KR20240067070A - 경부 이상긴장증의 치료에 사용하기 위한 변형된 bont/a - Google Patents
경부 이상긴장증의 치료에 사용하기 위한 변형된 bont/a Download PDFInfo
- Publication number
- KR20240067070A KR20240067070A KR1020247008446A KR20247008446A KR20240067070A KR 20240067070 A KR20240067070 A KR 20240067070A KR 1020247008446 A KR1020247008446 A KR 1020247008446A KR 20247008446 A KR20247008446 A KR 20247008446A KR 20240067070 A KR20240067070 A KR 20240067070A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- asn
- modified bont
- bont
- amino acid
- administered
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 155
- 206010044074 Torticollis Diseases 0.000 title claims abstract description 135
- 201000002866 cervical dystonia Diseases 0.000 title claims abstract description 122
- 101100272852 Clostridium botulinum (strain Langeland / NCTC 10281 / Type F) F gene Proteins 0.000 title 1
- 101710117542 Botulinum neurotoxin type A Proteins 0.000 claims abstract description 1027
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 370
- 230000005945 translocation Effects 0.000 claims abstract description 73
- 101710117524 Botulinum neurotoxin type B Proteins 0.000 claims abstract description 64
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims abstract description 58
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims abstract description 52
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims abstract description 52
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims abstract description 28
- 210000004237 neck muscle Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 108010057266 Type A Botulinum Toxins Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 462
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 324
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 230
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 166
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 claims description 150
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 140
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 120
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 120
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 80
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 78
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 76
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 claims description 68
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 67
- 231100000111 LD50 Toxicity 0.000 claims description 66
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 55
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 55
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 50
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 50
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 46
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 46
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 41
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 38
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 35
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 29
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 23
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 23
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 22
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 21
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 17
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 16
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 16
- 210000003109 clavicle Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000004475 Arginine Chemical group 0.000 claims description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 9
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Chemical group OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 9
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 6
- 210000001595 mastoid Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 6
- 210000001991 scapula Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical group NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 2
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 claims description 2
- -1 Here Chemical class 0.000 claims 1
- 210000000103 occipital bone Anatomy 0.000 claims 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 569
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 568
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 134
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 99
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 73
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 66
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 53
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 50
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 50
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 42
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 42
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 35
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 35
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 34
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 32
- 230000009471 action Effects 0.000 description 31
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 30
- 101710138657 Neurotoxin Proteins 0.000 description 29
- 108010057722 Synaptosomal-Associated Protein 25 Proteins 0.000 description 29
- 102000004183 Synaptosomal-Associated Protein 25 Human genes 0.000 description 29
- 108010079650 abobotulinumtoxinA Proteins 0.000 description 29
- 229940098753 dysport Drugs 0.000 description 29
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 26
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 22
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 20
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 18
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 16
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 15
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 14
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 14
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 13
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 13
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 12
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 12
- 208000018197 inherited torticollis Diseases 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 11
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 10
- 231100001103 botulinum neurotoxin Toxicity 0.000 description 9
- 231100001102 clostridial toxin Toxicity 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 231100000062 no-observed-adverse-effect level Toxicity 0.000 description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 9
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 102000000583 SNARE Proteins Human genes 0.000 description 8
- 108010041948 SNARE Proteins Proteins 0.000 description 8
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 8
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 8
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 8
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 8
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 7
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 241000489861 Maximus Species 0.000 description 6
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 6
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 6
- 230000003447 ipsilateral effect Effects 0.000 description 6
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 6
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 6
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 5
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 5
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 208000009782 Plagiocephaly Diseases 0.000 description 4
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 4
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002020 noncytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 description 4
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 4
- 210000005250 spinal neuron Anatomy 0.000 description 4
- 230000024188 startle response Effects 0.000 description 4
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 4
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 3
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 101001018085 Lysobacter enzymogenes Lysyl endopeptidase Proteins 0.000 description 3
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 3
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 3
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000003105 phrenic nerve Anatomy 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- PDRJLZDUOULRHE-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-3-pyridin-2-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=N1 PDRJLZDUOULRHE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- FQFVANSXYKWQOT-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-pyridin-4-ylpropanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=NC=C1 FQFVANSXYKWQOT-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- 102100021277 Beta-secretase 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710150190 Beta-secretase 2 Proteins 0.000 description 2
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 2
- 108091060545 Nonsense suppressor Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 101100008874 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) DAS2 gene Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000028752 abnormal posture Diseases 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-IMJSIDKUSA-N cis-4-Hydroxy-L-proline Chemical compound O[C@@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 2
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000002638 denervation Effects 0.000 description 2
- 230000000632 dystonic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 238000013178 mathematical model Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 2
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 210000000715 neuromuscular junction Anatomy 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 230000037434 nonsense mutation Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 2
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 2
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 230000016978 synaptic transmission, cholinergic Effects 0.000 description 2
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WTKYBFQVZPCGAO-LURJTMIESA-N (2s)-2-(pyridin-3-ylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=CN=C1 WTKYBFQVZPCGAO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CN=C1 DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- FXGZFWDCXQRZKI-VKHMYHEASA-N (2s)-5-amino-2-nitramido-5-oxopentanoic acid Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)N[N+]([O-])=O FXGZFWDCXQRZKI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- CCAIIPMIAFGKSI-DMTCNVIQSA-N (2s,3r)-3-hydroxy-2-(methylazaniumyl)butanoate Chemical compound CN[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CCAIIPMIAFGKSI-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- CNPSFBUUYIVHAP-WHFBIAKZSA-N (2s,3s)-3-methylpyrrolidin-1-ium-2-carboxylate Chemical compound C[C@H]1CCN[C@@H]1C(O)=O CNPSFBUUYIVHAP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDUUKBXTEOFITR-BYPYZUCNSA-N 2-methyl-L-serine Chemical compound OC[C@@]([NH3+])(C)C([O-])=O CDUUKBXTEOFITR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- XEVFXAFXZZYFSX-UHFFFAOYSA-N 3-azabicyclo[2.1.1]hexane-4-carboxylic acid Chemical compound C1C2CC1(C(=O)O)NC2 XEVFXAFXZZYFSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XWHHYOYVRVGJJY-QMMMGPOBSA-N 4-fluoro-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(F)C=C1 XWHHYOYVRVGJJY-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 1
- 240000000736 Amomum maximum Species 0.000 description 1
- 101000879393 Aplysia californica Synaptobrevin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000186542 Clostridium baratii Species 0.000 description 1
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 206010013887 Dysarthria Diseases 0.000 description 1
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 description 1
- 101000874762 Homo sapiens Synaptotagmin-2 Proteins 0.000 description 1
- YZJSUQQZGCHHNQ-UHFFFAOYSA-N Homoglutamine Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(N)=O YZJSUQQZGCHHNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N L-pipecolic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]1CCCC[NH2+]1 HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 208000016285 Movement disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- 206010028311 Muscle hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- PQNASZJZHFPQLE-LURJTMIESA-N N(6)-methyl-L-lysine Chemical compound CNCCCC[C@H](N)C(O)=O PQNASZJZHFPQLE-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 102000004390 N-Ethylmaleimide-Sensitive Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010081735 N-Ethylmaleimide-Sensitive Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010028836 Neck pain Diseases 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010030544 Peptidyl-Lys metalloendopeptidase Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015799 Qa-SNARE Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010010469 Qa-SNARE Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 101710087249 Small toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000006384 Soluble N-Ethylmaleimide-Sensitive Factor Attachment Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010019040 Soluble N-Ethylmaleimide-Sensitive Factor Attachment Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 208000003217 Tetany Diseases 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100035054 Vesicle-fusing ATPase Human genes 0.000 description 1
- 241000269370 Xenopus <genus> Species 0.000 description 1
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 description 1
- 102000036861 Zinc-dependent endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091006982 Zinc-dependent endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- CDUUKBXTEOFITR-UHFFFAOYSA-N alpha-methylserine Natural products OCC([NH3+])(C)C([O-])=O CDUUKBXTEOFITR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000689 aminoacylating effect Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- XNBJHKABANTVCP-REOHCLBHSA-N beta-guanidino-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CN=C(N)N XNBJHKABANTVCP-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009141 biological interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 229940089093 botox Drugs 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000749 chronicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000003029 clitoris Anatomy 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000012938 design process Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003210 dopamine receptor blocking agent Substances 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000002003 electron diffraction Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012526 feed medium Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108010055409 ganglioside receptor Proteins 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000004886 head movement Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 102000054004 human SYT2 Human genes 0.000 description 1
- MWFRVMDVLYIXJF-BYPYZUCNSA-N hydroxyethylcysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CSCCO MWFRVMDVLYIXJF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 108010024001 incobotulinumtoxinA Proteins 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000010189 intracellular transport Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- GCHPUFAZSONQIV-UHFFFAOYSA-N isovaline Chemical compound CCC(C)(N)C(O)=O GCHPUFAZSONQIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N l-pipecolic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCCCN1 HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 230000012042 muscle hypertrophy Effects 0.000 description 1
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000002856 peripheral neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005222 photoaffinity labeling Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 108010055896 polyornithine Proteins 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 230000036544 posture Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003518 presynaptic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 210000003314 quadriceps muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108010074523 rimabotulinumtoxinB Proteins 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000018448 secretion by cell Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 102000003137 synaptotagmin Human genes 0.000 description 1
- 108060008004 synaptotagmin Proteins 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000901 systemic toxic effect Toxicity 0.000 description 1
- NPDBDJFLKKQMCM-UHFFFAOYSA-N tert-butylglycine Chemical compound CC(C)(C)C(N)C(O)=O NPDBDJFLKKQMCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- ATCJTYORYKLVIA-SRXJVYAUSA-N vamp regimen Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1.C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1.C([C@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C(C45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C=O)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 ATCJTYORYKLVIA-SRXJVYAUSA-N 0.000 description 1
- 230000028973 vesicle-mediated transport Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 229940018272 xeomin Drugs 0.000 description 1
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 1
- 239000005019 zein Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
- A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Clostridium (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
- C12Y304/24069—Bontoxilysin (3.4.24.69), i.e. botulinum neurotoxin
Abstract
본 발명은 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)를 포함한 변형된 BoNT/A를 사용하는 경부 이상긴장증의 치료에 관한 것이며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고, 여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고, 여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다. 또한, 관련 방법, 용도, 단위 투여 형태 및 키트가 제공된다.
Description
본 발명은 경부 이상긴장증의 치료에 관한 것이다.
경부 이상긴장증 (연축성 사경으로 또한 공지됨)은 전형적으로 극도 통증과 연관된 만성 신경계 운동 장애이다. 장애는 이환 대상체의 경부가 좌측, 우측, 상향 및/또는 하향으로 불수의적으로 돌아가게 한다. 주동근 및 길항근 둘 다 이상긴장성 운동 중에 수축될 수 있다.
장애는 전형적으로 비교적 경도 증상, 예컨대 발병 시 수개월 동안 두부의 비가시적 진전을 나타낸다. 다른 조기/진행성 증상은 갑작스런 움직임에서의 두부 회전, 당김 및/또는 기울임을 포함할 수 있다. 추가의 조기/진행성 증상은 전형적으로 지속/연장된 불수의적 두부 위치결정을 포함한다. 불수의적 경부 근육 연축은 정체기에 도달하기 전에 시간 경과에 따라 빈도 및 강도가 증가하는 경향이 있다. 경부 이상긴장증을 갖는 대상체는 또한 근육 비대, 경부통, 구음장애 및/또는 진전을 경험할 수 있다.
경부 이상긴장증의 증상은 대상체의 임의의 경부 근육을 수반할 수 있고, 두부 자세가 달라질 수 있다. 전형적으로, 경부 이상긴장증과 연관된 가장 흔한 비정상적 자세는 턱을 어깨 쪽으로 비틀어 두부를 옆으로 회전시키는 것(사경)이다. 경부 이상긴장증과 연관된 다른 비정상적 자세는 두부가 전방으로 기울어지는 전경, 두부가 후방으로 기울어지는 후경, 또는 두부가 한쪽으로 기울어지는 측경을 포함할 수 있다. 또한, 전방 시상 이동 (전방 이동) 또는 후방 시상 이동 (후방 이동)으로 어깨 상의 두부의 이동이 있을 수 있다. 그러나, 가장 통상적으로, 경부 이상긴장증은 대상체가 두부 움직임의 여러 각도를 나타내는 복합 증상을 나타낸다.
현행 치료 옵션은 경구 의약 (예를 들어, 도파민 차단제), 심부 뇌 자극, 보툴리눔 신경독소, 및 근육 수축을 촉발하는 신경의 선택적 외과적 탈신경을 포함한다. 통상적인 경구 의약은 다수의 심각한 부작용과 연관된 반면에, 심부 뇌 자극 및 외과적 탈신경은 침습성이고/거나, 합병증의 연관된 위험을 갖고/거나, 비효과적일 수 있다.
경부 이상긴장증에 대한 통상적인 보툴리눔 신경독소 혈청형 A (BoNT/A) 치료의 예는 클로스트리디움 보툴리눔 유형 A 균주로부터 단리 및 정제된 약물 물질 BoNT/A 헤마글루티닌 복합체 (BTX-A-HAC)를 함유하는 의약품인 디스포르트(Dysport)®이다. 클로스트리디움 보툴리눔에 의해 자연적으로 생산된 여러 다른 의약 BoNT/A 제품 (예를 들어, 보톡스(BOTOX)® 및 제오민(XEOMIN)®)이 또한 시판되고 있다.
이상긴장성 길항근을 마비시킴으로써, BoNT/A는 주동근이 자유롭게 이동하도록 할 수 있다. 보다 상세하게, BoNT/A는 시냅스전 신경 말단으로부터의 아세틸콜린의 방출을 선택적으로 억제하고, 따라서 신경근 접합부에서의 콜린성 전달을 차단하여 근육 수축 및 근긴장도의 감소를 유도함으로써 주사된 근육을 이완시킨다. 그러나, 현재 이용가능한 BoNT/A 제품의 작용 지속기간은 약 12 내지 14주이며, 이 때 새로운 신경 종말 발아가 신경 기능을 정상으로 복귀시키고, 원래 증상이 다시 나타난다. 결과적으로, 효과를 유지하기 위해, 주사는 주기적으로 반복될 필요가 있다. 따라서, 상태의 만성 및 요구되는 치료의 장기 성질을 고려하여 BoNT/A 주사의 빈도는 경부 이상긴장증의 치료에 대한 중요한 고려사항이다. 실제로, 이는 환자 및 보호자에게 수반되는 직접 및 간접 건강 비용, 병원/클리닉 내 주사를 위한 물류, 및 가장 중요하게는 환자의 삶의 질에 영향을 미친다.
디스포르트®는 1,000 단위의 치료 세션당 최대 총 용량으로 경부 이상긴장증의 치료에 대해 승인되었다 (도 1 참조). 임상의는 대상체의 경부 근육에 디스포르트®를 치료 세션당 총 1,000 단위의 상한 역치까지 투여할 것이 요구된다. 임상의는 환자의 치료 동안 어려운 선택을 하도록 강요받는다. 다시 말해서, 통상적인 치료 요법에서, 임상의는 투여될 수 있는 BoNT/A의 비교적 낮은 총량 (1,000 단위 - BoNT/A의 고도로 독성인 성질에 의해 필요함)과 복수의 상이한 근육에서의 유효량 사이의 균형을 찾아야 한다. 따라서, 특정 근육은 무시되는 반면에, 다른 근육은 준최적량의 BoNT/A를 투여받아 준최적 요법을 초래한다.
더욱이, 통상적인 경부 이상긴장증 치료 요법은 복잡하고, 환자에게 독성을 피하기 위한 노력으로 임상의가 과소-투여하게 한다. 따라서, 환자 독성을 초래하지 않으면서 치료 세션에서 이환 경부 근육에 투여될 수 있는 단위의 수 (예를 들어, 근육당 주사 부위의 수 포함)에 대한 편리하고 안전하고 효과적인 단일 용량 단위 및 상응하는 가이드에 대한 필요가 존재한다.
결론적으로, 독성을 피하고 보다 오래 지속되는 치료 (덜 빈번한 투여를 유발함)를 제공하면서, 이환 경부 근육의 상이한 조합이 경부 이상긴장증의 분포, 정도 및 중증도에 따라 주사되는 것을 허용하는 표적화된 임상 패턴에 따라 치료를 맞추기 위한 개별화된 환자-중심 접근법을 가능하게 할 경부 이상긴장증에 대한 개선된 치료에 대한 필요가 존재한다.
본 발명은 상기 언급된 문제 중 하나 이상을 극복한다.
본 발명자들은 놀랍게도 변형된 BoNT/A가 경부 이상긴장증을 치료하는 데 특정한 유용성을 발견한다는 것을 발견하였다. 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함할 수 있으며, 이는 투여 부위에서의 증가된 체류 (그로부터의 감소된 확산) 및/또는 증가된 작용 지속기간 (예를 들어, 6-9개월)을 나타내는 변형된 BoNT/A를 생성한다. 대안적으로, 변형된 BoNT/A는 증가된 알짜 양전하를 유발하는 표면 노출된 아미노산 잔기의 1종 이상의 변형을 포함할 수 있다. 증가된 전하는 폴리펩티드와 음이온성 세포외 구성요소 사이의 정전기적 상호작용을 촉진하여, 그에 의해 폴리펩티드와 세포 표면 사이의 결합을 촉진한다. 차례로 이는 또한 투여 부위에서의 체류를 증가시키고/거나 (그로부터의 확산을 감소시키고/거나) 작용 지속기간을 증가시킨다 (예를 들어, 6-9개월).
유리하게는, 변형된 BoNT/A는 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 디스포르트®)와 비교하여 개선된 안전성 프로파일을 갖는다. 이러한 개선된 안전성 프로파일은 변형된 BoNT/A에 대한 본원에 기재된 높은 안전성 비에 의해 표현될 수 있다.
본원의 전-임상 및 임상 데이터 (실시예 참조)에 기초하여, 보다 높은 총량의 변형된 BoNT/A가 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 디스포르트®)와 유사한 안전성 프로파일을 달성하면서 이러한 고용량으로 대상체에게 투여될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 보다 변형된 BoNT/A는 최대 총 용량에 도달하기 전에 경부 이상긴장증의 치료에서 보다 많은 수의 경부 근육/부위에 주사될 수 있고/거나 주사될 수 있다. 이는 유의하고 유리한 발견이며, 임상의에게 더 큰 범위의 치료 옵션을 제공하면서 경부 이상긴장증의 개선된 치료를 산출한다. 치료는 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 디스포르트®)를 사용한 치료와 비교하여 보다 장기간 지속되는 치료를 제공하고/거나 (덜 빈번한 투여를 유발함) 대상체에 대해 맞춤화될 수 있고/거나 대상체의 개선된 삶의 질을 유발한다는 점에서 개선될 수 있다. 따라서, 본 발명의 치료는 통상적인 치료 요법에 비해 개선된다.
또한, 본 발명은 편리하고 안전하며 효과적인 단일 단위 용량 뿐만 아니라 단일 치료로 안전하게 투여될 수 있는 총 (최대) 투여량을 제공한다. 본 발명은 또한 환자 독성을 초래하지 않으면서 상기 단위 용량이 경부 근육에 투여될 수 있는 횟수 (예를 들어, 근육당 주사 부위의 수 포함)에 대한 상응하는 지침을 제공한다. 따라서, 본 발명에 따른 경부 이상긴장증의 치료는 임상의에게 훨씬 덜 복잡하고, 과소-투여 및/또는 과다-투여를 피하는 것을 돕는다. 게다가, 본 발명에 따른 치료는 통상적인 경부 이상긴장증 치료와 비교하여 환자의 필요에 따라 보다 잘 조정되기 때문에 환자에게 훨씬 더 만족스럽다.
본 발명의 실시양태는 이제 하기 도면 및 실시예를 참조하여 단지 예로서 기재될 것이다.
도 1은 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 디스포르트®의 FDA 승인된 투여량을 나타낸다.
도 2는 양이온성 구축물의 등전 포커싱 (IEF) 겔을 나타낸다.
도 3은 Cat5v2(K1064H/N954K) (A), Cat5v2(K1064H/N886K) (B) 및 Cat5v2(K1064H/ N1025K) (C)에 대한 래트 배아 척수 뉴런 (eSCN)에서의 SNAP-25 절단 백분율, 및 nBoNT/A1에 대한 pEC50의 요약을 나타낸다. (A, B, C) 래트 배아 척수 뉴런을 3주 동안 배양하고, 24시간 동안 Cat5v4로 처리한 후, SNAP-25 특이적 항체로 웨스턴 블롯팅하였다. 데이터는 삼중의 독립적 실험으로부터의 평균 ± SEM이다. (D) 래트 eSCN SNAP-25 절단 효력 검정에서 nBoNT/A1 (리스트 바이올로지칼 래보러토리즈)에 대한 Cat5v2(K1064H/N886K), Cat5v2(K1064H/N954K) 및 Cat5v2(K1064H/ N1025K)의 상대적 효력. 각각의 점은 개별 배치에 상응하고, 8-점 농도 반응 곡선 (CRC)에 기초한 3개의 독립적 pEC50 결정의 평균이다. CRC에서의 각각의 농도를 삼중으로 평가하였다. 효력 비교는 목록 배치의 평균에 대해 이루어지며, 풀링된 데이터 n=24이다. 데이터는 Cat5v4당 n=3 배치의 평균 ± SEM이다.
도 4는 마우스 횡격 신경 반-횡경막 검정 (mPNHD)에서의 nBoNT/A1 및 Cat5v4의 효력 (t50)을 나타낸다. 마우스 횡격 신경 반-횡격막 조직을 나타낸 바와 같이 Cat5v4 또는 천연 BoNT/A1과 함께 인큐베이션하였다. 횡경막 수축력을 수축이 더 이상 검출되지 않을 때까지 또는 140분 후에 기록하였다. 각각의 점은 독립적 결정에 상응한다. t50 값은 마우스 반-횡경막의 수축력을 50% 억제하는 데 필요한 시간이다.
도 5는 정제된 재조합 BoNT/AB 키메라 1, 2 및 3A (각각 서열식별번호: 11, 12 및 13)의 SDS-PAGE를 나타낸다. 레인은 "마커" (분자량 마커), "-DTT" (산화된 BoNT/AB 키메라 샘플), 및 "+DTT" (환원된 BoNT/AB 키메라 샘플)로 표지된다.
도 6은 재조합 BoNT/AB 키메라 1, 2 및 3A (각각 2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 11, 12 및 13)에 의한 래트 척수 뉴런에서의 SNAP-25의 절단을 나타낸다. 배양된 래트 1차 척수 뉴런 (SCN)을 10% CO2를 함유하는 가습 분위기 하에 37℃에서 24시간 동안 다양한 농도의 재조합 BoNT/AB 키메라 1, 2 또는 3A에 노출시켰다. 이어서, 세포를 DTT 및 벤조나제로 보충된 1x NuPAGE 완충제로 용해시켰다. 샘플을 마이크로원심분리 튜브로 옮기고, 가열 블록 상에서 90℃에서 5분 동안 가열하고, -20℃에서 저장한 후, 웨스턴 블롯에 의한 SNAP-25 절단을 분석하였다. SNAP-25의 전장 및 절단된 형태 둘 다를 검출하는 폴리클로날 항체 (시그마 #S9684)를 사용하여 SNAP-25를 검출하였다. 항-토끼 HRP (시그마 #A6154)를 2차 항체로서 사용하였다.
도 7은 마우스 발가락 외전 점수화 검정을 나타낸다. 마우스를 짧은 전신 마취 하에 한쪽 뒷다리의 비복근-가자미근 복합체 근육 내로 주사하고; 발가락 외전 점수 (DAS)를 사용하여 근육 약화를 0-4 척도로 측정하였다. DAS 최대 값을 각각의 용량에 대해 결정하고, 용량에 대해 플롯팅하고, 데이터를 4-파라미터 로지스틱 방정식에 피팅하고, ED50 및 DAS 4 값으로 이어지는 용량 (DAS 4 용량)을 결정하였다.
도 8은 정제된 재조합 BoNT/AB 키메라 3B 및 3C (각각 서열식별번호: 14 및 15)의 SDS-PAGE를 나타낸다. 레인은 "마커" (분자량 마커), "-DTT" (산화된 BoNT/AB 키메라 샘플), 및 "+DTT" (환원된 BoNT/AB 키메라 샘플)로 표지된다.
도 9는 인간 유도된 만능 줄기 세포 유래된 말초 뉴런 (PERI.4U - 악시오제네시스(Axiogenesis), 독일)에서의 비변형된 BoNT/A 및 BoNT/AB 키메라 3B 및 3C (각각 2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 2, 14 및 15)에 의한 SNAP-25의 절단을 나타낸다. PERI.4U 세포를 5% CO2를 함유하는 가습 CO2 분위기 하에 37℃에서 24시간 동안 다양한 농도의 재조합 BoNT/A, 또는 BoNT/AB 키메라 3B 또는 3C에 노출시켰다. 이어서, 세포를 DTT 및 벤조나제로 보충된 1x NuPAGE 완충제로 용해시켰다. 샘플을 마이크로원심분리 튜브로 옮기고, 가열 블록 상에서 90℃에서 5분 동안 가열하고, -20℃에서 저장한 후, 웨스턴 블롯에 의한 SNAP-25 절단을 분석하였다. SNAP-25의 전장 및 절단된 형태 둘 다를 검출하는 폴리클로날 항체 (시그마 #S9684)를 사용하여 SNAP-25를 검출하였다. 항-토끼 HRP (시그마 #A6154)를 2차 항체로서 사용하였다.
도 10은 마우스 발가락 외전 점수화 검정에서 시간 경과에 따른 근육 약화의 지속기간을 나타낸다. 마우스를 짧은 전신 마취 하에 한쪽 뒷다리의 비복근-가자미근 복합체 근육 내로 주사하고; 발가락 외전 점수 (DAS)를 사용하여 근육 약화를 0-4 척도로 측정하였다. 주사의 처음 4일 동안 4의 DAS를 유도한 최저 용량으로 주사된 군의 동물을 0의 DAS (근육 약화가 관찰되지 않음)로 근육 약화가 완전히 회복될 때까지 모니터링하였다.
도 1은 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 디스포르트®의 FDA 승인된 투여량을 나타낸다.
도 2는 양이온성 구축물의 등전 포커싱 (IEF) 겔을 나타낸다.
도 3은 Cat5v2(K1064H/N954K) (A), Cat5v2(K1064H/N886K) (B) 및 Cat5v2(K1064H/ N1025K) (C)에 대한 래트 배아 척수 뉴런 (eSCN)에서의 SNAP-25 절단 백분율, 및 nBoNT/A1에 대한 pEC50의 요약을 나타낸다. (A, B, C) 래트 배아 척수 뉴런을 3주 동안 배양하고, 24시간 동안 Cat5v4로 처리한 후, SNAP-25 특이적 항체로 웨스턴 블롯팅하였다. 데이터는 삼중의 독립적 실험으로부터의 평균 ± SEM이다. (D) 래트 eSCN SNAP-25 절단 효력 검정에서 nBoNT/A1 (리스트 바이올로지칼 래보러토리즈)에 대한 Cat5v2(K1064H/N886K), Cat5v2(K1064H/N954K) 및 Cat5v2(K1064H/ N1025K)의 상대적 효력. 각각의 점은 개별 배치에 상응하고, 8-점 농도 반응 곡선 (CRC)에 기초한 3개의 독립적 pEC50 결정의 평균이다. CRC에서의 각각의 농도를 삼중으로 평가하였다. 효력 비교는 목록 배치의 평균에 대해 이루어지며, 풀링된 데이터 n=24이다. 데이터는 Cat5v4당 n=3 배치의 평균 ± SEM이다.
