KR790001573B1 - 항생물질 BM123r의 환원적 알킬화에 의해 유도된 항균제 제조방법 - Google Patents

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내용 없음.

Description

항생물질 BM123r의 환원적 알킬화에 의해 유도된 항균제 제조방법

그림 1－그림 5는

Fig. 1 : BM123γ의 IR 흡수 스펙트럼.

Fig. 2 : BM123γ₁의 IR 흡수 스펙트럼.

Fig. 3 : BM123γ₂의 IR 흡수 스펙트럼.

Fig. 4 : BM123γ₁의 IR 양자자기공명(陽子滋氣共鳴) 스펙트럼.

Fig. 5 : BM123γ₂의 IR 양자자기공명 스펙트럼 실시예에 각기 설명된 바와 같다.

본 발명은 새로운 항생제군과 관련된 것이며, 특히 다음 일반식의 알데히드나 케톤으로 항생물질인 BM123γ를 환원적 알킬화시켜서 유도되는 신규의 강력한 항균제에 관한 것이다.

여기서 R₁은 수소, 저급알킬, 할로겐 치환 저급알킬, 저급알케닐, 페닐, 모노치환페닐, 페닐저급알킬, 2－푸릴, 메틸 치환 2－푸릴, 2－티에닐, 메틸 치환 2－티에닐, 2－피릴, 메틸 치환 2－피릴, 2－피리딜 또는 2－퀴놀릴이고; R₂는 저급알킬, 할로겐 치환 저급 알킬이나 페닐 저급 알킬이고; R₃는 저급알킬, 할로겐 치환 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 싸이클로알킬, 페닐, 모노치환페닐, 페닐 저급알킬 또는 모노치환 페닐 저급알킬이고; 그리고 R₂및 R₃를 함께하면 테트라메틸렌, 펜타메틸렌 또는 헥사메틸렌이다.

본 발명에 의한 적합한 저급알킬 및 할로치환 저급알킬은 메틸, 에틸, 이소푸로필, sec－부틸, n－아밀, 디클로로메틸, 2－브로모에틸, 2,3－디요도푸로필, γ－클로로 푸로필 등과 같은 것으로 할로겐은 염소 브롬 및 요드 같은 것으로 된 탄소원자를 5개까지 함유하는 것들이다. 적합한 저급 알케닐－비닐, 알릴, 푸로페닐, 이소푸로페닐, 1－부테닐, 2－부테닐, 3－부테닐, 이소부테닐 등과 같은 것으로 탄소원자를 4개까지 함유하는 것들이다. 적합한 저급 싸이클로 알킬은 싸이클로펜틸, 싸이클로헥실, 그리고 싸이클로 헵틸이다. 본 발명에 의한 적합한 모노치환 페닐은, 예를들면, P－아세트아미도페닐, m－니트로페닐, m－메르캅토페닐, O－아니실, P－아니실, O－톨릴, P-톨릴과 같은 것들인 반면에 페닐저급 알킬은 벤질, α－페닐에틸, 그리고 β－페닐 에틸이 그 예(例)가 된다. 적합한 모노치환 페닐 저급 알킬은 O, m, 또는 P－클로로벤질, α－(P－아미노페닐)에틸, β－(m－ 니트로페닐)에틸 등과 같은 것들이다. 사용할 수 있는 적합한 메틸치환 2－푸릴, 2－티에닐 및 2－피릴은 예를 들면 5－메틸－2－푸릴, 3,4－디메틸－2－푸릴, 4－메틸－2－티에닐, 3,5－디메틸－2－티에닐, 5－메틸－2－피릴, 1,3,4－트리메틸－2－피릴과 같은 것들이다.

본 발명의 새로운 항균제가 제조되는 환원전 알킬화법은 다음과 같이 실시된다. 항생물질 BM123γ, BM123γ₁, 또는 BM123γ₂를 물, 메탄올, 메틸 셀로솔브 또는 그 혼합물과 같은 적합한 용매중에 용해시키고 원하는 알데히드 또는 케톤을 등량(等量)보다 과량으로 가해준 다음 소듐시아노보로 하이드라이드를 환원에 충분할 만큼 가해준다. 반응 혼합물의 pH는 반응 진행중에 묽은 광산으로 6.0－8.0에서 유지시켜 준다. 주위온도(10°－35℃)에서 1－24시간 경과후, 반응 혼합물에 진공하에 증발 건조시키고 그 잔류물을 메탄올과 잘 갈아서 여과시킨다. 여액을 아세톤으로 희석시켜 침전된 고체 생성물을 여과로 제거하고 진공하에 건조시킨다.

상기한 과정에서 사용될 수 있는 알데히드로는 예를들면 아세트알데히드, 푸로피온알데히드, 부티르알데히드, 이소부티르알데히드, 크로톤알데히드, 발레르알데히드, 벤즈알데히드, P－시아노벤즈알데히드, 살리실알데히드, 시남알데히드, 트리클로로아세트알데히드 등과 같은 것들이다.

상기한 과정에서 사용될 수 있는 케톤으로는 예를들면 아세톤, 2－부타논, 1,3－디브로모아세톤, 클로로아세톤, 아세토페논, m－클로로아세토페논, P－브로모아세토페논, P－트리플루오로메틸아세토페논, m－니트로아세토페논, P－디메틸아미노 아세토페논 등과 같은 것들이다.

생성물은 침전법, 농축법, 용매추출법 또는 이들 과정을 합침에 의해서 환원적 알킬화 반응 혼합물로부터 얻어진다. 분리후에 생성물은 일반적으로 알려져 있는 정제법에 의해서 정제 시킨다. 정제법으로는 여러가지 용매 및 혼합 용매시스템에 의한 재 결정화법, 크로마토그래피법, 그리고 향류 분포법(向流分布法)이 있고 이들은 전부 정제의 목적으로 보통 쓰이고 있다.

본 발명의 새로운 항균제는 유기염기이고 따라서 여러가지 유기 및 무기의 염(鹽)형성제로 산－부가염을 형성할 수 있다. 따라서 적합한 중성 용매중에서 항균성 유리염기를 3당량까지의 산과 혼합하여 형성된 산부가염은 황산, 인산, 염산, 브롬화수소산, 설팜산, 구연산, 말레인산, 후말산, 주석산, 아세트산, 벤조산, 글루콘산, 아스코르빈산 및 그 관련산(酸)과 같은 것들로 형성시킨다. 본 발명의 항균제의 산부가염은 일반적으로 물, 메탄올 및 에탄올에 비교적 가용성이고 디에틸에테르, 벤젠, 톨로엔과 같은 비극성 용매에는 비교적 불용성인 결정성 고체이다. 본 발명의 목적으로 항균성 유기염기는 비독성인 그의 산 부가염과 등가(等價)이다.

