KR960016336B1 - 응고 매개변수를 결정하는데 사용되는 분석부재 - Google Patents

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Abstract

없음

Description

응고 매개변수를 결정하는데 사용되는 분석부재
제 1 도는 본 발명에 따른 분석부재의 일실시예를 개략적으로 도시한 단면도이다.
* 도면의 주요부분에 대한 부호의 설명
1 : 담체 오일2,8 : 접착제
3 : (덮개용)망사4 : (적혈구 분리 및 혈장 운반용)양모
5 : 산화제 담체6 : 시약 담체
7 : 덮개 호일10 ; 분석부재
본 발명은 응고 매개변수(coagulation parameters)를 결정하는데 사용되는 분석부재에 관한 것이며, 보다 상세히 설명하면 형액응고 시스템에서 단백질 분해효소(프로타아제 : protease)를 직접적으로 검출할 수 있거나 또는 이러한 단백질 분해효소의 검출반응을 개시하는 기질(substrate)과, 혈액응고 시스템의 적어도 하나의 인자(factor) 또는 보조인자(co-factor)와, 그리고 완충물질(buffer substance)에 의해서 응고 매개 변수를 결정하는데 사용되는 분석부재에 관한 것이다.
이와 같은 분석부재는 독일 특허출원 제3,516,579호에 개시되어 있다. 상기 독일 특허출원에 개시된 바에 따르면, 분석부재가 바람직하게 종 또는 양모(fleece)와 같은 담체 재료(carrier material)를 사용하고 있다. 한편, 상기 독일 특허출원에서 또 다른 바람직한 실시예로 제시된 분석부재에서는 담체 재료로 사용되는 수용성 막형성 중합체(film-forming polymer)의 안에 기질 또는 보조인자가 존재하고 있으며, 시약을 함유한 중합체 막이 기저부(base)의 호일(foil)상으로 도포되어 있다.
앞에서 언급된 독일 특허출원에 개시된 바와 같이 구성된 분석부재를 사용하여, 예를 들어서 "퀴크(Quick, Armand J.)"가 1935년 발표한 "퀴크 프로트롬빈 시간시험{Q's prothrombine time test ; 약 1 : 9 정도의 비율로 수산화나트륨 용액을 혁액에 섞어서 원심식으로 분리하여 얻은 혈장에 같은 양의 트롬보플라스틴(thromboplastin)과 칼슘 용액을 가하고 이러한 혼합 용액이 37℃에서 응고를 나타낼 때까지의 시간을 측정하면, 건강한 사람은 12초이고, 프로트롬빈 저하증이 있는 사람은 시간이 지연됨}"에 따른 단일 상(one phase)에서는 응고 시간을 결정하려고 하는 경우에, 이러한 분석부재는 보조인자{통상적으로, '촉진제(activator)'라고 함}로서의 트롬보플라스틴과, 칼슘이온과, 그리고 트롬빈(혈액응고 시스템의 단백질 분해 효소)에 대한 기질을 포함하게 된다. 예를 들어서 이러한 분석부재에 한방울의 혈장을 도포시킴으로써 분석부재가 혈장과 접촉하게 되면, 트롬보플라스틴과 칼슘이온의 존재하여 "응고 작용(coagulation cascade)"이 개시된다. 이러한 응고 작용 동안에 발생되는 트롬빈이 기질을 분해시킨다. 기질은, 이와 같이 트롬빈에 의한 분해작용이 이루어진 후에 직접적으로 단백질 분해효소를 검출할 수 있거나 또는 단백질 분해효소의 검출반응을 개시하는 물질로 선택된다. 일반적으로, 검출반응을 위하여 색을 형성하는 기질이 사용된다. 이러한 경우에, 기질은 그 자체가 색을 형성하는 것이나 또는 연속적인 반응에 의하여 분열된 생성물이 간접적으로 색을 형성하는 것으로 구성될 수 있다. 이와는 다르게, 이러한 검출반응을 위해서 예를 들면 형광색을 나타내는 재료를 기질로 사용할 수도 있다. 그러나, 다음에 보다 상세히 설명되는 바와 같이 본 발명에 따른 분석부재에 있어서는, 이와 같은 검출반응이 비물질적(immaterial)으로 이루어지도록 구성되어 있다.
