KR950002833B1

KR950002833B1 - 1, 7-치환된 헵틴-2-온 화합물의 제조 방법

Info

Publication number: KR950002833B1
Application number: KR1019870006422A
Authority: KR
Inventors: 자누스 제조타르스키 와크로우; 엘비에타 구쥬스카 마리아
Original assignee: 마리온 래보래토리스, 인코포레이티드; 로웰 디. 밀러
Priority date: 1986-06-27
Filing date: 1987-06-24
Publication date: 1995-03-27
Also published as: DE3775837D1; CA1329197C; KR890000981A; EP0251126A3; JPH0651665B2; NZ220791A; AU7457687A; AU591299B2; KR880000383A; EP0251126A2; JPS6322548A; EP0251126B1

Abstract

내용 없음.

Description

1, 7-치환된 헵틴-2-온 화합물의 제조 방법

본 발명은 새로운 1-페닐-1-히드록시-7-치환된 아미노 헵트-5-인-2온의 1-치환된 유도체의 제조방법에 관한 것이다. 이 화합물 및 그들의 제약학적으로 적합한 염은 신경원 방광질환(neurogenic bladder disease)의 치료에 사용될 수 있다.

신경원 방광 질환은 배뇨의 조절 기능을 상실하게 됨을 수반하는 질병으로 정의된다. 그 주요 증상은 뇨빈도(urinary frequency), 폐뇨(閉尿)(urinary retention) 또는 실금(incontinence)이 될 수 있다. 신경원방광의 부류에 들어가는 병변(lesion)은 두가지 형태가 있다. 첫째, 상위 운동뉴우런(upper motoneuron)병변은 뇨빈도 및 실금의 증상을 일으키면서 방광의 근긴장 항진(hypertonia) 및 반사항진(hyperreflexia), 경련 상태에 이르게 한다. 둘째 병변, 하위 운동뉴우런(lower motoneuron) 병변은 방광의 근긴장항진 및 반사항진, 그리고 더 심각한 상태로 방광근의 완전한 확장 및 이완증을 수반한다. 따라서, 이 경우는 이완된 상태이다. 이러한 상태에서 주요 증상은 배뇨 반사가 상실되었기 때문에 일어나는 폐뇨와, 방광이 넘쳐흐르게 되어 샐 때("leaks") 일어나는 실금이 된다.

이완성 또는 근긴장항진성 방광은 치료하기에 더 용이한 상태이다. 치료의 목적은 방광 경부 또는 요도의 수축을 피하는 반면 방광의 수축을 일으키는 것이다. 부교감 신경성 화합물(콜린성 작용물질)은 방광 평활근 상에서 자극성 무스카린 수용체를 자극하기 위해 일반적으로 사용된다.

이 분야에서 가장 널리 상용되는 화합물은 무스카린 수용체 작용 물질인 우레콜린(urecholine)이다. 이것은 방광 경부 근육의 교감신경 자극을 막기 위해 알파-아드레날린성 길항물질인 페녹시벤즈아민과 공동으로 주어진다.

또한 우레콜린은 때때로 골격근 수용체 길항물질인 리오레실(lioresil)과 공동으로 준다. 그러나, 일반적으로 비뇨기과 전문의 및 내과의들은 근긴장항진성 방광의 약리학적 치료보다는 간헐적인 카테테르 도입(catheterization)의 물리적인 조작을 시행하기를 선호한다.

대다수의 신경원 방광 환자는 보통 치료하기가 더 어려운 경련성 또는 근긴장항진성 증상을 가진다. 이경우, 임상의사들은 통상적으로 반사 항진 및 근긴장항진의 상태를 긴장저하(hypotonia)상태로 전환시키도록 시도하고, 그에 따라 가장 중요한 문제인 실금을 치료하는 것을 목적으로 한다. 상태가 긴장 저하로 전환되면 간헐적 카테테르 도입에 의해 간단히 다룰 수 있다. 근긴장항진 상태에서 긴장저하 상태로 완전히 전환될 수 없고, 여전히 매시간 배뇨해야 하는 환자가 많이 있다. 이러한 환자들을 위해서는, 항콜린성 약제(무스카린 수용체 길항물질)에 의한 장기 치료가 필요하다. 현재 약제는 반틴(banthine) 및 프로반틴(Probanthine) 같은 오래된 항콜린성 치료제 보다 더 좋다고 여겨지는, 옥시부티닌을 선택한다. 비교적 강도가 높은 복용량(5mg 1일 4회)의 옥시부티닌을 일반적으로 사용함에도 불구하고, 아트로핀 같은 종래의 무스카린 수용체 길항물질과는 달리, 빈맥(tachycarida)은 이 화합물의 주요 부작용이 아니다. 반면에, 가장 빈번한 옥시부티닌 치료의 부작용은 구강건조증(dry mouth)/이다.

무스카린 수용체 분야에서의 최근 진보는 옥시부티닌이 M1-R형 수용체에 대해 상당한 정도의 세포 활성도를 가진 길항 물질임을 제시하고, 그에 따라 심장성 부작용의 결여(심장 조직은 구로 M2-R을 가짐)및 구강 건조증 부작용의 발생(침샘은 주로 M1-R 집단을 가짐) 모두를 설명하게 된다.

염화 옥시부티닌은 신경원 방광 질환의 치료에 사용되어 점에도 불구하고 비교적 단기간의 지속 작용을 보이며, 상기한 바와 같이, 구강 건조증을 일으킨다. 본 발명에 의해 제조되는 화합물은 염화 옥시부티닌에서 비카르보닐(즉 에스테르의) 산소 대신에 메틸렌기를 함유한다.

이러한 새로운 화합물은 신경원 방광 질환에 대한 그 효능 및 특이성의 면에서, 염화 옥시부티닌에 비교하여 이점을 보여준다. 특히, 본 발명으로 제조되는 화합물은 진경작용(spasmolytic action)을 하는 장기작용 항무스카린제이다.

본 발명은 다음 일반식을 가지는 새로운 화합물 및 제약학적으로 적합한 그들의 염의 제조 방법을 제공한다 :

여기에서, R은 1 내지 7개의 탄소 원자를 가지는 알킬, 3 내지 6개의 탄소 원자를 가지는 시클로알킬, 7 내지 11개의 탄소 원자를 가지는 폴리시클로알킬, 또는 치환되거나 치환되지 않은 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴이고; R₁및 R₂는 각각 수소, 1 내지 3개의 탄소 원자를 가지는 알킬, 페닐알킬, 1 내지 3개의 탄소원자를 가지는 페닐알킬 이거나 R₁R₂는 n이 4 내지 6의 정수인 -(CH₂)_n-이고; R₃는 히드록시 또는 플루오르이며; R₄는 수소 또는 플루오르이다.

본 화합물은 신경원 방광질환의 치료에서 특별한 활성도를 가지는 선택적인 무스카린 아세틸콜린 수용체(M-AChR) 길항 물질이다.

본 발명은 다른 일반식을 가지는 화합물 및 제약학적으로 적합한 그들의 염의 제조 방법을 포함한다 :

위 식에서 R은 C₁내지 C₇알킬사슬; 시클로헥실 및 시클로펜틸과 같은 C₃내지 C₆시클로알킬; 페닐을 포함한 아릴: 7 내지 11개의 탄소 원자를 가지는 폴리시클로알킬; 할로겐, 바람직하게는 플루오르, 히드록시, 니트로, 메톡시, 메틸, 트리플루오르메틸, C(O)CH₃또는 아미노기를 포함하는 치환체로 치환된 아릴; 하나 또는 두개의 질소를 포함하며, 바람직하게는 메틸렌기에 의해 상기 화학식에 결합되는 5온 및6온 고리형 화합물과 같은 헤테로시클로알킬; 나프틸 및 테트라히드로나프틸과 같은 헤테로아릴; 및 상기 아릴 치환체로 허용된 것들 중에서 선택할 수 있는 치환체로 치환된 헤테로아릴 또는 헤테로시클로기이다.

