KR900702014A - 아미노펩티다아제 ap1 및 ap122의 단리, 정제 및 특성확인 - Google Patents

아미노펩티다아제 ap1 및 ap122의 단리, 정제 및 특성확인

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KR900702014A
KR900702014A KR1019900700987A KR900700987A KR900702014A KR 900702014 A KR900702014 A KR 900702014A KR 1019900700987 A KR1019900700987 A KR 1019900700987A KR 900700987 A KR900700987 A KR 900700987A KR 900702014 A KR900702014 A KR 900702014A
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KR
South Korea
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amino
aminopeptidase
specific
specific aminopeptidase
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Application number
KR1019900700987A
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Inventor
에이. 스미스 잔
이화 장
Original Assignee
원본미기재
더 제네랄 호스피탈 코오퍼레이션
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Publication date
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/48Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products

Abstract

내용 없음

Description

아미노펩티다아제 AP1 및 AP122의 단리, 정제 및 특성확인
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (23)

  1. 아미노-말단의 메티오닌 잔기와, Val,Ala, Arg, Cys, Gly, His,Ile,Leu, Lys, Met 및 Phe로 구성되는 군으로부터 선택된 끝에서 2번째의 모든 아미노-말단 아미노산 잔기 사이의 펩티드 결합을 절단하는 능력을 가지는 것을 특징으로 하는 실질적으로 정제된 기질-특이적 아미노펩티다아제 효소.
  2. 펩티드의 아미노-말단의 잔기 X와 인접한 Ile잔기 사이의 펩티드 결합을 절단하는 능력이 있고, 이때대 X는 Arg,Gln, Lue, Met, Phe 및 Trp 로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기인 것을 특징으로하는, 실질적으로 정제된 기질-특이적 아미노펩티다아제 효소.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, AP1 아미노펩티다아제인 것을 특징으로 하는 -특이적 아미노펩티다아제.
  4. 아미노말단의 메티오닌 잔기와, Arg, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, 또는 Thr로 구성되는 군으로부터 선택된 끝에서 2번째의 모든 아미노-말단 아미노산 잔기 사이의 펩티드 결합을 절단하는 능력을 가지는 것을 특징으로 하는 실질적으로 정제된 기질-특이적 아미노펩티다아제 효소.
  5. 펩티드의 아미노-말단의 잔기 X와 인접한 Ile 잔기 사이의 펩티드 결합을 절단하는 능력이 있고 이때 X는 Val,Ala,Arg, Gln, His, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr 및 Trp로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기인 것을 특징으로 하는 실질적으로 정제된 기질-특이적 아미노펩티다아제 효소.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, AP122 아미노펩티다아제인 것을 특징으로 하는 기질-특이적 아미노펩티다아제.
  7. 제3항의 기질-특이적 아미노펩티다아제를 코드하는 유전적 서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 재조합 DNA분자.
  8. 제6항의 기질-특이적 아미노펩티다아제를 코드하는 유전적 서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 재조합 DNA분자.
  9. 제3항에 있어서 재조합 분자의 발현에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 기질-특이적 아미노펩티다아제 AP1.
  10. 제6항에 있어서, 재조합 분자의 발현에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 기질-특이적 아미노펩티다아제 AP122.
  11. 제3항의 기질-특이적 아미노펩티다아제를 코드하는 유전적서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 재조합 DNA분자.
  12. 제6항의 기질-특이적 아미노펩티다아제를 코드하는 유전적서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 재조합 DNA분자.