앞서 언급된 독일 특허출원에 개시된 방법은, 혈액응고 시스템의 응고 매개변수를 결정하는 방법에 있어서 최초로 분석부재{통상적으로, '건식 시험 담체(dry test carrier)' 또는 시험 담체'라고 함}를 사용했다는 점에서 매우 의미가 있다. 그러나, 이러한 방법으로 얻어지는 측정결과의 정확도에 대해서는 개선되어야 할 문제점들이 남아 있다.
본 발명의 관점에서 볼 때, 통상적으로 분석부재의 담체 재료로서 사용되고 있는 종이 또는 양모는 응고 작용의 진행에 어떠한 영향을 미치기 때문에, 대부분의 경우에 측정결과가 의학적 관점에서 볼 때 바람직한 정확도에 도달하지 못한다는 것을 알게 되었다. 따라서, 담체 재료로 사용되는 막형성 중합체를 적절하게 선택함에 있어서, 수용성 중합체 막의 내부에 적절한 시약을 혼합시킨다면, 앞에서 언급된 관점에서 볼 때 응고 작용의 진행에 대한 그릇된 영향을 확실하게 방지할 수가 있다.
그럼에도 불구하고, 측정 결과의 정확성을 위해서 또 다른 문제점이 제기될 수 있다. 본 발명의 또 다른 관점에서 볼 때, 이러한 문제점을 시험 담체의 담체 재료로 사용되는 막형성 중합체에 의해서 형성되는 중합체 막을 구성하는 중합체 층이 중합체 막에 혼합되어 있는 시약을 비교적 천천히 유리시킨다는 사실로부터 기인하는 것을 귀착될 수가 있다. 응고 시험의 경우에 있어서는, 어떠한 샘플의 응고 특성이 시간의 측정에 의해 결정되기 때문에, 시약은 될 수 있는 대로 빨리 유리되어야 한다. 즉, 이러한 응고 시간의 개시점이 시약이 지연된 유리로 인하여 부정확해지는 것이다.
따라서, 본 발명의 목적은 앞에서 언급된 독일 특허출원에 개시된 분석부재를 개선시켜서 취급이 용이할 뿐만 아니라 측정결과의 정확도가 향상된 응고 시험용 분석부재를 제공하는 것이다.
본 발명에 따르면, 혈액응고 시스템에서 단백질 분해효소를 검출할 수 있거나 또는 단백질 분해효소의 검출반응을 개시하는 기질과, 혈액응고 시스템의 적어도 하나의 인자 또는 보조인자와, 그리고 완충물질에 의해서 응고 매개변수를 결정하는데 사용되는 분석부재에 있어서, 적어도 하나의 인자 또는 보조인자가 응고 작용의 진행에 그릇된 영향을 주지 않는 수용성 및 비이온성 중합체와 함께 편평하게 개방된 합성 구조체상으로 함침되어 있고, 이러한 합성 구조체가 응고 작용의 진행을 방해하지 않는 재료로 이루어져 있으며, 비이온성 중합체가 합성 구조체의 모든 측면을 둘러싸고 있는 것을 특징으로 하는 분석부재가 제공된다.