BM123β₁, BM123β₂, BM123γ₁및 BM123γ₂로 표시되는 항생물질은 미정(未定)의 노카르디아(Nocardia)종(種)의 새로운 균주를 조절된 상태하에 배양시키는 동안에 형성된다. 이 신규의 항생물질을 생성하는 균주는 아이오와(Iowa)의 오세올라(Oceola)에서 수집된 정원의 토양에서 분리된 것으로 뉴욕의 펄강(Pearl 江)에 아메리칸 시안아미드 컴퍼니의 Lederle 실험실이 배양 수집하여 균주 BM123호로서 보존하고 있다. 새로운 미생물의 생균 배양은 일리노이의 페리아(Peoria)에 있는 미국 농무성의 북부 이용개발과의 배양 수집실험실에 맡겨져 있으며, 영구수장품에 합해져 있다. 이 균주는 수납번호 NRRL5646으로 상기한 실험실에 실어서 대중(大衆)에게 자유로이 허용되고 있다.

여기서 BM123β라 함은 BM123β₁및 BM123β₂가 어떤 비율로든 배합되어 있는 혼합물을 말하며 BM123γ라 함은 BM123γ₁및 BM123γ₂가 어떤 비율로든 배합되어 있는 혼합물을 말한다.

다음은 진단적 특성을 관찰한 바에 의거한 미생물 노카르디아(Nocardia)종(種)인 (NRRL5646)의 일반적인 설명이다. 관찰은 [Internat. J. of syst. Bacteriolgy 16권 213－240(1966년도)]에서 Shirling 및 Gottlied에 의해 상세히 설명된 방법에 따라서 미생물의 배양, 생리 및 형태학적인 특성에 대해 이루어졌다. 배양균의 화학 조성은 [Advan. Appl. Microbilogy 14권 47－72P(1971년도)]에서 Lechevalier 및 그 동료연구자들에 의해 수록된 방법에 의해 결정되었다. 밑줄을 그은 묘사색 및 색판 표시는 일리노이의 시카고에 있는 미국 용기협회가 발행한 색조화 조절[(Color Harony Manual)3판(1948년도)]에 있는 Jaco-bson 및 그 동료들에 의한 것으로부터 택해왔다. 자세한 설명은 다음의 표 I－V에 나와있다.

[성장의 양(量)]

이스트 추출물, 아스파라킨 텍스트로스, 베네딕트(Benedict)액, 베네트(Benett)액, 감자 텍스트로스 및 바인슈타인(Weinstein) 아가르(agars)에서는 보통이고; Hickey ＆ Tresner액, 토마토 페이스트, 오트밀, 파블럼 아가르(Pablum agars)에서는 소량이며 무기염－전분, Kuster의 오트플레이크(oatflak), 차펙(Czapek)용액 및 라이스 아가르(rice agar)에서는 극소량이다.

[공중균사체]

존재하면 백색의 공중균사체임; 이스트 추출물, 아스파라긴 덱스트로즈, 베네딕드(Benedict)액, 베네트(Benett)액 및 감자 덱스트르스 아가르에서만 생성됨.

가용성 색소

생성되지 않음.

이색(裏色)

무색 내지 황색 색조.

여러가지 생리학적 반응

젤라틴의 액화작용 없음; 7일만에 질산염을 아질산염으로 환원시킴; 펩톤－철 아가르상에 멜라닌 색소 형성없음; 자주색 밀크에서 펩톤화 작용이나 응유형성 작용 없음; 이스트 추출물에서의 NaCl내성은 4% 이상 7%이하; 최적 성장온도 32℃, Pridham ＆ Gottlied법[J. Bacteriology 56권 107－114(1948년도)]에 따르면 탄소원 이용도는 다음과 같다 : 글리세톤, 살리신, d－트레할로스 및 덱스트로스의 이용도 좋음; i-이노시톨의 이용도는 보통임; d－후락토스, 말토스, 아도니톨, 1－아라비노스, 락토스, d－만니톨, d－멜리미오스, d－라피노스, 1－람노스, 서당 및 d－크실로스의 이용도는 극소 또는 전혀 없음.

[화학조성]

이 미생물은 세포 벽형(型) IV에 속하는 것으로, 즉 meso－2,6－디아미노피멜산을 함유하며, A형(型)의 전(全)－세포당의 양상 즉 아라비노스 및 갈락토스를 함유한다. 메틸화된 전세포 추출물은 가스 크로마토그래피를 행했을때 노카르디아 아스테로이데스(Nocardi asteroides)(ATCC 3308)에 의해 나온것과 유사한 지방산의 양상을 나타낸다.

[미생물형태학]

공중 균사체는 길게된 원시적인 나선형으로 보통 끝나는 측쇄가 적고 비교적 기다란 굴곡성 요소로서 기질 균사체로 부터 생긴다. 짧은 타원체 내지 쉽게 굴곡성 요소는 분해되는 실린더식의 부분(아포?)으로 불규칙하게 분절된다. 나선형의 끝부분은 분절이 덜 뚜렷하다. 분절의 크기는 일반적으로 0.8－1.7μm×0.3－0.5μm 의 범위에 이르며, 평균치는 0.4μm×1.2μm이다.

[진단법]

배양균 BM123호의 형태상특성은 대부분의 배양기에서 공중균사체의 발달이 빈약하기 때문에 관찰 및 그 해석이 힘들다. 때문에 필요성과는 무관하게 미생물의 일반관계를 규정하는데 있어서 상당한 중요성을 화학적 분석에 두고 있다.

Lechevalier 및 동료에 의해 제시된 시스템을 근거로 배양균 BM123호는 전(全) 세포에 meso－2,6－디아미노피멜산을 함유하고 당분석은 아라비노스 및 갈락토스의 존재를 보여주고 있다. 그러므로 배양균은 세포벽형(型) IV에 속한다. 배양균 BM123호의 가스크로마토그래피의 양상을 노카르디아 아스테로이데스(Nocardia asteroides)(ATCC 3308)의 것과 비교 하였더니 두개가 현저히 유사함을 보여 주었다.

노카르디아(Nocardia)의 개념에 따르는 배양균 BM123호의 다른 특징은 몇몇 배지에서 분절성 공중성장이 있고 대부분의 배지에서는 공중성장이 전혀 없다는 것이다. 종의 수중에 대해 노카르디아(Nocardia)를 특징지우는 적합한 표준이 없다는 관점에서 이런 결정을 하려는 시도는 지금까지 없어왔다. 그러므로 배양균 BM123호는 이러한 진단이 가능해질 때까지는 미정된 노카르디아(Nocardia)종으로 생각되어야 할 것이다.

[표 Ⅰ]

[표 Ⅱ]

[표 Ⅲ]

[표 Ⅳ]

[표 Ⅴ]

BM123β 및 BM123γ의 생성은 이 특수한 미생물이나 또는 상기의 성장 및 단지 설명의 목적으로 제시한 미생물학적 특성에 완전히 들어맞는 미생물에만 국한되는 것이 아니다. 사실상 X선 조사, UV조사, 니트르 젠 머스타드, 악티노파지류에의 노출과 같은 여러 방법에 의해 이 미생물로부터 생성된 변종(變種, mutant)들도 사용될 수 있다. 이같은 변종균주의 생균배양은 일리노이주 페리아에 있는 미국 농무성의 북부이용 개발과의 배양수집 실험실에 위탁되고 있고 수납번호(NRRL 8050)으로 영구수장품에 합해져 있다. (NRRL 8050)의 배양, 생리 및 형태학적인 특성이 실질적으로(NRRL 5646)과 동일하다고는 하나 호기성 배양중에는 BM123γ를 훨씬 많이 생성한다. 또한 (NRRL 8050)은 다음과 같이 그 모체인(NRRL 5646)과 다른 것이다 :

(a) 질산염을 아질산염으로 환원 시킴이 늦고, 또

(b) 베네트(Bennett) 및 이스트 추출물의 아가르에서 자단류의 붉은 균사색소를 생성한다.

