KR20240122606A - 암을 위한 병용 요법 - Google Patents

암을 위한 병용 요법 Download PDF

Info

Publication number
KR20240122606A
KR20240122606A KR1020247018081A KR20247018081A KR20240122606A KR 20240122606 A KR20240122606 A KR 20240122606A KR 1020247018081 A KR1020247018081 A KR 1020247018081A KR 20247018081 A KR20247018081 A KR 20247018081A KR 20240122606 A KR20240122606 A KR 20240122606A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
specific binding
binding molecule
active agent
cancer
activator
Prior art date
Application number
KR1020247018081A
Other languages
English (en)
Inventor
헨리 찰스 윌슨 헤이스
크리스토퍼 배리 우드
피오나 캐롤린 뎀프시
스콧 제임스 크라이튼
제임스 알렉산더 잉햄
샤를린 파비안
Original Assignee
메드어넥스 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메드어넥스 리미티드 filed Critical 메드어넥스 리미티드
Publication of KR20240122606A publication Critical patent/KR20240122606A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/69—Boron compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Abstract

본 발명은 암의 치료에 사용하기 위한 제2 활성제와 조합된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자의 용도에 관한 것이다. 제2 활성제에는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, 체크포인트 억제제, 프로테아솜 억제제, 탁산, 백금 기반 화학요법제 및 뉴클레오사이드 유사체가 포함된다. 치료에 바람직한 암은 췌장암, 대장암, 유방암, 폐암, 골수종 및 외투 세포 림프종이다. 관련된 키트, 생성물 및 용도가 또한 제공된다.

Description

암을 위한 병용 요법
본 발명은 특정한 다른 치료제와 조합된, 아넥신-A1(ANXA1)에 대한 특이적 결합 분자를 사용하는 암의 치료에 관한 것이다.
암은 비정상적인 세포 성장을 특징으로 하는 질환 군이다. 특징적으로, 암과 연관된 비정상적인 세포 성장은 종양(비정상적인 세포 성장으로 인해 형성되는 세포의 고체 덩어리)의 형성을 초래하지만, 언제나 그런 것은 아니다(특히 혈액 암에서). 2010년에 전 세계적으로 더 많은 사람들(약 8백만명)이 임의의 다른 단일 원인보다 암으로 사망하였다(Lozano et al., Lancet 380: 2095-2128, 2012). 나아가, 전 세계의 인구가 노화됨에 따라, 암 발병률이 증가할 것으로 예상된다. 따라서, 암에 대한 새롭고 개선된 치료법이 시급히 필요하다.
더욱이, 많은 암 사망은 암이 화학요법 약물에 내성을 갖게 된 결과이다. 암이 약물 내성이 되는 방법은 Housman 등의 문헌(Cancers 6: 1769-1792, 2014)에 검토되어 있다. 이 문헌에서 상세히 설명되는 것과 같이, 암은 약물의 비활성화 또는 대사(또는 대사 활성화의 방지), 약물 표적의 돌연변이 또는 변경 및 ABC 수송체를 통한 약물 유출을 포함한 다양한 메커니즘에 의해 약물 내성이 될 수 있다. 이러한 메커니즘은 암이 다중약물 내성(MDR)이 되는 결과를 초래할 수 있다. 약물 기반 치료법에 대한 내성의 발생은 오늘날 종양학에서 상당한 과제이다. 그러므로 종래 화학요법에 대해 내성이거나, 내성이 된 암에 대한 새로운 치료 옵션이 필요하다.
본 발명은 암에 대한 새로운 치료 옵션, 구체적으로 아넥신-A1(ANXA1)에 대한 특이적 결합 분자(예컨대 항체)가 특정한 특이적 파트너 약물과 조합되어 사용되는 새로운 치료법을 제공한다. 아래의 실시예에서 나타내는 것과 같이, 본원에서 제공된 조합은 암 또는 특정 유형의 암을 치료하는데 특히 효과적이다.
전장 인간 ANXA1은 서열번호: 17에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. ANXA1은 아넥신 단백질 패밀리의 구성원이다. ANXA1을 포함하여 이 패밀리의 대부분의 단백질은 4개의 상동성 반복 도메인을 포함하는 "코어"영역의 존재를 특징으로 하며, 이들 각각은 적어도 하나의 Ca2+ 결합 부위를 포함한다. 패밀리의 각각의 구성원은 고유한 N 말단 영역에 의해 구별된다. ANXA1은 단량체 양친매성 단백질로, 주로 그것이 발현되는 세포의 세포질에 위치한다. 그러나, ANXA1은 또한 외부로 수송되어, 세포 표면 국지화를 초래할 수 있다(D'Acquisto et al., Br. J. Pharmacol. 155: 152-169, 2008).
ANXA1은 선천성 면역계 및 적응성 면역계 둘 다의 다양한 세포 유형의 항상성에 관여하는 면역계의 조절에 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 예를 들어, ANXA1은 호중구 및 대식세포와 같은 선천성 면역계의 세포에 대한 항상성 제어를 발휘하고, 또한 T 세포 수용체(TCR) 신호전달의 강도를 조절함으로써 T 세포에서 역할을 하는 것으로 나타났다(D'Acquisto et al., Blood 109: 1095-1102, 2007). 적응성 면역계에서 그 역할을 억제하기 위해 ANXA1에 대한 중화 항체를 사용하는 것은, 류머티스 관절염(rheumatoid arthritis) 및 다발성 경화증(multiple sclerosis)과 같은 자가면역 질환을 포함한 다양한 T 세포 매개 질환의 치료에 효과적인 것으로 나타났다(WO 2010/064012; WO 2011/154705).
ANXA1에 대한 항체는 또한 특정 정신 질환, 특히 불안, 강박 장애(OCD) 및 관련 질환의 치료에 유용한 것으로 밝혀져 있지만(WO 2013/088111), 이것이 발생하는 메커니즘은 알려져 있지 않다.
인간 ANXA1을 인식하는 많은 단클론성 항체가 WO 2018/146230에서 개시된다. WO 2020/030827에서 상세하게 기술된 것과 같이, 이들 항체는 위치 197-206, 220-224 및 227-237에 있는 아미노산을 포함하는 불연속 에피토프에서(즉 서열 번호: 17의 위치 197-206, 220-224 및 227-237에 있는 아미노산을 포함하는 에피토프에서) 인간 ANXA1에 결합하는 것으로 나타났다. WO 2018/146230에서 개시된 항체는 그것이 매우 높은 친화도로 인간 ANXA1에 결합할 수 있다는 점에서 특히 유리한 특성을 가진다. WO 2018/146230에서 개시된 항체는 후속해서 강력한 항암 활성을 갖는 것으로 나타났다(WO 2020/030827). WO 2020/030827에서 입증된 것과 같이, 항체는 다수의 암 세포주에 대한 항증식 효과를 입증하였고, 또한 삼중 음성 유방암(triple-negative breast cancer)의 쥐과 모델에서 치료 효능을 입증하였다.
본 발명자들은 이제 특정한 다른 특이적 치료제와 함께 WO 2018/146230에서 개시된 항-ANXA1 항체를 사용한 병용 치료가 예상 외로 향상된 항암 효과를 제공하는 것을 발견하였다.
그러므로, 제1 측면으로, 발명은 대상체에서 암의 치료에 사용하기 위한 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제를 제공하며, 여기서:
(i) 특이적 결합 분자는 상보성 결정 영역(CDR) VLCDR1, VLCDR2, VLCDR3, VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3을 포함하고, 상기 CDR의 각각은 다음과 같이 아미노산 서열을 가지며:
VLCDR1은 서열 번호: 1, 7 또는 8에 제시된 서열 또는 위치 9 및/또는 11에서 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그것의 변형 버전을 가지고;
VLCDR2는 서열 번호: 2에 제시된 서열을 가지며;
VLCDR3은 서열 번호: 3에 제시된 서열을 가지고;
VHCDR1은 서열 번호: 4에 제시된 서열을 가지며;
VHCDR2는 서열 번호: 5에 제시된 서열을 가지고; 그리고
VHCDR3은 서열 번호: 6에 제시된 서열을 가지며; 그리고
(ii) 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택된다. 대안적으로 표현하면, 발명은 대상체에서 암의 치료에 사용하기 위한 본원에서 정의된 특이적 결합 분자를 제공하며, 상기 치료에서 본원에서 정의된 상기 특이적 결합 분자 및 제2 활성제는 상기 대상체에게 투여될 것이며, 즉 상기 특이적 결합 분자 및 상기 제2 활성제는 상기 치료에서 조합되어 사용된다.
제2 측면으로 발명은 대상체에서 유방암의 치료에 사용하기 위한 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제를 제공하며, 특이적 결합 분자는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같고, 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택된다. 대안적으로 표현하면, 발명은 대상체에서 유방암의 치료에 사용하기 위한 본원에서 정의된 특이적 결합 분자를 제공하며, 상기 치료에서 본원에서 정의된 상기 특이적 결합 분자 및 제2 활성제가 상기 대상체에게 투여될 것이며, 즉 상기 특이적 결합 분자 및 상기 제2 활성제가 상기 치료에서 조합되어 사용된다.
제3 측면으로 발명은 대상체에서 췌장암(pancreatic cancer)의 치료에 사용하기 위한 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제를 제공하며, 특이적 결합 분자는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같고, 제2 활성제는 뉴클레오사이드 유사체이다. 대안적으로 표현하면, 발명은 대상체에서 췌장암의 치료에 사용하기 위한 본원에서 정의된 특이적 결합 분자를 제공하며, 상기 치료에서 본원에서 정의된 상기 특이적 결합 분자 및 제2 활성제가 상기 대상체에게 투여될 것이며, 즉 상기 특이적 결합 분자 및 상기 제2 활성제가 상기 치료에서 조합되어 사용된다.
관련해서, 제4 측면으로 발명은 대상체에게 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 특이적 결합 분자는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같고 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택된다.
제5 측면으로 발명은 대상체에게 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 유방암을 치료하는 방법을 제공하며, 특이적 결합 분자는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같고 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택된다.
제6 측면으로 발명은 대상체에게 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 뉴클레오사이드 유사체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 췌장암을 치료하는 방법을 제공하며, 특이적 결합 분자는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같다.
관련하여, 제7 측면으로 발명은 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자의 용도를 제공하며, 특이적 결합 분자는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같고, 상기 암의 치료는 상기 의약 및 제2 활성제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택된다.
제8 측면으로 발명은 유방암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자의 용도를 제공하며, 특이적 결합 분자는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같고, 상기 유방암의 치료는 상기 의약 및 제2 활성제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택된다.
제9 측면으로 발명은 췌장암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자의 용도를 제공하며, 특이적 결합 분자는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같고, 상기 췌장암의 치료는 상기 의약 및 뉴클레오사이드 유사체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
제10 측면으로 발명은 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자, 제2 활성제 및 하나 이상의 제약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 제약학적 조성물을 제공하며,
본원에서 정의된 특이적 결합 분자 및 제2 활성제는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같다.
제11 측면으로 발명은 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제를 포함하는 키트를 제공하며, 본원에서 정의된 특이적 결합 분자 및 제2 활성제는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같다.
제12 측면으로 발명은 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 대상체의 암 치료에서 별도의, 동시의 또는 순차적 사용을 위한 제2 활성제를 포함하는 생성물을 제공하며, 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택된다.
제13 측면으로 발명은 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 대상체의 유방암 치료에서 별도의, 동시의 또는 순차적 사용을 위한 제2 활성제를 포함하는 생성물을 제공하며, 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택된다.
제14 측면으로 발명은 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 대상체의 췌장암 치료에서 별도의, 동시의 또는 순차적 사용을 위한 제2 활성제를 포함하는 생성물을 제공한다.
이하에서 기술되는 것과 같이 제3 활성제가 또한 발명의 위에서의 측면들에 사용될 수 있다.
도 1은 췌장암 세포주 MIA PaCa-2(A) 및 PANC-1(B)에 항체 MDX-124를 적용하는 것이 항체가 단일 작용제로서 사용될 때와 5FU를 사용하는 화학요법과 조합되어 사용될 때 모두 시험관내에서 암세포 증식을 상당히 감소시키는 것을 도시한다. 항체는 세포에 0 내지 10 μM의 농도 범위에서 적용되었다; 5FU는 그것의 IC50에서 적용되었다; ****p<0.0001, ***p<0.001 및 **p<0.01(MDX-124 v MDX-124 + 5FU IC50) 또는 op<0.05 및 oop<0.01(MDX-124 v IgG 아이소타입 대조군).
도 2는 췌장암 세포주 PANC-1에 항체 MDX-124를 적용하는 것이 항체가 단일 작용제로서 사용될 때와 겜시타빈을 사용하는 화학요법과 조합되어 사용될 때 모두 시험관내에서 암세포 증식을 상당히 감소시키는 것을 도시한다. 항체는 세포에 0 내지 10 μM의 농도 범위에서 적용되었다; 겜시타빈은 그것의 IC50에서 적용되었다; ****p<0.0001, ***p<0.001 및 **p<0.01(MDX-124 v MDX-124 + 겜시타빈 IC50) 또는 oooop<0.0001(MDX-124 v IgG 아이소타입 대조군).
도 3은 유방암 세포주 HCC1806에 항체 MDX-124를 적용하는 것이 항체가 단일 작용제로서 사용될 때와 시스플라틴을 사용하는 화학요법과 조합되어 사용될 때 모두 시험관내에서 암세포 증식을 상당히 감소시키는 것을 도시한다. 항체는 세포에 0 내지 10 μM의 농도 범위에서 적용되었다; 시스플라틴은 그것의 IC50에서 적용되었다; ****p<0.0001(MDX-124 v MDX-124 + 시스플라틴 IC50) 또는 op<0.05, oop<0.01 및 ooop<0.001(MDX-124 v IgG 아이소타입 대조군). 이 도면은 2개의 독립적인 실험을 나타낸다.
도 4는 유방암 세포주 HCC1806에 항체 MDX-124를 적용하는 것이 항체가 단일 작용제로서 사용될 때와 파클리탁셀을 사용하는 화학요법과 조합되어 사용될 때 모두 시험관내에서 암세포 증식을 상당히 감소시키는 것을 도시한다. 항체는 세포에 0 내지 10 μM의 농도 범위에서 적용되었다; 파클리탁셀은 그것의 IC20에서 적용되었다; ****p<0.0001(MDX-124 v MDX-124 + 파클리탁셀 IC20) 또는 ooop<0.001 및 oooop<0.0001(MDX-124 v IgG 아이소타입 대조군).
도 5는 유방암의 EMT6 마우스 모델에서의 평균 종양 부피를 도시한다. 마우스는 암세포로 접종된 후 비히클 대조군(PBS), MDX-001(10 mg/kg, QW), 항-PD-1 항체(10 mg/kg, BIW) 또는 MDX-001과 항-PD-1 처방의 조합이 투여되었다(n=그룹당 10마리). 종양 부피는 도시된 시점에서 계산되었다. 도면에서 나타낸 것과 같이, 병용 요법 그룹은 종양 성장을 감소시키는 측면에서 최상의 결과를 입증하였다.
도 6은 도 5에서 분석된 개별 마우스의 EMT6 종양 부피를 도시한다. 결과는 비히클로 처리된 마우스를 항-PD-1 항체(A) 또는 MDX-001과 항-PD-1 항체 병용 요법(B)으로 처리된 마우스를 비교한 것을 보여준다. 도시된 것과 같이, 항-PD-1 단일요법이 투여된 그룹에서보다 MDX-001와 항-PD-1 항체의 조합이 투여된 그룹에서 더 많은 마우스가 종양 퇴행을 보였다.
도 7은 폐암의 LL/2 쥐과 모델에서의 평균 종양 부피를 도시한다. 마우스는 암세포로 접종된 후 비히클 대조군(PBS), MDX-001(10 mg/kg, QW), 항-PD-1 항체(10 mg/kg, BIW) 또는 MDX-001과 항-PD-1 처방의 조합이 투여되었다(n=그룹당 10마리). 종양 부피는 도시된 시점에서 계산되었다. 도면에서 나타낸 것과 같이, MDX-001이나 항-PD-1 항체는 어떤 것도 단독으로 투여되었을 때 종양에 대한 효능을 나타내지 않았지만, 조합되어 투여되었을 때 유의미한 항-종양 효과를 볼 수 있었다.
도 8은 췌장암의 Pan02 마우스 모델에서의 평균 종양 부피를 도시한다. 마우스는 암세포로 접종된 후 겜시타빈(80 mg/kg, Q3D x4) 및 nab-파클리탁셀(아브락산, 30 mg/kg, Q3D x4)(n=50) 또는 MDX-124(10 mg/kg, 주 2회) 플러스 겜시타빈(80 mg/kg, Q3D x4) 및 nab-파클리탁셀(30 mg/kg, Q3D x4)(n=30)로 투여되었다. 종양 부피는 도시된 시점에서 계산되었고 평균 종양 부피 ± SEM으로서 표시된다.
도 9는 다발성 골수종(multiple myeloma) 세포주 세포자멸사에 미치는 MDX-124 +/- 보르테조밉의 영향을 도시한다. (A) H929, (B) JJN3 및 (C) U266 인간 골수종 세포주는 MDX-124(20 μM), 보르테조밉(20 nM) 또는 MDX-124 및 보르테조밉의 조합으로 처리되었다. 모든 데이터는 각각 이중으로 수행된 3개의 독립적인 실험의 평균±SD로서 표시된다. 통계학적 분석은 다중 비교를 위해 터키 수정(Tukey's correction)이 있는 이원변량분석을 사용하여 수행되었다.
도 10은 다발성 골수종 세포주에서 p-STAT3 및 p-BCL2 발현에 미치는 MDX-124 및 보르테조밉의 영향을 도시한다. 각각의 인간 다발성 골수종 세포주의 분취액이 MDX-124(20 μM), 보르테조밉(20 nM) 또는 MDX-124와 보르테조밉의 조합으로 4시간 동안 처리된 후 Alexa488 표지된 p-STAT3(Tyr705) 항체 및 PE 표지된 p-BCL2(pS70) 항체로 염색되었다. 각각의 그룹이 처리된 후에 (A) p-BCL2 및 (B) p-STAT3에 대한 평균 강도 값이 미처리 대조군 세포와 비교되었다. 모든 데이터는 각각 이중으로 수행된 3개의 독립적인 실험의 평균±SD로서 표시된다. 통계학적 분석은 다중 비교를 위해 터키 수정이 있는 이원변량분석을 사용하여 수행되었다.
도 11은 다발성 골수종 세포주에서 세포내 IL-6 생성에 미치는 MDX-124 및 보르테조밉의 영향을 도시한다. 각각의 인간 다발성 골수종 세포주의 분취액이 MDX-124(20 μM), 보르테조밉(20 nM) 또는 MDX-124와 보르테조밉의 조합으로 24시간 동안 처리된 후 고정 및 투과화된 세포에서 세포내 IL-6이 분석되었다. 각각의 치료 그룹에 대해 IL-6에 대한 평균 형광 강도 값이 미처리 대조군 세포와 비교되었다. 모든 데이터는 각각 이중으로 수행된 3개의 독립적인 실험의 평균±SD로서 표시된다. 통계학적 분석은 다중 비교를 위해 터키 수정이 있는 이원변량분석을 사용하여 수행되었다.
