KR20240099239A - 결장직장암에 대한 전임상 활성을 갖는 종양원성 chd1l의 소분자 - Google Patents

결장직장암에 대한 전임상 활성을 갖는 종양원성 chd1l의 소분자 Download PDF

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KR20240099239A
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다니엘 브이 라바베라
조슈아 엠 애보트
치옹 조우
헥터 에스퀘어
브렛 조셉 프리가로
폴 아울라데
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더 리전츠 오브 더 유니버시티 오브 콜로라도, 어 바디 코퍼레이트
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Abstract

본 발명은, CHD1L 억제제를 사용하는, TCF 전사-유도된 암 및 EMT-유도된 암을 포함하는 CHD1L-유도된 암의 치료에 관한 것이다. CHD1L ATPase를 억제하고 CHD1L-의존성 TCF-전사를 억제하는 CHDL1의 소분자 억제제가 동정되었다. CHD1L 억제제는 TCF-복합체가 Wnt 반응 요소 및 프로모터 부위에 결합하는 것을 방지한다. 더 구체적으로, CHD1L 억제제는 EMT의 역행을 유도한다. CHD1L 억제제는 다양한 암 및 특히 CRC 및 m-CRC의 치료에 유용하다. CHD1L-유도된 암은 그 중에서도 CRC, 유방암, 신경교종, 간암, 폐암 또는 위장관(GI) 암이다. 본원에서 정의된 바와 같은 화학식 I 및 XX의 CHD1L 억제제 및 이의 염 뿐만 아니라 CHD1L 억제제를 함유하는 약제학적 조성물이 제공된다. CHD1L 억제제와 다른 항신생물제의 상승작용적 조합이 또한 기재된다.

Description

결장직장암에 대한 전임상 활성을 갖는 종양원성 CHD1L의 소분자 억제제
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 9월 30일에 출원된 미국 가특허출원 제63/250,803호의 이득 및 2022년 9월 26일에 출원된 미국 출원 제17,953,221호의 이득을 주장한다. 각각의 열거된 출원은 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
미국 정부 지원에 관한 성명
본 발명은 국방부(DoD)에 의해 부여된 승인 번호 W81XWH1810142하에 정부 지원으로 이루어진 것이다. 미국 정부는 본 발명에 대하여 특정 권리를 갖는다.
게놈의 완전성은 유전자 발현 및 복제를 위한 DNA에 대한 접근성을 조절하는 염색질 구조에 대한 형태 변화에 의해 유지된다. 염색질 구조는 히스톤의 번역 후 변형 및 뉴클레오솜의 재배열에 의해 유지된다[Lorch et al., 2010; Kumar et al., 2016; Swygert et al., 2014]. ATP-의존성 염색질 리모델러는 히스톤 조성을 변화시킴으로써 그리고 DNA를 따라 뉴클레오솜을 퇴거 또는 이동시킴으로써 염색질을 변경하는 효소이다. 이들의 활성은 유전자 발현 및 복제, 전사, 및 DNA 복구를 위한 DNA의 접근성을 조절함으로써 세포 기능에서 중요한 역할을 한다[Erdel et al., 2011; Brownlee et al., 2015]. 염색질 재형성의 이상조절은 인간 질환, 특히 암과 관련이 있다[Zhang et al., 2016; Valencia & Kadoch, 2019].
지난 10년 동안, ALC1(간암 1에서 증폭됨)로도 알려진, CHD1L(크로모도메인 헬리카제/ATPase DNA 결합 단백질 1-유사)로 알려진 염색질 리모델러는 중요한 인간암의 병리학에 연루된 종양유전자로 부상하였다[Ma et al., 2008; Cheng et al., 2013]. CHD1L은 또한 약물 내성 유출 펌프의 상향조절(예를 들면, ABCB1)[Li et al., 2019]부터 PARP1 매개된 DNA 복구[Pines et al., 2012; Tsuda et al., 2017], 및 항아폽토시스 활성[Li et al., 2013; Chen et al., 2009]까지 걸친 다중약물 내성과 관련된다. 게다가, CHD1L의 증폭 또는 과발현은 낮은 전체 생존율(OS) 및 전이성 질환을 포함하는 환자에 대한 불량한 예후와 상관관계가 있다[He et al., 2015; Hyeon et al., 2013; Su et al., 2014; Mu et al., 2015; Su et al., 2015; Li et al., 2013; He et al., 2012; Chen et al., 2010]. CHD1L 과발현은 또한 종양 진행과 관련되었고 불량한 환자 생존의 예측인자였다[Ji et al., 2013]. CHD1L의 다기능성 종양원성 메커니즘은 이를 암에서의 매력적인 치료적 표적으로 만든다. CHD1L의 암 유발 메커니즘은 간암[Li et al., 2019], 유방암[Wu et al., 2014], 및 폐암[Li et al., 2019]에서 연구되었지만, 결장직장암(CRC: colorectal cancer)에서의 CHD1L과 연관된 병리학적 메커니즘에 관하여는 거의 알려지지 않았다.
CRC는 매년 진단되는 세번째로 널리 퍼진 암이고, CRC 환자는 세계적으로 두번째로 높은 사망률을 갖는다[Jemal et al., 2011]. 수술 및 5-플루오로우라실(5FU) 기반의 조합 화학요법과 조합된 CRC의 조기 검출은 전체 생존율을 최소로 개선시켰다[Jemal et al., 2011; Fakih, 2015]. 현재 화학 및 표적 요법은 전이성 CRC(mCRC)에 대하여 크게 효과적이지 못하며, 이는 낮은 11% 5년 전체 생존율에 의해 증명된다[Jemal et al., 2011; Fakih, 2015]. CRC 종양 진행 및 전이의 병리학에 관련된 표적을 확인하고 특성화하는 것에 대한 충족되지 않은 요구가 당해 분야에 존재한다.
대다수의 CRC 환자는 Wnt 신호전달 경로에서 돌연변이를 보유하고, 이는 비정상 T-세포 인자/림프 인핸서 인자-전사 또는 TCF-복합체를 야기한다[Kinzler & Voelstein, 1996; Cancer Genome Atlas, 2012]. 이러한 돌연변이는 구성적 β-카테닌 전좌 및 TCF-전사의 전사활성화를 야기할 수 있다[Clevers, 2006; Korinek et al., 1997]. TCF-복합체는 TCF4(즉, TCFL2)에 의해 조율되고, 이는 β-카테닌, PARP1, 및 CREB 결합 단백질(CBP)과 같은 보조 활성화제의 어레이와의 상호작용을 통해 활성화된다[Shitashige et al., 2008]. 최근에, TCF4는 선종(즉, 폴립)으로부터의 초기 전이 및 말기 mCRC 둘 다의 특이적인 유발요인 것으로 나타났다[Hyeo et al., 2013; Su et al., 2014].
TCF 전사가 상피-중간엽 이행(EMT: epithelial-mesenchymal transition)의 주요 조절인자로서 기능한다는 것이 보고되었다[Sanchez-Tilla et al., 2011; Zhou et al., 2016; Abraham et al., 2019]. 이러한 과정은 상대적 양성 상피 종양 세포를 증가된 암 줄기 세포(CSC) 줄기세포능 및 mCRC를 유발하는 다른 악성 특성을 갖는 중간엽 세포로 변형시킬 수 있다[Chaffer et al., 2016]. 최근에 특정한 CRC 유발 유전자의 변경이 원발성 및 전이성 종양 쌍 둘 다에서 공통적이라는 것이 보고되었다[Hu et al., 2019]. 더 구체적으로, 비정상 TCF4는 mCRC의 특이적인 유발요인인 것으로 보고되고[Hu et al., 2019], CRC는 초기 선종(즉, 폴립)에서 전이될 수 있고(또한 문헌[Magri & Bardelli, 2019] 참조), 이는 TCF 유발된 EMT에 의해 야기될 가능성이 있다[Chaffer et al. 2016; Chaffer & Weinberg, 2011]. 이러한 보고들은 TCF-전사가 CRC 진행 및 전이의 모든 단계에서 원동력이라는 것을 나타낸다.
EMT는 다수의 인간 질환, 특히 고형 종양 진행, 약물 및 방사선 요법 내성, 면역 반응 및 면역요법의 회피, 및 전이의 촉진에서 주요 원동력이다[Chaffer et al. 2016; Chaffer & Weinberg, 2011; Scheel & Weinberg, 2012].
암 및 다른 질환에서 Wnt 신호전달 경로 및 TCF-전사의 중요성으로 인하여[Clevers, 2006], Wnt 신호전달 경로 및 TCF-전사를 억제하는 소분자 약물이 시험되었다[Lee et al., 2011; Polakis, 2012]. 고려된 치료적 전략은 수용체 표적(예를 들면, 프리즐드(Frizzled)); Wnt 리간드 분비의 방지(예를 들면, 포큐파인); β-카테닌 파괴 복합체의 억제(예를 들면, 탄키라제); 및 β-카테닌 및 보조 활성화제(예를 들면, CBP)에 의한 단백질-단백질 억제(PPI)를 포함한다. 임상 실험이 진행 중일 수 있지만, Wnt/TCF 경로를 표적화하는 약물은 아직 임상적으로 승인되지 않았다[Lu et al., 2016]. 대조적으로, 본 발명은 특히, Wnt/TCF 유발된 CRC의 치료를 위한 소분자 약물의 확인을 위한 신규한 치료적 전략을 설명하고, 여기서 CHD1L은 CRC에서 악성 표현형을 TCF-전사 조절하는 필요한 DNA 결합 인자로서 확인된다.
예를 들면, 미국 특허 제9,616,047호에는 결장 발암을 약화시키는 것으로 언급되어 있는 β-카테닌의 소분자 억제제 또는 β-카테닌/TCF-4 복합체의 저해제가 보고되어 있다. 거기서 보고된 β-카테닌의 억제제는 에스큘레틴 뿐만 아니라 HI-B1-HI-B20, HI-B22-HI-B-24, HI-B26, HI-B32 및 HI-B34로 지정된 화합물을 포함하고, 이들 각각의 구조는 상기 특허에 제공되어 있다. 상기 특허는 추가로 β-카테닌 억제제로서 유용하고 결장 발암의 치료에 유용하다고 기재된 화합물을 거기서 다수의 일반 화학식으로 설명하고 있다. 본 특허는 거기서 해당 발명에 유용하다고 하는 특정한 화합물의 구조, 화학식 및 변수 정의에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 여기서 확인된 화합물은 본원에 기재된 것들과 구조적으로 다르다.
2019년 5월 17일에 공개된 CN 109761909에는 (이의 Espacenet 영어 요약에 기재된 바와 같이) 특정한 화학식의 특정 N-(4-(피리미딘-4-아미노)페닐)설폰아미드 화합물 또는 염이 Hsp90-Cdc37(열 충격 단백질 Hsp90 및 이의 보조 샤페론 Cdc37) 상호작용적 클라이언트 단백질 발현을 억제하며, Hsp90 신호 채널에 의해 매개된 다양한 질환을 치료 또는 예방하는데 유용한 것으로 보고되어 있다. 공개된 출원에 제공된 화학식은 하기와 같다:
Figure pct00001
상기 식에서, Espacenet 영어 기계 번역에 따라 정의된 변수는 하기와 같다:
R1은 mes-트리메틸페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 나프틸, 2,3,4,5-테트라메틸페닐, 4-메톡시페닐, 4-tert-부틸페닐, 2,4-디메톡시페닐, 2,5-디메톡시페닐 또는 4-페녹시페닐이고;
R2는 수소, 메틸 아세테이트, 아세테이트, 아미노아세틸, 4-포름산 벤질, 4-이소프로필벤질, 4-클로로벤질 또는 4-메톡시벤질이고;
R3은 염소, -ORa 또는 -NRbRc이고, 여기서 Ra는 C1-3 알킬쇄, C5-6 사이클로알킬, C1-2 알콕시, 모노- 또는 디-C1-2 알킬아미노, 또는 C5-6 질소 함유 또는 산소 함유 헤테로사이클릭기이고; Rb 및 Rc는 각각 C1-5 알킬기이다. 더 구체적으로, R3은 염소, 2-하이드록시테트라하이드로피롤릴, 에탄올아미노, 2,3-디하이드록시-1-메틸프로필아미노, 2,3-디하이드록시프로필아미노, 피페라지닐, N-메틸피페라지닐, 아제필, 피페리디닐, 2-메틸프로필아미노, 프로폭시, 메틸아미노, 에틸아미노, 사이클로프로필아미노, 1-에틸프로필아미노, 테트라하이드로피란-4-일메톡시 또는 2-메톡시에톡시이다. 해당 참고문헌에는 또한 화학식 I-5의 화합물이 언급되어 있다:
Figure pct00002
이러한 공개된 출원은 거기서 발명에 유용하다고 하는 특정한 화합물의 구조, 화학식 및 변수 정의에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 이러한 공개된 출원에 개시된 구조는 본 발명의 어떠한 화학식으로부터 배제될 수 있다.
본 발명은 CRC에서 CHD1L의 임상병리학적 특성을 시험하고, 본원에서 결과는 CHD1L가 TCF-전사에 관련된 약물 가능한 표적이라는 것을 나타낸다. CHD1L-매개된 TCF-전사에 대한 메커니즘이 또한 본원에서 제시된다. CHD1L의 소분자 억제제는 종양 오가노이드 및 환자 유래 종양 오가노이드(PDTO)를 포함하는 다양한 세포 모델에서 TCF 전사, 역 EMT, 및 다른 악성 특성을 방지할 수 있다고 본원에서 확인된다. 본원에서 확인된 특정한 CHD1L 억제제는 CRC 및 다른 암의 치료를 향한 번역 발전에 중요한 생체내 약동학적(PK) 및 약역학적(PD) 프로파일을 포함하는 약물 유사 약리학적 특성을 나타낸다.
본 발명은 CHD1L-유도된 암, 더 구체적으로 TCF 전사-유도된 암, 더욱 더 구체적으로 EMT-유도된 암의 치료에 관한 것이다. CHD1L은 TCF 전사 복합체의 필수 구성요소인 것으로 밝혀졌다. CHD1L ATPase를 억제하고 CHD1L-의존성 TCF-전사를 억제하는 CHDL1의 소분자 억제제가 확인되었다. CHD1L 억제제는 TCF-복합체가 Wnt 반응 요소 및 프로모터 부위에 결합하는 것을 방지하는 것으로 생각된다. 더 구체적으로, CHD1L 억제제는 EMT의 역행(reversion)을 유도한다. CHD1L 억제제는 다양한 암, 특히 CRC 및 m-CRC의 치료에 유용하다. 특히 CRC와 관련하여, CHD1L 억제제는 실시양태에서 암 줄기 세포(CSC) 줄기세포능 및 침습 가능성을 억제하는 것으로 나타난다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 CRC PDTO에서 세포독성을 유도한다. 특정 실시양태에서, CHD1L-유도된 암은 CRC, BRCA-돌연변이 유방암 및 전이성 유방암을 포함하는 유방암, BRCA-돌연변이 난소암을 포함하는 난소암, BRCA-돌연변이 췌장암을 포함하는 췌장암, 신경교종, 간암, 폐암, 전립선암, 또는 위장관(GI)암이다. 특정 실시양태에서, TCF 전사-유도된 암은 mCRC를 포함하는 CRC이다. 특정 실시양태에서, EMT-유도된 암은 mCRC를 포함하는 CRC이다. 특정 실시양태에서, 치료되는 암은 BRCA-돌연변이 유방암 및 전이성 유방암을 포함하는 유방암이다. 특정 실시양태에서, 치료되는 암은 난소암이다. 특정 실시양태에서, 치료되는 암은 췌장암이다.
본 발명은 GI 암, 특히 CRC 및 mCRC를 포함하는, CHD1L-유도된 암, 더 구체적으로 TCF 전사-유도된 암, 더욱 더 구체적으로 EMT-유도된 암을 치료하는 방법으로서, 이의 치료가 필요한 환자에게 CHD1L 억제에 효과적이거나, 비정상 TCF 전사의 억제에 효과적이거나, EMT 역행의 유도에 효과적인 CHD1L 억제제의 양을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 I-XXIII 또는 XXX-XVII 중 어느 하나의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 I, II, 또는 XX-XXIII 중 어느 하나의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 XLV 또는 XLVI 중 어느 하나의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화합물 1-177 중 어느 하나이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화합물 8-177 중 어느 하나 또는 화합물 9-117 중 어느 하나이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나이다. 더 특정 실시양태에서, 화합물은 화합물 52, 118, 126, 131, 150, 또는 169로부터 선택된다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 54, 57, 또는 75로부터 선택된다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나 이상이다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나이다. 더 구체적으로, 본 발명은 CHD1L 억제제의 유효량의 투여에 의해 특히 CRC에서 비정상 TCF-전사를 억제하는 방법을 제공한다. 더욱 더 구체적으로, 본 발명은 CHD1L 억제제의 유효량의 투여에 의해 특히 CRC 또는 mCRC에서 EMT의 역행을 유도하는 방법을 제공한다. 본 발명은 CHD1L 억제제의 유효량의 투여에 의해 특히 CRC에서 암 줄기 세포(CSC) 줄기세포능 및/또는 침습 가능성을 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명은 CHD1L 억제제의 유효량의 투여에 의해 특히 CRC에서 CHD1L-유도된 암, 또는 TCF 전사-유도된 암 또는 EMT-유도된 암의 암성 종양을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 CHD1L 억제제의 유효량의 투여에 의해 특히 CRC에서 CHD1L-유도된 암, 또는 TCF 전사-유도된 암 또는 EMT-유도된 암의 암성 고형 종양을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 CHD1L 억제제의 유효량의 투여에 의해 BRCA-돌연변이 유방암을 포함하는 유방암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 CHD1L 억제제의 유효량의 투여에 의해 난소암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 CHD1L 억제제의 유효량의 투여에 의해 췌장암을 치료하는 방법을 제공한다.
실시양태에서, CHD1L 억제제는 CHD1L의 억제에 대하여 선택적이다. 실시양태에서, 본원에서 CHD1L 억제제는 PARP 억제제가 아니다. 실시양태에서, 본원에서 CHD1L 억제제는 토포이소머라제의 억제제가 아니다. 특히, 본원에서 CHD1L 억제제는 DNA 토포이소머라제의 억제제가 아니다. 특히, 본원에서 CHD1L 억제제는 토포이소머라제 IIα형의 억제제가 아니다. 실시양태에서, 본원에서 CHD1L 억제제는 β-카테닌의 억제제, 특히 미국 특허 제9,616,047호에 기재된 바와 같은 억제제가 아니다. 실시양태에서, 본원에서 CHD1L 억제제는 Hsp90-Cdc37 상호작용적 클라이언트 단백질 발현의 억제제, 특히 제CN109761909호에 기재된 바와 같은 억제제가 아니다.
실시양태에서, 본 발명은 또한 이의 예방이 필요한 환자에게 CHD1L 억제, 비정상 TCF 전사의 억제, 또는 EMT의 역행에 효과적인 본 발명의 CHD1L 억제제의 양을 투여함으로써 CHD1L-유도된 암, TCF-전사된 암, 또는 EMT-유도된 암에서 종양 성장, 침습 및/또는 전이를 예방하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 종양은 고형 종양이다. 특정 실시양태에서, 종양은 GI 암과 관련된 것들이다. 실시양태에서, 종양은 CRC와 관련된 것들이다. 실시양태에서, 종양은 mCRC와 관련된 것들이다. 실시양태에서, 종양은 유방암과 관련된 것들이다. 실시양태에서, 종양은 BRAC-돌연변이 유방암과 관련된 것들이다. 실시양태에서, 종양은 난소암과 관련된 것들이다. 실시양태에서, 종양은 췌장암과 관련된 것들이다. 실시양태에서, 종양은 폐암과 관련된 것들이다. 실시양태에서, 종양은 간암과 관련된 것들이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 mCRC를 포함하는 CRC를 치료하는 방법으로서, 이의 치료가 필요한 환자에게 CHD1L의 억제에 효과적인 CHD1L 억제제의 양을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 mCRC를 포함하는 CRC를 치료하는 방법으로서, 이의 치료가 필요한 환자에게 비정상 TCF 전사의 억제에 효과적인 CHD1L 억제제의 양을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 mCRC를 포함하는 CRC를 치료하는 방법으로서, 이의 치료가 필요한 환자에게 EMT의 역행의 유도에 효과적인 CHD1L 억제제의 양을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 암 세포에서 아폽토시스를 유도하는 방법으로서, 암 세포를 CHD1L 억제제의 유효량과 접촉시키는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 비정상 TCF 전사의 억제에 효과적인 양으로 제공된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 EMT의 역행의 유도에 효과적인 양으로 제공된다. 실시양태에서, 암 세포는 CRC 암 세포이다. 실시양태에서, 암 세포는 mCRC 암 세포이다. 실시양태에서, 암 세포는 유방암 세포이다. 실시양태에서, 암 세포는 BRCA 돌연변이를 보유한 유방암 세포이다. 실시양태에서, 암 세포는 난소암 세포이다. 실시양태에서, 암 세포는 췌장암 세포이다. 실시양태에서, 암 세포는 폐암 세포이다. 실시양태에서, 암 세포는 간암 세포이다. 실시양태에서, 방법은 생체내 적용된다. 실시양태에서, 방법은 환자에서 생체내 적용된다. 실시양태에서, 방법은 시험관내 적용된다.
CHD1L 억제제의 투여를 포함하는 본원의 방법의 실시양태에서, CHD1L 억제제는 원하는 이익을 달성하기 위한 임의의 공지된 투여 방법 및 투여 스케줄로 투여된다. 실시양태에서, 투여는 경구 투여이다. 실시양태에서, 투여는 정맥내 주사에 의한 것이다.
실시양태에서, 경구 투여는 약제학적으로 허용되는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 경구 제형을 이용한다. 이러한 실시양태에서, 약제학적으로 허용되는 PEG는 약제학적으로 허용되는 유기 용매, 특히 약제학적으로 허용되는 극성, 비양자성 용매와 조합될 수 있다. 실시양태에서, 유기 용매는 약제학적으로 허용되는 DMSO이다. 실시양태에서, 경구 투여는 600 g/몰 미만의 분자량을 갖는 저분자량 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 경구 제형을 이용한다. 더 특정 실시양태에서, 경구 투여는 PEG 400을 이용한다. 더 특정 실시양태에서, 경구 투여는 PEG 200을 이용한다.
실시양태에서, 본 발명은 약물 내성 암을 치료하는 방법으로서, 이의 치료가 필요한 환자에게 CHD1L 억제, 비정상 TCF 전사의 억제 또는 EMT의 역행의 유도에 효과적인 CHD1L 억제제의 양을 암이 내성이 생긴 공지된 치료와 조합으로 투여하는 것을 포함하는 방법을 추가로 제공한다. 특정 실시양태에서, 암이 내성이 생긴 치료는 통상적인 화학요법 및 다른 표적 요법이다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 암에서 DNA-손상 약물의 효능을 증가시키는 방법으로서, DNA 손상 약물 및 CHD1L 억제제에 의한 암의 조합된 치료를 포함하고, 여기서 CHD1L이 DNA-손상 약물에 내성을 감소시키는데 효과적인 양으로 투여되는 방법을 제공한다. 실시양태에서, DNA-손상 약물은 토포이소머라제 억제제이다. 특히, DNA-손상 약물은 DNA 토포이소머라제 억제제이다. 특히, DNA-손상 약물은 토포이소머라제 IIα형 억제제이다. 특히, DNA-손상 약물은 에토포시드 또는 테니포시드이다. 특히, DNA-손상 약물은 SN38 또는 이의 프로드러그이다. 실시양태에서, DNA-손상 약물은 티미딜레이트 합성효소 억제제이다. 실시양태에서, 티미딜레이트 합성효소 억제제는 폴레이트 유사체이다. 실시양태에서, 티미딜레이트 합성효소 억제제는 뉴클레오타이드 유사체이다. 특정 실시양태에서, 티미딜레이트 합성효소 억제제는 랄티트렉세드, 페메트렉세드, 놀라트렉세드 또는 ZD9331이다. 특정 실시양태에서, DNA-손상 약물은 5-플루오로우라실 또는 카페시타빈이다.
실시양태에서, 약물 내성 암은 CHD1L-유도된 암이다. 실시양태에서, 약물 내성 암은 TCF 전사-유도된 암이다. 실시양태에서, 약물 내성 암은 EMT-유도된 암이다. 실시양태에서, 치료는 약물 내성 CRC를 위한 것이다. 실시양태에서, 치료는 약물 내성 mCRC를 위한 것이다. 실시양태에서, 치료는 약물 내성 유방암, 약물 내성 난소암, 약물 내성 췌장암, 약물 내성 폐암 또는 약물 내성 간암을 위한 것이다. 실시양태에서, DNA-손상 약물 및 CHD1L 억제제는 조합된 치료적 이익을 실현하는데 적절한 투여 스케줄로 임의의 공지된 방법에 의해 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 경구로 투여되고, DNA-손상 약물은 임의의 공지된 투여 방법 및 투여 스케줄로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 DNA-손상 약물의 투여 전에 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 DNA-손상 약물의 투여 전에 투여되고, 임의로 DNA-손상 약물의 투여 후에 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 DNA-손상 약물의 투여 전에 경구적으로 투여되고, 임의로 DNA-손상 약물의 투여 후에 정맥내 주사로 투여된다.
본 발명은 CHD1L-유도된 암, TCF-전사-유도된 암, 또는 EMT-유도된 암을 치료하는 방법으로서, 이의 치료가 필요한 환자에게 CHD1L 억제 또는 비정상 TCF 전사의 억제 또는 EMT의 역행의 유도에 효과적인 CHD1L 억제제의 양을 암의 치료를 위한 대안적인 방법과 조합으로 투여하는 방법을 제공한다. 실시양태에서, 암은 GI 암 또는 더 구체적으로 CRC 암, 더욱 더 구체적으로 mCRC이다. 실시양태에서, 치료를 위한 대안적인 방법은 5-플루오로우라실 중 하나 이상을 폴린산(또한 류코보린으로 공지됨), 토포이소머라제 억제제, 또는 세포독성제 또는 항신생물제와 조합으로 투여하는 것이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 5-플루오로우라실과 조합으로 또는 5-플루오로우라실 및 폴린산의 조합으로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 토포이소머라제 억제제와 조합으로, 특히 이리노테칸(캄프토테신으로도 공지된 SN38의 프로드러그) 또는 임의의 다른 공지된 SN38의 프로드러그와 조합으로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제 및 토포이소머라제 억제제를 사용하는 조합된 치료는 암에 대한 적어도 부가적 활성을 나타낸다. 실시양태에서, CHD1L 억제제와 토포이소머라제 억제제의 조합된 치료는 암에 대한 상승작용적 활성(부가적 활성보다 큼)을 나타낸다.
실시양태에서, CHD1L 억제제는 세포독성제 또는 항신생물제, 특히 백금계 항신생물제, 더 특히 시스플라틴, 카보플라틴 또는 옥살리플라틴과 조합으로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제 및 백금계 항신생물제를 사용하는 조합된 치료는 암에 대한 적어도 부가적 활성을 나타낸다. 실시양태에서, CHD1L 억제제와 백금계 항신생물제의 조합된 치료는 암에 대한 상승작용적 활성(부가적 활성보다 큼)을 나타낸다. 실시양태에서, 백금계 항신생물제 및 CHD1L 억제제는 조합된 치료적 이익을 실현하는데 적절한 투여 스케줄로 임의의 공지된 방법에 의해 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 경구적으로 투여되고, 백금계 항신생물제는 임의의 공지된 투여 방법 및 투여 스케줄에 의해 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 백금계 항신생물제의 투여 전에 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 백금계 항신생물제의 투여 전에 투여되고, 임의로 백금계 항신생물제의 투여 후에 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 백금계 항신생물제의 투여 전에 경구로 투여되고, 임의로 백금계 항신생물제의 투여 후에 정맥내 주사로 투여된다.
실시양태에서, CHD1L 억제제는 제한 없이 GI 암, 특히 CRC, 및 mCRC를 포함하는 암의 치료를 위한 화학요법 양생법(대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 투여 또는 항신생물 처치의 투여)과 조합으로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학요법 양생법 지정된 FOLFOX와 조합으로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학요법 양생법 지정된 FOLFIRI와 조합으로 투여된다. 실시양태에서, 화학요법 양생법 및 CHD1L 억제제는 치료적 이익을 실현하는데 적절한 투여 스케줄로 임의의 공지된 방법에 의해 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 경구로 투여되고, 화학요법 양생법은 임의의 공지된 투여 방법 및 투여 스케줄로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학요법 양생법의 투여 전에 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학요법 양생법의 투여 전에 투여되고, 임의로 화학요법 양생법의 투여 후에 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 PARP 억제제의 투여 전에 경구로 투여되고, 임의로 PARP 억제제의 투여 후에 정맥내 주사로 투여된다.
본 발명은 폴리(ADP)-리보스 중합효소 I(PARPI)에 민감한 암을 치료하는 방법으로서, CHD1L 억제제가 PARP 억제제와 조합으로 사용되는 방법을 제공한다. 실시양태에서, CHD1L 억제, 비정상 TCF 전사의 억제 또는 EMT의 역행의 유도에 효과적인 CHD1L 억제제의 양은 암 치료의 유효성을 적어도 향상시키기 위하여 암의 치료에 효과적인 PARP 억제제의 양과 조합으로 사용된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제 및 PARP 억제제를 사용하는 조합된 치료는 암에 대한 적어도 부가적 활성을 나타낸다. 실시양태에서, CHD1L 억제제와 PARP 억제제의 조합된 치료는 암에 대한 상승작용적 활성(부가적 활성보다 큼)을 나타낸다. 실시양태에서, 암은 PARP 억제제에 의한 치료에 민감한 암이다. 실시양태에서, 암은 PARP 억제제에 의한 치료에 내성이거나 내성이 생긴 암이다. 실시양태에서, 암은 PARP 억제제에 의한 치료에 민감하거나, PARP 억제제에 의한 치료에 내성이 생기고, CHD1L-유도된 암, TCF-유도된 암 또는 EMT-유도된 암인 암이다. 실시양태에서, 암은 상동 재조합 결핍 암(예를 들면, 문헌[Zhou et al. BioRxiv 2020] 참조)이다. 실시양태에서, 치료되는 암은 PARP 억제제에 민감한 암이고, 더 특히 유방암 또는 난소암이다. 특정 실시양태에서, 암은 BRCA-결핍 암(BRCA-돌연변이 암), 예를 들면, BRCA-결핍 유방암(BRCA-돌연변이 유방암), BRCA-결핍 난소암(BRCA-돌연변이 난소암 또는 BRCA-결핍 췌장암(BRCA-돌연변이 췌장암)이다. 특정 실시양태에서, 암은 췌장암이다. 특정 실시양태에서, 암은 폐암 또는 간암이다. 실시양태에서, 암은 전립선암이다. 실시양태에서, 치료되는 암은 GI 암, 위암, CRC 또는 mCRC이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제와 PARP 억제제의 조합된 치료는 PARP 억제제에 의한 치료에 대한 암의 내성을 역전시킨다. 실시양태에서, PARP 억제제는 올라파립, 벨리파립 또는 탈로조파립이다. 실시양태에서, PARP 억제제는 루카파립 또는 니라파립이다. 본 발명은 또한 암을 치료하는 방법으로서, CHD1L의 억제에 효과적인 CHD1L 억제제의 양의 투여와 조합된 암의 치료에 효과적인 PARP 억제제의 양의 투여를 포함하는 방법을 제공한다. 실시양태에서, PARP 억제제 및 CHD1L 억제제는 조합된 치료적 이익을 실현하는데 적절한 투여 스케줄로 임의로 공지된 방법에 의해 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 경구로 투여되고, PARP 억제제는 정맥내 주사로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제 및 PARP 억제제는 둘 다 정맥내 주사로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 PARP 억제제의 투여 전에 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 PARP 억제제의 투여 전에 투여되고, 임의로 PARP 억제제의 투여 후에 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 PARP 억제제의 투여 후에 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 PARP 억제제의 투여 전에 경구로 투여되고, 임의로 PARP 억제제의 투여 후에 정맥내 주사로 투여된다.
실시양태에서, CHD1L 억제제는 다양한 암을 포함하는 신생물 질환을 치료하기 위하여 DNA 손상을 유도하는 하나 이상의 제제와 조합된다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 DNA 손상을 유도하는 하나 이상의 제제와 조합되는 경우, 부가적 이상의 항암 활성을 나타낸다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 DNA 손상을 유도하는 하나 이상의 제제와 조합되는 경우, 상승작용적 항암 활성을 나타낸다. 이러한 CHD1L 억제제의 조합된 활성은 DNA 손상을 유도하는 예시적인 제제인 메틸메탄 설포네이트(알킬화제)와 조합으로 평가될 수 있다.
본원에서 실시예에 기재된 바와 같이, 본 발명은 또한 CHD1L-의존성 TCF 전사를 억제하는 CHD1L 억제제를 확인하는 방법으로서, 선택된 화합물이 CHD1L ATPase를 나타내는지 여부를 결정하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, cat-CHD1L ATPase의 억제가 결정된다. 실시양태에서, 30% 이상의 억제율(%)을 나타내는 화합물은 CHD1L ATPase를 억제하는 것으로 선택된다. 실시양태에서, 80% 이상의 억제율(%)을 나타내는 화합물은 CHD1L ATPase를 억제하는 것으로 선택된다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 CHD1L ATPase, 특히 cat-CHD1L ATPase에 대한 용량 반응 검정에서 10 μM 미만의 IC50을 나타낸다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 CHD1L ATPase, 특히 cat-CHD1L ATPase에 대한 용량 반응 검정에서 5 μM 미만의 IC50을 나타낸다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 CHD1L ATPase, 특히 cat-CHD1L ATPase에 대한 용량 반응 검정에서 5 μM 미만의 IC50을 나타낸다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 5 μM 미만의 IC50을 나타낸다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 3 μM 미만의 IC50을 나타낸다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 1 μM 미만의 IC50을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 본원에서 실시예에 기재된 바와 같이, CHD1L 억제제는 특히 하나 이상의 CRC 세포주를 사용하여 2D 암 세포 모델에서 TCF-전사의 억제에 대하여 평가된다. 특정 실시양태에서, TCF-전사의 억제는 TOPflash 리포터 구성물, 더 구체적으로 본원에 기재된 바와 같은 TOPflash 루시페라제 리포터 구성물을 사용하여 결정된다. 특정 실시양태에서, 세포 모델에서 CHD1L 억제제에 의한 TCF-전사의 억제는 용량 의존적이다. 특정 실시양태에서, 세포 모델에서 CHD1L 억제제에 의한 TCF-전사의 억제는 1 내지 50 μM 범위에서 용량 의존적이다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 20 μM에서 75% 이하의 세포 생존도로 정규화된 % TCF-전사를 나타낸다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 40 μM에서 50% 이하의 세포 생존도로 정규화된 % TCF-전사를 나타낸다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 암 세포주에서 TOPflash 리포터에 의해 검정된 10 μM 미만의 IC50로 TCF-전사의 용량 의존적 억제를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 암 세포주에서 TOPflash 리포터에 의해 검정된 5 μM 미만의 IC50로 TCF-전사의 용량 의존적 억제를 나타낸다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 암 세포주에서 TOPflash 리포터에 의해 검정된 3 μM 미만의 IC50로 TCF-전사의 용량 의존적 억제를 나타낸다. 실시양태에서, 암 세포주는 CRC 암 세포, 유방암 세포, 신경교종 세포, 간암 세포, 폐암 세포 또는 GI 암 세포이다. 실시양태에서, 암 세포주는 CRC 암 세포주이다. 특정 실시양태에서, CRC 암 세포주는 SW620이다.
특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 EMT를 역행시키거나 억제하는 이들의 능력에 대하여 평가된다. 특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 종양 오가노이드에서 EMT를 역행시키는 이들의 능력에 대하여 평가된다. 실시양태에서, EMT의 역행 또는 억제는 비멘틴을 발현하는 종양 오가노이드에서 평가되고, 여기서 비멘틴 발현의 용량 의존적 감소는 EMT의 역행 또는 억제를 나타낸다. 실시양태에서, EMT의 역행은 E-카드헤린을 발현하는 종양 오가노이드에서 평가되고, 여기서 E-카드헤린 발현의 용량 의존적 증가는 EMT의 역행 또는 억제를 나타낸다. 실시양태에서, EMT의 역행은 E-카드헤린, 비멘틴 또는 둘 다를 발현하는 종양 오가노이드에서 평가되고, 여기서 비멘틴의 용량 의존적 감소 및 E-카드헤린 발현의 용량 의존적 증가는 EMT의 역행 또는 억제를 나타낸다. 특정 실시양태에서, EMT의 용량 의존적 역행 또는 억제는 0.1 내지 100 μM의 화합물 농도에서 측정된다. 특정 실시양태에서, EMT의 용량 의존적 역행은 0.3 내지 50 μM의 화합물 농도에서 측정된다.
특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 암 줄기 세포 줄기세포능을 측정하기 위하여 잘 확립된 검정인 클론원성 콜로니 형성을 억제하는 이들의 능력에 대하여 평가된다. 실시양태에서, 세포는 플레이팅 전에 CHD1L 억제제의 선택된 농도로 전처리된다. 실시양태에서, 세포는 오직 CSC만이 배양에서 10일 동안 콜로리를 형성할 정도로 낮은 농도로 배양된다. 실시양태에서, 세포는 12 내지 36시간 동안 전처리된다. 실시양태에서, 세포는 24시간 동안 전처리된다. 실시양태에서, 세포는 적절한 대조군과 함께 0.5 내지 50 μM 범위의 농도로 CHD1L 억제제로 전처리된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 40 μM의 CHD1L 농도에 있어서 화합물이 없는 대조군과 비교하여 클론원성 콜로니 수의 40% 이상의 억제를 나타낸다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 20 μM의 CHD1L 농도에 있어서 화합물이 없는 대조군과 비교하여 클론원성 콜로니 수의 40% 이상의 억제를 나타낸다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 2 μM의 CHD1L 농도에 있어서 화합물이 없는 대조군과 비교하여 클론원성 콜로니 수의 40% 이상의 억제를 나타낸다. 실시양태에서, 클론원성 콜로니 형성의 억제는 배양에서 10일 동안 지속된다.
특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 임의의 공지된 방법을 사용하여, 특히 본원에서 실시예에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 침습 가능성의 손실에 대하여 추가로 평가된다.
특정 실시양태에서, CHD1L 억제제는 종양 오가노이드에서 세포독성의 유도에 의해 측정된 바와 같이 항종양 활성에 대하여 추가로 평가된다. 실시양태에서, 세포는 선택된 시간(예를 들면, 24-96시간, 바람직하게는 72시간) 동안 CHD1L 억제제의 선택된 농도(1-100 μM)로 처리된다. 실시양태에서, 세포독성은 당업계에 공지된 임의의 다양한 세포독성 시약, 예를 들면, 손상된 세포에 진입하여 진입에 대한 측정 가능한 변화를 나타내는 소분자(예를 들면, 형광성, 예를 들면, 셀톡스 그린(CellTox™ Green) 시약(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재) 또는 인큐사이트사이토톡스(IncuCyteCytotox) 시약(Sartorius, 프랑스 소재))를 사용하여 측정된다. 실시양태에서, 세포독성은 죽은 세포로부터 방출된 LDH(락테이트 탈수소효소)의 측정에 의해 측정된다.
실시양태에서, 본원에서 치료 방법, 약제학적 조성물 및 약제학적 조합물에서 유용한 CHD1L 억제제는 화학식 I- XXIII, XXX-XLII 및 XLV-XLVI의 화합물 또는 이의 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 실시양태에서, 본 발명은 본원에서 임의의 화학식의 신규한 화합물 및 특히 화학식 I-XXIII, XXXV-XLII의 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물을 제공한다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 I, II, XX-XXIII의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 XX의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 I-IX, XI-XIX, XX, XXI, XXII, XXIII 또는 XXXV-XLII의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 XLV 또는 XLVI의 화합물이다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법, 약제학적 조성물 및 약제학적 조합물은 화합물 1-177 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된 CHD1L 억제제를 이용한다. 둘 이상의 CHD1L 억제제가 본원의 방법에서 조합으로 이용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 6-39 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 40-51 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 52-68 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 70-73 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 74-101 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 102-103 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 104-116 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 117-142 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 143-177 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 150-154 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 155-159 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 28-39, 74-75, 52, 54, 62-66 또는 74-75 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 더 특정 실시양태에서, 화합물은 화합물 52, 118, 126, 131, 150, 또는 169 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 54, 57, 또는 75 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 52 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 상기 구체적으로 나열된 CHD1L 억제제는 치료 또는 약제학적 조합물을 위한 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제와 조합될 수 있다. 더 구체적으로 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제는 제한 없이 하나 이상의 PARP 억제제, 하나 이상의 토포이소머라제 억제제, 하나 이상의 티미딜레이트 합성효소 억제제 또는 하나 이상의 백금계 항신생물제를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 6, 8, 52, 54, 56, 61, 62, 65 또는 66 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 6, 8 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 52, 54 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 22, 23, 26 또는 27 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법은 화학식 II의 CHD1L 억제제를 이용하고, 화학식 II에 대하여 본원에 기재된 모든 실시양태를 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 II의 신규한 화합물, 이의 염 및 이러한 화합물 및 염을 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법은 화학식 XX의 CHD1L 억제제를 이용하고, 화학식 XX에 대하여 본원에 기재된 모든 실시양태를 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 XX의 신규한 화합물, 이의 염 및 이러한 화합물 및 염을 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법은 화학식 XXI의 CHD1L 억제제를 이용하고, 화학식 XXI에 대하여 본원에 기재된 모든 실시양태를 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 XXI의 신규한 화합물, 이의 염 및 이러한 화합물 및 염을 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법은 화학식 XXII의 CHD1L 억제제를 이용하고, 화학식 XXII에 대하여 본원에 기재된 모든 실시양태를 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 XXII의 신규한 화합물, 이의 염 및 이러한 화합물 및 염을 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법은 화학식 XXIII의 CHD1L 억제제를 이용하고, 화학식 XXIII에 대하여 본원에 기재된 모든 실시양태를 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 XXIII의 신규한 화합물, 이의 염 및 이러한 화합물 및 염을 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법은 화학식 XLV의 CHD1L 억제제를 이용하고, 화학식 XLV에 대하여 본원에 기재된 모든 실시양태를 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 XLV의 신규한 화합물, 이의 염 및 이러한 화합물 및 염을 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법은 화학식 XLVI의 CHD1L 억제제를 이용하고, 화학식 XLVI에 대하여 본원에 기재된 모든 실시양태를 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 XLVI의 신규한 화합물, 이의 염 및 이러한 화합물 및 염을 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다.
실시양태에서, 본 발명은 또한 본 발명의 CHD1L 억제제 및 임의의 이러한 억제제를 포함하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 약제학적으로 허용되는 조성물은 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
실시양태에서, 본 발명은 신규한, 본원에 화학식으로 기재된 바와 같은 임의의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 CHD1L 억제제가 화합물 1-8 또는 이의 염 또는 용매화물이 아닌 것을 제외하고는 본원에서 화학식으로 기재된 바와 같은 CHD1L 억제제 및 이의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 CHD1L 억제제가 화합물 1-9 또는 이의 염이 아닌 것을 제외하고는 본원에서 화학식으로 기재된 바와 같은 CHD1L 억제제 및 이의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 9-39, 40-68, 69-73, 74-101, 102-103, 104-116, 117-142, 또는 143-177 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 이러한 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 10-39, 40-73, 74-116, 117-142 또는 43-177 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 52-73 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 28-39, 74,75, 52, 54, 62-66, 또는 74-75 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 10-39 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 40-73 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 74-116 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 117-142 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 143-177 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 반응식 1의 화합물 10-177 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 150-154 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 본 발명은 화합물 155-159 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물에 관한 것이다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물로부터 선택된다. 더 특정 실시양태에서, 화합물은 화합물 52, 118, 126, 131, 150, 또는 169 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물로부터 선택된다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 54, 57, 또는 75 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물로부터 선택된다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물이다. 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 또는 화합물 또는 염 또는 용매화물을 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에서 이용되는 CHD1L 억제제는 화합물 52 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된다. 실시양태에서, 본 발명의 CHD1L 억제제는 5 이하의 Clog P를 갖는다. 실시양태에서, 본 발명의 CHD1L 억제제는 3-4의 Clog P를 갖는다.
특정 실시양태에서 본 발명은 하기 화합물 및 암, 특히 CRC 및 mCRC의 치료를 위하여 이들 화합물을 이용하는 본원의 방법에 관한 것이다: 화합물 52-73; 화합물 52 또는 53; 화합물 54, 55 또는 67; 화합물 57, 58 또는 59 중 어느 하나; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물; 화합물 8, 화합물 52, 화합물 53, 화합물 54, 화합물 55, 화합물 56, 화합물 57, 화합물 58, 화합물 59, 화합물 61, 화합물 62, 화합물 65, 화합물 66, 또는 화합물 67 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물. 특정 실시양태에서, 본 발명은 하기 화합물 및 암, 특히 CRC 및 mCRC의 치료를 위하여 이들 화합물을 이용하는 본원의 방법에 관한 것이다: 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 52, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 54, 57, 또는 75 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나 이상.
실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 약제학적 조합물을 제공한다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 구성요소는 함께 있거나 분리될 수 있다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나 이상의 CHDL1 억제제 및 하나 이상의 PARP 억제제 또는 하나 이상의 토포이소머라제 억제제 또는 하나 이상의 티미딜레이트 합성효소 억제제를 함유하는 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나 이상의 CHDL1 억제제 및 하나 이상의 백금계 항신생물제를 함유하는 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 각각 약제학적 조합물의 상이한 구성요소를 함유하는 둘 이상의 분리된 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나는 하나 이상의 CHD1L 억제제를 함유하고 하나는 하나 이상의 PARP 억제제 또는 하나 이상의 토포이소머라제 억제제 또는 하나 이상의 티미딜레이트 합성효소 억제제를 함유하는, 2개의 분리된 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나는 하나 이상의 CHD1L 억제제를 함유하고 하나는 하나 이상의 백금계 항신생물제를 함유하는, 2개의 분리된 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 PARP 억제제를 함유하는 단일 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 토포이소머라제 억제제를 함유하는 단일 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 티미딜레이트 합성효소 억제제를 함유하는 단일 약제학적 조성물이다. 더 구체적으로, 본 발명은 화학식 I- XXIII, XXX-XLII anf XLV-XLVI 중 어느 하나의 CHD1L 억제제 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 약제학적 조합물에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 화학식 I, II, XX-XXIII 중 어느 하나의 CHD1L 억제제 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 약제학적 조합물에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 화학식 XLV-XLVI 중 어느 하나의 CHD1L 억제제 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 약제학적 조합물에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 임의의 화합물 1-177 또는 화합물 9-177 중 어느 하나의 CHDL1 억제제 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 약제학적 조합물에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 약제학적 조합물의 CHD1L 억제제는 화합물 52-73; 화합물 52 또는 53; 화합물 54, 55 또는 67; 또는 화합물 57, 58 또는 59; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물; 화합물 8, 화합물 52, 화합물 53, 화합물 54, 화합물 55, 화합물 56, 화합물 57, 화합물 58, 화합물 59, 화합물 61, 화합물 62, 화합물 65, 화합물 66, 또는 화합물 67 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 CHD1L 억제제는 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 52, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 54, 57, 또는 75 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나 이상이다.
실시양태에서, 본 발명은 또한 암의 치료, 특히 CHD1L-유도된 암, TCF-유도된 암, 또는 EMT-유도된 암, 특히 GI 암, 더 특히 CRC 또는 mCRC의 치료를 위한 약제의 제조에서 CHD1L 억제제의 용도에 관한 것이다. 실시양태에서, 치료되는 암은 유방암, 특히 BRCA-돌연변이 유방암, 난소암, 특히 BRCA-돌연변이 난소암, 췌장암, 특히 BRCA-돌연변이 췌장암, 폐암, 전립선암 또는 간암이다. 더 구체적으로, 본 발명은 암, CHD1L-유도된 암, TCF-유도된 암, 또는 EMT-유도된 암, 특히 GI 암, 더 특히 CRC 또는 mCRC의 치료를 위한 약제의 제조에서 화학식 I- XX, XXI, XXII, XXIII, XXX-XLII 및 XLV-XLVI 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물의 CHD1L 억제제의 용도에 관한 것이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 I-IX, XI-XIX, XX, XX1, XXII, XXIII, XXXV-XLII 및 XLV-XLVI의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 I, 화학식 II, 화학식 XX, 화학식 XXI, 화학식 XXII 또는 화학식 XXIII의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 XLV 또는 XLVI의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 반응식 1의 화합물 1-117 중 하나 이상이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 반응식 1의 화합물 118-177 중 하나 이상이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화합물 52-73; 화합물 52 또는 53; 화합물 54, 55 또는 67; 또는 화합물 57, 58 또는 59; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물; 화합물 8, 화합물 52, 화합물 53, 화합물 54, 화합물 55, 화합물 56, 화합물 57, 화합물 58, 화합물 59, 화합물 61, 화합물 62, 화합물 65, 화합물 66, 또는 화합물 67 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 CHD1L 억제제는 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 52, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 54, 57, 또는 75 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다.
실시양태에서, 본 발명은 또한 암의 조합 치료, 특히 CHD1L-유도된 암, TCF-유도된 암, 또는 EMT-유도된 암, 특히 GI 암, 더 특히 CRC 또는 mCRC의 치료를 위한 약제의 제조에서 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제과 조합으로의 CHD1L 억제제의 용도에 관한 것이다. 실시양태에서, 치료되는 암은 유방암, 특히 BRCA-돌연변이 유방암 또는 전이성 유방암, 난소암, 특히 BRCA-돌연변이 난소암, 췌장암, 특히 BRCA-돌연변이 췌장암, 폐암, 전립선암, 또는 간암이다. 더 구체적으로, 본 발명은 암, CHD1L-유도된 암, TCF-유도된 암, 또는 EMT-유도된 암, 특히 GI 암, 더 특히 CRC 또는 mCRC의 조합 치료를 위한 약제의 제조에서 화학식 I- XXIII, XXX-XLII 및 XLV-XLVI 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물의 CHD1L 억제제의 용도에 관한 것이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 I, 화학식 II, 화학식 XX, 화학식 XXI, 화학식 XXII 또는 화학식 XXIII의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 XLV-XLVI의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 I-IX, XI-XIX, XX, XXI, XXII, XXIII, XXII, XXIII, XXXV-XLII 또는 XLV-XLVI의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화합물 1-117 중 하나 이상 또는 반응식 1의 화합물 8-177, 화합물 9-177 또는 화합물 118-177 중 하나 이상이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화합물 52-73; 화합물 52 또는 53; 화합물 54, 55 또는 67; 또는 화합물 57, 58 또는 59; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물; 화합물 8, 화합물 52, 화합물 53, 화합물 54, 화합물 55, 화합물 56, 화합물 57, 화합물 58, 화합물 59, 화합물 61, 화합물 62, 화합물 65, 화합물 66, 또는 화합물 67 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 CHD1L 억제제는 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 52, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 54, 57, 또는 75 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 실시양태에서, 하나 이상의 CHD1L 억제제는 하나 이상의 PARP 억제제, 하나 이상의 토포이소머라제 억제제, 하나 이상의 티미딜레이트 합성효소 억제제 또는 하나 이상의 백금계 항신생물제와 약제에서 조합된다.
실시양태에서, 본 발명은 추가로 암, CHD1L-유도된 암, TCF-유도된 암, 또는 EMT-유도된 암, 특히 GI 암, 더 특히 CRC 또는 mCRC의 치료에서 사용하기 위한 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제와 조합인 CHD1L 억제제에 관한 것이다. 실시양태에서, 치료되는 암은 유방암, 난소암, 및 췌장암, 특히 BRCA-돌연변이 유방암, BRCA-돌연변이 난소암, BRCA-돌연변이 췌장암, 전립선암, 위암, 폐암, 또는 간암이다. 더 구체적으로, 본 발명은 암, CHD1L-유도된 암, TCF-유도된 암, 또는 EMT-유도된 암, 특히 GI 암, 더 특히 CRC 또는 mCRC의 조합 치료를 위한 약제의 제조에서 화학식 I- XXIII, XXX-XLII 및 XLV-XLVI 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물의 CHD1L 억제제의 용도에 관한 것이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 I, 화학식 II, 화학식 XX, 화학식 XXI, 화학식 XXII 또는 화학식 XXIII의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 XLV-XLVI의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화학식 I-IX, XI-XIX, XX, XXI, XXII, XXIII, XXII, XXIII, XXXV-XLII 또는 XLV-XLVI의 화합물이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 반응식 1의 화합물 1-117 중 하나 이상 또는 화합물 8-177, 화합물 9-177 또는 화합물 118-177 중 하나 이상이다. 실시양태에서, CHD1L 억제제는 화합물 52-73; 화합물 52 또는 53; 화합물 54, 55 또는 67; 또는 화합물 57, 58 또는 59; 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물; 화합물 8, 화합물 52, 화합물 53, 화합물 54, 화합물 55, 화합물 56, 화합물 57, 화합물 58, 화합물 59, 화합물 61, 화합물 62, 화합물 65, 화합물 66, 또는 화합물 67 중 어느 하나 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 CHD1L 억제제는 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 52, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 54, 57, 또는 75 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 어느 하나; 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나 이상 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 실시양태에서, 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제는 하나 이상의 PARP 억제제, 하나 이상의 토포이소머라제 억제제, 하나 이상의 티미딜레이트 합성효소 억제제 또는 하나 이상의 백금계 항신생물제이다.
본 발명의 다른 실시양태 및 측면은 본원에서 도면, 상세한 설명 및 실시예의 검토하에 당업자에게 용이하게 명백할 것이다.
도 1a-1b: HTS로부터 확인된 CHD1L 억제제의 검증. (도 1a) 히트 1-7과 cat-CHD1L ATPase C50 용량 반응. 평균 IC50 값을 3개의 독립 실험으로부터 계산하고, 대표적인 그래프를 도시한다. (도 1b) TOPflash 리포터와 함께 SW620, HCT-16, 및 DLD1CHD1L-OE 세포를 사용하여 24시간 동안 3개의 용량을 사용하여 TCF 전사의 억제를 측정하였다.
도 2a-2d: CHD1L 억제제는 CRC에서 EMT 및 악성 표현형을 역행시킨다. VimPro-GFP 리포터의 하향조절(도 2a) 및 EcadPro-RFP 리포터의 상향조절(도 2b)의 고함량 이미징에 의해 측정된 EMT를 조절하는 CHD1L 억제제에 대한 용량 반응. 평균 EC50 값 ± SEM을 3개의 독립 실험으로부터 측정한다. (도 2c) DLD1CHD1L-OE 및 HCT-116 세포에서 CHD1L 억제제에 의한 전처리 후에 클론원성 콜로니 형성에 의해 측정된 CSC 줄기세포능. (도 2d) CHD1L 억제제의 처리 후의 HCT-116 세포의 침습 가능성의 억제. 웰치(Welch)의 t-시험 통계 분석을 사용하여 유의성을 결정하였고, 여기서 * = P ≤ 0.05, ** P ≤ 0.01, *** = P ≤ 0.001, **** P ≤ 0.0001이다.
도 3a-3c: 화합물 6은 CRC 세포주 및 PDTO에서 아폽토시스를 유도한다. (도 3a) Ecad-ProRFP 리포터 검정을 사용하는 유도 E-카드헤린 발현 및 셀톡스™ 그린 세포독성 검정(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)을 사용하는 세포독성의 시간 경과 평가. (도 3b) 12시간 동안 SN-38 및 6의 처리 후의 아폽토시스의 아넥신(Annexin) V-FITC 염색 분석. (도 3c) 셀티터-블루(CellTiter-Blue)® 세포 생존능 검정(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)을 사용하는 PDTO CRC102에서의 6의 세포독성. 평균 EC50 값 ± s.d.를 6개의 독립 실험으로부터 계산하고, 대표적인 그래프를 대표적인 PDTO의 삽도와 함께 도시한다. 웰치의 t-시험 통계 분석을 사용하여 유의성을 결정하였고, 여기서 * = P ≤ 0.05, ** P ≤ 0.01, *** = P ≤ 0.001, **** = P ≤ 0.0001이다.
도 4: SW620 이종이식 종양에서의 화합물 6의 축적. 화합물 6을 i.p. 주사로 가슴샘이 없는 마우스 QD에게 5일 동안 투여하여 SW620 이종이식 종양에서의 축적을 측정하였다.
도 5: CHD1L 매개된 TCF-전사의 작용의 제안된 메커니즘. CHD1L은 TCF-복합체 구성원 PARP1 및 TCF4의 결합을 통해 활성화된다[Abbott et al., 2020]. (1) 활성화되면, CHD1L은 염색질에 편재된 방해된 WRE를 향하게 된다. (2) 염색질 재형성 및 DNA 전좌는 WRE 부위의 노출을 발생시킨다. (3) TCF-복합체는 CHD1L에 의해 촉진된 노출된 WRE에 결합하여, EMT 유전자 및 다른 mCRC 관련 유전자를 촉진시킨다. CHD1L ATPase 억제제는 단계 1을 효과적으로 방지하여, EMT 및 CRC의 다른 악성 특성의 역행을 야기한다.
도 6a-6e: 화합물 8의 평가. (도 6a) 화합물 8은 2D에서 SW260 세포 배양에서 24시간 시간 경과 동안 보고된 TOPFlash 기반의 TCF-전사의 강력한 낮은 μM 용량 의존적 억제를 나타낸다. 화합물 8은 용량 의존적 방식으로 비멘틴의 하향조절(도 6b) 및 E-카드헤린 프로모터 활성의 상향조절(도 6c)에 의해 증명된, 72시간 동안 이중 리포터 SW620 종양 오가노이드에서 EMT를 효과적으로 역행시킨다. 화합물 8은 (도 6d) 24시간 동안 전처리 후 10일 동안 클론원성 콜로니 형성 및 (도 6e) 48시간 동안 HCT116 침습 가능성을 유의하게 억제한다. 스튜던트 t-시험은 * P ≤ 0.05를 나타낸다.
도 7a-7b: CHDIL 억제제에 의한 처리 후의 결장직장암 종양 오가노이드의 생존도. 도면은 기재된 화합물의 로그 농도의 함수로서의 생존도(%)의 대표적인 그래프를 도시한다. (도 7a) 화합물 6.9에 의한 처리; (도 7b) 화합물 6.11에 의한 처리; 반응식 1에서 사용되는 바와 같은 대안적인 화합물 번호는 괄호 안에 제공된다. IC50, 몇몇 경우에 평균 IC50이 각각의 도면에 제공된다. 다수의 예시적인 화합물에 대한 생존도 데이터는 표 3에 제공된다.