본 발명에 따르면, 편평하게 개방된 합성 구조체는 편평하게 연장된 어떠한 구조체로도 구성될 수가 있는데, 즉 이러한 합성 구조체의 편평한 정도는 비교적 작은 두께(바람직하게 0.5mm 이하, 특히 바람직하게 0.25mm 이하)로 제공되는것이 바람직하다. 이와 같은 합성 구조체의 편평한 정도는 분석부재 내부의 시험 영역에 의해서 결정된다. 여기서, "개방된(open)"이란 용어는 이러한 합성 구조체가 예를 들어 혈장 샘플등과 같은 수용액이 빠르게 침투할 수 있는 구조로 이루어져 있는 것임을 의미하는 것이며, 다시 말해서 합성 구조체가 가능한 한 이러한 샘플과 접촉할 수 있는 가장 넓은 표면을 갖는다는 것을 의미한다. 예를 들면, 합성수지 재료로 이루어진 체(sieve) 모양의 구조체가 사용될 수 있는데, 즉 서로 인접하게 배열된 다수의 구멍을 갖는 합성수지의 호일(foil)이 사용될 수 있다. 그러나, 이러한 합성 구조체로서는 섬유사(filaments)로 이루어진 직물(fabric)이나 직물원료(tfxtile), 또는 망사(mesh)가 바람직하며, 특히 단일 섬유상(monofilaments)의 섬유사로 이루어진 단일, 직물원료, 또는 망사가 보다 바람직하다.
이와 같이 합성 구조체를 구성하는 재료로서는, 근본적으로 응고 작용의 진행을 방해하지 않는 재료로서 구조적으로 앞에서 설명된 바와 같이 편평하게 개방된 구조체로 제조될 수 있는 것이면 된다. 더욱이, 이러한 재료는 수용성 및 비이온성 중합체가 그러한 합성 구조체 상에서 시약과 접착될 수 있도록 선택되어야 한다. 특히 바람직한 합성 구조체의 재료는 폴리아미드, 폴리에스테르, 및 이들 섬유사로 혼합된 직물이다. 이러한 합성 구조체가 1cm당 2개 이상의 섬유사를 갖는 것이 바람직하다.
합성 구조체를 제조하기 위해 선택된 재료가 외인성(exogenic) 응고 작용의 진행에 영향을 주는지에 대한 여부는 다음과 같은 시험에 의해서 확인되는데, 즉 이러한 재료 40mg을 구연산염 혈장(citrate plasma) 300㎕와 함께 37℃에서 60초 동안 배양시킨다. 그리고 나서, 혈장을 원심식으로 분리시켜서 혈장의 응고 특성이 통계적으로 심하게 변화되었는지를 알아보면 된다.
본 발명에 따른 분석부재에서 사용되는 비이온성 중합체는 상온에서 사용할 경우에 수용성 매질내에서 충분히 빨리 용해되는 성질을 가져야만 한다. 본 발명에 따르면, 다소 두께가 두꺼워도 상온 이상의 온도의 물속에서 충분히 빨리 용해되는 재료를 사용할 수도 있는데, 이는 이러한 재료가 본 발명에 따른 합성 구조체 상에서 얇은 층으로 존재하기 때문이다.
더욱이, 비이온성 중합체는 편평하게 개방된 합성 구조체 상에서 접착성 있는 얇은 층을 형성하는 특성을 가져야만 한다. 통상적인 피복, 예를 들면 방수복을 제조하는 경우와 같이 중합체 층이 직물 구조체의 거의 한쪽 측면으로만 존재하여 그러한 구조체의 개방부를 가로지르는 방식으로 중합체 재료가 직물 구조체의 층으로 도포되는 피복의 경우와는 대조적으로, 본 발명에 따른 분석부재에서는 편평하게 개방된 합성 구조체가 수용성 및 비이온성 중합체에 의해서 함침되는데(impregnated), 즉 이러한 중합체가 합성 구조체의 모든 측면상으로 덮여지게 구성되어 있다.
본 발명에 따른 분석부재에 사용할 수 있는 담체 재료, 즉 수용성 및 비이온성 중합체로서는 비이온성 셀룰로오스 유도체(cellulose derivative), 폴리비닐피롤리돈(ployvinylpyrrolidones), 및 폴리크산탄(polyxanthanes)등이 있다.