본 발명의 새로운 항균제는 일반적을 디에틸에테르 및 헥산과 같은 비극성 용매에서는 비교적 한정된 용태도를 가지지만 물 및 저급알카놀과 같은 용매에는 상당히 더 잘녹는 결정성의 고체이다. 항생물질 BM123γ₁및 BM123γ₂는 구조적 이성체이며 다음의 구조식으로 나타내진다;

BM123γ 및 BM123γ₁또는 BM123γ₂를 케톤류와 환원 알칼화시키는 것은 스페르마딘(spermadine)의 측쇄에서 일어나서 다음 일반식의 유도체를 형성한다 :

그리고 R₂및 R₃는 앞에서 정의한 바와 같다. BM123γ, BM123γ 또는 BM123γ를 알데히드와 환원알킬화시키는 것은 스페르마딘의 측쇄에서 일어나서 다음 일반식의 모노－, 디－, 및 트리－치환 유도체를 형성한다 :

여기서 R 및 R₁은 앞에서 정의한 바와 같다.

BM123γ의 알킬화된 유도체의 유용도는 쥐에서 전신치사감염을 억제할 수 있는 능력에 의해 표시된다. 이 새로운 물질은, 5시간 TSP 혈액배양한 것의 10^-3트립티케이스 소이브로트(trypticase soy broth)TSP 희석액으로 이 박테리아의 치사량을 복강으로 감염시킨 무게 20g의 Carworth Farms CF－1형(型) 쥐의 군(群)에게, 1회량을 피하 투여했을 때 E. coli US 311에 대해 쥐에서 생체내에서의 항균 활성을 보여준다. 다음의 표 VI에서 본 발명의 대표적 생성물(지적된바의 카보닐 시약으로부터 제조)의 E. coli US 311에 대한 쥐에서의 생체내 활성을 열거한 것이다. 활성은 유효 치료량(ED_EO) 즉 E. coli에 대해서 쥐의 50%를 치료하는데 필요한 mg/체중 1kg의 투여량을 표시한다.

[표 Ⅵ]

1급 BM123β 및 BM123γ를 생성하도록 선택된 발효공정 노카르디아(Nocardia)종 (NRRL 8050)의 배양은 광범위하게 다양한 액체양기에서 행해질 수 있다. 항생물질의 생성에 유용한 배지로는 전분, 당, 당밀, 글리세롤 등과 같은 탄소 등화원을 포함하고; 단백질, 단백수해물(水解物), 폴리펩타이드류, 아미노산류, 옥수수 주(酒)등과 같은 질소 등화원; 그리고 포타슘, 마그네슘, 칼슘, 암모늄, 황산염, 탄산염, 인산염, 염화물 등과 같은 무기 음이온 및 양이온들을 함유한다. 붕소, 몰리브덴, 구리등고 같은 미량원소는; 배지중 다른 성분들의 불순물로서 공급이 된다. 탱크 및 병에는 발효하고 있는 배지표면을 통해서 또는 그 표면상에 멸균공기를 집어 넣음으로서 공기를 공급해 준다. 탱크는 기계 깃바퀴에 의해서 더 교반을 시켜준다. Hodag

FD82와 같은 소포제는 필요할때 가해주어도 된다.

BM123β 및 BM123γ의 종균제조

노카르디아(Nocardia)종 (NRRL 8050)의 1차 진탕 풀라스크의 종균은 500ml용 풀라스크에 들어있는 100ml의 멸균액체 배지를 한 천사면 배지로부터 아포를 제거하거나 세척한 것을 종균시켜 이루어진다. 다음의 배지가 보통 사용이 된다 :

박토－트립톤 5g

이스트 Ex. 5g

비프 Ex. 3g

글루코스 10g

물을 가해 1,000ml 로 한다.

풀라스크를 25－29℃, 바람직하게는 28℃의 온도에서 배양시키고 30－48시간동안 회전진탕기상에서 격렬하게 흔들어 주었다. 다음 종균을 멸균 스크류 캡(screw cap) 배양 시험관에 옮기고 0℉ 이하에서 저장시킨다. 이 식물성 종균의 저장고는 이 첫 단계의 종균 제조에서 종균진탕 풀라스크를 더 사용하여 사면찰과(擦過)대신 쓰이고 있다.

이 첫단계 풀라스크의 종균은 20ℓ용 유리 발효기중에 동일 배지를 12ℓ씩을 심어주는데 쓰인다. 종균용 엿기름 물에는 성장이 30－48시간동안 계속 되는중에 멸균공기를 넣어 공기를 공급시켜 준다.

12ℓ씩으로 된 2단계 종균은 다음의 멸균액체 배지 300ℓ가 들어있는 탱크 발효기에 심어주어 3단계 및 4단계의 종균을 생성시킨다.

가용성 고기성분(meat solubles) 15g

황산 암모늄 3g

제 2인산 칼륨 3g

탄산 칼슘 1g

황산 마그네슘 7H₂O 1.5g

글루코스 10g

물을 가해 1,000ml로 한다.

글루코스는 따로 멸균시킨 것이다.

제 3단계 종균에 1분당 1ℓ의 브로트

broth에 대해 0.4－0.8ℓ의 멸균공기를 공급시켜주고, 발효혼합물 1분당 150－300회전으로 도는 깃바퀴로 교반시켜 준다. 온도는 25－29℃로 보통 28℃로 유지시킨다. 48－72시간동안 성장을 계속시키고, 이 시간중에 종균을 3,000ℓ용 탱크 발효에 사용한다.

BM123β 및 BM123γ의 탱크 발급

탱크 발효기에서 BM123β 및 BM123γ를 생성시키기 위해서는 다음의 발효 배지를 사용하는 것이 좋다.

가용성고기성분 30g

황산암모늄 6g

제 2 인산칼륨 6g

탄산칼슘 2g

황산 마그네슘 7H₂O 3g

글루코스 20g

물을가해 1,000ml 로 해준다.

글루코스는 따로 멸균시킨 것이다.

각 탱크에 종균 제제항에서 설명한대로 만들어진 3단계의 종균 5－10%를 심어준다. 발효용 엿기름물은 25－28℃, 보통은 26℃의 온도로 유지 시킨다. 엿기름물에 1분당 1ℓ의 엿기름물에 대해서 0.3－0.5ℓ의 멸균공기를 공급시키고 1분당 70－100회전으로 도는 깃바퀴로 교반시킨다.

발효를 65－90시간동안 계속 시키고 엿기름물을 거두어 모은다.

본 발명을 다음의 특수한 실례와 관련시켜 자세히 설명하기로 한다.

