000
u	EV-70	0,003	NN	>33333
Pirodaviras	EV-11	3,700	>10	>3
((	EV-70	0,060	NN	>167
Plekonarilas	EV-11	0,160	>10	>62
((	EV-70	NN	NN	NN

Nors išradimas buvo aprašytas remiantis tinkamiausiais įgyvendinimo variantais ir konkrečiais pavyzdžiais, specialistai turėtų suprasti, kad gali būti padaryti įvairūs pakeitimai ir modifikacijos, nenukrypstant nuo išradimo prasmės ir sferos. Taigi, išradimo nereikėtų suprasti kaip apriboto prieš tai duotu smulkiu aprašymu, bet jis yra nusakomas toliau pridedama apibrėžtimi ir jos punktų ekvivalentais.

Claims (78)

1. IŠRADIMO APIBRĖŽTIS

   1. Junginys, kurio formulė I:

   kurioje:

   Y yra -N(R_y)-, -C(R_y)(R_y)- arba -0-, kur kiekvienas iš R_y nepriklausomai vienas nuo kito yra H arba žemesnysis alkilas;

   Ri yra H, F, alkilo grupė, OH, SH arba O-alkilo grupė;

   R₂ ir R₃, nepriklausomai vienas nuo -kito, yra H;

   arba °V^A4x /'C ¹ A₂

   NH;

   (^4i)(^R4i) ' kur n yra sveikas skaičius nuo O iki 5, Ai yra CH arba N, A₂ ir kiekvienas A3, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš C(R₄i)(R4i), N(R₄₁), S, S(0), S(0)₂ ir O, o A4 yra NH arba NR41, kur kiekvienas R41 nepriklausomai yra H arba žemesnysis alkilas, su sąlyga, kad ne daugiau nei 2 heteroatomai atsiduria iš eilės žiede, sudarytame iš Ai, A₂, (Α^η, A4 ir C=0, ir su sąlyga, kad bent vienas iš R₂ ir R₃

   N H;

   arba yra '/ aL·/^ /'C' ¹ A₂ (R₄i)(R₄i)

   Rs ir R6, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, F, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė;

   R₇ ir Re, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -ORi₇, -SRi₇, NRi₇Ri8, -NRi₉NR₁₇R₁₈ arba -NR₁₇ORi8, kur Ri₇, R₁₈ ir R19, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė arba acilo grupė;

   Rg yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų pasirinktų iš O, N ir S; ir

   128

   Z ir Zi, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, F, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, -C(O)R2i, CO2R21, -CN, -C(O)NR₂iR22, -C(O)NR₂iOR₂2, -C(S)R₂i, -C(S)NR₂,R₂₂, -no₂, SOR₂i, -SO2R21, -SO₂NR₂iR22, -SO(NR₂i)(OR₂₂), -SONR21, -SO3R21, PO(OR₂i)₂, -PO(R₂i)(R₂₂), -PO(NR₂iR₂₂)(OR₂₃), -PO(NR₂₁R₂₂)(NR₂₃R₂₄), C(O)NR₂iNR₂2^r23 arba -C(S)NR₂iNR₂₂R23, kur R21, R_22i R₂₃ ir R24, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba kur bet kurie du iš R21, R22, R23 ir R₂₄, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z₁ abu kartu nėra H;

   arba Ζ_Ί ir R! kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

   arba Z ir Z1 kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

   arba jo provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas.
2. 2. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 1 punktą besiskiriantys tuo, kad R₂ ir R₃, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H;

   arba (C(R₄i)(R4l))_n c^z (^R4l)(^R4l)

   N H, (^r4i)(^r4i) , kur n yra sveikas skaičius nuo 0 iki 5, kiekvienas iš R₄₁ nepriklausomai yra H arba žemesnysis alkilas, o žvaigždute pažymėto anglies atomo stereochemija gali būti R arba S; su sąlyga, kad bent ^R41 vienas iš R₂ ir R₃ yra

   NH, arba y Ac /C (R₄₁)(R₄ (C(R₄l)(^R4l))n (^R41)(^R41)

