KR950004008B1 - 주그뢰아 라미제라의 최적 배양 및 생물 고분자의 생산을 위한 배지 조성물 및 이를 사용한 생물 고분자의 생산 방법 - Google Patents

주그뢰아 라미제라의 최적 배양 및 생물 고분자의 생산을 위한 배지 조성물 및 이를 사용한 생물 고분자의 생산 방법 Download PDF

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Abstract

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Description

주그뢰아 라미제라의 최적 배양 및 생물 고분자의 생산을 위한 배지 조성물 및 이를 사용한 생물 고분자의 생산 방법
본 발명은 주그뢰아 라미제라(Zoogloea ramigera)의 최적 배양 및 생물 고분자의 생산을 위한 배지 조성물 및 이를 이용한 생물 고분자의 생산방법에 관한 것이다.
일반적으로 폐수 처리, 상수도 정수, 발효 공임 등에서의 균체 분리, 생물 분리 정제 등에 널리 사용되고 있는 응집제는 무기 응집제와 유기 응집제로 구별할 수 있으며, 처리수의 특성에 따라 단독 또는 함께 사용되고 있다. 그러나, 환경 보호 측면에서 볼 때, 기존 무기 및 유기 응집제의 사용 증가는 처리수 중에 잔류하는 합성 응집제의 불확실성과 과량의 침전물 처리 등의 이차적인 공해 문제를 야기시킨다. 따라서, 장기적으로 이러한 환경 문제를 해소하기 위하여 응집력이 높고 자연 분해가 가능한 새로운 생물 응집제의 개발이 요청되고 있다.
활성 슬럿지 중에 자연적으로 서식하는 주요 응집성 미생물인 주그뢰아 라미제라 115(Zoogloearamigera l15, ATCC 25935)는 여러 종류의 탄소원과 질소원에서 다당류를 생성한다. 생성된 다당류는 세포의 응집과 중금속 흡착 능력 등 슬럿지의 물성에 영향을 미쳐, 슬럿지의 분리 및 궁극적인 폐수 중의 생물학적 산소 요구량(BOD) 저감에 주요한 기능을 담당하고 있다.
또한, 주그뢰아 라미제라에 의해 세포 밖에 형성되는 점액성의 고분자인 세포의 다당류(extracellular polysaccharide)는 구조 및 물리적 성질에서의 다양성을 갖는 수용성 검(gum)으로서 그 용도가 크게 증가할 것으로 기대된다. 예컨대, J. of Water Pollution Control Federation, 38, 1986(1966)에서는 상기 세포의 다당류의 대표적인 용도로서 식품, 의약 및 기타 공업 분야에서의 유화제, 안정제, 접착제, 응집제,윤활제, 농축제 등을 들고 있다.
주그뢰아 라미제라 115에 의하여 생성된 고분자 물질은 아직 정확한 구조가 밝혀져 있지 않지만, 대개 글루코오스, 갈락토오스, 피루베이트 단위로 구성되어 있는 것으로 알려져 있으며, 검의 점도는 25℃, 0.75%수용액에서 2,000 센티포와즈(cP.)에 이르는 높은 점도를 나타낸다. 분자량은 2.5-9×106으로 잔탄검의 3×106보다 높은 값을 갖으며, 아울러 pH, 열, 기계적 전단 응력에 대하여 매우 안정한 것으로 신스키(Sinskey)등에 의해서 밝혀졌다(Biotechnology in Food Procesing, 1986 참조).
이미 알려진 주그뢰아 라미제라 균체의 배양을 위한 대표적인 기질의 조성은 다음과 같다. 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륩 1g/L, 염화암모늄 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/K, 이스트 추출물 0.0lg/L(Applied Environmental microbiology, 44, 1231(1982) 참조) .
그러나, 종래의 균체 배양 배지를 사용하여 생물 고분자를 생산하는 경우, 발효 초기의 pH와 최종 pH사이의 변화가 클 뿐만 아니라, 생물 고분자의 생산 효율에 있어서도 만족스럽지 못하였다.
