KR920005994A

KR920005994A - 전체혈장으로 혈액응고 viii 인자-반 빌레브란트 인자 복합 농축물을 제조하는 방법

Info

Publication number: KR920005994A
Application number: KR1019900014264A
Authority: KR
Inventors: 봐르누-라도세뷔 마리안느; 봐르누 티에리
Original assignee: 샹트르 라지옹드 트랑스퓌지옹 상권느 드 릴르
Priority date: 1990-09-10
Filing date: 1990-09-10
Publication date: 1992-04-27
Also published as: KR0168415B1

Abstract

내용 없음

Description

전체혈장으로 혈액응고 Ⅷ 인자-반 빌레브란트 인자 복합 농축물을 제조하는 방법

본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims

전체혈장을 염화바륨과 수산화 알루미늄으로 2중 처리하여 예비-정제하고 또한 대형크기의 분자를 보존할 수 있는 음이온 교환 겔상의 크로마토그래피로 정제하는 것을 특징으로 하는 높은 특히 활성도의 안정한 Ⅷ 인자-반 빌레브란트 인자 복합농축물을 제조하는 방법.
제1항에 있어서, 전체혈장이 신선한 또는 냉동 혈장인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 또는 2항에 있어서, 0.2 내지 2U/ml 헤파린, 1 내지 5mM의 ETDA와 또는 1 내지 10mM의 CaCl₂로 된 안정화 혼합물을 혈장에 첨가하는 것을 특징으로 하는 방법.
제3항에 있어서, 안정화 화합물에 5 내지 60g/l농도의 글루코오스가 들어있는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제4항에 있어서, a) 염화바륨으로 침전시킨 후, 상청액을 원심분리하여 수득하고, b) 수산화 알루미늄겔에 흡착시킨 후 상청액을 원심분리하여 수득하고 또한, c) 탈염처리하는 것으로 된 예비-정제를 특징으로 하는 방법.
제5항에 있어서, pH 6.5의 1M염화바륨용액을 교반하면서 첨가하여 염화바륨을 이용한 침전에 효과를 주고 그 후 5℃ 내지 10℃로 원심분리하여 상청액을 수득하는 것을 특징으로 하는 방법.
제5항 또는 6항에 있어서, pH 6.5의 3% 수산화 알루미늄겔을 사용하여 흡착하고 그후 5℃로 급속냉각하고 원심분리하여 상청액을 수득하는 것을 특징으로 하는 방법.
제5항 내지 7항 중 어느 한 항에 있어서, 헤파린이 첨가된 충전 완충액의 존재하에서 한외 여과하여 탈염처리 한 후 다음의 크로마토그래피 단계에 사용하는 것을 특징으로 하는 방법.
제5항 내지 7항 중 어느 한 항에 있어서, 헤파린이 첨가된 충전 완충액속에 있는 세파덱스 G25 컬럼상에서의 크로마토그래피로 탈염처리한 후 후속 크로마토그래피 단계에 사용하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 9항 중 어느 한 항에 있어서, 예비-정제한 혈장의 상청액을 매우 큰 분자를 차단하지 않고 또한 피브리노겐, 알부민, 면역글로부린, 항트톰빈 Ⅲ과 피브로넥틴이 여액속으로 들어가게 하는 음이온 교환겔이 들어 있는 크로마토그래피 컬럼속에 주입하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 10항 중 어느 한항에 있어서, 크로마토그래피 겔이 DEAE나 T- 또는 D-MAE종루가 고착된 비닐 고분자형겔인 것을 특징으로 하는 방법.
제11항에 있어서, 고분자 겔이 프렉토겔인 것을 특징으로 하는 방법.
제10항 내지 12항 중 어느 한항에 있어서, 크로마토그래피 컬럼충전 완충액이 글리신과 리신이 들어있는 시르산 나트륨 및 염화나트륨 기초 완충액이고 여기에 0.11M염화나트륨을 첨가하고 pH7로 조정하는 것을 특징으로 하는 방법.
제13항에 있어서, 완충액이 8 내지 11g/l글리신과 2 내지 4g/l리신이 들어 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제10항 내지 14항 중 어느 한 항에 있어서, 완충액의 이온농도가 염화나트륨에 대해 0.27로 증가하여 Ⅷ인자-반 빌레브란트 인자 복합물을 크로마토그래피 컬럼에서 탈착시키는 것을 특징으로 하는 방법.
제10항 내지 14항 중 어느 한 항에 있어서, 완충액의 이온농도를 0.13M로 증가시켜 피브로넥틴을 제거하고 그후 다시 0.27M로 증가시켜 Ⅷ인자-반 빌리브란트 인자 복합물을 크로마토그래피 컬럼에서 탈착시키는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서, 크로마토그래피 컬럼에서 탈착된 Ⅷ인자-반 빌레브란트 인자 복합물을 크로마토그래피에 의한 또 다른 정제 및 농축단계로 보내는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 17항 중 어느 한 항에 있어서, 이 또 다른 크로마토그래피 처리를 DEAE- 또는 T/D-MAE-프렉토겔, 부동화아미노-헥실, 부동화 헤파린, 황산 덱스트란, 설포프로필 또는 친화성 또는 면역친화성 수지중에서 선택한 이온 교환 수지상에서 실행하는 것을 특징으로 하는 방법.
제17항 또는 18항에 있어서, 0.11M 염화나트륨으로 고정한 완충액으로 크로마토그래피 처리하고 그 이온농도를 0.13M과 그후 0.27M으로 증가시키는 것을 특징으로 하는 방법.
제17항 또는 18항에 있어서, 0.17M 염화나트륨으로 고정한 완충액으로 크로마토그래피 처리하고 이온농도를 0.27M까지 한번에 증가시키는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 14항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 제10항에 따른 크로마토그래피 여액에 들어있고, 이것을 또 다시 정제하고 농축시키는 단계로 보내는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 21항 중 어느 한 항에 있어서, 용매-세척제를 사용하여 종래의 바이러스 비활성 처리한 후 크로마토그래피 단계로 보내는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 22항 중 어느 한 항에 따르는 방법으로 수득하는 것을 특징으로 하는 Ⅷ 인자-반 빌레브란트 인자복합 농축물.
제1항 내지 14항과 21항 또는 22항 중 어느 한 항에 따르는 방법으로 수득하는 것을 특징으로 하는 혈장유도 단백질 농축물.
제23항 또는 24항에 있어서, 치료학적으로 사용할 수 있는 제조한 것을 특징으로 하는 농축물.

※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.