KR830000386B1 - 주사용 인삼 사포닌 정제방법 - Google Patents

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내용 없음.

Description

주사용 인삼 사포닌 정제방법

제1도는 본 발명에 의한 시료를 흡광도로 측정한 실험 결과의 순도 결정도.

제2도는 본 발명에 의하여 정제된 사포닌의 고속 액체 크로마토그라피 패턴도(RI 검출기).

제3도는 본 발명에 의하여 정제된 사포닌의 가스 크로마토그라피 패턴도(RI 검출기).

제4도는 본 발명에 의하여 정제된 사포닌의 가시-자외선 흡광 패턴도.

제5도는 본 발명에 의하여 정제된 사포닌의 고속 액체 크로마토그라피 패턴도(254nm).

제6도는 본 발명에 의한 디올 및 트리올계 사포닌 분리도.

제7도는 본 발명에 의하여 분리된 디올 및 트리올계 사포닌의 박층 크로마토그라피 패턴도.

본 발명은 인삼으로부터 사람에게 주사할 수 있는 유효한 순수 인삼 사포닌의 정제 방법에 관한 것이다.

종래는 주로 인삼의 엽경이나 꽃을 원료로 하여 이것을 그대로 부탄올로써 조사

종전의 공지 기술 예컨대, 미합중국 특허 제3,901,875호와 영국 특허 제1,378,278호에 있어서는 대체로 적절한 기술을 나타내고 있으나 본 발명에서는 응용할 수 없다.

상기 공지 기술에 의하여 정제된 인삼 사포닌은 순도가 낮을 뿐만 아니라 주사제 앰플로 제조했을 때 침전물이 생기기 때문에 주사용으로 사용할 수 없으며, 또한 재배 과정 또는 정제 과정 중에 혼입 할 수 있는 인체에 유독한 지용성 유기화합물의 제거에 대한 고려가 없었기 때문에 주사용으로서의 안정성을 확보하지 못하였다. 뿐만 아니라 널리 알려진 바와 같이, 인삼 사포닌은 약리 작용이 상이한 여러가지 물질의 혼합물로 이루어져 있으며 그 중에서도 파낙사디올계 사포닌 및 파낙사트 리올계 사포닌으로 크게 나눌 수 있는데, 이 두군의 약리 약용은 서로 상반되는 점이 많기 때문에 혼합물 상태에서는 유효한 치료효과를 기대하기 어렵다.

본 발명은 이 같은 공지 기술과는 달리 인삼근을 원료로 하되 인삼근의 알콜엑기스를 중화하여 조사포닌을 클로로포름과 벤젠으로 처리함으로써 앰플 제조시 침전 생성물질로 인정되는 인지질, 당, 페놀성 물질, 색소들의 인삼근 함유 물질과 재배 과정 또는 제조 과정에서 혼입할 우려가 있는 인체에 유독 작용을 나타낼 수 있는 지용성 유기 화합물을 제거할 수 있게 하였다. 또한 고분자 물질의 합성 수지를 이용하여 사포닌

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

조사포닌 I의 제조

인삼의 메탄올 또는 함수 에탄올 추출물을 물에 녹여 액성을 중성 또는 약알카리성으로 조절하고 클로로포름 또는 벤젠으로 추출하여 지질 성분을 제거한 후 수포화 부탄올층을 취하여 감압 농축한다.

조사포닌 Ⅱ의 제조

인삼의 메탄올 또는 함수 에탄올 추출물을 물에 녹여 액성을 중성 또는 약알카리성으로 조절하고 클로로포름 또는 벤젠으로 추출하여 지질성분을 제거한 후 수층을 앰벌라이트 XAD₂또는 앰벌라이트 XAD₄컬럼에 통과시켜 사포닌을 흡착시킨 후 메탄올로 용출시켜 사포닌 분획을 감압 농축한다.