도 8a-8b: CHD1L-매개된 DNA 복구의 평가 및 CHD1L 억제제 6 단독 및 이리노테칸(SN38의 프로드러그)의 조합물의 "표적에 대한" 효과. CHD1L은 DNA 손상 화학요법에 내성을 유발하는, PARP-1-매개된 DNA 복구에 필수적인 요소로 공지되어 있다[Ahel et al., 2009; Tsuda et al., 2017]. CHD1L을 과발현하도록 조작된 DLD1 세포(DLD1 과발현, OE)와 비교하여, CHD1L의 낮은 수준의 발현을 갖는 DLD1 CRC 세포(DLD1 빈 벡터, EV)를 사용하였다. 도 8a는 이들 세포에서 α-튜뷸린의 대조군 발현을 고려하여 DLD1(EV)에서의 CHD1L의 발현을 DLD1(OE)와 비교하는 웨스턴 블롯이다. 도 8b는 DLD1 빈 벡터 세포 및 DLD1 과발현 세포에서 화합물 단독, SN38 단독, 및 둘의 조합물에 대한 γ-H2AX 강도(DMSO에 상대적인)의 그래프를 나타낸다. 화합물 6.0 단독은 유의한 DNA 손상을 유도하지 않거나, CHD1L의 낮은 발현으로 DLD1 세포에서 SN38과의 상승작용을 갖지 않는다. 이 그래프는 CHD1L을 과발현하는 DLD1 세포에서 SN38과 상승작용하여 DNA 손상을 유도하는 CHD1L 억제제의 "표적에 대한" 효과를 증명한다.
도 9a-9c: 예시적인 CHD1L 억제제 및 이리노테칸(SN38의 프로드러그)의 상승작용 연구. (도 9a) SW620 결장직장암(CRC) 종양 오가노이드에서 화합물 6 및 6.3의 상승작용 연구. (도 9b) SW620 결장직장암(CRC) 종양 오가노이드에서 화합물 6.9의 상승작용 연구. (도 9c) SW620 결장직장암(CRC) 종양 오가노이드에서 화합물 6.11의 상승작용 연구. 6, 및 6.3의 SN38 조합물은 결장 SW620 종양 오가노이드의 사멸에서 SN38 단독보다 각각 50배 및 150배이다. 6.9 및 6.11의 SN38 조합물은 둘 다 SN38 단독보다 100배 강력하다. 각각의 화합물 6, 6.3, 6.9 및 6.11은 SW620 종양 오가노이드의 사멸에 있어서 이리노테칸(및 SN38)과 상승작용을 나타낸다.
도 10: 마우스에서 이리노테칸과의 조합물로서 화합물 6의 생체내 상승작용 연구. 도 10은 대조군(1)과 비교하여 화합물 6 단독(2), 이리노테칸 단독(3) 또는 이의 조합물(4)에 의한 처리의 일수(28일까지)의 함수로서 종양 부피(배수) SW620 종양 이종이식의 그래프를 포함한다. 데이터 통계 유의성을 나타내는 데이터 표가 또한 제공된다. 이리노테칸과 화합물 6의 조합물은 단일 제제 치료군과 비교하여 치료 28일 내에 종양 부피가 거의 없게 결장 SW620 종양 이종이식을 유의하게 억제한다.
도 11: CHD1L 억제제 화합물 6 및 이리노테칸의 생체내 상승작용은 치료 후 계속된다. 도 11은 이리노테칸 단독(1) 또는 화합물 6 및 이리노테칸의 조합물(2)에 의한 처리 후에 일수(41일까지)의 함수로서의 종양 부피(배수) SW620 종양 이종이식의 그래프를 포함한다. 데이터 통계 유의성을 나타내는 데이터 표가 또한 제공된다. 이리노테칸과 화합물 6의 조합물은 이리노테칸 단독과 비교하여 마지막 처리(제28일) 후에 종양 부피가 거의 없게 결장 SW620 종양을 유의하게 억제한다. 이리노테칸 단독의 마지막 처리의 2주 내에 종양 부피는 마지막 처리의 부피를 초과하게 증가하고, 이는 종양 재발을 의미한다. 대조적으로 조합물은 더 낮은 종양 부피를 유지하였다.
도 12: 화합물 6 단독 및 이리노테칸과의 조합물은 비히클 및 이리노테칸 단독과 비교하여 CRC 종양 함유 마우스의 생존을 유의하게 증가시킨다. 도 12는 대조군(1)과 비교된, 화합물 6 단독(2), 이리노테칸 단독(3) 또는 이의 조합물(4)에 의한 제28일에 마지막 처리 후 52일까지의 시간의 함수로서 생존율(%)의 그래프를 포함한다. 데이터 통계 유의성을 나타내는 데이터 표가 또한 제공된다. 생존율은 단일 투여량 화합물 또는 대조군과 비교하여 조합물 처리에 의해 유의미하게 더 높았다.
도 13: 마우스에서 이리노테칸과의 조합물로서 화합물 6.11의 생체내 상응작용 연구. 도 13은 대조군(1)과 비교하여 화합물 6.11 단독(2), 이리노테칸 단독(3) 또는 이의 조합물(4)에 의한 처리의 일수(20일까지)의 함수로서 종양 부피(배수) SW620 종양 이종이식의 그래프를 포함한다. 데이터 통계 유의성을 나타내는 데이터 표가 또한 제공된다. 이리노테칸 및 화합물 6.11의 조합물은 이리노테칸 단독과 비교하여 처리의 20일 내에 종양 부피가 거의 없게 결장 SW620 종양 이종이식을 유의하게 억제한다.
도 14: CHD1L 억제제 화합물 6.11 및 이리노테칸의 생체내 상승작용은 치료 후 계속된다. 도 14는 이리노테칸 단독(1) 또는 화합물 6 및 이리노테칸의 조합물(2)에 의한 처리 후에 일수(41일까지)의 함수로서의 종양 부피(배수) SW620 종양 이종이식의 그래프를 포함한다. 처리는 제33일에 중단되었다(Tx 방출됨). 이리노테칸 및 화합물 6.11의 조합물은 이리노테칸 단독과 비교하여 마지막 처리(제33일) 후에 결장직장 SW620 종양을 유의하게 억제한다.
도 15: CHD1L 억제제 6.11 및 이리노테칸의 생체내 상승작용은 생존 이익을 유의하게 증가시킨다. 이리노테칸과 조합물인 화합물 6.11은 비히클 및 이리노테칸 단독과 비교하여 CRC 종양 함유 마우스의 생존을 유의하게 증가시킨다. 도 15는 대조군(1)과 비교하여 화합물 6 단독(2), 이리노테칸 단독(3) 또는 이의 조합물(4)에 의한 제33일에 마지막 처리 후 50일까지의 시간의 함수로서 생존율(%)의 그래프를 포함한다. 데이터 통계 유의성을 나타내는 데이터 표가 또한 제공된다. 생존율은 이리노테칸 단독 또는 대조군과 비교하여 조합물 처리에 의해 유의미하게 더 높았다.
도 16a 및 16b. CHD1L의 효소적 억제 및 SW620 종양 오가노이드 세포독성. (도 16a) CHD1L 재조합 단백질의 촉매 도메인의 정량화. (도 16b) SW620 종양 오가노이드 생존능을 측정하는 CHD1L 억제제 화합물의 용량 반응. 데이터는 DMSO 대조군에 대하여 정규화되고, 삼중 실험의 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 17a-17c. CHD1L 억제제는 M-표현형 세포에서 CHD1L 매개된 TCF-전사를 하향조절한다. (도 17a) 단리된 SW620 및 HCT116 EMT 표현형에서의 TCF-전사 활성. P-값을 일방향 ANOVA로 계산하였고, 여기서 *P < 0.05이다. TOPflash 발광 리포터 검정을 통해 TCF-전사를 측정하는, 24시간 동안 열거된 CHD1L 억제제로 처리된 SW620(도 17b) 및 HCT116(도 17c) M-표현형 단층 세포 배양의 용량 반응 그래프. 데이터는 세포 생존도로 정규화되고, 이중 실험의 평균 ± SEM로서 표시된다.
도 18a-18d. CHD1L 억제제는 CRC 세포주 및 환자 종양 오가노이드에서 강력한 세포독성제이다. (도 18a 및 18b) 단리된 M-표현형 SW620 및 HCT116 종양 오가노이드의 처리의 72시간 후 세포 생존도를 측정하는, 선두 CHD1Li의 용량 반응 그래프. (도 18c 및 18d) CRC042 및 CRC102 환자 유도된 종양 오가노이드(PDTO)의 처리의 72시간 후 세포 생존도를 측정하는, 선두 CHD1Li의 용량 반응 그래프. 데이터는 DMSO(비히클)에 대하여 정규화되고, 각각의 실험에 대하여 기술적 반복(n = 3)에 의한 삼중 실험의 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 19a-19e. CHD1Li은 M-표현형 SW620 및 HCT116 종양 오가노이드에서 MET를 유도한다. (도 19a 및 19c) 선두 CHD1L 억제제에 의해 처리된 SW620 및 HCT116 종양 오가노이드의 EGFP 형광에 의해 측정된 VimPro-GFP 프로모터 활성의 하향조절의 용량 반응 그래프. (도 19b 및 19d) 선두 CHD1L 억제제에 의한 처리 후 SW620 및 HCT116 종양 오가노이드에서 RFP 형광 신호를 통해 측정된 EcadPro-RFP 프로모터 활성의 상향조절의 배수 변화. (도 19e) VimPro-GFP 및 EcadPro-RFP 프로모터 활성 둘 다에 있어서 화합물 6.5에 의한 처리 후 HCT116 종양 오가노이드의 대표적인 최대 투영 공초점 이미지. 데이터는 이중 실험의 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 20a-20b. 암 세포 줄기세포능은 CHD1L 억제제에 의해 크게 감소한다. (도 20a) SW620 세포에서 연속 선두 CHD1Li 처리 후 형성된 클론원성 콜로니의 수. (도 20b) HCT116 세포에서 선두 CHD1L 억제제에 의한 연속 처리 후 형성된 클론원성 콜로니의 수. 데이터는 삼중 기술적 반복을 사용하여 이중 실험의 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 21a 및 21b. SW620 준중간엽(Quasi-Mesaenchymal)(GFP+) 종양 제노그래프(Xenograph)에 대한 화합물 6.11의 경구 생체 이용 가능한 효능. 도 21a는 대조군 비히클 단독(*, 닫힌 원형), 6.11 75 mg/kg(사각형) 및 6.11 125 mg/kg에 대한 처리 개시 후 일수의 함수로서의 종양 부피의 그래프이다. 데이터 점 유의성은 2 방향 ANOVA(다중 비교)를 사용하여 평가하였고, 여기서 *P<0,05, **P<0.01, ***P<0.001, ****P<0.0001, #P<0.05, ####P<0.0001. 도 21b는 처리의 개시 후 일수의 함수로서 평균 마우스 체중의 그래프이다.
상세한 설명
본 발명은 일반적으로 CRC에서 불량한 예후 및 생존과 관련된 종양형성 인자로서 상대적으로 새로운 종양유전자, CHD1L의 특성화에 관한 것이다. TCF-유도된 EMT 및 다른 악성 특성을 촉진하는데 필요한 TCF 전사 복합체에 대한 DNA 결합 인자로서 CHD1L에 대한 새로운 생물학적 기능이 증명되었다. 저널 웹 사이트(mct.aacrjournals.org)로부터 이용 가능한 문헌[Abbott et al., 2020] 및 이 문헌에 대한 보충 정보는 여기서 제시된 실험 및 데이터의 일부분의 설명을 제공하고, 그 전문은 각각 본원에 참조로서 포함된다. 저널 웹 사이트(pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.jmedchem.1c01778)로부터 이용 가능한 문헌[Prigaro et al., 2022] 및 이 문헌에 대한 지지 정보는 여기서 제시된 실험 및 데이터의 일부분의 설명을 제공하고, 그 전문은 각각 본원에 참조로서 포함된다.
CHD1L은 다양한 유형의 암(예를 들면, 유방암, 방광암, 결장직장암, 식도암, 섬유육종, 간암, 난소암, 및 위암)에서 증폭되고(Chr1q21) 과발현된다[Ma et al., 2008; Cheng et al., 2013]. CHD1L 과발현은 다수의 암에서 불량한 예후 및 전이에 대한 지표로서 특성화되었다[Ma et al., 2008; Cheng et al., 2008; Hyeon et al., 2013; Su et al., 2014]. 악성 암의 종양유전자 및 동인으로서 CHD1L을 증명하는 집합적인 문헌이 강력하지만, CHD1L이 CRC에서 분자 표적으로서의 가능성을 갖는 종양유전자라는 엄밀한 선행 조사 및 가설이 본원에서 시험된다. 15년 동안 수득된 585 CRC 환자의 큰 코호트로부터의 전사체 데이터의 인실리코(In silico) 분석이 보고되었다[Marisa et al., 2013]. CHD1L 발현은 불량한 생존과 상관관계가 있었고, 저-CHD1L 환자는 고-CHD1L 환자보다 유의하게 더 오래 산다. 동일한 코호트를 사용하여, 문헌[Marisa et al., 2013]은 CRC의 개선된 임상 계층화에 대한 6개의 별개의 하위유형을 확인하였고, CHD1L은 일반적으로 모든 6개의 하위유형에서 발현되고, 이는 CRC에 대한 치료적 표적으로서 이의 가능성을 나타낸다. CHD1L은 또한 종양 결절 전이와 상관관계가 있고, 증가된 발현은 N0(지역 확산 없음)로부터 N3(거리가 있는 지역 확산)으로 이동한다. UCCC 환자 코호트(n=25)로부터의 전사체 데이터가 분석되었고, CHD1L 발현은 IV 기 및 mCRC과 유의한 상관관계가 있다는 것이 밝혀졌다. 문헌 기록 및 본원의 작업은 CHD1L이 악성 CRC를 촉진하는 종양유전자이고, 이의 높은 발현은 CRC 환자의 불량한 예후 및 생존과 상관관계가 있다는 것을 증명한다.
TCF-유도된 EMT 및 다른 악성 특성을 촉진하는데 필요한 TCF-전사 복합체에 대한 DNA 결합 인자로서의 CHD1L에 대한 새로운 생물학적 기능이 본원에서 증명된다. CHD1L의 첫번째로 공지된 억제제인 HTS 약물 전달의 사용은 PDTO를 포함하는 CRC의 세포 기반의 모델에서 우수한 약리학적 효능을 나타내는 것으로 확인되고 특성화되었다. CHD1L 억제제는 CHD1L-매개된 TCF-전사를 효과적으로 방지하여, CSC EMT 및 줄기세포능 및 침습 가능성을 포함하는 다른 악성 특성의 역행을 야기한다. 특히, CHD1L 억제제 6은 EMT의 역행 및 사멸 수용체를 통해 절단된 E-카드헤린 매개된 외인성 아폽토시스의 유도와 일치하는 세포 사멸을 유도하는 능력을 나타낸다. 추가로, 화합물 6은 SN38 단독과 비교하여 강력한 DNA 손상 유도를 나타내는 SN38(즉, 이리노테칸)과 상승작용하고, 이는 PARP1/CHD1L 매개된 DNA 복구의 억제와 일치한다. 급성 간 독성 없이 약물 유사 물리화학적 특성 및 바람직한 생체내 PK/PD 특성을 갖는 CHD1L 억제제가 확인되었다.
본원에 제시된 데이터를 기반으로, CRC 종양 진행 및 전이에 포함된 CHD1L-매개된 TCF-유도된 EMT의 작용 메커니즘이 제시된다(도 5). 이 메커니즘에서, TCF-복합체는 구체적으로 CHD1L을 동원하여 전이성 유전자 발현을 동적으로 조절한다. 이 메커니즘의 중심에서, PARP1 및 TCF4와의 단백질 상호작용을 통해 TCF-복합체에 의해 지시되는 경우, CHD1L은 뉴클레오솜 방해된 WRE에 결합한다. 중요하게는, PARP1은 자동 억제를 방출하는 매크로 도메인 결합을 통해 CHD1L의 주요 세포 활성제로서 특성화된다[Lehmann et al., 2017; Gottschalk et al., 2009]. 게다가, PARP1은 β-카테닌 및 TCF4와의 상호작용을 형성하는 TCF-복합체의 필요 구성요소이다[Idogawa et al., 2005]. 그러므로, 메커니즘은 CHD1L이 TCF-복합체에 의해 동원되고 PARP1 및 TCF4에 의해 활성화된다는 것을 나타낸다. 활성화되면, CHD1L은 뉴클레오솜 전좌에 의해 WRE를 발현하여, WRE에 대한 TCF-복합체의 결합 및 EMT를 촉진하는 악성 유전자의 전사를 촉진한다. CHD1L 억제제는 CHD1L ATPase 활성을 억제함으로써 고유한 작용 메커니즘을 갖고, 이는 TCF-복합체에 대한 WRE의 노출을 방지하여, EMT 및 특히 mCRC와 관련된 TCF-표적 유전자의 전사를 억제한다.
본원에 기재된 바와 같은 CHD1L의 소분자 억제제는 CHD1L ATPase 활성의 억제를 기반으로 스크린에서 확인되었다. 확인된 특정 억제제는 급성 간 독성 없이 약물 유사 물리화학적 특성 및 바람직한 생체내 PK/PD 특성을 나타낸다. 이러한 억제제는 다른 CHD1L-유도된 암 중에서 CRC 및 mCRC(전이성 CRC)의 치료로서 효과적이다.
약물 가능성의 평가를 위한 널리 공지된 방법을 사용하여 주어진 치료적 응용에 응용하기 위한 본 발명의 활성 화합물을 추가로 평가할 수 있다. 용어 "약물 가능성"은 투여, 분포, 대사 및 배설에 대한 유망한 약물의 약제학적 특성에 관한 것이다. 약물 가능성은 당업계에서 다양한 방식으로 평가된다. 예를 들면, 생체내 흡수 및 투과성에 관한 분자의 약물 유사 특성을 결정하기 위한 "리핀스키의 5 법칙"이 적용될 수 있다[Lipinski et al., 2001; Ghose, et al., 1999].
본 발명은 CHD1L 억제제의 투여가 CHD1L 억제제가 아닌 하나 이상의 항암제의 투여와 조합되는 조합 요법에 대한 방법을 제공한다. 실시양태에서, 다른 항암제는 토포이소머라제 억제제, 백금계 항신생물제, PARP 억제제 또는 이러한 억제제 및 제제 중 둘 이상의 조합이다. 실시양태에서, 조합 요법은 CHD1L 억제제와 토포이소머라제 억제제의 투여를 조합한다. 실시양태에서, 조합 요법은 CHD1L 억제제와 백금계 항신생물제의 투여를 조합한다. 실시양태에서, 조합 요법은 CHD1L 억제제와 PARP 억제제의 투여를 조합한다. 실시양태에서, 조합 요법은 CHD1L 억제제와 토포이소머라제 억제제 및 PARP 억제제의 투여를 조합한다. 실시양태에서, 조합 요법은 CHD1L 억제제의 투여와 치료되는 특정 암에 대한 화학요법을 조합한다. 본원의 실시양태에서, CHD1L 억제제 및 다른 항신생물제의 조합은 조합으로 상승작용적 활성을 나타낸다.
본원의 실시양태에서, CHD1L을 이용하는 요법은 주어진 암에 적합한 방사선 요법과 조합될 수 있다.
다양한 PARP 억제제가 당업계에 공지되어 있다(예를 들면, 문헌[Rouleau et al., 2010; Yi et al., 2019; Zhou et al., 2020; Wahlberg et al., 2012; D'Andrea, 2018] 참조). 각각의 문헌은 PARP 억제제, PARP 억제제의 작용 메커니즘, PARP 억제제를 사용하여 치료되는 암, 및 PARP 억제제에 대한 내성의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 본원의 특정 실시양태에서, PARP-내성 암은 CHD1L 억제제 및 PARP 억제제의 조합물에 의해 치료된다.
다양한 토포이소머라제 억제제가 당업계에 공지되어 있고, 임상적으로 이용되어 왔다(예를 들면, 문헌[Hevener, 2018; Bailly, 2012; Nitiss J, 2009 "Targeting DNA topoisomerase II in cancer chemotherapy," Nature Rev. Cancer, 9:338-350] 참조). 각각의 문헌은 토포이소머라제 억제제의 유형, 특정 토포이소머라제 억제제, 토포이소머라제의 억제 메커니즘, 토포이소머라제 억제제를 사용하여 치료되는 암 및 토포이소머라제 억제제를 사용하는 조합 요법의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 실시양태에서, 본원의 방법 및 조성물에서 유용한 토포이소머라제 억제제는 토포이소머라제 I 억제제이다. 실시양태에서, 본원의 방법 및 조성물에서 유용한 토포이소머라제 억제제는 캄프토테신 및 이의 프로드러그, 이리노테칸, 토포테칸, 벨로테칸, 이노테칸, 또는 인디미테칸을 포함한다. 실시양태에서, 본원의 방법 및 조성물에서 유용한 토포이소머라제 억제제는 에토포시드 또는 테니포시드를 포함한다. 실시양태에서, 본원의 방법, 약제학적 조합물 및 조합된 암 요법에서 유용한 토포이소머라제 억제제는 나미테칸, 실라테칸, 보사록신, 알독소루비신, 독소루비신, 베카테카린, 또는 에도테카린을 포함한다.
실시양태에서, 본원의 방법 및 조성물에서 유용한 토포이소머라제 억제제는 토포이소머라제 I 억제제이다. 예시적인 토포이소머라제 II-알파 억제제는, 예를 들면, 2020년 10월 8일에 공개된 공개된 PCT 특허 제WO2020/0205991호, 및 2019년 4월 1일에 출원된 이의 우선권 문서 미국 가특허 출원 제62/827,818호에 보고되어 있다. 이들 참조문헌은 각각 토포이소머라제 억제제의 유형, 특정 토포이소머라제 억제제, 토포이소머라제의 억제 메커니즘, 토포이소머라제 억제제를 사용하여 치료되는 암 및 토포이소머라제 억제제를 사용하는 조합 요법의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
다양한 백금계 항신생물제(또한 플라틴으로 지칭됨)가 당업계에 공지되어 있고, 임상적으로 또는 임상 시험에서 사용되어 왔다(예를 들면, 문헌[Wheate et al., 2010] 참조). 이 문헌은 백금계 항신생물제의 유형, 특정 백금계 항신생물제, 이러한 제제의 작용 메커니즘, 이러한 제제를 사용하여 치료되는 암 및 백금계 항신생물제를 사용하는 조합 요법의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 실시양태에서, 본원의 방법 및 조성물에서 유용한 백금계 항신생물제는 시스플라틴, 카본 플라틴, 옥살리플라틴, 네다플라틴, 로바플라틴, 또는 헵타플라틴을 포함한다. 실시양태에서, 백금계 항신생물제는 사트라플라틴, 또는 피코플라틴을 포함한다. 백금계 항신생물제는 리포솜적으로 캡슐화되거나(예를 들면, 리포플라틴(Lypoplatin)™), 나노중합체에 결합될 수 있다(예를 들면, 프로린닥(ProLindac)™).
다양한 티미딜레이트 합성효소 억제제가 당업계에 공지되어 있고, 임상적으로 특히 CRC의 치료에서 이용되어 왔다[Papamichael, 2009; Lehman, 2002]. 본원에 방법 및 조성물에서 유용한 티미딜레이트 합성효소 억제제는 제한 없이 폴레이트 유사체 및 뉴클레오타이드 유사체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 티미딜레이트 합성효소 억제제는 랄티트렉세드, 페메트렉세드, 놀라트렉세드 또는 ZD9331이다. 더 특정한 실시양태에서, 티미딜레이트 합성효소 억제제는 5-플루오로우라실 또는 카페시타빈이다.
본 발명은 하기 화학식의 CHD1L 억제제를 제공한다:
본 발명의 방법, 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물에서 유용한 화합물은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
[화학식 I]
Figure pct00003
상기 식에서,
B 고리는 1개, 2개 또는 3개의 5원 또는 6원 고리를 갖는 임의로 치환된 적어도 2가 헤테로아릴 고리 또는 고리 시스템이고, 이들 고리 중 임의의 2개 또는 3개는 융합된 고리일 수 있고, 여기서 고리는 카보사이클릭, 헤테로사이클릭, 아릴 또는 헤테로아릴 고리이고, 고리 중 적어도 하나는 헤테로아릴이고;
B 고리에서, 각각의 X는 독립적으로 N 또는 CH로부터 선택되고, 적어도 하나의 X는 N이고;
RP는 임의로 치환된 1차 또는 2차 아민기 [-N(R2)(R3)]이거나, -(M)x-P 기이고, 여기서 P는 -N(R2)(R3) 또는 아릴 또는 헤테로아릴 기이고, x는 M의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고, M은 임의로 치환된 연결기 -(CH2)n- 또는 -N(R)(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-6(포괄적)의 정수이고;
Y는 -O-, -S-, -N(R1)-, -CON(R1)-, -N(R1)CO-, -N(R1)CON(R1)-, -SO2N(R1)-, 또는 -N(R1)SO2-로 이루어진 군으로부터 선택된 2가 원자 또는 기이고;
L1은 임의로 치환되고 포화되거나 이중 결합을 함유하는(시스 또는 트랜스일 수 있는) 임의의 1-4개의 탄소 연결기이고, 여기서 x는 L1의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고;
A 고리는 1개, 2개 또는 3개의 고리를 갖는 임의로 치환된 적어도 2가 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리 또는 고리 시스템이고, 이들 고리 중 2개 또는 3개는 융합될 수 있고, 각각의 고리는 3-10개의 탄소 원자 및 임의로 1-6 헤테로원자를 갖고, 여기서 각각의 고리는 임의로 포화, 불포화 또는 방향족이고;
Z는 R'기로 치환된 적어도 하나의 질소를 함유하는 2가 기이고,
실시양태에서, Z는 -N(R')-, -CON(R')-, -N(R')CO-, -CSN(R')-, -N(R')CS-, -N(R')CON(R')-, -SO2N(R')-, -N(R')SO2-, -CH(CF3)N(R')-, -N(R')CH(CF3)-, -N(R')CH2CON(R')CH2-, -N(R')COCH2N(R')CH2-,
Figure pct00004
로부터 선택된 2가 기이거나,
2가 Z기는 적어도 하나의 질소 고리 구성원을 갖는 5원 또는 6원 헤테로사이클릭 고리, 예를 들면,
Figure pct00005
또는
Figure pct00006
를 포함하고,
L2는 임의로 치환되고 포화되거나 이중 결합을 함유하는(시스 또는 트랜스일 수 있는) 임의의 1-4개의 탄소 연결기이고, 여기서 z는 L2의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고;
R은 수소, 지방족기, 카보사이클릴기, 아릴기, 헤테로사이클릴기 및 헤테로아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
각각의 R'은 독립적으로 수소, 지방족기, 카보사이클릴기, 아릴기, 헤테로사이클릴기 및 헤테로아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
R1은 수소, 지방족기, 카보사이클릴기, 아릴기, 헤테로사이클릴기 및 헤테로아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
R2 및 R3은 독립적으로 수소, 지방족기, 카보사이클릴기, 아릴기, 헤테로사이클릴기 및 헤테로아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되거나,
R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 포화, 부분 불포화 또는 방향족 고리인 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
RA 및 RB는 각각 지시된 A 및 B 고리 또는 고리 시스템 상의 수소 또는 1-10개의 비수소 치환기를 나타내고, 여기서 RA 및 RB 치환기는 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록실, 시아노, 니트로, 아미노, 일치환 또는 이치환된 아미노(-NRCRD), 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로사이클릴, 알콕시, 아실, 할로알킬, -COORC, -OCORC, -CONRCRD, -OCONRCRD, -NRCCORD, -SRC, -SORC, -SO2RC,및 -SO2NRCRD로부터 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로사이클릴, 알콕시, 및 아실은 임의로 치환되고;
각각의 RC 및 RD는 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 하나 이상의 할로겐, 알킬, 알케닐, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클릴, 아릴 치환된 알킬, 또는 헤테로사이클릴 치환된 알킬로 임의로 치환되고;
RH는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴 기이고;
임의의 치환은 하나 이상의 할로겐, 니트로, 시아노, 아미노, 모노- 또는 디-C1-C3 알킬 치환된 아미노, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C1-C3 할로알킬, C1-C6 아실, C1-C6 아실옥시, C1-C6 알콕실카보닐, C6-C12 아릴, C5-C12 헤테로아릴, C3-C12 헤테로사이클릴, C1-C3 알콕시, C1-C6 아실, -COORE, -OCORE, -CONRERF, -OCONRERD, -NRECORF, -SRE, -SORE, -SO2RE, 및 -SO2NRERF에 의한 치환을 포함하고, 여기서 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로사이클릴, 알콕시, 및 아실은 임의로 치환되고;
각각의 RE 및 RF는 수소, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C1-C3 할로알킬, C6-C12 아릴, C5-C12 헤테로아릴, C3-C12 헤테로사이클릴, C1-C3 알콕시, C1-C6 아실로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 하나 이상의 할로겐, 니트로, 시아노, 아미노, 모노- 또는 디-C1-C3 알킬 치환된 아미노, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C1-C3 할로알킬, C6-C12 아릴, C5-C12 헤테로아릴, C3-C12 헤테로사이클릴, C1-C3 알콕시, C1-C6 아실옥시, C1-C6 알콕시카보닐 및 C1-C6 아실로 임의로 치환된다.
화학식 I의 실시양태에서,
R은 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
각각의 R'은 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
R1-R3은 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
R1-R3 중 하나 이상은 사이클로알킬 치환된 알킬, 예를 들면, 사이클로프로필메틸, 사이클로펜틸메틸, 또는 사이클로헥실메틸이고;
R은 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
각각의 R'은 독립적으로 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
R1은 수소 또는 C1-C3 알킬이고;
R2 및 R3은 독립적으로 수소, 또는 C1-C3 알킬로부터 선택되거나;
R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 포화된 5-7원 헤테로사이클릭 고리를 형성한다.
화학식 I의 실시양태에서, A 고리는 2가이고, 1 또는 2개의 헤테로원자, 특히 1 또는 2개의 질소를 함유할 수 있는 단일 6원 방향족 고리이다. 실시양태에서, 2가 A 고리는 1,4-페닐렌 또는 2,5-피리딜렌이다.
화학식 I의 실시양태에서, 2가 B 고리는 적어도 하나의 전기음성 치환기로 치환된다. 실시양태에서, 전기음성 치환기는 할로겐이다. 실시양태에서, 전기음성 치환기는 1-3개의 탄소 원자를 갖는 할로알킬기이다. 실시양태에서, 전기음성 치환기는 플루오르이다. 실시양태에서, 전기음성 치환기는 트리플루오로메틸(CF3-)이다. 상기 실시양태의 추가의 실시양태에서, x는 1이다. 화학식 I의 관련 실시양태에서, B 고리는 적어도 하나의 할로겐으로 치환되고, x는 1이고, L1은 -CH2-이다. 화학식 I의 관련 실시양태에서, B 고리는 적어도 하나의 플루오르로 치환되고, x는 1이고, L1은 -CH2-이다.
화학식 I의 실시양태에서, 2가 B 고리는 적어도 하나의 C1-C3 알킬기로 치환된다. 화학식 I의 실시양태에서, B 고리는 적어도 하나의 메틸기로 치환된다.
화학식 I의 특정 실시양태에서,
고리 A는 임의로 치환된 페닐렌이거나;
고리 A는 임의로 치환된 1,4-이치환된 페닐렌이거나;
고리 A는 임의로 치환된 나프틸렌이거나;
고리 A는 임의로 치환된 2,6-이치환된 나프틸렌이거나;
고리 A는 임의로 치환된 피리딜렌이거나;
고리 A는 임의로 치환된 2,5-피리딜렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 피리딜렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 피리미딜렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 피라지닐렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 트리아지닐렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 퀴나졸리닐렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 프테리디닐렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 퀴놀리닐렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 이소퀴놀리닐렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 나프티리디닐렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 피리도피리미딜렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 피리미도피리딜렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 피리노피리딜렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 피라노피리미딜렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 퓨리닐렌이거나;
고리 B는 임의로 치환된 6,8-이치환된 퓨리닐렌이거나;
고리 A는 임의로 치환된 페닐렌이고, 고리 B는 임의로 치환된 피리미디닐렌이거나;
고리 A는 임의로 치환된 페닐렌이고, 고리 B는 임의로 치환된 프테리디닐렌이다.
실시양태에서, RA는 모든 이용 가능한 고리 위치에서 H를 나타낸다.
실시양태에서, RA는 이용 가능한 고리 위치에서 치환된 하나의 C1-C3 알킬을 나타낸다.
실시양태에서, RA는 이용 가능한 고리 위치에서 치환된 하나의 메틸을 나타낸다.
실시양태에서, RA는 이용 가능한 고리 위치에서 치환된 하나의 할로겐을 나타낸다.
실시양태에서, RA는 이용 가능한 고리 위치에서 치환된 하나의 플루오르를 나타낸다.
실시양태에서, RA는 이용 가능한 고리 위치에서 치환된 하나의 C1-C3 할로알킬을 나타낸다.
실시양태에서, RA는 이용 가능한 고리 위치에서 하나의 트리플루오로메틸기를 나타낸다.
실시양태에서, RB는 모든 이용 가능한 고리 위치에서 H를 나타낸다.
바람직한 A 및 B 고리 치환은 하나 이상의 C1-C3 알킬, C3-C7 사이클로알킬, C4-C10 사이클로알킬 치환된 알킬, C2-C4 알케닐, C1-C3 알콕시, C1-C3 아실, C1-C4 알콕시카보닐, C1-C4 아실옥시, 카복실, 할로겐, 하이드록실, C1-C3 할로알킬, 일치환 또는 이치환된 페닐 또는 일치환 또는 이치환된 벤질을 포함한다. 더 특정한 A 및 B 고리 치환은 메틸, 에틸, 이소프로필, 사이클로프로필, 사이클로프로필메틸, 메톡시, 에톡시, 페닐, 벤질, 할로페닐, 할로벤질, Cl, Br, F, CF3-, HO-, CF3O-, CH3CO-, HOOC-, CH3OCO-및 CHCO-를 포함한다.
실시양태에서, 2가 A 고리는 페닐 고리 또는 벤질 고리가 아니다. 실시양태에서, A 고리는 페닐 고리가 아니다. 실시양태에서, A 고리는 비치환된 페닐 고리 또는 비치환된 벤질 고리가 아니다. 실시양태에서, A 고리는 비치환된 페닐 고리가 아니다.
실시양태에서, 2가 B 고리는 반응식 4에 도시된 구조, RB1-RB17 중 하나를 갖는다. 실시양태에서, 2가 B 고리는 구조 RB2-RB5를 갖고, 여기서 RB는 화학식 I에 기재된 바와 같은 임의의 치환을 나타낸다. 고리는 지시된 위치에서 RP 또는 Y에 결합된다. 더 구체적으로, RB는 C1-C3 알킬, 할로겐 또는 C1-C3 할로알킬 중 하나 이상, 더 구체적으로 C1-C3 플루오로알킬, 더 구체적으로 하나 이상의 메틸, 트리플루오로메틸 또는 플루오르에 의한 고리 탄소에서의 임의의 치환을 나타낸다. 실시양태에서, 2가 B 고리는 구조 RB6을 갖고, 이는 지시된 위치에서 RP 또는 Y에 결합하고, 여기서 RB는 화학식 I에 기재된 바와 같은 임의의 치환을 나타낸다. 더 구체적으로, RB는 C1-C3 알킬, 할로겐 또는 C1-C3 할로알킬 중 하나 이상, 더 구체적으로 C1-C3 플루오로알킬, 더 구체적으로 하나 이상의 메틸, 트리플루오로메틸 또는 플루오르에 의한 고리 탄소에서의 임의의 치환을 나타낸다. 실시양태에서, B 고리는 RB7-RB17에 도시된 바와 같고, 이는 지시된 위치에서 RP에 결합되고 Y에 결합되고, 여기서 RB는 화학식 I에 기재된 바와 같은 임의의 치환을 나타낸다. 더 구체적으로, RB는 C1-C3 알킬, 할로겐 또는 C1-C3 할로알킬 중 하나 이상, 더 구체적으로 C1-C3 플루오로알킬, 더 구체적으로 하나 이상의 메틸, 트리플루오로메틸 또는 플루오르에 의한 고리 탄소에서의 임의의 치환을 나타낸다. 특정 실시양태에서, B 고리는 RB14-17에 도시된 바와 같다.
실시양태에서, 2가 B 고리는 반응식 4에 도시된 바와 같은 구조, 화학식 RB1을 갖고, 여기서 X1 및 X2는 CH 및 N으로부터 선택되고, X1 및 X2 중 적어도 하나는 N이고, X3-X6은 CH, CH2, O, S, N 및 NH로부터 선택되고, 여기서 도시된 B 고리는 1-X6의 선택에 따라 포화, 불포화 또는 방향족이고, RB는 화학식 I에서 정의된 바와 같은 임의의 치환을 나타낸다. 실시양태에서, RB는 수소를 나타내고, B 고리는 치환되지 않는다. 실시양태에서, RB는 하나 이상의 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 아실, C1-C3 알콕시를 나타낸다. 실시양태에서, RB는 하나 이상의 F, Cl 또는 Br, 메틸, 에틸, 아세틸 또는 메톡시 또는 이의 조합을 나타낸다. 화학식 I의 실시양태에서, B 고리는 반응식 4에 도시된 바와 같은 임의의 RB2-RB5로부터 선택된다.
화학식 I의 실시양태에서,
x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이거나;
x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이거나;
x는 0이고, L1은 부재하거나;
y는 1이고, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이거나;
y는 1이고, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이거나;
y는 1이고, L2는 -CH=CH-이거나;
y는 1이고, 및 L2는 트랜스 -CH=CH-이거나;
x 및 y는 둘 다 0이거나;
x는 1이고, y는 0이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이거나;
y는 1이고, x는 0이고, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이거나;
x 및 y는 둘 다 1이고, L2 및 L1은 둘 다 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이다.
화학식 I의 실시양태에서,
Y는 -O-, -S-, -N(R1)-, -CON(R1)-, -N(R1)CO- 또는 -N(R1)CON(R1)-이거나;
Y는 -O-, -S-, -NH-, -CONH-, 또는 -NHCO- 또는 -N(R1)CON(R1)-이거나;
Y는 -N(R1)-, -CON(R1)-, -N(R1)CO- 또는 -N(R1)CON(R1)-이거나;
Y는 -N(R1)-, -CON(R1)-, 또는 -N(R1)CO-이거나;
Y는 -N(R1)CON(R1)-이거나;
Y는 -N(H)-, -CON(H)-, -N(H)CO- 또는 -N(H)CON(H)-이거나;
Y는 -N(H)-, -CON(H)-, 또는 -N(H)CO-이거나;
Y는 -N(H)CON(H)-이거나;
R1은 수소, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 할로알킬, 특히 C1-C3 플루오로알킬이거나;
R1은 수소, 메틸기 또는 CF3-이거나;
R1은 수소이거나;
Y는 -N(R1)-, -CON(R1)-, 또는 -N(R1)CO-이고, R1은 수소, 메틸 또는 CF3-이거나;
Y는 -N(R1)-이고, R1은 수소, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 할로알킬, 특히 C1-C3 플루오로알킬이거나;
Y는 -N(R1)-이고, R1은 수소, 메틸 또는 CF3-이다.
화학식 I의 실시양태에서, x 및 y는 둘 다 0이고, Y는 -N(R1)-이다.
화학식 I의 실시양태에서, x 및 y는 둘 다 0이고, Y는 -NH-이다.
화학식 I의 실시양태에서, x 및 y는 둘 다 0이고, Y는 -CONH-이다.
화학식 I의 실시양태에서, x 및 y는 둘 다 0이고, Y는 -NHCO-이다.
화학식 I의 실시양태에서, x 및 y는 둘 다 0이고, Y는 -NHCONH-이다.
화학식 I의 실시양태에서,
Z는 -N(R')-, -CON(R')-, 또는 -N(R')CO-이거나;
Z는 -CH(CF3)N(R')-이거나;
Z는 -SO2N(R')-이거나;
Z는 -N(R')CON(R')-이거나;
Z는 -N(R')CH2CON(R')CH2-이거나;
Z는
Figure pct00007
이거나;
Z는
Figure pct00008
또는
Figure pct00009
이거나;
Z는
Figure pct00010
또는
Figure pct00011
이거나;
R'은 수소, C1-C6 알킬 또는 C1-C3 할로알킬, 특히 C1-C3 플루오로알킬이거나;
R'은 수소 또는 C1-C3 알킬이거나;
R'은 수소, 메틸 또는 CF3-이거나;
R'은 수소 또는 메틸이거나;
R'은 수소이거나;
Z는 -N(R')-, -CON(R')-, 또는 -N(R')CO-이고, R'은 수소 또는 메틸이거나;
Z는 -N(R')-, -CON(R')-, -N(R')CO- 또는 -N(R')CON(R')이고, R'은 수소이거나;
Z는 -CON(R')- 또는 -N(R')CO-이고, R'은 수소 또는 메틸이거나;
Z는 -N(R')CON(R')-이고, R'은 둘 다 수소이거나;
Z는
Figure pct00012
또는
Figure pct00013
이고, R'은 수소이거나;
Z는
Figure pct00014
또는
Figure pct00015
이고, R'은 수소이다.
화학식 I의 실시양태에서,
x는 0이거나;
x는 1이고, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1-3이거나;
y는 0, x는 1이고, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1-3이거나;
x는 0이고, Z는 -N(R')-, -CON(R')-,-N(R')CO- 또는 -N(R')CON(R')-이거나;
x는 0이고, Z는 -N(R')-, -CON(R')-,-N(R')CO- 또는 -N(R')CON(R')-이고, R'은 수소 또는 메틸이거나;
x는 0이고, Z는 -N(H)-, -CON(H)-,-N(H)CO- 또는 -N(H)CON(H)-이거나;
x는 0이고, Z는 -CON(R')-이거나;
x는 0이고, Z는 -CON(R')- 또는 -N(R')CO-이고, R'은 수소 또는 메틸이거나;
x는 0이고, Z는 -CONH- 또는 -NHCO-이거나;
x는 0이고, Z는 -CONH-, -NHCO- 또는 -NHCONH-이거나;
x는 1이고, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1-3이고, Z는 -N(R1)-, -CON(R')-, -N(R')CO- 또는 -N(R')CON(R')-이거나;
x는 1이고, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1-3이고, Z는 -NH-, -CONH-, -NHCO- 또는 -NHCONH-이거나;
x는 1이고, L2는 -CH2-이고, Z는 -NH-, -CONH-, -NHCO- 또는 -NHCONH-이거나;
x는 1이고, L2는 -CH2-CH2-이고, Z는 -NH-, -CONH-, -NHCO- 또는 -NHCONH-이거나;
x는 1이고, L2는 -CH2-CH2-CH2-이고, Z는 -NH-, -CONH-, -NHCO- 또는 -NHCONH-이거나;
x는 1이고, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1-3이고, Z는 -CON(R')-이거나;
x는 1이고, L2는 -CH2-이고, Z는 -CON(R')-이거나;
x는 1이고, L2는 -CH2-CH2-이고, Z는 -CON(R')-이거나;
x는 1이고, L2는 -CH2-이고, Z는 -CONH-이거나;
x는 1이고, L2는 -CH2-CH2-이고, Z는 -CONH-이거나;
x는 1이고, L2는 -CH2-CH2-CH2-이고, Z는 -CONH-이거나;
x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고, Z는 -CON(R')-이거나;
x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고, Z는 -CONH-이거나;
x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고, Z는 -N(R')CO-이거나;
x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고, Z는 -NHCO-이거나;
x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고, Z는 -NHCONH-이거나;
y는 0이고, x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고, Z는 -CONH-이거나;
y는 0이고, Y는 -N(R1)-이고, x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고, Z는 -CONH-;
y는 0이고, Y는 -NH-이고, x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고, Z는 -CONH-이거나;
y는 0이고, Y는 -NH-이고, x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고, Z는 -CONH-, -NHCO-, 또는 -NHCONH-이다.
화학식 I의 실시양태에서,
RP는 적어도 하나의 질소를 함유하거나;
RP가 -(M)x-P이고, x = 0인 경우, P는 -N(R2)(R3)이거나 P는 적어도 하나의 고리 N을 갖는 헤테로사이클릭 또는 헤테로아릴기이거나;
RP가 -(M)x-P이고, x = 1이고, M = -(CH2)n-인 경우, P는 -N(R2)(R3)이거나 P는 적어도 하나의 고리 N을 갖는 헤테로사이클릭 또는 헤테로아릴기이다.
화학식 I의 실시양태에서, RP는 하기와 같다:
-N(R2)(R3);
-(M)-N(R2)(R3), 여기서 M은 임의로 치환된 연결기 -(CH2)n- 또는 -N(R)(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-6(포괄적)의 정수이고, R은 수소 또는 1-3개의 탄소 원자를 갖는 임의로 치환된 알킬기이고;
-(M)-N(R2)(R3), 여기서 M은 임의로 치환된 연결기 -(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-6(포괄적)의 정수이고, R은 수소 또는 1-3개의 탄소 원자를 갖는 임의로 치환된 알킬기이고;
-(M)-N(R2)(R3), 여기서 M은 임의로 치환된 연결기 -(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-6(포괄적)의 정수이고, R은 수소 또는 1-3개의 탄소 원자를 갖는 임의로 치환된 알킬기이고, 임의의 치환은 하나 이상의 할로겐 또는 하나 이상의 C1-C3 알킬기에 의한 치환이고;
-(M)-N(R2)(R3), 여기서 M은 임의로 치환된 -N(R)(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-6(포괄적이고 R은 수소이다)의 정수이고, R은 수소 또는 1-3개의 탄소 원자를 갖는 임의로 치환된 알킬기이고,
-(M)-N(R2)(R3), 여기서 M은 임의로 치환된 -N(R)(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-6(포괄적)의 정수이고, R은 H 또는 1-3개의 탄소 원자를 갖는 임의로 치환된 알킬기이고, 임의의 치환은 하나 이상의 할로겐 또는 하나 이상의 C1-C3 알킬기에 의한 치환이고;
-(M)-N(R2)(R3), 여기서 M은 임의로 치환된 연결기 -(CH2)n-이고, n은 1, 2 또는 3이고;
-(M)-N(R2)(R3), 여기서 M은 임의로 치환된 연결기 -N(R)(CH2)n-이고, n은 1, 2 또는 3이고;
-(M)-N(R2)(R3), 여기서 M은 -(CH2)n-이고, n은 1, 2 또는 3이고;
-(M)-N(R2)(R3), 여기서 M은 -N(R)(CH2)n-이고, n은 1, 2 또는 3이고;
-(M)x-P 기, 여기서 P는 아릴 또는 헤테로아릴 기이고, x는 M의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고, M은 임의로 치환된 연결기 -(CH2)n- 또는 -N(R)(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-6(포괄적)의 정수이고, R은 H 또는 1-3개의 탄소 원자를 갖는 임의로 치환된 알킬기이고;
-(M)-P 기, 여기서 P는 아릴 또는 헤테로아릴 기이고, M은 임의로 치환된 연결기 -(CH2)n- 또는 -N(R)(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-6(포괄적)의 정수이고, R은 H 또는 1-3개의 탄소 원자를 갖는 임의로 치환된 알킬기이고;
-(M)-P 기, 여기서 P는 아릴 또는 헤테로아릴 기이고, M은 임의로 치환된 연결기 -N(R)(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-6(포괄적)의 정수이고, R은 H 또는 1-3개의 탄소 원자를 갖는 임의로 치환된 알킬기이고;
-(M)-P 기, 여기서 P는 아릴 또는 헤테로아릴 기이고, M은 임의로 치환된 연결기 -(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-3(포괄적)의 정수이고, R은 H 또는 1-3개의 탄소 원자를 갖는 임의로 치환된 알킬기이거나;
P는 임의로 치환된 페닐 또는 나프틸이거나;
P는 임의로 치환된 페닐 또는 나프틸이고, 임의의 치환은 하나 이상의 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시 또는 C1-C3 할로알킬에 의한 것이거나;
P는 5원 또는 6원 고리 또는 2개의 융합된 5원 또는 6원 고리를 갖는 임의로 치환된 헤테로아릴기이거나;
P는 5원 또는 6원 고리 또는 2개의 융합된 5원 또는 6원 고리 및 1 내지 3개의 질소 고리 구성원을 갖는 임의로 치환된 헤테로아릴기이거나;
RP에서 R2는 수소(즉, -N(R2)(R3)은 1차 아민기이고)이거나;
RP에서 R2 및 R3은 둘 다 수소가 아닌 기(즉, -N(R2)(R3)은 2차 아민기이고)이거나;
R2는 수소이고, R3은 임의로 치환된 3-8원 사이클로알킬기이거나;
R2는 수소이고, R3은 3-8원 사이클로알킬기로 치환된 C1-C3 알킬기이거나;
R2는 수소이고, R3은 6-12개의 탄소 원자를 갖는 임의로 치환된 아릴기이거나;
R2는 수소이고, R3은 6-12개의 탄소 원자 및 1-3개의 헤테로원자(N, O, 또는 S)를 갖는 임의로 치환된 헤테로아릴기이거나;
R2는 수소이고, R3은 6-12개의 탄소 원자 및 1-3개의 고리 질소를 갖는 임의로 치환된 헤테로아릴기이거나;
R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 포화, 부분 불포화 또는 방향족 고리인 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나;
R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 설탐 고리를 형성하거나;
RP는 -(CH2)n-N(R2)(R3)이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 포화, 부분 불포화 또는 방향족 고리인 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나;
RP는 -N(R)(CH2)n-N(R2)(R3)이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, R은 수소 또는 메틸이고, R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 포화, 부분 불포화 또는 방향족 고리인 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나;
RP는 -M-N(R2)(R3)이고, 여기서 R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 포화, 부분 불포화 또는 방향족 고리인 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나;
R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 이중 결합을 함유하지 않는 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나;
RP는 -N(R2)(R3)이고, R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 이중 결합을 함유하지 않는 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나;
R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 1개, 2개 또는 3개의 이중 결합을 함유하는 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나;
RP는 -N(R2)(R3)이고, R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 1개, 2개 또는 3개의 이중 결합을 함유하는 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 고리를 형성하거나;
R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로아릴 고리를 형성하거나;
RP는 -N(R2)(R3)이고, R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로아릴 고리를 형성한다.
화학식 I의 특정 실시양태에서, RP 또는 -N(R2)(R3)은
반응식 2의 RN1-RN39 중 어느 하나;
RN1; RN3; RN2 또는 RN4; RN5 또는 RN6; RN7 또는 RN8; RN9; RN10; RN11; RN12; RN13; RN14; RN15; RN16; RN17 또는 RN18; RN19 또는 RN20; RN21; RN22; RN23 또는 RN24; RN25; RN26-RN29; RN27-RN32; RN30; RN31; RN33-RN36; RN37; RN38; RN39; 또는
RN1, RN2, RN3, RN4, RN11, RN13, 또는 RN14; 또는
비치환된 RN1-RN31이다.
화학식 I의 실시양태에서, RH는 임의로 치환된 페닐; 임의로 치환된 페닐이 아닌 것; 비치환된 페닐; 비치환된 페닐이 아닌 것; 임의로 치환된 나프틸; 비치환된 나프틸; 임의로 치환된 나프티-2-일; 임의로 치환된 나프티-1-일; 나프티-2-일; 나프티-1-일; 임의로 치환된 티오페닐; 할로겐 치환된 티오페닐; 브롬 치환된 티오페닐; 임의로 치환된 티오펜-2-일; 할로겐 치환된 티오펜-2-일; 브롬 치환된 티오펜-2-일; 4-할로티오펜-2-일; 4-브로모티오펜-2-일; 임의로 치환된 푸릴; 임의로 치환된 푸르-2-일; 임의로 치환된 인돌릴; 비치환된 인돌릴; 인돌-3-일; 인돌-2-일; 인돌-1-일; 임의로 치환된 피리디노피롤릴; 임의로 치환된 피리디노피롤-2-일; 임의로 치환된 피리디노피롤릴; 임의로 치환된 피리디노피롤-3-일; 임의로 치환된 퀴놀리닐; 임의로 치환된 퀴놀린-4-일; 임의로 치환된 이소퀴올리닐; 임의로 치환된 이소퀴놀린-4-일, 임의로 치환된 벤조이미다졸릴; 임의로 치환된 벤조이미다졸-1-일; 임의로 치환된 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일: 임의로 치환된 피리딘-2-일; 임의로 치환된 피리딘-3-일; 임의로 치환된 피리딘-4-일; 1H-이미다졸-1-일, 1H-이미다졸-2-일; 또는 1H-이미다졸-5-일이다.
특정 실시양태에서, RH의 임의의 치환은 하나 이상의 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 할로알킬, C1-C3 플루오로알킬, C4-C7 사이클로알킬알킬, OH, 아미노, C1-C6 아실, -COORE, -OCORE, -CONRERF, -OCONRERD, -NRECORF, -SRE, -SORE, -SO2RE,및 -SO2NRERF에 의한 치환이고, 여기서 RE 및 Re는 상기 정의된 바와 같고, 특히 수소, C1-C3 알킬, 페닐 또는 벤질이다. 더 구체적으로, RH의 임의의 치환은 하나 이상의 할로겐(특히 Br 또는 Cl), C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 플루오로알킬(특히 CF3-)에 의한 치환이다.
실시양태에서, RH는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00016
상기 식에서,
X11은 CH, CRT 또는 N이고; RT는 상기 기재된 바와 같은 임의의 RH 고리 치환이고, R 및 R'은 독립적으로 수소, C1-C6 알킬기, C4-C10 사이클로알킬알킬기, 아릴기, 헤테로사이클릴기, 또는 헤테로아릴기이고, 각각의 이들 기는 임의로 치환된다. 특정 실시양태에서, RT는 수소, 또는 할로겐, OH, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, 또는 C3-C6 사이클로알킬로 치환된 C1-C3 알킬 중 하나 이상에 의한 치환이고; R'은 수소, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, 또는 C3-C6 사이클로알킬로 치환된 C1-C3 알킬이고; R은 수소, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, 또는 C3-C6 사이클로알킬로 치환된 C1-C3 알킬이다.
실시양태에서, RH는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00017
상기 식에서,
X11은 CH, CRT 또는 N이고; X10은 CH, CRT 또는 N이고; RT는 상기 기재된 바와 같은 RH 고리 임의의 치환이고, R 및 R'은 독립적으로 수소, C1-C6 알킬기, C4-C10 사이클로알킬알킬기, 아릴기, 헤테로사이클릴기, 또는 헤테로아릴기이고, 각각의 이들 기는 임의로 치환된다. 특정 실시양태에서, RT는 수소, 또는 할로겐, OH, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, 또는 C3-C6 사이클로알킬로 치환된 C1-C3 알킬 중 하나 이상의 치환이고; R'은 수소, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, 또는 C3-C6 사이클로알킬로 치환된 C1-C3 알킬이고; R은 수소, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, 또는 C3-C6 사이클로알킬로 치환된 C1-C3 알킬이다.
실시양태에서, 화학식 I에서 RH 또는 화학식 XX에서 R12는 화학식 R12-1 내지 R12-84 중 어느 하나로부터 선택된다. 실시양태에서, RH는 반응식 3에서 하기 화학식으로부터 선택된다:
R12-79 또는 R12-80; 또는
R12-81-R12-84; 또는
R12-70, R12-71, 또는 R12-75-R12-78; 또는
R12-3, R12-4, R12-5, R12-7, R12-8, R12-10, R12-23, R12-25, R12-27, R12-29, 또는 R12-31; 또는
R12-12, R12-13, R2-145, R12-15, R12-16, R12-17, R12-18, R12-19, R12-20, R12-21, R12-21 또는 R12-22, 여기서 p는 0이고; 또는
R12-33, R12-34, R12-35, R12-36, R12-37, R12-38, R12-39 R12-40, R12-41, R12-42, 여기서 p는 0이고; 또는
R12-70 또는 R12-71, 여기서 p는 0이고; 또는
R12-75, R12-76, R12-77 또는 R12-78, 여기서 p는 0이다.
실시양태에서, RH는 하기 화학식의 5원 헤테로사이클릭기로부터 선택된다:
Figure pct00018
상기 식에서,
T, U, V, 및 W는 O, S, C(R")(R"), C(R")-/, C(R"), C-/, N(R"), 또는 N-/으로부터 선택되고;
기는 T, U, V, 및 W의 선택에 따라 1 또는 2개의 이중 결합을 함유하고;
RH기는 C-/, C(R")-/, 또는 N-/을 통해 화학식 I의 화합물에서 -(L2)y-Z-모이어티에 결합되고;
R"은 N 또는 C 상의 임의의 치환을 나타낸다.
더 구체적으로, RH는 하기 화학식의 5원 헤테로사이클릭기로부터 선택된다:
Figure pct00019
상기 식에서,
T는 C(R"), C-/, 또는 N이고;
U는 O, S, C(R")(R"), C(R")-/, N(R"), 또는 N-/이고;
V는 CR", C-/, 또는 N이고;
W는 CR", C-/, N이고, 여기서 RH기는 C-/, C(R")-/, 또는 N-/을 통해 화학식 I의 화합물에서 -(L2)y-Z-모이어티에 결합하고,
RH기는 C-/, C(R")-/, 또는 N-/을 통해 화학식 I의 화합물에서 -(L2)y-Z-모이어티에 결합하고;
R"은 N 또는 C 상의 임의의 치환을 나타낸다. 기호 "-/"는 이를 통해 헤테로사이클릭기가 여기서 화합물에 결합하는 1가 결합을 나타내고, 예를 들면, C-/는 이를 통해 헤테로사이클릭기가 여기서 화합물에 결합하는 고리 탄소로부터의 1가 결합을 나타낸다.
실시양태에서, RH는 하기 화학식의 융합된 고리 헤테로사이클릭기이다:
Figure pct00020
또는
Figure pct00021
상기 식에서,
U, V 및 W는 O, S, N, C(R")(R"), C(R")-/, C(R"), C-/, N(R"), 또는 N-/로부터 선택되고;
T', U', V' 및 W는 C(R"), C-/, N(R"), 또는 N-/로부터 선택되고;
RH기는 지시된 고리에서 C-/, C(R")-/, 또는 N-/을 통해 화학식 I의 화합물에서 -(L2)y-Z-모이어티에 결합하고;
기는 U, V, 및 W의 선택에 따라 결합을 함유하고;
R"은 N 또는 C 상의 임의의 치환을 나타낸다.