본 발명은 암을 치료하는데 효과적인 새로운 조합을 제공한다. 조합은 별도 사용에 비해 구성요소의 효능을 증가시키는 작용을 할 수 있다. 한 예에서, 구성요소 중 하나는 그렇지 않으면 효과적이지 않을 약물의 효과를 강화시킬 수 있다. 이것은 약물 내성 암을 치료하기 위해, 예컨대 새로운 치료를 제공하거나 또는 암이 내성이 된 약물의 효능을 증가시키는데 특히 유용할 수 있다. 나아가, 조합을 사용하여 달성된 향상된 효과의 면에서, 발명은 사용될 구성요소(예컨대 제2 또는 제3 활성제)의 더 낮은 수준을 허용한다. 바람직한 측면으로 조합은 시너지, 즉 부가 효과보다 더 나은 효과를 보여준다. 특히 그러한 경우에 조합에서의 사용에 의해 사용될 구성요소(예컨대 제2 또는 제3 활성제) 중 하나 또는 둘 다의 양을 감소시키고 구성요소(예컨대 제2 또는 제3 활성제)의 효과를 강화시키는 것이 가능하다. 특이적 결합 분자는 제2(또는 제3) 활성제의 활성을 강화시키는 조합의 구성요소를 제공할 수 있고, 또는 그 역도 가능하다.
위에서 언급된 것과 같이, 발명은 (부분적으로) 대상체에서 암(또는 특정한 특정 암)의 치료에 사용하기 위한 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자를 제공한다. 본원에서 정의된 "특이적 결합 분자"는 특정 분자 파트너, 이 경우에 인간 ANXA1에 특이적으로 결합하는 분자이다. 인간 ANXA1에 특이적으로 결합하는 분자는 이것이 다른 분자, 또는 적어도 대부분의 다른 분자에 결합하는 것보다 더 큰 친화도로 인간 ANXA1에 결합하는 분자이다. 그러므로, 예를 들어, 만약 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자가 인간 세포의 용해물과 접촉되었다면, 특이적 결합 분자는 주로 ANXA1에 결합할 것이다. 특히, 특이적 결합 분자는 상기 인간 ANXA1 상에 존재하는 서열 또는 구성에 결합한다. 특이적 결합 분자가 항체인 때 서열 또는 구성은 특이적 결합 분자가 결합하는 에피토프이다. 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자에 의해 결합되는 ANXA1 에피토프는 위에서 상세하게 설명된다.
본원에서 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 반드시 인간 ANXA1에만 결합하는 것은 아니다: 특이적 결합 분자는 특정 다른 비정의된 표적 분자와 교차 반응할 수 있거나, 또는 다수의 분자의 혼합물(예컨대 세포 용해물 또는 그와 같은 것)과 접촉될 때 비특이적 결합의 수준을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합 분자는 인간 아넥신 패밀리의 다른 구성원, 및/또는 다른 동물로부터의 ANXA1 단백질과의 교차 반응성 수준을 나타낼 수 있다. 무관하게, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 ANXA1에 대한 특이성을 나타낸다. 숙련된 사람은 기술분야에서의 표준기법, 예컨대 ELISA, 웨스턴 블롯, 표면 플라스몬 공명(SPR), 등을 사용하여 특이적 결합 분자가 ANXA1에 대해 특이성을 나타내는지의 여부를 쉽게 확인할 수 있을 것이다. 특정 구현예에서, 본원에서 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 20 nM, 15 nM 또는 10 nM 미만의 KD(해리 상수)로 인간 ANXA1에 결합한다. 바람직한 구현예에서, 본원에서 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 5 nM 미만의 KD로 인간 ANXA1에 결합한다.
ANXA1에 대한 특이적 결합 분자의 결합의 KD는 바람직하게는, Ca2+ 이온이 적어도 1 mM의 농도로 존재하고, 선택적으로 HEPES가 10-20 mM의 농도로 존재하며, pH가 7 내지 8, 바람직하게는 7.2와 7.5를 포함하여 7.2 내지 7.5의 생리적 수준인 결합 조건 하에서 측정된다. NaCl은, 예컨대 100-250 mM의 농도로 존재할 수 있고, 저농도의 세제, 예컨대 폴리소르베이트 20이 또한 존재할 수 있다. 그러한 저농도는 예컨대 0.01 내지 0.5 부피/부피%일 수 있다. 특이적 결합 분자와 이것의 리간드 사이의 상호작용의 KD가 계산될 수 있는 다수의 방법이 기술분야에 공지되어 있다. 공지된 기법은 SPR(예컨대 Biacore) 및 분극화 조절된 경사-입사 반사율 차이(OI-RD)를 포함한다.
위에서 기술된 것과 같이, "인간 ANXA1에 결합하는" 분자는 인간 ANXA1 분자에 대해 특이성을 나타낸다. 4개의 교대로 스플라이싱된 ANXA1 mRNA의 번역으로부터 얻어진, 인간 ANXA1의 3개의 인간 동형(isoform)이 존재한다. 전장 인간 ANXA1 단백질은 ANXA1-002 또는 ANXA1-003 전사체의 번역으로부터 얻어지고, 위에서 주지된 것과 같이 서열 번호: 17에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. ANXA1-004 및 ANXA1-006 전사체는 전장 인간 ANXA1 단백질의 단편을 암호화하고, 각각 서열 번호: 18 및 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
본 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 전장 인간 ANXA1(즉, 346개 아미노산 단백질인 ANXA1-002 또는 ANXA1-003 전사체에 의해 암호화된 서열 번호: 17의 ANXA1)에 결합한다. 특이적 결합 분자는 또한 전장 ANXA1의 특정 단편, 부분 또는 변이체, 예컨대 ANXA1-004 및 ANXA1-006 전사체에 의해 암호화된 단편에 결합할 수 있다.
이하에서 논의되는 것과 같이, 항체(및 CDR을 함유하는 분자)는 발명에 따라 사용하기 위한 바람직한 특이적 결합 분자를 형성한다.
위에서 언급된 것과 같이, 인간 ANXA1을 인식하는 많은 단클론성 항체가 WO 2018/146230에 개시되어 있다. WO 2018/146230에 개시된 하나의 항체는 다음의 CDR 서열을 가진다:
VLCDR1: RSSQSLENSNAKTYLN(서열 번호: 1);
VLCDR2: GVSNRFS(서열 번호: 2);
VLCDR3: LQVTHVPYT(서열 번호: 3);
VHCDR1: GYTFTNYWIG(서열 번호: 4);
VHCDR2: DIYPGGDYTNYNEKFKG(서열 번호: 5); 및
VHCDR3: ARWGLGYYFDY(서열 번호: 6).
WO 2018/146230에 개시된 또 다른 항체는 다음의 CDR 서열을 가진다:
VLCDR1: RSSQSLENSNGKTYLN(서열 번호: 7);
VLCDR2: GVSNRFS(서열 번호: 2);
VLCDR3: LQVTHVPYT(서열 번호: 3);
VHCDR1: GYTFTNYWIG(서열 번호: 4);
VHCDR2: DIYPGGDYTNYNEKFKG(서열 번호: 5); 및
VHCDR3: ARWGLGYYFDY(서열 번호: 6).
WO 2018/146230에 개시된 또 다른 항체는 다음의 CDR 서열을 가진다:
VLCDR1: RSSQSLENTNGKTYLN(서열 번호: 8);
VLCDR2: GVSNRFS(서열 번호: 2);
VLCDR3: LQVTHVPYT(서열 번호: 3);
VHCDR1: GYTFTNYWIG(서열 번호: 4);
VHCDR2: DIYPGGDYTNYNEKFKG(서열 번호: 5); 및
VHCDR3: ARWGLGYYFDY(서열 번호: 6).
(표준 명명법과 일치하게, VLCDR1, VLCDR2 및 VLCDR3 각각은 항체 경쇄의 CDR 1, 2 및 3을 나타내는 한편, VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3 각각은 항체 중쇄의 CDR 1, 2 및 3을 나타낸다.)
그러므로 WO 2018/146230에 개시된 항체는 VLCDR1 서열을 제외하고 동일한 CDR 서열을 가진다. 서열 번호: 7의 VLCDR1 서열은 수탁 번호 10060301을 갖는 ECACC에 기탁된 하이브리도마로부터 얻어진 미량 mRNA 서열로부터 구성된 쥐과 항체 MDX-001에서 발견되는 야생형 VLCDR1 서열이다.
MDX-001의 인간화된 버전이 제조되었고, 놀랍게도, 이들 인간화된 항체에서 VLCDR1 서열의 변형은 향상된 항체를 유발하는 것으로 발견되었다. 서열 번호: 7의 위치 11에서 글리신 잔기의 치환은 항체 안정성 및 기능을 향상시킨다. 이론에 얽매이길 바라지는 않지만, 이것은 CDR의 번역 후 변형을 위한 부위를 제거함으로써 달성되는 것으로 여겨진다. 구체적으로, 이러한 글리신 잔기의 치환은 단백질로부터 탈아미드화 부위를 제거하는 것으로 여겨진다. 서열 번호: 7에 제시된 VLCDR1 서열은 서열 모티프 Ser-Asn-Gly를 포함한다. 이 서열 모티프는 Asn 잔기의 탈아미드화와 연관되어 아스파라긴 잔기의 아스파르트산 또는 아이소아스파르트산으로의 전환으로 이어지고, 이것은 항체 안정성 및 표적 결합에 영향을 미칠 수 있다. Ser-Asn-Gly 모티프 내의 잔기 중 어느 하나의 치환은 탈아미드화 부위를 제거하는 것으로 여겨진다.
WO 2018/146230에서 상세하게 설명된 것과 같이, 서열 번호: 7의 위치 11에서의 글리신 잔기(위에서 기술된 탈아미드화 부위 내에 위치한 글리신 잔기)가 알라닌으로 치환된 항체는 네이티브 MDX-001 항체에 비해서 이들의 표적(ANXA1)에 대한 향상된 결합을 나타낸다. 위치 11에서 글리신의 알라닌으로의 치환을 포함하는 VLCDR1은 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열 RSSQSLENSNAKTYLN(진하게 표시된 잔기는 전술한 치환에 의해 도입된 알라닌임)을 가진다. 추가로, 세린의 트레오닌으로의 치환에 의해 위치 9에서 변형된 VLCDR1을 포함하는 인간화된 항체는 MDX-001에 비해 ANXA1의 향상된 결합을 나타내는 것으로 나타났다. 위치 9에서 트레오닌으로의 세린의 치환을 포함하는 VLCDR1은 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열 RSSQSLENTNGKTYLN(진하게 표시된 잔기는 전술한 치환에 의해 도입된 트레오닌임)을 가진다.
본 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 WO 2018/146230에서 개시된 3개의 항체 중 임의의 항체, 또는 그것의 특정 변이체의 CDR 서열을 포함한다. 특히, 위에서 주지된 것과 같이, WO 2018/146230에서 개시된 항체의 VLCDR1은 VLCDR1의 위치 9 및 11에서 보존적 아미노산 치환을 적어도 용인하는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 다음과 같이 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함한다:
VLCDR1은 서열 번호: 1, 7 또는 8에 제시된 서열, 또는 위치 9 및/또는 11에 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그것의 변형 버전을 가지며;
VLCDR2는 서열 번호: 2에 제시된 서열을 가지고;
VLCDR3은 서열 번호: 3에 제시된 서열을 가지며;
VHCDR1은 서열 번호: 4에 제시된 서열을 가지고;
VHCDR2는 서열 번호: 5에 제시된 서열을 가지며; 그리고
VHCDR3은 서열 번호: 6에 제시된 서열을 가진다.
본원에서 사용된 바, 용어 "보존적 아미노산 치환"은 하나의 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 또 다른 아미노산 잔기로 대체되는 아미노산 치환을 지칭한다. 유사한 측쇄가 있는 아미노산은 유사한 특성을 갖는 경향이 있고, 따라서 폴리펩타이드의 구조 또는 기능에 중요한 아미노산의 보존적 치환은 동일한 위치에서 비보존적 아미노산 치환보다 폴리펩타이드 구조/기능에 영향을 덜 준다고 예측될 수 있다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 염기성 측쇄(예컨대 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예컨대 아스파르트산, 글루탐산), 무전하 극성 측쇄(예컨대 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신), 비극성 측쇄(예컨대 글리신, 시스테인, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판) 및 방향족 측쇄(예컨대 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함하여, 기술분야에서 정의되어 있다. 그러므로 보존적 아미노산 치환은 특정 아미노산 잔기가 동일한 패밀리의 상이한 아미노산에 대해 치환된 치환인 것으로 간주될 수 있다.
그러므로 특정 구현예에서 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 서열 번호: 1, 7 또는 8에 제시된 서열에 관련하여 위치 9에서 보존적 아미노산 치환을 포함하는 서열 번호: 1, 7 또는 8의 변형 버전인 VLCDR1을 포함한다. 또 다른 구현예에서 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 서열 번호: 1, 7 또는 8에 제시된 서열에 관련하여 위치 11에서 보존적 아미노산 치환을 포함하는 서열 번호: 1, 7 또는 8의 변형 버전인 VLCDR1을 포함한다. 또 다른 구현예에서 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 서열 번호: 1, 7 또는 8에 제시된 서열에 관련하여 위치 9 및 11에서 보존적 아미노산 치환을 포함하는 서열 번호: 1, 7 또는 8의 변형 버전인 VLCDR1을 포함한다.
바람직한 측면으로,
a) 서열 번호: 7 또는 1에 제시된 서열에 관련하여 위치 9에서 보존적 아미노산 치환(그 위치의 아미노산이 세린일 때)은 아스파라긴, 글루타민, 트레오닌 또는 티로신이거나;
b) 서열 번호: 8에 제시된 서열에 관련하여 위치 9에서 보존적 아미노산 치환(그 위치의 아미노산이 트레오닌일 때)은 아스파라긴, 글루타민, 세린 또는 티로신이거나;
c) 서열 번호: 7 또는 8에 제시된 서열에 관련하여 위치 11에서 보존적 아미노산 치환(그 위치의 아미노산이 글리신일 때)은 시스테인, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌 또는 트립토판이거나; 또는
d) 서열 번호: 1에 제시된 서열에 관련하여 위치 11에서 보존적 아미노산 치환(그 위치의 아미노산이 알라닌일 때)은 글리신, 시스테인, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌 또는 트립토판이다.
바람직한 구현예에서, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 다음과 같이 아미노산 서열을 가지는 CDR을 포함한다:
VLCDR1은 서열 번호: 1, 7 또는 8에 제시된 서열을 가지며;
VLCDR2는 서열 번호: 2에 제시된 서열을 가지고;
VLCDR3은 서열 번호: 3에 제시된 서열을 가지며;
VHCDR1은 서열 번호: 4에 제시된 서열을 가지고;
VHCDR2는 서열 번호: 5에 제시된 서열을 가지며; 그리고
VHCDR3은 서열 번호: 6에 제시된 서열을 가진다.
가장 바람직하게, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 다음과 같이 아미노산 서열을 가지는 CDR을 포함한다:
VLCDR1은 서열 번호: 1에 제시된 서열을 가지며;
VLCDR2는 서열 번호: 2에 제시된 서열을 가지고;
VLCDR3은 서열 번호: 3에 제시된 서열을 가지며;
VHCDR1은 서열 번호: 4에 제시된 서열을 가지고;
VHCDR2는 서열 번호: 5에 제시된 서열을 가지며; 그리고
VHCDR3은 서열 번호: 6에 제시된 서열을 가진다.
표시된 바와 같이, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 폴리펩타이드 서열로 이루어지는 6개의 CDR을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "단백질" 및 "폴리펩타이드"는 상호 교환 가능하고, 각각 하나 이상의 펩타이드 결합에 의해 연결된 2개 이상의 아미노산의 서열을 지칭한다. 그러므로, 특이적 결합 분자는 폴리펩타이드일 수 있다. 대안적으로, 특이적 결합 분자는 CDR 서열을 포함하는 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 항체 또는 항체 단편이다.
CDR의 서열을 구성하는 아미노산에는 자연적으로 발생하지 않지만, 자연적으로 발생하는 아미노산의 변형인 아미노산이 포함될 수 있다. 이들 비-자연 발생 아미노산의 제공이 서열을 변경하지 않고 특이성에 영향을 주지 않으면, 이들은 서열 동일성이 감소하지 않으면서 본원에서 기술된 CDR을 제조하기 위해 사용될 수 있고, 즉, CDR의 아미노산을 제공하는 것으로 간주된다. 예를 들어, 아미노산의 유도체, 예컨대 메틸화된 아미노산이 사용될 수 있다. 한 구현예에서 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 자연적인 분자가 아니고, 즉 자연에서 발견된 분자가 아니다.
발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 합성될 수 있다. 특히, 특이적 결합 분자는 단백질 발현 시스템, 예컨대 원핵(예컨대 박테리아) 세포 또는 진핵(예컨대 효모, 진균, 곤충 또는 포유류) 세포를 사용하는 세포 발현 시스템을 사용하여 합성될 수 있다. 대안적인 단백질 발현 시스템은 특이적 결합 분자를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 시험관내에서 mRNA로 전사되고, mRNA가 단백질로 번역되는 무세포, 시험관내 발현 시스템이다. 무세포 발현 시스템 키트가 광범위하게 이용 가능하고, 예컨대 ThermoFisher Scientific(USA)으로부터 구매될 수 있다. 대안적으로, 특이적 결합 분자는 비생물학적 시스템에서 화학적으로 합성될 수 있다. 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자를 형성할 수 있거나 그 안에 포함될 수 있는 폴리펩타이드를 제조하기 위해 액상(liquid-phase) 합성 또는 고상(solid-phase) 합성이 사용될 수 있다. 숙련된 사람은 기술분야에서 일반적인 적절한 방법을 사용하여 특이적 결합 분자를 쉽게 제조할 수 있다. 특히, 특이적 결합 분자는 포유류 세포, 예컨대 CHO 세포에서 재조합적으로 발현될 수 있다.
발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는, 필요한 경우, 분리(정제)될 수 있다. 본원에서 사용되는 바, "분리된"은 특이적 결합 분자가 그것이 제공된 임의의 용액 또는 유사한 것의 일차 구성요소(즉, 대부분의 구성요소)라는 것을 의미한다. 특히, 만약 특이적 결합 분자가 혼합물 또는 혼합된 용액에서 초기에 제조된다면, 특이적 결합 분자의 분리는 이것이 그것들로부터 분리 또는 정제되었다는 것을 의미한다. 그러므로, 예를 들어, 만약 특이적 결합 분자가 폴리펩타이드이고, 상기 폴리펩타이드가 위에서 논의된 단백질 발현 시스템을 사용하여 제조된다면, 특이적 결합 분자는 그것이 존재하는 용액 또는 조성물에서, 바람직하게는 용액 또는 조성물에서 대부분의 폴리펩타이드를 구성하는 가장 풍부한 폴리펩타이드가 되도록, 그리고 천연 생산 배지에 존재하는 다른 폴리펩타이드 및 생체 분자에 비하여 풍부하게 되도록 분리된다. 특히, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 그것이 용액 또는 조성물에서 우세한(대부분의) 특이적 결합 분자가 되도록 분리된다. 바람직한 특징으로, 특이적 결합 분자는 용액 또는 조성물에서 다른 구성요소, 특히 다른 폴리펩타이드 구성요소의 존재에 비교하여 평가될 때 적어도 60, 70, 80, 90, 95 또는 99 중량/중량%의 순도로 용액 또는 조성물에 존재한다.