[실시예 1]

BM123β 및 BM123γ의 종균제조

1단계 및 2단계의 종균을 키우는데 쓰이는 대표적인 배지는 다음 조성대로 제조되었다.

박토－트립톤 5g

이스트 Ex. 3g

비프 Ex. 3g

글루코스 10g

물을 가해 100ml로 해준다.

상기한 멸균배지 100ml가 들어있는 2개의 500ml용 풀라스크에 노카르디아(Nocardia)종 (NRRL 8050)에서 얻은 각각의 냉동시킨 식물성 종균을 5ml씩 종균시켰다.

풀라스크를 회전진탕기상에 놓고 28℃에서 48시간동안 격렬히 교반시켰다. 이렇게 해준 풀라스크의 종균을 상기한 멸균배지를 12ℓ함유하는 5갤론등이 유리 발효기로 옮겼다. 성장이 약 48시간동안 행해지는 중에 엿기름물에 멸균공기를 공급해주고, 그 다음 그 내용물을 사용하여 다음의 멸균액체 배지 300ℓ를 함유하는 100갤론들이 탱크 발효기에 종균시킨다.

가용성고기성분 15g

황산암모늄 3g

제 2인산칼륨 3g

탄산 칼슘 1g

황산마그네슘 7H₂O 1.5g

글루코스 10g

물을 가해 100ml로 한다.

글루코스는 따로 멸균시킨다.

제 3단계의 종균용 엿기름물에 1분당 1ℓ의 엿기름물에 대해서 0.4ℓ의 공기를 발효기로 공급해주는 멸균공기로 공기를 공급해 주었다. 1분당 240회전으로 도는 깃바퀴로 교반을 시켜 주었다. 엿기름물은 28℃로 유지시키고 Hodag

FD82를 소포제로 사용했다. 성장시간이 48시간이 지난후 종균용 엿기름물을 가하여 3,000ℓ발효에 심어준다.

[실시예 2]

노카르디아(Nocardia)종 (NRRL 8050)에 쓰이는 배양 및 BM123β 및 BM123γ의 생성에 좋은 배지 발효용 배지는 다음 조성에 따라 제조되었다 :

가용성 고기성분 30g

황산암모늄 6g

제 2인산칼륨 6g

탄산칼슘 2g

황산마그네슘 7H₂O 3g

글루코스 30g

물을 가해 1000ml로 해준다.

글루코스는 따로 멸균시킨 것이다.

발효용 배지는 60분동안 20LB의 압력으로 120℃에서 증기 멸균시켰다. 멸균후 배지의 pH는 6.9였다. 4000ℓ탱크 발효기에 들어있는 300ℓ의 멸균배지에 실례 1에서 설명한 바와같은 300l의 종균을 심어주고 발효는 소포제로 Hodag

FD82를 사용하여 26℃에서 실시했다. 1분당 1ℓ의 엿기름 물에 대해서 0.35ℓ의 멸균공기를 공급시켰다. 엿기름물을 1분당 70－72회전으로 도는 깃바퀴로 교반시켜 주었다. 67시간의 발효시간이 끝났을때 엿기름물을 거두어 들였다.

[실시예 3]

BM123β 및 BM123γ의 분리

실시예 2에서 설명한대로 제조된 pH 4.3의 발효엿기름물의 3000ℓ를 소듐하이드록사이드로 pH 7.0로 조정하고 여과기보조로서 5% 규조토를 사용하여 여과시켰다. 여과시킨 덩어리를 약 100ℓ의 물로 세척하여 경주시켜 버린다. 여액과 세척액을 합한것을 15ℓ의 CM sephadex

c－25[Na⁺]수지(Pharmaoa Fine Chemicals, Inc. 로부터 ; 얻을수 있는 교차－연결된 덱스트라－에피클로로히드린 양이온 교환겔)를 각기 함유하는 세개의 평행한 81/4"×48"의 스텐레스 스틸통을 통해서 위로 뿜어 보내주었다. 충진이 된 통을 총량 약 390ℓ의 물로 세척한 다음 200ℓ의 1% NaCl수용액을 전개시킨 다음 560ℓ의 5% NaCl수용액을 전개시켰다. 5%의 NaCl 수용액 용출물을 규조토를 통과시켜 여과해주어 맑은 액으로 하고, 이 맑은 여액을 25ℓ의 입자상 Darco

G－60(20－40멧슈)(Atlas Chemical Industries Inc. 에서 얻을 수 있는 입자상의 활성화된 탄소)가 들어 있는 9"×60"의 유리통을 통과시켜 준다. 충진된 통을 120ℓ의 물로 세척시킨 다음 120ℓ의 15%메탄올 수용액을 전개시킨 다음 340ℓ의 50% 메탄올 수용액으로 그 다음은 120ℓ의 50% 아세톤수용액으로 전개 시켰다. 15% 메탄올 수용액 용출물을 진공 상태하에서 약 7ℓ의 액상(淑相)으로 농축시키고 Amberlite

IR－45(OH^-)수지( 약 염기성 폴리스티렌－폴리아민형의 음이온 교환수지)로 pH를 4.5－6.0으로 조정했다. 수지를 여과에 의해 제거하고 여액을 진공상태하에 약 1ℓ로 농축시킨후 동경진공 건조시켜 소량의 BM123γ(주로 BM123γ₂)과 함께 주로 BM123β로 구성된 물질 38g을 생성시켰다. 50%수성메탈올 용출액의 pH를 Amberlite

IR－45(OH^-)수지로 4.65－6.0으로 조성했다. 수지를 여과에 의해 제거하고, 그 여액을 진공상태하에서 약 6.3ℓ로 농축시킨후 동결진공 건조시켜 주로 BM123γ로 구성되는 물질 213g을 얻었다. 50% 수성 아세톤 용출물의 pH를 Amberlite

IR－45(OH^-)수지로 4.0－6.0으로 조정했다. 수지를 여과에 의해 제거하고, 그 여액을 진공 상태하에서 약 1.5ℓ로 농축시킨 후 동결진공 건조시켜 불순물이 섞인 BM123γ를 56g 얻었다.

[실시예 4]

BM123γ의 재정제

2% 수성 암모늄 클로라이드 중의 CM Sephadex

C－25[NH₄ ⁺]슬러리(slurry)를 직경이 2.6cm인 유리통에 약 62cm의 수지 높이까지 부어 넣었다. 과잉의 2% 수성 암모늄 클로라이드를 뽑아버리고 실시예 3에서 설명한대로 제조한 BM123γ의 검체 5.0g을 2% 수성 암모늄 클로라이드 약 10ml에 녹인다음 통에 넣어준다.

다음 통을 2% 및 4% 수성암모늄의 6ℓ 사이의 농도구배로 용출시켰다. 약 75ml의 양이 매(每) 15분마다 자동적으로 수집이 되었다. 항생물질 BM123γ는 UV광선하에 통의 용출액을 검사함으로써 그리고 클렙시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae)균주 AD를 심은 대형 아가르 배지판상에서의 이물질로 적신 페이퍼 디스크에 의한 생물학적 자기묘사법에 의해 규명이 되었다. BM123γ의 주부분은 71－107번째 사이의 부분에서 규명되었다.

