KR20240077870A - 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법 Download PDF

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조병옥
강은서
박지현
신재영
임이택
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진안당 영농조합법인
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Abstract

본 발명은 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 제조방법으로 제조된 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물, 보다 상세하게는 홍삼박, 비쑥, 당귀 및 백작약의 식물 혼합 추출물과 해양성 부식토 추출물을 혼합하여 제조한 복합물은 항산화 효과 및 면역증진 효과가 우수하므로, 면역증진용 건강기능식품, 수의학적 조성물 또는 사료 첨가제로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법{Immune-enhancing composition comprising complex of mixed plant extract and marine humus extract as effective component and manufacturing method thereof}
본 발명은 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
면역은 인체가 자기 성분 이외의 물질이 생체의 항상성을 깨뜨리거나 자기를 위협하는 것을 배제하기 위해 일어나는 일련의 자기 보호기작으로, 크게 선천적 면역(innate immunosurveillance)과 획득 면역(adaptive immunosurveillance)으로 구분된다.
자연 면역이라고도 하는 선천적 면역은 대식 세포, 자연살해 세포 등을 포함하는 백혈구, TNF-α 등의 다양한 사이토카인, 점액조직, 혈액에 존재하는 보체(complement) 등으로 구성되어 있어 획득 면역이 발생하기 전에 미생물, 바이러스 침입 등의 감염성 병원체뿐만 아니라 노화된 정상세포와 암세포 등에 대해 대식작용(phagocytosis)을 일으켜 1차적인 방어 면역 역할을 담당한다. 선천 면역을 보강하는 역할을 하는 획득 면역은 적응 면역이라고도 하는데, 항원 제시 세포가 포식하여 제시한 항원을 T 세포가 인식하면서 이루어지며, T 세포가 관여하는 세포성 면역과 B 세포가 생산하는 항체에 의한 체액성 면역반응으로 이루어진다. 이처럼 인체는 외부 항원과 같은 외래 물질의 침입 혹은 감염에 대하여 선천적 면역 및 획득 면역이 적절하게 대항하여 항상성을 유지하도록 설계되어 있다.
비장은 림프구와 대식 세포, 자연살해 세포 등 다양한 면역 세포를 형성하는 중요한 면역기관이다. 비장은 혈액에서 유래된 항원에 대해 면역반응을 하며, 노화된 세포 및 손상된 세포를 제거하는 역할도 수행한다.
선천 면역에서 비장 등에 존재하는 대식 세포가 가장 중요한 역할을 담당하는데, 대식 세포는 외부물질 침입을 가장 먼저 인지하여 체액성 면역과 세포성 면역에 관여하며, 활성화되면 증식과 확산능력의 향상, 대식 능력 증강뿐만 아니라 NO(nitric oxide), TNF-α, IL-1β, IL-6 등의 사이토카인을 분비하여 각종 미생물, 바이러스 등 감염성 병원체의 증식을 억제하고 암세포 등에 대해서도 독성을 나타내는 것으로 알려져 있다.
한편, 면역력의 저하는 본래 우리 몸이 가지고 있는 자연치유기능을 점차 약화시켜 다양한 질환 또는 증상을 유발한다. 이를 해결하기 위해서는 근본적으로 면역력 증진이 요구되지만, 면역력은 개인별로 차이가 있어, 장기적인 관점에서 접근할 필요가 있다. 현재까지 면역증진을 목적으로 한 다양한 치료제 또는 보조제가 개발되어 시판되고 있으나, 장기간 복용에 따른 부작용을 이유로 치료제보다는 상대적으로 안전한 보조제, 특히 천연보조제의 사용이 바람직한 방안으로 지목되고 있으며, 이에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.
한편, 한국공개특허 제2022-0089947호에는 '상동나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증진용 조성물'이 개시되어 있고, 한국등록특허 제2203501호에는 '홍삼, 대추 및 길경의 혼합 추출물을 포함하는 항염증 및 면역증진용 조성물'이 개시되어 있으나, 본 발명의 '식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법'에 대해서는 기재된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 본 발명자들은 홍삼박(red ginseng marc), 비쑥(Artemisia scoparia), 백작약(Paeonia japonica) 및 당귀(Angelica gigas)의 식물 혼합 추출물과 해양성 부식토 추출물을 혼합하여 제조한 복합물이 항산화 효과 및 면역증진 효과가 우수한 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 홍삼박(red ginseng marc), 비쑥(Artemisia scoparia), 백작약(Paeonia japonica) 및 당귀(Angelica gigas)로 이루어진 식물 혼합 추출물; 및 미네랄 성분 및 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물;의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀로 이루어진 식물 혼합 추출물; 및 미네랄 성분 및 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물;의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 수의학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀로 이루어진 식물 혼합 추출물; 및 미네랄 성분 및 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물;의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 사료 첨가제를 제공한다.
