KR940002797B1 - 고농도의 플라본 배당체 추출정제 방법 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

[발명의 명칭]

고농도의 플라본 배당체 추출정제 방법.

[발명의 상세한 설명]

본 발명은 은행잎으로부터 플라본 배당체를 추출, 정제하는 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 기존의 방법으로 추출되는 은행잎의 농축 알코올 추출물로부터 용해도차를 이용하여 혼합 플라본 배당체를 고동도로 추출정제하는 방법에 관한 것이다.

은행잎에 대한 생리활성은 독일연방공화국의 피이터, 피젤, 바이서등이 은행잎 엑기스가 모르모트의 혈액순환을 촉진한다고 발표[Arzneimittel Forschung 16, 719(1966) 참조]한 이래 다양한 연구가 수행되어 현재는 세계 여러국가에서 의약품으로 그 제제가 시판되고 있으며, 말초혈액순환 장해로 인한 버거씨병, 노인성 난시, 난청 및 보행장애, 사지 냉감등과 뇌혈관 순환장애로 인한 뇌졸중, 노망, 사지마비등에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

은행잎으로부터 약용제제를 제조하는 방법은 종래의 여러문헌에 개시되어 있다. 예를들면, 대한민국 특허 공고 제81-333호에서는 유기용매층에서 색소성분을 제거하기 위하여 흡착제를 사용하며, 플라보노이드의 함량을 높이기 위하여 납을 사용하기도 하였으나, 이는 엑스중에 납이 혼입될 우려가 있어서 약용의 목적에 부적합한 것이며, 또한 대한미국 특허공고 제89-651호에서는 납염의 혼입을 배제하기 위하여 무해한 무기염을 사용하여 플라보노이드를 침강시키는 방법을 개시하고 있으나, 이는 단순히 염석을 통하여 플라보노이드를 침강시키는 것으로 순도면에 있어서 개선점을 발견할 수 없었다.

또한, 종래 플라보노이드의 분리를 위하여 물과 메탄올의 혼합용매를 사용하거나[J.W.Clark-Lewis, Aust. J.Chem., 25, p1943(1972) 참조], 은행잎의 알코올 추출물을 농축한 후 여기에 물을 가해 용해도를 낮추어 플라보노이드의 침전을 얻는 방법[J.W.Clark-Lewis, Aust. J.Chem., 1, p425(1968) 참조]이 발표된 바 있으나, 이러한 방법에 의하면 극성이 낮은 비당체(非糖體)들은 쉽게 석출이 되나 상대적으로 극성이 높은 플라보노이드 배당체(配糖體)들은 석출되지 않으므로 약용제제의 제조에 사용하기에는 부적합한 것이었다.

따라서, 본 발명자는 상기한 선행기술의 제반 문제점을 해소하기 위하여 광범위한 연구를 거듭한 결과, 통상의 방법으로 제조한 은행잎의 농축 알코올 추출물로부터 메탄올 : 물 : 초산 또는 개미산 =1-9 : 9-1 : 0.01-1의 혼합용매를 사용하여 페놀성 물질인 플라본 배당체의 용해도를 적절히 조정하게 되면 약용제제에 적합한 혼합상태의 플라본 배당체의 판상 결정을 용이하고 안정하게 고농도로 수득할 수 있다는 놀라운 사실을 알게 되었다.

그러므로, 본 발명은 통상의 방법으로 제조되는 은행잎의 농축 알코올 추출물로부터 메탄올 : 물 : 초산 또는 개미산= 1-9 : 9-1 : 0.01-1의 혼합용매를 사용하여 플라본 배당체의 용매상에서의 용해도를 조정하여 혼합상태의 플라본 배당체 판상 결정을 고농도로 추출정제하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 방법에서, 메탄올과 물, 개미산 또는 초산의 비율을 상기 범위로 조정하는 것은 다가 페놀화합물로서 플라본 배당체보다 더 극성이 높은 탄닌류의 공침을 최소화하려는 것이고, 이렇게 하여 메탄올과 물의 혼합용매로 용해상태를 조절하고, 초산 또는 개미산으로 pH를 조절하여 최적조건에서 혼합 플라본 배당체를 고농도로 추출정제 하기 위한 것이다.

