KR930013102A - 바실러스로부터 정제된 파라-니트로벤질 에스테라제 - Google Patents

바실러스로부터 정제된 파라-니트로벤질 에스테라제 Download PDF

Info

Publication number
KR930013102A
KR930013102A KR1019920024768A KR920024768A KR930013102A KR 930013102 A KR930013102 A KR 930013102A KR 1019920024768 A KR1019920024768 A KR 1019920024768A KR 920024768 A KR920024768 A KR 920024768A KR 930013102 A KR930013102 A KR 930013102A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
pnb
reducing agent
dialysate
esterase
concentrate
Prior art date
Application number
KR1019920024768A
Other languages
English (en)
Inventor
시게유끼 우수이
창-안 유
Original Assignee
원본미기재
일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 원본미기재, 일라이 릴리 앤드 캄파니 filed Critical 원본미기재
Publication of KR930013102A publication Critical patent/KR930013102A/ko

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/16Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P35/00Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 바실러스 속 미생물로 부터 정제된 PNB에스테라제를 제공한다. 상기 효소는 약 54,000달론의 분자량을 갖는 단량체이다. 상기 PNB에스테라제는 세팔로스포린및 1-카바세팔로스포린 화합물의 PNB-에스테르를 유리산 형태로 탈에스테르화시키는 과정을 촉진한다. 본 발명은 또한 바실러스 종으로 부터 효소를 정제하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 황산 암모늄 분별, pH처리, 음이온-교환 크로마토그래피, 겔 여과, 흡착-탈착 크로마토그래피 및 친화도 크로마토그래피의 조합을 포함한다.

Description

바실러스로부터 정제된 파라-니트로벤질 에스테라제
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 단백질 표준물화 PNB에스테라제의 분자량 대 SDS-PAGE에 의한 이동도의 반로그 플롯이다,
제2도는 플라스미드 pNBE1의 제한 효소 부위와 작용지도이다,
제3도는 플라스미드 pNB106R의 제한 효소 부위와 작용지도이다.

Claims (5)