도 4는 마우스 횡격 신경 반-횡경막 검정 (mPNHD)에서의 nBoNT/A1 및 Cat5v4의 효력 (t50)을 나타낸다. 마우스 횡격 신경 반-횡격막 조직을 나타낸 바와 같이 Cat5v4 또는 천연 BoNT/A1과 함께 인큐베이션하였다. 횡경막 수축력을 수축이 더 이상 검출되지 않을 때까지 또는 140분 후에 기록하였다. 각각의 점은 독립적 결정에 상응한다. t50 값은 마우스 반-횡경막의 수축력을 50% 억제하는 데 필요한 시간이다.
도 5는 정제된 재조합 BoNT/AB 키메라 1, 2 및 3A (각각 서열식별번호: 11, 12 및 13)의 SDS-PAGE를 나타낸다. 레인은 "마커" (분자량 마커), "-DTT" (산화된 BoNT/AB 키메라 샘플), 및 "+DTT" (환원된 BoNT/AB 키메라 샘플)로 표지된다.
도 6은 재조합 BoNT/AB 키메라 1, 2 및 3A (각각 2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 11, 12 및 13)에 의한 래트 척수 뉴런에서의 SNAP-25의 절단을 나타낸다. 배양된 래트 1차 척수 뉴런 (SCN)을 10% CO2를 함유하는 가습 분위기 하에 37℃에서 24시간 동안 다양한 농도의 재조합 BoNT/AB 키메라 1, 2 또는 3A에 노출시켰다. 이어서, 세포를 DTT 및 벤조나제로 보충된 1x NuPAGE 완충제로 용해시켰다. 샘플을 마이크로원심분리 튜브로 옮기고, 가열 블록 상에서 90℃에서 5분 동안 가열하고, -20℃에서 저장한 후, 웨스턴 블롯에 의한 SNAP-25 절단을 분석하였다. SNAP-25의 전장 및 절단된 형태 둘 다를 검출하는 폴리클로날 항체 (시그마 #S9684)를 사용하여 SNAP-25를 검출하였다. 항-토끼 HRP (시그마 #A6154)를 2차 항체로서 사용하였다.
도 7은 마우스 발가락 외전 점수화 검정을 나타낸다. 마우스를 짧은 전신 마취 하에 한쪽 뒷다리의 비복근-가자미근 복합체 근육 내로 주사하고; 발가락 외전 점수 (DAS)를 사용하여 근육 약화를 0-4 척도로 측정하였다. DAS 최대 값을 각각의 용량에 대해 결정하고, 용량에 대해 플롯팅하고, 데이터를 4-파라미터 로지스틱 방정식에 피팅하고, ED50 및 DAS 4 값으로 이어지는 용량 (DAS 4 용량)을 결정하였다.
도 8은 정제된 재조합 BoNT/AB 키메라 3B 및 3C (각각 서열식별번호: 14 및 15)의 SDS-PAGE를 나타낸다. 레인은 "마커" (분자량 마커), "-DTT" (산화된 BoNT/AB 키메라 샘플), 및 "+DTT" (환원된 BoNT/AB 키메라 샘플)로 표지된다.
도 9는 인간 유도된 만능 줄기 세포 유래된 말초 뉴런 (PERI.4U - 악시오제네시스(Axiogenesis), 독일)에서의 비변형된 BoNT/A 및 BoNT/AB 키메라 3B 및 3C (각각 2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 2, 14 및 15)에 의한 SNAP-25의 절단을 나타낸다. PERI.4U 세포를 5% CO2를 함유하는 가습 CO2 분위기 하에 37℃에서 24시간 동안 다양한 농도의 재조합 BoNT/A, 또는 BoNT/AB 키메라 3B 또는 3C에 노출시켰다. 이어서, 세포를 DTT 및 벤조나제로 보충된 1x NuPAGE 완충제로 용해시켰다. 샘플을 마이크로원심분리 튜브로 옮기고, 가열 블록 상에서 90℃에서 5분 동안 가열하고, -20℃에서 저장한 후, 웨스턴 블롯에 의한 SNAP-25 절단을 분석하였다. SNAP-25의 전장 및 절단된 형태 둘 다를 검출하는 폴리클로날 항체 (시그마 #S9684)를 사용하여 SNAP-25를 검출하였다. 항-토끼 HRP (시그마 #A6154)를 2차 항체로서 사용하였다.
도 10은 마우스 발가락 외전 점수화 검정에서 시간 경과에 따른 근육 약화의 지속기간을 나타낸다. 마우스를 짧은 전신 마취 하에 한쪽 뒷다리의 비복근-가자미근 복합체 근육 내로 주사하고; 발가락 외전 점수 (DAS)를 사용하여 근육 약화를 0-4 척도로 측정하였다. 주사의 처음 4일 동안 4의 DAS를 유도한 최저 용량으로 주사된 군의 동물을 0의 DAS (근육 약화가 관찰되지 않음)로 근육 약화가 완전히 회복될 때까지 모니터링하였다.
한 측면에서, 본 발명은 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
관련 측면에서, 본 발명은 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 BoNT/A를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
용어 "비변형된 BoNT/A에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는"은 대상체의 경부 이상긴장증의 1종 이상의 증상이 비변형된 BoNT/A의 투여와 비교하여 본 발명의 변형된 BoNT/A의 투여 후에 더 긴 시간 기간 동안 감소되는 것을 의미할 수 있다. 상기 작용 지속기간은 적어도 1.25x, 1.5x, 1.75x, 2.0x, 또는 2.25x 더 클 수 있다. 변형된 BoNT/A의 작용 지속기간은 6 내지 9개월일 수 있다. 예를 들어, 작용 지속기간은 적어도: 4.5개월 (개시로부터), 5.0개월, 5.5개월, 6개월, 6.5개월, 7.0개월, 7.5개월, 8.0개월, 8.5개월 또는 9.0개월일 수 있다. 특정한 실시양태에서, 작용 지속기간은 9.0개월 초과일 수 있다. 상기 감소는 비변형된 BoNT/A로 치료된 동등한 증상을 나타내는 동등한 대조군 대상체와의 비교에 의해 결정될 수 있다. 대조군 대상체의 1종 이상의 증상의 중증도가 비변형된 BoNT/A 치료 전과 실질적으로 동일한 (예를 들어, 동일한) 시간 기간에, 본 발명에 따른 변형된 BoNT/A로 치료된 대상체는 변형된 BoNT/A로의 치료 전의 1종 이상의 증상의 중증도와 비교하여 적어도 5%, 10%, 25%, 또는 50%의 동등한 1종 이상의 증상에서의 개선을 나타낼 수 있다. 비변형된 BoNT/A는 바람직하게는 2쇄 형태로 존재하는 서열식별번호: 2이다.
한 측면에서, 본 발명은 변형된 BoNT/A를 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는, 경부 이상긴장증을 치료하는 방법을 제공하며,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
관련 측면에서, 본 발명은 변형된 BoNT/A를 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는, 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 방법을 제공하며,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)의 용도를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
관련 측면에서, 본 발명은 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 BoNT/A의 용도를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
단위 용량은 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다. 단위 용량 범위의 상한은 16,500, 15,500, 14,500, 13,500, 12,500, 11,500, 10,500, 9,500, 8,500, 7,500, 6,500, 5,500, 4,500, 3,500, 2,500, 2,250, 2,000, 1,500, 1,250, 1,000, 750 또는 500 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 상한은 16,000 pg이다. 단위 용량 범위의 하한은 800, 850, 950, 1,000, 1,500, 1,750, 2,000, 2,500, 3,000, 3,500, 4,000, 4,500 또는 5,000 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 하한은 1,000 pg이다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 1,000 pg 내지 16,000 pg의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 950 pg 내지 1,250 pg, 1,750 pg 내지 2,250 pg, 또는 8,000 pg 내지 12,000 pg이다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 1,000, 2,000, 3,000, 8,000 또는 16,000 pg일 수 있다.
본 발명의 치료 요법을 수행할 때 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다. 다시 말해서, 주어진 치료 세션에서 투여되는 변형된 BoNT/A의 총량은 170,000 pg 이하일 수 있다. 총 용량은 165,000, 160,000, 140,000, 110,000, 100,000, 90,000, 80,000, 70,000, 60,000, 50,000, 40,000, 30,000, 28,000, 25,000, 20,000, 15,000, 14,000, 10,000, 8,000, 7,000, 또는 5,000 pg 이하일 수 있다. 바람직하게는, 총 용량은 160,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 예를 들어 총 용량은 7,000, 10,000, 14,000, 20,000, 28,000, 30,000, 80,000 또는 160,000 pg 이하일 수 있다. 총 용량은 적어도 900, 1,000, 2,000, 3,000, 4,000, 5,000, 6,000, 7,000, 7,500, 10,000, 12,500, 13,000, 14,000, 15,000, 20,000, 25,000, 30,000, 40,000, 50,000, 60,000, 70,000, 80,000, 90,000, 100,000, 120,000 또는 150,000 pg일 수 있다. 바람직하게는, 총 용량은 적어도 1,500 pg, 보다 바람직하게는 적어도 2,000 pg의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 적어도 5,000 pg일 수 있다. 총 용량은 5,250 pg 내지 170,000 pg, 바람직하게는 7,000 pg 내지 160,000 pg일 수 있다. 예를 들어, 투여되는 총 용량은 6,000-30,000 pg, 예컨대 6,000-15,000 pg 또는 13,000-29,000 pg일 수 있다. 보다 바람직하게는, 투여되는 총 용량은 10,000 pg 내지 160,000 pg이다. 바람직하게는, 투여되는 총 용량은 7,000, 10,000, 14,000, 20,000, 28,000, 30,000, 80,000 또는 160,000 pg일 수 있다.
따라서, 단위 용량은 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하고, 본 발명의 치료 요법을 수행할 때 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하일 수 있다. 단위 용량은 1,000 pg일 수 있고, 총 용량은 7,000 pg 이하일 수 있다. 단위 용량은 1,000 pg일 수 있고, 총 용량은 10,000 pg 이하일 수 있다. 단위 용량은 1,000 pg일 수 있고, 총 용량은 14,000 pg 이하일 수 있다. 단위 용량은 2,000 pg일 수 있고, 총 용량은 14,000 pg 이하일 수 있다. 단위 용량은 2,000 pg일 수 있고, 총 용량은 20,000 pg 이하일 수 있다. 단위 용량은 2,000 pg일 수 있고, 총 용량은 28,000 pg 이하일 수 있다. 단위 용량은 3,000 pg일 수 있고, 총 용량은 30,000 pg 이하일 수 있다. 단위 용량은 8,000 pg일 수 있고, 총 용량은 80,000 pg 이하일 수 있다. 단위 용량은 16,000 pg일 수 있고, 총 용량은 160,000 pg 이하일 수 있다.
따라서, 단위 용량은 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하고, 본 발명의 치료 요법을 수행할 때 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하일 수 있다. 단위 용량은 1,000 pg일 수 있고, 총 용량은 7,000 pg일 수 있다. 단위 용량은 1,000 pg일 수 있고, 총 용량은 10,000 pg일 수 있다. 단위 용량은 1,000 pg일 수 있고, 총 용량은 14,000 pg일 수 있다. 단위 용량은 2,000 pg일 수 있고, 총 용량은 14,000 pg일 수 있다. 단위 용량은 2,000 pg일 수 있고, 총 용량은 20,000 pg일 수 있다. 단위 용량은 2,000 pg일 수 있고, 총 용량은 28,000 pg일 수 있다. 단위 용량은 3,000 pg일 수 있고, 총 용량은 30,000 pg일 수 있다. 단위 용량은 8,000 pg일 수 있고, 총 용량은 80,000 pg일 수 있다. 단위 용량은 16,000 pg일 수 있고, 총 용량은 160,000 pg일 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 단위 (U) 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
관련 측면에서, 본 발명은 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 BoNT/A를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 단위 (U) 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 변형된 BoNT/A를 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는, 경부 이상긴장증을 치료하는 방법을 제공하며,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 U 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
관련 측면에서, 본 발명은 변형된 BoNT/A를 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는, 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 방법을 제공하며,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 U 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)의 용도를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 U 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
관련 측면에서, 본 발명은 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 BoNT/A의 용도를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 U 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
단위 용량은 31 단위 내지 707 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다. 단위 용량 범위의 상한은 700, 650, 600, 550, 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150 100, 95, 90, 85, 65, 60, 55, 50, 또는 31 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 상한은 666 단위이다. 단위 용량 범위의 하한은 35, 40, 45, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 또는 700 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 하한은 42 단위이다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 42 단위 내지 666 단위의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 40 단위 내지 50 단위, 70 단위 내지 95 단위, 또는 333 단위 내지 499 단위이다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 41.6 단위, 83.2 단위, 124.8 단위, 332.8 단위 또는 665.6 단위일 수 있다.
본 발명의 치료 요법을 수행할 때 투여되는 총 용량은 7,070 단위 이하의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다. 다시 말해서, 주어진 치료 세션에서 투여되는 변형된 BoNT/A의 총량은 7,070 단위 이하일 수 있다. 총 용량은 7,000, 6,000, 5,000, 4,000, 3,500, 3,350, 3,000, 2,000, 1,500, 1,250, 1,175, 1,000, 900, 800, 700, 650, 625, 600, 575, 550, 500, 450, 425, 400, 350, 330, 300, 290, 250 또는 200 단위 이하일 수 있다. 바람직하게는, 총 용량은 6,660 단위 이하의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 예를 들어 총 용량은 290, 425, 575, 600, 800, 1,000, 1,175, 1,250, 3,000, 3,350, 3,500 또는 7,000 단위 이하일 수 있다. 총 용량은 적어도 35, 40, 50, 100, 150, 200, 250, 290, 300, 350, 400, 450, 500, 540, 550, 580, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1,000, 1,050, 1,500, 2,000, 3,000, 4,000, 5,000, 6,000 또는 7,000 단위일 수 있다. 바람직하게는, 총 용량은 적어도 62 단위, 보다 바람직하게는 적어도 83 단위의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 적어도 208 단위일 수 있다. 총 용량은 217 단위 내지 7,070 단위, 바람직하게는 294 단위 내지 6,660 단위일 수 있다. 예를 들어, 투여되는 총 용량은 250-1,250 단위, 예컨대 250-625 단위, 또는 540-1,200 단위일 수 있다. 보다 바람직하게는, 투여되는 총 용량은 420 단위 내지 6,660 단위이다. 바람직하게는, 투여되는 총 용량은 291 단위, 416 단위, 582 단위, 832 단위, 1,165 단위, 1,248 단위, 3,328 단위 또는 6,656 단위일 수 있다.
따라서, 단위 용량은 31 단위 내지 707 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하고, 본 발명의 치료 요법을 수행할 때 투여되는 총 용량은 7,070 단위 이하일 수 있다. 단위 용량은 41.6 단위일 수 있고, 총 용량은 291 단위 이하일 수 있다. 단위 용량은 41.6 단위일 수 있고, 총 용량은 416 단위 이하일 수 있다. 단위 용량은 41.6 단위일 수 있고, 총 용량은 582 단위 이하일 수 있다. 단위 용량은 83.2 단위일 수 있고, 총 용량은 582 단위 이하일 수 있다. 단위 용량은 83.2 단위일 수 있고, 총 용량은 832 단위 이하일 수 있다. 단위 용량은 83.2 단위일 수 있고, 총 용량은 1,165 단위 이하일 수 있다. 단위 용량은 124.8 단위일 수 있고, 총 용량은 1,248 단위 이하일 수 있다. 단위 용량은 332.8 단위일 수 있고, 총 용량은 3,328 단위 이하일 수 있다. 단위 용량은 665.5 단위일 수 있고, 총 용량은 6,656 단위 이하일 수 있다.
따라서, 단위 용량은 31 단위 내지 707 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하고, 본 발명의 치료 요법을 수행할 때 투여되는 총 용량은 7,070 단위 이하일 수 있다. 단위 용량은 41.6 단위일 수 있고, 총 용량은 291 단위일 수 있다. 단위 용량은 41.6 단위일 수 있고, 총 용량은 416 단위일 수 있다. 단위 용량은 41.6 단위일 수 있고, 총 용량은 582 단위일 수 있다. 단위 용량은 83.2 단위일 수 있고, 총 용량은 582 단위일 수 있다. 단위 용량은 83.2 단위일 수 있고, 총 용량은 832 단위일 수 있다. 단위 용량은 83.2 단위일 수 있고, 총 용량은 1,165 단위일 수 있다. 단위 용량은 124.8 단위일 수 있고, 총 용량은 1,248 단위일 수 있다. 단위 용량은 332.8 단위일 수 있고, 총 용량은 3,328 단위일 수 있다. 단위 용량은 665.5 단위일 수 있고, 총 용량은 6,656 단위일 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
관련 측면에서, 본 발명은 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 BoNT/A를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
한 측면에서, 본 발명은 변형된 BoNT/A를 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는, 경부 이상긴장증을 치료하는 방법을 제공하며,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
관련 측면에서, 본 발명은 변형된 BoNT/A를 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는, 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 방법을 제공하며,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
한 측면에서, 본 발명은 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)의 용도를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
관련 측면에서, 본 발명은 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 BoNT/A의 용도를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
단위 용량은 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 (i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; (iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 (v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택된다. 단위 용량 범위의 상한은 7,750, 7,500, 7,000, 6,000, 5,000, 4,000, 3,000, 2,000 또는 1,000 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 상한은 7,500 pg이다. 단위 용량 범위의 하한은 475, 500, 600, 700, 800, 900, 1,000, 1,500, 2,000, 3,000, 4,000, 5,000, 6,000 또는 7,000 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 하한은 500 pg이다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 500 pg 내지 7,500 pg의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 4,000 pg 내지 6,000 pg이다. 가장 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 2,000 pg 내지 3,000 pg, 예컨대 2,400 pg 내지 2,600 pg이다.
단위 용량은 1,000 pg 초과 또는 5,000 pg 초과의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 (i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; (iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 (v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택된다. 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 1,000 pg 초과 내지 7,500 pg 이하의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 5,000 pg 초과 내지 7,500 pg 이하의 변형된 BoNT/A일 수 있다.
본 발명의 치료 요법을 수행할 때 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 (i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; (iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 (v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택된다. 다시 말해서, 주어진 치료 세션에서 투여되는 변형된 BoNT/A의 총량은 80,000 pg 이하일 수 있다. 총 용량은 75,000, 70,000, 60,000, 50,000, 40,000, 30,000, 20,000, 10,000 또는 5,000 pg 이하일 수 있다. 바람직하게는, 총 용량은 변형된 BoNT/A 75,000 pg 이하일 수 있다. 총 용량은 적어도 700, 800, 900, 1,000, 2,000, 3,000, 4,000, 5,000, 7,500, 10,000, 12,500, 15,000, 20,000, 30,000, 40,000, 50,000, 60,000, 또는 70,000 pg일 수 있다. 바람직하게는, 총 용량은 적어도 900 pg, 보다 바람직하게는 적어도 1,000 pg의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 적어도 3,000 pg일 수 있다. 총 용량은 3,150 pg 내지 80,000 pg, 바람직하게는 3,500 pg 내지 75,000 pg일 수 있다. 보다 바람직하게는, 투여되는 총 용량은 7,500-75,000 pg이다.
투여되는 총 용량은 1,000 pg 초과 또는 5,000 pg 초과의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 (i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; (iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 (v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택된다. 바람직하게는, 총 용량은 1,000 pg 초과의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 5,000 pg 초과의 변형된 BoNT/A일 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
관련 측면에서, 본 발명은 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 BoNT/A를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
관련 측면에서, 본 발명은 대상체의 이환 경부 근육에 변형된 BoNT/A를 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는, 경부 이상긴장증을 치료하는 방법을 제공하며,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
관련 측면에서, 본 발명은 변형된 BoNT/A를 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는, 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 방법을 제공하며,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
또 다른 관련 측면에서, 본 발명은 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)의 용도를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
관련 측면에서, 본 발명은 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 BoNT/A의 용도를 제공하며, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
단위 용량은 53 단위 내지 948 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 (i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; (iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 (v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택된다. 단위 용량 범위의 상한은 925, 900, 850, 800, 750, 700, 650, 600, 550, 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150 또는 100 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 상한은 889 단위이다. 단위 용량 범위의 하한은 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850 또는 900 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 하한은 59 단위이다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 59 단위 내지 889 단위의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 200 단위 내지 600 단위이다. 가장 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 237 단위 내지 355 단위, 예컨대 284 단위 내지 308 단위이다.
단위 용량은 118.5 단위 초과 또는 592.5 단위 초과의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 (i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; (iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 (v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택된다. 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 118.5 단위 초과 내지 888 단위 이하의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 592.5 단위 초과 내지 888 단위 이하의 변형된 BoNT/A일 수 있다.
본 발명의 치료 요법을 수행할 때 투여되는 총 용량은 9,480 단위 이하의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 (i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; (iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 (v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택된다. 다시 말해서, 주어진 치료 세션에서 투여되는 변형된 BoNT/A의 총량은 9,480 단위 이하일 수 있다. 총 용량은 9,000, 8,000, 7,000, 6,000, 5,000, 4,000, 3,000, 2,000 또는 1,000 단위 이하일 수 있다. 바람직하게는, 총 용량은 8,890 단위 이하의 변형된 BoNT/A일 수 있다. 총 용량은 적어도 83, 95, 106, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1,000, 1,500, 2,000, 3,000, 4,000, 5,000, 6,000, 7,000, 8,000 또는 9,000 단위일 수 있다. 바람직하게는, 총 용량은 적어도 106 단위, 보다 바람직하게는 적어도 118 단위의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 적어도 355 단위일 수 있다. 총 용량은 371 단위 내지 9,480 단위, 바람직하게는 413 단위 내지 8,890 단위일 수 있다. 보다 바람직하게는, 투여되는 총 용량은 889 단위 내지 8,890 단위이다.
투여되는 총 용량은 118.5 단위 초과 또는 592.5 단위 초과의 변형된 BoNT/A일 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 (i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; (iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 (v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택된다. 바람직하게는, 총 용량은 118.5 단위 초과의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 592.5 단위 초과의 변형된 BoNT/A일 수 있다.
"이환 경부 근육"은 대상체에서 경부 이상긴장증 및/또는 그의 증상에 기여하거나 (예를 들어, 그를 유발하거나), 또는 대상체에서 경부 이상긴장증 및/또는 그의 증상에 기여하는 (예를 들어, 그를 유발하는) 경부 근육일 수 있다. "이환 경부 근육"이 반드시 치료 시점에 경부 이상긴장증 및/또는 그의 증상에 기여해야 (예를 들어, 그를 유발해야) 하는 것으로 의도되지는 않지만, 이것이 바람직하다. 예를 들어, 경부 근육은 과거에 대상체에서 경부 이상긴장증 및/또는 그의 증상에 기여한 (예를 들어, 그를 유발한) 것 또는 미래에 대상체에서 경부 이상긴장증 및/또는 그의 증상에 기여할 (예를 들어, 그를 유발할) 것으로 예상되는 것일 수 있다. 한 실시양태에서, 2개 이상의 경부 근육 (예를 들어, 경부 근육의 주동근 및 길항근 쌍)이 대상체에서 경부 이상긴장증 및/또는 그의 증상에 기여할 수 있다 (예를 들어, 그를 유발할 수 있다). 이러한 경우, 변형된 BoNT/A는 2개 이상의 경부 근육에 투여될 수 있다 (예를 들어, 한 쌍의 경부 근육의 주동근 경부 근육 및 길항근 경부 근육에 투여될 수 있음).
이환 경부 근육은 바람직하게는 수축에 의해 대상체에서 경부 이상긴장증 및/또는 그의 증상에 기여한다 (예를 들어, 그를 유발한다). 따라서, 이환 경부 근육은 바람직하게는 수축되거나 또는 수축하여 대상체에서 경부 이상긴장증 및/또는 그의 증상을 유발하는 대상체의 근육이다. 상기 경부 근육은 바람직하게는, 예를 들어 치료 시점에, 불수의적으로 수축하거나 또는 불수의적으로 수축된 경부 근육이다. 경부 근육은 대상체의 경부 및/또는 두부에 작동가능하게 연결된 임의의 근육 (예를 들어, 골격근), 예를 들어 대상체의 두부 위치결정을 변경시킬 수 있는 (예를 들어, 수축될 때) 임의의 근육일 수 있다. 이환 경부 근육은 대상체의 어깨를 향해 대상체의 턱을 비틀어 측방향 두부 회전 (사경)을 일으킬 수 있고/거나; 대상체의 두부를 전방으로 기울지게 할 수 있고/거나 (전경); 대상체의 두부를 후방으로 기울어지게 할 수 있고/거나 (후경); 대상체의 두부를 측방향으로 기울어지 할 수 있고/거나 (측경); 대상체의 두부의 전방 시상 이동 (전방 이동)을 일으킬 수 있고/거나; 대상체의 두부의 후방 시상 이동 (후방 이동)을 일으킬 수 있는 것일 수 있다.
이환 경부 근육은 흉쇄유돌기근, 흉쇄유돌근, 두판상근, 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 승모근 (예를 들어, 상부 승모근 및/또는 하행부 승모근), 견갑거근, 두반극근, 또는 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근)을 포함할 수 있다. 이환 경부 근육은 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 승모근 (예를 들어, 상부 승모근 및/또는 하행부 승모근), 견갑거근, 두반극근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두개골, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 또는 가로돌기 C2-C5-아틀라스 (전결절)을 포함할 수 있다. 이환 경부 근육은 우측 견갑거근, 좌측 견갑거근, 우측 승모근, 좌측 승모근, 우측 흉쇄유돌기근, 좌측 흉쇄유돌기근, 우측 두판상근, 좌측 두판상근, 중사각근, 전사각근, 우측 두반극근, 좌측 두반극근, 우측 두최장근 또는 좌측 두최장근을 포함할 수 있다. 이환 경부 근육은 흉쇄유돌근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 흉쇄유돌기근), 좌측 또는 우측 두판상근, 전사각근 또는 중사각근, 좌측 또는 우측 승모근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 상부 승모근), 좌측 또는 우측 견갑거근, 좌측 또는 우측 두반극근, 최장근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 두최장근 및/또는 경최장근), 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하행부 승모근, 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 상두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 경반극근, 대후두직근, 소후두직근, 전두직근, 다열근, 또는 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절)를 포함할 수 있다.
이환 경부 근육은 하기를 포함할 수 있다: 경반극근, 견갑거근, 경판상근, 경최장근, 하행부 승모근, 흉쇄유돌근, 두반극근, 하두사근, 두최장근, 두판상근, 경반극근, 중사각근, 두최장근, 경장근, 또는 두장근.
본 발명에 따라 치료되는 복수의 이환 경부 근육은 본원에 기재된 임의의 근육 중 적어도 1개 (예를 들어, 적어도 2개)를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 승모근 (예를 들어, 상부 승모근 및/또는 하행부 승모근), 견갑거근, 두반극근, 및 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근)으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 복수의 이환 경부 근육에 투여된다. 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 적어도 2개 (예를 들어, 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7개, 바람직하게는 8개)의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 승모근 (예를 들어, 상부 승모근 및/또는 하행부 승모근), 견갑거근, 두반극근, 및 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근).
한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다: 우측 견갑거근, 좌측 견갑거근, 우측 승모근, 좌측 승모근, 우측 흉쇄유돌기근, 좌측 흉쇄유돌기근, 우측 두판상근, 좌측 두판상근, 중사각근, 전사각근, 우측 두반극근, 좌측 두반극근, 우측 두최장근, 및 좌측 두최장근.