상기 화학식에 적합한 헤테로고리형 치환체중에는 3-피리딜 및 4-피리딜 모두를 포함하는 피리딜기 및 질소중 하나에 또는 6온 고리의 단일질소의 파라 위치 수소에 결합한 메틸렌기에 의해 전술된 일반식에 결합하는 그러한 고리로, 하나의 질소를 가지거나 서로에 대해 파라 위치의 두개의 질소를 가지는 완전히 포화된 5온 및 6온 고리가 있다. 헤테로고리형 화합물이 치환될 때 치환체는 질소 원자에 결합하는 것이 바람직하며, 메틸 또는 -C(O)CH₃기가 바람직하다. 특히 바람직한 포화 헤테로고리형 R치환체는 다음을 포함한다 :

R₅는 아릴 치환체로 허용된 치환체로부터 선택한다.

R은 아릴, 시클로알킬 또는 폴리시클로알킬이 바람직하며, 페닐, 5 또는 6개의 탄소를 가지는 시클로알킬이거나 아다만틸(adamantyl)이 가장 바람직하다. R이 페닐일때는 파라위치에서 치환되는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 플루오르 치환체에 의해 치환된다. R₁및 R₂는 각각 독립적으로 수소, 1 내지 3개의 탄소를 가지는 알킬, 특히 메틸 또는 에틸, 페닐 에틸과 같은 페닐 알킬이고, 또는 R₁및 R₂함께는 질소와 함께 4 내지 6개의 탄소를 가지는 헤테로시클로기를 형성한다. R₃는 히드록시 또는 플루오르이다. R₄는 수소 또는 플루오르이다.

본 발명에 의해 제조되는 화합물들의 염으로는 염화수소산염, 황산염, 인산염, 질산염, 메탄 술폰산염 및 다트타르산염과 같은 산의 염이 포함된다. 제약학적으로 적합한 다른 염들이 또한 본 발명에 의해 제조될수 있다.

본 발명에 의해 제조되는 바람직한 화합물은 R이 페닐, 시클로헥실, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 또는 1-아다만틸이고 R₁및 R₂가 각각 수소, 메틸 또는 에틸인 화합물이다. 가장 바람직한 화합물은 1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시-7-디메틸아미노헵트-5-인-2-온, 1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시-7-메틸아미노헵트-5-인-2-온 및 1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시-7-메틸아미노헵트-5-인-2-온이다.

본 발명에 의해 제조되는 다른 화합물들은 다음과 같다 :

2-히드록시-2-페닐-8-(N, N -디에틸아미노)옥트-6-인-3-온 옥살레이트

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-디이소프로필아미노헵트-5-인-2-온 하이드레이트

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-에틸아미노헵트-5-인-2-온 헤미푸마레이트, 하이드레이트

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-(N-메틸-N-에틸아미노)헵트-5-인-2-온 하이드레이트

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-이소프로필아미노헵트-5-인-2-온 하이드레이트

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-(N-메틸-N-이소프로필아미노)헵트-5-인-2-온 하이드레이트

1-시클로헥실-1-페닐-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온 옥살레이트

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-t-부틸아미노헵트-5-인-2-온하이드레이트

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-(N-에틸-N-이소프로필)헵트-5-인-2-온

1- 시클로헥실 -1- 히드록시-1-페닐-7-디메틸아미노헵트-5-인-2-온

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-(N-메틸-N-페네틸아미노)-헵트-5-인-2-온

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-피롤리디닐헵트-5-인-2-온 하이드레이트

1-(6-N, N-디에틸아미노헥스-4-인-2-온)-1-히드록시인단 옥살레이트 세미하이드레이트

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-메틸아미노헵트-5-인-2-온 하이드레이트

1-시클로헥실-1-플루오르-1-페닐-7-헵트-5-인-2-온옥살레이트 쿼터 하이드레이트

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-(N, N-디에틸-N-에틸암모니오)헵트-5-인-2-온 요오드화물

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-(N-메틸-N-벤질아미노)헵트-5-인-2-온

1-시클로펜틸-1-히드록시-1-페닐-7-(N-메틸-N-에틸아미노)헵트-5-인-2-온

1-시클로프로필-1-히드록시-1-페닐-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-아미노헵트-5-인-2-온

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-디-n-부틸아미노헵트-5-인-2-온

1-시클로펜틸-1-히드록시-1-페닐-7-디메틸아미노헵트-5-인-2-온

본 발명에 의해 제조되는 화합물은 M₂-AChR에 대해 더 큰 친화력을 가지며, 그들의 약리학적 작용에 있어서 선택적이다. 본 발명에 의해 제조되는 화합물, 특히 1-페닐 또는 1-시클로헥실 또는 1-시클로펜틸-1-페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온의 높은 선택성은 수용체의 결합연구, 기능적 분석 및 유리된 기관에서 M₁-AChR의 선택적 길항작용을 제공하는 그들의 능력에 의해 입증되었다.

본 화합물은 제약 분야의 숙련자들에게 잘 얄려진 다양한 제약학적 조제물로 투여될 수 있다. 비경구적 투여를 위해, 본 화합물은 항산화제, 완충제, 세균 발육 저지제(bacteriostats) 및 이러한 용액에 대개 사용되는 기타 부가제를 포함할 수 있는 수성 주사 용액으로 제조될 수 있다. 즉석 주사 용액은 본 발명에 의해 제조되는 화합물 뿐만 아니라 희석제, 분산제 및 표면 활성제, 결합제 및 윤활제를 포함할 수 있는 멸균환약, 과립 또는 겅제(tablets)로부터 조제할 수 있다.

경구적 투여의 경우, 본 발명에 의해 제조되는 화합물의 미세한 분말이나 과립은 희석제 및 분산제와 표면활성제와 함께 제제화할 수 있고, 물, 시럽, 캡슐 캐세이(capsules cachets), 비수성(non-aqueous) 현탁액 또는 유화액으로 조제할 수 있다. 건조 형태로는 임의의 결합제 및 윤활제가 있을 수 있다. 본 화합물은 또한 향미제, 방부제, 현탁제, 농조화제 및 유화제와 기타 제약학적으로 적합한 첨가제를 포함할 수 있다. 경구 투여를 위하여 과립이나 정제는 제피화(coat)될 수 있다.

본 발명에 의해 제조되는 화합물은 신경원 방광 질환으로 고통받는 환자들의 치료에 유용하다. 본 화합물은 제약학적으로 유효량으로 투여된다 : 즉 항콜린성 효과를 일으키는데 필요한 양이다. 복용량은 공지된 염화 옥시부티닌의 M₁-AChR 활성도와 본 발명으로 제조되는 화합물의 M₁-AChR 활성도의 상호관계에 의해 결정될 수 있다. 전형적으로, 본 발명에 의해 제조되는 화합물은 더 긴 작용 지속기간을 가지는 것으로 예상될 수 있으며 그에 따라 활성도의 손실없이 감소된 양의 복용이 가능하게 된다. 게다가, 본 발명으로 제조되는 화합물이 염화 옥소부티닌 보다 큰 선택성, 즉 더 적은 부작용을 보여주는 한, 본 발명의 화합물에 대해 허용되는 복용량 상한선은 염화 옥시부티닌에 대해서 보다 더 높을 수 있다.

본 발명으로 제조되는 화합물은 적합한 디티안과 케톤을 반응시키고, 이어서 디티안 보호기를 제거함으로써 제조될 수 있다. 다음 실시예는 본 발명의 화합물 제조과정을 설명한다 :

실시예 1

6-디에틸아미노헥스-4-인-1-올

디옥산(40ml)내의 파라포름알데히드(7.14g, 238mmol), 디에틸아민(27.6ml, 260mmol) 및 아세트산 구리(II) 일수화물(1g) 혼합물을 1시간동안 60℃의 기름중탕으로 가열하였다.

고체 물질이 사라졌을 때, 펜트-4-인-1-올(20g, 238mmol)을 첨가하고, 녹색 현탁액이 엷은 갈색 침전으로 완전히 바뀔때까지(약 3시간) 95℃에서 계속 가열하였다.

