KR910005409B1 - Process for preparing specific antibody containing substance from eggs - Google Patents

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KR910005409B1 KR1019870000607A KR870000607A KR910005409B1 KR 910005409 B1 KR910005409 B1 KR 910005409B1 KR 1019870000607 A KR1019870000607 A KR 1019870000607A KR 870000607 A KR870000607 A KR 870000607A KR 910005409 B1 KR910005409 B1 KR 910005409B1
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Abstract

내용 없음.No content.

Description

계란으로 부터의 특이적항체함유재료의 제조방법Method for preparing specific antibody-containing material from eggs

제1도는 돼지의 장독소대장균(ETEC)인 987P+항원에 대해 면역된 암탉의 노른자내의 항체적정량의 주간변화율을 도시한 그래프.1 is a graph showing the weekly rate of change of antibody titers in the yolk of hens immunized against 987P + antigen of E. coli (ETEC) in swine.

제2도는 동일한 항원에 대해 면역된 암탉의 알로 부터 회수한 노른자 분말을 경구투여한 투여집단과 투여하지않은 대조집단에 있어서, 987P+ETEC 공격후 갓태어난 돼지새끼들의 체온 변화율을 도시한 그래프.FIG. 2 is a graph depicting the rate of change in body temperature of newborn piglets after 987P + ETEC challenge in the control group administered orally with the yolk powder recovered from the hen's eggs immunized against the same antigen.

제3도는 987P+ETEC 공격후 갓태어난 돼지새끼들의 체중증가율을 도시한 그래프.3 is a graph showing the weight gain rate of newborn piglets after 987P + ETEC attack.

본 발명은 선택 항원에 대해 면역시킨 암탉의 알로 부터 제조되며, 그 항원에 대해 특이적인 항체를 함유하는 특이적항체함유재료와 그 제조방법 및 그 용도에 관한 것이다. 또한 본 발명은 선택 항원에 대해 면역시킨 암탉의 알로 부터 제조되며 그 항원에 대해 특이적인 전이인자류 성분을 함유하는 재료와 그 제조방법 및 그 용도에 관한 것이다.The present invention relates to a specific antibody-containing material prepared from eggs of a hen immunized against a selected antigen, containing an antibody specific for the antigen, a method for producing the same, and a use thereof. The present invention also relates to a material prepared from the eggs of a hen immunized against a selected antigen and containing a transelement component specific for the antigen, a method for producing the same and a use thereof.

미합중국 특허 제4,402,938호(콜린스 외 다수)에는 분만전의 유제(有蹄)동물의 유방에 항원을 접종하고, 분만후 초유와 초유다음에 분비되는 젖을 채취하고, 이로 부터 지방분 및 고형분을 제거하여 유장(乳漿)을 얻은뒤, 이 유장을 약 0.2 마이크론의 세공크기를 갖는 필터로 한외여과시켜 여과액으로서 1200 이하의 분자량을 가진 미지구조의 영양인자를 함유하는 생성물을 얻는 방법에 대해 발표하고 있다. 이 방법에 의하면, 항원물질은 꽃가루, 박테리아, 바이러스, 곰팡이, 알레르겐, 병든 동물로 부터 추출한 혈액, 정자 및 톡신으로 부터 선택된다. 상기 영양인자를 함유하는 생성물은 동물의 영양 보급제로서 유용하다.U.S. Patent No. 4,402,938 (Collins et al.) Inoculates an antigen into the breast of an ungulate animal before delivery, collects the milk secreted after colostrum and colostrum after delivery, and removes fat and solids from the whey ( After obtaining i), the whey is ultrafiltered with a filter having a pore size of about 0.2 micron, and a method for obtaining a product containing an unknown nutrient having a molecular weight of 1200 or less as a filtrate is disclosed. According to this method, the antigenic substance is selected from pollen, bacteria, viruses, fungi, allergens, blood, sperm and toxins extracted from diseased animals. Products containing these nutrients are useful as nutritional supplements for animals.

그러나 상기 방법에 의하면, 임신 마지막달의 유제동물에게 항원을 투여해야 하며 채취대상도 초유를 필수성분으로 포함하지만 이것은 분비기간이 분만후 수일간으로 극히 한정되어 있다. 그러므로 상술된 영양인자를 다량으로 제조하려면 대규모의 농장을 확보해야하므로, 일본 또는 영국과 같은 제한된 농지를 가진 나라에서 상기 방법을 계속해서 이용한다는 것은 매우 곤란한 일이다.According to the above method, however, the antigen must be administered to the ungulate animal of the last month of pregnancy, and the subject to be collected contains colostrum as an essential ingredient, but the secretion period is extremely limited to several days after delivery. It is therefore very difficult to continue to use the method in countries with limited farmland, such as Japan or the United Kingdom, since large scale farms must be secured to produce large quantities of the above mentioned nutrients.

더군다나 상기 미합중국 특허에서 발표한 방법은 초유와 그후 모아진 젖을 각각 별도로 처리하고 고형분을 침전시켜 제거하기 위해서 60일 또는 그 이상의 장기간 동안 냉동해야하는 매우 복잡한 공정을 포함한다.Furthermore, the method disclosed in the above-mentioned US patent involves a very complex process which requires refrigeration for 60 days or longer to separately treat colostrum and subsequent collected milk and to precipitate and remove solids.

또한 상기 미합중국 특허에는, 약 0.2 마이크론의 세공크기를 가진 필터를 사용하여 한외여과 함으로써 얻어진 생성물이 영양인자와 B 리신, 콩글루티닌, 인테페론, 락토페린, 락토퍼옥시다제, B 임파구, T 임파구, 리소자임, 대식세포, 폴리펩티드, 프로페르딘 및 티오시아네이트 등을 함유하고는 있지만 단백질, 글로블린 및 1200 이상의 분자량을 가진 기타 큰 분자들이 제거되어 있는 것에 대해 기술되어 있다. 그러나 생성물로 부터 제거되고 상기 방법에 사용되지 않는 이들 분자는 글로블린과 같은 유용한 활성재료를 포함하며, 면역시키는데 사용되는 항원에 대한 특이적인 항체를 함유하며 이 특이적항체는 동물이 동일한 항원에 노출될때 동물을 보호하는 능력을 가지고 있다.In addition, the above-mentioned U.S. Patent discloses that the product obtained by ultrafiltration using a filter having a pore size of about 0.2 micron is a nutrient and B lysine, conglutinin, inteferon, lactoferrin, lactoperoxidase, B lymphocytes, T lymphocytes, and lysozyme. , Macrophages, polypeptides, properdin and thiocyanate and the like, but have been described for the removal of proteins, globulins and other large molecules with molecular weights greater than 1200. However, these molecules, which are removed from the product and not used in the method, contain useful active materials such as globulins and contain specific antibodies to the antigens used for immunization, which specific antibodies may be present when the animal is exposed to the same antigen. Has the ability to protect animals

항원에 대한 면역에 의하여 동물의 체내에 생성된 특이적항체를 다른 동물에게 투여하면, 이 특이적항체가 투여된 동물은 항원에 대해 수동 면역되기 때문에 면역에 사용된 것과 동일한 항원의 공격 또는 감염으로 부터 효과적으로 보호될 수 있다는 것은 이 분야에서 잘 알려진 사실이다. 그러나 항체투여동물과 면역된 동물이 같은 종이 아니라면, 첫번째 투여로 동물의 몸에 생성된 이질항체와 특이적인 반응때문에 동물에게 항체를 반복 투여하는것은 민감성 쇼크를 일으키게 한다. 이러한 이유때문에, 이질항체로 수동면역됨으로써 성취되는 보호는 일반적으로 단지 응급상황에 대한 치료, 예를들면 파상풍 또는 뱀에 물린 상처의 치료에만 적용된다.When a specific antibody generated in an animal's body by immunization against an antigen is administered to another animal, the animal to which the specific antibody has been administered is passively immunized against the antigen, and therefore, is attacked or infected by the same antigen as that used for immunization. It is well known in the art that it can be effectively protected. However, unless the antibody-immunized and immunized animals are the same species, repeated administration of the antibody to the animal due to the specific reaction with the heterologous antibodies produced in the animal's body at the first dose causes a shock. For this reason, the protection achieved by passive immunization with heterologous antibodies generally applies only to treatment for emergencies, for example, for tetanus or snake bites.

