CS201369B1

CS201369B1 - Biopreparation for protection of husbandry youngs animals against the intestine infections

Info

Publication number: CS201369B1
Application number: CS756678A
Authority: CS
Inventors: Leopold Ulmann; Eduard Salajka; Zdenka Salajkova; Jiri Dressler
Original assignee: Leopold Ulmann; Eduard Salajka; Zdenka Salajkova; Jiri Dressler
Priority date: 1978-11-21
Filing date: 1978-11-21
Publication date: 1980-11-28

Description

Vynález se týká biopreparátu použitelného k prevenci a léčbě střevních infekcí mlááat.The invention relates to a biopreparable for the prevention and treatment of intestinal infections of the pups.

Enteropatogenní bakterie a viry způsobují u mléčtat hospodářských zvířat a u dětí střevní infekce projevující se průjmy, často smrtelnými. Organismus dospělých jedinců se poměrně rychle ubrání těmto infekcím produkcí protilátek vylučovaných na povrch střevní sliznice. Mlááata v časném věku nejsou schopna vytvářet protilátky tak rychle, aby se infekci ubránila. Infekce březích matek původci střevních infekcí mé za následek produkci protilátek nejen ve střevě, ale i v mléčné žláze. Přítomností specifických protilátek v sekretu mléčné žlázy lze dosáhnout i imunizací březích matek. Protilátky obsažené v kolostru a mléce takových matek chrání sající mlááata před infekcí. Mlááata, která sají u matek neimunních a hlavně mlááata odchovávaná bez matek často smrtelně onemocní při styku s původci enterálních infekcí. Doposud používaná léčba střevních infekcí spočívá v potlačení střevní infekce různými léky, nejčastěji antibiotiky, sulfonamidy nebo jejich kombinací s řadou chemoterapeutik. Tato léčba, kromě potlačení běžné střevní mikroflóry nutné k fyziologické funkci střeva, má často za následek potlačení běžné střevní mikroflóry nutné k fyziologické funkci střeva, má Cesto za následek i poškozeni makroorganismu.Enteropathogenic bacteria and viruses cause intestinal infections, often fatal, in intestinal infants and infants. Adult organisms can control these infections quite quickly by producing antibodies secreted to the surface of the intestinal mucosa. Early age babies are unable to produce antibodies fast enough to resist infection. Infections of pregnant mothers causing intestinal infections result in the production of antibodies not only in the intestine but also in the mammary gland. The presence of specific antibodies in the mammary secretion can also be achieved by immunizing pregnant mothers. Antibodies contained in colostrum and milk of such mothers protect suckling babies from infection. Young suckling babies sucking in non-immune mothers and especially young suckling mothers often become fatal in contact with agents of enteral infections. The treatment of intestinal infections used so far consists in suppressing the intestinal infection with various drugs, most commonly antibiotics, sulfonamides or a combination thereof with a number of chemotherapeutic agents. This treatment, in addition to suppressing the normal intestinal microflora necessary for the physiological function of the intestine, often results in the suppression of the normal intestinal microflora necessary for the physiological function of the intestine, and the dough also causes damage to the macroorganism.

Mlááata věak lze před střevními infekcemi chránit a z onemocnění vyléčit i bezMlááata, however, can be protected from intestinal infections and cured of the disease without

201 369201 369

201 309 zmíněných nepříznivých důsledků,a to využitím imunitních mechanizmů, které představa* jí normální fyziologický proces. Pro prevenci střevních infekcí u sajících mláďat lze využít umělé imunizace březích matek, které potom ochrání mláďata protilátkami v sekretu mléčná žlázy. K léčbě mláďat stižených infekčními průjmy lze použít krevní sérum získané ze zvířat imunizovaných vyvolavateli těchto onemocnění. Toto sérum lze použít i k prevenci onemocnění u mláďat chovaných bez matek v období, kdy ee jeětě sama infekci neubrání. Séra proti střevním infekcím se podávají perorálně, a proto mohou být heterologní. Podávání musí být opakované, aby byl zabezpečen jejich stálý přísun do střeva. K tomu je třeba zajistit poměrně velké množství specifických sér. Pro poměrně vysokou cenu eér se této možnosti využívá jen omezeně a pro prevenci průjmu u velkého počtu ohrožených mláďat je tento způsob ekonomicky neúnosný. K odstranění shora uvedeného nedostatku směřuje vynález, jehož podstata spočívá v tom, že se k prevenci nebo léčbě enterálních infekcí použije kravského kolostra od zvířat, imunizovaných v období jejiph březosti vakcínami, které obsahují původce infekčních průjmů.201,309 of these adverse consequences, utilizing immune mechanisms which represent a normal physiological process. Artificial immunization of pregnant mothers can be used to prevent intestinal infections in suckling pups, which then protect the pups with antibodies in the mammary gland secretion. Blood serum obtained from animals immunized with the causative agent of the disease may be used to treat infants suffering from infectious diarrhea. This serum can also be used to prevent disease in non-maternal chickens at a time when the infection itself is not prevented. Serums against intestinal infections are administered orally and may therefore be heterologous. Administration must be repeated to ensure a steady supply to the intestine. To this end, a relatively large number of specific sera must be provided. Due to the relatively high price of the era, this option is used only to a limited extent and for the prevention of diarrhea in a large number of endangered chicks this method is economically unbearable. In order to overcome the above drawback, the present invention is based on the use of cow colostrum from animals immunized during the period of pregnancy with vaccines containing infectious diarrhea agents to prevent or treat enteral infections.