20℃로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 10% KOH 수용액(40ml)에 부었다. 침전을 여과시키고, 에테르(100ml)로 씻어내었다. 유기상은 물(50ml 5회)로 씻고, 건조시킨 뒤(K₂CO₃) 조(粗) 생성물을 산출하기 위하여 건조하게 증발시킨다. 분리시킨 생성물을 증류시켜 29.7g(74%)의 6-디에틸아미노헥스-4-인-1-올을 산출하였다 :

bp 92-94℃(0.1mmHg).

IR(니이트(neat)) 3309㎝^-1.

¹H NMR(CDCl₃)δ 4.1(S, 1H), 3.6(t, 2H), 3.3(m, 2H), 2.7-2.0(m, 6H), 2.0-1.4(m, 2H), 1.0(t, 6H).

6-디에틸아미노헥스-4-인알

CH₂Cl₂(75ml)내의 디메틸 술폭시드(25.1ml, 353mmol)용액을 -60℃에서 CH₂Cl₂(370ml)내에 염화 옥살릴(14.75ml, 169mmol)을 교반시킨 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간동안 교반시키고, CH₂Cl₂(150ml)내의 상기 기술한 바와 같이 제조한 6-디에틸아미노헥스-4-인-1-올 용액을 방울씩 첨가하였다; 교반은 첨가시간동안 지속하였다.

TEA(103.25ml, 740mmol)를 첨가하였고, 반응 혼합물을 90분동안 교반시키고 나서 실온까지 따뜻하게 하였다. 그 후 물(200ml)을 첨가하고, 수성 층을 클로로포름(100ml 3회)으로 재추출하였다. 유기층은 혼합시켜 염수로 씻고, 건조시켰다(MgSO₄).

용매를 증발시켜 조(粗) 생성물을 산출하며, 이 생성물을 실리카겔을 통해 여과시키고, 증류시켜 19.26g(78%)의 알데히드를 산출하였다 :

bp 68-71℃ (0.125mmHg).

IR(니이트) 1727.9㎝^-1.

¹H NMR(CDCl₃)δ 9.7(s, 1H), 3.3(m, 2H), 2.7-2.2(m, 8H), 1.0(t, 6H).

2-5-디에틸아미노펩트-3-인)-1, 3-디티안

CH₂Cl₂(150ml)내의 상기와 같이 제조된 6-디에틸아미노헥스-4-인알-(10g, 59.7mmol) 및 1, 3-프로판디티올 용액을 1시간동안 교반시키고 나서, BF₃. Et₂O(8ml)로 처리하였다. 5시간 후, 반응 혼합물을 물, 10% KOH 수용액 및 물로 각각 3회씩 연속하여 씻었다. 유기층은 건조시키고(K₂CO₃), 여과시킨 후 용매를 제거하였다. 헥산/아세트산 에틸/트리에틸아민(95 : 5 : 3)으로 실리카겔 상에 나머지를 크로마토그래피시키고, 증류시켜 4.3g(28%)의 디티안을 산출하였다 :

bp 140℃ (0.2mmHg).

IR(니이트) 907.7㎝^-1.

¹H NMR(CDCl₃)δ 4.1(t, 1H), 3.4(m, 2H), 2.8-1.8(m, 14H), 1.1(t, 6H).

C₁₃H₂₃NS₂에 대한 분석.

계산치(Anal.Calcd.) : C; 60.65, H; 9.00, N; 5.44, S; 24.91.

확인치: C; 60.70, H; 9.04, N; 5.42, S; 24.82.

1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온 비스(1, 3-프로필렌디티오케탈

-70℃까지 냉각시킨 100ml의 건조 THF내에서 상기 디티안(5g, 19.42mmol)에 11.4ml(25mmol)의 2.2M n-BuLi을 방울씩 첨가하였다. 이 온도로 45분 후, 반응 혼합물을 -20℃까지 따뜻하게 하고 TMEDA(3.76ml, 25mmol)을 첨가하였다. 이 온도로 1시간 후, 엷은 황색 용액을 -70℃로 냉각시키고, 50ml의건조 THF내의 시클로헥실페닐케톤(3.64g, 19.4mmol) 용액을 넣었다. 반응 혼합물을 3시간 동안 더 교반시키고 나서, 물로

칭시키고 에테르로 추출하였다. 추출물을 건조시키고(K₂CO₃), 용매를 제거하였다.

분리시킨 조(粗) 생성물을 헥산/아세트산에틸/트리에틸아민(95 : 5 : 3)으로 실리카겔 상에서 크로마토그래피시켜 6.40g(74%)의 생성물을 산출하였다.

IR(니이트) 3486.7cm^-1.

¹H[NMR(CCl₄)δ 7.8-7.1(m, 5H), 3.2(m, 2H), 2.9-1,3(m, 26H), 1.0(t, 6H).

헤미옥살레이트 : mp 172-3℃(EtOH).

IR(누졸) 1625.1cm^-2.

C₂₇H₄₀NO₃S₂에 대한 분석

계산치 : C; 66.08, H; 8.22, N; 2.85, S; 13.06.

확인치: C; 66.18, H; 8.36, N; 2.82, S; 12.95.

1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온

메탄올(15ml)내의 질산 탈륨(III) 삼수화물(3.13g, 6.9mmol)을 MeOH(120ml) THF(30ml) 에 용해시킨 상기 디티오케탈(3g, 6.73mmol)에 빠르게 첨가하였다. 백색 침전이 즉시 형성되며, 5분 후 CH₂Cl₂(100ml)를 첨가하고, 침전을 여과하였다. 용매는 진공에서 제거하였고, 나머지를 클로로포름에 용해시키고, 물로 씻은 후, 건조시켰다(MgSO₄).

용매를 증발시켜서 산출한 조(粗) 1-시클로헥실-1페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온을 아세트니트릴/MeOH(98 : 2)로 C-18 실리카젤 상에서 크로마토 그래피시켜 340mg(14.22%)의 원하는 생성물을 산출하였다.

IR(니이트) 709.9㎝^-1.

¹H NMR(CDCl₃)δ 7.6-7.2(m, 5H), 3.4(m, 2H), 2.9-2.3(m, 9H), 2.0-1.0(m, 17H).

옥살레이트 : mp 112-115℃(EtOH).

IR(CHCl₃) 1779.8, 1704.7 및 1655.9cm^-1.

C₂₅H₃₅NO₆에 대한 분석

계산치 : C; 67.39, H; 7.92, N; 3.14.

확인치: C; 67.43, H; 7.95, N; 3.10.

실시예 II

1-시클로펜틸-1-페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온 비스(1, 3-프로필렌) 디티오케탈

-70℃로 냉각시킨 100ml의 건조 THF내의, 실시예 1에서 제조한 디티안(5g, 19.42mmol)에 11.4ml의 2.2M n-BuLi(25mmol)을 방울씩 첨가하였다. 이 온도로 45분후, 반응 혼합물을 -20℃까지 따뜻하게 하고, TMEDA(3.76ml, 25mmol)을 가하였다. 이 온도로 한 시간후, 엷은 황색 용액을 -70℃로 냉각시키고,50ml의 건조 THF내의 시클로펜틸 페닐케톤(3.3ml, 19.42mmol)용액을 넣었다.

반응혼합물을 3시간 동안 더 교반시키고 나서 물로

칭시키고, 에테르로 추출하였다. 추출물을 건조시키고(K₂CO₃), 용매를 진공에서 제거하였다. 분리시킨 조(粗) 생성물을 헥산/아세트산 에틸/트리에틸아민(95 : 5 : 3)으로 실리카겔상에서 크로마토그래피시켜 6.37g(76%)의 생성물을 산출하였다 : IR(니이트)3517.5cm^-1.

¹H NMR(CCl₄)δ 7.7-7.0(m, 5H), 3.2(m, 2H) 2.9-1.1(m, 24H), 1.0(m, 6H). 옥살레이트 : mp 139-140℃(EtOH); IR(누졸) 1740.8 및 1653.3cm^-1; C₂₇H₃₉NO₅S₂에 대한 분석

계산치 : C, 62.16; H, 7.53; N, 2.68; S, 12.29.

확인치 : C; 62.00, H; 7.59, N;2 .63, S; 12.21.