더 구체적으로, RH는 하기 화학식의 융합된 헤테로사이클릭기이다:
Figure pct00022
또는
Figure pct00023
상기 식에서,
U, 및 V는 N, C(R"), 또는 C-/이고;
W는 O, S, C(R")(R"), C(R")-/, N(R"), 또는 N-/로부터 선택되고;
T', U', V' 및 W'는 C(R"), C-/, N(R"), 또는 N-/로부터 선택되고;
RH기는 지시된 고리에서 C-/, C(R")-/, 또는 N-/을 통해 화학식 I의 화합물에서 -(L2)y-Z-모이어티에 결합하고;
R"은 N 또는 C 상의 임의의 치환을 나타낸다.
각각의 R"은 독립적으로 수소, 할로겐, 니트로, 시아노, 아미노, 모노- 또는 디-C1-C3 알킬 치환된 아미노, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C1-C3 할로알킬, C6-C12 아릴, C5-C12 헤테로아릴, C3-C12 헤테로사이클릴, C1-C3 알콕시, C1-C6 아실, -COORE, -OCORE, -CONRERF, -OCONRERD, -NRECORF, -SRE, -SORE, -SO2RE, 및 -SO2NRERF로부터 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로사이클릴, 알콕시, 및 아실은 임의로 치환되고;
각각의 RE 및 RF는 수소, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C1-C3 할로알킬, C6-C12 아릴, C5-C12 헤테로아릴, C3-C12 헤테로사이클릴, C1-C3 알콕시, C1-C6 아실로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 하나 이상의 할로겐, 니트로, 시아노, 아미노, 모노- 또는 디-C1-C3 알킬 치환된 아미노, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C1-C3 할로알킬, C6-C12 아릴, C5-C12 헤테로아릴, C3-C12 헤테로사이클릴, C1-C3 알콕시, 및 C1-C6 아실로 임의로 치환된다.
더 특정한 실시양태에서, RH는 하기 중 어느 하나로부터 선택된다:
Figure pct00024
상기 식에서,
RT는 상기 기재된 바와 같은 RH 고리 임의의 치환이고, R 및 R'은 독립적으로 수소, C1-C6 알킬기, C4-C10 사이클로알킬알킬기, 아릴기, 헤테로사이클릴기, 또는 헤테로아릴기이고, 각각의 이들 기는 임의로 치환된다. 특정 실시양태에서, RT는 수소, 또는 할로겐, OH, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, 또는 C3-C6 사이클로알킬로 치환된 C1-C3 알킬 중 하나 이상에 의한 치환이고; R'은 수소, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, 또는 C3-C6 사이클로알킬로 치환된 C1-C3 알킬이고; R은 수소, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시, 또는 C3-C6 사이클로알킬로 치환된 C1-C3 알킬이다. 특정 실시양태에서, R 및 R'은 독립적으로 수소, C1-C3 알킬 또는 C4-C7 사이클로알킬알킬이다. 특정 실시양태에서, RT는 수소 또는 하나의 할로겐, 특히 Br에 의한 치환을 나타낸다.
실시양태에서, RH는 고리에서 1-3개의 질소, 고리에서 1 또는 2개의 산소, 황 또는 둘 다, 또는 고리에서 1 또는 2개의 질소 및 1개의 산소 또는 황을 갖는 6원 임의로 치환된 헤테로사이클릭 또는 헤테로아릴기이고, 여기서 임의의 치환은 화학식 I에서 정의된 바와 같다. 헤테로사이클릭기는 불포화, 부분 불포화 또는 헤테로아릴기일 수 있다.
실시양태에서, RH는 융합된 고리에서 1-5개의 질소, 융합된 고리에서 1-3개의 산소, 황 또는 둘 다, 또는 융합된 고리에서 1-4개의 질소 및 1 또는 2개의 산소, 황 또는 둘 다를 갖는 2개의 융합된 6원 고리를 갖는 임의로 치환된 융합된 헤테로사이클릭 또는 헤테로아릴기이고, 여기서 임의의 치환은 화학식 I에서 정의된 바와 같다. 더 특정한 실시양태에서, 융합된 고리는 융합된 고리에서 1, 2, 3 또는 4개의 질소를 갖는다. 더 특정한 실시양태에서, 융합된 고리는 융합된 고리에서 1 또는 2개의 산소 또는 황을 갖는다. 더 특정한 실시양태에서, 융합된 고리는 융합된 고리에서 1 또는 2개의 질소 및 1개의 산소 또는 황을 갖는다. 융합된 고리 헤테로사이클릭기는 불포화, 부분 불포화 또는 헤테로아릴기일 수 있다.
특정 실시양태에서, RH기는 페닐, 옥사지닐, 피리디닐, 피리미디닐, 티오닐, 피라닐, 티아지닐, 4H-피라닐, 나프틸, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 프테리디닐, 푸리닐 및 크로마닐로부터 선택되고, 여기서 RH기는 임의의 이용 가능한 고리 위치에서 화학식 I의 화합물에서 -(L2)y-Z-모이어티에 결합된다. 특정 실시양태에서, RH기는 고리에서 탄소에서 화학식 I의 화합물에서 -(L2)y-Z-모이어티에 결합된다.
화학식 I의 실시양태에서, RP는 모이어티 RN1, RN2, RN3, RN9, RN10, RN11, RN13, RN14, RN36, RN37, RN38 또는 RN39의 군으로부터 선택되고, RH는 모이어티 R12-3, R12-5, R12-44. R13-45, R12-48, R12-58, R12-70, R12-72, R12-73, R12-75, R12-79, R12-80, R12-82, R12-83, 또는 R12-84의 군으로부터 선택된다. 화학식 I의 실시양태에서, RP는 모이어티 RN1, RN2, RN3, RN9, RN10, RN11, RN13, RN14, RN36, RN37, RN38 또는 RN39의 군으로부터 선택되고, RH는 모이어티 R12-3, R12-5, R12-44. R13-45, R12-48, R12-58, R12-70, R12-72, R12-73, R12-75, R12-79, R12-80, R12-82, R12-83, 또는 R12-84의 군으로부터 선택되고, A 고리는 비치환된 1,4-페닐렌 또는 2,5-피리딜렌이다. 화학식 I의 실시양태에서, RP는 모이어티 RN1, RN2, RN3, RN9, RN10, RN11, RN13, RN14, RN36, RN37, RN38 또는 RN39의 군으로부터 선택되고, RH는 모이어티 R12-3, R12-5, R12-44. R13-45, R12-48, R12-58, R12-70, R12-72, R12-73, R12-75, R12-79, R12-80, R12-82, R12-83, 또는 R12-84의 군으로부터 선택되고, A 고리는 비치환된 1,4-페닐렌 또는 2,5-피리딜렌이고, Y는 -NH-, -CONH, -NH-CO- 또는 -NH-CO-NH-이고, x는 0 또는 1이고, L1은, 존재하는 경우, -(CH2)-이다. 화학식 I의 실시양태에서, RP는 모이어티 RN1, RN2, RN3, RN9, RN10, RN11, RN13, RN14, RN36, RN37, RN38 또는 RN39의 군으로부터 선택되고, RH는 모이어티 R12-3, R12-5, R12-44. R13-45, R12-48, R12-58, R12-70, R12-72, R12-73, R12-75, R12-79, R12-80, R12-82, R12-83, 또는 R12-84의 군으로부터 선택되고, A 고리는 비치환된 1,4-페닐렌 또는 2,5-피리딜렌이고, Y는 -NH-, -CONH, -NH-CO- 또는 -NH-CO-NH-이고, x는 0 또는 1이고, L1은, 존재하는 경우, -(CH2)-이고, Z는 -CONH, -NH-CO- 또는 -NH-CO-NH-이고, y는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -(CH2)-이다. 상기 실시양태의 더 특정한 실시양태에서, A 고리는 비치환된 1,4-페닐렌이다. 상기 실시양태의 더 특정한 실시양태에서, Y는 -NH-이다. 상기 실시양태의 더 특정한 실시양태에서, Z는 -CONH-이다. 상기 실시양태의 더 특정한 실시양태에서, y는 1이다. 상기 실시양태의 더 특정한 실시양태에서, x는 1이다.
화학식 I의 특정한 실시양태에서, -Z-(L2)y-RH는 -NH-SO2-RW가 아닌 기이고, 여기서 RW는 mes-트리메틸페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 나프틸, 2,3,4,5,-테트라메틸페닐, 4-메톡시페닐, 4-tert-부틸페닐, 2,4-디메톡시페닐, 2,5-디메톡시페닐 또는 4-페녹시페닐이다. 화학식 I의 특정한 실시양태에서, -Z-(L2)y-는 -NRX-SO2-가 아닌 모이어티이고, 여기서 RX는 H, 수소, 메틸 아세테이트, 아세테이트, 아미노아세틸, 4-포름산 벤질, 4-이소프로필벤질, 4-클로로벤질 또는 4-메톡시벤질이다. 화학식 I의 실시양태에서, -Z-는 -NRX-SO2-가 아니고, 여기서 RX는 H, 수소, 메틸 아세테이트, 아세테이트, 아미노아세틸, 4-포름산 벤질, 4-이소프로필벤질, 4-클로로벤질 또는 4-메톡시벤질이다.
화학식 I의 실시양태에서, RH는 페닐기 또는 임의로 치환된 페닐기가 아니다. 화학식 I의 실시양태에서, RH는 단일 할로겐, 특히 Br로 치환된 헤테로사이클릭기이다.
화학식 I의 실시양태에서, RP 또는 -N(R2)(R3)은 반응식 2, RN1-RN39에 도시된 임의로 치환된 아민기이다. 기의 예시적인 임의의 치환은 반응식 2에 도시된다. 도시된 R 치환기는 임의의 이용 가능한 고리 위치에 위치할 수 있다. 반응식 2의 모이어티에서, 바람직한 알킬은 C1-C3 알킬이고, 아실은 포밀을 포함하고, 바람직한 아실은 C1-C6 아실, 더 바람직하게는 아세틸이고, 아실옥시는 바람직하게는 C1-C4 아실옥시, 알콕시카보닐, 바람직하게는 C2-C5 알콕시카보닐이고, 하이드록시알킬은 C1-C6 하이드록시알킬, 바람직하게는 -CH2-CH2-OH이고, 아민기에 있어서 바람직한 알킬은 C1-C3 알킬이고, -SO2알킬에 있어서 바람직한 알킬은 C1-C3 알킬, 더 바람직하게는 메틸이다.
화학식 I의 특정한 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN1이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN3이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN2 또는 RN4이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN5 또는 RN6이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN7 또는 RN8이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN9이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN10이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN11이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN12이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN13이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN14이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN15이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN16이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN17 또는 RN18이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN19 또는 RN20이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN21이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN22이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN23 또는 RN24이다. 특정 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN25이다. 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN1, RN2, RN3, RN4, RN11, RN13, 또는 RN14이다. 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN26-RN29이다. 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN30이다. 실시양태에서, -N(R2)(R3)은 RN31이다.
화학식 I의 실시양태에서, RH는 반응식 3 R12-1 내지 R12-78에 도시된 모이어티이다. 화학식 I의 실시양태에서, RH는 반응식 3 R12-1 내지 R12-69에 도시된 모이어티이다. 화학식 I의 실시양태에서, RH는 반응식 3 R12-1 내지 R12-71에 도시된 모이어티이다. 화학식 I의 실시양태에서, RH는 반응식 3 R12-72 내지 R12-78에 도시된 모이어티이다. 실시양태에서, RH는 R12-35-R12-42이다. 실시양태에서, RH는 임의의 R12-43-R12-69이다. 실시양태에서, RH는 임의의 R12-43-R12-45이다. 실시양태에서, RH는 임의의 R12-46-R12-48이다. 실시양태에서, RH는 임의의 R12-49-R12-51이다. 실시양태에서, RH는 임의의 R12-52-R12-54이다. 실시양태에서, RH는 임의의 R12-55-R12-58이다. 실시양태에서, RH는 임의의 R12-59-R12-62이다. 실시양태에서, RH는 임의의 R12-63-R12-66이다. 실시양태에서, RH는 임의의 R12-67-R12-69이다. 실시양태에서, RH는 R12-72 또는 R12-73이다. 실시양태에서, RH는 R12-74이다. 실시양태에서, RH는 t12-75 또는 R12-76이다. 실시양태에서, RH는 R12-77이다. 실시양태에서, RH는 R12-78이다. 반응식 3의 모이어티에서, 바람직한 알킬기는 C-C6 알킬기 또는 더 바람직하게는 C1-C3 알킬기이고, 바람직한 할로겐은 F, Cl 및 Br이고, 아실은 포밀을 포함하고, 바람직한 아실은 -CO-C1-C6 알킬이고, 더 바람직하게는 아세틸이고, 페닐은 하나 이상의 할로겐, 알킬 또는 아실로 임의로 치환된다. 더 바람직한 알킬은 메틸, 에틸. 메틸 사이클로프로필 및 사이클로프로필이다. 더 바람직한 할로겐은 Cl 및 Br이다.
특정 실시양태에서, 본원의 방법에서 유용한 화합물은 하기 화학식 II의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
[화학식 II]
Figure pct00025
상기 식에서,
X, RP, Y, x, L1, RA, Z, y, L2 및 RH는 모두 화학식 I에서 정의된 바와 같고, R4 및 R5는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬기, 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 또는 헤테로사이클릴기로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되거나,
R4 및 R5는 함께 1 또는 2개의 이중 결합을 함유하거나 방향족일 수 있는 임의로 치환된 5원 또는 6원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
점선은 R4 및 R5의 선택에 따라 단일 또는 이중 결합이다.
실시양태에서, x는 1이고, y는 1이다. 실시양태에서, X는 둘 다 질소이다. 실시양태에서, RP는 -N(R2)(R3)이다. 실시양태에서, L1 및 L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 독립적으로 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, RH는 헤테로사이클릭 또는 헤테로아릴기이다. 실시양태에서, Y는 -N(R1)-, -CON(R1)-, 또는 -N(R1)CO-이다. 실시양태에서, Z는 -CON(R')- 또는 -N(R')CO-이다. 실시양태에서, R'은 수소, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 할로알킬이다. 실시양태에서, R'은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, RA는 수소, 할로겐 C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 아실, 또는 C1-C3 할로알킬이다. 실시양태에서, R'은 수소, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, R4 및 R5는 수소, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R4 및 R5는 함께 포화, 부분 불포화이거나 헤테로방향족인 5원 또는 6원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 실시양태에서, RH는 RH1-RH12 중 어느 하나이다.
화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 0이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 0이고, R5는 전기음성기가 아니다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 0이고, R5는 수소이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 0이고, R5는 수소이고, R4는 C1-C3 알킬이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 0이고, R5는 수소이고, R4는 메틸이다.
화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, R5는 전기음성기이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, R5는 할로겐이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 할로겐이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, R5는 플루오르이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 플루오르이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 할로겐이고, R4는 C1-C3 알킬이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 할로겐이고, R4는 메틸이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 플루오르이고, R4는 C1-C3 알킬이다. 화학식 II의 실시양태에서, Y는 NH이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 플루오르이고, R4는 메틸이다.
특정 실시양태에서, 본원의 방법에서 유용한 화합물은 하기 화학식 III의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
[화학식 III]
Figure pct00026
상기 식에서, 변수는 화학식 I 및 II에서 정의된 바와 같고, 점선은 단일 또는 이중 결합을 나타낸다.
실시양태에서, y는 1이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, X는 둘 다 질소이다. 실시양태에서, RP는 -N(R2)(R3)이다. 실시양태에서, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, RH는 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴 기이다. 실시양태에서, Y는 -N(R1)-, -CON(R1)-, 또는 -N(R1)CO-이다. 실시양태에서, Z는 -CON(R')- 또는 -N(R')CO-이다. 실시양태에서, R'은 수소, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 할로알킬이다. 실시양태에서, R'은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, RA는 수소, 할로겐 C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 아실, 또는 C1-C3 할로알킬이다. 실시양태에서, R'은 수소, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, R4 및 R5는 수소, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R4 및 R5는 함께 포화, 부분 불포화이거나 헤테로방향족인 5원 또는 6원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 실시양태에서, RH는 RH1-RH12 중 어느 하나이다.
특정 실시양태에서, 본원의 방법에서 유용한 화합물은 화학식 IV의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
Figure pct00027
상기 식에서, 변수는 화학식 I 및 II에서 정의된 바와 같고, 점선은 단일 또는 이중 결합을 나타낸다.
실시양태에서, y는 1이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, X는 둘 다 질소이다. 실시양태에서, RP는 -N(R2)(R3)이다. 실시양태에서, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, RH는 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴 기이다. 실시양태에서, R1은 수소이다. 실시양태에서, R1은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, Z는 -CON(R')- 또는 -N(R')CO-이다. 실시양태에서, R'은 수소, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 할로알킬이다. 실시양태에서, R'은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, RA는 수소, 할로겐 C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 아실, 또는 C1-C3 할로알킬이다. 실시양태에서, R'은 수소, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, R4 및 R5는 수소, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R4 및 R5는 함께 포화, 부분 불포화이거나 헤테로방향족인 5원 또는 6원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 실시양태에서, RH는 RH1-RH12 중 어느 하나이다.
특정 실시양태에서, 본원의 방법에서 유용한 화합물은 하기 화학식 V의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
[화학식 V]
Figure pct00028
상기 식에서, 변수는 화학식 I 및 II에서 정의된 바와 같고, 점선은 단일 또는 이중 결합을 나타낸다.
실시양태에서, y는 1이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, X는 둘 다 질소이다. 실시양태에서, RP는 -N(R2)(R3)이다. 실시양태에서, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, RH는 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴 기이다. 실시양태에서, R1은 수소이다. 실시양태에서, R1은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, Rs는 수소, C1-C3 알킬, 임의로 치환된 C1-C3 알킬, 또는 아릴이다. 실시양태에서, RA는 수소, 할로겐 C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 아실, 또는 C1-C3 할로알킬이다. 실시양태에서, R'은 수소, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, R4 및 R5는 수소, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R4 및 R5는 함께 포화, 부분 불포화이거나 헤테로방향족인 5원 또는 6원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 실시양태에서, RH는 RH1-RH12 중 어느 하나이다.
특정 실시양태에서, 본원의 방법에서 유용한 화합물은 하기 화학식 VI의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
[화학식 VI]
Figure pct00029
상기 식에서, 변수는 화학식 I 및 II에서 정의된 바와 같고, 점선은 단일 또는 이중 결합을 나타낸다.
실시양태에서, y는 1이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, X는 둘 다 질소이다. 실시양태에서, x는 1 및 -N-(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, RH는 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴 기이다. 실시양태에서, R1은 수소이다. 실시양태에서, R1은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, Rs는 수소, C1-C3 알킬, 임의로 치환된 C1-C3 알킬, 또는 아릴이다. 실시양태에서, RA는 수소, 할로겐 C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 아실, 또는 C1-C3 할로알킬이다. 실시양태에서, R'은 수소, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, R4 및 R5는 수소, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R4 및 R5는 함께 포화, 부분 불포화이거나 헤테로방향족인 5원 또는 6원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 실시양태에서, RH는 RH1-RH12 중 어느 하나이다.
특정 실시양태에서, 본원의 방법에서 유용한 화합물은 하기 화학식 VII의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
[화학식 VII]
Figure pct00030
상기 식에서, 변수는 화학식 I 및 II에서 정의된 바와 같고, 점선은 단일 또는 이중 결합을 나타낸다.
실시양태에서, y는 1이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, X는 둘 다 질소이다. 실시양태에서, x는 1 및 -N-(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, RH는 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴 기이다. 실시양태에서, R1은 수소이다. 실시양태에서, R1은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, Rs는 수소, C1-C3 알킬, 임의로 치환된 C1-C3 알킬, 또는 아릴이다. 실시양태에서, RA는 수소, 할로겐 C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 아실, 또는 C1-C3 할로알킬이다. 실시양태에서, R'은 수소, 메틸, 메톡시 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, R4 및 R5는 수소, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R4 및 R5는 함께 포화, 부분 불포화이거나 헤테로방향족인 5원 또는 6원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 실시양태에서, RH는 RH1-RH12 중 어느 하나이다.
특정 실시양태에서, 본원의 방법에서 유용한 화합물은 하기 화학식 VIII의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
[화학식 VIII]
Figure pct00031
상기 식에서, 변수는 화학식 I 및 II에서 정의된 바와 같고, 점선은 단일 또는 이중 결합을 나타내고, R6-R9는 독립적으로 수소 및 화학식 I에서 정의된 RA기로부터 선택된다. RM은 융합된 고리 상의 임의의 치환을 나타내고, RM은 화학식 I에서 RA의 값을 갖는다.
실시양태에서, y는 1이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, X는 둘 다 질소이다. 실시양태에서, x는 1 및 -N-(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, x는 0이다. 실시양태에서, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, R1은 수소이다. 실시양태에서, R1은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, R7-R9는 독립적으로 수소, C1-C3 알킬, 임의로 치환된 C1-C3 알킬, 또는 아릴로부터 선택된다. 실시양태에서, R7-R9는 독립적으로 수소, 할로겐 C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 아실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R7-R9는 모두 수소이다. 실시양태에서, R4 및 R5는 수소, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R4 및 R5는 함께 포화, 부분 불포화이거나 헤테로방향족인 5원 또는 6원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 실시양태에서, RM은 하나 이상의 수소, 할로겐, C1-C3 알킬기, C4-C7 사이클로알킬알킬기 또는 C1-C3 할로알킬기이다. 실시양태에서, RM은 하나 이상의 수소, 할로겐, 특히 Br, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, RM은 수소이다.
특정 실시양태에서, 본원의 방법에서 유용한 화합물은 하기 화학식 IX의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
[화학식 IX]
Figure pct00032
상기 식에서, 변수는 화학식 I 및 II에서 정의된 바와 같고, 점선은 단일 또는 이중 결합을 나타낸다. R6-R9는 독립적으로 수소 및 화학식 I에서 정의된 RA기로부터 선택되고, RM은 화학식 I에서 정의된 바와 같은 임의의 치환을 나타낸다.
실시양태에서, y는 1이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, X는 둘 다 질소이다. 실시양태에서, x는 1이고, M은 -N-(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, x는 1이고, M은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, x는 0이다. 실시양태에서, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, R1은 수소이다. 실시양태에서, R1은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, R7-R9는 독립적으로 수소, C1-C3 알킬, 임의로 치환된 C1-C3 알킬, 또는 아릴로부터 선택된다. 실시양태에서, R7-R9는 독립적으로 수소, 할로겐 C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 아실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R7-R9는 모두 수소이다. 실시양태에서, R4 및 R5는 수소, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R4 및 R5는 함께 포화, 부분 불포화이거나 헤테로방향족인 5원 또는 6원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 실시양태에서, RM은 수소, 할로겐, C1-C3 알킬기 또는 C1-C3 할로알킬기이다. 실시양태에서, RM은 수소, 할로겐, 특히 Br, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다.
다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 XI의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 제공한다:
[화학식 XI]
Figure pct00033
상기 식에서,
각각의 X는 독립적으로 N 또는 CH로부터 선택되고, 적어도 하나의 X는 N이고;
A 고리는 3-10개의 탄소 원자 및 임의로 1-6개의 헤테로원자를 갖는 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리이고, 이는 임의로 포화, 불포화 또는 방향족이고;
L1은 임의로 치환된, 임의의 1-3개의 탄소 연결기이고, 여기서 x는 L1의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고;
R1은 수소, 알킬기. 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 헤테로사이클릴기, 또는 아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
R2 및 R3은 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되거나,
R2 및 R3은 함께 포화, 부분 불포화 또는 방향족 고리인 임의로 치환된 5 내지 8원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
R4 및 R5는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되거나,
R4 및 R5는 함께 임의로 1 또는 2개의 이중 결합을 함유하거나 방향족이고 임의로 1-3개의 헤테로원자를 함유하는 임의로 치환된 5원 또는 6원 고리를 형성하고;
점선은 R4 및 R5의 선택에 따라 단일 또는 이중 결합을 나타내고;
RA는 지시된 고리 상의 수소 또는 1-10개의 치환기를 나타내고, 여기서 RA 치환기는 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록실, 시아노, 니트로, 아미노, 일치환 또는 이치환된 아미노, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로사이클릴, -OR15, -COR15, -COOR15, -OCOR15, -CO-NR16R17, -OCON R16R17, -NR16-CO-R15, -SR15, -SOR15, -SO2R15, -SO2-NR16R17, R10, -NH-CO-(L2)y-R12, 또는 -NH-CO-(L2)y-R12로부터 선택되고, L2는 연결기가 임의로 치환된 임의의 1-6개의 탄소 원자 연결기이고, 연결기의 1 또는 2개의 탄소는 임의로 O 또는 S로 대체되고, y는 L2의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고;
R10은 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클릴, 또는 아릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 하나 이상의 할로겐, 알킬, 알케닐, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클릴, 아릴 치환된 알킬, 또는 헤테로사이클릴 치환된 알킬로 임의로 치환되고;
R12는 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 또는 아릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되거나, R12는 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 또는 아릴로 치환된 C1-C3 알킬이고, 이들은 각각 임의로 치환되고, 임의의 치환은 하나 이상의 할로겐, 알킬, 알케닐, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클릴이고;
각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴 또는 헤테로사이클릴, 아릴알킬(아릴로 치환된 알킬기) 및 헤테로사이클릴알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
각각의 R16 및 R17은 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴 또는 헤테로사이클릴, 아릴알킬(아릴로 치환된 알킬기) 및 헤테로사이클릴알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
임의의 치환은 하나 이상의 할로겐, 니트로, 시아노, 아미노, 모노- 또는 디-C1-C3 알킬 치환된 아미노, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C6-C12 아릴, 및 C6-C12 헤테로사이클릴에 의한 치환을 포함한다.
화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 0이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 0이고, R5는 전기음성기가 아니다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 0이고, R5는 수소이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 0이고, R5는 수소이고, R4는 C1-C3 알킬이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 0이고, R5는 수소이고, R4는 메틸이다.
화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, R5는 전기음성기이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, R5는 할로겐이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 할로겐이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, R5는 플루오르이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 플루오르이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 할로겐이고, R4는 C1-C3 알킬이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 할로겐이고, R4는 메틸이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 플루오르이고, R4는 C1-C3 알킬이다. 화학식 XI의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 플루오르이고, R4는 메틸이다.
실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 XII의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 갖는다:
[화학식 XII]
Figure pct00034
상기 식에서, 변수는 화학식 XI에서 정의된 바와 같다.
실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 XIII의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물이다:
[화학식 XIII]
Figure pct00035
상기 식에서,
변수는 화학식 XI에서 정의된 바와 같고,
각각의 Y는 독립적으로 N 또는 CH로부터 선택되고;
RB는 지시된 고리 상의 수소 또는 1-10개의 치환기를 나타내고, 여기서 RA 치환기는 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록실, 시아노, 니트로, 아미노, 일치환 또는 이치환된 아미노, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로사이클릴, -OR15, -COR15, -COOR15, -OCOR15, -CO-NR16R17, -OCON R16R17, -NR16-CO-R15, -SR15, -SOR15, -SO2R15, -SO2-NR16R17, 또는 -(L2)y-R10으로부터 선택되고, L2는 연결기가 임의로 치환되는, 임의의 1-6개의 탄소 원자 연결기이고, y는 L2의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이다.
화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 0이다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 0이고, B 고리는 전기음성기가 아닌 것으로 치환된다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 0이고, B 고리는 하나 이상의 수소 또는 C1-C3 알킬기로 치환된다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 0이고, B 고리는 하나 이상의 수소 또는 메틸기로 치환된다.
화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, B 고리는 전기음성기로 치환된다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, B 고리는 할로겐으로 치환된다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, B 고리는 할로겐으로 치환된다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, B 고리는 플루오르로 치환된다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, B 고리는 플루오르로 치환된다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, B 고리는 할로겐 및 C1-C3 알킬로 치환된다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, B 고리는 할로겐으로 치환된다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, B 고리는 플루오르로 치환되고, R4는 C1-C3 알킬이다. 화학식 XIII의 실시양태에서, R1은 H이고, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, B 고리는 할로겐 및 메틸로 치환된다.
실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 XIV 또는 XV의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물이다:
Figure pct00036
상기 식에서, 변수는 화학식 XI, XII 또는 XIII에서 정의된 바와 같다.
3개의 화학식의 실시양태에서, x는 0이고, R1은 수소이다. 3개의 화학식의 실시양태에서, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R1은 수소이다.
실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 XVI 또는 XVII의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물이다:
Figure pct00037
상기 식에서,
변수는 화학식 XI 또는 XV에서 정의된 바와 같고,
R11 및 R12는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬기, 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 또는 헤테로사이클릴기로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환된다.
실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 XVIII의 화합물, 이의 또는 염(또는 용매화물)이다:
[화학식 XVIII]
Figure pct00038
상기 식에서,
R1은 수소, 알킬기. 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 헤테로사이클릴기, 또는 아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고(치환의 정의가 필요);
R2 및 R3은 함께 1 또는 2개의 이중 결합을 함유하거나 방향족일 수 있는 임의로 치환된 5원 또는 6원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
R4 및 R5는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬기, 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 또는 헤테로사이클릴기로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되거나,
R4 및 R5는 함께 1 또는 2개의 이중 결합을 함유하거나 방향족일 수 있는 임의로 치환된 5원 또는 6원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
점선은 R4 및 R5의 선택에 따라 단일 또는 이중 결합이고;
R6-R9는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬기, 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 또는 헤테로사이클릴기로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
L은 임의의 1-6 원자 연결기이고, 여기서 x는 L기의 존재 또는 부재를 나타내는 1 또는 0이고;
R10은 알킬기, 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 헤테로사이클릴기, 또는 아릴기로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환된다.
예를 들면, L은 2-6 원자 연결기(예를 들면, -CH2-O-, -CH2-CH2-O-, -O-CH2-, -O-CH2-CH2-, -CO-NH-, -NH-CO-, -CH2-CO-NH-, -CH2-CH2-CO-NH-)이다.
실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 XIX의 화합물, 또는 이의 염(또는 용매화물)이다:
[화학식 XIX]
Figure pct00039
상기 식에서,
R1-R9는 상기 정의된 바와 같고; 점선은 R4 및 R5의 선택에 따라 단일 또는 이중 결합을 나타내고;
y는 0 또는 포괄적인 1-3 범위의 정수이고;
R10은 알킬기. 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 헤테로사이클릴기, 또는 아릴기로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환된다.
실시양태에서, CHD1L 억제제는 하기 화학식 XX, XXI, XXII 또는 XXIII의 화합물 및 이의 염 또는 용매화물이다:
Figure pct00040
Figure pct00041
상기 식에서, R1-R9는 수소 또는 임의의 치환기를 나타내고, R10은 효능과 연관되어 있다고 생각되는 모이어티이고; RN은 물리화학적 특성, 예를 들면, 용해도와 연관되어 있다고 생각되는 모이어티이다. L1은 상기 화학식 I에서 정의된 바와 같고, x는 L1기의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이다. 실시양태에서, R5는 대사 안정성과 연관되어 있다고 생각되는 수소가 아닌 치환기이다. 특정 실시양태에서, R5는 할로겐, 특히 F 또는 Cl, C1-C3 알킬기, 특히 메틸기이다. 특정 실시양태에서, x가 1인 경우, R5는 전기음성 치환기, 특히 할로겐, 더 바람직하게는 F 또는 Cl이다. 특정 실시양태에서, R5는 할로겐, 특히 F 또는 Cl이고, R4는 C1-C3 알킬기, 특히 메틸기이다. 특정 실시양태에서, x가 1인 경우, R5는 전기음성 치환기, 특히 할로겐, 더 바람직하게는 F 또는 Cl이다. 실시양태에서, R4는 수소가 아닌 치환기, 특히 C1-C3 알킬기, 더 특히 메틸기이다. 특정 실시양태에서, R5는 F이고, R4는 메틸이다. 특정 실시양태에서, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이고, 더 구체적으로 n은 1이다. 실시양태에서, R6-R9는 수소, C1-C3-알킬, 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알콕시, 포밀, 또는 C1-C3 아실로부터 선택된다. 실시양태에서, R6-R9 중 1 또는 2개는 수소가 아닌 모이어티이다. 실시양태에서, R6-R9 중 하나는 할로겐, 특히 플루오르이다. 특정 실시양태에서, 모든 R6-R9는 수소이다. 실시양태에서, RN은 아미노 모이어티 -N(R2)(R3)이다. 특정 실시양태에서, RN은 임의로 제2 헤테로원자(N, S 또는 O)를 함유하는 5 내지 7원 고리를 갖는 임의로 치환된 헤테로사이클릭기이다. 실시양태에서, RN은 임의로 치환된 피롤리딘-1-일, 피페리딘-1-일, 아제판-1-일, 피페라진-1-일, 또는 모르폴리노이다. RN은 C1-C3 알킬, 포밀, C1-C3 아실(특히 아세틸), 하이드록실, 할로겐(특히 F 또는 Cl), 하이드록실, C1-C3 알킬(특히 -CH2-CH2-OH)로부터 선택된 하나의 치환기로 치환된다. 실시양태에서, RN은 비치환된 피롤리딘-1-일, 피페리딘-1-일, 아제판-1-일, 피페라진-1-일, 또는 모르폴리노이다.
실시양태에서, R10은 -NRy-CO-(L2)y-R12 또는 -CO-NRy-(L2)y-R12이고, 여기서 y는 L2의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고, 이는 연결기가 임의로 치환되는, 임의의 1-6개의 탄소 원자 연결기이고, 여기서 연결기의 1 또는 2개의 탄소는 임의로 O, NH, NRy 또는 S로 대체되고, Ry는 수소 또는 1-3개의 탄소 알킬이고, R12는 아릴기, 사이클로알킬기, 헤테로사이클릭기, 또는 헤테로아릴기이고, 이들 각각은 임의로 치환된다. 실시양태에서, y는 1이고, L2는 -(CH2)p-이고, 여기서 p는 0-3이다. 실시양태에서, R12는 티오펜-2-일, 티오펜-3-일, 푸라니-2-일, 푸란-3-일, 피롤-2-일, 피롤-3-일, 옥사졸-4-일, 옥사졸-5-일, 옥사졸-2-일, 인돌-2-일, 인돌-3-일, 벤조푸란-2-일, 벤조푸란-3-일, 벤조[b]티오펜-2-일, 벤조[b]티오펜-3-일, 이소벤조푸란-1-일, 이소인돌-1-일, 또는 벤조[c]티오펜-1-일이다. 실시양태에서, R1은 수소 또는 메틸이다. 실시양태에서, R12는 티오펜-2-일, 푸라니-2-일, 피롤-2-일, 옥사졸-4-일, 인돌-2-일, 벤조푸란-2-일, 또는 벤조[b]티오펜-2-일이다. 실시양태에서, R12는 티오펜-2-일 또는 인돌-2-일이다. 실시양태에서, R1은 수소 또는 메틸이다.
화학식 XX -XXIII의 더 일반적인 실시양태에서,
R1은 수소, 알킬기, 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 헤테로사이클릴기, 또는 아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
RN은 -NR2R3이고, R2 및 R3은 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되거나, R2 및 R3은 함께 포화, 부분 불포화 또는 방향족 고리인 임의로 치환된 5 내지 8원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
R4-R9는 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록실, 시아노, 니트로, 아미노, 모노- 또는 디알킬 치환된 아미노, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 사이클로알케닐, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, -OR15, -COR15, -COOR15, -OCOR15, -CO-NR15R16, -OCONR15R16, -NR15-CO-R16, -SR15, -SOR15, -SO2R15, 및 -SO2-NR15R16으로부터 선택되고;
R10은 -NRy-CO-(L2)y-R12, -CO-NRy-(L2)y-R12이고, 여기서 L2는 연결기가 임의로 치환되는, 임의의 1-6개의 탄소 원자 연결기이고, 연결기의 1 또는 2개의 탄소는 O 또는 S로 임의로 대체되고, y는 L2의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고;
R12는 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 또는 아릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되거나, R12는 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 또는 아릴로 치환된 C1-C3 알킬이고, 이들 각각은 임의로 치환되고, 여기서 임의의 치환은 하나 이상의 할로겐, 알킬, 알케닐, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클릴이고;
각각의 R15 및 R16은 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴 또는 헤테로사이클릴, 아릴알킬 및 헤테로사이클릴알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알케닐알킬로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
임의의 치환은 하나 이상의 할로겐, 니트로, 시아노, 아미노, 모노- 또는 디-C1-C3 알킬 치환된 아미노, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C6-C12 아릴, C6-C12 헤테로사이클릴, -OR17, -COR17, -COOR17, -OCOR17, -CO-NR17R18, -OCONR17R18, -NR17-CO-R18, -SR17, -SOR17, -SO2R17, 및 -SO2-NR17R18에 의한 치환을 포함하고, 여기서 R17 및 R18은 독립적으로 수소 또는 C1-C6 알킬이다.
화학식 XX 및 XXI의 실시양태에서, RN은 임의의 RN1-RN39(반응식 2)로부터 선택된 임의로 치환된 사이클릭 아민기이다. 기의 예시적인 임의의 치환은 반응식 2에 도시된다. 도시된 R 치환기는 임의의 이용 가능한 고리 위치에 위치할 수 있다. 반응식 2의 모이어티에서, 바람직한 알킬은 C1-C3 알킬이고, 아실은 포밀을 포함하고, 바람직한 아실은 C1-C6 아실, 더 바람직하게는 아세틸이고, 하이드록시알킬은 C1-C6 하이드록시알킬, 바람직하게는 -CH2-CH2-OH이고, 아민기에 있어서 바람직한 알킬은 C1-C3 알킬이고, -SO2알킬에 있어서 바람직한 알킬은 C1-C3 알킬이고, 메틸은 더 바람직하다.
화학식 XX, 또는 XXI의 특정 실시양태에서, RN은 RN1이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN3이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN2 또는 RN4이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN5 또는 RN6이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN7 또는 RN8이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN9이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN10이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN11이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN12이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN13이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN14이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN15이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN16이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN17 또는 RN18이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN19 또는 RN20이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN21이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN22이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN23 또는 RN24이다. 특정 실시양태에서, RN은 RN25이다. 실시양태에서, RN은 RN1, RN2, RN3, RN4, RN11, RN13, 또는 RN14이다. 실시양태에서, RN은 RN26-RN29이다. 실시양태에서, RN은 RN30이다. 실시양태에서, RN은 RN31이다.
화학식 XX-XXIII의 실시양태에서, R12는 임의로 치환된 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3 R12-1 내지 R12-69, R12-1-R12-71 또는 R12-72-R12-78에 도시된 모이어티이다. 반응식 3의 모이어티에서, 바람직한 알킬기는 C-C6 알킬기이고, 더 바람직하게는 C1-C3 알킬기이고, 바람직한 할로겐은 F, Cl 및 Br이고, 아실은 포밀을 포함하고, 바람직한 아실은 -CO-C1-C6 알킬, 더 바람직하게는 아세틸이고, 페닐은 임의로 하나 이상의 할로겐, 알킬 또는 아실로 치환된다. 실시양태에서, R12는 반응식 3 R12-1 내지 R12-22에 도시된 바와 같은 모이어티로 치환된 메틸, 에틸기 또는 프로필이다. 실시양태에서, R12는 R12-1이다. 실시양태에서, R12는 R12-2이다. 실시양태에서, R12는 R12-3이다. 실시양태에서, R12는 R12-4이다. 실시양태에서, R12는 R12-5이다. 실시양태에서, R12는 R12-6이다. 실시양태에서, R12는 R12-7이다. 실시양태에서, R12는 R12-8이다. 실시양태에서, R12는 R12-9이다. 실시양태에서, R12는 R12-10이다. 실시양태에서, R12는 R12-11이다. 실시양태에서, R12는 R12-12이다. 실시양태에서, R12는 R12-13이다. 실시양태에서, R12는 R12-14이다. 실시양태에서, R12는 R12-15이다. 실시양태에서, R12는 R12-16이다. 실시양태에서, R12는 R12-17이다. 실시양태에서, R12는 R12-18 실시양태에서, R12는 R12-19이다. 실시양태에서, R12는 R12-20이다. 실시양태에서, R12는 R12-21이다. 실시양태에서, R12는 R12-22이다. 실시양태에서, R12는 R12-23-R12-26 중 하나이다. 실시양태에서, R12는 R12-27-R12-30 중 하나이다. 실시양태에서, R12는 R12-31-R12-34 중 하나이다. 실시양태에서, R12는 R12-35-R12-42 중 하나이다. 실시양태에서, R12는 R12-43-R12-69 중 어느 하나이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-43-R12-69로 치환된 메틸, 에틸기 또는 프로필기이다. 실시양태에서, R12는 R12-43-R12-45 중 어느 하나이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-43-R12-45로 치환된 메틸, 에틸기 또는 프로필기이다. 실시양태에서, R12는 R12-46-R12-48 중 어느 하나이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-46-R12-48로 치환된 메틸, 에틸기 또는 프로필기이다. 실시양태에서, R12는 12-49-R12-51 중 어느 하나이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-49-R12-51로 치환된 메틸, 에틸기 또는 프로필기이다. 실시양태에서, R12는 R12-52-R12-54 중 어느 하나이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-52-R12-54로 치환된 메틸, 에틸기 또는 프로필기이다. 실시양태에서, R12는 R12-55-R12-58 중 어느 하나이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-55-R12-58로 치환된 메틸, 에틸기 또는 프로필기이다. 실시양태에서, R12는 R12-59-R12-62 중 어느 하나이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-59-R12-62로 치환된 메틸, 에틸기 또는 프로필기이다. 실시양태에서, R12는 R12-63-R12-66 중 어느 하나이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-63-R12-66로 치환된 메틸, 에틸기 또는 프로필기이다. 실시양태에서, R12는 R12-67-R12-69 중 어느 하나이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-67-R12-69로 치환된 메틸, 에틸 또는 프로필기이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-70 또는 R12-71이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-72 또는 R12-73이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-74이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-75 또는 R12-76이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-75 또는 R12-76이고, 여기서 p는 1 또는 2이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-77이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-77이고, 여기서 p는 1 또는 2이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-78이다. 실시양태에서, R12는 반응식 3에 도시된 바와 같은 모이어티 R12-78이고, 여기서 p는 1 또는 2이다.
본원에서 화학식 XX-XXIII의 실시양태에서, RN은 임의의 RN1-RN25 또는 RN26-RN39(반응식 2)로부터 선택된 임의로 치환된 사이클릭 아민기이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다. 화학식 XX-XXIII의 실시양태에서, RN은 RN1, RN2, RN3, RN4, RN11, RN13, RN14 또는 RN25이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다. 실시양태에서, RN은 RN37이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다. 실시양태에서, RN은 RN38 또는 RN39이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다. 실시양태에서, RN은 RN26이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다. 실시양태에서, RN은 RN27-RN32이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다. 실시양태에서, RN은 RN33-RN35이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다. 실시양태에서, RN은 RN36이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다.
본원에서 화학식 XX-XXIII의 실시양태에서, RN은 화학식 RN37(반응식 2)의 임의로 치환된 사이클릭 아민기이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다. 화학식 XX-XXIII의 실시양태에서, RN은 RN38이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다. 화학식 XX-XXIII의 실시양태에서, RN은 RN39이고, R12는 티에닐, 티에닐메틸, 푸릴, 푸릴메틸, 인돌릴 또는 메틸인돌릴이다.
화학식 XX-XXIII의 실시양태에서, R10은 -NHCOR12이다. 화학식 XX-XXIII의 실시양태에서, R10은 -CONHR12이다. 본원에서 화학식 XX-XXIII의 실시양태에서, R10은 -CO-NH-R12이고, RN은 RN1-RN25 중 어느 하나이고, R12는 R12-1-R12-22 중 어느 하나이다. 본원에서 화학식 XX-XXIII의 실시양태에서, R10은 -CO-NH-R12이고, RN은 RN1-RN25 중 어느 하나이고, R12는 R12-1-R12-69 중 어느 하나이다.
화학식 XXI 또는 XXIII의 상기 실시양태의 추가의 실시양태에서, x는 1이다. 화학식 XXI 또는 XXIII의 상기 실시양태의 추가의 실시양태에서, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이다. 화학식 XXI 또는 XXIII의 상기 실시양태의 추가의 실시양태에서, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1 또는 2이다. 화학식 XXI 또는 XXIII의 상기 실시양태의 추가의 실시양태에서, x는 1이고, L1은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1이다. 화학식 XXI 또는 XXIII의 상기 실시양태의 추가의 실시양태에서, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 전기음성기이다. 화학식 XXI 또는 XXIII의 상기 실시양태의 추가의 실시양태에서, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 할로겐이다. 화학식 XXI 또는 XXIII의 상기 실시양태의 추가의 실시양태에서, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 플루오르이다. 화학식 XXI 또는 XXIII의 상기 실시양태의 추가의 실시양태에서, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 플루오르이고, R4는 C1-C3 알킬기이다. 화학식 XXI 또는 XXIII의 상기 실시양태의 추가의 실시양태에서, x는 1이고, L1은 -(CH2)-이고, R5는 플루오르이고, R4는 메틸기이다.
실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 XXX의 화합물, 또는 이의 염(또는 용매화물)이다:
[화학식 XXX]
Figure pct00042
상기 식에서,
R1은 수소, 알킬기. 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 헤테로사이클릴기, 또는 아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고(치환의 정의가 필요);
R2 및 R3은 함께 1 또는 2개의 이중 결합을 함유하거나 방향족일 수 있는 임의로 치환된 5원 또는 6원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
R6-R9는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬기, 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 또는 헤테로사이클릴기로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
Y는 0 또는 포괄적인 1-3 범위의 정수이고;
R10은 알킬기. 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 헤테로사이클릴기, 또는 아릴기로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
R11 및 R12는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬기, 알케닐기, 사이클로알킬기, 사이클로알케닐기, 또는 헤테로사이클릴기로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환된다. 실시양태에서, R10은 RH1-RH12 중 어느 하나이다.
특정 실시양태에서, 본원의 방법에서 유용한 화합물은 하기 화학식 XXXI의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
[화학식 XXXI]
Figure pct00043
상기 식에서, 변수는 화학식 I에서 정의된 바와 같고, R6-R9는 독립적으로 수소 및 화학식 I에서 정의된 RA로부터 선택되고, RM은 융합된 고리 상의 임의의 치환을 나타내고, RM은 화학식 I에서 RA의 값을 갖고, W1은 N 또는 CH이다.
실시양태에서, y는 1이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, X는 둘 다 질소이다. 실시양태에서, x는 1이고, M은 -N-(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, x는 1이고, M은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, x는 0이다. 실시양태에서, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, R1은 수소이다. 실시양태에서, R1은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, R7-R9는 독립적으로 수소, C1-C3 알킬, 임의로 치환된 C1-C3 알킬, 또는 아릴로부터 선택된다. 실시양태에서, R7-R9는 독립적으로 수소, 할로겐 C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 아실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R7-R9는 모두 수소이다. 실시양태에서, R4 및 R5는 수소, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R4 및 R5는 함께 포화, 부분 불포화 또는 헤테로방향족인 5원 또는 6원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 실시양태에서, RM은 하나 이상의 수소, 할로겐, C1-C3 알킬기 또는 C1-C3 할로알킬기이다. 실시양태에서, RM은 하나 이상의 수소, 할로겐, 특히 Br, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, RM은 수소이다.
실시양태에서, 본 발명의 방법, 약제학적 조성물 및 약제학적 조합물에서 유용한 화합물은 하기 화학식 XXXII의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물을 포함한다:
[화학식 XXXII]
Figure pct00044
상기 식에서, 변수는 화학식 I에서 정의된 바와 같고, RB는 화학식 I에서 정의된 바와 같은 임의의 치환을 나타내고, R6-R9는 수소이거나 화학식 I에서 RA의 값을 갖는다.
실시양태에서, y는 1이다. 실시양태에서, y는 0이다. 실시양태에서, X는 둘 다 질소이다. 실시양태에서, x는 1이고, M은 -N-(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, x는 1이고, M은 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, x는 0이다. 실시양태에서, L2는 -(CH2)n-이고, 여기서 n은 1, 2 또는 3이다. 실시양태에서, R1은 수소이다. 실시양태에서, R1은 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, R6-R9는 독립적으로 수소, C1-C3 알킬, 임의로 치환된 C1-C3 알킬, 또는 아릴로부터 선택된다. 실시양태에서, R6-R9는 독립적으로 수소, 할로겐 C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, C1-C3 아실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, R7-R9는 모두 수소이다. 실시양태에서, R4 및 R5는 수소, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕실, 또는 C1-C3 할로알킬로부터 선택된다. 실시양태에서, RB는 하나 이상의 수소, 할로겐, C1-C3 알킬기 또는 C1-C3 할로알킬기로부터 선택된다. 실시양태에서, RB는 하나 이상의 수소, 할로겐, 특히 Br, 메틸 또는 트리플루오로메틸이다. 실시양태에서, RB는 수소. 실시양태에서, RH는 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴 기이다. 실시양태에서, RH는 임의로 치환된 나프틸, 티오펜, 인돌릴, 또는 피리디노피롤릴이다.
하기 화학식 XXXV-XLII의 화합물은 본원의 방법, 약제학적 조성물 및 약제학적 조합물에서 유용하다:
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
또는
Figure pct00048
상기 식에서, 변수는 상기 화학식 I-XIX에서 정의된 바와 같고, X5는 F, Cl 및 Br을 포함하는 할로겐이고, 특정 실시양태에서, Br이다. 화학식 XXXV-XLII의 특정 실시양태에서, y는 0이다. 화학식 XXXV-XLII의 특정 실시양태에서, y는 1이고, L2는 -(CH2)n-이고, n은 1, 2 또는 3이다. 화학식 XXXV-XLII의 특정 실시양태에서, A 고리는 RA가 수소인 페닐 고리이다. 특정 실시양태에서, RP는 RN-1 내지 RN-31 중 어느 하나로부터 선택된 기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 XLII의 B 고리는 반응식 4에서 도시된 바와 같은 화학식 RBI의 것이다. 더 특정한 실시양태에서, 화학식 XLII의 B 고리는 반응식 4의 RB2-RB5의 것이다.
본 발명은 하기 임의의 화학식 I-IX, XI-XIX, XXX-XXXII, XXXV-XLII 및 화학식 XX의 화합물의 각각의 염, 특히 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 하기 임의의 화학식 I-XIX, XXX-XXXII, XXXV, XXXV-XLII 및 화학식 XX 및 XXI의 화합물의 각각의 용매화물 및 염, 특히 약제학적으로 허용되는 용매화물 및 염을 제공한다. 바람직한 용매화물은 수화물이다. 본 발명은 본원의 화학식 중 어느 하나의 임의의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
실시양태에서, 하기 화학식 XLV의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물은 본원의 방법, 약제학적 조성물 및 약제학적 조합물에서 유용하다:
Figure pct00049
상기 식에서,
X1 및 X2는 독립적으로 CH 또는 N이고;
RB는 수소, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 플루오로알킬이고;
a, b, c 또는 d는 0 또는 정수이고, 여기서 a는 1 또는 2이고, b는 0 또는 1이고, c는 0 또는 1이고, d는 0 또는 1이고;
RH는 반응식 3의 모이어티, R12-1 내지 R12-84 중 어느 하나로부터 선택된다.
화학식 XLV의 실시양태에서,
X1은 N이고, X2는 CH이거나, X1은 CH이고, X2는 N이거나;
X1은 N이고, X2는 CH이거나;
X1은 CH이고, X2는 N이거나;
a는 1이고, X1은 N이고, X2는 CH이거나, X1은 CH이고, X2는 N이거나;
a는 1이고, X1은 N이고, X2는 CH이거나;
a는 1이고, 및 X1은 CH이고, X2는 N이거나;
a는 2이고, X1은 N이고, X2는 CH이거나, X1은 CH이고, X2는 N이거나;
a는 2이고, 및 X1은 N이고, X2는 CH이거나;
a는 2이고, X1은 CH이고, X2는 N이다.
화학식 XLV의 실시양태 및 그 안의 X1, X2, 및 a의 각각의 상기 실시양태에서,
b는 0이고, c는 0이거나, b는 0이고, c는 1이거나, b는 1이고, c는 0이거나, b는 1이고, c는 1이거나;
b는 0이고, c는 0이거나;
b는 0이고, c는 1이거나;
b는 1이고, c는 0이거나;
b는 1이고, c는 1이다.
화학식 XLV의 실시양태 및 그 안의 X1, X2, a, b 및 c의 각각의 상기 실시양태에서,
d는 0이거나,
d는 1이다.
화학식 XLV의 실시양태 및 그 안의 X1, X2, a, b, c 및 d의 각각의 상기 실시양태에서,
RH는 반응식 3의 모이어티 R12-1 내지 R12-84 중 하나이거나;
RH는 모이어티 R12-5; R12-44; R12-45; R12-58; R12-62; R12-75, R12-79; 또는 R12-80 중 하나이거나;
RH는
Figure pct00050
Figure pct00051
또는
Figure pct00052
이고,
여기서 R20 및 R21은 독립적으로 지시된 탄소 상의 수소, C1-C3 알킬, C1-C3 플루오로알킬 또는 할로겐이거나, 열거된 원자 또는 기 중 하나 이상에 의한 지시된 고리 상의 치환을 나타낸다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, R20 및 R21은 둘 다 수소이거나, 모든 이용 가능한 고리 위치에서 수소를 나타낸다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, R20 및 R21은 독립적으로 지시된 탄소 상의 수소, 메틸, 트리플루오로메틸 또는 할로겐이거나, 열거된 원자 또는 기 중 하나 이상에 의한 지시된 고리 상의 치환을 나타낸다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, R20 및 R21은 독립적으로 상기 지시된 탄소 상의 메틸, 트리플루오로메틸 또는 할로겐이거나, 열거된 원자 또는 기 중 하나 이상에 의한 지시된 고리 상의 치환을 나타낸다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, R21은 수소이거나, 지시된 고리 상의 모든 이용 가능한 위치에서 수소를 나타내고, R20은 상기 지시된 탄소 상의 메틸, 트리플루오로메틸 또는 할로겐이거나, 열거된 원자 또는 기 중 하나 이상에 의한 지시된 고리 상의 치환을 나타낸다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, R20은 수소이거나, 지시된 고리 상의 모든 이용 가능한 위치에서 수소를 나타내고, R21은 상기 지시된 탄소 상의 메틸, 트리플루오로메틸 또는 할로겐이거나, 열거된 원자 또는 기 중 하나 이상에 의한 지시된 고리 상의 치환을 나타낸다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, R20 또는 R21의 할로겐은 독립적으로 플루오르, 염소 또는 브롬이다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, RH는 R12-79; R12-80; R12-44, 여기서 R'은 모든 고리 위치에서 수소를 나타내고; R12-45, 여기서 R'은 모든 고리 위치에서 수소를 나타내고; R12-58, 여기서 R'은 모든 이용 가능한 고리 위치에서 수소를 나타내고; R12-62, 여기서 R'은 모든 이용 가능한 고리 위치에서 수소를 나타내고; 2-할로퀴놀린-4-일; 2-클로로퀴놀린-4-일; R12-75, 여기서 모든 Rs는 수소이고, X는 할로겐이고, R12-5, 여기서 R은 수소이고, R'은 모든 고리 위치에서 수소를 나타내고; R12-5, 여기서 R은 수소이고, R'은 6-고리 위치에서 할로겐을 나타내고; 6-클로로퀴놀린-4-일, 2-C1-C3알킬-1H-인돌-3-일 또는 2-메틸-1H-인돌-3-일이다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, RH는 R12-80; R12-44, 여기서 R'은 모든 고리 위치에서 수소를 나타내고; R12-58, 여기서 R'은 모든 이용 가능한 고리 위치에서 수소를 나타내고; 2-할로퀴놀린-4-일; 2-클로로퀴놀린-4-일; R12-5, 여기서 R은 수소이고, R'은 모든 고리 위치에서 수소를 나타내고; R12-5, 여기서 R은 수소이고, R'은 6-고리 위치에서 할로겐을 나타내고; 6-클로로퀴놀린-4-일, 2-C1-C3 알킬-1H-인돌-3-일 또는 2-메틸-1H-인돌-3-일이다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, RH는 나프트-1-일이다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, RH는 4-브로모티오펜-2-일이다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, RH는 티오펜-2-일이다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, RH는 1H-인돌-3-일이다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, RH는 6-클로로-1H-인돌-3-일이다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, RH는 2-메틸-1H-인돌-3-일이다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, RH는 퀴놀린-4-일이다.
화학식 XLV의 상기 실시양태의 실시양태에서, RH는 2-클로로퀴놀린-4-일이다.
화학식 XLV의 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169로부터 선택된다. 더 특정한 실시양태에서, 화합물은 화합물 52, 118, 126, 131, 150, 또는 169로부터 선택된다. 화학식 XLV의 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 54, 57, 또는 75로부터 선택된다. 화학식 XLV의 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169로부터 선택된다. 화학식 XLV의 실시양태에서, 화합물은 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150, 또는 169 중 하나이다.
실시양태에서, 하기 화학식 XLVI의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물은 본원에 기재된 바와 같은 방법, 약제학적 조성물 및 약제학적 조합물에서 유용하다:
[화학식 XLVI]
Figure pct00053
상기 식에서, 변수는 화학식 XLV에서 정의된 바와 같고, RH 및 RP는 화학식 I 및 상기 열거된 이의 다양한 실시양태에서 정의된 바와 같다. 실시양태에서, RP는 임의의 모이어티 RN1-RN39이다.
화학식 XLVI의 실시양태에서, RP는 임의의 RN1; RN3; RN2 또는 RN4; RN5 또는 RN6; RN7 또는 RN8; RN9; RN10; RN11; RN12; RN13; RN14; RN15; RN16; RN17 또는 RN18; RN19 또는 RN20; RN21; RN22; RN23 또는 RN24; RN25; RN26-RN29; RN27-RN32; RN30; RN31; RN33-RN36; RN37; RN38; RN39; 또는
RN1, RN2, RN3, RN4, RN11, RN13, 또는 RN14; 또는
비치환된 RN1-RN31 또는
RN32-RN-39; 또는
RN37; 또는
RN38 또는 RN39이다.