Na základě vlastních pokusů autoři zjistili, že u neimunizovaných krav jeou prokazatelné hladiny jen proti somatickým antigenům kmenů E. coli, které jsou vyvolavatelé střevních infekci, v různém titru při vyšetřeni pomalou aglutinaci, a to v ředění 1:20 až 1:32O. Nejsou věak u nich prokazovány protilátky proti kapsulárním antigenům. Ty se objevují až po infekci nebo imunizaci. Jednorázová aplikace vakcíny zpravidla nestačí k vytvořeni prokazatelných titrů protilátek. Teprve druhá a třetí aplikace vyvolá vzestup titru specifických protilátek proti kapsulárním (povrchovým) antigenům, které byly prokázány v množství 1:20 až 1:160.Based on their own experiments, the authors found that in non-immunized cows, levels are only detectable against somatic antigens of E. coli strains that are induced by intestinal infections, at different titers when tested for slow agglutination at a dilution of 1:20 to 1: 32O. However, they do not show antibodies against capsular antigens. These appear after infection or immunization. A single administration of the vaccine is generally not sufficient to produce detectable antibody titers. Only the second and third application induces an increase in the titer of specific antibodies against the capsular (surface) antigens, which have been demonstrated in an amount of 1:20 to 1: 160.

Je prokázáno, že kolostrální imunoglobuliny lépe odolávají enzymatické degradaci ve střevě, než imunoglobuliny krevního séra, a proto je také zaručena delěí biologická účinnost během jejich pasážování střevem. Kravské kolostrum získané od imunizovaných zvířat je tedy nejpřirozenějším zdrojem ochranných látek k nevodění pasivní imunity pro všechny druhy mláďat hospodářských zvířat a může být využito i k ochraně dětí. Děti stejně jako ostatní mláďata jsou chráněny pasivně protilátkami matky obsaženými v mateřském mléce. U dětí, které nejsou kojeny matkou z nejrůznějších příčin dochází velmi často k průjmovým onemocněním infekčního původu. Mateřské protilátky lze velmi výhodně nahradit protilátkami obsaženými v kravském kolostru. Dosavadní ověřování bylo provedeno s aplikací hyperimunních hovězích sér při koliinfekcích u dětí, avšak aplikace kravského kolostra byla výhodnější.Colostral immunoglobulins have been shown to better resist enzymatic degradation in the intestine than blood serum immunoglobulins, and therefore longer biological efficacy during their passage through the intestine is also guaranteed. Thus, cow colostrum obtained from immunized animals is the most natural source of preservatives for non-conferring passive immunity for all livestock species and can also be used to protect children. Children as well as other pups are passively protected by maternal antibodies contained in breast milk. In infants who are not breastfed by their mother for various reasons, diarrheal diseases of infectious origin very often occur. The maternal antibodies can be very advantageously replaced by those contained in the cow colostrum. Up to date verification has been performed with the application of hyperimmune bovine sera in coli infections in children, but the application of cow colostrum was more advantageous.

Výše uvedené vlastnosti kravského kolostra lze výhodně využít jako dostupného zdroje pro výrobu biopreparátu. Kravské kolostrum podle vynálezu lze použít především jako biopreparát na ochranu mláďat hospodářských zvířat proti střevním infekcím. Použije se kolostra krav, které byly v poslední třetině březosti imunizovány vakcínou připravenou z původců vyvolávajících střevní onemocnění. l>ze použít buď celé kolostxum, nebo z něj získanou kolostrální syrovátku. Biopreparát může být v tekuté, nativní formě nebo ve formě prášku získaného sprayovým sušením.The abovementioned properties of cow colostrum can be advantageously utilized as an available source for the production of organic preparation. The cow colostrum according to the invention can be used in particular as a bio-preparation for the protection of young animals of the livestock against intestinal infections. Colostrum of cows which have been immunized with a vaccine prepared from agents causing intestinal disease in the last third of pregnancy shall be used. either whole colostxum or colostral whey obtained therefrom. The organic preparation may be in liquid, native or spray-dried form.