1-시클로펜틸-1-페닐-1-히드록기-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온

MeOH(15ml)내의 질산 탈륨(III) 삼수화물(3.13g, 6.9mmol)을 MeOH(120ml)과 THF(30ml)에 용해시킨 상기 생성물(2.9g, 6.73mmol)에 빠르게 첨가하였다. 백색 침전이 즉시 형성되며, 5분 후 CH₂Cl₂(100ml)를 첨가하고 침전을 여과하였다. 용매는 진공에서 여과액으로부터 제거하였고, 나머지를 클로로포름에 용해시키고, 물로 씻은 후, 건조시켰다(MgSO₄). 용매를 증발시켜서 산출한 조(粗)생성물을 아세트니트릴/MeOH(98 : 2)로 C-18 실리카겔상에서 크로마토그래피시켜 0.77g(33.62%)의 원하는 생성물을 산출하였다 :

IR(니이트) : 1709.9cm^-1;¹H NMR(CDCl₃)δ 7.6-7.1(m, 5H), 3.3(m, 2H), 2.8-2.1(m, 10H), 1.8-1.3(m, 8H); 1.1(m, 6H).

옥살레이트 : mp 128-129℃(EtOH); IR(CHCl₃) : 1776.8, 1704.8 및 1653.3cm^-1.

C₂₄H₃₂NO₆에 대한 분석

계산치 : C; 66.80, H; 7.70, N; 3.24.

확인치 : C; 66.81, H; 7.74, N; 3.20.

실시예 Ⅲ

1, 1-디페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온 비스(1, 3-프로필렌)디티오케탈

-70℃로 냉각시킨 100ml의 건조 THF내의 실시예 1에서 제조한 디티안(5g, 19.42mmol)에 2.2Mn-BuLi(25mmol)을 방울씩 첨가하였다. 이 온도로 45분후, 반응혼합물을 -20℃까지 따뜻하게 하고, TMEDA(3.76ml, 25mmol)을 첨가하였다. 이 온도로 1시간후, 엷은 황색 용액을 -70℃로 냉각시키고, 50ml의 건조 THF내의 벤즈페논(3.53g, 19.4mmol)용액을 넣었다. 반응 혼합물을 3시간동안 더 교반시키고 나서, 물로

칭시키고, 에테르로 추출하였다. 추출물을 건조시키고(K₂CO₃), 용매를 제거하였다. 분리시킨 조(粗) 생성물을 헥산/아세트산 에틸/트리에틸아민=95 : 5 : 3으로 실리카 켈상에서 크로마토그래피시켜 6.16g(72.13%)의 생성물을 산출하였다:

IR(CHCl₃) 3437.8cm^-1;¹H NMR(CDCl₃)δ 7.9-7.0(m, 10H), 4.2(s, 1H), 3.2(m, 2H), 2.6-1.4(m, 14H), 0.9(t, 6H).

1, 1-디페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온

CH₃OH(15ml)내의 질산 탈륨(III) 삼수화물(3.13g, 6.9mmol)을 CH₃OH(120ml) 및 THF(30ml)에 용해시킨 디티안(실시예 3)(2.95g, 6.73mmol)에 빠르게 첨가하였다. 백색 침전이 즉시 생성되었으며, 5분후 CH₂Cl₂(100ml)를 첨가하고, 침전을 여과시켰다. 용매는 진공에서 여과액으로부터 제거하였고, 나머지는 클로로포름에 용해시키고, 물로 씻은 후, 건조시켰다(MgSO₄). 용매를 증발시켜 산출한 조(粗) 생성물을 아세트니트릴/MeOH(98 : 2)로 C-18 실리카 겔 상에서 크로마토그래피시켜 0.35g(15%)의 원하는 생성물을 산출하였다.

IR(CHCl₃) 1710.0cm^-1;¹H NMR(CDCl₃)δ 7.35(s, 10H), 3.3(m, 2H), 2.8(t, 2H), 2.5(m, 6H), 1.0(t, 6H).

실시예 IV

6-디이소프로필아미노헥스-4-인-1-올디옥산(40ml)내의 파라포름알데히드(7.14g, 238mmol).

디이소프로필아민(19.1ml, 262mmol) 및 아세트산 구리(II) 일수화물(1g) 혼합물을 1시간동안 60℃의 기름중탕으로 가열하였다. 고체 물질이 사라졌을때, 펜트-4-인-1-올(20.02g, 238mmol)을 첨가하고, 녹색현택액이 엷은 갈색 침전으로 완전히 바뀔때까지(약 3시간) 95℃에서 계속 가열하였다. 20℃로 냉각시킨후, 반응 혼합물을 10% KOH수용액(40ml)에 부었다. 침전을 여과시키고, 에테르(100ml)로 씻어내었다. 유기상은 물(50ml 5회)로 씻고, 건조시킨 뒤(K₂CO₃), 조(粗) 생성물을 증류시켜 16.88g(36%)의 6-디이소프로필아미노헥스-4-인-1-올을 산출하였다 :

bp 116-9℃(0.05mmHg);¹H NMR(CDCl₃)δ 1.08(d, 12H), 1.40-1.98(m, 2H), 2.02-2.60(m, 2H), 2.83-3.44(m, 4H), 3.46-3.83(t, 2H), 4.09(s, 1H).

6-디이소프로필아미노헥스-4-인알

CH₂Cl₂(75ml)내의 디메틸 술폭시드(25.1ml, 353mmol)용액을 -60℃에서CH₂Cl₂(370ml)내에 염화 옥살릴(14.75ml, 169mmol)을 교반시킨 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간동안 교반시키고, CH₂Cl₂(150ml)내의 6-디이소프로필아미노헥스-4-인-1-올(29.07g, 147.5mmol)용액을 첨가한 뒤, 반응 혼합물을 90분동안 교반시키고나서 실온까지 따뜻하게 하였다. 그후 물(200ml)을 첨가하고, 수성층을 클로로포름(100ml 3회)으로 재추출하였다. 유기층은 혼합시켜 염수로 씻고, 건조시켰다(MgSO₄). 용매를 증발시켜 조(粗)생성물을 산출하며, 이 생성물을 증류시켜 12.96g의 알데히드를 산출하였다 :

bp 90-5(2.5mmHg);¹H NMR(CDCl₃)δ 1.05(d, 12H), 2.00-2.67(m, 4H), 2.83-3.50(m, 4H), 9.67(s, 1H).

2-(5-디이소프로필아미노펩트-3-인)-1, 3-디티안

CH₂Cl₂(150ml)내의 6-디이소프로필아미노헥스-4-인알(11.66g, 59.7mmol) 및 1, 3-프로판디티올 용액을 1시간동안 교반시키고 나서, BF₃Et₂O(8ml)로 처리하였다. 5시간후, 반응혼합물을 물, 10% KOH수용액 및 물로 각각 3회씩 연속하여 씻었다. 유기 층은 건조시키고(K₂CO₃), 여과시킨후 용매를 제거하였다. 헥산/아세트산 에틸/트리에틸아민(95 : 5 : 3)실리카켈 상에 나머지를 크로마토그래피시키고, 증류시켜(0.1mmHg);¹H NMR(CDCl₃)δ 0.91-0.50(d+m, 14H), 1.68-2.67(m, 6H), 2.73-3.67(m, 6H), 4.18(t, 1H).

1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시-7-디이소프로필아미노헵트-5-인-2-온 비스(1, 3-프로필렌)디티오케탈

-70℃로 냉각시켜 100ml의 건조 THF내의 디티안(5.54g, 19.42mmol)에 10.0ml의 2.5Mn-BuLi(25mmol)을 방울씩 첨가하였다. 이 온도로 45분후, 반응 혼합물을 -20℃까지 따뜻하게 하고, TMEDA(3.76ml, 25mmol)를 첨가하였다. 이 온도로 한 시간후, 엷은 황색 용액을 -70℃로 냉각시키고, 50ml의 건조 THF내의 시클로헥실페닐케튼(4.70g, 25mmol)용액을 넣었다. 반응 혼합물을 3시간동안 더 교반시키고 나서, 물로

칭시키고, 에테르로 추출하였다. 추출물을 건조시키고(K₂CO₃), 용매를 제거하였다. 분리시킨 조(粗)생성물을 헥산/아세트산 에틸/트리에틸아민(95 : 5 : 3)으로 실리카겔 상에서 크로마토그래피시켜 1.64g(30%)의 생성물을 산출하였다.