항원에 대해 면역시킨 소의 젖 또는 닭의 알로 부터 분리해낸 특이적항체 또는 특이적항체함유 프랙션(fraction)은 동물에게 장기간(30일-90일)동안 우유 또는 계란과 같은 이질항체함유재료를 먹임으로써 동물이 닭 또는 소의 이질항체에 대한 저항을 획득하도록하여, 면역에 사용된 것과 동일한 항원의 공격에 대해서 동물이 이질의 수동면역을 갖도록 하는데 사용될 수 있다고 일본국 특허 공개공보 제60-248628호에 기술되어 있다. 공개명세서의 실시예 2에서, 난자의 항체함유 프랙션을 항체에 대한 저항을 획득하지 않은 토끼들에게 두번 주사하였다. 그결과, 모든 동물들이 민감성 쇼크로 죽었다.Specific antibodies or specific antibody-containing fractions isolated from bovine milk or chicken eggs immunized against the antigen feed animals with heterologous antibody-containing materials such as milk or eggs for prolonged periods (30-90 days). Japanese Patent Publication No. 60-248628 discloses that an animal can obtain resistance to heterologous antibodies in chickens or cattle, thereby allowing the animal to have a heterogeneous passive immunity against attack of the same antigens used for immunization. Described. In Example 2 of the disclosure, the antibody-containing fraction of the egg was injected twice into rabbits that did not acquire resistance to the antibody. As a result, all animals died of sensitivity shock.

그러므로 상기 공개명세서에 발표된 수동면역방법은 동물이 난자 또는 소항체를 사용한 수동면역법에 의해 치료되기 이전에 30일 이상의 장기간을 필요로한다. 이것은 실제 전염병의 치료방법에 적용하기에 매우 곤란하다는 것을 의미한다. 더군다나 항체에 대한 저항을 획득하는데 필요한 기간은 대부분 동물의 종, 나이, 건강상태에 의존하기 때문에, 상기 방법은 항체의 조기반복투여에 의한 혈청질병 또는 심하면 민감성 쇼크까지도 일으킬 위험을 항상 내포하고 있다.Therefore, the passive immunization method disclosed in the above disclosure requires a long time of 30 days or more before the animal is treated by passive immunization method using an egg or small antibody. This means that it is very difficult to apply to the treatment of actual infectious diseases. Moreover, since the time required to obtain resistance to the antibody is largely dependent on the species, age and health of the animal, the method always carries the risk of developing serum diseases or even severe shock by co-administering the antibody.

상기 일본 공개공보 출원서에서, 항체에 대한 저항을 획득한 동물에게 특이적항체를 투여하여 어떠한 치료효과를 나타내는지에 대한 실험적 데이타가 없다. 단지 치료적 실험만이 공개공보 출원서의 실시예 3에 나타나 있는데, 이 실시예에서, 무탄 인쇄구균(세로타입 C)에 대한 난자항체를 난자항체에 대해 저항을 획득하지 않은 무세균 쥐들에게 경구로 반복투여한지 20일후에, 이 동물들은 같은종의 박테리아에 의해 공격받았다. 그 결과는 어금니에서 발견된 반점의 수에의해 평가되었다. 그러나 항체투여집단과 대조집단에 대한 결과에서 통계적으로 중요한 차이점은 없었다. 더군다나 쥐들보다는 인간에 대해 카리에스유발성으로 작용하는 박테리아인 무탄 연쇄구균의 경구투여에 의해서도 자연적으로 생존하지 못하는 무 세균 쥐에게 실험이 행해졌다. 그러므로, 이 실험은 공개공보 출원서에 발표되어 있는 항체 또는 항체함유 프랙션을 투여함으로써 얻어지는 치료효과에 관한 확실성 있는 자료를 제공하지 못한다.In the Japanese Laid-Open Patent Application, there is no experimental data on what therapeutic effect is obtained by administering a specific antibody to an animal that has obtained resistance to the antibody. Only therapeutic experiments are shown in Example 3 of the Published Application, in which an oocyte antibody against anthracite typhoid (Serotype C) was orally administered to sterile mice that did not acquire resistance to the oocyte antibody. After 20 days of repeated administration, these animals were attacked by bacteria of the same species. The results were evaluated by the number of spots found in the molars. However, there were no statistically significant differences in the results for antibody and control groups. Furthermore, experiments were conducted on germ-free mice that could not survive naturally by oral administration of mucosa streptococcus, a bacterium that causes caries in humans rather than mice. Therefore, this experiment does not provide reliable data on the therapeutic effect obtained by administering an antibody or an antibody-containing fraction disclosed in the application.

돼지 및 닭과 같은 가축 및 가금의 많은 전염병은 그 병을 유발하는 박테리아에 대한 항체를 경구투여함으로써 예방할 수 있다는 것은 잘 알려진 사실이다. 이러한 목적을 위하여 항체 또는 항체류 인자를 함유하는 재료의 제조방법과 투여방법 등이 이 분야에서 제안되어 왔다. 예를들면, 상기 기술된 미합중국 특허 제4,402,938호와 미합중국 특허 제3,984,539호 및 제4,284,623호에서 찾아볼수 있다. 그러나 대부분의 공지방법들은 항체 또는 항체류 인자를 제조하기 위해 소의 혈청, 초유 또는 젖을 사용한다. 그러므로 이 방법들은 제한된 농지를 가진 일본 또는 기타 나라에서 용이하게 간편하고 수행될수 없으며, 또한 이렇게 제조된 생성물은 값이 너무 비싸다.It is well known that many infectious diseases of livestock and poultry, such as pigs and chickens, can be prevented by oral administration of antibodies to the bacteria that cause them. For this purpose, methods for preparing and administering materials containing antibodies or antibody-like factors have been proposed in this field. For example, US Pat. Nos. 4,402,938 and 3,984,539 and 4,284,623 described above can be found. Most known methods, however, use bovine serum, colostrum or milk to prepare antibodies or antibody-like factors. Therefore, these methods are readily simple and cannot be performed in Japan or other countries with limited farmland, and the products thus produced are too expensive.

특이적 항체 또는 항체류 인자를 함유하는 재료는 동물의 전염병을 예방하는 것 이외에도, 가축 및 가금의 사료용 첨가물, 화장품, 의약품에서 그리고 혈청 진단법의 분야에서 유용하게 사용된다. 따라서 다량으로 값싸게 제조될 수 있는 항원 또는 항원류 인자를 함유한 재료 또는 선택 항원에 대해 특이적인 항체 또는 항체류 인자를 제공하는 것이 바람직하다.In addition to preventing the infectious diseases in animals, materials containing specific antibodies or antibody-like factors are useful in animal feed and poultry feed additives, cosmetics, pharmaceuticals and in the field of serum diagnostics. It is therefore desirable to provide antibodies or antibody-like factors specific for materials or selected antigens containing antigens or antigen-like factors that can be prepared in large quantities at low cost.

본 발명의 목적은 활성성분으로서 특이적항체 또는 전이인자류 성분을 함유하는 재료를 제조하는 방법으로써, 연중 어느 계절에서나 다량으로 값싸게 이러한 재료를 제조할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a method for preparing a material containing a specific antibody or a transfactor component as an active ingredient, and to provide a method for producing such a material in a large amount at low cost in any season of the year.

본 발명의 다른 목적은 선택 항원에 대해 면역시킨 암탉의 알로 부터 제조되는 활성성분으로서, 특이적항체 또는 전이인자류 성분을 함유하는 값싼 재료를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide an inexpensive material containing a specific antibody or a transfactor component as an active ingredient prepared from the eggs of a hen immunized against a selected antigen.

본 발명의 또 다른 목적은 전염병 또는 기타의 치료에 있어 활성성분으로써, 그리고 가축 및 가금의 사료, 화장품 및 의약품에 첨가물로서 특이적항체 또는 전이인자류 성분을 함유하는 이러한 재료의 용도를 제공한다.It is a further object of the present invention to provide the use of such materials containing specific antibody or transfactor components as active ingredients in infectious diseases or other treatments and as additives to feed, cosmetics and pharmaceutical products of livestock and poultry.