한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다: 흉쇄유돌기근, 흉쇄유돌근, 두판상근, 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 승모근 (예를 들어, 상부 승모근 및/또는 하행부 승모근), 견갑거근, 두반극근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 및 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절). 바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 복수의 이환 경부 근육에 투여된다. 예를 들어, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 적어도 2개 (예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35개)의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 흉쇄유돌기근, 흉쇄유돌근, 두판상근, 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 승모근 (예를 들어, 상부 승모근, 및/또는 하행부 승모근), 견갑거근, 두반극근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 및 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절).
한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 하기를 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 흉쇄유돌근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 흉쇄유돌기근), 좌측 또는 우측 두판상근, 전사각근 또는 중사각근, 좌측 또는 우측 승모근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 상부 승모근), 좌측 또는 우측 견갑거근, 좌측 또는 우측 두반극근, 중간부 두반극근, 최장근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 두최장근 및/또는 경최장근), 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하행부 승모근, 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 상두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 경반극근, 대후두직근, 소후두직근, 전두직근, 다열근, 또는 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절)를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 복수의 이환 경부 근육에 투여된다. 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 적어도 2개 (예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35개)의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 흉쇄유돌근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 흉쇄유돌기근), 좌측 또는 우측 두판상근, 전사각근 또는 중사각근, 좌측 또는 우측 승모근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 상부 승모근), 좌측 또는 우측 견갑거근, 좌측 또는 우측 두반극근, 중간부 두반극근, 최장근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 두최장근 및/또는 경최장근), 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하행부 승모근, 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 상두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 경반극근, 대후두직근, 소후두직근, 전두직근, 꼬리뼈, 및/또는 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절).
한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 흉쇄유돌근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 흉쇄유돌기근), 좌측 또는 우측 두판상근, 전사각근 또는 중사각근, 좌측 또는 우측 승모근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 상부 승모근), 좌측 또는 우측 견갑거근, 좌측 또는 우측 두반극근, 최장근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 두최장근 및/또는 경최장근), 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하행부 승모근, 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 상두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 경반극근, 대후두직근, 소후두직근, 전두직근, 꼬리뼈, 및 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절). 바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 복수의 이환 경부 근육에 투여된다. 예를 들어, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 적어도 2개 (예를 들어, 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35개)의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 흉쇄유돌근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 흉쇄유돌기근), 좌측 또는 우측 두판상근, 전사각근 또는 중사각근, 좌측 또는 우측 승모근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 상부 승모근), 좌측 또는 우측 견갑거근, 좌측 또는 우측 두반극근, 최장근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 두최장근 및/또는 경최장근), 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하행부 승모근, 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 상두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 경반극근, 대후두직근, 소후두직근, 전두직근, 꼬리뼈, 및 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절).
한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 하기를 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다: 경반극근, 견갑거근, 경판상근, 경최장근, 하행부 승모근, 흉쇄유돌근, 두반극근, 하두사근, 두최장근, 두판상근, 경반극근, 중사각근, 두최장근, 경장근, 또는 두장근. 한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 하기를 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다: 경반극근, 견갑거근, 경판상근, 경최장근, 하행부 승모근, 흉쇄유돌근, 두반극근, 하두사근, 두최장근, 두판상근, 경반극근, 중사각근, 두최장근, 경장근, 및 두장근. 예를 들어, 변형된 BoNT/A는 적어도 2개 (예를 들어, 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개)의 상기 이환 경부 근육에 투여될 수 있다.
경부의 양측에 2개의 동등한 경부 근육 (예를 들어, 흉쇄유돌기근, 예컨대 좌측 및 우측 흉쇄유돌기근)이 존재하는 경우, 변형된 BoNT/A는 일측으로 (예를 들어, 단지 1개가 수축되는 근육 중 1개에) 또는 양측으로 (예를 들어, 두 근육이 수축되는 근육 둘 다에) 투여될 수 있다. 복수의 이환 근육을 치료할 때, 이는 복수의 상이한 유형의 이환 근육인 것이 바람직하다. 예를 들어, 2개의 이환 흉쇄유돌기근으로의 양측 투여가 수행되는 경우, 본원에 기재된 바와 같이 복수의 이환 근육을 치료할 때 추가의 근육이 치료되는 것이 바람직하다.
경부의 어느 한 측면에 2개의 동등한 경부 근육이 있는 경우, 상기 동등한 경부 근육 중 어느 하나에 일측 투여가 있을 수 있다. 예를 들어, 투여는 수축된 근육 또는 비-수축된 동등한 근육에 대한 것일 수 있다. 한 실시양태에서, 일측 투여는 대상체의 경부의 한 측면 상의 근육에 대한 것이며, 여기서 대상체의 경부의 한 측면은 경부 이상긴장증의 증상을 나타내거나, 또는 대상체의 경부의 반대측 측면 상의 동등한 근육에 대한 것이며, 여기서 대상체의 경부의 반대측 측면은 경부 이상긴장증의 증상을 나타내지 않는다.
본 발명에 따른 치료를 위해 선택된 이환 경부 근육은 치료될 대상체의 경부 이상긴장증의 구체적 제시 (예를 들어, 사경, 측경, 전경, 후경 또는 그의 조합)에 따라 달라질 수 있다.
본 발명에 따른 치료를 위해 선택된 이환 경부 근육은 치료될 대상체의 경부 이상긴장증의 구체적 제시에 따라 달라질 수 있다 (예를 들어, 사경, 측경, 전경, 후경, 측두증(laterocaput), 사두증(torticaput), 전두증(antecaput), 후두증(retrocaput), 측방 이동, 시상 이동 또는 그의 조합).
한 실시양태에서, 사경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 전사각근, 두판상근, 경판상근, 견갑거근, 및 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근)으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 사경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 및 전사각근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 대해 반대측으로 투여될 수 있고/거나; 두판상근, 경판상근, 견갑거근, 및 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근)으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 대해 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 사경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 전사각근, 두판상근, 경판상근, 견갑거근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근) 및 경반극근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 사경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 및 전사각근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 대해 반대측으로 투여될 수 있고/거나; 두판상근, 경판상근, 견갑거근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 및 경반극근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 대해 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 사경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 전사각근, 두판상근, 경판상근, 견갑거근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 경반극근, 대후두직근, 다열근 및 하두사근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 사경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 전사각근, 경반극근, 및 다발루근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 대해 반대측으로 투여될 수 있고/거나; 두판상근, 경판상근, 견갑거근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 대후두직근, 및 하두사근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 대해 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 사경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 전사각근, 두판상근, 경판상근, 견갑거근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 경반극근, 대후두직근, 다열근 또는 하두사근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 사경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 전사각근, 경반극근, 또는 다열근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 대해 반대측으로 투여될 수 있고/거나; 두판상근, 경판상근, 견갑거근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 대후두직근, 또는 하두사근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 대해 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 측경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 및 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근). 바람직하게는, 측경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 상기 이환 경부 근육 중 1개 이상에 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 측경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근) 및 경반극근. 한 실시양태에서, 측경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 상기 이환 경부 근육 중 1개 이상에 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 측경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 및 다열근. 한 실시양태에서, 측경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 상기 이환 경부 근육 중 1개 이상에 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 측경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 경반극근, 및 다열근. 한 실시양태에서, 측경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 상기 이환 경부 근육 중 1개 이상에 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 측경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 경반극근, 또는 다열근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 측경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 상기 이환 경부 근육 중 1개 이상에 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 전경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 전사각근 및 중사각근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 전경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 전경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 전사각근, 중사각근, 견갑거근, 경장근, 및 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근)로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 전경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 전경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 전사각근, 중사각근, 두장근, 경장근, 및 전두직근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 전경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 전경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 전사각근, 중사각근, 견갑거근, 경장근, 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 두장근, 및 전두직근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 전경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 전경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌기근, 전사각근, 중사각근, 견갑거근, 경장근, 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 두장근, 또는 전두직근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 전경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 후경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 두판상근, 경판상근, 및 두반극근. 바람직하게는, 후경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 후경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 두판상근, 경판상근, 두반극근, 경반극근, 및 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근). 바람직하게는, 후경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 후경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 두판상근, 경판상근, 두반극근, 경반극근, 두극근, 대후두직근, 소후두직근, 상두사근. 바람직하게는, 후경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 후경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 두판상근, 경판상근, 두반극근, 경반극근, 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 두극근, 대후두직근, 소후두직근, 및 상두사근. 바람직하게는, 후경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 후경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 두판상근, 경판상근, 두반극근, 경반극근, 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 두극근, 대후두직근, 소후두직근, 또는 상두사근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 후경을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 측방 이동을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하기로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다: 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근 또는 하행부 승모근), 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 및 경반극근. 바람직하게는, 측방 이동을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 경부의 제1 측면 (예를 들어, 좌측) 상의 견갑거근, 경반극근, 중사각근 및 경최장근으로부터 선택된 이환 경부 근육에 투여될 수 있고, 변형된 BoNT/A는 경부의 제2 측면 (예를 들어, 우측) 상의 흉쇄유돌기근, 하행부 승모근, 두판상근, 두반극근, 두최장근 및 견갑거근으로부터 선택된 이환 근육에 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 측방 이동을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 견갑거근, 승모근 (예를 들어, 상부 승모근 또는 하행부 승모근), 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 또는 경반극근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 측방 이동을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 경부의 제1 측면 (예를 들어, 좌측) 상의 견갑거근, 경반극근, 중사각근 또는 경최장근을 포함하는 이환 경부 근육에 투여될 수 있고, 변형된 BoNT/A는 경부의 제2 측면 (예를 들어, 우측) 상의 흉쇄유돌기근, 하행부 승모근, 두판상근, 두반극근, 두최장근 또는 견갑거근을 포함하는 이환 근육에 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 측두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하행부 승모근, 흉쇄유돌근, 두최장근, 두판상근, 두반극근, 견갑거근, 및 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근)로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 측두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 측두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하행부 승모근, 흉쇄유돌근, 두최장근, 두판상근, 두반극근, 견갑거근, 또는 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근)를 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 측두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 사두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하행부 승모근, 흉쇄유돌근, 두최장근, 두판상근, 중간부 두반극근, 및 하두사근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 사두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 동측으로 또는 반대측으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 변형된 BoNT/A는 하행부 승모근, 흉쇄유돌근 및 중간부 두반극근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 대해 반대측으로 투여될 수 있고/거나; 변형된 BoNT/A는 하두사근, 두최장근, 및 두판상근으로부터 선택된 1개 이상의 경부 근육에 대해 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 사두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하행부 승모근, 흉쇄유돌근, 두최장근, 두판상근, 중간부 두반극근, 또는 하두사근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 사두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 동측으로 또는 반대측으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 변형된 BoNT/A는 하행부 승모근, 흉쇄유돌근 또는 중간부 두반극근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 대해 반대측으로 투여될 수 있고/거나; 변형된 BoNT/A는 하두사근, 두최장근, 또는 두판상근을 포함하는 1개 이상의 경부 근육(들)에 대해 동측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 전두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 두장근, 견갑거근 및 흉쇄유돌근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 전두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 전두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 두장근, 견갑거근 또는 흉쇄유돌근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 전두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 후두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하두사근, 두반극근, 하행부 승모근 및 두판상근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 후두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 후두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 하두사근, 두반극근, 하행부 승모근 또는 두판상근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 후두증을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 양측으로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 시상 이동을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌근, 전사각근, 중사각근, 견갑거근, 경장근, 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하두사근, 두반극근, 하행부 승모근 및 두판상근으로부터 선택된 1개 이상의 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 시상 이동을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 경부의 제1 측면 (예를 들어, 좌측) 상의 흉쇄유돌근, 전사각근, 중사각근, 견갑거근, 경장근, 및 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근)로부터 선택된 이환 경부 근육에 투여될 수 있고, 변형된 BoNT/A는 경부의 제2 측면 (예를 들어, 우측) 상의 하두사근, 두반극근, 하행부 승모근 및 두판상근으로부터 선택된 이환 경부 근육에 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 시상 이동을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 흉쇄유돌근, 전사각근, 중사각근, 견갑거근, 경장근, 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하두사근, 두반극근, 하행부 승모근 또는 두판상근을 포함하는 1개 이상의 이환 경부 근육(들)에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 시상 이동을 치료할 때, 변형된 BoNT/A는 경부의 제1 측면 (예를 들어, 좌측) 상의 흉쇄유돌근, 전사각근, 중사각근, 견갑거근, 경장근, 또는 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근)를 포함하는 이환 경부 근육에 투여될 수 있고, 변형된 BoNT/A는 경부의 제2 측면 (예를 들어, 우측) 상의 하두사근, 두반극근, 하행부 승모근 또는 두판상근을 포함하는 이환 경부 근육에 투여될 수 있다.
변형된 BoNT/A는 이환 경부 근육에서 근육내 주사에 의해 투여된다. 변형된 BoNT/A의 1개 이상의 단위 용량 (예를 들어, 적어도 2개의 단위 용량)이 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 그러나, 단일 단위 용량만이 이환 경부 근육당 투여되는 것이 바람직하다. 경부 근육이 흉쇄유돌근인 경우, 2개의 단위 용량이 투여될 수 있다. 예를 들어, 2개의 단위 용량이 좌측 흉쇄유돌기근에 투여될 수 있고/거나, 2개의 단위 용량이 우측 흉쇄유돌기근에 투여될 수 있다. 경부 근육이 승모근 (예를 들어, 하행부 승모근)인 경우, 2개의 단위 용량이 투여될 수 있다. 예를 들어, 2개의 단위 용량이 좌측 승모근에 투여될 수 있고/거나 (예를 들어, 좌측 상부 승모근), 2개의 단위 용량이 우측 승모근에 투여될 수 있다 (예를 들어, 우측 상부 승모근).
단위 용량은 단일 주사 부위에서 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 이환 경부 근육에서 주사 부위당 단위 용량으로 투여된다. 그러나, 단위 용량 미만이 단일 주사 부위에 투여되는 것이 바람직하며, 이 경우에 단위 용량은 이환 경부 근육의 2개 이상의 주사 부위 사이에서 (동등하게 또는 동등하지 않게) 분할될 수 있다. 따라서, 변형된 BoNT/A는 2개 이상의 주사 부위에서 이환 경부 근육에 투여될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 이환 경부 근육에서 주사 부위당 단위 용량 미만으로 투여된다. 유리하게는, 이는 임상의가 덜 이환 영역에 비해 근육을 윤곽화하고/거나 근육의 특히 이환 영역에 보다 많은 변형된 BoNT/A를 투여함으로써 상기 영역을 치료하게 할 수 있다.
가장 바람직하게는, 단위 용량이 주사 부위당 투여된다.
변형된 BoNT/A는 주사 부위당 750-4,000 pg의 용량으로 투여될 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 주사 부위당 1,000 pg 또는 2,000 pg의 용량으로 투여되며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
변형된 BoNT/A는 주사 부위당 31-166.4 단위의 용량으로 투여될 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 주사 부위당 41.6 단위 또는 83.2 단위의 용량으로 투여되며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
용어 "적어도 단일 단위 용량이 투여되는"은 적어도 실질적으로 모든 단일 단위 용량이 투여되는 것을 의미한다. 예를 들어, 단위 용량의 잔류 양 (예를 들어, 1%, 0.1% 또는 0.01% 이하)이 변형된 BoNT/A가 재구성된 바이알에 남아있을 수 있다. 그러나, 바람직하게는 적어도 단일 단위 용량의 모두가 (예를 들어, 하나 이상의 주사 부위에) 투여된다.
본 발명에 따라 사용하기 위한 변형된 BoNT/A의 효력은 표준 기술에 따라 마우스 LD50 검정에 의해 결정될 수 있다. 상기 검정에서, 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양으로 정의된다. 바람직하게는, 마우스에서의 계산된 중앙값 치사 복강내 용량이다.
본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A가 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 변형된 BoNT/A인 경우, 상기 검정에서 1 단위에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양은 바람직하게는 24.04 pg이다.
본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A가 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하는 변형된 BoNT/A이고, 여기서 변형은 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택되는 경우, 상기 검정에서 1 단위에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양은 바람직하게는 8.44 pg이다.
값 (예를 들어, 170,000 pg 이하)과 관련하여 사용될 때 용어 "이하"는 언급된 값 이하를 의미한다. 따라서, 예로서, "170,000 pg 이하"의 변형된 BoNT/A를 투여하는 것에 대한 언급은 170,000 pg의 변형된 BoNT/A의 투여 뿐만 아니라 170,000 pg 미만의 변형된 BoNT/A의 투여를 포괄한다.
단위 용량은 변형된 BoNT/A의 양, 변형된 BoNT/A의 단위 또는 그의 조합으로 표현될 수 있다.
한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 하기와 같이 하기 경부 근육 중 하나 이상에 하기 투여량으로 투여될 수 있다:
한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 하기와 같이 하기 경부 근육 중 하나 이상에 하기 투여량으로 투여될 수 있다:
한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 하기와 같이 하기 경부 근육 중 하나 이상에 하기 투여량으로 투여될 수 있다 (치료 동안 투여되는 총 용량이, 변형된 BoNT/A가 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 경우에 170,000 pg 또는 7,070 단위의 상한을 초과하지 않거나; 또는 변형된 BoNT/A가 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274, 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택되는 경우에 80,000 pg 또는 9,480 단위의 상한을 초과하지 않는 한):
바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 하기와 같이 하기 경부 근육에 하기 투여량으로 투여될 수 있다 (치료 동안 투여되는 총 용량이, 변형된 BoNT/A가 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 경우에 170,000 pg 또는 7,070 단위의 상한을 초과하지 않거나; 또는 변형된 BoNT/A가 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택되는 경우에 80,000 pg 또는 9,480 단위의 상한을 초과하지 않는 한):
바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 하기와 같이 하기 경부 근육 중 하나 이상에 하기 투여량으로 투여될 수 있다:
바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 하기와 같이 하기 경부 근육에 하기 투여량으로 투여될 수 있다:
본원에 사용된 용어 "우측" 및 "좌측"은 그의 일반적인 의미를 갖는다. 예를 들어, 대상체의 우측 견갑거근은 대상체의 우측에 있는 견갑거근일 것인 반면에, 대상체의 좌측 견갑거근은 대상체의 좌측에 있는 견갑거근일 것이다.
주어진 치료에서 투여되는 단위 용량의 총 수는 단위 용량의 10x 이하 또는 단위 용량의 7x 이하일 수 있다. 단위 용량의 총수는 치료되는 이환 경부 근육에 따라 분할될 수 있고, 예를 들어 한 실시양태에서, 치료 동안 전달되는 용량의 수가 단위 용량의 1x인 경우, 단지 1개의 이환 경부 근육이 치료될 수 있지만, 총량이 2x 단위 용량인 경우, 2개의 이환 경부 근육이 치료될 수 있다. 투여되는 단위 용량의 총수는 9x, 8x, 7x 또는 6x 이하일 수 있다. 투여되는 단위 용량의 총수는 단위 용량의 적어도 2x, 3x, 4x, 5x, 6x, 7x, 바람직하게는 적어도 2x일 수 있다. 투여되는 단위 용량의 총수는 1x 내지 10x, 또는 5x 내지 10x, 바람직하게는 7x 내지 10x일 수 있다.
주어진 치료에서 투여되는 단위 용량의 총수는, 치료 동안 투여되는 총 용량이 변형된 BoNT/A가 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 경우에 170,000 pg 또는 7,070 단위의 상한을 초과하지 않거나; 또는 변형된 BoNT/A가 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274, 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택되는 경우에 80,000 pg 또는 9,480 단위의 상한을 초과하지 않는 한, 단위 용량의 20x 또는 15x 이하 (바람직하게는 14x 이하 또는 7x 이하)일 수 있다. 따라서, 투여되는 단위 용량의 총수는, 치료 동안 투여되는 총 용량이 변형된 BoNT/A가 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 경우에 170,000 pg 또는 7,070 단위의 상한을 초과하지 않거나; 또는 변형된 BoNT/A가 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274, 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택되는 경우에 80,000 pg 또는 9,480 단위의 상한을 초과하지 않는 한, 13x, 12x, 10x, 9x, 8x, 7x 또는 6x 이하일 수 있다. 투여되는 단위 용량의 총수는, 치료 동안 투여되는 총 용량이 변형된 BoNT/A가 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 경우에 170,000 pg 또는 7,070 단위의 상한을 초과하지 않거나; 또는 변형된 BoNT/A가 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274, 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택되는 경우에 80,000 pg 또는 9,480 단위의 상한을 초과하지 않는 한, 적어도 2x, 3x, 4x, 5x, 6x, 7x, 8x, 9x, 10x 단위 용량, 바람직하게는 적어도 2x (예를 들어, 7x 또는 14x)일 수 있다. 투여되는 단위 용량의 총수는, 치료 동안 투여되는 총 용량이 변형된 BoNT/A가 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 경우에 170,000 pg 또는 7,070 단위의 상한을 초과하지 않거나; 또는 변형된 BoNT/A가 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274, 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택되는 경우에 80,000 pg 또는 9,480 단위의 상한을 초과하지 않는 한, 1x 내지 20x (예를 들어, 12x 내지 16x), 1x 내지 15x, 1x 내지 14x, 또는 5x 내지 14x, 바람직하게는 7x 내지 14x일 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 대상체가, 예를 들어 화장품 치료 또는 상이한 적응증에 대한 치료의 일부로서 최근에 언제 클로스트리디움 신경독소 (예를 들어, BoNT)를 사용한 추가의 치료를 받았는지를 (또는 후속적으로 받았는지를) 고려할 것이다. 관련 기술분야에서 통상적인 기술을 사용하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 치료 요법을 그에 따라 적합화할 것이다.
본 발명의 변형된 BoNT/A는 바람직하게는 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 디스포르트®)와 비교하여 더 긴 작용 지속기간 (예를 들어, 적어도 5%, 10%, 25%, 또는 50%의 1종 이상의 증상의 개선)을 갖는다. 상기 작용 지속기간은 적어도 1.25x, 1.5x, 1.75x, 2.0x 또는 2.25x 초과일 수 있다. 변형된 BoNT/A의 작용 지속기간은 6 내지 9개월일 수 있다. 예를 들어, 작용 지속기간은 적어도: 4.5개월 (개시로부터), 5.0개월, 5.5개월, 6개월, 6.5개월, 7.0개월, 7.5개월, 8.0개월, 8.5개월 또는 9.0개월일 수 있다. 특정한 실시양태에서, 작용 지속기간은 9.0개월 초과일 수 있다.
투여가 복수의 이환 경부 근육에 대한 것인 경우, 바람직하게는 상기 투여는 동일한 치료 세션에서 발생한다.
치료는 변형된 BoNT/A의 투여 후 적절한 시간 기간에 반복될 수 있다. 작용 지속기간이 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 디스포르트 ®)의 대략 2배인 것을 고려하면, 대상체가 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 디스포르트 ®)로 치료되는 경우보다 후속 투여 사이에 적합하게는 더 긴 기간이 존재한다. 대상체는 이전 투여 후 적어도 18, 20, 25 또는 30주에 본 발명에 따른 변형된 BoNT/A를 재투여받을 수 있다. 예를 들어, 대상체는 이전 투여 후 적어도 18-45주, 바람직하게는 20-35주에 본 발명에 따른 변형된 BoNT/A를 재투여받을 수 있다.
치료의 효능 (대상체의 증상(들)의 중증도 포함)은 문헌 [Jost et al. 2013 J Neural Transm (Vienna) 120(3):487-496]에서 검토된 토론토 웨스턴 연축성 사경 등급화 척도 (TWSTRS)를 사용하여 평가될 수 있다. TWSTRS는 TWSTRS-중증도 척도, TWSTRS-장애 척도 및 TWSTRS-통증 척도로 이루어진 복합 척도이다. TWSTRS에 대한 보다 높은 점수는 보다 중증의 질환을 나타낸다. TWSTRS-중증도 척도는 하기 항목을 포함한다: A. 최대 편위 (회전, 기울어짐, 전경 또는 후경, 측방 이동, 시상 이동), B. 지속기간 인자, C. 감각 간계의 효과, D. 어깨 상승/전방 변위, E. 운동 범위 (감각 간계의 보조 없이), F. 시간 (환자가 감각 간계의 사용 없이 중립 위치의 10° 이내에서 두부를 유지할 수 있는 최대 60초). A 내지 F의 합은 35의 최대 점수에 이르고, 지속기간 인자는 2회 가중된다. TWSTRS-장애 척도는 CD에 의해 영향을 받을 수 있는 일상 활동의 수행의 평가를 포함하는 6-항목 척도이다: 업무 수행 (작업 또는 가사), 일상 생활 활동 (섭식, 옷입기, 위생), 운전, 독서, 텔레비전 시청, 및 가정 외부의 레저 활동. 각각의 항목은 6-포인트 척도로 등급화되고 (0 = 어려움 없음, 5 = 최고 정도의 장애), 각각의 항목의 합계는 30의 최대 점수에 이른다. TWSTRS-통증 척도는 마지막 주에 환자의 통상적, 최악 및 최선의 통증에 대한 중증도 점수, 뿐만 아니라 지속기간 성분 및 장애에 대한 통증의 기여의 평가로 이루어진다. 점수 범위는 0 내지 20이며, 20은 최고로 가능한 경험 통증에 할당된다.
본원에 사용된 "대상체"는 포유동물, 예컨대 인간 또는 다른 포유동물일 수 있다. 바람직하게는, "대상체"는 인간 대상체를 의미한다. "대상체"는 바람직하게는 성인 대상체, 즉 적어도 18세의 대상체이다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 동의어로 사용된다.
본원에 사용된 용어 "치료하다" 또는 "치료하는"은 예방적 치료 (예를 들어, 장애의 발병을 예방하기 위함) 뿐만 아니라 교정적 치료 (이미 장애를 앓고 있는 대상체의 치료)를 포괄한다. 바람직하게는 본원에 사용된 "치료하다" 또는 "치료하는"은 교정적 치료를 의미한다. 본원에 사용된 용어 "치료하다" 또는 "치료하는"은 장애 및/또는 그의 증상을 지칭한다.
적합한 변형된 BoNT/A 폴리펩티드 (및 이를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 존재하는 경우)는 WO 2015/004461 A1 및 WO 2017/191315에 기재되어 있으며, 이들 둘 다는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
BoNT/A는 클로스트리디아 속의 박테리아에 의해 생산된 클로스트리디움 신경독소의 한 예이다. 이러한 클로스트리디움 신경독소의 다른 예는 씨. 테타니 (TeNT) 및 씨. 보툴리눔 (BoNT) 혈청형 B-G에 의해 생산된 것, 뿐만 아니라 씨. 바라티이 및 씨. 부티리쿰에 의해 생산된 것을 포함한다. 상기 신경독소는 고도로 강력하고 특이적이며, 뉴런 및 이들이 전달되는 다른 세포를 중독시킬 수 있다. 클로스트리디움 독소는 공지된 가장 강력한 독소 중 일부이다. 예로서, 보툴리눔 신경독소는 혈청형에 따라 0.5 내지 5 ng/kg 범위의 마우스에 대한 중앙값 치사 용량 (LD50) 값을 갖는다. 파상풍 및 보툴리눔 독소 둘 다는 영향을 받는 뉴런의 기능, 구체적으로 신경전달물질의 방출을 억제함으로써 작용한다. 보툴리눔 독소는 신경근 접합부에서 작용하고, 말초 신경계에서 콜린성 전달을 억제하는 반면에, 파상풍 독소는 중추 신경계에서 작용한다.