만약 특이적 결합 분자가, 예컨대 단백질 발현 시스템에서 제조된 단백질이라면, 특이적 결합 분자의 용액은 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자가 우세하고 그로써 분리되는지의 여부를 확인하기 위해 정량적 프로테오믹스에 의해 분석될 수 있다. 예를 들어, 2D 겔 전기영동 및/또는 질량 분석법이 사용될 수 있다. 그러한 분리된 분자는 아래에서 기술되는 제제 또는 조성물에 존재할 수 있다
본 발명의 특이적 결합 분자는 기술분야에서 공지된 임의의 기법을 사용하여 분리될 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합 분자는 적절한 결합 파트너를 사용하여 친화성 크로마토그래피에 의해 분자의 분리가 가능하도록 친화성 태그, 예컨대, 폴리히스티딘 태그, 스트렙 태그, FLAG 태그, HA 태그 등과 함께 제조될 수 있고, 예컨대 폴리히스티딘 태그를 보유하는 분자는 Ni2+ 이온을 사용하여 정제될 수 있다. 특이적 결합 분자가 항체인 구현예에서, 특이적 결합 분자는 하나 이상의 항체 결합 단백질, 예컨대 단백질 G, 단백질 A, 단백질 A/G 또는 단백질 L을 사용한 친화성 크로마토그래피를 사용하여 분리될 수 있다. 대안적으로, 특이적 결합 분자는 예컨대 크기 배제 크로마토그래피 또는 이온 교환 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다. 반대로, 화학적 합성에 의해(즉 비생물학적 방법에 의해) 제조된 특이적 결합 분자는 분리된 형태로 제조될 가능성이 있다. 그러므로, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자가 분리된 분자를 생성하는 방식으로 합성된다면, 그것이 분리되는 것으로 간주되기 위해 특이적 정제 또는 분리 단계는 필요하지 않다.
서열 번호: 1-8에 제시된 CDR의 아미노산 서열에 대한 변형은 임의의 적합한 기법, 예컨대, 암호화 DNA 서열의 부위 지정 돌연변이유발 또는 고체 상태 합성을 사용하여 이루어질 수 있다.
발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 위에서 기술된 CDR 외에, CDR의 적절한 제시를 허용하기 위해 링커 모이어티 또는 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 추가 특성을 편리하게 부여할 수 있는 추가 서열, 예컨대 지금까지 기술된 것과 같은 CDR을 함유하는 분자의 분리 또는 확인을 허용하는 펩타이드 서열이 또한 존재할 수 있다. 그러한 경우, 융합 단백질이 생성될 수 있다.
위에서 언급된 바와 같이, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 바람직하게는 항체 또는 항체 단편이다. 본원에서 사용되는 용어 "항체"는 천연 면역글로불린의 모든 특징을 함유하는 항체(기술분야에서 알려진 것과 같으며 예를 들어 본원에 참조로 포함된 WO 2020/030827의 설명을 참고함)뿐만 아니라 CDR을 보유하지만, 이하에서 논의되는 것과 같이 상이한 프레임워크로 제시되고, 동일한 방식으로 기능하는, 즉 항원에 대한 특이성을 보유하는(또는 천연 면역글로불린의 모든 특징을 포함하는) 자연 발생 항체의 변이체를 지칭한다. 그러므로 항체에는 자연 발생 도메인이 동일한 방식으로 기능하는 자연적인 또는 비자연적인 등가물 또는 상동체로 부분적으로 또는 전체적으로 대체된 기능적 등가물 또는 상동체가 포함된다.
발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자가 항체일 때, 그것은 바람직하게는 단클론성 항체이다. "단클론성 항체"란 단일 항체 종으로 이루어지는 항체 제제를 의미하며, 즉 제제 내의 모든 항체는 동일한 CDR을 포함하여 동일한 아미노산 서열을 갖고, 그로써 동일한 효과로 그것의 표적 항원("표적 항원"이란 특정 항체에 의해 결합된 에피토프를 함유하는 항원을 의미하며, 즉 항-ANXA1 항체의 표적 항원은 ANXA1임) 상의 동일한 에피토프에 결합한다. 달리 말하면, 발명에 따라 사용하기 위한 항체는 바람직하게는 항체의 다클론성 혼합물의 일부가 아니다.
기술분야에 잘 알려져 있는 것과 같이, 항체에서 CDR 서열은 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인에 위치한다. CDR 서열은 폴리펩타이드 프레임워크 내에 자리하며, 이것은 CDR을 항원 결합을 위해 적절하게 위치시킨다. 그러므로 가변 도메인의 나머지(즉, CDR 중 임의의 하나의 일부를 형성하지 않는 가변 도메인 서열의 부분)는 프레임워크 영역을 구성한다. 성숙한 가변 도메인의 N 말단은 프레임워크 영역 1(FR1)을 형성하고; CDR1과 CDR2 사이의 폴리펩타이드 서열은 FR2를 형성하며; CDR2와 CDR3 사이의 폴리펩타이드 서열은 FR3을 형성하고; 불변 도메인에 CDR3을 연결시키는 폴리펩타이드 서열은 FR4를 형성한다. 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 그것의 단편에서, 가변 영역 프레임워크 영역은 항체 또는 그것의 단편이 그것의 CDR을 통해 인간 ANXA1에 결합하도록 임의의 적절한 아미노산 서열을 가질 수 있다. 불변 영역은 임의의 포유류(바람직하게는 인간) 항체 아이소타입의 불변 영역일 수 있다.
발명의 특정 구현예에서 특이적 결합 분자는 다중 특이적, 예컨대 이중 특이적 단클론성 항체일 수 있다. 다중 특이적 결합 분자는 적어도 2개의 상이한 분자 결합 파트너에 결합하는, 예컨대 2개 이상의 상이한 항원 또는 에피토프에 결합하는 영역 또는 도메인(항원 결합 영역)을 함유한다. 이중 특이적 항체의 경우에, 항체는 표준 형성에서 2개의 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 단, 2개 중쇄 및 2개 경쇄의 가변 도메인 각각은 상이하고, 그로써 2개의 상이한 항원 결합 영역을 형성한다. 발명에 따라 사용하기 위한 다중 특이적(예컨대, 이중 특이적) 결합 분자, 예컨대 단클론성 항체에서, 항원 결합 영역 중 하나는 본원에서 정의된 바와 같은 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자의 CDR 서열을 갖고, 그로써 ANXA1에 결합한다. 발명에 따라 사용하기 위한 다중 특이적 결합 분자의 다른 항원 결합 영역(들)은 발명에 따라 사용하기 위한 CDR에 의해 형성된 항원 결합 영역과 상이하고, 예컨대 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자에 대해 본원에서 정의된 것과 상이한 서열을 갖는 CDR을 갖는다. 예컨대, 이중 특이적 항체에서, 특이적 결합 분자의 추가의(예컨대 제2) 항원 결합 영역(들)은 또한 ANXA1에 결합할 수 있지만, (발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자의 CDR을 갖는) ANXA1에 결합하는 제1 항원 결합 영역과 상이한 에피토프에서 ANXA1에 결합할 수 있다. 대안적으로, 추가의(예컨대, 제2) 항원 결합 영역(들)은 ANXA1이 아닌 추가의(예컨대 제2), 상이한 항원(들)에 결합할 수 있다. 대안적인 구현예에서, 예컨대, 항체에서 특이적 결합 분자의 2개 이상의 항원 결합 영역은 각각 동일한 항원에 결합할 수 있고, 즉 다가(예컨대 2가) 분자를 제공할 수 있다.
특이적 결합 분자는 인간 ANXA1에 결합할 수 있는 항체 단편 또는 합성 구성물일 수 있다. 그러므로 발명에 따라 사용하기 위한 항체 단편은 항원 결합 도메인(즉, 그것이 유래된 항체의 항원 결합 도메인)을 포함하며, 즉 항체의 항원 결합 단편이다. 항체 단편은 문헌[Rodrigo et al., Antibodies, Vol. 4(3), p. 259-277, 2015]에서 논의된다. 발명에 따라 사용하기 위한 항체 단편은 바람직하게는 단클론성이다(즉, 그것들은 항체 단편의 다클론성 혼합물의 일부가 아니다). 항체 단편에는, 예를 들어, Fab, F(ab')2, Fab' 및 Fv 단편이 포함된다. Fab 단편은 문헌[Roitt et al, Immunology second edition (1989), Churchill Livingstone, London]에서 논의된다. Fab 단편은 항체의 항원 결합 도메인을 구성하며, 즉, 개별 항체는 그 각각이 경쇄와 그것과 연합된 중쇄의 N 말단 섹션으로 이루어지는 2개의 Fab 단편을 함유하는 것으로 볼 수 있다. 그러므로 Fab 단편은 전체 경쇄와 이것이 결합되는 중쇄의 VH 및 CH1 도메인을 함유한다. Fab 단편은 항체를 파파인으로 소화시킴으로써 얻어질 수 있다.
F(ab')2 단편은 항체의 2개의 Fab 단편과, 2개의 중쇄를 함께 연결하는 이황화 결합을 포함한 중쇄 도메인의 힌지 영역으로 이루어진다. 달리 말하면, F(ab')2 단편은 2개의 공유적으로 연결된 Fab 단편으로 인지될 수 있다. F(ab')2 단편은 항체를 펩신으로 소화시킴으로써 얻어질 수 있다. F(ab')2 단편의 환원은 다른 분자에 대한 단편의 콘쥬게이션에 유용할 수 있는 추가의 설프하이드릴 기를 함유하는 Fab 단편으로 여겨질 수 있는 2개의 Fab' 단편을 유발한다.
Fv 단편은 경쇄 및 중쇄의 단지 가변 도메인만으로 이루어진다. 이들은 공유결합되지 않고, 비공유 상호작용에 의해서만 약하게 함께 유지된다. Fv 단편은 단일 사슬 Fv(scFv) 분자로 알려져 있는 합성 구성물을 생성하도록 변형될 수 있다. 그러한 변형은 단일 폴리펩타이드가 VH 및 VL 도메인 둘 다를 포함하는 융합 단백질을 생성하도록 항체 유전자를 조작함으로써 전형적으로 재조합으로 수행된다. scFv 단편에는 일반적으로 분자의 안정성에 기여하는 VH 및 VL 영역을 공유적으로 연결하는 펩타이드 링커가 포함된다. 링커는 1 내지 20개의 아미노산, 예컨대, 예를 들어 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산, 5, 10 또는 15개의 아미노산, 또는 편리하게는 1 내지 20개 범위의 다른 중간 수의 아미노산을 포함할 수 있다. 펩타이드 링커는 임의의 일반적으로 편리한 아미노산 잔기, 예컨대 글리신 및/또는 세린으로부터 형성될 수 있다. 적합한 링커의 한 예는 Gly4Ser이다. 그러한 링커의 다량체, 예컨대, 예를 들어 이량체, 삼량체, 사량체 또는 오량체, 예컨대 (Gly4Ser)2, (Gly4Ser)3, (Gly4Ser)4 또는 (Gly4Ser)5가 사용될 수 있다. 그러나, 링커가 존재하는 것이 필수적인 것은 아니며, VL 도메인은 펩타이드 결합에 의해 VH 도메인에 연결될 수 있다. scFv는 본원에서 항체 단편으로 정의된다.
특이적 결합 분자는 scFv의 유사체일 수 있다. 예를 들어, scFv는 다른 특이적 결합 분자(예를 들어, 다른 scFv, Fab 항체 단편 및 키메릭 IgG 항체(예컨대, 인간 프레임워크를 포함함))에 연결될 수 있다. scFv는 다중 특이적 결합 단백질, 예를 들어, 이량체, 삼량체 또는 사량체인 다량체를 형성하기 위해 다른 scFv에 연결될 수 있다. 이중 특이적 scFv는 때때로 디아바디, 트리아바디와 같은 삼중 특이적 scFv 및 테트라바디와 같은 사중 특이적 scFv로 지칭된다. 다른 구현예에서 발명에 따라 사용하기 위한 scFv는 다른, 동일한 scFv 분자에 결합될 수 있고, 그로써 단일 특이적 다량체를 형성하지만 다가, 예컨대 2가 이량체 또는 3가 삼량체가 형성될 수 있다.
사용될 수 있는 합성 구성물에는 CDR 펩타이드가 포함된다. 이들은 항원 결합 결정인자를 포함하는 합성 펩타이드이다. 펩타이드 모방체가 또한 사용될 수 있다. 이들 분자는 일반적으로 CDR 루프의 구조를 모방하고 항원 상호작용 측쇄를 포함하는 형태적으로 한정된 유기 고리이다.
위에서 주지된 것과 같이, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 서열 번호: 1, 7 또는 8에 제시된 아미노산 서열(또는 이것들의 변이체) 및 2 내지 6에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함한다. 상술한 바와 같이, 이들은 쥐과 항체 MDX-001로부터 유래되거나 변형된다. 그러나, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 그것의 단편은 바람직하게는 인간화된다.
발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 항체 단편은 인간/마우스 키메릭 항체일 수 있거나, 또는 바람직하게는 인간화될 수 있다. 이것은 특히 단클론성 항체 및 항체 단편에 대한 경우이다. 분자가 인간 치료제로서 사용되어야 할 때 인간화된 또는 키메릭 항체 또는 항체 단편이 바람직하다. 비인간(예컨대, 쥐과) 항체로의 인간의 치료적 치료는 많은 이유, 예컨대 항체의 짧은 생체내 반감기; 인간 면역 이펙터 세포 상의 Fc 수용체에 의한 비인간 중쇄 불변 영역의 낮은 인식으로 인한, 외래 중쇄 불변 영역에 의해 매개된 약한 이펙터 기능; 항체에 대한 환자 감작 및 (쥐과 항체의 맥락에서) 인간 항-마우스 항체(HAMA) 반응의 생성; 및 치료적 효능의 손실로 이어지는 HAMA에 의한 마우스 항체의 중화로 인해 비효과적일 수 있다.
키메릭 항체는 하나의 종으로부터 유래된 가변 영역 및 또 다른 것으로부터 유래된 불변 영역을 갖는 항체이다. 그러므로 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 항체 단편은 쥐과의 가변 도메인 및 인간 불변 도메인을 포함하는 키메릭 항체 또는 키메릭 항체 단편일 수 있다.
키메릭 항체를 포함한, 발명에 따라 사용하기 위한 항체는 임의의 항체 아이소타입(특히 임의의 인간 항체 아이소타입), 및 각각의 아이소타입 내의 임의의 하위-부류의 불변 영역을 가질 수 있다. 예를 들어, 항체는 아이소타입 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM 항체의 것일 수 있지만(즉 키메릭 항체는 각각 중쇄 α, δ, ε, γ, 또는 μ의 불변 도메인을 포함할 수 있음), 바람직하게는 발명에 따라 사용하기 위한 항체는 IgG 아이소타입의 것이다. 발명에 따라 사용하기 위한 항체(예컨대 키메릭 항체)의 경쇄는 κ 또는 λ 경쇄 중 어느 하나일 수 있고, 특히 인간 λ 경쇄 또는 인간 κ 경쇄의 불변 영역을 포함할 수 있다. 이에 상응하게, 키메릭 항체 단편은 불변 도메인을 포함하는 항체 단편(예컨대, Fab, Fab' 또는 F(ab')2 단편)이다. 발명에 따라 사용하기 위한 항체 단편의 불변 도메인은 키메릭 단클론성 항체에 대해 위에서 기술된 것과 같을 수 있다.
키메릭 항체는 임의의 적합한 기법, 예컨대 쥐과의 가변 도메인의 DNA 서열이 키메릭 항체를 암호화하도록 인간 불변 도메인(들)의 DNA 서열에 융합되는 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 키메릭 항체 단편은 그러한 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열을 생성하도록 재조합 DNA 기술을 사용하거나, 또는 위에서 기술된 것과 같이 원하는 단편을 생성하도록 발명에 따라 사용하기 위한 키메릭 항체를 가공함으로써 얻어질 수 있다. 키메릭 항체는 외래, 예컨대 쥐과의 항체를 인간 요법에 사용하는 것과 연관된 짧은 생체내 반감기 및 약한 이펙터 기능의 문제를 극복할 것으로 예측될 수 있고, 환자 감작 및 HAMA가 발생하는 확률을 감소시킬 수 있다. 그러나, 환자 감작 및 HAMA는 가변 도메인 내의 쥐과의 서열의 존재로 인해서, 키메릭 항체가 인간 환자에게 투여될 때 여전히 발생할 수 있다.
그러므로 바람직하게 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 항체 단편은 따라서 완전히 인간화된다. 인간화된 항체는 항체 사슬의 불변 도메인이 인간 불변 도메인으로 대체되고 가변 영역의 아미노산 서열이 인간 프레임워크 서열로 외래(예컨대 쥐과) 프레임워크 서열을 대체하기 위해 변형됨으로써 바람직하게는 항체의 비인간 서열은 CDR 서열만인 또 다른 종, 예컨대 마우스로부터 유래된 항체이다. 인간화된 항체는 환자 감작 및 HAMA가 발생할 확률을 피하거나 최소화하는 것을 포함하여, 인간에서 비인간 항체의 치료적 사용과 연관된 모든 문제를 극복할 수 있다.
항체 인간화는 일반적으로 CDR 그래프팅으로 알려져 있는 방법에 의해 수행되지만, 기술분야에서의 임의의 다른 기법이 사용될 수 있다. 항체 그래프팅은 문헌[Williams, D.G. et al., Antibody Engineering Vol. 1, edited by R. Kontermann and S. Dubel, Chapter 21, pp. 319-339]에 잘 기술되어 있다. 이 방법에서, 위에서 기술된 것과 같이 키메릭 항체가 먼저 생성된다. 그로써 항체의 인간화의 맥락에서, 비인간 불변 도메인이 먼저 인간 불변 도메인으로 대체되어, 인간 불변 도메인 및 비인간 가변 도메인을 포함하는 키메릭 항체를 생성한다.
외래, 예컨대 쥐과의 가변 도메인의 후속 인간화는 가장 적절한 인간 가변 영역의 FR 내에 각각의 면역글로불린 사슬로부터의 쥐과 CDR을 삽입하는 것을 포함한다. 이것은 공지된 인간 가변 도메인의 데이터베이스와 쥐과의 가변 도메인을 정렬함으로써 수행된다(예컨대 IMGT 또는 Kabat). 적절한 인간 프레임워크 영역은 최상의 정렬된 가변 도메인, 예컨대 인간과 쥐과 프레임워크 영역 사이의 높은 서열 동일성을 갖는 도메인, 동일한 길이의 CDR을 함유하는 도메인, (상동성 모델링에 기반하여) 가장 유사한 구조를 갖는 도메인, 등으로부터 확인된다. 그런 후 쥐과의 CDR 서열은 재조합 DNA 기술을 사용하여 적절한 위치에서 리드 인간 프레임워크 서열로 그래프팅되고, 그런 후 인간화된 항체가 생성되고 표적 항원에 대한 결합에 대해 테스트되었다. 항체 인간화 방법은 추가의 지시 없이 기법을 수행할 수 있는 숙련된 개인에게 공지되어 있고 이해된다. 항체 인간화 서비스는 또한 수많은 상업적 회사, 예컨대 GenScript(미국/ 중국) 또는 MRC Technology(영국)에 의해 제공된다. 인간화된 항체 단편은 위에서 기술된 것과 같이 인간화된 항체로부터 쉽게 얻어질 수 있다.
그러므로, 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 항체 단편은 임의의 종으로부터 유래될 수 있고, 예컨대 그것은 쥐과의 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 그러나, 항체 또는 항체 단편이 키메릭 항체 또는 항체 단편인 것이 바람직하며, 즉, 항체 또는 항체 단편의 가변 도메인만 비인간이고, 불변 도메인은 모두 인간인 것이 바람직하다. 최적으로, 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 항체 단편은 인간화된 항체 또는 항체 단편이다.
WO 2018/146230에 상세히 설명된 것과 같이, MDX-001의 인간화된 버전이 본 발명자들에 의해 개발되었다. 인간화된 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 9(L1M2 가변 영역으로 알려짐) 및 서열 번호: 10(L2M2 가변 영역으로 알려짐)에 제시된 아미노산 서열로 개발되었으며, 지금까지 기술된 CDR을 함유한다. 특정 구현예에서, 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 그것의 단편은 서열 번호: 9 또는 서열 번호: 10에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%(바람직하게는 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 CDR 서열 VLCDR1-3은 위에서 정의된 것과 같다.