본 발명의 다른 목적 및 장점과 특성은 다음 설명으로 부터 밝혀질 것이다. 하나의 특징으로, 본 발명은 선택 항원에 대해 면역시킨 암탉이 낳은 알의 알전체 또는 노른자 또는 흰자로 부터 얻어진 경구용 특이적항체함유재료를 제공하는 것이다. 이 재료는 암탉을 면역시키는데 사용되는 항원에 대한 특이적인 항체를 함유하며 항원에 대해 활성이다. 그러므로 본 발명에 의하면, 바람직한 항체함유재료는 계란으로 부터 제조되며 따라서 연중 어느 계절이든 다량으로 값싸게 제조하는 것이 가능하다. 이 특이적항체함유재료는 통상적인 방법으로 계란의 알전체, 노른자 또는 흰자로 부터 분리해낸 특이적항체, 그자체(즉, 면역글로블린프랙션)일 수도 있다. 그러나 바람직한 실시예에 있어서, 특이적항체를 함유하는 알 전체, 노른자 또는 흰자는 교반 또는 균질화시켜서 에멀젼으로 만들고, 분말을 형성시키기 위해 분무건조하여 본 발명에 의한 바람직한 항체함유재료로서 회수한다. 이 분말은 장 전염병에 걸린 동물에게 치료목적으로 경구투여된다.Other objects, advantages and features of the present invention will become apparent from the following description. In one aspect, the present invention provides an oral specific antibody-containing material obtained from the egg whole or egg yolk or egg white of a hen immunized with a selected antigen. This material contains antibodies specific for antigens used to immunize hens and is active against antigens. Therefore, according to the present invention, the preferred antibody-containing material is made from eggs, and thus it is possible to produce a large amount inexpensively in any season of the year. The specific antibody-containing material may be a specific antibody, itself (i.e., immunoglobulin fraction), which has been separated from the egg whole, yolk or egg white by a conventional method. In a preferred embodiment, however, whole eggs, yolks or whites containing specific antibodies are stirred or homogenized into emulsions and spray dried to form powders and recovered as preferred antibody-containing materials according to the invention. This powder is orally administered to animals with intestinal infectious diseases.

다른 특징으로, 본 발명은 특이적 전이인자류 성분을 함유하며 선택 항원에 대해 면역시킨 암탉이 낳은 알의 알전체 또는 노른자 또는 흰자의 분자량 10,000 이하인 프랙션으로 부터 얻어진 경구 및 비경구용 재료를 제공한다. 이 재료에 함유된 전이인자류 성분은 면역시키는데 사용되는 항원에 대해 특이적이며, 만성형 과민성 수동 전이에 대한 활성을 가지고 있다. 이러한 재료는 항체 또는 면역글로블린을 함유하지 않으므로 비경구용으로 사용할 수 있다. 이것은 장 전염병과는 다른 여러 전염병의 치료에서, 그리고 가축 및 가금의 사료용 첨가물, 화장품, 의약품에 사용하기에 특히 유용하다. 상기 재료는 제조하기 위해 분리해낸 분자량 10,000 이하의 프랙션 이외의 나머지 부분은 선택 항원에 대한 특이적인 항체를 함유하며, 상기 단락에서 기술된 특이적항체함유재료를 제조하는데에 유용하게 사용된다.In another aspect, the present invention provides oral and parenteral materials containing a specific transfactor component and obtained from fractions having a molecular weight of 10,000 or less of egg whole or yolk or white of hens immunized against a selected antigen. . The transfactor components contained in this material are specific for the antigen used to immunize and have activity against chronic type hypersensitivity passive metastasis. Such materials do not contain antibodies or immunoglobulins and can therefore be used for parenteral use. It is particularly useful for the treatment of various infectious diseases other than intestinal infectious diseases, and for use in animal and poultry feed additives, cosmetics and pharmaceuticals. The material other than fractions of molecular weight of 10,000 or less isolated for preparation contain the antibodies specific for the selected antigen and are useful for preparing the specific antibody-containing materials described in the paragraphs above.

본 발명에 의한 특이적 항체함유재료 또는 특이적 전이인자류 성분함유재료를 제조하기 위해서는 암탉을 선택항원에 대하여 면역시켜야 한다. 항원으로는 동물의 면역시스템이 이에 반응을 하는 어떠한 물질도 가능하며 제조되는 재료의 사용목적에 따라서 선택된다. 본 발명의 방법에 사용되는 항원은 꽃가루, 박테리아, 바이러스, 곰팡이, 알레르겐, 병든동물로 부터 추출한 혈액, 정자 및 톡신으로 부터 선택된다. 또한 둘이상의 항원이 배합되어 사용되거나 또는 다가항원이 사용될 수 있다.In order to prepare a specific antibody-containing material or a specific transfer factor component-containing material according to the present invention, a hen must be immunized against a selective antigen. The antigen may be any substance to which the animal's immune system responds and is selected depending on the intended use of the material to be produced. Antigens used in the methods of the invention are selected from pollen, bacteria, viruses, fungi, allergens, blood, sperm and toxins extracted from diseased animals. In addition, two or more antigens may be used in combination or polyvalent antigens may be used.

특이적항체함유재료를 제조함에 있어서, 항원으로는 동물내에 장 전염병을 일으키는 병원성 박테리아 또는 인자로 부터 선택하는 것이 바람직하다. 본 발명에 의한 항체함유재료는 혈청 질병 또는 민감성 쇼크를 유발하는 위험을 피하기 위하여 경구에 의해서만 동물에 투여되기 때문에 장내 감염의 치료 또는 예방에 이러한 재료의 사용은 특히 유용하다. 본 발명의 항체함유재료를 제조하는데 사용되기에 특히 적합한 병원성 박테리아 또는 인자는 대장균중(특히 돼지새끼 또는 송아지와 같은 어린동물의 "스카우어"와 같은 설사증)을 일으키는 대장균 박테리아 또는 인자이다. 이러한 박테리아 또는 인자의 특정 예를들면 돼지의 ETEC(장독소대장균) 987P, K88 및 K99 항원 등이 있다. 대장균증은 가축 농장에서 심각한 문제가 되는데 그 이유는 갓태어난 돼지새끼 또는 송아지가 종종 초유로 부터 충분한 면역글로블린을 섭취하지 못하므로, 어린 돼지새끼 및 송아지의 상당수가 대장균증 및 스카우어에 걸려서 심한 설사증 및 탈수증을 나타내고 빈번히 죽는 결과도 초래하기 때문이다.In preparing specific antibody-containing materials, the antigen is preferably selected from pathogenic bacteria or factors causing intestinal infectious diseases in animals. The use of such materials in the treatment or prevention of intestinal infections is particularly useful because the antibody-containing materials according to the invention are administered to animals only orally to avoid the risk of causing serum disease or sensitive shock. Particularly suitable pathogenic bacteria or factors for use in preparing the antibody-containing material of the present invention are E. coli bacteria or factors that cause Escherichia coli (especially diarrhea, such as swine scouts in young animals such as piglets or calves). Specific examples of such bacteria or factors include swine ETEC 987P, K88 and K99 antigens. E. coliosis is a serious problem in livestock farms because newborn piglets or calves often do not get enough immunoglobulin from colostrum, so many young piglets and calves have E. coli and scouts with severe diarrhea and dehydration. It also results in frequent deaths.

계란의 노른자 또는 흰자 또는 알전체의 분자량 10,000 이하인 프랙션으로 부터 전이인자류 성분을 함유하는 재료를 제조하는데 있어서, 이러한 재료는 어떠한 항체도 함유하지 않으므로 혈청질병 및 민감성 쇼크를 일으키는 위험없이 비경구적으로 사용될 수 있기 때문에, 이 목적으로 사용되는 항원은 동물내에서 항원으로 작용하는 상기 열거된 매우 다양한 물질로 부터 선택된다.In preparing materials containing transition factor components from fractions with molecular weight of 10,000 or less of egg yolk or egg white or egg whole, these materials do not contain any antibodies and therefore parenterally without risk of causing serum diseases and sensitive shock. Since it can be used, the antigen used for this purpose is selected from a wide variety of substances listed above which serve as antigens in animals.

특이적항체 또는 전이인자류 성분을 함유하는 본 발명의 재료가 동물의 사료용 첨가물로서 사용되는 경우, 면역시키는데 사용되는 항원은 불활성 항원, 감독성(減毒性)항원 및 서브유닛(Subunit)항원으로 부터 선택되는 것이 바람직하다.When a material of the present invention containing a specific antibody or a transfactor component is used as an animal feed additive, the antigen used for immunization is derived from inactive antigens, supervisory antigens and subunit antigens. It is preferred to be selected.