1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시-7-디이소프로필아미노헵트-5-인-2-온

메탄올(15ml)내의 질산 탈륨(III) 삼수화물(3.13g, 6.9mmol)을 MeOH(120ml) 및 THF(30ml)에 빠르게 첨가하였다.

백색 침전이 즉시 생성되었으며, 5분후 CH₂Cl₂를 첨가하고, 침전을 여과시켰다.

용매는 진공에서 제거하였고, 나머지는 클로로포름에 용해시키고, 물로 씻은후, 건조시켰다(MgSO₄).

용매를 증발시켜 산출한 조(粗) 생성물을 아세트니트릴/MeOH(98 : 2)로 C-18실리카 겔 상에서 크로마토그래피시켜 원하는 생성물을 산출하였다.

실시예 V

3 -시클로헥실-3-히드록시-3-페닐프로프-1-인

아세틸렌 리튬(47.84g, 0.52mmol)을 70ml의 건조 테트라하이드로 푸란(THF)에 첨가하였다. 이 용액을 0℃로 냉각시키고, 100ml의 건조 THF내의 시클로헥실페닐 케톤 용액을 15분 이상 쭉 교반시키면서 첨가하였다. 용액을 실온까지 따뜻하게 하고, 16시간동안 교반시켰다. 그리고나서 용액을 0℃로 냉각시키고, 50ml의 5N HCl을 첨가하였다. 그후 용액을 실온까지 따뜻하게 하고, 200ml의 물을 첨가하였다. 용액을 분별 깔대기로 옮긴후 에테르로 씻어내었다. 에테르로 씻은 것을 혼합하여, 황산 나트륨 하에 건조시켰다. 진공에서 에테르를 제거하고, 조(粗) 생성물을 진공 증류시켜, 엷은 황색오일을 분리시켰다(60.33g, 82.9%).

Bp 111-114℃ (0.8mm).

¹H NMR(CDCl₃) δ 7.7-7.2(m, 5H), 2.6(S, 1H), 2.3(S, 1H), 2.1-0.9(m, 11H).

IR(니이트) 3433, 3304, 2111, 1448, 1016cm^-1.

1-아세톡시-1-시클로헥실-1-페닐프로판-2-온

3-시클로헥실-3-히드로시-3-페닐프로프-1-인(21.57g, 0.10mol)을 100ml의 빙초산에 첨가하였다. 용액을 격렬하게 교반시키는 동안 아세트산 수은(II)(35.20g, 0.11mol)을 첨가하였다. 용액을 72시간동안 실온에서 교반시키고 나서 티오아세트아미드(8.3g, 0.11mol)를 첨가하였다.

이 용액을 3시간동안 더 교반시키고, 300ml의 에테르를 첨가하였다. 반응혼합물을 분별 깔때기에 옮기고, 물, 포화 중탄산나트륨용액 그리고 다시 물로 씻어내었다.

에테르 층은 황산나트륨하에 건조시키고, 진공하에 에테르를 제거하여 백색 고체 결정(18.36g, 66.9%)같은 생성물을 얻었다.

Mp 8l-83℃(석유 에테르로부터).

¹H NMR(CDCl₃) δ 7.3(bS, 5H), 2.2(S, 3H), 1.9(S, 3H), 2.0-0.8(m, 11H).

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐프로판-2-온

55ml의 90% 메탄올 수용액 내의 1-아세톡시-1-시클로헥실-1-페닐프로판-2-온(16.42g, 0.06mol)용액에 3.2g의 수산화칼륨을 첨가하였다. 이 용액을 15분간 환류시키고, 냉각시킨 후 90ml의 포화 염화 나트륨을 가하였다. 반응혼합물을 분별 깔대기 옮기고, 에테르로 씻어내었다. 에테르로 씻은 것을 혼합하여 황산나트륨하에 건조시킨 후, 진공하에서 건조하게 증발시켰다. 조(粗)생성물을 진공종류하에 깨끗한 오일(10.51g, 75.4%)로 얻었다.

Bp 125-28℃(0.1mm).

¹H NMR(CDCl₃) δ 7.6-7.2(m, 5H), 4.5(S, 1H), 2.1(S, 3H), 2.5-0.9(m, 11H).

IR(니이트) 3456, 3057, 1705, 1448, 1358, 1209, 1124cm^-1.

1-(트리메틸시릴 에테르)-1-시클로헥실-1-페닐프로판-2-온

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐프로판-2-온을 건조 아세트니트릴에 첨가하고, 이 용액을 교반시켰다. 그리고나서, 비스(트리메틸시릴) 아세트아미드를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간동안 30℃로 가열하였다. 그후 이 용액을 냉각시키고, 진공하에서 건조하게 증발시켜 재결정화한 후, 백색 고체 결정같은 생성물을 얻었다.

1-(트리메틸시릴 에테르)-1-시클로헥실-1-페닐헥실-5-인-2-온

리튬 디이소프로필아미드를 건조 THF에 용해시키고, 용액을 -78℃로 냉각시켰다. 건조 THF내에 1-(트리메틸시릴 에테르) -1-시클로헥실-1-페닐프로판-2-온을 포함하는 용액을 -78℃에서 교반시키는 상기 용액에 방울씩 첨가하였다. 완전히 첨가한 후 반응 혼합물을 한시간 동안 교반시켰다. 그후 건조 THF내의 브롬화 프로파르길 용액을 -78℃에서 반응 혼합물 용액에 방울씩 첨가하였다. 이 용액을 0℃까지 데운후, 5시간 동안 교반시켰다.

에테르-아세트산 용액(9 : 1)을 천천히 첨가하고, 생성되는 혼합물을 실온까지 데웠다. 에테르를 첨가한뒤, 용액을 분별 깔대기에 옮긴 후 물로 세척하였다. 에테르 층을 황산나트륨하에 건조시키고, 건조하게 증발시킨후, 재결정화하여 백색 고체 결정같은 생성물을 얻었다.

1-시클로헥실 -1- 히드록시 -1- 페닐헥스-5-인-2-온

1-(트리메틸시릴 에테르)-1-시클로헥실-1-페닐헥스-5-인-2-온을 25℃에서 1%의 진한 염산을 포함하는 메탄올에 용해시켰다. 물을 첨가하고, 용액을 분별 깔대기에 옮겼다.

용액을 에테르로 세척하고, 에테르 층을 황산나트륨 하에 건조시켰다 .진공하에서 에테르를 증발시키고, 조(粗)생성물을 진공 증류시켜 엷은 황색 오일을 분리시켰다.

1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온

디옥산 내의 파라포름알데히드, 디에틸아민 및 아세트산 구리(II)일수화물 혼합물을 1시간동안 60℃에서 가열한다.

그리고 나서, 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐헥스-5-인-2-온을 첨가하고, 반응 혼합물을 5시간동안 95℃에서 가열시킨다. 혼합물을 냉각시키고, 10% 수산화칼륨 용액을 첨가한다.

이 용액을 에테르로 세척하고, 에테르 반응물을 황산나트륨하에 건조시킨 후, 진공하에서 건조하게 증발시킨다.

조(粗)생성물을 증류시켜 그것의 옥살산 염과 같은 백색 고체 결정을 얻는다.

실시예 VI

실시예 VI 및 VII에서의 시험 화합물은 다음과 같다.