또한, 본 발명은 (1) 건조된 홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀를 4~6:1~3:1~3:0.5~1.5의 중량비로 혼합한 후 추출용매를 첨가하고 90~100℃에서 30~90분 동안 추출하여 식물 혼합 추출물을 제조하고, 하기 표 1의 미네랄 성분과 표 2의 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물 1 중량부에 대하여 300~400 중량부의 물을 첨가하여 희석하는 단계; 및
미네랄 성분(mg/ℓ)
성분 함유량 성분 함유량 성분 함유량
나트륨(Na) 91.00 칼륨(K) 20.00 칼슘(Ca) 240.00
마그네슘(Mg) 92.00 유황(S) 1,170.00 규소(Si) 38.00
스트론튬(Sr) 2.00 철(Fe) 20.00 망간(Mn) 6.80
알루미늄(Al) 330 아연(Zn) 3.10 이트륨(Y) 0.40
니켈(Ni) 0.22 리튬(Li) 0.30 구리(Cu) 0.62
베리움(Be) 0.10 셀레늄(Se) 2.40 붕소(B) 0.60
코발트(Co) 0.20
아미노산 성분(mg/100g)
성분 함유량 성분 함유량 성분 함유량
아르기닌 71 리신 105 히스티딘 33
페닐알라닌 90 티로신 49 류신 117
이소류신 81 메티오닌 24 발린 123
알라닌 131 글리신 136 프롤린 91
글루탐산 166 세린 83 트레오닌 93
아스파르트산 184 트립토판 12 시스테인 52
(2) 상기 (1) 단계의 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물을 2~3:97~98의 중량비로 혼합하여 복합물을 획득하는 단계;를 포함하는 면역증진용 복합물의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 식물 혼합 추출물 및 해앙성 부식토 추출물의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 제조방법으로 제조된 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물, 보다 상세하게는 홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀의 식물 혼합 추출물과 해양성 부식토 추출물을 혼합하여 제조한 복합물은 DPPH 라디칼 소거능, ABTS 라디칼 소거능, GSH 활성, SOD 활성 및 카탈라아제 활성이 우수하고, T 림프구 및 비장세포의 증식을 증가시키며, T 림프구에서 IL-2, IL-6, IL-10의 발현량 및 CD4+, CD8+ 세포수를 증가시키는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 복합물의 DPPH 라디칼 소거능(A) 및 ABTS 라디칼 소거능(B)을 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명의 복합물의 GSH 활성(A), SOD 활성(B) 및 카탈라아제 활성(C)을 확인한 결과이다. 도면 내 서로 다른 문자 a~d는 유의미한 차이가 있다는 것으로, p<0.05이다.
도 3은 본 발명의 복합물의 비장세포(A) 및 T 림프구(B)의 증식능을 확인한 결과이다. CON은 아무것도 처리하지 않은 대조군이고, ConA는 T 세포 증식 촉진제인 콘카나발린 A(concanavalin A) 처리군이다. 도면 내 서로 다른 문자 a~f는 유의미한 차이가 있다는 것으로, p<0.05이다.
도 4는 본 발명의 복합물 처리에 따른 T 림프구에서의 IL-2(A), IL-6(B) 및 IL-10(C)의 발현량을 확인한 결과이다. CON은 아무것도 처리하지 않은 대조군이고, ConA는 T 세포 증식 촉진제인 콘카나발린 A(concanavalin A) 처리군이다. 도면 내 서로 다른 문자 a~d는 유의미한 차이가 있다는 것으로, p<0.05이다.
도 5는 본 발명의 복합물 처리에 따른 T 림프구에서의 CD4+ 세포수 및 CD8+
세포수를 측정한 결과이다. neg는 아무것도 처리하지 않은 음성 대조군이고, pos는 T 세포 증식 촉진제인 콘카나발린 A(concanavalin A) 처리군이며, 식물 혼합 추출물은 홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀 혼합 추출물 처리군이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 홍삼박(red ginseng marc), 비쑥(Artemisia scoparia), 백작약(Paeonia japonica) 및 당귀(Angelica gigas)로 이루어진 식물 혼합 추출물; 및 미네랄 성분 및 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물;의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀의 혼합비는 바람직하게는 4~6:1~3:1~3:0.5~1.5의 중량비인 것이며, 더 바람직하게는 5:2:2:1의 중량비인 것이나, 이에 제한되지 않는다.