선택 항원에 대해 암탉을 면역시키는 일은 피하주사, 복강내주사, 근육내주사, 정맥내주사 또는 경구투여와 같은 적절한 경로에 의해 항원을 접종시킴으로써 수행될 수 있다. 면역성을 높이기 위해, 적절한 면역증강제를 항원과 함께 투여하는 것이 바람직하다. 이 목적에 유용한 면역증강제는 완전한 프로인트 면역증강제(Freund's adjuvant)와 같은 오일내에 물이 들어있는(water-in-oil)에멀젼 면역증강제이다. 적절한 면역증강제의 사용은 면역된 암탉의 알내의 항체적정량을 장기간동안 높게 유지시키는데 상당히 효과적이며, 이로인해 바람직한 항체함유재료를 효과적으로 제조하게 한다. 항원의 접종량은 항원과 면역증강제의 종류 및 암탉내에 과다한 항원 자체의 독성이 나타나지 않는 면역상태를 생기게하는 방법에 있어서의 투여경로 등에 의하여 결정된다. 일반적으로 접종후 수주이내에 (처음 면역) 암탉은 항원에 민감하게 된다. 즉 항원에 대해 면역된다. 항원에 대한 특이적인 항체가 암탉의 몸에 생성되고 이 암탉이 낳은 알은 특이적항체를 함유하게 된다. 암탉 및 그 계란내의 항원에 대한 특이적항체의 존재 및 적정량 수준은 면역학적 실험분야에 전문적인 사람에게 공지된 여러가지 방법에 의해 확인될 수 있다.Immunization of hens against selected antigens can be accomplished by inoculating the antigens by appropriate routes such as subcutaneous, intraperitoneal, intramuscular, intravenous or oral administration. In order to increase immunity, it is preferable to administer an appropriate adjuvant together with the antigen. Adjuvant useful for this purpose is a water-in-oil emulsion adjuvant, such as a complete Freund's adjuvant. The use of an appropriate adjuvant is quite effective in keeping the antibody titer in the eggs of the immunized hens high for a long time, thereby effectively producing the desired antibody-containing material. The inoculation amount of the antigen is determined by the type of the antigen and the adjuvant, and the route of administration in the method of producing an immune state in which the excess antigen itself is not toxic in the hen. In general, within a few weeks of inoculation (first immunization) the hen becomes sensitive to the antigen. That is, they are immune to antigen. Antibodies specific to the antigen are produced in the hen's body, and the eggs laid by the hen contain specific antibodies. The presence and titer levels of specific antibodies to antigens in hens and eggs can be confirmed by various methods known to those skilled in the immunological field of experiments.

항원에 대해 암탉을 처음 면역시킨후 암탉내의 높은 항체적정량을 지속하기 위해 한가지 이상의 촉진제가 적정량 투여된다. 또 각 촉진제 투여시에, 적절한 면역증강제를 항원과 함께 사용할 수 있다. 처음 면역과 첫번째 촉진제 투여사이의 시간 간격 및 각 촉진제 투여사이의 시간간격은 항원의 종류에 따라 다르며 최소한 2주정도가 바람직하다.One or more promoters are administered in an appropriate amount to maintain a high antibody titer in the hen after initially immunizing the hen against the antigen. In addition, at the time of administration of each promoter, an appropriate adjuvant can be used together with the antigen. The time interval between the first immunization and the first promoter administration and the time interval between each promoter administration depends on the type of antigen and is preferably at least 2 weeks.

적정량의 원하는 특이적항체가 면역된 암탉이 낳은 계란내에 함유된 것을 확인한 후, 계란을 모으고 필요하다면 사용할때까지 저장한다. 편리하게는 동일한 항체에 대해 면역시키는 한마리 이상의 암탉이 낳은 다수의 계란들을 모아서 함께 공정을 거쳐, 항원에 대한 특이적인 항체 또는 전이인자류 성분을 함유하는 원하는 재료를 제조한다.After confirming that the appropriate amount of the specific antibody of interest is contained in the eggs laid by the immunized hen, eggs are collected and stored until needed. Conveniently, a number of eggs from one or more hens immunized against the same antibody are collected and processed together to produce the desired material containing antibodies or transfactor components specific for the antigen.

즉, 모아진 계란 또는 계란들로 부터 알전체 또는 각 계란의 노른자 또는 흰자를 분리한다. 대부분의 항체들은 계란의 노른자속에 함유되어 있기때문에 일반적으로 바람직한 재료를 제조하는데 사용하기 위해 노른자를 분리한다. 그러나, 어떤 항원에 대한 특이적항체들은 계란의 흰자내에 주로 존재하는 것으로 여겨지므로 이러한 항원이 암탉을 면역시키는데 사용된다면, 그 흰자가 본 발명의 방법에 의한 제조방법에 사용될 수 있다. 어떤 경우에는 계란의 노른자 및 흰자(알전체)가 함께 사용된다.That is, the whole egg or the yolk or white of each egg are separated from the collected eggs or eggs. Since most antibodies are contained in the egg yolks, they are usually isolated for use in preparing the desired material. However, specific antibodies to certain antigens are believed to be present mainly in the egg whites, so if such antigens are used to immunize hens, the whites can be used in the method of the present invention. In some cases, egg yolks and egg whites are used together.

접종된 항원에 대한 항체를 함유하는 분리시킨 노른자 또는 흰자 또는 알전체를 그다음 균질화하거나 강하게 교반하여 에멀젼 항체로 만든다. 원하다면 이 균질물에 물을 첨가시킬 수도 있다. 바람직한 실시예에 있어서, 항체활성의 심한 파괴를 유발하지 않는 분무건조 또는 동결건조와 같은 통상적인 방법에 의해 상기 에멀젼을 즉시 건조시켜 분말로 만든다. 이렇게 형성된 분말은 특이적항체를 함유하며 본 발명에 따른 경구투여의 항체함유재료로서 사용된다. 본 실시예에 의하면, 원하는 특이적항체 함유기질은 에멀젼으로 부터 면역글로블린 프랙션을 분리하는 복잡한 공정없이 제조된다. 이러한 분리공정이 일반적으로 항체함유재료의 제조에 관한 종전기술에서는 사용되어 왔다.The isolated yolk or white or whole whole containing the antibody to the inoculated antigen is then homogenized or vigorously stirred to make an emulsion antibody. If desired, water can be added to this homogenate. In a preferred embodiment, the emulsion is immediately dried to a powder by conventional methods such as spray drying or lyophilization which do not cause severe destruction of antibody activity. The powder thus formed contains a specific antibody and is used as an antibody-containing material for oral administration according to the present invention. According to this example, the desired specific antibody-containing substrate is prepared without the complicated process of separating the immunoglobulin fraction from the emulsion. This separation process has generally been used in prior art relating to the production of antibody-containing materials.

암탉을 면역시키는데 사용되는 항원이 송아지 또는 돼지새끼의 대장균증과 같은 장 전염병을 일으키는 박테리아인 경우, 상기 방법으로 면역시킨 암탉의 알, 대개는 노른자로 부터 얻어진 항체함유분말은 항원에 대한 활성을 가지고 있으므로 면역시키는데 사용되는 것과 동일한 박테리아의 공격으로 부터 송아지나 돼지새끼를 보호하는데 효과적이다. 그러므로 이 분말은 경구투여에 의해 대장균증 및 스카우어와 같은 장 전염병을 예방 또는 치료하는데에 사용된다.If the antigen used to immunize a hen is a bacterium that causes an intestinal infectious disease, such as calf or swine colitis, the eggs containing hens immunized by the above method, usually the antibody-containing powder obtained from the yolk, have activity against the antigen. It is effective in protecting calf and piglets from the same bacterial attack used to immunize. Therefore, this powder is used to prevent or treat intestinal infectious diseases such as Escherichia coli and Skaur by oral administration.

특이적항체함유재료는 또한 가축 및 가금의 사료용 첨가물, 화장품, 의약품과 혈청진단법 분야에 사용된다.Specific antibody-containing materials are also used in livestock and poultry feed additives, cosmetics, pharmaceuticals and serum diagnostics.

본 발명의 다른 실시예에서, 면역된 암탉의 노른자, 흰자 또는 알전체의 에멀젼을 한외여과에 의해 분자량 10,000 이하인 프랙션과 더 큰 반자량을 가진 나머지 프랙션으로 분리한다. 10,000 이하의 분자량을 가진 전자의 프랙션은 항원에 대해 특이적인 전이인자류 성분을 함유하는 재료를 회수하는데 사용되며, 반면에 약 150,000 이상의 분자량을 가진 면역글로불린을 함유한 나머지 프랙션을 상술된 과정, 즉 프랙션을 직접 건조시켜 분말로 만드는 과정에 의해 특이적항체함유재료를 제조하는데 사용된다.In another embodiment of the present invention, the emulsion of the yolk, white or whole egg of the immunized hen is separated by ultrafiltration into fractions of molecular weight 10,000 or less and the remaining fractions with larger diamagnetic weight. The fraction of electrons having a molecular weight of 10,000 or less is used to recover a material containing a transition factor component specific for the antigen, while the remaining fractions containing immunoglobulins having a molecular weight of about 150,000 or more are described in the above-described procedure. That is, it is used to prepare a specific antibody-containing material by the process of directly drying the fraction into a powder.