   129
3. 3. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 1 punktą besiskiriantys tuo, kad Y yra -N(R_y)-, kur R_y yra H arba žemesnysis alkilas.
4. 4. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad Z ir Zi, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H, F, žemesniojo alkilo, -CO2R21 ir-C(O)NR₂iR22, kur R₂i ir R22, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂i ir R^, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z1 abu kartu nėra H;

   arba Z1 ir Ri, kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

   arba Z ir Z1, kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę.
5. 5. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad R1 yra H, F arba metilas.
6. 6. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad bent vienas iš R₂arba R3 yra arba
7. 7. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 6 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R5 ir Re yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.
8. 8. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.
9. 9. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo,

   130 kad vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas.
10. 10. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad Rz ir R₈, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė.

    I
11. 11. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R7 ir Ra yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.
12. 12. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R7 ir R₈ yra H, o kitas yra 2-propilas, 2-metil-2-propilas, 2-metil1-propilas, fenilmetilas arba naftilmetilas.
13. 13. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad R9 yra penkianaris heterociklas, turintis bent vieną azoto heteroatomą ir vieną deguonies heteroatomą.
14. 14. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad Rg yra pasirinktas iš turinčio pakaitų ir neturinčio pakaitų 1,2-oksazolilo,

    1,3-oksazolilo ir 1,2,4-oksadizolilo.
15. 15. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 3 punktą besiskiriantys tuo, kad R₉ yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas, arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenu.
16. 16. Junginys pagal 3 punktą kurio formulė I-A”:

    kurioje R₁₍ R₂, R6, R7, R9. R_y, Z ir Ζ_Ί yra tokie, kaip apibūdinta 3 punkte, arba jo provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas.

    131
17. 17. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 16 punktą besiskiriantys tuo,
18. 18. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 16 punktą besiskiriantys tuo, kad

    R_y yra H arba metilas;

    Ri yra H, F arba metilas;

    Z ir Zi yra nepriklausomai vienas nuo kito pasirinkti iš H, F, -CO2R21, -CN ir -C(O)NR₂iR₂2, kur R21 ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂i ir R₂₂, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z1 abu kartu nėra H;

    arba Z1 ir Rt kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

    arba Z ir Z] kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

    NHs yR₂ yra

    R6 yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas;

    R7 yra alkilas arba arilas; ir

    Rg yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų
19. 19. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 18 punktą besiskiriantys tuo, kad R₇ yra pasirinktas iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1 -propilo, fenilmetilo ir naftilmetilo..

    132
20. 20. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 16 punktą besiskiriantys tuo, kad kiekvienas iš R_y, Rf ir Z yra H, o:

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, Z, yra

    N.

    \\_s_

    CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3°

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH₃)_2l Zi yra

    -o.

    CO₂CH₂CH₃, o Rg yra

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, Rs yra ^H3^C , R₇ yra C(CH₃)₃, Zi yra

    -N \\J_

    CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R_s yra F , R₇ yra C(CH₃)₃, Z\ yra v N.

    \\_S_

    CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C , R₇ yra CH(CH₃)₂. Zi yra

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra , R₇ yra CH(CH₃)₂, Zi yra •N.

    CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C

    133

    R₂ yra

    H ,N

    M v-N.

    CO₂CH₂CH3, o Rg yra ^H3^C

    R₂ yra

    X) , Re yra \\_5_ , R₇ yra C(CH₃)3, Zi yra , R₇ yra CH(CH₃)₂, yra

    R₇ yra C(CH₃)3, Z\ yra

    -N \s_S_

    CO₂CH₂CH₃, o R_g yra ^H3^C
21. 21. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 16 punktą besiskiriantys tuo, kad R_y yra CH₃, ir Ri, ir Z yra H, o:

    'T’

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, Rs yra F , R₇ yra . .H , Zi yra

    -N

    CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, Rs yra CH₂Ph, R₇ yra CH₂CH(CH3)2, o Rg yra

    -N.

