KR880003005A - 사람의 저친화성 Fcε-수용체 및 그의 단리, 재조합적 제조 및 정제 - Google Patents

사람의 저친화성 Fcε-수용체 및 그의 단리, 재조합적 제조 및 정제 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

사람의 저친화성 Fcε-슈용체 및 그의 단리, 재조합적 제조 및 정제
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 RPMI 8866 세포의 세포 용해물 및 상등액에서의 FcεR활성을 나타낸 그래프,
제2도는 면역친화성 정제된 용성 FcεR의 활성을 나타내는 그래프,
제3도는 정제 후의 수용성 FcεR의 활성을 나타내는 그래프.

Claims (59)

  1. N-말단 세포질 영역, C-말단 세포외 영역 및 분자량 약 46Kd을 갖는 사람의 저친화성 Fcε-수용체 및 그이 글라이코실하된 유도체.
  2. 제1항에 있어서, 하기의 부분적 아미노산 서열을 함유하는 사람의 저친화성 Fcε-수용체.
  3. 제 1 또는 2항에 있어서, 아미노산 63에서 임의로 O-글라이코실화되고/거나 N-글라이코실화된 하기의 아미노산 서열을 갖는 사람의 저친화성 Fcε-수용체
  4. 제1 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 사람의 저친화성 Fcε-수용체의 수용성 부분 및 그의 글라이코실화된 유도체.
  5. 제4항에 있어서, 제3항에서 청구한 아미노산 서열의 50 내지 약 150에 상응하는 아미노산으로부터 시작하는 수용성 Fcε-수용체 부위 및 그의 글라이코실화된 유도체.
  6. 제 4 또는 5항에 있어서, 하기의 아미노산 서열을 함유하는 수용성 Fcε-수용체 부분 및 그의 O-글라이코실화된 유도체.
  7. 제4 내지 6항 중 어느 한 항에 있어서, 제6항에서 청구한 서열을 갖는 수용성 Fcε-수용체 부분 및 그의 O-글라이코실화된 유도체.
  8. 제1 내지 7항 중 어느 한 항에 있어서, 기본적으로 사람 기원의 다른 단백질이 없는 재조합 사람 저친화성 Fcε-수용체 또는 그의 수용성 부분 및 그의 글라이코실화된 유도체.
  9. 제8항에 있어서, 하기 DNA 저열 또는 그의 축퇴성(degenerative) 유도체의 발현에 의해 제조되는 재조합 사람 저친화성 Fcε-수용체 및 그의 글라이코실화된 유도체.
  10. 제8항에 있어서, 제9항에서 청구한 DNA 서열의 약 50 내지 약 150으로부터 코돈으로 시작하는 DNA 서열의 발열에 의해 제조되는 재조합 사람 저친화성 Fcε-수용체의 수용성 부분 및 그의 O-글라이코실화된 유도체.
  11. 제8항에 있어서, 적어도 하기의 서열을 함유하는 DNA 서열 또는 그의 축퇴성 유도체의 발현에 의해 제조되는 재조합 사람 저친화성 Fcε-수용체의 수용성 부분 및 그의 O-글라이코실화된 유도체.
  12. 제8항에 있어서, 제11항에서 청구한 DNA 서열의 발현에 의해 제조되는 재조합 사람 저친화성 Fcε-수용체의 수용성 부분 및 그의 글라이코실화된 유도체.
  13. 제12항에 있어서, 제9항에서 청구한 전길이 FcεR-cDNA의 DNA 서열에 의해 특성지워지며, 여기에서 아미노산 1 내지 148항에 대한 암호 서열의 적어도 일부가 진핵 신호 서열 또는 그의 축퇴성 유도체에 의해 대치되는 재조합 FcεR의 수용성 단편 및 그이 O-글라이코실화된 유도체.
  14. 제13항에 있어서, pBSF-2.38의 신호 서열이 진핵 신호 서열 또는 그의 축퇴성 유도체로서 사용되는 재조합 FcεR의 수용성 단편 및 그의 O-글라이코실화된 유도체.
  15. 제1 내지 14항 중 어느 한 항에서 청구한 유전 정보를 함유하는 재조합 DNA 분자 또는 그의 축퇴성 유도체.
  16. 제15항에 있어서, 발현에 필요한 리플리콘(replicon) 및 조절 서열을 부가적으로 함유하는 재조합 DNA분자.
  17. 제16항에 있어서, 원핵생물 또는 진핵생물에서의 발현을 위한 리플리콘 및 조절 서열을 함유하는 재조합 DNA 분자.