201 389201 389

Kravské kolostrum získané v prvém dnu po porodu mé vysoký obsah imunoglobnlinů. Námi zjištěné hodnoty ukazuji, Se množství u jednotlivých krav je značně rozdílné, a to v rozmezí 6 až 12 g imunoglobulinů ve 100 ml kolostrální syrovátky. Toto vysoké množství kolostrálních imunoglobulinů v mléčné žláze je odvislé od zatím ne zcela jasného mechanizmu, umožňujícího zvýšený prostup sérových imunoglobulinů v období těsně před porodem a jeětě během 2 až 3 dnů po porodu přes biologickou membránu do mléčné žlázy z krevního řečiště. Množství imunoglobulinů v kolostru ovšem během prvých dnů po porodu u krav rychle klesá a čtvrtého dne dosahuje již hodnot, které se běžně zjišíují v normálním kravském mléce, kdy hodnoty jsou zpravidla 0,5 g ve 100 ml mléčné syrovátky. Během prvého dne klesá množství na 40 % a během druhého dne již na hodnoty kolem 20 % původního množství. Pokles imunoglobulinů v prvých 4 dnech je úměrný poklesu celkové bílkoviny kolostrální syrovátky. Celkové bílkovina v kolostrální syrovátce dosahuje podle našich zjištění v prvém dnu průměrné hodnoty 10 až 12 g na 100 ml. Imunoglobulíny tvoří v době porodu 70 až 80 % obsahu z celkové bílkoviny kolostrální syrovátky. Je to tedy nesporně nejvyšší koncentrace imunoglobulinů jako se v žádném jiném sekretu krav nevyskytuje. V krevním séru je poměr imunoglobulinů u krav dosti stabilní a dosahuje průměrných hodnot 1,5 g na 100 ml krevního séra.The cow colostrum obtained in the first day after delivery my high immunoglobnlin content. Our values show that the amount varies considerably between cows, ranging from 6 to 12 g of immunoglobulins per 100 ml of colostral whey. This high amount of colostral immunoglobulins in the mammary gland is dependent on a not yet clear mechanism, allowing increased passage of serum immunoglobulins in the period just before delivery and even 2-3 days after delivery through the biological membrane into the mammary gland from the bloodstream. However, the amount of immunoglobulins in colostrum decreases rapidly during the first days after delivery and on day four it already reaches the values normally found in normal cow's milk, with values usually being 0.5 g per 100 ml whey. During the first day, the quantity decreases to 40% and during the second day to around 20% of the original quantity. The decrease in immunoglobulins in the first 4 days is proportional to the decrease in total colostral whey protein. The total protein in colostral whey reaches an average value of 10 to 12 g per 100 ml on the first day. Immunoglobulins account for 70 to 80% of total colostral whey protein at birth. It is undoubtedly the highest concentration of immunoglobulins as it does not occur in any other cow secretion. In blood serum, the immunoglobulin ratio in cows is fairly stable, reaching an average of 1.5 g per 100 ml of blood serum.

Je dokázáno, že převážná část imunoglobulinů v kolostru pochází z krevního séra a jen malé část je syntetizována lokálně přímo mléčnou žlázou. Z těchto důvodů je poměr specifických protilátek v kolostru proti vyvolavatelům průjmových onemocnění obdobný jako v krevním séru. Toto je možno ovlivnit imunizací březích krav. Neimunizované krávy sice mohou mít vysoký obsah imunoglobulinů, ale jen nepatrné hladiny specifických protilátek. Tyto se vytvářejí buá po spontánní infekci, nebo po imunizaci. U březích zvířat přichází v úvahu jen parenterální imunizace prováděná buá subkuténní, nebo intramuskulární aplikací vakcín z umrtvených původců střevních onemocnění mlááat.It is shown that most of the immunoglobulins in colostrum are derived from blood serum and only a small portion is synthesized locally directly by the mammary gland. For these reasons, the ratio of specific antibodies in colostrum against diarrhea-inducers is similar to that in blood serum. This can be influenced by immunization of pregnant cows. Unimmunized cows may have a high immunoglobulin content, but only minor levels of specific antibodies. These are formed either after spontaneous infection or after immunization. In pregnant animals, only parenteral immunization carried out either by subcutaneous or intramuscular administration of the deadly enteric disease vaccines is considered.

Výchozím postupem při přípravě všech forem biopreparétu je získáni kolostra od imunizovaných krav. Uvedeme tedy nejprve tento postup. Pro imunizaci byly použity krávy umístěné ve dvou stájích. V prvé stáji se použilo k imunizaci Polyvalentni vakcíny proti enterálním koliinfekcím novorozených selat, ve druhé stáji se používalo Polyvalentní vakcíny proti enterálním koliinfekcím novorozených telat. Obě vakcíny jsou komerčně vyráběné podle návrhu autorů v Biovetě n.p. Ivanovice na Hané. V každé stáji se vakcinovalo podle s chématu tak, že se započalo s vakcinací krav v 7. měsíci březosti, po 14 dnech se aplikovala druhá dávka a za dalších 14 dnů třetí dávka vakcíny v množství 20 ml s.s, do volného podkoží. Imunizace byla ukončena asi 14 dnů před očekávaným porodem krav.The default procedure for the preparation of all forms of biopreparation is to obtain colostrum from immunized cows. So let's start with this procedure first. Cows housed in two stables were used for immunization. In the first stable, a polyvalent vaccine against enteral coli infections of newborn piglets was used, in a second stable a polyvalent vaccine against enteral coli infections of newborn calves was used. Both vaccines are commercially manufactured according to the design of the authors in Bioveta n.p. Ivanovice na Hané. In each stable, vaccination according to the scheme was started by commencing vaccination of cows at 7 months of gestation, after 14 days a second dose and after a further 14 days a third vaccine dose of 20 ml s.s. into the free subcutaneous tissue. Immunization was terminated about 14 days prior to expected farrowing.