지방족 화합물은 직쇄, 분지쇄, 또는 비방향족 고리에 함께 결합된 탄소 및 수소를 함유하고 단일, 이중, 또는 삼중 결합을 함유할 수 있는 유기 화합물이다. 지방족 화합물은 방향족 화합물과 구별된다. 본원에서 용어 지방족기는 방향족이 아닌 탄소 및 수소를 함유하는 1가 기를 지칭한다. 지방족기는 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및 사이클로알키닐, 뿐만 아니라 다른 지방족기로 치환된 지방족기, 예를 들면, 알킬기로 치환된 알케닐기, 사이클로알킬기로 치환된 알킬기를 포함한다.
용어 알킬 또는 알킬기는 직쇄 또는 분지형 포화 탄화수소의 모노라디칼을 지칭한다. 알킬기는 직쇄 및 분지형 알킬기를 포함한다. 달리 기재되지 않는 한, 알킬기는 1-8개의 탄소 원자(C1-C8 알킬기)를 갖고, 1-6개의 탄소 원자(C1-C6 알킬기)를 함유하는 것이 바람직하고, 1-3개의 탄소 원자(C1-C3 알킬기)를 함유하는 것이 더 바람직하다. 알킬기는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 비수소 치환기로 임의로 치환된다. 예시적인 알킬기는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, 다양한 분지형 펜틸, n-헥실, 다양한 분지형 헥실을 포함하고, 이들 모두는 임의로 치환되고, 여기서 치환은 본원의 다른 곳에서 정의된다. 치환된 알킬기는 완전 할로겐화되거나 반할로겐화된 알킬기, 예를 들면, 하나 이상의 수소가 하나 이상의 플루오르 원자, 염소 원자, 브롬 원자 및/또는 요오드 원자로 대체된 알킬기를 포함한다. 치환된 알킬기는 완전 플루오르화되거나 반플루오르화된 알킬을 포함한다.
사이클로알킬기 적어도 하나의 3원 이상의 탄소 고리를 갖는 알킬기이다. 사이클로알킬기는 3-12원 탄소 고리를 갖는 것들을 포함한다. 사이클로알킬기는 3-20개의 탄소 원자를 갖는 것들 및 3-12개의 탄소 원자를 갖는 것들을 포함한다. 더 구체적으로, 사이클로알킬기는 적어도 하나의 3-10원 탄소 고리를 가질 수 있다. 사이클로알킬기는 고리에서 3-10개의 탄소를 갖는 단일 탄소 고리를 가질 수 있다. 사이클로알킬기는 임의로 치환된다. 사이클로알킬기는 6-12개의 탄소를 갖는 비사이클릭일 수 있다. 예시적인 사이클로알킬기는 그 중에서도 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 사이클로노닐 및 사이클로데실기를 포함한다. 비사이클릭 알킬기는 융합된 비사이클릭기 및 브릿지형 비사이클릭기를 포함한다. 예시적인 비사이클로알킬기는 그 중에서도 비사이클로[2.2.2]옥틸, 비사이클로[4.4.0]데실(데칼리닐), 및 비사이클로[2.2.2]헵틸(노보닐)을 포함한다.
사이클로알킬알킬기는 본원에 기재된 바와 같은 사이클로알킬기로 치환되는 본원에 기재된 바와 같은 알킬기이다. 더 구체적으로, 알킬기는 메틸 또는 에틸기이고, 사이클로알킬기는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실 기이다. 사이클로알킬기는 임의로 치환된다. 특정 실시양태에서, 임의의 치환은 하나 이상의 할로겐, 1-3개의 탄소 원자를 갖는 알킬기, 1-3개의 탄소 원자를 갖는 알콕시, 하이드록실 및 니트로기에 의한 치환을 포함한다.
용어 알킬렌은 직쇄 또는 분지형 포화 탄화수소의 2가 라디칼을 지칭한다. 알킬렌기는 달리 기재되지 않는 한, 1-12개의 탄소 원자를 가질 수 있다. 알킬렌기는 2-12개, 2-8개, 2-6개 또는 2-4개의 탄소 원자를 갖는 것들을 포함한다. 본원에서 연결기(L1)는 알킬렌기, 특히 직쇄, 비치환된 알킬렌기, -(CH2)n-을 포함하고, 여기서 n은 1-12이거나, n은 1-10이거나, n은 1-9이거나, n은 1-8이거나, n은 1-7이거나, n은 1-6이거나, n은 1-5이거나, n은 1-4이거나, n은 1-3이거나, n은 2-10이거나, n은 2-9이거나, n은 2-8이거나, n은 2-7이거나, n은 2-6이거나, n은 2-5이거나, n은 2-4이다.
알콕시기는 산소(R알킬-O-)에 연결된, 상기 널리 논의된 바와 같은 알킬기이다. 알콕시기는 1가이다.
알케닐렌기는 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬렌기의 2가 라디칼이다. 특정 실시양태에서, 동일한 탄소 원자는 2개의 이중 결합의 부분이 아니다. 알케닐렌기에서 알킬렌기의 하나 이상의 CH2-CH2 모이어티는 탄소-탄소 이중 결합으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 알케닐렌기는 2-12개의 탄소 원자 또는 더 바람직하게는 3-12개의 탄소 원자를 함유한다. 특정 실시양태에서, 알케닐렌기는 1 또는 2개의 이중 결합을 함유한다. 특정 실시양태에서, 알케닐렌기는 1 또는 2개의 트랜스-이중 결합을 함유한다. 특정 실시양태에서, 알케닐렌기는 1 또는 2개의 시스-이중 결합을 함유한다. 예시적인 알케닐렌기는 다음을 포함한다:
-(CH2)n-CH=CH-(CH2)n-, 여기서 n은 1-4이고, 더 바람직하게는 2이고;
-(CH2)n-CH=CH-CH=CH-(CH2)n-, 여기서 n은 1-4이고, 더 바람직하게는 1 또는 2이다.
알콕시알킬기는 비인접 내부 -CH2-기 중 하나 이상이 -O-로 대체된 알킬기이고, 이러한 기는 또한 에테르기로 지칭될 수 있다. 알콕시알킬기는 1가이다. 이러한 기는 직쇄 또는 분지형일 수 있지만, 직쇄가 바람직하다. 알콕시알킬기는 2-12개의 탄소 원자 및 1, 2, 3 또는 4개의 산소 원자를 갖는 것들을 포함한다. 더 구체적으로, 알콕시알킬기는 3 또는 4개의 탄소 및 1개의 산소를 갖는 것들, 또는 4, 5 또는 6개의 탄소 및 2개의 산소를 갖는 것들을 포함한다. 기에서 각각의 산소는 기에서 탄소에 결합된다. 기는 기의 탄소에 대한 결합을 통해 분자에 결합된다.
알콕시알킬렌기는 2가 알콕시알킬기이다. 이러한 기는 내부 -CH2-기 중 하나 이상이 산소로 대체된 알킬렌기로서 기재될 수 있다. 이러한 기는 직쇄 또는 분지형일 수 있지만, 직쇄기가 바람직하다. 알콕시알킬렌기는 2-12개의 탄소 원자 및 1, 2, 3 또는 4개의 산소 원자를 갖는 것들을 포함한다. 더 구체적으로, 알콕시알킬렌기는 3 또는 4개의 탄소 및 1개의 산소를 갖는 것들, 또는 4, 5 또는 6개의 탄소 및 2개의 산소를 갖는 것들을 포함한다. 기에서 각각의 산소는 기에서 탄소에 결합된다. 기는 기에서 탄소에 대한 결합을 통해 분자에 결합된다. 본원에서 연결기(L1)는 알콕시알킬렌기, 특히 직쇄, 비치환된 알콕시알킬렌기를 포함한다. 특정한 알콕시알킬렌기는 그 중에서도 -CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH2-CH2-,-CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-, -CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH2-CH2-O-CH2-, 및 -CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH2-를 포함한다.
용어 아실기는 기 -CO-R을 지칭하고, 여기서 R은 본원에 기재된 바와 같은 수소, 알킬 또는 아릴기이다.
아릴기는 하나 이상의 5원 또는 6원 방향족 고리를 갖는 1가 기를 포함한다. 아릴기는 1개, 2개 또는 3개의 6원 방향족 고리를 함유할 수 있다. 아릴기는 2개 이상의 융합된 방향족 고리를 함유할 수 있다. 아릴기는 2개 또는 3개의 융합된 방향족 고리를 함유할 수 있다. 아릴기는 임의로 하나 이상의 비수소 치환기로 치환된다. 치환된 아릴기는 그 중에서도 알킬 또는 알케닐기로 치환된 것들을 포함하고, 이 기는 결국 임의로 치환될 수 있다. 특정한 아릴기는 페닐기, 비페닐기, 및 나프틸기를 포함하고, 이들 모두는 본원에 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 치환된 아릴기는 완전 할로겐화되거나 반할로겐화된 아릴기, 예를 들면, 하나 이상의 수소가 하나 이상의 플루오르 원자, 염소 원자, 브롬 원자 및/또는 요오드 원자로 대체된 아릴기를 포함한다. 치환된 아릴기는 완전 플루오르화되거나 반플루오르화된 아릴기, 예를 들면, 하나 이상의 수소가 하나 이상의 플루오르 원자로 대체된 아릴기를 포함한다.
알킬기는 알킬기가 아릴기로 치환된 아릴알킬기를 포함한다. 아릴알킬기는 그 중에서도 벤질 및 펜에틸기를 포함한다. 아릴알킬기는 본원에 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 치환된 아릴알킬기는 아릴기가 1-5개의 비수소 치환기로 치환된 것들 및 특히 1개, 2개 또는 3개의 비수소 치환기로 치환된 것들을 포함한다. 유용한 치환기는 그 중에서도 메틸, 메톡시, 하이드록시, 할로겐, 및 니트로를 포함한다. 특히 유용한 치환기는 하나 이상의 할로겐이다. 특정한 치환기는 F. Cl, 및 니트로를 포함한다.
아실기는 R-CO-기이고, 여기서 R은 각각 임의로 치환되는 본원에 기재된 바와 같은 알킬, 사이클로알킬 또는 아릴이다.
아실 옥시기는 R-COO-기이고, 여기서 R은 R은 각각 임의로 치환되는 본원에 기재된 바와 같은 알킬, 사이클로알킬 또는 아릴이다.
알콕시카보닐기는 RO-CO-기이고, 여기서 R은 각각 임의로 치환되는 본원에 기재된 바와 같은 알킬 또는 사이클로알킬이다.
카복실기는 -COOH기이고, 이는 이온화된 형태 -COO-일 수 있다.
헤테로사이클릭기는 하나 이상의 포화 또는 불포화 탄소 고리를 갖고 고리당 하나 이상의 헤테로원자(예를 들면, N, O 또는 S)를 함유하는 1가 기이다. 특정 실시양태에서, 헤테로사이클릭기는 1 내지 6개의 헤테로원자(예를 들면, N, O 또는 S)를 함유한다. 특정한 실시양태에서, 헤테로사이클릭기는 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유한다. 이러한 기는 임의로 1개, 2개 또는 3개의 이중 결합을 함유한다. 원자가 요건을 만족시키기 위하여, 고리 원자는 하나 이상의 수소에 결합되거나 본원에 기재된 바와 같이 치환될 수 있다. 헤테로사이클릭 고리에서 하나 이상의 탄소는 -CO-기일 수 있다. 고리에서 헤테로원자는 원자가에 따라 하나 이상의 치환기로 치환되거나 하나 이상의 산소 원자로 치환될 수 있다. 헤테로사이클릭 고리 구성원은, 예를 들면, -N=, -NH-, -NR- , -SO-, 또는 -SO2-를 포함할 수 있다. 헤테로사이클릭기는 3-12개의 탄소 원자, 및 1-6개의 헤테로원자를 갖는 것들을 포함하고, 여기서 1 또는 2개의 탄소 원자는 -CO-기로 대체된다. 헤테로사이클릭기는 이들 중 3개 이하가 탄소가 아닌 헤테로원자일 수 있는 3-12 또는 3-10 고리 원자를 갖는 것들을 포함한다. 헤테로사이클릭기는 각각 포화 또는 불포화인 하나 이상의 고리를 함유할 수 있다. 헤테로사이클릭기는 비사이클릭 및 트리사이클릭기를 포함한다. 바람직한 헤테로사이클릭기는 5원 또는 6원 고리를 갖는다. 헤테로사이클릭기는 본원에 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 구체적으로, 헤테로사이클릭기는 하나 이상의 알킬기로 치환될 수 있다. 헤테로사이클릭기는 1 또는 2개의 질소 및 1 또는 2개의 이중 결합을 갖는 5 및 6원 고리를 갖는 것들을 포함한다. 헤테로사이클릭기는 산소 또는 황 및 1 또는 2개의 이중 결합을 갖는 5 및 6원 고리를 갖는 것들을 포함한다. 헤테로사이클릭기는 5원 또는 6원 고리 및 2개의 상이한 헤테로원자, 예를 들면, N 및 O, O 및 S 또는 N 및 S를 갖는 것들을 포함한다. 특정한 헤테로사이클릭기는 그 중에서도 피롤리디닐, 피페리딜, 피페라지닐, 피롤릴, 피롤리닐, 푸릴, 티에닐, 모르폴리닐, 옥사졸릴, 옥사졸리닐, 옥사졸리디닐, 인돌릴, 트리아졸릴, 트리아지닐기, 설탐기(예를 들면, 1,1-디옥시도이소티아졸리딘-2-일, 1,1-디옥시도티아지난-2-일)를 포함한다.
헤테로사이클알킬기는 하나 이상의 헤테로사이클기로 치환된 알킬기이고, 여기서 알킬기는 임의로 추가의 치환기를 갖고, 헤테로사이클기는 임의로 치환된다. 특정한 기는 헤테로사이클 치환된 메틸 또는 에틸기이다.
헤테로아릴기는 적어도 하나의 고리가 헤테로원자(비탄소 고리 원자)를 함유하는 하나 이상의 방향족 고리를 갖는 1가 기이다. 헤테로아릴기는 1개, 2개 또는 3개의 헤테로원자를 갖는 1 또는 2개의 헤테로방향족 고리를 갖는 것들을 포함하고, 임의로 1개의 6원 방향족 고리를 갖는다. 헤테로아릴기는 5-20개, 5-12개 또는 5-10개의 고리 원자를 함유할 수 있다. 헤테로아릴기는 헤테로원자를 갖는 1개의 방향족 고리 및 탄소 고리 원자를 함유하는 1개의 방향족 고리를 갖는 것들을 포함한다. 헤테로아릴기는 하나 이상의 5원 또는 6원 방향족 헤테로방향족 고리 및 하나 이상의 6원 탄소 방향족 고리를 갖는 것들을 포함한다. 헤테로방향족 고리는 고리에서 하나 이상의 N, O, 또는 S 원자를 포함할 수 있다. 헤테로방향족 고리는 1개, 2개 또는 3개의 N을 갖는 것들, 1 또는 2개의 O를 갖는 것들, 및 1 또는 2개의 S를 갖는 것들, 또는 1개, 2개 또는 3개의 N, O 또는 S의 조합을 갖는 것들을 포함할 수 있다. 특정한 헤테로아릴기는 푸릴, 피리디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 퀴놀리닐, 푸리닐, 인돌릴 기를 포함한다. 특정한 실시양태에서, 헤테로아릴기는 인돌릴기이고, 더 구체적으로 인돌-3-일기이다.
헤테로원자는 O, N, S, P 또는 B를 포함한다. 더 구체적으로 헤테로원자는 N, O 또는 S이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 헤테로원자는 방향족 또는 카보사이클릭 고리에서 탄소에 대하여 치환된다. 원자가를 만족시키기 위하여 이러한 방향족 또는 카보사이클릭 고리에서 임의의 헤테로원자는 H 또는 치환기, 예를 들면, 알킬기 또는 다른 치환기에 결합될 수 있다.
헤테로아릴알킬기는 하나 이상의 헤테로아릴기로 치환된 알킬기이고, 여기서 알킬기는 임의로 추가의 치환기를 갖고, 아릴기는 임의로 치환된다. 특정한 알킬기는 메틸 및 에틸기이다.
용어 아미노기는 종 -N(H)2를 지칭한다. 용어 알킬아미노는 종 -NHR"을 지칭하고, 여기서 R"은 알킬기, 특히 1-3개의 탄소 원자를 갖는 알킬기이다. 용어 디알킬아미노는 종 -N(R")2를 지칭하고, 여기서 각각의 R"은 알킬기, 특히 1-3개의 탄소 원자를 갖는 알킬기이다.
본원에서 기는 임의로 치환된다. 가장 일반적으로 임의의 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭기는 하나 이상의 할로겐, 하이드록실기, 니트로기, 시아노기, 이소시아노기, 옥소기, 티옥소기, 아지드기, 시아네이트기, 이소시아네이트기, 아실기, 할로알킬기, 알킬기, 알케닐기 또는 알키닐기(특히 1-4개의 탄소를 갖는 것들), 페닐 또는 벤질 기(할로겐 또는 알킬 치환된 것들 포함), 알콕시, 알킬티오, 또는 머캅토(HS-)로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 임의의 치환은 1-12개의 비수소 치환기에 의한 치환이다. 특정 실시양태에서, 임의의 치환은 1-6개의 비수소 치환기에 의한 치환이다. 특정 실시양태에서, 임의의 치환은 1-3개의 비수소 치환기에 의한 치환이다. 특정 실시양태에서, 임의의 치환기는 6개 이하의 탄소 원자를 함유한다. 특정 실시양태에서, 임의의 치환은 하나 이상의 할로겐, 하이드록시기, 시아노기, 옥소기, 티옥소기, 비치환된 C1-C6 알킬기 또는 비치환된 아릴기에 의한 치환이다. 용어 옥소기 및 티옥소기는 각각 -CO-(카보닐) 또는 -CS-(티오카보닐) 기를 형성하는 =O 또는 =S에 의한 탄소 원자의 치환을 지칭한다.
특정한 치환된 알킬기는 할로알킬기, 특히 트리할로메틸기, 구체적으로 트리플루오로메틸기를 포함한다. 특정한 치환된 아릴기는 모노-, 디-, 트리-, 테트라- 및 펜타-할로 치환된 페닐기; 모노-, 디-, 트리-, 테트라-, 펜타-, 헥사-, 및 헵타-할로 치환된 나프탈렌기; 3- 또는 4-할로 치환된 페닐기, 3- 또는 4-알킬 치환된 페닐기, 3- 또는 4-알콕시 치환된 페닐기, 3- 또는 4-RCO 치환된 페닐, 5- 또는 6-할로 치환된 나프탈렌기를 포함한다. 더 구체적으로, 치환된 아릴기는 아세틸페닐기, 특히 4-아세틸페닐기; 플루오로페닐기, 특히 3-플루오로페닐 및 4-플루오로페닐기; 클로로페닐기, 특히 3-클로로페닐 및 4-클로로페닐기; 메틸페닐기, 특히 4-메틸페닐기, 및 메톡시페닐기, 특히 4-메톡시페닐기를 포함한다.
사이클릭기에 적용되는 바와 같은 용어 방향족은 가능하게는 하나 이상의 헤테로원자, 예를 들면, 산소 원자, 황 원자 또는 질소 원자를 통해 전체 고리 구조 주변에 컨쥬게이트되는 이중 결합을 함유하는 고리 구조를 지칭한다. 아릴기, 및 헤테로아릴기는 방향족기의 예이다. 방향족기의 컨쥬게이트된 시스템은 특정한 수의 전자, 예를 들면, 전형적으로 혼성화되지 않은 p-오피탈인 컨쥬게이트된 시스템을 구성하는 전자 오비탈을 점유하는 6 또는 10개의 전자를 함유한다.
용어 카보사이클릭은 3 내지 12개의 탄소 원자를 포함하고 모노사이클릭, 비사이클릭 또는 트리사이클릭일 수 있는 탄소 고리 또는 고리 시스템을 갖는 1가 기를 지칭한다. 고리는 임의의 헤테로원자를 함유하지 않는다. 고리는 불포화, 부분 불포화 또는 포화일 수 있다.
본원에서 화학식의 화합물 및 치환기는 임의로 치환된다. 치환기는 단일 원자(예를 들면, 할로겐 원자) 또는 서로 공유 결합된 2개 이상의 원자의 기를 지칭하고, 이는 전형적으로 수소 원자 대신에, 분자의 원자 또는 원자들의 원자가 요건을 만족시키기 위하여 분자의 원자 또는 원자들에 공유 결합된다. 치환기의 예는 그 중에서도 알킬기, 하이드록실기, 알콕시기, 아실옥시기, 머캅토기, 및 아릴기를 포함한다. 치환기는 그 자체가 치환될 수 있다.
치환된 또는 치환은 하나 이상의 추가의 치환기, 예를 들면, 이에 한정되지 않지만, 할로겐, 알킬, 알콕시, 알킬티오, 트리플루오로메틸, 아실옥시, 하이드록시, 머캅토, 카복시, 아릴옥시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 모르폴리노, 피페리디노, 피롤리딘-1-일, 피페라진-1-일, 니트로, 설파토, 또는 다른 R기에 의한 분자 또는 화학적 기 또는 모이어티의 수소 원자의 대체를 지칭한다.
카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리는 다른 기, 예를 들면, 본원에서 알킬 및 아릴 기에서 일반적으로 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 치환은, 존재하는 경우, 전형적으로 고리 C, 고리 N 또는 둘 다에서 발생한다. 추가로, 카보사이클릭 및 헤테로사이클릭 고리는 임의로 고리에서 -CO-, -CO-O-, -CS- 또는 -CS-O- 모이어티를 함유할 수 있다.
치환된, 즉, 하나 이상의 비수소 치환기를 함유한 본원의 임의의 화학적 기에 관하여, 이러한 기는 입체적으로 실행 불가능하고/거나 합성적으로 실현 불가능한 임의의 치환 또는 치환 패턴을 함유하지 않는다는 것이 이해되어야 한다. 추가로, 본 발명의 화합물은 이러한 화합물의 치환으로부터 발생하는 모든 입체화학적 이성질체를 포함한다.
개시된 화합물의 보호된 유도체가 또한 고려된다. 개시된 화합물과 함께 사용하는데 다양한 적합한 보호기는 문헌[Greene and Wuts, Protective Groups in Organci Synthesis; 3rd Ed.; John Wiley & Sons, New York, 1999]에 개시되어 있다. 일반적으로, 보호기는 분자의 나머지 부분에 영향을 미치지 않을 조건하에 제거된다. 이러한 방법은 당업계에 널리 공지되어 있고, 산 가수분해, 가수소분해 등을 포함한다. 하나의 바람직한 방법은 에스테르의 제거, 예를 들면, 루이스 산 조건을 사용하는 포스포네이트 에스테르의 절단, 예를 들면, TMS-Br 매개된 에스테르 절단으로 유리 포스포네이트를 수득하는 것을 포함한다. 두번째 바람직한 방법은 보호기의 제거, 예를 들면, 적합한 용매 시스템, 예를 들면, 알코올, 아세트산 등 또는 이의 혼합물 중에서 탄소상 팔라듐을 이용한 가수소분해에 의한 벤질기의 제거를 포함한다. t-부톡시 카보닐 보호기를 포함하는 t-부톡시 기반의 기는 적합한 용매 시스템, 예를 들면, 물, 디옥산 및/또는 염화메틸렌 중에서 무기 또는 유기 산, 예를 들면, HCl 또는 트리플루오로아세트산을 이용하여 제거될 수 있다. 아미노 및 하이드록시 작용기를 보호하는데 적합한 또 다른 예시적인 보호기는 트리틸이다. 다른 통상적인 보호기는 공지되어 있고, 적합한 보호기는 문헌[Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis; 3rd Ed.; John Wiley & Sons, New York, 1999]과 협의하여 당업자에 의해 선택될 수 있다. 아민이 탈보호되는 경우, 수득된 염은 용이하게 중화되어 유리 아민을 수득할 수 있다. 유사하게는, 산 모이어티, 예를 들면, 포스폰산 모이어티가 노출되는 경우, 화합물은 산 화합물 또는 이의 염으로서 단리될 수 있다. 본원에서 화합물의 바람직한 유도체는, 예를 들면, 본원에서 구조적으로 관련된 화합물의 합성에서 이용될 수 있다.
본 발명은 종양 세포 이질성, MDR, 및 전이를 촉진하는 과정인 TCF-유도된 EMT를 표적으로 하는 신규한 치료적 전략을 제공한다. 본 발명자들의 구조 기반의 약물 디자인은 실시양태에서 TCF-유도된 EMT를 표적으로 하는 신규하고 강력한 CHD1L 억제제를 생성하였다. CHD1L 억제제에 의한 EMT의 역행은 세포독성 화학요법 및 표적화된 항종양 약물 뿐만 아니라 방사선 요법과의 조합으로 사용되는 경우, 효과적인 치료일 수 있다. 이러한 EMT 표적 제제는 또한 1차 종양 및 전이성 병변 둘 다를 임상적으로 관련된 요법에 민감하게 만들 수 있고, 잠재적으로 종양 세포 전이를 억제할 수 있다.
따라서, 본 발명의 하나의 측면은 광범위하게 다양한 진행 고형 종양 및 혈액암의 전이를 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있는 CHD1L 억제제이다. 본 발명의 모든 CHD1L 억제제 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 프로드러그, 입체이성질체, 및 대사산물이 또한 고려된다.
본 발명은 본원의 화학식에 따른 화합물의 약제학적으로 이용 가능한 용매화물을 명백하게 포함한다. 구체적으로, 유용한 용매화물은 수화물이다. 화학식 I의 화합물 또는 이의 염은 용매화(예를 들면, 수화)될 수 있다. 용매화는 제조 공정의 과정에서 일어나거나 발생할 수 있다(예를 들면, 본원의 화학식의 초기 무수 화합물의 흡습성의 결과로서(예를 들면, 수화)).
본 발명의 화합물은 프로드러그 형태를 가질 수 있다. 본 발명의 화합물의 프로드러그는 본 발명의 방법에서 유용하다. 생체내에서 전환되어 본 발명의 화합물의 생물학적, 약제학적 또는 치료학적 활성 형태를 제공할 것인 임의의 화합물은 프로드러그이다. 프로드러그의 다양한 예 및 형태는 당업계에 널리 공지되어 있다. 프로드러그는 대상체에게 프로드러그의 투여 후 생체내 생리학적 작용, 예를 들면, 가수분해, 대사 등을 통해 활성 화합물로 화학적으로 변형되는 활성 및 비활성 화합물이다. 본 문서 전체에서 사용되는 바와 같은 용어 프로드러그는 유도체의 수득된 생체내 생물변환 생성물이 본원에 기재된 화합물에서 정의된 바와 같은 활성 약물이 되는 약리학적으로 허용되는 유도체, 예를 들면, 에스테르, 아미드 및 포스페이트를 의미한다. 프로드러그는 바람직하게는 우수한 수성 용해도, 증가된 생체이용률을 갖고, 생체내에서 활성 TOP2A 억제제로 용이하게 대사된다. 본원에 기재된 화합물의 프로드러그는 변형이 일상적인 조작에 의해 또는 생체내에서 절단되어 모 화합물이 되는 방식으로 화합물에 존재하는 작용기를 변형시킴으로써 제조될 수 있다. 프로드러그의 제조 및 사용에 포함된 적합성 및 기술은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 프로드러그의 예는 그 중에서도 문헌[Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985), Methods in Enzymology, Vol. 42, at pp. 309-396, edited by K. Widder, et. al.(Academic Press, 1985); A Textbook of Drug Design and Development, edited by Krosgaard-Larsen and H. Bundgaard, Chapter 5, "Design and Application of Prodrugs," by H. Bundgaard, at pp. 113-191(1992); H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, Vol. 8, p. 1-38(1992); H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 77, p. 285(1988); and Nogrady(1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, pages 388-392]에서 확인된다.
화합물 또는 조성물의 투여는 화합물 또는 이의 염, 화합물의 프로드러그, 또는 화합물을 포함하는 약제학적 조성물의 제공을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 화합물 또는 조성물은 다른 사람에 의해 환자에게 투여될 수 있거나(예를 들면, 정맥내로), 대상체에 의해 자가 투여될 수 있다(예를 들면, 정제 또는 캡슐). 용어 "환자"는 포유동물(예를 들면, 인간 및 수의과 동물, 예를 들면, 개, 고양이, 돼지, 말, 양 및 소)을 지칭한다. 다른 제제, 예를 들면, 대안적인 항암제, 항신생물제 또는 암 세포독성제와 조합으로의 본원의 CHD1L 억제제의 투여가 고려된다. 이러한 조합된 투여는 이것이 효과적이고 CHD1L 억제제와 조합되는 임의의 공지된 대안적인 치료의 투여와 일치함에 따라, 동시에 또는 분, 시간 또는 일만큼 분리된 시간에 2개 이상의 활성 성분의 투여를 포함한다. 조합된 투여는 다시 CHD1L 억제제와 조합되는 공지된 대안적인 치료와 일치함에 따라, 동일한 방법 및/또는 환자의 신체의 위치 또는 상이한 위치에서 상이한 방법에 의한 투여를 추가로 포함한다.
실시양태에서, CHD1L 억제제는 하나 이상의 허용되는 약제학적 제형에서 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제 또는 항신생물 시술(예를 들면, 방사선 치료)과 함께 투여되거나, 상승작용적 효과를 제공하는 선택된 시간 기간 동안 분리되어 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제(들)는 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제와 동일한 경로로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제(들)는 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제와 상이한 경로로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제(들)는 경구로 또는 주사로 투여된다. 실시양태에서, 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제는 경구로 또는 주사로 투여된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제(들)는 종양에 국소적으로 또는 전신적으로 또는 두 투여 형태의 조합으로 투여된다. 실시양태에서, 대안적인 신생물제는 종양에 국소적으로 또는 전신적으로 또는 두 투여 형태의 조합으로 투여된다.
실시양태에서, 약제학적 조합물(하나의 대안적인 신생물제와 하나 이상의 CHD1L)의 구성요소는 이의 필요가 있는 대상체에게 상승작용적 치료적 효과를 제공하는 공동 치료적 양으로 투여된다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 구성요소는 임의의 적절한 방식으로 이의 필요가 있는 대상체에게 상승작용적 치료적 효과를 제공하는 공동 치료적 양으로 투여된다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 구성요소는 국소 또는 전신적 투여에 의해 또는 국소 및 전신적 투여의 조합에 의해 이의 필요가 있는 대상체에게 상승작용적 치료적 효과를 제공하는 공동 치료적 양으로 투여된다.
환자가 다중 약제학적 활성 화합물을 수용하거나 수용 중인 경우, 화합물은 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 정제의 경우, 활성 화합물은 하나의 정제 또는 분리된 정제들로 확인될 수 있고, 이는 한번에 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여된다. 추가로, 조성물은 상이한 제형일 수 있다는 것이 인식되어야 한다. 예를 들면, 하나 이상의 화합물은 정제를 통해 전달될 수 있는 반면, 다른 것은 주사를 통해 또는 시럽으로서 경구로 투여된다. 모든 조합, 전달 방법 및 투여 순서가 고려된다.
실시양태에서, 본원에서 조합 요법은 치료가 필요한 환자에 대한 하나 이상의 CHD1L 억제제의 투여 및 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 투여를 포함한다. 투여는 CHD1L 억제제(들) 및 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 상승작용적 치료 작용을 달성하는 임의의 투여 형태 또는 형태들을 포함한다. 투여는 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제와 CHD1L 억제제(들)의 동시, 동시적, 순차적, 연속적, 교대 또는 분리된 투여를 포함한다. 실시양태에서, CHD1L 억제제(들)의 경구 투여는 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 경구 또는 주사 투여와 조합될 수 있다. CHD1L 억제제(들)의 투여 및 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 투여의 순서(순차) 및 상대적 시기는 상승작용적 치료 작용을 달성하도록 조절된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제(들)의 투여는 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 투여와 동시에(즉, 서로 2시간 이하 내에) 수행된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제(들)의 투여는 서로 2시간 초과의 선택된 시간 기간 내에 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 투여와 분리된다. 실시양태에서, CHD1L 억제제(들)의 투여는 ± 24시간 내지 1주의 선택된 시간 기간 내에 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 투여와 분리된다.
실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 약제학적 조합물을 제공한다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 구성요소는 함께 있거나 분리될 수 있다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나 이상의 CHDL1 억제제 및 하나 이상의 토포이소머라제 억제제, PARP 억제제, 또는 티미딜레이트 합성효소 억제제를 함유하는 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 각각 약제학적 조합물의 상이한 구성요소를 함유하는, 2개 이상의 분리된 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나는 하나 이상의 CHD1L 억제제를 함유하고 하나는 하나 이상의 토포이소머라제 억제제, 하나 이상의 PARP 억제제 및/또는 하나 이상의 티미딜레이트 합성효소 억제제를 함유하는, 2개의 분리된 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 PARP 억제제를 함유하는 단일 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 토포이소머라제 억제제를 함유하는 단일 약제학적 조성물이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 티미딜레이트 합성효소 억제제를 함유하는 단일 약제학적 조성물이다.
실시양태에서, 약제학적 조합물의 구성요소는 선택된 투여 방식, 예를 들면, 경구 또는 주사에 적절한 단일 제형으로 함께 투여된다. 약제학적 조합물이 단일 제형인 실시양태에서, 제형 내의 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 상대적인 양은 고정된다. 실시양태에서, 약제학적 조합물은 2개의 분리된 약제학적 조성물 또는 제형으로 투여되고, 여기서 하나는 하나 이상의 CHD1L 억제제를 함유하고 하나는 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제를 함유한다. 이러한 분리된 투여는 선택된 투여 방식에 적절한 동일하거나 상이한 제형으로 수행될 수 있다.
실시양태에서, 약제학적 조합물의 구성요소는 하나 이상의 제형으로 투여되고, 동시에 또는 상이한 시간에 투여될 수 있다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 구성요소는 이러한 투여가 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 치료적으로 효과적인 조합된 양을 제공하도록, 특정한 시간 제한과 함께 또는 없이 동시에, 동시적으로 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 실시양태에서, 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 조합된 치료적 유효량은 부가적 치료적 효과보다 큰 효과를 나타낸다. 실시양태에서, 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제의 조합된 치료적 유효량은 상승작용적 치료적 효과를 나타낸다.
실시양태에서, 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물 제는 분리되어 제제화되고 분리되어 판매되지만, 이것이 필요한 대상체에게 약제학적 조합물로서 투여된다. 실시양태에서, 하나 이상의 CHD1L 억제제 및 하나 이상의 대안적인 암 세포독성제 또는 항신생물제는 동일한 장애 또는 질환 상태의 치료를 위하여 투여된다. 특정 실시양태에서, 장애 또는 질환 상태는 증식성 장애이고, 더 구체적으로 암이다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 구성요소는 약제학적 조합물의 구성요소의 동시, 동시적 또는 순차적 투여를 위한 설명서와 조합으로, 동일하거나 상이한 제형으로 함께 또는 분리되어 판매될 수 있다.
원하는 조합된 치료적 효과를 달성하는 임의의 투여 형태가 이용될 수 있다. 예를 들면, 조합된 투여는 하나 이상의 종양의 부위에 국소적일 수 있거나 대상체에게 전신적으로 투여될 수 있다. 실시양태에서, 약제학적 조합물의 하나 이상의 구성요소는 하나 이상의 종양 부위에 국소적으로 투여될 수 있고, 약제학적 조합물의 하나 이상의 다른 구성요소는 대상체에게 전신적으로 투여될 수 있다. 국소 및 전신 투여는 임의의 적절한 투여 방식에 의할 수 있다. 국소 투여는, 예를 들면, 주사, 주입 또는 국소 적용에 의할 수 있다. 전신 투여는, 예를 들면, 경구, 국소 또는 주사에 의할 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 CHD1L 억제제는 화학요법, 방사선요법, 면역요법, 수술 또는 이러한 요법의 임의의 조합과 조합되어 투여될 수 있다. 본원에 기재된 조합 요법(들)은 화학요법, 방사선요법, 면역요법, 수술 또는 이러한 요법의 임의의 조합과 조합되어 투여될 수 있다.
본원에서 약제학적 조성물은 지명된 활성 성분 또는 지명된 활성 성분들의 조합을 주어진 환자에게 주어진 투여 형태로 원하는 생물학적 활성을 달성하는데 효과적인 양으로 포함하고, 임의로 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 함유한다. 약제학적 조성물은 담체, 희석제, 및/또는 애쥬번트, 및 임의의 다른 생물학적 활성 성분을 포함하는 하나 이상의 비독성 약제학적으로 허용되는 첨가제와 함께 개시된 화합물 중 하나 이상의 양(예를 들면, 단위 투여량)을 포함할 수 있다. 이러한 약제학적 조성물은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa.(19th Edition)]에 개시된 것들과 같은 표준 약제학적 제제화 기술에 의해 제조될 수 있다.
실시양태에서, 본원에서 약제학적 조성물은 임의의 화학식 I-XIX, XXX-XXXII, XXXV, XXXV-XLII, XLV, XLVI 및 화학식 XX 및 XXI의 하나 이상의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 용어 "부형제"는 활성 약제학적 성분(API) 또는 또 다른 분명하게 지정된 활성 약제학적 성분이 아닌 임의의 약제학적으로 허용되는 첨가제, 담체, 희석제, 애쥬번트, 또는 기타 성분을 의미하고, 이는 전형적으로 제제 및/또는 환자에 대한 투여에 포함된다.
약제학적으로 허용되는 담체는 제제 내의 다른 성분과 혼화성이고 생물학적으로 허용되는 담체이다. 담체는 고체 또는 액체일 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 담체는 고체이고, 예를 들면, 경구 제형은 환제이다. 몇몇 실시양태에서, 담체는 액체이고, 예를 들면, 경구 제현은 용액 또는 현탁액이다. 담체는 가용화제, 현탁제, 충전제, 활택제, 압축 보조제, 결합제, 정제 붕해제, 또는 캡슐화 물질로서 작용할 수 있는 하나 이상의 물질을 포함할 수 있다. 액체 담체는 용액, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 엘릭서제를 제조하는데 사용될 수 있다. 활성 성분은 약제학적으로 허용되는 액체 담체, 예를 들면, 물(적절한 순도, 예를 들면, 무발열원, 살균 등), 유기 용매, 둘의 혼합물, 또는 약제학적으로 허용되는 오일 또는 지방 중에 용해되거나 현탁될 수 있다. 액체 담체는 다른 적합한 약제학적 첨가제, 예를 들면, 가용화제, 유화제, 완충제, 보존제, 감미제, 향미제, 현탁제, 증점제, 착색제, 점도 조절제, 안정제 또는 삼투도 조절제를 함유할 수 있다. 경구 투여를 위한 조성물은 액체 또는 고체 형태일 수 있다.
경구 및 비경구 투여를 위한 액체 담체의 적합한 예는 적절한 순도의 물, 수성 용액(특히 첨가제, 예를 들면, 셀룰로스 유도체 함유, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스 용액), 알코올(1가 알코올 및 다가 알코올, 예를 들면, 글리콜 포함) 및 이의 유도체, 및 오일을 포함한다. 특정 예에서, 경구 투여를 위한 액체 담체는 바람직하게는 액체 담체 중에 용해되거나 현탁된 활성 성분(즉, CHD1L 억제제)의 용액을 포함한다. 비경구 투여를 위하여, 담체는 또한 유성 에스테르, 예를 들면, 에틸 올레에이트 및 이소프로필 미리스테이트일 수 있다. 살균 액체 담체는 비경구 투여를 위한 살균 액체 형태 조성물에서 사용된다. 가압된 조성물을 위한 액체 담체는 할로겐화된 탄화수소 또는 다른 약제학적으로 허용되는 추진제일 수 있다. 살균 용액 또는 현탁액인 액체 약제학적 조성물은, 예를 들면, 근육내, 복강내 또는 피하 주사에 의해 투여될 수 있다. 살균 용액은 또한 정맥내로 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 조성물은 액체 또는 고체 형태일 수 있다. 담체는 또한 크림 및 연고, 페이스트, 및 젤의 형태일 수 있다. 크림 및 연고는 수중유 또는 유중수 유형의 점성이 있는 액체 또는 반고체 에멀젼일 수 있다.
실시양태에서, CHD1L 억제제의 투여는 약제학적으로 허용되는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 제형을 이용한다. 이러한 실시양태에서, 약제학적으로 허용되는 PEG는 약제학적으로 허용되는 유기 용매, 특히 약제학적으로 허용되는 극성, 비양성자성 용매와 조합될 수 있다. 실시양태에서, 유기 용매는 약제학적으로 허용되는 DMSO이다. 실시양태에서, 경구 투여는 600 g/mole 이하의 분자량을 갖는 저분자량 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 경구 제형을 이용한다. 더 특정한 실시양태에서, 경구 투여는 PEG 400을 이용한다. 더 특정한 실시양태에서, 경구 투여는 PEG 200을 이용한다. 실시양태에서, PEG는 이의 평균 Mn(수평균) 분자량에 의해 기재된다. 600 이하의 Mn을 갖는 PEG는 본원에서 CHD1L 억제제의 제제에 사용하는데 적합하다. 더 구체적으로, 400 또는 200의 Mn을 갖는 PEG는 본원에서 제제에 사용하는데 적합하다. 실시양태에서, 투여는 PEG, 바람직하게는 저분자량 PEG, 더 구체적으로 600 이하의 Mn을 갖는 PEG를 포함하는 경구 제제를 이용한다. 실시양태에서, 경구 제제는 PEG와 조합으로 CHD1L 억제제의 치료적 유효량을 포함하고, 특히 CHD1L 억제제는 PEG 중에 현탁되거나 용해된다. 실시양태에서, PEG 및 적절한 약제학적으로 허용되는 극성 비양성자성 용매의 조합. 실시양태에서, 극성 비양성자성 용매는 약제학적으로 허용되는 DMSO이다. 특정 실시양태에서, 경구 제제는 PEG 및 DMSO를 포함한다. 실시양태에서, PEG 및 DMSO의 용매 조합은 혼화성이다. 실시양태에서, PEG 및 DMSO의 조합은 CHD1L 억제제의 치료적 유효량을 용해시킨다. 실시양태에서, 경구 제제에서 DMSO에 대한 PEG의 부피비는 100 내지 4이다. 더 구체적으로, DMSO에 대한 PEG의 부피비는 20 내지 4, 또는 9 내지 4 또는 12 내지 6 또는 10 내지 8 범위이다. 특정 실시양태에서, PEG, 특히 저분자량 PEG 90 부피% 및 DMSO 10 부피%의 용매 혼합물이 경구 제제에 이용된다.
개시된 화합물의 "치료적 유효량"은 원하는 치료적 효과, 예를 들면, 항종양 또는 항전이 효과를 달성하는데 충분한 화합물의 투여량이다. 주어진 화합물의 치료적 유효량은 화합물, 투여 경로 및 제형 뿐만 아니라 치료되는 환자(연령, 체중 등)에 따라 좌우된다는 것이 이해될 것이다. 몇몇 예에서, 치료적 유효량은 시험관내 또는 생체내 조직에서 TCF-전사 및/또는 상피-중간엽 이행(EMT)을 조절하는 것으로 나타난 것들과 유사한 작용 부위에서 조직 농도를 달성하는데 충분한 양이다. 예를 들면, 화합물의 치료적 유효량은 대상체가 약 0.1 μg/kg 체중/일 내지 약 1000 mg/kg 체중/일의 투여량, 예를 들면, 약 1 μg/kg 체중/일 내지 약 1000 μg/kg 체중/일의 투여량, 예를 들면, 약 5 μg/kg 체중/일 내지 약 500 μg/kg 체중/일의 투여량을 수용하도록 할 수 있다. 본 발명의 CHD1L 억제제를 사용하는 치료가 또 다른 활성 성분을 사용하는 치료 또는 암 치료 또는 요법의 또 다른 형태와 조합되는 경우에, CHD1L 억제제의 치료적 유효량은 조합되는 활성 성분, 치료 또는 요법에 따라 좌우될 수 있다.
용어 조절하다는 생물학적 기능의 양, 정도, 또는 속도, 질환의 진행, 또는 병태의 개선을 변경하는 개시된 화합물의 능력을 지칭한다. 예를 들면, 조절은 TCF-전사 및/또는 EMT를 억제하거나 종양 전이 또는 종양형성을 억제하는 혈관신생의 증가 또는 감소를 유도하는 화합물의 능력을 지칭할 수 있다.
치료는 이것이 발달하기 시작한 후에 질환 또는 병리학적 병태의 징후 또는 증상을 개선시키는 치료적 개입을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 질환 또는 병리학적 병태와 관련하여 용어 개선은 치료의 임의의 관찰 가능한 유리한 효과를 지칭한다. 유리한 효과는, 예를 들면, 취약한 대상체에서 질환의 임상적 증상의 지연된 개시, 질환의 일부 또는 모든 임상적 증상의 중증도의 감소, 질환의 더 느린 진행, 대상체의 전체적인 건강 또는 행복의 개선, 또는 특정한 질환에 특이적인 당업계에 널리 공지된 다른 파라미터에 의해 증명될 수 있다. 질환의 치료라는 구는, 예를 들면, 질환, 예를 들면, 손상된 면역계와 관련이 있는 암 또는 질환에 대한 위험이 있거나 이를 갖고 있는 대상체에서 질환 또는 병태의 완전한 발달을 억제하는 것을 포함한다. 질환 또는 병태의 예방은 병리 또는 병태가 발달할 위험을 감소시키거나 병리 또는 병태의 중증도를 감소시킬 목적으로, 질환의 징후를 나타내지 않거나 질환의 초기 징후만을 나타내는 대상체에게 조성물을 예방적으로 투여하는 것을 지칭한다.
일반적으로 본원에서 CHD1L 억제제는 단독으로 또는 본원에 기재된 바와 같은 조합 요법으로 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물에 의해 일반적으로 치료될 수 있는 암은 제한 없이 암종, 예를 들면, 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 신장암, 폐암(소세포 폐암, 및 비소세포 폐암), 식도암, 담낭암, 난소암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 갑상선암, 전립선암, 및 피부암(편평상피 세포 암종 포함); 림프 계통의 조혈기 종양(백혈병, 급성 림프성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, B 세포 림프종, T 세포 림프종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 모발 세포 림프종 및 버킷 림프종 포함); 골수 계통의 조혈기 종양(급성 및 만성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군 및 전골수성 백혈병 포함); 중간엽 기원의 종양(섬유육종 및 횡문근육종, 및 다른 육종, 예를 들면, 연조직 및 뼈 포함); 중추 및 말초 신경계 종양(성상세포종, 신경모세포종, 신경교종 및 신경초종 포함); 및 기타종양(흑색종, 정상피종, 기형암종, 골육종, 색소성 건피증, 각질극 세포종(keratoctanthoma), 갑상선 여포성 암 및 카포시 육종을 포함)을 포함한다. 본 발명의 화합물로 치료될 수 있는 다른 암은 자궁내막암, 두경부암, 교모세포종, 악성 복수, 및 조혈암을 포함한다.
본 출원 전체에서 모든 참조, 예를 들면, 발행되거나 등록된 특허 또는 균등특허를 포함하는 특허 문서; 특허 출원 공개; 및 비특허 문헌 문서 또는 다른 원자료는 마치 개별적으로 참조로 포함되는 것처럼 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 명세서에서 언급된 모든 특허 및 출판물은 본 발명이 관련된 분야의 기술자의 기술 수준을 나타낸다. 본원에 언급된 참조는 몇몇 경우 이들의 출원일과 같이 최신 기술을 나타내는 그 전문이 본원에 참조로서 포함되고, 이는 필요한 경우, 선행 기술에 있는 특정한 실시양태를 배제하기 위하여(예를 들면, 주장하지 않기 위하여) 이 정보가 본원에 이용될 수 있다는 것으로 의도된다. 예를 들면, 화합물이 주장되는 경우, 본원에 개시된 참조(특히 참조 특허 문서)에 개시된 특정한 화합물을 포함하는 선행 기술에 공지된 화합물은 청구항에 포함되는 것이 의도되지 않는다.
문헌[Esquer et al., 2021] 및 그 학회지 논문에 대한 임의의 보충 정보는 본원의 CHD1L 억제제의 활성 및 특성을 제조 및 평가하는데 유용한 생물학적 및 화학적 방법의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 각각 포함된다.
문헌[Abbott et al., 2020] 및 그 학회지 논문에 대한 보충 정보는 본원의 CHD1L 억제제의 활성 및 특성을 제조 및 평가하는데 유용한 생물학적 및 화학적 방법의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 각각 포함된다.
문헌[Esquer et al., 2020] 및 그 학회지 논문에 대한 임의의 보충 정보는 본원의 CHD1L 억제제의 활성 및 특성을 제조 및 평가하는데 유용한 생물학적 및 화학적 방법의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 각각 포함된다.
문헌[Yang et al., 2020] 및 그 학회지 논문에 대한 임의의 보충 정보는 본원의 CHD1L 억제제의 활성 및 특성을 제조 및 평가하는데 유용한 생물학적 및 화학적 방법의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 각각 포함된다.
문헌[Abraham et al., 2019] 및 그 학회지 논문에 대한 임의의 보충 정보는 본원의 CHD1L 억제제의 활성 및 특성을 제조 및 평가하는데 유용한 생물학적 및 화학적 방법의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 각각 포함된다.
문헌[Zhou et al., 2020] 및 그 학회지 논문에 대한 임의의 보충 정보는 본원의 CHD1L 억제제의 활성 및 특성을 제조 및 평가하는데 유용한 생물학적 및 화학적 방법의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 각각 포함된다.
2021년 3월 24일에 출원된 제PCT/US2021/023981호, 2020년 3월 24일에 출원된 미국 가특허 출원 제62/994,259호, 2021년 1월 20일에 출원된 제63/139,394호는 그 전문이 본원에 참조로서 각각 포함된다.
문헌[Prigaro et al. 2022] 및 그 학회지 논문에 대한 임의의 보충 정보는 본원의 CHD1L 억제제의 활성 및 특성을 제조 및 평가하는데 유용한 생물학적 및 화학적 방법의 설명에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 각각 포함된다.
치환기의 군이 본원에 개시되는 경우, 군의 구성원의 임의의 이성질체 및 거울상이성질체, 및 치환기를 사용하여 형성될 수 있는 화합물의 부류를 포함하는 군 및 모든 하위군의 모든 개별적인 구성원은 개별적으로 개시된다. 화합물이 주장되는 경우, 본원에 개시된 참조에서 개시된 화합물을 포함하는 당업계에 공지된 화합물은 포함되지 않는 것이 의도된다는 것이 이해되어야 한다. 마쿠쉬 군 또는 다른 군이 본원에서 사용되는 경우, 군의 모든 개별적인 구성원 및 군의 모든 조합 및 가능한 하위조합은 본 발명에 개별적으로 포함되는 것이 의도된다.
화합물이 화합물의 특정한 이성질체, 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체가, 예를 들면, 화학식 또는 화학명에서 특정되지 않게 본원에 기재되는 경우, 기재에는 개별적으로 또는 임의의 조합으로 기재된 화합물의 각각의 이성질체 및 거울상이성질체(예를 들면, 시스/트랜스 이성질체, R/S 거울상이성질체)가 포함되는 것이 의도된다. 추가로, 달리 특정되지 않는 한, 본원에 개시된 화합물의 모든 동위원소 변이체는 본 발명에 포함되는 것이 의도된다. 예를 들면, 개시된 분자의 임의의 하나 이상의 수소는 중수소 또는 삼중수소로 대체될 수 있다는 것이 이해될 것이다. 분자의 동위원소 변이체는 일반적으로 분자에 대한 검정 및 분자 또는 이의 사용과 관련된 화학적 및 생물학적 연구에서 표준으로서 유용하다. 방사성 동위원소를 보유한 것들을 포함하는 동위원소 변이체는 또한 진단적 검정 및 치료학에서 유용할 수 있다. 이러한 동위원소 변이체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다.
본원에 개시된 분자는 하나 이상의 이온화 가능한 기[양성자가 제거(예를 들면, -COOH) 추가(예를 들면, 아민)될 수 있거나 4차화(예를 들면, 아민)될 수 있는 기]를 함유할 수 있다. 이러한 분자의 모든 가능한 이온 형태 및 이의 염은 본원에서 본 발명에 개별적으로 포함되는 것이 의도된다. 본원의 화합물의 염과 관련하여, 당업자는 주어진 응용을 위하여 광범위하게 다양한 이용 가능한 반대이온 중에서 본 발명의 염의 제조에 적절한 것들을 선택할 수 있다. 특정한 응용에서, 염의 제조를 위한 주어진 음이온 또는 양이온의 선택은 그 염의 증가되거나 감소된 용해도를 야기할 수 있다.
본 발명의 CHD1L 억제제는 상업적으로 이용 가능하거나, 본원에 개시된 방법 또는 상업적으로 이용 가능하거나 공지된 방법으로 제조될 수 있는 출발 물질 및 시약을 사용하는 방법의 일상적인 개조에 의해 과도한 실험 없이 제조될 수 있다. 합성되는 화합물에 따라 원하지 않는 컨쥬게이션으로부터 출발 물질의 잠재적인 반응성 기를 보호하는 것이 필요할 수 있다는 것이 인식될 것이다. 다양한 반응성 기에 유용한 보호기는, 예를 들면, 문헌[Wutts & Greene, 2007]에 기재된 바와 같이 당업계에 공지되어 있다.
본원의 화합물은 염의 형태, 예를 들면, 선택된 음이온과 함께 암모늄 염, 또는 4차화된 암모늄 염일 수 있다. 염은 산을 유리 염기에 첨가함으로써 당업계에 공지된 바와 같이 형성될 수 있다. 염은 무기산, 예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등, 또는 유기산, 예를 들면, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말레산, 말론산, 석신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산, N-아세틸시스테인 등과 함께 형성될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 염의 형태일 수 있는 하나 이상의 음성으로 하전된 기(유리 산)를 함유할 수 있다. 무기 염기와 함께 형성되는 유리 산의 예시적인 염은 알칼리 금속 염(예를 들면, Li+, Na+, K+), 알칼리 토금속 염(예를 들면, Ca2+, Mg2+), 비독성 중금속 염 및 암모늄(NH4 +) 및 치환된 암모늄(N(R')4 + 염, 여기서 R'은 수소, 알킬, 또는 치환된 알킬이고, 즉, 메틸, 에틸, 또는 하이드록시에틸을 포함하고, 구체적으로, 트리메틸 암모늄, 트리에틸 암모늄, 및 트리에탄올 암모늄 염), 리신, 아르기닌, N-에틸피페리딘, 피페리딘 등의 양이온 형태의 염을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 화합물은 또한 양쪽성 이온의 형태로 존재할 수 있다. 본원의 화합물은 약제학적으로 허용되는 염의 형태일 수 있고, 이는 유리 염기 또는 유리 산의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하고 생물학적이지 않거나 그렇지 않으면 바람직하지 않은 염을 지칭한다.
기재되고 주장되는 바와 같은 본 발명의 범위는 화합물의 라세미 형태 뿐만 아니라 개별적인 거울상이성질체 및 이의 비라세미 혼합물을 포함한다. 본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 탄소 원자를 함유하여, 화합물이 상이한 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 화합물은, 예를 들면, 라세미체 또는 광학 활성 형태일 수 있다. 광학 활성 형태는 라세미체의 분할 또는 비대칭 합성에 의해 수득될 수 있다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 거울상이성질체는 +(양)인 특정한 회전을 나타낸다. 바람직하게는, (+) 거울상이성질체는 상응하는(-) 거울상이성질체를 실질적으로 함유하지 않는다. 따라서, 상응하는 거울상이성질체를 실질적으로 함유하지 않는 거울상이성질체는 분리 기술을 통해 단리 또는 분리되거나 상응하는 거울상이성질체를 함유하지 않게 제조된 화합물을 지칭한다. "실질적으로 함유하지 않는"은 화합물이 하나의 거울상이성질체의 유의하게 큰 비율로 구성된다는 것을 의미한다. 바람직한 실시양태에서 화합물은 바람직한 거울상이성질체 적어도 약 90 중량%로 구성된다. 본 발명의 다른 실시양태에서, 화합물은 바람직한 거울상이성질체 적어도 약 99 중량%로 구성된다. 바람직한 거울상이성질체는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 및 키랄 염의 형성 및 결정화를 포함하는 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 라세미 혼합물로부터 단리되거나, 본원에 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들면, 문헌[Jacques et al., 1981; Wilen et al., 1977; Eliel, 1962; Wilen, 1972.] 참조).
본 발명의 화합물, 및 이의 염은 수소 원자가 분자의 다른 부분으로 이동하고 분자의 원자 사이의 화학적 결합이 그 결과 재배열되는 이들의 호변이성질체 형태로 존재할 수 있다. 존재할 수 있는 모든 호변이성질체 형태는 본 발명에 포함된다는 것이 이해되어야 한다.
본원에 기재되거나 예시된 모든 제제, 화합물 또는 구성요소의 조합은 달리 기재되지 않는 한, 본 발명을 실시하는데 사용될 수 있다. 화합물의 특정한 명칭은 예시적인 것이 의도되고, 이는 당업자가 동일한 화합물을 상이하게 명명할 수 있는 것과 마찬가지이다. 화합물이 화합물의 특정한 이성질체 또는 거울상이성질체가, 예를 들면, 화학식 또는 화학명에서 특정되지 않게 기재된 경우, 기재에는 개별적으로 또는 임의의 조합으로 기재된 화합물의 각각의 이성질체 및 거울상이성질체가 포함되는 것이 의도된다.
화학적 화합물이 다양한 관례에 의해 명명될 수 있고, 심지어 주어진 관례 내에서 주어진 화합물에 대한 화학적 명칭이 다양할 수 있기 때문에 동일한 화합물은 상이한 방식으로 적절하에 명명될 수 있다는 것을 당업자는 인식할 것이다. 여기서, 화합물 명칭과 화합물 구조 사이의 불일치가 존재한다면, 구체적으로 제공되는 경우, 화합물 구조가 우선한다.
당업자는 구체적으로 예시된 것 이외의 방법, 대안적인 요법, 출발 물질, 및 합성 방법이 과도한 실험에 의지하지 않고 본 발명의 실시에서 이용될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 임의의 이러한 방법, 장치 요소, 출발 물질, 및 합성 방법의 모든 당업계에 공지된 기능적 균등물은 본 발명에 포함되는 것이 의도된다. 범위, 예를 들면, 온도 범위, 시간 범위, 또는 조성 범위가 명세서에 주어지는 경우에는 언제든지, 모든 중간 범위 및 하위 범위 뿐만 아니라 주어진 범위에 포함된 개별적인 값은 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.
