KR910700341A - 합성 인터루킨-6 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

합성 인터루킨-6

본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

제1도는 p360의 구조의 다이아그램.

제2도는 p369의 구조의 다이어그램.

제3도는 합성된 시스테인 없는 IL-펩티드의 유전자 배열을 포함하는 폴라스미드의 발현과 미발현.

Claims (130)

1. 제1, 제2, 제3단백질 부위를 가진 3혼성 단백질로 제1펩티드 부위는 IL-6 활성을 가지고 제2펩티드부위는 제1과 제3펩티드 부위 사이에서 화학적 혹은 효소적으로 절단될 수 있는 연결부위로 구성되어 있으며 제3펩티드 부위는 숙주세포에 의해 발현될 수 있는 능력을 가진 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 합성3혼성 단백질을 코드하는 염기배열로 구성된 재조합 유전자.
2. 제1항에 있어서, IL-6 활성을 가진 제1펩티드 부위가 설퍼히드릴(SH) 결합을 할 능력이 없는 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
3. 제1항 혹은 2항에 있어서, 펩티드 연결부위로 구성된 제2펩티드 부위는 단백질 분해요소에 반응성이 있는 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
4. 제3항에 있어서, 제2펩티드 부위가 콜라겐나제 활성부위를 가지는 것을 특징으로 하는 유전자.
5. 제3항에 있어서, 제2펩티드 부위가 엔테로키나재 활성부위를 가지는 것을 특징으로 하는 유전자.
6. 제3항에 있어서, 제2펩티드 부위가 인자 Xa 활성부위를 가지는 것을 특징으로 하는 유전자.
7. 제1 혹은 2항에 있어서, 제3펩티드 부위가 β-칼락토시다제 혹은 그 부위로 구성된 것을 특징으로 하는 유전자.
8. 제1 혹은 2항에 있어서, 제3펩티드 부위는 TrpE 유전자 산물로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
9. 제1항에 있어서, 제1펩티드 부위가 설퍼히드릴(SH) 결합을 형성할 능력이 없고, 제2펩티드는 콜라겐나제 활성 부위를 가지고, 제3펩티드 부위는 β-갈락토시다제 효소활성을 가진 단백질로 구성된 경우을 특징으로 하는 재조합 유전자.
10. 제1항에 있어서, 제1펩티드 부위가 설퍼히드릴(SH) 결합을 형성할 능력이 없고, 제2펩티드 부위가 엔테로키나제 활성부위를 가지며, 제3펩티드 부위는 TrpE유전자 산물 혹은 그 부위 단백질로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
11. 제1항에 있어서, 제1펩티드 부위가 설퍼히드릴(SH) 결합을 형성할 능력이 없고, 제2펩티드 부위가 인자 Xa 활성부위를 가지며, 제3펩티드 부위는 TrpE 유전자 산물 혹은 그 부위 단백질로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
12. 제1항에 있어서, 제1펩티드 부위가 설퍼히드릴(SH) 결합을 형성할 능력이 없고, 제2펩티드 부위가 엔테로키나제 활성부위를 가지며, 제3펩티드 부위가 β-갈락토시다제 유전자 배열 혹은 그 부위로 된것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
13. 제1항에 있어서, 제1펩티드 부위가 설퍼히드릴 결합형성 능력이 없고, 제2펩티드 부위가 인자 Xa 활성 부위를 가지고, 제3펩티드 부위가 인자 Xa 활성부위를 가지고, 제3펩티드 부위가 β-갈락토시다제 염기배열 혹은 그 부위 단백질로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
14. 제9항 내지 13항중 어느 한항에 있어서, 제2펩티드 부위에서 절단된 후 제1펩티드 부위가 제2펩티드 부위가 아미노산 잔기를 가지지 않는 경우를 특징으로 하는 재조합 유전자.
15. 제2항에 있어서, IL-6 아미노산 배열을 코드하는 DNA 염기서열이 도면 5에 설명된 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
16. 제3항에 있어서, IL-6 아미노산 배열을 코드하는 DNA 염기서열이 도면 5에 설명된 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
17. 제4항에 있어서, IL-6 아미노산 배열을 코드하는 DNA 염기서열이 도면 5에 설명된 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
18. 제5항에 있어서, IL-6 아미노산 배열을 코드하는 DNA 염기서열이 도면 5에 설명된 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
19. 제1항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
20. 제2항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
21. 제3항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
22. 제4항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
23. 제5항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
24. 제6항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
25. 제7항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