입자상의 Darco

G－60(20－40멧슈)의 130ml를 물에 현탁시켜 유리통에 옮겨서 가라 앉도록 해준 다음 과잉의 물은 뽑아 냈다. 상기한 CM Sephadex 크로마토그래피의 부분도 포함해서 84－96번째의 부분을 합하여 입자상의 탄소가 있는 통을 통과 시켰다. 충진된 통을 600ml의 물로 세척한 다음 50%수성아세톤 1ℓ로 전개시켰다. BM123γ를 함유하는 용출액을 둘다 진공상태하에서 액상으로 농축시키고 동결 진공 건조시켜서 BM123γ를 염산염으로서 총 886mg를 얻었다. 미량분석용 검체는 상기한 물질을 상기한 과정으로 반복시켜서 얻었다.

항생물질 BM123γ는 융점이 명확하지 않지만 점차적인 분해가 200℃근처에서 시작된다. 상대습도가 23%인 72°F의 대기중에서 24시간동안 평형시켜준 검체를 미량 분석한 결과는 C, 39.44%; I, 6.10%; N, 16.19%; Cl(이온성), 11.54%; 건조감량, 8.19%였다.

물에서는 BM123γ의 UV 최대흡수는 286nm에서

이었다. 이 최대치의 위치는 pH에 의해 변화되지 않았다. BM123γ는 비선광도가

= +71°(C=0.97 용해 : 물)이었다.

항생물질 BM123γ는 IR스펙트럼대(帶)중 다음의 파장에서 특수한 흡수를 나타냈다. 즉 770, 830, 870, 930, 980, 1,035, 1,175, 1,105, 1,225, 1,300, 1,340, 1,370, 1,460, 1,510, 1,555, 1,605, 1,660, 1,740, 2,950 및 3,350cm^-1이다.

BM123γ의 표준 IR흡수 스펙트럼은 KBR펠렛으로 했을때 Fig. 1에서 보여준 그림과 같이 나타났다.

[실시예 5]

BM123γ₁의 분리

2% 소듐 클로라이드 수용액중의 CM Sephadex C－25[Na⁺]의 슬러리를 직경이 2.6cm인 통에 약 70cm의 수지높이까지 부어주었다. 과잉의 2% 소듐 클로라이드 수용액을 뽑아내고 실시예 3에서 설명한대로 제조된 BM123γ₂및 다른 불순물이 약간 함유되고 주 구성분은 BM123γ₁인 검체 4.11g을 2% 소듐클로라이드 수용액 10ml에 용해시켜 통에 넣어준다. 다음 통을 2% 및 4%의 소듐 클로라이드 4ℓ사이의 농도 구배로 용출시켰다. 약 75ml의 양이 매(每) 15분마다 자동적으로 수집되었다. 항생물질 BM123γ는 UV광선하에서 용출액을 검사함으로써 그리고 클랩시엘라 뉴모니아에(Klebsiella Pneumoniae)균주 AD를 심어준 대형 아가르 배지판상에서의 이물질로 적신 페이퍼 디스크에 의한 생물학적 자기 묘사법에 의해 규명되었다. BM123γ의 주(主)부분은 64－90번째의 부분 사이에서 규명되었고; BM123γ₁및 BM123γ₂은 혼합물이 초기의 부분(64－80번째)에 함유된 반면 나중의 부분(81－90번째)에는 본질적으로 순수한 BM123γ₁이 함유되어 있었다.

입자상의 Darco

G－60(20－40멧슈)의 100ml를 물에 현탁시키어 유리통으로 옮겨서 가라 앉도록 해주고 과잉의 물은 뽑아 내었다. 상기한 CM Sephadex 크로마토 그라피의 부분도 포함해서 81－90번째의 부분을 합쳐서 입자상의 탄소가 들어있는 통을 통과시켰다. 충진된 통을 500ml의 물로 세척한후 10% 수성메탄올 500ml로 전개시킨 다음 50% 수성 메탄올 1%로 전개시켰다. 주로 BM123γ₁을 함유하는 50% 수성 메탄올 500ml로 전개시킨 다음 50% 수성 메탄올 1%로 전개시켰다. 주로 BM123γ₁을 함유하는 50% 수성 메탄올 용출액의 pH를 Amberlite

IR－45(OH^-1)수지로 5.7－6.0으로 조정했다. 수지를 여과에 의해 제거하고, 그 여액을 진공상태하에서 액상으로 농축시킨 다음 동결 진공 건조시켜서 백색무정형의 BM123γ₁을 염산염으로서 294mg을 얻었다.

항생물질 BM123γ₁는 융점이 명확하지 않지만 점차적인 분해는 200℃근처에서 시작된다. 상대 습도가 60%인 70°F의 대기중에서 24시간동안 평형시켜준 검체를 미량 분석한 결과는 C, 37.84%; H, 5.73%; N, 15.58%; Cl(이온성), 10.01%; 건조감량 10.45%였다. 메탄올 중에서 BM123γ₁의 UV 최대 흡수는 286nm에서

= 225였다. 이 최대 위치는 pH에 의해 변화되지 않았다. BM123γ₁은 비선광도가 +55°(C=0.803, 용해 : 물)였다.

항생물질 BM123γ₁은 IR 스펙트럼 대(帶)중 다음의 파장에서 특수한 흡수를 나타낸다. 즉 770, 830, 930, 980, 1,045, 1,080,1,110, 1,125, 1,175, 1,225, 1,305, 1,345, 1,380, 1,465, 1,515, 1,560, 1,605, 1660, 1,705, 중간 2,950 및 3,350cm^-1이다.

BM123γ₁의 표준 IR 흡수 스펙트럼은 KBr펠렛으로 했을때 Fig. 2 와 같이 나타났다. BM123γ₁의 표준양자자기 공명 스펙트럼은 100megacycle의 스펙트로메타로 D₂O용액을 사용했을 때 Fig. 4에서와 같이 나타났다.

[실시예 6]

BM123γ₂의 분리

실시예 3에서 설명한대로 제조한 것으로 주로 BM123γ_{2 및}BM123β를 함유하는 25g의 검체를 2% 소듐클로라이드 수용액 약 120ml에 용해시켜서 CM Sephadex

C－25[Na⁺]의 2% 소듐클로라이드 수용액 1,800ml를 함유하는 통에 넣어 주었다. 다음 통을 2% 및 4% 소듐클로라이드 20ℓ의 농도 구배로 용출을 시켰다. 초기 용출액 12ℓ를 큰 병에 모아서 버렸다. 그 다음에 얻는 부분은 약 800ml씩 매(每) 40분마다 자동적으로 수집되었다. 항생물질 BM123γ는 용출액 UV광선하에 검사함으로서 규명이 되었다. BM123γ의 주(主)부분은 7－18번째의 사이의 부분에서 규명되었고; 초기 부분(7－15번째)는 본질적으로 순수한 BM123γ를 함유했고 나중 부분(16－18번째)는 BM123γ₁및 BM123γ₂의 혼합물을 함유하고 있었다.