  18. 제16 또는 17항에 있어서, 이·콜라이 또는 효모에서의 발현에 적합한 리플리콘 및 조절 서열을 함유하는 제조합 DNA 분자.
  19. 제18항에 있어서, 리플리콘 및 조절 서열로서 플라스미드 pER 103의 것을 사용하는 재조합 DNA 분자.
  20. 제18항에 있어서, 리플리콘으로서 2μ 기원(origin) 및 조절 서열로서 ADHI-프로모터 및 ADHI-터미네이터를 함유하는 재조합 DNA 분자.
  21. 제18항에 있어서, 리플리콘 및 조절 서열로서 플라스미드 pGEM 4의 것을 사용하는 재조합 DNA 분자.
  22. 제21항에 있어서, 교배 인자 α선도 서열(MFα)을 부가적으로 함유하는 재조합 DNA 분자.
  23. 제15 내지 22항 중 어느 한 항에서 청구한 재조합 DNA 분자를 함유하는 벡터.
  24. 제23항에 있어서, 벡터가 플라스미드 벡터인 벡터.
  25. 제24항에 있어서, 제15 내지 22항 중 어느 한 항에서 청구한 암호 서열을 함유하는 플라스미드.
  26. 제25항에 있어서, 제9항에서 청구된 DNA 서열을 플라스미드 pGEMTM4 내에 EcoRI 삽입물로서 함유하는, 이·콜라이 HB 101에 도입되는 FERM BP-1116하에 기탁된 플라스미드 LE 392.
  27. 제25항에 있어서, 제9항에서 청구된 DNA 서열을 플라스미드 pDE 2 내에 EcoRI 삽입물로서 함유하는 플라스미드 pDE-2-FceR-1.
  28. 제25항에 있어서, 제11 및 19항에서 청구된 DNA 서열을 플라스미드 pBR 322 내에 EcoRI 삽입물로서 함유하는 제16도에 나타낸 제한 지도를 갖는 플라스미드 pRH 246.
  29. 제25항에 있어서, 제11 및 20항에서 청구한 DNA 서열을 플라스미드 Bluescribe M13＋내에 BamHⅠ/HindⅢ 삽입물로서 함유하는 제14도에 나타낸 제한 지도를 갖는 플라스미드 pRH 244.
  30. 제25항에 있어서, 제11 및 20항에서 청구한 DNA 서열을 플라스미드 Bluescribe M13＋내에 BamHⅠ/HindⅢ 삽입물로서 함유하는 제15도에 나타낸 제한 지도를 갖는 플라스미드 pRH 245.
  31. 제25항에 있어서, 제19도에 나타낸 제한 지도를 갖는 제11항에서 청구한 DNA 서열을 함유하는 플라스미드 psFcεR -1.
  32. 제24항에 있어서, 제29 또는 30항에서 청구한 암호 플라스미드 DNA를 함유하는 효모 벡터.
  33. 제32항에 있어서, 제29항에서 청구한 암호 DNA를 플라스미드 pJDB 207 내에 BamHⅠ/HindⅢ 삽입물로서 함유하는 pJDB-244로 표시되는 효모 벡터.
  34. 제32항에 있어서, 제30항에서 청구한 암호 DNA를 플라스미드 pJDB 207 내에 BamHⅠ/HindⅢ 삽입물로서 함유하는 pJDB-245로 표시되는 효모 벡터.
  35. 제32항에 있어서, 제29항에서 청구한 암호 DNA를 플라스미드 YEp 13 내에 BamHⅠ/HindⅢ 삽입물로서 함유하는 289a1로 표시되는 효모 벡터.
  36. 제32항에 있어서, 제30항에서 청구한 암호 DNA를 플라스미드 YEp 13 내에 BamHⅠ/HindⅢ 삽입물로서 함유하는 289a3로 표시되는 효모 벡터.
  37. 제23 내지 36항 중 어느 한 항에서 청구한 벡터에 의해 형질전환된 숙주 유기체.
  38. 제 2 항에서 청구한 부분적 아미노산 서열을 암호화하는 올리고뉴클리오타이드.
  39. 제38항에 있어서, 제2항에서 청구한 서열 Lys-Trp-Ile-Asn-Phe-Gln-의 부분 아미노산을 암호화하는 서열
    을 갖는 올리고뉴클리오타이드.
  40. 목적하는 폴리펩타이드에 대한 제15 내지 22항 중 어느 한 항에서 청구한 암호 서열을 발현시키기 적절한 부위에 함유하는 발현 벡터로 적절한 숙주 유기체를 형질전환시키고, 생성된 형질전환체로부터 목적하는 폴리펩타이드를 단리시킴을 특징으로 하여 제8 내지 14항 중 어느 한 항에서 청구한 폴리펩타이드를 제조하는 방법.
  41. 제40항에 있어서, 제23 내지 36항 중 어느 한 항에서 청구한 발현 벡터를 사용하는 방법.