본 발명에 따르면, 폴리비닐 알코올로 부분적으로 또는 완전하게 비누화된(saponified) 폴리비닐 아세테이트는 물론이고, 폴리에틸렌 산화물과 폴리아크릴아미드가 중합체 재료로서 유용한 것으로서 판명되었다. 이들 재료중에서도, 부분적으로 비누화된 폴리비닐 아세테이트가 가장 바람직하다. 특히 바람직한 중합체 재료는 70 내지 93몰% 정도로 비누화된 폴리비닐 아세테이트이다. 놀랍게도, 이들 모든 중합체는 트롬보플라스틴을 안정화시키는 부가적인 장점을 가졌다. 이와 같은 방법으로 선택된 중합체는, "퀴크프로트롬빈 시간 시험"의 결과 아주 양화한 보존특성(storage behaviour)을 보여 주었다.
그 밖에도, 중합체 재료로서 임의의 적절한 비이온성 중합체의 혼합물이 사용될 수도 있다.
본 발명에 따른 분석부재에 사용되는 합성 구조체를 제조하기 위해서는, 첫째로 인자 또는 보조인자 중에서 어느 하나와 그리고 앞에서 언급된 바와 같은 수용성 및 비이온성 중합체로 이루어진 혼합 용액을 준비한다. 예를 들어 가소제와 같은 다른 성분을 이러한 용액에 임의로 첨가시킬 수도 있다. 다음으로, 합성 구조체를 이러한 용액에 침지(dipping)시키거나 또는 상황에 따라서는 이러한 용액을 합성 구조체에 분사(spraying)시킴으로써, 합성 구조체가 바람직하게 이러한 용액에 의해서 함침(impregnation)된다. 함침된 용액의 적절한 점도를 일반적으로 규정할 수도 없으며, 이러한 점도는 각각의 비이온성 중합체 또는 중합체 혼합물에 대해서 직물의 제조 기술적인 조건을 고려하여 정해진다. 50 내지 250mPa초 정도의 점도가 바람직한 것으로 판명되었다.
본 발명의 다른 바람직한 실시형태에 따르면, 반응지시제(indicator)로서 작용하는 기질을 앞에서 설명한 적어도 하나의 인자 또는 보조인자 그리고 수용성 및 비이온성 중합체와 함께 합성 구조체 상으로 함침시킬 수도 있다. 그러나, 어떤 조건하에서는 적어도 하나의 인자 또는 보조인자를 기질과 함께 사용함으로써 문제가 발생할 수도 있다. 이와 같은 경우에는, 인자 또는 보조이자가 도포되는 담체 재료와는 다른 별도의 담체 재료에 기질을 도포시키는 것이 바람직한 것으로 판명되었다. 이를 위하여, 여러가지 공지된 담체 재료가 사용될 수 있다. 그러나, 이와 같은 경우에 별도의 담체 재료로서 특히 바람직하게 사용되는 것은, 기질 이외의 수용성 및 비이온성 중합체를 함유하는 용액으로 함침되어진 함성 구조체로서, 앞에서 설명한 바와 같이 편평하게 개방된 구조의 합성 구조체이다. 따라서, 적어도 하나의 인자 또는 보조인자를 함유하고 있는 담체 재료의 층 및 반응지시제로서 작용하는 기질을 함유하고 있는 담체 재료의 층으로 이루어진 두 개의 담체 재료의 층에 의해서 아주 균일한 용해 특성이 제공된다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시형태에 따르면, 하나의 편평하게 개방된 합성 구조체 이와 같은 다수의 합성 구조체를 사용하는 경우에는 적어도 하나의 합성 구조체가 칼슘 이온으로 함침되는데, 이는 일반적으로 응고 시험에서 요구되는 혈장의 칼슘 재첨가(recalcifying)를 위해서 필수적인 요건이다.
본 발명에 따른 분석부재에서, 완충물질은 적어도 하나의 인자 또는 보조인자와 함께 함침될 수도 있고 또는 별도의 다른 담체 재료상에 제공될 수도 있다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 구체적 실시형태를 보다 상세히 설명하면 다음과 같다.