화합물 번호

1. 1, 1-디페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2 -온

2. 1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온 비스(1, 3-프로필렌) 디티오케탈 헤미옥살레이트

3. 1-시클로펜틸-1-페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온 비스(1, 3-프로필렌) 디티오케탈 옥살레이트

4. 1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온

5. 1-시클로펜틸-1-페닐-1-히드록시-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온

6. 2-(5-디에틸아미노펩트-3-인)-1, 3-디티안 옥살레이트

7. 2-히드록시-2-페닐-8-(N, N-디에틸아미노)옥트-6-인-3-온 옥살레이트

8. 2-펜틴-1-아민 ; N, N-디에틸-5-[2-페닐메틸-1, 3-디티안-2-일] 옥살레이트

9. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-디이소프로필아미노헵트-5-인-2-온 하이드레이트

10. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-에틸아미노헵트-5-인-2-온 헤미푸마레이트, 하이드레이트

11. 1-(6-디에틸아미노헥스-4-인-2-온)-1-히드록시-1, 2, 3, 4-테트라히드로나프탈렌 N-시클로헥실설파메이트 하이드레이트

12. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페눌-7-(N-메틸-N-에틸아미노)헵트-5-인-2-온 하이드레이트

13. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-이소프로필아미노헵트-5-인-2-온 하이드레이트

14. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-(N-메틸-N-이소프로필아미노)헵트-5-인-2-온 하이드레이트

15. 1-시클로헥실-1-페닐-7-디에틸아미노헵트-5-인-2-온 옥살레이트

16. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-t-부틸아미노헵트-5-인-2-온 하이드레이트

17. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-(N-에틸-N-이소프로필아미노)헵트-5-인-2-온

18. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-디메틸아미노헵트-5-인-2-온

19. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-(N-메틸-N-페네틸아미노) 헵트-5-인-2-온

20. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-피롤리디닐헵트-5-인-2-온 하이드레이트

21. 1-(6-N, N-디에틸아미노헥스-4-인-2-온)-1-히드록시인단 옥살레이트 세미하이드레이트

22. 1-시클로헥실-1-히드록시-1-페닐-7-메틸아미노헵트-5-인-2-온 하이드레이트

항무스카린 실험계획(Protocol)

목적：이 실험은 장(회장)의 세로 평활근 및 방광 배뇨근(detrusormuscle)상의 시냅스 후방의 무스카린콜린 수용체에서 길항물질 활성도를 가지는 화합물을 밝히기 위한 것이다.

재료 및 방법： 시험용 회장(Ileum)의 제조

백변종(albino) 돼지쥐(guinea pig)의 수컷을 단두하거나 경부 탈구시켜 죽인다. 공동을 열고, 약 10cm의 말단회장을 버리면서 소장을 떼어낸다. 이 장을, 타이로드 용액(137mM NaCl, 2.7mM KCl, 1.8mM CaCl₂, 2H₂O, 1.1mM MgCl₂: 6H₂O, 0.4mM NaH₃PO₄, 11.8mM NaHCO₃, 5.6mM 덱스트로즈)을 포함하는 페트리 접시에 놓고, 3-4cm의 단편으로 자른다. 그 단편은 회장의 반구(反口)(aboral)측 말단으로부터 선택적으로 취한다. 각 단편은 6mm 직경의 유리 막대위에 조심스럽게 뻗쳐놓고 남아있는 장간막(mesentric)조직은 잘라낸다. 부착된 장간막 신경총(plexus)과 함께 세로근은 장간막 부착물에 평행한 얕은 세로 절개부로부터 멀어진 접전 상에서 타이로드 용액에 적신 면으로 끝을 씌운 도포구(cotton-tipped applicator)으로 부드럽게 쓰다듬어 밑에 있는 환상근(circular muscle)으로부터 분리한다. 부드러운 마찰을 사용하며, 전 과정을 통해 단편을 습하게 유지하도록 주의하며, 조직을 전 길이의 단편으로부터 벗겨낸다(Paton 및 Zar, J.Physiol. 194：13, 1968).

37℃로 유지시키고 95% O₂/5% CO₂로 거품을 일으키며 타이로드 용액을 함유하는 10ml의 물재킷 유리조직조(water-jacketed glass tissue baths)내에서 조직을 5-0실크 봉합사와 현탁시킨다. 봉합사는 지형(physiograph)에 관계된 등방성 힘-전위 변환기(isometric force-displacement transducer) (Grass 또는 Gould)에 각 조직을 연결한다.

각각의 제조는 0.3g의 휴지 장력(resting tension)하에서 현탁시키며, 36분간 평형을 이루게 한다. 이 시기동안, 용액조(bath)는 비워지고, 매 12분마다 10ml의 따뜻한 타이로드 용액으로 채워진다. 이 평형 기간의 마지막에서, 각 근육 조각(strip)은 용액조에 10μm의 카르바콜(Carbachol)을 첨가시켜 조절한다. 이 약품은 1-2분간 각 조직과 접촉하게 둔 뒤, 10ml의 따뜻한 타이로드 용액으로 4회 빠르게 헹구어 용액조로부터 제거한다.

제조물은 실험에 사용되기 전에 부가적으로 12분간 회복하게 한다.

시험용 방광의 제조

백변종 돼지쥐의 수컷을 단두하거나 경부탈구시켜 죽인다.

복강을 열고, 방광을 첨(尖)(apex)에서 가볍게 붙들어 부드럽게 잡아늘리며, 지방을 예리한 집게로 걷어낸후, 가능한 한 방광의 표면에 가깝게 끝이 무딘 가위로 그 자리에서 떨어져 절개한다. 조직을 변형된 크렙스(Krebs) 용액(133mM NaCl, 1.3mM NaH₃PO₄, 16.3mM NaHCO₃, 4.7mM KCl, 0.6mM MgSO₄, 7H₂O, 2.5mM CaCl₂, 2H₂O, 7.7mM 덱스트로즈)을 포함하는 라텍스(latex) 바닥의 페트리 접시에 놓고, 경부위에서 자른다. 방광을 평평한 주머니 모양으로 접고, 그것을 측면 절개에 의해 필친 다음 대략 2cm의 길이와 1cm 폭의 장방향 조직 박판이 되게 편다.

이 박판을 부드럽게 펼치고, 페트리 접시의 바닥에 핀으로 고정시킨다. 느슨한 분홍빛 표면 층으로 보이는 점막은 한 끝에서, 두 층을 가늘게 찢도록 집게로 차분히 당기면서, 점막과 근육층 사이에 현미 해부 가위의 날을 조심스럽게 삽입시키고, 날을 부드럽게 폄으로써 무딘 분리가 시작된다. 점막의 깨끗한 제거는 밑에 있는 근육을 닳게 하거나 찢지 않고도 대개 가능하다. 점막의 제거는 준비물에 산소 공급을 더 좋게하고, 얇은 근육 박편의 양면상에 투여한 약품이 더 잘 닿을 수 있게 함이 필수적으로 고려된다(Ambache 및 Zar, J. Physiol. 210：671, 1970).

박편은 필요하다면 잘라내어 네 조각(strips)으로 세로로 자른다. 이 조각들은 5-0 실크 봉합사로 묶어맨 뒤, 35℃로 유지시키고 95% O₂/5% CO₂로 거품을 일으키는, 크렙스 용액을 함유하는 10ml의 물재킷 유리 조직내에서 현탁시킨다. 봉합사는 지형에 관계된 등방성 힘-전위 변환기(Grass 또는 Gould)에 각 조직을 연결한다. 각각의 제조는 0.5g의 휴지 장력하에서 현탁시키며, 36분간 평형을 이루게 한다. 이 시기동안, 용액조는 비워지고, 매 12분마다 10ml의 따뜻한 크렙스 완충액으로 채워진다. 이 기간의 마지막에서, 각 근육 조각은 용액조에 10μM의 카르바콜을 첨가시켜 조절한다. 이 약품은 1-2분간 각 조직과 접촉하게 둔 뒤, 10ml의 따뜻한 크렙스 완충액으로 4회 빠르게 헹구어 제거한다. 제조물은 실험에 사용되기전에 부가적으로 12분간 회복하게 한다.

작용물질(Agonist) 의 제조

카르바콜을 염수에 용해시켜 2×10^-2M의 저장 농도가 되게 한다. 염수 또는 물에서의 연속 희석(serialdilutions)(1 : 10)을 저장용액으로부터 시행한다. 원하는 용액조의 농도를 얻기 위하여 이 용액의 적당한 부피를 10ml 조직조에 누가적으로 가한다.

시험 화합물의 제조

2×10^-2M 또는 2×10^-3M의 저장농도가 되도록 물 또는 염수에 용해시킨 화합물을 이들 용매에 용해시킨다.

1N HCl 또는 1N NaOH나 95% 에탄올의 소량을 물이나 염수에서 용해되지 않는 약제들을 위해 첨가할 수 있다.