단수형 용어("a," "an," 및 "the")는 달리 문맥에서 명확하게 기재되지 않는 한, 복수의 지시대상을 포함한다. 유사하게, 단어 "또는"은 달리 문맥에서 명확하게 기재되지 않는 한, "및"을 포함하는 것이 의도된다. 용어 "포함하다(comprise)"는 "포함하다(include)"를 의미한다. 또한, "A 또는 B를 포함하는"은 달리 문맥에서 명확하게 기재되지 않는 한, A 또는 B, 또는 A 및 B를 포함하는 것을 의도한다. 화합물에 대하여 주어진 모든 분자량 또는 분자 질량은 근사치이고, 설명을 위하여 제공된다는 것이 추가로 이해된다. 본원에 기재된 것들과 유사하거나 균등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있음에도 불구하고, 적합한 방법 및 물질이 하기에 기재된다. 추가로, 물질, 방법, 및 예는 오직 예시적인 것이고 제한을 의도하지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "포함하는(comprising)"은 "포함하는(including)", "함유하는", 또는 "특징으로 하는"과 동의어이고, 포괄적 또는 나 개방 종결형이고, 추가의 기재되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "구성되는"은 주장된 요소에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계, 또는 성분을 배제한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "본질적으로 구성되는"은 청구항의 기본적이고 신규한 특징에 실질적으로 영향을 미치지 않는 물질 또는 단계를 배제하지 않는다. 더 구체적으로, 용어 '본질적으로 구성되는"은 (1) 의도된 치료적 응용에 작용하지 않는 활성 성분, 및 (2) 열거된 구성요소의 활성 또는 조합된 활성에 부정적으로 영향을 미치는 다른 구성요소를 배제하지만, 열거된 구성요소(들)의 활성 또는 조합된 활성에 부정적으로 영향을 미치지 않는 약제학적으로 허용되는 부형제는 배제하지 않는, 열거된 구성요소(들)에 개방적이다. 특히 조성물의 구성요소의 설명 또는 장치의 요소의 설명에서, 용어 "포함하는"의 본원의 임의의 기재는 기재된 구성요소 또는 요소로 본질적으로 구성되는 조성물 및 방법 및 이로 구성되는 조성물 및 방법을 포함하는 것으로 이해된다.
본원에 예시적으로 기재된 본 발명은 본원에 구체적으로 개시되지 않는 임의의 요소 또는 요소들, 제한 또는 제한들의 부재하에 적합하게 실시될 수 있다.
임의의 특정한 이론과 결부되는 것을 원하지 않지만, 본 발명에 관한 기본 원칙의 신뢰 또는 이해에 대한 본원의 논의가 존재할 수 있다. 임의의 기계적 설명 또는 가설의 궁극적인 정확성과 관계없이, 본 발명의 실시양태는 그럼에도 불구하고 작동될 수 있고 유용하다는 것이 인식된다.
사용된 용어 및 표현이 설명의 용어로서 제한 없이 사용되고, 도시되고 기재된 특징의 임의의 균등물 또는 이의 부분을 배제하는 이러한 용어 및 표현의 사용에서 의도가 존재하지 않지만, 다양한 변형이 주장된 발명의 범위 내에서 가능하다는 것이 인식된다. 따라서, 본 발명이 바람직한 실시양태 및 임의의 특징에 의해 구체적으로 개시되었음에도 불구하고, 본원에 개시된 개념의 변형 및 변화는 당업자에 의해 의지될 수 있고, 이러한 변형 및 변화는 본 발명의 범위에 속하는 것으로 간주된다는 것이 이해되어야 한다.
실시예
실시예 1: CRC 환자에서 CHD1L의 임상병리학적 특성화
CHD1L 발현은 몇몇 암에서 불량한 예후와 상관관계가 있지만, CRC에서 CHD1L의 병리학에 대한 제한된 정보만이 알려져 있다. 이 실시예는 CRC 환자에서 CHD1L에 대한 병원성 특성화 및 병리학의 메커니즘을 기재한다. CRC 환자 585명의 임상병리학적 특성을 CHD1L 발현에 관하여 CIT(Cartes d'Identite des Tumeurs) 프로그램으로 분석하였다(GEO: GSE39582)[Marisa et al., 2013]. 이러한 특성은 문헌[Abbott et al., 2020, 보충 정보]에 요약된다.
이 실시예에 대한 추가의 데이터는 문헌[Abbott et al., 2020 및 이의 보충 정보]에서 확인된다. 후속 정보는 15년의 기간 동안 CIT 코호트에서 모든 환자에 대하여 이용 가능하다. 전체 환자 코호트에 있어서, 높은 CHD1L 발현은 높은 CHD1L 환자에 있어서 낮은 OS(P = 0.0167) 및 8.8의 중앙 생존(MS)과 연관된다. 환자의 72%(115/159)가 검열되고 26%(42/159)가 사망하였기 때문에, 중앙 생존은 낮은 CHD1L 코호트에서 도달되지 못했다. 환자 데이터는 TNM 병기 시스템을 사용하여 평가하였다. I기 및 IV기 환자는 각각 생존 또는 사망의 높은 가능성을 갖기 때문에, II기 및 III기 CRC 환자의 생존을 평가하였다. 높은 CHD1L 발현은 II기 및 III기 CRC에 있어서 낮은 OS(P = 0.0191) 및 11년의 MS와 연관되었고, 다시 중앙 생존은 낮은 CHD1L 코호트에서 도달하지 못했다. 생존을 또한 CRC의 초기에 있어서 CHD1L 발현에 관하여 분석하였다. II기 환자는 11년의 M.S.와 함께 생존(P = 00319)에서 유의한 차이를 나타냈고, I기, III기 또는 IV기 환자에 있어서 유의한 차이는 관찰되지 않았다. CHD1L 발현의 분석은 발현 암 병기에서 유의한 차이를 나타냈다. I기 및 II기 결장직장암 환자 대 III기 및 IV기 환자를 평가하였고, 이들은 III기 및 IV기 대 초기 코호트(P = 0.0051)에서 CHD1L 발현의 유의한 증가를 보여주었다. 림프절 전이에 대한 CHD1L 발현의 분석은 CHD1L이 증가된 국부 림프절 전이를 갖는 환자에서 과발현된다는 것을 제시한다(N0와 비교된 N1 P = 0.0128, N2 P = 0.05). CHD1L 발현의 경향이 N3 코호트와 동일하였음에도 불구하고, 이용 가능한 환자 샘플의 제한된 수로 인하여 유의성은 측정되지 않았다. 종양 크기, 전이 또는 위치에 관한 CHD1L 발현의 유의한 차이가 발견되지 않았다.
CRC 분자 하위유형에서 CHD1L의 평가
CHD1L 발현과 CRC의 6종의 분자 하위유형의 연관성[Marisa et al., 2013]: C1(면역계 저하, n = 116), C2(결핍 부정합 복구, n = 104), C3(KRAS 돌연변이, n = 75), C4(CSC, n = 59), C5(활성화된 WNT 경로, n = 152), 및 C6(염색체 불안정 정상, n = 60)을 조사하였다. 6종의 분자 하위유형 중에서 CHD1L 발현의 유의한 차이가 존재한다(P < 0.001). CHD1L 발현은 C5, C4, 및 C3에서 높았고, C2 및 C6에서 낮았다. C2 하위유형은 WNT 신호전달 경로에서의 감소 및 부정합 복구에 대한 결핍과 연관된다. C4 및 C6 하위유형은 다른 하위유형과 비교하여 더 불량한 재발 없는 생존과 연관된다. C4 하위유형은 증가된 CSC 줄기세포능과 연관되고, C5 하위유형은 활성화된 WNT 신호전달 및 하향조절된 EMT 경로와 연관된다. C2(결핍 부정합 복구) 하위유형에서 낮은 CHD1L 발현은 DNA 손상 반응에서 이의 공지된 기능과 일치한다[Ahel et al., 2009]. 추가로, CHD1L 발현은 결핍 부정합 복구가 없는 환자보다 결핍 부정합 복구가 있는 환자에서 더 낮았다(P < 0.001). CHD1L 발현은 또한 KRAS 돌연변이를 갖는 환자에서 더 높았다(P = 0.049). C3, C4, 및 C5 분자 하위유형에서 CHD1L의 발현은 EMT, CSC 줄기세포능, 및 WNT/TCF 경로에서 CHD1L 발현의 기능의 추가의 조사를 촉진하였다.
CHD1L 발현은 Wnt/TCF 연관된 유전자와 상관관계아 있다
UCCC GI 종양 조직 은행으로부터의 CRC 환자의 더 작은 코호트(n = 26)를 이용하여, 초기 및 1차 CRC와 비교하여 후기 및 전이성 CRC와 유의하게 상관관계가 있는 더 큰 CIT 코호트 CHD1L 발현에서와 마찬가지로 유사한 경향이 관찰되었다(Abbott et al., 2020, 보충 정보). 발현은 FPKM(맵핑된 단편 백만개당 엑손 킬로베이스당 단편)으로서 정량된다. 전이성 종양 샘플은 1차 종양보다 유의하게 더 많은 CHD1L을 가졌다. 추가로, CHD1L 수준은 II/III기 환자 코호트와 비교하여 IV기에서 더 높았다. 스피어만(Spearman) 상관관계를 사용하여 KEGG WNT 경로에 관여하는 유전자로 CHD1L 발현을 분석하는 경우, 125개의 유전자 중 65개와 유의한 양의 상관관계가 관찰되었다. 그 중에서도 이들은 TCF-매개된 전사에 관여된 잘 확립된 유전자, 예를 들면, 토포이소머라제 IIα(TOP2A)(r = 0.65, P = 0.004)[Zhou et al., 2016; Abraham et al, 2019], 및 TCF4(r = 0.61, P = 0.0012)(Abbott et al., 보충 도면 2)이었다. 유전자는 P < 0.05 상관관계 값을 가졌다. 전사 발현을 Log2 정규화하고, FPKM(맵핑된 단편 백만개당 엑손 킬로베이스당 단편)으로 정량하였다.
유의한 양의 상관관계가 공지된 CSC 마커 CD44(r = 0.43, P = 0.038), LGR5(r = 0.55, P = 0.0075) 및 CHD1L 사이에서 관찰되었다. CIT 코호트를 UCCC 코호트에 비교하는 경우, TOP2A(r = 404 0.1275, P = 0.0020) 및 TCF4(r = 0.1050, P = 0.011)에 있어서 유의한 상관관계가 관찰되었다. 이 결과와 일치하게, TOP2A는 CRC에서 EMT를 촉진하는 TCF-복합체의 필요 구성요소라는 것이 나타났다[Zhou et al., 2016; Abraham et al., 2019]. 따라서, CHD1L은 CRC 환자에서 TCF-전사 및 EMT에 관여하는 것으로 나타난다.
실시예 2: CHD1L은 CRC에서 TCF-전사를 매개한다
CHD1L과 TCF-복합체 구성원의 상관관계를 기반으로, CHD1L은 TCF-전사에서 기계적 역할을 가질 수 있다. 이 역할을 평가하기 위하여, 각각 높은 및 낮은 내인성 CHD1L 발현을 갖는 SW620 및 DLD1 세포주를 이용하였다. 이 실시예에 대한 추가의 데이터는 문헌[Abbott et al, 2020 및 이의 보충 정보]에서 확인된다. 작은 헤어핀 RNA(shRNA)를 사용하여 SW620 세포에서 CHD1L을 녹다운시켰다(SW620CHD1L-KD). CHD1L은 DLD1 세포에서 과발현되었다(DLD1CHD1L-OE). SW620CHD1L-KD 또는 DLD1CHD1L-OE로 형질감염된 TOPflash 루시페라제 리포터[Morin et al., 1997; Zhou et al., 2016]를 사용하여, CHD1L의 과발현이 TCF-전사에서 유의한 증가를 생성하였다는 것이 결정되었다(P<0.0001)(Abbott et al., 2020). 대조적으로, SW620CHD1L-KD 세포는 TCF-전사에서 유의한 감소를 나타냈다(P = 0.0006). 이들 결과는 CHD1L이 TCF-전사에 직접적으로 관여된 잠재적 인자라는 것을 나타낸다. 문헌[Morin et al., 1997] 및 문헌[Zhou et al., 2016]은 각각 TOPflash 리포터의 전사 및 이를 이용하는 검정에 대하여 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
CHD1L은 TCF-전사 복합체와 직접적으로 상호작용한다
TCF-전사의 활성화는 보조 억제자 단백질의 쉐딩(shedding), 보조 활성자 단백질의 결합, 및 염색질 지형의 재형성을 포함하는 동적인 과정이다[Lorch et al. 2010, Shitashige et al., 2008]. TCF4와의 상호면역침강(Co-IP) 연구를 수행하여, CHD1L이 TCF-복합체에 직접적으로 결합한다는 것을 증명하였다[Abbott et al, 2020].
CHD1L은 DNA 손상 반응에서 PARP1과의 결합 파트너로서 잘 특성화되어 있다[Pines, 2012; Ahel et al., 2009]. PARP1은 또한 TCF4 및 β-카테닌에 대한 TCF-복합체 결합의 구성요소이다[Idogawa et al. 2005]. 본원에서 결과는 CHD1L이 TCF-복합체에 결합한다는 것을 증명하고, 이는 TCF4와 PARP1의 상호작용을 통한 것일 수 있다.
TCF-복합체의 구성요소로서 CHD1L을 추가로 특성화하기 위하여, TCF-복합체 WNT 반응 요소(WRE)에 대한 CHD1L의 염색질 면역침강(ChIP)을 SW620 세포에서 수행하였다[Abbott et al., 2020]. CHD1L은 c-Myc, 비멘틴, 슬러그(slug), LEF1, 및 N-카드헤린 WRE에서 풍부하였고, 이는 CHD1L이 TCF-복합체와 직접적으로 작용한다는 것을 추가로 지지한다. 합하면, 데이터는 CHD1L을 TCF-전사의 중요한 구성요소로서 암시한다.
CHD1L 매개된 TCF-전사는 CRC에서 EMT 및 CSC 줄기세포능을 촉진한다
이전에, TCF-전사는 CRC에서 EMT의 주요 조절제로서 특정화되었다[Zhou et al., 2016]. 추가로, CHD1L은 EMT 이펙터 유전자의 WRE에서 국소화된다[Abbott et al, 2020]. 따라서, SW620CHD1L-KD 및 DLD1CHD1L-OE 세포에서 바이오마커 발현을 측정항혀 CHD1L의 녹다운 또는 과발현이 EMT를 조절하는지 여부를 결정하였다. CHD1L의 녹다운은 EMT의 역행을 유도하여, 비멘틴 및 슬러그를 감소시키고 E-카드헤린 발현을 증가시켰다[Abbott et al, 2020]. 대조적으로, EMT는 DLD1CHD1L-OE 세포에서 유도되었고, 이는 E-카드헤린의 감소 및 비멘틴 및 슬러그 발현의 증가에 의해 증명되었다[Abbott et al, 2020]. 이들 결과는 CHD1L이 CRC에서 중간엽 표현형을 촉진하는데 관여된 EMT 이펙터 유전자라는 것을 나타낸다. EMT의 특징은 CSC 줄기세포능의 증가이다.
클론원성 콜로니 형성 검정[Abbott et al, 2020]을 수행하여 줄기세포능에 대한 CHD1L 발현의 영향을 특성화하였다[Franken et al., 2006] CSC 줄기세포능은 콜로니 형성에 의해 측정된 바, DLD1CHD1L-OE에서 증가하였고(P = 0.0001), SW620CHD1L-KD(P = 0.002) 세포에서 감소하였다.
실시예 3: CHD1L의 소분자 억제제의 동정
본원에서 실시예 1 및 2에서 확립된 바와 같이, CHD1L은 TCF-매개된 EMT의 동인이다. 이를 기반으로, CHD1L의 소분자 억제제를 동정하는 검정이 본원에 기재된다. 약물 발견 목표는 CHD1L DNA 전좌 또는 DNA와의 상호작용을 표적으로 하였고, 이는 CHD1L의 촉매 도메인 ATPase 활성에 따라 좌우된다[Ryan & Owen-Hughes, 2011; Flaus et al., 2011].
CHD1L은 2엽 ATPase 도메인을 함유하는 염색질 리모델러의 SNF2(수크로스 비발효제 2) ATPase 수퍼패밀리에 속한다[Abbott et al, 2020 및 이의 보충 정보]. CHD1L은 또한 다른 염색질 리모델러에 비해 고유한 매크로 도메인을 갖고 이는 매크로와 ATPase 도메인 사이의 상호작용을 통해 자가 억제된 상태를 촉진한다. [Lehmann et al., 2017; Gottschalk et al., 2009]. 그러나, 매크로 도메인은 CHD1L의 주요 활성자인 PARP1에 결합하여, 자가 억제를 완화시킨다[Lehmann et al., 2017; Gottschalk et al., 2009].
문헌[Lehmann et al., 2017]의 방법을 사용하여, 전장 CHD1L(fl-CHD1L) 및 촉매 ATPase 도메인(cat-CHD1L)을 정제하였다[Abbott et al, 2020 및 이의 보충 정보]. 단백질 구성물을 문헌[Abbott et al., 2020]에 예시된 바와 같이 시험관내 HTS에 대한 CHD1L의 재조합 발현 및 정제에 대하여 사용하였다. SDS 페이지 겔은 정제된 cat-CHD1L(68 kD) 및 fl-CHD1L(101 kD)을 나타냈다. cat-CHD1l 대 fl-CHD1L의 효소 반응속도론을 비교하였다. cat-CHD1L은 fl-CHD1L에 비해 더 강력한 ATPase 검정을 제공하고, 이는 문헌[Lehman et al., 2017]의 보고와 일치한다. 따라서, CHD1L ATPase의 직접적인 억제제를 동정하기 위하여, TCF-전사의 맥락에서 예시적인 고속대량 스크리닝(HTS) 검정이 기재되고, 이는 cat-CHD1L, c-Myc DNA, ATP, 및 무기 포스페이트(Pi)에 결합시 형광인 포스페이트-결합 단백질을 포함한다.
이 검정을 입증하였고, 파일로트 스크리닝을 임상적으로 관련된 키나제 억제제에 대하여 수행하였다[Abbott et al, 2020 및 이의 보충 정보]. 파일로트 스크린은 히트를 찾을 수 없었고, 이는 CHD1L이 키나제 억제제에 대한 가능한 표적이 아니라는 것을 증명한다. 입증된 후, 라이프 케미칼스 디버시티 세트(Life Chemicals Diversity Set)로부터의 20,000개의 화합물을 사용하여 1차 HTS를 수행하였고, 이를 양성 대조군으로서 10 mM EDTA를 함유하는 1% DMSO 중의 20 μM에서 스크리닝하였다[Abbott et al, 2020 및 이의 보충 정보]. 스크린은 64개의 플레이트에 대하여 0.57 ± 0.06의 평균 Z'-인자 값을 갖는 강력한 통계를 제공하였다. 평균 화합물 활성은 92.3% ± 17.8이었다. 결과로서, 히트 제한은 39% ATPase 활성에서 평균으로부터의 3 표준 편차로 설정되었다. 이러한 엄격한 히트 제한은 64개의 히트를 동정하였고, 이 중 53개의 히트는 재조합 CHD1L ATPase 활성에 대하여 확인되었다.
실시예 4: 예시적인 억제제
7개의 확인된 히트의 하위세트(화합물 1-7, 반응식 1 참조)를 구입하였고, 이는 cat-CHD1L ATPase에 대하여 50% 초과의 억제를 갖는 광범위한 약물작용발생단을 나타낸다. 화합물 1-7에 cat-CHD1L ATPase에 대한 용량 반응 연구를 수행하였고, 이는 900 nM 내지 5 μM의 활성을 갖는 강한 CHD1L 억제제로서 이러한 히트를 입증하였다(도 1a). 추가의 예시적인 화합물 8-73의 구조는 반응식 1에 제공되고, 여기서 SEM은 보호기 트리메틸실릴에톡시 메틸를 나타낸다. 추가의 예시적인 화합물 74-116의 구조는 반응식 1에 제공된다. 반응식 1의 다수의 경우에, 본원에서 표 및 도면 또는 문헌[Abbott et al., 2020] 및 이의 보충 정보 또는 문헌[Prigaro et al.]에서 이용될 수 있는 추가의 화합물 번호가 괄호에 제공되나는 것을 주의한다.
화합물 1-7을 TOPflash 리포터 시스템을 사용하여 TCF-전사를 억제하는 이들의 능력에 대하여 HCT116, SW620, 및 DLD1CHD1L-OE 세포에서 시험하였다(도 1b). 화합물 1-3은 세포에서 유의한 활성을 갖지 않는 것으로 나타났다. 화합물 4는 TCF-활성의 용량 의존적 억제 없이 세포에서 중간 활성을 갖는 것으로 나타났다. 그러나, 화합물 5-7은 모든 3개의 CRC 세포주에서 TCF 전사에 대한 뛰어난 용량 의존적 활성을 증명한다. 특히, DLD1CHD1L-OE 세포에서 낮은 2 μM 용량에서 TCF-전사의 감소된 억제가 5-7에 있어서 관찰되었고, 이는 세포성 CHD1L 표적 교전의 증거이다.
CHD1L 억제제는 CRC에서 EMT 및 악성 특성을 역행시킨다
CHD1L 매개된 TCF 전사에 대하여 히트 5-7을 입증한 후, CRC에서 EMT 및 다른 악성 특성을 역행시키는 이들 화합물의 능력을 평가하였다. E-카드헤린 및 비멘틴은 각각 상피 및 중간엽 표현형에 대한 추정되는 바이오마커이다[McDonald et al., 2015]. E-카드헤린의 손실 및 비멘틴의 증가는 또한 불량한 예후의 임상적 바이오마커이다[Yun et al., 2014; Richardson et al., 2012; Dhanasekaran et al., 2001; Kashiwagi et al., 2010; Toiyama et al., 2013]. 따라서, E-카드헤린(pCDH1-EcadPro-RFP) 및 비멘틴(pCDH1-VimPro-GFP)에 대하여 렌티바이러스 프로모터 유도된 리포터를 개발하였고, 이는 각각 E-카드헤린 및 비멘틴 단백질 발현을 충실하게 리포팅한다[Zhou et al., 2016; Abraham et al., 2019]. EcadPro-RFP 또는 VimPro-GFP가 형질도입된 SW620 세포를 종양 오가노이드로서 72시간 동안 배양하여, 600 μm의 직경에 도달하였다. 종양 오가노이드를 화합물 5-7로 추가 72시간 동안 처리하여 프로모터 활성의 조절을 위한 유효 농도 50 퍼센트(EC50)를 결정하였다. 프로모터 발현의 변화는 3D 공초점 이미지 507 기반의 고함량 분석 알고리즘을 사용하여 정량하였다(도 2a-2b)[Zhou et al., 2016; Abraham et al., 2019].
화합물 5-7은 15.6 ± 1.7 μM(5), 4.7 ± 510 1.5 μM(6), 및 12.8 ± 1.3 μM(7)의 EC50 값으로 비멘틴 프로모터 활성을 효과적으로 하향조절하였다. 대조적으로, E-카드헤린 프로모터 활성은 11.9 ± 0.3 μM(5), 11.4 ± 0.3 μM(6), 및 28 ± 0.003 μM(7)의 EC50 값으로 상향조절되었다. EMT 리포터 검정에 의해 측정된 SW620 종양 오가노이드에서 화합물 6에 의한 EMT의 역행을 나타내는 대표적인 이미지는 문헌[Abbott et al., 2020]에 도시된다. 이들 결과는 CHD1L의 소분자 억제제가 CRC에서 TCF-유도된 EMT를 역행시킨다는 것을 나타낸다.
CHD1L 억제제가 EMT를 역행시킨다는 것을 확인하기 위하여, EMT, 슬러그(중간엽) 및 폐쇄 소대-1(ZO-1, 상피)의 2개의 추가의 추정되는 바이오마커의 단백질 발현을 평가하였다. 슬러그 및 ZO-1의 변화는 EMT에 대한 주요 기준으로 간주된다[Zeisberg & Neilson, 2009]. CHD1L 억제제로 처리된 SW620 종양 오가노이드는 슬러그를 하향조절하고 ZO-1을 상향조절하고, 이는 EMT의 역행을 추가로 나타낸다. 추가의 EMT 바이오마터 슬러그 및 ZO1의 단백질 발현 변화을 나타내는 웨스턴 블롯 분석은 문헌[Abbott et al., 2020]에 나타난다.
EMT의 특징은 CSC 줄기세포능 및 세포 침습의 증가이다. 따라서, HCT-116 및 DLD1CHD1L-OE 세포에서 이동 및 침습을 억제하는 화합물 5-7의 능력을 시험하였다. 모든 3개의 화합물은 CSC 줄기세포능의 유의한 억제를 증명하였다(도 2c). 그러나, 화합물 5 및 6.0은 더 강한 용량 의존적 억제를 나타낸다. DLD1CHD1L-OE 세포는 HCT-116 세포보다 2배 이상의 콜로니를 형성하는 것을 주목하고, 이는 중간 CHD1L 발현을 갖는다. 이러한 관찰은 CHD1L의 종양원성 및 종양형성 특성과 일치한다. 그 다음, 50% 매트리겔(Matrigel)® 매트릭스(Corning Life Sciences, 미국 뉴욕 코닝 소재)에 매립된 균일한 스크래치 상처를 가진 HCT-116 세포를 사용하여, 세포를 지시된 농도의 CHD1L 억제제로 처리하고, 침습을 72시간 동안 모니터링하였다. 화합물 5-7은 침습의 용량 의존적 억제를 나타냈고(도 2d), 화합물 6.0 이 가장 강한 활성을 나타냈다.
실시예 5: DNA 손상 약물의 CHD1L 효능의 억제
CHD1L은 PARP1 매개된 DNA 손상 반응 복구에서 작용하는 것으로 공지되어 있고, 이는 DNA 손상 화학요법에 대한 증가된 약물 내성의 메커니즘이다[Li et al., 2019; Ahel et al., 2009; Gottschalk et al., 2009]. 예를 들면, 폐암에서 시스플라틴에 대한 약물 내성이 CHD1L을 과발현하는 세포에서 관찰되었다. 시스플라틴의 효능은 CHD1L 녹다운 후 회복되었다[Li Y., et al., 2019]. 추가로, CHD1L 단독의 녹다운은 DNA 손상을 증가시키지 않는다[Ahel D, et al., 2009]. CHD1L 억제제가 CRC 세포에서 빈 벡터로 형질도입된 낮은 CHD1L 발현 DLD1 세포(DLD1CHD1L-EV) 및 과발현 DLD1CHD1L-OE에 DNA 손상 약물의 효능을 증가시킬 수 있는지 여부를 결정하기 위하여, 화합물 6을 단일 제제로서 단독으로 및 SN-38(프로드러그 이리노테칸의 활성 약물작용발생단), 옥살리플라틴, 및 에토포시드와의 조합으로 평가하였다. DNA 손상을 평가하기 위하여, 면역형광에 의한 H2AX(g-H2AX)의 인산화, DNA 손상 화학요법에 대한 바이오마커[Ahel D, et al., 2009]를 문헌[Abbott et al., 2020 및 이의 보충 정보]에 기재된 바와 같이 측정하였다. 화합물 6 단독은 10 μM에서 세포를 처리하고 g-H2AX 활성을 측정할 때 유의한 DNA 손상을 나타내지 않았고, 이는 이전에 보고된 CHD1L 녹다운 연구와 일치한다[Ahel D, et al., 2009]. 그러나, DLD1CHD1L-OE 세포와 화합물 6의 조합 치료는 에토포시드(10 μM) 및 SN-38(1 μM)와 상승작용하였고, 에토포시드 및 SN-38 단독과 비교하여 DNA 손상을 유의하게 증가시킨다. DLD1CHD1L-EV 세포에서 에토포시드 및 화합물 6의 조합만이 유의한 상승작용을 나타냈다. 사용된 실험 조건하에 옥살리플라틴과의 상승작용은 관찰되지 않았다. 그럼에도 불구하고, FOLFIRI로 공지된 SN-38(즉, 이리노테칸) 조합 요법은 CRC의 치료에서 치료 기준이다. 그러므로, SN-38과 조합인 화합물 6에 의해 발생한 향상된 DNA 손상은 CHD1L 억제제가 CRC 표준 치료 DNA 손상 화학요법의 효능을 증가시킬 수 있다는 가술을 지지한다.
실시예 6: CHD1L 억제제는 세포 사멸의 유도 전에 EMT를 역행시킨다
CHD1L은 카스파제-의존성 아폽토시스의 활성화를 억제함으로써 항아폽토시스 활성을 부여하는 것으로 보고되었다[Li et al., 2013; Sun et al., 2016]. 추가로, EMT의 역행 또는 억제는 암 세포의 아폽토시스 활성을 복구하는 것으로 공지되어 있다[Lu et al., 2014]. CHD1L 억제제가 세포 사멸의 유도 전에 EMT를 역행시키는지 여부를 결정하기 위하여, EcadPro-RFP 리포터 활성에 의한 E-카드헤린 발현을 모니터링하고, 셀톡스™ 그린 검정을 사용하여 세포독성을 측정하였다. 세포를 CHD1L 억제제로 72시간 동안 처리하고, 2시간 마다 이미징하였다. DMSO에 비해 화합물 6에 있어서 세포독성의 유도 전에 E-카드헤린 발현의 유의한 증가(도 3a).
CHD1L 억제제가 CRC에서 아폽토시스를 유도할 수 있는지 여부를 결정하기 위하여, SW620 종양 오가노이드로부터의 웨스턴 블롯을 수행하였고, 5 및 6에 의한 처리 후 E-카드헤린이 절단된다는 것이 관찰되었다[Abbott et al., 2020]. E-카드헤린의 절단은 아폽토시스의 마커이다[Steinhusen et al., 2001].
더 강한 CHD1L 억제제 6은 DMSO 대조군에 비해 절단된 PARP1, 절단된 카스파제 8, 및 절단된 카스파제 3의 증가를 나타냈다[Abbott et al., 2020]. 이들 결과는 화합물 6이 사멸 수용체를 통해 E-카드헤린 매개된 아폽토시스와 일치하는 외인성 아폽토시스를 유도한다는 것을 나타낸다[Lu et al., 2014].
CHD1L 억제제의 아폽토시스 활성을 추가로 특성화하기 위하여, 12시간 동안 SW620 세포에서 아넥신-V 염색을 시험하였다. 화합물 6.0은 DMSO 단독과 비교하여 유의한 아폽토시스를 유도하였고, 이리노테칸의 활성 대사산물인 양성 대조군 SN-38에 대한 유사한 활성을 가졌다(도 3b).
CHD1L 억제제는 환자 유래 종양 오가노이드(PDTO)에 대하여 효과적이다. 전임상 약물 개발에서 PDTO의 사용은 임상 효능을 위한 시험관내 세포 모델에서 예측자로서 확립되어 있다[Drost J & Clevers H, 2018]. 세포주 기반 모델을 사용하여 EMT를 역행시키고 아폽토시스를 유도하는 화합물 6의 능력을 확립한 후, 화합물 6의 효능을 콜로라도 암 센터 대학(UCCC) 위장관(GI) 조직 은행으로부터 입수된 환자 샘플 CRC102로부터 생성된 PDTO에서 평가하였다(도 3c). CRC 세포주에서의 결과와 일치하게, 화합물 6.0은 11.6 ± 2 μM의 EC50로 PDTO에서 강한 세포독성을 나타냈다.
실시예 7: 예시적인 억제제 화합물 6의 시험관내 및 생체내 PK, PD, 및 간 독성
화합물 6.0의 약물 유사 가능성 및 특성을 평가하기 위하여, 인실리코, 시험관내, 및 생체내 PK 연구를 수행하여 CD-1 마우스에서 CLogP, 수성 용해도, 마우스 간 마이크로좀에서의 안정성, 및 PK를 평가하였다.
표 1은 화합물 6의 생체내 및 시험관내 약물동력학 파라미터의 요약을 제공한다. 컨센서스 LogP(CLogP) 값을 SwissADME 웹 툴을 사용하여 수득하였다[Daina et al., 2017]. 화합물 6을 i.p. 주사로 가슴샘이 없는 마우스 QD에 5 일 동안 투여하여 SW620 이종이식 종양에서 축적을 측정하고(도 4) 간 독성의 조직병리학을 평가하였다. 비히클 및 화합물 6 처리된 동물 둘 다에서 간의 대표적인 H&E 염색된 현미경 사진 섹션(5x 배율)은 문헌[Abbott et al., 2020]에 도시된다. 이미지는 간세포 변성, 괴사, 비대증, 또는 실질 염증의 증거 없이 정상 간세포삭 및 소엽 구조물을 증명한다. 화합물 6.0은 간 대사 효소에 상대적으로 안정적인 친유성(CLogP = 3.2) 및 수성 용해도의 우수한 균형, 및 CD-1 마우스에 투여될 때 우수한 PK 성향을 갖는다. 화합물 6.0은 복강내(i.p.) 투여 후 3시간의 상대적으로 긴 반감기(T1/2l)와 함께 높은 혈장 약물 농도 CMax(~30,000 ng/mL) 및 AUC(~80,000 ng/mL/h)에 도달한다.
초기 연구에서, 화합물 6은 20분 미만의 간 마이크로솜에서의 반감기를 나타냈다. 상이한 간 마이크로솜 제조물(데이터는 도시되지 않음)로 수행된 후속적인 유사한 시험관내 간 마이크로솜 반감기 실험에서, 화합물 6은 67분의 더 긴 반감기를 나타냈고, 화합물 6.3은 98분의 개선된(6에 비해) 시험관내 반감기를 나타냈고, 화합물 6.11은 130분의 추가의 개선된(6에 비해) 시험관내 반감기를 나타냈다. 화합물 6에 의한 초기 반감기 연구는 후기 시험관내 마이크로솜 반감기 실험과 비슷하지 않은 상이한 간 마이크로솜 제조물로 수행하였다. 시험관내 및 생체내 반감기 측정으 제2 시리즈의 결과는 표 2에 제공되고, 이는 지시된 바와 같은 몇몇 추가의 화합물에 대한 데이터를 포함한다.
5일 동안 i.p. QD로 가슴샘이 없는 마우스에게 투여된 6.0의 최대 허용 용량(50 mg/kg)을 사용하여 제2 급성 생체내 실험을 수행하였다. 이 실험의 목표는 (1) 화합물 6.0이 간에 급성 독성을 유발하는지 여부를 결정하는 것, (2) VimPro-GFP SW620 이종이식 종양에서의 축적 여부를 결정하는 것, 및 (3) PD 효과를 결정하는 것이었다. 화합물 6.0은 SW620 종양에서 10,533 ± 5,579 ng/mL(n=4)의 농도로 축적된다. 예상되는 바와 같이, 조직/혈장에서 화합물 6.0 축적의 비를 비교하는 경우, 종양에 비해 간에서 2.7배 더 축적이 관찰되었다(도 4). 그러나, 투여되는 용량 및 스케줄에서 화합물 6.0으로부터 야기된 명백한 간 독성을 없었다(표 3). 전체적으로, 비히클 또는 화합물 6.0 처리된 마우스의 간에서 유의한 조직학적 차이는 없었다. 관찰된 1차 조직학적 변화는 비히클 및 화합물 6.0 처리된 동물 둘 다에서 간 캡슐의 최소 섬유증 및 염증이었다. 이는 매우 낮은 등급의 준임상적 복막염을 제시하고, i.p. 약물 투여에 대한 2차적인 것과 일치한다.
종양에서 화합물 6.0의 축적에 따라, 종양 조직에 대한 PD 효과를 웨스턴 블롯 분석으로 측정하였고, 이는 중간엽 마커 비멘틴, 비멘틴 리포터(VimPro-GFP), 및 슬러그의 유의한 하향조절을 나타낸다[Abbott et al., 2020]. 통계적으로 유의하지 않음에도 불구하고, 상피 마커 ZO-1의 상향조절 및 절단된 카스파제 3(아폽토시스의 추정되는 바이오마커)의 유도가 또한 관찰되었다. 합하면, 화합물 6.0에 의한 PD 효과의 이러한 관찰은 화합물 6의 시험관내 세포 기반의 항종양 활성과 일치하는 EMT의 역행 및 생체내 아폽토시스를 나타낸다. 화합물 6.0은 관찰된 간 독성 없이 우수한 PK 약물 유사 특성 및 EMT를 변경하고 생체내 아폽토시스를 유도하는 능력을 나타낸다.
대조적으로, 화합물 6.11은 복강내(i.p.) 투여 후 6시간보다 훨씬 큰 화합물 6의 것과 비교하여 유의하게 더 긴 반감기(T1/2l)를 나타낸다.
1평가: N = 마우스 균주에 대한 정상 배경 병변; A = 비정상. 2염증 점수(비정상 조직 평가가 수행된 경우): 0 = 없음, 1 = 최소, 2 = 가벼움, 3 = 중간, 4 = 심각함
실시예 8: 화합물 8의 생물학적 평가
화합물 8을 상기 기재된 다수의 생물학적 검정으로 평가하였다. 결과는 도 7a-e에 나타낸다. 화합물 8은 화합물 6과 비교하여 CHD1L-매개된 TCF-전사의 더 강한 용량 의존적 억제를 나타낸다(도 7a). 마찬가지로, 화합물 8은 비멘틴의 하향조절 및 E-카드헤린 프로모터 활성의 상향조절(각각 도 7b 및 7c)에 의해 증명된 바, EMT를 역행시킨다. 화합물 8은 10 일 동안 클론원성 콜로니 형성을 유의하게 억제한다(도 7d). 화합물 8은 48시간 동안 HCT116 침습 가능성을 유의하게 억제한다(도 7e).
실시예 9: 본원에서 실시예에 적용된 방법
추가의 물질 및 방법
항체. 단일클론 마우스 항-TCF4 항체를 EMD 밀리포어(EMD Millipore, 미국 매사추세츠주 밀레리카 소재)(카탈로그 #05-511)로부터 구입하고, 1:1000 희석을 웨스턴 블롯에 사용하고, 단백질 300 μg당 항체 2 μg을 IP를 위하여 사용하였다. 단일클론 래빗 항-CHD1L 항체를 Abcam(미국 매사추세츠주 캠브릿지 소재)(카탈로그 #ab197019)으로부터 구입하고, 1:5000 희석을 웨스턴 블롯에 사용하고, 단백질 300 μg당 항체 1.5 μg을 IP를 위하여 사용하였다. 단일클론 래빗 항-비멘틴(카탈로그# 5741), 항-슬러그(카탈로그 #9585), 항-E-카드헤린(카탈로그 #3195), 항-ZO-1(카탈로그 #8193), 항-히스톤 H3(카탈로그 #4620)을 셀 시그널링(Cell Signaling, 미국 매사추세츠주 댄버스 소재)으로부터 구입하고, 마우스 항-α-튜불린(카탈로그 #3873)을 셀 시그널링으로부터 구입하고, 1:1000 희석을 웨스턴 블롯에 사용하였다. 단일클론 래빗 항-β-카테닌(카탈로그 #9582)을 셀 시그널링으로부터 구입하고, 1:1000 희석을 웨스턴 블롯에 사용하였다. 단일클론 래빗 항-포스포-β-카테닌을 셀 시그널링(카탈로그 #5651)으로부터 구입하였다. 단일클론 래빗 항-TCF4(카탈로그 #2569) 및 항-히스톤 H3(카탈로그 #4620)을 셀 시그널링으로부터 구입하고, 단백질 1 mg당 항체 2 μg을 ChIP를 위하여 사용하였다. 항-래빗 IgG HRP-연결된 2차 항체(카탈로그 #7074)를 셀 시그널링으로부터 구입하고, 1:3000 희석을 웨스턴 블롯에 사용하였다. 항-고트 및 항-마우스 IgG HRP-연결된 2차 항체(카탈로그 #805-035-180 및 #115-035-003)를 잭슨 이뮤노리서치(Jackson ImmunoResearch, 미국 펜실베이니아주 웨스트 그로브 소재)로부터 구입하고, 1:10,000 희석을 웨스턴 블롯에 사용하였다.
CHD1L의 임상병리학적 특성화
CIT 코호트(GEO: GSE39582)로부터의 585명의 CRC 환자의 전사체 발현 데이터를 인실리코 검증(GSE39582)에 사용하였다[Marisa et al., 2013]. 유전자 발현 분석을 아피메트릭스(Affymetrix) 진칩(GeneChip)™ 휴먼 게놈 U133 플러스 2.0 어레이(인간 Genome U133 Plus 2.0 Array)(Thermo Fisher Scientific, 미국 매사추세츠주 월섬 소재)로 수행하였다. 데이터 전처리를 위하여 로부스트 멀티 어레이 분석(RMA: Robust Multi-Array Analysis)을 사용하고, 배치 교정을 위하여 ComBat(경험적 베이스(Bayes) 회귀)를 사용하였다. 신호 강도를 log2 정규화하였다. 질환 특이적 생존을 기반으로 한 CRC 위험 계층화를 위한 CHD1L 컷오프를 수신자 조작 특성(ROC: receiver operating characteristic) 곡선으로 결정하였다. CHD1L 발현을 위한 컷오프는 6.45로 설정하였다. OS의 차이를 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 방법으로 추정하고, 로그 순위(log-rank) 시험을 사용하여 비교하였다. 카테고리 변수의 비교를 위하여 피셔(Fisher)의 정확 시험을 사용하였다. 연속 변수의 2개의 군을 위하여 만-휘트니(Mann-Whitney) U 시험을 사용하였다. 2개 이상의 군의 경우, 데이터를 크루스칼-왈리스(Kruskal-Wallis) 시험으로 분석하였다. 모든 2측 P-값에 있어서, 0.05의 조절되지 않은 유의성 수준을 적용하였다.
CHD1L 컷오프 및 임상병리학적 특성을 다중 cox 회귀 분석으로 평가하였다. 일변수 분석에서 유의한 변수만을 유의성 결정을 위한 왈드(Wald) 전향 알고리즘을 사용하여 cox 회귀 모델에서 통합하였다. 2개 이상의 군을 포함하는 모든 변수를 카테고리화하였고, 공변량을 위한 단계식 진입 기준은 P<0.05이었고, 제거 기준은 P>0.1이었다. 통계 분석은 IBM® SPSS 통계(IBM, 미국 뉴욕주 아몽크 소재), Prism8(GraphPad Software, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재), JMP®(SAS Institute, 미국 노스캐롤라이나주 캐리 소재), 및 RStudio™IDE(RStudio Inc, 미국 매사추세츠주 보스톤 소재)를 사용하여 수행하였다.
UCCC 환자 샘플 RNA-seq 분석
CRC 환자 종양 이종이식 외식편으로부터의 RNA-seq 데이터를 UCCC(콜로라도 암 센터의 대학) GI 종양 조직 은행으로부터 입수하였고, 이전에 기재된 바와 같이 분석하였다[Scott et al, 2017]. 간략하게, 유전자 발현을 Log2 정규화하고, FPKM(백만개의 맵핑된 리드당 전사 킬로베이스당 단편)으로 측정하였다. 유전자 및 게놈의 교토 인사이클로피디아(KEGG: Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)에 의해 정의된 Wnt 신호전달 경로를 이 연구에서 유전자 세트로서 사용하였다. CHD1L <1 FPKM의 발현을 갖는 샘플을 낮은 발현으로 간주하고, 이 연구로부터 제거하였다. 유의한 스피어만 상관관계(P<0.05)를 갖는 유전자를 matrix2png(유전자 방식으로 Z-정규화됨)을 사용하여 히트맵으로 나타냈다[Abbott et al, 2020 및 이의 보충 정보 참조].
CHD1L 과발현 및 shRNA 녹다운
전장 CHD1L을 pGEX-6P-1 플라스미드(GenScript, 미국 뉴저지주 피스캐터웨이 소재)에서 합성하였다. EcoRI 및 NotI의 측면에 위치한 CHD1L 서열을 소화시키고 렌티바이러스 골격에 결찰시켜 인간 CRC 세포에서 CHD1L의 과발현을 위한 pCDH1-CMV-CHD1L-EF1-puro 플라스미드를 생성하였다. 미션(Mission)® shRNA(Sigma-Aldrich Co. LLC, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)(스크램블링됨) 및 CHD1L에 특이적인 TRCN0000013469 및 TRCN0000013470(sh69 및 sh70)을 시그마 알드리치(Sigma-Aldrich, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)로부터 구입하였다. TransIT®-293 시약(Mirus, 미국 위스콘신주 매디슨 소재), 및 플라스미드 pHRdelta8.9 및 pVSV-G를 사용하여 HEK293T 세포에서 바이러스를 생성하였다. CRC 세포를 과발현 또는 shRNA 녹다운 바이러스로 형질도입시키고, 2 μg/ml 퓨로마이신으로 7일 동안 선택하였다.
웨스턴 블롯
CRC 세포주 및 마우스로부터의 균질화된 종양 조직 샘플을 RIPA 용해 버퍼(20 mM Tris-HCl(pH 7.5), 150 mM NaCl, 1 mM Na2EDTA, 1 mM EGTA, 1% NP-40, 1% 나트륨 데옥시콜레이트, 2.5 mM 나트륨 파이로포스페이트, 1 mM b-글리세로포스페이트, 1 mM Na3 VO4, 0.1 mM PMSF) 중에 재현탁시켰다. 피어스(Pierce)™ BCA 단백질 검정 키트(ThermoFisher, 미국 매사추세츠주 월섬 소재)를 사용하여 단백질 농도를 결정하였다. 샘플 40 마이크로그램을 10% Bis-Tris 겔에 수행하였다. 전기영동 후, 단백질은 니트로셀룰로스 막으로 이동하였다. 막을 TBS/트윈(Tween)® 20(TBST는 20 mM Tris, 150 mM NaCl, 및 0.1% 트윈® 20을 함유한다)(Croda International PLC, 영국 스네이쓰 소재) 중의 5% 무지방 우유로 1시간 동안 실온에서 차단하였다. 막을 TBST로 3회 세척하였다. 블롯을 적절한 1차 항체와 함께 TBST 중의 5% 무지방 우유 중에서 밤새 4℃에서 배양하였다. 막을 TBST로 3회 세척한 다음, 1시간 동안 적절한 2차 항체와 함께 배양하였다. 막을 다시 TBST로 3회 세척하였다. 블롯을 수퍼시그널™웨스트 피코 플러스 케미루미센트 서브스트레이트(SuperSignal™West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate)(ThermoFisher, 미국 매사추세츠주 월섬 소재)를 사용하여 노출시키고, 케미도크(ChemiDoc) 이미징 시스템(Bio-Rad, 미국 캘리포니아주 허큘리스 소재)을 사용하여 이미징하였다(웨스턴 블롯에 대하여 문헌[Abbott et al., 2020] 및 이의 보충 정보 참조).
TOPflash TCF-전사 리포터 검정
TOPflash 검정(Millipore, 미국 매사추세츠주 빌레리카 소재)을 사용하여 CRC 세포에서 TCF 전사 활성을 평가하였다. 웰당 총 20,000개의 세포를 96-웰 화이트 플레이트에 플레이팅하고, TransIT®-LT1 형질감염 시약(Mirus, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)으로 형질감염시켰다. 세포를 형질감염 믹스와 24시간 동안 배양하였다. 그 다음, 세포를 인산염 완충 용액(PBS)으로 세척하고, 1:1 비의 PBS: ONE-Glo™ 루시페라제 시약(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)을 가하고, 10분 내에 발광을 검출하였다. 이중 실험을 수행하여 셀티터-글로(CellTiter-Glo)® 방광 세포 생존도 검정(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)을 사용하여 세포 생존도를 측정하고, 이를 사용하여 TOPflash 발광을 정규화하여 TCF 활성에서 배수 변화를 수득하였다. 실험을 2x로 반복하였다(각각의 실험에 있어서 n = 3).
상호면역침강(Co-IP)
핵 세포 용해물을 미처리 SW620 세포로부터 138개 생성하였다. 입력 제어를 위하여, 1 mg/mL 핵 추출물 100 μL를 보관하고, 입력으로 사용하였다. 면역침강(IP)을 다이나비즈(Dynabeads)™ 단백질 A IP 키트(ThermoScientific, 미국 매사추세츠주 월섬 소재)로 수행하였다. 간략하게, 용해물 300 μg을 항-TCF4 및 항-CHD1L IP 항체 2 μg과 함께 배양하고, 항-래빗 IgG 및 항-마우스 IgG를 비특이적 결합 대조군으로 사용하고, 4℃에서 2시간 동안 회전시켰다. 전배양 후, 비드 50 μL를 전배양된 항체/용해물 혼합물에 옮긴 후, 밤새 4℃에서 배양하였다. 통과액을 수집하고, 비드를 PBST로 3회 세척하였다. 단백질을 50 mM 글리신(pH = 2.8) 20 μL로 70℃에서 10분 동안 용리시켰다.
염색질 면역침강(ChIP)
이전에 기재된 상세한 방법[Zhou et al., 2016]을 사용하여, 세포를 1.42% 포름알데히드와 15분 동안 가교결합시키고, 125 mM 글리신으로 5분 동안 켄칭하였다. 세포를 스작(Szak)의 RIPA(방사선면역침강 검정 버퍼) 버퍼로 용해시키고 초음파 처리하였다. IP 단계를 4℃에서 하기와 같이 수행하였다: 단백질 A/G 아가로스 비드 50 μL를 차가운 스작의 RIPA 버퍼로 예비세척하고, 용해물 1 mg과 함께 2시간 동안 배양하였다. 연어 정자 DNA 0.3 mg/mL를 가하고, 2시간 동안 배양하였다. 용해물(100 μL)을 입력 제어로서 확보하였다. 항-CHD1L(2 μg)을 나머지에 가하고 밤새 배양하였다. 비드를 세척하고, 상청액을 100 μL로 흡입한 후, 1.5x-탈리아니디스(Talianidis) 용리 버퍼(70 mM Tris-Cl pH 8.0, 1 mM EDTA pH 8.0, 1.5% w/v SDS) 200 μL를 가하였다. 면역복합체를 용리시키고 가교결합을 역전시키기 위하여, 5 M NaCl 12 μL를 가하고, 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 배양하였다. 상청액을 프로테이나제 K 20 μg과 혼합하고, 30분 동안 37℃에서 배양하였다. DNA를 페놀/클로로포름으로 추출하고, 에탄올로 침강시켰다. 공지된 공개된 프라이머를 사용하여 IP 생성물을 파워업(PowerUp)™ SYBR™ 그린 마스터 믹스(Applied Biosystems, 미국 텍사스주 오스틴 소재)로 증폭시켰다[Zhou et al., 2016].
클론원성 검정
이전에 기재된 바와 같이 SW620 세포에서 CHD1L 녹다운 또는 DLD1 세포에서 과발현 후 콜로니 형성을 형가하였다[Zhou et al., 2016; Abraham et al., 2019]. 세포를 6-웰 플레이트에서 1,000개 세포/웰로 플레이팅하고, 배지를 10일 시간 과정 동안 주당 2x로 변화시켰다. 콜로니 형성 분석을 또한 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다[Zhou et al., 2016; Abraham et al., 2019].
CSC 줄기세포능을 억제하는 이들의 능력에 대하여 CHD1L 억제제를 평가하기 위하여, HCT-116 또는 CHD1L 과발현 DLD1 세포주를 단층 배양으로 24시간 동안 비히클 대조군(0.5% DMSO) 또는 도 2c에서 지시된 농도의 CHD1L 억제제와 함께 전처리하였다. 전처리된 생존 세포를 6-웰 플레이트에서 1,000개 세포/웰 또는 24-웰 플레이트에서 200개 세포/웰로 플레이팅하였다. 인큐사이트(IncuCyte)® S3 2018A(Sartorius, 프랑스 소재) 소프트웨어(디폴트로부터 변형된 하기 파라미터와 함께: (1) HCT116 세포에 있어서 분할 조절 = 0.6; 최소 면적(μm2) = 3x104; 최대 면적(μm2) = 1.6x106; 최대 이심율 = 0.9; (2) DLD1CHD1L OE 세포에 있어서 분할 조절 = 1; 최소 면적(μm2) = 1x104; 최대 면적은 제약되지 않았고; 최대 이심율 = 0.95)를 사용하여 콜로니를 분석하였다. 실험을 2회 반복하였다(각각의 실험에 있어서 n = 2).
종양 오가노이드 배양
5% FBS를 함유하는 페놀 레드 무함유 RPMI-1640을 사용하고, 5,000개 세포/웰을 코팅되지 않은 96-웰 U-바닥 울트라 로우 어태치먼트 마이크로플레이츠(Ultra Low Attachment Micro플레이트)(Perkin-Elmer, 미국 매사추세츠주 홉킨톤 소재)에 시딩한 후, 15분 동안 1,000 rpm으로 원심분리하여 세포 응집을 촉진함으로써, 종양 오가노이드로서 세포주를 배양하였다[Zhou et al., 2016; Abraham et al., 2019]. 최종 농도 2% 마트리겔® 매트릭스(Corning Incorporated, 미국 뉴욕주 코닝 소재)를 가하고, 종양 오가노이드를 처리 전에 72시간 동안 배양(5% CO2, 37℃, 습도)하에 자가 조립되도록 두고, 처리 시간 과정 동안 표준 세포 배양 조건을 유지하였다.
VimPro-GFP 및 EcadPro-RFP 리포터 3D 고함량 이미징 검정
이전에 보고된 바와 같이 pCDH imPro-GFP-EF1-puro 바이러스 또는 pCDH-EcadPro-mCherry-EF1-puro 바이러스를 사용하여 안정한 VimPro-GFP 또는 EcadPro-RFP SW620 리포터 세포를 생성하였다[Zhou et al., 2016; Abraham et al., 2019]. 안정한 형광 표지된 리포터 세포를 사용하여 본원에 기재된 바와 같이 종양 오가노이드를 생성하였다. 종양 오가노이드를 10 μM의 CHD1L 억제제로 추가 72시간 동안 처리하였다. 처리 후, 종양 오가노이드를 회흐스트(Hoechst) 33342 16 μM로 1시간 동안 염색하였다(핵 염색). 5x 공기형 대물렌즈(air objective)로 이미지를 이미징하였다. Z-스택을 총 15개의 광학 슬라이스에 대하여 26.5 μm 떨어지게 설정하였다. 오페라 피닉스(Opera Phenix)™ 및 하모니(Harmony)® 소프트웨어(PerkinElmer, 미국 매사추세츠주 홉킨톤 소재)를 사용하여 이미징 및 고함량 분석을 수행하였다. 핵을 각 층 내에서 동정하고, 세포를 GFP 또는 mCherry 채널로 확인하였다. 각각의 채널의 형광 강도를 계산하고, 역치를 배경 강도를 기반으로 설정하였다. GFP 또는 mCherry RFP 양성 세포의 퍼센트를 계산하고, DMSO 처리군으로 정규화하였다.
종양 오가노이드 세포독성
SW620 종양 오가노이드를 본원에 기재된 바와 같이 배양하였다. 셀톡스™ 그린 세포독성 검정 용액을 제조사의 프로토콜(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)에 따라 제조하였다. 간략하게, 종양 오가노이드를 72시간 동안 셀톡스™ 그린 시약(0.5X) 및 0 내지 100 μM 범위의 다양한 용량의 CHD1L 억제제로 처리하였다. 488 nm에서 여기 및 500-550 nm에서 방출을 갖는 오페라 피닉스™ 207 스크리닝 시스템(PerkinElmer Cellular Technologies, 독일 함부르크 소재)을 사용하여 오가노이드를 이미징하였다. 전체 웰의 평균 강도를 이용하여 세포독성을 계산하였고, 용해 버퍼(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)는 100% 세포독성 대조군이고, 0.5% DMSO는 0% 세포독성 대조군이다. 강도 값을 Prism8(GraphPad, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)을 사용하여 이들 대조군으로 정규화하였다.
침습 검정
HCT116 세포를 60,000개 세포/웰로 인큐사이트 ® 이미지록크(ImageLock) 96-웰 플레이트(Sartorius, 프랑스 소재)로 플레이팅하고, 밤새 부착되도록 두었다. 인큐사이트® 운드메이커(WoundMaker)를 사용하여 모든 웰에 상처를 생성한 다음, PBS로 2회 세척하였다. 코닝 XT 쿨 코어(Corning XT Cool Core)를 사용하여 플레이트를 4℃로 만들어 침습 조건의 제조 동안 마트리겔® 매트릭스(Corning Life Sciences, 미국 뉴욕주 코닝 소재)의 중합을 회피하였다. 웰을 RPMI-1640 배지에서 50% 마트리겔® 매트릭스 50 μL로 코팅하였다. 공기 방울에 의한 고른 매트릭스 코팅을 보장하기 위하여 스윙 버켓 로터(swing bucket rotor)를 사용하여 플레이트를 150 rpm으로 4℃에서 3분 동안 원심분리하였다. 그 후, 매트릭스의 고른 중합을 위하여 10분 동안 세포 배양 배양기(5% CO2, 37℃, 습도) 내부에서 예열된 코닝 XT 쿨싱크(Corning XT CoolSink) 모듈에 플레이트를 놓은 후, 5% FBS를 함유하는 RPMI-1640 배지 50 μL 중에 용해된 CHD1L 억제제를 첨가하였다. 최종적으로, 플레이트를 인큐사이트® S3 생존 세포 이미저(Sartorius, 프랑스 소재)에 48시간 동안 놓았다. 단계 대조 채널 및 와이드 모드의 10x 대물렌즈를 사용하여 매 시간 마다 상처를 이미징하였다.