  13. 아미노 펩티다아제를 함유하는 샘플로부터 제3항의 실질적으로 정제된 기질-특이적 아미노펩티다아제를 회수하기 위한 방법으로,(a) 상기 아미노펩티다아제 함유 샘플로부터 미정제 기질-특이적 아미노펩티다아제를 회수하는 단계 ;(b)단계 (a)로부터의 상기 미정제 기질- 특이적 아미노펩티다아제에 CM-세파로스 및 DEAE-세파로스 CL-6B 상에서 연속적으로 이온 교환 크로마토그래피를 수행하는 단계; 그리고 (c) 상기 연속적인 이온 교환 크로마토그래피로부터의 용출액으로부터 황산 암모늄 침강에 의해 정제된 모든 기질-특이적 아미노펩티다아제를 회수하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 추가로 다음 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법; (d)단계 (c)의 상기 회수된 기질-특이적 아미노펩티다아제에 페닐-세파로스 소수성 상호반응 크로마토그래피를 수행하는 단계; 와 (e) 상기 페닐-세파로스 소수성 상호반응 크로마토그래피에 의해 정제된 모든 기질-특이적 아미노펩티다아제를 회수하는 단계.
  15. 제14항에 있어서, 추가로 다음단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법; (f)단계 (e)의 상기 회수된 기질-특이적 아미노펩티다아제에 세파로스 CL6B 크로마토그래피를 수행하는 단계;와 (g) 상기 세파로스 CL-6B 크로마토그래피에 의해 정제된 모든 기질-특이적 아미노펩티다아제를 회수하는 단계.
  16. 아미노펩티다아제가 함유된 샘플로부터 제6항의 실질적을 정제된 기질-특이적 아미노펩티다아제를 히수하기 위한 방법으로, (a) 상기 아미노펩티다아제에 함유된 샘플로부터 미정제 기질-특이적 아미노펩티아제를 회수하는 단계;(b) (a) 단계에서 회수된 상기 미정제 기질-특이적 아미노펩티아제에 이온 교환 크코로마토그래피를 수행하는 단계; 그리고 (c) 상기 이온 교환 크로마토그래피에로부터의 용출액으로부터 황산 암모늄 침강에 의해 정제된 모든 기질-특이적 아미노펩티아제를 회수하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 추가로 다음 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법; (d) (c)단계의 상기 회수된 기질-특이적 아미노펩티다아제를 페닐-세파로스 소수성 상호반응 크로마토그래피시키는 단계; 및 (e) 상기 페닐-세파로스 소수성 상호반응 크로마토그래피에 의해 정제된 모든 기질-특이적 아미노펩티다아제를 회수하는 단계.
  18. 제17항에 있어서, 다음과 같은 추가적 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법; (f) (e)단계에서 회수된 상기 기질-특이적 아미노펩티다아제를 히드록실아파타이트 크로마토그래피하는 단계 및(g) 상기 히드록실아파타이트 크로마토그래피에 의해 정제된 모든 기질-특이적 아미노펩티다아제를 회수하는 단계.
  19. 아미노-말단 잔기를 함유하고, 아미노-말단의 끝에서 2번째의 아미노산 잔기로서 Val, Ala, Arg, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Met, 및 Phe로 구성되는 군에서 선택된 아미노산을 함유하는 펩티드로부터 아미노-말단 메티오닌잔기를 제거하는 방법으로 기질-특이적 아미노펩티다아제 AP1의 존재하에 상기 펩티드를 인큐베이션함으로써 상기 아미노 말단잔기를 제거하는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 아미노-말단 잔기를 함유하고, 아미노-말단의 끝에서 2번째의 아미노산 잔기로서 Arg, Cys, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, 및 Thr로 구성되는 군에서 선택된 아미노산을 함유하는 펩티드로부터 아미노-말단 메티오닌잔기를 제거하는 방법으로 기질-특이적 아미노펩티다아제 AP122의 존재하에 펩티드를 인큐베이션함으로써 상기 아미노-말단잔기를 제거하는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. Arg, Gln, Leu, Met, Phe, 및 Thr로 구성되는 군에서 선택된 말단잔기 X와, 인접한 Ile 잔기를 함유하고 있는 펩티드로부터 아미노-말단잔기 X를 제거하는 방법으로, 기질-특이적 아미노펩티다아제 AP1의 존재하에 펩티드를 인큐베이션함으로써 상기 아미노-말단잔기를 제거하는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. Val, Ala, Arg, Gln, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr 및 Trp로 구성되는 군에서 선택된 말단잔기 X와, 인접한 Ile잔기를 함유하고 있는 펩티드로부터 아미노-말단잔기 X를 제거하는 방법으로, 기질-특이적 아미노펩티다아제 AP122의 존재하에 펩티드를 인큐베이션함으로써 상기 아미노-말단잔기를 제거하는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제 19항 내지 22항중 어느하나에 있어서, 상기 기질-특이적 아미노펩티다아제가 고체 지지체에 고정되어 있는 것을 특징으로 하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019900700987A 1988-09-13 1989-08-25 아미노펩티다아제 ap1 및 ap122의 단리, 정제 및 특성확인 KR900702014A (ko)

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