인간화된 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 11(H4 가변 영역으로 알려짐) 및 서열 번호: 12(H2 가변 영역으로 알려짐)에 제시된 아미노산 서열로 개발되었다. 특정 구현예에서, 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 그것의 단편은 서열 번호: 11 또는 서열 번호: 12에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%(바람직하게는 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 CDR 서열은 위에서 정의된 것과 같다.
바람직하게, 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 그것의 단편은:
(i) 서열 번호: 9 또는 서열 번호: 10에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%(바람직하게는 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어지고, CDR 서열 VLCDR1-3은 위에서 정의된 것과 같은 것인 경쇄 가변 영역; 및
(ii) 서열 번호: 11 또는 서열 번호: 12에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%(바람직하게는 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어지고, CDR 서열은 위에서 정의된 것과 같은 것인 중쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 구현예에서, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 IgG1 아이소타입의 단클론성 항체이며 κ 하위유형의 경쇄를 포함한다. L1M2 경쇄는 κ 하위유형의 것이며 서열 번호: 13에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. H4 중쇄는 서열 번호: 14에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 L1M2 경쇄 및 H4 중쇄를 포함하는 L1M2H4 항체이다(이 항체는 또한 MDX-124로도 언급됨). 그러므로 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는:
i) 서열 번호: 13에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%(바람직하게는 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어지며, CDR 서열 VLCDR1-3은 위에서 정의된 것과 같은 경쇄; 및
ii) 서열 번호: 14에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%(바람직하게는 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어지며, CDR 서열 VHCDR1-3은 위에서 정의된 것과 같은 중쇄
를 포함하거나 그것으로 이루어진 단클론성 항체일 수 있다.
유사하게, L2M2 경쇄는 κ 하위유형의 것이며 서열 번호: 15에 제시된 아미노산 서열을 가진다. H2 중쇄는 서열 번호: 16에 제시된 아미노산 서열을 가진다. 특정 구현예에서, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 L2M2 경쇄 및 H2 중쇄를 포함하는 L2M2H2 항체이다(이 항체는 또한 MDX-222로도 언급됨). 그러므로 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는:
i) 서열 번호: 15에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%(바람직하게는 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어지며, CDR 서열 VLCDR1-3은 위에서 정의된 것과 같은 것인 경쇄; 및
ii) 서열 번호: 16에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%(바람직하게는 적어도 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어며, CDR 서열 VHCDR1-3은 위에서 정의된 것과 같은 것인 중쇄
를 포함하는 단클론성 항체일 수 있다.
대안적인 구현예에서, L1M2 경쇄는 H2 중쇄와 쌍을 형성할 수 있고 L2M2 경쇄는 H4 중쇄와 쌍을 형성할 수 있다.
숙련된 사람에게 알려진 것과 같이, 항체 사슬은 신호 서열과 함께 자연적으로 생성된다. 항체 신호 서열은 경쇄 및 중쇄의 N 말단, 가변 영역의 N 말단에 위치한 아미노산 서열이다. 신호 서열은 항체 사슬이 생성되는 세포로부터 빠져나가도록 지시한다. 만약 세포 발현 시스템에서 생성된다면, 서열 번호: 13-16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 중쇄는 신호 서열과 함께 암호화될 수 있다. L1M2 및 L2M2 경쇄의 신호 서열은 서열 번호: 20에 제시되어 있으며; H2 및 H4 중쇄의 신호 서열은 서열 번호: 21에 제시되어 있다. 만약 신호 서열과 함께 합성된다면, 그로써 L1M2 사슬은 서열 번호: 22에 제시된 아미노산 서열로 합성될 수 있고; H4 사슬은 서열 번호: 23에 제시된 아미노산 서열로 합성될 수 있으며; L2M2 사슬은 서열 번호: 24에 제시된 아미노산 서열로 합성될 수 있고 H2 사슬은 서열 번호: 25에 제시된 아미노산 서열로 합성될 수 있다. 그러한 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 숙련된 사람에 의해 쉽게 유래될 수 있지만, 서열 번호: 22-25의 항체 사슬을 암호화하고 이들의 합성에 사용될 수 있는 적합한 뉴클레오타이드 서열의 예는 각각 서열 번호: 26-29에 제시된다.
서열 동일성은 임의의 편리한 방법에 의해 평가될 수 있다. 그러나, 서열 간 서열 동일성의 정도를 결정하기 위해, 서열의 쌍별 또는 다중 정렬을 만드는 컴퓨터 프로그램이 유용하고, 예를 들어 EMBOSS Needle 또는 EMBOSS 스트레처(둘 다 문헌[Rice, P. et al., Trends Genet. 16, (6) pp. 276-277, 2000])가 쌍별 서열 정렬에 대해 사용될 수 있는 반면 Clustal Omega(문헌[Sievers F et al., Mol. Syst. Biol. 7:539, 2011]) 또는 MUSCLE(문헌[Edgar, R.C., Nucleic Acids Res. 32(5):1792-1797, 2004])이 다중 서열 정렬에 대해 사용될 수 있지만, 임의의 다른 적절한 프로그램이 사용될 수 있다. 정렬이 쌍별이든 또는 다중이든 간에, 이것은 국소적으로보다 전반적으로(즉 참조 서열의 전체에 걸쳐) 수행되어야 한다.
서열 정렬 및 % 동일성 계산은 예를 들어 표준 Clustal Omega 파라미터: 매트릭스 Gonnet, 갭 오프닝 페널티 6, 갭 연장 페널티 1을 사용하여 결정될 수 있다. 대안적으로, 표준 EMBOSS Needle 파라미터: 매트릭스 BLOSUM62, 갭 오프닝 페널티 10, 갭 연장 페널티 0.5가 사용될 수 있다. 임의의 다른 적합한 파라미터가 대안적으로 사용될 수 있다.
본 출원의 목적에 대해, 상이한 방법에 의해 얻어진 서열 동일성 값 사이에 논란이 있는 경우, 기본 파라미터를 가진 EMBOSS Needle을 사용하여 전체적인 쌍별 정렬에 의해 얻어진 값이 타당한 것으로 간주될 것이다.
위에서 제시된 것과 같이, 본 발명은 일반적인 암 치료, 및 다양한 특이적 암 치료 모두에서 다양한 제2 활성제와 조합되어 사용하기 위한 특이적 결합 분자(위에서 정의된 것과 같은)를 제공한다. 선택적으로 추가 활성제는 아래에서 기술되는 것과 같이 예컨대 제3 활성제로서 사용될 수 있다. 대안적으로, 치료는 제3 활성제 없이, 특히 특이적 결합 분자 및 제2 활성제만으로 수행될 수 있다. 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및, 존재하는 경우 선택적으로 제3 활성제)는 활성 치료제로서 작용한다. 암종(carcinoma)(선암종(adenocarcinoma), 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma), 기저 세포 암종(basal cell carcinoma), 이행 세포 암종(transitional cell carcinoma), 등), 육종(sarcoma), 백혈병(leukaemia) 및 림프종(lymphoma)을 포함한 임의의 유형의 암이 본 발명에 따라 치료될 수 있다. 치료될 수 있는 암에는 흑색종(melanoma), 폐암(lung cancer), 대장암(colorectal cancer), 식도암(oesophageal cancer), 위암(stomach cancer), 췌장암, 유방암, 피부암(skin cancer), 림프종(특히 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma) 또는 맨틀 세포 골수종(mantle cell myeloma)), 방광암(bladder cancer), 신장암(kidney cancer), 중피종(mesothelioma), 간암(liver cancer) 및 골수종(myeloma)이 포함된다.
발명에 따르면, I기, II기, III기 및 IV기 암을 포함하여 임의의 병기(또는 등급)의 암이 치료될 수 있다. 전이성 및 국지성(즉 비전이성) 암 모두 치료될 수 있다. 바람직한 측면으로, 본 발명에 의해 치료된 암은 약물 내성, 예컨대 다중 약물 내성(MDR)이다. 약물 내성암이란 하나의 화학요법 약물에 내성인 암을 의미한다. 암이 내성인 약물은 제2 또는 제3 활성제일 수 있다. MDR 암은 하나 이상의 화학요법 약물, 특히 화학요법 약물의 하나 이상의 패밀리에 대해 내성이다. MDR 암은 2, 3, 4 또는 5가지 또는 그 이상의 상이한 화학요법 약물, 또는 화학요법 약물 패밀리(또는 부류)에 대해 내성일 수 있다. 용어 "MDR 암"은 기술분야에 잘 알려져 있고 본 맥락에서 기술분야에서의 그 의미에 따라 사용된다. MDR 암은 모든 알려져 있는 화학요법 약물에 대해 내성일 수 있다. 다중 약물 내성은 ABC 수송체 다중 약물 내성 단백질 1(MDR1), 다중 약물 내성 관련 단백질 1(MRP1) 및 유방암 내성 단백질(BCRP) 중 하나 이상의 발현에 의해 매개될 수 있다. 3가지 모두 광범위한 기질 특이성을 가지며 이들을 발현하는 세포로부터 다수의 상이한 부류의 화학요법제를 배출할 수 있다.
발명의 제1 측면으로, 대상체에서 암 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 제2 활성제가 본원에 제공되며, 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 또는 프로테아솜 억제제이다. 말하자면, 발명은 암 치료를 위해 제2 활성제와 조합된 위에서 정의된 특이적 결합 분자를 제공하며, 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 또는 프로테아솜 억제제이다.
핵염기 유사체는 암 요법에 사용하기에 적합한 임의의 핵염기 유사체일 수 있다. 본원에서 언급된 것과 같이 핵염기 유사체는 핵산 분자에서 천연 핵염기를 구성할 수 있는, 예컨대 그것이 유사체인 모 핵염기와 동일한 파트너 염기와 염기쌍을 형성할 수 있는 화합물이다. 핵염기 유사체는 암세포에 세포독성 효과를 가지고/거나, 화학요법에 사용하기에 적합한 시토신, 구아닌, 아데닌, 티민 또는 우라실의 임의의 유사체일 수 있다. 바람직한 구현예에서 핵염기 유사체는 피리미딘 유사체, 바람직하게는 우라실 유사체이다. 5-플루오로우라실은 발명에 따라 사용될 수 있는 핵염기 유사체 화학요법제이다.
티미딜레이트 합성효소 억제제는 효소 티미딜레이트 합성효소를 억제한다.
티미딜레이트 합성효소는 DNA 합성에 사용된 뉴클레오타이드인 데옥시우리딘 모노포스페이트(dUMP)의 데옥시티미딘 모노포스페이트(dTMP)로의 전환을 촉매한다. 그러므로 티미딜레이트 합성효소의 억제는 dTMP 생성 및 DNA 합성을 억제한다. 그러므로 티미딜레이트 합성효소 억제제는 티미딜레이트 합성효소에 의해 dTMP의 생성을 억제하는 임의의 작용제이다. 그러한 억제제는 임의의 작용 모드, 예컨대 경합성 또는 비경합성 작용 모드를 가질 수 있다. 화학요법에 사용하기에 적합한 임의의 티미딜레이트 합성효소 억제제는 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 몇몇 티미딜레이트 합성효소 억제제가 기술분야에 알려져 있고(예를 들어 위에서 언급된 핵염기 유사체 5FU는 티미딜레이트 합성효소 억제제임), 티미딜레이트 합성효소 억제제는 또한 적정된 5-플루오로-dUMP 결합 검정과 같은 티미딜레이트 합성효소 활성을 측정하는 알려진 기법을 사용하여 확인될 수 있다(예컨대 Takezawa et al., British Journal of Cancer 103: 354-361, 2010 참고).
가장 바람직하게, 핵염기 유사체 또는 티미딜레이트 합성효소 억제제는 5-플루오로우라실(5FU)이다. 5FU의 구조는 아래에서 식 I로 제시된다:
식 I(5-플루오로우라실)
발명에 따라 사용될 수 있는 또 다른 예시의 티미딜레이트 합성효소 억제제는 카페시타빈으로, 이것은 체내에서 5FU로 전환되며(즉 5FU 전구 약물임), 따라서 5FU와 동일한 작용 메커니즘을 가진다. 카페시타빈의 구조는 아래에서 식 II로 제시된다:
식 II(카페시타빈)
특이적 결합 분자가 핵염기 유사체 또는 티미딜레이트 합성효소 억제제(예컨대 5FU)와 조합되어 사용될 때 약물은 임의의 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어 조합은 대장암, 식도암, 위암, 췌장암, 유방암 또는 피부암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 조합은 췌장암 또는 대장암을 치료하기 위해 사용된다. 말하자면, 바람직한 구현예에서, 발명은 췌장암 또는 대장암의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 5FU를 제공한다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 발명은 췌장암의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 카페시타빈을 제공한다.
그러므로, 한 바람직한 구현예에서 발명은 췌장암의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 5FU를 제공한다. 또 다른 바람직한 구현예에서 발명은 대장암의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 5FU를 제공한다.
발명의 이 측면에 따라 치료된 췌장암은 임의의 췌장암일 수 있다. 특정 구현예에서 췌장암은 췌장관 선암종(pancreatic ductal adenocarcinoma)이다.
아래의 실시예에서 나타내는 것과 같이, 시험관내에서 췌장암 세포주를 치료하기 위해 사용될 때, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자와 5FU의 조합은 세포주에 미치는 항증식 효과에서 상당한 시너지를 입증하며, 이것은 암 치료에 대한 이들 두 약물 유형을 조합할 때의 예상치 못한 이익을 입증한다.
체크포인트 억제제는 면역 체크포인트 활성을 차단하는 분자이다. 이들 억제제는 암세포를 공격하기 위해 환자의 면역 체계를 활성화함으로써 항암 약물로서의 용도를 발견하였다. 면역 체크포인트는 건강한 세포의 사멸 및 자가면역을 방지함으로써 체크시 면역 체계를 유지한다. 그것은 T 세포 활성화를 방지함으로써 면역 체계에서 "브레이크"로서 작용한다. 체크포인트 단백질은 면역 세포 표면에서 발현되고 표적 세포 또는 항원 제공 세포의 표면에서 체크포인트 리간드에 결합하여 면역 세포 활성의 억제를 초래한다.
PD-1(프로그래밍된 세포 사멸 단백질 1)은 면역 체크포인트의 예이다. PD-1은 T 세포에 의해 발현되고 표적 세포, 림프구 및 항원 제공 세포를 포함한 세포의 표면에서 발현된 PD-L1(프로그래밍된 사멸 리간드 1) 및 PD-L2에 결합한다. PD-L1 또는 PD-L2 결합에 의한 PD-1의 활성화는 T 세포 활성화 및 증식을 억제한다. 그러므로 암세포에 의한 PD-L1 및/또는 PD-L2의 상향 조절은 T 세포에 의한 그것들의 파괴를 방지하기 위한 보호 메커니즘으로서 작용한다. 종양에 근접한 곳에서 건강한 세포에 의한 PD-L1 및/또는 PD-L2의 상향 조절은 면역 반응에 대해 유사한 감쇠 효과를 나타낸다.
본 발명자들은 본원에 정의된 특이적 결합 분자와 PD-1과 PD-L1의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제와의 조합이 암세포 치료에서 예상치 못한 유리한 효과로 이어진다는 것을 발견하였다. PD-1과 PD-L1의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제는 PD-1을 억제하고 그것의 활성화를 차단하기 위하여 그 상호작용을 차단함으로써 암에 대한 면역 반응의 하향 조절을 방지하는 임의의 분자일 수 있다. PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제는 이들 단백질 중 하나에 결합하여 두 단백질 사이에서 상호작용이 일어나는 것을 방지한다. 그러므로 PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제는 PD-1에 결합하거나 PD-L1에 결합할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 체크포인트 억제제는 PD-1 또는 PD-L1에 결합한다. 특히, 그러한 체크포인트 억제제는 PD-1의 PD-L1 결합 부위, 또는 PD-L1의 PD-1 결합 부위에 결합할 수 있다. PD-1과 PD-L1 및 PD-L2 둘 다와의 사이의 상호작용을 차단하기 위하여, PD-1에 결합하여 PD-1과 그것의 리간드 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제를 사용하는 것이 유리할 수 있다.
발명의 특정 구현예에서, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제는 PD-1에 결합하는 항체(바람직하게는 단클론성 항체, 또는 그것의 유도체 또는 단편)이다. 다른 구현예에서, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제는 PD-L1에 결합하는 항체(바람직하게는 단클론성 항체, 또는 그것의 유도체 또는 단편)이다. 많은 그러한 항체가 기술분야에 알려져 있고, 예를 들어 인간 단클론성 항-PD1 lgG4 항체인 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb); 인간화된 lgG4 항-PD-1 항체(Merck)인 펨브롤리주맙; 인간 lgG4 항-PD-1 항체인 세미플리맙(Regeneron/Sanofi); 인간화된 항-PD-L1 항체인 아테졸리주맙(Genentech); 및 인간 항-PD-L1 항체인 두르발루맙(Medimmune/Astrazeneca)은 모두 규제 승인을 받았고 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 다른 많은 그러한 항체, 예컨대 인간화된 항-PD-1 항체인 티슬렐리주맙(BeiGene); 및 전체 인간 항-PD-L1 항체인 아벨루맙(Pfizer/Merck)이 현재 개발/시험 중이며, 또한 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
특이적 결합 분자가 PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제와 조합되어 사용될 때, 약물은 임의의 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 조합은 흑색종, 폐암, 유방암, 림프종(특히 호지킨 림프종), 위암, 방광암, 식도암, 신장암, 중피종, 대장암 또는 간암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 조합은 대안적으로 불일치 복구 결핍 또는 미세부수체 불안정성이 있고/거나, 종양 돌연변이 부담이 높은(TMB-H) 임의의 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
미세부수체(또한 "짧은 직렬 반복"으로도 알려짐)는 반복 단위 서열로 이루어진 게놈(코딩 및 비코딩 영역을 모두 포함함) 전체에 흩어져 있는 DNA 서열이다. 개별 미세부수체는 일반적으로 10 내지 60개의 반복 단위 복사물을 포함하며, 1 내지 6개 염기쌍 범위의 길이이다. 미세부수체의 반복적인 성질로 인해, DNA 중합효소는 게놈의 다른 영역에서보다 이들 영역에서 훨씬 더 잘못을 저지르기 쉽다. 기능적 불일치 복구(MMR) 시스템이 있는 세포에서, MMR 기계는 새롭게 합성된 DNA 가닥을 "교정"하여, 중합효소에 의해 만들어진 오류를 수정한다. MMR 기계에 결함이 있는 암세포는 이들 오류를 수정할 수 없고, 그로써 그것의 미세부수체 내에서 점 돌연변이가 100 내지 1000배 증가한다. 미세부수체에서 돌연변이율의 이런 증가는 미세부수체 불안정성(MSI)으로 알려져 있다(Dudley et al., Clin Cancer Res 22(4): 813-820, 2016). "미세부수체 불안정성이 높은"(MSI-H) 암은 MSI를 입증하는 암이다. "불일치 복구 결핍" 암은 기능적 MMR 기계가 결핍된 암이다.
TMB-H 암은 >10개 돌연변이/메가염기를 갖는 종양으로서 정의된다. TMB-H와 MSI-H 종양 사이에는 실질적이지만 완벽하지 않은 상관관계가 있다. 즉 전부는 아니지만 대부분의 TMB-H 종양이 또한 MSI-H이며, 그 역도 마찬가지이다. 그러므로 발명의 이 구현예에 따라 치료된 암은 MSI-H이지만 TMB-H는 아닐 수 있거나, TMB-H이지만 MSI-H는 아닐 수 있거나, 또는 MSI-H이면서 TMB-H일 수 있다.