  1. 충분히 정제된 형태의 p-니트로벤질-에스테라제.
  2. 하기단계(a)내지(m)을 포함하는, 제1항의 PNB에스테라제를 충분히 순수한 형태로 제조하는 방법 : (a) 약 PH7에서 PNB에스테라제를 함유하는 수성 무세포 추출물에 황산 암모늄을 가하여 약45%내지 80%포화도의 황산 암모늄 농도를 달성하고, 생성된 침전물을 수거하고, (b) 환원제의 종재하에 약 pH7로 완충된 침전물 용액을 투석시키고, (c)상기 투석물을 약 pH5로 산성화시키고, 침전물을 제거한 후, 투석물을 약 pH8.5로 조정하고, (d)상기 투석물을 약 음이온 교환 수지상에서 크로마토그래피 시키고, 약 pH7의 완충제중에서 환원제의 존재하에 0.05M내지 0.3NaCl의 선형 구배로 상기 수지로부터 PNB 에스테라제를 용출시키고, (e) 상기단계 (d)의 PNB에스테라제-함유 용출액을 모아서 농축시키고, (f) 환원제의 존재하에 약 pH8.0에서 폴라사카라이드-타입 겔을 통해 상기 단계(e)의 농축물을 여과시키고, (g) 상기 단계 (f)의 PNB-에스테라제 함유 용출액을 모아서 통축시키고, 환원제의 존재하에 pH8.5로 완충된 농축물의 용액을 투석시키고, (h)상기 단계 (g)의 농축물을 약 pH8.5에서 음이온 교환 수지상에서 크로마토그래피시키고, 약 pH6의 완충제중에서 환원제의 존재하에 0.1M내지 0.3M NaCl의 선형 구배로 상기 수지롤 부터 PNB 에스테라제를 용출시키고, (i)상기단계 (h)의 PNB에스테라제-함유 용출액을 모아서 농축시키고, 환원제의 존재하에 약 pH5.0으로 완충된 농출물 용액을 투석시킨후, 투석물을 수거하고, (j)상기 투석물을 약 pH6에서 인산칼슘-셀룰로즈상에서 크로마토그래피시키고, 환원제의 존재하에 약 pH7에서 0.01내지 0.10M인산 칼슘의 선형 구배로 상기 셀룰로즈로부터 PNB에스테라제를 용출시키고, (k)상기단계 (j)의 PNB에스테라제-함유용출액을 모아서 농축시키고, 환원제의 존재하에 약 pH8로 완충된 농축물의 용액을 투석시킨후, 투석물을 수거하고, (l)약 pH8에서 상기 투석물을 아미노벤즈아미딘-아가로즈상에서 크로마토그래피시키고, 환원제의 존재하에 약 pH8에서 0내지 0.30M NaCl의 선형 구배로 상기 아가로즈로부터 PNB에스테라제를 용출시키고, (m)상기단계 (l)의 PNB에스테라제-함유 용출액을 모아서 농축시킨다(이때, 상기단계(a) 내지 (m)은 약 0℃내지 4℃의 온도에서 수행한다.).
  3. 하기단계(a) 내지 (i)를 포함하는, PNB에스테라제를 발현시킬 수 있는 제조합 숙주 세포로부터 충분히 정제된 형태로 PNB에스테라제를 제조하는 방법 : (a) 약 pH7에서 PNB에스테라제를 함유하는 수성 무세포 추출물에 황산 암모늄을 가하여 약 45% 내지 85%포화도의 황산 암모늄 농도를 달성하고, 생성된 침전물을 수거하고, (b)환원제의 존재하에 약 pH7로 완충된 침전물 용액을 투석시키고, (C)상기 투석물을 약 pH5로 산성화시키고, 침전물을 제거한 후, 투석물을 약 pH8.5로 조정하고, (d)상기 투석물을 약 음이온 교환 수지상에서 크로마토그래피 시키고, 약 pH7의 완충제중에서 환원제의 존재하에 0.05M내지 0.3M NaCl의 선형 구배로 사익 수지로부터 PNB에스테라제를 용출시키고, (e)상기 단계(d)의 PNB에스테라제-함유 용출액을 모아서 농축시키고, (f) 약 pH8에서 상기 투석물을 P-아미노벤즈아미딘-아가로즈 상에서 크로마토그래피시키고, 환원제의 존재하에 약 pH8.0에서 0 내지 0.30M NaCl의 선형구배로 상기 아가로즈로부터 PNB에스테라제를 용출시키고, (g)상기 단계 (f)의 PNB-에스테라제함유 용출액을 모아서 농축시키고, 환원제의 존재하에 pH8.5로 완충된 농축물의 용액을 투석시키고, (h) 상기 단계(g)의 농축물을 약 pH8.5에서 음이온 교환수지상에서 크로마토그래피시키고, 약 pH6의 완충제중에서 환원제의 존재하에 0.1M 내지 0.3M NaCl의 선형구배로 상기 수지로 부터 PNB에스테라제를 용출시키고, (i) 상기단계(h)의 PNB에스테라제-함유 용출액을 모아서 농축시키고, 환원제의 종재하에 약 pH5.0으로 완충된 농축물 용액을 투석시킨후, 투석물을 수거한다.
  4. 세팔로스포린 PNB에스테르 또는 1-카바세팔로스포린 PNB에스테르를 제1항의 PNB에스테라제와 반응시킴을 포함하는, 상기 에스테르로 부터 p-니트로벤질 그룹을 제거하는 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기와 같이 생성된 세팔로스포린이 세파클로르 또는 로라카베프인 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019920024768A 1991-12-20 1992-12-19 바실러스로부터 정제된 파라-니트로벤질 에스테라제 KR930013102A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US81138791A 1991-12-20 1991-12-20
US811,387 1991-12-20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR930013102A true KR930013102A (ko) 1993-07-21

Family

ID=25206399

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019920024768A KR930013102A (ko) 1991-12-20 1992-12-19 바실러스로부터 정제된 파라-니트로벤질 에스테라제