보다 구체적으로 설명하면, 혼합용매중의 메탄올과 물의 비율에서 물이 90%를 초과하는 경우에는 은행잎의 농축 알코올 추출물(건조엑스)이 잘 용해되지 않으므로 결정석출 조작이 불가능하고, 메탄올이 90%를 초과하는 경우에는 플라보노이드의 용해도가 너무 높아지므로 초산 또는 개미산으로 해리도를 낮추어 결정석출 조작을 할 수 있는 한계를 넘어서게 된다. 또한 초산 또는 개미산을 상기 규정범위보다 많이 가하는 경우에는 고극성의 탄닌류까지 해리도가 상다히 떨어져 공침하는 현상이 발생하므로 순도가 낮아져 약용으로 부적합하게 되며, 상기 규정범위보다 적게 가하는 경우에는 플라보노이드의 해리도가 충분히 낮아지지 않아 결정석출이 되지 않거나 한두가지 정도의 플라보노이드 밖에 석출되지 않으므로 약용으로 부적합하게 된다.

또한, 본 발명의 혼합용매를 사용하여 용해도차에 의한 플라본 배당체의 결정석출시의온도는 -5℃ 내지 5℃ 범위내가 적합하며, 온도가 5℃를 초과하면 산을 쓰더라도 약용제제에 부적합한 단일 플라본 배당체 결정이 석출되고, -5℃보다 낮으면 탄닌을 비롯한 불필요한 페놀성 화합물이 공침하여 순도가 떨어지게 된다.

본 발명의 방법에서 사용되는 은행잎의 농축 알코올 추출물은 공지의 방법으로 수득할 수 있다. 예를들어, 우선 가을에 단풍이 들기 직전에 채집하여 건조한 은행잎을 분쇄하여 추출기에 넣고 아세톤과 물의 혼합용매중에서추출한 다음, 그 추출액을 감압농축하고, 여기에 염화메틸렌, n-헥산, 석유에테르중에서 선택되는 1종 이상의 유기용매를 가하여 진탕혼합한 후 방치하여 수층과 유기용매층을 분리하고, 분리된 수층을 알코올로 추출하고, 수산화 나트륨으로 알칼리화한 다음, 다시 무기산으로 산성화하고 알코올로 재추출하고 감압하에 건조시켜 농축 알코올 추출물을 수득할 수 있다. 상기한 알콜의 예로는 이소부탄올, 2-부탄올, 부탄올 등이 잘 알려져 있다.

이와 같이 제조되는 은행잎의 농축 알코올 추출물을 본 발명의 방법에 따라 메탄올 : 물 : 초산 또는 개미산=1-9 : 9-1 : 0.01-1로 조정이 된 혼합용매 최소량을 가하여 녹이고 12-24시간 동안 -5℃ 내지 5℃의 온도에서 방치하면 혼합결정이 석출되며(플라본 배당체함량 24.0-45.0%), 이를 같은 조건하에서 2회 더 재결정하면 플라본 배당체 함량이 최고 98.0%까지 높아진다. 이때 석출되는 혼합결정의 모양은 판상이다.

이하, 비한정적인 실시예를 예시하여 본 발명을 보다 명백히 하기로 한다.