Sběr kolostra od krav se provedl v průběhu prvého dne po porodu, zpravidla při trojím vydojení během 24 hodin. Sbírá se jen přebytečné kolostrum, které nespotřebují telata. Takto bylo zíákáno od jedné krávy 2 až 5 litrů kolostra. Kolostrum po oddojení se přecedí, zchladí a uchovává v nádobách z plastické hmoty od každé krávy zvlášt. Každý den se provede odvoz kolostra z obou stájí k dalšímu zpracování.Colostrum was collected from cows during the first day after delivery, usually with three milkings per 24 hours. Only excess colostrum is collected that does not consume calves. Thus, 2 to 5 liters of colostrum were attracted from one cow. After the milking, the colostrum is streaked, cooled and stored in plastic containers from each cow separately. Every day colostrum is transported from both stables for further processing.

201 309201 309

V laboratoři probíhá potom vlastní zpracování kolostra na biopreparát. Zpracovává se jen hygienicky získané kolostrum beze stop nečistot nebo krve. Smíchají se vždy: kolostra od krav imunizovaných stejnou vakcínou, nakonzervují benzoanem sodným nebo kyselinou benzoovou v 0,3 % koncentraci a uchovají v 25 1 nádobách v chladicím boxu,nebo se nádoby ponoří do nádrže s chlazeným roztokem. Zde je možno kolostrum uchovávat po dobu 1 týdne. Tato základní surovina slouží k výrobě všech dalších forem biopreparátu.In the laboratory, colostrum is processed into an organic preparation. Only hygienically obtained colostrum is processed without traces of dirt or blood. They are always mixed: colostrum from cows immunized with the same vaccine, preserved with 0.3% sodium benzoate or benzoic acid and stored in 25 l containers in a refrigerated box, or immersed in a chilled solution tank. Here the colostrum can be stored for 1 week. This basic raw material is used for the production of all other forms of organic preparation.

U smíšeního kolostra se provede stanovení hladiny imunoglobulinů, která mé být v rozmezí 3 až 10 g na 100 ml. Pro použití kolostra v nativní formě není nutné provést další zpracování. Kolostrum se rozplnilo do polyethylenových sáčků po 1 litru, které se zatavily a uložily ke zmrazení při -15 až -20 °C do mrazicích boxů. Zde byly sáčky uchovávány až po dobu 6 měsíců.Mixing of colostrum is performed to determine the level of immunoglobulins, which should be between 3 and 10 g per 100 ml. No further processing is required to use colostrum in native form. Colostrum was filled into polyethylene bags of 1 liter, which were sealed and stored in freezers at -15 to -20 ° C for freezing. Here the bags were kept for up to 6 months.

Biopreparát v sušené formě se připravuje z výše popsané výchozí suroviny, a to buá z celého kolostra, nebo jen z kolostrální syrovátky.The organic preparation in dried form is prepared from the raw material described above, either from the whole colostrum or only from colostral whey.

Příprava sušeného biopreparátu z kolostrální syrovátky začíná srážením čerstvého, nebo zmraženého uchovaného kolostra sýřidlem Laktosin. Kolostrum je nutno nejdříve zahřát v nádobách ponořených do temperované lázně na teplotu 35 °C. Do ohřátého koloára se přidává syřidlo v množství 1:10000. Srážení probíhá 2 až 3 hodiny v klidu bez míchání. V případě, že nedojde k vytvořeni sraženiny kaseinu může se snížit pH kolostra naThe preparation of dried organic preparation from colostral whey begins by precipitation of fresh or frozen preserved colostrum with rennet Laktosin. The colostrum must first be heated to 35 ° C in containers immersed in a tempered bath. Rennet is added to the heated collar in an amount of 1: 10,000. The precipitation takes place for 2-3 hours at rest without stirring. If casein does not precipitate, the pH of colostrum may be reduced to

4,6 směsí 0,1 N! kyseliny solné a octové (1:1). V tomto případě má získaná kolostrální syrovátka nižší hodnotu pH (4,5 až 3,9), zatímco syrovátka získaná samotným Laktosinem mé pH 5,5 až 5,0. Samotný srážecí postup neovlivňuje biologickou aktivitu imunoglobulinů, avšak při delším skladování syrovátky může dojít ke snížení pH na 3,5 i méně, tím již hrozí nebezpečí degradace imunoglobulinů na nižší fragmenty, biologicky neúčinné.4.6 mixtures of 0.1 N! hydrochloric and acetic acid (1: 1). In this case, the obtained colostral whey has a lower pH (4.5-3.9), whereas the whey obtained with Lactosin alone has a pH of 5.5-5.0. The clotting process itself does not affect the biological activity of immunoglobulins, but if the whey is stored for a longer period, the pH may be reduced to 3.5 or less, thus threatening to degrade the immunoglobulins into lower fragments, biologically ineffective.

Z těchto důvodů jsme syrovátku po vysrážení kolostra ihned odstředili nebo oddělili lisováním přes husté plátno a během 24 až 48 hodin zpracovali na sušený biopreparát.For this reason, the whey after centrifugation of the colostrum was immediately centrifuged or separated by pressing through a thick cloth and processed into a dried organic preparation within 24 to 48 hours.