사실상, 클로스트리디움 신경독소 (BoNT/A 포함)는 단일쇄 폴리펩티드로서 합성되고, 이는 단백질분해적 절단 사건에 의해 번역후 변형되어 디술피드 결합에 의해 함께 연결된 2개의 폴리펩티드 쇄를 형성한다. 절단은 쇄간 디술피드 결합을 제공하는 시스테인 잔기 사이에 위치하는, 종종 활성화 부위로 지칭되는 특이적 절단 부위에서 발생한다. 독소의 활성 형태가 상기 2쇄 형태이다. 2개의 쇄는 대략 100 kDa의 분자 질량을 갖는 중쇄 (H-쇄) 및 대략 50 kDa의 분자 질량을 갖는 경쇄 (L-쇄)로 명명된다. H-쇄는 N-말단 전위 성분 (HN 도메인) 및 C-말단 표적화 성분 (HC 도메인)을 포함한다. 절단 부위는 L-쇄와 전위 도메인 성분 사이에 위치한다. HC 도메인의 그의 표적 뉴런에의 결합 및 결합된 독소의 엔도솜을 통한 세포 내로의 내재화 후에, HN 도메인은 L-쇄를 엔도솜 막을 가로질러 시토졸 내로 전위시키고, L-쇄는 프로테아제 기능 (또한 비-세포독성 프로테아제로 공지됨)을 제공한다.
비-세포독성 프로테아제는 SNARE 단백질 (예를 들어, SNAP-25, VAMP, 또는 신탁신)로 공지된 세포내 수송 단백질을 단백질분해적으로 절단함으로써 작용한다 - 문헌 [Gerald K (2002) "Cell and Molecular Biology" (4th edition) John Wiley & Sons, Inc.] 참조. 두문자어 SNARE는 용어 가용성 NSF 부착 수용체로부터 유래하며, 여기서 NSF는 N-에틸말레이미드-감수성 인자를 의미한다. SNARE 단백질은 세포내 소포 융합에 필수적이고, 따라서 세포로부터 소포 수송을 통한 분자의 분비에 필수적이다. 프로테아제 기능은 아연-의존성 엔도펩티다제 활성이고, SNARE 단백질에 대한 높은 기질 특이성을 나타낸다. 따라서, 목적하는 표적 세포로 전달되면, 비-세포독성 프로테아제는 표적 세포로부터의 세포 분비를 억제할 수 있다. 클로스트리디움 독소의 L-쇄 프로테아제는 SNARE 단백질을 절단하는 비-세포독성 프로테아제이다.
SNARE 단백질의 편재성 성질의 관점에서, 클로스트리디움 신경독소, 예컨대 보툴리눔 독소는 광범위한 요법에 성공적으로 사용되어 왔다.
클로스트리디움 보툴리눔 및 씨. 테타니에서의 독소 생산의 유전적 기초에 대한 추가의 세부사항에 대해서는, 문헌 [Henderson et al. (1997) in The Clostridia: Molecular Biology and Pathogenesis, Academic press]을 참조한다.
상기 논의된 바와 같이, 클로스트리디움 신경독소는 대략 100 kDa의 분자 질량을 갖는 중쇄 (H-쇄), 및 대략 50 kDa의 분자 질량을 갖는 경쇄 (L-쇄)의 2개의 폴리펩티드 쇄로부터 형성된다. H-쇄는 C-말단 표적화 성분 (수용체 결합 도메인 또는 HC 도메인) 및 N-말단 전위 성분 (HN 도메인)을 포함한다.
클로스트리디움 신경독소 도메인은 하기에 보다 상세하게 기재된다.
L-쇄 참조 서열의 예는 하기를 포함한다:
보툴리눔 유형 A 신경독소: 아미노산 잔기 1-448
보툴리눔 B형 신경독소: 아미노산 잔기 1-440
상기 확인된 참조 서열은 하위-혈청형에 따라 약간의 변이가 발생할 수 있기 때문에 가이드로 간주되어야 한다. 예로서, US 2007/0166332 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨)는 약간 상이한 클로스트리디움 서열을 언급한다:
보툴리눔 유형 A 신경독소: 아미노산 잔기 M1-K448
보툴리눔 B형 신경독소: 아미노산 잔기 M1-K441
전위 도메인은 H-쇄의 아미노-말단 절반과 대략 동등한 클로스트리디움 신경독소의 H-쇄의 단편, 또는 무손상 H-쇄 내의 그 단편에 상응하는 도메인이다.
참조 전위 도메인의 예는 하기를 포함한다:
보툴리눔 A형 신경독소 - 아미노산 잔기 (449-871)
보툴리눔 B형 신경독소 - 아미노산 잔기 (441-858)
상기 확인된 참조 서열은 하위-혈청형에 따라 약간의 변이가 발생할 수 있기 때문에 가이드로 간주되어야 한다. 예로서, US 2007/0166332 (본원에 참조로 포함됨)는 약간 상이한 클로스트리디움 서열을 언급한다:
보툴리눔 A형 신경독소 - 아미노산 잔기 (A449-K871)
보툴리눔 B형 신경독소 - 아미노산 잔기 (A442-S858)
본 발명의 문맥에서, 전위 도메인을 포함하는 다양한 BoNT/A HN 영역이 본 발명의 측면에서 유용할 수 있다. BoNT/A의 중쇄로부터의 HN 영역은 대략 410-430개 아미노산 길이이고, 전위 도메인을 포함한다. 연구는 클로스트리디움 신경독소 중쇄로부터의 HN 영역의 전체 길이가 전위 도메인의 전위 활성에 필요하지 않다는 것을 보여주었다. 따라서, 이러한 실시양태의 측면은, 예를 들어 적어도 350개 아미노산, 적어도 375개 아미노산, 적어도 400개 아미노산 또는 적어도 425개 아미노산의 길이를 갖는 전위 도메인을 포함하는 BoNT/A HN 영역을 포함할 수 있다. 이러한 실시양태의 다른 측면은, 예를 들어 최대 350개 아미노산, 최대 375개 아미노산, 최대 400개 아미노산 또는 최대 425개 아미노산의 길이를 갖는 전위 도메인을 포함하는 BoNT/A HN 영역을 포함할 수 있다.
용어 HN은 자연-발생 BoNT/A HN 부분, 및 자연에서 발생하지 않는 아미노산 서열 및/또는 합성 아미노산 잔기를 갖는 변형된 BoNT/A HN 부분을 포괄한다. 바람직하게는, 상기 변형된 BoNT/A HN 부분은 상기 언급된 전위 기능을 여전히 입증한다.
클로스트리디움 신경독소 수용체 결합 도메인 (HC) 참조 서열의 예는 하기를 포함한다:
BoNT/A - N872-L1296
BoNT/B - E859-E1291
클로스트리디움 신경독소 (예컨대, BoNT)의 ~50 kDa HC 도메인은 각각 전형적으로 ~25 kDa의 HCC 및 HCN 도메인으로 지칭되는 2개의 별개의 구조적 특색을 포함한다. 수용체 결합에 관여하는 아미노산 잔기는 주로 HCC 도메인에 위치하는 것으로 여겨진다. 천연 클로스트리디움 신경독소의 HC 도메인은 대략 400-440개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 사실은 하기 간행물에 의해 확인되며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다: 문헌 [Umland TC (1997) Nat. Struct. Biol. 4: 788-792; Herreros J (2000) Biochem. J. 347: 199-204; Halpern J (1993) J. Biol. Chem. 268: 15, pp. 11188-11192; Rummel A (2007) PNAS 104: 359-364; Lacey DB (1998) Nat. Struct. Biol. 5: 898-902; Knapp (1998) Am. Cryst. Assoc. Abstract Papers 25: 90; Swaminathan and Eswaramoorthy (2000) Nat. Struct. Biol. 7: 1751-1759; and Rummel A (2004) Mol. Microbiol. 51(3), 631-643].
(참조) HCN 도메인의 예는 다음을 포함한다:
보툴리눔 A형 신경독소 - 아미노산 잔기 (872-1110)
보툴리눔 B형 신경독소 - 아미노산 잔기 (859-1097)
상기 서열 위치는 혈청형/하위유형에 따라 약간 달라질 수 있고, (참조) HCN 도메인의 추가의 예는 다음을 포함한다:
보툴리눔 A형 신경독소 - 아미노산 잔기 (874-1110)
보툴리눔 B형 신경독소 - 아미노산 잔기 (861-1097)
(참조) HCC 도메인의 예는 다음을 포함한다:
보툴리눔 A형 신경독소 - 아미노산 잔기 (Y1111-L1296)
보툴리눔 B형 신경독소 - 아미노산 잔기 (Y1098-E1291)
L-쇄 및 HN 도메인 (임의로 완전 또는 부분 활성화 루프, 예를 들어 변형된 BoNT/A가 단일쇄 형태인 경우 완전 활성화 루프 및 2쇄 형태인 경우 절단된/부분 활성화 루프를 포함함)은 집합적으로 LHN 도메인으로 지칭될 수 있다. 따라서, LHN 도메인은 HC 도메인을 추가로 포함하지 않는다.
본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하는 것일 수 있다. 이러한 변형된 BoNT/A는 공지된 BoNT/A의 사용과 비교하여 부작용의 감소 또는 부재를 나타낸다. 본 발명의 변형된 BoNT/A의 증가된 조직 체류 특성은 또한 증가된 효력 및/또는 작용 지속기간을 제공하고, 공지된 클로스트리디움 독소 치료제와 비교하여 감소된 투여량 (또는 임의의 추가의 유해 효과 없이 증가된 투여량)이 사용되도록 할 수 있으며, 따라서 추가의 이점을 제공한다.
변형은 서열식별번호: 2로 제시된 비변형된 BoNT/A와 비교할 때 변형일 수 있으며, 여기서 아미노산 잔기 넘버링은 서열식별번호: 2와의 정렬에 의해 결정된다. 서열식별번호: 2 (뿐만 아니라 본원에 기재된 변형된 BoNT/A 폴리펩티드에 상응하는 서열식별번호)의 위치 1에서의 메티오닌 잔기의 존재는 임의적이기 때문에, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 아미노산 잔기 넘버링을 결정할 때 메티오닌 잔기의 존재/부재를 고려할 것이다. 예를 들어, 서열식별번호: 2가 메티오닌을 포함하는 경우, 위치 넘버링은 상기 정의된 바와 같을 것이다 (예를 들어, ASN 886은 서열식별번호: 2의 ASN 886일 것임). 대안적으로, 메티오닌이 서열식별번호: 2에 부재하는 경우, 아미노산 잔기 넘버링은 -1로 변형되어야 한다 (예를 들어, ASN 886은 서열식별번호: 2의 ASN 885일 것임). 유사한 고려사항이 본원에 기재된 다른 폴리펩티드 서열의 위치 1에서의 메티오닌이 존재/부재하는 경우에 적용되고, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 관련 기술분야에서 상용적인 기술을 사용하여 정확한 아미노산 잔기 넘버링을 용이하게 결정할 것이다.
아미노산 잔기 넘버링을 결정하기 위한 본원에 기재된 정렬은 서열 상동성 및/또는 % 서열 동일성을 결정하기 위한 본원에 기재된 임의의 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
변형을 위해 표시된 아미노산 잔기(들)는 표면 노출된 아미노산 잔기(들)이다.
변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1052, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함할 수 있다. 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 3, 5, 7, 및 9로부터 선택된 핵산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다. 예를 들어, 핵산 서열은 서열식별번호: 3, 5, 7, 및 9로부터 선택된 핵산 서열에 대해 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99.9% 서열 동일성을 갖는다. 바람직하게는, 본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 3, 5, 7 또는 9를 포함하는 (또는 그로 이루어진) 핵산에 의해 코딩될 수 있다. 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 4, 6, 8, 및 10으로부터 선택된 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열식별번호: 4, 6, 8, 및 10으로부터 선택된 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99.9% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열이다. 바람직하게는, 본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 4, 6, 8, 및 10으로부터 선택된 폴리펩티드 서열을 포함할 수 있다 (보다 바람직하게는 그로 이루어질 수 있다).
용어 "1개 이상의 아미노산 잔기(들)"는 변형된 BoNT/A와 관련하여 사용될 때 바람직하게는 적어도 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 표시된 아미노산 잔기(들)를 의미한다. 따라서, 변형된 BoNT/A는 표시된 아미노산 잔기(들)에서 적어도 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개 (바람직하게는 7개)의 변형을 포함할 수 있다. 변형된 BoNT/A는 1-30, 3-20, 또는 5-10개의 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 보다 바람직하게는, 용어 "1개 이상의 아미노산 잔기(들)"는 변형된 BoNT/A와 관련하여 사용될 때 표시된 아미노산 잔기(들) 모두를 의미한다.
바람직하게는, 표시된 아미노산 잔기(들)에서의 1개 이상의 아미노산 변형(들)이외에, 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 2와 비교하여 임의의 추가의 아미노산 변형을 함유하지 않는다.
가장 바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 930, SER 955, GLN 991, ASN 1026, ASN 1052 및 GLN 1229로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함한다 (보다 바람직하게는 그로 이루어진다). 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 3에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 코딩될 수 있다. 예를 들어, 핵산 서열은 서열식별번호: 3에 대해 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99.9% 서열 동일성을 갖는다. 바람직하게는, 본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 3을 포함하는 (또는 그로 이루어진) 핵산에 의해 코딩될 수 있다. 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 4에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열식별번호: 4에 대해 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99.9% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열이다. 바람직하게는, 본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 4를 포함할 수 있다 (보다 바람직하게는 그로 이루어질 수 있다).
변형은 하기로부터 선택될 수 있다:
i. 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
ii. 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
iii. 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
iv. 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
v. 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
상기 나타낸 바와 같은 변형은 상응하는 비변형된 BoNT/A와 비교하여 증가된 양성 표면 전하 및 증가된 등전점을 갖는 변형된 BoNT/A를 생성한다.
등전점 (pI)은 주어진 단백질의 특정 특성이다. 관련 기술분야에 널리 공지된 바와 같이, 단백질은 특정 아미노산 서열 (단백질에서 아미노산 잔기로도 지칭됨)로부터 제조된다. 20개의 표준 세트의 각각의 아미노산은 상이한 측쇄 (또는 R 기)를 가지며, 이는 단백질 내의 각각의 아미노산 잔기가 상이한 화학적 특성, 예컨대 전하 및 소수성을 나타냄을 의미한다. 이들 특성은 주위 화학적 환경, 예컨대 온도 및 pH에 의해 영향을 받을 수 있다. 단백질의 전반적인 화학적 특징은 이들 다양한 인자의 합에 좌우될 것이다.
특정 아미노산 잔기 (하기 상술됨)는 주위 pH에 따라 전하를 나타낼 수 있는 이온화성 측쇄를 보유한다. 이러한 측쇄가 주어진 pH에서 하전되는지 아닌지의 여부는 관련 이온화성 모이어티의 pKa에 의존하며, 여기서 pKa는 짝염기로부터의 명시된 양성자에 대한 산 해리 상수 (Ka)의 음의 로그이다.
예를 들어, 산성 잔기, 예컨대 아스파르트산 및 글루탐산은 대략 4.1의 pKa 값을 갖는 측쇄 카르복실산 기를 갖는다 (정확한 pKa 값은 온도, 이온 강도 및 이온화성 기의 미세환경에 따라 달라질 수 있음). 따라서, 이들 측쇄는 7.4의 pH (종종 "생리학적 pH"로 지칭됨)에서 음전하를 나타낸다. 낮은 pH 값에서, 이들 측쇄는 양성자화되고 그의 전하를 잃을 것이다.
반대로, 리신 및 아르기닌과 같은 염기성 잔기는 대략 10-12의 pKa 값을 갖는 질소-함유 측쇄 기를 갖는다. 따라서, 이들 측쇄는 7.4의 pH에서 양전하를 나타낸다. 이들 측쇄는 높은 pH 값에서 탈양성자화되고 그의 전하를 잃을 것이다.
따라서, 단백질 분자의 전체 (알짜) 전하는 단백질에 존재하는 산성 및 염기성 잔기의 수 (및 그의 표면 노출 정도) 및 주위 pH에 따라 달라진다. 주변 pH를 변화시키는 것은 단백질 상의 전체 전하를 변화시킨다. 따라서, 모든 단백질에 대해, 양전하 및 음전하의 수가 동일하고 단백질이 전체 알짜 전하를 나타내지 않는 주어진 pH가 존재한다. 이 점은 등전점 (pI)으로 공지되어 있다. 등전점은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 익숙한 단백질 생화학에서의 표준 개념이다.
따라서, 등전점 (pI)은 단백질이 0의 알짜 전하를 나타내는 pH 값으로 정의된다. pI의 증가는 단백질이 0의 알짜 전하를 나타내기 위해 보다 높은 pH 값이 요구됨을 의미한다. 따라서, pI의 증가는 주어진 pH에서 단백질의 알짜 양전하의 증가를 나타낸다. 반대로, pI의 감소는 단백질이 0의 알짜 전하를 나타내는 데 보다 낮은 pH 값이 요구된다는 것을 의미한다. 따라서, pI의 감소는 주어진 pH에서 단백질의 알짜 양전하의 감소를 나타낸다.
단백질의 pI를 결정하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 친숙할 것이다. 예로서, 단백질의 pI는 단백질에 존재하는 각각의 아미노산의 평균 pKa 값으로부터 계산될 수 있다 ("계산된 pI"). 이러한 계산은 관련 기술분야에 공지된 컴퓨터 프로그램, 예컨대 ExPASy로부터의 컴퓨터 pI/MW 도구 (.expasy.org/compute_pi/)를 사용하여 수행될 수 있으며, 이는 본 발명에 따라 pI를 계산하기 위한 바람직한 방법이다. 상이한 분자 사이의 pI 값의 비교는 동일한 계산 기술/프로그램을 사용하여 이루어져야 한다.
적절한 경우, 단백질의 계산된 pI는 등전 포커싱의 기술을 사용하여 실험적으로 확인될 수 있다 ("관찰된 pI"). 이 기술은 단백질을 그의 pI에 따라 분리하기 위해 전기영동을 사용한다. 등전 포커싱은 전형적으로 고정된 pH 구배를 갖는 겔을 사용하여 수행된다. 전기장이 인가될 때, 단백질은 알짜 전하가 0인 pH에 도달할 때까지 pH 구배를 통해 이동하며, 이 지점이 단백질의 pI이다. 등전 포커싱에 의해 제공된 결과는 전형적으로 사실상 비교적 저-해상도이며, 따라서 본 발명자들은 계산된 pI (상기 기재된 바와 같음)에 의해 제공된 결과가 사용하기에 보다 적절하다고 믿는다.
본 명세서 전반에 걸쳐, "pI"는 달리 언급되지 않는 한 "계산된 pI"를 의미한다.
단백질의 pI는 그의 표면 상에 나타난 염기성 및/또는 산성 기의 수를 변경시킴으로써 증가 또는 감소될 수 있다. 이는 단백질의 1개 이상의 아미노산을 변형시킴으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, pI의 증가는 산성 잔기의 수를 감소시킴으로써, 또는 염기성 잔기의 수를 증가시킴으로써 제공될 수 있다.
본 발명의 변형된 BoNT/A는 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)의 것보다 적어도 0.2, 0.4, 0.5 또는 1 pI 단위 더 높은 pI 값을 가질 수 있다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 적어도 6.6, 예를 들어 적어도 6.8의 pI를 가질 수 있다.
20종의 표준 아미노산의 특성을 하기 표에 나타낸다:
다음 아미노산은 하전된 아미노산으로 간주된다: 아스파르트산 (음성), 글루탐산 (음성), 아르기닌 (양성), 및 리신 (양성).
7.4의 pH에서, 아스파르트산 (pKa 3.1) 및 글루탐산 (pKa 4.1)의 측쇄는 음전하를 갖는 반면에, 아르기닌 (pKa 12.5) 및 리신 (pKa 10.8)의 측쇄는 양전하를 갖는다. 아스파르트산 및 글루탐산은 산성 아미노산 잔기로 지칭된다. 아르기닌 및 리신은 염기성 아미노산 잔기로 지칭된다.
다음 아미노산은 비하전된 극성 (이들이 수소 결합에 참여할 수 있음을 의미함) 아미노산으로 간주된다: 아스파라긴, 글루타민, 히스티딘, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 메티오닌 및 트립토판.
다음 아미노산은 비하전된 소수성 아미노산으로 간주된다: 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 페닐알라닌, 프롤린 및 글리신.
아미노산 삽입에서, 추가의 아미노산 잔기 (정상적으로 존재하지 않는 것)가 BoNT/A 폴리펩티드 서열 내로 혼입되어, 상기 서열에서 아미노산 잔기의 총 수를 증가시킨다. 아미노산 결실에서, 아미노산 잔기는 클로스트리디움 독소 아미노산 서열로부터 제거되어, 상기 서열에서 아미노산 잔기의 총 수를 감소시킨다.
바람직하게는, 변형은 유리하게는 변형된 BoNT/A에서 동일한 수의 아미노산 잔기를 유지하는 치환이다. 아미노산 치환에서, BoNT/A 폴리펩티드 서열의 일부를 형성하는 아미노산 잔기는 상이한 아미노산 잔기로 대체된다. 대체 아미노산 잔기는 상기 기재된 바와 같은 20개의 표준 아미노산 중 하나일 수 있다. 대안적으로, 아미노산 치환에서 대체 아미노산은 비-표준 아미노산 (상기 기재된 20개의 표준 세트의 일부가 아닌 아미노산)일 수 있다. 예로서, 대체 아미노산은 염기성 비-표준 아미노산, 예를 들어 L-오르니틴, L-2-아미노-3-구아니디노프로피온산, 또는 리신, 아르기닌 및 오르니틴의 D-이성질체일 수 있다. 비-표준 아미노산을 단백질 내로 도입하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 이. 콜라이 영양요구성 발현 숙주를 사용하는 재조합 단백질 합성을 포함한다.
한 실시양태에서, 치환은 산성 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환, 산성 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환, 및 비하전된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 치환이 산성 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환인 경우, 산성 아미노산 잔기는 그의 상응하는 비하전된 아미드 아미노산 잔기로 대체된다 (즉, 아스파르트산은 아스파라긴으로 대체되고, 글루탐산은 글루타민으로 대체됨).
바람직하게는, 염기성 아미노산 잔기는 리신 잔기 또는 아르기닌 잔기이다. 즉, 치환은 리신 또는 아르기닌으로의 치환이다. 가장 바람직하게는, 변형은 리신으로의 치환이다.
본 발명에 따른 변형 후, 변형된 BoNT/A는 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)가 결합하는 표적 세포 수용체에 결합할 수 있다.
본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 클로스트리디움 독소 HCN 도메인에 위치하는 4 내지 40개의 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 상기 변형된 BoNT/A는 바람직하게는 또한 적어도 6.6의 pI를 갖는다. 상기 변형된 BoNT/A는 바람직하게는 ASN 886, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, ASN 1025, ASN 1026 및 ASN 1052로부터 선택된 적어도 4개의 아미노산의 변형을 포함하며, 여기서 상기 변형은 아미노산의 리신 잔기 또는 아르기닌 잔기로의 치환을 포함한다. 예를 들어, 상기 변형된 BoNT/A 또는 그의 단편은 ASN 886, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1052 및 GLN 1229로부터 선택된 적어도 5개의 아미노산의 변형을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 변형은 아미노산의 리신 잔기 또는 아르기닌 잔기로의 치환을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "변형된 BoNT/A" 또는 "키메라 신경독소"는 바람직하게는 제1 클로스트리디움 신경독소 혈청형으로부터의 클로스트리디움 신경독소 경쇄 및 전위 도메인 (HN 도메인) 및 제2 상이한 클로스트리디움 신경독소 혈청형으로부터 유래하는 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 (바람직하게는 그로 이루어진) 신경독소를 의미한다. 구체적으로, 본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A) 경쇄 및 전위 도메인 (HN 도메인), 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다. 변형된 BoNT/A의 BoNT/A LHN 도메인은 BoNT/B HC 도메인에 공유 연결된다. 본 발명의 변형된 BoNT/A는 키메라 보툴리눔 신경독소로 지칭될 수 있다. 상기 변형된 BoNT/A는 또한 본원에서 "BoNT/AB", "mrBoNT/AB" 또는 "BoNT/AB 키메라"로 지칭된다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인 (BoNT/A LHN 도메인), 및 BoNT/B HC 도메인을 포함할 수 있다. BoNT/A LHN 도메인은 BoNT/B HC 도메인에 공유 연결된다. 상기 변형된 BoNT/A는 또한 본원에서 "BoNT/AB" 또는 "BoNT/AB 키메라"로 지칭된다.
LHN 도메인의 C-말단 아미노산 잔기는 BoNT/A의 LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선의 제1 아미노산 잔기에 상응할 수 있고, HC 도메인의 N-말단 아미노산 잔기는 BoNT/B에서 LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선의 제2 아미노산 잔기에 상응할 수 있다.
BoNT/B 폴리펩티드 서열의 예는 서열식별번호: 16 (유니프롯 수탁 번호 B1INP5)으로서 제공된다.
본원에서 "BoNT/A의 LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선의 제1 아미노산 잔기"에 대한 언급은 LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선의 N-말단 잔기를 의미한다.
본원에서 "BoNT/B의 LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선의 제2 아미노산 잔기"에 대한 언급은 LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선의 N-말단 잔기 다음의 아미노산 잔기를 의미한다.
"310 나선"은 α-나선, β-시트 및 역회전과 함께 단백질 및 폴리펩티드에서 발견되는 2차 구조의 유형이다. 310 나선 내의 아미노산은 각각의 완전한 회전이 이들 사이의 분자내 수소 결합을 분리하는 3개의 잔기 및 10개의 원자에 의해 완료되는 우측 나선 구조로 배열된다. 각각의 아미노산은 나선 내의 120° 턴 (즉, 나선은 턴당 3개의 잔기를 가짐), 및 나선 축을 따라 2.0 Å ( = 0.2 nm)의 번역에 상응하고, 수소 결합을 만듦으로써 형성된 고리 내에 10개의 원자를 갖는다. 가장 중요하게는, 아미노산의 N-H 기는 3개 잔기 앞의 아미노산의 C = O 기와 수소 결합을 형성하고; 이러한 반복된 i + 3 → i 수소 결합은 310 나선을 정의한다. 310 나선은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 익숙한 구조 생물학에서의 표준 개념이다.
이러한 310 나선은 실제 나선을 형성하는 4개의 잔기 및 2개의 캡 (또는 전이) 잔기 (이들 4개의 잔기의 각각의 말단에 하나씩)에 상응한다. 본원에 사용된 용어 "LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선"은 이들 6개의 잔기로 이루어진다.
구조 분석 및 서열 정렬을 수행함으로써, LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선을 확인하였다. 상기 310 나선은 그의 N-말단 (LHN 도메인의 C-말단 부분)에서 α-나선에 의해 및 그의 C-말단 (HC 도메인의 N-말단 부분)에서 β-가닥에 의해 둘러싸인다. 310 나선의 제1 (N-말단) 잔기 (캡 또는 전이 잔기)는 또한 상기 α-나선의 C-말단 잔기에 상응한다.
LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선은 예를 들어 보툴리눔 신경독소의 공중 이용가능한 결정 구조, 예를 들어 보툴리눔 신경독소 A1 및 B1 각각에 대해 3BTA w.rcsb.org/pdb/explore/explore.do?structureId=3BTA) 및 1EPW w.rcsb.org/pdb/explore/explore.do?structureId=1EPW)로부터 결정될 수 있다.
공개적으로 이용가능한 인 실리코 모델링 및 정렬 도구, 예를 들어 상동성 모델링 서버 LOOPP (Learning, Observing and Outputting Protein Patterns,p.org), PHYRE (Protein Homology/analogY Recognition Engine,w.sbg.bio.ic.ac.uk/phyre2/) 및 Rosetta w.rosettacommons.org/), 단백질 중첩 서버 SuperPose t.biology.ualberta.ca/superpose/), 정렬 프로그램 Clustal Omega w.clustal.org/omega/), 및 분자 및 세포 생물학자에 대한 인터넷 자원 l-tools.ca/에 열거된 다수의 다른 도구/서비스가 또한 다른 신경독소에서 LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선의 위치를 결정하는 데 사용될 수 있다. 특히, "HN/HCN" 접합부 주위의 영역은 구조적으로 고도로 보존될 수 있으며, 이는 이를 상이한 혈청형을 중첩시키는 이상적인 영역으로 만든다.