한외여과에 의한 상기 분리는 예를들면, 다음과 같은 방법으로 수행된다. 특이적항체를 함유하는 노른자, 흰자 또는 알전체의 에멀젼에 1N 임산을 가하여 예를들면 pH 4.5로 낮추면 침전이 생기기에 충분해진다. 고속 원심분리에 의해 침전물을 제거한 후에 표면에 뜨는 액을 1N NaOH로 중화시킨다. 산성화 및 중화는 온화하게 교반시키면서 수행하는 것이 바람직하다. 산성화 및 그 다음의 중화대신에, 클로로포름과 같은 유기용매로 처리할수도 있다. 그다음 표면에 뜨는 액을 분자량 10,000 이하의 분자가 통과할수 있는 세공크기를 가진 한외여과기에 통과시킨다. 이 세공크기는 대략 0.45 마이크론 정도이다. 한외여과가 근본적으로 모든 면역글로블린, 바이러스, 마이코플라스마 및 박테리아를 제거시키는데 효과적인 한, 한외여과기의 세공크기는 변화될 수 있다. 한외여과기를 통과한 프랙션을 모은다. 모아진 프랙션, 즉 여과액은 면역시키는데 사용되는 항원에 대한 특이적인 활성성분으로서 전이인자류 성분을 함유한다. 이 여과액은 어떠한 바이러스, 마이코플라스마, 박테리아 또는 면역글로블린도 함유하지 않는다. 이러한 모든 공정은 실온보다 너무 높지않은 온도(예를들면 0 내지 25℃)에서 수행하는 것이 바람직하다. 이렇게 얻어진 여과액은 본 발명에 의한 전이인자류 성분을 함유한 재료로서 사용되며, 용액으로서 저장되거나 또는 동결건조와 같은 통상적인 방법에 의해 분말 또는 과립형태로 건조된다.The separation by ultrafiltration is carried out, for example, in the following manner. Addition of 1N forest to the emulsion of yolks, whites or whole eggs containing specific antibodies, for example to pH 4.5, is sufficient for precipitation. After removing the precipitate by high speed centrifugation, the supernatant is neutralized with 1N NaOH. Acidification and neutralization are preferably carried out with gentle stirring. Instead of acidification and subsequent neutralization, it may be treated with an organic solvent such as chloroform. The supernatant is then passed through an ultrafilter having a pore size through which molecules of molecular weight of 10,000 or less can pass. This pore size is approximately 0.45 microns. As long as ultrafiltration is effective in removing all immunoglobulins, viruses, mycoplasmas and bacteria, the pore size of the ultrafilter can be varied. The fractions that passed through the ultrafilter are collected. The collected fractions, i.e., the filtrate, contain a transfactor component as an active ingredient specific for the antigen used for immunization. This filtrate does not contain any virus, mycoplasma, bacteria or immunoglobulin. All these processes are preferably carried out at a temperature not too high above room temperature (eg 0-25 ° C.). The filtrate thus obtained is used as a material containing the transition factor component according to the present invention and is stored as a solution or dried in powder or granule form by conventional methods such as lyophilization.

이렇게 얻어진 전이인자류 성분을 함유하는 재료는 여러 전염병의 치료 및 예방에 그리고 가축 및 가금의 사료용 첨가물, 화장품, 의약품에 유용하다. 이 재료는 어떠한 항체 또는 면역글로블린도 함유하지 않기 때문에, 항원에 대한 항체에 저항을 미리 획득할 필요없이, 또한 혈청 질병 및 민감성 쇼크를 일으킬 위험없이 비경구적으로 투여할 수 있다. 그러므로 이 재료는 장(腸)내의 여러 전염병 및 기타 질병의 치료 및 예방에 유용하며, 이러한 투여는 필요할 때 언제든지 투여될 수 있다.The materials containing the components of the transfer factor thus obtained are useful for the treatment and prevention of various infectious diseases and for feed additives, cosmetics and medicines for livestock and poultry. Since this material does not contain any antibodies or immunoglobulins, it can be administered parenterally without the need to obtain resistance to the antibody in advance and also without the risk of causing serum disease and sensitivity shock. Therefore, this material is useful for the treatment and prevention of various infectious diseases and other diseases in the intestine, and such administration can be administered whenever necessary.

현재에까지, 분자량 10,000 이하인 상기 프랙션내에 함유된 전이인자류 성분의 면역학적 기능은 일려지지 않았다. 이 프랙션은 전이인자류 성분이외에도, 상기 미합중국 특허 제4,402,938호에 기술된 약 1200 이하의 분자량을 가진 영양인자를 함유한다고 생각된다. 전이인자류 성분의 일부는 상기 미합중국 특허에 기술된 영양인자와 같다는 가능성이 있다. 따라서 특이적 전이인자류 성분을 함유하는 상기 프랙션은 상기 미합중국의 영양인자와 같은 영양보급제로서 유용하다고 추측된다.To date, the immunological function of the transition factor components contained within the fractions of molecular weight 10,000 or less has not been achieved. In addition to the transition factor component, this fraction is thought to contain nutrients having a molecular weight of about 1200 or less described in US Pat. No. 4,402,938. It is possible that some of the transfactor components may be the same as the nutritional factors described in the above-mentioned US patent. Therefore, the fraction containing the specific transfer factor component is assumed to be useful as a nutritional supplement such as the nutritional factors of the United States.

상기 기술한 바와같이, 한외여과를 통과하지 못하는 나머지 프랙션은 면역글로블린을 함유하며, 이것은 통상적인 방법으로 분말로 건조시킴으로써 항체함유분말을 제조하는데 사용된다. 원한다면, 특이적항체를 함유하는 나머지 프랙션 또는 노른자, 흰자 또는 알전체는 분말로 건조되기 이전에 통상적인 분별화 과정 또는 정제화 과정을 수행할 수 있다. 특이적 항체함유재료는 분말로 건조하지않고 에멀젼으로서 또는 용액자체로서 회수할수 있으나, 저장의 용이성을 위해 분말 또는 과립과 같은 고체로서 회수하는 것이 편리하고 바람직하다.As described above, the remaining fractions that do not pass ultrafiltration contain immunoglobulins, which are used to prepare antibody-containing powders by drying to powder in a conventional manner. If desired, the remaining fractions or yolks, whites or whole bodies containing specific antibodies can be subjected to conventional fractionation or tableting procedures before they are dried to powder. The specific antibody-containing material can be recovered as an emulsion or as a solution without drying into a powder, but for ease of storage it is convenient and desirable to recover as a solid such as a powder or granules.

본 발명의 방법에 의하면, 면역되게 하는데 사용되는 동물이 암탉이기 때문에, 많은 동물들을 선택 항원에 대해 면역시키는데 즉시 쉽게 이용할 수 있으며, 다양한 많은 항원들이 각기 항체들을 만들어내는데 동시에 쉽게 이용될수 있다. 그러므로 특이적항체를 함유하는 재료 또는 특이적 전이인자류 재료는 연중 어느 계절에서나 다량으로 값싸게 제조될수 있다. 또한 동시에 서로 다른 여러가지 종류의 특이적항체를 함유하는 다수의 재료를 계획적으로 제조하는 것이 가능하다.According to the method of the present invention, since the animal used to immunize is a hen, many animals are readily available for immunization against the selected antigen, and many different antigens can be readily used simultaneously to produce antibodies. Therefore, a material containing a specific antibody or a specific transition factor material can be produced inexpensively in large quantities at any season of the year. It is also possible to deliberately prepare a number of materials containing different kinds of specific antibodies at the same time.

항체함유재료의 제조방법의 바람직한 실시예에 있어서, 면역시킨 암탉의 노른자. 흰자 또는 알전체는 균질화 후에 간단하게 건조되어 분말을 형성하여 한외여과와 같은 분별화 공정없이 원하는 생성물이 얻어진다. 이러한 실시예은 매우 간단한 공정으로 인해 특히 유리하다. 면역증강제가 면역된 암탉내에 항원과 함께 투여되는 경우, 항원에 대해 항체가 고 항체적정량으로 장기간 동안 계란내에 유지되며 이로인해 원하는 재료가 매우 효과적으로 값싸게 제조되는 것이 가능하다.In a preferred embodiment of the method for producing an antibody-containing material, the yolk of an immunized hen. The white or whole body is simply dried after homogenization to form a powder, so that the desired product is obtained without a fractionation process such as ultrafiltration. This embodiment is particularly advantageous because of the very simple process. When an adjuvant is administered with an antigen in an immunized hen, it is possible for the antibody to be retained in the egg for a prolonged period of time with a high antibody titer against the antigen, thereby making it possible to produce the desired material very effectively and inexpensively.