재조합 인간 CHD1L의 클로닝 및 정제
Cat-CHD1L(잔기 16-61) 및 fl-CHD1L(잔기 16-879) 구성물은 카롤린스타 연구소의 의학 생화학 및 생물물리학과의 헬렌 베르글룬드(Helena Berglund)로부터의 관대한 선물이었다. 단백질은 테리픽 브로쓰(Terrific Broth)(ThermoFischer, 미국 매사추세츠주 월섬 소재)에서 로세타(Rosetta)™ 2(DE3) pLysS 세포(시그마 알드리치(Sigma-Aldrich, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)로부터 이용 가능한 노바겐(Novagen))에서 발현되었다. 배양은 0.2 mM IPTG와 함께 OD600 = 2.0에서 18℃에서 16시간 동안 유도되었다. 세포를 수확하고, 20 mM HEPES, pH 7.5, 500 mM NaCl, 50 mM KCl, 20 mM 이미다졸, 10 mM MgCl2, 1 mM TCEP(트리스(2-카복시에틸)포스핀), 10% 글리세롤 및 500 μM PMSF를 함유하는 버퍼-A 중에 재현탁시켰다. 세포를 초음파 처리로 용해시키고, 세포 잔해를 원심분리로 제거하였다. 상청액을 Ni-NTA 수지 컬럼(Qiagen, 독일 힐덴 소재)에 로딩하였다. 컬럼에 결합된 단백질을 버퍼-A로 1회 세척하고, 10 mM ATP를 함유하는 버퍼-A로 1회 세척하고, 버퍼-A로 추가로 세척하였다. 20 내지 500 mM 이미다졸의 구배로 버퍼-B(500 mM 이미다졸을 함유하는 버퍼-A)를 사용하여 단백질을 용리시켰다. 친화성 정제 후, cat-CHD1L을 50 mM Tris, pH 7.5, 200 mM NaCl, 및 1 mM DTT로 밤새 투석하였다. 유사하게, fl-CHD1L을 20 mM MES, pH 6.0, 300 mM NaCl, 10% 글리세롤, 및 1 mM DTT로 밤새 투석하였다. 그 다음, 단백질을 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. cat-CHD1L은 Q-세파로스 컬럼(GE Healthcare, 미국 일리노이주 시카고 소재)에 결합되고, fl-CHD1L은 S-세파로스 컬럼(GE Healthcare, 미국 일리노이주 시카고 소재)에 결합되고, cat-CHD1L에 있어서 0.2 - 1 M 및 fl-CHD1L에 있어서 0.3 - 1 M의 NaCl 구배를 사용하여 단백질을 용리시켰다. 순수한 분획을 풀링하고, 농축하고, 20 mM HEPES, pH 7.5, 100 mM NaCl, 1 mM TCEP, 및 10% 글리세롤과 함께 수퍼덱스(Superdex)™ 200 컬럼(GE Healthcare, 미국 일리노이주 시카고 소재)을 사용하는 크기 배제 크로마토그래피로 추가로 정제하였다. ACTA 스타트(Start) FPLC(GE Healthcare, 미국 일리노이주 시카고 소재)를 사용하여 단백질 정제를 수행하였다.
CHD1L ATPase 검정
모든 반응은 저 부피 비결합 표면 384-웰 플레이트(Corning Inc., 미국 뉴욕주 코닝 소재)를 사용하여 수행하였다. cat-CHD1L 또는 fl-CHD1L(100 nM) 및 200 nM c-Myc DNA 또는 모노뉴클레오솜(Active Motif, 미국 캘리포니아주 칼즈배드 소재)을 50 mM Tris pH 7.5, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, 5% 글리세롤을 함유하는 버퍼에 가하고, 10 μM ATP(New England Biolabs, 미국 매사추세츠주 입스위치 소재)를 총 부피 10 μL로 첨가함으로써 반응을 개시하고, 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 구체적으로는 플루오로포어 MDCC로 표지된 포스페이트-결합 단백질을 함유하는 포스페이트 센서(Life Technologies, 미국 캘리포니아주 칼즈배드 소재) 500 nM을 가하고, 엔비젼(EnVision)® 플레이트 리더(PerkinElmer, 미국 매사추세츠주 홉킨톤 소재)에서 즉시 여기(430 nm) 및 방출(450 nm)을 측정함으로써 ATPase 활성을 검정하였다. 무기 포스페이트 표준 곡선을 사용하여 형광을 [Pi]로 전환하고, Prism8(GraphPad Software, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)를 사용하여 효소 반응속도론을 결정하였다
CHD1L의 억제제를 위한 HTS 약물 발견
검정 조성물은 반응 혼합물 부피가 약물 또는 DMSO의 첨가를 수용하도록 변형된 것을 제외하고 cat-CHD1L을 사용하는 상기 기재된 바와 동일한 것이었다. 야누스(Janus)® 액체 핸들러(PerkinElmer, 미국 매사추세츠주 홉킨톤 소재)를 사용하여, 100% DMSO 중에 용해된 화합물의 선택된 양을 10% DMSO 중의 200 μM의 농도가 되도록 50 mM Tris pH 7.5, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, 5% 글리세롤 버퍼와 혼합하였다. 그 다음, 각각의 화합물 1 μL를 효소 혼합물에 20 μM의 최종 농도를 갖도록 가하였다. 사용된 음성 대조군은 1% DMSO이고, 10 mM EDTA를 양성 대조군으로서 사용하였다. 10 μM ATP의 첨가로 반응을 개시하고, 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 500 nM 포스페이트 센서를 가하여 ATPase 활성을 형광으로 측정하였다. cat-CHD1L을 라이프 케미칼스(Life Chemicals, 미국 코네티컷주 우드브리지 소재)로부터의 20,000-화합물 다양성 세트 및 셀렉 케미칼스(Selleck Chemicals, 미국 텍사스주 휴스턴 소재)로부터의 키나제 억제제 라이브러리에 대하여 스크리닝하였다. 두 라이브러리 모두 구입 전에 예비스크리닝하여, 원하는 표적에 대한 선택성보다 많은 생물학적 표적과 비특이적으로 반응하는 경향이 있는 팬 검정(Pan-assay) 방해 화합물(PAINS)을 제거하였다[Baell & Nissink, 2018; Baell & Holloway, 2010].
환자 유래 종양 오가노이드(PDTO) 배양 및 생존도 검정
CRC 환자 종양 조직을 UCCC GI 조직 은행으로부터 입수하고, 하기 확립된 프로토콜을 따라 확장하였다[Morin et al., 1997]. 간략하게, 세포를 96-웰 플레이트에서 웰당 5,000개 세포로 시딩하고, 확립된 방법으로 배양하여[Franken et al., 2006] 72시간 동안 PDTO 형성을 허용하였다. PDTO를 DMSO(0.5%) 또는 다양한 농도의 화합물 6.0로 추가 72시간 동안 처리하여 용량 반응을 수득하였다. 셀티터-블루® 시약(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)을 사용하여 PDTO 세포 생존도를 측정하였다. 배지(80 μL)를 웰로부터 흡입하고, 시약 80 μL를 가하고, 4시간 동안 배양하고, 여기 560 여기 및 590 방출을 사용하는 형광 강도로 세포 생존도를 측정하였다.
아폽토시스의 평가
SW620 세포를 96-웰 플레이트에서 30,000개 세포/웰로 플레이팅하였다. 세포를 DMSO(음성 대조군), SN-38(아폽토시스 양성 대조군), 및 지시된 농도의 화합물 6.0으로 12시간 동안 처리하였다. 그 다음, 차가운 PBS로 2회, 차가운 아넥신-V 염색 버퍼(10 mM HEPES, pH 7.4, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2)로 21회 세정한 다음, 아넥신-V FITC와 1:100로 30분 동안 암실에서 배양하였다. 그 다음, 세포를 아넥신-V 염색 버퍼로 2회 세정하고, 엔비젼® 플레이트 리더(PerkinElmer, 미국 매사추세츠주 홉킨톤 소재)를 사용하여 FITC 강도를 측정하였다.
γ-H2AX에 의한 DNA 손상의 평가
DLD1CHD1L-OE 세포를 96-웰 퍼킨엘머(PerkinElmer) 세포 캐리어 플레이트에 시딩하고, 밤새 부착되도록 두었다. 그 다음, 세포를 10 μM의 적절한 화합물(0.5% DMSO) 또는 SN-38(1 μM), 옥살리플라틴(10 μM), 및 에토포시드(10 μM)와 조합으로 CHD1L 억제제로 처리하였다. 세포를 6시간 동안 처리하였다. 배지를 흡입하고, 세포를 차가운 PBS로 세척하였다. 그 다음, 세포를 3% 파라포름알데히드로 15분 동안 실온에서 고정하고, 고정된 세포를 PBS로 3회 세척하였다. 세포를 1시간 동안 실온에서 PBS 중의 5% BSA, 0.3% 트리톤(Triton) X-100 중에서 차단하였다. 그 다음, PBS 중의 1% BSA, 0.3% 트리톤 X-100 중의 1:800 희석을 사용하여 4℃에서 밤새 세포를 포스포-(S139)-g-H2AX 래빗 mAb로 면역염색하였다. 1차 항체를 흡입하고, 세포를 PBS로 세척하였다. 세포를 2시간 동안 실온에서 PBS 중의 1% BSA, 0.3% 트리톤 X-100 중의 5 μg/mL의 농도로 고트 항-래빗 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) PlusTM 647 형광 2차 항체와 함께 배양하였다. 그 다음, 세포를 PBS로 세척하고, 회흐스트 33342 염색을 PBS 중의 1:1000의 농도로 희석하고, 세포에 15분 동안 실온에서 가하였다. 그 다음, 세포를 오페라 피닉스™ HCS 이미징 시스템(PerkinElmer)에서 20X 침수형 대물렌즈(water objective)를 사용하여 이미징하였다. 상승작용은 약물 상호작용 계수(CDI) 방정식, CDI = (A+B)/(AB)를 사용하여 결정하였다. 상승작용은 이들 실험에서 CDI < 0.8로 정의되었다. 부가작용은 0.8-1.2이고, 길항작용은 CDI > 1.2로 정의된다.
수성 용해도 및 CLogP
최근 보고된 상세한 방법[Abraham et al., 2019]을 사용하여, 수성 용해도를 화합물 6에 대하여 측정하였다. PBS UV 흡수 스펙트럼을 1-프로판올 중의 완전한 포화 용액과 비교하고, 선형 회귀 분석을 사용하여 PBS 중의 10% DMSO(pH 7.4) 중의 화합물 6.0의 용해도를 결정하였다. PBS 중의 용해도의 측정은 이중 실험으로 수행하였다. SwissADME 웹 툴을 사용하여 컨센서스 LogP(CLogP) 값을 수득하였다[Daina et al., 2017].
마이크로솜 안정성 연구
세키수이 제노테크(Sekisui XenoTech), 미국 캔자스주 캔자스 시티 소재)로부터 구입한 암컷 CD-1 마우스 마이크로솜(M1500)을 사용하여 최근 보고된 방법에 따라[Abraham et al., 2019] 화합물 6.0의 마이크로솜 안정성을 결정하였다. 샘플을 20,000g로 10분 동안 원심분리하고, 상청액을 LCMS 분석을 위하여 오토샘플러 바이알로 옮겼다. 후속 질량 이동(m/z, amu)을 화합물 6(분자량 = 393.5)에 대하여 모니터링하였다.
생체내 약리학
모든 동물 연구는 콜로라도 안슈츠 메디칼 캠퍼스 대학(미국 콜로라도주 오로라 소재) 및 콜로라도 주립 대학(미국 콜로라도주 포트콜린스 소재)에서 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 동물 프로토콜 절차에 따라 수행하였다.
약물동력학
찰스 리버(Charles River, 미국 매사추세츠주 윌밍턴 소재)로부터 구입한 9주 연령의 암컷 CD-1 마우스를 최근 보고된 방법[Abraham et al., 2019]을 사용하여 PK 연구에 사용하였다. 간략하게, PK 연구는 총 21마리 마우스/화합물 6에 대하여 3마리 마우스/시점으로 0.25 내지 24시간의 범위를 커버하도록 설계된다. 각각의 마우스에게 화합물 6.0의 단일 i.p. 주사를 100% DMSO 중에 제조된 50 mg/kg으로 투여하였다. 전체 혈액을 특정한 시점에서 수확하고, 분리된 혈장을 -80℃에서 보관을 위하여 냉동하거나 LC-MS/MS 분석을 위하여 사용하였다.
약역학 및 간 독성
마트리겔® 매트릭스(Corning Life Sciences, 미국 뉴욕주 코닝 소재) 및 RPMI 1640의 1:1 혼합물 100 μL 중에 현탁된 2,000,000개의 VimPro-GFP SW620 세포를 9주 연령의 암컷 가슴샘이 없는 마우스(Nude-Foxn1nu(069))(Envigo, 영국 캠프리지셔주 헌팅던 소재)의 옆구리에 주사하였다. 성장을 주당 3회 캘리퍼 측정으로 모니터링하였다. 4주에, 마우스를 2개의 군으로 무작위로 나누고, 비히클(10% DMSO, 40% PEG 400, 50% PBS pH=7.4) 200 μL 중의 화합물 6.0 50 mg/kg 또는 비히클 대조군으로 처리하였다. 처리는 i.p. QD로 5일 동안 투여하였다. 마우스를 처리 제5일에 최종 용량 투여 후 2시간에 희생시켰다. 종양 및 간을 LCMS에 의해 측정된 화합물 6.0 축적의 분석, EMT 및 아폽토시스, 및 간 독성에 대한 효과를 측정하는 웨스턴 블롯 분석을 위하여 수집하였다.
통계 분석
데이터에 웰치의 상관관계 통계 분석과 함께 독립 양측 스튜던트 t-시험을 수행하거나 그렇지 않으면 Prism8(GraphPad, 미국 캘리포니아주 라호이아 소재)을 사용하여 기재된 바와 같이 수행하였다. 모든 실험은 3회(n=3) 또는 방법에 기재된 바와 같이 반복하였다.
실시예 10: 화합물 활성의 평가를 위한 추가의 실험 방법
마이크로솜 안정성. CD-1 마우스 마이크로솜을 상업적으로 구입하고, 반응을 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다. 간략하게, 하기와 같이 마스터 믹스를 제조하였다: 마이크로솜(0.5 mg/mL), DMSO(0.1%) 중에 용해된 10 μM CHD1Li, 5 mM UDPGA, 25 μg 알라메티신, 및 1 mM MgCl2 in 100 mM 포스페이트 버퍼(pH 7.4). 마스터 믹스를 37℃에서 5분 동안 전배양한 다음, 1 mM NADPH를 가하여 마이크로솜 활성 반응을 개시하고, 이를 시간 과정 전체에서 37℃에서 유지하였다. 아세토니트릴 200 μL를 가하여 0, 5, 15, 30, 45, 및 60분에 반응을 중단시키고, 질량 분석으로 분석하였다. 적절한 마이크로솜 대조군을 또한 동일한 반응 조건에서 수행하였다.
이리노테칸(SN38)과의 γ-H2AX DNA 손상 조합 연구 . CHD1L 억제제 6을 단독으로 및 SN38과의 조합으로 이전에 보고된 바와 같이 DNA 손상에 대하여 평가하였다[Abbott et al., 2020; Abraham et al., 2019]. 낮은 CHD1L 내인성 발현을 갖는 DLD1 결장직장암 세포 및 CHD1L을 과발현하도록 조작된 DLD1 세포를 사용하여, DNA 손상 연구를 수행하여 DNA 손상의 잘 확립된 바이오마커인 γ-H2AX의 면역형광을 측정하였다[Ji et al., 2017; Ivashkevich et al., 2012]. 세포를 단층으로 96-웰 플레이트에 시딩하고, 10 mM(0.5% DMSO)의 화합물 6.0 또는 SN-38(1 mM), 또는 6.0 및 SN38의 조합으로 6시간 동안 처리하였다. 배지를 흡입하고, 세포를 차가운 PBS로 세척하였다. 그 다음, 세포를 3% 파라포름알데히드로 15분 동안 실온에서 고정하고, PBS로 3회 세척하였다. 세포를 1시간 동안 실온에서 PBS 중의 5% BSA, 0.3% 트리톤 X-100 중에서 차단하였다. 그 다음, 세포를 PBS 중의 1% BSA, 0.3% 트리톤 X-100 중의 1:800 희석을 사용하여 4℃에서 밤새 포스포-(S139)-γ-H2AX 래빗 mAb으로 면역염색하였다. 1차 항체를 흡입하고, 세포를 PBS로 세척하였다. 세포를 2시간 동안 실온에서 고트 항-래빗 알렉사 플루오르 PlusTM 647 형광 2차 항체와 함께 PBS 중의 1% BSA, 0.3% 트리톤 X-100 중의 농도 5 mg/mL로 배양하였다. 그 다음, 세포를 PBS로 세척하고; 회흐스트 33342 염색을 PBS 중에 1:1000의 농도로 희석하고, 세포에 15분 동안 실온에서 가하였다. 그 다음, 퍼킨엘머 피닉스(Phenix) HCS 이미징 시스템에서 20X 침수형 대물렌즈를 사용하여 세포를 이미징하였다. CHD1L을 발현하는 DLD1 세포에서 손상을 유도하는 화합물 6.0과 SN38 사이의 상승작용이 관찰되었고, 이는 약물 상호작용 계수(CDI) 방정식, CDI =(A+B)/(AB)를 사용하여 결정되고, 상승작용은 CDI < 0.8로 결정되고, 부가작용은 0.8-1.2로 결정되고, 길항작용은 CDI > 1.2로 정의된다. 웰치의 t-시험 통계 분석을 사용하여 유의성을 결정하였고, 여기서 **= P ≤ 0.01이다.
세포 기반의 세포독성 용량 반응 및 조합 연구. CHD1L 억제제 및 SN38(이리노테칸의 활성 약물작용발생단)을 결장직장암 세포주 단독 또는 조합에 대한 항종양 활성에 대하여 평가하였다. 세포주를 이전에 보고된 바와 같이 5% 소 태아 혈청을 함유하는 RPMI-1640을 사용하여 단층 또는 3D 종양 오가노이드 배양으로 배양하였다[Abbott et al. , 2020]. 3D SW620 종양 오가노이드 세포독성 연구를 위하여, 2,000개의 세포 100 μL를 96-웰 U-바닥 울트라-저 부착 마이크로플레이트(Corning Inc., 미국 뉴욕주 코닝 소재, USA)의 각각의 웰에 플레이팅하였다. 플레이트를 1,000 rpm으로 15분 동안 원심분리하여 세포 응집을 촉진하였다. 원심분리된 세포를 웰당 10% 마트리겔 25 μL로 코팅하여 최종 2%의 마트리겔 농도를 도달하였다. 그 다음, 플레이트를 처리 전에 3일 동안 배양하였다. 3D 오가노이드를 다양한 농도의 약물 25 μL로 처리하였다. 처리 후 3일에, 배지 40 μL를 갖는 오가노이드를 96-웰 화이트 고체 바닥 플레이트로 수동으로 옮겼다. 동일한 양의 셀티터-글로 3D(Promega)를 가하고, 플레이트를 45분 동안 400 rpm으로 플레이트 쉐이커에서 유지한 후, 엔비젼 플레이트 리더(PerkinElmer)로 발광을 판독하였다. 조합 연구를 위하여, 콤베네피트(Combenefit) 분석을 사용하여 상승작용 점수를 결정하였다[De Veroli et al., 2016].
생체내 연구. 이전에 보고된 바와 같이 9주 연령의 암컷 CD-1 마우스에서 CHD1L 억제제 화합물 6.0 및 6.11을 약물동력학적으로 평가하여 혈장 반감기를 측정하였다[Abbott et al., 2020]. 화합물 6을 가슴샘이 없는 마우스에서 SW620 종양 이종이식에 대한 항종양 활성 단독 및 이리노테칸과의 조합에 대하여 추가로 평가하였다. 이전에 보고된 바와 같은 방법을 사용하여 이종이식을 생성하였다[Zhou et al., 2016]. 간략하게, 화합물 6을 5 mg/kg으로 총 5주 동안 복강내 주사(i.p.) 2x/일 7일/주로 투여하였다. 화합물 6 치료의 제1 주 후 시작하여, 이리노테칸을 3주 동안 60 mg/kg 1x/주로 i.p. 투여하였다. 체중 및 종양 부피를 2회/주 모니터링하였다. 단일 종양이 2000 mm3에 도달하거나 총 종양 부피가 3000 mm에 도달하면 마우스를 희생시키고 조직을 수집하였다[Ji et al., 2017]. 화합물 6.11을 SW620 종양 이종이식에 대한 항종양 활성 단독 및 이리노테칸과의 조합에 대하여 유사하게 평가하였다. CRC M-표현형은 다른 CRC EMT-표현형보다 유의하게 더 종양형성적이고 M-표현형은 또한 유의하게 더 높은 TCF-전사를 갖는다고 최근에 보고되었다[Esquer et al., 2021 및 이의 보충 정보]. 이 연구에서 사용된 이종이식은 문헌[Esquer et al, 2021]에 기재된 바와 같이 단리된 이중-리포터 중간엽 세포(M-표현형)를 사용하여 생성하였다. 화합물 6.11의 반감기는 CD-1 마우스에서 8시간이고, 이는 화합물 6(반감기 3시간)과 비교하여 2.7배 더 안정적이다. 따라서, 치료의 수는 2x/일에서 1x/일로 감소하였다. 추가로, 이리노테칸은 50 mg/kg로 i.p. 투여되었다.
도 7a 및 7b는 SW620 결장직장암(CRC) 종양 오가노이드에서 대표적인 단일 제제 세포독성 용량 반응 연구를 도시하고, 지시된 바와 같이 예시적인 화합물에 대한 IC50을 제공한다. 하기 표 4a 및 4b는 예시적인 화합물에 대한 세포독성 데이터의 요약을 제공한다. 표 4A는 몇몇 상이한 CRC 종양 오가노이드에서 대표적인 단일 화합물에 대한 세포독성 데이터를 제공한다.
Figure pct00057
Figure pct00058
표 4B는 지시된 대표적인 CHD1L 억제제(CHD1Li)와 SN38 또는 올라파립의 조합 처리의 결과를 제공한다. 치료는 4종의 상이한 CRC 종양 오가노이드 유형에서 수행된다. CHD1L 억제제의 농도는 지시된 바와 같이 다양하다. 조합 처리에 대한 IC50은 SN38 및 올라파립 단독과 비교하여 일반적으로 감소한다. # 화합물의 개선된 비교를 위한 업데이트된 실험, 데이터는 소수점 이하 하나의 유효 숫자 자리로 반올림되었다.
Figure pct00059
도 8b는 DLD1 빈 벡터(EV) 세포 및 DLD1(OE) 과발현 세포에서 화합물 6 단독, 이리노테칸(SN38) 단독, 및 둘의 조합에 대한 γ-H2AX 강도(DMSO에 상대적인)의 그래프를 나타낸다. 도 8a는 이들 세포에서 α-튜불린의 대조군 발현과 비교하여 DLD1(OE) 세포에 비교된 DLD1(EV) 세포에서 CHD1L의 상대적인 발현을 보여주는 웨스턴 블롯이다. CHD1L은 PARP-1 매개된 DNA 복구에 필수적인 것으로 공지되어 있고, 따라서 DNA 손상 화학요법에 대한 내성을 유발한다[Ahel et al., 2009; Tsuda et al., 2017]. 도 8b의 데이터는 SN38과 상승작용하여 DNA 손상을 유도하는 CHD1L 억제제의 "표적에 대한" 효과를 증명한다.
도 9a-9c는 SW620 결장직장암(CRC) 종양 오가노이드에서 예시적인 CHD1L 억제제 6, 6.3, 6.9 및 6.11과의 상승작용 연구의 결과를 도시한다. 6, 및 6.3과 SN38 조합은 결장 SW620 종양 오가노이드를 사멸시키는데 SN38 단독보다 각각 50배 및 150배 더 강하다. 6.9 및 6.11과 SN38 조합은 둘 다 SN38 단독보다 100배 이상 더 강하다. 각각의 화합물 6, 6.3, 6.9 및 6.11은 SW620 종양 오가노이드를 사멸시키는데 있어서 이리노테칸(및 SN38)과 상승작용을 나타낸다.
점수가 문헌[De Veroli et al. 2016]에 기재된 바와 같이 결정되는 예시적인 CHD1L 억제제의 상승작용 점수는 표 5에 제공된다. 상승작용 점수의 값을 해석하기 위하여, 시너지파인더(SynergyFinder)가 백분율 억제로서 정규화된 입력 데이터를 갖기 때문에, 이들은 약물 상호작용으로부터 기인할 수 있는 세포 반응의 비율로서 직접적으로 해석될 수 있다(예를 들면, 상승작용 점수 20은 기대 이상의 반응의 20%에 상응한다). 우리의 경험에 따르면, 거의 0인 상승작용 점수는 상승작용 또는 길항작용에 대한 제한적 확신을 제공한다. 상승작용 점수가
-10 미만인 경우: 두 약물 사이의 상호작용이 길항작용일 가능성이 있고;
-10 내지 10인 경우: 두 약물 사이의 상호작용이 부가작용일 가능성이 있고;
10 초과인 경우: 두 약물 사이의 상호작용이 상승작용일 가능성이 있다.
도 10은 화합물 6 단독, 이리노테칸 단독 또는 이의 조합에 의한 처리의 일수(28일까지)의 함수로서 종양 부피(배수) SW620 종양 이종이식의 그래프를 포함한다. 이리노테칸과 화합물 6의 조합은 단일 제제 처리군 또는 대조군과 비교하여 처리 28일 내에 거의 종양 부피가 없을 정도로 결장 SW620 종양 이종이식을 유의하게 억제한다.
도 11은 이리노테칸 단독(1) 또는 화합물 6.0과 이리노테칸의 조합(2)에 의한 처리의 일수(28일까지)의 함수로서 종양 부피(배수) SW620 종양 이종이식의 그래프를 포함한다. 이리노테칸과 화합물 6의 조합은 이리노테칸 단독과 비교하여 마지막 처리 후 거의 종양 부피가 없을 정도로 결장 SW620 종양을 유의하게 억제한다. 이리노테칸 단독의 마지막 처리의 2주 내에 종양 부피는 마지막 처리의 부피보다 상승하고, 이는 종양 재발을 의미한다. 대조적으로 조합은 낮은 종양 부피를 유지하였다.
도 12는 화합물 6 단독 및 이리노테칸(4)과의 조합이 비히클(1), 화합물 6 단독(2) 및 이리노테칸 단독(3)과 비교하여 CRC-종양 함유 마우스에서 생존을 유의하게 증가시킨다는 것을 보여준다.
도 13은 화합물 6.11 단독, 이리노테칸 단독 또는 이의 조합에 의한 처리의 일수(28일까지)의 함수로서 종양 부피(배수) SW620 종양 이종이식의 그래프를 포함한다. 이리노테칸과 화합물 6.11의 조합은 이리노테칸 단독 또는 대조군과 비교하여 결장직장암 SW620 종양 이종이식을 유의하게 억제한다.
도 14는 이리노테칸 단독 또는 화합물 6.11과 이리노테칸의 조합에 의한 처리의 일수(33일까지)의 함수로서 종양 부피(배수) SW620 종양 이종이식의 그래프를 포함한다. 이리노테칸과 화합물 6.11의 조합은 이리노테칸 단독과 비교하여 마지막 처리(제33일) 후 결장직장 SW620 종양을 유의하게 억제한다. 처리 후 8일(Tx 방출됨)에, 이리노테칸 처리 단독의 종양 부피는 ~3배 상승하고, 이는 종양 재발을 의미한다. 대조적으로, 6.11과 이리노테칸의 조합의 처리에 의한 종양 부피는 처리 후 계속 감소하였다(~1.5배 만큼). 처리 후 8일에 이리노테칸 단독에 의한 처리와 6.11과 이리노테칸의 조합에 의한 처리 사이의 종양 부피의 차이는 3.4배이다.
도 15는 이리노테칸과 조합인 화합물 6.11이 이리노테칸 단독 및 대조군과 비교하여 CRC-종양 함유 마우스의 생존을 유의하게 증가시킨다는 것을 보여준다.
실시예 11: 억제제에 대한 현재 바람직한 구조 활성 관계의 요약
본 발명의 CHD1L 억제제를 위한 하기 화학식 I을 기반으로 한 현재 바람직한 구조 활성 관계는 하기와 같다:
[화학식 I]
Figure pct00061
B 고리에 있어서, 고리는 6원 방향족 또는 융합된 6, 6원 방향족 고리이고, X는 둘 다 N인 것이 현재 바람직하다. B 고리는 임의로 융합된 고리를 함유하고, 존재하는 경우, 1 또는 2개의 추가의 N을 함유할 수 있다. 바람직한 RB(B 고리 치환)는, 존재하는 경우, 수소, 알킬 및 플루오로알킬기를 포함한다. 특정 실시양태에서, x는 1이고, L1은 존재하고, 바람직하게는 L1은 -CH2-이고, RB는 전기음성기, 예를 들면, 할로겐, 특히 F 또는 할로알킬, 특히 CF3-일 수 있다. 바람직한 RB는 수소 또는 C1-C3 알킬이다. 바람직한 A 고리는 임의로 치환된 페닐이고, 비치환된 페닐(여기서 RA는 수소이다)이 더 바람직하다. RP 기는 수 용해도와 연관되는 것으로 생각되고, -N(R2)(R3)기가 일반적으로 바람직하고, 임의로 치환된 N 함유 헤테로사이클이 특히 더 바람직하고, 여기서 R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 하나 이상의 추가의 헤테로원자를 함유할 수 있고 포화(이중 결합 없음)이거나 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있는 5 내지 8원 고리를 형성한다. RH는 활성 및 효능 뿐만 아니라 대사 안정성과 연관된다고 생각된다. RH는 바람직하게는 방향족기이고, 더 특히 방향족 또는 헤테로방향족 고리를 안정화시키는 고리 치환을 갖는 헤테로방향족기이다. 바람직한 Y는 NR이고, R은 수소가 더 바람직하다. 바람직하게는 x는 상기 기재된 바를 제외하고 0이다. 바람직한 Z는 -CO-NH-이다. 바람직한 L2는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이다. 바람직한 L1은, 존재하는 경우, -CH2-이다.
실시양태에서, CHD1L을 위한 HTS 스크리닝은 하기 화학식 XX에 도시된 페닐아미노 피리미딘 약물작용발생단 및 이의 염을 동정하였다:
[화학식 XX]
Figure pct00062
상기 식에서, R1-R9는 수소 또는 임의의 치환기를 나타내고, R10은 효능과 연관된다고 생각되는 모이어티이고; RN은 물리화학적 특성, 예를 들면, 용해도와 연관된다고 생각되는 모이어티이다. 실시양태에서, R5는 대사 안정성과 연관된다고 생각되는 수소가 아닌 치환기이다. 특정 실시양태에서, R5는 할로겐, 특히 F 또는 Cl, C1-C3 알킬기, 특히 메틸기이다. 실시양태에서, R4는 수소가 아닌 치환기, 특히 C1-C3 알킬기, 더 특히 메틸기이다. 특정 실시양태에서, R5는 F이고, R4는 메틸이다. 실시양태에서, R6-R9는 수소, C1-C3-알킬, 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알콕시, 포밀, 또는 C1-C3 아실로부터 선택된다. 실시양태에서, R6-R9 중 1 또는 2개는 수소가 아닌 모이어티이다. 실시양태에서, R6-R9 중 1개는 할로겐, 특히 플루오르이다. 특정 실시양태에서, 모든 R6-R9는 수소이다. 실시양태에서, RN은 아미노 모이어티 -N(R2)(R3)이다. 특정 실시양태에서, RN은 제2 헤테로원자(N, S 또는 O)를 임의로 함유하는 5 내지 7원 고리를 갖는 임의로 치환된 헤테로사이클릭기이다. 실시양태에서, RN은 임의로 치환된 피롤리딘-1-일, 피페리딘-1-일, 아제판-1-일, 피페라진-1-일, 또는 모르폴리노이다. RN은 C1-C3 알킬, 포밀, C1-C3 아실(특히 아세틸), 하이드록실, 할로겐(특히 F 또는 Cl), 하이드록시C1-C3 알킬(특히 -CH2-CH2-OH)로부터 선택된 하나의 치환기로 치환된다. 실시양태에서, RN은 비치환된 피롤리딘-1-일, 피페리딘-1-일, 아제판-1-일, 피페라진-1-일, 또는 모르폴리노이다.
실시양태에서, R10은 -NRy-CO-(L2)y-R12 또는 -CO-NRy-(L2)y-R12이고, 여기서 y는 L2의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고, 이는 임의의 1-6개의 탄소 원자 연결기이고, 이 연결기는 임의로 치환되고, 연결기의 1 또는 2개의 탄소는 임의로 O, NH, NRy 또는 S로 대체되고, Ry는 수소 또는 1-3개의 탄소 알킬이고, R12는 아릴기, 사이클로알킬기, 헤테로사이클릭기, 또는 헤테로아릴기이고, 이들 각각은 임의로 치환된다. 실시양태에서, y는 1이다. L2는 -(CH2)p-이고, 여기서 p는 0-3이다. 실시양태에서, R12는 티오펜-2-일, 티오펜-3-일, 4-브로모티오펜-2-일, 푸라니-2-일, 푸란-3-일, 피롤-2-일, 피롤-3-일, 옥사졸-4-일, 옥사졸-5-일, 옥사졸-2-일, 인돌-2-일, 인돌-3-일, 벤조푸란-2-일, 벤조푸란-3-일, 벤조[b]티오펜-2-일, 벤조[b]티오펜-3-일, 이소벤조푸란-1-일, 이소인돌-1-일, 또는 벤조[c]티오펜-1-일이다. 실시양태에서, R1은 수소 또는 메틸이다. 실시양태에서, R12는 티오펜-2-일, 푸라니-2-일, 피롤-2-일, 옥사졸-4-일, 인돌-2-일, 벤조푸란-2-일, 또는 벤조[b]티오펜-2-일이다. 실시양태에서, R12는 티오펜-2-일 또는 인돌-2-일이다. 실시양태에서, R1은 수소 또는 메틸이다.
본 발명의 예시적인 화합물은 반응식 1에 도시된다. 반응식 1에서, X는 할로겐이고, 바람직하게는 Cl 또는 Br이다. 반응식 1에서, R은 C1-C5 알킬 또는 사이클로알킬, 바람직하게는 C1-C3 알킬 또는 사이클로프로필, 더 구체적으로, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 사이클로프로필이다.
본원의 임의의 화학식의 예시적인 RP 및 -N(R2)(R3) 기는 반응식 2에 도시된다.
본원의 임의의 화학식의 예시적인 R12 및 RH 기는 반응식 3에 도시된다.
화학식 I의 예시적인 B 고리는 반응식 4에 도시된다.
반응식 1: 화학식 I 또는 화학식 XX-XXIII의 예시적인 화합물
Figure pct00063
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
Figure pct00067
Figure pct00068
Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
Figure pct00076
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
Figure pct00082
반응식 2: 예시적인 R P 및 -N(R 2 )(R 3 ) 기
Figure pct00083
Figure pct00084
Figure pct00085
Figure pct00086
반응식 3: 예시적인 R 12 및 R H 기
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
Figure pct00091
Figure pct00092
Figure pct00093
X11는 CH 또는 N이고; p는 0, 1 또는 2이고;
R은 수소, C1-C6 알킬, C4-C7 사이클로알킬알킬, -SO2-R', 페닐, 또는 벤질이고;
R'은 수소, C1-C6 알킬, C4-C7 사이클로알킬알킬, 페닐, 또는 벤질이고;
각각의 Rs는 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록사이드, C1-C6 알킬, C4-C7사이클로알킬알킬, 페닐 또는 벤질 또는 C1-C3 알콕사이드이다.
Figure pct00094
X11은 CH 또는 N이고; X10은 CR 또는 N이고;
p는 0, 1 또는 2이고;
R은 수소, C1-C6 알킬, C4-C7 사이클로알킬알킬, -SO2-R', 페닐, 또는 벤질이고;
R'은 수소, C1-C6 알킬, C4-C7 사이클로알킬알킬, 페닐, 또는 벤질이고;
각각의 Rs는 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록사이드, C1-C6 알킬, C4-C7사이클로알킬알킬, 페닐 또는 벤질 또는 C1-C3 알콕사이드이다.
Figure pct00095
Figure pct00096
R12-75,
X는 할로겐, 특히 Cl 및 Br이고;
p는 0, 1 또는 2이고;
각각의 Rs는 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록사이드, C1-C6 알킬, C3-C7-사이클로알킬알킬, 페닐 또는 벤질 또는 C1-C3 알콕사이드이고, 특히 각각의 Rs는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬 또는 C3-사이클로알킬이다.
Figure pct00097
R12-76,
X는 할로겐, 특히 Cl 및 Br이고;
p는 0, 1 또는 2이고; X11은 CH 또는 N이고;
각각의 Rs는 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록사이드, C1-C6 알킬, C3-C7-사이클로알킬알킬, 페닐 또는 벤질 또는 C1-C3 알콕사이드이고, 특히 각각의 Rs는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬 또는 C3-사이클로알킬이다.
Figure pct00098
R12-77,
p는 0, 1 또는 2이고; X11은 CH 또는 N이고;
각각의 Rs는 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록사이드, C1-C6 알킬, C3-C7-사이클로알킬알킬, 페닐 또는 벤질 또는 C1-C3 알콕사이드이고, 특히 각각의 Rs는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬 또는 C3-사이클로알킬 또는 할로겐이다. 할로겐은 특히 Cl 또는 Br이다.
Figure pct00099
R12-78,
p는 0, 1 또는 2이고;
R은 수소 또는 C1-C4 알킬 또는 사이클로알킬이고;
각각의 Rs는 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록사이드, C1-C6 알킬, C3-C7-사이클로알킬알킬, 페닐 또는 벤질 또는 C1-C3 알콕사이드이고, 특히 각각의 Rs는 독립적으로 H 또는 C1-C3 알킬 또는 C3-사이클로알킬 또는 할로겐이다. 할로겐은 특히 Cl 또는 Br이다. R은 특히 수소 또는 메틸이다.
Figure pct00100
반응식 4: 화학식 I의 예시적인 B 고리
Figure pct00101
RB1, 이는 지시된 위치에서 Y 또는 RP에 결합하고, 여기서 X1 및 X2는 CH 및 N으로부터 선택되고, X1 및 X2 중 적어도 하나는 N이고, X3-X6은 CH2, CH, O, S, N, 및 NH로부터 선택되고, B 고리는 X3-X6의 선택에 따라 포화, 부분 불포화 또는 방향족이고, RB는 고리 탄소 및 또는 질소에서 화학식 I에서 정의된 바와 같은 임의의 치환을 나타낸다.
Figure pct00102
Figure pct00103
RB2-RB6, 이는 지시된 위치에서 Y 또는 RP에 결합하고, RB는 고리 탄소에서 화학식 I에서 정의된 바와 같은 임의의 치환을 나타낸다.
Figure pct00104
RB7-RB17, 이는 지시된 위치에서 Y에 결합하고, RB는 고리 탄소에서 또는 구체적으로 지시된 탄소에서 화학식 I에서 정의된 바와 같은 임의의 치환을 나타낸다.
실시예 12: 예시적인 합성 방법
화학식 XX -XXIII의 화합물 뿐만 아니라 본 발명의 많은 다른 화합물, 예를 들면, 반응식 5에 도시된 방법에 의해 제조되고, 여기서 변수는 상기 정의된 바와 같다. 이러한 3 단계 합성은 p-페닐렌디아민 B에 의한 2,4-디클로로-피리미딘 A(예를 들면, 2,4-디클로로-6-메틸피리미딘, 여기서 R4는 메틸 또는 2,4-디클로로-5-플루오로피리미딘이고, 여기서 R5는 플루오르이다)의 4-위치에서의 선택적 방향족 친핵성 치환로 시작하여 중간체 C를 형성한다. 예시적인 반응 조건은 반응식 5에 도시되고, 여기서 반응물을 트리메틸아민과 함께 얼음처럼 차가운 에탄올에 가하고, 실온에서 15시간 동안 교반하였다[Kumar et al., 2014; Odingo et al., 2014]. 그 다음, 염소화된 중간체 C를 아민화에 의해 임의의 아민 HNR2R3 D와 반응시켜 중간체 E를 생성한다. 예시적인 아민화 조건은 반응식 5에 도시되고, 여기서 반응물은 DMF 중에서 K2CO3의 존재하에 상승된 온도에서 반응한다. 단계 3은 산 F를 이용하여 R10 기를 중간체 E에 커플링시킨다. 선택된 R10 기를 도입하는데 다양한 공지된 합성 방법, 예를 들면, 가교 결합, 클릭 화학 또는 치환 반응(예를 들면, SN2, 방향족, 친전자성)을 이용할 수 있다 [Li et al., 2014a; Li et al., 2014b; LaBarbera et al., 2007]. 반응식 5는 R10이 -NH-CO-R12인 화합물 G를 형성하는 E의 아민기와 선택된 카복실산 F의 커플링을 도시한다. 예시적인 R12는 아릴, 아릴 치환된 알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴 치환된 알킬이다. 예시적인 커플링 조건은 반응식 5에 도시되고, 여기서 커플링은 프로필포스포닉 무수물(T3P) 및 트리에틸아민의 존재하에 실온에서 진행되어 원하는 화합물 G를 형성한다. 도시된 방법을 사용하여, 예를 들면, 화합물 6 및 화합물 8(반응식 6 참조)을 제조하였다.
다양한 치환된 출발 물질 A, B, D 및 F는 상업적으로 이용 가능하거나 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 실시양태에서, 이미 R10으로 치환된 아닐린 유도체(B')를 p-페닐렌디아민 유도체 B를 대신에 사용하여 상응하는 R10-치환된 중간체 C'를 형성한다. 도시된 반응의 단계 2를 수행하여, 중간체 C'와 D의 반응은 원하는 상응하는 화합물 G'(여기서, R10은 R12-CO-NH-를 대체한다)를 수득할 것이다. 당업자에게 인식될 것인 바와 같이, 원하지 않는 부반응을 방지하기 위하여 도시된 반응 동안 출발 물질 또는 중간체에서 특정한 기를 보호하는 것이 유용하거나 그럴 필요가 있을 수 있다. 예를 들면, 반응물 F에서 고리 N은 적절한 아민 보호기로 보호될 수 있다. 적절한 보호기의 사용은 일반적으로 당업계에서 일상적인 것이다. 다양한 1차 또는 2차 아민(D)은 상업적으로 이용 가능하거나 널리 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 대안적으로, 염소화된 중간체 C는 적절한 친핵체와 반응하여 선택된 -NR2R3 기를 4-클로로 위치에 첨가할 수 있다. 예를 들면, D는 사이클릭 아민, 예를 들면, 피롤리딘일 수 있다. 또 다른 가능한 대안으로서, 스즈키 커플링을 사용하여 C-C 결합 형성에 의한 아민 함유 기를 설치할 수 있다[Li et al., 2014a]. 또 다른 가능한 대안으로서, 부흐발트-하르트비히(Buchwald-Hartwig) 교차 커플링을 사용하여 이러한 중간체에서 탄소 및 아민 결합을 형성할 수 있다.
Figure pct00105
반응식 5
화합물 6 및 8 의 상세한 합성 (반응식 6)
N-(4-아미노페닐)-2-클로로-6-메틸-피리미딘-4-아민(102)..
0℃에서 에탄올 10 mL 중에 용해된 2,4-디클로로-6-메틸피리미딘(100) 0.5 g(3.06 mmol)에 트리에틸 아민(TEA) 513.7 μL(1.2 당량, 372.5 mg, 3.68 mmol) 및 p-페닐렌디아민(101) 330.5 mg(3.06 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가열하고, 그 온도에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 수득된 잔여물을 용리액으로서 에틸 아세테이트 중의 40% 헥산을 사용하여 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 순수한 생성물(102) 500 mg(70% 수율)을 수득하였다. 1H NMR:(400 MHz, CDCl3): δ 7.19(브로드 s, 1H), 7.02(d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.70(d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.18(s, 1H), 3.77(브로드 s, 2H), 2.26(s, 3H).
N-(4-아미노페닐)-6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-아민(104)..
DMF 120 mL 중에 용해된 N-(4-아미노페닐)-2-클로로-6-메틸-피리미딘-4-아민(102) 1.2 g에 탄산칼륨 777.3 mg(5.62 mmol) 및 피롤리딘(103) 3.63 mg(4.12 mL, 51.1 mmol)을 실온에서 가하였다. 반응 혼합물을 80℃로 8시간 동안 가열하였다. 반응을 실온으로 냉각하고, 물로 희석하였다. 생성물을 에틸 아세테이트(3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 층을 조합하고, 염수로 세척한 후, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 유성 미정제 생성물을 수득하고, 이를 DCM 중의 10% 메탄올(TEA 몇 방울 함유)을 사용하여 실리카 겔 상에서 크로마토그래피하여 순수한 생성물(104) 1.31 g(96% 수율)을 수득하였다. 1H NMR:(400 MHz, CDCl3): δ 7.11(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.67(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.25(브로드 s, 1H), 5.68(s, 1H), 3.63(브로드 s, 2H), 3.56(t, J = 6.8 Hz, 4H), 2.19(s, 3H), 1.93(t, J = 6.8 Hz, 4H).
N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-2-(티오펜-2-일)아세트아미드(6).
15 mL 중의 N-(4-아미노페닐)-6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-아민(104) 700 mg(2.60 mmol)에 2-티오펜아세트산(105) 406 mg(2.86 mmol), TEA 906.8 μL(657.5 mg, 6.50 mmol), 및 T3P(에틸 아세테이트 중의 50 중량% 용액) 3.06 mL(1.65 mg, 5.20 mmol)를 0℃에서 가하였다. 혼합물을 실온으로 가열하고, 15시간 동안 교반하였다. 물의 점진적으로 첨가로 반응을 켄칭하고, 생성물을 DCM(3 x 150 mL)으로 추출한 후, 염수로 세척하였다. 유기 층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 및 DCM 중의 10% 메탄올을 사용하여 정제하여 순수한 생성물(6) 864.5 mg(84% 수율)을 수득하였다. 1H NMR:(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.07(s, 1H), 9.06(브로드 s, 1H), 7.64(d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.49(d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.39 - 7.37(m, 1H), 6.98 - 6.96(m, 2H), 3.84(s, 2H), 3.47(s, 4H), 2.13(s, 3H), 1.89(t, J = 6.6 Hz, 4H). HPLC: 98% 순수.
T3P 및 TEA의 존재하에 화합물 104와 펩타이드 커플링 방법에서 사용하여 boc-보호된 인돌 유도체 8-boc의 합성을 달성하고, 이를 boc-보호기의 TFA 탈보호화를 통해 우수한 수율로 인돌 유도체 8로 전환하였다. boc 보호기는 -COO-t-부틸K2Co3, KI, EtOH임을 주의한다.
N-(4-{[6-메틸-2-(1-피롤리디닐)-4-피리미디닐]아미노}페닐)-1-{[(2-메틸-2-프로파닐)옥시]카보닐}-1H-인돌-3-카복사미드(8-boc)..
DCM 8 mL 중의 화합물 104 80 mg(0.297 mmol)에 boc보호된 인돌-3-카복실산(106-boc) 85.36 mg(0.3267 mmol), TEA 103.6 μL(75.13 mg, 0.742 mmol), T3P 350 μL(189 mg, 0.594 mmol)를 0℃에서 가하였다. 혼합물을 실온으로 가열하고, 20시간 동안 교반하였다. 물의 점진적인 첨가로 반응을 켄칭하고, 생성물을 DCM(3 x 50 mL)으로 추출한 후, 염수로 세척하였다. 유기 층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 미정제 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 및 DCM 중의 10% 메탄올을 사용하여 정제하여 순수한 생성물(8-boc) 76 mg(50% 수율)을 수득하였다. 1H NMR:(400 MHz, CDCl3): δ 8.28(브로드 s, 1H), 8.24 - 8.13(m, 3H), 7.57(q, J = 4.8, 8.8 Hz, 4H), 7.40 -7.31 m, 3H), 5.92(s, 1H), 3.54(s, 4H), 2.23(s, 3H), 1.86(s, 4H), 1.66(s, 9H).
N-(4-{[6-메틸-2-(1-피롤리디닐)-4-피리미디닐]아미노}페닐)-1H-인돌-3-카복사미드(8).
N-(4-{[6-메틸-2-(1-피롤리디닐)-4-피리미디닐]아미노}페닐)-1H-인돌-3-카복사미드(8-boc) 70 mg(0.136 mmol)을 DCM 중의 25% TFA(5 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 실리카 겔 및 DCM 중의 10% 메탄올을 사용하여 미정제 생성물을 정제하여 순수한 생성물 43.78 mg(78% 수율)을 수득하였다. 1H NMR:(400 MHz, DMSO-d6): δ 11.7(s, 1H), 9.65(s, 1H),9.09(s, 1H), 8.28(브로드 s, 1H), 8.20(d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.67(s, 4H), 7.47(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 -7.12(m, 2H), 5.88(s, 1H), 3.50(s, 4H), 2.14(s, 3H), 1.91(s, 4H).
Figure pct00106
반응식 6
반응식 7은 화합물 6의 수율을 최적화하는 대안적인 합성 방법을 도시한다. 이 방법에서, t-부틸 보호된 카바메이트, 예를 들면, 화합물 35는 선택된 방향족 카복실산, 예를 들면, 화합물 36과 반응하여 보호된 카바메이트 중간체, 예를 들면, 화합물 37을 형성한다. 중간체를 당업계에 공지된 방법으로, 예를 들면, 트리플루오로아세트산(TFA)으로 탈보호화시키고, 탈보호화된 카바메이트를 1차 또는 2차 아민기(예를 들면, 피롤리디닐기)를 갖는 염소화된 헤테로사이클릭기, 예를 들면, 화합물 38과 반응시켜 화학식 XX의 원하는 화합물, 예를 들면, 화합물 6을 형성한다. 이 방법을 또한 이용하여 출발 방향족 카복실산 및 1차 또는 2차 아민기를 갖는 염소화된 헤테로사이클릭 화합물의 선택에 의해 화학식 XX의 다양한 화합물을 제조할 수 있다.
반응식 7에서, 화합물 6의 합성에 이용되는 시약이 도시되고, 여기서 제1 반응에서 DCC는 N,N'-di사이클로헥실카본디이미드이고, DMAP는 디메틸아미노피리딘이고, 용매는 DCM 디클로로메탄이다. 제2 반응에서, TFA 탈보호화 후, 에탄올 중의 탄산칼륨 및 요오드화칼륨을 이용한다. 당업자는 화학식 XX의 원하는 화합물을 제조하는데 이용되는 시약 및 반응 조건을 용이하게 개조할 수 있다.
Figure pct00107
반응식 7
실시예 13: 종양원성 CHD1L의 억제제의 생물학적 평가 및 비교
CHD1L은 다른 염색질 리모델러와 달리 고유하고, 세포 기능의 다양한 목록을 갖는다(Xiong et al., 2021). CHD1L은 PARP-매개된 DNA 복구에 필수적이고, CHD1L의 녹다운은 종양 세포를 DNA 손상제에 민감하게 만든다(Ahel et al., 2009). 2개의 최근 보고는 PARP 트랩핑을 완화하는, CHD1L 매개된 뉴클레오솜 슬라이팅을 통해 PARP 억제제에 대한 약물 내성을 촉진하는 유의한 인자로서 CHD1L을 입증한다(Verma et al., 2021; Juhasz et al., 2020). CHD1L의 녹아웃은 BRCA1/2 돌연변이 HR-결핍 종양 세포을 PARP 억제에 민감하게 만들어 시험관내 세포 사멸 및 생체내 증가된 생존과 함께 종양 성장의 손실을 유발한다고 보고된다(Verma et al., 2021; Juhasz et al., 2020).
본원의 측면에서, 우리는 CHD1L이 TCF/LEF-전사 인자 복합체(이후로 TCF-전사로 기재됨)의 필요 구성요소이고(또한 문헌[Abbott et al., 2020] 참조), GI 암 및 많은 다른 암의 동인으로서 연결된다는 것을 보여준다(van de Wetering, et al., 2002; Ram Makena et al., 2019; Batlle et al., 2002; He et al., 2020; Polakis, 2012b; Clevers et al., 2006). 우리는 이 복합체를 상피-중간엽 가소성(EMP)을 촉진하는 상피-중간엽 이행(EMT)의 주요 조절자로 결정하였다(Esquer et al., 2021; Zhou et al., 2016). 다른 사람들이 이를 확인해주었다(Yang et al., 2020; Sachez-Tillo et al., 2011; Kroger et al., 2019). 특히, 우리는 TCF-전사가 다른 EMT 표현형과 비교하여 단리된 준중간엽 세포 표현형에서 상향조절되어, 증가된 암 줄기 세포(CSC) 줄기세포능 및 침습성을 촉진한다는 것을 증명하였다(Esquer et al., 2021). 우리의 작업은 CHD1L의 표적화된 소분자 억제제가 CRC 및 다른 암을 치료하는 효과적인 치료 전략을 제공할 수 있다는 것을 제시하였다.
본원에서, 우리는 혁신 신약(first-in-class) CHD1L 억제제(CHD1Li)의 고속대량 스크린(HTS) 약물 발견 및 히트 투 리드(hit-to-lead) 검증을 기재한다(또한, 문헌[Abbott et al., 2020] 참조). 이 실시예에서, 우리는 화합물 6.0의 의학 화학 최적화, 이의 생물학적 평가, 및 화합물 6.0과 구조적으로 관련된 특정한 CHD1L 억제제의 구조 활성 관계(SAR)에 대한 추가의 설명을 제공한다. 추가로, 우리는 유사체 6.11이 경구 생체이용률 및 CRC HCT116 종양 이종이식에 대한 생체내 항종양 효능을 포함하여 6.0과 비교하여 개선된 약물동력학을 나타낸다는 것을 증명한다.
이 실시예에서, 우리는 화합물 6.0의 합성을 설명하고, 리간드 기반의 약물 디자인을 위한 유사체를 효과적으로 제조하기 위한 화학을 최적화한다. 합성은 p-페닐렌디아민(1) 및 디클로로피리미딘 유사체(2.1-2.3)(반응식 8)를 포함하는 상업적으로 이용 가능한 출발 물질을 사용하여 시작하였다. 화합물 1 및 2(반응식 8)를 트리에틸아민의 존재하에 반응시켜 선택적 친핵성 방향족 치환을 수득하여, 중간체 3.1-3.3(반응식 8)을 70-83% 범위의 우수한 수율로 제공하였다. 피롤리딘에 의한 제2 친핵성 방향족 치환으로 6.0의 코어 피리미딘 약물작용발생단을 수득하였다. 그 다음, 프로판포스폰산 무수물(T3P)을 사용하여, 상업적으로 이용 가능한 티오펜(5)(반응식 8)을 커플링시켜 6.0, 6.1, 및 6.2를 77-84% 범위의 수율로 제공하였다. 유사체 6.1을 요오드화메틸과 반응시켜 유사체 6.4를 제공하였다(화합물 6.0-6.4, 및 6.11-6.14의 화학적 구조는 반응식 1에서 확인된다). 이러한 화학은 피리미딘 고리 주위의 구조 활성 관계(SAR)를 조사하기 위하여 몇몇 CHD1L 억제제 유사체를 제공하였다. 초기에, 우리는 또한 이러한 합성 접근법을 이용하여 아미드로서 커플링되는 티오펜 방향족 고리를 페닐렌디아민 고리로 변형하였다.
반응식 8에 도시된 바와 같은 6.3을 생성하기 위한 합성 접근법은 낮은 수율 및 정제의 어려움을 제공하였다. 그러므로, 우리는 tert-부톡시카보닐(BOC) 보호된 페닐렌디아민으로 시작하는 합성을 추가로 최적화시키고, 이로써 피리미딘 고리의 4-위치에서 원하는 치환의 순도의 유의한 증가를 야기하여, 2-위치에서 피롤리딘 치환을 촉진하였다. 불행하게도, BOC 탈보호화 후, 6.3을 생성하기 위한 3-인돌 카복실산의 펩타이드 커플링에 대한 도전은 계속되었다. 그러나, 방향족 고리와 카복실산 작용기 사이의 탄소 스페이서의 증가는 효율적인 펩타이드 커플링을 가능하게 하여, CHD1Li의 최적화된 합성을 야기하였다(반응식 9A 및 9B). 반응식 9A 및 9B에서, 우리는 BOC 보호기를 이용하여, 티오펜, 인돌, 아자인돌, 벤즈이미다졸, 및 퀴놀린 고리를 포함하는 다양한 방향족기에 의한 그 안의 R4 기의 유도체화를 촉진하였다(반응식 9A). 추가로, 우리는 그 안의 R3 기에서 모르폴린 아민 고리를 피롤리딘으로 치환하였다. 최종적으로, 6.0의 아닐린 연결기의 필요성을 조사하기 위하여, 우리는 6.0의 에테르 연결된 유사체(반응식 9B)를 생성하였다. 반응식 9A 및 9B의 방법은 그 중에서도 6.5-6.33를 포함하여 6.0의 유사체를 생성하였다(반응식 1 참조).
실시예 13: 합성 실시예(하기 문단에서 화합물 번호는 반응식 8, 9A 및 9B를 참조한다)
N-(4-아미노페닐)-2-클로로-6-메틸-피리미딘-4-아민(3.1).
0℃에서 에탄올 10 mL 중에 용해된 2,4-디클로로-6-메틸피리미딘(2) 0.5 g(3.06 mmol)에 트리에틸 아민 513.7 μL(1.2 당량, 372.5 mg, 3.68 mmol) 및 p-페닐렌디아민(1) 330.5 mg(3.06 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가열하고, 밤새 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 수득된 잔여물을 용리액으로서 에틸 아세테이트 중의 40% 헥산을 사용하여 실리카 겔 상에서 크로마토그래피하여 3.1 500 mg(70% 수율)을 수득하였다. R f = 0.40; m.p. 157-159℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.507(s, N-H), 7.003-7.025(d, J=8.6 Hz, 2H), 6.670-6.691(d, J=8.6 Hz, 2H), 6.162(s, 1H), 3.777(s, N-H, 2H), 2.239(s, 3H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3); 168.384, 164.430, 160.118, 145.450, 127.560, 126.906, 115.827, 100.182, 23.936; IR(순수) υmax 33214.14, 1590.07, 1506.88, 1424.41, 1214.54, 1028.66, 970.00, 905.78, 826.69, 757.43, 547.51, 510.10; ESI-HRMS [M+H]+ C11H11ClN4 계산치 234.07, 실측치 235.0735.
N-(2-클로로-5-플루오로-6-메틸피리미딘-4-일)벤젠-1,4-디아민(3.2).
2,4-디클로로-5-플루오로-6-메틸피리미딘(2.2)(250 mg, 1.381 mmol, 1.0 당량)을 에탄올(10 mL) 중에 용해시키고, 아이스 배쓰에서 냉각하였다. 트리에틸 아민(231 μL, 1.657 mmol, 1.2 당량) 및 p-페닐렌디아민(1)(324.1 mg, 1.381 mmol, 1.0 당량)을 가하고, 반응을 실온으로 가열하고, 15시간 동안 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 미정제 혼합물을 헥산 중의 60% 에틸 아세테이트를 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 3.2(290 mg, 83% 수율)를 어두운 황색 고체로서 수득하였다. TLC(헥산 중의 60% 에틸 아세테이트), R f = 0.40; m.p. 157-159℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.313-7.335(d, J=8.7 Hz, 2H), 6.746(s, 1H), 6.674-6.695(d, J=8.7 Hz, 2H), 3.667(s, N-H, 2H), 2.360-2.376(d, J=3.0 Hz, 3H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3); 153.422, 151.036, 150.891, 150.742, 144.413, 143.984, 141.895, 128.176, 123.111, 115.638, 17.025; IR(순수) υmax 3328.86, 1616.04, 1507.65, 1281.35, 829.94, 830.88, 624.12, 562.34, 511.93; ESI-HRMS [M+H]+ C11H13ClFN4 계산치 252.06, 실측치 253.0640.