예를 들어, 하기 방법론을 이용하여 다른 신경독소에서 상기 310 나선의 서열을 결정할 수 있다:
1. 구조적 상동성 모델링 도구 LOOP p.org)를 사용하여 BoNT/A1 결정 구조 (3BTA.pdb)에 기반한 다른 BoNT 혈청형의 예측된 구조를 수득할 수 있다;
2. 이와 같이 하여 수득된 구조적 (pdb) 파일은 HCN 도메인의 N-말단 단부 및 그 앞의 약 80개 잔기 (HN 도메인의 일부임)만을 포함하도록 편집되고, 그에 의해 구조적으로 고도로 보존된 "HN/HCN" 영역을 보유할 수 있다;
3. 단백질 중첩 서버 SuperPose t.biology.ualberta.ca/superpose/)를 사용하여 각각의 혈청형을 3BTA.pdb 구조 상에 중첩시킬 수 있다;
4. 중첩된 pdb 파일을 검사하여 BoNT/A1의 HC 도메인의 시작에 310 나선을 위치시킬 수 있고, 이어서 다른 혈청형에서의 상응하는 잔기를 확인할 수 있다.
5. 다른 BoNT 혈청형 서열은 상응하는 잔기가 정확한지를 체크하기 위해 Clustal Omega를 사용하여 정렬될 수 있다.
상기 방법에 의해 결정된 LHN, HC 및 310 나선 도메인의 예를 아래에 제시한다:
구조 분석 및 서열 정렬을 사용하여, LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선 다음의 β-가닥은 모든 보툴리눔 및 파상풍 신경독소에서 보존된 구조이고, LHN 및 HC 도메인을 분리하는 310 나선의 제1 잔기로부터 출발할 때 (예를 들어, BoNT/A1에 대한 잔기 879에서) 제8 잔기에서 출발하는 것으로 밝혀졌다.
BoNT/AB 키메라는 BoNT/B로부터의 HC 도메인에 공유 연결된 BoNT/A로부터의 LHN 도메인을 포함할 수 있으며, 여기서 LHN 도메인의 C-말단 아미노산 잔기는 BoNT/A의 HC 도메인의 시작부 (N-말단)에 위치한 β-가닥의 N-말단의 제8 아미노산 잔기에 상응하고, HC 도메인의 N-말단 아미노산 잔기는 BoNT/B의 HC 도메인의 시작부 (N-말단)에 위치한 β-가닥의 N-말단의 제7 아미노산 잔기에 상응한다.
BoNT/AB 키메라는 BoNT/B로부터의 HC 도메인에 공유 연결된 BoNT/A로부터의 LHN 도메인을 포함할 수 있으며, 여기서 LHN 도메인의 C-말단 아미노산 잔기는 BoNT/A의 LHN 도메인의 말단 (C-말단)에 위치한 α-나선의 C-말단 아미노산 잔기에 상응하고, HC 도메인의 N-말단 아미노산 잔기는 BoNT/B의 LHN 도메인의 말단 (C-말단)에 위치한 α-나선의 C-말단 아미노산 잔기에 대해 바로 C-말단인 아미노산 잔기에 상응한다.
BoNT/AB 키메라의 설계 과정의 근거는 2차 구조가 손상되지 않?岵습? 보장하고, 그에 의해 3차 구조 및 각각의 도메인의 기능에 대한 임의의 변화를 최소화하려는 것이다. 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, BoNT/AB 키메라에서 310 나선의 4개의 중심 아미노산 잔기를 파괴하지 않음으로써 키메라 신경독소에 대한 최적 입체형태를 보장하며, 그에 의해 키메라 신경독소가 그의 기능을 그의 전체 능력에 대해 발휘하도록 하는 것으로 가정된다. 실제로, 놀랍게도, BoNT/A의 310 나선의 제1 아미노산 잔기 및 BoNT/B의 310 나선의 제2 아미노산 잔기만을 보유하는 것은 가용성 및 기능적 BoNT/AB 키메라의 생산을 허용할 뿐만 아니라, 다른 BoNT/AB 키메라에 비해 개선된 특성, 특히 증가된 효력, 증가된 안전성 비 및/또는 더 긴 작용 지속기간 (뿐만 아니라 비변형된 BoNT/A와 비교하여 증가된 안전성 비 및/또는 작용 지속기간)을 추가로 유도한다.
BoNT/A 경쇄, BoNT/A 전위 도메인, 및/또는 BoNT/B HC 도메인은 하기 기재된 것들을 포함하나 이에 제한되지는 않는 변형된 BoNT/A 경쇄, BoNT/A 전위 도메인, 및/또는 BoNT/B HC 도메인 또는 그의 유도체일 수 있다. 변형된 BoNT/A 경쇄, BoNT/A 전위 도메인, 및/또는 BoNT/B HC 도메인 또는 유도체는 BoNT/A 경쇄, BoNT/A 전위 도메인, 및/또는 BoNT/B HC 도메인의 천연 (비변형된) 형태와 비교하여 변형된 1개 이상의 아미노산을 함유할 수 있거나, 또는 BoNT/A 경쇄, BoNT/A 전위 도메인, 및/또는 BoNT/B HC 도메인의 천연 (비변형된) 형태에 존재하지 않는 1개 이상의 삽입된 아미노산을 함유할 수 있다. 예로서, 변형된 BoNT/A 경쇄, BoNT/A 전위 도메인, 및/또는 BoNT/B HC 도메인은 천연 (비변형된) BoNT/A 경쇄, BoNT/A 전위 도메인, 및/또는 BoNT/B HC 도메인 서열에 비해 하나 이상의 도메인에 변형된 아미노산 서열을 가질 수 있다. 이러한 변형은 그의 기능적 측면, 예를 들어 생물학적 활성 또는 지속성을 변형시킬 수 있다. 따라서, 한 실시양태에서, BoNT/A 경쇄, BoNT/A 전위 도메인, 및/또는 BoNT/B HC 도메인은 변형된 BoNT/A 경쇄, BoNT/A 전위 도메인, 및/또는 BoNT/B HC 도메인, 또는 변형된 BoNT/A 경쇄, BoNT/A 전위 도메인, 및/또는 BoNT/B HC 도메인 유도체이다.
변형된 BoNT/B HC 도메인은 표적 신경 세포에 대한 결합을 변형시키는, 예를 들어 천연 (비변형된) BoNT/B HC 도메인과 비교하여 보다 높거나 보다 낮은 친화도 결합을 제공하는 1종 이상의 변형을 가질 수 있다. BoNT/B HC 도메인에서의 이러한 변형은 HC 도메인의 강글리오시드 결합 부위 또는 표적 신경 세포의 강글리오시드 수용체 및/또는 단백질 수용체에 대한 결합을 변경시키는 단백질 (예를 들어, 시냅토태그민) 결합 부위에서의 잔기를 변형시키는 것을 포함할 수 있다. 이러한 변형된 신경독소의 예는 WO 2006/027207 및 WO 2006/114308에 기재되어 있으며, 이들 둘 다는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
변형된 경쇄는 그의 아미노산 서열에 1종 이상의 변형, 예를 들어 변형된 경쇄의 SNARE 단백질 특이성을 변경 또는 변형시킬 수 있는 기질 결합 또는 촉매 도메인에서의 변형을 가질 수 있으며, 단 바람직하게는 상기 변형은 상기 경쇄를 촉매적으로 불활성화시키지 않는다. 이러한 변형된 신경독소의 예는 WO 2010/120766 및 US 2011/0318385에 기재되어 있으며, 이들 둘 다는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
BoNT/A로부터의 LHN 도메인은 서열식별번호: 2의 아미노산 잔기 1 내지 872, 또는 그에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열에 상응할 수 있다. BoNT/A로부터의 LHN 도메인은 서열식별번호: 2의 아미노산 잔기 1 내지 872, 또는 그에 대해 적어도 80%, 90% 또는 95% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열에 상응할 수 있다. 바람직하게는, BoNT/A로부터의 LHN 도메인은 서열식별번호: 2의 아미노산 잔기 1 내지 872에 상응한다.
BoNT/B로부터의 HC 도메인은 서열식별번호: 16의 아미노산 잔기 860 내지 1291, 또는 그에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열에 상응할 수 있다. BoNT/B로부터의 HC 도메인은 서열식별번호: 16의 아미노산 잔기 860 내지 1291, 또는 그에 대해 적어도 80%, 90% 또는 95% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열에 상응할 수 있다. 바람직하게는, BoNT/B로부터의 HC 도메인은 서열식별번호: 16의 아미노산 잔기 860 내지 1291에 상응한다.
바람직하게는, BoNT/AB 키메라는 BoNT/A1 LHN 도메인 및 BoNT/B1 HC 도메인을 포함한다. 보다 바람직하게는, LHN 도메인은 BoNT/A1 (서열식별번호: 2)의 아미노산 잔기 1 내지 872에 상응하고, HC 도메인은 BoNT/B1 (서열식별번호: 16)의 아미노산 잔기 860 내지 1291에 상응한다.
바람직하게는, BoNT/B HC 도메인은 천연 BoNT/B 서열과 비교하여 인간 Syt II에 대한 BoNT/B 신경독소의 결합 친화도를 증가시키는 효과를 갖는 HCC 서브도메인에서의 적어도 1개의 아미노산 잔기 치환, 부가 또는 결실을 추가로 포함한다. BoNT/B HCC 서브도메인에서의 적합한 아미노산 잔기 치환, 부가 또는 결실은 WO 2013/180799 및 WO 2016/154534 (둘 다 본원에 참조로 포함됨)에 개시되어 있다.
BoNT/B HCC 서브도메인에서의 적합한 아미노산 잔기 치환, 부가 또는 결실은 V1118M; Y1183M; E1191M; E1191I; E1191Q; E1191T; S1199Y; S1199F; S1199L; S1201V; E1191C, E1191V, E1191L, E1191Y, S1199W, S1199E, S1199H, W1178Y, W1178Q, W1178A, W1178S, Y1183C, Y1183P 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 치환 돌연변이를 포함할 수 있다.
BoNT/B HCC 서브도메인에서의 적합한 아미노산 잔기 치환, 부가 또는 결실은 E1191M 및 S1199L, E1191M 및 S1199Y, E1191M 및 S1199F, E1191Q 및 S1199L, E1191Q 및 S1199Y, E1191Q 및 S1199F, E1191M 및 S1199W, E1191M 및 W1178Q, E1191C 및 S1199W, E1191C 및 S1199Y, E1191C 및 W1178Q, E1191Q 및 S1199W, E1191V 및 S1199W, E1191V 및 S1199Y, 또는 E1191V 및 W1178Q로 이루어진 군으로부터 선택된 2개의 치환 돌연변이의 조합을 추가로 포함할 수 있다.
BoNT/B HCC 서브도메인에서의 적합한 아미노산 잔기 치환, 부가 또는 결실은 또한 E1191M, S1199W 및 W1178Q인 3개의 치환 돌연변이의 조합을 포함할 수 있다.
가장 바람직하게는, BoNT/B HCC 서브도메인에서의 적합한 아미노산 잔기 치환, 부가 또는 결실은 E1191M 및 S1199Y인 2개의 치환 돌연변이의 조합을 포함한다. 이러한 변형은 예를 들어 BoNT/AB 키메라 서열식별번호: 13 및 서열식별번호: 14에 존재한다.
변형은 서열식별번호: 16으로 제시된 비변형된 BoNT/B와 비교하였을 때의 변형일 수 있으며, 여기서 아미노산 잔기 넘버링은 서열식별번호: 16과의 정렬에 의해 결정된다. 서열식별번호: 16 (뿐만 아니라 본원에 기재된 변형된 BoNT/A 폴리펩티드에 상응하는 서열식별번호)의 위치 1에서의 메티오닌 잔기의 존재가 임의적이기 때문에, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 아미노산 잔기 넘버링을 결정할 때 메티오닌 잔기의 존재/부재를 고려할 것이다. 예를 들어, 서열식별번호: 16이 메티오닌을 포함하는 경우, 위치 넘버링은 상기 정의된 바와 같을 것이다 (예를 들어, E1191은 서열식별번호: 16의 E1191일 것임). 대안적으로, 메티오닌이 서열식별번호: 16에 부재하는 경우, 아미노산 잔기 넘버링은 -1로 변형되어야 한다 (예를 들어, E1191은 서열식별번호: 16의 E1190일 것임). 유사한 고려사항이 본원에 기재된 다른 폴리펩티드 서열의 위치 1에서의 메티오닌이 존재/부재하는 경우에 적용되고, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 관련 기술분야에서 상용적인 기술을 사용하여 정확한 아미노산 잔기 넘버링을 용이하게 결정할 것이다.
본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 11-15로부터 선택된 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열식별번호: 11-15로부터 선택된 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99.9% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열이다. 바람직하게는, 본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 11-15로부터 선택된 폴리펩티드 서열을 포함할 수 있다 (보다 바람직하게는 그로 이루어질 수 있다).
변형된 BoNT/A가 BoNT/AB 키메라인 경우, 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 14에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 서열식별번호: 14에 대해 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99.9% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열이다. 가장 바람직하게는, 본 발명에 사용하기 위한 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 14를 포함할 수 있다 (보다 바람직하게는 그로 이루어질 수 있다).
아미노산 잔기의 치환, 삽입 또는 결실에 의해 단백질을 변형시키는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예로서, 아미노산 변형은 BoNT/A를 코딩하는 (예를 들어, 비변형된 BoNT/A를 코딩하는) DNA 서열의 변형에 의해 도입될 수 있다. 이는 표준 분자 클로닝 기술을 사용하여, 예를 들어 목적하는 아미노산(들)을 코딩하는 DNA (올리고뉴클레오티드)의 짧은 가닥을 사용하여 폴리머라제 효소의 사용으로 원래 코딩 서열을 대체하는 부위-지정 돌연변이유발에 의해, 또는 유전자의 일부를 다양한 효소 (예를 들어, 리가제 및 제한 엔도뉴클레아제)로 삽입/결실시킴으로써 달성될 수 있다. 대안적으로, 변형된 유전자 서열은 화학적으로 합성될 수 있다.
본원에 기재된 변형된 BoNT/A의 폴리펩티드 서열이 예를 들어 정제를 위한 태그, 예컨대 His-태그를 포함하는 경우, 상기 태그는 임의적이다. 바람직하게는, 상기 태그는 본 발명에 따른 변형된 BoNT/A의 사용 전에 제거된다.
상기 논의된 바와 같이, 본원에 기재된 변형된 BoNT/A는 증가된 효력 및/또는 작용 지속기간을 또한 제공하는 증가된 조직 체류 특성을 갖고, 임의의 추가의 부정적 영향 없이 증가된 투여량을 가능하게 할 수 있다. 이들 유리한 특성이 정의될 수 있는 하나의 방식은 변형된 BoNT/A의 안전성 비의 관점에서이다. 이와 관련하여, 클로스트리디움 독소의 바람직하지 않은 효과 (투여 부위로부터의 독소의 확산에 의해 유발됨)는 관련 동물 모델 (예를 들어, 체중 감소가 투여 7일 이내에 검출되는 마우스)에서 백분율 체중 감소를 측정함으로써 실험적으로 평가될 수 있다. 반대로, 클로스트리디움 독소의 목적하는 온-타겟 효과는 근육 마비의 척도인 발가락 외전 점수 (DAS) 검정에 의해 실험적으로 평가될 수 있다. DAS 검정은 젤라틴 포스페이트 완충제 중에 제제화된 클로스트리디움 독소 20 μl를 마우스 비복근/가자미근 복합체 내로 주사한 후, 아오키(Aoki) 방법 (문헌 [Aoki KR, Toxicon 39: 1815-1820; 2001])을 사용하여 발가락 외전 점수를 평가함으로써 수행될 수 있다. DAS 검정에서, 마우스가 그의 뒷다리를 연장하고 그의 뒷발가락을 외전시키는 특징적인 놀람 반응을 도출하기 위해 마우스를 꼬리로 잠시 매단다. 클로스트리디움 독소 주사 후, 다양한 정도의 발가락 외전을 5-점 척도로 점수화하였다 (0=정상 내지 4=발가락 외전 및 다리 연장의 최대 감소).
이어서, 본 발명의 변형된 BoNT/A (또는 비교를 위한 비변형된 BoNT/A)의 안전성 비는 체중의 10% 감소에 요구되는 독소의 양 (마우스에서 투여 후 처음 7일 이내에 피크 효과에서 측정됨)과 2의 DAS 점수에 요구되는 독소의 양 사이의 비로서 표현될 수 있다. 따라서, 높은 안전성 비 점수가 요망되고, 이는 바람직하지 않은 오프-타겟 효과가 거의 없이 표적 근육을 효과적으로 마비시킬 수 있는 독소를 나타낸다. 본 발명의 변형된 BoNT/A는 동등한 비변형된 (천연) BoNT/A의 안전성 비보다 더 높은 안전성 비를 갖는다.
높은 안전성 비는 치료 지수의 증가를 나타내기 때문에 요법에서 특히 유리하다. 다시 말해서, 이는 대안적 클로스트리디움 신경독소 치료제와 비교하여 감소된 투여량이 사용될 수 있고/거나 증가된 투여량이 임의의 추가의 (예를 들어, 유해) 효과 없이 사용될 수 있음을 의미한다. 유해 효과는 전신 독성 및 인접한 근육으로의 바람직하지 않은 확산을 포함한다. 추가의 효과 없이 보다 높은 용량의 신경독소를 사용할 가능성은 보다 높은 용량이 통상적으로 신경독소의 더 긴 작용 지속기간으로 이어지기 때문에 특히 유리하다.
변형된 BoNT/A의 효력은 마우스 비복근/가자미근 복합체에 투여될 때 주어진 DAS 점수, 예를 들어 2의 DAS 점수 (ED50 용량) 또는 4의 DAS 점수로 이어지는 신경독소의 최소 용량으로서 표현될 수 있다. 변형된 BoNT/A의 효력은 또한 신경독소에 의한 SNARE 절단을 측정하는 세포 검정에서의 EC50 용량, 예를 들어 변형된 BoNT/A에 의한 SNAP25 절단을 측정하는 세포 검정에서의 EC50 용량으로 표현될 수 있다.
변형된 BoNT/A의 작용 지속기간은 마우스 비복근/가자미근 복합체에 대해 주어진 용량의 신경독소, 예를 들어 4의 DAS 점수로 이어지는 신경독소의 최소 용량의 투여 후 0의 DAS 점수를 회수하는 데 요구되는 시간으로서 표현될 수 있다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 발명의 변형된 BoNT/A는 7 초과 (예를 들어, 적어도 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50)의 안전성 비를 가지며, 여기서 안전성 비는 -10% 체중 변화에 요구되는 독소의 용량 (pg/마우스)을 DAS ED50 (pg/마우스)으로 나눈 것으로서 계산된다 [ED50 = 2의 DAS 점수를 생성하는 데 요구되는 용량].
한 실시양태에서, 본 발명의 변형된 BoNT/A는 적어도 10의 안전성 비를 갖는다. 한 실시양태에서, 본 발명의 변형된 BoNT/A는 적어도 15의 안전성 비를 갖는다.
바람직하게는, 변형된 BoNT/A가 본원에 기재된 바와 같은 ASN 886, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1052, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산 잔기(들)를 포함하는 것인 경우, 상기 변형된 BoNT/A는 적어도 20, 보다 바람직하게는 적어도 22 (예를 들어, 23-25)의 안전성 비를 갖는다.
바람직하게는, 변형된 BoNT/A가 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B HC 도메인을 포함하는 것인 경우, 변형된 BoNT/A는 적어도 10, 보다 바람직하게는 적어도 12 (예를 들어, 14-15)의 안전성 비를 갖는다.
변형된 BoNT/A는 바람직하게는 비-복합체화된 형태 (자연 발생 BoNT/A에 존재하는 복합체화 단백질이 없음)이다. 이러한 복합체화 단백질의 예는 신경독소-연관 단백질 (NAP) 및 비독성-비헤마글루티닌 성분 (NTNH)을 포함한다. 그러나, 변형된 BoNT/A는 재조합 변형된 BoNT/A인 것이 바람직하다. 이러한 본 발명의 변형된 BoNT/A는 재조합 핵산 기술을 사용하여 생산될 수 있다.
한 실시양태에서, 변형된 BoNT/A를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 (예를 들어, DNA)이 제공된다. 한 실시양태에서, 핵산 서열은 프로모터 및 종결인자를 포함하는 DNA 벡터의 일부로서 제조된다. 핵산 서열은 본원에 기재된 임의의 핵산 서열로부터 선택될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 벡터는 하기로부터 선택된 프로모터를 갖는다:
프로모터 유도제 전형적 유도 조건
Tac (하이브리드) IPTG 0.2 mM (0.05-2.0 mM)
AraBAD L-아라비노스 0.2% (0.002-0.4%)
T7-lac 오퍼레이터 IPTG 0.2 mM (0.05-2.0 mM)
또 다른 바람직한 실시양태에서, 벡터는 하기로부터 선택된 프로모터를 갖는다:
프로모터 유도제 전형적 유도 조건
Tac (하이브리드) IPTG 0.2 mM (0.05-2.0 mM)
AraBAD L-아라비노스 0.2% (0.002-0.4%)
T7-lac 오퍼레이터 IPTG 0.2 mM (0.05-2.0 mM)
T5-lac 오퍼레이터 IPTG 0.2 mM (0.05-2.0 mM)
핵산 분자는 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 따라서, 핵산 분자는 화학적 합성 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 핵산 분자는 분자 생물학 기술을 사용하여 제조될 수 있다.
본 발명의 DNA 구축물은 바람직하게는 인 실리코 설계된 후, 통상적인 DNA 합성 기술에 의해 합성된다.
상기 언급된 핵산 서열 정보는 사용될 궁극적인 숙주 세포 (예를 들어, 이. 콜라이) 발현 시스템에 따라 코돈-편향을 위해 임의로 변형된다.
용어 "뉴클레오티드 서열" 및 "핵산"은 본원에서 동의어로 사용된다. 바람직하게는, 뉴클레오티드 서열은 DNA 서열이다.
본 발명의 변형된 BoNT/A는 단일쇄로서 또는 2쇄로서 존재할 수 있다. 그러나, 변형된 BoNT/A는 L-쇄가 디술피드 결합을 통해 H-쇄 (또는 그의 성분, 예를 들어 HN 도메인)에 연결된 2쇄로서 존재하는 것이 바람직하다.
경쇄 및 중쇄를 갖는 단일쇄 변형된 BoNT/A의 생산은 발현 숙주에서 변형된 BoNT/A를 코딩하는 핵산을 발현시키고, 숙주 세포를 용해시켜 단일쇄 변형된 BoNT/A를 함유하는 숙주 세포 균질물을 제공하고, 단일쇄 변형된 BoNT/A를 단리하는 것을 포함하는 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 본원에 기재된 단일쇄 변형된 BoNT/A는, 단일쇄 변형된 BoNT/A를 변형된 BoNT/A의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법을 사용하여 단백질분해적으로 프로세싱될 수 있다 (예를 들어, 여기서 경쇄 및 중쇄는 디술피드 결합에 의해 함께 연결됨). 2쇄 변형된 BoNT/A는 바람직하게는 이러한 방법에 의해 수득가능하다.
따라서, 본 발명에 사용된 변형된 BoNT/A는 바람직하게는 단일쇄 BoNT/A로부터 생산된 2쇄 변형된 BoNT/A이며, 여기서 단일쇄 BoNT/A는 본원에 기재된 폴리펩티드 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 예를 들어, 본 발명에 사용된 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 14에 대해 적어도 70% (예를 들어, 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99.9%) 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 폴리펩티드로부터 생산된 2쇄 변형된 BoNT/A인 것이 바람직하다. 가장 바람직하게는, 본 발명에 사용된 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 14를 포함하는 (보다 더 바람직하게는 그로 이루어진) 폴리펩티드로부터 생산된 2쇄 변형된 BoNT/A이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 경쇄 (L-쇄)가 디술피드 결합을 통해 중쇄 (H-쇄)에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A이고, 이는 서열식별번호: 14를 포함하는 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능하다. 일부 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 L-쇄가 디술피드 결합을 통해 H-쇄에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A이고, 이는 서열식별번호: 14로 이루어진 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능하다.
한 실시양태에서, 본 발명에 사용된 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 4에 대해 적어도 70% (예를 들어, 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99.9%) 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 폴리펩티드로부터 생산된 2쇄 변형된 BoNT/A이다. 바람직하게는, 본 발명에 사용된 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 4를 포함하는 (보다 바람직하게는 그로 이루어진) 폴리펩티드로부터 생산된 2쇄 변형된 BoNT/A이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 경쇄 (L-쇄)가 디술피드 결합을 통해 중쇄 (H-쇄)에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A이고, 이는 서열식별번호: 4를 포함하는 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능하다. 일부 실시양태에서, 변형된 BoNT/A는 L-쇄가 디술피드 결합을 통해 H-쇄에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A이고, 이는 서열식별번호: 4로 이루어진 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능하다.
본원에 사용된 용어 "수득가능한"은 또한 용어 "수득된"을 포괄한다. 한 실시양태에서, 용어 "수득가능한"은 수득된 것을 의미한다.
활성화 루프를 절단하는 데 사용되는 프로테아제는 바람직하게는 Lys-C이다. 활성화 루프를 절단하여 2쇄 클로스트리디움 신경독소를 생산하는 적합한 프로테아제 및 방법은 WO 2014/080206, WO2014/079495 및 EP2677029A2에 교시되어 있으며, 이는 본원에 참조로 포함된다. Lys-C는 그 안에 존재하는 리신 잔기 중 1개 이상에 대해 C-말단에서 활성화 루프를 절단할 수 있다. Lys-C가 활성화 루프를 1회 초과로 절단하는 경우, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 2쇄 변형된 BoNT/A의 활성화 루프의 작은 펩티드가 본원에 제시된 서열식별번호와 비교할 때 부재할 수 있다는 것을 알 것이다.
본 발명의 변형된 BoNT/A는 대상체에게 투여하기 위한 임의의 적합한 방식으로, 예를 들어 제약 조성물의 일부로서 제제화될 수 있다. 따라서, 한 측면에서, 본 발명은 본 발명의 변형된 BoNT/A 및 제약상 허용되는 담체, 부형제, 아주반트, 및/또는 염을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
유체 투여 형태는 전형적으로 변형된 BoNT/A 및 발열원-무함유 멸균 비히클을 이용하여 제조된다. 변형된 BoNT/A는 사용된 비히클 및 농도에 따라 비히클 중에 용해 또는 현탁될 수 있다. 용액을 제조하는 데 있어서, 변형된 BoNT/A는 비히클 중에 용해될 수 있고, 용액은 필요한 경우에 염화나트륨의 첨가에 의해 등장성으로 제조되고, 무균 기술을 사용하여 멸균 필터를 통한 여과에 의해 멸균된 후에 적합한 멸균 바이알 또는 앰플 내로 충전하고 밀봉된다. 대안적으로, 용액 안정성이 적절한 경우, 그의 밀봉된 용기 내의 용액을 오토클레이빙에 의해 멸균할 수 있다. 유리하게는 첨가제, 예컨대 완충제, 가용화제, 안정화제, 보존제 또는 살박테리아제, 현탁화제 또는 유화제 및/또는 국부 마취제가 비히클 중에 용해될 수 있다.