염수 또는 물에서의 연속 희석(1 : 10)을 저장 용액으로부터 시행한다. 수성 용매에 용해되지 않는 화합물을 4×10^-2M 저장 용액을 만들도록 (DMSO)디메틸설폭시드에 용해시킨다. 물에서의 연속 희석(1 : 10)을 저장 용액으로부터 시행한다. 다른 용매들이 적절할 때 사용될 수 있고, 실험 과정에서 특별히 기술할 것이다. 원하는 용액조의 농도를 얻기 위하여 적당한 부피를 용액조에 가한다.

실험 :

카르바콜 용액의 적당한 부피를 각 단일 투여 후 세척하지 않고 10ml 조직조에 누가적으로 가하여, 용액조에서 카르바콜의 농도는 단계적으로 증가한다. 각 농도 단계와 함께, 조직은 같은 크기로 수축한다. 이전의 수축이 일정한 값에 도달한 후에만 다음 농도를 가한다. 다음 농도 단계가 수축에서 더이상 증가를 일으키지 않을 때, 최대 효과가 얻어졌다고 생각한다. 그리고나서, 조직을 10ml의 따뜻한 타이로드 용액으로 4회 빠르게 헹구어 씻고, 12분간 회복하게 한다(Van Rossum 및 그의 동료, Arch. int. Pharmacodyn. 143 : 240, 1963 및 143：299, 1963).

길항물질의 존재하에서 카르바콜 반응의 길항작용은 조직을 5분간 작용물질에 노출시킨 후, 누가적인 첨가 과정을 반복함으로써 결정된다.

길항물질의 세네가지 다른 농도는 같은 제조물에 연구된다. 반응은 길항물질이 없을 때 카르바콜에 의해 유도된 최대 수축에 비교하여 나타낸다. 데이타는 부스코 데이타 로저(Buxco Data Logger)를 통해 수집되었고, 길항물질의 Kb값을 얻기 위해 브랜치 테크놀로지의 소프트웨어 패키지에 의해 분석하였다.

돼지쥐의 방광 및 회장의 항무스카린성 활성도

실시예 Ⅶ

생체내 돼지쥐의 방광내압측정 모델로의 작용 지속기간 연구

더 완전한 모델 체계를 가지는 시험 화합물들을 평가하기 위하여, 자연적으로 느리게 채워지는 방광을 더 가깝게 모방한 방법이 사용되었다. 느리게 채워지는 방광내압측정도(CMG)는 비뇨기 방광의 기능장해를 측정하는데 임상적으로 사용된다(Ouslander, J. 등, J. Urol., 137：68-71(1987)). 이 임상적 CMG는 방광내압(Pves)을 동시에 측정하는 동안 액으로 채워지고, 비워지며, 다시 채워지도록 방광에 카테테르 도입을 시행한다. 채우는 속도가 반사 체계의 반응을 변경시킬 수 있으므로(Coolsaet, B. Neurourol. Urodyn., 4：263-273(1985)), 느린 속도를 선택한다.

이는 감각 체계가 정상적 욕구 및 배뇨반사 형태를 개시하기 전에 방광이 최대 용량/압력에 도달할 수 있도록 한다.

본 발명에서는 시험 화합물의 정액 주사 투여에 이어 방광을 반복하여 채움으로써 시험 화합물의 작용 지속기간을 결정하기 위하여 이 임상적인 시험 모형을 사용하고자 한다. 한계(threshold) 압력 이상의 최고압력은 시험 화합물에 의해 억제될 수 있고, 마취시킨 돼지쥐내에서 작용의 잠재성 및 지속 기간을 측정하는데 사용될 수 있는, 작용의 중요한 측정 한계이다.

방법 :

동물 실험 재료

돼지쥐의 암컷(350-500g, 챨스 리버 실험실로부터 이계 교배시킨것：Crl：(HA) BR Hartley, V.A.F.로 기른것)을 랄스톤 퓨리나 돼지쥐 챠우 #5025 및 임의의 수도물을 공급하고, 70℃±2℉., RH 40-50%, 12시간 명/암 주기에서 소집단으로 (＜5)기른다.

마취 :

물에 150mg/ml의 우레탄 비율로 제조된 우레탄(시그마, #U-2500, 1.5gm/kg i.p.으로 유용함) 주사는 한번에 투여할 경우 과잉량을 투여할 염려가 있으므로, 약 30분 간격으로 80%+20%의 분할 투여를 한다.이로써 더 이상의 보충없이 세시간 또는 그 이상 안정된 마취상태를 유지한다.

동물의 준비과정 :

마취 유도, 후(later) 대퇴 정맥의 노출 및 주사를 위해 대퇴부 중간 부분을 면도한다. 체온을 유지시키기 위하여 가열시킨 작은 동물 판 위에 이것을 눕혀둔다. 말단 가까이에 몇몇의 측면 구멍을 가진 PE-100관으로 만들어진 비뇨용 카테테르를 식염수로 채워, 이를 요도를 통하여 방광속에 넣는다. 이때 계내로 공기가 조금도 들어가지 못하게 주의하고, 카테테르의 끝은 광유를 몇방울 떨어뜨려 윤활하게 한다. 카테테르는 압력 변환기(스타탐/고울드 모델 피-50), 주사기(Syringe) 펌프(하바드 모델 2274) 및 방광을 채운후 비우기 위한 배출구에서 일련의 세방향 정지콕에 의해 연결한다. 방광은 하복부 상에서 완만한 조작과 압력을 지닌, 개방된 배출구에서 완만한 주사기 흡입으로 비운다. 요도의 개방은 낭-현(purse-string) 봉합사(4-0 델마론 또는 실크, 3/8-원형 절단 바늘, 즉 P-3을 사용하여)로 카테테르의 주위에서 봉합한다. 주사기 펌프는 채우는 과정동안 방광내압을 측정하기 위해 변환기를 열어놓으며 배출구는 닫아두어 보통의 염수가 실온에서 약 0.4ml/분으로 운반되도록 맞춘다.

변환기는 물이 든 컬럼을 사용하여 실험에 앞서 균형을 이루도록 하고, 보정하여 둔다. 대부분의 동물에 있어서, 0 내지 5.0kPa(0 내지 51cm H₂O와 동등함)의 실제 크기 범위가 가장 유용하다. 몇몇 경우에 있어서, 최고 수축 압력은 5kPa을 초과할 것이며, 정점 반응을 추적하기 위해서 0 내지 10kPa 크기로 급속한 전환이 필요하다. 챠트 기록계(고울드=모델 2400S)는 0.10mm/Sec의 챠트 속도로 Pves를 기록한다.

약품 제조과정 :

시험 약품 및 비교 화합물은 화합물을 원하는 농도의 용액으로 대개 정상염수에서 산성화된 또는 염기성화시킨 용액으로 제조된다. 약품은 약 0.5 내지 0.8ml의 부피에서, 선택된 mg/kg(유리 염기로 계산함)의 정맥주사투여로 운반된다. 작용 지속기간을 시험하기 위한 바람직한 투여량의 선택은 투여-반응 데이타가, 점점 증가시킨 일련의 투여량 측정을 이용하여 얻어지는 사전 연구를 토대로 한다. 억제 측정을 위해서는 대개, 충분한 저하신호가 관찰되지만 신호는 시험계의 소음으로 인하여 지워지거나 감추어지지 않도록 ID70-ID80을 선택 한다.