N-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)벤젠-1,4-디아민(3.3).
2,4-디클로로-5-플루오로피리미딘(2.3)(500 mg, 2.995 mmol, 1.0 당량)을 EtOH(20 mL) 중에 용해시키고, 아이스 배쓰에서 냉각하였다. 트리에틸 아민(501.57 μL, 3.593 mmol, 1.2 당량) 및 p-페닐렌디아민(1)(323.88 mg, 2.995 mmol, 1.0 당량)을 가하고, 반응을 실온으로 가열하고, 8시간 동안 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 미정제 혼합물을 헥산 중의 60% 에틸 아세테이트를 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 3.3(544 mg, 76% 수율)을 황갈색 고체로서 수득하였다. TLC(헥산 중의 60% 에틸 아세테이트), R f = 0.36; m.p. 155-157℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.981-7.988(d, J=2.7 Hz, 1H), 7.340-7.361(d, J=8.7 Hz, 2H), 6.801(s, N-H), 6.692-6.714(d, J=8.7 Hz, 2H), 3.691(s, N-H, 2H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3)154.642, 151.535, 151.433, 146.62, 144.223, 143.900, 140.533, 140.331, 127.753, 123.174, 115.620; IR(순수) υmax 3014.43, 1627.78, 1580.69, 1506.69, 1323.90, 1235.19, 946.92, 816.77, 746.87, 690.44, 641.61, 592.67, 514.39, 430.10; ESI-HRMS [M+H]+ C10H8ClFN4 계산치 238.04, 실측치 239.0484.
N-(6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)벤젠-1,4-디아민(4.1).
3.1을 DCM 5 mL 중에 용해시키고, TFA 5 mL를 0℃로 처리하여, 적색 용액을 수득하였다. 반응을 실온으로 가열하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응을 농축하고, 10% 메탄올 및 DCM 중에 재용해시킨 다음, 중탄산나트륨 및 물로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축하고, DCM 중의 10% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 4.1(2.09 g, 2 단계에 걸쳐 67%)을 오렌지색 고체로서 수득하였다. TLC(5% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.18; m.p. 190-192℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.105-7.127(d, J=8.6 Hz, 2H), 6.666-6.687(d, J=8.6 Hz, 2H), 6.190(s, N-H), 5.680(s, 1H), 3.542-3.575(m, 4H), 2.188(s, 3H), 1.920-1.953(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 192.975, 162.718, 160.872, 143.621, 130.275, 125.357, 115.779, 91.608, 46.674, 25.689, 24.546; IR(순수) υmax 1755.53, 1658.71, 1612.71, 1548.12, 1504.15, 1403.49, 1251.05, 1138.16, 890.44, 696.38, 517.52; ESI-HRMS [M+H]+ C15H19N5 계산치 269.13, 실측치 270.1700.
N-(2-클로로-5-플루오로-6-메틸피리미딘-4-일)벤젠-1,4-디아민(4.2).
3.2(260 mg, 1.029 mmol, 1.0 당량)를 DMF(29 mL) 중에 용해시키고, 탄산칼륨(156.4 mg, 1.132 mmol, 1.1 당량) 및 피롤리딘(422.5 μL, 5.145 mmol, 5.0 당량)로 처리하였다. 반응을 80℃로 8시간 동안 가열한 다음, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 5% 염화리튬 용액으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 농축한 다음, 에틸 아세테이트 중의 10% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 4.2(243 mg, 82% 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다. TLC(10% 메탄올/에틸 아세테이트), R f = 0.57; m.p. 180-182℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.456-7.478(d, J=8.6 Hz, 2H), 6.663-6.685(d, J=8.6 Hz, 2H), 6.436(s, N-H), 3.497-3.530(m, 4H), 2.267-2.274(d, J=2.9 Hz, 3H), 1.914-1.947(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3)156.073, 149.566, 149.460, 149.193, 149.062, 142.081, 139.428, 139.056, 130.876, 121.623, 115.600, 47.019, 25.812, 17.361; IR(순수) υmax 3185.05, 1600.39, 1506.17, 1444.25, 1238.75, 826.91, 762.06, 509.83; ESI-HRMS [M+H]+ C15H18FN5 계산치 287.15, 실측치 288.1606.
N-(5-플루오로-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)벤젠-1,4-디아민(4.3).
3.3(310 mg, 1.30 mmol, 1.0 당량)을 DMF(36 mL) 중에 용해시키고, 탄산칼륨(197.6 mg, 1.43 mmol, 1.1 당량) 및 피롤리딘(533.8 μL, 6.5 mmol, 5.0 당량)로 처리하였다. 반응을 80℃로 8시간 동안 가열한 다음, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압하에 농축하여 4.3을 어두운 황색 고체로서 수득하고, 이를 미정제로 수행하였다. TLC(10% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.59; m.p. 179-181℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.846-7.855(d, J=3.7 Hz, 1H), 7.458-7.479(d, J=8.7 Hz, 2H), 6.671-6.693(d, J=8.7 Hz, 2H), 6.494(s, N-H), 3.497-3.530(m, 4H), 1.934-1.967(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3)156.889, 149.984, 149.886, 142.406, 141.214, 139.910, 139.717, 138.808, 130.346, 122.189, 121.827, 115.572, 47.026, 37.755, 25.808; IR(순수) υmax 3388.87, 1598.56, 1568.68, 1500.63, 1447.20, 1227.27, 930.93, 831.66, 763.87, 496.87; ESI-HRMS [M+H]+ C14H16FN5 계산치 273.14, 실측치 274.1450.
N-(4-((6-메틸-2-(1-피롤리디닐)-4-피리미디닐)아미노)페닐)-2-(2-티에닐)아세트아미드(6.0).
4.1(262.0 mg, 0.973 mmol, 1.0 당량)을 DCM(40 mL, 무수) 중에 용해시킨 다음, 질소하에 5.1(145.3 mg, 1.02 mmol, 1.05 당량), DMAP(118.9 mg, 0.973 mmol, 1.0 당량), 그 다음, DCC(251 mg, 1.22 mmol, 1.25 당량)로 처리하였다. 그 다음, 반응을 8시간 동안 교반하고, 물질을 실리카 겔 상에서 농축하고, 1:1 에틸 아세테이트:디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 화합물 6.0(302.8 mg, 79% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. TLC(10% 메탄올/에틸 아세테이트), R f = 0.49; m.p. 186-188℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.611(s, N-H), 7.389(s, 4H), 7.273-7.289(dd, 1H), 7.012-7.032(m, 2H), 6.600(s, N-H), 5.762(s, 1H), 3.919(s, 2H), 3.537-3.570(m, 4H), 2.204(s, 3H), 1.904-1.938(s, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3); 167.993, 166.584, 161.249, 160.656, 136.446, 135.883, 132.826, 127.768, 127.625, 126.049, 121.643, 120.996, 92.885, 46.727, 38.504, 25.626, 24.380; IR(순수) υmax 2862.14, 1572.75, 1500.37, 1398.29, 1330.32, 1226.59, 1169.02, 830.35, 782.81, 681.54, 513.32; ESI-HRMS [M+H]+ C21H23N5OS 계산치 393.16, 실측치 394.1680.
N-(4-((5-플루오로-6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-2-(티오펜-2-일)아세트아미드(6.1).
4.2(450 mg, 1.566 mmol, 1.0 당량)를 DCM(15.0 mL, 무수) 중에 용해시키고, 2-티오펜아세트산(5.1)(244.9 mg, 1.723 mmol, 1.1 당량), 및 트리에틸아민(546.4 μL, 3.915 mmol, 2.5 당량)으로 처리하였다. 반응을 5분 동안 교반한 다음, 프로판포스폰산 무수물(1.85 mL, 3.132 mmol, 2.0 당량)을 가하고, 반응을 15시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응을 얼음물로 켄칭하고, DCM(x3)으로 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 농축하고, 에틸 아세테이트 중의 10% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 6.1을 황색 고체(529 mg, 82% 수율)로서 수득하였다. TLC(10% 메탄올/에틸 아세테이트), R f = 0.42; m.p. 245-247℃; 1H NMR(400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.093(s, N-H), 8.950(s, N-H), 7.752-7.774(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.482-7.504(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.375-7.391(dd, 1H), 6.963-6.982(m, 2H) 3.844(s, 2H), 3.391-3.423(m, 4H), 2.183-2.190(d, J=2.9 Hz, 3H), 1.860-1.892(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, DMSO-d 6 ); 167.579, 155.240, 148.710, 149.054, 138.597, 137.281, 136.205, 135.432, 133.499, 126.622, 126.211, 124.986, 120.444, 119.297, 46.517, 37.493, 25.128, 17.109; IR(순수) υmax 3256.79, 1654.91, 1621.65, 1587.57, 1501.62, 1417.54, 1292.95, 1226.40, 826.57, 689.26, 548.39, 512.40; ESI-HRMS [M+H]+ C21H22FN5OS 계산치 411.5, 실측치 412.1587.
N-(4-((5-플루오로-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-2-(티오펜-2-일)아세트아미드(6.2).
4.1(50.0 mg, 0.183 mmol, 1.0 당량)을 DCM(15.0 mL, 무수) 중에 용해시키고, 2-티오펜아세트산(5.1)(28.6 mg, 0.201 mmol, 1.1 당량), 및 트리에틸아민(63.9 μL, 0.458 mmol, 2.5 당량)으로 처리하였다. 반응을 5분 동안 교반한 다음, 프로판포스폰산 무수물(0.194 mL, 0.366 mmol, 2.0 당량)을 가하고, 반응을 15시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응을 얼음물로 켄칭하고, DCM(x3)으로 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 농축하고, 에틸 아세테이트 중의 10% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 6.1을 황색 고체(56 mg, 77% 수율)로서 수득하였다. TLC(10% 메탄올/에틸 아세테이트), R f = 0.61; m.p. 245-247℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 10.112(s, N-H), 9.110(s, N-H), 7.950-7.960(d, J=3.9 Hz, 1H), 7.766-7.789(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.499-7.522(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.377-7.393(dd, 1H), 6.964-6.983(m, 2H) 3.848(s, 2H), 3.402-3.434(m, 4H), 1.874-1.907(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD); 167.617, 156.244, 149.151, 149.046, 140.693, 140.541, 140.350, 138.276, 137.262, 135.08, 133.735, 126.627, 126.223, 124.994, 120.588, 119.306, 46.568, 37.498, 25.115; IR(순수) υmax 3256.79, 1654.91, 1621.65, 1587.57, 1501.62, 1417.54, 1292.95, 1226.40, 826.57, 689.26, 548.39, 512.40; ESI-HRMS [M+H]+ C20H20FN5OS 계산치, 397.47, 실측치 398.1431.
N-(4-((5-플루오로-6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)(메틸)아미노)페닐)-2-(티오펜-2-일)아세트아미드(6.3).
6.1(13 mg, 0.0316 mmol, 1.0 당량)을 THF(1.0 mL, 무수) 중에 용해시키고, 수소화나트륨(1.52 mg, 0.0379 mmol, 1.2 당량)으로 0℃에서 질소하에 처리하였다. 반응을 10분 동안 교반한 다음, 요오도메탄(3.0 μL, 0.047 mmol, 1.5 당량)을 가하고, 반응을 15시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응을 얼음물로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(x3)로 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 농축하고, 디클로로메탄 중의 3% 메탄올을 사용하는 1000 mm prep 플레이트를 통해 정제하여 6.3을 황색 오일(6.8 mg, 44% 수율)로서 수득하였다. TLC(5 % 메탄올/ 디클로로메탄), R f = 0.62; m.p. 178-180℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.783-7.806(d, J=8.7 Hz, 2H), 7.154-7.166(dd, 1H), 7.118-7.139(d, J=8.7 Hz, 2H), 6.875-6.897(m, 1H), 6.715-6.736(m, 1H), 3.674(s, 2H), 3.547-3.580(m, 4H), 3.284(s, 3H), 2.311(s. 3H), 1.967-1.991(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3); 170.285, 155.868, 148.927, 139.213, 138.053, 137.039, 127.982, 126.533, 126.362, 126.270, 125.259, 124.801, 120.274, 47.142, 37.865, 35.280, 25.822, 17.541; IR(순수) υmax 1583.85, 1508.03, 1441.51, 1231.31, 910.69, 729.28; ESI-HRMS [M+H]+ C22H24FN5OS 계산치 425.17, 실측치 426.1741.
N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-1H-인돌-3-카복사미드(6.3).
인돌-3-카복실산(11.6 mg, 0.0722 mmol, 1.2 당량)을 DMF(무수, 0.5 mL) 중의 DIPEA(12.6 μL, 0.0722 mmol, 1.2 당량)와 함께 슬러리화하고, DMF(무수, 0.2 mL) 중의 Hbtu(27.4 mg, 0.0722 mmol, 1.2 당량)로 처리하였다. 반응을 15분 동안 실온에서 교반한 다음, DMF(무수, 0.2 mL) 중의 4.1(16.2 mg, 0.0602 mmol, 1.0 당량)을 적가하고, 반응을 추가 8시간 동안 실온에서 계속 교반하였다. 반응을 DCM으로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 원하는 생성물 6.3을 백색 고체(7.5 mg, 25% 수율)로서 수득하였다. TLC(3 % 메탄올/ 디클로로메탄), R f = 0.20; m.p. 182-184℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.171-8.193(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.973(s, 1H), 7.896(s, N-H), 7.662(s, 4H), 7.440-7.460(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.155-7.238(m, 2H), 5.963(s, 1H), 3.574-3.594(m, 4H), 2.274(s, 3H), 2.022-2.050(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3); 166.616, 164.856, 162.165, 138.153, 136.427, 135.951, 129.349, 127.596, 123.682, 122.418, 122.314, 122.137, 122.074, 112.812, 112.005, 97.046, 79.467, 36.944, 31.641, 26.260, 20.453; IR(순수) υmax 1505.51, 1232.99, 1176.73, 833.69, 743.65, 552.85; ESI- HRMS [M+H]+ C24H24N6O 계산치 412.2, 실측치 413.2066.
tert-부틸(4-((2-클로로-6-메틸피리미딘-4-일)아미노)페닐)카바메이트(8).
2,4-디클로로-6-메틸피리미딘(2.1)(2.36g, 0.0145 mol, 1.05 당량)을 무수 에탄올 30 mL 중에 용해시키고, 아이스 배쓰로 냉각하고, 트리에틸 아민(2.5 mL, 0.0179 mol, 1.3 당량)을 가하였다. tert-부틸(4-아미노페닐)카바메이트(2.87g, 0.0138 mol, 1.0 당량)를 무수 에탄올 15 mL 중에 용해시키고, 첨가 깔대기로 옮겼다. 아닐린을 적가하고, 반응을 실온으로 가열하였다. 24시간 후, 반응이 완료될 때까지 반응을 40℃로 가열하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 헥산 중의 5-50% 에틸 아세테이트를 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 8(3.88g, 80%)을 오렌지색 고체로서 수득하였다. TLC(20% 에틸 아세테이트/디클로로메탄), R f = 0.49; m.p. 109-111℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.371-7.437(m, 4H), 6.446(s, 1H), 2.281(s, 3H), 1.513(s, 9H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 168.015, 163.907, 160.978, 155.334, 137.049, 134.613, 123.140, 120.421, 80.832, 54.787, 28.713, 23.136; IR(순수) υmax 1723.38, 1591.78, 1518.26, 1398.75, 1310.28, 1221.08, 1152.21, 1024.67, 970.18, 910.69, 835.64, 735.57, 515.54; ESI-HRMS [M+H]+ C16H19ClN4O2 계산치 334.12, 실측치 335.1257.
tert-부틸(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일) 아미노)페닐)카바메이트(9.1).
8(3.88 g, 0.0116 mol, 1.0 당량)을 무수 DMF 25 mL 중에 용해시켰다. 탄산칼륨(2.08 g, 0.015 mol, 1.3 당량)을 피롤리딘(4.85 mL, 0.0581 mol, 5.0 당량)을 가하고, 반응을 80℃로 8시간 동안 가열하였다. 그 다음, 반응을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 다음 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감소된 진공하에 농축하여 오렌지색 고체를 수득하였다. 미정제 물질을 DCM 중의 5% 메탄올로 실리카 겔의 플러그를 통과시키고, 농축하여 카바메이트 9.1을 황색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.28; m.p. 118-120℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.303-7.352(m, 4H), 6.428(s, N-H), 6.294(s, N-H), 5.767(s, 1H), 3.532-3.609(m, 4H), 2.219(s, 3H), 1.928-1.961(m, 4H), 1.520(s, 9H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 166.567, 161.606, 160.709, 153.112, 134.881, 134.083, 122.437, 119.567, 92.520, 80.474, 46.660, 28.447, 25.602, 24.318; IR(순수) υmax 2971.67, 1718.69, 1569.84, 1505.67, 1399.06, 1227.56, 1155.05, 1050.05, 750.41, 515.91; ESI-HRMS [M+H]+ C20H27H5O2 계산치 369.22, 실측치 370.2225.
tert-부틸(4-((6-메틸-2-모르폴리노피리미딘-4-일)아미노)페닐)카바메이트(9.2) .
8(199.0 mg, 0.594 mmol, 1.0 당량)을 아세톤(3.4 mL) 중에 용해시키고, 아이스 배쓰로 냉각하였다. 탄산나트륨(69.3 mg, 0.653 mmol, 1.1 당량) 후, 아세톤 1.0 mL 중의 모르폴린(53.0 μL, 0.612 mmol, 1.03 당량)을 적가하였다. 아이스 배쓰를 제거하고, 반응을 80℃로 8시간 동안 가열하였다. 반응을 에틸 아세테이트로 희석한 다음, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 농축한 다음, 디클로로메탄 중의 1% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 9.2(122.88 mg, 54% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. TLC(디클로로메탄 중의 5% 아세톤), R f = 0.18; m.p. 226-228℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.317-7.349(m, 2H), 7.243-7.264(m, 2H), 6.465(s, N-H), 6.314(s, N-H), 5.816(s, 1H), 3.742-3.765(m, 8H), 2.203(s, 3H), 1.520(s, 9H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 167.048, 162.072, 161.944, 153.257, 134.747, 134.264, 123.308, 119.610, 93.338, 80.766, 67.148, 44.511, 28.500, 24.474; IR(순수) υmax 2947.41, 1702.51, 1579.06, 1489.70, 1357.90, 1230.06, 1155.92, 1004.35, 811.14, 746.29, 516.15; ESI-HRMS [M+H]+ C20H27N5O3 계산치 385.21, 실측치 386.2170.
2-(1H-인돌-3-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)아세트아미드(6.5).
4.1(70.0 mg, 0.260 mmol, 1.0 당량)을 무수 DCM(1.5 mL) 중에 용해시킨 다음, DMAP(31.8 mg, 0.260 mmol, 1.0 당량), DCC(67.1 mg, 0.325 mmol, 1.25 당량), 및 2-(1H-인돌-3-일)아세트산(47.8 mg, 0.273 mmol, 1.05 당량)으로 처리하였다. 반응을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 완료 후, 반응을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 원하는 생성물 6.5(92.0 mg, 83% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.24; m.p. 197-199℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.894(s, N-H), 7.603-7.638(m, 3H), 7.417-7.440(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.347-7.367(d, J=8.2 Hz, 1H), 7.226(s, 1H), 7.109(t, 1H), 7.028(t, 1H), 5.831(s, 1H), 3.807(s, 2H), 3.527-3.560(m, 4H), 2.187(s, 3H), 1.969-1.978(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 172.991, 162.612, 161.617, 138.384, 138.140, 134.053, 128.607, 124.802, 122.560, 121.985, 121.160, 119.975, 119.411, 112.328, 109.563, 95.337, 79.466, 47.804, 34.895, 26.455, 23.433; IR(순수) υmax 1503.05, 1401.52, 1202.57, 828.19, 738.45, 512.00; ESI-HRMS [M+H]+ C25H26N6O 계산치 426.22, 실측치 427.2220.
3-(1H-인돌-3-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)프로판아미드(6.6).
4.1(30.1 mg, 0.112 mmol, 1.0 당량)을 무수 DCM(1.5 mL) 중에 용해시킨 다음, DMAP(13.7 mg, 0.112 mmol, 1.0 당량), DCC(28.9 mg, 0.14 mmol, 1.25 당량), 및 3-(1H-인돌-3-일)프로판산(23.3 mg, 0.123 mmol, 1.1 당량)으로 처리하였다. 반응을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 완료 후, 반응을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 원하는 생성물 6.6(38.3 mg, 78% 수율)을 밝은 오렌지색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.20; m.p. 89-90℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.888(s, N-H), 7.558-7.629(m, 3H), 7.388-7.410(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.306-7.327(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.061-7.097(m, 2H), 6.979-7.015(t, 1H), 5.834(s, 1H), 3.529-3.562(m, 4H), 3.127-3.165(m, 2H), 2.700-2.738(t, 2H), 2.190(s, 3H), 1.947-1.980(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 174.149, 166.029, 162.608, 161.578, 138.254, 138.174, 134.099, 128.543, 122.992, 122.286, 121.974, 121.142, 119.538, 119.330, 115.073, 112.169, 95.353, 79.460, 47.808, 39.114, 26.452, 23.426, 22.627; IR(순수) υmax 1570.80, 1503.13, 1399.39, 1227.17, 791.94, 738.86, 514.31; ESI-HRMS [M+H]+ C26H28N6O 계산치 440.23, 실측치 441.2382.
4-(1H-인돌-3-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)부탄아미드(6.7).
4.1(26.7 mg, 0.0992 mmol, 1.0 당량)을 무수 DCM(1.5 mL) 중에 용해시킨 다음, DMAP(12.1 mg, 0.0992 mmol, 1.0 당량), DCC(25.6 mg, 0.124 mmol, 1.25 당량), 및 4-(1H-인돌-3-일)부탄산(20.2 mg, 0.109 mmol, 1.1 당량)으로 처리하였다. 반응을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 완료 후, 반응을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피을 통한 정제로 원하는 생성물 6.7(43 mg, 95% 수율)을 밝은 오렌지색 고체로서 수득하였다. TLC(5% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.33; m.p. 157-159℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.656(s, N-H), 7.404-7.426(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.314-7.334(d, J=7.9 Hz, 1H), 7.212-7.234(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.090-7.110(d, J=8.0 Hz, 1H), 6.750-6.875(m, 3H), 5.609(s, 1H), 3.250-3.350(m, 4H), 2.616(t, 2H), 2.188(t, 2H), 1.967(s, 3H), 1.877(m, 2H), 1.660-1.750(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 174.403, 165.762, 162.519, 161.371, 138.179, 138.136, 134.163, 128.769, 122.968, 122.176, 121.839, 121.154, 119.419, 119.384, 115.626, 112.132, 95.418, 79.435, 47.780, 37.599, 28.738, 27.761, 26.403, 25.708, 23.363; IR(순수) υmax 2861.61, 1570.45, 1503.18, 1398.69, 1229.00, 785.54, 738.42, 511.98; ESI-HRMS [M+H]+ C27H30N6O 계산치 454.25, 실측치 455.2534.
(E)-3-(1H-인돌-3-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-아크릴아미드(6.8).
4.1(19.0 mg, 0.0706 mmol, 1.0 당량)을 무수 DCM(1.5 mL) 중에 용해시킨 다음, (E)-3-(1H-인돌-3-일)아크릴산(13.2 mg, 0.0706 mmol, 1.0 당량), HBTU(34.8 mg, 0.0918 mmol, 1.3 당량), 및 DIPEA(25.0 mL, 0.141 mmol, 1.1 당량)로 처리하였다. 반응을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 완료 후, 반응을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축한 다음, 디클로로메탄 중의 0-10% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 원하는 생성물 6.8(20 mg, 63% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄, 2회 수행), R f = 0.33; m.p. 188-190℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.918-7.978(d, J=7.9 Hz, 1H), 7.860-7.899(d, J=15.6 Hz, 1H), 7.669(s, 4H), 7.626(s, 1H), 7.436-7.455(d, J=7.9 Hz, 1H), 7.176-7.252(m, 2H), 6.726-6.765(d, J=15.6 Hz, 1H), 5.986(s, 1H), 3.539-3.630(bs, 4H), 2.296(s, 3H), 2.072(bs, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 168.323, 162.306, 139.243, 137.042, 135.967, 135.664, 131.257, 126.624, 123.692, 121.838, 121.798, 121.453, 121.117, 116.081, 114.168, 113.084, 96.286, 79.465, 36.938, 31.638 26.347, 21.908; IR(순수) υmax 3107.31, 1581.55, 1508.82, 1403.71, 1343.98, 1241.42, 1180.48, 829.45, 743.93; ESI-HRMS [M+H]+ C26H26N6O 계산치 438.22, 실측치 439.2223.
1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복실산 N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복사미드(6.9).
4.1(13.2 mg, 0.049 mmol, 1.0 당량)을 무수 DFM(0.5 mL) 중에 용해시킨 다음, 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복실산(8.0 mg, 0.049 mmol, 1.0 당량), HBTU(21.4 mg, 0.056 mmol, 1.15 당량), 및 DIPEA(9.8 mL, 0.056 mmol, 1.15 당량)로 처리하였다. 반응을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 완료 후, 반응을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축한 다음, 디클로로메탄 중의 0-10% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 원하는 생성물 6.9(17.4 mg, 86% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.24(3% 메탄올/디클로로메탄); m.p. 295-297℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 2.234(s, N-H), 8.482-8.505(m, 1H), 8.440(s, 1H), 8.296-8.311(m, 1H), 7.692(s, 4H), 7-195-7.226(dd, 1H), 5.926(s, 1H), 3.509(bs, 4H), 2.177(s, 3H), 1.924(bs, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 162.263, 160.458, 148.461, 143.662, 129.324, 128.763, 128.564, 120.305, 120.199, 120.197, 119.935, 118.752, 117.094, 109.395, 99.522, 46.569, 24.964; IR(순수) υmax 3297.80, 1661.79, 1576.88, 1501.18, 1450.36, 1338.97, 1221.50, 1012.59, 825.14, 689.68, 596.71, 510.91; ESI-HRMS [M+H]+ C23H23N7O 계산치 413.20, 실측치 414.2022.
N-(4-((5-메톡시-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-2-(티오펜-2-일)-아세트아미드(6.10).
6.10의 합성은 반응식 8 방법 및 하기 출발 물질을 이용하였다. 2,4-디클로로-5-메톡시피리미딘(13)(116.7 mg, 0.652 mmol, 1.0 당량)을 에탄올(3 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각한 다음, 트리에틸 아민(109.1 μL, 0.782 mmol, 1.2 당량) 및 1(70.5 mg, 0.652 mmol, 1.0 당량)로 처리하였다. 반응을 실온으로 가열하고, 8시간 동안 교반한 다음, 농축하고, 디클로로메탄 중의 5% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 (14)(154.0 mg, 94% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. TLC(7% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.19; m.p. 167-169℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.644(s, 1H), 7.412-7.434(d, J=8.7 Hz, 2H), 7.089(s, N-H), 6.691-6.713(d, J=8.7 Hz, 2H), 3.944(s, 3H), 3.631(s, N-H, 2H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 152.720, 151.597, 143.403, 139.311, 133.572, 129.027, 122.385, 115.666, 56.372; IR(순수) υmax 3332.41, 1608.05, 1575.91, 1509.54, 1461.05, 1335.49, 1254.70, 1003.45, 961.94, 833.83, 756.01, 634.82, 553.64, 515.78, 459.09; ESI-HRMS [M+H]+ C11H11ClN4O 계산치 250.06, 실측치 251.0685.
2-(4-브로모티오펜-2-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-아세트아미드(6.11).
4.1(2.33 g, 0.00866 mol, 1.0 당량)을 무수 DCM(100 mL) 중에 용해시킨 다음, DMAP(1.06 g, 0.00866 mol, 1.0 당량), DCC(2.23 g, 0.0108 mol, 1.25 당량), 및 2-(4-브로모티오펜-2-일)아세트산(2.11 g, 0.00952 mol, 1.1 당량)으로 처리하였다. 반응을 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 완료 후, 반응을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 원하는 생성물 6.11(3.76 mg, 갈색 고체)을 92% 수율로 수득하였다. TLC(8% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.42; m.p. 195-197℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.386-7.434(m, 4H), 7.325(s, N-H), 7.197(s, 1H), 6.957(s, 1H), 6.370(s, N-H), 5.777(s, 1H), 3.885(s, 2H), 3.547-3.580(m, 4H), 2.224(s, 3H), 1.925-1.959(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 166.809, 161.075, 137.195, 136.470, 132.471, 130,052, 123.159, 121.889, 121.607, 120.978, 109.899, 99.980, 92.628, 46.618, 38.423, 25.531, 24.357; IR(순수) υmax 2862.68, 1568.07, 1501.64, 1400.13, 1333.38, 1231.08, 785.83, 563.89; ESI-HRMS [M+H]+ C21H22BrN5OS 계산치 471.07, 실측치 472.0787.
N-(4-((2-클로로-6-메틸피리미딘-4-일)옥시)페닐)-2-(티오펜-2-일)아세트아미드(6.12).
11.1(63.0 mg, 0.27 mool, 1.0 당량)을 에탄올(무수, 3 mL) 중에 용해시킨 다음, 2.1(44.1 mg, 0.270 mmol, 1.0 당량), 탄산칼륨(44.8 mg, 0.324 mmol, 1.2 당량) 다음, KI의 결정으로 처리하였다. 반응을 실온에서 8시간 동안 교반한 다음, 실리카 겔 상에서 농축하고, 디클로로메탄 중의 0-3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 6.12(92.8 mg, 96%)를 황백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.45; m.p. 176-177℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) 7.566 s, -H), .476-7.512 d, J=8.9 Hz, 2H), 7.287-7.304(dd, 1H), 7.018-7.063(m, 4H), 6.564(s, 1H), 3.937(s, 2H), 2.453(s, 3H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 171.760, 170.920, 168.118, 160.102, 148.396, 135.564, 135.517, 127.912, 127.728, 126.211, 122.103, 121.936, 121.570, 121.238, 115.629, 105.169, 38.549, 24.044; IR(순수) υmax 1655.62, 1578.47, 1507.89, 1323.18, 1207.23, 846.34, 793.77, 690.66, 481.83; ESI-HRMS [M+H]+ C17H14ClN3O2S 계산치 359.05, 실측치 360.0552.
N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)옥시)페닐)-2-(티오펜-2-일)아세트아미드(6.13).
6.12(44.3 mg, 0.123 mmol, 1.0 당량)를 DMF(무수, 1 mL) 중에 용해시킨 다음, 탄산칼륨(20.3 mg, 0.148 mmol, 1.2 당량) 및 피롤리딘(20.6 mL, 0.247 mmol, 2.0 당량)으로 처리하였다. 혼합물을 80℃로 8시간 동안 가열한 다음, 디클로로메탄 중에 희석시키고, 물 다음 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축한 다음, 헥산 중의 30-60% 에틸 아세테이트를 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 6.13(8.5 mg, 18% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.43; m.p. 187-189℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.438-7.460(d, J= 8.9 Hz, 2H), 7.310-7.350(m, 1H), 7.049-7.102(m, 3H), 5.727(s, 1H), 3.960(s, 2H), 3.484(bs, 4H), 2.258(s, 3H), 1.882-1.936(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 170.292, 169.595, 167.758, 160.509, 149.532, 135.530, 134.331, 127.895, 127.678, 126.174, 122.203, 120.974, 93.152, 46.590, 38.484, 25.418, 24.404; IR(순수) υmax 1655.18, 1575.53, 1503.62, 1330.12, 1204.97, 961.26, 844.36, 792.73, 688.69, 567.34, 519.75, 480.84; ESI-HRMS [M+H]+ C17H14ClN3O2S 계산치 394.15, 실측치 395.1522.
N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)옥시)페닐)-1H-인돌-3-카복사미드(6.14).
11.2(9.0 mg, 0.024 mmol, 1.0 당량)를 무수 DMF 1.0 mL 중에 용해시켰다. 탄산칼륨(4.3 mg, 0.0312 mol, 1.3 당량)을 가한 후, 피롤리딘(10 mL, 0.119 mmol, 5.0 당량)을 가하고, 반응을 80℃로 8시간 동안 가열하였다. 그 다음, 반응을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 다음 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감소된 진공하에 농축하여 오렌지색 고체로서 수득하였다. 미정제 물질을 디클로로메탄 중의 5% 메탄올과 함께 실리카 겔의 플러그를 통과시켜 6.14를 황색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.20; m.p. 172-174℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.710(s, N-H), 8.054-8.094(m, 1H), 7.882-7.889(d, J=4.0 Hz, 1H), 7.733(s, N-H), 7.667-7.689(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.457-7.500(m, 1H), 7.300-7.343(m, 2H), 7.162-7.184(d, J= 8.9 Hz, 2H), 5.778(s, 1H), 3.522(bs, 4H), 2.281(s, 3H), 1.909-1.943(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 170.631, 169.798, 163.563, 149.229, 136.539, 135.440, 128.389, 124.854, 123.429, 122.408, 122.143, 121.465, 120.113, 112.729, 112.252, 93.360, 60.557, 46.804, 25.581, 24.551, 21.214, 14.348; IR(순수) υmax 3325.82, 1575.09, 1506.16, 1425.63, 1248.26, 1094.00, 949.73, 808.19, 775.56, 487.07; ESI-HRMS [M+H]+ C24H23N5O2 계산치 413.19, 실측치 414.1908.
N-(4-((6-메틸-2-모르폴리노피리미딘-4-일)아미노)페닐)-2-(티오펜-2-일)아세트아미드(6.15).
4.1(17.5 mg, 0.061 mmol, 1.0 당량)을 무수 DCM(1.5 mL) 중에 용해시킨 다음, DMAP(7.5 mg, 0.061 mmol, 1.0 당량), DCC(19.9 mg, 0.0763 mmol, 1.25 당량), 및 5.1(9.1 mg, 0.064 mmol, 1.05 당량)로 처리하였다. 반응을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 완료 후, 반응을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 원하는 생성물 6.15(14 mg, 56% 수율)을 어두운 고체로서 수득하였다. TLC(5% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.60; m.p. 196-198℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.454-7.522(q, 4H), 7.263-7.277(d, J=5.7 Hz, 1H), 6.995(bs, 1H), 6.952-6.974(t, 1H), 5.907(s, 1H), 3.870(s, 2H), 3.723(s, 8H), 2.190(s, 3H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 170.716, 166.644, 163.165, 162.779, 137.897, 134.192, 127.716, 127.482, 125.742, 121.808, 121.653, 96.230, 67.886, 45.856, 38.672, 23.833; IR(순수) υmax 2842.93 1654.21, 1579.80, 1545.32, 1486.92, 1439.58, 1398.31, 1354.51, 1232.28, 1104.29, 993.25, 830.14, 786.59, 696.36, 483.49; ESI- HRMS [M+H]+ C21H23N5O2S 계산치 409.16, 실측치 410.1630.
N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-2-(나프탈렌-1-일)아세트아미드(6.16).
4.1(33.6 mg, 0.125 mmol, 1.0 당량)을 무수 DCM(1.5 mL) 중에 용해시킨 다음, DMAP(15.3 mg, 0.125 mmol, 1.0 당량), DCC(32.2 mg, 0.156 mmol, 1.25 당량), 및 2-(나프탈렌-1-일)아세트산(25.6 mg, 0.137 mmol, 1.1 당량)으로 처리하였다. 반응을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 완료 후, 반응을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 원하는 생성물 6.16(22 mg, 40% 수율)을 황백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄, 2회 수행), R f = 0.5; m.p. 275-278℃; 1H NMR(400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.168(s, N-H, 1H), 8.946(s, N-H, 1H), 8.134-8.154(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.926-7.948(d, J=7.9 Hz, 1H), 7.830-7.855(dd, 1H), 7.609-7.631(d, J=8.9 Hz 1H), 7.457-7.582(m, 6H), 5.824(s, 1H), 4.121(s, 2H), 3.435-3.467(m, 4H), 2.113(s, 3H), 1.864-1.896(m, 4H); 13C NMR(100 MHz, DMSO-d 6 ) 168.533, 164.598, 160.633, 159.945, 136.439, 133.358, 132.978, 132.628, 131.997, 128.411, 127.776, 127.161, 126.065, 125.671, 125.539, 124.213, 119.633, 119.483, 93.799, 46.185, 40.620, 25.019, 23.938; IR(순수) υmax 1660.02, 1575.10, 1503.95, 1401.14, 1227.15, 787.35, 558.68; ESI-HRMS [M+H]+ C27H27N5O 계산치 437.22, 실측치 438.2273.
2-(6-클로로-1H-인돌-3-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)아세트아미드(6.18) .
4.1(25.8 mg, 0.096 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(12.8 mg, 0.105 mmol, 1.1 당량), DCC(24.8 mg, 0.12 mmol, 1.25 당량) 및 2-(6-클로로-1H-인돌-3-일)아세트산(22.1 mg, 0.105 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.18(25.4 mg, 57% 수율)을 황백색 고체로서 수득하였다. TLC(2% 메탄올, 20% 아세톤, 78% 디클로로메탄), R f = 0.57; m.p. 146-148℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.613-7.651(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.557-7.578(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.427-7.449(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.348-7.360(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.242(s, 1H), 6.994-7.019(dd, 1H), 5.825(s, 1H), 3.784(s, 2H), 3.529-3.563(m, 4H), 2.189(s, 3H), 1.949-1.983(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 172.615, 162.616, 159.239, 138.467, 138.412, 134.068, 128.481, 127.362, 125.759, 121.970, 121.184, 120.604, 120.468, 112.127, 110.057, 95.356, 76.019, 47.820, 34.666, 26.458, 23.418; IR(순수) υmax 1660.51, 1571.67, 1505.47, 1399.30, 795.55; ESI-HRMS [M+H]+ C25H25ClN6O 계산치 460.18, 실측치 461.1834.
1-메틸-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-1H-인돌-3-카복사미드(6.19).
4.1(60 mg, 0.223 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(30 mg, 0.245 mmol, 1.1 당량), DCC(57.5 mg, 0.279 mmol, 1.25 당량) 및 1-메틸-1H-인돌-3-카복실산(39 mg, 0.223 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.19(23.6 mg, 25% 수율)를 밝은 황색 고체로서 수득하였다. TLC(5% 메탄올/디클로로메탄, 2회 수행), R f = 0.58; m.p. 262-264℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 8.176-8.196(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.945(s, 1H), 7.668-7.690(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.560-7.582(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.425-7.445(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.250-7.291(t, 1H), 7.187-7.227(t, 1H), 5.857(s, 1H), 3.855(s, 3H), 3.544-3.577(m, 4H), 2.201(s, 3H), 1.958-1.991(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 166.950, 165.212, 162.641, 161.568, 138.775, 138.012, 134.530, 133.132, 128.188, 123.729, 122.537, 122.328, 121.277, 111.161, 110.925, 95.376, 79.464, 47.819, 36.937, 33.480, 26.463, 23.422; IR(순수) υmax 3307.96, 1571.45, 1502.60, 1399.70, 1227.73, 1100.50, 741.44; ESI-HRMS [M+H]+ C25H26N6O 계산치 426.22, 실측치 427.2227.
N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-2-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)아세트아미드(6.20).
4.1(25.2 mg, 0.0936 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(12.6 mg, 0.103 mmol, 1.1 당량), DCC(24.1 mg, 0.117 mmol, 1.25 당량) 및 2-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)아세트산(39 mg, 0.223 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.20(36.0 mg, 90% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. TLC(20% 아세톤, 2% 메탄올, 78% 디클로로메탄, 2회 수행), R f = 0.35; m.p. 236-238℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 8.175-8.191(d, J=5.1 Hz, 1H), 8.080-8.104(d, J=7.9 Hz, 1H), 7.831(s, 1H), 7.610-7.648(d, J=9.0 Hz, 2H), 7.441-7.479(d, J=9.0 Hz, 2H), 7.092-7.124(dd, 1H), 5.849(s, 1H), 3.818(s, 2H), 3.545-3.578(m, 4H), 2.204(s, 3H), 1.965-1.999(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 172.217, 162.578, 149.416, 143.291, 138.215, 134.262, 129.094, 125.774, 121.924, 121.851, 121.317, 116.466, 109.195, 101.393, 95.543, 47.878, 34.712, 26.440, 23.082; IR(순수) υmax 2864.93, 1572.18, 1502.48, 1398.08, 1229.57, 753.09, 515.55; ESI- HRMS [M+H]+ C24H25N7O 계산치 427.21, 실측치 428.2178.
2-(2-메틸-1H-인돌-3-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)아세트아미드(6.21).
4.1(20.8 mg, 0.0773 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(9.44 mg, 0.0773 mmol, 1.1 당량), DCC(19.9 mg, 0.0966 mmol, 1.25 당량) 및 2-(2-메틸-1H-인돌-3-일)아세트산(15.4 mg, 0.0773 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.21(24.1 mg, 73.3% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.42; m.p. 142-144℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.592-7.614(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.471-7.491(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.383-7.405(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.240-7.258(d, J=7.6 Hz, 1H), 6.947-7.038(m, 2H), 5.802(s, 1H), 3.739(s, 2H), 3.492-3.525(m, 4H), 2.417(s, 3H), 2.168(s, 3H), 1.908-1.941(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD). 173.092, 165.696, 162.506, 161.309, 138.322, 137.089, 134.671, 133.965, 129.856, 122.078, 121.634, 121.134, 119.853, 118.485, 111.417, 105.226, 95.441, 47.791, 33.567, 26.409, 23.316, 11.539; IR(순수) υmax 1571.52, 1505.98, 1399.07, 741.35; ESI- HRMS [M+H]+ C26H28N6O 계산치 440.23, 실측치 441.2381.
2-(5-메톡시-1H-인돌-3-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐) 아세트아미드(6.22).
4.1(21.6 mg, 0.0802 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(9.80 mg, 0.0802 mmol, 1.1 당량), DCC(20.7 mg, 0.100 mmol, 1.25 당량) 및 2-(5-메톡시-1H-인돌-3-일)아세트산(17.3 mg, 0.0843 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.22(15.5 mg, 44% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.55; m.p. 167-169℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.621-7.643(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.429-7.451(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.237-7.259(d, J=8.7 Hz, 1H), 7.199(s, 1H), 7.118-7.124(d, J=2.0 Hz 1H), 6.760-6.788(dd, 1H), 5.844(s, 1H), 3.802(s, 3H), 3.775(s, 2H), 3.552(bm, 4H), 2.195(s, 3H), 1.974(bm, 4H). 13C-NMR(100 MHz, CD3OD); 173.054, 162.612, 155.223, 137.780, 134.158, 133.356, 128.899, 125.518, 121.988, 121.257, 113.029, 112.906, 109.361, 101.367, 95.418, 79.464, 56.255, 47.828, 35.031, 26.454, 23.724, 20.049; IR(순수) υmax 2864.55, 1573.52, 1504.15, 1398.88, 1224.02, 790.75, 513.02; ESI- HRMS [M+H]+ C26H28N6O2 계산치 456.23, 실측치 457.2329.
2-(5-브로모-1H-인돌-3-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐) 아세트아미드(6.23).
4.1(17.0 mg, 0.0632 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(7.72 mg, 0.0632 mmol, 1.1 당량), DCC(16.3 mg, 0.079 mmol, 1.25 당량) 및 2-(5-브로모-1H-인돌-3-일)아세트산(17.7 mg, 0.0695 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.23(30.7 mg, 99% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. TLC(5% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.47; m.p. 151-153℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.899(s, 1H), 7.784-7.788(d, J=1.9 Hz, 1H), 7.630-7.652(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.436-7.459(d, J=8.9 Hz 2H), 7.264-7.272(m, 2H), 7.183-7.210(dd, 1H), 5.843(s, 1H), 3.769(s, 2H), 3.518-3.598(m, 4H), 2.193(s, 3H), 1.948-2.003(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 172.565, 162.617, 161.530, 155.127, 138.382, 136.716, 134.086, 130.445, 126.290, 125.261, 122.170, 122.017, 121.233, 113.973, 113.149, 109.537, 95.377, 47.823, 34.618, 26.455, 23.383; IR(순수) υmax 2862.30, 1570.94, 1504.59, 1399.41, 1225.39, 789.49, 513.22; ESI- HRMS [M+H]+ C25H25BrN6O 계산치 504.13, 실측치 505.1327.
2-(1H-인돌-1-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)아세트아미드(6.24).
4.1(16.6 mg, 0.0617 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(7.5 mg, 0.0617 mmol, 1.1 당량), DCC(16.0 mg, 0.077 mmol, 1.25 당량) 및 2-(1H-인돌-1-일)아세트산(11.3 mg, 0.0648 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.24(12.0 mg, 47% 수율)를 황백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.32; m.p. 275-277℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.111-7.130(d, J=7.8 Hz, 1H), 6.875-6.899(d, J=8.9 Hz, 2H), 6.756-6.825(m, 4H), 6.708(t, 1H), 6.599-6.650(m, 2H), 6.083-6.091(d, J=3.2 Hz, 1H), 5.230(s, 1H), 4.381(s, 2H), 2.960-2.993(m, 3H), 1.642(s, 3H), 1.377-1.410(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 173.133, 162.616, 138.337, 136.690, 136.060, 134.116, 128.780, 124.921, 123.207, 122.022, 121.234, 117.835, 112.158, 109.187, 95.39434.965, 30.173, 26.451, 23.333, 17.153; IR(순수) υmax 1668.49, 1576.69, 1502.37, 1400.50, 1330.94, 1227.86, 794.97, 735.87, 568.62, 509.47; ESI-HRMS [M+H]+ C25H26N6O 계산치 426.22, 실측치 427.2224.
2-(5-하이드록시-1H-인돌-3-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐) 아세트아미드(6.25).
4.1(44.2 mg, 0.164 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(20.0 mg, 0.164 mmol, 1.0 당량), DCC(42.3 mg, 0.205 mmol, 1.25 당량) 및 2-(5-하이드록시-1H-인돌-3-일)아세트산(33.0 mg, 0.173 mmol, 1.0 당량)로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.25(15.5 mg, 21% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. TLC(5% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.28; m.p. 196-198℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.614-7.636(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.445-7.467(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.173-7.203(m, 2H), 6.983-6.988(d, J=3.2 Hz, 1H), 6.675-6.703(dd, 1H), 5.877(s, 1H), 3.746(s, 2H), 3.547-3.581(m, 4H), 2.221(s, 3H), 1.961-2.025(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 173.106, 162.529, 151.451, 151.370, 134.650, 133.095, 129.301, 125.657, 125.397, 121.978, 121.555, 112.809, 112.696, 108.727, 103.674, 103.594, 95.786, 52.325, 35.009, 31.977, 26.407; IR(순수) υmax 3258.66, 1578.16, 1506.67, 1397.36, 1228.60, 793.25; ESI-HRMS [M+H]+ C25H26N6O2 계산치 442.21, 실측치 443.2172.
2-(3-(사이클로프로필메틸)-1H-인돌-1-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)아세트아미드(6.26).
4.1(17.0 mg, 0.0632 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(7.72 mg, 0.0632 mmol, 1.1 당량), DCC(16.3 mg, 0.079 mmol, 1.25 당량) 및 2-(3-(사이클로프로필메틸)-1H-인돌-1-일)아세트산(16.1 mg, 0.0663 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.26(23.7 mg, 78% 수율)을 황백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.27; m.p. 275-277℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 8.311(s, 1H), 8.270-8.289(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.780(s, 1H), 7.625-7.647(d, J= 8.9 Hz, 2H), 7.517-7.539(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.425-7.444(d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.218-7.305(m, 2H), 5.918(s, 1H), 5.109(s, 2H), 3.554-3.586(m, 4H), 2.605-2.667(m, 1H), 2.250(s, 3H), 1.991-2.024(m, 4H), 1.956(s, 2H), 1.121-1.158(m, 2H), 0.949-0.995(m, 2H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 197.917, 166.991, 162.055, 139.009, 138.658, 138.587, 137.137, 134.355, 127.271, 124.469, 123.493, 123.177, 121.899, 121.535, 118.579, 110.702, 96.389, 49.285, 50.561, 26.188, 22.943, 21.585, 18.662, 10.523; IR(순수) υmax 2009.39, 1508.43, 1386.73, 1167.26, 1065.42, 946.58, 744.69; ESI-HRMS [M+H]+ C29H32N6O2 계산치 494.20, 실측치 495.2484.
2-(5-에틸-1H-인돌-3-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐) 아세트아미드(6.27).
4.1(15.0 mg, 0.056 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(6.84 mg, 0.056 mmol, 1.1 당량), DCC(14.4 mg, 0.070 mmol, 1.25 당량) 및 2-(5-에틸-1H-인돌-3-일)아세트산(11.9 mg, 0.0585 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.27(24.8 mg, 98% 수율)을 황백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.30; m.p. 177-179℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.617-7.639(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.417-7.439(m, 3H), 7.257-7.278(d, J=8.9 Hz, 1H), 7.189(s, 1H), 6.972-6.996(d, J=8.4 Hz 1H), 5.838(s, 1H), 3.789(s, 2H), 3.530-3.563(m, 4H), 2.685-2.742(q, 2H), 2.191(s, 3H), 1.950-1.984(m, 4H), 1.253(t, 3H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 173.133, 162.616, 138.337, 138.332, 136.690, 136.060, 134.116, 128.780, 124.921, 123.207, 122.022, 121.234, 117.835, 112.158, 109.187, 95.394, 47.829, 34.965, 30.173, 26.452, 23.333, 17.153; IR(순수) υmax 2957.96, 1504.91, 1399.77, 1253.22, 803.62; ESI- HRMS [M+H]+ C27H30N6O 계산치 454.25, 실측치 455.2535.
2-(1H-벤조[d]이미다졸-1-일)-N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐) 아세트아미드(6.28).
4.1(15.6 mg, 0.0580 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(7.1 mg, 0.0580 mmol, 1.1 당량), DCC(15.0 mg, 0.0725 mmol, 1.25 당량) 및 2-(1H-벤조[d]이미다졸-1-일)아세트산(10.7 mg, 0.0609 mmol, 1.0 당량)로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.28(16.9 mg, 68% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.27; m.p. 175-177℃; 1H NMR(400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.368(s, 1H), 8.229(s, 1H), 7.641-7.678(m, 3H), 7.486-7.542(m, 3H), 7.190-7.270(m, 2H), 5.857(s, 1H), 5.148(s, 2H), 3.446-3.505(m, 4H), 2.135(s, 3H), 1.885-1.916(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, DMSO-d 6 ) 179.572, 164.927, 144.989, 143.167, 134.379, 122.336, 121.465, 119.673, 119.323, 110.280, 72.465, 63.055, 48.568, 47.275, 46.295, 24.955; IR(순수) υmax 3093.18, 1581.23, 1502.31, 1403.46, 1298.11, 1230.31, 1175.88, 835.05, 738.59; ESI- HRMS [M+H]+ C24H25N7O 계산치 427.21, 실측치 428.2177.
N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-2-(1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)-1H-인돌-3-일)아세트아미드(6.29).
4.1(15.6 mg, 0.0580 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, DMAP(7.1 mg, 0.0580 mmol, 1.1 당량), DCC(15.0 mg, 0.0725 mmol, 1.25 당량) 및 2-(1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐-H-인돌-3-일)아세트산(I17, 1.0 당량)로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.29(16.9 mg, 68% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.47; m.p. 230-232℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 8.102-8.123(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.989-8.010(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.793-7.814(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.612-7.676(m, 4H), 7.449-7.471(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.344-7.383(t, 1H), 7.264-7.302(t, 1H), 5.878(s, 1H), 3.787(s, 2H), 3.554-3.586(m, 4H), 2.219(s, 3H), 1.978-2.010(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 170.699, 162.550, 142.731, 136.537, 136.446, 136.116, 132.265, 128.837, 127.658, 126.295, 126.000, 124.954, 121.830, 121.473, 121.061, 119.402, 114.738, 101.399, 79.474, 47.965, 33.994, 26.429; IR(순수) υmax 1649.02, 1577.42, 1505.48, 1400.80, 1319.87, 1169.71, 1126.77, 1059.29, 830.21, 784.74, 713.73, 607.93, 558.38, 427.28; ESI-HRMS [M+H]+ C32H29F3N6O3S 계산치 634.2, 실측치 635.2022.
중간체 2-(1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐-H-인돌-3-일)아세트산(I17)의 합성은 반응식 10에 도시된다.
Figure pct00108
반응식 10
메틸 2-(1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)-1H-인돌-3-일)아세테이트(I16)(37.3 mg, 0.0939 mmol)를 디옥산(1 mL)/물(0.5 mL) 중에 용해시킨 다음, 2N NaOH 수성 용액(0.5 mL)으로 처리하고, 반응을 0.5시간 동안 교반하였다. 반응을 pH가 약 4가 될 때까지 1 N HCl로 켄칭하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 황산나트륨 상에서 건조시켜 I17을 황백색 고체(31.3 mg, 87% 수율)로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/ 디클로로메탄), Rf = 0.69; m.p. 196-198℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 8.092(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.964-7.984(d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.782-7.803(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.640(s, 1H), 7.542-7.562(d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.315-7.355(t, 1H), 7.232-7.271(t, 1H), 3.682(s, 2H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 175.390, 142.801, 136.448, 136.373, 136.044, 132.443, 128.792, 127.601, 126.092, 125.838, 124.780, 121.131, 119.441, 114.592, 32.205; IR(순수) υmax 1690.56, 1272.57, 1318.67, 1170.49, 1121.30, 1057.78, 979.30, 837.70, 749.36, 711.52, 640.54, 603.04, 557.08, 426.66; ESI-HRMS [M+H]+ C17H12F3NO4S 계산치 383.3412, 실측치 384.0497.
중간체 메틸 2-(1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)-1H-인돌-3-일)아세테이트(I16)의 합성.
메틸 2-(1H인돌-3-일)아세테이트(54.8 mg, 0.290 mmol, 1.0 당량), 4-(트리플루오로메틸)벤젠설포닐 클로라이드(85.1 mg, 0.348 mmol, 1.2 당량), 및 테트라부틸암모늄 수소 설페이트(9.85 mg, 0.029 mmol, 0.1 당량)를 톨루엔(2 mL) 중에 용해시키고, 아이스 배쓰에서 냉각하였다(반응식 10). 50% 수산화칼륨 용액(400 mL)을 적가하고, 반응을 힘찬 교반하에 8시간 동안 교반하였다. 반응을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 농축하고, 디클로로메탄 중의 5% 아세톤을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 16(37.3 mg, 32% 수율)을 투명한 오일을 수득하였다. TLC(5% 아세톤/디클로로메탄), Rf = 0.62; m.p. 94-96℃; 1HNMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.976-8.011(m, 3H), 7.689(d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.579(s, 1H), 7.502-7.512(d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.338-7.380(m, 1H), 7.265-7.305(m, 1H), 3.714(s, 3H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 170.919, 141.610, 135.971, 135.309, 135.086, 130.706, 127.445, 126.620, 125.465, 124.601, 123.953, 119.910, 116.313, 113.709, 52.364, 30.816; 19F-NMR(100 MHz, CDCl3) - 63.358; IR(순수) nmax 1442.28, 1737.13, 373.50, 1316.00, 1251.99, 1168.40, 1123.27, 1058.93, 1010.33, 976.94, 839.25, 749.05, 708.96, 605.14, 557.41, 425.79; ESI-HRMS [M+H]+ C18H14F3NO4S 계산치 397.3682, 실측치 398.0655.
N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-2-(2-옥소인돌린-3-일) 아세트아미드(6.30).
4.1(22.0 mg, 0.0817 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(1.5 mL) 중에 용해시키고, HBTU(40.3 mg, 0.106 mmol, 1. 당량), 2-(2-옥소인돌린-3-일)아세트산(17.2 mg, 0.090 mmol, 1.1 당량) 및 그 다음, DIPEA(28.3 mL, 0.163 mmol, 1.0 당량)로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 실리카 겔 상에서 농축하고, 디클로로메탄 중의 5-20% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 6.30(16.0 mg, 45% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.27; m.p. 170-172℃; 1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.626-7.648(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.484-7.506(d, J=8.9 Hz, 2H), 7.192-7.252(q, 2H), 6.961-6.999(t, 1H), 6.907-6.926(d, J=7.8 Hz, 1H), 5.952(s, 1H), 3.882-3.915(m, 1H), 3.581-3.654(m, 4H), 3.060-3.111(dd, 1H), 2.746-2.818(m, 1H), 2.277(s, 3H), 2.036(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CD3OD) 181.633, 170.864, 162.145, 143.659, 136.567, 135.491, 130.594, 129.266, 125.084, 123.288, 122.212, 121.651, 110.921, 96.940, 55.830, 38.068, 36.945, 31.639, 26.245, 20.701, 13.165; IR(순수) υmax 3323.06, 1571.06, 1502.57, 1335.88, 1231.30, 816.45, 663.70, 520.32; ESI- HRMS [M+H]+ C25H26N6O2 계산치 442.21, 실측치 443.2175.
N-(4-((6-메틸-2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-4-일)아미노)페닐)-2-(1-((4-(트리플루오로메틸) 페닐)설포닐)-1H-인돌-3-일)아세트아미드(6.31).
4.1(62.0 mg, 0.230 mmol, 1.0 당량)을 디클로로메탄, 무수(6.0 mL) 중에 용해시키고, DMAP(28.1 mg, 0.230 mmol, 1.1 당량), DCC(59.3 mg, 0.288 mmol, 1.25 당량) 및 2-(2-클로로퀴놀린-4-일)아세트산(56.0 mg, 0.253 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 바이알을 질소로 정화하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 1:1 에틸 아세테이트/디클로로메탄 및 3% 메탄올을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 통한 정제로 6.31(13.5 mg, 57% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. TLC(3% 메탄올/디클로로메탄), R f = 0.58; m.p. 260-262℃; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.199-8.220(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.976-7.997(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.798-7.839(t, 1H), 7.658-7.710(m, 3H), 7.553(s, 1H), 7.475-7.497(d, J=8.9 Hz, 2H), 5.859(s, 1H), 4.243(s, 2H), 3.558-3.591(m, 4H), 2.214(s, 3H), 1.976-2.009(m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) 167.354, 165.894, 161.314, 160.216, 150.517, 147.781, 145.224, 136.193, 133.217, 130.757, 128.675, 127.402, 126.491, 124.017, 123.331, 121.492, 120.797, 116.000, 93.281, 46.653, 40.236, 25.483, 23.457; IR(순수) υmax 1755.53, 1658.71, 1612.71, 1548.21, 1504.15, 1403.49, 1251.05, 1138.16, 890.44, 696.38, 517.52 ESI-HRMS [M+H]+ C26H25ClN6O 계산치 472.18, 실측치 473.1834.