첨부된 도면 제 1 도를 참조하면, 본 발명에 따른 분석부재(10)의 최하부에 제공되는 담체 재료로서 담체 호일(1)이 도시되어 있다. 제 1 도에 도시된 실시예에서, 담체 호일(1)은 예를 들어 시험편(test strip)과 같이 기다란 형태로 제공되어 있다. 그러나, 본 발명에 따른 분석부재가 예를 들어 사각형으로 이루어진 사진용 투명양화(photographic diapolitives)와 같이 임의의 다른 형태로 구성될 수도 있음은 물론이다.
적혈구의 분리 및 혈장 운반용 담체로서 사용되는 양모(4)가 용융 접착제(2)에 의해 담체 호일(1)상으로 고정되어 있다. 이러한 담체로서 사용되는 양모(4)는, 독일 특허출원 제3,523,969호와 제3,610,429호에서 개시된 바와 같이 응고에 중립적인(coagulation-neutral) 유리섬유 재료로 이루어진 양모를 사용하는 것이 특히 바람직하다. 이러한 양모(4)가 덮개용 망사(3)에 의해 부분적으로 덮여져 있고, 양모(4)와 마찬가지로 덮개용 망사(3)도 접착제(2)에 의해서 고정되어 있는데, 이러한 덮개용 망사(3)로서는 나일론 망사가 적절하다.
본 발명에 따른 분석부재(10)에서는, 앞에서 설명한 양모(4) 외에도 편평한 형상의 또 다른 세개의 담체가 스트립 형태의 접착제(8)에 의해서 담체 호일(1)상으로 고정되어 있는데, 즉 이들 담체는 양모(4)와 부분적으로 겹쳐지게 배열된다. 이들 세개의 담체는 각각 한쪽 가장자리들만이 서로에 대해서 그리고 담체 호일(1)에 대해서 고정되기 때문에, 이와 같이 고정된 한쪽 가장자리를 제외한 나머지 표면상으로는 서로 일정한 거리를 두고 있으며, 따라서 외부의 압력에 의하여 이들 담체가 서로 눌러지지 않도록 구성되어 있다. 이와 같은 시험 담체의 보다 상세한 구조에 대해서는, 유럽 특허출원 제0,045,476호를 참조하면 된다.
이들 세개의 담체는, 가장 낮은 층에 제공되는 산화매트릭스 또는 산화제 담체(5)와, 앞서 설명한 바와 같이 본 발명에 따른 특징을 제공하도록 함침되어진 합성 구조체의 형태로 중간 층에 배열되어 있는 시약 담체(6)와, 그리고 가장 높은 층에 제공되는 덮개 호일(7)로 구성되어 있다.
시약 담체(6)로서는 바람직하게 혼합 용액에 의해서 함침된 직물이 사용되는데, 이와 같은 혼합 용액은 막형성 중합체와, 완충물질과, 외부의 (exogenic) 또는 내부의(endogenic) 응고 작용을 개시하기 위한 트롬보플라스틴 등의 반응개시용 시약과, 예를 들어 인자 IIa, 인자 Xa 등과 같이 혈액 응고의 과정에서 발생하는 단백질 분해효소(프로테아제)에 대한 기질과, 그리고 필요에 따라서 칼슘 이온이나 임의의 결합제 또는 막형성 중합체에 대한 가소제 등이 부가적으로 첨가된 혼합물이 물 속에 용해되어 있는 용액이다. 완충물질로서는 "굳 버퍼 시리이즈(the Good buffer series)"로부터 선택된 화합물 및 트리스(Tris)가 유용한 것으로 입증되었다. 기질로서는 아미노산 배열을 기초로 하는 모든 단백질 분해효소가 사용될 수 있으며, 특수한 용도의 결합제로서 예를 들어 토스-글리-프로-아르그-4-니트로아닐리드 아세테이트(Tos-Gly-Pro-Arg-4-nitroanilide acetate), 토스-글리-프로-아르그-피-페닐렌디아민 아세테이트(Tos-Gly-Pro-Arg-p-phenylenediamine acetate), 또는 N-메틸안쓰라닐산(N-methylanthranilic acid) 등이 사용된다. N-(4-플루오로페닐)-N-메틸아미노메탄 포스폰산(N-(4-fluorophenyl)-N-methylaminomethane phosphonic acid)등과 같은 다른 결합제가 사용될 수도 있음은 물론이다.