26. 제8항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
27. 제9항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
28. 제10항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
29. 제11항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
30. 제12항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
31. 제13항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
32. 제14항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
33. 제15항에 따르는 유전자로 구성된 재조합 벡터.
34. pTrpE/EK/cfIL-6; pβ Gal/EK/cfIL-6; pTrpE/Xa/cfIL-6 혹은 pβ Gal/EK/cfIL-6로 구성된 플라스미드.
35. 제19항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
36. 제20항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
37. 제21항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
38. 제22항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
39. 제23항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
40. 제24항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
41. 제25항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
42. 제26항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
43. 제27항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
44. 제28항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
45. 제29항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
46. 제30항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
47. 제31항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
48. 제32항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
49. 제33항에 따르는 벡터를 포함한 단세포 숙주.
50. 제35항 내지 49항중 어느 하나가 원시핵 세포가 단세포 숙주인 경우.
51. 제50항에 있어서, 박테리아가 단세포 숙주인 경우.
52. a) 합성 3중합 단백질이 제1펩티드 부위가 IL-6 활성을 가지고, 제2펩티드 부위가 제1과 제3펩티드 부위 사이의 화학적으로 절단될 수 있는 연결 부위로 구성되어 있고 제3펩티드 부위가 단세포 숙주에 의해 발현될 수 있는 합성 혼성단백질을 코드하는 염기 서열로된 재조합유전자로 복제, 전사, 해독이 숙주에서 가능한 유전자를 가진 단세포 숙주 미생물을 배양하고; b) 숙주에 의해 생성되는 삼부분 단백질을 확인하고; c) 제2펩티드 부위를 화학적 혹은 효소적으로 절단하고; 그리고 d) IL-6 활성을 가진 제1펩티드 부위를 회수하는 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 IL-6 활성을 가진 펩티드 생산방법.
53. 제52항에 있어서, 제2펩티드 부위가 단백질 분해효소에 반응성이 있는 연결부위로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
54. 제53항에 있어서, 제2펩티드 부위가 콜라겐나제 활성을 가진 부위로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
55. 제53항에 있어서, 제2펩티드 부위가 엔테로키나제 활성을 가진 부위로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
56. 제53항에 있어서, 제2펩티드 부위가 인자 Xa 활성을 가진 부위로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
57. 제53항에 있어서, 제3펩티드 부위가 β-갈락토시다제 배열 혹은 그 부위로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
58. 제53항에 있어서, 제3펩티드 부위가 TrpE 유전자 산물로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
59. 제53항에 있어서, 제1펩티드 부위는 설퍼히드릴 결합형성 능력이 없고 제2펩티드 부위는 콜라겐나제 활성부위를 가지고 제3펩티드 부위는 β-갈락토시다제 효소활성 단백질로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
60. 제59항에 있어서, 제1펩티드 부위는 설퍼히드릴 결합형성 능력이 없고 제2펩티드 부위는 엔테로키나제 활성부위를 가지고 제3펩티드 부위는 TrpE 유전자 산물 혹은 그 부위 단백질로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