상기 미네랄 성분은 나트륨(Na), 마그네슘(Mg), 스트론튬(Sr), 알루미늄(Al), 니켈(Ni), 베리움(Be), 코발트(Co), 칼륨(K), 유황(S), 철(Fe), 아연(Zn), 리튬(Li), 셀레늄(Se), 칼슘(Ca), 규소(Si), 망간(Mn), 이트륨(Y), 구리(Cu) 및 붕소(B)이고, 상기 아미노산 성분은 아르기닌, 페닐알라닌, 이소류신, 알라닌, 글루탐산, 아스파르트산, 리신, 티로신, 메티오닌, 글리신, 세린, 트립토판, 히스티딘, 류신, 발린, 프롤린, 트레오닌 및 시스테인인 것이나, 이에 제한되지 않는다(표 1 및 표 2 참고).
상기 식물 혼합 추출물의 추출 용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물일 수 있고, 바람직하게는 물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 비쑥은 바람직하게는 지상부를 사용할 수 있고, 상기 백작약 및 당귀는 바람직하게는 뿌리 부위를 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 해양성 부식토 추출물은 바람직하게는 매몰된 해저 동물, 식물 플랑크톤 유해, 조류, 다시마 등이 퇴적되어 부식한 해양성 부식토 추출 엑기스로, 미네랄 및 아미노산을 함유하고 있는 옅은 갈색의 투명한 액체(pH 2.8)이다(한국등록특허 제2414642호 참고).
상기 해양성 부식토 추출물은 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물로 희석하여 사용할 수 있고, 바람직하게는 물로 희석하여 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 해양성 부식토 추출물 1 중량부에 대하여 300~400 중량부의 물을 첨가하여 희석하여 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 해양성 부식토 추출물 1 중량부에 대하여 350 중량부의 물을 첨가하여 희석하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물은 바람직하게는 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물이 2~3:97~98의 중량비로 혼합된 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물이 2.5:97.5의 중량비로 혼합된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물은 항산화 효과가 있는 것이 특징이며, T 림프구 및 비장세포의 증식을 증가시키고, T 림프구에서 IL-2, IL-6, IL-10의 발현량 및 CD4+, CD8+ 세포수를 증가시키는 효과가 있다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 또는 음료의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 장기간 섭취하는 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 홍삼박(red ginseng marc), 비쑥(Artemisia scoparia), 백작약(Paeonia japonica) 및 당귀(Angelica gigas)로 이루어진 식물 혼합 추출물; 및 미네랄 성분 및 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물;의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 수의학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 수의학적 조성물에 있어서, 상기 식물 혼합 추출물, 해양성 부식토 추출물 및 복합물은 전술한 것과 같다.
본 발명의 수의학적 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 수의학적 조성물에 포함될 수 있는 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 세탄올, 스테아릴알콜, 유동파라핀, 솔비탄모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 메칠파라벤, 프로필파라벤 및 광물유를 들 수 있다. 본 발명에 따른 수의학적 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향신료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있는데, 본 발명에 따른 수의학적 조성물은 동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있고, 제형은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 좌제, 멸균 주사용액, 멸균 외용제 등의 형태일 수 있다.
본 발명에 따른 수의학적 조성물의 유효한 양은 동물의 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 질환 내지 상태의 중증도, 개체의 연령, 체중, 건강상태 또는 성별에 따른 본 발명의 유효성분에 대한 민감도, 투여 경로, 투여 기간, 상기 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 다른 조성물을 포함한 요소 및 기타 생리 내지 수의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
또한, 본 발명은 홍삼박(red ginseng marc), 비쑥(Artemisia scoparia), 백작약(Paeonia japonica) 및 당귀(Angelica gigas)로 이루어진 식물 혼합 추출물; 및 미네랄 성분 및 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물;의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 사료 첨가제를 제공한다.
본 발명의 사료 첨가제에 있어서, 상기 식물 혼합 추출물, 해양성 부식토 추출물 및 복합물은 전술한 것과 같다.