본 발명의 주 목적은 주그뢰아 라미제라 미생물의 최적 배양 및 생물 고분자의 생산을 위한 배지 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 배지 조성물을 주그뢰아 라미제라에 의한 생물 고분자의 생산에 사용함으로써 개선된 생산 효율을 갖는 생물 고분자의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 기타 목적 및 잇점은 이하의 본 발명에 관한 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다.
본 발명자들은 폐수 처리시 생물 고분자로서 사용되는 등 그 수요가 크게 증대되고 있는 다당류를 주그뢰아 라미제라의 순수 배양을 통해 대량 생산하는 방법에 관하여 예의 연구를 거듭한 결과, 주그뢰아 라미제라의 배양에 사용된 기존의 기질 조성 중 질소원으로서 염화암모늄 대신에 질산나트륨을 사용할 경우, 발효중의 pH 변화도 거의 없고, 또한 생물 고분자의 생산 효율도 대폭 개선된다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명은 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L, 이스트 추출물 0.0lg/L로 이루어진 주그뢰아 라미제라의 배양에 적합한 배지 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 의한 배지 조성물을 사용하여 주그뢰아 라미제라를 배양시키면 질소원으로 요소, 염화암모늄, 황산암모늄, 인산수소이암모늄을 사용하였을 때보다 2배 이상의 생물 고분자가 생산되며, 또한 발효중의pH의 변화에 있어서도 질소원으로서 염화암모늄을 사용한 경우에는 초기 pH(pH 7.0)에 비해 최종 pH가4.84로서 낮은 산성을 띠며, 질소원으로서 요소, 황산암모늄, 인산수소이암모늄을 사용한 경우에도 초기pH와 최종 pH 사이의 변화가 크게 나타나지만, 본 발명에 따라 질산나트륨을 사용하였을 때에는 초기 pH(7.0)와 최종 pH(7.30) 사이의 변화가 거의 없다.
본 발명에 의한 배지 조성물에는 추가로 황산제일철을 0.1-0.4g/L 더 함유시킬 수 있다. 하기 실시예 2 의 표 2에서 보는 바와 같이, 본 발명의 배지 조성물에 황산제일철을 전혀 첨가하지 않을 때에는 생물 고분자가 11.4g/L의 농도로 얻어지나, 본 발명의 배지 조성물에 황산제일철을 각각 0.lg/L, 0.2g/L 및 0.4g/L 첨가할 경우 생물 고분자는 각각 11.8g/L, 12.4g/L 및 15.4g/L의 농도로 얻어진다. 특히, 황산제일철을 0.4g/L의 농도로 본 발명의 배지 조성물에 첨가했을 때에는 황산제일철을 첨가하지 않았을 때보다 생물 고분자가 35% 더 생산된다. 그러나, 황산제일철의 농도를 더욱 증가시켰을 때에는 세포의 성장도 잘 이루어지지 않고 생물 고분자의 생산도 황산제일철을 첨가하지 않았을 때보다 더 떨어진다.
본 발명에 의한 배지 조성물은 생물 고분자를 회분식 발효 방법으로 생산하는데 사용된다. 본 발명의 배지 조성물을 회분식 발효 방법에 사용하는 경우 탄소원으로서 포도당 이외에 유당, 당밀, 치즈훼이 등이 사용될 수 있으며, 배양 조건은 탄소원/질소원 비(C/N비) 30-120, pH 4-8 및 온도 24℃-32℃가 적합하다.
