KR830001368A - 우로키나제의 정제 및 농축방법 - Google Patents

우로키나제의 정제 및 농축방법 Download PDF

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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
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Abstract

내용 없음

Description

우로키나제의 정제 및 농축방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (13)

  1. 공지의 방법으로 미리 정제 및 농축시킨 조제 우로키나제액으로부터 고농도 및 고활성의 우로키나제를 정제하는 방법에 있어서 비표면적이 큰 다공질 고체 매트릭스를 가지고 그 표면에서 화학적 공유결합에 의하여 아프로티닌이 고착된 상기 조제 우로키나제액을 pH6의 매질 내에서 접촉시키고, 담체 매질을 분리한 다음 흡착된 우로키나제를 pH4.5에서 용출제로 용출시킨 후 이 용출된 우로키 나제를 공지의 상이한 약품 제조방법에 따라 후처리하는 것이 특징인 우로키나제의 정제 및 농축방법.
  2. 조제 우로키나제액을 고비표면적을 가지며, 그의 표면상에 아프로티닌을 공유 화학결합으로 고착시켜 탑 중에서 다공성 고상 매트릭스 중에서 pH6의 매질에서 친화성 크로마토그라피로 분비시킨 다음 이 방법으로 흡착시킨 우로키나제를 pH4.5에서 용출제를 사용하여 용출시키는 특허 청구의 범위 제1항 기재의 방법.
  3. 사용하는 조제 우로키나제액이 용액 중 2,000~10,000I.U 우로키나제/ml, 적합하기로는 3,000~5,000 I.U. 우로키나제/ml의 농도와 존재하는 단백질 중 200~2ㅡ,000 I.U. 우로키나제/mg. 유리하기로는 300~1,000I.U. 우로키나제 /mg의 순도를 갖도록 하는 특허 청구의 범위 제1 및 2항 기재의 방법.
  4. 다공성 고상매트릭스로서 다당류 기초 수지, 셀루로오스, 스웨덴국 화르마시아 에이비제 SepharoseR등의 아가로오즈, 스웨덴국 화르마시아 에이비제 SephadexR등의 텍스트란 또는 스웨덴국 화르마시아 에이비제 SepharoseR또는 LKB의 SepharoseR등의 아가로오스 등을 갖는 폴리아크릴아미드의 공종합체 부가생성물 또는 이와 유사한 물질의 기초제품을 사용하는 특허청구의 범위 제1 및 2항 기재의 방법
  5. 아프로티닌을 공유결합물을 직접 사용하거나 또는 결합제 또는 스페이서를 사용해서 고상 매트릭스에 접합시키고, 스페이서로서 ε-아미노카프로산 EACA(6-아미노헥사노산), 디비닐술폰, 비스-옥시란 또는 기타 화합물을 사용하는 특허청구의 범위 제1,2 및 4항 기재의 방법.
  6. 고상 매트릭스를 예를 들면 BrCN 또는 공지의 활성제를 사용하여 미리 활성화시키는 특허청구의 범위 1,2,4, 및 5항 기재의 방법
  7. 친화성 크로마토그라피 분리법으로 우로키나제를 흡착시키기 탑 전에 중의 흡착제를 pH6~9 및 총염농도 1.5~1m에서 액체매질을 사용하여 조절시키고, 완충물로서 인산염 혼합물 또는 트리스-완충제등을 사용하고, 염으로서 NaCL.KCl 등을 사용하는 특허청구의 범위 제4,5 및 6항의 기재의 방법.
  8. 너무 낮은 우로키나제 농도와 순도 때문에 소변물 자체를 처리하기 위해 본 발명의 방법을 사용할 수 없는 특허 청구 범위 제 1 및 2항의 기재의 방법.
  9. 조제 우로키나제액을 NaClㆍKCl 또는 기타 염을 가하여 총염농도 0.5~1m로 조정하는 특허 청구의 범위 제1 및 2항 기재의 방법.
  10. 아프로티닌을 사용하여 표면 활성화시킨 고상 매트릭스 상에 로키나제를 흡착시킨 후 용출시키기 전에 분리탑으로 부터 불필요한 단배질을 제거하기 위해 0.5~1m NaCl액을 사용하여 탑 중에서 중간물질을 세척시키고, 세척제가 광학적으로 순수할 때 까지 중간물질 세척을 계속하는 특허청구의 범위 제1 및 2항 기재의 방법.
  11. pH2~4.5와 염, 예를들면 NaClㆍKCl등의 농도 0.5~1m에서 용출제를 사용하여 용출시키고, 초산 HCl또는 기타 화합물을 사용하여 pH를 조절시키는 특허청구의 범위 제1 및 2항 기재의 방법.
  12. 리신, 아르기닌 등의 아미노산과 같은 용출제산을 용출제에 첨가하는 특허청구의 범위 제11항 기재의 방법.
  13. 특허청구의 범위 제1 및 2항의 기재의 방법으로 제조한 고농도 및 고활성 우로키나제.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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