반응지시제로 작용하는 기질이 단백질 분해효소에 의해서 분해된 후에 그와 관련된 산화 결합(oxidative coupling)을 통해서 어떤 색상을 나타내도록 구성되어 있는 경우에는, 예를 들어서 포타슘 헥사시아노페레이트-Ⅲ(potassium haxacyanoferrat-Ⅲ)와 같은 산화제를 산화제 담체(5)에 제공해야 한다. 또한, 산화제 담체(5)에 칼슘이온이 제공될 수도 있다. 산화제 담체(5)로서는, 앞에서 설명된 바와 같이 함침되어진 얇은 직물을 사용하는 것이 바람직하다. 산화 결합을 통한 강한 반응을 필요로 하지 않는 반응지시제가 사용되는 경우에는, 산화제 담체(5)가 생략될 수 있다.
기질을 인자 또는 보조인자와는 별도로 다른 합성 구조체에 저장하도록 구성되어 있는 본 발명의 바람직한 다른 실시 형태에 있어서는, 그러한 기질을 인자 또는 보조인자와는 별도로 산화제 담체(5) 상에서 함침시키도록 산화제 담체(5)를 편평하게 개방된 합성 구조체로 구성할 수가 있다.
본 발명이 적용될 수 있는 여러 가지 응고 시험의 화학적 조성에 대한 세부적인 사항은 언급된 독일 특허출원 제3,516,579호에 개시되어 있다.
이제 본 발명에 따른 몇몇 실시예들을 보다 구체적으로 소개하면서, 앞에서 언급된 독일 특허출원 제3,516,579호에 따라 호일 상에 제공된 시약막에 의하여 수행된 실험 결과를 본 발명에 따라 직물로 이루어진 시약 담체에 의해서 수행된 실험결과와 비교하기로 한다.
[퀴크프로트롬빈 시간시험에 따른 단일 상에서의 응고 시간을 결정하는데 사용되는 본 발명에 따른 분석 부재의 제조]
{호일 상으로의 시약 막(시약 매트릭스)의 제조}
폴리카보네이트로 제조된 200㎛의 두께의 호일 상으로, 다음의 표 1에 나타낸 바와 같은 조성을 갖는 중합체로 이루어진 대략 100㎛ 두께의 젖은 막(wet film)을 올려 놓고 45℃의 온도에서 건조시킨다. 이러한 건조과정을 마친 후에, 15mm 정도의 폭을 갖는 피복된 호일 스트립으로 자른다.
{함침된 직물로 이루어진 시약 담체(6)의 제조 : 본 발명에 따른 특징}
폴리아미드 직물{스위스 쮜리히 뷰우텔투크패브릭의 제품명 75 에이치씨(Type 75 HC of the firm
Figure kpo00001
Beuteltuchfabrik, Switzerland)}을 다음의 표 1에 나타낸 바와 같은 조성을 갖는 중합체를 포함하는 소정량의 함침 용액에 의해서 함침시킨 후에함침된 직물을 45℃의 온도에서 건조시킨다. 이러한 건조 과정이 완료된 후에, 15mm 정도의 폭을 갖는 함침된 직물 스트립으로 자른다.
{산화제 담체(5) 또는 산화 매트릭스의 제조}
나일론 망사{(스위스 쮜리히 뷰우텔트크패브릭의 제품명 엔와이 20 에이치씨 슈퍼(Type NY 20 HC Super of the film
Figure kpo00002
Beuteltuchfabrik, switzerland)}를 수용액으로 함침시킨 후 45℃의 온도에서 건조시키는데, 이러한 수용액은 50밀리몰/리터(mMole/liter)의 포타슘 헥사시아노페레이트-Ⅲ(potassium hexacyanoferrat-Ⅲ),50밀리몰/리터의 염화칼슘, 0.2그램/리터의 폴리아크릴아미드{독일 룀의 제품명 로하기트 700(Rohagit 700 og the film
Figure kpo00003
}로 이루어진 것이다. 이러한 건조 과정이 완료된 후에, 함침된 망사로부터 15mm 정도의 폭을 갖는 스트립으로 잘라낸다.