사용 전에 적합한 비히클 중에 용해되거나 현탁되는 건조 분말은 멸균 영역에서 무균 기술을 사용하여 사전-멸균된 성분을 멸균 용기에 충전함으로써 제조될 수 있다. 대안적으로, 성분은 멸균 영역에서 무균 기술을 사용하여 적합한 용기 내로 용해될 수 있다. 이어서, 생성물을 동결 건조시키고, 용기를 무균 밀봉한다.
본원에 기재된 투여 경로에 적합한 비경구 현탁액은, 멸균 성분이 용해되는 대신에 멸균 비히클 중에 현탁되고 멸균이 여과에 의해 달성될 수 없는 것을 제외하고는 실질적으로 동일한 방식으로 제조된다. 성분은 멸균 상태로 단리될 수 있거나, 또는 대안적으로 단리 후에, 예를 들어 감마선 조사에 의해 멸균될 수 있다.
유리하게는, 현탁화제, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈이 성분들의 균일한 분포를 용이하게 하기 위해 조성물(들)에 포함된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는, 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)의 단위 투여 형태를 제공한다:
a. 31-707 단위의 변형된 BoNT/A (여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양임); 또는
b. 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A; 및
c. 임의로 제약상 허용되는 담체, 부형제, 아주반트 및/또는 염,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다.
단위 투여 형태의 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 14에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 서열식별번호: 14에 대해 적어도 80%, 90%, 95% 또는 99.9% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열이다. 가장 바람직하게는, 변형된 BoNT/A는 서열식별번호: 14를 포함할 수 있다 (보다 바람직하게는 그로 이루어질 수 있다).
경부 이상긴장증을 치료하기 위한 단위 투여 형태는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A를 포함할 수 있으며, 여기서 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다. 단위 용량 범위의 상한은 16,500, 15,500, 14,500, 13,500, 12,500, 11,500, 10,500, 9,500, 8,500, 7,500, 6,500, 5,500, 4,500, 3,500, 2,500, 2,250, 2,000, 1,500, 1,250, 1,000 또는 750 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 상한은 16,000 pg이다. 단위 용량 범위의 하한은 800, 850, 950, 1,000, 1,500, 1,750, 2,000, 2,500, 3,000, 3,500, 4,000, 4,500 또는 5,000 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 하한은 1,000 pg이다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 1,000 pg 내지 16,000 pg의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 950 pg 내지 1,250 pg, 1,750 pg 내지 2,250 pg, 또는 8,000 pg 내지 12,000 pg이다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 1,000, 2,000, 3,000, 8,000 또는 16,000 pg일 수 있다.
경부 이상긴장증을 치료하기 위한 단위 투여 형태는 31 단위 내지 707 단위의 변형된 BoNT/A를 포함할 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함한다. 단위 용량 범위의 상한은 700, 650, 600, 550, 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150 100, 95, 90, 85, 65, 60, 55, 50, 또는 31 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 상한은 666 단위이다. 단위 용량 범위의 하한은 35, 40, 45, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 또는 700 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 하한은 42 단위이다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 42 단위 내지 666 단위의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 40 단위 내지 50 단위, 70 단위 내지 95 단위, 또는 333 단위 내지 499 단위이다. 바람직하게는, 변형된 BoNT/A의 단위 용량은 41.6 단위, 83.2 단위, 124.8 단위, 332.8 단위 또는 665.6 단위일 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는, 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)의 단위 투여 형태를 제공한다:
a. 53 U 내지 948 U 단위의 변형된 BoNT/A, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양임; 또는
b. 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A; 및
c. 임의로 제약상 허용되는 담체, 부형제, 아주반트 및/또는 염,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은 하기로부터 선택된다:
i. 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
ii. 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
iii. 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
iv. 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
v. 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실.
경부 이상긴장증을 치료하기 위한 단위 투여 형태는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A를 포함할 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 (i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; (iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 (v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택된다. 범위의 상한은 7,750, 7,500, 7,000, 6,000, 5,000, 4,000, 3,000, 2,000 또는 1,000 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 상한은 7,500 pg이다. 범위의 하한은 475, 500, 600, 700, 800, 900, 1,000, 1,500, 2,000, 3,000, 4,000, 5,000, 6,000 또는 7,000 pg의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 하한은 500 pg이다. 바람직하게는, 단위 투여 형태는 500 pg 내지 7,500 pg, 예를 들어 4,000 pg 내지 6,000 pg의 변형된 BoNT/A를 포함한다. 가장 바람직하게는, 단위 투여 형태는 2,000 pg 내지 3,000 pg, 예컨대 2,400 pg 내지 2,600 pg을 포함한다.
경부 이상긴장증을 치료하기 위한 단위 투여 형태는 53 단위 내지 948 단위의 변형된 BoNT/A를 포함할 수 있으며, 여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고, 여기서 변형은 (i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환; (iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환; (iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및 (v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실로부터 선택된다. 범위의 상한은 925, 900, 850, 800, 750, 700, 650, 600, 550, 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150 또는 100 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 상한은 889 단위이다. 범위의 하한은 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850 또는 900 단위의 변형된 BoNT/A일 수 있고, 바람직하게는 하한은 59 단위이다. 바람직하게는, 단위 투여 형태는 59 단위 내지 889 단위의 변형된 BoNT/A, 예를 들어 200 단위 내지 600 단위를 포함한다. 가장 바람직하게는, 단위 투여 형태는 237 단위 내지 355 단위, 예컨대 284 단위 내지 308 단위를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는 키트를 제공한다:
a. 본 발명에 따른 단위 투여 형태; 및
b. 경부 이상긴장증을 치료하는 데 있어서 그의 사용에 대한 지침서; 및
c. 임의로 희석제
본 발명의 다양한 치료 용도에 관한 실시양태는 본 발명의 방법, 조성물 (예를 들어, 단위 투여 형태) 및 키트에 적용될 수 있고, 그 반대의 경우도 가능하다.
서열 상동성
전반적 방법, 국부 방법 및 하이브리드 방법, 예컨대 예를 들어 절편 접근법 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 다양한 서열 정렬 방법이 퍼센트 동일성을 결정하는 데 사용될 수 있다. 퍼센트 동일성을 결정하기 위한 프로토콜은 관련 기술분야의 통상의 기술자의 범주 내의 상용 절차이다. 전반적 방법은 분자의 시작부터 끝까지 서열을 정렬하고, 개별 잔기 쌍의 점수를 합산함으로써 및 갭 페널티를 부여함으로써 최상의 정렬을 결정한다. 비제한적 방법은, 예를 들어 CLUSTAL W (예를 들어, 문헌 [Julie D. Thompson et al., CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting, Position- Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994)] 참조); 및 반복 정밀화 (예를 들어, 문헌 [Osamu Gotoh, Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein. Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. MoI. Biol. 823-838 (1996)] 참조)를 포함한다. 국소 방법은 모든 입력 서열에 의해 공유되는 하나 이상의 보존된 모티프를 확인함으로써 서열을 정렬한다. 비제한적 방법은, 예를 들어 매치-박스(Match-box) (예를 들어, 문헌 [Eric Depiereux and Ernest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501 -509 (1992)] 참조); 깁스(Gibbs) 샘플링 (예를 들어, 문헌 [C. E. Lawrence et al., Detecting Subtle Sequence Signals: A Gibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment, 262(5131 ) Science 208-214 (1993)] 참조); Align-M (예를 들어, 문헌 [Ivo Van WaIIe et al., Align-M - A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics:1428-1435 (2004)] 참조)을 포함한다.
따라서, 퍼센트 서열 동일성은 통상적인 방법에 의해 결정된다. 예를 들어, 문헌 [Altschul et al., Bull. Math. Bio. 48: 603-16, 1986 and Henikoff and Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-19, 1992]을 참조한다. 간략하게, 2개의 아미노산 서열을 정렬하여 10의 갭 개방 페널티, 1의 갭 연장 페널티, 및 하기 제시된 바와 같은 문헌 [Henikoff and Henikoff] (상기 문헌)의 "블로섬(blosum) 62" 점수화 매트릭스를 사용하여 정렬 점수를 최적화하고 (아미노산은 표준 1-문자 코드에 의해 표시됨); 바람직하게는 이 방법을 사용하여 서열을 본원의 대상 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 2)과 정렬하여 본원에 기재된 바와 같은 아미노산 위치 넘버링을 규정한다.
2개 이상의 핵산 또는 아미노산 서열 사이의 "퍼센트 서열 동일성"은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다. 따라서, % 동일성은 동일한 뉴클레오티드 / 아미노산의 수를 뉴클레오티드 / 아미노산의 총수로 나누고, 100을 곱하여 계산될 수 있다. % 서열 동일성의 계산은 또한 갭의 수, 및 2개 이상의 서열의 정렬을 최적화하기 위해 도입될 필요가 있는 각각의 갭의 길이를 고려할 수 있다. 2개 이상의 서열 사이의 서열 비교 및 퍼센트 동일성의 결정은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 익숙할 특정 수학적 알고리즘, 예컨대 BLAST를 사용하여 수행될 수 있다.
실질적으로 상동인 폴리펩티드는 1개 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 것을 특징으로 한다. 이들 변화는 바람직하게는 사소한 성질의 것이며, 즉 보존적 아미노산 치환 (하기 참조) 및 폴리펩티드의 폴딩 또는 활성에 유의하게 영향을 미치지 않는 다른 치환; 전형적으로 1 내지 약 30개 아미노산의 작은 결실; 및 작은 아미노- 또는 카르복실-말단 연장, 예컨대 아미노-말단 메티오닌 잔기, 약 20-25개 이하 잔기의 작은 링커 펩티드, 또는 친화성 태그이다.
보존적 아미노산 치환
염기성: 아르기닌
리신
히스티딘
산성: 글루탐산
아스파르트산
극성: 글루타민
아스파라긴
소수성: 류신
이소류신
발린
방향족: 페닐알라닌
트립토판
티로신
소형: 글리신
알라닌
세린
트레오닌
메티오닌
20개의 표준 아미노산 외에도, 비-표준 아미노산 (예컨대, 4-히드록시프롤린, 6-N-메틸 리신, 2-아미노이소부티르산, 이소발린 및 α-메틸 세린)이 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 잔기를 치환할 수 있다. 제한된 수의 비-보존적 아미노산, 유전자 코드에 의해 코딩되지 않는 아미노산, 및 비천연 아미노산이 폴리펩티드 아미노산 잔기를 대체할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드는 또한 비-자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.
비-자연 발생 아미노산은 비제한적으로 트랜스-3-메틸프롤린, 2,4-메타노-프롤린, 시스-4-히드록시프롤린, 트랜스-4-히드록시-프롤린, N-메틸글리신, 알로-트레오닌, 메틸-트레오닌, 히드록시-에틸시스테인, 히드록시에틸호모-시스테인, 니트로-글루타민, 호모글루타민, 피페콜산, tert-류신, 노르발린, 2-아자페닐알라닌, 3-아자페닐-알라닌, 4-아자페닐-알라닌, 및 4-플루오로페닐알라닌을 포함한다. 비-자연 발생 아미노산 잔기를 단백질 내로 혼입하기 위한 여러 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 넌센스 돌연변이가 화학적으로 아미노아실화된 억제인자 tRNA를 사용하여 억제되는 시험관내 시스템이 사용될 수 있다. 아미노산을 합성하고 tRNA를 아미노아실화시키는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 넌센스 돌연변이를 함유하는 플라스미드의 전사 및 번역은 이. 콜라이 S30 추출물 및 상업적으로 입수가능한 효소 및 다른 시약을 포함하는 무세포 시스템에서 수행된다. 단백질은 크로마토그래피에 의해 정제된다. 예를 들어, 문헌 [Robertson et al., J. Am. Chem. Soc. 113:2722, 1991; Ellman et al., Methods Enzymol. 202:301, 1991; Chung et al., Science 259:806-9, 1993; and Chung et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10145-9, 1993을 참조한다. 제2 방법에서, 번역은 돌연변이된 mRNA 및 화학적으로 아미노아실화된 억제자 tRNA의 미세주사에 의해 크세노푸스 난모세포에서 수행된다 (문헌 [Turcatti et al., J. Biol. Chem. 271:19991-8, 1996]). 제3 방법 내에서, 이. 콜라이 세포는 대체될 천연 아미노산 (예를 들어, 페닐알라닌)의 부재 하에 및 목적하는 비-자연 발생 아미노산(들) (예를 들어, 2-아자페닐알라닌, 3-아자페닐알라닌, 4-아자페닐알라닌 또는 4-플루오로페닐알라닌)의 존재 하에 배양된다. 비-자연 발생 아미노산은 그의 천연 대응물 대신에 폴리펩티드 내로 혼입된다. 문헌 [Koide et al., Biochem. 33:7470-6, 1994]을 참조한다. 자연 발생 아미노산 잔기는 시험관내 화학적 변형에 의해 비-자연 발생 종으로 전환될 수 있다. 화학적 변형은 치환의 범위를 추가로 확장시키기 위해 부위-지정 돌연변이유발과 조합할 수 있다 (문헌 [Wynn and Richards, Protein Sci. 2:395-403, 1993]).
제한된 수의 비-보존적 아미노산, 유전자 코드에 의해 코딩되지 않는 아미노산, 비-자연 발생 아미노산, 및 비천연 아미노산이 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 잔기를 대체할 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드에서 필수 아미노산은 관련 기술분야에 공지된 절차, 예컨대 부위-지정 돌연변이유발 또는 알라닌-스캐닝 돌연변이유발에 따라 확인될 수 있다 (문헌 [Cunningham and Wells, Science 244: 1081-5, 1989]). 생물학적 상호작용의 부위는 또한 추정 접촉 부위 아미노산의 돌연변이와 함께 핵 자기 공명, 결정학, 전자 회절 또는 광친화도 표지화와 같은 기술에 의해 결정되는 구조의 물리적 분석에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [de Vos et al., Science 255:306-12, 1992; Smith et al., J. Mol. Biol. 224:899-904, 1992; Wlodaver et al., FEBS Lett. 309:59-64, 1992]을 참조한다. 필수 아미노산의 정체는 또한 본 발명의 폴리펩티드의 관련 성분 (예를 들어, 전위 또는 프로테아제 성분)과의 상동성의 분석으로부터 추론될 수 있다.
다중 아미노산 치환은 돌연변이유발 및 스크리닝의 공지된 방법, 예컨대 문헌 [Reidhaar-Olson and Sauer (Science 241:53-7, 1988) or Bowie and Sauer (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:2152-6, 1989)]에 개시된 것을 사용하여 이루어지고 시험될 수 있다. 간략하게, 이들 저자는 폴리펩티드 내의 2개 이상의 위치를 동시에 무작위화하고, 기능적 폴리펩티드에 대해 선택한 후, 돌연변이유발된 폴리펩티드를 서열분석하여 각각의 위치에서 허용되는 치환의 스펙트럼을 결정하는 방법을 개시한다. 사용될 수 있는 다른 방법은 파지 디스플레이 (예를 들어, 문헌 [Lowman et al., Biochem. 30:10832-7, 1991]; 미국 특허 번호 5,223,409 (Ladner et al.); WIPO 공보 WO 92/06204 (Huse)) 및 영역-지정 돌연변이유발 (문헌 [Derbyshire et al., Gene 46:145, 1986; Ner et al., DNA 7:127, 1988])을 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술분야의 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 문헌 [Singleton, et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 20 ED., John Wiley and Sons, New York (1994), and Hale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, NY (1991)]은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 본 개시내용에 사용된 많은 용어의 일반적 사전을 제공한다.
본 개시내용은 본원에 개시된 예시적인 방법 및 물질에 의해 제한되지 않고, 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 개시내용의 실시양태의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 수치 범위는 범위를 규정하는 숫자를 포함한다. 달리 나타내지 않는 한, 임의의 핵산 서열은 각각 좌측에서 우측으로 5'에서 3' 배향으로 기재되고; 아미노산 서열은 좌측에서 우측으로 아미노에서 카르복시 배향으로 기재된다.
본원에 제공된 표제는 본 개시내용의 다양한 측면 또는 실시양태의 제한이 아니다.
아미노산은 본원에서 아미노산의 명칭, 3문자 약어 또는 단일 문자 약어를 사용하여 지칭된다. 본원에 사용된 용어 "단백질"은 단백질, 폴리펩티드 및 펩티드를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "아미노산 서열"은 용어 "폴리펩티드" 및/또는 용어 "단백질"과 동의어이다. 일부 경우에, 용어 "아미노산 서열"은 용어 "펩티드"와 동의어이다. 일부 경우에, 용어 "아미노산 서열"은 용어 "효소"와 동의어이다. 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 본 개시내용 및 청구범위에서, 아미노산 잔기에 대한 통상적인 1-문자 및 3-문자 코드가 사용될 수 있다. 아미노산에 대한 3-문자 코드는 IUPACIUB 생화학 명명법에 대한 공동 위원회 (JCBN: Joint Commission on Biochemical Nomenclature)에 따라 정의된다. 또한, 폴리펩티드는 유전자 코드의 축중성으로 인해 1개 초과의 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있는 것으로 이해된다.
용어의 다른 정의는 명세서 전반에 걸쳐 나타날 수 있다. 예시적 실시양태가 보다 상세하게 기재되기 전에, 본 개시내용은 기재된 특정한 실시양태로 제한되지 않으며, 따라서 이는 달라질 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 개시내용의 범주는 첨부된 청구범위에 의해서만 정의될 것이기 때문에, 본원에 사용된 용어는 단지 특정한 실시양태를 기재하기 위한 목적이며, 제한하는 것으로 의도되지 않는 것으로 이해되어야 한다.
값의 범위가 제공되는 경우, 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한, 그 범위의 상한치와 하한치 사이에서 하한치 단위의 1/10까지의 각각의 개재 값이 또한 구체적으로 개시된 것으로 이해된다. 언급된 범위 내의 임의의 언급된 값 또는 개재 값과 그 언급된 범위 내의 임의의 다른 언급된 또는 개재 값 사이의 각각의 보다 작은 범위가 본 개시내용 내에 포괄된다. 이들 보다 작은 범위의 상한치 및 하한치는 독립적으로 범위 내에 포함되거나 또는 배제될 수 있고, 언급된 범위 내의 임의의 구체적으로 배제된 한계치를 조건으로, 한계치 중 어느 하나 또는 둘 다가 보다 작은 범위 내에 포함되거나 또는 둘 다가 포함되지 않는 각각의 범위가 또한 본 개시내용 내에 포괄된다. 언급된 범위가 한계치 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 이들 포함된 한계치 중 하나 또는 둘 다를 배제하는 범위가 또한 본 개시내용에 포함된다.
본원 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다는 것을 주목해야 한다. 따라서, 예를 들어 "변형된 보툴리눔 신경독소 A"에 대한 언급은 복수의 이러한 후보 작용제를 포함하고, "변형된 보툴리눔 신경독소 A"에 대한 언급은 하나 이상의 변형된 보툴리눔 신경독소 A 및 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 그의 등가물 등에 대한 언급을 포함한다.
본원에 논의된 간행물은 본 출원의 출원일 이전의 그의 개시내용에 대해서만 제공된다. 본원에서의 어떠한 것도 이러한 간행물이 본원에 첨부된 청구범위에 대한 선행 기술을 구성한다는 것을 인정하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
서열 목록
초기 Met 아미노산 잔기 또는 상응하는 초기 코돈이 하기 서열식별번호 중 임의의 것에 표시되어 있는 경우, 상기 잔기/코돈은 임의적이다.
서열식별번호: 1 (비변형된 BoNT/A의 뉴클레오티드 서열)
서열식별번호: 2 (비변형된 BoNT/A의 폴리펩티드 서열)
서열식별번호: 3 (변형된 BoNT/A "Cat-A"의 뉴클레오티드 서열)
서열식별번호: 4 (변형된 BoNT/A "Cat-A"의 폴리펩티드 서열)
서열식별번호: 5 (변형된 BoNT/A "Cat-B"의 뉴클레오티드 서열)
서열식별번호: 6 (변형된 BoNT/A "Cat-B"의 폴리펩티드 서열)
서열식별번호: 7 (변형된 BoNT/A "Cat-C"의 뉴클레오티드 서열)
서열식별번호: 8 (변형된 BoNT/A의 폴리펩티드 서열 "Cat-C")
서열식별번호: 9 (변형된 BoNT/A "Cat-D"의 뉴클레오티드 서열)
서열식별번호: 10 (변형된 BoNT/A의 폴리펩티드 서열 "Cat-D")
서열식별번호: 11 (변형된 BoNT/A의 폴리펩티드 서열 "키메라 1")
서열식별번호: 12 (변형된 BoNT/A의 폴리펩티드 서열 "키메라 2")
서열식별번호: 13 (변형된 BoNT/A의 폴리펩티드 서열 "키메라 3A")
서열식별번호: 14 (변형된 BoNT/A의 폴리펩티드 서열 "키메라 3B")
서열식별번호: 15 (변형된 BoNT/A의 폴리펩티드 서열 "키메라 3C")
서열식별번호: 16 (BoNT/B의 폴리펩티드 서열)
실시예
실시예 1
클로닝, 발현 및 정제
야생형 BoNT/A (서열식별번호: 2)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 1을 돌연변이시켜 하기 치환을 도입함으로써 하기 표 1에 나타낸 4개의 구축물을 형성하였다:
표 1. 구축물.
*Cat-D는 7.45의 계산된 pI 및 149,859의 분자량을 가졌다.
상기 변형된 BoNT/A 분자를 코딩하는 DNA 구축물을 합성하고, pJ401 발현 벡터 내로 클로닝한 다음, BL21 (DE3) 이. 콜라이 내로 형질전환시켰다. 이는 BL21 (DE3) 이. 콜라이에서 재조합 Cat-A, Cat-B, Cat-C, 및 Cat-D 단백질의 가용성 과다-발현을 허용하였다.
재조합 변형된 BoNT를 이. 콜라이 용해물로부터 전형적 크로마토그래피 기술을 사용하여 정제하였다. 양이온-교환 수지를 사용하는 초기 정제 단계, 이어서 소수성 상호작용 수지를 사용하는 중간 정제 단계를 사용하였다. 이어서, 재조합 변형된 BoNT 단일쇄를 단백질분해에 의해 절단하여, 활성화된 2쇄 변형된 BoNT를 생성하였다. 이어서, 최종 정제 단계를 이용하여 잔류 오염물을 제거하였다. 적합한 기술은 WO2015/166242, WO2017055274A1, EP2524963B1, EP2677029B1, 및 US10087432B2에 교시되어 있다.
실시예 2
정제된 변형된 BoNT/A의 특징화
상기 실시예 1에 기재된 변형된 BoNT를 하기와 같이 실험적으로 특징화하였다.
pI의 측정은 변형된 BoNT가 비변형된 (천연) BoNT/A1의 등전점보다 더 큰 등전점을 갖는다는 것을 나타냈다 - 도 2 및 하기 표 2 참조.
표 2. 변형된 BoNT/A pI 값.
뉴런에 진입하고 SNAP-25 (BoNT/A1의 표적)를 절단하는 변형된 BoNT의 능력을 래트 배아 척수 뉴런 (eSCN)을 사용하여 평가하였다. 도 3은 변형된 BoNT가 천연 BoNT/A1과 동일한 뉴런에 진입하고 SNAP-25를 절단하는 능력을 보유하였음을 나타낸다.
변형된 BoNT의 효력을 마우스 횡격 신경 반-횡격막 검정 (mPNHD)을 사용하여 추가로 평가하였다. 도 4는 변형된 BoNT가 천연 BoNT/A1과 동일한 마우스 반-횡경막의 수축 능력을 억제하는 능력을 보유하였음을 나타낸다.
생체내 마우스 발가락 외전 점수 (DAS) 검정을 사용하여 천연 BoNT/A1에 비해 안전성 뿐만 아니라 효력을 평가하였다. 두 분자 (Cat-A [2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4] 및 Cat-B [2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 6])는 천연 BoNT/A1에 비해 더 높은 안전성 비를 나타냈고, 약간 더 강력하였다. 이들 데이터는 하기 표 3에 제시된다:
표 3. DAS 검정 및 안전성 비.
- DAS ED50: DAS 2를 유도하는 계산된 용량
- 용량 DAS 4: DAS 4를 유도하는 실험 용량
- BW: 체중
- -10% ΔBW에 대한 용량: D0에서의 BW와 비교하여 BW에서 10%의 감소를 유도하는 계산된 용량
- 안전성 비: -10% ΔBW에 대한 용량 / DAS ED50
안전성 비는 효력 (반수 최대 발가락 외전 점수 (DAS))과 관련하여 BoNT 치료의 부정적 영향 (체중 감소)의 척도이다. 이는 -10% 체중 (BW)과 DAS ED50 사이의 비로서 계산되며, 여기서 -10%BW는 체중의 10% 감소에 요구되는 BoNT의 양 (pg/동물)을 지칭하고, ED50은 2의 DAS를 생성할 BoNT의 양 (pg/동물)을 지칭한다.
DAS 검정은 젤라틴 포스페이트 완충제 중에 제제화된 20 μl의 변형된 BoNT/A를 마우스 비복근/가자미근 복합체 내로 주사한 후, 아오키 (문헌 [Aoki KR, Toxicon 39: 1815-1820; 2001])에 의해 이전에 보고된 바와 같이 발가락 외전을 평가함으로써 수행되었다.
실시예 3
변형된 BoNT/A (BoNT/AB 키메라)의 클로닝, 발현 및 정제
BoNT/AB 키메라 구축물 1, 2, 3A, 3B 및 3C (각각 서열식별번호: 11 내지 15)를 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 모 혈청형 분자 및 적절한 올리고뉴클레오티드를 코딩하는 DNA로부터 구축하였다. 이어서, 이들을 C-말단 His10-태그를 갖거나 갖지 않는 pJ401 발현 벡터 내로 클로닝하고, 과다-발현을 위해 BLR (DE3) 이. 콜라이 세포 내로 형질전환시켰다. 이들 세포를 적절한 항생제가 보충된 1 L 변형된 테리픽 브로쓰 (mTB)를 함유하는 2 L 배플 원추형 플라스크에서 37℃ 및 225 RPM 진탕 하에 성장시켰다. A600이 >0.5에 도달하면, 인큐베이터 온도를 16℃로 감소시킨 후, 1시간 후 1 mM IPTG로 20시간 동안 225 RPM 진탕 하에 유도하여 재조합 BoNT/AB 구축물을 발현시켰다.
수거된 세포를 초음파처리에 의해 용해시키고, 4℃에서 1시간 동안 4500 RPM으로 원심분리에 의해 정화하였다. 이어서, 재조합 BoNT/AB 키메라 분자를 황산암모늄에서 추출하고, 표준 고속 단백질 액체 크로마토그래피 (FPLC) 기술에 의해 정제하였다. 이는 포획을 위한 소수성 상호작용 수지 및 중간 정제 단계를 위한 음이온-교환 수지의 사용을 포함하였다. 이어서, 부분적으로 정제된 분자를 엔도프로테이나제 Lys-C로 단백질분해적으로 절단하여 활성 2쇄를 수득하였다. 이를 제2 소수성 상호작용 수지로 추가로 정제하여 최종 BoNT/AB 키메라를 수득하였다.
데카히스타딘 태그 (H10)를 갖는 BoNT/AB 키메라 분자 (키메라 1, 2, 3A)의 경우, 포획 단계는 소수성 상호작용 수지 대신 고정화된 니켈 수지의 사용을 이용하였다.
각각의 키메라의 서열을 표 4에 제시한다.
표 4 - 키메라 BoNT/AB 구축물
실시예 4
BoNT/AB 키메라 1, 2 및 3A의 비교
C-말단 His10 태그 및 E1191M/S1199Y 이중 돌연변이를 갖는 BoNT/AB 키메라 1, 2 및 3A를 실시예 3에 기재된 바와 같이 정제하고 (도 5), 기능적 활성에 대해 시험하였다.