  42. B임파아구 세포를 배양하고 상등액 또는 용해된 세포로부터 연속된 면역친화성 정제에 의해 사람 저친화성 Fcε-수용체를 분리시킴을 특징으로 하여 4 내지 7항 중 어느 한 항에서 청구한 사람 저친화성 Fcε-수용체 또는 그의 수용성 부분을 제조하는 방법.
  43. 제42항에 있어서, RPMI-8866 세포를 임파아구 세포로서 사용하는 방법.
  44. 제42 또는 43항에 있어서, FcεR을 함유하는 용액을 BSA-세파로스, 사람 트렌스페린 세파로스 및 정상의 마우스 Ig-세파로스 상에 연속적으로 흡착시키고, 유출액을 항-FcεR-친화성 컬럼에 적용하며, 용출액을 HPLC에 의해 추가로 정제하는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 면역친화성 컬럼을 상응하는 항체를 세파로스에 결합시켜 제조하는 방법.
  46. 제44항에 따라 제조한 Fcε-수용체를 트립신 또는 라이실엔도펩티데이스 처리한 다음 HPLC에 의해 분리시킴을 특징으로 하여 제2항에서 청구한 부분 아미노산 서열을 제조하는 방법.
  47. 올리고뉴클리오타이드를 상응하는 뉴클리오 타이드를 가함으로써 올리고 합성기에 의해 합성함을 특징으로 하여 제38 또는 39항에서 청구한 DNA 서열을 제조하는 방법.
  48. FcεR mRNA를 생성하는 임파아구 세포로부터 유도한 RNA 메트릭스(matrix)로부터 cDNA를 합성하고, 상기 합성된 cDNA를 발현 비이클에 결합시켜 발현 비이클 은행을 형성하며; 상기 결합된 cDNA를 FcεR＋L세포에 특이한 cDNA 및 FcεR의 유전자에 공통적인 올리고뉴클리오타이드를 함유하는 표지된 2개의 탐침과 하이브리드시켜 FcεR을 암호화하는 유전자를 함유하는 발현 비이클을 식별함을 특징으로 하여, 제1 내지 7항 중 어느 한 항에서 청구한 FcεR을 암호화하는 유전자를 함유하는 발현 비이클을 식별하는 방법.
  49. 제48항에 있어서, 상기 탐침 Ⅰ을 FcεR＋L세포로부터 단리된 RNA의 메트리스로 부터 합성하는 방법.
  50. 제48항에 있어서, 상기 탐침 Ⅰ를 FcεR 서열을 함유하는 RNA의 메트릭스로부터 합성하고, 제38 또는 39항에서 청구한 상기 올리고 뉴클리오타이드가 프라이머인 방법.
  51. 제48항에 있어서, 상기 임파아구 세포가 RPMI-8866 세포주인 방법.
  52. 제48항에 있어서, 상기 FcεR＋L세포를 허피즈 심플렉스 바이러스(Herpes Simplex Virus) 유도된 tk 유전자 및 RPMI-8866 세포로부터의 고분자량 제놈성(genomic) DNA로 LtK-세포를 공동-형질감염시켜 수득하는 방법.
  53. 제23 내지 36항 중 어느 한 항에서 청구된 벡터로 적절한 숙주를 형질전한시켜 제37항에서 청구한 숙주 유기체를 제조하는 방법.
  54. 제15 내지 22항 중 어느 한 항에서 청구한 DNA 서열을 적절한 벡터에 삽입하여 제23 내지 36항 중 어느 한 항에서 청구한 벡터를 제조하는 방법.
  55. 적절한 벡터를 하나 또는 그 이상의 적절한 제한효소를 분해하고 목적하는 DNA를 단리시킴을 특징으로 하여 제15 내지 22항 중 어느 한 항에서 청구한 DNA를 제조하는 방법.
  56. 제1 내지 14항 중 어느 한 항에서 청구한 폴리펩타이드를 함유하는 약제학적 조성물.
  57. 제56항에 있어서, 국소 또는 전신성 IgE-알레르기 반응을 치료하기에 적합한 약제학적 조성물.
  58. 제1 내지 14항 중 어느 한 항에서 청구한 폴리펩타이드의 유효량을 하나 또는 그 이상의 부형제에 결합시켜 제56 또는 57항에서 청구한 약제학적 조성물을 제조하는 방법.
  59. 제1 내지 14항 중 어느 한 항에서 청구한 폴리펩타이드의 약제학적 조성물의 제조를 위한 용도.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR870009152A 1986-08-21 1987-08-21 사람의 저친화성 Fcε-수용체 및 그의 단리, 재조합적 제조 및 정제 KR880003005A (ko)

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