바람직하게, 위에서 정의된 특이적 결합 분자는 유방암 또는 폐암을 치료하기 위하여 PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제와 조합되어 사용된다. 말하자면, 바람직한 구현예에서 발명은 유방암의 치료에 사용하기 위해 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제를 제공한다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 발명은 폐암의 치료에 사용하기 위해 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제를 제공한다.
발명의 이 구현예에 따라 치료된 유방암은 임의의 유형의 유방암일 수 있지만, 특정 구현예에서 유방암은 삼중 음성 유방암(즉 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 호르몬 표피 성장 인자 수용체 HER2의 발현이 결핍된 유방암)이다. 대안적으로 발명의 이 구현예에 따라 치료된 유방암은 호르몬 수용체 양성 유방암, 즉 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 HER2 중 하나 이상을 발현하는 유방암일 수 있다.
유사하게, 발명의 이 구현예에 따라 치료된 폐암은 임의의 유형의 폐암일 수 있고, 특히 비소세포 폐암(NSCLC) 또는 소세포 폐암(SCLC)일 수 있다.
아래의 실시예에서 나타낸 것과 같이, 폐암 및 유방암의 마우스 모델을 치료하기 위해 사용될 때, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자와 PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제의 조합은 상당히 향상된 항종양 효과를 입증하였고, 이것은 암 치료를 위해 이들 두 약물 유형을 조합할 때의 예상치 못한 이익을 입증한다.
프로테아솜 억제제는 암 요법에 사용하기에 적합한 임의의 프로테아솜 억제제일 수 있다. 프로테아솜은 손상된(예컨대 잘못 접힌) 또는 불필요한 단백질을 유비퀴틴으로 태그 부착한 후 단백질 가수분해에 의해 분해하는 세포의 단백질 복합체이다. 포유류에서 우세한 프로테아솜은 하나의 20S 단백질 하위단위(코어 입자) 및 2개의 19S 조절 캡 하위단위를 함유한 세포질성 26S 프로테아솜이다. 코어 입자는 α 하위단위(구조적) 및 β 하위단위(촉매성)로 이루어진다. 임상 및 전임상 데이터는 골수종 세포의 불멸 표현형을 유지하는 프로테아솜의 역할을 지지한다. 프로테아솜 억제는 세포자멸 촉진 인자의 분해를 방지하여 신생물 세포에서 프로그래밍된 세포 사멸을 촉발시키는 것에 연루된다.
본원에서 언급된 것과 같이 프로테아솜 억제제는 프로테아솜의 활성을 부분적으로 또는 완전히 억제하며 암세포, 특히 다발성 골수종 암세포에 대해 세포독성 효과를 가진다. 바람직한 억제제는 그것의 촉매 부위에 결합함으로써 26S 프로테아솜을 억제하지만 임의의 작용 모드, 예컨대 경합성 또는 비경합성 모드에 의해 억제를 발휘할 수 있고 억제는 가역적이거나 비가역적일 수 있다. 바람직하게 억제제는 프로테아솜 하위단위 β 유형 5(PSMB5)를 억제한다.
바람직한 프로테아솜 억제제는 펩타이드 유사체이다. 바람직한 억제제는 보르테조밉, 익사조밉 및 카르필조밉이다.
보르테조밉, 익사조밉 및 카르필조밉의 구조는 아래에서 식 III-V로 제시된다:
식 III(보르테조밉)
식 IV(익사조밉)
식 V(카르필조밉)
특이적 결합 분자가 프로테아솜 억제제(예컨대 보르테조밉, 익사조밉 또는 카르필조밉)와 조합되어 사용될 때 약물은 임의의 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 조합은 흑색종, 폐암, 대장암, 식도암, 위암, 췌장암, 유방암, 피부암, 림프종(특히 호지킨 림프종 또는 맨틀 세포 골수종), 방광암, 신장암, 중피종, 간암 및 골수종을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 조합은 골수종(또한 다발성 골수종으로도 언급됨) 또는 외투 세포 림프종을 치료하기 위해 사용된다. 말하자면, 바람직한 구현예에서, 발명은 골수종 또는 외투 세포 림프종의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 보르테조밉, 익사조밉 또는 카르필조밉(특히 골수종을 치료하는데 사용하기 위한 보르테조밉)을 제공한다.
그러므로, 한 바람직한 구현예에서 발명은 골수종 또는 외투 세포 림프종의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 보르테조밉, 익사조밉 또는 카르필조밉을 제공한다.
아래의 실시예에서 나타낸 것과 같이, 시험관내에서 골수종 세포주를 치료하기 위해 사용될 때, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자와 보르테조밉의 조합은 세포주에 대해 상당히 개선된 항증식 효과를 입증하며, 이것은 암 치료를 위해 이들 두 약물 유형을 조합할 때의 예상치 못한 이익을 입증한다. 특히 특이적 결합 분자는 보르테조밉의 효과를 강화하는 것으로 나타났다.
추가의 구현예에서 제3 활성제는 암 치료에 사용될 수 있다. 제3 활성제는 발명의 이 구현예 또는 다른 구현예에 대해 본원에 기술된 제2 활성제로부터 선택될 수 있거나(즉 2개의 제2 활성제가 사용될 수 있음) 또는 대체 치료 분자가 사용될 수 있다. 발명의 일부 측면으로 또한 추가 활성제가 사용될 수 있지만, 발명의 일부 측면에서는 상기 특이적 결합 분자 및 상기 제2 활성제(및 선택적으로 상기 제3 활성제)만이 사용된다.
발명의 제2 측면으로, 대상체에서 유방암의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 제2 활성제가 본원에 제공되며, 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택된다. 말하자면, 발명은 유방암의 치료를 위해 제2 활성제와 조합된 위에서 정의된 특이적 결합 분자를 제공하며, 제2 활성제는 탁산 또는 백금 기반 화학요법제이다.
발명의 이 구현예에 따라 치료된 유방암은 임의의 유방암일 수 있다. 한 구현예에서 유방암은 삼중 음성 유방암이다. 또 다른 구현예에서 유방암은 호르몬 수용체 양성 유방암이다.
위에서 설명된 것과 같이, 발명의 이 측면에서 특이적 결합 분자는 탁산과 조합되어 사용될 수 있다. 기능적으로 탁산은 미세소관에 결합하고 안정화시켜서 세포 주기 정지 및 세포자멸사를 유발함으로써 세포 성장에 영향을 미친다. 탁산은 다이테르펜류 부류에 속하며 탁사다이엔 코어를 함유한다. 암세포에 대해 세포독성 효과를 가지고/거나, 화학요법에 사용하기에 적합한 임의의 탁산, 예를 들어 파클리탁셀, 도세탁셀 또는 카바지탁셀이 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서 탁산은 파클리탁셀이다. 파클리탁셀의 구조는 아래에서 식 VI으로 표시된다:
식 VI(파클리탁셀)
파클리탁셀은 다양한 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들어, 그것은 예컨대 알부민에 결합된 파클리탁셀 단백질 결합 제형의 형태로, 예컨대 nab-파클리탁셀(파클리탁셀의 알부민 결합 나노입자 제형)로 제공될 수 있다. 파클리탁셀의 그러한 대체 제형은 파클리탁셀을 참조함으로써 포함되는 것으로 간주된다. 유사한 고려 사항이 본원에서 기술된 다른 활성에 적용된다.
위에서 설명된 것과 같이, 발명의 이 측면으로 특이적 결합 분자는 대안적으로 백금 기반 화학요법제(즉 특히 백금의 배위 복합체로서 백금 이온 또는 원자를 함유하는 화학요법제)와 조합되어 사용될 수 있다. 백금 기반 화학요법제는 백금 기반 항신생물제, 또는 플라틴으로서 언급될 수 있다. 모든 백금 기반 화학요법제는 구아닌 잔기에서 N-7 위치와 반응하여 가닥간 및 가닥내 DNA 가교 및 DNA-단백질 가교를 형성함으로써 본질적으로 동일한 방식으로 작동한다. 가교는 DNA 합성을 억제하고/거나 복구시키고, 세포자멸사의 개시를 유발한다(Shen et al., Pharmacol. Rev. 64: 706-721,2012). 임의의 백금 기반 화학요법제, 예를 들어 시스플라틴, 옥살리플라틴, 네다플라틴 또는 카보플라틴이 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서 백금 기반 화학요법제는 시스플라틴이다. 시스플라틴의 구조는 아래의 식 VII로 표시된다:
식 VII(시스플라틴)
그러므로 바람직한 구현예에서, 발명의 제2 측면은 대상체에서 유방암의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 제2 활성제를 제공하며, 제2 활성제는 파클리탁셀 및 시스플라틴으로부터 선택된다(말하자면, 제2 활성제는 파클리탁셀 또는 시스플라틴이다). 특정 구현예에서, 발명은 대상체에서 유방암의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 파클리탁셀을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 발명은 대상체에서 유방암의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 시스플라틴을 제공한다.
아래의 실시예에서 나타낸 것과 같이, 시험관내에서 유방암 세포주(구체적으로 삼중 음성 유방암 세포주)를 치료하기 위해 사용될 때, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자와 시스플라틴(또는 파클리탁셀)의 조합은 세포주에 대한 항증식 효과에서 시너지를 입증하며, 이것은 유방암 치료를 위해 이들 두 약물 유형을 조합할 때의 예상치 못한 효과를 입증한다.
추가의 구현예에서 제3 활성제는 유방암 치료에 사용될 수 있다. 제3 활성제는 발명의 이 구현예 또는 다른 구현예에 대해 본원에 기술된 제2 활성제로부터 선택될 수 있거나(즉 2개의 제2 활성제가 사용될 수 있음) 또는 대체 치료 분자가 사용될 수 있다. 발명의 일부 측면으로 또한 추가 활성제가 사용될 수 있지만, 발명의 일부 측면에서는 상기 특이적 결합 분자 및 상기 제2 활성제(및 선택적으로 상기 제3 활성제)만이 사용된다.
발명의 제3 측면으로, 대상체에서 췌장암의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 제2 활성제가 본원에 제공되며, 제2 활성제는 뉴클레오사이드 유사체이다. 말하자면, 발명은 췌장암의 치료를 위해 제2 활성제와 조합된 위에서 정의된 특이적 결합 분자를 제공하며, 제2 활성제는 뉴클레오사이드 유사체이다.
숙련된 사람에게 알려져 있는 것과 같이, 뉴클레오사이드는 5탄당(리보스 또는 2'-데옥시리보스)에 콘쥬게이션된 핵염기로 이루어진다. 이것은 뉴클레오타이드가 당 모이어티에 콘쥬게이션된 적어도 하나의 포스페이트 기를 추가적으로 포함한다는 점에서 뉴클레오타이드와 상이하다.
뉴클레오사이드 유사체는 임의의 뉴클레오사이드의 유사체, 즉 아데노신, 데옥시아데노신, 구아노신, 데옥시구아노신, 티미딘, 우리딘, 시티딘 또는 데옥시시티딘의 유사체일 수 있다. 본원에서 언급된 것과 같이 뉴클레오사이드 유사체는 핵산 분자에서 천연 뉴클레오사이드에 대해 치환될 수 있는, 예컨대 그것에 대해 유사체인 모 뉴클레오사이드와 동일한 파트너 염기와 염기쌍을 형성할 수 있는 화합물이다. 발명에 따라 사용하기 위한 뉴클레오사이드 유사체는, 그것이 기반으로 하는 천연 뉴클레오사이드와 관계 없이, 세포독성 및/또는 화학요법 효과를 가진다, 즉 암 요법에 사용하기에 적합한다. 말하자면 그것은 화학요법 뉴클레오사이드 유사체이다. 바람직한 구현예에서 뉴클레오사이드 유사체는 시티딘 및/또는 데옥시시티딘의 유사체이다. 가장 바람직하게 뉴클레오사이드 유사체는 겜시타빈이다. 겜시타빈의 구조는 아래의 식 VIII로 표시된다:
식 VIII(겜시타빈)
아래의 실시예에서 나타낸 것과 같이, 시험관내에서 췌장암 세포주를 치료하기 위해 사용될 때, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자와 겜시타빈의 조합은 세포주에 대해 상당히 향상된 항증식 효과를 입증하며, 이것은 췌장암 치료를 위해 이들 두 약물 유형을 조합할 때의 예상치 못한 효과를 입증한다.
추가의 구현예에서 제3 활성제는 췌장암 치료에 사용될 수 있다. 제3 활성제는 발명의 이 구현예 또는 다른 구현예에 대해 본원에 기술된 제2 활성제로부터 선택될 수 있거나(즉 2개의 제2 활성제가 사용될 수 있음) 또는 대체 치료 분자가 사용될 수 있다. 발명의 일부 측면으로 또한 추가 활성제가 사용될 수 있지만, 발명의 일부 측면에서는 상기 특이적 결합 분자 및 상기 제2 활성제(및 선택적으로 상기 제3 활성제)만이 사용된다.
바람직한 측면으로 제3 활성제는 탁산, 바람직하게는 파클리탁셀이다.
아래의 실시예에서 나타낸 것과 같이, 마우스 모델에서 췌장암을 치료하기 위해 사용될 때, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자, 겜시타빈 및 파클리탁셀의 조합은 종양에 대한 상당히 향상된 항증식 효과를 입증하였고, 이것은 췌장암 치료를 위해 이들 두 약물 유형을 조합할 때의 예상치 못한 효과를 입증한다. 그러므로 바람직한 측면으로 췌장암은 겜시타빈 및 파클리탁셀을 사용하여 치료될 것이다.
암 치료를 위해 바람직한 조합은 실시예에서 설명된다.
위에서 설명된 발명의 모든 측면으로, 발명에 따라 치료된 암은 ANXA1을 발현할 수 있다(이것은 암의 세포가 ANXA1을 예컨대 세포 표면에서 발현하는 것을 의미한다). 숙련된 사람이 암이 ANXA1을 발현하는지의 여부를 결정하는 것은 간단하다. ANXA1 발현은 암의 생검 샘플에서, 예컨대 샘플의 면역조직화학 분석에 의해 단백질 수준에서 분석될 수 있다. 샘플은 기술분야의 표준 과정에 따라 ANXA1 발현을 검출하기 위해 항-ANXA1 항체(예컨대 위에서 기술된 항체)를 사용하여 면역염색될 수 있다. (예컨대, 기술분야에서의 표준과 같이 계면활성제를 사용하여) 샘플을 투과시킴으로써 세포내 및 세포외 ANXA1 모두 검출될 수 있다.
대안적으로, ANXA1 발현은, 예컨대 정량적 PCR(qPCR)에 의해 핵산 수준에서 분석될 수 있다. mRNA는 조직 샘플로부터 추출되고 기술분야의 표준 과정을 사용하여 DNA로 역전사될 수 있다. 그런 후에 ANXA1 발현 수준은 표적 ANXA1 서열의 정량적 증폭에 의해 결정될 수 있다. 적합한 qPCR 기법, 예컨대, TaqMan은 기술분야에 잘 알려져 있다.
특정 구현예에서, 암은 ANXA1을 과발현한다. "ANXA1을 과발현한다"는 것은 암이 동일한 공급원으로부터의 건강한 조직보다 더 높은 수준으로 ANXA1을 발현하는 것을 의미한다. 말하자면, 암성 세포는 동일한 공급원으로부터의 건강한(즉, 비암성) 세포보다 더 높은 수준으로 ANXA1을 발현한다. 동일한 공급원은 동일한 조직을 의미한다. 예를 들어, 췌장 관 선암종은 건강한 췌장 관 조직보다 더 높은 수준으로 ANXA1을 발현한다면 ANXA1을 과발현하는 것으로 간주될 수 있다. 그러므로 암 조직이 ANXA1을 과발현하는지의 여부는 적어도 2개의 상이한 조직(암 조직 및 건강한 대조군 조직)에서 ANXA1 발현을 정량적으로 비교하는 것을 필요로 한다. 이런 비교를 수행하기 위해 임의의 적절한 기법이 이용될 수 있지만, qPCR이 가장 적합할 수 있다. 숙련된 사람이 암이 ANXA1을 과발현하는지의 여부를 결정하는 것은 간단할 것이다. 특정 구현예에서, ANXA1을 과발현하는 암에서 ANXA1 발현 수준과 건강한 조직 사이의 차이는 통계학적으로 유의미하다. 다른 구현예에서, ANXA1 발현은 상응하는 건강한 조직에 비해 암성 조직에서 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100% 이상 증가된다.
본 발명에 따라 치료되고 ANA1을 발현하는 암은 그 표면에서 ANXA1을 발현할 수 있다(말하자면, ANXA1은 암 세포의 표면에서 발현될 수 있다). 암세포의 표면 상에서 ANXA1의 발현은 세포가 ANXA1을 발현하고, 발현된 ANXA1이 배출되어 세포 표면에 위치하는 것을 의미한다. ANXA1의 세포 표면 발현은 위에서 기술된 것과 같이 면역조직화학에 의해 확인될 수 있다. 특히, ANXA1의 세포 표면 발현을 분석하기 위해, 면역조직화학 분석이 세포 투과화 없이 수행된다. 이것은 조직에서 ANXA1을 검출하는 데 사용된 항체가 세포 내부로 진입할 수 없고 세포외(예컨대 표면에 위치한) 단백질만이 검출될 수 있는 것을 의미한다. 배출된 ANXA1은 일반적으로 (혈장 또는 임의의 다른 세포외 공간으로 방출되기보다는) 세포 표면에 부착되며, 그로써 비투과성 세포의 면역조직화학에 의해 검출된 임의의 ANXA1은 표면에 위치한 ANXA1이라고 간주될 수 있다. 그럼에도 불구하고, 조직은 단백질을 포함한 느슨한 세포외 물질을 제거하기 위해 염색 전에 세척될 수 있다.
특이적 결합 분자, 제2 및 제3 활성제(사용될 때) 중 하나 이상(바람직하게는 전부)은 유리 형태로 있을 수 있다(즉 담체와 같은 또 다른 분자에 결합되거나 그것과 회합되지 않음). 그러므로, 바람직한 측면으로 특이적 결합 분자, 제2 및 제3 활성제 중 하나 이상(바람직하게는 전부)에 대해 담체가 사용되지 않는다.
대안적으로, 특이적 결합 분자, 제2 및 제3 활성제(사용될 때) 중 하나 이상은 담체에 결합되거나, 또는 담체와 회합될 수 있다. 담체는 입자, 소포, 또는 다른 고체 지지체(예컨대 스캐폴드)일 수 있다. 바람직한 측면으로, 담체는 사용될 때 고체 지지체가 아니며, 즉 특이적 결합 분자 및/또는 제2 활성제(및/또는 존재할 때 제3 활성제)는 담체와 회합되지만, 담체에 결합되지는 않는다. 이런 측면에서, 담체는, 예를 들어, 특이적 결합 분자, 제2 및 제3 활성제 중 하나 이상을 이들 분자에 결합하지 않으면서 포장하기 위해 사용될 수 있다. 한 구현예에서 예를 들면, 담체는 특이적 결합 분자, 제2 및 제3 활성제 중 하나 이상을 캡슐화할 수 있고, 예컨대 담체는 자유롭게 움직이는 지질 소포, 예컨대 리포솜일 수 있다.
또 다른 대안으로, 특이적 결합 분자, 제2 및/또는 제3 활성제에 결합하지 않거나, 또는 그것들과 회합하는 담체가 사용될 때, 사용되는 담체는 단백질성이다.