측정표 :

5-10분간 방광을 비워 "휴지(resting)"시킨 후, 식염수 주입을 개시한다. Pves는 채우는 과정을 시작하면서 측정한다. 대부분의 동물에 있어서, 이 지점은 이 첫번깨 조절된 채움 조작 동안 강한 수축이 일어나는 3 내지 15분 내에(대략 방광 부피의 1.2 내지 6ml) 도달될 것이다. 이 과정이 인식되고, 최고 압력이 내리면, 방광은 위와 같이 비게되며, 5분의 휴지기간이 시작된다. 재생할 수 있는 베이스 라인 조절장치를 정착시키도록 조절된 채움 과정을 일정한 휴지 기간과 함께 최소한 3회 계속 되풀이한다. 약품처리에 앞서 마지막 세번의 채움과정의 유용한 평균이, 반복되는 조절 채움조작의 목표이다(몇몇 동물에 있어서 인지할수 있는 수축 반응은 명백하지 않으며/또는 방광은 병을 나타내지는 않는다(압력은 부피가 증가함에 따라 계속적으로 그리고 급속히 증가한다). 만약 수축 반응이 20분(약 8ml 부피)내에 나타나지 않거나 또는 계속 증가하는 Pves가 2.5-3kPa을 초과하면, 방광은 비게되며, 일정한 5분의 휴지기간이 시작된다. 거의 모든 동물은 두번 또는 세번의 채움조작 후 전형적인 조절 반응을 일으키기 시작할 것이다.)

다음 측정치는 챠트 기록으로부터 얻는다:

PvesB=채움 조작의 초기에서 베이스라인 압력

PvesT=수축 반응의 관찰이 시작된 곳의 한계 압력

PvesM=수축 반응동안의 최대 Pves의 절대치

PvesP=PvesM-PvesT : 한계 압력위의 최고 압력

시간=PvesT가 기록될 때까지의 주입기간(그때 방광의 부피는 실제 운반 속도×시간이며, 어떤 신장 배설물도 무시한다).

원하는 조절된 채움의 마지막 과정후에, 대퇴정맥이 드러나며, 시험 약품을 일정한 5분간의 휴지기간 중간지점 동안에 정맥주사투여로 운반시킨다. 그후, 시험 약품 투여에 이어 시간에 따라 기록되는 변수의 변화를 관찰하도록 채움 조작을 반복한다. 한계 이상의 최고 압력(PvesP)은 시험 화합물의 작용 지속 기간동안 수축 강도의 억제를 측정하는 주요 수단으로 이용된다.

분석 :

기록된 변수의 측청치들을 표로 작성하고, 조절 측정치를 평균하며(대게 마지막 세 조절 채움과정), 후처리 결과와 비교하는데 사용한다. PvesP(및 다른 어떤 변수들도)는 조절로 퍼센트 변화에서 변화를 가져온다 :

[(결과/조절 평균값)^*100]-100 또한 약품 투여에 따라 시간에 대해 표를 작성한다.

각 동물이 그 자체의 조절작용을 제공하고, 동물들 사이에는 보통의 변화성이 존재하므로, 이 변수는 조절의 최대 저하가 관찰된 저하의 100%로서 정의되도록 최대 반응(즉, 최대 저하)의 100%로 표준화한다. 그러면 시간에 따른 모든 측정치는 관찰된 최대 저하와 관련된다.

표준화된 반응을 이용하여, 약품 투여에 따라 시간에 대한 측청치로 표는 얻어진다. 각 동물에 있어서, 그 표를 검사하고 표준화된 변수의 회복(recovery) 기울기를 결정하기 위해 직선회귀선을 도표화한다(이때 기울기는 %/min 단위이다).

데이타의 최종점은 기울기 기준의 정의를 써서 적당한 때에 삭제한다. 이는 기울기가 0과는 현저하게 차이나기 시작하며, 반응 회복 곡선의 양 끝에서 이전의 점을 포함하는 점을 선택한다. 그 후, 회귀선을 다시 계산한다. 그러면 변수 회복의 반감기는 원래의 절편에 관계없이 다음으로 얻어진다 :

T-1/2=50/기울기.(min)

반감기 측정치가 대개는 분포되지 않은 것으로 알려져 있으므로, 기하 평균(G.M) 및 값의 범위가 각 약품 처리에 대해 또는 다른 처리와 비교한 투여량으로 보고된다. 약품 처리간의 정규 시험의 중대성은 회복곡선의 회귀변수나 T-1/2에 대한 계산치에 대한 검정을 이용함으로써 얻을 수 있다.

결과 :

12 약품이 PvesP 수축 강도 변수(표 2) 조절 수준에 대한 회복에 대해 T-1/2 값을 결정하기 위하여 본 모델에 있어서 최초로 시험되었다. 작용 지속기간에 대한 시험에 선택된 투여량은 이전의 연구로부터의 ID70-ID80 평가치에 기초하고, 이 측정된 변수에 대한 등전위 투여량과 관련된다. 몇몇의 시험 화합물에 있어서, ID70-ID80에 도달하기 위해 필요한 투여량은 돼지쥐에 유독하거나 또는 불용성이다. 이러한 예는 표 1에 나타내었고, 모든 화합물에 대한 초기 억제작용을 표로 만들었다.

두 경우를 제외한 모든 약품은 옥시부티닌과 같거나 그보다 짧은 PvesP 저하 반감기를 보였다. 매우 긴값을 보이는 두 약품은 화합물 10(1.78배 더 길다)과 화합물 18(2.65배 더 길다)이었다.

기울기의 균등성에 대한 F-검정을 이용한, 이들 값은 모두 옥시부티닌의 기울기와는 매우 다르다(P＜0.00001).

화합물 18에 있어서는, 가장 낮은 범위의 값조차 옥시부티닌의 가장 높은 범위 값과 겹치지 않았다.

BOLUS 정맥 주사에 이은 등전위-유효^*억제 투여(Equieffective inhibitory doses)에서 생체내의 돼지쥐 방광내압 측정도(CMG)에 대한 수축억제 반감기

* 몇몇 약품은 본 변수의 "등전위" 저하에 충분한 투여량으로 운반될 수 있다 : 이러한 약품에 대해서는, 사용된 최대 투여량을 기록하였다.

** 가장 높은 값을 가진 두 동물들(T-1/2=495＆146분)은 본 세트에서 제외시켰다. 포함된 이들 값들의 기하평균은 57.0분이다.

∫n=동물 개체수

Claims

다음 일반식(I)의 디티안(dithiane)을 일반식(II)의 케톤과 반응시킨 후 디티안보호기를 제거하여 일반식(III)의 1, 7-치환된 헵틴-2-온 화합물을 제조하는 방법.

R₁R₂NCH₂C ≡ CCH₂CH₂-X …………………………………………… (I)

식(I)에서 X는 1, 3디타인이다.

식(II)에서, Ph는 R₄가 파라 위치에 있는 페닐기이다.

식(III)에서, R은 1 내지 7개의 탄소원자를 가지는 알킬, 3 내지 6개의 탄소원자를 가지는 시클로알킬, 7내지 11개의 탄소원자를 가지는 폴리시클로알킬, 또는 치환되거나 치환되지 않은 아릴, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴이고; R₁및 R₂는 각각 수소, 1 내지 3개의 탄소원자를 가지는 알킬, 페닐알킬, 1 내지 3개의 탄소원자를 가지는 페닐알킬이거나 R₁R₂는 n이 4 내지 6의 정수인 -(CH₂)-이고; R₃는 히드록시 또는 플루오르이며; R₄는 수소 또는 플루오르이다.
제1항에 있어서, R은 치환되거나 치환되지 않은 페닐, 나프틸, 테트라히드로나프틸 또는 피리딜임을 특징으로 하는 1, 7-치환된 헵틴-2-온 화합물의 제조방법.
제1항에 있어서, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로시클로기가 할로겐, 히드록시, 니트로, 메톡시, 메틸, 트리플루오르메틸, C(O)CH₃또는 아미노기로 치환되었음을 특징으로 하는 1, 7-치환된 헵틴-2-온 화합물의 제조방법.
제1항에 있어서, R은 시클로헥실, 시클로펜틸, 시클로부틸, 시클로프로필, 아다만탄, 페닐 또는 P-플루오르페닐이고 R₁및 R₂는 각각 수소, 메틸 또는 에틸임을 특징으로 하는 1, 7-치환된 헵틴-2-온 화합물의 제조방법.
제1항에 있어서, 1, 7-치환된 헵틴-2-온이 1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시 -7-에틸아미노헵트-5-인-2-온임을 특징으로 하는 제조방법.
제1항에 있어서, 1, 7-치환된 헵틴-2-온이 1-시클로헥실-1-페닐-1-히드록시-7-디메틸아미노헵트-5-인-2-온임을 특징으로 하는 제조방법.