    H₃c'

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, Rs yra F

    -N

    Rg yra ^H3^C

    134

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, _Ο-Ν R6 yra » R₇ yra CH₂CH(CH₃)₂, o H₃C^/^^/ I IT' ivS R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R6 yra F » R₇ yra ORg

    yra ^H3^C
22. 22. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 16 punktą besiskiriantys tuo, kad jie yra pasirinkti iš grupės, susidedančios iš:

    135
23. 23. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 1 punktą besiskiriantys tuo, kad Y yra -CH2-.
24. 24. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad Z ir Zi, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H, F, žemesniojo alkilo, -CO2R21, ir -C(O)NR₂iR22, kur R21 ir R22, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R21 ir R22, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z1 abu kartu nėra H;

    arba Z1 ir kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

    arba Z ir kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę.
25. 25. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad R! yra H, F arba metilas.
26. 26. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo,

    O, kad bent vienas iš R₂ arba R₃ yra

    H arba nh₂
27. 27. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 26 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R5 ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.

    136
28. 28. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₅ ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.
29. 29. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš Rs ir R₆ yra H, o kitas yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas.
30. 30. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad R₇ ir Rs, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė.
31. 31. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₇ ir Rs yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.
32. 32. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina, druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₇ ir R₈ yra H, o kitas yra 2-propilas, 2-metil-2-propilas, 2-metil1-propilas, fenilmetilas arba naftilmetilas.
33. 33. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 23 punktą besiskiriantys tuo, kad R₉ yra penkianaris heterociklas, turintis bent vieną azoto heteroatomą ir vieną deguonies heteroatomą.
34. 34. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 33 punktą besiskiriantys tuo, kad Rg yra pasirinktas iš turinčio pakaitų ir neturinčio pakaitų 1,2-oksazolilo,

    1,3-oksazolilo ir 1,2,4-oksadizolilo.
35. 35. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 34 punktą besiskiriantys tuo, kad R₉ yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas, arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų.
36. 36. Junginys pagal 23 punktą kurio formulė l-B”:

    137 o r₇ o r₂ z .ΛΥΛΥζ, kurioje Ri, R₂, R6, Rz, R9. Z ir Z1 yra tokie, kaip apibūdinta 23 punkte, arba jo provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas.
37. 37. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 36 punktą besiskiriantys tuo,
38. 38. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 36 punktą besiskiriantys tuo, kad

    R1 yra H, F arba metilas;

    Z ir Z1 yra nepriklausomai vienas nuo kito pasirinkti iš H, F, -CO₂R₂₁, -CN ir -C(O)NR₂₁R₂₂, kur R₂i ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R21 ir R22, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z1 abu kartu nėra H;

    arba 7.\ ir Rt kartu su atomais, prie cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

    arba Z ir Z1 kartu su atomais, prie cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

    ·-·* •i#·- .

    Αΐ i kurių jie yra kurių jie yra prijungti, sudaro prijungti, sudaro

    H

    R₂ yra pasirinktas iš R6 yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas;

    R₇ yra alkilas arba arilas; ir

    Rg yra yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų.

    138
39. 39. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 38 punktą besiskiriantys tuo, kad R₇ yra pasirinktas iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1-propilo, fenilmetilo ir naftilmetilo.
40. 40. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 36 punktą besiskiriantys tuo, kad Ri yra H, o:

    , R₇ yra CH(CH₃)₂, Z yra

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH₂, R₆ yra

    -N \y?_

    H, Zi yra CO₂CH₂CH₃, o R₉ yra ^H3^C

    R₂ yra , H V-n , Re yra F , R₇ yra CH(CH₃)₂, Z yra H, Zi

    -N.

    yra CO₂CH₂CH₃, o Rg yra ^H3^C

    H

    V-n

    R₂ yra o , Rs yra f , R₇ yra CH(CH₃)₂, Z ir Zi kartu yra ^L—^/ , kur karbonilo grupė yra cis-padėtyje Ri vandenilio atžvilgiu ir Rg yra , R₇ yra CH(CH₃)₂, Z yra H, Z,
41. 41. Junginys pagal 1 punktą kurio formulė:

    139

    o.