순수 정제 인삼 사포닌의 제조

이상의 조사포닌 Ⅰ또는 조사포닌 Ⅱ의 분말을 클로로포름에 분산시켜 가온하므로서 인지질, 색소 및 의인성 유독성 유기 화합물을 용출 제거한 후 여과하여 사포닌을 회수한다. 회수한 사포닌을 메탄올에 녹여 활성탄으로 처리하므로서 페놀성 물질, 색소등을 제거하고 메탄올 용액을 감압 농축하여 분말로 한다. 이 분말을 다시 에탄올에 녹여 여과하고 감압 농축하여 분말로 한다.

파낙사디올계 사포닌 및 파낙사트리올계 사포닌의 분리 순수 정제 인삼 사포닌을 세파덱스 G-50 또는 G-75 컬럼에 적용하여 물 또는 생리 식염수를 용매로 하여 파낙사디올계와 파낙사트리올계 사포닌을 분리한다. 이 같은 본 발명의 정제 방법을 공정별로 상술하면 다음과 같다.

[실시예]

가. 조사포닌 Ⅰ의 제조

인삼(수삼, 백삼, 홍삼)의 5~10배량의 메탄올 또는 60~80%의 함수 에탄올로 70℃이하의 적절한 온도에서 가온 추출한다.

매추출 용액을 합쳐 수분 함량의 35~45%가 될때까지 70℃ 이하에서 감압 농축하여 인삼 엑기스를 제조한다.

인삼 엑기스에 물 4~6배량을 가하여 녹이고 40% 수산화나트륨 용액으로 pH를 7.0~7.4로 조절한 후 인삼 엑기스 수용액과 같은 용량의 클로로포름 또는 벤젠으로 3~5회 반복 추출하여 탈지한다.

탈지된 인삼 엑기스 수용액과 같은 용량의 수포화 부탄올로 5회 반복 추출하고 수포화 부탄올 용매층을 모아 소량의 물(부탄올 용액의 1/10~1/20양)로 1회 세척하고 세척된 부탄올 용액을 감압 농축하여 분말로 만든다. 이 분말을 조사포닌 Ⅰ로 한다.

나. 조사포닌 Ⅱ의 제조

상기 조사포닌 Ⅰ의 제조 공정중 탈지된 인삼 엑기스 수용액을 출발원료로 하여 조사포닌 Ⅱ를 제조한다. 즉 탈지 인삼 엑시스 수용액을 앰벌라이트 XAD₂또는 앰벌라₄

다. 순수 정제 인삼사포닌의 제조

조사포닌 I 또는 조사포닌 Ⅱ의 분말을 5~10배량의 클로로포름에 분산시키고 60℃ 정도로 가온하여 인지질, 색소 등을 용출시켜 여과한다. 이 조작을 3회 반복한다. 사포닌 중에 함유된 클로로포름 용매를 회수하고 난 후 메탄올을 사포닌 양의 4~6배량 가하여 사포닌을 녹인 후 활성탄을 소량 가하여 페놀성물질, 색소를 제거한다. 활성탄 함유 사포닌의 메탄올 용액을 여과하고 활성탄을 메탄올로 수회 세척한다. 여액 및 세액을 합쳐 농축하여 분말로 한다. 이 분말을 다시 에탄올에 녹인 후 여과하고 여액을 감압 농축하여 분말로 한다. 이 분말은 백색의 조해성이 없는 순수 정제 인삼 사포닌이 된다. 이 순수 정제 인삼사포닌을 생리 식염수에 적당량 녹이고 등장성을 맞추어 인삼 사포닌의 주사제로 사용한다.

라. 파낙사디올계 사포닌 및 파낙사트리올계 사포닌의 분리 순수 정제 인삼 사포닌을 소량의 생리 식염수에 녹인 용액(20~30%용액)을 식염수로 평형화 한 세파덱스 G~50 또는 세파덱스 G~75에 적용하여 크로마토 그라피하면 파낙사디올계 사포닌이 먼저 용출되고 다음에 파낙사트리올계 사포닌이 용출된다. 각각의 분획을 모아 각각의 주사제로 사용한다.