담체가 사용되는 경우 그것은 특이적 결합 분자, 제2 및/또는 제3 활성제 중 하나 이상에 결합될 수 있다. 그러나, 사용될 때 담체는 바람직하게는 특이적 결합 분자, 제2 및/또는 제3 활성제 중 하나에만 결합한다. 그 경우에 상이한 분자/작용제에 대해 상이한 담체가 사용될 수 있고/거나 분자/작용제 중 하나 이상이 유리 형태로 있을 수 있다.
본원에서 기술되는 것과 같이, 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 존재할 때 제3 활성제)는 별도로(예컨대 별도의 조성물로), 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 후자의 경우에, 상이한 분자/작용제가 조합되어(즉 하나의 조성물로) 제공될 수 있다. 모든 경우에, 그리고 위에서 논의된 것과 같이, 분자/작용제는 담체가 있거나 없이 투여를 위해 제공될 수 있다. 담체(들)가 사용되는 경우에, 바람직하게는 특이적 결합 분자, 제2 및/또는 제3 활성제 중 하나만이 각 담체 상에 존재하며, 즉 동일한 조성물로 제공될 때, 다른 분자/작용제는 유리 형태로 있거나, 또는 별도의 담체가 상이한 분자/작용제에 대해 사용될 수 있다. 그러므로, 예를 들면 특이적 결합 분자는 제1 담체와 함께 제공될 수 있고, 별도로 제2 활성제가 제2 담체와 함께 제공될 수 있으며 제3 활성제(존재하는 경우)가 유리 형태로 제공될 수 있다. 그러나, 바람직한 측면으로 모든 작용제가 유리 형태로 제공된다.
특이적 결합 분자, 제2 활성제, 및 선택적으로 존재할 때 제3(또는 추가) 활성제는 제약학적 조성물의 형태로 치료될 대상체에게 각각 투여될 수 있다. 그러한 조성물은 하나 이상의 제약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 함유할 수 있다. 본원에서 사용된 "제약학적으로 허용 가능한"은 조성물의 다른 성분과 양립 가능할 뿐만 아니라 수령체에게 생리학적으로 허용 가능한 성분을 지칭한다. 조성물의 성질 및 담체 또는 부형제 물질, 투여량 등은 투여의 선택 및 원하는 경로, 등에 따라 일상적인 방식으로 선택될 수 있다. 투여량은 마찬가지로 일상적인 방식으로 결정될 수 있고 분자의 성질, 환자의 연령, 투여의 모드 등에 따라 달라질 수 있다. 아래에서 추가로 논의되는 것과 같이, 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)는 동일한 제약학적 조성물 또는 별도의 제약학적 조성물로 대상체에게 투여될 수 있다.
제약학적 조성물은 임의의 적합한 수단에 의해 대상체에게 투여하기 위해 제조될 수 있다. 그러한 투여는 예컨대 경구, 직장, 비강, 국소, 질 또는 비경구일 수 있다. 본원에서 사용되는 경구 투여에는 협측 및 설하 투여가 포함된다. 본원에서 사용되는 국소 투여에는 경피 투여가 포함된다. 본원에서 정의된 비경구 투여에는 피하, 근육내, 정맥내, 복강내 및 피내 투여가 포함된다.
본원에서 개시된 제약학적 조성물에는 액체 용액 또는 시럽, 분말, 과립, 정제 또는 캡슐, 크림, 연고와 같은 고체 조성물 및 기술분야에서 일반적으로 사용되는 임의의 다른 스타일의 조성물이 포함된다. 그러한 조성물에 사용하기에 적합한 제약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 및 부형제는 기술분야에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 적합한 부형제에는 락토스, 옥수수 전분 또는 그것의 유도체, 스테아르산 또는 그것의 염, 식물성 오일, 왁스, 지방 및 폴리올이 포함된다. 적합한 담체 또는 희석제에는 카르복시메틸셀룰로스(CMC), 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 덱스트로스, 트레할로스, 리포솜, 폴리비닐 알코올, 제약 등급 전분, 만니톨, 락토스, 스테아르산 마그네슘, 나트륨 사카린, 활석, 셀룰로스, 글루코스, 수크로스(및 다른 당), 탄산 마그네슘, 젤라틴, 오일, 알코올, 계면활성제 및 폴리소르베이트와 같은 유화제가 포함된다. 안정화제, 습윤제, 유화제, 감미료 등이 또한 사용될 수 있다.
액체 제약학적 조성물에는 그것이 용액, 현탁액 또는 기타 유사 형태이든, 다음 중 하나 이상이 포함될 수 있다: 주사용 물, 링거 용액, 등장성 염화 나트륨과 같은 멸균 희석제, 용매 또는 현탁 매질로서 작용할 수 있는 합성 모노-또는 다이글리세리드와 같은 고정 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 용매; 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤과 같은 항박테리아제; 아스코르브산 또는 중아황산나트륨과 같은 항산화제; EDTA와 같은 킬레이트화제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충제 및 덱스트로와 같은 긴장성 조절제. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 만들어진 앰플, 일회용 주사기 또는 다중 용량 바이알에 동봉될 수 있다. 주사용 제약학적 조성물은 바람직하게는 멸균된다.
발명에 따라 사용하기 위한 제약학적 조성물은 임의의 적절한 방식으로 투여될 수 있다. 투여의 양 및 빈도는 환자의 병태, 및 환자 질환의 유형 및 중증도와 같은 요인에 따라 결정되지만, 적절한 투여량은 임상 시험에 의해 결정될 수 있다. 편리하게 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자 및/또는 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)는 매일, 주 단위 또는 월 단위 용량, 또는 중간 빈도의 용량으로 대상체에게 제공될 수 있고, 예컨대 용량은 2, 3, 4, 5 또는 6일마다, 2, 3, 4, 5 또는 6주마다, 2, 3, 4, 5 또는 6개월마다, 매년 또는 2년마다 제공될 수 있다. 용량은 총 적어도 2주 동안, 바람직하게는 적어도 2개월, 예컨대 3 내지 24개월의 기간 동안 제공될 수 있다. 용량은 100 ng/kg 내지 5 g/kg, 예컨대 10 μg/kg 내지 1 g/kg 체중, 예를 들어 1 mg/kg 내지 100 mg/kg의 양으로 제공될 수 있다. 용량은 1회로 또는 연속적인 시간 동안 특이적 결합 분자 또는 제2 활성제(또는 제3 활성제)의 적용으로 간주되며, 예컨대 단일 볼루스로 첨가되거나 개별 기간에 걸쳐 연속적으로 투여된다.
이미 허가를 받은 제2(또는 제3) 활성제가 사용될 때, 작용제는 편리하게 허가받은 용량으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 5FU는 1일차에 400 mg/m2 정맥내 볼루스로서 투여된 후 2주마다 46시간에 걸쳐 연속 주입으로서 2400-3000 mg/m2가 정맥내로 투여될 수 있다. 70 kg의 인간 성인의 경우 이것은 약 11 mg/kg(볼루스의 경우) 내지 각 주입당 68-85 mg/kg(단일 용량으로 간주됨)에 해당한다. 펨브롤리주맙은 3주마다 200 mg 정맥내 주입 또는 6주마다 400 mg 정맥내 주입(성인 인간에서 약 6-11 mg/kg에 해당함)으로서 투여될 수 있다. 보르테조밉은 인간 성인의 경우 적어도 2주 동안 주 2회 1-5 mg의 용량으로 정맥내로 또는 피하로 투여된 후, 후속해서 주기적으로 매주 투여될 수 있다. 익사조밉은 인간 성인의 경우 1-5 mg의 용량으로 4주 사이클로 매주 1회 경구로 투여될 수 있다. 카르필조밉은 인간 성인의 경우 10-100 mg의 용량으로 제1 사이클에서 3주 동안 매주 2회 정맥내로 투여될 수 있다. 기존의 다른 요법의 허가받은 용량은 기술분야에 잘 알려져 있다. 대안적으로, 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)와 ANXA1에 대한 특이적 결합 분자의 조합은 현재 사용이 허가된 것보다, 특히 시너지가 두 구성요소 사이에서 관찰될 때, 더 낮은 용량의 제2 활성제(및/또는 및 선택적으로 제3 활성제)의 사용을 가능하게 할 수 있다. 예를 들어, 제2 활성제(및/또는 및 선택적으로 제3 활성제)는 기존의 허가받은 용량보다 최대 10, 20, 30, 40 또는 50% 또는 그 이상으로 더 낮은 용량일 수 있다. 숙련된 임상의는 모든 관련 요인, 예컨대 연령, 신장, 체중 및 치료될 병태를 기반으로 환자에 대한 적절한 용량을 계산할 수 있을 것이다.
특이적 결합 분자 및 제2 활성 성분은 위에서 기술된 양으로, 예컨대 종래에 사용된 것과 같이 또는 감소된 양으로 제공될 수 있다. 편리하게 특이적 결합 분자 및 제2 활성 성분은 2000:1 내지 1:2000의 몰비율로 사용된다.
바람직하게, 발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(또는 그것을 함유하는 제약학적 조성물(들))(및 선택적으로 제3 활성제)는 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량으로 투여된다. "치료적 유효량"은 대상체의 병태에 대한 이익을 나타내기에 충분한 양을 의미한다. 양이 대상체의 병태에 대해 이익을 나타내기에 충분한지의 여부는 의사/수의사에 의해 결정될 수 있다.
위에서 정의된 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)는 대상체에게 별도로, 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 본원에서 사용되는 것과 같이, "별도" 투여는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)가 대상체에게 동시에, 또는 적어도 실질적으로 동시에, 그러나 상이한 투여 경로에 의해 투여되는 것을 의미한다. 본원에서 사용되는 것과 같이, "동시" 투여는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)가 대상체에게 동시에, 또는 적어도 실질적으로 동시에 동일한 투여 경로에 의해 투여되는 것을 의미한다. 본원에서 사용되는 것과 같이, "순차적" 투여는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)가 대상체에게 상이한 시간에 투여되는 것을 의미한다. 특히, 특이적 결합 분자의 투여는 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)의 투여가 시작되기 전에 완료된다(또는 그 반대). 두 약물이 10분 내지 30일 간격인, 예컨대 1시간 내지 96시간(또는 2주) 간격인 순차적 투여가 수행될 수 있다. 대상체에게 순차적으로 투여될 때, 두 약물은 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다.
발명에 따라 사용하기 위한 특이적 결합 분자는 또한 방사선 요법 및/또는 수술과 조합되어 대상체에게 투여될 수 있다.
위에서 상세하게 설명된 것과 같이, 본 발명은 대상체에서 암 치료에 관한 것이다. 치료는 치유적일 수 있지만(또는 치유적이도록 의도될 수 있지만), 대안적으로 완화적일 수 있다(즉, 단순히 암의 증상을 제한, 완화 또는 개선하거나, 생존을 연장하도록 설계됨). 바람직하게 종양의 크기는 치료에 의해 감소되거나 또는 그것의 성장 속도가 안정화되거나 감소된다. 종양 크기의 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 20, 30 또는 50%(예컨대, 최대 30, 50, 75 또는 100%)의 감소가 바람직하고 동일한 수준의 성장 감소가 바람직하다.
발명에 의해 치료되는 대상체는 임의의 포유류, 예컨대 소, 말, 양, 돼지 또는 염소와 같은 농장 동물, 토끼, 고양이 또는 개와 같은 애완 동물, 또는 원숭이, 침팬지, 고릴라 또는 인간과 같은 영장류일 수 있다. 가장 바람직하게는 대상체는 인간이다. 대상체는 암을 앓고 있거나, 또는 암을 앓고 있는 것으로 의심되는 임의의 동물(바람직하게는 인간)일 수 있다. 그러므로 대상체는 암, 또는 위에서 상세하게 설명된 발명의 다양한 측면에서 제시된 특정 암에 대한 치료를 필요로 하는 개체이다.
위에서 상세하게 설명된 것과 같이, 발명의 제1 측면은 대상체에서 암의 치료에 사용하기 위한 위에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)를 제공하며, 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택된다. 발명의 이런 측면은 대상체에게 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)를 투여하는 단계를 포함하며, 특이적 결합 분자는 위에서 정의된 것과 같고 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택되는 것인, 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서 볼 수 있다. 그러므로 그러한 방법은 제4 측면을 형성한다. 발명의 이런 제4 측면의 모든 특징은 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같을 수 있다.
유사하게, 위에서 설명된 것과 같이 발명의 제2 측면은 대상체에서 유방암의 치료에 사용하기 위한 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)를 제공하며, 특이적 결합 분자는 위에서 정의된 것과 같고, 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택된다. 발명의 이런 측면은 대안적으로, 대상체에게 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)를 투여하는 단계를 포함하며, 특이적 결합 분자는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같고 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택되는 것인, 대상체에서 유방암을 치료하는 방법을 제공하는 것으로 볼 수 있다. 그러므로 그러한 방법은 제5 측면을 형성한다. 발명의 이런 제5 측면의 모든 특징은 제2 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같을 수 있다.
유사하게, 위에서 설명된 것과 같이 발명의 제3 측면은 대상체에서 췌장암의 치료에 사용하기 위한 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)를 제공하며, 특이적 결합 분자는 위에서 정의된 것과 같고, 제2 활성제는 뉴클레오사이드 유사체이다. 발명의 이런 측면은 대안적으로, 대상체에게 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 뉴클레오사이드 유사체(및 선택적으로 제3 활성제)를 투여하는 단계를 포함하며, 특이적 결합 분자는 위에서 정의된 것과 같은 것인, 대상체에서 췌장암을 치료하는 방법을 제공하는 것으로 볼 수 있다. 그러므로 그러한 방법은 제6 측면을 형성한다. 발명의 이런 제6 측면의 모든 특징은 제3 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같을 수 있다.
발명의 제1 측면은 대안적으로 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자의 용도를 제공하는 것으로 볼 수 있으며, 특이적 결합 분자는 위에서 정의된 것과 같고, 상기 암의 치료는 대상체에게 상기 의약 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)를 투여하는 단계를 포함하며, 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택된다. 그러므로 그러한 용도는 발명의 제7 측면을 형성한다. 발명의 이런 제7 측면의 모든 특징은 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같을 수 있다. 이 측면에 대한 대안으로 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)는 의약을 제조하기 위해 사용될 수 있고 치료는 의약 및 위에서 정의된 특이적 결합 분자의 투여를 포함한다.
발명의 제2 측면은 대안적으로 유방암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자의 용도를 제공하는 것으로 볼 수 있으며, 특이적 결합 분자는 위에서 정의된 것과 같고, 상기 유방암의 치료는 대상체에게 상기 의약 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)를 투여하는 단계를 포함하며, 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택된다. 그러므로 그러한 용도는 발명의 제8 측면을 형성한다. 발명의 이런 제8 측면의 모든 특징은 제2 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같을 수 있다. 이 측면에 대한 대안으로 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)는 의약을 제조하기 위해 사용될 수 있고 치료는 의약 및 위에서 정의된 특이적 결합 분자의 투여를 포함한다.
발명의 제3 측면은 대안적으로 췌장암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자의 용도를 제공하는 것으로 볼 수 있으며, 특이적 결합 분자는 위에서 정의된 것과 같고, 상기 췌장암의 치료는 대상체에게 상기 의약 및 뉴클레오사이드 유사체(및 선택적으로 제3 활성제)를 투여하는 단계를 포함한다. 그러므로 그러한 용도는 발명의 제9 측면을 형성한다. 발명의 이런 제9 측면의 모든 특징은 제3 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같을 수 있다. 이 측면에 대한 대안으로 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)는 의약을 제조하기 위해 사용될 수 있고 치료는 의약 및 위에서 정의된 특이적 결합 분자의 투여를 포함한다.
발명의 제7, 제8 및 제9 측면에서, 위의 교시에 따라, 제조된 의약은 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제) 모두를 포함하거나, 또는 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자만 또는 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)만을 포함할 수 있고, 그 경우에 두(또는 3개) 약물은 대상체에게 별도의 의약의 맥락에서 투여된다.
제10 측면으로 발명은 위에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자, 발명의 제1 측면에서 정의된 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제) 및 하나 이상의 제약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 제약학적 조성물 및 제약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제는 위에서 기술되며, 이들 모든 교시는 발명의 제약학적 조성물에 적용 가능하다. 발명의 제약학적 조성물은 암, 특히 발명의 제1 측면과 관련하여 위에서 기술된 암의 치료에 사용될 수 있다.
제11 측면으로 발명은 위에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자, 및 발명의 제1 측면과 관련하여 정의된 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)를 포함하는 키트를 제공한다. 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)는 별도의 구성요소로서, 예컨대 별도의 조성물로 제공될 수 있고, 단일 용기에 함께 또는 별도의 용기에 제공될 수 있다. 대안적으로, 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)는 단일 용기에 단일 조성물로 제공될 수 있다. 각각의 치료제는 임의의 적절한 형태로, 예컨대 수성 용액으로 또는 동결건조물로서 제공될 수 있다.
제12 측면으로 발명은 대상체에서의 암의 치료에서 별도의, 동시의 또는 순차적인 사용을 위해 위에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)를 포함하는 생성물을 제공하며, 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택된다. 제12 측면의 생성물의 특징 및 그것의 용도는 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같을 수 있다.
제13 측면으로 발명은 대상체에서의 유방암의 치료에서 별도의, 동시의 또는 순차적인 사용을 위해 위에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)를 포함하는 생성물을 제공하며, 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택된다. 제13 측면의 생성물의 특징 및 그것의 용도는 제2 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같을 수 있다.
제14 측면으로 발명은 대상체에서의 췌장암의 치료에서 별도의, 동시의 또는 순차적인 사용을 위해 제1 측면과 관련하여 위에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 뉴클레오사이드 유사체(및 선택적으로 제3 활성제)를 포함하는 생성물을 제공한다. 제14 측면의 생성물의 특징 및 그것의 용도는 제3 측면과 관련하여 위에서 정의된 것과 같을 수 있다.
발명에 따르는 용도를 위한 생성물에서 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)는 별도의 구성요소로서, 예컨대 별도의 조성물로 제공될 수 있고, 단일 용기에 함께 또는 별도의 용기에 제공될 수 있다. 대안적으로, 특이적 결합 분자 및 제2 활성제(및 선택적으로 제3 활성제)는 단일 용기에 단일 조성물로 제공될 수 있다. 각각의 치료제는 임의의 적절한 형태로, 예컨대 수성 용액으로 또는 동결건조물로서 제공될 수 있다.
본 출원에서 인용된 모든 문서는 본원에 참조로 전체적으로 포함된다.
발명은 도면 및 아래의 비제한적인 실시예를 참조로 한층 더 이해될 수 있다:
도 1은 췌장암 세포주 MIA PaCa-2(A) 및 PANC-1(B)에 항체 MDX-124를 적용하는 것이 항체가 단일 작용제로서 사용될 때와 5FU를 사용하는 화학요법과 조합되어 사용될 때 모두 시험관내에서 암세포 증식을 상당히 감소시키는 것을 도시한다. 항체는 세포에 0 내지 10 μM의 농도 범위에서 적용되었다; 5FU는 그것의 IC50에서 적용되었다; ****p<0.0001, ***p<0.001 및 **p<0.01(MDX-124 v MDX-124 + 5FU IC50) 또는 op<0.05 및 oop<0.01(MDX-124 v IgG 아이소타입 대조군).
도 2는 췌장암 세포주 PANC-1에 항체 MDX-124를 적용하는 것이 항체가 단일 작용제로서 사용될 때와 겜시타빈을 사용하는 화학요법과 조합되어 사용될 때 모두 시험관내에서 암세포 증식을 상당히 감소시키는 것을 도시한다. 항체는 세포에 0 내지 10 μM의 농도 범위에서 적용되었다; 겜시타빈은 그것의 IC50에서 적용되었다; ****p<0.0001, ***p<0.001 및 **p<0.01(MDX-124 v MDX-124 + 겜시타빈 IC50) 또는 oooop<0.0001(MDX-124 v IgG 아이소타입 대조군).