Ze smíšeného kolostra jsme získali 40 až 50 % objemového množstvísyrovátky. Syrovátka obsahuje především bílkoviny, a to hlavně imunoglobuliny (průměrně 5 g IgG na 100 ml), dále specifické mléčné bílkoviny beta-laktoglobulin a alfa-laktoalbumin, laktózu, řadu stopových prvků, enzymů a vitaminů.From mixed colostrum we obtained 40 to 50% volume of whey. Whey contains mainly proteins, mainly immunoglobulins (average 5 g IgG per 100 ml), specific milk proteins beta-lactoglobulin and alpha-lactoalbumin, lactose, a number of trace elements, enzymes and vitamins.

Sušení syrovátky jsme prováděli na sprayovém sušicím zařízení (mlhové sušení). Vyzkoušeli jsme sušicí zařízení firmy NIRO a ANHYDRO (Dánsko), a to jednak laboratorní typ sušicího zařízení, tak i typ II (pětinásobné kapacita oproti laboratornímu zařízení). Podstatné rozdíly v sušení na různých aparaturách nejsou, avšak proces sušení na každém zařízení vykazuje menší individuální odlišnosti ve stupni teploty a rychlosti průletu rozprašovaných částic. Na každé apartuře je nutno nejšetrnější způsob sušení odzkoušet a stanovit nejvhodnější parametry. Při jejich dodržení se potom biologická hodnota imunoglobulinů v úsušku nemění a proces sušení vyžaduje jen minimální kontrolu. Uvedeme proto parametry, které jsme použili při sušeni na zařízení ANHYDRO, laboratorní typ.Whey drying was carried out on a spray dryer (fog drying). We tested drying equipment of NIRO and ANHYDRO (Denmark), both laboratory type of drying equipment and type II (five times capacity compared to laboratory equipment). There are no significant differences in drying on different apparatuses, but the drying process on each apparatus shows less individual variation in the temperature and flow rate of the sprayed particles. On each apartment, the most gentle drying method must be tested and the most suitable parameters determined. If this is followed, the biological value of the immunoglobulins in the handheld does not change and the drying process requires only minimal control. We will therefore list the parameters that we used for drying on ANHYDRO, laboratory type.

201 309201 309

Suěicí aparatura sa vytemperuje a nastaví konstantní vstupní teplota v rozmezí 220 al 240 °C. Nastavení teploty se provádí při rozprašování destilované vody. Foton se započne s rozprašováním kolostrální syrovátky v atomizáru při otáčkách kolem 35000, aby rozprašovaná kapky se nelepily na stánu aparatury. Výstupní teplota se udržuje v rozmezí 75 až 80 °C, čehož se dosáhne regulaci přítoku syrovátky do atomizáru. Při tomto postupu rozprašované kapky mají mžikový prolet a jejich povrchová teplota při odpařování nepřesahuje 40 °C, takže nedochází k denaturaci imunoglobulinů. Množství zpracované syrovátky na této aparatuře za hodinu je maximálně 5 litrů.The drying apparatus was allowed to warm and set a constant inlet temperature between 220 and 240 ° C. The temperature is set when spraying distilled water. The photon is started to spray the colostral whey in an atomizer at a speed of about 35,000 so that the spray drops do not stick to the apparatus stand. The outlet temperature is maintained in the range of 75 to 80 ° C, which is achieved by controlling the flow of whey into the atomizer. In this procedure, the spray droplets have a flash-through and their surface temperature during evaporation does not exceed 40 ° C, so that the denaturation of the immunoglobulins does not occur. The amount of whey processed on this apparatus per hour is a maximum of 5 liters.

Získaný úsušek je značně hydroskopický. Bezprostředně po usušení neobsahuje více jak 5 % reziduélní vody. Aby se zamezilo absorbování vlhkosti z ovzduší, sušený preparát se tentýž den rozdělí a zataví do polyetylenových sáčků. Sáčky se uchovávají v temnu při normální teplotě. Z každé šarže se odebírají vzorky pro kontrolu šetrnosti sušicího poetupu. Po skončení sušení se každý den vyčistí aparatura, přičemž zbytky sušeného preparátu, která byly nalepeny na stěnách & v potrubí se nepoužívají, jelikož jde o preparát se zAačně denaturovanou bílkovinou. Sušený preparát z kolostrální syrovátky byl uchováván až po dobu 6 měsíců, bez průkazných změn.The obtained towel is highly hygroscopic. It does not contain more than 5% residual water immediately after drying. In order to prevent the absorption of moisture from the atmosphere, the dried preparation is distributed on the same day and sealed in polyethylene bags. The bags are stored in the dark at normal temperature. Samples are taken from each batch to check the gentleness of the drying poetup. After the drying is finished, the apparatus is cleaned every day, and the remnants of the dried preparation that have been stuck to the walls & in the pipeline are not used as it is a preparation with the initially denatured protein. The dried colostral whey preparation was stored for up to 6 months without any significant changes.