[실시예 1]

은행잎을 음건한 후 50메쉬 정도로 분쇄하여 얻은 은행잎 분말 1㎏에 부피비로 아세톤 : 물 = 4 : 1 혼합용매 4ℓ를 가하여 3시간동안 추출한 다음 감압하에서 증발 농축하였다. 이 농축액 500㎖에 염화메틸렌을 500㎖씩 3회에 걸쳐 가하여 추출하고 방치하여 염화메틸렌층과 수층을 분리하였다. 분리된 수층에 부탄올을 2ℓ 씩 3회에 걸쳐 가하여 세척하였다. 다음 5% 수산화나트륨을 3회에 걸쳐 2ℓ씩 가하여 알칼리용액층 으로 이행한후 , 부탄올층과 수층을 분리하고, 분리된 수층에 2-N 염산을 가하여 pH 4로 조정하고, 부탄올을 2회에 걸쳐 2ℓ씩 가하여 추출한후 48-50℃의 온도에서 감압건조하여 건조엑스 14.0g을 얻었다.

수득된 건조엑스에 메탄올 : 물 =4 :6 혼합용매를 가하여 미쳐 용해되지 않은 건조엑스가 극미량 부유할 정도로 용해시키고 초산을 소량씩 서서히 가하여 pH 4.0이 되도록 한 다음 -5℃에서 18시간 방치하여 플라본 배당체 혼합 조결정 4.0g(플라본 배당체 함량 40.0%)을 얻었다. 이를 상기한 방법으로 2회 더 재결정한 결과, 플라본 배당체 함량 98.0%의 판상 혼합결정이 석출되었다.

[실시예 2]

실시예1에서 얻은 건조엑스를 메탄올 : 물 : 초산=3 : 7 : 0.18의 혼합용매중에서 결정화온도 0℃에서 24시간 방치하였다. 그 결과 플라본 배당체 혼합 조결정 3.9g(플라본 배당체 함량 43.8%)이 수득되었다. 이를 다시 2회더 재결정한 결과, 플라본 배당체 함량 98.0%의 판상 혼합결정이 수득되었다.

[실시예 3]

초산 대신 개미산을 사용하고, 결정화 온도 -2℃에서 24시간 동안 방치한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 절차를 반복하였다. 그 결과 석출된 판상 혼합결정은 플라본 배당체 함량이 98.0%이었다.

[비교 실시예 ]

분쇄한 은행잎 1㎏에 물 4ℓ를 가하여 초음파로 추출하고 50℃의 온도에서 클로로포름 1ℓ로 분획한후, 수층을 다시 부탄올 1ℓ로 3회 추출하고, 황산암모늄 310g을 사용하여 침강시킨후 재차 황산암모늄 290g을 가하여 계속 침강시키고, 75% 에탄올 0.5ℓ에 용해시키고 활성탄 50g으로 처리후 건조시켰다.

수득된 생성물의 플라본 배당체 함량은 최고34.8%이었다.

상기한 본 실시예와 비교예로부터 알 수 있는 바와 같이, 플라본 배당체의 용매상에서의 해리도를 적절하게 조정하여 약용제제에 적합한 혼합상태의 플라본 배당체 결정을 고농도로 추출정제하는 본원 발명은 고부가치의 신규유용한 발명인 것이다.

Claims (2)

1. 건조, 분쇄한 은행잎을 아세톤과 물의 혼합용매로 추출하고, 비극성 용매로 지용성 물질을 제거한 후 남은 수용액을 알코올로 추출하고 알칼리층으로 이행한후 무기산으로 산성화한 다음, 다시 알코올로 재추출하고 감압 건조시켜 준비한 은행잎의 농축 알코올 추출물로부터 고농도의 플라본 배당체를 추출정제하는 방법에 있어서, 상기 은행잎의 농축 알코올 추출물에 메탄올 : 물 : 초산 또는 개미산=1-9 : 9-1 : 0.01-1의 혼합용매를 가한후 -5℃ 내지 5℃의 온도범위에서 결정화시키는 것을 특징으로 하는 고농도의 플라본 배당체 추출정제방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 메탄올, 물 및 초산 및 개미산으로된 혼합용매하의 결정화 공정을 반복하는 것을 특징으로하는 고농도의 플라본 배당체 추출정제방법.