    NH

    CO₂CH₂CH₃ arba jo provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas.
42. 42. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 1 punktą besiskiriantys tuo, kad Y yra -O-.
43. 43. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad Z ir Zi, nepriklausomai vienas nuo kito, yra pasirinkti iš H, F, žemesniojo alkilo, -CO₂R₂i, ir -C(O)NR₂iR22, kur R₂i ir R₂2, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R21 ir R22, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z1 abu kartu nėra H;

    arba Z1 ir R1 kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

    arba Z ir kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę.
44. 44. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad Ri yra H, F arba metilas.
45. 45. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad bent vienas iš R₂arba R₃ yra arba

    140
46. 46. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 45 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš Rs ir R6 yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.
47. 47. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš Rs ir R₆ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.
48. 48. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš Rs ir R6 yra H, o kitas yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas.
49. 49. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad R7 ir R₈, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė arba heteroarilo grupė.
50. 50. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₇ ir R₈ yra H, o kitas yra alkilas arba arilas.
51. 51. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad vienas iš R₇ ir R₈ yra H, o kitas yra 2-propilas, 2-metil-2-propilas, 2-metil1-propilas, fenilmetilas arba naftilmetilas.
52. 52. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad Rg yra penkianaris heterociklas, turintis bent vieną azoto heteroatomą ir vieną deguonies heteroatomą.
53. 53. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad Rg yra pasirinktas iš turinčio pakaitų ir neturinčio pakaitų 1,2-oksazolilo,

    1,3-oksazolilo ir 1,2,4-oksadizolilo.
54. 54. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 42 punktą besiskiriantys tuo, kad Rg yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas, arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų.
55. 55. Junginys pagal 42 punktą kurio formulė l-C”:

    141 kurioje R_b R₂, Rs, R7, Rg, Z ir Z1 yra tokie, kaip apibūdinta 42 punkte, arba jo provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas.
56. 56. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 55 punktą besiskiriantys tuo,
57. 57. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 55 punktą besiskiriantys tuo, kad

    R1 yra H, F arba metilas;

    Z ir Z1 yra nepriklausomai vienas nuo kito pasirinkti iš H, F, -CO₂R₂i, -CN ir -C(O)NR₂iR₂₂, kur R₂i ir R₂₂, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R₂i ir R₂₂, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, su sąlyga, kad Z ir Z1 abu kartu nėra H;

    arba Z1 ir Ri kartu su atomais, prie cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

    arba Z ir Z1 kartu su atomais, prie cikloalkilo arba heterocikloalkilo grupę;

    kurių jie yra prijungti, sudaro kurių jie yra prijungti, sudaro

    R₂ yra pasirinktas iš R6 yra neturintis pakaitų arba turintis pakaitų fenilmetilas;

    Rz yra alkilas arba arilas; ir

    Rg yra yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazolilas arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų.

    142
58. 58. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 57 punktą besiskiriantys tuo, kad R? yra pasirinktas iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1-propilo, fenilmetilo ir naftilmetilo.
59. 59. Junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas pagal 55 punktą besiskiriantys tuo, kad Ri yra H, Z yra H, o:

    R₂ yra CH₂CH₂C(O)NH2, Re yra F , R₇ yra CH(CH₃)₂, Z1 yra

    CO2CH2CH3, o R₉ yra ^H3^C ' ; arba

    R₂ yra y, R6 yra F , R₇ yra CH(CH₃)₂, Z, yra

    CO2CH2CH3, o Rg yra ^H3^C
60. 60. Junginys, pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

    o.