61. 제59항에 있어서, 제1펩티드 부위는 설퍼히드릴 결합형성 능력이 없고 제2펩티드 부위는 인자 Xa 활성 부위를 가지고 제3펩티드 부위는 TrpE 유전자 산물 혹은 그 부위 단백질로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
62. 제59항에 있어서, 제1펩티드 부위는 설퍼히드릴 결합형성 능력이 없고 제2펩티드 부위는 엔테로키나제 활성 부위를 가지고 제3펩티드 부위는 β-갈락토시다제 염기서열 혹은 그 부위 단백질로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
63. 제59항에 있어서, 제1펩티드 부위는 설퍼히드릴 결합형성 능력이 없고 제2펩티드 부위는 인자 Xa 활성 부위를 가지고 제3펩티드 부위는 β-갈락토시다제 염기서열 혹은 그 부위 단백질로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
64. 제59항에 있어서, 제2펩티드 부위는 절단한 후에 제1펩티드 부위가 제2펩티드 부위의 아미노산 잔기를 보유하지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
65. 제52 내지 64항중 어느 한항에 있어서, 삼중혼성 단백질이 숙주개체에 의해 생성되는 전체 단백질의 적어도 20%로 구성되는 경우를 특징으로 하는 방법.
66. 제52 내지 64항중 어느 한항에 있어서, 숙주개체가 원시핵 세포인 경우에 있어서의 방법.
67. 제52 내지 64항중 어느 한항에 있어서, 숙주개체가 박테리움인 경우에 있어서의 방법.
68. 제65항에 있어서, 숙주가 박테리우인 경우에 있어서 방법.
69. 제52 내지 64항중 어느 한항에 있어서, 제1펩티드 부위가 설퍼히드릴 결합을 가지지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
70. 제52 내지 64항중 어느 한항에 있어서, 제1펩티드 부위가 도면에 IL-6 아미노산 서열로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
71. 제70항에 있어서, 삼중혼성 단백질이 숙주개체에 의해 형성되는 총단백질의 적어도 20%로 구성되는 경우를 특징으로 하는 방법.
72. ATCC 수락번호 40516(p340)인 재조합 플라스미드.
73. ATCC 수락번호 40517(p367)인 재조합 플라스미드.
74. 제1펩티드 부위가 IL-6 활성을 가지고, 제2펩티드 부위가 절단되는 펩티드로 구성되고, 제3펩티드 부위가 선택된 숙주개체에 의해 발현될 수 있는 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 실재상의 순수한 재조합 단백질.
75. 제1항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
76. 제2항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
77. 제3항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
78. 제4항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
79. 제5항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
80. 제6항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
81. 제7항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
82. 제8항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
83. 제9항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
84. 제10항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
85. 제11항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
86. 제12항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
87. 제13항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
88. 제14항에 따르는 유전자에 의해 코딩된 재조합 단백질.
89. 도면 8b에 설명된 IL-6과 콜가겐 아미노산 서열을 가진 재조합 단백질.
90. 제75 내지 88항중 어느 한항에 있어서, 단백질이 화학적 혹은 효소적으로 절단되어 생성된 IL-6 활성을 가진 재조합 단백질.
91. 제75항 내지 78항에 있어서, 시스테인 없고, 단백질이 화합물 혹은 효소에 의해 절단되어 절단후에 제2펩티드 부위의 아미노산 잔기를 포함하지 않은 IL-6 활성을 가진 재조합 단백질.
92. 물에 실질적으로 용해되는 IL-6 활성을 가진 합성 펩티드.
93. 제59항에 따르는 설퍼히드릴 결합을 형성할 수 없는 것을 특징으로 하는 합성 펩티드.
94. 도면 5에서 시스테인이 없는 IL-6 아미노산 배열이나 혹은 어떤 동형의, 유형의 혹은 그활성 부위의 배열을 가진 것을 특징으로 하는 합성 펩티드.
95. 도면 5에서 시스테인이 없고 콜라겐 연결부위의 아미노산이 부분적 혹은 전체적으로 삭제된 것을 특징으로 하는 합성 펩티드.
96. 도면 5에서 시스테인이 없고 콜라겐 연결부위의 모든 아미노산과, IL-6 단백질의 콜라겐을 연결하는 세린잔기가 삭제된 IL-6 아미노산 배열을 가지는 것을 특징으로 하는 합성 펩티드.
97. 제94항 내지 96항중 어느 한항에 있어서, 제2아미노산의 N말단 배열이 글리신 대신에 프롤린을 포함하는 경우를 특징으로 하는 합성 펩티드.