Pro přípravu sušeného preparátu z celého kolostra jsme používali stejného zařízení. K sušení je možno použít kromě horního rozprašování atomizáru také spodního tlakového rozprašování tryskou. Dodržují se stejné teplotní parametry. Jelikož kolostrum má vysoký obsah tuku, použili jsme k homogenizaci tekutého substrátu elektrického míchadla, jinak dojde k oddělování tuku v zásobní nádobě. Sušený preparát z celého kolostra má vysoký podíl tuku v sušině (40 až 50 %), a je proto nutno jej uchovávat v zatavených sáčcích při teplotě +5 °C, a to nejdéle po dobu 3 měsíců. Sušený preparát z kolostra má navíc vysokou nutriční hodnotu a je určen především pro mlááata při »aném odstavu.We used the same equipment to prepare the dried preparation from the whole colostrum. In addition to the upper atomization of the atomizer, the lower pressure atomization through the nozzle can be used for drying. The same temperature parameters are observed. Since the colostrum has a high fat content, we have used an electric stirrer to homogenize the liquid substrate, otherwise the fat in the storage vessel will be separated. The dried colostrum preparation has a high fat content in the dry matter (40 to 50%) and must therefore be stored in sealed bags at + 5 ° C for a maximum of 3 months. In addition, the dried colostrum preparation has a high nutritional value and is intended primarily for young weaners.

Preparáty připravené z celého kolostra nebo i z kolostrální syrovátky nejsou sterilní, a to ani v případě, kdy jsou připravovány v sušené formě. Ověřili jsme proto možnost sterilizace kolostrální syrovátky filtrací přes bakteriologické filtry. Používali jsme k těmto účelům Seitzovy filtry, ale je možno využít i membránové filtry firmy Millipore (velikost póru 0,45 um) za použití tlaku 0,3 až 0,4 MPa. Zkoušeli jsme také sterilizaci sušených preparátů radiačním zářením, a to kobaltovou bombou v dávce 40 až 50 KGy. Takto ozářené sušené preparáty byly při bakteriologické kontrole sterilní. Neosvědčilo se však ozařování preparátu v tekutém, nativním stavu, jelikož došlo k denaturaci imunoglobulinů.Preparations prepared from whole colostrum or even from colostral whey are not sterile, even when prepared in dried form. We have therefore verified the possibility of sterilizing colostral whey by filtration through bacteriological filters. We used Seitz filters for this purpose, but it is also possible to use Millipore membrane filters (pore size 0.45 µm) using a pressure of 0.3 to 0.4 MPa. We also attempted sterilization of dried preparations by radiation radiation, using a cobalt bomb at a dose of 40 to 50 KGy. The irradiated dried preparations were sterile during bacteriological control. However, irradiation of the preparation in the liquid, native state has not proven to be successful as immunoglobulin denaturation has occurred.

Pro přípravu biopreparátu z kolostra jsme vyzkoušeli kromě komerčně připravených vakcín Polyvalentní vakeína proti enterélním koliinfekcím novorozených telat a Polyvalentní vakeína proti enterélním koliinfekcím novorozených selat vyráběných v Biovetě n.p. Ivanovice na Hané i vlastní vakcíny, které obsahují kromě kmenů obsažených v komerční vakcíně pro telata navíc enteropatogenní kmeny E. coli séroskupiny 08:K? a 011:K?, a u vakcíny pro selata navíc kmeny E. coli séroskupiny 064 :K? a 045:K7.In addition to the commercially prepared vaccines Polyvalent Vaccine against enteric coli infections of newborn calves and Polyvalent Vaccine against enteric coli infections of newborn piglets produced in Bioveta n.p. Ivanovice na Hané and its own vaccines, which contain, in addition to strains contained in commercial vaccine for calves, in addition enteropathogenic strains of E. coli serogroup 08: K? and 011: K ?, and in the case of the piglet vaccine, in addition, strains of E. coli serogroup 064: K? and 045: K7.

201 309201 309

Déle jsme vyzkoušeli pro přípravu biopreparétu kombinovanou vakeínu sestávající z uvedené vakcíny proti enterálnía koliinfekeím novorozených selat sdoIu ee suspenzí viru TGE (virus virové gastroenteritidy prasat) z tkáňové kultury.We have also tried for the preparation of a combination vaccine consisting of said vaccine against enteral coli infections of newborn piglets with a suspension of TGE virus (swine viral gastroenteritis virus) from tissue culture.

Obsah specifických protilátek proti vyvolavatelům střevních infekcí ee zjišluje eérologickými metodami, a to u protilátek proti koliinfekeím mikrometodou na plotnáhh podle Takatay-ho s kulturami intravitálná barvenými trifenyltetrazolium chloridem. Fři vyšetření biopreparétu proti koliinfekeím je nutno prokázat titry proti kapsulárním antigenům (OK-antigeny) v ředění 1:20 až 1:320.The content of specific antibodies against the causative agents of intestinal infections is determined by eerological methods, in the case of antibodies against coliinfections with the Takatay plate micromethod with cultures intravitalally stained with triphenyltetrazolium chloride. When examining the biopreparation against coliinfections, titers against capsular antigens (OK-antigens) at a dilution of 1:20 to 1: 320 should be shown.