도 3은 유방암 세포주 HCC1806에 항체 MDX-124를 적용하는 것이 항체가 단일 작용제로서 사용될 때와 시스플라틴을 사용하는 화학요법과 조합되어 사용될 때 모두 시험관내에서 암세포 증식을 상당히 감소시키는 것을 도시한다. 항체는 세포에 0 내지 10 μM의 농도 범위에서 적용되었다; 시스플라틴은 그것의 IC50에서 적용되었다; ****p<0.0001(MDX-124 v MDX-124 + 시스플라틴 IC50) 또는 op<0.05, oop<0.01 및 ooop<0.001(MDX-124 v IgG 아이소타입 대조군). 이 도면은 2개의 독립적인 실험을 나타낸다.
도 4는 유방암 세포주 HCC1806에 항체 MDX-124를 적용하는 것이 항체가 단일 작용제로서 사용될 때와 파클리탁셀을 사용하는 화학요법과 조합되어 사용될 때 모두 시험관내에서 암세포 증식을 상당히 감소시키는 것을 도시한다. 항체는 세포에 0 내지 10 μM의 농도 범위에서 적용되었다; 파클리탁셀은 그것의 IC20에서 적용되었다; ****p<0.0001(MDX-124 v MDX-124 + 파클리탁셀 IC20) 또는 ooop<0.001 및 oooop<0.0001(MDX-124 v IgG 아이소타입 대조군).
도 5는 유방암의 EMT6 마우스 모델에서의 평균 종양 부피를 도시한다. 마우스는 암세포로 접종된 후 비히클 대조군(PBS), MDX-001(10 mg/kg, QW), 항-PD-1 항체(10 mg/kg, BIW) 또는 MDX-001과 항-PD-1 처방의 조합이 투여되었다(n=그룹당 10마리). 종양 부피는 도시된 시점에서 계산되었다. 도면에서 나타낸 것과 같이, 병용 요법 그룹은 종양 성장을 감소시키는 측면에서 최상의 결과를 입증하였다.
도 6은 도 5에서 분석된 개별 마우스의 EMT6 종양 부피를 도시한다. 결과는 비히클로 처리된 마우스를 항-PD-1 항체(A) 또는 MDX-001과 항-PD-1 항체 병용 요법(B)으로 처리된 마우스를 비교한 것을 보여준다. 도시된 것과 같이, 항-PD-1 단일요법이 투여된 그룹에서보다 MDX-001와 항-PD-1 항체의 조합이 투여된 그룹에서 더 많은 마우스가 종양 퇴행을 보였다.
도 7은 폐암의 LL/2 쥐과 모델에서의 평균 종양 부피를 도시한다. 마우스는 암세포로 접종된 후 비히클 대조군(PBS), MDX-001(10 mg/kg, QW), 항-PD-1 항체(10 mg/kg, BIW) 또는 MDX-001과 항-PD-1 처방의 조합이 투여되었다(n=그룹당 10마리). 종양 부피는 도시된 시점에서 계산되었다. 도면에서 나타낸 것과 같이, MDX-001이나 항-PD-1 항체는 어떤 것도 단독으로 투여되었을 때 종양에 대한 효능을 나타내지 않았지만, 조합되어 투여되었을 때 유의미한 항-종양 효과를 볼 수 있었다.
도 8은 췌장암의 Pan02 마우스 모델에서의 평균 종양 부피를 도시한다. 마우스는 암세포로 접종된 후 겜시타빈(80 mg/kg, Q3D x4) 및 nab-파클리탁셀(아브락산, 30 mg/kg, Q3D x4)(n=50) 또는 MDX-124(10 mg/kg, 주 2회) 플러스 겜시타빈(80 mg/kg, Q3D x4) 및 nab-파클리탁셀(30 mg/kg, Q3D x4)(n=30)로 투여되었다. 종양 부피는 도시된 시점에서 계산되었고 평균 종양 부피 ± SEM으로서 표시된다.
도 9는 다발성 골수종 세포주 세포자멸사에 미치는 MDX-124 +/- 보르테조밉의 영향을 도시한다. (A) H929, (B) JJN3 및 (C) U266 인간 골수종 세포주는 MDX-124(20 μM), 보르테조밉(20 nM) 또는 두 MDX-124 및 보르테조밉의 조합으로 처리되었다. 모든 데이터는 각각 이중으로 수행된 3개의 독립적인 실험의 평균±SD로서 표시된다. 통계학적 분석은 다중 비교를 위해 터키 수정(Tukey's correction)이 있는 이원변량분석을 사용하여 수행되었다.
도 10은 다발성 골수종 세포주에서 p-STAT3 및 p-BCL2 발현에 미치는 MDX-124 및 보르테조밉의 영향을 도시한다. 각각의 인간 다발성 골수종 세포주의 분취액이 MDX-124(20 μM), 보르테조밉(20 nM) 또는 MDX-124와 보르테조밉의 조합으로 4시간 동안 처리된 후 Alexa488 표지된 p-STAT3(Tyr705) 항체 및 PE 표지된 p-BCL2(pS70) 항체로 염색되었다. 각각의 그룹이 처리된 후에 (A) p-BCL2 및 (B) p-STAT3에 대한 평균 강도 값이 미처리 대조군 세포와 비교되었다. 모든 데이터는 각각 이중으로 수행된 3개의 독립적인 실험의 평균±SD로서 표시된다. 통계학적 분석은 다중 비교를 위해 터키 수정이 있는 이원변량분석을 사용하여 수행되었다.
도 11은 다발성 골수종 세포주에서 세포내 IL-6 생성에 미치는 MDX-124 및 보르테조밉의 영향을 도시한다. 각각의 인간 다발성 골수종 세포주의 분취액이 MDX-124(20 μM), 보르테조밉(20 nM) 또는 MDX-124와 보르테조밉의 조합으로 24시간 동안 처리된 후 고정 및 투과화된 세포에서 세포내 IL-6이 분석되었다. 각각의 치료 그룹에 대해 IL-6에 대한 평균 형광 강도 값이 미처리 대조군 세포와 비교되었다. 모든 데이터는 각각 이중으로 수행된 3개의 독립적인 실험의 평균±SD로서 표시된다. 통계학적 분석은 다중 비교를 위해 터키 수정이 있는 이원변량분석을 사용하여 수행되었다.
실시예
실시예 1 - 시험관내에서 암 세포주에 대한 항-ANXA1 항체 조합의 테스트
췌장암 세포주에 대한 MDX-124 및 5FU의 조합
MTT 세포 증식 검정을 췌장암 세포주 MIA-PaCa-2 및 PANC-1에 대해 수행하였다. 세포주는 영국 공중보건 컬춰 컬렉션(Public Health England Culture Collections)으로부터 얻었다. MIA-PaCa-2는 인간 췌장 암종 세포주이며; PANC-1은 인간 췌장 유상피 암종(pancreatic epithelioid carcinoma) 세포주이다. MIA PaCa-2 및 PANC-1 세포를 10% FBS, 1% pen/strep 및 1% L-글루타민을 함유한 DMEM에서 5% CO2를 함유한 분위기에서 37℃에서 배양하였다.
MDX-124는 위의 설명에서 기술된다: 그것은 서열 번호: 13의 경쇄 및 서열 번호: 14의 중쇄를 가진 ANXA1에 대한 인간화된 IgG 1 항체이다.
세포 대사 활성을 측정하기 위해 MTT 비색 검정을 사용하여 세포 증식을 측정하였다. 검정에서, NADPH 의존성 세포 산화환원효소는 황색 테트라졸륨 염료인 MTT를 불용성 자주색 포르마잔 생성물로 환원시키고, 분광 광도계를 사용하여 500 내지 600 nm에서 흡광도를 측정하여 정량화한다. 포르마잔의 양은 세포 증식 수준에 비례하며 빠르게 분열하는 세포는 더 높은 수준의 MTT를 환원시킨다. 검정을 삼중으로 수행하였다. 세포를 최종 부피 100 μl로 시딩하였다. MIA PaCa-2 및 PANC-1 세포를 웰당 1 x 104의 밀도로 시딩하였다.
그런 후 세포를 검정 전에 24시간 동안 배양한 후, 세포 증식을 측정하였다. 증식 검정에서, 세포를 2.5-10 μM의 농도의 IgG 아이소타입 음성 대조군(Thermo Fisher Scientific, USA, 카탈로그 번호 31154)의 존재 하에, MDX-124(2.5-10 μM)의 존재 하에 또는 100 μM(MIA PaCa-2 세포의 경우) 또는 1 mM(PANC-1 세포의 경우)의 5FU와 조합된 MDX-124(2.5-10 μM)의 존재 하에 72시간 동안 배양하였다. 각 처리의 항증식 효과를 미처리 대조군 세포에 비교한 백분율 반응으로서 측정하였다.
두 세포주 모두와 함께 5FU를 그것의 IC50으로 사용하였다. IC50 농도는 물질이 그것의 최대 억제 효과의 절반을 나타내는 농도를 나타낸다. 각 세포주에 대한 IC50을 1 nM 내지 10 mM 범위의 5FU의 일련의 10배 희석으로 처리함으로써 계산하였다. MTT 검정을 사용하여 각 농도의 5FU와 함께 72시간 인큐베이션한 후 암세포 생존력을 계산하였다. 이것을 8회 반복하였고, 세포의 50%가 생존할 수 없는 평균 농도를 IC50 값으로서 간주하였다.
예상했던 것과 같이, MDX-124 단독은 두 세포주, 특히 MIA-PaCa-2에 대해 상대적으로 강력한 항증식 효과를 나타냈다. 그럼에도 불구하고, 5FU와 조합되었을 때(그것의 IC50에서) 두 세포주 모두에 대한 암세포 생존력은 개별 치료에 비해 상당히 감소하였다(도 1). MDX-124의 5FU와의 조합은 암세포 생존력을 MIA PaCa-2 및 PANC-1 세포주 각각에 대해 99.8% 및 91.2%로 감소시켰다. 결과를 쌍을 이루지 않은 t 테스트에 의해 'SynergyFinder' 소프트웨어(Ianevski et al., Nucleic Acids Research 48(W1): W488-W493, 2020)를 사용하여 분석하였고, MDX-124는 5FU와 조합되어 사용되었을 때 강력한 시너지 활성을 가지는 것을 나타냈다.
췌장암 세포주에 대한 MDX-124와 겜시타빈의 조합
MTT 세포 증식 검정을 췌장암 세포주 PANC-1에 대해, 위에서와 같이 수행하였다.
세포 증식을 동일한 IgG 아이소타입 대조군을 사용하여 위에서 기술된 것과 같이 MTT 비색 검정을 사용하여 측정하였다. 세포를 MDX-124(2.5-10 μM)의 존재 하에 또는 PANC-1 세포에 대해 겜시타빈에 대한 IC50인 20 μM의 겜시타빈과 조합된 MDX-124(2.5-10 μM)의 존재 하에 배양하였다. IC50을 위에서 기술된 것과 같이, 0.1 nM 내지 100 μM의 다양한 겜시타빈 희석을 사용하여 계산하였고, 검정을 3회 반복하여 세포의 50%가 생존할 수 없는 평균 농도(즉 IC50)를 확립하였다.
예상했던 것과 같이, MDX-124 단독은 세포주에 대해 상대적으로 강력한 항증식 효과를 나타냈다. 그럼에도 불구하고, 겜시타빈과 조합되었을 때(그것의 IC50에서) 암세포 생존력은 어느 하나의 개별 치료에 비해 상당히 감소하였다(도 2). 결과를 쌍을 이루지 않은 t 테스트에 의해 분석하였다.
유방암 세포주에 대한 MDX-124 및 시스플라틴의 조합
MTT 세포 증식 검정을 삼중 음성 유방암 세포주 HCC1806에 대해 수행하였다. 세포주를 ATCC로부터 얻었다. HCC1806 세포를 10% FBS, 1% pen/strep 및 1% L-글루타민을 함유한 DMEM에서 5% CO2를 함유한 분위기에서 37℃에서 배양하였다.
세포 증식을 동일한 IgG 아이소타입 대조군을 사용하여 위에서 기술된 것과 같이 MTT 비색 검정을 사용하여 측정하였다. 세포를 MDX-124(2.5-10 μM)의 존재 하에 또는 HCC1806 세포에 대해 시스플라틴에 대한 IC50인 0.65 μM의 시스플라틴과 조합된 MDX-124(2.5-10 μM)의 존재 하에 배양하였다. IC50을 위에서 기술된 것과 같이, 0.1 nM 내지 100 μM의 다양한 시스플라틴 희석을 사용하여 계산하였고, 검정을 4회 반복하여 세포의 50%가 생존할 수 없는 평균 농도(즉 IC50)를 확립하였다.
예상했던 것과 같이, MDX-124 단독은 세포주에 대해 항증식 효과를 나타냈고, 시스플라틴과의 조합에 의해 실질적으로 향상되었다(도 3). 결과를 쌍을 이루지 않은 t 테스트에 의해 'SynergyFinder' 소프트웨어(상기 동일)를 사용하여 분석하였고, MDX-124는 시스플라틴과 조합되어 사용되었을 때 강력한 시너지 활성을 가지는 것을 나타냈다.
유방암 세포주에 대한 MDX-124 및 파클리탁셀의 조합
MTT 세포 증식 검정을 삼중 음성 유방암 세포주 HCC1806에 대해 수해하였다.
세포 증식을 동일한 IgG 아이소타입 대조군을 사용하여 위에서 기술된 것과 같이 MTT 비색 검정을 사용하여 측정하였다. 세포를 MDX-124(2.5-10 μM)의 존재 하에 또는 HCC1806 세포에 대해 파클리탁셀에 대한 IC20인 0.4 nM의 파클리탁셀과 조합된 MDX-124(2.5-10 μM)의 존재 하에 배양하였다. IC20을 위에서 기술된 것과 같이, 0 내지 10 nM의 다양한 파클리탁셀 희석을 사용하여 계산하였고, 검정을 2회 반복하여 세포의 20%가 생존할 수 없는 평균 농도(즉 IC20)를 확립하였다.
예상했던 것과 같이, MDX-124 단독은 세포주에 대해 항증식 효과를 나타냈고, 파클리탁셀과의 조합에 의해 실질적으로 향상되었다(도 4). 결과를 쌍을 이루지 않은 t 테스트에 의해 'SynergyFinder' 소프트웨어(상기 동일)를 사용하여 분석하였고, MDX-124는 파클리탁셀과 조합되어 사용되었을 때 강력한 시너지 활성을 가지는 것을 나타냈다.
실시예 2 - 암의 생체내 모델에서 항-ANXA1 항체 조합의 테스트
유방암 모델
생후 9주령의 암컷 BALB/c 마우스를 5 x 105 EMT6 삼중 음성 유방암 세포로 피하 접종하였다. 종양이 100 mm3에 도달한 후(캘리퍼스를 사용하여 측정함), 마우스(n = 그룹당 10마리)에게 비히클 대조군(PBS), MDX-001(10 mg/kg, 매주), 항-PD-1 항체(10 mg/kg, 주 2회) 또는 MDX-001(10 mg/kg, 매주)와 항-PD-1 항체(10 mg/kg, 주 2회)의 조합 처방을 제공하였다. 종양 부피를 3주 동안 주 2회 측정하였다. 사용된 항-PD-1 항체는 마우스 항체 RMP-1-14(Yamazaki et al., Journal of Immunology 175(3): 1586-1592, 2005)이고; PBS를 복강내 주사에 의해 투여하였으며; 항체를 정맥내 주사에 의해 투여하였다.
위에서 상세하게 설명된 것과 같이, MDX-001은 MDX-124의 모체인 항-ANXA1 항체이다. MDX-001은 각각 서열 번호: 30 및 31에 제시된 서열을 가진 경쇄 및 중쇄를 가진다.
비히클 대조군과 비교하여, MDX-001 단일요법은 종양 성장에 유의하게 영향을 미치지 못하였지만, 종양 성장은 마우스가 항-PD-1 단일요법으로 투여되었을 때보다 상당히 느렸다. 항-PD-1 항체와 MDX-001이 조합되어 사용되었을 때, 평균 종양 부피는 항-PD-1 단일요법과 비교하여 추가로 15% 더 감소하였다(도 5). 특히, MDX-001과 항-PD-1 조합 요법으로 처리된 마우스의 30%는 18일 째와 비교하여 21일 째에 종양 퇴행의 증거를 보였고, 이에 비해 항-PD-1 요법만을 받은 마우스는 10%에 불과하였다(도 6). 어떠한 치료 그룹에서도 체중 손실은 볼 수 없었고, MDX-001, 항-PD-1 또는 병용 요법 치료로 부작용을 볼 수 없었다.
폐암 모델
생후 9주령의 암컷 C57BL/6 마우스를 3 x 105 LL/2 폐암 세포로 피하로 접종하였다. 종양이 100 mm3에 도달한 후(캘리퍼스를 사용하여 측정함), 마우스(n = 그룹당 10마리)에게 비히클 대조군(PBS), MDX-124(10 mg/kg, 매주), 항-PD-1(10 mg/kg, 주 2회) 또는 MDX-124(10 mg/kg, 매주)와 항-PD-1(10 mg/kg, 주 2회)의 조합 처방을 제공하였다. 약물을 위에서 기술한 것과 같이 투여하였다. 종양 부피를 2, 5, 8, 12 및 15일 째에 측정하였고, 이 시점에서 비히클과 단일요법 그룹을 종결시켰다. 병용 요법 그룹은 다시 19일 째에 측정한 후 종결시켰다.
결과를 양방향 반복 측정 변량 분석/혼합 효과 모델을 사용하여 분석하였다. 비히클 그룹과 MDX-124 또는 항-PD-1 단일요법 사이에서 유의미한 차이를 볼 수 없었다. 그러나, MDX-124/항-PD-1 조합 그룹은 비히클 대조군(P=0.022), MDX-124 단독(P=0.0003) 또는 항-PD-1 단독(P=0.037)보다 종양 성장이 상당히 더 느렸고, 이것은 MDX-124와 항-PD-1 요법의 조합에 대한 시너지 효과를 입증한다. 조합 그룹의 마우스는 더 길게 생존하였고 19일 째까지도 연구에 남아 있었던 한편, 다른 그룹은 15일 차에 종료하였다(도 7). 이 연구에서 체중 손실은 감지되지 않았다.
실시예 3 - 췌장암의 생체내 모델에서 항-ANXA1 항체 조합의 테스트
췌장암 모델
생후 8주령의 암컷 C57BL/6 마우스를 5 x 106 Pan02 췌장암 세포로 피하로 접종하고 종양이 100 m3에 도달한 후(캘리퍼스를 사용하여 측정함) 무작위로 치료 그룹으로 나누었다. 처음 13-일 치료 단계 동안, 마우스에게 겜시타빈(Hospira Inc., Lake Forest, IL)(80 mg/kg, Q3D x4) 및 nab-파클리탁셀(아브락산, Celgene Corp., Summit, NJ; Celgene Europe, Germany)(30 mg/kg, Q3D x4)(n = 50) 또는 MDX-124(10 mg/kg, 주 2회)와 겜시타빈(80 mg/kg, Q3D x4) 및 nab-파클리탁셀(30 mg/kg, Q3D x4)의 조합 처방을 제공하였다(n = 30마리). 약물을 위에서 기술한 것과 같이 투여하였다. 비히클 대조군을 또한 식염수로 수행하였다(BIW, 10 mL/kg). 종양 부피를 3, 7, 10 및 13일 째에 측정하였다.