본 발명에 의한 배지 조성물은 또한 유가 배양식 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산에도 사용될 수 있다. 유가 배양식 발효 방법은 회분식 발효 방법으로 일정 시간 동안 발효시킨 후, 외부로부터 공급되는 질소원을 제한시킴으로써 기질이 세포의 성장보다는 생물 고분자를 생산하도록 유도하는 것이 특징이다. 이유가식 발효 방법에 의하면 세포 성장이 원활해지고 기질의 저해 현상이 줄어들기 때문에 회분식 발효 방법보다 생산성이 3배 이상 증가된다. 이는 세포의 성장이 빨리 일어나도록 질소원을 많이 공급해 준 다음, 외부로부터 공급해 주는 공급액에는 질소원을 제한시킴으로써 기질이 세포의 성장보다는 생물 고분자를 생산하는 방향으로 이용된 결과로 생각된다.
본 발명에 의한 배지 조성물은 또한 2단계 연속 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산 방법에도 사용될수 있다.
2단계 연속 발효 방법은 세포 성장용 발효조에는 질소원을 계속 공급해 줌으로써 세포 성장을 극대화시키고, 생물 고분자 생산 발효조에는 세포 성장용 발효조에 공급해 주는 배지 조성 중 질소원만을 제거한 공급액과 세포 성장용 발효조에서의 발효된 액을 일정량 속도를 조절하면서 공급해 줌으로써 생물 고분자의 생산을 극대화시키는 방법이다. 이 2단계 연속 배양 방법에 의하면, 생물 고분자 생산 발효조의 희석 속도가 증가함에 따라 생물 고분자의 생산성이 증가되며, 희석 속도 0.048L/hr 내지 0.402L/hr에서 생산성이 최대가 된다. 이는 회분식 발효법에 의한 생산성에 비해 생산성이 4.72배 증가됨을 의미한다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 더욱 구체적으로 설명한다. 하기 실시예에서는 대표적 플록(floc) 생성균인 주그뢰아 라미제라 115(ATCC 25935)를 미국 ATCC로부터 구입하여 사용하였다. 균주 은행으로부터 분양받은 주그뢰아 라미제라 115의 보관을 위하여는 아르기닌 배지(아르기닌 염산염 0.5g/L, 알라닌 1.0g/L,황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L, 인산수소이칼륨 2.0g/L, 인산이수소칼륨 0.5g/L, 포도당 5-25g/L, 비타민 Bl21.5 ×10-6g/L) 를 사용하였다.(Applied microbio1ogy, 1971참조).
(실시예 1)
주그뢰아 라미제라 115의 최적 배양 배지 결정-질소원의 영향
종래의 균체 배양을 위한 기질의 조성 중 질소원으로 사용된 염화암모늄보다 효과가 우수한 질소원을 찾기 위하여 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0 2g/L, 이스트 추출물 0.0lg/L의 조건은 동일하게 하고, 여기에 각각 0.5% 질산나트륨,0.17% 요소,0.31% 염화암모늄,0.38% 황산암모늄,0.38% 인산수소이암모늄 등의 동량의 질소량을 첨가하였을 때의 비교 실험을500mL 플라스크에서 배양 실험을 하였다. 하기 표 1에서 보는 바와 같이, 질소원으로 질산나트륨을 사용하였을때, 균체량에 있어서는 발효 시간 90시간에 0.99g/L로서 가장 높은 균체량을 나타낸 염화암모늄을 사용했을 때보다 10% 낮게 나타났다. 발효 시간 258시간 동안 생성된 생물 고분자에 있어서는 질산나트륨을 사용했을 때 5.2g/L로서 질소원으로 요소, 염화암모늄, 황산암모눔, 인산수소이암모늄을 사용했을 때보다 2배 이상의 생물 고분자가 생산되었다. 또한, 발효중의 pH의 변화를 측정한 결과, 질소원으로 질산나트륨을 사용했을 때는 초기 pH와 최종 pH의 변화가 거의 없는 반면, 염화암모늄의 경우는 초기 pH에 비해최종 pH가 4.84로서 낮은 산성을 띠며, 질소원으로 요소, 황산암모늄, 인산수소이암모늄을, 사용했을 때에도 초기 pH와 최종 pH간의 변화가 크게 나타났다. 따라서, 본 발명에서는 질소원으로는 이미 알려진 염화암모늄보다 생물 고분자 생산이 우수하고 발효 중의 pH 변화가 작은 질산나트륨을 선택하였다.