래트 척수 뉴런 SNAP-25 절단 검정
래트 척수 뉴런 (SCN)의 1차 배양물을 제조하고, 96 웰 조직 배양 플레이트에서 3주 동안 성장시켰다 (문헌 [Masuyer et al., 2011, J. Struct. Biol. Structure and activity of a functional derivative of Clostridium botulinum neurotoxin B; and in: Chaddock et al., 2002, Protein Expr. Purif. Expression and purification of catalytically active, non-toxic endopeptidase derivatives of Clostridium botulinum toxin type A]에 기재된 바와 같음). BoNT/AB의 연속 희석물을 SCN 공급 배지에서 제조하였다. 처리될 웰로부터 성장 배지를 수집하고 여과하였다 (0.2 μm 필터). 125 μL의 여과된 배지를 각각의 시험 웰에 다시 첨가하였다. 이어서, 125 μL의 희석된 독소를 플레이트 (3중 웰)에 첨가하였다. 처리된 세포를 37℃, 10% CO2에서 24 ± 1시간 동안 인큐베이션하였다.
SNAP-25 절단 검정을 사용한 BoNT 활성의 분석
처리 후, BoNT를 제거하고, 세포를 PBS (깁코, 영국)에서 1회 세척하였다. 세포를 0.1 M 디티오트레이톨 (DTT) 및 250 단위/mL 벤조나제 (시그마)로 보충된 1x NuPAGE 용해 완충제 (라이프 테크놀로지스) 중에서 용해시켰다. 용해물 단백질을 SDS-PAGE에 의해 분리하고, 니트로셀룰로스 막으로 옮겼다. 막을 비절단된 SNAP-25 뿐만 아니라 BoNT/A 엔도펩티다제에 의해 절단된 SNAP-25를 인식하는 SNAP-25에 특이적인 1차 항체 (시그마 #S9684)로 프로빙하였다. 사용된 2차 항체는 HRP-접합된 항-토끼 IgG (시그마 #A6154)였다. 밴드를 증진된 화학발광에 의해 검출하고, pXi6 액세스 (시놉틱스, 영국)를 사용하여 영상화하였다. 밴드의 강도를 진툴스 소프트웨어 (신진, 영국 캠브리지)를 사용하여 결정하고, BoNT의 각 농도에서 절단된 SNAP-25의 백분율을 계산하였다. 데이터를 4-파라미터 로지스틱 방정식에 피팅하고, 그래프패드 프리즘 버전 6 (그래프패드)을 사용하여 pEC50을 계산하였다.
하기 표 5는 래트 SCN SNAP-25 절단 검정에서 키메라 1, 2 및 3A에 대해 결정된 pEC50 값을 제공한다. 이들 결과는 3종의 BoNT/AB 키메라가 래트 척수 뉴런에 진입하고 이들의 표적 기질을 절단하는 능력을 보유하였음을 나타낸다. 그러나, 키메라 3A는 본 검정에서 키메라 1 및 2보다 더 강력하였다 (또한 도 6 참조).
표 5. pEC50 값.
발가락 외전 점수화 (DAS) 검정
DAS 검정에서 BoNT/AB 키메라 1, 2 및 3A의 활성을 측정하는 방법은 꼬리로 잠시 매달릴 때 마우스의 놀람 반응 발가락 확장 반사에 기초한다. 이 반사는 발가락 외전 점수 (DAS)로서 점수화되고, 뒷발의 비복근-가자미근 근육 내로의 BoNT의 투여 후에 억제된다. 동물이 그의 뒷다리를 연장하고 그의 뒷발가락을 외전시키는 특징적인 놀람 반응을 도출하기 위해 마우스를 꼬리로 잠시 매단다 (문헌 [Aoki et al. 1999, Eur. J. Neurol.; 6 (suppl. 4) S3-S10]).
주사 당일에, 마우스를 산소 중 이소플루란 3%를 수용하는 유도 챔버에서 마취시켰다. 각각의 마우스는 우측 뒷발의 비복근-가자미근 근육에 BoNT/AB 키메라 또는 비히클 (0.2% 젤라틴을 함유하는 포스페이트 완충제)의 근육내 주사를 받았다.
신경독소 주사 후, 다양한 정도의 발가락 외전을 0 내지 4의 척도로 점수화하였으며, 여기서 0 = 정상 및 4 = 발가락 외전 및 다리 연장의 최대 감소이다. ED50은 각각의 용량에서 최대 효과의 평균을 사용하여 비선형 조정 분석에 의해 결정하였다. 사용된 수학적 모델은 4 파라미터 로지스틱 모델이었다.
DAS를 투여 후 제1일 동안 2시간마다 수행한 후; 4일 동안 1일 3회 수행하였다.
도 7은 키메라 1, 2 및 3A (각각 2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 11, 12 및 13)에 대한 피팅된 곡선을 나타낸다. 키메라 3A 곡선은 좌측으로 이동하며, 이는 더 낮은 용량의 키메라 3A가 키메라 1 및 2에 비해 유사한 DAS 반응을 달성하였음을 의미하고, 따라서 키메라 3A는 마우스 DAS 검정에서 다른 것보다 더 강력하다는 것을 나타내며; 또한 각각의 키메라에 대해 계산된 ED50 및 DAS 4 (최고 점수)로 이어지는 용량에 대한 값을 제공하는 하기 표 (표 6)를 참조한다.
하기 표 6은 마우스 DAS 검정에서 비변형된 재조합 BoNT/A1 (rBoNT/A1 - 2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 2) 및 키메라 1, 2 및 3A에 대해 결정된 ED50 및 DAS 4 용량을 제공한다. 이들 결과는 3개의 키메라 중에서, 키메라 3A가 근육 약화를 유도하는 데 있어서 가장 높은 생체내 효력을 갖는다는 것을 나타낸다. 도 7 및 표 6에 나타낸 연구는 찰스 리버 래보러토리즈(Charles River laboratories)로부터 수득된 마우스에서 수행하였다.
표 6. ED50 값.
실시예 5
BoNT/AB 키메라 3B, 3C 및 비변형된 BoNT/A1의 비교
E1191M/S1199Y 이중 돌연변이 (서열식별번호: 14 및 15)의 존재 및 부재 하에 각각 태그부착되지 않은 BoNT/AB 키메라 3B 및 3C를 실시예 3 (도 8)에 기재된 바와 같이 정제하고, 비변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 2)를 참조로 사용하여 기능적 활성에 대해 시험하였다.
인간 만능 줄기 세포 SNAP-25 절단 검정
냉동보존된 PERI.4U-세포를 악시오제네시스(Axiogenesis) (독일 쾰른)로부터 구입하였다. 세포의 해동 및 플레이팅을 제조업체에 의해 권장된 바와 같이 수행하였다. 간략하게, 세포를 함유하는 크리오바이알을 37℃의 수조에서 2분 동안 해동시켰다. 부드러운 재현탁 후, 세포를 50 mL 튜브로 옮겼다. 크리오바이알을 제조업체에 의해 공급된 Peri.4U® 해동 배지 1 mL로 세척하고, 배지를 세포 현탁액에 50 mL 튜브로 적가한 후, 추가의 Peri.4U® 해동 배지 2 mL를 50 mL 튜브에 적가하였다. 이어서, 혈구계를 사용하여 세포를 계수하였다. 그 후, 추가의 Peri.4U® 해동 배지 6 mL를 세포 현탁액에 첨가하였다. 세포 펠릿을 실온에서 6분 동안 260 xg (예를 들어, 1,100 RPM)에서 원심분리에 의해 수득하였다. 이어서, 세포를 제조업체에 의해 공급된 완전 Peri.4U® 배양 배지 중에 재현탁시켰다. 세포를 폴리-L-오르니틴 및 라미닌으로 코팅된 세포 배양 플레이트 상에 cm2당 50,000 내지 150,000개 세포의 밀도로 플레이팅하였다. 세포를 가습 CO2 분위기에서 37℃에서 배양하고, 배지를 배양 동안 2-3일마다 완전히 교체하였다.
독소 처리를 위해, BoNT의 연속 희석물을 Peri.4U® 배양 배지에서 제조하였다. 처리될 웰로부터의 배지를 수집하고 여과하였다 (0.2 μm 필터). 125 μL의 여과된 배지를 각각의 시험 웰에 다시 첨가하였다. 이어서, 125 μL의 희석된 독소를 플레이트 (3중 웰)에 첨가하였다. 처리된 세포를 37℃, 10% CO2에서 48 ± 1시간 동안 인큐베이션하였다.
SNAP-25 절단 검정을 사용한 BoNT 활성의 분석
처리 후, BoNT를 제거하고, 세포를 PBS (깁코, 영국)에서 1회 세척하였다. 세포를 0.1 M 디티오트레이톨 (DTT) 및 250 단위/mL 벤조나제 (시그마)로 보충된 1x NuPAGE 용해 완충제 (라이프 테크놀로지스) 중에서 용해시켰다. 용해물 단백질을 SDS-PAGE에 의해 분리하고, 니트로셀룰로스 막으로 옮겼다. 막을 비절단된 SNAP-25 뿐만 아니라 BoNT/A 엔도펩티다제에 의해 절단된 SNAP-25를 인식하는 SNAP-25에 특이적인 1차 항체 (시그마 #S9684)로 프로빙하였다. 사용된 2차 항체는 HRP-접합된 항-토끼 IgG (시그마 #A6154)였다. 밴드를 증진된 화학발광에 의해 검출하고, pXi6 액세스 (시놉틱스, 영국)를 사용하여 영상화하였다. 밴드의 강도를 진툴스 소프트웨어 (신진, 영국 캠브리지)를 사용하여 결정하고, BoNT의 각 농도에서 절단된 SNAP-25의 백분율을 계산하였다. 데이터를 4-파라미터 로지스틱 방정식에 피팅하고, 그래프패드 프리즘 버전 6 (그래프패드)을 사용하여 pEC50을 계산하였다.
도 9는 키메라 3B 및 3C가 유도된 인간 만능 줄기 세포에서 SNAP-25를 절단하는 데 있어서 rBoNT/A1보다 더 큰 효력을 나타냈지만, 전자가 유의하게 더 큰 효력을 나타냈다는 것을 나타낸다. 이는 이들 세포에 존재하는 인간 시냅토태그민 II 단백질 수용체에 대한 키메라 3B의 친화도를 증가시키는 이중 돌연변이에 의해 설명될 수 있다 (도 9, 표 7).
표 7. pEC50 값.
발가락 외전 점수화 (DAS) 검정 - 안전성 비
DAS 검정에서 BoNT의 활성을 측정하는 방법은 꼬리로 잠시 매달릴 때 마우스의 놀람 반응 발가락 확장 반사에 기초한다. 이 반사는 발가락 외전 점수 (DAS)로서 점수화되고, 뒷발의 비복근-가자미근 근육 내로의 BoNT의 투여 후에 억제된다. 동물이 그의 뒷다리를 연장하고 그의 뒷발가락을 외전시키는 특징적인 놀람 반응을 도출하기 위해 마우스를 꼬리로 잠시 매단다 (문헌 [Aoki et al. 1999, Eur. J. Neurol.; 6 (suppl. 4) S3-S10]).
주사 당일에, 마우스를 산소 중 이소플루란 3%를 수용하는 유도 챔버에서 마취시켰다. 각각의 마우스는 우측 뒷발의 비복근-가자미근 근육에 BoNT 또는 비히클 (0.2% 젤라틴을 함유하는 포스페이트 완충제)의 근육내 주사를 받았다.
신경독소 주사 후, 다양한 정도의 발가락 외전을 0 내지 4의 척도로 점수화하였으며, 여기서 0 = 정상 및 4 = 발가락 외전 및 다리 연장의 최대 감소이다. ED50은 각각의 용량에서 최대 효과의 평균을 사용하여 비선형 조정 분석에 의해 결정하였다. 사용된 수학적 모델은 4 파라미터 로지스틱 모델이었다.
DAS를 투여 후 제1일 동안 2시간마다 수행한 후; 모든 용량에 대해 4일 동안 1일 3회 수행하였다. 그 후, 비히클 및 주사의 처음 4일 동안 4의 DAS를 유도한 최저 용량으로 주사된 군의 동물을 0의 DAS (근육 약화가 관찰되지 않음)로 근육 약화가 완전히 회복될 때까지 모니터링하였다.
안전성 비의 계산을 위해, 모든 동물을 독소 주사 전날 (D0) 및 그 후 연구 지속기간 전반에 걸쳐 1일 1회 칭량하였다. 평균 체중, 그의 표준 편차, 및 표준 오차 평균을 각각의 용량-군에 대해 매일 계산하였다. BoNT에 대한 안전성 비 (-10%ΔBW/ED50)를 수득하기 위해, 연구 동안 임의의 시점에 용량-군의 평균 체중이 동일한 용량-군의 D0에서의 평균 체중의 10% 미만인 용량을 연구된 BoNT에 대한 ED50으로 나누었다. 치사 용량은 그 용량군 내의 하나 이상의 동물이 사망한 용량으로 정의되었다.
도 10은 비변형된 BoNT/A, 키메라 3B 및 키메라 3C (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 2, 14 및 15)에 대한 마우스 발가락 외전 점수화 검정에서 시간 경과에 따른 근육 약화의 지속기간을 나타내며, 이는 키메라가 더 긴 작용 지속기간을 갖는다는 것을 나타낸다.
하기 표 8은 마우스 DAS 검정에서 rBoNT/A1 및 키메라 3B 및 3C에 대해 결정된 ED50 및 DAS 4 용량을 제공한다. 표는 또한 0의 DAS (근육 약화가 관찰되지 않음)로 근육 약화가 완전히 회복될 까지 DAS 4 용량에 대한 총 작용 지속기간을 제공한다. 또한, 표는 상기 본문에서 정의된 바와 같은 마우스 치사 용량 및 안전성 비 (-10%ΔBW/ED50)를 나타낸다. rBoNT/A1과 비교하여, 키메라 3B 및 3C는 더 긴 작용 지속기간, 더 우수한 안전성 비, 및 더 높은 치사 용량을 갖는다. 도 10 및 표 8에 제시된 연구는 장비에(Janvier) 실험실로부터 수득된 마우스에서 수행하였다.
표 8. BoNT/AB 키메라의 DAS 및 안전성 비.
실시예 6
변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)의 전-임상 시험
변형된 BoNT/A "Cat-A" (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)를 추가의 전-임상 시험에 적용하였다.
물질 및 방법
래트 발가락 외전 점수 (DAS) 검정
생체내 근육 활성에 대한 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)의 효과를 평가하기 위해, 용량-반응 연구를 래트 DAS 검정을 사용하여 수행하였다. 래트 DAS 검정은 동물을 잠시 움켜잡을 때 특징적인 놀람 반응인 발가락 확장 반사에 기초한다. 좌측 비골근 복합체 내로의 단일 신경독소 주사 후, 근육 약화는 발가락 외전의 감소를 유발한다. 다양한 정도의 발가락 외전을 5-점 척도로 점수화한다: 0=정상 내지 4=발가락 외전 및 다리 연장의 최대 감소 (문헌 [Broide RS, Rubino J, Nicholson GS, et al. The rat Digit Abduction Score (DAS) assay: A physiological model for assessing botulinum neurotoxin-induced skeletal muscle paralysis. Toxicon 2013;71:18-24]). DAS 값을 독소 주사 후 및 그 후 2 내지 3일의 간격으로 더 낮은 용량에 대한 발가락 확장 반사에 대한 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)의 효과의 완전한 소멸까지 및 DAS4를 생성하는 용량에 대해 DAS2로의 회복까지 처음 연속 5일 동안 측정하였다. 체중 증가에 대한 일시적 BoNT-유도된 용량-의존성 효과는 전신 독성 효과의 증거로 간주된다 (문헌 [Torii Y, Goto Y, Nakahira S, et al. Comparison of Systemic Toxicity between Botulinum Toxin Subtypes A1 and A2 in Mice and Rats. Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 2015;116:524-528.]). 결과적으로 각각의 평가 시점에서 래트를 칭량하고, 부작용을 기록하였다. BoNT의 투여 용액을 주사 전에 및 연구의 종료까지 마스킹하였다 (무작위 문자가 할당됨). 효력은 효과의 50%를 유도하는 데 필요한 용량으로서 결정하였다 (ED50: 2의 DAS 값을 유도하는 용량). ED50 및 95% 신뢰 구간 (CI)을 결정하기 위해, 2.5 내지 750 pg/kg 범위의 용량을 시험하였다. 1, 1.5, 2, 2.4, 3, 4 및 5 ng/kg의 보다 높은 용량을 또한 투여하여 가능한 부작용을 평가하였다.
변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)의 작용 지속기간을 평가하고 이를 비변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 2)의 작용 지속기간과 비교하기 위해, 2의 DAS2 판독치로 복귀하는 데 필요한 중앙값 시간을 2개의 독립적인 직접적 헤드-투-헤드 연구에서 두 독소에 대한 최고 허용 용량 (비처리 래트와 비교하여 체중 진화에 대한 영향 없음)에 대해 평가하였다.
래트 단일 용량 연구
래트는 우측 비복근 내로 투여된 0, 0.1, 1 및 3 ng/kg의 용량의 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)의 단일 근육내 (i.m.) 주사를 받았다. 대조군 동물은 우측 비복근에 서열식별번호: 4 희석제를 받았다. 처리 7일 후 (군당 10마리의 수컷 및 10마리의 암컷) 또는 13 또는 26주 관찰 기간 후 (용량당 5마리의 수컷 및 5마리의 암컷) 동물을 안락사시켰다. 중추 신경계 기능의 평가를 위한 어윈 시험 관찰을 시험전 (제-1일), 제8일에 및 제13주 및 제27주 동안 수행하였다. 평가된 다른 임상적 (유해) 징후는 절뚝거림, 작은 독소 주사된 근육 크기, 및 무른 팽창된 복부였다.
원숭이 연구
원숭이는 우측 비복근 내로 투여된 0, 0.1, 0.25 및 0.75 ng/kg 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)의 단일 i.m. 용량을 받았다. 처리 7일 후 (군당 3마리의 수컷 및 3마리의 암컷) 또는 13 또는 26주 관찰 기간 후 (용량당 2마리의 수컷 및 2마리의 암컷) 동물을 안락사시켰다. 혈류역학, 심전도 및 호흡 파라미터를 포함한 심혈관 검사를 제8일 및 제15일에 외부 원격측정 사전검사에 의해 수행하였다.
임신한 래트에서의 예비 향상된 EFD
연구의 목적은 기관발생 기간 전반에 걸쳐 i.m. 경로에 의해 투여되었을 때 래트의 배아 및 태아 발생에 대한 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)의 효과에 대한 초기 정보를 제공하는 것이었다. 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)를 임신 제6일 (G6) 내지 제17일 (G17) (경계 포함)의 9마리의 교미된 암컷 스프라그-돌리 래트의 군에 0.02, 0.05 및 0.1 ng/kg/일의 용량 수준으로 매일 i.m. 주사 (비복근)에 의해 투여하였다. 임상 상태, 체중 및 식품 소비를 연구 전반에 걸쳐 모니터링하였다. 암컷을 G21에 제왕절개 검사에 적용하고, 한배새끼 파라미터를 기록하였다. 부검 시, 암컷을 육안으로 검사하고, 임신 자궁을 칭량하고, 작은 주사된 비복근을 제시한 래트에 대해 상기 근육 및 반대측 근육을 칭량하였다. 모든 태아를 칭량하였다. 이어서, 태아를 외부 및 내장 이상에 대해 검사하고, 성별을 구분하였다. 태아의 대략 절반의 두부를 내부 검사를 위해 연속 절편화에 의해 고정시켰다. 모든 태아의 내장제거된 사체를 골격 검사를 위해 처리하였다.
임신한 토끼에서의 예비 연장된 EFD
연구의 목적은 기관발생 기간 전반에 걸쳐 i.m. 경로에 의해 투여되었을 때 토끼의 배아 및 태아 발생에 대한 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)의 효과에 대한 초기 정보를 제공하는 것이었다. 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)를 임신 제6일 (G6) 내지 제19일 (G19) (경계 포함)의 9마리의 교미된 암컷 뉴질랜드 백색 토끼의 군에 0.002, 0.005 및 0.01 ng/kg/일의 용량 수준으로 매일 i.m. 주사 (비복근)에 의해 투여하였다. 임상 상태, 체중 및 식품 소비를 연구 전반에 걸쳐 모니터링하였다. 암컷을 G29에 제왕절개 검사에 적용하였고, 한배새끼 파라미터를 기록하였다. 부검 시, 암컷을 육안으로 검사하고, 임신 자궁을 칭량하고, 작은 주사된 비복근을 제시한 래트에 대해 상기 근육 및 반대측 근육을 칭량하였다. 모든 태아를 칭량하였다. 이어서, 태아를 외부 및 내장 이상에 대해 검사하고, 성별을 구분하였다. 태아의 대략 절반의 두부를 내부 검사를 위해 연속 절편화에 의해 고정시켰다.
결과
상기 나타낸 바와 같은 연구를 수행함으로써, 변형된 BoNT/A를 투여받는 다수의 상이한 종에 대해 하기 약리학적 데이터 (하기 표 9에 나타냄)를 수득하였다.
표 9. 전-임상 결과.
추가로, 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)를 래트 DAS 검정에서 시험하여, 디스포르트®와 비교하여 작용 지속기간을 결정하였다. 결과는 하기 표 10에 제시되어 있다:
표 10. 작용 지속기간.
이들 데이터는 변형된 BoNT/A가 디스포르트®의 2배 초과의 작용 지속기간을 갖는다는 것을 나타낸다.
실시예 7
경부 이상긴장증을 치료하기 위한 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)의 단위 용량의 결정
상기 실시예 6에서 수득된 전-임상 약리학 데이터를 고려하여, 인간에서의 변형된 BoNT/A의 투여에 적합한 단위 용량 범위 (UD)를 결정하였다. 연구는 변형된 BoNT/A가 비변형된 BoNT/A보다 더 긴 작용 지속기간을 제공하는 동시에 개선된 안전성 프로파일을 나타낸다는 것을 나타내었다. 이러한 개선된 안전성 프로파일은 변형된 BoNT/A에 대한 본원에 기재된 높은 안전성 비에 의해 표현될 수 있다.
변형된 BoNT/A는 (그의 변형된 특성으로 인해 증가된 안전성 비를 갖지만) 디스포르트®와 동일한 작용 메카니즘을 공유하기 때문에, 대상체를 치료하기 위한 변형된 BoNT/A의 최저 용량은 그 동일한 근육군에서의 디스포르트®의 표지된 용량과 관련하여 맥락에 따라 위치하였다:
발가락 외전 점수 래트 모델에서, 변형된 BoNT/A의 ED50은 13 pg/kg이고, 이는 동일한 동물 종에서 1500 pg/kg의 추정 무관찰 부작용 수준 (NOAEL)보다 100배 초과 더 낮다. 동일한 래트 모델에서, 디스포르트®의 ED50은 0.5 U/kg이다. 이들 동물 데이터에 기초하여, 변형된 BoNT/A의 2.6 ng의 용량은 100 U 디스포르트®의 용량으로 추정될 것이다.
복강내 마우스 LD50은 8.44 pg으로 확립되었다. 이들 조건 하에, 0.84 ng의 용량의 변형된 BoNT/A는 100 U 디스포르트®의 용량에 상응한다.
따라서, 계산된 최저 용량은 500 pg (0.5 ng)이다. 일부 맥락을 제공하고 상기 복강내 마우스 LD50 데이터를 사용하기 위해, 0.5 ng 변형된 BoNT/A는 대략 60 U 디스포르트®와 동등하고, 따라서 이는 경부 이상긴장증의 치료를 위해 근육내로 투여되는 경우에 활성일 것이다.
래트에서 1.5 ng/kg의 변형된 BoNT/A의 추정된 NOAEL은 60 kg 체중의 인간에 대해 90 ng 용량에 상응한다. 시험된 2종의 비임상 종 중 보다 감수성인 원숭이에서, 0.125 ng/kg의 변형된 BoNT/A의 추정된 NOAEL은 60 kg 체중의 인간에 대해 7.5 ng 용량에 상응한다.
따라서, 단위 용량의 상한치는 7,500 pg (7.5 ng)인 것으로 결정되며, 이는 이것이 인간 용량으로 번역된 래트 NOAEL 미만으로 유지되기 때문이다.
따라서, 변형된 BoNT/A를 사용한 경부 이상긴장증의 치료에 적합한 단위 용량은 500-7,500 pg인 것으로 결정되었다. 수득된 전-임상 데이터에 기초하여, 이는 마우스 복강내 치사 용량 검정을 사용하여 결정된 바와 같은 마우스에서의 계산된 중앙값 치사 복강내 용량 (LD50)을 기준으로 하여 변형된 BoNT/A의 ~59-889 단위이다 (또한 디스포르트®의 ~59-889 단위에 상응함).
실시예 6의 전-임상 데이터에 의해 결정된 바와 같은 디스포르트®와 비교 시 개선된 안전성 프로파일의 관점에서, 경부 이상긴장증에서 투여된 총 투여량 (단위)은 디스포르트®에 대한 것보다 거의 9x 더 클 것으로 예상된다. 경부 이상긴장증의 치료를 위한 디스포르트®의 최대 총 용량은 1,000 단위이다 (도 1 참조).
유리하게는, 보다 변형된 BoNT/A는 최대 용량에 도달하기 전에 경부 이상긴장증의 치료에서 보다 많은 수의 경부 근육/부위에 주사될 수 있고/거나 주사될 수 있다. 이는 임상의에게 더 큰 범위의 치료 옵션을 제공하면서 경부 이상긴장증의 개선된 치료를 유도하는 유의하고 유리한 발견이다.
실시예 8
경부 이상긴장증을 치료하기 위한 투여 요법
변형된 BoNT/A (예를 들어, 2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)는 바이알당 15 ng의 변형된 BoNT/A를 함유하는 2 mL 투명 유리 바이알에서 동결건조된 분말로서 제공된다. 동결건조된 분말을 멸균 염화나트륨 0.9% v/w 보존제 무함유 용액 및 희석제 (변형된 BoNT/A의 부형제만을 함유하는 제제 완충제)의 혼합물로 재구성한다. 재구성 후, 용액을 필요에 따라 추가로 희석한다.
단위 용량 (UD)은 500-7,500 pg (~59-889 단위)이다.
경부 이상긴장증을 하기 투여 요법 (표 11)에 따라 근육내 주사에 의해 치료한다:
표 11. 투여 요법.
투여는 구체적 제시에 기초하여 필요에 따라 일측성 또는 양측성일 수 있다.
투여되는 최대 총 투여량은 10x UD이다 (예를 들어, 일부 경우에 2x UD가 지시된 경부 근육 중 1개 이상에 투여됨). 이는 75,000 pg/~8,890 단위에 상응한다. 이는 독성 한계 (통상적인 치료 요법의 우려)에 접근하지 않으면서 경부 이상긴장증의 치료 동안 투여될 수 있는 디스포르트®의 최대 총 투여량보다 거의 9x 더 크다. 따라서, 임상의는 독성에 대한 어떠한 우려도 없이 10x UD를 투여할 수 있고, 그에 의해 대상체의 추가의 경부 근육의 치료를 가능하게 하고/거나 각각의 경부 근육이 제약상 유효 용량을 받는 것을 보장할 수 있다는 지식 하에 환자에게 맞춤 치료를 제공할 수 있다.
실시예 9
변형된 BoNT/A (BoNT/AB 키메라 [2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 14])의 전-임상 시험
BoNT/AB 키메라 서열식별번호: 14 (2쇄 형태로 전환됨)를 마우스 LD50 검정에서 시험하여 1.202 ng/kg의 결과를 수득하였다. 따라서, 서열식별번호: 14의 1 단위 (2쇄 형태로 전환됨)는 본 검정에서 24.04 pg에 상응한다.