Stanovení celkové bílkoviny ae provádí v koloetrální syrovátce, a to biuretovou metodou nebo Kjeldahlizací při použití přepoěítavacího faktoru N x 6,38. Hladina celkové bílkoviny by měla být v rozmezí 6 až 16 g na 100 ml.Determination of total protein ae is carried out in coletral whey by the biuret method or by Kjeldahlization using a conversion factor of N x 6.38. The total protein level should be between 6 and 16 g per 100 ml.

Stanovení množství hlavního imunoglobulinu (IgO^ (IgO^) se provádí jednosměrnou radikální imunodifuzí podle Manciniové v agaru za použití specifického králičího antiséra proti hovězímu imunoglobulinu (RAB IgGg). Princip vyšetření spočívá v precipiteční reakci, které vzniká ve formě jednosměrně se zvětšujících zón, jejichž velikost je úměrná množství IgG v naneseném vzorku kolostrální syrovátky do startovacích jamek. Jako srovnávací standardy se použije vzorek hovězího krevního séra, které obsahujeThe amount of major immunoglobulin (IgO ^) is determined by one-way radical immunodiffusion according to Mancini in agar using a specific rabbit antisera against bovine immunoglobulin (RAB IgGg). the size is proportional to the amount of IgG in the colostral whey sample applied to the starting wells.

1,5 g IgO₂ na 100 ml. Zjištěné hodnoty smíšeného kolostra se mají pohybovat v rozmezí 3 až 5 g na 100 ml syrovátky.1.5 g IgO ₂ per 100 ml. The values of mixed colostrum should be in the range of 3 to 5 g per 100 ml of whey.

Reziduální vlhkost u vyhovujících sušených preparátů je v rozmezí 3 až 8 %. Toto zjištění jsme provedli vážením vzorku před a po sušení při 100 °C v sušárně po dobu 24 hodin.The residual moisture content of suitable dried preparations is in the range of 3 to 8%. This was done by weighing the sample before and after drying at 100 ° C in an oven for 24 hours.

Poměrně rychlým a jednoduchým vyšetřením, které jsme provedli u sušených preparátů je sledování rozpustnosti sušeného preparátu v destilované vodě a 5 í roztoku NaCl. Sušené preparáty kolostrální syrovátky a kolostra se rozpouští v množství 1:10 na Míchačce po dobu 30 minut. Potom se odstředí při 15000 ot./min. po dobu 30 minut a opět zváží nerozpuštěný zbytek. Zbytek nemá přesahovat 10 % původní navážky sušeného preparátu.A relatively quick and simple examination, which we performed for dried preparations, is the monitoring of the solubility of the dried preparation in distilled water and 5 µl of NaCl solution. Dried colostral whey and colostrum preparations dissolve 1:10 in a blender for 30 minutes. It is then centrifuged at 15000 rpm. for 30 minutes and reweigh the undissolved residue. The residue should not exceed 10% of the initial weight of the dried preparation.

Obsah tuku v sušeném kolostru je značné vysoký 40 až 50 % v sušině. V sušené kolostrální syrovátce je naproti tomu značně nížký, což zaručuje další skladovatelnost tohoto sušeného biopreparétu. Naše stanovení ukazovalo, že hodnota tuku je kolem 0,5 %. Zkouška se provádí éterovou extrakcí podle líajaniera.The fat content of the dried colostrum is considerably high 40-50% in the dry matter. On the other hand, it is very low in dried colostral whey, which guarantees a further shelf life of this dried biopreparate. Our determination showed that the fat value is around 0.5%. The test is carried out with ethereal ether extraction.

Ověřování protekčního účinku navrhovaných biopreparátů na bázi kravského kolostra bylo provedeno experimentální infekcí selat a telat enteropatogenními typy E. coli dále při spontánním onemocnění enterálními koliinfekcemi telat a selat a při virové gastroenteritidě selat.The protective effect of the proposed cow colostrum-based bioproducts was verified by experimental infection of piglets and calves with enteropathogenic E. coli types, in spontaneous disease by enteral coli infections of calves and piglets and in viral gastroenteritis of piglets.

Výsledky experimentální infekce u telat ukázaly, že dávka 10 g sušeného biopreparátu kolostrální syrovátky na 1 litr diety zabránila vzniku průjmového onemocnění po infekci enteropatogenním kmenem E. coli sérotypu 08+0141. Při aplikaci preparátu z ee201 309 láho kolostra je potřebná dávka 20 g na 1 litr diety.Results of experimental infection in calves showed that a dose of 10 g colostral whey dried bioproduct per liter of diet prevented the development of diarrhea after infection with the enteropathogenic strain E. coli serotype 08 + 0141. When applying ee201 309 colostrum, a dose of 20 g per liter of diet is required.

Pokusy s experimentální infekcí u selat rovněž ukázaly, že dávka 5 g sušeného kolostra pro eele na den byla dostačující k ochránění zvířat při infekci enteropatogenním kmenem E. coli sárotypu 0147:K89,k88.Experiments with experimental infection in piglets also showed that a dose of 5 g of dried colostrum for eele per day was sufficient to protect animals from infection with the enteropathogenic strain of E. coli sarotype 0147: K89, k88.