본 발명의 사료 첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다. 본 발명에서 용어 '사료'는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은
(1) 건조된 홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀를 4~6:1~3:1~3:0.5~1.5의 중량비로 혼합한 후 추출용매를 첨가하고 90~100℃에서 30~90분 동안 추출하여 식물 혼합 추출물을 제조하고, 하기 표 1의 미네랄 성분과 표 2의 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물 1 중량부에 대하여 300~400 중량부의 물을 첨가하여 희석하는 단계; 및
(2) 상기 (1) 단계의 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물을 2~3:97~98의 중량비로 혼합하여 복합물을 획득하는 단계;를 포함하는 면역증진용 복합물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 면역증진용 복합물의 제조방법은 바람직하게는
(1) 건조된 홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀를 5:2:2:1의 중량비로 혼합한 후 물을 첨가하고 95℃에서 60분 동안 추출하여 식물 혼합 추출물을 제조하고, 상기 표 1의 미네랄 성분과 표 2의 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물 1 중량부에 대하여 350 중량부의 물을 첨가하여 희석하는 단계; 및
(2) 상기 (1) 단계의 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물을 2.5:97.5의 중량비로 혼합하여 복합물을 획득하는 단계;를 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물 제조
건조된 홍삼박 75g, 비쑥 30g, 백작약 30g 및 당귀 15g을 혼합한 다음, 물 3ℓ를 첨가하고, 95℃에서 60분 동안 추출하여 식물 혼합 추출물을 제조하였다. 하기 표 1의 미네랄 성분과 표 2의 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물(네오맥스, (주)화조바이오)을 물로 350배 희석하여 준비하였다. 이후, 식물 혼합 추출물 및 부식토 추출물을 2.5:97.5의 중량비로 혼합하여 복합물을 제조하였다.
[세포 배양]
T 림프구(VICK 세포)는 ATCC에서 구입하였으며, 5% FBS(Gibco, 미국)와 1% 페니실린 및 스트렙토마이신(Sigma, 미국)이 함유된 RPMI(Gibco, 미국) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다.
비장세포(splenocyte)는 토종닭로부터 적출된 비장을 멸균된 슬라이드 글래스로 으깨고, 메쉬 필터로 걸러준 후 RBC 버퍼를 사용하여 분리하였고, RPMI 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다.
실시예 1. 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물의 항산화 효과 분석
1-1. DPPH 라디칼 소거능 및 ABTS 라디칼 소거능 측정
DPPH 라디컬 소거능은 본 발명의 복합물 시료와 0.3mM DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)를 각각 1:1 부피비로 혼합하고, 실온에서 20분간 반응시킨 다음 540nm에서 흡광도를 측정한 후, 하기 식에 대입하여 계산하였다.
DPPH 라디칼 소거능(%)={1-(시료 첨가군 흡광도/시료 무첨가군 흡광도)}×100
ABTS 라디칼 소거능은 7.4mM ABTS(2.2-azino-bis(3-rthylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)와 2.6mM 과황산칼륨(potassium persulphate)을 혼합하여 실온인 암소에서 24시간 동안 방치한 후, 본 발명의 복합물 시료를 첨가하여 암소에서 30분간 반응시킨 다음 732nm에서 흡광도를 측정한 후, 하기 식에 대입하여 계산하였다.
ABTS 라디칼 소거능(%)={1-(시료 첨가군 흡광도/시료 무첨가군 흡광도)}×100
그 결과, 본 발명의 복합물의 DPPH 라디칼 소거능 및 ABTS 라디칼 소거능은 은 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다(도 1).
1-2. SOD 활성, GSH 활성 및 카탈라아제 활성 측정
T 림프구(VICK 세포) 및 비장세포(splenocyte)를 60mm 디쉬에 4×105 세포/㎖이 되도록 분주하고, 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양한 후, 본 발명의 복합물(100 또는 200㎍/㎖)을 1시간 동안 전처리한 다음, 250μM H2O2를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 이후, 세포 배양액을 수거하여 GSH(glutathione) 어세이 키트, SOD(superoxide dismutase) 어세이 키트 및 카탈라아제(catalase) 어세이 키트(Cayman Chemical., 미국)를 사용하여 각각의 활성을 측정하였다.
그 결과, 본 발명의 복합물의 GSH 활성, SOD 활성 및 카탈라아제 활성은 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다(도 2).
실시예 2. 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물의 복합물의 면역증진 효과 분석
2-1. 세포 증식능 측정
T 림프구(VICK 세포) 및 비장세포(splenocyte)를 96웰 플레이트에 5×105 세포/㎖이 되도록 분주하고, 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양한 후, 본 발명의 복합물(12.5, 25, 50, 100 또는 200㎍/㎖)을 1시간 동안 처리한 다음, EZ-cytox Cell Viability Assay kit((주)대일바이오텍, 대한민국)를 사용 하여 세포 증식능을 측정하였다. T 세포 증식 촉진제인 콘카나발린 A(concanavalin A) 처리군을 양성 대조군으로 이용하였다.