{피복물 및 함침물의 제조}
1리터의 증류수에 100밀리몰의 헵스(Hepes), 1밀리몰의 토스-글리-프로-아르그-피-페닐렌디아민, 15밀리몰의 N-(4-플루오로페닐)-N-메틸아미노 케탄포스폰산, 그리고 2.5g의 트롬보플라스틴을 다음의 표 1에 나타낸 중합체와 함께 용해시킨다. 이러한 용액을 수산화나트륨 용액에 의해 pH 7.5까지 조절한다.
다음의 표 1은 앞에서 설명된 과정에서 사용된 중합체, 피복물, 및 함침 용액에 대한 것이다.
[표 1]
Figure kpo00004
{분석부재의 제조}
폴리스티렌으로 제조된 폭 100mm의 담체 호일(제 1 도에서 (1)에 해당함)상으로 독일 특허출원 제3,523,969호에 따른 유리 섬유사 양모(제 1 도에서 (4)에 해당함)를 올려 놓고 나일론 망사(제 1도에서 (3)에 해당함)를 부분적으로 덮은 후에 접착제(제 1 도에서 (2)에 해당함)에 의해서 양모(4)의 일단부를 담체 호일(1)상으로 고정시키는데, 여기서 양모(4)의 단위 표면적당 무게는 30 내지 40g/m2 정도이고 폭은 15mm 정도이다. 양모의 타단부인 자유단의 윗쪽으로 산화제 담체(제 1 도에서 (5)에 해당함) 및 시약 담체(제 1 도에서 (6)에 해당함)를 올려 놓고 투명한 폴리카아보네이트로 제조된 두께 200㎛ 정도이고 폭 15mm 정도의 덮개 호일(제 1 도에서 (7)에 해당함)을 덮은 후에 접착제(제 1 도에서 (8)에 해당함)에 의해서 견고하게 고정시킨다. 이와 같은 방식으로 제조된 밴드를 폭 6mm의 스트립으로 잘라낸다.
이와 같이 호일 상으로 시약 막을 갖는 분석부재의 구성은 근본적으로도 제 1 도와 관련하여 앞에서 설명된 바와 같다. 단지, 제 1 도에 도시된 구성과의 차이점은 제 1 도에서는 각각 별도의 층으로 도시된 시약 담체(6)와 덮개 호일(7)에 본 실시예에서는 단일의 층으로 제공된 점만이 다르다. 이는, 본 실시예에서 덮개 호일(7)이 막으로 덮여진 투명한 호일로 이루어져 있기 때문이다. 제 1 도를 참조하면, 호일은 상부를 향하도록 배열되어 있음을 알 수가 있다.
[퀴크에 따른 단일 상에서의 응고 시간을 결정하는 시험에 대해서, 호일 상에 막 피복물을 갖춘 종래 기술에 의해 이룩된 시험 결과와 본 발명에 따라 이룩된 시험 결과의 정확도의 비교]
이와 같은 목적을 위해서 다음의 과정이 수행된다.
앞에서 설명한 시험 담체로 제공된 스트립 형태의 분석부재(10)상으로 100% 의 퀴크 값을 갖는 혈장과 생리식염수로 희석된 12.5%의 혈장을 피펫으로 각각 32㎕만큼씩 넣는다. 이들 혈장 샘플이 제공된 시약 담체를 독일 뵈링거 만하임 게엠베하(Boehringer Mannheim Gmbh)에서 제조한 레프로트론 레미션 분광계(Reflotron remission photometer)로 측정한다. 완화(remission)의 감소가 10% 정도로 발생할 때까지 경과된 시간, 즉 소정량의 트롬빈(인자 IIa)이 형성될 때까지 외부의 응고 작용이 진행되는 시간을 측정한다. 연속적인 시험의 측정이 수행되는 경우에는, 각각의 시험 및 퀴크%에 대해서 25번 씩의 개의 정량분석이 수행된다.