Využiti biopreparátů vyrobených na bázi kravská kolostrální syrovátky byla ověřována i při ranám odstavu selat a účinnost byla srovnávána s biopreparátem vyrobeným na bázi imunního hovězího séra. Při aplikaci 5 g na 1 sele po dobu 10 až 14 dnů byl úhyn v důsledku průjmových onemocnění ve skupině selat s aplikací suěené syrovátky 3,6 % a ve skupině s aplikací sušeného séra 5,8 %. V kontrolní skupině bez aplikace biopreparátů byl úhyn selat 12,9 %,The use of bio-products made on the basis of cow's colostral whey was also verified at weaning piglets and the effectiveness was compared with bio-products made on the basis of immune bovine serum. At the application of 5 g per piglet for 10-14 days, the death rate due to diarrhea was 3.6% in the group of piglets with whey powder and 5.8% in the group with dried sera. In the control group without the application of biopreparations, the piglet mortality was 12.9%,

Déle bylo provedeno srovnání účinnosti biopreparátů u konvenčních selat odstavovaných v 28 dnech v lokalitě e výskytem enteropatogenního kmene E. coli 0147. V důsledku průjmu docházelo zde u selat ke snížení přírůstku hmotnosti. Při ověřování protekČního účinku byla proto srovnávána hmotnost selat za 3 týdny po odstavu. Ve skupině selat s aplikací sušeného biopreparátů v dávce 10 g na 1 sele po dobu 10 dnů byl oproti kontrole zjištěn vyšší přírůstek hmotnosti o 6 %, zatímco ve skupině s aplikací sušeného imunního séra byl přírůstek hmotnosti vyěěí o 4,8 %.A comparison of the efficacy of bioproducts in conventional piglets weaned at 28 days in the locality with the occurrence of an enteropathogenic strain E. coli 0147 was also performed. Due to diarrhea, there was a decrease in weight gain in piglets. Therefore, in checking the protective effect, the weight of piglets was compared 3 weeks after weaning. In the group of piglets treated with 10 g per 1 piglet for 10 days, a weight gain of 6% compared to the control was found, whereas in the group of dried immune serum the weight gain was 4.8%.

Při získávání selat s minimální nemocností byla prevence průjmového onemocnění prováděna u více jak 200 hysterektomovaných selat odchovávaných v orevřeném systému bet izolátorů. Prevence byla prováděna od 3. do 15. dne po narození aplikací sušeného kolostra v množství 10 g na 1 sele. Úhyn při tomto způsobu prevence nepřesáhl 4 %, zatímco v období před aplikací sušeného kolostra ae pohyboval úhyn selat mezi 10 až 15 %,In obtaining piglets with minimal morbidity, the prevention of diarrhea was performed in more than 200 hysterectomized piglets reared in an open system of bet insulators. Prevention was performed from day 3 to day 15 after birth by applying dried colostrum in an amount of 10 g per 1 piglet. The mortality rate in this method of prevention did not exceed 4%, whereas in the period prior to application of the dried colostrum, the mortality of piglets ranged between 10 and 15%,

U telat bylo využití navrhovaných biopreparátů odzkoušeno ve velkokapacitních teletnicích. Zde bylo provedeno srovnání ochranného účinku biopreparátů ze sušená kolostrální syrovátky a sušeného imunního séra. Srovnáván byl jednak úhyn telat a dále množství zvířat ohemocnělých průjmem.In calves, the use of the proposed biopreparations has been tested in large-capacity calves. Here, a comparison of the protective effect of the bio-preparations from dried colostral whey and dried immune serum was performed. The deaths of calves and the number of animals diarrhea were compared.

Ve skupině s aplikací sušené kolostrální syrovátky v množství 20 g na 1 tele po dobu 14 dnů nebyl zaznamenán úhyn a 66,6 % ze zastavených zvířat onemocnělo průjmem.In the group receiving 20 g of colostral whey for 1 day for 14 days, mortality was not reported and 66.6% of the animals stopped having diarrhea.

Ve skupině s aplikací sušeného krevního séra nebyl rovněž zaznamenán úhyn a 80 % telat onemocnělo průjmem. V kontrolní skupině uhynulo 16 % zvířat a průjem mělo všech 100 % zastavených zvířat. V těchto pokusech aplikované preparáty ze sušeného séra a sušené kolostrální syrovátky nahradily běžně používaná antibiotika, však preparát z kolostra nebo kolostrální syrovátky jsou podle našich kalkulací asi lOx levnější.Mortality was also not observed in the dried blood serum group and 80% of calves suffered from diarrhea. In the control group, 16% of the animals died and all 100% of the animals stopped having diarrhea. In these experiments, the applied preparations of dried serum and dried colostral whey replaced the commonly used antibiotics, however, the preparation of colostrum or colostral whey is, according to our calculations, about 10 times cheaper.

Claims

Object of the invention

1. A bioproduct for the protection of juvenile livestock against intestinal infections, characterized in that it consists of colostrum or coletral whey of immunized cows from the first day after calving, comprising specific antibodies against the intestinal infectious agents detectable at a dilution of 1:20 to 1: 320 and has a total amount of immunoglobulin 0 ranging from 3 to 10 g per 100 ml.

2. A preparation according to claim 1, characterized in that the coletral whey and the whole colostrum are in native, liquid or dried form.

Printed by Moravian Printing Works,