98. 제94항 내지 97항중 어느 한항에 있어서, N말단 배열의 시작 메티 오닌이 부족한 경우를 특징으로 하는 합성 펩티드.
99. 제94항 내지 98항중 어느 한항에 있어서, 아미노산 결실, 첨가, 치환, 전환, 첨가 혹은 회복등에 의한 펩티드의 유도체로 구성된 것을 특징으로 하는 합성 펩티드.
100. 시스테인을 포함하고 29번 아미노산이 프롤린 대신에 글리신인 29번에서 212 아미노산의 원래 IL-6의 아미노산 배열 부위로 구성된 것을 특징으로 하는 화합성 펩티드.
101. 제100항에 있어서, 초기 메티오닌 잔기를 가지는 것을 특징으로 하는 합성 펩티드.
102. 제92항 내지 100항에 따르는 합성 펩티드를 코드하는 염기서열을 구성하는 것을 특징으로 하는 재조합 유전자.
103. 제102항에 따르는 재조합 유전자로 구성된 것을 특징으로 하는 유전자.
104. 제102항에 따르는 재조합 유전자로 구성된 것을 특징으로 하는 단세포 숙주.
105. 제103항에 따르는 벡터를 가지는 것을 특징으로 하는 단세포 숙주.
106. 제90항 내지 101항중 어느 하나에 따르는 효과적인 항원과 결합에 있어서, 효과적인 양을 펩티드로 기술한 숙주에 주입하는 것을 특징으로 하는 숙주에서의 항체생산 자극방법.
107. 제90항 내지 101항중 어느 한항에 따르는 펩티드의 효과적인 양을 전술한 숙주에 주입하는 것을 특징으로 하는 숙주에서의 바이러스 감염의 예방 혹은 치료의 방법.
108. 제90항 내지 101항중 어느 한항에 따르는 펩티드의 효과적인 양을 숙주에게 주입시키는 것을 특징으로 하는 간단백질 생성 자극 방법.
109. 제90항 내지 101항중 어느 한항에 따르는 펩티드의 효과적인 양을 숙주에게 주입시키는 것을 특징으로 하는 숙주에서 최종 B세포 분화를 자극하는 방법.
110. 제90항 내지 101항중 어느 한항에 따르는 펩티드의 효과적인 양을 숙주에게 주입시키는 것을 특징으로 하는 숙주의 해마토포에틱 스템 세포의 자극 방법.
111. 제90항 내지 101항중 어느 한항에 따르는 펩티드의 효과적인 양을 숙주에게 주입시키는 것을 특징으로 하는 면역억제된 숙주의 치료방법.
112. 제90항 내지 101항중 어느 한항에 따르는 펩티드와 반응성이 있는 단클론 항체의 효과량을 숙주에게 주입시키는 것을 특징으로 하는 면역글로블린 생산의 역기능과 관계된 질병의 치료방법.
113. 제90항 내지 101항에 따르는 펩티드의 효과량을 약학적으로 수용가능한 원반체에 결합시키는 것을 특징으로 하는 약학적인 조제.
114. 제113항에 있어서, 펩티드가 적어도 하나의 시토킨 혹은 헤마토포에틱 성장인자와 결합하는 것을 특징으로 하는 조제.
115. 제114항에 있어서, 시토킨 혹은 헤마토포에틸 성장인자를 적혈구 단백질, 인터루킨 그리고 콜로니 자극 콜로니에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조제.
116. 제114항에 있어서, 인터루킨이인 IL-1, IL-2 혹은 IL-3이고 콜로니 자극인자가 G-CSF, GM-CSF 혹은 M-CSF인 것을 특징으로 하는 조제.
117. 제114 내지 116항에 있어서, 정의한 시토킨 혹은 헤마토포에틱 성장인자라 제90항 내지 101항중 어느 한항에 있어서, 펩티드를 치료요법의 사용에 있어 동시에 혹은 연속적으로 주입시키는 것을 특징으로 하는 펩티드.
118. 제113항에 있어서, 항원의 보호를 위한 효과량의 결합에 있어 펩티드가 어쥬벤트로 존재하는 경우에 있어서 제조.
119. 제1부위가 유도성 프로모터이고, 제2부위가 미니스트론 배열이고, 제3부위가 멈춤코드가 결핍된 단백질을 구성하는 DNA 단편의 삽입을 위한 클로닝 부위이고, 제4부위가 절단성 펩티드의 염기서열이고, 제5부위가 제4부위의 절단성 펩티드의 구조안에 β-칼락토시다제의 염기서열이고, 제5부위의 β-칼락토시다제의 해독면 밖에 제3부위 클로닝 부위가 있는 염기서열로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 뉴클레오티드 벡터.
120. 제119항에 있어서, DNA 염기서열이 도면 8b에서 설명한 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 벡터.
121. 제92 내지 101항중 어느 한항에 따르는 펩티드 코딩된 DNA 서열로 구성된 것을 특징으로 하는 제1항 내지 14항에 있어서의 재조합 유전자.
122. 제121항에 따르는 유전자로 구성되는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터.
123. 제122항에 따르는 벡터로 구성되는 것을 특징으로 하는 단세포 숙주.
124. p340 플라스미드로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 벡터.
125. 돌연변이 1AB DNA 배열로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 벡터.
126. 제125항에 따르는 벡터에 의해서 생성되는 펩티드.
127. 돌연변이 1AB에 의한 염기배열을 가지고 IL-6 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 펩티드를 코드하는 DNA 염기배열.
128. 제127항에 따르는 DNA 염기서열에 의해 코드된 펩티드.
129. 아미노산 4에서 23까지 결손된 자연 IL-6의 서열과 IL-6 활성을 가진 것을 특징으로 하는 펩티드.
130. 제129항에 따르는 펩티드를 코드하는 것을 특징으로 하는 DNA 염기배열.

     ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.