[표 1] 여러 가지 질소원에서의 pH, 균체량 및 생물 고분자의 생산량의 변화
(실시예 2)
생물 고분자의 생산성에 미치는 황산제일철의 영향
주그뢰아 라미제라의 성장에 미치는 미량 원소의 영향을 고찰하는 실험에서 황산제일철의 첨가로 인하여 생물 고분자의 생성이 향상됨을 알 수 있었다. 균체 배양을 위한 기질의 조성인 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-l.0g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L, 이스트 추출물 0.0lg/L에 황산제일철을 각각 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0g/L 첨가했을 경우를 비교·실험하기 워하여 5L 발효기에서 실험하였다. 그 결과 0.4g/L의 황산제일철을 첨가했을 때 가장 좋은 결과를 얻었다. C/N 60의경우, 발효 시간 120에 생물 고분자의 양이 15.4g/L로서 황산제일철을 첨가하지 않았을 때보다 생물 고분자를 35% 더 생산하였다. 그러나, 황산제일철의 농도를 더욱 증가시켰을 때에는 세포의 성장도 잘 이루어지지 않고 생물 고분자의 생산도 철 이온을 첨가하지 않았을 때보다 더 띨어지는 것으로 나타났다.
[표 2] 황산제일철 첨가량에 따른 회분식 발효 실험 결과
(실시예 3)
회분식 발효 방법에 의한 생물 고분자 생산 방법
본 실시예는 본 발명의 배지 조성물을 회분식 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산 방법에 적용한 예이다.
500mL 삼각 플라스크에 100mL의 배지를 넣고 아르기닌 배지에 보관 중인 주그뢰아 라미제라 115(ATCC 25935) 균주 중 단일 균체를 분리하여 접종용 배지로 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L, 이스트 추출물 0.0lg/L、황산제일철 0.1-0.4g/L를 넣은 250mL 플라스크에 접종하여 26℃ 배양기에서 72시간 배양한 후 발효조에 접종하였다.
접종량은 5%(v/v)로 접종하였으며 발효조건은 다음과 같았다. 운전 용량 : 3L ; 온도 : 24℃-32℃ : pH : 4-8 : 통기 속도 : 1vvm : 교반 속도 : 300-800rpm.
5L 발효조의 배지 조성은 다음과 같았다. 배지의 조성 중 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L, 이스트 추출물 0.0lg/L의 조성은 동일하게 하고 탄소원으로 포도당, 유당, 당밀, 치즈훼이를 각각 사용하였다. 탄소원으로 사용한 당밀은 포도당 8%, 과당 11%, 자당 36%의 조성으로 되어 있으며, 치즈훼이는 35%(w/v)의 유당을 함유하고 있다.
탄소원이 포도당인 경우, C/N비가 90일 때가 C/N 30, C/N 60의 경우보다 질소원이 훨씬 제한되어 균체량의 양은 낮았지만, 고분자의 생산은 C/N 30, C/N 60의 경우보다 높게 나타났다. 탄소원이 유당인 경우는 C/N 30일 때, 탄소원이 당밀인 경우는 C/N 60일 때, 탄소원이 치즈훼이인 경우는 C/N 60일 때 생물 고분자 생산이 가장 좋았다. 실험 결과는 표 3에 나타내었다.
[표 3] 여러가지 탄소원에 대한 회분식 발효 실험 결과
(실시예 4)
유가 배양식 발효 방법에 의한 생물 고분자 생산 방법
본 실시예는 본 발명의 배지 조성물을 유가 배양식 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산 방법에 적용한 예이다. 500mL 삼각 플라스크에 100mL의 배지를 넣고 아르기닌 배지에 보관 중인 주그뢰아 라미제라 115(ATCC 25935) 균주 중 단일 균체를 분리하여 접종용 배지로 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L, 이스트 추출물 0.0lg/L, 황산제일철 0.1-0.4g/L를 넣은 250mL 플라스크에 접종하여 26℃ 배양기에서 72시간 배양한 후 발효조에 접종하였다.