그 결과, 본 발명의 복합물은 T 림프구 및 비장세포의 증식을 촉진시키는 것을 확인하였다(도 3).
2-2. IL-2, IL-6 및 IL-10 사이토카인 발현량 측정
T 림프구(VICK 세포)를 6웰 플레이트에 최종 농도가 5×106 세포/㎖이 되도록 분주하고, 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양한 후, 본 발명의 복합물(100 또는 200㎍/㎖)을 1시간 동안 처리한 다음, RNA를 추출하여 IL-2, IL-6 및 IL-10의 발현량을 측정하였다. T 세포 증식 촉진제인 콘카나발린 A(concanavalin A) 처리군을 양성 대조군으로 이용하였다.
그 결과, 본 발명의 복합물은 T 림프구에서 IL-2, IL-6 및 IL-10의 발현량을 증가시키는 것을 확인함으로써 면역증진 효과가 우수한 것을 알 수 있었다(도 4).
2-3. CD4+ 세포수 및 CD8+ 세포수 측정
T 림프구(VICK 세포)를 6웰 플레이트에 최종 농도가 5×106 세포/㎖이 되도록 분주하고, 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양한 후, 본 발명의 복합 물(100 또는 200㎍/㎖)을 1시간 동안 처리한 다음, FITC-CD4 항체 및 PE-CD8 항체 희석한 FACS 버퍼에 부유시킨후 1시간 동안 배양한 후, 유세포분석(flow cytometry) 장치를 이용하여 CD4+ 세포 및 CD8+ 세포수를 측정하였다.
그 결과, 본 발명의 복합물은 T 림프구에서 CD4+ 세포수 및 CD8+ 세포수를 증가시키는 것을 확인함으로써 면역기능을 증진시킬 수 있음을 알 수 있었다.
또한, 본 발명의 복합물(홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀 혼합 추출물+해양성 부식토 추출물)은 식물 혼합 추출물(홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀 혼합 추출물)보다 면역증진 효과가 우수한 것을 확인하였다(도 5).

Claims (9)

  1. 홍삼박(red ginseng marc), 비쑥(Artemisia scoparia), 백작약(Paeonia japonica) 및 당귀(Angelica gigas)로 이루어진 식물 혼합 추출물; 및 미네랄 성분 및 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물;의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀의 혼합비는 4~6:1~3:1~3:0.5~1.5의 중량비인 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 미네랄 성분은 나트륨(Na), 마그네슘(Mg), 스트론튬(Sr), 알루미늄(Al), 니켈(Ni), 베리움(Be), 코발트(Co), 칼륨(K), 유황(S), 철(Fe), 아연(Zn), 리튬(Li), 셀레늄(Se), 칼슘(Ca), 규소(Si), 망간(Mn), 이트륨(Y), 구리(Cu) 및 붕소(B)이고, 상기 아미노산 성분은 아르기닌, 페닐알라닌, 이소류신, 알라닌, 글루탐산, 아스파르트산, 리신, 티로신, 메티오닌, 글리신, 세린, 트립토판, 히스티딘, 류신, 발린, 프롤린, 트레오닌 및 시스테인인 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 식물 혼합 추출물의 추출용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 복합물은 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물이 2~3:97~98의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 복합물은 항산화 효과가 있는 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
  7. 홍삼박(red ginseng marc), 비쑥(Artemisia scoparia), 백작약(Paeonia japonica) 및 당귀(Angelica gigas)로 이루어진 식물 혼합 추출물; 및 미네랄 성분 및 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물;의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 수의학적 조성물.
  8. 홍삼박(red ginseng marc), 비쑥(Artemisia scoparia), 백작약(Paeonia japonica) 및 당귀(Angelica gigas)로 이루어진 식물 혼합 추출물; 및 미네랄 성분 및 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물;의 복합물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 사료 첨가제.
  9. (1) 건조된 홍삼박, 비쑥, 백작약 및 당귀를 4~6:1~3:1~3:0.5~1.5의 중량비로 혼합한 후 추출용매를 첨가하고 90~100℃에서 30~90분 동안 추출하여 식물 혼합 추출물을 제조하고, 하기 표 1의 미네랄 성분과 표 2의 아미노산 성분을 포함하는 해양성 부식토 추출물 1 중량부에 대하여 300~400 중량부의 물을 첨가하여 희석하는 단계; 및

    (2) 상기 (1) 단계의 식물 혼합 추출물 및 해양성 부식토 추출물을 2~3:97~98의 중량비로 혼합하여 복합물을 획득하는 단계;를 포함하는 면역증진용 복합물의 제조방법.
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