반응식 8. 화합물 6.0 및 유사체 6.1-6.4의 합성
Figure pct00109
반응식 9A 및 9B. 특정한 6.0 유사체의 최적화된 합성
Figure pct00110
실시예 14: 추가의 합성 실시예
화합물 6의 벤질 유사체의 예시적인 합성
반응식 10은 화합물 6의 벤질 유사체의 예시적인 합성을 도시한다. 하기 화합물 번호는 반응식 10의 화합물 번호를 참조한다.
반응식 10
Figure pct00111
중간체 3 및 4의 합성(반응식 10)
4-아미노벤질아민, 1(12.28 mmol) 1.5 g을 2,4-디클로로-6-메틸피리미딘, 2(2.0 g, 1 당량)의 아세토니트릴 용액 25 mL 및 트리에틸아민(3.43 mL, 2 당량)에 가하였다. 수득된 용액을 실온에서 밤새 교반한 다음, 물 및 포화 중탄산나트륨 용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조합된 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 실리카 겔 상에서 농축하고, 텔레다인 콤비플래시(Teledyne Combiflash) 크로마토그래피 시스템으로 정제하여 4-위치 이성질체, 3(오렌지색 황색 고체, 1.84 g, 60.3%) 및 2-위치 이성질체, 4(밝은 황색 고체, 0.66 g, 5.4%)를 수득하였다.
중간체 6 및 7의 합성(반응식 10)
새롭게 건조시킨 DCM(50 mL) 중의 3(500 mg) 및 DMAP(1.1 당량)의 슬러리에 DCC(1.2 당량) 및 4-브로모티오펜 아세트산, 5(1.2 당량)을 가하였다. 실온에서 8시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 실리카 겔 플래시 크로마토그래피를 통한 정제로 6을 갈색 고체로서 정량 수율로 수득하였다. 반응 프로토콜을 반복하여 7을 베이지색 고체로서 정량 수율로 수득하였다.
CHD1Li 6.33, 6.40, 6.41, 6.44-6.47 및 6.57의 합성(반응식 11)
6 또는 7(150 mg)을 각각 n-BuOH 및 DIPEA(3 당량) 3 mL로 처리한 다음, 실온에서 수 분 동안 교반하였다. 상응하는 사이클릭 2°아민을 가하고, 반응 혼합물을 120℃에서 밤새 환류시킨 다음, 진공하에 건조하게 농축하였다. 잔여물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨 용액으로 염기성화시켰다. 조합된 에틸 아세테이트 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 실리카 겔 상에서 농축하고, 실리카 겔 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 후속적으로, 갈색 고체 생성물을 DMSO 중에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨 용액으로 처리하여 황백색 침전물을 수득하였다. 이를 여과로 수집하여 원하는 CHD1Li을 수득하였다.
화합물 6.11의 트리아졸로피리딘 유사체의 예시적인 합성
반응식 11은 화합물 6.11의 트리아졸로피리미딘 유사체의 예시적인 합성을 도시한다. 하기 언급된 화합물 번호는 반응식 11의 것을 참조한다.
반응식 12:
Figure pct00112
Figure pct00113
중간체 12의 합성 (반응식 11)
트리아졸 9 1.0 g 및 에틸 아세토아세테이트 10 1.28 mL를 아세트산 30 mL에 가하고, 130℃에서 6시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 에탄올로 희석하고, -20℃에서 밤새 유지하였다. 수득된 백색 침전물을 진공하에 여과하여 11을 정량 수율로 수득하였다. 후속적으로, 11(0.7 g)을 POCl3 5 mL에 0℃에서 나누어 가하였다. 수 분 동안 이 온도에서 교반한 후, 혼합물을 115℃에서 2시간 동안 환류시킨 다음, 진공하에 건조하게 농축하였다. 붉은 벽돌색 잔여물을 DCM 중에 재용해시키고, 포화 NaHCO3으로 염기성화시키고, 진공하에 여과하여 12 0.51 g을 오렌지색 고체로서 수득하였다.
중간체 15의 합성 (반응식 11)
필요한 아세트아미드 중간체 14를 7의 합성 과정에 따라 90% 수율로 베이지색 고체로서 합성하였다. DCM-TFA(1:1) 용액에 의한 후속적인 boc-탈보호화로 15를 75% 수율로 갈색 고체로서 수득하였다.
중간체 18의 합성 (반응식 11)
무수 THF 중의 1의 용액(1.0 mL)을 무수 THF 중에 미리 용해된 boc-무수물(1 당량)의 적가로 처리하였다. 반응 혼합물을 질소하에 2시간 동안 교반한 다음, 진공하에 건조하게 농축하였다. 수득된 황색 고체를 CHCl3-헥산(1:2)으로 세척하여 16을 정량 수율로 제공하였다. 15와 유사한 아미드 커플링 및 boc-탈보호화로 18을 87% 수율로 황백색 고체로서 수득하였다.
6.53 및 6.54의 합성 (반응식 11)
12 70 mg을 트리에틸아민(2 당량)을 함유하는 15 또는 16(1 당량)의 DMF 용액(5 mL)에 가하였다. 반응 혼합물을 90℃로 18시간 동안 가열한 다음, 분쇄 얼음에 붓고, 진공하에 여과하여 미정제 생성물을 갈색 고체로서 수득하였다. 실리카 겔 콤비플래시 크로마토그래피로 정제하여 순수한 6.53 및 6.54를 황백색 고체로서 각각 55 및 60% 수율로 수득하였다.
반응식 12는 화합물 6.55 및 6.56의 예시적인 합성을 도시한다.
반응식 12:
Figure pct00114
하기 설명에서, 화합물 번호는 반응식 12를 참조한다.
중간체 22의 합성
아세토니트릴(5 mL) 중의 디메틸 시아노카본이미도디티오에이트 10 1.024 g(7 mmol) 및 피롤리딘(1.0 당량)의 용액을 85℃에서 2시간 동안 환류시켰다. 그 다음, 하이드라진 일수화물(1.5 당량)을 가하고, 5시간 동안 계속 환류시켰다. 실온으로 냉각한 후, 차가운 디에틸 에테르로 세척하면서 수득된 밝은 핑크색 침전물을 진공하에 여과하여 21을 정량 수율로 수득하였다. 후속적으로, 아세트산(7 mL) 중의 21 500 mg을 10(1 당량)으로 처리하고, 90℃에서 6시간 동안 환류시켰다. 차가운 디에틸 에테르로 세척하면서 수득된 침전물을 여과하여 22를 황백색 고체로서 89% 수율로 수득하였다. 22의 23로의 전환은 상기 12에 기재된 바와 동일한 과정을 사용하여 78% 수율로 달성하였다.
6.55 및 6.56의 합성
6.55 및 6.56을 상기 6.53 및 6.54에 기재된 방법에 따라 합성하였다.
1,3-프로판설탐 유사체의 합성(반응식 13)
하기 설명에서, 화합물 번호는 반응식 13을 참조한다. boc-보호된 p-페닐렌디아민(250 mg, 1.2 mmol) 및 Et3N(2 당량)의 아세토니트릴 용액 5 mL에 2,4-디클로로-6-메틸피리미딘을 실온에서 가하고, 반응 혼합물을 12시간 동안 교반하였다. 물, 포화 NaHCO3에 의한 일상적 후처리 및 DCM에 의한 추출 후, EtOAc-헥산을 사용하는 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제로 중간체 1을 황백색 고체로서 우수한 수율(90%)로 수득하였다. 후속적으로, 1(200 mg, 0.597 mmol)을 디옥산 5 mL 중에 용해시키고, CsCO3(3 당량), Pd2(dba)3(0.5 당량) 및 크산트포스(1.5 당량)로 실온에서 처리하였다. 110℃에서 12시간 동안 환류시킨 후, 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, EtOAc-헥산을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 있어서 실리카 겔 상에서 농축하였다. boc-보호된 생성물을 DCM 5 mL 중에 재용해시키고, TFA 5 mL로 처리하고, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. EtOAc에 의한 일상적 후처리 및 EtOAc-헥산을 사용하여 플래시 크로마토그래피를 통한 정제로 중간체 2를 베이지색 고체로서 40% 수율로 2 단계에 걸쳐 수득하였다. 최종적으로, 새롭게 건조된 DCM 중의 2(50 mg, 0.157 mmol) 및 DMAP(1.2 당량)의 용액에 DCC(1.2 당량) 및 4-브로모티오펜 아세틱(1.2 당량)을 동시에 가하였다. 실온에서 12시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. 메탄올-클로로포름을 사용하는 플래시 크로마토그래피로 원하는 CHD1Li(3/158)를 60% 수율로 황백색 고체로서 수득하였다.
반응식 13:
Figure pct00115
아미드 및 우레아 유사체의 예시적인 합성(반응식 14)
하기에서, 화합물 번호는 반응식 14를 참조한다.
화합물 6
2-클로로-6-메틸피리미딘-4-아민(500 mg, 3.48 mmol) 및 피롤리딘(3 당량)을 K2CO3(1.05 당량) 및 DMF(2 mL)를 함유하는 플라스크에 동시에 가하였다. 75℃에서 8시간 동안 환류시킨 후, 반응 혼합물을 분쇄된 얼음에 붓고, 힘차게 교반하였다. 수득된 침전물을 진공 여과를 통해 수집하여 중간체 4를 황백색 고체로서 76% 수율로 수득하였다. 따라서, 새롭게 건조된 DCM 중의 4(150 mg, 0.842 mmol), 트리에틸아민(1.2 당량) 및 DMAP(1.0 당량)의 교반된 용액에 실온에서 4-니트로벤조일 클로라이드(1.0 당량)를 가하고, 16시간 동안 계속 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 물에 붓고, 포화 NaHCO3 용액으로 염기성화시켰다. 수성 층을 DCM으로 추출하고, 조합된 유기 추출물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 실리카 겔 상에서 농축하였다. EtOAc-헥산에 의한 플래시 크로마토그래피로 5의 니트로 전구체를 황색 고체로서 수득하였다. EtOH 8 mL 중의 이러한 니트로 전구체 100 mg(0.306 mmol)를 물 2 mL 중의 Fe 분말(7 당량) 및 NH4Cl(3.5 당량)의 혼합물에 가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 환류시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 진공하에 건조하게 농축하였다. 잔여물을 에틸 아세테이트 중에 현탁시키고, 물로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공하에 농축하여 미정제 중간체 5를 베이지색 고체로서 수득하였다. 5를 4-브로모티오펜 아세트산으로 처리하여 6을 황백색 고체로서 수득하였다.
반응식 14
Figure pct00116
화합물 8(반응식 15)
하기 설명에서, 화합물 번호는 반응식 15을 참조한다. 화합물 6 합성에 대한 프로토콜을 사용하여 화합물 8을 합성하였다. 과량의 티오닐 클로라이드 중에 4-니트로페닐 아세트산 250 mg을 환류시킴으로써 필요한 산 클로라이드를 제조하였다.
반응식 15:
Figure pct00117
화합물 10(반응식 16)
하기 설명에서, 화합물 번호는 반응식 16을 참조한다. 화합물 6 합성에 대한 프로토콜을 사용하여 화합물 10을 황백색 고체로서 합성하였다. 9의 필요한 니트로 전구체를 하기와 같이 제조하였다: 중간체 4(150 mg, 0.842 mmol), 4-니트로페닐 이소시아네이트(1.0 당량) 및 트리에틸아민(3 당량)을 디옥산 5 mL 중에 110℃에서 16시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각한 후, 차가운 디에틸 에테르 5 mL로 세척하면서 수득된 침전물을 여과하여 원하는 니트로 전구체를 황색 고체로서 수득하였다.
반응식 16:
Figure pct00118
Figure pct00119
화합물 13(반응식 17)
우레아 중간체 11을 9에 대하여 기재된 바와 같이 제조하고, 이의 12로의 전환은 중간체 4에 대한 과정을 사용하여 달성하였다. 그 후, n-BuOH 3 mL 중의 12(0.177 mmol) 80 mg을 피롤리딘(3 당량)으로 처리하고, 120℃에서 16시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 진공하에 농축하고, 에틸 아세테이트 중에 재용해시키고, 포화 NaHCO3 용액으로 염기성화시켰다. 수성 층을 EtOAc로 추출하고, 조합된 유기 추출물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 플래시 크로마토그래피 정제로 13을 베이지색 고체로서 수득하였다.
반응식 17:
Figure pct00120
실시예 15: CHD1L 억제제의 시험관내 생물학적 평가
CHD1L 억제제를 CHD1L의 재조합 촉매 도메인(cat-CHD1L)을 억제하는 이들의 능력에 대하여 평가하였다(문헌[Abbott et al., 2020 참조). 이러한 연구의 결과는 화합물 6.0의 약물작용발생단을 기반으로 한 약물의 디자인의 용이성을 증명한다(도 16a 및 16b). 특히, 더 강력한 CHD1L 억제제는 화합물 6.5, 6.11, 6.16, 6.18, 6.21, 및 6.31이고(도 16a), 이는 또한 6.0과 비교하여 SW620 부모 종양 오가노이드에서 세포독성 효능의 유사한 증가를 나타냈다(도 16b). 화합물 6.5, 6.11, 6.16, 6.18, 6.21, 및 6.31의 구조는 반응식 1에서 확인된다.
EMT 세포 표현형의 스펙트럼 동시에 추적하면서 EMP를 실시간으로 측정하는 효과적인 도구인 2D 및 3D 고함량 이미지에 적합한 신규한 형광 EMT 이중-리포터를 개발하였다(또한 문헌[Zhou et al., 2016] 참조). EMT 표현형은 이중-리포터 형광을 기반으로 한 FACS로 단리할 수 있고, 안정한 xE/xM(RFP-/GFP-), 및 준-EMT 집단 E(RFP+), E/M(RFP+/GFP+), 및 M(GFP+)을 포함하는 장기간 배양에서 개별 세포 집단으로서 질의할 수 있다. 단리된 EMT 표현형은 형태학적으로 대사적으로 명백한 차이를 나타내고, 이들 표현형 차이는 TCF-전사에 의해 유도된다. 세포독성과 CHD1L 억제의 상관관계는 CRC에서 CHD1L 매개된 TCF-전사의 억제와 일치한다(Esquer et al., 2021; Abbott et al., 2020). 특히, 우리는 더 많은 종양형성 CSC 준-M-표현형이 다른 EMT 표현형과 비교하여 상향조절된 TCF-전사를 갖는다는 것을 증명한다(도 17a). 따라서, 우리는 M-표현형 SW620 및 HCT116 세포를 CHD1L 억제제로 처리하고, 낮은 마이크로몰 농도에서 억제 농도 50%(IC50) 값을 갖는 모든 열거된 화합물에 있어서 TCF-전사의 용량 의존적 감소를 관찰하였다(각각 도 17b 및 17c)
그 다음, CHD1Li 세포독성을 세포주(SW620 및 HCT116) 및 환자 세포 유래(CRC042 및 CRC102) 종양 오가노이드(도 18a-18d) 둘 다에서 측정하였다. CHD1L 억제제는 SW620 및 HCT116 M-표현형 종양 오가노이드에서 강력한 항종양 활성을 나타내고, 이는 낮은 마이크로몰 IC50 값에서 세포 생존도를 억제한다(도 18a 및 18b). 마찬가지로, CHD1Li는 CRC042 및 CRC102 환자 종양 오가노이드에 대하여 강력한 세포독성을 가졌다(도 18c 및 18d). 이들 결과는 CRC 환자 종양 오가노이드를 포함하는 다양한 CRC 세포 모델에서 CHD1Li의 강력한 항종양 활성을 강조한다.
그 다음, 이전에 기재된 고함량 이미징 방법을 사용하여, EMT 이중-리포터(VimPro-GFP 및 EcadPro-RFP)의 형광 신호를 동시에 측정함으로써, CHD1L 억제제를 EMT를 억제하고/거나 중간엽-상피 이행(MET, 즉, EMT의 역행)을 유도하는 이들의 능력에 대하여 평가하였다(Zhou et al., 2016). 실제로, CHD1L 억제제는 SW620 및 HCT116 M-표현형 종양 오가노이드에서 EMT를 방지하고 MET를 유도하고, 이는 E-카드헤린 발현의 부수적인 상향조절과 함께 비멘틴의 용량 의존적 하향조절을 특징으로 한다(도 19a-19e). CHD1Li로부터 야기된 E-카드헤린 상향조절을 정량하기 위하여, 우리는 RFP 형광 신호의 2배 증가가 발생하는 용량을 결정하기 위하여 비선형 회귀 모델을 생성하였다. 화합물 6.5로 처리된 대표적인 이중-리포터 M-표현형 HCT116 종양 오가노이드 이미지가 도시된다(도 19e). VimPro-GFP의 뚜렷한 하향조절이 관찰되고, EcadPro-RFP의 상향조절은 치료 용량 증가로 기재되고, CHD1Li 6.0 유도된 MET의 우리의 이전 결과와 일치한다(문헌[Abbott et al., 2020] 참조).
TCF-유도된 EMT는 자기 재생, 아폽토시스에 대한 내성, 및 증가된 전이 가능성을 포함하는 증가된 CSC 특성을 갖는 중간엽 세포를 가능하게 하는 메커니즘으로 연결된다(Scheel et al., 2012; Chaffer et al., 2016). 이러한 사실은 단리된 M-표현형 종양 세포가 유의한 증가된 CSC 줄기세포능을 갖는다는 우리의 결과와 일치한다(또한 문헌[Esquer et al., 2021] 참조). 우리는 클론원성 콜로니 형성 검정(Esquer et al., 2020; Franken et al., 2006)을 기반으로 화합물 6.0이 CSC 줄기세포능을 유의하게 억제한다는 것을 보여주었다(또한 문헌[Abbott et al., 2020] 참조). 따라서, 우리는 고함량 이미징을 사용하여 CHD1L 억제제를 SW620 및 HCT116 M-표현형 세포에서 CSC 줄기세포능을 억제하는 이들의 능력에 대하여 평가하였다(Esquer et al., 2020). CHD1L 억제제는 낮은 mM 내지 nM 범위에서 콜로니 형성을 효과적으로 억제하였다(도 20a 및 20b). CHD1L 억제제 6.31은 SW620 세포에서 300 nM 및 HCT116 세포에서 200 nM의 IC50 값으로 평가된 가장 강력한 화합물이었다. CHD1L 억제제는 CHD1L-매개된 TCF-전사를 방지하고, 결국 EMT를 억제하고 MET를 유도하여, 종양 세포에 세포독성을 촉진하면서 CSC 줄기세포능의 손실을 야기하는 효과적인 항종양제라는 것이 증명된다.
실시예 16: CHD1L 억제제의 생체내 생물학적 평가
우리는 CHD1Li 6.0이 마우스에서 3시간의 혈장 반감기를 포함하는 우수한 생체내 성향을 갖는다는 것을 설명하였다(상기 및 또한 문헌[Abbott et al., 2020] 참조). 우리는 6.0의 반감기가 티오펜 고리의 간 대사로 인하여 해로운 영향을 받을 수 있다는 것을 고려하였다. 티오펜 고리는 반응성 대사산물(예를 들면, S-산화에 의한)을 형성할 수 있고, 치환된 티오펜은 일반적으로 간 대사 효소에 더 안정적이다(Gramec et al., 2014). 게다가, 6.0은 5일 동안 매일 복강내(i.p.) 투여에 의해 50 mg/kg의 최대 허용 용량으로 마우스를 처리하는 경우, 임의의 간 독성을 나타내지 않는다(또한, 문헌[Abbott et al., 2020] 참조). 따라서, 티오펜 반응성 대사산물은 제한된 역효과를 나타내지 않는 독성을 야기한다. CHD1L 억제제로 생체내 연구를 수행하기 전에, 우리는 6.0, 6.4, 6.5, 6.11, 및 6.31을 포함하는 선택된 화합물로 시험관내 마우스 마이크로솜 안정성 연구를 수행하였다. CHD1L 억제제 6.11은 화합물 6.0의 67.2분과 비교하여 130.3분의 2배 긴 반감기로 마이크로솜에 노출되는 경우에 이들 화합물의 가장 대사적으로 안정한 것으로 증명되었다. 따라서, 6.11은 생체내 평가에 있어서 우선순위가 되었다.
상기 더 상세히 기재된 바와 같이, CD-1 마우스를 사용하여, 우리는 6.11을 50 mg/kg의 용량의 i.p. 주사로 투여하고, 혈장, 및 간 및 지방 조직으로부터의 제거 반감기(t1/2l)를 포함하는 6.11의 약물동력학(PK)을 평가하였다. 혈장 및 조직에서 6.11의 t1/2l은 8시간이고, 이는 6.0보다 2.7배 긴 반감기이다. 그 다음, 동일한 용량을 사용하여, 우리는 경구 위관영양법(p.o.) 후 6.11의 경구 생체이용률을 평가하였고, 6.11은 혈장에서 44% 흡수 및 8시간의 t1/2l로 경구 생체 이용 가능하다는 것을 확인하였다(도 6b). 생체내 반감기 6.11은 이의 시험관내 마이크로솜 안정성과 일치하고, 이는 6.11의 브로모티오펜 모이어티가 6.0과 비교하여 간 효소에 대한 이의 안정성을 증가시킴으로써 생체내 PK를 유의하게 개선한다는 것을 나타낸다.
실시예 17: 실험 방법
일반 실험 방법. 모든 상업적인 화학물질은 달리 기재되지 않는 한, 공급된 그대로 사용하였다. 사용된 모든 용매는 표준 절차를 사용하여 건조하고 증류시켰다. 박막 크로마토그래피(TLC)는 60Å 실리카 겔 F254(Sorbent Technologies, 미국 조지아주 노르크로스 소재)로 코팅된 알루미늄 후면 플레이트를 사용하여 수행하였다. 플레이트는 UV 램프(λmax = 254 nm)를 사용하여 시각화하였다. 컬럼 크로마토그래피는 230-400 메쉬 60Å 실리카 겔 또는 텔레다인 이스코 콤비플래시(Teledyne Isco Combiflash) 후, 고성능 금 컬럼을 갖는 gen 300+ 크로마토그래피 시스템를 사용하여 수행하였다. NMR 스펙트럼은 브루커 아반스(Bruker Avance) III 400(1H 400 MHz, 13C 100 MHz) 상에 기록하였다. 모든 화학적 이동은 나머지 용매 주파수를 참조하여 백만분율(ppm)로 기록하였다(1H NMR: Me4Si = 0, CDCl3 = 7.26, D2O = 4.79, CD3OD = 4.87 또는 3.31, DMSO-d6 = 2.50, 아세톤-d6 = 2.05 및 13C NMR: CDCl3 = 77.16; CD3OD = 49.0, DMSO-d6 = 39.5, 아세톤-d6 = 29.9). 커플링 상수(J) 값은 헤르츠(Hz)로 표시한다. 하기 분할 약어를 사용하였다: s = 단항, d = 이중항, t = 삼중항, q = 사중항, p = 오중항, m = 다중항, br = 브로드, dd = 이중항의 이중항, dt = 삼중항의 이중항, td = 삼중항의 삼중항, 융점(m.p.)은 스튜어트(Stuart) 융점 기구(SMP20)를 사용하여 결정하였다. 적외선(IR) 스펙트럼은 브루커(Bruker) ALPHA 플래티늄 ATR에서 기록하였다(오일 및 고체를 순수 상태로 시험함). 화합물 순도(≥ 95%)는 포토다이오드 어레이 검출기(PDA) 및 루나 오메가(LunaR Omega) 극성 C18 컬럼(5 ㎛, 100 Å, 250 mm x 4.6 mm)이 장착된 시마즈 프로미넨스(Shimadzu prominence) HPLC를 사용하여 측정하였다. 0.525 mL/분의 유속을 사용하여, 화합물을 물 중의 0.1% TFA/메탄올 중의 0.1% TFA를 갖는 물/메탄올의 구배로 0 내지 25분 동안 용리시켰다. 고해상도 질량 분석(HRMS)은 Q 이그잭티브(Exactive) 질량 분광계(ThermoFisher, 미국 캘리포니아주 산호세 소재)를 사용하여 기록하였고, 이는 4 kV 스프레이 전압, 45 차단 가스(sheath gas), 15 보조 가스와 함께 140,000 해상도에서 150 내지 1500 m/z의 완전 MS 모드(2 μ스캔)으로 스캐닝하는 양 또는 음 이온 모드로 독립적으로 작동되었다. 그 다음, 수득된 데이터를 매스 매트릭스(Mass Matrix, 미국 오하이오주 클리블랜드 소재)를 사용하여 미가공 데이터에서 mzXML 파일 포맷으로 전환하였다.
CHD1L 효소 ATPase 검정. CHD1L 효소 억제 검정은 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다(Abbott et al., 2020). 모든 반응은 저부피 비결합 표면 384-웰 플레이트(Corning Inc., 미국 뉴욕주 코닝 소재)를 사용하여 수행하였다. 800 nM cat-CHD1L, 200 nM 모노뉴클레오솜(Active Motif, 미국 캘리포니아주 칼즈배드 소재), 및 다양한 농도의 억제제를 37℃에서 10분 동안 50 mmol/L Tris pH 7.5, 50 mmol/L NaCl, 5 mmol/L MgCl2, 2 mmol/L DTT, 및 5% 글리세롤을 함유하는 1x 버퍼 중에서 전배양하였다. 10 μmol/L ATP(New England Biolabs, 미국 매사추세츠주 입스위치 소재)의 10 μL의 총 부피로의 첨가로 반응을 개시하고, 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 엔비젼 플레이트 리더(PerkinElmer, 미국 매사추세츠주 월섬 소재)에서 즉시 여기(430 nm) 및 방출(450 nm)을 측정하는 포스페이트 센서(ThermoFisher, 미국 매사추세츠주 월섬 소재) 500 nmol/L를 가함으로써 ATPase 활성을 측정하였다. 효소를 제외한 모든 검정 구성요소를 사용하여 배경 신호를 결정하였다.
세포주. 세포주를 ATCC로부터 직접 구입하고, 지시된 바와 같이 사용하였다. 이전에 보고된 조작된 세포주를 진위를 위하여 STR 프로파일링하였다. 모든 세포주를 사용 전에 박테리아 및 마이코플라스마 오염에 대하여 시험하였다. 개인 정보가 삭제된 환자 샘플 세포을 CU 암 센터 GI 조직 은행으로부터 입수하였다.
세포 배양. SW620 및 HCT116 세포주를 아메리칸 타입 컬처 컬렉션(ATCC, 미국 버지니아주 머내서스 소재)로부터 입수하고, 37℃ 및 5% CO2에서 가습된 인큐베이터에서 5% 소 태아 혈청(FBS)으로 보충된 RPMI-1640 배지에서 성장시켰다. 세포를 ATCC 프로토콜에 따라 10 cm2 조직 배양 처리된 디쉬(ThermoFisher)에서 확장시켰다. 상피-중간엽 이행(EMT) 이중 리포터 세포주(SW620 및 HCT116 E, E/M, 및 M)를 이전에 요약된 바와 같이 생성하고, 특성화하고, 유지하였다(PMID: 33742123). 야생형 및 이중 리포터 세포주 둘 다를 수확하고, 배지를 흡입하고, 10 mL PBS로 세척하고, 0.25%의 트립신-EDTA(ThermoFisher) 1 mL로 탈착시키고, 완전 성장 배지 4 mL로 중화시킴으로써 실험을 준비하였다. 세포를 트립판 블루(1:1) 생/사 세포 배제에 의한 Bio-Rad TC20 자동 세포 계수기(Bio-Rad, 미국 캘리포니아주 허큘러스 소재)를 사용하여 세포를 계수하였다.
세포주 종양 오가노이드 배양. 셀 캐리어 스페로이드 울트라-로두 어태치먼트(CellCarrier Spheroid Ultra-Low Attachment)(ULA) 96-웰 플레이트(카탈로그 번호 6055330, PerkinElmer) 또는 투명 환저 ULA 96-웰 플레이트(카탈로그 번호 7007, Corning)에 2,000개 세포/웰로 플레이팅함으로써 종양 오가노이드를 제조하였다. 간략하게, 플레이팅된 세포를 1,000 RPM으로 원심분리하여 세포 응집을 촉진한 후, 최종 농도 2% 마트리겔(Corning)를 가하고, 플레이트를 37℃ 및 5% CO2 가습된 인큐베이터에 72시간 동안 놓아 적절한 종양 오가노이드 구조에 도달하였다. 그 다음, 종양 오가노이드를 용량 반응 검정에서 CHD1Li 화합물로 추가 72시간 동안 처리하고, EMT 역행 및 세포독성에 대하여 분석하였다.
환자 세포 종양 오가노이드 배양. 보고된 방법 및 시약을 사용하여 CRC048 및 CRC102 환자 세포 샘플을 확장하고 PDTO로서 배양하였다(Drost et al., 2016; Sato et al., 2011). 간략하게, 환자 세포를 PBS로 세척하고, TrypLE로 소화시키고, 3D 세포 배양에서 사용하기 전에 100 ㎛ 세포 여과기를 통해 여과하였다. 환자 세포를 2% 마트리겔로 코팅된 96-웰 플레이트에 웰당 5,000개 세포로 시딩하고, PDTO로서 72시간 동안 자기 조립되도록 하였다.
종양 오가노이드 세포독성. 셀티터 글로 3D(카탈로그 번호 G9681, Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)를 사용하여 CHD1Li 세포독성을 평가하였다. 종양 오가노이드를 투명 환저 ULA 96-웰 플레이트로부터 코닝(Corning) 96- 또는 384-웰 고체 바닥 백색 플레이트(카탈로그 번호 655083, Greiner Bio-One, 미국 노스캐롤라이나주 먼로 소재)로 수동으로 옮겼다. 셀티터 글로 3D를 1:1 비로 가하고, 45분 동안 실온에서 오비탈 쉐이커에서 450 RPM으로 배양하였다. 최종적으로, 엔비전 플레이트 리더(PerkinElmer)를 사용하여 발광을 정량하였다. 세포 세포독성을 비히클 대조군으로서 0.5% DMSO로 정규화하였다.
3D 고함량 이미징 및 EMT 이중-리포터 활성의 분석. 10x 공기형 대물렌즈(NA 0.3)를 이용하는 공초점 방식으로 오페라 피닉스 고함량 스크리닝 시스템(PerkinElmer)을 사용하여 종양 오가노이드를 이미징하였다. 하기 여기 및 방출(Ex/Em) 파장을 이용하였다: RFP(561/570-630) 및 GFP(488/500-550). 오가노이드를 또한 명시야에서 절편으로 이미징하고, 이중 리포터 특이적 형광 강도의 고함량 분석을 수행하였다. RFP 형광 신호는 E-카드헤린 프로모터 활성과 상관관계가 있고, GFP 형광 신호는 비멘틴 프로모터 활성과 상관관계가 있다. 형광 신호는 둘 다를 이전에 기재된 바와 같이 정량하고 정규화하였다(Esquer, et al., 2021).
TCF-전사 리포터 검정. 검정을 문헌[Esquer et al, 2021; Zhou et al., 2016; Yang et al., 2020]로부터 개조 및 변형하였다. SW620 세포를 이중 96-웰 플레이트에 20,000개 세포/웰(10,000개 세포/웰로 HCT116)로 플레이팅하고, 하나의 백색 고체 바닥 플레이트를 사용하여 TCF-전사 활성을 평가하고, 하나의 투명 플레이트를 사용하여 정규화 목적을 위하여 BCA 검정에 의한 총 단백질을 측정하였다. 세포주를 밤새 부착되도록 한 다음, 72시간 동안 TransIT-LT1 형질감염 시약(Mirus Bio, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)을 사용하여 TOPflash 플라스미드(밀리포어, 미국 매사추세츠주 빌레리카 소재)로 일시적으로 옮겼다. 그 후, 백색 고체 바닥 플레이트로부터의 세포를 PBS로 조심스럽게 세척하고, 1:1 비의 PBS:One-Glo 루시페라제 검정 시스템(Promega)을 가하고, 10분 동안 배양하고, 발광을 TCF-활성에 대하여 엔비전 플레이트 리더(PerkinElmer)에서 정량하였다. 대조군으로서, 투명 플레이트로부터의 세포를 포유동물 세포 용해 버퍼(Promega)로 용해시키고, 각각의 웰로부터의 총 단백질을 BCA 검정(ThermoFisher)으로 정량하였다.
클론원성 검정. CHD1Li 처리 후 암 줄기 세포 콜로니 형성를 이전에 기재된 바와 같이 평가하였다(Esquer et al., 2020). 간략하게, 7-10일의 성장 기간 동안 콜로니 합류를 피하기 위하여 HCT116 세포를 최적의 세포 농도로 플레이팅하였다. SW620 및 HCT116 M-표현형 세포를 각각 200 및 75개 세포/웰로 96-웰 mClear 세포 블랙 플레이트(Greiner Bio-One)에 플레이팅하였다. 신선한 배지 및 약물 처리를 3일 마다 보충하였다. 오페라 피닉스 HCS 시스템을 사용하여 이미지를 획득하고, 하모니(Harmony) 소프트웨어를 사용하여 콜로니 수, 면적(mm2), 및 컨플루언스(confluence)(mm2)를 정량하고 분석하였다. 실험을 3회(각각의 조건에 대하여 n = 3) 반복하였다.
생체내 PK 연구. 우리의 이전에 공개된 방법(Abraham et al., 2019)을 사용하여 PK 연구를 수행하고, 여기서 CHD1Li 6.11을 100% DMSO의 비히클 중의 50 mg/kg의 용량으로 경구 위관영양법(p.o.)으로 투여하였다.
통계 분석
모든 통계 분석은 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) v9.0(GraphPad Software Inc., 미국 캘리포니아주 라호이아 소재)을 사용하여 수행하였다. 데이터는 달리 기재되지 않는 한, 실험 복제물을 사용하여 수집하였다. 유의한 모든 P-값은 *, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001; ****, p<0.0001로 표시된다.
약어
또한 간암 1에서 증폭된(ALC1) 것으로 공지된 크로모도메인 헬리카제 DNA 결합 단백질 1 유사(CHD1L); T 세포 인자/림프 인핸서 인자(TCF/LEF); 상피-중간엽 이행(EMT), 중간엽-상피 이행(MET); 상피-중간엽 가소성(EMP); 암 줄기 세포(CSC); 위장관(GI); 결장직장암(CRC).
실시예 18: 경구 위관영양법에 의해 투여된 화합물 6.11의 생체내 항종양 활성
옆구리(Flk)에 단리된 SW620 EMT 이중-리포터 준중간엽 세포(GFP+)를 접종한 11주 연령의 가슴샘이 없는 마우스(35)(Esquer et al., 2021). 세포 주사 후 5일에, 주사된 마우스를 처리(Tx)를 위한 3개의 군으로 무작위로 나누었다. 1군(12마리 마우스)은 위관영양법 비히클(10 부피% DMSO, 90 부피% PEG 400(폴리에틸렌 글리콜 400))의 대조군 처리를 수용하고, 2군(11마리 마우스)은 비히클 중에 용해된 75 mg/kg의 화합물 6.11의 경구 위관영양법을 수용하였다. 3군(12마리 마우스)은 비히클 중에 용해된 125 mg/kg의 화합물 6.11의 경구 위관영양법을 수용하였다. 마우스를 1일당 1회, 1주당 5일 PO(경구 위관영양법을 통해)로 처리하였다. 마우스의 중량을 측정하고, 종양 부피를 도 21a 및 21b에 도시된 바와 같이 캘리퍼로 1주당 2회 평가하였다. 희생시킬 때, 종양의 중량을 재고 측정하였다. 추가로, 마우스의 상태에 대한 전체적인 관찰을 하고, 혈장, 종양, 간 비장 및 신장의 샘플을 추가의 평가, 예를 들면, 약물 정량 및 독성 평가를 위하여 수집하였다.
도 21a는 처리가 개시된 후 3일에 시작하는 종양 부피(mm3)의 그래프이다. 이 그래프는 처리 27일 동안 화합물 6.11에 의한 마우스의 경구 처리에 대한 종양 부피의 유의한 용량 의존적 감소를 보여준다. 도 21b는 처리가 개시된 후 일수의 합수로서 처리군에 대한 평균 마우스 체중(그램)이다. 이 그래프는 3개의 처리군의 마우스 중에서 체중의 유의한 차이를 나타내지 않는다. 체중 손실은 처리 독성의 일반적 척도이다.
모든 동물 연구는 콜로라도 덴버 안슈츠 메디칼 캠퍼스 대학(미국 콜로라도주 오로라 소재)에서 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 동물 프로토콜 절차에 따라 수행하였다.
실시예 19: CHD1L 억제제의 선택된 생물학적 활성의 요약표
표 6은 본원에 기재된 특정한 CHD1L 억제제에 대한 Cat-CHD1L 활성, 3D 세포독성 데이터 및 마이크로솜 안정성 데이터의 요약을 제공한다. 이러한 생물학적 활성을 측정하는 방법은 상기 실시예에 기재된다. 또한 생물학적 활성을 평가하는 방법의 추가적인 세부사항 및 설명에 대하여 문헌[Abbott et al., 2020] 및 문헌[Prigaro et al., 2022]을 참조한다.
Figure pct00121
Figure pct00122
Figure pct00123
화합물 57(6.5), 52(6.11), 54(6.16), 28(6.18), 31(6.21), 75(6.31), 118(6.33), 120(6.35), 123(6.38) 및 150(6.58)은 SW620 세포에서 세포독성의 10 uM 미만의 IC50을 나타낸다. 화합물 57, 52, 54, 28, 31, 75, 118, 120, 123 및 150 중 어느 하나는 특히 본 발명의 치료 방법, 조합 요법, 약제학적 조성물 및 약제학적 조합물에서 유용하다.
참조 문헌
Figure pct00124
Figure pct00125
Figure pct00126
Figure pct00127
Figure pct00128
Figure pct00129
Figure pct00130
Figure pct00131

Claims (85)

  1. 하기 화학식 I의 CHD1L 억제제, 또는 이의 염 또는 용매화물:
    [화학식 I]
    Figure pct00132

    상기 식에서,
    B 고리는 1개, 2개 또는 3개의 5원 또는 6원 고리를 갖는 임의로 치환된 적어도 2가 헤테로아릴 고리 또는 고리 시스템이고, 이들 고리 중 임의의 2개 또는 3개는 융합된 고리일 수 있고, 여기서 고리는 카보사이클릭, 헤테로사이클릭, 아릴 또는 헤테로아릴 고리이고, 고리 중 적어도 하나는 헤테로아릴이고;
    B 고리에서, 각각의 X는 독립적으로 N 또는 CH로부터 선택되고, 적어도 하나의 X는 N이고;
    RP는 임의로 치환된 1차 또는 2차 아민기 [-N(R2)(R3)] 또는 -(M)x-P 기이고, 여기서 P는 -N(R2)(R3) 또는 아릴 또는 헤테로아릴 기이고, x는 M의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고, M은 임의로 치환된 연결기 -(CH2)n- 또는 -N(R)(CH2)n-이고, 각각의 n은 독립적으로 1-6(포괄적)의 정수이고;
    Y는 -N(R1)-, -CON(R1)-, -N(R1)CO-, -N(R1)CON(R1)-, -O-, -S-, -SO2N(R1)-, 또는 -N(R1)SO2-로 이루어진 군으로부터 선택된 2가 원자 또는 기이고;
    L1은 임의로 치환되고 포화되거나 이중 결합을 함유하는 임의의 1-4개의 탄소 연결기이고, 여기서 x는 L1의 부재 또는 존재를 나타내는 0 또는 1이고;
    A 고리는 1개, 2개 또는 3개의 고리를 갖는 임의로 치환된 적어도 2가 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리 또는 고리 시스템이고, 이들 고리 중 2개 또는 3개는 융합될 수 있고, 각각의 고리는 3-10개의 탄소 원자 및 임의로 1-6개의 헤테로원자를 갖고, 각각의 고리는 임의로 포화, 불포화 또는 방향족이고;
    Z는 -N(R')-, -CON(R')-, -N(R')CO-, -CSN(R')-, -N(R')CS-, -N(R')CON(R')-, -SO2N(R')-, -N(R')SO2-, -CH(CF3)N(R')-, -N(R')CH(CF3)-, -N(R')CH2CON(R')CH2-, -N(R')COCH2N(R')CH2-,
    Figure pct00133
    로부터 선택된 2가 기이거나,
    2가 Z기는 적어도 하나의 질소 고리 구성원을 갖는 5원 또는 6원 헤테로사이클릭 고리, 예를 들면,
    Figure pct00134
    또는
    Figure pct00135
    를 포함하고;
    L2는 임의로 치환되고 포화되거나 이중 결합을 함유하는 임의의 1-4개의 탄소 연결기이고, 여기서 z는 L2의 존재 또는 부재를 나타내는 1 또는 0이고;
    R은 수소, 지방족기, 카보사이클릴기, 아릴기, 헤테로사이클릴기 및 헤테로아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
    각각의 R'은 독립적으로 수소, 지방족기, 카보사이클릴기, 아릴기, 헤테로사이클릴기 및 헤테로아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
    R1은 수소, 지방족기, 카보사이클릴기, 아릴기, 헤테로사이클릴기 및 헤테로아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되고;
    R2 및 R3은 독립적으로 수소, 지방족기, 카보사이클릴기, 아릴기, 헤테로사이클릴기 및 헤테로아릴기로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 임의로 치환되거나,
    R2 및 R3은 이들이 결합되는 N과 함께 포화, 부분 불포화 또는 방향족 고리인 임의로 치환된 5원 내지 10원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
    RA 및 RB는 각각 지시된 A 및 B 고리 또는 고리 시스템 상의 1-10개의 비수소 치환기 또는 모든 이용 가능한 고리 위치 상의 수소를 나타내고, 여기서 RA 및 RB 치환기는 독립적으로 알킬, 할로알킬, 수소, 할로겐, 하이드록실, 시아노, 니트로, 아미노, 일치환 또는 이치환된 아미노(-NRCRD), 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로사이클릴, 알콕시, 아실, -COORC, -OCORC, -CONRCRD, -OCONRCRD, -NRCCORD, -SRC, -SORC, -SO2RC,및 -SO2NRCRD로부터 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로사이클릴, 알콕시, 및 아실은 임의로 치환되고;
    각각의 RC 및 RD는 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 하나 이상의 할로겐, 알킬, 알케닐, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클릴, 아릴 치환된 알킬, 또는 헤테로사이클릴 치환된 알킬로 임의로 치환되고;
    RH는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴 기이고;
    임의의 치환은 하나 이상의 할로겐, 니트로, 시아노, 아미노, 모노- 또는 디-C1-C3 알킬 치환된 아미노, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C1-C3 할로알킬, C1-C6 아실, C1-C6 아실옥시, C1-C6 알콕실카보닐, C6-C12 아릴, C5-C12 헤테로아릴, C3-C12 헤테로사이클릴, C1-C3 알콕시, C1-C6 아실, -COORE, -OCORE, -CONRERF, -OCONRERD, -NRECORF, -SRE, -SORE, -SO2RE, 및 -SO2NRERF에 의한 치환을 포함하고, 여기서 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 아릴, 헤테로사이클릴, 알콕시, 및 아실은 결국 임의로 치환되고,
    각각의 RE 및 RF는 수소, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C1-C3 할로알킬, C6-C12 아릴, C5-C12 헤테로아릴, C3-C12 헤테로사이클릴, C1-C3 알콕시, C1-C6 아실로부터 선택되고, 각각의 이들 기는 하나 이상의 할로겐, 니트로, 시아노, 아미노, 모노- 또는 디-C1-C3 알킬 치환된 아미노, C1-C3 알킬, C2-C4 알케닐, C3-C6 사이클로알킬, C3-C6-사이클로알케닐, C1-C3 할로알킬, C6-C12 아릴, C5-C12 헤테로아릴, C3-C12 헤테로사이클릴, C1-C3 알콕시, C1-C6 아실옥시, C1-C6 알콕시카보닐 및 C1-C6 아실로 임의로 치환되고;
    단, 화합물이 화합물 1-9 중 하나가 아니고 RH가 비치환된 벤질 또는 페닐 고리가 아닌 것은 제외된다.
  2. 제1항에 있어서, A 고리는 비치환된 1,4-페닐렌 또는 비치환된 2,5-피리딜렌인 화합물, 염 또는 용매화물.
  3. 제1항에 있어서, Y는 -NH-, -CONH-, -NHCO-, 또는 -NHCONH-로 이루어진 군으로부터 선택된 기이고, x는 0 또는 1이고, L1은, 존재하는 경우, -CH2-, -CH2-CH2- 또는 CH2-CH2-CH2-인 화합물, 염 또는 용매화물.
  4. 제1항에 있어서, Z는 -NH-, -CONH-, -NHCO-, 또는 -NHCONH-로 이루어진 군으로부터 선택된 기이고, y는 1 또는 0이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2-, -CH2-CH2- 또는 CH2-CH2-CH2-인 화합물, 염 또는 용매화물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RP는 1,3-프로판 설탐기 또는 피롤릴인 화합물, 염 또는 용매화물.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RH는 티오페닐 또는 할로티오페닐인 화합물, 염 또는 용매화물.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RP는 1,3-프로판 설탐기 또는 피롤릴이고, RH는 티오페닐 또는 할로티오페닐인 화합물, 염 또는 용매화물.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RP는 1,3-프로판 설탐기인 화합물, 염 또는 용매화물.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RH는 할로티오페닐인 화합물, 염 또는 용매화물.
  10. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RH는 4-브로모-티오펜-2-일인 화합물, 염 또는 용매화물.
  11. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RH는 4-브로모-티오펜-2-일이고, RP는 피롤-1-일인 화합물, 염 또는 용매화물.
  12. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RP는 모이어티 RN38 또는 RN39 또는 RN1-RN37 중 하나로부터 선택되는 것인 화합물, 염 또는 용매화물.
  13. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RH는 모이어티 R12-1-R12-84 중 하나로부터 선택되는 것인 화합물, 염 또는 용매화물.
  14. 제1항 또는 제2항에 있어서, Y는 -NH-이고, x는 0 또는 1이고, L1은, 존재하는 경우, -CH2-, 또는 -CH2-CH2-인 화합물, 염 또는 용매화물.
  15. 제1항 또는 제2항에 있어서, Z는 -CONH-이고, x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2-, 또는 -CH2-CH2-인 화합물, 염 또는 용매화물.
  16. 제1항 또는 제2항에 있어서, Y는 -NH-이고, x는 0 또는 1이고, L1은, 존재하는 경우, -CH2-, 또는 -CH2-CH2-이고, Z는 -CONH-이고, x는 0 또는 1이고, L2는, 존재하는 경우, -CH2-, 또는 -CH2-CH2-인 화합물, 염 또는 용매화물.
  17. 제1항에 있어서, 하기 화학식 XLVI의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물:
    [화학식 XLVI]
    Figure pct00136

    상기 식에서,
    X1 및 X2는 독립적으로 CH 또는 N이고;
    RB는 수소, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 할로알킬이고;
    b, c 또는 d는 0 또는 정수이고, b는 0 또는 1이고, c는 0 또는 1이고, d는 0 또는 1이고;
    RP는 모이어티 RN1-RN39 중 하나로부터 선택되고;
    RH는 모이어티 R12-1-R12-84 중 하나로부터 선택된다.
  18. 제17항에 있어서, b는 0인 화합물.
  19. 제17항에 있어서, RP는 1,3-프로판 설탐기인 화합물.
  20. 제17항에 있어서, RH는 티오페닐 또는 할로티오페닐인 화합물.
  21. 제17항에 있어서, RP는 1,3-프로판 설탐기이고, RH는 티오페닐 또는 할로티오페닐인 화합물.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, b는 0인 화합물.
  23. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, b는 1이고, c는 0 또는 1인 화합물.
  24. 제17항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, RP는 RN1, RN3, RN9, RN11, RN25, RN26-RN31, RN 33-RN34, RN37, RN38, 또는 RN39로부터 선택되는 것인 화합물.
  25. 제17항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, RH는 R12-5, R12-44, R12-45, R12-58, R12-62, R12-75, R12-79, 또는 R12-80으로부터 선택되는 것인 화합물.
  26. 제17항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, RP는 RN1, RN3, RN9, RN11, RN25, RN26-RN31, RN33-RN34, RN37, RN38, 또는 RN39로부터 선택되고, RH는 R12-5, R12-44, R12-45, R12-58, R12-62, R12-75, R12-79, 또는 R12-80으로부터 선택되는 것인 화합물.
  27. 제17항에 있어서, 하기 화학식의 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물:
    Figure pct00137

    상기 식에서, a는 1 또는 2인 정수이다.
  28. 제27항에 있어서, RH는 티오페닐 또는 할로티오페닐인 화합물, 염 또는 용매화물.
  29. 제27항에 있어서, RH는 4-브로모-티오펜-2-일인 화합물, 염 또는 용매화물.
    [청구항 29]
    제27항에 있어서, a는 1인 화합물, 염 또는 용매화물.
  30. 제27항에 있어서, a는 1이고, RH는 4-브로모-티오펜-2-일인 화합물, 염 또는 용매화물.
  31. 제27항에 있어서, RH는 R12-5, R12-44, R12-45, R12-58, R12-62, R12-75, R12-79, 또는 R12-80로부터 선택되는 것인 화합물, 염 또는 용매화물.
  32. 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, d는 0인 화합물, 염 또는 용매화물.
  33. 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, d는 1인 화합물, 염 또는 용매화물.
  34. 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, RB는 C1-C3 알킬 또는 C1-C3-할로알킬인 화합물, 염 또는 용매화물.
  35. 제27항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, RB는 메틸기 또는 트리플루오로메틸기인 화합물, 염 또는 용매화물.
  36. 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, RB는 트리플루오로메틸기인 화합물, 염 또는 용매화물.
  37. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RB는 단일 할로알킬기인 화합물, 염 또는 용매화물.
  38. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RB는 단일 플루오로알킬기인 화합물, 염 또는 용매화물.
  39. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, RB는 단일 트리플루오로메틸기인 화합물, 염 또는 용매화물.
  40. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 기 RB1-RB17로부터 선택된 모이어티인 화합물, 염 또는 용매화물.
  41. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 모이어티 RB6인 화합물, 염 또는 용매화물.
  42. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 기 RB12-RB17로부터 선택된 모이어티인 화합물, 염 또는 용매화물.
  43. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 기 RB13, RB14 또는 RB16으로부터 선택된 모이어티인 화합물, 염 또는 용매화물.
  44. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 RB15 또는 RB17로부터 선택된 모이어티인 화합물, 염 또는 용매화물.
  45. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 모이어티 RB6인 화합물, 염 또는 용매화물.
  46. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 기 RB12-RB17로부터 선택된 모이어티인 화합물, 염 또는 용매화물.
  47. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 기 RB13, RB14 또는 RB16으로부터 선택된 모이어티인 화합물, 염 또는 용매화물.
  48. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 RB15 또는 RB17로부터 선택된 모이어티인 화합물, 염 또는 용매화물.
  49. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 기 RB1-RB17로부터 선택된 모이어티인 화합물, 염 또는 용매화물.
  50. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 RB12-RB17인 화합물, 염 또는 용매화물.
  51. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, B 고리는 RB15 또는 RB17인 화합물, 염 또는 용매화물.
  52. 화합물 10-177 중 어느 하나로부터 선택된 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물.
  53. 제52항에 있어서, 화합물 155-159 중 어느 하나로부터 선택된 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물.
  54. 제52항에 있어서, 화합물 155, 156, 157, 158 및 159로부터 선택된 화합물.
  55. 제52항에 있어서, 화합물 155인 화합물.
  56. 제52항에 있어서, 화합물 28, 31, 52, 54, 57, 75, 118, 126, 131, 150 또는 169로부터 선택된 화합물인 화합물.
  57. 제52항에 있어서, 화합물 57, 52, 54, 28, 31, 75, 118, 120, 123 및 150로부터 선택된 화합물인 화합물.
  58. 제1항의 화합물, 염 또는 용매화물 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  59. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 화합물, 염 또는 용매화물 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  60. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 화합물, 염 또는 용매화물 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  61. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항의 화합물, 염 또는 용매화물 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  62. 제17항의 화합물, 염 또는 용매화물을 포함하는 약제학적 조성물.
  63. 대안적인 항신생물제 또는 세포독성제와의 조합으로 제1항의 화합물, 염 또는 용매화물을 포함하는 약제학적 조합물.
  64. 대안적인 항신생물제 또는 세포독성제와의 조합으로 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 화합물, 염 또는 용매화물을 포함하는 약제학적 조합물.
  65. 대안적인 항신생물제 또는 세포독성제와의 조합으로 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 화합물, 염 또는 용매화물을 포함하는 약제학적 조합물.
  66. 대안적인 항신생물제 또는 세포독성제와의 조합으로 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항의 화합물, 염 또는 용매화물을 포함하는 약제학적 조합물.
  67. 대안적인 항신생물제 또는 세포독성제와의 조합으로 제17항의 화합물, 염 또는 용매화물을 포함하는 약제학적 조합물.
  68. 제63항에 있어서, 항신생물제 또는 세포독성제는 PARP, 토포이소머라제 또는 티미딜레이트 합성효소의 억제제인 약제학적 조합물.
  69. 제63항에 있어서, 항신생물제 또는 세포독성제는 백금계 항신생물제인 약제학적 조합물.
  70. CHD1L-유도된 암의 치료를 위한, 제1항의 CHD1L 억제제, 또는 제1항의 CHD1L 억제제를 포함하는 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물의 용도.
  71. CHD1L-유도된 암의 치료를 위한, 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항의 CHD1L 억제제, 또는 제58항 내지 제69항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물의 용도.
  72. CHD1L-유도된 암의 치료를 위한, 제1항의 CHD1L 억제제, 또는 제1항의 CHD1L 억제제를 포함하는 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물의 용도.
  73. CHD1L-유도된 암의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항의 CHD1L 억제제, 또는 제58항 내지 제69항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물의 용도.
  74. 제70항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 유방암, 난소암, 췌장암, 폐암, 간암 또는 결장직장암인 용도.
  75. CHD1L-유도된 암을 치료하는 방법으로서, CHD1L-유도된 암의 치료가 필요한 환자에게 제1항의 CHD1L 억제제, 또는 CHD1L 억제제를 포함하는 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 투여된 CHD1L 억제제의 양이 CHD1L 억제에 효과적인 방법.
  76. CHD1L-유도된 암을 치료하는 방법으로서, CHD1L-유도된 암의 치료가 필요한 환자에게 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 CHD1L 억제제, 또는 CHD1L 억제제를 포함하는 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 투여된 CHD1L 억제제의 양이 CHD1L 억제에 효과적인 방법.
  77. CHD1L-유도된 암을 치료하는 방법으로서, CHD1L-유도된 암의 치료가 필요한 환자에게 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 CHD1L 억제제, 또는 CHD1L 억제제를 포함하는 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 투여된 CHD1L 억제제의 양이 CHD1L 억제에 효과적인 방법.
  78. CHD1L-유도된 암을 치료하는 방법으로서, CHD1L-유도된 암의 치료가 필요한 환자에게 제17항의 CHD1L 억제제, 또는 CHD1L 억제제를 포함하는 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 투여된 CHD1L 억제제의 양이 CHD1L 억제에 효과적인 방법.
  79. CHD1L-유도된 암을 치료하는 방법으로서, CHD1L-유도된 암의 치료가 필요한 환자에게 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항의 CHD1L 억제제, 또는 CHD1L 억제제를 포함하는 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 투여된 CHD1L 억제제의 양이 CHD1L 억제에 효과적인 방법.
  80. CHD1L-유도된 암, EMT-유도된 암 또는 TCF-전사 유도된 암에서 종양 성장, 침습 및/또는 전이의 예방이 필요한 환자에게 CHD1L 억제 또는 비정상 TCF 전사의 억제에 효과적인 제1항의 CHD1L 억제제의 양을 투여함으로써, CHD1L-유도된 암, EMT-유도된 암 또는 TCF-전사 유도된 암에서 종양 성장, 침습 및/또는 전이를 예방하는 방법.
  81. CHD1L-유도된 암, EMT-유도된 암 또는 TCF-전사 유도된 암에서 종양 성장, 침습 및/또는 전이의 예방이 필요한 환자에게 CHD1L 억제 또는 비정상 TCF 전사의 억제에 효과적인 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항의 CHD1L 억제제, 또는 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합물의 양을 투여함으로써, CHD1L-유도된 암, EMT-유도된 암 또는 TCF-전사 유도된 암에서 종양 성장, 침습 및/또는 전이를 예방하는 방법.
  82. 암의 치료를 위한 조합 방법으로서, 대안적인 항신생물제 또는 세포독성제와 조합으로 제1항의 CHD1L 억제제를 투여하는 것을 포함하고, CHD1L 및 PARP 억제제, 토포이소머라제 억제제, 백금계 항신생물제 또는 티미딜레이트 합성효소 억제제가 조합된 치료적 유효량으로 조합물에 존재하는 것인 조합 방법.
  83. 암의 치료를 위한 조합 방법으로서, PARP 억제제, 토포이소머라제 억제제, 백금계 항신생물제 또는 티미딜레이트 합성효소 억제제와의 조합으로 제1항의 CHD1L 억제제를 투여하는 것을 포함하고, CHD1L 및 PARP 억제제, 토포이소머라제 억제제, 백금계 항신생물제 또는 티미딜레이트 합성효소 억제제가 조합된 치료적 유효량으로 조합물에 존재하는 것인 조합 방법.
  84. 암의 치료를 위한 조합 방법으로서, 대안적인 항신생물제 또는 세포독성제와의 조합으로 제1항의 CHD1L 억제제를 투여하는 것을 포함하고, CHD1L 및 PARP 억제제, 토포이소머라제 억제제, 백금계 항신생물제 또는 티미딜레이트 합성효소 억제제가 조합된 치료적 유효량으로 조합물에 존재하는 것인 조합 방법.
  85. 암의 치료를 위한 조합 방법으로서, PARP 억제제, 토포이소머라제 억제제, 백금계 항신생물제 또는 티미딜레이트 합성효소 억제제와의 조합으로 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항의 CHD1L 억제제를 투여하는 것을 포함하고, CHD1L 및 PARP 억제제, 토포이소머라제 억제제, 백금계 항신생물제 또는 티미딜레이트 합성효소 억제제가 조합된 치료적 유효량으로 조합물에 존재하는 것인 조합 방법.
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