    co₂ch₂ch₃ co₂ch₂ch₃

    143 ir arba jo provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas.
61. 61. Junginys, farmaciškai priimtina druska, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 1-60 punktą besiskiriantis tuo, kad jis pasižymi aktyvumu prieš pikornavirusą atitinkančiu EC50 mažesnę arba lygią 100 μΜ H1-Hela ląstelių kultūros teste.
62. 62. Junginys, farmaciškai priimtina druska, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 1 -60 punktą besiskiriantis tuo, kad jis pasižymi aktyvumu prieš rinovirusą atitinkančiu EC50 mažesnę arba lygią 10 μΜ H1-HeLa ląstelių kultūros teste.
63. 63. Junginys, turintis formulę, pasirinktą iš grupės, susidedančios iš:

    kuriose:

    144

    Ri, R₂, Z ir Zi yra tokie kaip apibūdinta 1 punkte;

    n yra 1 arba 2;

    R_y yra H arba žemesnysis alkilas;

    R6 yra alkilas, cikloalkilas, heterocikloaikilas, arilas arba heteroarilas;

    R₇ yra alkilas, cikloalkilas, heterocikloaikilas, arilas, heteroarilas, -ORi₇, -SRi₇, -NRi₇Ri8, -NRigNRi₇Ri8 arba —NRi₇ORi₈, kur R17, Ris ir Rig, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilas, cikloalkilas, heterocikloaikilas, arilas, heteroarilas arba acilas; ir

    Rg yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų pasirinktų iš O, N ir S, arba jo provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas.
64. 64. Junginys, provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 62 punktą besiskiriantys tuo, kad

    R1 yra H, F arba alkilas;

    R_y yra H arba metilas;

    R6 yra alkilo grupė, kurioje gali būti vienas arba daugiau pakaitų, pasirinktų iš alkilo ir arilo;

    R₇ yra alkilas, cikloalkilas, heterocikloaikilas, arilas arba heteroarilas;

    Rg yra penkianaris heterociklas, turintis nuo vieno iki trijų heteroatomų, pasirinktų iš O, N ir S, kur bent vienas iš heteroatomų yra azotas, ir kuriame nėra pakaitų arba yra vienas arba daugiau pakaitų pasirinktų iš žemesniųjų alkilo grupių ir halogenų;

    arba jo provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas.
65. 65. Junginys, provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 63 punktą besiskiriantys tuo, kad:

    R6 yra arilmetilas arba ariltiometilas;

    R₇ yra alkilo grupė;

    Rg yra yra neturintys pakaitų 3-izoksazolilas arba 5-izoksazoiilas arba turintys vieną arba du pakaitus, pasirinktus iš metilo ir halogenų ir

    145

    Z yra H, o Zi yra -CO2R21, -CN arba -C(O)NR2iR22. kur R21 ir R22, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H, alkilo grupė, cikloalkilo grupė, heterocikloalkilo grupė, arilo grupė, heteroarilo grupė, acilo grupė arba tioacilo grupė, arba R21 ir R22, kartu su atomu(ais), prie kurių jie yra prijungti, sudaro heterocikloalkilo grupę, arba Z ir Zi kartu sudaro ciklinį esterį arba amidą.
66. 66. Junginys, provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 65 punktą besiskiriantys tuo, kad:

    R1 yra H arba F;

    R₆ yra arilmetilas arba ariltiometilas; ir

    R7 yra pasirinktas iš 2-propilo, 2-metil-2-propilo, 2-metil-1-propilo ir arilmetilo.
67. 67. Junginys, provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas pagal 66 punktą besiskiriantys tuo, kad R₆ yra fenilmetilas, kur fenilo liekanoje gali būti nuo vieno iki trijų pakaitų, pasirinktų iš halogeno, žemesniojo alkilo ir žemesniosios alkoksigrupės.
68. 68. Junginys pagal 63 punktą pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

    146 ir arba jo provaistas, farmaciškai priimtina druska, farmaciškai aktyvus metabolitas arba solvatas.