접종량은 5%(v/v)로 접종하였으며, 발효 조건은 다음과 같았다. 초기 운전 용량 : 2L ; 온도 : 24℃-32℃ ; pH : 4-8 , 통기 속도 1vvm : 교반 속도 : 300-800rppm.
5L 발효조에 당밀 11.35g/L, 질산나트륨 1.0lg/L, 인산수소이칼륨 1g/L, 인산이수소칼륨 0.5g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.lg/L, 이스트 추출물 0.0lg/L의 배지에서 40시간 동안 발효를 시켰다. 40시간 이후부터는 외부로부터 당밀 22.7g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L, 이스트 추출물 0.0lg/L의 조성을 갖는 배지를 발효조에 공급해 주어 발효액이 4L로 될때까지 발효시켰다. 실험 결과, 세포 성장을 돕고 기질의 저해 현상을 줄인 유가식 발효 방법으로 인하여 회분식 발효보다 생산성이 3.54배 증가됨을 알 수 있었다. 이와 같은 결과는 세포의 성장이 빨리 일어나도록 질소원을 많이 공급해 준 다음, 외부로부터 공급해 주는 공급액에는 질소원을 제한시킴으로써 기질이 세포의 성장보다는 고분자를 생산하는 방향으로 이용된 결과로 생각된다.
(실시예 5)
2단계 연속 발효 방법에 의한 생물 고분자 생산 방법
본 실시예는 본 발명의 배지 조성물을 2단계 연속식 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산에 적용한 예이다.
당밀을 기질로 한 2단계 연속 배양 방법은 다음과 같았다. 2.5L 세포 성장용 발효조에는 운전 용량 1.5L, 5L 생물 고분자 생산용 발효조에는 운전 용량 2.5L가 되게 배지 용액을 넣고, 통기 속도 1vvm, 온도 26℃, 교반 속도 300rpm의 반응 조건에서 53시간 발효시켰다. 이때의 배지 용액의 조성은 세포 성장용 발효조, 생물 고분자 생산용 발효조와 동일하게 당밀 11.35g/L, 질산나트륨 1.0lg/L, 인산수소이칼륨 1g/L, 인산이수소칼륨 0.5g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.lg/L이다. 53시간 이후 외부로부터 세포 성장용 반효조에는 당밀 45.5g/L, 질산나트륨 1.91g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L의 조성을 갖는 배지를 공급해주고, 생물 고분자 생산용 발효조에는 세포 성장용 발효조에 공급해주는 배지 조성 중 질소원만을 제거한 공급액과 세포 성장용 발효조에서의 발효된 액을 일정량 속도를 조절하면서 같이 공급해 주었다. 생물 고분자 생산 발효조의 희석 속도를 0.024h-1에서부터 0.168h-1까지 변화시키면서 실험하였다. 시험 결과, 희석 속도가 증가함에 따라 생물 고분자의 생산성이 증가하여, 생산성은 희석 속도 0.048h-l에서 0.402g/L/h로 최대이었다. 이는 회분식 발효에서의 생산성과 비교하였을 때 생산성이 4.72배 증가항을 나타내었다.
(실시예 6)
응집 실험
본 실시예는 생산된 생물 고분자를 추출하여 카올린(kaolin) 혼탁 용액에 첨가하여 응집을 통한 높은 정화 능력을 입증하기 위한 예이다.