입자상의 Darco

G－60(20－60멧슈)600ml를 물에 현탁시켜 유리통에 옮겨서 가라않도록 해 준다음 과잉의 물을 뽑아냈다. 상기한 CM Sephadex 크로마토그래피를 포함해서 7－15번째의 부분을 합쳐서 입자상 탄소가 들어있는 통을 통과시켰다. 충진된 통을 3ℓ의 물로 세척한후 10% 수성 메탄올 3ℓ로 전개시킨다음 50% 수성메탄올 6ℓ로 전개시켰다. 10% 수성메탄올 용출액의 pH를 Amberlite

IR－45(OH^-)수지로 5.8－6.0으로 조정했다. 수지를 여과에 의해 제거시키고, 그 여액을 진공상태하에서 액상으로 농축시킨 다음 동결 진공건조시켜서 약간 불순한 백색무정형의 BM123γ₂를 염산염으로서 3.645g을 얻었다.

항생물질 BM123γ₂는 융점이 명확하지 않지만, 점차적인 분해가 200℃ 근처에서 시작된다. 상대 습도가 60%인 70°F의 대기중에서 24시간동안 평형시킨 검체의 미량 분석결과는 C, 36.14%; H, 5.67%; N, 15.1%; Cl(이온성), 11.11%; 건조감량, 10.87%였다.

메탄올중에서 BM123γ₂의 UV최대흡수는 286nm에서

=220이었다. 이 최대치의 위치는 pH에 의해서 변동되지 않았다. BM123γ₂의 비선광도는 +60°(C=0.851, 용매 : 물)였다.

항생물질 BM123γ₂는 IR 스펙트럼 대(帶)중 다음의 파장에서 특수한 흡수를 나타냈다. 즉 770, 830,870, 950, 980, 1,035, 1,118, 1,175, 1,225, 1,285, 1,345, 1,380, 1,470, 1,515, 1,560, 1,605, 1,660, 1,755, 중간 2,950 및 3,350cm^-1이다.

BM123γ₂의 표준 IR 흡수 스펙트럼은 KBr펠렛으로 했을때 Fig. 3과 같이 나타났다. BM123γ₂의 표준양자 자기공명스펙트럼은 100megacycle의 스펙트로메터에서 D₂O용액을 썼을때 Fig. 5와 같이 나타났다.

[실시예 7]

BM123β 및 BM123β의 페이퍼 크로마토그래피(paper partition) 및 TLC BM123인 항생물질은 페이퍼 크로마토그래피에 의해서 확인이 될수 있다. 이 목적으로는, Whatman No. 1 지(紙)를 본 물질의 수용액이나 메탄올 용액으로 점적시켜 윗 상(相) 및 아랫 상(相) 양자의 존재상태로 1－2시간동안 평형시켰다. 이 종이(紙)를 90% 페놀 : m－크레졸 : 초산 : 피리딘 : 물(용적비로 100 : 25 : 4 : 4 : 75)을 혼합하여 얻은 아랫(유기)상(相)으로 하룻밤새 전개시켰다. 전개시킨 종이를 크로마토그래피 통으로 부터 빼내어 1－2시간 동안 대기중에서 건조시키고 에테르로 세척해서 잔류페놀을 제거한다음 클렙시엘라 뉴모니아에(Kle-bsiella pneumoniae) 균주 AD를 심어준 대형 아가르 배지 판상에서 생물학적 자기묘사법을 실시한다.

대표적인 Rf치는 아래 표 VII에 나와 있다.

[표 Ⅶ]

β성분은 이 시스템을 사용한 두 항생물질의 혼합물이었다. BM123β는 BM123β₁, 이라 불리는 주(主)항생물질(Rf=0.50) 및 BM123β₂라 불리는 부(副)항생물질(Rf=0.70)으로 되어있다.

BM123인 항생물질은 또한 TLC에 의해서도 확인될 수 있다. 이 목적으로는 뉴욕시 Elmsford에 있는 (Laboratories, Inc.)에 의해 공급되고 있는 후층(厚層)셀룰로즈의 형태의 표면이 얇게 입혀진 Cellulose F

판(0.10mm 두께)을 본 물질의 수용액으로 점적시켜 크로마토그래피를 행했다.

(한점(點)당 약 20－40μg).

이판올 1－부탄올 : 물 : 피리딘 : 초산(용적비로 15 : 12 : 10 : 1)의 혼합으로 얻어진 용매로 하룻밤새 전개시켰다. 전개시킨 판을 크로마토그래피통으로 부터 꺼내어 약 1시간동안 공기중에서 건조했다. 항생물질은 표준 닌히드린 시액이나 Sakaguchi분무시액을 사용해서 검출되었다.

대표적인 Rf치는 아래의 표 VIII에 나와있다.

[표 Ⅷ]

BM123β 및 BM123γ의 양자(兩者)는 이 시스템을 사용한 두 성분의 혼합물이었다. BM123β는 주(主)성분은 BM123β₁(Rf-0.08)으로 부(副)성분은 BM123β₂(Rf: 0.14)로 되어 있었다. BM123γ₁중 극성이 적은 성분(R₅: 0.23)은 BM123γ₁이었고 극성이 큰 성분(Rf=0.17)은 BM123γ₂였다.

[실시예 8]

항생물질 BM123γ의 환원적 알킬화에 대한 일반 공정.

20ml 메탄올중에 100mg의 항생물질 BM123γ가 들어있는 교반된 용액에 5ml(또는 5g)의 적당한 알데히드나 케톤을 가한다음 100mg의 소듐 시아노보로하이드라이드를 가한다. 이렇게 얻은 용액의 pH를 6.1N 메탄올성 염화수소로 3－24시간에 걸쳐 약 7.0에서 유지시킨다. 반응은 BM123γ가 없어질때까지 TLC로 검사한다. 다음 반응 혼합물을 여과하고, 그 여액을 증발 건고시킨다. 잔류물을 3ml의 메탄올과 잘게 분쇄하여 여과 시킨다. 그 여액을 50ml의 아세톤으로 희석시키고, 형성되는 침전은 여과로 분리하여 건조시킨다. 출발물질인 알데히드나 케톤이 수용성인 곳에서는 메탄올 용매는 20ml의 물로 대치시켜 주어도 된다.

[실시예 9]

메틸－BM123γ의 제조

50ml의 물중에 1.0g의 BM123γ 및 2.5ml의 37% 수성 포름알데히드 용액이 들어있는 용액에 400mg의 소듐 시아노 보로 하이드라이드를 일부분씩 가했다. 반응 혼합물의 pH는 1N 염산으로 소듐 시아노보로 하이드라이드를 다 가해줄때까지 7.0에서 유지시켰다. 반응혼합물을 실온에서 10분간 더 교반시킨 다음 진공상태하에서 증발 건고시켰다. 그 잔류물을 20ml의 메탄올과 잘 분쇄시킨 다음 여과하고, 그 여액을 250ml의 아세톤으로 희석시켰다. 침전되는 생성물을 여과에 의해 분리시켜 건조시켰다. 산출량 667mg.