항원으로서 장 전염병을 일으키는 박테리아가 암탉을 면역시키는데 사용되는 경우, 본 발명에 의한 항체함유재료를 경구투여시킴으로써 가축의 대장균증 및 설사증과 같은 장 전염병을 치료 및 예방할 수 있다. 동물에의 투여는 동물이 난자항체에 대한 저항을 획득할 필요없이 어느때든지 수행될 수 있다. 항체함유재료가 분별화 공정을 거치지 않고 계란의 노른자, 흰자 또는 알전체로 부터 그대로 회수되는 경우 이 재료는 항원에 대한 특이적항체 이외에도 10,000 이하의 분자량을 가진 프랙션에 함유되는 전이인자류 성분을 함유한다. 그러므로 이 재료는 영양보급제, 또는 동물들의 사료용 첨가물, 화장품 및 의약품에 유용하다.When bacteria causing an intestinal infectious disease as an antigen are used to immunize a hen, oral administration of the antibody-containing material according to the present invention can treat and prevent intestinal infectious diseases such as Escherichia coli and diarrhea in livestock. Administration to the animal can be performed at any time without the animal having to acquire resistance to the oocyte antibody. When the antibody-containing material is recovered directly from the egg yolk, egg white or whole egg without undergoing the fractionation process, the material contains a transfactor component contained in a fraction having a molecular weight of 10,000 or less in addition to the specific antibody to the antigen. It contains. This material is therefore useful for nutritional supplements, or animal feed additives, cosmetics and pharmaceuticals.

다음 실시예에서 본 발명을 좀더 설명하고자 한다. 본 발명은 이후의 실시예에서의 세부적 설명에 제한되지 않는다.In the following examples, the present invention will be further described. The invention is not limited to the details in the following examples.

[실시예 1]Example 1

이 실시예에는 면역시킨 암탉의 알로부터 특이적항체를 함유하는 노른자 분말을 제조하는 방법을 설명한다.This example describes a method for preparing yolk powder containing specific antibodies from the eggs of immunized hens.

돼지의 설사증을 일으키는 것으로 알려진 돼지의 ETEC(장독소대장균)인 987P 항원을 암탉 한마리당 약 1.5mg의 양으로 실험용 성숙암탉에 근육내 주사하여 암탉이 항원에 대해 처음 면역을 갖도록 하였다. 오일내에 물이 들어있는 에멀젼 형태이며 죽은 결핵균 세포를 포함한 면역증강제를 항원과 함께 사용하였다. 처음 면역된지 4주후에, 동일한 항원 및 면역증강제를 촉진제로서 한마리당 약 1.5mg의 양으로 같은 방법으로 주사하였다. 이 암탉들이 낳은 계란의 노른자 샘플을 계란내의 항원에 대한 특이적항체의 존재를 확인하기 위해 항원과의 응집반응을 이용한 항체검정법으로 실험하였다. 각 노른자 샘플의 항체적정량은 응집반응을 이용한 공지의 방법으로 측정되었다. 처음 면역된 후 면역된 암탉의 노른자의 항체 적정량의 주간 변화율이 제1도에 도시되어 있다. 제1도의 그래프로부터, 노른자의 항체적정량이 처음 면역된지 8주후에 극대값에 도달한다는 것을 알수 있다.The 987P antigen, E. coli (E. coli), known to cause diarrhea in pigs, was injected intramuscularly into the experimental mature hens in an amount of about 1.5 mg per hen so that the hens were initially immune to the antigen. An adjuvant was used in combination with the antigen, in the form of an emulsion containing water in the oil and containing dead Mycobacterium tuberculosis cells. Four weeks after the first immunization, the same antigen and an adjuvant were injected in the same manner in an amount of about 1.5 mg per animal as a promoter. The yolk samples of the eggs laid by these hens were tested by antibody assay using aggregation reaction with antigens to confirm the presence of specific antibodies to antigens in the eggs. Antibody titer of each yolk sample was measured by the well-known method using an aggregation reaction. The rate of weekly change in the titration of the antibody in the yolk of the immunized hen after first immunization is shown in FIG. From the graph of FIG. 1, it can be seen that the titrant of the yolk antibody titers reaches the maximal value 8 weeks after the first immunization.

또한 다른 항원으로서 돼지의 설사증을 일으키는 대장균 박테리아인 돼지의 K88 및 K99를 사용하여 상기의 동일한 방법으로 실험용 성숙암탉이 선택 항원에 대해 면역을 갖게 하였으며, 계란 노른자의 항원에 대한 특이적항체의 존재 및 그 항체적정량도 같은 방법으로 측정되었다. 이 실험에서도 항체적정량은 얼마의 기간후에 극대값에 도달되었다.In addition, using the K88 and K99 of E. coli bacteria that cause swine diarrhea as another antigen, the experimental mature hens were immunized against the selected antigen by the same method described above, and the presence of specific antibodies against the antigen of egg yolk and The antibody titer was also measured in the same manner. Even in this experiment, the titer of antibody reached its maximum after some period of time.

노른자내의 항체적정량이 극대값에 도달된후 면역된 암탉이 낳은 알을 다음과 같이 항체함유 노른자를 제조하기 위하여 모았다.After the titration of the antibody in the yolk reached the maximal value, the eggs of the immunized hens were collected to prepare the antibody-containing yolk as follows.

동일한 항원에 대해 면역시킨 암탉의 알을 모아서 이 계란 노란자를 분리하여 함께 배합하였다. 그다음 배합된 노른자를 균질화하고 이 노른자 균질물을 즉시 분말로 분무건조시켜 항체함유 생성물로서 회수하였다. 이 분말은 대기중에서 37℃로 저장되었다.Eggs of hens immunized against the same antigen were collected and these egg yellows were isolated and combined together. The blended yolk was then homogenized and the yolk homogenate was immediately spray dried to a powder to recover as an antibody containing product. This powder was stored at 37 ° C. in the atmosphere.

37℃에서 저장된 항체함유 노른자 분말의 안정도는 다음과같이 평가되었다. 기간을 달리하여 저장하기 이전 및 이후의 노른자 분말샘플 1g을 9ml의 PBS(인산-완충염)에 분산시키고 같은양의 클로로포름을 이 분산물에 첨가시켰다. 이 혼합물을 철저히 흔든후에 3000rpm으로 20분동안 원심분리시켰다. 표면에 뜨는 액을 항체함유 프랙션으로서 모으고, 이 표면에 뜨는액의 항체적정량을 항원과의 응집반응에 의해 측정하였다. 그 결과는 아래 표 1에 나타나있다.The stability of the antibody-containing yolk powder stored at 37 ° C. was evaluated as follows. One gram of yolk powder sample before and after storage at different times was dispersed in 9 ml of PBS (phosphate-buffered salt) and the same amount of chloroform was added to this dispersion. The mixture was shaken thoroughly and then centrifuged at 3000 rpm for 20 minutes. The solution which floated on the surface was collected as an antibody containing fraction, and the antibody titer of the solution which floated on this surface was measured by aggregation reaction with an antigen. The results are shown in Table 1 below.

표1에서 알수있는 바와같이 항체적정량은 여러항원으로 부터 유도된 서로다른 분말생성 모두에서 6개월 이상 저장할 동안 변화없이 유지되었다.As can be seen from Table 1, antibody titers remained unchanged for at least 6 months of storage in all different powder productions derived from different antigens.

이렇게 얻어진 항체함유 노른자 분말은 동물에 경구투여 할수 있으며, 동물들(특히 돼지들)의 대장균증 및 설사증의 치료 및 예방에 유용하다. 또한 이 노른자 분말은 동물의 사료용 첨가물로서도 유용하다.The antibody-containing yolk powder thus obtained can be orally administered to animals and is useful for the treatment and prevention of E. coli and diarrhea in animals (especially pigs). This yolk powder is also useful as an animal feed additive.

[표 1]TABLE 1

저장이전 및 이후의 항체적정량Antibody titration before and after storage

Figure kpo00001
Figure kpo00001

[실시예 2]Example 2

이 실시예는 암탉을 면역시키는데 사용되는 항원에 대해 특이적인 전이인자류 성분을 함유하는 재료의 제조방법을 설명한다.This example describes a method of making a material containing a transfactor component that is specific for an antigen used to immunize a hen.