이와 같은 과정에서 얻어진 수행 측정 결과를 다음의 표 2에 나타내었다.
표 2에서 네 개의 줄은 각각 표 1에서의 네개의 서로 다른 중합체 또는 중합체 혼합물에 관련된 것이다. 앞쪽의 첫번째 및 두번째 열은 본 발명과의 비교를 위해서 호일 상에 막을 제공한 종래 기술에 따른 측정 결과를 나타낸 것이다. 나머지 두 개의 열, 즉 세번째 및 네 번째 열은 본 발명에 따른 실시예에 의해서 얻어진 측정 결과를 나타낸 것이다.
본 발명과의 비교를 위한 종래 기술에 따른 시험과 본 발명에 따른 시험에 대해서, 각각 100% 혈장 및 12.5% 혈장에 대한 측정 시험의 결과가 표 2에 나타나 있다. 또한, 본 발명을 평가하기 위해서 특히 중요한 항목인 변환계수(vriation coefficients)가 %로 나타나 있다.
또한, 표 2에 나타낸 측정결과는 본 발명에 따른 구체적 실시예가 통계적으로 중요한 보다 양호한 변환계수를 나타냄을 보여준다. 퀴크 %가 적은 영역, 즉 중요한 치료 범위에 있어서,특히 명확하게 개선된 정확도가 나타나 있다.
[표 2]
Figure kpo00005

Claims (10)

  1. 혈액응고 시스템에서 단백질 분해효소를 검출할 수 있거나 또는 단백질 분해효소의 검출반응을 개시하는 기질과, 상기 혈액응고 시스템의 적어도 하나의 인자 또는 보조인자와, 그리고 완충물질에 의해서 응고 매개변수를 결정하는데 사용되는 분석부재에 있어서, 상기 적어도 하나의 인자 또는 보조인자가 응고 작용의 진행에 그릇된 영향을 주지 않는 수용성, 비이온성의 중합체와 함께 편평하게 개방된 구조체 상에 함침되어 있고, 상기 구조체가 응고 작용의 진행을 방해하지 않는 재료로 이루어져 있으며, 상기 중합체가 상기 구조체의 모든 측면을 둘러싸고 있는 것을 특징으로 하는 분석부재
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 기질이 상기 적어도 하나의 인자 또는 보조인자 및 상기 중합체와 함께 상기 구조체 상에 함침되어 있는 것을 특징으로 하는 분석부재.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 기질이 수용성, 비이온성의 중합체와 함께 상기 적어도 하나의 인자 또는 보조인자를 함유한 상기 구조체와는 별도로 편평하게 개방된 제 2 구조체 상에 함침되어 있는 것을 특징으로 하는 분석부재.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 구조체에 칼슘이온이 추가로 함침되어 있는 것을 특징으로 하는 분석부재.
  5. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서 상기 구조체가 직물, 직물원료, 또는 망사로 이루어져 있는 것을 특징으로 하는 분석부재.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 구조체를 이루고 있는 상기 직물, 직물원료, 또는 망사가 단일 섬유상의 섬유사로 이루어져 있는 것을 특징으로 하는 분석부재.
  7. 제 5 항에 있어서, 상기 구조체가 최대로 0.25mm의 두께를 가지며 cm당 적어도 20개의 섬유사를 갖추고 있는 것을 특징으로 하는 분석부재.
  8. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중합체가 50℃ 이하의 온도에서 물에 녹는 수용성 막형성체로 이루어져 있는 것을 특징으로 하는 분석부재.
  9. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보조인자가 트롬보플라스틴이며, 상기 중합체가 상기 구조체 상에서 상기 트롬보플라스틴을 안전화시키는 것을 특징으로 하는 분석부재.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 중합체가 폴리에틸렌옥사이드, 폴리아크릴아미드, 또는 폴리비닐알코올로 이루어져 있는 것을 특징으로 하는 분석부재.
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