이 같은 본 발명을 공지 기술과 대비하면 다음과 같다.

[표 1]

본 발명과 공지 기술과의 상위점 비고

마. 순도 분석법

1) Brit. Pat. 1,378,278(27, Dec. 1974)

US. Pat. 3,901,875(26, Aug. 1975)

2) 바닐린-황산법 적용

표준품으로 진세노사이드 Re 및 Rbl 등물(mole)의 혼합물

3) 가스 크로마토그라피법 적용(1)항 참조.

표준품으로 사포닌 사용

이와 같은 본 발명의 가장 큰 특징은 1) 벤젠으로 추출하기 전에 인삼근 엑기스의 pH를 중성으로 조절하고 2) 클로로포름과 벤젠으로 지질 성분을 제거한 다음 3) 지질을 제거한 수층을 앰벌라이트 XAD₂또는 XAD₄를 이용하여 사포닌을 정제하는 것이

이상의 방법은 공지 기술과는 그 목적에 있어서 근본적으로 다른 것이며, 이 방법의 효과상의 차이는 증가된 순도 및 안전성에 있다. 즉 본 방법으로 정제한 결과 조사포닌의 농도는 90%(도면 제1도)정제 사포닌은 95% 이상이었으며 동물 실험 결과 안전성이 입증되었다. 그러나, 이제까지 알려진 다른 방법으로 정제할때는 75% 정도의 순품밖에 얻지 못하여 주사용으로써의 안정성 여부에 대해서는 알려진 바가 없다.

실험에 의한 본 발명의 표준 곡선 및 조사포닌 Ⅱ의 순도 결정은 도면 제1도와 같은 것임을 확인할 수 있었다. 즉 0.5%의 진세노사이드 Re 에탄올 용액 20㎕, 30㎕, 40㎕ 및 50㎕를 취하여 시험관에 옮긴다음 0.5ml의 8% 바닐린 에탄올 용액을 가한다. 여기에 72% 황산 5ml를 가하여 60℃에서 10분간 가열하고 꺼내어 찬물에서 식힌 다음, 550 nm에서의 흡광도를 측정한 결과 도면 제1도와 같은 표준 곡선이 나타났으며, 조사포닌 Ⅱ시료를 가지고 동일한 실험을 했을 때, 도면에서와 같은 흡광도를 나타냈으며 그 순도를 확인하기 위하여 고속 액체 크로마토 그라피(제2도), 가스 그로마토그라피(제3도) 및 가시-자외선 흡광도 패턴(제4도)를 측정하였다. 즉 순수 정제 사포닌의 백색분말 100mg을 메탄올 1ml에 용해시킨 후 10㎕를 고속 액체 크로마토그라피(Waters Model 440)에 주사하여 굴절률 검출기(RI 검출기)로 측정한_{1 2}

또 분리한 디올 및 트리올계 사포닌의 박충 크로마토그라피패턴에 있어서는 세

Claims (1)

1. 인삼근을 원료로 하여 통상의 방법으로 제조한 메탄올 또는 함수 에탄올 인삼 엑기스에 물 4~6배량의 물에 녹이고 pH를 7.0~7.4로 조절하여 중성 또는 약알카리성으로 한 후 클로로포름 또는 벤젠으로 탈지, 탈색소하고 인삼 사포닌의 분획을 수포화부탄올로 추출하거나, 앰벌라이트 XAD₂또는 XAD₄수지를 이용하여 얻은 다음, 클로로포름에 다시 분산시켜 가온하여 인지질, 색소등을 용출, 제거하며, 메탄올에 녹여 활성탄처리를 하여 수불용성물질, 페놀성 물질 및 색소 등을 제거하고 농축하여 분말로 한 후 다시 에탄올에 녹여 침전성 물질을 제거하고 이를 다시 세파덱스 G~75 또는 G~50을 이용하여 파낙사디올계 및 파낙사트리올계 사포닌을 분리함을 특징으로 하는 주사제용 순수 인삼 사포닌 정제법.

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