성숙된 암탉을 실시예 1에서 기술한 방법으로 987P+ETEC에 대하여 면역시키고, 면역된 암탉의 계란 노른자내의 항제적정량의 극대값에 도달된 후에 계란들을 모았다. 987P+ETEC에 대한 특이적항체를 함유한 계란의 전체(노른자와 흰자)를 약 5Kg 교반시켜 계란 에멀젼을 형성하였다. 계란에멀젼을 같은양의 PBS로 희석시켜 15분간 혼합기로 교반시켰다. 희석된 계란 에멀젼에 1N 염산을 가하여 에멀젼의 pH 4.5가 되도록 조절하여 이 에멀젼을 15분간 추가적으로 교반시켰다. 침전된 고형분은 고속도의 원심분리에 의해 제거하였다. 표면에 뜨는액을 1N NaOH 용액으로 중화시킨후, 약 10,000 이하의 분자량을 가진 프랙션을 모으기 위하여 0.45 마이크론의 세공크기를 가진 한외여과기에 통과시켰다. 모아진 프랙션은 면역시키는데 사용된 항원(987P+ETEC)에 대해 특이적인 전이인자류 성분을 함유하였다.The mature hens were immunized against 987P + ETEC in the manner described in Example 1 and eggs were collected after reaching the maximal value of the antibiotic titer in the egg yolk of the immunized hen. The whole (eg yolk and white) of eggs containing specific antibodies against 987P + ETEC was stirred by about 5 Kg to form an egg emulsion. The egg emulsion was diluted with the same amount of PBS and stirred with a mixer for 15 minutes. 1N hydrochloric acid was added to the diluted egg emulsion to adjust the pH to 4.5, and the emulsion was further stirred for 15 minutes. Precipitated solids were removed by high speed centrifugation. The supernatant was neutralized with 1N NaOH solution and then passed through an ultrafilter having a pore size of 0.45 microns to collect fractions having a molecular weight of less than about 10,000. The collected fractions contained a transfactor component that was specific for the antigen (987P + ETEC) used to immunize.

[실시예 3]Example 3

이 실시예는 돼지의 ETEC의 987P 항원에 대해 면역시킨 암탉으로 부터 실시예 1에서 얻어진 항체함유계란 노른자 분말의 치료적 기능을 설명한다.This example illustrates the therapeutic function of the antibody-containing egg yolk powder obtained in Example 1 from hens immunized against 987P antigen of swine ETEC.

이미 초유를 먹은 0.97 내지 1.8Kg의 무게를 가진 갓태어난 각 돼지에게, 987P+ETEC 항원에 대한 특이적항체를 함유하고 항체적정량 1000을 가진 실시예 1에서 얻어진 분무건조 노른자 분말 1.5g을, 동물에게 1일 3회 인공유를 먹일때마다 이 인공유의 용액으로서 투여하였다. 상기 방법으로 1일 3회 행한 노른자분말투여는 투여집단의 동물에 대한 실험이 끝날때까지 계속되었다. 태어난지 21 내지 23시간이 지난 갓태어난 동물은 동물 한마리당 1회 경구투여량이 2×1010세포가 되게 항원을 경구투여함으로써 암탉을 면역시키는데 사용된 것과 동일한 987P 항원에 의해 공격받았다. 대조집단의 각 갓태어난 돼지들은 상기 항체함유 노른자 분말이 용해되어 있지않는 동일한 인공유를 먹는동안 같은 방법으로 상기 항원에 의해 공격받았다.To each newborn pig weighing 0.97 to 1.8 Kg already fed colostrum, 1.5 g of the spray-dried yolk powder obtained in Example 1 containing a specific antibody to 987P + ETEC antigen and having an titer of 1000 antibodies was given to animals. Whenever artificial oil was fed three times a day, it was administered as a solution of this artificial oil. The yolk powder administration, which was performed three times a day by the above method, continued until the end of the experiment on the animals of the administration group. Newly born animals 21 to 23 hours old were challenged by the same 987P antigens used to immunize hens by oral administration of an antigen at an oral dose of 2 × 10 10 cells per animal. Each newborn pig in the control group was attacked by the antigen in the same manner while eating the same artificial oil in which the antibody-containing yolk powder was not dissolved.

각 실험동물의 체온변화율, 임상적증상, 체중증가율 및 공격세균의 분리율을 평가하였으며, 그 결과는 제2도 및 제3도 그리고 표2 내지 4에 나타나있다.The rate of change of body temperature, clinical symptoms, weight gain, and isolation rate of challenge bacteria of each experimental animal were evaluated, and the results are shown in FIGS. 2 and 3 and Tables 2-4.

항원 987P+ETEC에 의한 공격후 실험동물들의 체온변화율을 도시한 제2도로 부터, 투여집단 동물들의 체온은 초기에 감소하였지만 곧 본래 수준으로 회복된 것(공격후 약 2일)을 알수 있다. 반면에 대조집단 동물들의 체온의 회복에는 수일 더 긴 기간이 필요하였다.From FIG. 2, which shows the temperature change rate of the experimental animals after the challenge with antigen 987P + ETEC, it can be seen that the body temperature of the administration group animals was initially reduced but soon returned to the original level (about 2 days after the attack). On the other hand, the recovery of body temperature of control animals required a longer period of days.

공격후 배설물 상태에 관한 임상적 증상은 표2에 나타나있는데, 이 표로부터 투여집단의 모든 동물들의 배설물은 공격후 3일만에 정상으로 되었으며 반면에 대조집단의 동물은 그중 어느 하나의 배설물이 5일후까지도 정상으로 된것은 없었으며 몇몇 동물들은 공격후 5일내에 죽었다는 것을 알수 있다.The clinical symptoms of post-aggression fecal status are shown in Table 2, from which the excreta of all animals in the treatment group became normal only 3 days after the challenge, whereas the control excreta animals were excreted 5 days later. None have ever been normal and some animals died within five days of the attack.

배설물 및 소장으로 부터의 공격세균의 분리율을 나타내는 표3 및 4의 결과에서도 같은 경향을 알수 있다. 투여집단의 모든 동물들에게 세균은 배설물 또는 소장으로 부터 분리되지 않았다. 반면에 대조집단의 모든 동물에서 세균은 변 및 소장내에서 증식하였다.The same trend can be seen in the results of Tables 3 and 4, which show the separation rate of the attack bacteria from the feces and small intestine. For all animals in the administration group, bacteria were not isolated from feces or small intestines. On the other hand, in all animals in the control group, bacteria grew in feces and small intestine.

투여집단 및 대조집단의 갓태어난 돼지의 체중증가율을 도시한 제3도를 참조하면 공격후 22시간후에 투여집단의 돼지의 체중증가율은 일시적으로 감소하지만, 태어난지 2일후에는 정상적인 수준으로 회복되었다. 반면에 대조실험돼지의 체중증가율은 공격후 급속히 감소되며, 공격으로 인한 체중증가 억제가 태어난지 4일후까지 지속되었다.Referring to FIG. 3, which shows the weight gain rates of newborn pigs in the administration group and the control group, the weight gain rate of the pigs in the administration group was temporarily reduced 22 hours after the attack, but returned to normal levels two days after birth. On the other hand, the weight gain rate of the control pigs decreased rapidly after the attack, and lasted up to 4 days after birth.

그러므로 본 발명에 의한 특이적항체함유 노른자분말은 암탉을 면역시키는데 사용된 항원에 의한 공격으로 부터 동물을 보호하는데에 치료적 기능을 가지고 있다는것이 상기 결과로 부터 명백해 졌다.Therefore, it became clear from the above results that the specific antibody-containing yolk powder according to the present invention has a therapeutic function in protecting animals from attack by antigens used to immunize hens.

[표 2]TABLE 2

987P+ETEC에 의한 공격후 임상적 증상Clinical Symptoms After Attack by 987P + ETEC

Figure kpo00002
Figure kpo00002

증상 : 0 = 정상배설물 1 = 묽은 배설물(형태없음)Symptoms: 0 = normal feces 1 = thin feces (no form)

2 = 가벼운 설사(형태없음) 4 = 죽음2 = mild diarrhea (no form) 4 = death

3 = 심각한 물설사3 = severe watery diarrhea

[표 3]TABLE 3

투여집단 대조집단 돼지들의 배설물로 부터의 공격세균의 분리율Isolation Rate of Aggressive Bacteria from Excretion in Dose Control Group Pigs

Figure kpo00003
Figure kpo00003

계산은 DHL 한천배지에서의 공격세균 콜로니의 비율을 기준으로함.The calculation is based on the percentage of offending bacterial colonies on DHL agar medium.

-=공격세균 50% : -=공격세균 80% : -=공격세균 100%-= Attack Bacteria 50%:-= Attack Bacteria 80%:-= Attack Bacteria 100%

[표 4]TABLE 4

투여집단 및 대조집단 돼지들의 소장내용물로 부터의 공격세균의 분리Isolation of Aggressive Bacteria from Small Intestine Contents in Dosing and Controlling Pigs

Figure kpo00004
Figure kpo00004

계산은 DHL 한천배지에서의 공격세균 콜리니의 비율을 기준으로함.Calculations are based on the percentage of offending bacterial colonies on DHL agar media.