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP0549264A1 (ko)
JP (1) JPH05292961A (ko)
KR (1) KR930013102A (ko)
BR (1) BR9205054A (ko)
CA (1) CA2085803A1 (ko)
HU (1) HUT69971A (ko)
IL (1) IL104141A0 (ko)
MX (1) MX9207384A (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX9207379A (es) * 1991-12-20 1993-07-01 Lilly Co Eli Compuestos de adn recombinante y vectores de expresion que codifican para una para-nitrobencilesterasa de bacillous subtilis.
DE102005037659A1 (de) 2005-08-05 2007-02-22 Henkel Kgaa Verwendung von Esterasen zur Spaltung von Kunststoffen
EP2873736A1 (en) 2013-11-18 2015-05-20 Sandoz AG Chemoenzymatic synthesis of the cephalosporine intermediate 7-amino-3-alkenylcephem-4-carboxylic acid
US11103444B1 (en) 2017-10-20 2021-08-31 B&R Plastics, Inc. Teeth cleaning for animals

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3972774A (en) * 1975-07-28 1976-08-03 Eli Lilly And Company Enzymatic de-esterification of cephalosporin para-nitrobenzyl esters
EP0243167B1 (en) * 1986-04-22 1992-08-19 Sumitomo Chemical Company, Limited A novel microorganism, a novel esterase and method for preparing the same
CA2018367A1 (en) * 1989-06-12 1990-12-12 Chang-An Yu Purified enzyme and process therefor
ES2133140T3 (es) * 1990-01-12 1999-09-01 Glaxo Group Ltd Secuencia de adn que codifica una enzima de biosintesis de antibioticos.

Also Published As

Publication number Publication date
CA2085803A1 (en) 1993-06-21
HU9204038D0 (en) 1993-04-28
EP0549264A1 (en) 1993-06-30
BR9205054A (pt) 1993-06-22
MX9207384A (es) 1993-07-01
IL104141A0 (en) 1993-05-13
HUT69971A (en) 1995-09-28
JPH05292961A (ja) 1993-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SU1431691A3 (ru) Способ получени гликопротеина
US4673734A (en) Porous mineral support coated with an aminated polysaccharide polymer
Iibuchi et al. Studies on tannin acyl hydrolase of microorganisms: Part III. Purification of the enzyme and some properties of it
AU4251989A (en) Method for the purification of proteins
US5234991A (en) Porous mineral support coated with an aminated polysaccharide polymer
PT893450E (pt) Metodo cromatografico para purificacao de elevado rendimento e inactivacao viral de anticorpos
JPH0231687A (ja) 血清アルブミンの純化方法
AU656552B2 (en) Process for isolating human albumin from supernatant IV, in particular IV-4, or from COHN's fraction V or from an analogous supernatant or fraction
Tomoda et al. Acid Protease Produced by Trametes sanguinea, a Wood-destroying Fungus: Part I. Purification and Crystallization of the Enzyme Part II. Physical and Enzymological Properties of the Enzyme
KR930013102A (ko) 바실러스로부터 정제된 파라-니트로벤질 에스테라제
Cassidy et al. Purification of staphylococcal alpha-toxin by adsorption chromatography on glass
Rihn et al. A new purification procedure for Clostridium difficile enterotoxin
KR900702011A (ko) 제 x ⅲ 인자의 정제
SE8401664D0 (sv) Forfarande for rening av tylosin
US5525500A (en) Chromatographic process for the copurification of chondroitinase I and II proteins from Proteus vulgaris
EP0188053A2 (en) Purification of superoxide dismutase
DE59813491D1 (de) Verfahren zur Herstellung eines eine Hyaluronidase enthaltenden Präparats
KAMEI et al. Cholesterol esterase produced by Streptomyces lavendulae. II. Purification and properties as a lipolytic enzyme
EP0059182B1 (en) A process for isolating aminoacylase enzyme from a mammal kidney extract
Scott et al. Affinity chromatography purification of Clostridium perfringens enterotoxin
CA2058453A1 (en) Chymosin recovery and purification
EP0868507B1 (en) Process for the purification of urease from helicobacter pylori
AU7955687A (en) Method for purification of antibodies
KR950023726A (ko) 한국형 씨(c)형 간염 바이러스의 항원 결정부위 융합 단백질인 유비엔에스4 이 12-ii(ubns4e12-ii)의 정제방법
KR920006399B1 (ko) 비브리오 프로테오리티커스로부터 아미노펩티다제의 정제방법

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid