KR970043043A - 생물활성을 갖는 섬유신경세포 성장인자 변형체 및 이의 제조방법 - Google Patents

생물활성을 갖는 섬유신경세포 성장인자 변형체 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 안정하고 높은 생물활성을 갖는 섬유신경세포 성장인자의 변형체 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 천연형 섬유신경세포 성장인자의 아미노 말단으로부터 17번째 위치의 시스테인 잔기를 세린잔기로 치환시킨 유전자를 함유하는 벡터를 제조하고 이로 형질전환된 균주를 배양하여 생산된 섬유신경세포 성장인자 변형체를 정제함으로써 안정되고 생물학적 활성이 높은 섬유신경세포 성장인자 변형체를 제조할 수 있으며, 이렇게 제조된 섬유신경세포 성장인자 변형체는 말초신경장애의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

생물활성을 갖는 섬유신경세포 성장인자 변형체 및 이의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제 1도는 인간 섬유신경세포 성장인자의 아미노 말단으로부터 17번째 아미노산인 시스테인을 세린으로 돌연변이시키는 과정 및 인간 섬유신경세포 성장인자를 유비퀴틴과 융합시켜 효모에서 발현시키기 위한 벡터의 제작 과정을 도시한 것이고,
제 2도는 효모에서 발현된 인간 섬유신경세포 성장인자 변형체(Cys17→Ser17)를 포함한 효모 세포 분쇄액을 변성 폴리아크릴 아마이드 젤(SDS-PAGE)상에서 전기영동한 결과를 나타낸 것이며,
제 3도는 재조합 효모로부터 정제된 인간 섬유신경 성장인자(rhCNTF) 및 본 발명의 Ser17 변형체의 산화성 차이를 비환원성 SDS-PAGE로 확인한 결과이며,

Claims (9)

  1. 천연형 섬유신경세포 성장인자의 아미노 말단으로부터 17번째 위치의 시스테인 잔기가 세린 잔기로 치환된 섬유신경세포 성장인자 변형체.
  2. 제 1항의 섬유신경세포 성장인자 변형체를 코드하는 유전자.
  3. 제 2항의 섬유신경세포 성장인자 변형체를 코드하는 유전자를 포함하는 발현 벡터.
  4. 제 3항에 있어서, 플라스미드 pYLBC A/G UB CNTF Cys17→Ser.
  5. 제 3항의 발현 벡터로 형질전환된 효모.
  6. 제 5항에 있어서, 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) pYLBC A/G UB CNTF Cys17→Ser (KCTC 8697P).
  7. 제 5항 또는 6항의 미생물을 섬유신경세포 성장인자 변형체의 발현에 적절한 배지에서 배양하고, 생산된 섬유신경세포 성장인자 변형체를 분리 및 정제하는 단계를 포함하는 섬유신경세포 성장인자의 제조방법.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 배양물에 포함된 세포를 파쇄하여 섬유신경세포 성장인자 변형체 봉입체를 수득하고, 상기 봉입체의 용액을 QAE-세파로즈 칼럼, 사이징 칼럼 및 페닐 세파로즈 칼럼을 이용하여 차례로 크로마토그래피하여 섬유신경세포 성장인자 변형체를 분리 정제하는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 1항의 섬유신경세포 성장인자 변형체 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 말초신경장애 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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