-=챌린지세균 50% : -=챌린지세균 80% : -=챌린지세균 100%-= Challenge Bacteria 50%:-= Challenge Bacteria 80%:-= Challenge Bacteria 100%

* 5번 및 7번 동물에서는 죽었을때, 기타 동물에서는 세균공격후 5일에 샘플추출함.* When killed in animals 5 and 7, samples are taken 5 days after bacterial attack in other animals.

본 발명에 의한 특이적항체 또는 전이인자류 성분을 함유하는 재료의 작용은 인간에게도 효과적이다. 그러므로 이 재료는 인간을 포함하여 동물에 적용될수 있다.The action of the material containing the specific antibody or transition factor component according to the present invention is also effective for humans. Therefore, this material can be applied to animals, including humans.

이상 본 발명의 바람직한 실시예에 관하여 기술하였다. 그러나 본 발명의 개념에서 벗어나지 않는 여러수정이 이루어질수 있으며 이러한 수정은 본 발명의 범위에 포함된다.As mentioned above, the preferred embodiment of the present invention has been described. However, many modifications may be made without departing from the spirit of the invention and such modifications are included within the scope of the invention.

Claims (15)

a) 선택항원을 암탉에게 접종하여 이 항원에 대해 면역시키고 이에 의해 암탉몸내에 항원에 대한 특이적항체를 생성시키는 단계와; b) 특이적항체가 난자내에 생성된 후 암탉이 낳은 계란을 모으는 단계; 및 c) 특이적항체함유재료 즉 암탉을 면역시키는데 사용되는 항원에 대해 활성인 특이적항체를 함유하는 재료로서, 특이적항체를 함유하는 계란의 알전체, 노른자 또는 흰자의 모든 부분 또는 프랙션(fraction)을 회수하는 단계로 구성되는, 계란으로 부터의 특이적항체함유재료의 제조방법.a) inoculating a hen with the selected antigen to immunize the antigen thereby generating a specific antibody to the antigen in the hen body; b) collecting eggs laid by the hen after the specific antibody is produced in the egg; And c) a specific antibody-containing material, i.e. a material containing a specific antibody active against an antigen used to immunize a hen, wherein all parts or fractions of the whole, yolk or white of the egg containing the specific antibody ( A method for producing a specific antibody-containing material from eggs, comprising the steps of recovering the fraction. 제1항에 있어서, 오일내에 물이 들어있는(water-in-oil)에멀젼 면역증강제와 함께 항원을 암탉에게 접종시키는 것을 특징으로 하는 제조방법.The method of claim 1, wherein the hen is inoculated with the antigen together with a water-in-oil emulsion adjuvant. 제1항 또는 제2항에 있어서, 계란의 알전체, 노른자 또는 흰자의 모든 부분은 분별화 과정을 거치지 않고 특이적항체함유재료로서 회수되는 것을 특징으로 하는 제조방법.The method according to claim 1 or 2, wherein all parts of the egg whole, yolk or white of the egg are recovered as a specific antibody-containing material without undergoing fractionation. 제3항에 있어서, 특이적항체함유재료는 계란의 알전체, 노른자 또는 흰자의 모든 부분을 교반시켜 에멀젼으로 만들고 이 에멀젼을 건조시켜 분말로 형성시킴으로써 분말의 형태로 회수되는 것을 특징으로 하는 제조방법.The method of claim 3, wherein the specific antibody-containing material is recovered in the form of a powder by stirring all parts of the egg whole, yolk or white of the egg to form an emulsion, and drying the emulsion to form a powder. . 제1항 또는 제2항에 있어서, 특이적항체를 함유하는 계란의 알전체, 노른자, 또는 흰자의 프랙션은 특이적항체함유제료로서 회수되는 것을 특징으로 하는 제조방법.The method according to claim 1 or 2, wherein the fraction of whole, yolk or white of the egg containing the specific antibody is recovered as a specific antibody-containing agent. 제1항에 있어서, 항원은 꽃가루, 박테리아, 바이러스, 곰팡이, 알레그렌, 병든 동물로 부터 추출한 혈액, 정자 및 톡신으로 구성된 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.The method of claim 1, wherein the antigen is selected from the group consisting of pollen, bacteria, viruses, fungi, allegren, blood, sperm and toxins extracted from diseased animals. 제6항에 있어서, 항원은 동물의 장 전염병을 유발시키는 대장균 박테리아인 것을 특징으로 하는 제조방법.The method of claim 6, wherein the antigen is E. coli bacteria that cause an intestinal infectious disease in an animal. 제7항에 있어서, 항원은 불활성 항원, 감독성(減毒性)항원, 및 서브유닛 항원으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.8. The method of claim 7, wherein the antigen is selected from inactive antigens, supervisory antigens, and subunit antigens. a) 선택항원을 암탉에게 접종하여 이 항원에 대해 면역시키고 이에 의해 암탉몸내에 항원에 대한 특이적항체를 생성시키는 단계와; b) 특이적항체가 난자내에 생성된 후 암탉이 낳은 계란을 모으는 단계와; c) 특이적항체를 함유하는 계란의 알전체, 노른자 또는 흰자를 회수하는 단계; 및 d) 회수된 계란의 알전체, 노른자, 또는 흰자중의 분자량 10,000 이하인 프랙션 즉, 암탉을 면역시키는데 사용된 항원에 대해 특이적인 전이인자류 성분을 함유하는 재료인 상기 프랙션을 분리해내는 단계로 구성되는, 특이적 전이인자류 성분 함유재료의 제조방법.a) inoculating a hen with the selected antigen to immunize the antigen thereby generating a specific antibody to the antigen in the hen body; b) collecting the eggs laid by the hen after the specific antibody is produced in the egg; c) recovering the whole, yolk or white of the egg containing the specific antibody; And d) isolating said fraction, a fraction containing a molecular weight of 10,000 or less in the whole egg, yolk, or egg white of the recovered egg, i.e. a material containing a transfer factor component specific for the antigen used to immunize the hen. A method for producing a specific transfer factor component-containing material, comprising the steps. 제10항에 있어서, 프랙션의 분리는 희석제를 사용하여 또는 사용하지 않고 계란의 알전체, 노른자 또는 흰자를 교반시켜 에멀젼을 만들고, 이 에멀젼을 산으로 처리한 다음 중화시키거나 또는 에멀젼을 유기용매로 처리하고, 원심분리에 의해 침전된 고형물을 제거시키고, 분자량 10,000 이하인 프랙션을 분리해내기 위해 표면에 뜨는 액을 한외여과시켜 특이적 전이인자류 성분을 함유한 재료로서 회수하는 것을 특징으로 하는 제조방법.The method according to claim 10, wherein the separation of the fraction is carried out by stirring the whole egg, yolk or egg white of the egg with or without diluent to form an emulsion, treating the emulsion with acid and then neutralizing the emulsion or Treatment to remove the solids precipitated by centrifugation, and ultrafiltration of the supernatant to separate fractions having a molecular weight of 10,000 or less, and recovering them as materials containing specific transition factor components. Manufacturing method. 제9항 또는 제10항에 있어서, 오일내에 물이 들어있는 에멀젼 면역증강제와 함께 항원을 암탉에게 접종시키는 것을 특징으로 하는 제조방법.The method according to claim 9 or 10, wherein the hen is inoculated with the antigen together with an emulsion adjuvant containing water in the oil. 제9항에 있어서, 항원은 꽃가루, 박테리아, 바이러스, 곰팡이, 알레르겐, 병든 동물로부터 추출한 혈액, 정자 및 톡신으로 구성된 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.The method of claim 9, wherein the antigen is selected from the group consisting of pollen, bacteria, viruses, fungi, allergens, blood, sperm and toxins extracted from diseased animals. 제12항에 있어서, 항원은 불활성 항원, 감독성 항원 및 서브유닛 항원으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.The method of claim 12, wherein the antigen is selected from inert antigens, supervisory antigens and subunit antigens. 제1항의 제조방법으로 제조되는 특이적항체함유재료로 구성되는 동물사료용 첨가물.An additive for animal feed consisting of a specific antibody-containing material prepared by the method of claim 1. 제10항의 제조방법으로 제조되는 특이적 전이인자류 성분을 함유하는 재료로 구성되는 동물사료용 첨가물.An animal feed additive comprising a material containing a specific transfer factor component prepared by the method of claim 10.
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