KR880007725A - 합성유전자에 의한 대장균으로부터 소 성장호르몬의 대량 생산방법 - Google Patents

합성유전자에 의한 대장균으로부터 소 성장호르몬의 대량 생산방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음.

Description

합성유전자에 의한 대장균으로부터 소 성장호르몬의 대량 생산방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 전체 소 성장호르몬 유전자에 해당되는 27종류의 합성 올리고 뉴클리오티드의 염기 순서를 5′ 말단에서 3′ 말단 순서로 나타낸 것이며,
제2도는 제1도의 올리고 뉴클리오티드의 접합 전략을 도시한 것이고,
제3도는 합성된 올리고 뉴클리오티드의 접합을 위해 대장균 운반체로의 전체 소 성장호르몬 유전자 재조합 과정을 나타낸 것이고,
제4도는 확인한 소 성장호르몬의 염기배열 순서 및 아미노산 순서를 나타낸 것이고,
제5도는 재조합된 전체 소 성장호르몬 유전자를 대장균 발현운반체로 재조합 시키는 과정을 나타낸 것이다.

Claims (7)

  1. 소 성장호르몬의 아미노산 배열 순서에 따라 Sac I Pst I 및 Sal I의 인지부위가 존재하는 올리고 뉴클리오티드를 합성한 후 이를 접합전략에 따라 접합시켜 대장균 운반체에 클로닝하여 소 성장호르몬 유전자를 제조한 다음 이 유전자를 인공합성 링커와 함께 대장균 운반체에 클로닝하여 인공합성 링커가 접합된 소 성장호르몬 전체 유전자를 제조하여 이를 연어 성장호르몬이 발현될 수 있는 trp 프로모터를 지닌 대장균 발현 운반체에 재클로닝 시킨 최종발현 운반체를 대장균 내에서 발현시킴을 특징으로 하는 소 성장호르몬의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 인공합성 링커는 시작코돈 ATG 앞에 종료코돈 TAA와 SD 배열로 되어 있어 SD배열과 시작코돈 ATG 사이에서 m-RNA 2차 구조가 생기지 않도록 한 것임을 특징으로 하는 소 성장호르몬의 제조방법.
  3. 제1항 또는 2항에 있어서 인공합성 링커는 윗가닥 73mer(5′-CATG GAG GAA TTA TAA ATG GCT TTT CCG GCT ATG TCT CTA TCT GGT CTA TTC GCT AAC GCT GTT CTT CGA GCT-3′)과 아랫가닥 65mer(3′-CTC CTT AAT ATT TAC CGA AAA GGC GCA TAC AGA GAT AGA CCA GAT AAG CGA TTG CGA CAA GAA GC-5′)로 구성된 것임을 특징으로 하는 소 성장호르몬의 제조방법.
  4. 제1항에 있어서, 인공합성 링커가 접합된 소 성장호르몬 전체유전자는 526 염기쌍으로 된 소 성장호르몬 유전자의 Sac I-Sal I 절편을 인공합성 링커와 함께 제한효소 Nco I와 Sai I으로 처리한 운반체 pSOD에 클로닝시켜서 제조된 것임을 특징으로 하는 소 성장호르몬의 제조방법.
  5. 제1항에 있어서, 최종 대장균 발현운반체는 운반체(pSOD BGH)를 Nco I, Sal I으로 처리하여 인공합성 링커와 접합된 소 성장호르몬 전체 유전자를 분리한 후 이를 Xba I, Sal I으로 처리하여 연어 성장 호르몬 유전자의 일부가 제거된 대장균 발현운반체(ptrp 322H SGH)에 재클로닝시킨 운반체(ptrphs BGH 1-13)임을 특징으로 하는 소 성장호르몬의 제조방법.
  6. 제1항에 있어서, 대장균에서의 발현은 연어 성장호르몬 유전자 앞부분의 SD 배열과 시작코돈(ATG)을 이용한 것임을 특징으로 하는 소 성장호르몬의 제조방법.
  7. 제1항 또는 제6항에 있어서, 대장균에서의 발현은 시작코돈에서 37염기쌍 까지의 연어 성장호르몬 유전자에 SD 배열 및 종료코돈(TPA)을 포함한 인공합성 링커와 접합된 소 성장호르몬 유전자를 연결시켜 행함을 특징으로 하는 소 성장호르몬의 제조방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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