13일 째에, MDX-124와 겜시타빈 및 nab-파클리탁셀의 조합 처방을 받은 그룹의 평균 종양 부피는 겜시타빈 및 nab-파클리탁셀 단독을 받은 그룹에서의 106.7 mm3의 평균 종양 부피와 비교하여 92.6 mm3이었다(또는 비히클 대조군 처리된 마우스와 비교함, 데이터 미도시). 그러므로, 겜시타빈 및 nab-파클리탁셀에 MDX-124의 첨가는 Pan02 마우스에서 겜시타빈 및 nab-파클리탁셀 단독의 투여와 비교하여 평균 종양 성장 억제를 증가시켰다(도 8).
실시예 4 - 시험관내에서 다발성 골수종 세포주에 대한 항-ANXA1 항체 조합의 테스트
여러 검정을 사용하여 인간 다발성 골수종 암 세포주의 패널에 대해 보르테조밉과 조합된 MDX-124의 항암 활성을 평가하였다.
물질 및 방법
세포자멸사 검정
세포자멸사에 미치는 MDX-124, 보르테조밉 및 두 작용제 모두의 조합의 영향을 아넥신 V 및 7-AAD 표지화를 사용하여 평가하였다. 인간 다발성 골수종 세포주(H929, JJN3 및 U266, 모두 DSMZ, Leibniz Institute, German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, GmbH(Germany)로부터 유래됨)를 10% FCS가 보충된 1 mL의 RPMI 배지에서 MDX-124(20 μM), 보르테조밉(20 nM, Cell Signaling Technology, MA, USA) 또는 두 작용제의 조합(1000:1의 고정 몰비율)과 함께 48시간 동안 인큐베이션하였다. 미처리 대조군 세포 수준보다 위의 세포자멸사의 백분율을 각각의 치료 그룹에 대해 유세포분석을 사용하여 정량화하였다.
세포자멸사 관련 단백질의 발현
2개의 세포자멸사 관련 단백질인 p-BCL2 및 p-STAT3의 발현에 미치는 MDX-124, 보르테조밉 및 두 작용제의 조합의 영향을 유세포분석을 사용하여 평가하였다. 각각의 인간 다발성 골수종 세포주의 분취액을 MDX-124(20 μM), 보르테조밉(20 nM) 또는 MDX-124와 보르테조밉의 조합으로 4시간 동안 처리한 후 Alexa488 표지된 p-STAT3(Tyr705, BD Biosciences, 카탈로그 #557814) 항체 및 PE 표지된 p-BCL2(pS70, BD Biosciences, 카탈로그 #562532) 항체로 염색하였다. 각 치료 그룹에 대한 평균 형광 강도 값을 미처리 대조군 세포와 비교하였다.
IL-6의 발현
인터류킨-6(IL-6)의 발현에 미치는 각 작용제, 두 단독 및 조합의 영향을 유세포분석을 사용하여 평가하였다. 각각의 인간 다발성 골수종 세포주의 분취액을 MDX-124(20 uM), 보르테조밉(20 nM) 또는 MDX-124와 보르테조밉의 조합으로 24시간 동안 처리한 후 고정 및 투과화된 세포에서 세포내 IL-6 분석을 하였다. 각 치료 그룹에 대한 IL-6에 대한 평균 형광 강도 값을 미처리 대조군 세포와 비교하였다.
결과
세포자멸사 검정
MDX-124 단독은 세포자멸사에 영향을 나타낸 한편, 보르테조밉 단독은 미처리 대조군 세포와 비교했을 때 세포자멸사를 상당히 유도하였다(도 9). 그러나, 보르테조밉에 MDX-124의 첨가는 보르테조밉 단독과 비교했을 때 테스트된 모든 세포주에서 세포자멸사를 향상시켰다(도 9).
세포자멸사 관련 단백질의 발현
다발성 골수종에서 STAT3 과발현은 불리한 예후와 연관이 있고 미세환경 의존성 치료 저항에서 역할을 하는 것으로 가설이 세워진다. 증식 촉진 역할 외에, STAT3은 항-세포자멸성 단백질을 상향 조절하여 다발성 골수종에서 마이크로RNA 조절장애를 유발한다(Chong et al., 2019, Cancers, Vol. 11(5), 731).
BCL2 단백질은 세포 생존을 촉진하는 종양 유전자이며 다발성 골수종에서 자주 상향 조절되므로 매력적인 표적이 된다(Gupta et al., 2021, Blood Lymphat. Cancer, Vol. 11,11-24).
MDX-124 및 보르테조밉 단독 모두 테스트된 다발성 골수종 세포주에서 p-BCL2 또는 p-STAT3의 발현을 감소시켰다(도 10). 그러나, MDX-124와 보르테조밉의 조합은 테스트된 모든 세포주에서 어느 하나의 치료 단독과 비교했을 때 p-BCL2 및 p-STAT3의 더 큰 감소를 유발하였다(도 10).
IL-6의 발현
IL-6은 성장 인자일뿐만 아니라, 다발성 골수종의 생존 인자로, 골수종 세포에서 세포자멸사를 억제한다. IL-6의 효과를 감소시키는 것은 종양 성장의 퇴행과 관련되었다(Harmer et al., 2019, Front. Endocrinol., Vol. 9, doi: 10.3389/fendo.2018.00788).
세포내 IL-6 발현은 MDX-124 및 보르테조밉 둘 다에 의해 적당히 감소되었지만, MDX-124와 보르테조밉의 조합은 어느 하나의 치료 단독과 비교했을 때 테스트된 모든 세포주에서 더 큰 감소를 유발하였다(도 11).
전체적으로, 이들 데이터는 다발성 골수종 세포주에서 보르테조밉에 MDX-124의 첨가가 어느 하나의 작용제 단독의 항암 효과를 강화시키는 것을 시사한다.
서열 목록
서열 목록에 제공된 서열은 다음의 표에 제시된다:
서열 번호 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열 설명
1 아미노산 L1M2H4 및 L2M2H2의 VLCDR1
2 아미노산 MDX-001, L1M2H4 및 L2M2H2의 VLCDR2
3 아미노산 MDX-001, L1M2H4 및 L2M2H2의 VLCDR3
4 아미노산 MDX-001, L1M2H4 및 L2M2H2의 VHCDR1
5 아미노산 MDX-001, L1M2H4 및 L2M2H2의 VHCDR2
6 아미노산 MDX-001, L1M2H4 및 L2M2H2의 VHCDR3
7 아미노산 MDX-001의 VLCDR1
8 아미노산 S9T 치환이 있는 VLCDR1 변이체
9 아미노산 L1M2 경쇄 가변 영역
10 아미노산 L2M2 경쇄 가변 영역
11 아미노산 H4 중쇄 가변 영역
12 아미노산 H2 중쇄 가변 영역
13 아미노산 L1M2 경쇄
14 아미노산 H4 중쇄
15 아미노산 L2M2 경쇄
16 아미노산 H2 중쇄
17 아미노산 인간 ANXA1 단백질
18 아미노산 ANXA1-004에 의해 암호화된 인간 ANXA1 단편
19 아미노산 ANXA1-006에 의해 암호화된 인간 ANXA1
20 아미노산 경쇄 신호 서열
21 아미노산 중쇄 신호 서열
22 아미노산 L1M2 경쇄 프로 서열
23 아미노산 H4 중쇄 프로 서열
24 아미노산 L2M2 경쇄 프로 서열
25 아미노산 H2 중쇄 프로 서열
26 뉴클레오타이드 L1M2 경쇄 프로 서열
27 뉴클레오타이드 H4 중쇄 프로 서열
28 뉴클레오타이드 L2M2 경쇄 프로 서열
29 뉴클레오타이드 H2 중쇄 프로 서열
30 아미노산 MDX-001 경쇄
31 아미노산 MDX-001 중쇄
서열목록 전자파일 첨부

Claims (39)

  1. 대상체에서 암의 치료에 사용하기 위한 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제로서,
    (i) 특이적 결합 분자는 상보성 결정 영역(CDR) VLCDR1, VLCDR2, VLCDR3, VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3을 포함하고, 상기 CDR의 각각은 다음과 같이 아미노산 서열을 가지며:
    VLCDR1은 서열 번호: 1, 7 또는 8에 제시된 서열, 또는 위치 9 및/또는 11에서 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그것의 변형 버전을 가지고;
    VLCDR2는 서열 번호: 2에 제시된 서열을 가지며;
    VLCDR3은 서열 번호: 3에 제시된 서열을 가지고;
    VHCDR1은 서열 번호: 4에 제시된 서열을 가지며;
    VHCDR2는 서열 번호: 5에 제시된 서열을 가지고; 그리고
    VHCDR3은 서열 번호: 6에 제시된 서열을 가지며; 그리고
    (ii) 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택되는, 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  2. 제1항에 있어서, 제3 활성제는 상기 암의 치료에 사용되는 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 활성제는 5FU인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  4. 제3항에 있어서, 암은 췌장암 또는 대장암인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 활성제는 PD-1에 결합하는 항체 또는 PD-L1에 결합하는 항체인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  6. 제5항에 있어서, PD-1에 결합하는 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙 또는 티스렐리주맙이거나, 또는 PD-L1에 결합하는 항체는 아테졸리주맙, 두르발루맙 또는 아벨루맙인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 암은 유방암 또는 폐암인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  8. 제7항에 있어서, 유방암은 삼중 음성 유방암인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 활성제는 보르테조밉, 익사조밉 또는 카르필조밉인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  10. 제9항에 있어서, 암은 골수종 또는 외투 세포 림프종인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  11. 대상체에서 유방암의 치료에 사용하기 위한 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제로서, 특이적 결합 분자는 제1항에서 정의된 것과 같으며, 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택되고;
    바람직하게는 제2 활성제는 파클리탁셀 및 시스플라틴으로부터 선택되는, 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  12. 제11항에 있어서, 제3 활성제는 상기 유방암의 치료에 사용되는 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  13. 대상체에서 췌장암의 치료에 사용하기 위한 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제로서, 특이적 결합 분자는 제1항에서 정의된 것과 같으며, 제2 활성제는 뉴클레오사이드 유사체, 바람직하게는 겜시타빈인, 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  14. 제13항에 있어서, 제3 활성제는 상기 췌장암의 치료에 사용되는 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  15. 제14항에 있어서, 제2 활성제는 겜시타빈이고 제3 활성제는 파클리탁셀인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 특이적 결합 분자의 CDR은 다음과 같이 아미노산 서열을 가지는 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제:
    VLCDR1은 서열 번호: 1에 제시된 서열을 가지며;
    VLCDR2는 서열 번호: 2에 제시된 서열을 가지고;
    VLCDR3은 서열 번호: 3에 제시된 서열을 가지며;
    VHCDR1은 서열 번호: 4에 제시된 서열을 가지고;
    VHCDR2는 서열 번호: 5에 제시된 서열을 가지며; 그리고
    VHCDR3은 서열 번호: 6에 제시된 서열을 가진다.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 특이적 결합 분자는 항체 또는 그것의 단편인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  18. 제17항에 있어서, 항체 또는 그것의 단편은 인간화된 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 항체는 단클론성 항체이거나, 또는 상기 항체 단편은 Fab, Fab' 또는 F(ab')2 항체 단편 또는 scFv 분자인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  20. 제19항에 있어서, 상기 항체 또는 그것의 단편은:
    i) 서열 번호: 9 또는 10에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
    ii) 서열 번호: 11 또는 12에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  21. 제20항에 있어서, 상기 특이적 결합 분자는:
    i) 서열 번호: 13에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함는 경쇄; 및
    ii) 서열 번호: 14에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    를 포함하는 단클론성 항체인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  22. 제20항에 있어서, 상기 특이적 결합 분자는:
    i) 서열 번호: 15에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함는 경쇄; 및
    ii) 서열 번호: 16에 제시된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    를 포함하는 단클론성 항체인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 ANXA1을 발현하는 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 특이적 결합 분자 및 제2 활성제, 및 선택적으로 존재할 때 상기 제3 활성제는 대상체에게 별도로, 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 인간인 것인 특이적 결합 분자 및 제2 활성제.
  26. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제를 투여하는 단계를 포함하며, 특이적 결합 분자는 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같고 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택되며;
    바람직하게는 암은 제23항에서 정의된 것과 같고, 투여는 제24항에서 정의된 것과 같고/거나 대상체는 제25항에서 정의된 것과 같은, 방법.
  27. 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자의 용도로서, 특이적 결합 분자는 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같고, 상기 암의 치료는 상기 의약 및 제2 활성제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제으로부터 선택되고;
    바람직하게는 암은 제23항에서 정의된 것과 같으며, 투여는 제24항에서 정의된 것과 같고/거나 대상체는 제25항에서 정의된 것과 같은, 용도.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서,
    (i) 제2 활성제는 5FU이고 암은 췌장암 또는 대장암이거나;
    (ii) 제2 활성제는 제5항 또는 제6항에서 정의된 것과 같고 암은 제7항 또는 제8항에서 정의된 것과 같거나;
    (iii) 제2 활성제는 보르테조밉, 익사조밉 또는 카르필조밉이고 암은 골수종 또는 외투 세포 림프종이거나; 또는
    (iv) 제3 활성제가 상기 암의 치료에 사용되는 것인 방법 또는 용도.
  29. 대상체에서 유방암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제를 투여하는 단계를 포함하며, 특이적 결합 분자는 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같고 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택되며;
    바람직하게는 제2 활성제는 파클리탁셀 및 시스플라틴으로부터 선택되고, 암은 제23항에서 정의된 것과 같으며, 투여는 제24항에서 정의된 것과 같고, 대상체는 제25항에서 정의된 것과 같고/거나, 제3 활성제가 상기 유방암의 치료에 사용되는, 방법.
  30. 대상체에서 췌장암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 뉴클레오사이드 유사체를 투여하는 단계를 포함하며, 특이적 결합 분자는 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같고;
    바람직하게는 뉴클레오사이드 유사체는 겜시타빈이며, 암은 제23항에서 정의된 것과 같고, 투여는 제24항에서 정의된 것과 같으며, 대상체는 제25항에서 정의된 것과 같고/거나, 제3 활성제가 상기 췌장암의 치료에 사용되는, 방법.
  31. 유방암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자의 용도로서, 특이적 결합 분자는 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같고, 상기 유방암의 치료는 상기 의약 및 제2 활성제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택되고;
    바람직하게는 제2 활성제는 파클리탁셀 및 시스플라틴으로부터 선택되며, 암은 제23항에서 정의된 것과 같고, 투여는 제24항에서 정의된 것과 같으며, 대상체는 제25항에서 정의된 것과 같고/거나, 제3 활성제가 상기 유방암의 치료에 사용되는, 용도.
  32. 췌장암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자의 용도로서, 특이적 결합 분자는 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같고, 상기 췌장암의 치료는 상기 의약 및 뉴클레오사이드 유사체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며;
    바람직하게는 뉴클레오사이드 유사체는 겜시타빈이고, 암은 제23항에서 정의된 것과 같으며, 투여는 제24항에서 정의된 것과 같고, 대상체는 제25항에서 정의된 것과 같고/거나, 제3 활성제가 상기 췌장암의 치료에 사용되는, 용도.
  33. 제30항 또는 제32항에 있어서, 제3 활성제는 상기 췌장암의 치료에 사용되며 제2 활성제는 겜시타빈이고 제3 활성제는 파클리탁셀인 것인 방법 또는 용도.
  34. 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자, 제2 활성제, 및 선택적으로 제3 활성제 및 하나 이상의 제약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 제약학적 조성물로서,
    특이적 결합 분자는 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같고, 제2 활성제는 제1항, 제3항, 제5항, 제6항 또는 제9항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같으며, 존재할 때 상기 제3 활성제는 바람직하게 제15항에서 정의된 것과 같은, 제약학적 조성물.
  35. 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자 및 제2 활성제, 및 선택적으로 제3 활성제를 포함하는 키트로서, 특이적 결합 분자는 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같고, 제2 활성제는 제1항, 제3항, 제5항, 제6항 또는 제9항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같으며, 존재할 때 상기 제3 활성제는 바람직하게 제15항에서 정의된 것과 같은, 키트.
  36. 대상체에서 암의 치료에 별도로, 동시에 또는 순차적으로 사용하기 위한 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자, 제2 활성제, 및 선택적으로 제3 활성제를 포함하는 생성물로서, 제2 활성제는 티미딜레이트 합성효소 억제제, 핵염기 유사체, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 체크포인트 억제제 및 프로테아솜 억제제로부터 선택되는, 생성물.
  37. 제36항에 있어서,
    (i) 제2 활성제는 5FU이고 암은 췌장암 또는 대장암이거나;
    (ii) 제2 활성제는 제5항 또는 제6항에서 정의된 것과 같고 암은 제7항 또는 제8항에서 정의된 것과 같거나, 또는
    (iii) 제2 활성제는 보르테조밉, 익사조밉 또는 카르필조밉이고 암은 골수종 또는 외투 세포 림프종인 것인 생성물.
  38. 대상체에서 유방암의 치료에 별도로, 동시에 또는 순차적으로 사용하기 위한 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자, 제2 활성제, 및 선택적으로 제3 활성제를 포함하는 생성물로서, 제2 활성제는 탁산 및 백금 기반 화학요법제로부터 선택되고;
    바람직하게 제2 활성제는 파클리탁셀 및 시스플라틴으로부터 선택되는, 생성물.
  39. 대상체에서 췌장암의 치료에 별도로, 동시에 또는 순차적으로 사용하기 위한 제1항 또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에서 정의된 인간 ANXA1에 결합하는 특이적 결합 분자, 뉴클레오사이드 유사체, 및 선택적으로 제3 활성제를 포함하는 생성물로서,
    바람직하게 뉴클레오사이드 유사체는 겜시타빈이고/거나 상기 제3 활성제는 파클리탁셀인, 생성물.
KR1020247018081A 2021-11-18 2022-11-18 암을 위한 병용 요법 KR20240122606A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB2116680.6 2021-11-18
GB2208893.4 2022-06-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240122606A true KR20240122606A (ko) 2024-08-12

Family

ID=

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3334431B1 (en) 5-bromo-2,6-di-(1h-pyrazol-l-yl)pyrimidin-4-amine for use in the treatment of cancer
CA3142119A1 (en) Dosage of an antibody-drug conjugate for treating cancer
JP2020036595A (ja) 抗ヒト４−１ｂｂ抗体およびその使用
AU2015225646B2 (en) Anti-MET in combination with anti-VEGFR2 antibodies therapy for cancer
US8992915B2 (en) Combination of CD37 antibodies with ICE
US12053530B2 (en) Plectin-1 binding antibodies and uses thereof
EP4173636A1 (en) Combined use of anti-ccr8 antibody and chemotherapeutic agent
JP2024041851A (ja) 抗体による癌治療
KR20240122606A (ko) 암을 위한 병용 요법
CN117222663A (zh) 使用结合nkg2d、cd16和肿瘤相关抗原的多特异性结合蛋白治疗癌症的方法
TW202332698A (zh) 癌症之組合療法
CA3128521A1 (en) Administration of sumo-activating enzyme inhibitor and checkpoint inhibitors
US20160106837A1 (en) Combination of cd37 antibodies with chlorambucil
WO2023164872A1 (en) Anti-cd39 antibodies and use thereof
TW201642904A (zh) 含抗ｆｇｆｒ２抗體及其他藥劑之組成物
TW202330589A (zh) 治療
CA3207494A1 (en) Hhla2 binding agents with novel activity
KR20240114759A (ko) 치료
TW201729827A (zh) 用於癌症治療之肽及擬肽與ｔ細胞活化劑及／或查核點抑制劑之組合