    147
69. 69. Farmacinė kompozicija, besiskirianti tuo, kad į ją įeina:

    (a) terapiškai efektyvus kiekis bent vieno priešpikornavirusinio agento, kuris yra 1-60 punktuose apibūdintas junginys, provaistas, farmaciškai aktyvus metabolitas, farmaciškai priimtina druska arba solvatas; ir (b) farmaciškai priimtinas nešiklis, skiediklis, tirpiklis arba pagalbinė ) i medžiaga.
70. 70. Bent vieno junginio, provaisto, farmaciškai aktyvaus metabolito, farmaciškai priimtinos druskos arba solvato, apibūdintų 1-60 punktuose, terapiškai efektyvaus kiekio panaudojimas vaisto, skirto pikornavirusinės proteazės · aktyvumo tarpininkaujamų žinduolių ligos būklių gydymui, gamyboje.
71. 71. Bent vieno junginio, provaisto, farmaciškai aktyvaus metabolito, farmaciškai priimtinos druskos arba solvato, apibūdintų 1-60 punktuose, terapiškai efektyvaus kiekio panaudojimas vaisto, skirto pikornavirusinės 3C proteazės aktyvumo inhibavimui, gamyboje.
72. 72. Panaudojimas pagal 71 punktą besiskiriantis tuo, kad pikornavirusinė 3C proteazė yra rinovirusinė proteazė.
73. 73. Junginys, kurio formulė:

    kurioje p yra sveikas skaičius nuo 0 iki 5;

    A11 yra CH arba N, A₁₂ ir kiekvienas iš At3 yra nepriklausomai pasirinkti iš C(R₆i)(R6i), N(R₆i), S, S(O), S(O)₂ ir O, o A₁₄ yra NH arba NR₆i, kur kiekvienas R6i yra nepriklausomai H, alkilas, acilas arba arilas, su sąlyga, kad ne daugiau nei du heteroatomai būtų iš eilės žiede, sudarytame iš An, Ai₂, (Ai3)p, Ai4 ir C=O;

    kiekvienas iš R141 yra nepriklausomai H arba žemesnysis alkilas;

    148

    R₅₂, R53 ir Rs4 yra nepriklausomai pasirinkti iš H, hidroksilo, alkilo, acilo ir arilo; arba bet kurie du iš R52, R53 ir R54 kartu sudaro =0 arba =C(R57)(Rs8), kur R57 ir R_5a yra nepriklausomai pasirinkti iš H, alkilo, CO2(Ci-C₆)alkilo, C(O)N(Ci-C₆)alkilo ir CO₂(arilo); ir

    R55 ir R56, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H arba tinkama azotą blokuojanti grupė;

    t , arba farmaciškai priimtina šio junginio druska.
74. 74. Junginys, kurio formulė:

    kurioje p yra sveikas skaičius nuo O iki 5;

    R51 yra H, alkilas, acilas arba arilas;

    R52, R53 ir R54 yra nepriklausomai pasirinkti iš H, hidroksilo, alkilo, acilo ir arilo; arba bet kurie du iš R52, R53 ir R54 kartu sudaro =0 arba =C(R57)(Rs8), kur R57 ir Rss yra nepriklausomai pasirinkti iš H, alkilo, CO2(Ci-C6)alkilo, C(O)N(Ci-Ce)alkilo ir CO₂(arilo); ir

    R55 ir R56, nepriklausomai vienas nuo kito, yra H arba tinkama azotą blokuojanti grupė;

    arba šio junginio farmaciškai priimtina druska.
75. 75. Junginys arba farmaciškai priimtina druska pagal 74 punktą b e - s i s k i r i a n.t i tuo, kad p yra 1 arba 2.
76. 76. Junginys arba farmaciškai priimtina druska pagal 75 punktą b e -siskirianti tuo, kad kiekvienas iš R52, R53 ir R54 yra nepriklausomai pasirinktas iš H, alkoksigrupės, hidroksilo ir karbonilo.
77. 77. Junginys pagal 74 punktą pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

    149 kur Pn yra tinkama azotą blokuojanti grupė, o q yra 1 arba 2;

    arba šio junginio farmaciškai priimtina druska.
78. 78. Junginys pagal 74 punktą pasirinktas iš grupės, susidedančios iš:

    150 kur BOC yra t-butiloksikarbonilas;

    arba šio junginio farmaciškai priimtina druska.