[실시예 10]

이소푸로필－BM123γ의 제조

300ml의 메탄올 중에 200mg의 BM123γ가 들어있는 용액에 5ml의 아세톤을 가했다. 이 용액에 139ml의 소듐시아노보로 하이드라이드를 가하고 반응 혼합물을 30분간 실온에서 교반시켰다. 이때 반응혼합물의 pH는 0.1N 메탄올성 염화수소를 가해서 7.4－7.8사이로 유지시켰다. 형성된 소량의 침전물을 여과에의해 제거하고 그 여액을 진공상태하에서 증발 건고시켰다. 그 잔류물을 2ml의 메탄올과 잘 분쇄시켜 여과했다. 그 여액을 100ml의 아세톤으로 희석시키고 분리된 고체 생성물을 여과에 의해 분리시켜 제조시켰다 : 산출량, 184mg.

[실시예 11]

β－페닐에틸－BM123γ의 제조

15ml의 물 및 25ml의 아세토니트릴중에 200mg의 BM123γ가 들어있는 용액에 4ml 에탄올중에 2ml의 페닐아세트알데히드가 들어있는 용액을 가했다. 여기에 103mg의 소듐 시아노보로하이드라이드를 가했다. 반응 혼합물을 30분간 실온에서 교반시켜 주는데 이때 혼합물의 pH는 0.2N 염산으로 7에서 유지시켰다. 다음 반응 혼합물을 여과하고, 그 여액을 진공 상태하에서 증발 건조시켰다. 잔류물을 2ml의 메탄올과 함께 잘 분쇄시켜 여과시켰다. 그 여액을 100ml의 아세톤으로 희석시켜 분리된 생성물을 여과에 의해 분리시켜 건조시켰다. 산출량 180mg.

[실시예 12]

1,3,3－트피메틸부틸－BM123γ의 제조

50ml의 메탄올중에 200mg의 BM123γ－HCl이 들어있는 용액에 3ml의 4,4－디메틸－2－펜타논 및 106mg의 소듐시아노보로 하이드라이드를 가했다.

반응 용액의 pH는 메탄올성 염화수소를 극소량씩 가해주어 7로 유지시켰다. 반응액을 18시간동안 실온에서 교반시킨 다음 여과시켰다. 그 여액을 진공상태하에서 증발 건고시켰다. 그 잔류물을 3ml의 메탄올에 녹이고 50ml의 아세톤으로 희석시켜서 여과시켰다 : 산출량. 125mg.

[실시예 13]

1－메틸페닐에틸－BM123γ의 제조

50ml의 메탄올중에 200mg의 BM123γ가 들어있는 용액에 5ml의 페닐아세톤을 가했다. 이용액에 170mg의 소듐 시아노보로하이드라이드를 가하고 그 반응 혼합물을 3시간 반동안 실온에서 교반시켰다. 이때에 반응 혼합물의 pH는 염화수소가스로 포화시킨 메탄올로 7에서 유지시켰다. 반응 혼합물을 5ml의 용적으로 농축시켜 2ml의 메탄올로 희석시켜 여과했다. 그 여액을 10ml의 아세톤에 붓고 분리된 고체 생성물을 여과로 분리해 내어 건조시켰다; 산출량 233mg.

[실시예 14]

1－메틸노닐－BM123γ의 제조

40ml의 메탄올중에 BM123γ(200mg) 및 2－데카논(1ml)이 들어있는 용액에 소듐시아노보로하이드라이드(100mg)를 가했다. 용액의 pH를 7.0으로 조정하고 필요시에는 0.1N 메탄올성 염화수소를 첨가해서 7.0±0.2로 유지시켰다. 19.5시간 후에 반응 혼합물을 여과하고, 그 여액을 30℃에서 진공상태하에 농축시켰다. 잔류물을 5ml의 메탄올레 슬러리화시켜 여과시켰다. 그 여액을 50ml의 아세톤에 가했다. 침전된 회백색 고체를 여과에 의해 수집하여 아세톤으로 세척하고 진공상태하에서 건조시켰다. 조(租) 1－메틸노닐－BM123γ의 산출량은 167mg이었다.

[실시예 15]

1,3－디메틸부틸－BM123γ의 제조

50ml의 메탄올중에 210mg의 BM123γ가 들어있는 용액에 5ml의 메틸이소부틸케톤을 가했다. 이 용액에 166mg의 소듐시아노 브로하이드라이드를 가하고 그 반응 혼합물을 5시간동안 실온에서 교반시켰다. 이때에 반응 혼합물의 pH는 염화수소 가스로 포화시킨 메탄올로 7로 유지시켰다. 반응 혼합물을 진공상태하에 증발 건고시켰다. 그 잔류물을 2ml의 메탄올과 함께 잘 갈아서 여과시켰다. 그 여액을 100ml의 아세톤으로 희석시키고 분리된 고체 생성물을 여과로 분리하여 건조시켰다; 산출량, 210mg.

[실시예 16]

2－노르보르닐－BM123γ의 제조

40ml의 메탄올중에 BM123γ(200mg) 및 2－노르보르나논(400mg)이 들어있는 용액에 소듐 시아노보로하이드라이드(100mg)를 가했다. 용액의 pH를 0.1N 메탄올성 염화수소 7로 조정했다. pH는 필요시에 0.1N 염화수소를 첨가해서 7.0±0.2로 유지시켰다. 21.5시간 후에 반응 혼합물을 여과하고 그 여액을 35℃에서 진공상태하 농축 시켰다. 그 잔류물을 5ml의 메탄올에 슬러리화 시켜서 여과 시켰다. 그 여액을 50ml의 아세톤에 가했다. 침전된 회백색고체를 여과하여 수집하고 아세톤으로 세척해서 진공상태하에 건조시켰다. 조(租) 2－노르보르닐－BM123γ의 산출량은 175mg이었다.

[실시예 17]

이소푸로필－BM123γ₁의 제조

35ml의 메탄올중에 50mg의 BM123γ₁, 5ml의 아세톤 및 60mg의 소듐 시아노보로하이드라이드가 들어있는 혼합물을 40분간 실온에서 교반시켰다. 용액을 pH를 메탄올성 염화수소 용액을 극소량씩 첨가해주어 7에서 유지시켰다. 이 혼합물을 진공상태하에서 증발시켰다. 그 잔류물을 5ml의 메탄올과 함께 잘 분쇄해서 생긴 용액을 50ml의 아세톤으로 희석 시켰다; 산출량, 49mg.

[실시예 18]

이소푸로필－BM123γ₂의 제조

35ml의 메탄올에 41mg의 BM123γ₂, 5ml의 아세톤 및 50mg의 소듐 시아노보로하이드라이드가 들어있는 혼합물을 40분간 실온에서 교반시켰다. 용액의 pH를 메탄올성 염화수소 용액(포화)의 첨가로 7에서 유지 시켰다. 이 혼합물을 여과하여 진공상태하에서 증발 건고시켰다. 잔류물을 5ml의 메탄올과 함께 잘 갈아서 생긴 용액을 50ml의 아세톤으로 희석시켰다; 산출량, 46mg.