추가적으로, 상기 BoNT/AB 키메라를 래트 DAS 검정에서 시험하여, 디스포르트®와 비교하여 작용 지속기간 (실시예 6에 따름)을 결정하였다. 결과는 하기 표 12에 제시되어 있다:
표 12. 작용 지속기간.
결론적으로, BoNT/AB의 작용 지속기간은 디스포르트®보다 훨씬 더 높았고, 서열식별번호: 4 (2쇄 형태로 전환됨)의 것과 유사하였다. 따라서, 경부 이상긴장증에 대한 개선된 치료를 제공하기 위해 서열식별번호: 4 (2쇄 형태로 전환됨)에 대한 단위 용량 및 투여 요법이 BoNT/AB에 유사하게 적용될 수 있을 것으로 예상된다.
실시예 10
경부 이상긴장증을 치료하기 위한 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 14)의 단위 용량의 결정
전-임상 약리학 데이터를 고려하여, 인간에서 변형된 BoNT/A의 투여에 적합한 단위 용량 범위 (UD)를 결정하였다.
13 pg/kg의 DAS ED50을 서열식별번호: 14 (2쇄 형태로 전환됨)에 대해 계산하였다. ED50은 최소 약리학적 활성 용량으로 간주되며, 이는 동일한 동물 종에서 4 ng/kg의 무관찰 부작용 수준 (NOAEL)보다 대략 300배 더 낮다. 래트에서 13 pg/kg의 서열식별번호: 14 (2쇄 형태로 전환됨)의 ED50은 60 kg 체중의 인간에 대해 0.8 ng 용량에 상응한다.
따라서, 1,000 pg의 단위 용량의 하한치를 선택하였다. 16,000 pg의 단위 용량의 상한치를 선택하였으며, 이는 60 kg 체중에 대해 인간 용량으로 전환된 두 비임상 안전성 종 (래트 및 원숭이)으로부터의 4 ng/kg의 NOAEL보다 낮다. 따라서, 단위 용량은 1,000 pg 내지 16,000 pg (~42 단위 내지 ~666 단위)인 것으로 결정되었다.
개선된 안전성 프로파일의 관점에서, 경부 이상긴장증의 치료를 위한 최대 총 용량은, 60 kg 체중에 대해 인간 용량으로 전환된 두 비임상 안전성 종 (래트 및 원숭이)으로부터의 4 ng/kg의 NOAEL로부터 유래된 160,000 pg (~7,070 단위)으로 설정되었다.
실시예 9의 전-임상 데이터에 의해 결정된 바와 같은 디스포르트®와 비교 시 개선된 안전성 프로파일의 관점에서, 경부 이상긴장증에서 투여된 총 투여량 (단위)은 디스포르트®에 대한 것보다 거의 7x 더 클 것으로 예상된다. 경부 이상긴장증의 치료를 위한 디스포르트®의 최대 총 용량은 1,000 단위이다 (도 1 참조).
유리하게는, 보다 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 14)는 경부 이상긴장증의 치료에서 최대 용량에 도달하기 전에 보다 많은 수의 경부 근육/부위에서 주사될 수 있고/거나 주사될 수 있다. 이는 임상의에게 더 큰 범위의 치료 옵션을 제공하면서 경부 이상긴장증의 개선된 치료를 유도하는 유의하고 유리한 발견이다.
실시예 11
변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 14)를 사용하여 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 투여 요법
변형된 BoNT/A (예를 들어, 2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 14)는 바이알당 36 ng의 변형된 BoNT/A를 함유하는 바이알에서 동결건조된 분말로서 제공된다. 동결건조된 분말을 재구성한다.
단위 용량 (UD)은 1,000-16,000 pg이다 (~42-666 단위 [마우스 LD50에 의해 측정됨]).
경부 이상긴장증을 하기 투여 요법 (표 13)에 따라 근육내 주사에 의해 치료한다:
표 13. 투여 요법.
투여는 구체적 제시에 기초하여 필요에 따라 일측성 또는 양측성일 수 있다.
투여되는 최대 총 투여량은 10x UD이다 (예를 들어, 일부 경우에 2x UD가 지시된 경부 근육 중 1개 이상에 투여됨). 이는 160,000 pg/~6,660 단위에 상응한다. 이는 독성 한계 (통상적인 치료 요법의 우려)에 접근하지 않으면서 경부 이상긴장증의 치료 동안 투여될 수 있는 디스포르트®의 최대 총 투여량보다 거의 7x 더 크다. 따라서, 임상의는 독성에 대한 어떠한 우려도 없이 10x UD를 투여할 수 있고, 그에 의해 대상체의 추가의 경부 근육의 치료를 가능하게 하고/거나 각각의 경부 근육이 제약상 유효 용량을 받는 것을 보장할 수 있다는 지식 하에 환자에게 맞춤 치료를 제공할 수 있다.
실시예 12
경부 이상긴장증 (측경) 환자의 치료
제인(Jane), 65세는 그녀의 GP에 의해 경부 이상긴장증으로 진단된다. 구체적 제시는 측경이다. 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 4)의 단일 단위 용량 (3,000 pg)을 제인의 견갑거근에 동측으로 투여하고, 단일 단위 용량을 또한 제인의 흉쇄유돌기근에 동측으로 투여하였다 (이는 6,000 pg의 치료 세션에서의 총 용량을 생성함). 측경이 완화되고, 변형된 BoNT/A의 장기 지속기간으로 인해, 제인은 9개월 초과 동안 추가의 치료를 필요로 하지 않는다. 따라서, 제인은 비변형된 BoNT/A를 투여받는 동등한 대상체와 비교하였을 때 (예를 들어, 1년에) 덜 빈번한 주사를 받는다. 추가적으로, 제인은 변형된 BoNT/A의 개선된 안전성 프로파일로 인해 어떠한 부작용도 나타내지 않는다.
실시예 13
경부 이상긴장증 (후경)을 갖는 환자의 치료
브라이언(Brian), 48세는 그의 GP에 의해 경부 이상긴장증으로 진단된다. 구체적 제시는 후경이다. 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 14)를 다음과 같이 브라이언의 근육 각각에 양측으로 투여한다:
ㆍ 각각의 견갑거근에 10,000 pg의 1x 단위 용량 (UD);
ㆍ 각각의 승모근에 10,000 pg의 1x UD;
ㆍ 각각의 최장근에 10,000 pg의 1x UD;
ㆍ 각각의 두판상근에 10,000 pg의 1x UD; 및
ㆍ 각각의 경판상근에 10,000 pg의 1x UD.
투여된 총 용량은 10x UD (100,000 pg)이며, 이는 160,000 pg의 상한치 내에 양호하게 있고, 비변형된 BoNT/A와 비교 시 변형된 BoNT/A의 보다 큰 안전성 프로파일을 고려하면 가능한 것이다. 후경이 완화되고, 변형된 BoNT/A의 장기 지속기간으로 인해, 브라이언은 12개월 동안 추가의 치료를 필요로 하지 않는다. 따라서, 브라이언은 비변형된 BoNT/A를 투여받는 동등한 대상체와 비교하였을 때 덜 빈번한 주사를 받는다.
실시예 14
인간에서 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 14)의 안전성 및 효능
서열식별번호: 14 (2쇄 형태로 전환됨)를 인간 대상체에게 변형된 BoNT/A의 단일 단위 용량으로 투여하였다. 5개의 코호트에 상이한 (증가하는) 양의 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 14)를 투여하였다. 코호트 1은 2x 1,000 pg 단위 용량의 변형된 BoNT/A (즉, 최대 2,000 pg)를 투여받는 반면에, 코호트 5는 2x 16,000 pg 단위 용량의 변형된 BoNT/A (즉, 최대 32,000 pg)를 투여받았다.
결과는 시험된 변형된 BoNT/A의 모든 단위 용량 (즉, 16,000 pg 이하의 단위 용량)이 근육 마비에서 효과적이고, 안전하게 허용되며, 근육당 예외적으로 높은 투여량에도 불구하고 어떠한 유해 효과도 관찰되지 않았음을 나타냈다. 이는 변형된 BoNT/A가 주사 부위로부터 확산되지 않는다는 것을 나타내고, 변형된 BoNT/A (2쇄 형태로 전환된 서열식별번호: 14)의 예외적인 안전성 프로파일을 강조한다.
실시예 15
경부 이상긴장증을 갖는 환자의 치료
샐리(Sally) 64는 그녀의 GP에 의해 경부 이상긴장증으로 진단된다. 그녀는 하기와 같이 투여되는 1000 pg의 서열식별번호: 14 (2쇄 형태로 전환됨)의 단위 용량 (UD)에 의해 치료된다:
그녀는 14,000 pg의 총 용량의 서열식별번호: 14 (2쇄 형태로 전환됨)를 받는다. 치료는 성공적이고, 그녀의 증상은 완화된다. 그녀는 9개월 초과 동안 치료를 필요로 하지 않는다.
실시예 16
경부 이상긴장증을 갖는 환자의 치료
프란세스코(Francesco) 43은 그의 GP에 의해 경부 이상긴장증으로 진단된다. 그는 하기와 같이 투여되는 2000 pg의 서열식별번호: 14 (2쇄 형태로 전환됨)의 단위 용량 (UD)에 의해 치료된다:
그는 28,000 pg의 총 용량의 서열식별번호: 14 (2쇄 형태로 전환됨)를 받는다. 치료는 성공적이고, 그의 증상이 완화된다. 그녀는 10개월 초과 동안 치료를 필요로 하지 않는다.
상기 명세서에서 언급된 모든 간행물은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명의 기재된 방법 및 시스템의 다양한 변형 및 변화가 본 발명의 범주 및 취지로부터 벗어나지 않으면서 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 본 발명이 구체적인 바람직한 실시양태와 관련하여 기재되었지만, 청구된 바와 같은 본 발명은 이러한 특정한 실시양태로 과도하게 제한되지 않아야 함이 이해되어야 한다. 실제로, 생화학 및 생명공학 또는 관련 분야의 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백한, 본 발명을 수행하기 위한 기재된 방식의 다양한 변형은 하기 청구범위의 범주 내에 있는 것으로 의도된다.
서열목록 전자파일 첨부
Claims (66)
- 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
변형된 BoNT/A. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 BoNT/A로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
변형된 BoNT/A. - 경부 이상긴장증을 치료하는 방법으로서, 방법은 대상체의 이환 경부 근육에 변형된 BoNT/A를 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하고,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
방법. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 방법으로서, 방법은 대상체의 이환 경부 근육에 변형된 BoNT/A를 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하고,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
방법. - 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)의 용도로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
변형된 BoNT/A의 용도. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 BoNT/A의 용도로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 170,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
변형된 BoNT/A의 용도. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 투여되는 총 용량이 5,250 pg 내지 170,000 pg, 바람직하게는 7,000 pg 내지 160,000 pg인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 용도.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 단위 용량이 1,000 pg 내지 16,000 pg인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 용도.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 치료 동안 투여되는 총 용량이 160,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 용도.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 이환 경부 근육에 단일 주사 부위에서 또는 2개 이상의 주사 부위 (예를 들어, 2개의 주사 부위)에서 투여되는 것인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 용도.
- 제10항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 주사 부위당 750-4,000 pg (바람직하게는 1,000 pg 또는 2,000 pg)의 단위 용량으로 투여되는 것인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 단위 (U) 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
변형된 BoNT/A. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 BoNT/A로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 단위 (U) 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
변형된 BoNT/A. - 경부 이상긴장증을 치료하는 방법으로서, 방법은 대상체의 이환 경부 근육에 변형된 BoNT/A를 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하고,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 U 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
방법. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 방법으로서, 방법은 대상체의 이환 경부 근육에 변형된 BoNT/A를 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하고,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 U 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
방법. - 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)의 용도로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 U 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
변형된 BoNT/A의 용도. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 BoNT/A의 용도로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 31 U 내지 707 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 7,070 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
변형된 BoNT/A의 용도. - 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 투여되는 총 용량이 217 U 내지 7,070 U, 바람직하게는 294 U 내지 6,660 U인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 단위 용량이 42 U 내지 666 U인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제12항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 치료 동안 투여되는 총 용량이 6,660 U 이하의 변형된 BoNT/A인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제12항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 이환 경부 근육에 단일 주사 부위에서 또는 2개 이상의 주사 부위 (예를 들어, 2개의 주사 부위)에서 투여되는 것인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제21항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 주사 부위당 31-166.4 단위 (바람직하게는 41.6 단위 또는 83.2 단위)의 단위 용량으로 투여되는 것인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 E1191M 및 S1199Y인 2개의 치환 돌연변이의 조합을 포함하는 것인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 서열식별번호: 14에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가, 서열식별번호: 14를 포함하는 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능한, 경쇄 (L-쇄)가 디술피드 결합을 통해 중쇄 (H-쇄)에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가, 서열식별번호: 14로 이루어진 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능한, L-쇄가 디술피드 결합을 통해 H-쇄에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
변형된 BoNT/A. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 BoNT/A로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
변형된 BoNT/A. - 경부 이상긴장증을 치료하는 방법으로서, 방법은 대상체의 이환 경부 근육에 변형된 BoNT/A를 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하고,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
방법. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 방법으로서, 방법은 대상체의 이환 경부 근육에 변형된 BoNT/A를 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하고,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
방법. - 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)의 용도로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
변형된 BoNT/A의 용도. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 BoNT/A의 용도로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 80,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
변형된 BoNT/A의 용도. - 제27항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 투여되는 총 용량이 3,150 pg 내지 80,000 pg, 바람직하게는 3,500 pg 내지 75,000 pg인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제27항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 단위 용량이 500 pg 내지 7,500 pg인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제27항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 치료 동안 투여되는 총 용량이 75,000 pg 이하의 변형된 BoNT/A인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
변형된 BoNT/A. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 데 사용하기 위한 변형된 BoNT/A로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
변형된 BoNT/A. - 경부 이상긴장증을 치료하는 방법으로서, 방법은 대상체의 이환 경부 근육에 변형된 BoNT/A를 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하고,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
방법. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하는 방법으로서, 방법은 대상체의 이환 경부 근육에 변형된 BoNT/A를 근육내 주사에 의해 투여하는 것을 포함하고,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
방법. - 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 보툴리눔 신경독소 A (BoNT/A)의 용도로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
변형된 BoNT/A의 용도. - 비변형된 BoNT/A (예를 들어, 서열식별번호: 2)에 의해 치료되는 것보다 더 긴 지속기간 동안 대상체의 경부 이상긴장증을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 변형된 BoNT/A의 용도로서, 여기서 변형된 BoNT/A는 대상체의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고,
여기서 변형된 BoNT/A는 53 U 내지 948 U의 변형된 BoNT/A의 단위 용량으로 투여되고, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양이고,
여기서 적어도 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에 투여되고,
여기서 치료 동안 투여되는 총 용량은 9,480 U 이하의 변형된 BoNT/A이고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
변형된 BoNT/A의 용도. - 제36항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 투여되는 총 용량이 371 U 내지 9,480 U, 바람직하게는 413 U 내지 8,890 U인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 단위 용량이 59 단위 내지 889 단위인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제26항 및 제37항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 치료 동안 투여되는 총 용량이 8,890 U 이하의 변형된 BoNT/A인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제27항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형이 ASN 886, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1052, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 또는 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고 (바람직하게는 그로 이루어지고), 여기서 변형된 BoNT/A가 서열식별번호: 3, 5, 7 및 9로부터 선택된 핵산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 코딩되고/거나 서열식별번호: 4, 6, 8 및 10으로부터 선택된 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 바람직하게는 여기서 상기 변형이 ASN 886, ASN 930, SER 955, GLN 991, ASN 1026, ASN 1052 및 GLN 1229로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고 (바람직하게는 그로 이루어지고), 여기서 변형된 BoNT/A가 서열식별번호: 3에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 코딩되고/거나 서열식별번호: 4로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제27항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 변형이 치환, 바람직하게는 리신 또는 아르기닌으로의 치환인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제27항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가, 서열식별번호: 4를 포함하는 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능한, 경쇄 (L-쇄)가 디술피드 결합을 통해 중쇄 (H-쇄)에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제27항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가, 서열식별번호: 4로 이루어진 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능한, L-쇄가 디술피드 결합을 통해 H-쇄에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 7 초과의 안전성 비를 가지며, 여기서 안전성 비는 pg/마우스로서 측정된 -10% 체중 변화에 요구되는 독소의 용량을 pg/마우스로서 측정된 DAS ED50으로 나눈 것으로서 계산되며, 여기서 ED50 = 2의 DAS 점수를 생성하는 데 요구되는 용량인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
이환 경부 근육이 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 견갑거근, 두반극근 및 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근)으로부터 선택되거나;
이환 경부 근육이 우측 견갑거근, 좌측 견갑거근, 우측 승모근, 좌측 승모근, 우측 흉쇄유돌기근, 좌측 흉쇄유돌기근, 우측 두판상근, 좌측 두판상근, 중사각근, 전사각근, 우측 두반극근, 좌측 두반극근, 우측 두최장근, 및 좌측 두최장근으로부터 선택되거나;
이환 경부 근육이 흉쇄유돌기근, 흉쇄유돌근, 두판상근, 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 견갑거근, 두반극근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하행부 승모근, 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 및 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절)로부터 선택되거나; 또는
이환 경부 근육이 흉쇄유돌근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 흉쇄유돌기근), 좌측 또는 우측 두판상근, 전사각근 또는 중사각근, 좌측 또는 우측 승모근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 상부 승모근), 좌측 또는 우측 견갑거근, 좌측 또는 우측 두반극근, 최장근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 두최장근 및/또는 경최장근), 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 후부 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하행부 승모근, 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 상두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 경반극근, 대후두직근, 소후두직근, 전두직근, 꼬리뼈, 및 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절)로부터 선택되는 것인
변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도. - 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 대상체의 복수의 이환 경부 근육에 근육내 주사에 의해 투여되고, 여기서 적어도 단일 단위 용량이 각각의 이환 경부 근육에 투여되고,
바람직하게는 여기서:
복수의 이환 경부 근육이 흉쇄유돌기근, 두판상근, 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 견갑거근, 두반극근, 및 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근)으로부터 선택되거나;
복수의 이환 경부 근육이 우측 견갑거근, 좌측 견갑거근, 우측 승모근, 좌측 승모근, 우측 흉쇄유돌기근, 좌측 흉쇄유돌기근, 우측 두판상근, 좌측 두판상근, 중사각근, 전사각근, 우측 두반극근, 좌측 두반극근, 우측 두최장근, 및 좌측 두최장근으로부터 선택되거나;
복수의 이환 경부 근육이 흉쇄유돌기근, 흉쇄유돌근, 두판상근, 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 승모근 (예를 들어, 상부 승모근), 견갑거근, 두반극근, 최장근 (예를 들어, 두최장근 및/또는 경최장근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하행부 승모근, 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 및 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절)로부터 선택되거나; 또는
복수의 이환 경부 근육이 흉쇄유돌근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 흉쇄유돌기근), 좌측 또는 우측 두판상근, 전사각근 또는 중사각근, 좌측 또는 우측 승모근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 상부 승모근), 좌측 또는 우측 견갑거근, 좌측 또는 우측 두반극근, 중간부 두반극근, 최장근 (예를 들어, 좌측 또는 우측 두최장근 및/또는 경최장근), 경판상근, 사각근 복합체 (예를 들어, 전사각근 및/또는 중사각근), 후방 척추주위근 (예를 들어, 후사각근, 중사각근 및/또는 전사각근, 바람직하게는 후사각근), 이하 복합체 (예를 들어, 이복근, 이설골근, 악설골근, 악설골근 부토니에르 및/또는 경돌설골근), 하행부 승모근, 맨위목덜미선-쇄골 (외측부), 가시돌기 C3-Th3-유양돌기, 가시돌기 Th3-Th5-가로돌기 C1-C2, 가로돌기 C3-Th6, 가시돌기 C3-Th1-맨위목덜미선, 가로돌기 Th1-Th6-가시돌기 C2-C7, 가로돌기 C3-Th3-유양돌기, 가로돌기 Th1-Th6-가로돌기 C2-C6, 하두사근, 상두사근, 가시돌기 C2-가로돌기 C1, 흉골상절흔 및 쇄골 (내측부)-유양돌기 및 맨위목덜미선, 가로돌기 C1-C4-견갑골 (상각), 가로돌기 C2-C7-제1 늑골, 가로돌기 C3-C6-제1 늑골, 두장근, 가로돌기 C3-C6-후두골 (기저부), 경장근, 경반극근, 대후두직근, 소후두직근, 전두직근, 꼬리뼈, 및 가로돌기 C2-C5-꼬리뼈 (전결절)로부터 선택되는 것인
변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도. - 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 이환 경부 근육에서 주사 부위당 단위 용량으로 투여되거나, 또는 변형된 BoNT/A가 주사 부위당 단위 용량 미만으로 투여되는 것인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에서 복수의 주사 부위에서 투여되고/거나 2개 이상의 단위 용량이 이환 경부 근육에서 복수의 주사 부위에서 투여되는 것인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 단위 용량이 이환 경부 근육에서 투여되는 (예를 들어, 단일 단위 용량이 각각의 이환 경부 근육에서 투여되는) 것인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 인간 대상체인 변형된 BoNT/A, 방법, 또는 변형된 BoNT/A의 용도.
- 변형된 BoNT/A의 단위 투여 형태 (예를 들어, 경부 이상긴장증을 치료하기 위한)로서, 단위 투여 형태는:
(a) 31 단위 내지 707 단위의 변형된 BoNT/A, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양임; 또는
(b) 750 pg 내지 17,000 pg의 변형된 BoNT/A; 및
(c) 임의로 제약상 허용되는 담체, 부형제, 아주반트 및/또는 염
을 포함하고,
여기서 변형된 BoNT/A는 BoNT/A 경쇄 및 전위 도메인, 및 BoNT/B 수용체 결합 도메인 (HC 도메인)을 포함하는 것인
단위 투여 형태. - 제56항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 E1191M 및 S1199Y인 2개의 치환 돌연변이의 조합을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
- 제56항 또는 제57항에 있어서, 변형된 BoNT/A가 서열식별번호: 14에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
- 제56항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가, 서열식별번호: 14를 포함하는 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능한, L-쇄가 디술피드 결합을 통해 H-쇄에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A인 단위 투여 형태.
- 제56항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가, 서열식별번호: 14로 이루어진 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능한, L-쇄가 디술피드 결합을 통해 H-쇄에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A인 단위 투여 형태.
- 변형된 BoNT/A의 단위 투여 형태 (예를 들어, 경부 이상긴장증을 치료하기 위한)로서, 단위 투여 형태는:
(a) 53 단위 내지 948 단위의 변형된 BoNT/A, 여기서 1 단위는 마우스에서 계산된 중앙값 치사 용량 (LD50)에 상응하는 변형된 BoNT/A의 양임; 또는
(b) 450 pg 내지 8,000 pg의 변형된 BoNT/A; 및
(c) 임의로 제약상 허용되는 담체, 부형제, 아주반트 및/또는 염
을 포함하고,
여기서 변형된 BoNT/A는 ASN 886, ASN 905, GLN 915, ASN 918, GLU 920, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, GLU 992, GLN 995, ASN 1006, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1032, ASN 1043, ASN 1046, ASN 1052, ASP 1058, HIS 1064, ASN 1080, GLU 1081, GLU 1083, ASP 1086, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 및 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하며, 여기서 변형은:
(i) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(ii) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 비하전된 아미노산 잔기로의 치환;
(iii) 비하전된 표면 노출된 아미노산 잔기의 염기성 아미노산 잔기로의 치환;
(iv) 염기성 아미노산 잔기의 삽입; 및
(v) 산성 표면 노출된 아미노산 잔기의 결실
로부터 선택되는 것인
단위 투여 형태. - 제61항에 있어서, 상기 변형이 ASN 886, ASN 930, ASN 954, SER 955, GLN 991, ASN 1025, ASN 1026, ASN 1052, ASN 1188, ASP 1213, GLY 1215, ASN 1216, GLN 1229, ASN 1242, ASN 1243, SER 1274 또는 THR 1277로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고 (바람직하게는 그로 이루어지고), 여기서 변형된 BoNT/A가 서열식별번호: 3, 5, 7 및 9로부터 선택된 핵산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 코딩되고/거나 서열식별번호: 4, 6, 8 및 10으로부터 선택된 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 바람직하게는 여기서 상기 변형이 ASN 886, ASN 930, SER 955, GLN 991, ASN 1026, ASN 1052 및 GLN 1229로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 잔기(들)에서의 변형을 포함하고 (바람직하게는 그로 이루어지고), 여기서 변형된 BoNT/A가 서열식별번호: 3에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 코딩되고/거나 서열식별번호: 4로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
- 제61항 또는 제62항에 있어서, 변형이 치환, 바람직하게는 리신 또는 아르기닌으로의 치환인 단위 투여 형태.
- 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가, 서열식별번호: 4를 포함하는 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능한, 경쇄 (L-쇄)가 디술피드 결합을 통해 중쇄 (H-쇄)에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A인 단위 투여 형태.
- 제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 BoNT/A가, 서열식별번호: 4로 이루어진 단일쇄 변형된 BoNT/A를 그의 활성화 루프 내의 펩티드 결합을 가수분해하는 프로테아제와 접촉시키고, 그에 의해 단일쇄 변형된 BoNT/A를 상응하는 2쇄 변형된 BoNT/A로 전환시키는 것을 포함하는 방법에 의해 수득가능한, L-쇄가 디술피드 결합을 통해 H-쇄에 연결된 2쇄 변형된 BoNT/A인 단위 투여 형태.
- (a) 제56항 내지 제65항 중 어느 한 항에 따른 단위 투여 형태; 및
(b) 경부 이상긴장증을 치료하는 데 있어서 그의 사용에 대한 지침서; 및
(c) 임의로 희석제
를 포함하는 키트.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB2113262.6 | 2021-09-16 | ||
| GB2206357.2 | 2022-04-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20240067070A true KR20240067070A (ko) | 2024-05-16 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102643970B1 (ko) | 키메라 신경독소 | |
| US20230346674A1 (en) | Treatment of Upper Facial Lines | |
| TWI825396B (zh) | 肢體痙攣之治療 | |
| AU2022348206A1 (en) | Modified bont/a for use in the treatment of cervical dystonia | |
| AU2022351260A1 (en) | Modified bont/a for use in the treatment of a disorder affecting an eyelid muscle of a subject | |
| US20230038233A1 (en) | Treatment of neurological disorders | |
| WO2022208091A1 (en) | Treatment of pain & inflammatory disorders | |
| KR20240067070A (ko) | 경부 이상긴장증의 치료에 사용하기 위한 변형된 bont/a | |
| KR20240067100A (ko) | 대상체의 안검 근육에 이환된 장애의 치료에 사용하기 위한 변형된 bont/a | |
| EP4297773A1 (en) | Catalytically inactive clostridial neurotoxins for the treatment of pain & inflammatory disorders | |
| WO2023209327A1 (en) | Bont/a for use in treating a facial dystonia | |
| CN117979988A (zh) | 用于治疗影响受试者眼睑肌肉的疾病的修饰的BoNT/A | |
| WO2023209326A1 (en) | Treatment of cervical dystonia | |
| US20240082368A1 (en) | Treatment of Brain Damage | |
| WO2023209403A1 (en) | Treatment of upper facial lines | |
| WO2023209385A1 (en) | Treatment of limb spasticity | |
| AU2022390672A1 (en) | Treatment of visceral pain | |
| WO2023089338A1 (en) | Treatment of visceral pain | |
| NZ787215A (en) | Chimeric neurotoxins |