카올린과 Ca2+이온의 효과를 보기 위해 시료로 카올린을 5000ppm의 농도로 하고, 염화칼슘은 용액의10%를 사용하였으며, 여기에 추출한 생물 고분자를 각각 2.43mg, 4.86mg, 14.58mg, 24.3mg씩을 첨가하여 응집 실험을 실시하였고, 아울러 염화칼슘을 첨가하지 않는 것과 비교·관찰하였다. 응집 효과는 분광광도계로 550nm에서 상등액의 광학 밀도를 측정하였다. 실험 결과, 생물 고분자를 14.58mg 및 24.3mg 첨가한 경우에 카올린이 완전 침전되었으나, 반면에 같은 양의 고분자를 첨가하였다 하더라도, Ca2+이 없는경우는, 매우 낮은 응집 효과를 보았다. 실험 결과는 표 4에 나타내었다.
[표 4] 응집 실험

Claims (10)

  1. 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L 및 이스트 추출물 0.0lg/L로 이루어진 것이 특징인 주그뢰아 라미제라 115(Zoogloearamigera l15, ATCC 25935)의 배양용 배지.
  2. 제1항에 있어서, 상기 배지가 황산제일철 0.1-0.4g/L를 더 함유하는 것이 특징인 배지.
  3. 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L, 이스트 추출물 0.0lg/L 및 황산제일철 0.1-0.4g/L로 구성된 배지 중에서 배양시킨 주그뢰아 라미제라 115를 포도당, 유당, 당밀 및 치즈훼이 중에서 선택되고, C/N비가 30-120이 되도록 공급되는 탄소원, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L 및 이스트 추출물 0.0lg/L로 구성되는 발효 배지 중에서 pH 4-8 및 온도 24-32℃에서 발효시키는 것이 특징인 주그뢰아 라미제라 115의 회분식 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산 방법.
  4. 제3항에 있어서, 탄소원이 포도당이고, C/N비가90인 것이 특징인 방법.
  5. 제3항에 있어서, 탄소원이 유당이고, C/N비가30인 것이 특징인 방법.
  6. 제3항에 있어서, 탄소원이 당밀이고, C/N비가60인 것이 특징인 방법.
  7. 제3항에 있어서, 탄소원이 치즈훼이이고, C/N비가60인 것이 특징인 방법.
  8. 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.2g/L, 이스트 추출물 0.0lg/L 및 황산제일철 0.1-0.4g/L로 이루어진 배지 중에서 주그뢰아 라미제라 115를 일정 시간 배양한 후, 당밀 11.35g/L, 질산나트륨 l.0g/L, 인산수소이칼륨 1g/L, 인산이수소칼륨 0.5g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.1g/L 및 이스트 추출물 0.0lg/L로 구성된 제1발효 배지 중에서 회분식 발효 방법으로 1차 발효시키고, 이어서 질소원이 배제된 배지를 외부로부터 공급해주면서 2차 발효시키는 것이 특징인 주그뢰아 라미제라 115의 유가 배양식 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산 방법.
  9. 세포 성장용 발효조, 생물 고분자 생산용 발효조와 동일하게 당밀 11.35g/L, 질산나트륨 1.0lg/L, 인산수소이칼륨 1g/L, 인산이수소칼륨 0.5g/L, 황산마그네슘 칠수화물 0.lg/L로 이루어진 배지를 사용하여 일정시간 주그뢰아 라미제라 115를 배양시킨 후, 외부로부터 세포 성장용 발효조에는 당밀 45.5g/L, 질산나트륨1.91g/L, 인산수소이칼륨2g/L, 인산이수소칼륨1g/L, 황산마그네슘 칠수화물0.2g/L의 조성을 갖는 배지를 공급해 주고, 생물 고분자 생산용 발효조에는 세포 성장용 발효조에 공급해 주는 배지 조성 중질소원만을 제거한 공급액과 세포 성장용 발효조에서의 발효된 액을 희석속도 0.024h-1내지 0.168h-1로 조절하면서 공급하여 발효시키는 것이 특징인 주그뢰아 라미제라 115의 2단계 연속 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산 방법
  10. 제8항에 있어서, 상기 희석 속도가 0.048h-1내지 0.402h-1인 것이 특징인 방법.
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