[실시예 19]

1－메틸－2－페닐－에틸－BM123γ₂의 제조

50ml의 메탄올중에 200mg의 BM123γ₂, 5ml의 페닐－아세톤 및 170mg의 소듐 시아노보로하이드라이드가 들어있는 혼합물을 3시간 45분동안 실온에서 교반시켰다. 이때 반응 혼합물의 pH는 메탄올성 염화수소용액(포화)의 첨가로 7에서 유지시켰다. 이 혼합물을 진공상태하에서 증발 건고시켰다. 그 잔류물을 5ml의 메탄올과 함께 잘 갈아서 생긴 메탄올용액을 약 50ml의 아세톤으로 희석시켰다; 산출량, 233mg.

[실시예 20]

(2－에틸싸이클로펜틸) BM123γ의 제조

50ml의 메틸알콜중에 200mg의 BM123γ, 3ml의 2－에틸싸이클로펜타논 및 101mg의 소듐시아노보로 하이드라이드가 들어있는 용액을 18시간동안 실온에서 저장했다. 이때 용액의 pH는 염화수소로 포화된 메탄올 용액의 첨가로 7에서 유지시켰다. 이 반응 혼합물을 증발 건고시켰다. 그 잔류물을 3ml의 메탄올과 함께 잘 분쇄시켜 여과하고 그 여액을 40ml의 아세톤으로 희석시켰다; 산출량, 157mg.

[실시예 21]

3,5－디메틸싸이클로헥실 BM123γ의 제조

50ml의 메탄올중에 200mg의 BM123γ, 5ml의 3,5－디메틸싸이클로 헥사논 및 200mg의 소듐시아노보로하이드라이드가 들어있는 용액을 1시간동안 실온에서 저장시켰다. 이때 용액의 pH는 염화수소로 포화된 메탄올 용액의 첨가로 7에서 유지시켰다. 반응물을 3ml의 메탄올과 함께 잘 분쇄해서 여과하고 그 여액을 40ml의 아세톤으로 희석시켰다; 산출량, 200mg.

[실시예 22]

2,4－디메틸싸이클로펜틸 BM123γ의 제조

50ml의 메탄올중에 206mg의 BM123γ, 3ml의 2,4－디메틸싸이클로펜타논 및 104mg의 소듐 시아노보로하이드라이드가 들어있는 용액을 6시간동안 실온에서 저장시켰다. 이 때 용액의 pH는 염화수소로 포화된 메틴올 용액의 첨가로 7에서 유지시켰다. 반응물 3ml의 메탄올과 함께 잘 갈아서 여과하고, 그 여액을 40ml의 아세톤으로 희석시켰다; 산출량, 101mg.

[실시예 23]

2－에틸싸이클로헥실 BM123γ의 제조

50ml의 메탄올 중에 200mg의 BM123γ, 5ml의 2－에틸싸이클로헥사논 및 213mg의 소듐 시아노보로 하이드라가 들어있는 용액을 3시간동안 실온에서 저장시켰다. 이때 용액의 pH－염화수소로 포화된 메탄올 용액의 첨가로 7에서 유지시켰다. 반응물을 3ml의 메탄올과 함께 잘 분쇄해서 여과하고 그 여액을 40ml의 아세톤으로 희석시켰다; 산출량, 200mg.

[실시예 24]

3－메틸싸이클로헥실 BM123γ의 제조

50ml의 메탄올 중에 200mg의 BM123γ, 1.5ml의 3－메틸싸이클로헥사논 및 200mg의 소듐시아노보로하이드라이드가 들어있는 용액을 2시간동안 실온에서 저장시켰다. 이때 용액의 pH는 염화수소로 포화된 메탄올 용액을 첨가하여 7에서 유지시켰다. 반응물을 3ml의 메탄올과 함께 잘 갈아서 여과하고, 그 여액을 40ml의 아세톤으로 희석시켰다.; 산출량, 200mg.

[실시예 25]

2,4,4－트리메틸싸이클로펜틸 BM123γ의 제조

50ml의 메탄올 중에 200mg의 BM123γ, 5ml의 2,4,4－트리메틸싸이클로펜타논 및 179mg의 소듐시아노보로하이드라이드가 들어있는 용액을 24시간동안 실온에서 저장시켰다. 이때 용액의 pH는 염화수소로 포화된 메탄올 용액을 첨가하여 7에서 유지시켰다. 반응물을 3ml의 메탄올과 함께 잘 불쇄해서 여과하고, 그 여액을 40ml의 아세톤으로 희석시켰다.; 산출량, 176mg.

[실시예 26]

2－푸로필싸이클로헥실 BM123γ의 제조

50ml의 메탄올 중에 200mg의 BM123γ, 3ml의 2－푸로필싸이클로헥사논 및 157mg의 소듐시아노보로하이드라이드가 들어있는 용액을 4시간동안 실온에서 저장시켰다. 이때 용액의 pH는 염화수소로 포화된 메탄올 용액을 첨가하여 7에서 유지시켰다. 반응물을 3ml의 메탄올과 함께 잘 갈아서 여과하고, 그 여액을 40ml의 아세톤으로 희석시켰다.; 산출량, 75mg.

[실시예 27]

2－메틸싸이클로펜틸 BM123γ의 제조

50ml의 메탄올 중에 211mg의 BM123γ, 3ml의 2－메틸싸이클로펜타논 및 98mg의 소듐시아노보로하이드라이드가 들어있는 용액을 35시간동안 실온에서 저장시켰다. 이때 용액의 pH는 염화수소로 포화된 메탄올 용액을 첨가하여 7에서 유지시켰다. 반응물을 3ml의 메탄올과 함께 잘 갈아서 여과하고 그 여액을 40ml의 아세톤으로 희석시켰다.; 산출량, 157mg.

Claims (1)

1. 다음, 일반식(V)의 아민을 일반식

   

   의 알데히드나 케톤과 함께 반응물에 대해 불활성인 용매중에서 환원제의 존재하에 환원적 알킬화가 일어나기에 충분한 시간동안 알킬화시켜서 다음 일반식(I)로 나타내지는 화합물을 제조하는 방법.

   

   여기서 A는 R₁또는 R₂이고; B는 수소 또는 R₃이고; D는 수소 또는 －CH|₂－R₁이고; E는 수소 또는 －CH₂－R₁이고; F는 －CH₂－R₁또는 |

   

   이고; R₁은 수소, 저급알킬, 할로치환저급알킬, 저급알케닐, 페닐, 모노치환페닐, 페닐저급알킬, 2－푸릴, 메틸치환 2－푸릴, 2－치에닐, 메틸치환 2－치에닐, 2－피릴, 메틸치환 2－피릴, 2－피리딜 또는 2－퀴놀릴이고; R₂는 저급알킬, 할로치환저급알킬 또는 페닐 저급알킬이고; R₃는 저급알킬, 할로치환저급알킬, 저급알케닐, 저급사이클로알킬, 페닐, 모노치환페닐, 페닐저급알킬 또는 모노치환 페닐 저급알킬이고 R₂및 R₃는 함께 테트라메틸렌, 펜타메틸렌 또는 헥사메틸렌이고; R은 다음 일반식들로 나타내지는 부분이다.

   

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